DE2833886A1 - Immunologisches reagenz - Google Patents
Immunologisches reagenzInfo
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Description
Patentanwälte"
Dr. Franz Lederer 2, Aug, 1978
Dip!.-Ing. Reiner F. Meyer fo
8000 München 80
lucile-Grahn-Str. 22. Tal. iO39) 47 29 47 <έ O O· «J O 8 b
RAU 4093/ 32
F. Hoffmann-La Roche & Co. Aktiengesellschaft, Basel/Schweiz
Immunologisches Reagenz
Die vorliegende Erfindung betrifft wertvolle diagnostische Reagenzien, ein Verfahren zu deren Herstellung und diagnostische
Methoden, worin solche Reagenzien Verwendung finden.
Die Diagnose von pathologischen oder anderen Zuständen in Menschen und Tieren wird oft unter Anwendung von immunologischen
Prinzipien durchgeführt. Diese Prinzipien werden zum Nachweis
von Antikörpern oder Antigenen in den Körperflüssigkeiten des Lebewesens benützt. Ein Antigen ist eine fremde Substanz, welche,
wenn sie dem Lebewesen appliziert wird, die Bildung von gewissen löslichen und als Antikörper bezeichneten Substanzen bewirkt.
Irgendeine Substanz wie z.B. ein Protein, welche normal nicht in einem bestimmten Lebewesen vorhanden ist, kann die
Bildung von Antikörpern verursachen, wenn sie dem Lebewesen unter geeigneten Bedingungen appliziert wird.
3098G8/Q807
Hen/16.5.1978
283388$
Nach ihrer Bildung reagieren die Antikörper mit den Antigenen und schützen auf diese Weise, im Fall eines Bakterienoder
Virus-Fremdkörpers, gegen Infektionen.
Immunologische Testverfahren beruhen auf der Antigen-Antikörper-Reaktion,
welche sich gewöhnlich durch Unlöslichkeit oder Agglutination manifestiert.
Im allgemeinen wird die Anwesenheit eines Antigens oder
eines Antikörpers dadurch bestätigt oder bestimmt, dass man den entsprechenden Antikörper oder das entsprechende Antigen
einer Körperflüssigkeit des Lebewesens, meistens Urin, Blutserum oder einem speziell behandelten Blutextrakt, zugibt. Es
können jedoch auch andere Körperflüssigkeiten verwendet werden. Man stellt die Anwesenheit bzw. die Abwesenheit des Antikörpers
oder des Antigens in der Körperflüssigkeit des Lebewesens fest, indem das Eintreten oder nicht-Eintreten einer Antigen-Antikörperreaktion
festgestellt wird.
Weil einige Komplexe sich nur sehr langsam bilden und sehr geringe Teilchengrössen besitzen, ist es notwendig, Träger zu
benützen, um sie sichtbar zu machen. In einer bisher bevorzugten Methode wurden der Antikörper bzw. das Antigen mittels
eines Carbodiimids über eine Amidbindung an diskreten Teilchen von carboxylierten Latexpolymeren, wie z.B. von carboxylierten
Copolymeren aus Butadien und Styrol, gebunden.
Diese Methode hat jedoch den Nachteil, dass während der
Kupplung des Proteins (Antikörper oder Antigen) an die Latexteilchen, wegen der Verwendung von Carbodiimiden als Nebenreaktion
eine unerwünschte Vernetzung des eingesetzten Proteins eintritt und somit ein Teil der oft sehr teuren Proteine für die
Kupplung mit dem Träger verloren geht.
Die vorliegende Erfindung betrifft nun neuartige polymere Träger, mit welchen die obigen Nachteile vermieden werden können
und welche mit einem breiten Spektrum von immunologisch aktiven
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-S-
Materialien ein diagnostisch verwendbares Reagenz bilden können, das stabil, spezifisch und empfindlich ist und eine leicht .·
nachweisbare visuelle Bewertung in sehr kurzer Zeit ermöglicht.
Genauer gesagt betrifft die vorliegende Erfindung ein wasserunlösliches Reagenz für eine immunologische Bestimmung
mit einem etwa dem von Wasser entsprechenden spezifischen Gewicht in Form diskreter Latexteilchen, an welche ein
immunologisch aktives Material gebunden ist, dadurch gekennzeichnet, dass der Latex aus einer Dispersion von Partikeln
von Vxnylpolymerisaten besteht, die als Endgruppen Gruppen der Formel: / /^\
NH2 tragen, wobei die Partikel aus einem Kern von Vinyl- und/oder
Dienpolymerisat, das Carboxyl- und/oder SuIfonatfunktionen
trägt, und aus einer äusseren Schicht von Viny!polymerisat, das
als Endgruppen Gruppen der Formel:
NH2
trägt, gebildet sind und einen mittleren Durchmesser zwischen 0,03 und 5 pm haben.
Weiter bezieht sich die Erfindung auf ein Verfahren zur Herstellung eines solchen Reagens, welches dadurch gekennzeichnet
ist, dass man den Latex nach Diazotierung oder in Gegenwart von geeigneten bifunktionellen Reagenzien mit dem
immunologisch aktiven Material umsetzt.
