DE2600664C3 - Verfahren zur direkten Bestimmung des ß -Cholesteringehaltes im Blutserum - Google Patents

Verfahren zur direkten Bestimmung des ß -Cholesteringehaltes im Blutserum

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Description

Die Bestimmung des kleines Beta-Cholesterinspiegels im Blutserum, d.h. des Gehaltes an Cholesterin in der Fraktion der low density-Lipoproteine (LDL) wird z.B. in der Labordiagnostik zur Differentialdiagnose von Fettstoffwechselfunktionen durchgeführt.
Das einzige bisher mit gutem Erfolg angewandte Verfahren zur direkten Bestimmung des kleines Beta-Cholesteringehaltes ist die Ultrazentrifugation in einem Dichtegradienten.
Dieses Verfahren bedient sich zur Auftrennung der drei Lipoproteinbestandteile im Serum, nämlich
1) kleines Alpha-Lipoprotein (high density-Lipoprotein-(HDL), Moleküldurchmesser 75 - 100 Angström)
2) kleines Beta-Lipoprotein (low density-Lipoprotein-(LDL), Moleküldurchmesser 150 - 250 Angström) und
3) Prä-kleines Beta-Lipoprotein (very low density-Lipoprotein (VLDL), Moleküldurchmesser 300 - 700 Angström) + Chylomikronen (Moleküldurchmesser 1000 - 10 000 Angström)
der unterschiedlichen spezifischen Massen der drei zu trennenden Bestandteile HDL, LDL und VLDL.
Dieses Verfahren ist jedoch sehr aufwendig, da die Fraktionierung in zwei Arbeitsgängen mit extrem hohen Zentrifugalkräften (105 000 g) durchgeführt werden muß. Darüber hinaus erfordert diese Methode einen großen Zeitaufwand, da zur vollständigen Trennung die Ultrazentrifuge 2 x 20 Stunden und mehr laufen muß. Es versteht sich von selbst, dass bei derart extremen Belastungen ein großer Materialverschleiß in Kauf zu nehmen und das Verfahren als Routineverfahren nicht geeignet ist.
Vollständigkeitshalber seien noch andere Trennungsverfahren erwähnt, die jedoch nur indirekte Bestimmungsmethoden erlauben. Dabei werden die Lipoproteine mit Polyanionen und zweiwertigen Metallsalzen (Heparin oder Dextransulfat und Calcium- oder Magnesium- oder Manganchlorid) fraktioniert ausgefällt. Die Ermittlung des kleines Beta-Cholesteringehaltes geschieht hier durch Differenzbildung der Cholesterinanteile der isolierten Lipoproteinpräzipitate.
Die Kombination von Ultrazentrifugation mit der Polyanionenpräzipitation wird in der Routinediagnostik angewandt. Sie erreicht günstigen Falls eine Präzision mit einer Fehlerbreite von 10%. Im allgemeinen liegt sie bei 10 - 20%.
Aufgabe der vorliegenden Erfindung war es daher, ein Verfahren zur Bestimmung des kleines Beta-Cholesteringehaltes im Blutserum zu finden, das die Genauigkeit der Ultrazentrifugation garantiert, die oben erwähnten Nachteile jedoch vermeidet.
Sie wurde durch ein Verfahren gelöst, das dadurch gekennzeichnet ist, dass man dem Serum ein Polykation zusetzt und anschließend mit einem schwachen Kationenaustauscher prä kleines Beta-(VLDL) und kleines Alpha-(HDL) Lipoprotein extrahiert, wonach im Serum der Cholesteringehalt der kleines Beta-Lipoproteine (LDL) gemessen wird.
Als Polykation wird in vorteilhafter Weise Polyäthylenimin verwendet, das in Mengen von 1 - 2 Gew.-% Endkonzentration dem Serum zugesetzt wird.
Als Ionenaustauscher haben sich solche mit schwach sauren polaren funktionellen Gruppen (z.B. Carboxyl- oder Aminoxidgruppen) als geeignet erwiesen. Die Verwendung von Kationenaustauschern auf Methacrylsäure-Divinylbenzolbasis führten hierbei zu sehr gut reproduzierbaren Ergebnissen.
Methodik
Die vorliegende Erfindung wird nachfolgend durch Beispiele näher erläutert:
1. 1,5 ml Humanserum werden in einem Reagenzglas mit 50 µl einer 40%igen Polyäthyleniminlösung (Polymin P, BASF Ludwigshafen, BRD) bei 20°C 15 Minuten lang geschüttelt. 0,4 g eines schwach sauren Kationenaustauschers in H-Form, z.B. ein Methacrylsäure-Divinylbenzol-Copolymerisat (IRC-50, P. A., Fa. Serva, Heidelberg, BRD) werden als Granulat hinzugefügt und die Mischung 10 Minuten lang geschüttelt. Nach weiteren 10 Minuten wird der Überstand dekantiert und aus dieser Lösung Cholesterin chemisch nach dem Verfahren von Liebermann-Burchard oder enzymatisch bestimmt. Der gefundene Cholesterin-Gehalt entspricht dem Gehalt an kleines Beta-Cholesterin im Serum.
