DE2122294A1 - Verfahren zur Gewinnung von Creatininamidohydrolase - Google Patents

Verfahren zur Gewinnung von Creatininamidohydrolase

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Description

Patentanwälte Dipl.-Ing. F, Weickmann,
Dipl.-Ing. H.Weickmann, D1PL.-PHYS. Dr.K. Fincke Dipl.-Ing.-R A.Weickmann, Dipl.-Chem. B. Huber
• MÜNCHEN 27, DEN
MÖHLSTRASSE 22, RUFNUMMER 48 3921/22
int. Nr. 1767
BOEHRIITGER MANNHEIM GMBH" " ' 68 Maraiheim-Waldhof« Sandhof er Str. 112-132
Verfahren zur Gewinnung von Creatinin-amidohydrolase
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Gewinnung des Enzyms .Creatinin-amidohydrolase und gegebenenfalls.Creatinamidinohydrolase aus Mikroorganismen.
In der klinischen Chemie, besonders für die Funktionsdiagnostik der Niere, spielt die Bestimmung der Zwischen- und Endprodukte des Eiweißstoffwechsels eine wichtige Rolle. Hierzu zählen auch Creatinin und Creatin. Die Bestimmung von Creatinin wurde daher schon wiederholt beschrieben. Die meisten der bekannten Methoden basieren auf der nichtenzyinatischen Jaffe-Reaktion, die jedoch den Nachteil hat, unspezifisch zu 3ein.
Weiter wurde bereits eine spezifische mikrobiologische Bestimmungsmethode mit isolierten Bakterien beschrieben, wobei gewaschene Zellsuspensionen zur Creatinin-Messung verwendet wurden und die Bildung von Harnstoff und Ammoniak als Maß der Enzyinwirkung herangezogen wurde. Lösliche, zum Creatininabbau befähigte Enzymextrakte konnten dabei jedoch nicht erhalten werden. Voraussetzung für die Schaffung einer spezifischen Creatinin-Bestimmung mit Hilfe von Enzymen war jedoch die Auffindung von geeigneten, löslichen Enzymen*
209848/0908 BAD ordinal
welche spezifische und meßbare Umsetzungen des Creatinine katalysieren können.
Roche·, Lacombe und Girard (BBA j>, 210, 1950) charakterisie ten in zwei Pseudomonas-Arten Creatinase, Creatininase unc eine Glycocyaminase als spezifische Enzyme, die aus ihren Substraten aus der Guanidinogruppe Harnstoff in Freiheit setzten. Weiter wurde von Akamatsu und Mitarbeiter (Enzymologia, Jj>, Seiten 122, 158, 173, 1951) in Erdbakterien ein als Creatinmutase bezeichnetes Enzym, welches die fe Gleichgewichtseinstellung zwischen Creatinin und Creatir. bewirken soll, festgestellt. Hierbei wird folgender Abbeu·, des Creatinine vermutet:
Creatinin Creatin -> Harnstoff und
Sarcosin > Glycin > NH,
In der gleichzeitig unter der internen Nummer 1749 eiligere ten Patentanmeldung P wird ein Verft
ren zur Trennung und Gewinnung von zwei Enzymen beschriebt die erstmals aufgefunden und isoliert wurden, welche an di: sem Abbauweg entscheidend beteiligt sind. Die Enzyme wurde: * aus Mikroorganismen isoliert. Gegenstand der'vorliegenden Erfindung ist die Auffindung von Mikroorganismen, welche ε: besonders als Ausgangsmaterial für die Gewinnung der dort I schriebenen neuen Enzyme Creatinin-amidohydrolase und Creatin-amidinohydrolase eignen.
Es wurde schon wiederholt versucht, mit Hilfe von Mikroorge nismen Creatinin enzymatisch abzubauen. Es gelang jedoch nicht, wasserlösliche Enzymextrakte zu gewinnen, die Creati in ausreichendem Maße abbauen konnten. Derartige Versuche . wurden, beispielsweise mit Corynebakterium, Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas ovalis und Pseudomonas eisenberg.il und Cloatridien durchgeführt.
20 98 A8/0908 bad original
-V-
Aufgabe der Erfindung war es daher, Mikroorganismen zu finden und zu züchten, welche eine zur Gewinnung der beiden
oben erwähnten neuen Enzyme geeignete wasserlösliche Aufschlußfraktion liefern.
Gelöst wird diese Aufgabe erfindungsgemäß dadurch, daß zur Gewinnung von Creatinin-amidohydrolase und Creatin-araidinohydtfolase die Mikroorganismen Alcaligenes spec. WS 51400 oder Penicillium V/S 90001 verwendet werden.
Alcaligenes spec. WS 51400 besitzt folgende Eigenschaften: strikt oxydative gramnegative Kurzstäbchen mit peritricher Begeißelung. Die Keime sind schwach oxydase-positiv, alkalisieren Lackmusmilch und sind zur Denitrifikation befähigt. Ferner-wurden folgende Eigenschaften festgestellt:-
Wachstum bei 4°C - m-Inosit
Wachstum bei 410C - Glycollat
Gelatineverflüssigung - Pelargonat -
Tributyrinspaltung - Adipat
Eigelbreaktion - p-Hydroxybenzoat +
Pigmentbildung - Phenylacetat
Vergärung von: Valin -
Arabinose + Arginin (+)
Glucose + σ -Aminovalerat -
Maltose . (+) Tryptophan
Cellobiose (+) Betain +
Trehalose + Hippurat -
2-Ketogluconat + Acetamid -
Mannit (+) Benzylamin - ,
Nach den gegenwärtigen Kenntnissen gehören die Keime zur Familie Achrornobacteriaceae und sind mit großer Wahrscheinlichkeit zur Gattung Alcaligenes zu stellen."