Als "immunologisch aktive Substanzen" können all jene Bestandteile in physiologischen Flüssigkeiten, Zeil- und Gewebeextrakten
genannt werden, für die ein immunologischer Reaktionspartner vorhanden ist oder gebildet werden kann. Dazu gehören
Amine, Aminosäuren, Peptide, Proteine, Lipoproteine, Glycoproteide,
Sterine, Steroide, Lipoide, Nucleinsäuren, Enzyme, Hormone, Vitamine, Polysaccharide und Alkaloide. Bevorzugte
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■\ immunologisch aktive Substanzen sind in der folgenden Tabelle
zusammengestellt:
I. Antigene gewonnen aus Mikroorganismen
Bakterien
-JO 1- Gram-positive Kokken
Streptokokken (Pyogene, Feealis und Viridans) Staphylokokken (aureus und albus)
Pneumokokken (D. pneumoniae)
"15 2. Gram-negative Kokken
Neisseria (gonorrhoeae und meningitidis)
3. Gram-positive, aerobe Bazillen Bacillus anthracis Corynebacterium diphtheriae
Erysipelothrix
Listeria monocytogenes
4. Gram-positive, anaerobe Bazillen
Clostridia (botulinum, perfringens, welchii und tetani)
5. Gram-negative, anaerobe Bazillen
Bacteroides
6. Gram-negative, intestinale Bazillen
Escherichia
Klebsiella
Enterobacter Proteus Pseudomonas
Salmonella
Shigella
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-/■
7. Gram-negative, nicht intestinale Bazillen
Pasteurella (pestis und tularensis)
Hemophilus influenzae Brucella (melitensis, abortus und suis)
Bordetella pertussis
Malleomyces
8. Spirocheten Treponema pallidum
■\q Leptospira
Borrelia
9. Mycoplasma
10. Mycobakterien
11. Vibrio
12. Actinomyces
Protozoen
1. Intestinale Protozoen Amöben
2. Flagellates Trichomonas Leishmania Trypanosomes Toxoplasma (T. Gondii)
3. Sporozoen
Plasmodia (vivax, falciparum, malariae und ovale)
1. Sporotrichum
2. Cryptococcus
3. Blastomyces
4. Histoplasma 10
5. Coccidioides
6. Candida
YiE§S_HS^_5i£lS§££§i§S
1. Rickettsia
2. Viren
Hundehepatidis
Shope papilloma
Influenza A & B
Hühnerpest Herpes simplex Adenoviren
PoIyoma
Rous sarcoma
Vaccinia Poliovirus Röteln
Hundestaupe
Leukemia
Mumps
Newcastle-Krankheit (Haushuhnkrankheit) Sendai
ECHO
Maul- und Klauenseuche
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Psittacosis
Rabis
Ectromelia Arborviren
II. Fremde Antigene
Polysaccharide Hyaluronidase Tetanus-toxin Eiovalbumin
Schafserumalbumin
menschliches Plasma-gamma-globulin menschliches Serum-albumin
III. Natürliche Antigene
1. Hormone
Insulin
Glucagon
Thyroid-Hormone
Choriongonadotropin
Chorion-Wachstumshormon - Prolactin 25
2.
Pancreas-chymotrypsinogen Procarboxypeptidase Deoxyribonuclease
Ribonuclease Catalase Creatin-Phosphokinase
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3. Organsgezifische_Anti2gne
Niere Leber Haut
Herz (Myoglobin)
gastrointestinaler Trakt
Prostata Embryo-Antigene (z.B. CEA-Antigen) Tumor-Antigene
4. Bindegewebekomgonenten
Muskel Collagen
Amyloid
Plättchen Megakaryocyten Leucocyten Erythrocyten
Blutgruppensubstanzen
Fors sman-Antigen Histoverträglichkeits-Antigene
Fibrin und Fibrinoid Plasminogen und Plasmin
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7. Pathologische_Globuline
Myeloma, makroglobulinaemische und dysglobulinaemische
Proteine
Rheumatoidfaktor
Rheumatoidfaktor
C-reaktionsfähiges Protein
IV. Natürliche Antikörper
1. Natürliches_Gamma.2lobulin
1. Natürliches_Gamma.2lobulin
Natürliche Antikörper - nephrotoxische Antikörper Komplement
2. Auto-Antikörper
antinuclearer Faktor
Thyroidautoantikörper
Adrenalautoantikörper
Autoantikörper für gastrisch-parietale Zellen bei
perniziöser Anämie
Autoantikörper für Spermatozoen
Muskel-Autoantikörper bei Myasthenia gravis
Autoantikörper für Nervengewebe Autoantikörper gegen faserartiges Gewebe und Vaskular-
komponenten
Autoantikörper gegen Plättchen und Megakaryocyten
Antikörper gegen Trophoblasten
3. Induzierte_Antikörger_2e2en:
Immunoglobulinklassen IgG, IgA, IgM oder unterschiedliche Spezies
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V. Haptenische Verbindungen
Opiumalkaloid (Morphin)
Antipyrin
Barbitursäure
Antipyrin
Barbitursäure
Im Rahmen der vorliegenden Erfindung sind besonders bevorzugte immunologisch aktive Substanzen Albumin, Rheumatoidfaktor,
menschliches Immunoglobulin IgG und Antikörper gegen 10
Unter Vinylpolymerisaten, die den Kern der Partikeln
bilden, versteht man Homopolymerisate von Monomeren, wie Styrol und seine Derivate: Methylstyrole, Aethylstyrole,
Vinyltoluol; Vinylchlorid, Vinylidenchlorid; Vinylacetat; Acrylderivate, wie Alkylacrylate und -methacrylate (Alkyl mit
1 bis 10 Kohlenstoffatomen), die gegebenenfalls hydroxyliert
sind, wie 2-Hydroxyäthylacrylat und -methacrylat und 2-Hydroxypropylacrylat
und -methacrylat; Acrylnitril und Methacrylnitril; sowie Copolymerisate dieser Monomeren untereinander
und/oder mit modifizierenden Vinylcomonomeren, wie Divinyl— benzol, Acrylamid und Methacrylamid und deren N-substituierte
Derivate, wie z.B. Methylolacrylamid; diese Comonomere stellen bis zu 5 Gew.-% des Copolymerisates dar.
Unter Dienpolymerisaten, die den Kern bilden, versteht man Homopolymerisate des Butadiens und seiner Derivate:
Chloropren, Isopren; sowie,die Copolymerisate dieser Monomeren
untereinander und/oder mit Vinylmonomeren, wie sie oben genannt
wurden, in allen Mengenverhältnissen und/oder mit modifizierend
wirkenden Vinylmonomeren, wie sie oben aufgezählt wurden, deren Menge in dem Copolymerisat bis zu 5 Gew.-% ausmacht.
Die Viny!polymerisate, welche die äussere Schicht der
Partikel bilden, sind Homopolymerisate von Monomeren, wie Styrol und seine Derivate, z.B. Methylstyrole, Aethylstyrole
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-j und Vinyltoluol; gegebenenfalls hydroxylierte Alky!acrylate
und Alky!methacrylate (Alkyl mit 1 bis 10 Kohlenstoffatomen);
Acrylnitril und Methacrylnitril; sowie Copolymerisate dieser Monomeren untereinander und/oder mit modifizierend wirkenden
Vinylcomonomeren, wie Divinylbenzol, Acrylamid und Methacrylamid sowie deren N-substituierte Derivate, wie Methylolacrylamid,
die bis zu 5 Gew.-% des Copolymerisats ausmachen können.
-|0 In den Partikeln stellt das Kernpolymerisat 30 bis 99,5
Gew.-%, vorzugsweise 60 bis 99 Gew.-%, und das Polymerisat der äusseren Schicht 70 bis 0,5 Gew.-%, vorzugsweise 40 bis
1 Gew.-%, dar.
■|5 Die Polymerisatpartikel, deren Kornverteilung je nach den
gewünschten Eigenschaften des Latex und den in Betracht gezogenen Anwendungen breit oder eng sein kann, haben einen
mittleren Durchmesser zwischen 0,03 und 5 μΐη, vorzugsweise
zwischen 0,05 und 1 μΐη. Sie stellen bis zu 60 Gew.-%, vorzugsweise
bis zu 45 Gew.-%, des Latex dar. Jedoch kann der Latex ohne weiteres verdünnt oder konzentriert werden.
