DE68912315T2

DE68912315T2 - Testverfahren für chlamydia unter verwendung einer basisbehandlung.

Info

Publication number: DE68912315T2
Application number: DE68912315T
Authority: DE
Inventors: Patrick Mach; Howard Soule; Jeffrey Thompson
Original assignee: Kallestad Diagnostics Inc
Current assignee: Sanofi Diagnostics Pasteur Inc
Priority date: 1988-02-29
Filing date: 1989-02-16
Publication date: 1994-05-26
Anticipated expiration: 2009-02-17
Also published as: EP0402396A4; JPH03502967A; DE68912315D1; JP2782256B2; EP0402396B1; EP0402396A1; WO1989008262A1; US4916057A; CA1339462C

Description

GEBIET DER ERFINDUNG

Diese Erfindung betrifft ein Immuntestverfahren zum Nachweis eines Chlamydia trachomatis-Antigens in einem klinischen Urogenital-Untersuchungsmaterial. HINTERGRUND DER ERFINDUNG Chlamydia trachomatis ist der Krankheitserreger einer Reihe von Infektionen beim Menschen, z.B. Urethritis, mukopurulenter Gebärmutterhalsentzündung bei der Frau und Einschlußkonjunktivitis und Lungenentzündung bei Neugeborenen.
Obwohl es eine Anti-Chlamydia-Arzneimitteltherapie gibt, laufen viele Chlamydia-Infektionen auf Grund der Grenzen, die mit den heutigen diagnostischen Methoden verbunden sind, unbehandelt ab. Dies ist bei Frauen, bei denen die Mehrzahl der Gebärmutterhalsinfektionen asymptomatisch sind, und, falls sie unbehandelt bleiben, zu einer Beckenentzündung, welche zu Unfruchtbarkeit führen kann, fortschreiten können, ein signifikantes Problem. Ein üblicherweise angewendetes Verfahren zum Nachweis von Chlamydia hängt von den Kultivierungstechiniken ab. Diese Technik ist arbeitsaufwendig und zeitraubend. Ein zuverlässiger, schneller und billiger Test zur Identifizierung des Organismus ist daher wünschenswert, so daß eine geeignete Therapie begonnen werden kann.
Immuntests, wie Enzymimmuntests und direkte Fluoreszenzimmuntests, welche verschiedene Chlamydia-Antigene, wie ein Lipopolysacchirrid (LPS) und ein Hauptprotein der äußeren Membran (MOMP), nachweisen, werden derzeit angewendet, um das Vorliegen von Chlamydia in Untersuchungsmaterialien von Patienten nachzuweisen. Im Falle eines Enzymimmuntests werden die Proben üblicherweise mit Detergentien vorbehandelt, um MOMP- oder LPS-Antigene zu solubilisieren, um anschließend einen Antikörper an sie zu binden. Es treten jedoch gerne falsch negative und falsch positive Ergebnisse bei solchen Immuntests in beträchtlicher Anzahl auf Eine Vorbehandlung der Untersuchungsmaterialien mit einem Detergens beseitigt das Auftreten von falsch positiven und falsch negativen Ergebnissen nicht.