209848/0908
Bei WS 90001 handelt es sich um einen Pilz der Gattung Penicillium.
Um die gewünschten Enzyme in den erfindungsgemäß zu verwendenden Mikroorganismen adaptativ anzureichern, werden diese vorzugsweise unter Zusatz von Creatinin zum Wachstumsmedium gezüchtet. Beide Mikroorganismen werden vorteilhaft auf einem Nährboden wachsengelassen, der Glucose oder Glycerin als Kohlenstoffquelle, Creatinin sowie Salze und Vitamine in der in der Mikrobiologie bekannten Menge und Zusammensetzung enthält. Ein besonders geeignetes Währmedium weist folgende ^ Zusammensetzung auf:
0,5 Gew.?6 Glucose oder Glycerin 0,5 Gew.96 Creatinin
0,08 Gew.# Arnmoniumsulfat, .... - 0,02 Gew.i>> Magnesiumsulfathydrat
Eisensulfatspuren, Calciumchloridspuren,
Mangansulfatspuren, 0,05 Gew.# Hefeextrakt
Nicotinsäure
Thiamin-p-aminobenzoesäure
Vitamin Bg je 1 mg 0,1 mg Biotin
r gelöst in m/10 Kaliumphosphat-Puffer pH 6 (Pilz) bzw. pH 7 (Alcaligenes).
Die Stammerhaltung der erfindungsgemäßen Mikroorganismen geschieht in üblicher Weise auf Agarschrägröhrchen durch Zusatz von 2$ Agar zu einem geeigneten Nährboden, vorzugsweise dem oben angegebenen Nährboden, dem noch 5 ml/1 einer 0,05/^igen Bromthimolblaulösung zugesetzt wird. Unter-den bevorzugten Wachstumsbedingungen schlägt dieser Indikator bei dem erfindungsgemäßen Pilz nach 4 bis 6 Tagen, bei dem Bakterium in 2 bis 3 Tagen deutlich ins alkalische Gebiet um, bedingt durch den Creatinin-Greatin-Abbau. Creatinin ver-7 brauchende Mikroorganismen, die den Abbau nicht nach dem
209848/0908 BAD0RiG1NAL
obengenannten Stoffwechselschema mit den obengenannten Enzymen bewerkstelligen, zeigen diese Alkalisierung nicht.
Die erfindungsgemäß zu verwendenden Mikroorganismen ermöglichen die wirtschaftliche Gewinnung der Enzyme Oreatininamidohydrolase und Creatin-amidinohydrolase aus der aus ihrem Aufschluß erhaltenen wasserlöslichen üiweißfraktion, wie in der oben erwähnten, gleichzeitig eingereichten Patentanmeldung näher beschrieben ist.
Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung weiter.
Beispiel 1 Anreicherung von aktivem Pilzmycel in Submers-Schüttelkultiir
2 1 eines Nährbodens mit 1 Gew.$ Glucose, 0,5 Gew.$ Greatinin, 0,08 Gew.$ Ammoniumsulfat, 0,02 Gew.$ Magnesiumsulfatheptahydrat, 0,05 Gew.$ Hefeextrakt, je 1 mg Nicotinsäure, Thiaminp-aminobenzoesäure und Vitamin Bg, 0,1.mg Biotin, Eisensulfat, Calciumchlorid und Mangansulfat in Spuren, in 0,1OM Kaliumphosphatpuffer pH 6 werden in einem geeigneten Schüt- ·■' telkolben mit 200 ml einer 48 Stunden alten Vorkultur von Penicillium WS 90001 beimpft und in einem Schüttelapparat 4 Tage kultiviert. Der Creatinin-Gehalt sinkt in dieser Zeit von 0,5$ auf knapp 0,1$, und die Glucose ist bis zu diesem Zeitpunkt nahezu verbraucht. Der pH-Wert steigt dabei auf 1,5 bis 8,0. Man erhält so 3 bis 4 g WS 90001 Trockengewicht/l Kulturlösung mit 45 bis 60 IU/g Trockengewicht Creatinin-amidohydrolase.
Beispiel 2
In einem geeigneten Kulturgefäß werden 15 1 des in Beispiel 1 beschriebenen Mediums mit 1,5 1 gut bewachsender Vorkultur von Alcaligenes spec. WS 51400 bei kräftiger Durchlüftung kultiviert. Dabei wird während der gesamten Kultur-
209848/0908
dauer der pH-Wert konstant auf 7,0 gehalten. Der Creatinin- und der G-luocse-Gehalt werden laufend verfolgt. Der Creatinin-Verbrauch vollzieht sich hauptsächlich im zweiten Drittel der Logphase, während Glucose zunächst abgebaut wird. Die Kultur wird bei 30° gehalten. Nach 35 Stunden können 1,5 g/l Kulturlösung Bakterientrockenmasse geerntet werden. Die spezifische Aktivität an Creatinin-amidohydrolase beträgt 1600 IU/g Trockengewicht.
B eispiel 3
Es wird wie in Beispiel 2 beschrieben Alcaligenes spec. V/S 5H00 im Arbeitsvolumen von 60 1 kultiviert. Sobald das gewünschte V/achstumsstadium erreicht ist, wird begonnen, frischen Nährboden dem Kulturgefäß zuzuführen und in gleichem- Maß bewachsene Kulturlösung dem Kulturgefäß zu entnehmen. Die Verdünnungsrate (Fließgeschwindigkeit/Arbeitsvolumen) beträgt hierbei 0,13 bis 0,18, vorzugsweise 0,16. Pro Stunde werden 500 1 Luft durchgeleitet. Man erhält so in kontinuierlicher Züchtung eine Ausbeute von 3 bis 5 g/l Bakterientrockenmasse mit einer spezifischen Aktivität wie sie nach dem in Beispiel 2 beschriebenen batch-Verfahren erhalten wird.
Der Alcaligenes spec. WS 5H00 eignet sich gut zur kontinuierlichen Züchtung, wie vorstehend beschrieben wurde.
Beide Mikroorganismen sind in der Sammlung des Bakteriologischen Instituts der Technischen Universität München in Weihenstephan hinterlegt.
209848/0908