Das Kernpolymerisat kann hergestellt werden durch Emulsionspolymerisation
des oder der Vinylmonomeren und/oder Dienmonomeren in Gegenwart von mindestens einer äthylenischen Mono-
oder Polycarbonsäure, die mit dem oder den Monomeren copolymerisierbar ist, und/oder mindestens eines copolymerisierbaren
ungesättigten Alkaliorganosulfonats; dann wird das Polymerisat der äusseren Schicht hergestellt durch Emulsionspolymerisation
des oder der Vinylmonomeren in Gegenwart des Latex des Kernpolymerisates, der oben erhalten wurde, und in Gegenwart eines
Kettenübertragungsmittels.
Die bei der Polymerisation des Kernpolymerisates und bei der Polymerisation des Polymerisates der äusseren Schicht verwendeten
Monomeren sind die oben aufgezählten Monomeren. Sie werden entweder alle vor der Polymerisation verwendet oder zum
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Teil vor der Polymerisation verwendet, wobei der restliche Teil im Verlauf der Polymerisation in aufeinanderfolgenden
Fraktionen oder kontinuierlich zum Reaktionsmedium gegeben wird, oder alle im Verlauf der Polymerisation in aufeinanderfolgenden
Fraktionen oder kontinuierlich zugesetzt.
Als copolymerisierbare äthylenische Mono- oder Polycarbonsäuren seien Acrylsäure, Methacrylsäure, Maleinsäure,
Fumarsäure, Crotonsäure, Sorbinsäure, Zimtsäure, Itaconsäure, Aconitsäure genannt, die in Mengen zwischen 0,5 und 15 Gew.-%,
vorzugsweise zwischen 0,5 und 10 Gew.-%, bezogen auf das oder die Monomeren, verwendet werden.
Die copolymerisierbaren ungesättigten Alkaliorganosulfonate sind z.B. Natriumvinylsulfonat, Natriuinmethallylsulfonat,
Natrium-2-sulfoäthylacrylat, Natrium-2-sulfoäthylmetacrylat,
2-Acrylamido-2-methylpropansulfonat; sie werden in Mengen zwischen 0,1 und 3 Gew.-%, bezogen auf das oder die Monomeren, verwendet.
Die copolymerisierbaren äthylenischen Mono- oder Polycarbonsäuren
und die copolymerisierbaren ungesättigten Alkaliorganosulfonate können einzeln oder in Kombination in den angegebenen
Mengen verwendet werden.
Die Herstellung des Kernpolymerisates erfolgt in Emulsion nach jedem beliebigen klassischen Verfahren in Gegenwart eines
Initiators und eines Emulgators.
Als Initiator verwendet man vorzugsweise Alkalipersulfate,
wasserlösliche Diazoderivate oder Redoxysysteme auf Basis von Wasserstoffperoxyd, organischen Peroxyden oder Hydroperoxyden
in Mengen in der Grössenordnung von 0,01 bis 5 Gew.-%, vorzugsweise
0,03 bis 3 Gew.-%, bezogen auf das oder die Monomeren.
Der verwendete Emulgator kann anionaktiv und/oder nichtionogen sein. Es handelt sich um klassische Produkte für die
Emulsionspolymerisation.
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Als anionaktive Emulgatoren seien genannt Salze von Fettsäuren; Alkalialkylsulfate, Alkalialkylsulfonate, Alkalialkylarylsulfonate,
Alkalialkylsulfosuccinate, Alkalialkylphosphate; SuIfobernsteinsäurealky!ester; Sulfonate von Alkylphenolpolyglycoläthern;
Salze von Estern von Alkylsulfopolycarbonsäuren; Kondensationsprodukte von Fettsäuren mit
Oxyalkansulfonsäuren und Aminoalkansulfonsäuren; sulfatierte
Derivate von Polyglycoläthern; sulfatierte Ester von Fettsäuren und Polyglycolen; Alkanolamide von sulfatierten Fettsäuren.
Als nichtionogene Emulgatoren kommen Fettsäureester von Polyalkoholen, Alkanolamide von Fettsäuren, Polyäthylenoxyde,
Copolyäthylenoxyd/Propylenoxyd, oxyäthylierte Alkylphenole in Betracht.
Die zu verwendenden Mengen des oder der Emulgatoren liegen in der Grössenordnung von 0,01 bis 5 Gew.-%, bezogen
auf das oder die Monomeren, und ihre Einführung erfolgt entweder insgesamt vor der Polymerisation oder zum Teil vor der
Polymerisation, wobei der restliche Teil im Verlauf der Polymerisation in nacheinanderfolgenden Fraktionen oder kontinuierlich
zum Reaktionsmedium zugesetzt wird, oder insgesamt im Verlauf der Polymerisation in nacheinanderfolgenden Fraktionen
oder kontinuierlich.
Die für die Polymerisation des Kernpolymerisates zu
verwendende Menge Wasser muss derart sein, dass die Konzentration des oder der Monomeren 60 Gew.-% nicht übersteigt.
Obgleich es nicht unbedingt erforderlich ist, ist es möglich, dem Reaktionsmedium beliebige Verbindungen zuzusetzen,
die entweder die Ionenstärke des Mediums und demzufolge die Kornverteilung zu modifizieren vermögen, wie Mineralsalze,
Elektrolyten, in einer Menge bis zu 3 Gew.-%, bezogen auf die Monomeren, oder die den pH-Wert des Mediums zu modifizieren
vermögen, wie beispielsweise Puffer, Säuren, 3asen. Jedoch
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wurde in bestimmten Fällen festgestellt, dass es zur Begünstigung
der Copolymerisation zu bevorzugen ist, wenn das Medium neutral oder sauer ist.
Die Polymerisationstemperatur, die eine Funktion des verwendeten
Initiators und des herzustellenden Polymerisats ist,
liegt im allgemeinen zwischen -5 und +90 C.
Die erhaltenen Latices weisen Polymerisatpartikel mit
einem Durchmesser zwischen 0,03 und 5 μπι, vorzugsweise zwischen
0,05 und 1 pm, auf. Diese Partikel sind im allgemeinen nicht
kalibriert, aber es ist möglich, sie kalibriert zu erhalten, wenn man bekannte Kalibrierverfahren für die Emulsionspolymerisation
anwendet, wie die gesteuerte Zugabe des Emulgators und/oder des oder der Monomeren und insbesondere die Animpfung.