Die EP-A - 0 174 106 betrifft ein Verfahren zum Nachweis von Zellproteinen von Mikroorganismen, wie z.B. des Hauptproteins der äußeren Membran von Chlamydia trachomatis mit einem mittleren Molekulargewicht von 39,5 Dalton. Bei dem Verfahren wird eine Puffersalzlösung einer Probe, von der angenommen wird, daß sie bakterielle Antigene enthält, zugegeben, der pH der gepufferten Lösung angehoben, die Lösung inkubiert, der Lösung ein neutralisierender Puffer zugegeben, um den pH zu senken, und die Probe mit herkömmlichen Immuntesttechniken getestet.
Die US-A - 4,663,291 betrifft ein Verfahren einer Behandlung von Untersuchungsmaterialien, um einen Immuntest auszufhren, bei der ein mikrobielles Protein bei erhöhten Temperaturen und bei Anwesenheit eines Alkali- oder Erdakalimetallions mit einem Detergens solubilisiert wird. Das Detergens ist bei erhöhten Temperaturen löslich. Bei niedrigeren Temperaturen macht jedoch die Anwesenheit des Metallions das Detergens unlöslich, so daß es im Immuntestverfahren nicht reagieren kann.
Die US-A - 4,056,608 stellt Immuntests für Digoxin und seine verwandten Verbindungen zur Verfügung, bei welchem Test die Serumprobe mit verdünnten wäßrigen alkalischen Lösungen unter milden Bedingungen und für kurze Zeitperioden, vorzugsweise in Kombination mit einem chelatisierenden Mittel, vor dem Durchführen des Immuntests vorbehandelt wird.
Die US-A - 4,652,518 betrifft eine Präparation für den Nachweis von Chlamydia-Infektionen, wobei ein Lipopolysacchnrid von Re-Lipopolysaccharidmutanten gram-negativer Bakterien verwendet wird. Die Lipopolysaccharid-Präparation wird bei der Herstellung gruppenspezifischer Antikörper auf Chlamydien für diagnostische Zwecke oder für den Nachweis von Antikörpern auf Chlamydia-Gruppenantigene in Untersuchungsmaterialien verwendet.
Diese Erfindung ist ein Verfahren zum wesentlichen Ausschluß des Auftretens falsch negativer und falsch positiver Ergebnisse in einem Enzymimmuntest für ein Chlamydia-Antigen in einem aus dem Auge, den Nasenlöchern an der Nasenrückenseite, dem Gebärmutterhals, der Harnröhre, dem Rachen oder dem Rectum entnommenen Patienten-Untersuchungsmaterial, bei dem das Untersuchungsmaterial mit einer wäßrigen Lösung behandelt wird, derart, daß die wäßrige Lösung mit dem Untersuchungsmaterial eine Endkonzentration von nicht weniger als 0,1M NaOH oder 0,1M KOH hat, und dann die das Untersuchungsmaterial enthaltende Lösung vor Durchführung des Immuntests neutralisiert wird.
Auch ein diagnostischer Testkit zur Bestimmung des Vorliegens eines Chlamydia-Antigens in einem Untersuchungsmaterial umfaßt:
eine vorbestimmte Menge einer wäßrigen Lösung einer 1,0M NaOH oder 1,0M KOH, die zur Kombination mit einer Menge des Untersuchungsmaterials ausreichend ist, so daß die wäßrige Lösung eine Endkonzentration von nicht weniger als 0,1M NaOH oder 0,1M KOH hat,
eine 1,0M HCl-Lösung in einer Menge, die zur Neutralisierung der das Untersuchungsmaterial enthaltenden Lösung ausreichend ist,
eine bekannte Menge eines Antichlamydia-Antikörpers und
eine bekannte Menge eines Enzym-markierten Nachweis-Antikörpers.