2. Zum Vergleich wird kleines Beta-Cholesterin nach Fraktionierung der Lipoproteine im Serum in folgender Weise bestimmt: 3 ml Humanserum werden bei 105 000 g 20 Std. lang mit einem 40,3 Rotor in einer Beckmann-Zentrifuge in einem diskontinuierlichen Dichtegradienten mit der Dichte 1,006 zentrifugiert. Die VLDL-Lipoproteine befinden sich in der Lösung mit der Dichte < 1,006, die LDL und HDL-Lipoproteine in der Lösung mit der Dichte > 1,006. Die LDL-Lipoproteine werden durch Präzipitation mit Heparin und Manganchlorid von den HDL getrennt. Das Cholesterin wird aus dem Serum, aus der Fraktion der VLDL, aus der Fraktion, die die HDL und LDL enthält, sowie aus der Fraktion, die die HDL enthält, nach dem Verfahren von Zack oder von Liebermann-Burchard gemessen. Aus der Differenz des Cholesterin-Gehaltes der Fraktion von HDL und LDL und der Fraktion der HDL wird das kleines Beta-Cholesterin berechnet.
Ergebnisse
In der Tabelle 1 sind einige Versuchswerte Messwerten der Ultrazentrifugalmethode gegenübergestellt.
Ein Vergleich der kleines Beta-Cholesterinbestimmung mit Hilfe der Ultrazentrifugation und mit der Extraktion mit Polyäthylenimin und dem Kationenaustauscher von 100 Humanseren ergab eine Korrelation von 95% K[tief]k = 0,95. Über einen Bereich von 50 mg% bis 500 mg% kleines Beta-Cholesterin verläuft die Korrelationskurve linear mit einer Funktion
Y[tief]Extr. = 1,06 mal X[tief]UZ - 5,02
Wie die Funktion der Geraden zeigt wird in dem Präzipitationsverfahren ein kleines Beta-Cholesterinwert bestimmt, der im Vergleich zur Bestimmung mit Hilfe der Ultrazentrifugation um 5 mg höher liegt. Diese Differenz kann auf einen Verlust von Cholesterin bei der Auftrennung mit Hilfe der Ultrazentrifugation zurückgeführt werden, der maximal bis zu 15% beträgt.
Die Untersuchung einer Verdünnungsreihe in Seren, deren Lipoproteingehalt durch Zugabe einer 6%igen Albuminlösung verändert wurde, ergab nach der Extraktion mit Polyäthylenimin und dem Kationenaustauscher eine lineare Abnahme des kleines Beta-Cholesteringehaltes (Abb. 1).
Die Reproduzierbarkeit der kleiner Beta-Cholesterinbestimmungen aus aliquoten Volumina desselben Serums, die in gleicher Weise mit Polyäthylenimin und dem Kationenaustauscher behandelt wurden, ist präziser (Variationskoeffizient v[tief]k: 2,4) als die der Ultrazentrifugation (Variationskoeffizient v[tief]k: 5,9) (Tabelle 2).
Die im Rahmen einer Verlaufskontrolle von mehreren Wochen untersuchten Seren eines Patienten nach beiden Verfahren ergab eine Übereinstimmung der kleines Beta-Cholesterinbestimmungen, die für klinische Zwecke voll ausreicht (Tabelle 3).
Die Untersuchung von Seren mit einem extrem hohen Gehalt an Triglyceriden (Typ IV, Typ V) oder einem extrem hohen Gehalt an Cholesterin (Typ II) mit Hilfe der Extraktion mit Polyäthylenimin und dem Kationenaustauscher führten zu kleines Beta-Cholesterinwerten, die in gleicher Weise befundet werden müssen wie die Bestimmung mit Hilfe der Ultrazentrifugation (Tabelle 4).
Tabelle 1
Vergleich der kleines Beta-Cholesterinbestimmung mit Hilfe
1. des Polyäthyleniminextraktionsverfahrens
2. des Ultrazentrifugations-Präzipitationsverfahrens
Abbildung 1
Verdünnungsreihe
Gehalt an kleines Beta-Cholesterin im Serum nach Extraktion der VLDL und HDL mit Polyäthylenimin und einem DVB-Methacrylsäurekopolymerisat-Kationenaustauscher nach Verdünnung mit einer 6%igen Humanalbuminlösung
Tabelle 2
Reproduzierbarkeit der kleines Beta-Cholesterinbestimmung aus einem Serum
1. durch Extraktion mit Polyäthylenimin und IRC 50
2. durch Polyanionenpräzipitation-Ultrazentrifugation
Gesamtwert des Serumcholesterins: 509 mg/100 ml
Fortsetzung
Tabelle 3
Verlaufskontrolle des nach dem 1. Extraktionsverfahren, 2. Ultrazentrifugations-Präzipitationsverfahren bestimmten kleines Beta-Cholesterins einer Person über einen mehrwöchigen Zeitraum
Tabelle 4