Im letzten Falle kann der Emulgator in dem Impfmaterial enthalten sein.
Die Partikel sind aus Homopolymerisat oder Copolymerisat mit einer Oberfläche von Carboxyl- und/oder Sulfonatfunktionen
gebildet. Das Vorhandensein dieser Funktionen kann durch konduktometrische Titration bestätigt werden.
Die Herstellung des Polymerisates der äusseren Schicht wird in wässriger Emulsion in Gegenwart von Kernpolymerisat,
Kettenübertragungsmittel, Initiator und gegebenenfalls Emulgator ausgeführt.
Die verwendete Menge des Kernpolymerisats liegt zwischen
30 und 99,5 Gew.-% und beträgt vorzugsweise 60 bis 99 Gew.-%,
bezogen auf die Summe von Kernpolymerisat und zu polymerisierendem
Monomer oder zu polymerisierenden Monomeren.
Das Kettenübertragungsmittel vom Typ Aminophenyldisulfid
oder Aminophenylmercaptan ist insbesondere ο,ο'-Dithiobisanilin,
ρ,ρ'-Dithiobisanilin, 2-Mercaptoanilin, 3-Mercaptoanilin,
4-Mercaptoanilin. Dieses Mittel wird im allgemeinen in Lösung
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-yr-
in dem oder den Monomeren verwendet, und zwar in Mengen zwischen 0,1 und 10 Gew.-%, vorzugsweise zwischen 0,5 und
5 Gew.-%, bezogen auf das oder die Monomere.
Die für die Polymerisation des oder der Monomeren der äusseren Schicht erforderlichen Initiatoren sind Diazoinitiatoren,
Azonitrile wie Azo-bis-isobutyronitril oder wie sulfonierte
Azonitrile, wie sie im französischen Patent Nr. 1.233.582 beschrieben sind; von diesen kann man erwähnen Azobis-(isobutyronitrilnatriumsulfonat),
Azobis- (cc-methylbutyronitrilnatriumsulfonat)
, Azobis- (a-methyl-ß-äthoxycarbonylbutyronitrilnatriumsulfonat);
carboxylierte Azonitrile, wie 4,4'-Azobis- (4-cyanpentansäure)
und ihre Salze, Azobis-alkylamidiniumsalze, wie α,α'-Azobis-isobutyramidiniumchlorid, Azobis-N,N'-dimethylenisobutyramidiniumchlorid.
Der Initiator, der in einer Menge von 0,01 bis 3 Gew.-%, vorzugsweise 0,1 bis 2 Gew.-%, bezogen auf das oder die Monomeren,
verwendet wird, wird insgesamt oder zum Teil vor der Polymerisation verwendet, wobei der andere Teil im Verlauf
der Polymerisation in nacheinanderfolgenden Fraktionen oder kontinuierlich zu dem Reaktionsmedium zugesetzt wird, insbesondere
wenn die Lebensdauer des Initiators bei der Polymerisationstemperatur kurz ist. Der Initiator kann auch insgesamt
im Verlauf der Polymerisation kontinuierlich zum Reaktionsmedium zugegeben werden.
Der allfällige Emulgator wird aus anionaktiven und/oder nichtionogenen Emulgatoren gewählt, die für die Herstellung
des Kernpolymerisats angegeben wurden; er kann gleich oder verschieden wie der für die Herstellung des Kernpolymerisates
verwendete Emulgator sein. Er wird in Mengen von bis zu 10 Gew.-%, bezogen auf das oder die Monomeren, verwendet, und
seine Einführung kann je nach dem mittleren Durchmesser der Latexpartikel, der erhalten werden soll, entweder insgesamt
vor der Polymerisation oder zum Teil vor der Polymerisation erfolgen, wobei der restliche Teil im Verlauf der Polymeri-
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\ sation in nacheinanderfolgenden Fraktionen oder kontinuierlich
zugegeben wird, oder sie kann insgesamt im Verlauf der Polymerisation in aufeinanderfolgenden Fraktionen oder kontinuierlich
erfolgen.
Die bei der Polymerisation der äusseren Schicht zu verwendende Menge Wasser muss derart sein, dass die Konzentration
von Kernpolymerisat und zu polymerisierendem oder zu
polymerisierenden Monomeren 60 Gew.-%, vorzugsweise 45 Gew.-%, nicht übersteigt.
Die Polymerisationstemperatur, die eine Funktion des gewählten Initiators 1st, liegt im allgemeinen zwischen 5 und
100 C, vorzugsweise zwischen 40 und 90°C.
Die erhaltenen Latices weisen Polymerisationspartikel auf,
deren Durchmesser zwischen 0,03 und 5 μπι, vorzugsweise
zwischen 0,05 und 1 Mm, liegt; da die Menge der äusseren Schicht
nicht sehr gross ist, modifiziert sie nicht in merklicher Weise die Grosse der Partikel des Kernpolymerisates. Die Partikel
können kalibriert sein oder nicht, aber bei bestimmten Anwendungen wird es aus Gründen der Reproduzierbarkeit bevorzugt,
dass sie kalibriert sind, d.h. dass sie eine schmale Korngrössenverteilung haben.
Die Latices sind mechanisch und bei der Lagerung sowie
gegen Elektrolyten beständig, d.h. sie flocken nicht aus, wenn man ihnen Mineralsalze, wie z.B. die Chloride, Nitrate,
Borate, Phosphate des Natriums, Calciums, Magnesiums, Kaliums zusetzt.
Die Partikel sind aus Polymerisaten gebildet und weisen
eine Oberflache mit Carboxyl- und/oder Sulfonatfunktionen sowie
Gruppen der Formel:
NH2
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auf.
Obgleich die äussere Schicht auf dem Kernpolymerisat polymerisiert
wird, bleiben die Carboxyl- und/oder SuIfonatfunktionen
zugänglich, wie durch konduktometrische Titration gezeigt
werden kann, und die Gruppen der Formel:
NH2
stehen für weitere Reaktionen zur Verfügung.
Die immunologisch aktiven Materialien (Antigen oder Antikörper) können physikalisch und/oder chemisch an den erfindungs-
-|5 gemäss verwendeten Latexpolymeren gebunden werden.
In einer Ausführungsform wird das erfindungsgemässe
Reagenz durch Bildung einer Azobindung zwischen dem Latex und dem immunologisch aktiven Material hergestellt. Zu diesem
Zweck werden durch Behandlung des Latex in wässriger saurer Lösung mit einem Nitrit die primären aromatischen Aminogruppen
des Latex in ein Diazoniumsalz überführt.