DETAILLIERTE BESCHREIBUNG DER BEVORZUGTEN AUSFÜHRUNGSFORM

Die erfindungsgemäßen Verfahren können bei Patienten-Untersuchungsmaterialien angewendet werden, die von Patienten erhalten werden, von denen angenommen wird, daß sie eine Chlamydia-Infektion haben, wobei herkömmliche medizinische und mikrobiologische Techniken angewendet werden. Solche Untersuchungsmaterialien sind z.B. Abstrich-Untersuchungsmaterialien, die vom Auge, den Nasenlöchern an der Nasemückenseite, dem Gebärmutterhals, dem Harnleiter, dem Rachen oder dem Rectum entnommen wurden. Das Verfahren ist bei urogenitalen Abstrich-Untersuchungsmaterialien besonders brauchbar.
In einem erfindungsgemäßen Verfahren wird eine Lösung einer starken Base mit einem geeigneten Extraktionsdetergens, wie jene, die üblicherweise bei der Extraktion von Membrankomponenten verwendet werden, d.h. 3-[(3-Cholamidopropyl)dimethylammonio]-1-propansulfonat (CHAPS), einem Röhrchen zugegeben, das einen Urogenital-Abstrichtupfer enthält. Der Abstrichtupfer wird in dieser Lösung stehengelassen und gut gemischt, gefolgt von einem Abtrennen überschüssiger Flüssigkeit im Abstrichtupfer und Herausnehmen des Abstrichtupfers. Dann wird die Lösung im Röhrchen neutralisiert. Anschließend wird ein geeignetes Volumen der neutralisierten Lösung in einem Standard-Enzymimmuntest (EIA) vom Sandwich-Typus verwendet, um das Vorliegen eines Chlamydia-Antigens nachzuweisen.
In einer Modifikation der Erfindung wird eine Lösung des geeigneten Extraktionsdetergens direkt einem Röhrchen, das einen Patienten-Abstrichtupfer enthält, zugegeben. Der Patienten-Abstrichtupfer wird unter Mischen in dieser Lösung stehengelassen, gefolgt von einem Abtrennen überschüssiger Flüssigkeit aus dem Abstrichtupfer und Herausnehmen des Abstrichtupfers. Ein Zehntel Volumen einer starken Base mit einer Mindestkonzentration von 1,0M wird dann dem Patientenextrakt zugegeben, um eine Endkonzentration von 0,1M Base vorzusehen, was der Konzentration der im ersten Verfahren verwendeten Base entspricht. Die Probe wird stehengelassen, gemischt und dann neutralisiert. Ein geeignetes Volumen der neutralisierten Lösung wird dann in einem Standard-EIA vom Sandwich-Typus verwendet, um das Vorliegen eines Chlamydia-Antigens nachzuweisen.
Der EIA vom Sandwich-Typus ist vorzugsweise einer, in welchem ein Antikörper:Antigen: Antikörper-Sandwich auf einem festen Träger gebildet wird. Typischerweise wird ein Antikörper, der spezifisch an Chlamydia bindet, an einen festen Träger, wie Filtrierpapier, Teströhrchen aus Polyethylen, Polystyrol, Polypropylen oder andere geeignete Materialien, Latexpartikel, Glaskörnchen, Magnetkörnchen oder dergleichen gebunden. Eine Probe, von der angenommen wird, daß sie Chlamydia enthält, wird mit dem festen Träger in Kontakt gebracht, und Chlamydia-Antigene, die in der Probe vorhanden sind, binden während einer geeigneten Inkubationsperiode an den Antikörper. Der feste Träger wird gewaschen, um Restprobe und nicht gebundenes Antigen, falls vorhanden, zu entfernen, und wird dann mit einer Lösung in Kontakt gebracht, die eine bekannte Menge eines zweiten Antikörpers enthält, der auch für Chlamydia spezifisch ist und direkt oder indirekt (wie mit einem Antikörper auf den zweiten Antikörper) mit einem Enzym markiert ist. Falls der zweite Antikörper direkt markiert ist) wird, nachdem der feste Träger gewaschen worden ist, Enzymsubstrat dem festen Träger zugegeben und eine Enzymbestimmung mittels herkömmlicher kolorimetrischer oder spektrophotometrischer Techniken durchgeführt. Falls der zweite Antikörper nicht markiert ist, wird ein markiertes Antiglobulin, das gegen den zweiten Antikörper gerichtet ist, zugegeben, die Lösung eine vorbestimmte Zeit stehengelassen und der feste Träger gewaschen. Die Menge an markiertem Antikörper wird mit herkömmlichen Techniken bestimmt.