Claims (5)

1. Verfahren zur direkten Bestimmung des kleines Beta-Cholesteringehaltes im Blutserum, dadurch gekennzeichnet, dass man dem Serum ein schwaches Polykation zusetzt und anschließend mit einem schwachen Kationenaustauscher prä kleines Beta-(VLDL) und kleines Alpha-(HDL) Lipoprotein extrahiert, wonach im Serum der Cholesteringehalt der kleines Beta-Lipoproteine (LDL) gemessen wird.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass als Polykation Polyäthylenimin eingesetzt wird.
3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass das Polykation in Mengen von 1 - 2 Gew.-% eingesetzt wird.
4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 - 3, dadurch gekennzeichnet, dass ein Carboxylgruppen aufweisender Kationenaustauscher verwendet wird.
5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 - 4, dadurch gekennzeichnet, dass ein Kationenaustauscher auf Methacrylsäure-Divinylbenzolbasis eingesetzt wird.
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EP0006822B1 (de) * 1978-07-04 1982-10-13 Laboratoires Goella Verfahren zur Bestimmung des Cholesteringehaltes im Serum und Reagens zur Durchführung des Verfahrens
DE2934228A1 (de) * 1979-08-24 1981-03-12 Basf Ag Verfahren zur quantitativen bestimmung der oberflaechenladung von serum-lipoproteinen.
DE3009037A1 (de) * 1980-03-08 1981-09-24 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur direkten bestimmung des lipidgehaltes der (beta) -lipoproteine des blutes
DE3215310A1 (de) * 1982-04-23 1983-10-27 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren zur bestimmung der low density lipoproteine (ldl) und reagenz zu seiner durchfuehrung

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