Als Säure kann z.B. eine anorganische Säure wie Salzsäure, Schwefelsäure oder Perchlorsäure verwendet werden. Als Nitrit
wird vorzugsweise Natriumnitrit oder Kaliumnitrit verwendet. Die Reaktion wird wegen der Instabilität der Diazoniumsalze
vorzugsweise bei 0-5 C ausgeführt.
Das immunologische aktive Material wird anschliessend im wässrigen Medium, vorzugsweise zwischen 0 C und Zimmertemperatur,
mit dem diazotierten Träger zur Reaktion gebracht.
In einer weiteren Ausführungsform des erfindungsgemässen Verfahrens kann das immunologisch aktive Material mit Hilfe
einer polyfunktionellen Verbindung über ein Zwischenstück an den gemäss vorliegender Erfindung verwendeten Latex gebunden
werden. 909808/0807
Als polyfunktionelle Verbindungen eignen sich diejenigen,
. welche mit den aromatischen Aminogruppen des Latexpolymeren reagieren oder an dem aromatischen Ring des Latexpolymeren eine
Substitutionsreaktion eingehen und gleichzeitig mit funktionellen Gruppen des immunologisch aktiven Materials, wie Amino-,
Mercapto-, Carboxyl- und Hydroxylgruppen, reagieren oder eine Substitutionsreaktion an dem aromatischen Ring des immunologisch
aktiven Materials eingehen.
Repräsentative Vertreter derartiger polyfunktioneller
Verbindungen sind Azo-, Isocyano-, Isothiocyano- oder Aldehydgruppen enthaltenden Verbindungen wie z.B. Bis-diazobenzidin,
Bis-diazobenzidin-disulfonsäure, Bis-diazo-p-phenyldiamin,
Phenyldiisocyanat, Toluoldiisocyanat, Glutardialdehyd.
Bei Umsetzung in Gegenwart einer bifunktionellen Verbindung wird das immunologisch aktive Material in wässrigem
Medium, vorzugsweise bei Zimmertemperatur (20°C bis 25°C), mit dem Träger zur Reaktion gebracht. Die Temperatur kann
jedoch auch zwischen O C und 40 C liegen.
Die Menge der verwendeten bifunktionellen Verbindung hängt ab von der Zahl der Aminogruppen auf dem Latex. Vorzugsweise
wird ein zehn- bis hundert-fächer molarer Ueberschuss der bifunktionellen Verbindung gegenüber der Zahl der Aminogruppen
des eingesetztes Latex verwendet.
In beiden Ausführungsformen zur Herstellung des erfindungsgemässen
Reagenz ist der pH-Wert der Reaktion wichtig. Er darf nicht so gewählt werden, dass ein Protein-Reaktionspartner
denaturiert wird. In der Regel liegt der pH-Wert zwischen 5 und 9. Dieser pH-Wert wird unter Verwendung von geeigneten üblichen
Puffer-Systemen wie Phosphatpuffer und dgl., aufrechterhalten.
Das Endprodukt ist ein wasserunlösliches Material, welches in einer wässrigen Pufferlösung vom pH-Wert 5,0 bis 9 suspendiert
ist, wobei der pH-Wert der Lösung von dem im einzelnen
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verwendeten System und von den Anforderungen an die Stabilität des immunologisch aktiven Materials abhängig ist. Das spezifische
Gewicht des Produktes entspricht etwa demjenigen von Wasser (0,97-1,02), wodurch eine stabile Suspension des Produkts
erreicht wird. Die Produkte können z»B. durch Zentrifugieren
in Form eines weissen oder gelblichen Niederschlags isoliert werden.
Die Menge an immunologisch aktivem Material, das an die immunologisch inerten Latexpolymer-Träger gebunden ist, beträgt
in der Regel 0,01 bis 15,0 Gew.%. Jedoch wird jedes einzelne immunologisch aktive Material in einer Menge benützt, welche
sich in einem diagnostischen Test am zweckmässigsten erweist. Aus diesem Grunde wird jedes Material mit dem Träger in einem
Verhältnis kombiniert, welches den jeweiligen spezifischen Anforderungen am besten entspricht. Die vorliegende Erfindung
umfasst deshalb die Verwendung einer solchen Menge an immunologisch
aktivem Material in Kombination mit einem immunologisch inerten Latexpolymer-Träger, die geeignet ist, ein für derartige
diagnostische Zwecke nützliches Reagens zu liefern.
Nach seiner Herstellung kann das Produkt in spezifischen diagnostischen Tests, welche auf immunologischen Prinzipien
aufgebaut sind, verwendet werden.
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Erfindungsgemäss kann die Bestimmung der immunologisch
aktiven Substanz sowohl in einem direkten wie auch in einem indirekten (Inhibitions-) Testverfahren durchgeführt werden.
im direkten Testverfahren werden zur Bestimmung einer
immunologisch aktiven Substanz die Analysenprobe und die mit dem entsprechenden immunologischen Reaktionspartner beschichteten
Latexteilchen vermischt und das Auftreten einer Agglutination beobachtet. Der Test ist positiv, wenn eine Agglutination
festgestellt wird.
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Beim indirekten (Inhibitions-)-Testverfahren wird zur Bestimmung einer, immunologisch aktiven Substanz die Analysenprobe
mit einer bestimmten Menge des entsprechenden immunologischen Reaktionspartners(z.B. Antiserum) und Latexteilchen, die mit
der immunologisch aktiven Substanz beschichtet sind,-vermischt
und das Auftreten einer Agglutination beobachtet. Der Test ist positiv, wenn keine Agglutination festgestellt wird.
Die in derartigen immunologischen Testverfahren nutzbaren
Reagenzien können vorteilhaft für kommerzielle Zwecke in eine diagnostische Testgarnitur abgepackt werden.
Im Falle eines direkten Tests enthält die Reagenziengarnitur zur Bestimmung einer immunologisch aktiven Substanz
in einem Behälter eine wässrige Suspension von mit dem entsprechenden immunologischen Reaktionspartner beschichteten
Latexteilchen. . .
Im Falle eines indirekten Tests enthält die Reagenziengarnitur
zur Bestimmung einer immunologisch aktiven Substanz in einem ersten Behälter eine Lösung des entsprechenden
immunologischen Reaktionspartners (z.B. Antiserum) und in einem zweiten Behälter eine wässrige Suspension von mit dem
immunologisch aktiven Material beschichteten Latexteilchen. 25
In beiden Fällen kann die wässrige Suspension des an
Latex gebundenen immunologisch aktiven Materials oder des an Latex gebundenen immunologischen Reaktionspartners in
irgendeiner Konzentration vorhanden sein. Jedoch ist eine Konzentration von 0,5 bis 5 Gew.% bevorzugt.