Ein auf Chlamydia spezifischer Antikörper kann vom Menschen oder vom Tier, z.B. Kaninchen, Ziege, Pferd, Schaf, Meerschweinchen, etc. durch Immunisierung mit Elementarkörpern eines oder mehrerer Stämme von Chlamydia trachomatis nach bekannten Techniken produziert werden. Auch ein monoklonaler Antikörper auf Chlamydia kann im erfindungsgemäßen Verfahren verwendet werden.
Chlamydia-Antigene, die in dieser Erfindung brauchbar sind, sind z.B. jedes Antigen, das bei den vorherrschenden Stämmen von Chlamydia trachomatis üblich ist. Solche Antigene können vom Fachmann des Standes der Technik festgestellt werden und sind zum Beispiel LPS und MOMP. Enzyme, die in dieser Erfindung brauchbar sind, können zum Beispiel Meerrettich-Peroxidase, alkalische Phosphatase, beta-Galactosidase und dergleichen sein. Enzymimmuntests sind auf diagnostischem Gebiet gut bekannt und brauchen nicht näher beschrieben werden.
Ohne an die folgende Erklärung gebunden zu sein, glauben wir, daß die Patientenprobenbehandlung der Erfindung Substanzen in der Probe beseitigt oder inaktiviert, die bei immunologischen Tests stören, wobei sie falsch positive und falsch negative Ergebnisse verursachen. Es scheint, daß diese störenden Substanzen beseitigt werden, wenn der pH der Lösung auf ein Niveau von oder über pH 12 angehoben und dann neutralisiert wird.
Falsch positive und falsch negative Ergebnisse, die bei Anwendung eines Immuntests erhalten werden, können mit verschiedenen Methoden, d.h. direkter Fluoreszenzalyse, Kultivierungstechniken und dergleichen, nachgewiesen werden. Direkte Fluoreszenzmarkierungstechniken sind wie folgt angewendet worden, um festzustellen, ob Chlamydia in einer Probe vorhanden ist. Ein Antikörper, der an Chlamydia spezifisch bindet und mit einem fluoreszierenden Mittel markiert ist, wurde erhalten. Ein markierter Antikörper dieses Typus ist bei Kallestad Diagnostics oder Syva Company kommerziell erhältlich. Ein Volumen eines Untersuchungsmaterialextraktes wird gewonnen und zentrifugiert, wobei ein Pellet aus Chlamydia-Elementarkörpern und Bruchstücken aus der Probe gebildet wird. Das Pellet wird in einem minimalen Puffervolumen erneut suspendiert, auf einen Mikroskopträger punktförmig aufgetragen, mit Methanol fixiert und mit dem markierten Antikörper-Reagens gefärbt. Der Antikörper bindet an das gegebenenfälls vorhandene Chlamydia auf dem Träger. Dann wird der Träger mit einem geeigneten Mikroskop untersucht, um zu bestimmen, ob Chlamydia vorhanden ist. In Proben, die nicht mit einer Lösung einer starken Base vor Durchführung des EIA gemäß der Erfindung behandelt worden waren, ergab eine beträchtliche Ahhahl von Proben, die bei der direkten Fluoreszenzmethode als positiv getestet wurden, negative EIA-Ergebnisse. Annlich waren mehrere Proben, die bei Anwendung der direkten Fluoreszenzmethode negativ waren, bei der EIA-Methode positiv.
Signalgewinnungsstudien demonstrierten die Existenz funktioneller falscher negativer Ergebnisse, wenn Patienten-Untersuchungsmaterialien verwendet wurden, die in eine gepufferte Detergenslösung extrahiert worden waren, wie im oben beschriebenen zweiten Verfahren. Funktionelle falsch negative Proben ergaben einen niedrigen EIA-Absorptionswert sogar dann, wenn Chlamydia-Antigen der Probe exogen zugegeben wurde.
Vier gleiche Volumsaliquote jeder Probe, die in eine wäßrige Lösung extrahiert worden waren, wurden genommen. Zwei Aliquote erhielten ein Zehntel Volumen gereinigte elementare Chlamydia-Elementarkörper (versetzt), und die anderen zwei Aliquote erhielten ein gleiches Volumenpuffer (nicht versetzt). Dann wurden ein versetztes und ein nicht versetztes Aliquot mit einem Zehntel Volumen 1,0M NaOH behandelt, und die anderen Aliquote wurden mit dem gleichen Volumen entionisiertem Wasser behandelt und 10 Minuten stehengelassen. Dann wurden die mit Base behandelten Miquoten neutralisiert, indem 0,10 ml 1,0M HCl (verdünnt in 1,0M Tris- HCl, vorher bei pH 8,0) der Probe zugegeben wurden und die Lösung zehn Sekunden durchgewirbelt wurde). Die unbehandelten Aliquoten wurden mit einem gleichen Volumen 1,0M