Die Erfindung wird anhand der folgenden Beispielen veranschaulicht.
909808/0807
In einem Autoklaven von 25 Liter stellt man einen Latex von Kernpolymerisat her, wobei man verwendet:
5
4800 g entionisiertes Wasser
50 g Kaliumpersulfat
50 g Natriumpyrophosphat
10 g Natriumlaurylsulfat
50 g Kaliumpersulfat
50 g Natriumpyrophosphat
10 g Natriumlaurylsulfat
50 g Natriummethallylsulfonat
100 g Acrylsäure
100 g Itaconsäure
2135 g Styrol
2865 g Butadien
15
100 g Itaconsäure
2135 g Styrol
2865 g Butadien
15
Die Polymerisation wird bei 75 C unter Stickstoffatmosphäre ausgeführt, wobei die Monomeren im Verlauf von 7 Stunden
kontinuierlich eingeführt werden und die Reaktion 8 Stunden lang fortgesetzt wird.
20
20
Nach dem Abkühlen erhält man einen Latex vom pH = 2,5, dessen Konzentration an Polymerisatpartikeln 51 Gew.-% beträgt.
Durch Elektronenmikroskopie stellt man fest, dass die Partikel einen mittleren Durchmesser von 0,145 μτα haben;
90% der Partikel haben einen Durchmesser zwischen 0,14 und 0,15 pm.
Die Zusammensetzung des Polymerisates ist im wesentlichen
gleich wie diejenige der verwendeten Monomeren. Die Partikel tragen auf ihrer Oberfläche Carboxyl- und Sulfonatfunktionen,
die durch konduktometrische Titration bestimmt werden.
406 g des erhaltenen Latex und 1541 g entionisiertes Wasser werden in einen Reaktor eingeführt. Das Gemisch wird
unter Rühren auf 70 C erhitzt? diese Temperatur wird während der ganzen Dauer der Reaktion aufrechterhalten.
909808/0807
vt*-
'2033886-
t Sobald das Gemisch 70°C erreicht hat, wird es unter Stickstof
fatmosphäre gehalten;man gibt in 3 Stunden mit konstanter.
Geschwindigkeit gleichzeitig 1,25 g Natriumdihexylsulfosuccinat in 150 g Wasser, 0,2O g a,al-Az.obis-isobutyramidiniumchlorid
in 210 g Wasserr 18 g Styrol, die 0,45 g p,pr-Dithiobisanilin
enthalten, zu. .
Dann wird die Polymerisation 5 Stunden lang fortgesetzt. Das Gemisch wird danach abgekühlt.
Eigenschaften des erhaltenen Latex:
pH: 3,1
Konzentration an Polymerisationspartikeln: 9,3 Gew.-% -j5 Elektrolytbeständigkeit: S
mittlerer Durchmesser der Partikel: 0,15 Mm, wobei
90% einen Durchmesser zwischen 0,145 und 0,155 pm haben.
Die Partikel tragen auf ihrer Oberfläche Carboxyl- und Sulfonatfunktionen, die durch konduktometrische Titration bestätigt
werden, und Gruppen der Formel:
NH2
1 ml von dem oben hergestellten 10%igen Latex wird 20 ml Wasser zugesetzt und die Mischung 1 1/2 Stunden bei 351OOO g
zentrifugiert. Der Ueberstand wird abdekantiert, der Rückstand in 20 ml Wasser aufgenommen und nochmals 11/2 Stunden bei
35'0OO g zentrifugiert. Diese Operation wird zweimal wiederholt und der so erhaltene Latex wird in den folgenden Beispielen als
"gewaschener Latex" bezeichnet.
909808/0807
if
5 mg humanes Immunoglobulin G (Cohn Fraktion II) wird durch
zen auf 60°C währen«
Puffer pH 4 denaturiert.
Puffer pH 4 denaturiert.
Erhitzen auf 60°C während 3 Stunden in 1 ml 0,1 M Glycin-HCl
1 ml gewaschener Latex wird 5 ml 0,05 M HCl zugesetzt und
die Mischung auf 0 C abgekühlt. Zu dieser Mischung wird 0,1 ml einer 0,01 M NaNO „ Lösung gegeben und es wird 15 Minuten bei
0 C gerührt. Der diazotierte Latex wird bei 5°C 1 1/2 Stunden
bei 351OOO g zentrifugiert und der üeberstand abdekantiert. Der
Rückstand wird in 5 ml eisgekühltem 0,1 M Glycin-HCl Puffer pH 4,0 aufgenommen und im gleichen Puffer 1 ml 0,5%iges denaturiertes
humanes Immunoglobulin G zugegeben, 1 Stunde im Eisbad gerührt und anschliessend über Nacht bei 10° stehen gelassen.
Der Latex wird 1 1/2 Stunden bei 351OOO g abzentrifugiert, der
-|5 Üeberstand abdekantiert und der Rückstand zweimal mit je 25 ml
0,1 M Glycin-NaOH Puffer pH 8,2 gewaschen, durch Zentrifugieren und Aufschlämmen des Rückstandes. Dem Latex wird nun soviel
Puffer zugesetzt, dass eine Lösung mit 30 mg/ml resultiert.
Für den Röhrchen-Agglutinationstest wird der folgende Puffer verwendet: 7,5 g Glycin, 6,0 g CaCl-, 3 g Rinder albumin,
1 g NaN, gelöst in 1 Liter Wasser. Der pH-Wert wird mit NaOH
auf 8,2 eingestellt. Für den Nachweis der Rheumafaktoren im Serum wird in einem kleinen Reagenzglas 20 μΐ Latex mit 3 ml
Puffer verdünnt und 25 μΐ des zu untersuchenden Serums zugegeben.
Nach dem Durchmischen werden die Röhrchen während 2 Stunden in einem Wärmeblock bei 37 C gehalten. Ein positives
Serum agglutiniert unter diesen Bedingungen während ein negatives Kontrollsystem keine Agglutination zeigt.
1 ml gewaschener Latex wird wie in Beispiel 1 hergestellt und diazotiert. Dem diazotierten Latexrückstand wird 5
909808/0807
ml eiskalter 0,1 M Glycin-NaOH Puffer pH 6,0 zugesetzt und
mg Ziegen anti-Humanalbumin Immunoglobulin G in 1 ml obigem Puffer gelöst zugegeben und die Mischung wird nach Rühren
während 1 Stunde bei 1O°C über Nacht stehen gelassen. Der Latex
wird bei 351OOO g während 1 1/2 Stunden abzentrifugiert, der
Ueberstand verworfen und das Sediment zweimal mit je 25 ml 0,1 M Glycin-NaOH pH 8,2 gewaschen. Nach dem Wäschen wird der Latex
mit soviel Puffer vermischt, dass eine 3%ige Lösung erhalten
wird.
Für den Röhrchenagglutinationstest wird der folgende
Puffer verwendet: 7,5 g Glycin, 6,0 g CaCl2, 3 g Rinderalbumin
und 1,0 g NaN3 werden In 1 Liter Wasser gelöst und das pH mit
Salzsäure auf 6,0 eingestellt. Es wird in kleinen Reagenzgläsern
eine Konzentrationsreihe von Humanalbumin in 3 ml Puffer erstellt, je 20 μΐ Latex zugegeben und nach Durchmischen
2 Stunden bei 37 C in einem Wärmeblock gehalten.
20 | 10 | 1 | 0,1 | \ 0,05 | 0,01 j 0 |
4- | + | + | + | + | - I- |
Humanalbumln/ml Puffer
+ = agglutiniert in 2 Stunden - = nicht agglutiniert in 2 Stunden
Aus dieser Tabelle Ist ersichtlich, dass mit dem so hergestellten Latex 0,05 μg Humanalbumin/ml bestimmt werden kann.
I ml gewaschenem Latex von Beispiel 1 wird 5 ml 0,1 M
Phosphatpuffer pH 5,0 zugesetzt und 5 mg Schaf anti-Human IgG
Immunoglobulin G in 1 ml Puffer zugegeben und es wird gut gerührt.
Änschliessend wird 0,1 ml einer 0,01 M p-Phenyldiisothlocyanatlösung
in Dimethylformamid zugegeben, 1 Stunde gerührt und bei
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Raumtemperatur über Nacht stehen gelassen- Der Latex wird 1 1/2 Stunden bei 351OOO g zentrifugiert, der Ueberstand verworfen
und der Rückstand zweimal mit je 25 ml 0,1 M Glycin-NaOH Puffer
pH 8,2 gewaschen. Für den Agglutinationstest wird der Latex in einer Konzentration von 30 mg/ml eingesetzt.
Für den Röhrchenagglutinationstest wird ein 0,1 M Phosphatpuffer
pH 6,0 mit 0,1% Rinderalbumin verwendet. Es wird eine Konzentrationsreihe von Human IgG in 3 ml Puffer hergestellt.
Zu jedem Röhrchen werden 20 μΐ Latexreagens gegeben, durchmischt und 2 Stunden bei 37 C inkubiert im Wärmeblock.
100 | 10 | 1 | 0,1 | 0,05 | 0 |
+ | + | + | - | - |
μg Human IgG/ml Puffer
+ = agglutiniert in 2 Stunden
- = agglutiniert nicht in 2 Stunden
Die Tabelle zeigt, dass mit diesem Latexreagens 0,1 Mg/ml
Human IgG noch bestimmt werden können.
36,8 mg Benzidin werden in 0,5 ml 2 NaCl gelöst und mit
7,5 ml Wasser verdünnt. Die Mischung wird im Eisbad gekühlt und unter Rühren 27,2 mg NaNO- in 2 ml Wasser zugetropft. Das
so erhaltene bisdiazotierte Benzidin ist bei -20° während Wochen haltbar.
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1 ml gewaschener Latex von Beispiel 1 wird in 5 ml 0,1 M
Phosphatpuffer pH 7,0 aufgenommen und 5 mg humanes Immunoglobulin
G in 1 ml obigem Puffer zugegeben. Die Suspension wird auf O° abgekühlt und unter Rühren 0,01 ml einer 0,02 M
bisdiazotierten Benzidinlösung zugegeben und anschliessend bei 10 über Nacht stehen gelassen. Der Latex wird bei 301OOO g
während 1 1/2 Stunden zentrifugiert, der Ueberstand verworfen
und das Sediment zweimal mit je 25 ml 0,1 M Glycin-NaOH pH 8,2
gewaschen. Nach dem Waschen wird der Latex wird soviel Puffer vermischt, dass eine 3%ige Lösung erhalten wird.
Für die Bestimmung von IgG im Inhibitionstest wird ein 0,1 M Phosphatpuffer pH 6,0 verwendet. In kleine Reagenzgläser
wird je 3 ml eines 1/500 verdünnten Schaf anti-human IgG Serums und steigende Mengen von human IgG gegeben. Nach Inkubation
während 15 Minuten bei 37 C wird in jedes Röhrchen 20 μΐ
Latexreagenz gegeben und 3 Stunden bei 37°C inkubiert.
μg human IgG/3ml
O | ,01 | ο, | 05 | o, | 10 | o, | 50 | 1 | '° ! | 5 | ,0 |
+ | + | + | ™ t | - |
+ = agglutiniert in 3 Stunden - = nicht agglutiniert in 3 Stunden
Es lassen sich mit dem oben beschriebenen Latexreagenz 0,16 μg human IgG/ml bestimmen.
Claims (26)
1. Wasserunlösliches Reagenz für eine immunologische
Bestimmung,mit einem etwa dem von Wasser entsprechenden spezifischen
Gewicht in Form diskreter Latexteilchen, an welche ein immunologisch aktives Material gebunden ist, dadurch gekennzeichnet,
dass der Latex aus einer Dispersion von Partikeln von Viny!polymerisaten besteht, die als Endgruppen Gruppen
der Formel:
\Ov)
NH2
tragen, wobei die Partikel aus einem Kern von Vinyl- und/oder
Dienpolymerisat, das Carboxyl- und/oder Sulfonatfunktionen
trägt, und aus einer äusseren Schicht von Viny!polymerisat,
das als Endgruppen Gruppen der Formel:
NH2
trägt, gebildet sind und einen mittleren Durchmesser zwischen 0,03 und 5 pm haben.
2. Reagenz nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Vinylpolymerisate entweder Homopolymerisate von Monomeren
sind, die aus Styrol und seinen Derivaten, Vinylchlorid, Vinylidenchlorid, Vinylacetat, Acrylderivaten gewählt sind,
oder Copolymerisate dieser Monomeren untereinander und/oder mit modifizierend wirkenden Vinyl-Comonomeren sind, die bis
zu 5 Gew.-% des Copolymerisats ausmachen.