Tris-HCl-Puffer verdünnt Nach Neutralisation wurden alle Aliquoten in einem für Chlamydia spezifischen EIA getestet. Ohne Vorbehandlung mit starker Base wurde exogen zugegebene Chlamydia nicht in einer signifikanten Zahl in Patientenproben nachgewiesen, wie in Tabelle 1 gezeigt. Mit Vorbehandlung mit starker Base wurde jedoch exogen zugegebenes Chlamydia in allen Proben nachgewiesen. TABELLE 1 BESEITIGUNG FALSCH NEGATIVEN ANSPRECHENS DURCH BASENBEHANDLUNG Absorptionswert Patient Neutraler pH Basischer pH Nummer Ansprechen mit EB ohne EB EB - Elementarkörper; D - EB nachgewiesen; ND - EB nicht nachgewiesen.
Funktionelle falsch positive Proben wurden auch unter Verwendung von Patienten-Untersuchungsmaterialien ausgewertet, die in eine gepufferte Detergenslösung extrahiert worden waren, wie im obigen Verfahren 1 beschrieben. EIA-Absorptionswerte von klinischen Proben wurden mit Ergebnissen verglichen, die unter Anwendung direkter Fluoreszenztechniken für die gleichen Untersuchungsmaterialien erhalten wurden, um einen Absorptionspegel (Abschaltung) zu bilden, über welchem Proben positiv angesehen werden, und unterhalb welchem Proben negativ angesehen werden.
Zwei gleiche Volumina Aliquote jeder Probe, extrahiert in die Lösung, wurden genommen. Ein Aliquot erhielt ein Zehntel Volumen 1,0M NaOH, und das andere Aliquot erhielt das gleiche Volumen entionisiertes Wasser. Die Aliquoten wurden 10 Minuten stehengelassen. Das mit der Base behandelte Aliquot wurde neutralisiert, wie oben beschrieben, und das andere Aliquot wurde mit einem gleichen Volumen Puffer verdünnt. Die Proben wurden in einem herkömmlichen EIA vom Sandwich-Typus getestet, wobei ein polyklonaler Anti-Chlamydia-Antikörper und ein mit Meerrettich-Peroxidase (HPP) markierter Nachweis-Antikörper, verdünnt in einem herkömmlichen Verdünnungspuffer, verwendet wurden. Der Abschaltabsorptionswert für dieses Experiment war 0,22. Die in Tabelle 2 gezeigten Ergebnisse zeigen, daß mit einer beträchtlichen Anzahl von Proben die Absorptionswerte von nicht mit Base behandelten Untersuchungsmaterialien falsch hoch waren, und daß die Basenbehandlung dieser Proben dieses Ergebnis vermied. Falsche Werte, wie jene, die unten gezeigt sind, können zum falschen Schluß geführt haben, daß Chlamydia-Antigen in der Probe vorhanden ist. TABELLE 2 BESEITIGUNG FALSCH POSITIVEN ANSPRECHENS DURCH BASENBEHANDLUNG
Experimente, die einige verschiedene Basen verwendeten, zeigten, daß starke Basen, wie Natriumhydroxid und Kaliumhydroxid, welche in Wasser vollständig ionisieren (d.h. Lösungen von 1,0N bilden einen pH von 14,0), am meisten wirkiam waren. Schwächere Basen, wie Ammoniumhydroxid, Trinatriumphosphat, Natriumcarbonat und Amin-enthaltende Verbindungen, waren nicht so wirksam. Alle schwächeren Basen besitzen pKa-Werte von weniger als 13.
Die Erfindung wird mit den folgenden veranschaulichenden Beispielen weiter dargestellt. Beispiel 1: Ein urogenitales Abstrich-Untersuchungsmaterial wurde von einem Patienten erhalten und in ein Glasteströhrchen von 12 x 75 mm gegeben. Ein Volumen von 1,0 ml einer 0,1M NaOH oder KOH mit 0,005M Ethylendiamindinatriumtetraessigsäure (Na&sub2;EDTA) und 0,05% Gewicht(Volumen CHAPS wurde dem Röhrchen zugegeben, um die Probe vom Abstrichtupfer zu extrahieren.
Der Abstrichtupfer wurde in der oben beschriebenen Lösung zumindest zehn Minuten stehengelassen und durchgewirbelt und gegen die Seite des Röhrchens ausgedrückt, um absorbierte Flüssigkeit aozutrennen und verworfen. 0,10 ml einer 1,0M HCl oder einer anderen Säure wurde der Lösung zugegeben, um die Base zu neutralisieren. Das Neutralisierungsmittel wurde in einer 2,0M Tris(hydroxymethyl)aminomethanhydrochiorid-(Tris- HCI)-Lösung anfangs bei pH 8,0 zugegeben. Die Probe wurde zehn Sekunden durchgewirbelt, um die Neutralisation zu vervollständigen.
Ein geeignetes Volumen der Probe wurde aus dem Röhrchen zum Test in einem Chlamydia-spezifischen EIA genommen, wie in Beispiel 3 beschrieben.

Beispiel 2:

Ein urogenitales Abstrich-Untersuchungsmaterial wurde in ein Teströhrchen von 12 x 75 mm gegeben und in eine Lösung von 1,0 ml 0,1M Tris-HCl, 0,005M Na&sub2;EDTA, 0,05% Gew./Vol. CHAPS, pH 8,0, extrahiert. Der Abstrichtupfer wurde in dieser Lösung mindestens 10 Minuten stehengelassen und etwa 30 Sekunden durchgewirbelt. Nachdem der Abstrichtupfer gegen die Seite des Röhrchens ausgewrungen worden war, um absorbierte Flüssigkeit herauszudrücken, wurden 0,100 ml 1,0M NaOH oder 1,0M KOH der Probe zugegeben, und die Probe wurde für weitere zehn Sekunden durchgewirbelt. Nach zehn Minuten wurden 0,100 ml 1,0M HCl, verdünnt in 1,0M Tris-HCl, pH 8,0, zugegeben. Die das Untersuchungsmaterial enthältende Probe wurde zehn Sekunden durchgewirbelt, um die Neutralisation zu vervollständigen. Ein geeignetes Volumen Probe wurde aus dem Röhrchen genommen, um es in einem Chlamydia-spezifischen EIA zu verwenden, wie in Beispiel 3 beschrieben.