3. Reagenz nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass die Dienpolymerisate Homopolymerisate des Butadiens und
seiner Derivate oder Copolymerisate dieser Monomeren untereinander und/oder mit Vinylmonomeren und/oder modifizierend
wirkenden Vinylcomonomeren, die bis zu 5 Gew.-% des Copolymerisats
ausmachen, sind.
9ÖS808/Ö807
2853886
4. Reagenz nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass die Viny!polymerisate, die die äussere
Schicht bilden, Homopolymerisate des Styrols und seiner Derivate, von Alkylacrylaten und Alkylmethacrylaten (Alkyl mit
bis 10 Kohlenstoffatomen), von Acrylnitril oder Methacrylnitril, sowie Copolymerisate dieser Monomeren untereinander
und/oder mit modifizierend wirkenden Vinylcomonomeren sind,
die bis zu 5 Gew.-% des Copolymerisates ausmachen.
5· Reagenz nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass das Kernpolymerisat 30 bis 99,5 Gew.-%
der Partikel und das Polymerisat der äusseren Schicht 70 bis 0,5 Gew.-% der Partikel ausmacht.
6. Reagenz nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass das immunologische aktive Material an
einen gemäss Beispiel 1 hergestellten Latex gebunden ist.
7. Reagenz nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, dass die Menge des immunologisch aktiven
Materials 0,01 bis 15,0 Gew.-% beträgt.
8. Reagenz nach einem der Ansprüche 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, dass das immunologisch aktive Material kovalent
an die diskreten Teilchen des Latexpolymeren gebunden ist.
9. Reagenz nach einem der Ansprüche 1 bis 8, dadurch
gekennzeichnet, dass das immunologisch aktive Material humanes Immunoglobulin G ist.
10. Reagenz nach einem der Ansprüche 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, dass das immunologisch aktive Material Ziegen
anti-Humanalbumin Immunoglobulin G ist.
909808/0807 owginal inspect»
j 3
886
11. Reagenz nach einem der Ansprüche 1 bis 8, dadurch
gekennzeichnet, dass das immunologisch aktive Material Schaf anti-Human IgG Immunoglobulin G ist.
12. Verfahren zur Herstellung eines Reagens nach einem der Ansprüche 1 bis 11, dadurch gekennzeichnet, dass man den
Latex nach Diazotierung oder unter Verwendung von geeigneten bifunktionellen Verbindungen mit dem immunologisch aktiven
Material umsetzt.
13. Verfahren nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet,
dass man den gemäss Beispiel 1 hergestellten Latex nach Diazotierung mit denaturiertem humanem Immunoglobulin G umsetzt.
14. Verfahren nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet,,
dass man den gemäss Beispiel 1 hergestellten Latex nach Diazotierung mit Ziegen anti-Humanalbumin Immunoglobulin G
umsetzt.
15. Verfahren nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, dass man den gemäss Beispiel 1 hergestellten Latex unter Verwendung
von p-Phenyldiisothiocyanat mit Schaf anti-Human IgG Immunoglobulin G umsetzt.
16. Verfahren nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet,
dass man den gemäss Beispiel 1 hergestellten Latex unter Verwendung
von Bis-diazobenzidin mit humanem Immunoglobulin G umsetzt.
17. Verfahren zur Bestimmung einer immunologisch aktiven
Substanz in einer Probe, dadurch gekennzeichnet, dass man die Probe und die mit dem entsprechenden immunologischen Reaktionspartner beschichteten Teilchen eines in den Ansprüchen 1 bis
definierten Latex vermischt und das Auftreten einer Agglutination beobachtet.
90.9809/0807
18. Verfahren zur Bestimmung einer immunologisch aktiven
Substanz in einer Probe, dadurch gekennzeichnet, dass man die Probe mit einer bestimmten Menge des entsprechenden immunologischen
Reaktionspartners und mit der immunologischen aktiven Substanz beschichteten Teilchen eines in den Ansprüchen 1 bis
5 definierten Latex vermischt und das Auftreten einer Agglutination beobachtet.
19. Verfahren nach Anspruch 17 zur Bestimmung des
Rheumatoxdfaktors in einer Probe, dadurch gekennzeichnet,
dass man die Probe und mit denaturiertem humanen Immunoglobulin G beschichteten Teilchen eines gemäss Beispiel 1 hergestellten
Latex vermischt und das Auftreten einer Agglutination beobachtet.
20. Verfahren nach Anspruch 17 zur Bestimmung von
Humanalbumin in einer Probe, dadurch gekennzeichnet, dass man die Probe und mit Ziegen anti-Humanalbumin Immunoglobulin G
beschichteten Teilchen eines gemäss Beispiel 1 hergestellten Latex vermischt und das Auftreten einer Agglutination beobachtet.
21. Verfahren nach Anspruch 17 zur Bestimmung von Human Immunoglobulin G in einer Probe, dadurch gekennzeichnet, dass
man die Probe und mit Schaf anti-Human IgG-Immunoglobulin G beschichteten Teilchen eines gemäss Beispiel 1 hergestellten
Latex vermischt und das Auftreten einer Agglutination beobachtet.
22. Verfahren nach Anspruch 18 zur Bestimmung von Human Immunoglobulin G in eine Probe, dadurch gekennzeichnet, dass
man die Probe mit anti-Human-Immunoglobulin G Serum und mit Human Immunoglobulin G beschichteten Teilchen eines gemäss
Beispiel 1 hergestellten Latex vermischt und das Auftreten einer Agglutination beobachtet.
909808/0807
Oi=SGINAL
-,81 -
23. Reagenziengarnitur zur Bestimmung einer, immunologisch
aktiven Substanz in einer Probe enthaltend in einem Behälter eine wässrige Suspension von mit dem entsprechenden immunologischen
Reaktionspartner beschichteten Teilchen eines in den Ansprüchen 1 bis 5 definierten Latex.
24. Reagenziengarnitur zur Bestimmung einer immunologisch aktiven Substanz in einer Probe enthaltend in einem ersten
Behälter eine Lösung des entsprechend immunologischen Reaktionspartners und in einem zweiten Behälter eine wässrige Suspension
von mit dem immunologisch aktiven Material beschichteten Teilchen eines in den Ansprüchen 1 bis 5 definierten Latex.
25.. Verwendung von einem in den Ansprüchen 1 bis 5 definierten Latex als Träger für immunologische Bestimmungen.
26. Verwendung eines Reagens nach einem der Ansprüche
1 bis 11 in immunologischen Bestimmungen.
ORIGINA INSPECTED
909808/0807
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