Beispiel 3: Immuntest

Zweihundert Mikroliter des vorbehandelten Untersuchungsmaterials, eine positive und eine negative Kontrolle wurden jeweils in ein mit Antikörper beschichtetes Teströhrchen gegeben. Nachdem die Probe in das beschichtete Röhrchen gegeben worden war, wurde das Röhrchen leicht geschüttelt und für etwa eine Stunde bei Raumtemperatur stehengelassen.
100 Mikroliter eines auf Chlamydia spezifischen, polyklonalen Antikörpers, der nach gut bekannten Verfahren, die jenen äquivalent sind, die in H. D. Caldwell, C. Kuo und G. E. Kenny, 115 Journal of Immunology, S. 969-975 (1975) beschrieben sind, hergestellt und gereinigt wurde, wurden jedem Röhrchen zugegeben, und jedes Röhrchen wurde leicht gemischt und für etwa eine Stunde bei Raumtemperatur stehengelassen. 100 Mikroliter Merrettichperoxidase (HPP), mit einem Antikörper konjugiert, der gegen den Chlamydia-spezifischen polyklonalen Antikörper gerichtet und von kommerziellen Quellen, wie Jackson Immuno Research Laboratories, erhalten war, wurden jedem Röhrchen zugegeben. Jedes Röhrchen wurde leicht gemischt und für eine Stunde bei Raumtemperatur stehengelassen. Dann wurde das Gemisch aus jedem Röhrchen entfernt und das Röhrchen gründlich mit entionisiertem Wasser gewaschen. 500 Mikroliter einer frisch hergestellten Substratlösung, die aus einem Teil Chromagen (3,0 mg/ml Tetramethylbenzidin in 0,1M HCl) auf 25 Teile Substratpuffer (0,05M Natriumcitrat, 0,05M Borsäure, 0,012% Vol./Vol. Wasserstoffperoxid, pH 4,2) bestand, wurden jedem Röhrchen zugegeben.
Die Enzymreaktion wurde 15 Minuten ablaufen gelassen und mit 1,0 ml 1,0M Schwefelsäure (H) gestoppt. Die Absorption der Proben wurde bei 450 Nanometer spektrophotometrisch gemessen. Die Farbintensität ist eine Funktion der in der Probe vorhandenen Menge an Chlamydia-Antigen, und demgemäß wurde die Antigenmenge bestimmt.

Claims

1. Verfahren zum wesentlichen Ausschluß des Auftretens falsch negativer und falsch positiver Ergebnisse in einem Enzymimmuntest für ein Chlamydia-Antigen in einem aus dem Auge, den Nasenlöchern an der Nasenrückseite, dem Gebärmutterhals, der Harnröhre, dem Rachen oder dem Rektum entnommenen Patienten-Untersuchungsmaterial,bei dem das Untersuchungsmaterial mit einer wäßrigen Lösung behandelt wird derart, daß die wäßrige Lösung mit dem Untersuchungsmaterial eine Endkonzentration von nicht weniger als 0,1M NaOH oder 0,1M KOH hat, und dann die das Untersuchungsmaterial enthaltende Lösung vor Durchführung des Immuntests neutralisiert wird.

2. Verfahren nach Anspruch 1, worin das Chlamydia-Antigen ein Lipopolysaccharid ist.

3. Verfahren nach Anspruch 1, worin das Untersuchungsmaterial ein urogenitales Untersuchungsmaterial ist.

4. Verfahren nach Anspruch 1, worin das Untersuchungsmaterial ein Abstrich-Untersuchungsmateriai ist.

5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 4, worin das Untersuchungsmaterial mit einer wäßrigen basischen Lösung eines pH von nicht weniger als etwa 13 behandelt wird.

6. Diagnostischer Testkit zur Bestimmung des Vorliegens eines Chlamydia-Antigens in einem Untersuchungsmaterial, umfassend

eine vorbestimmte Menge einer wäßrigen Lösung von 1,0M NaOH oder 1,0M KOH, die zur Kombination mit einer Menge des Untersuchungsmaterials ausreichend ist, so daß die wäßrige Lösung eine Endkonzentration von nicht weniger als 0,1M NaOH oder 0,1M KOH hat, eine 1,0M HCl-Lösung in einer Menge, die zur Neutralisierung der das Untersuchungsmaterial enthaltenden Lösung ausreichend ist, eine bekannte Menge eines Anti-Chlamydia-Antikörpers und eine bekannte Menge eines Enzym-markierten Nachweis-Antikörpers.