Claims (3)

  1. - 7 Patentansprüche
    Ϊ. Verwendung von Alcaligenes speo. WS 51400 oderPenicillium WS 90001 zur Gewinnung von löslicher Creatinin-amido-'hydrolase oder/und Creatin-amidinohydrolase.
  2. 2. . Verwendung von in Anspruch 1 genannten Mikroorganismen, die auf einem Creatinin enthaltenden Nährmedium
    wachsengelassen wurden,für den Zweck von Anspruch 1.
  3. 3. Verwendung von in Anspruch 1 genannten Mikroorganismen, die auf einem Glucose oder Glycerin neben Creatinin, Salze und Vitamine enthaltenden Nährmedium gezüchtet wurden, für den Zweck von Anspruch 1.
    209848/0908 original inspected
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Application Number Priority Date Filing Date Title
DE2122255A DE2122255B2 (de) 1971-05-05 1971-05-05 Verfahren zur spezifischen Bestimmung von Creatinin
DE2122298A DE2122298C3 (de) 1971-05-05 1971-05-05 Verfahren zur Gewinnung von Creatininamidohydrolase
DE2122294A DE2122294C3 (de) 1971-05-05 1971-05-05 Verfahren zur Gewinnung von Creatininamidohydrolase
DE2167034A DE2167034C3 (de) 1971-05-05 1971-05-05 Creatinin-amidohydrolase
AT64872A AT315131B (de) 1971-05-05 1972-01-27 Verfahren zur spezifischen Bestimmung von Kreatinin in wässerigem Medium
CA137,211A CA960946A (en) 1971-05-05 1972-03-15 Process and reagents for the specific determination of creatinine
US00249589A US3806416A (en) 1971-05-05 1972-05-02 Creatine amidohydrolase and process for its preparation
US00249588A US3806420A (en) 1971-05-05 1972-05-02 Process for the preparation of creatinine amidohydrolase
GB2037172A GB1359402A (en) 1971-05-05 1972-05-02 Process and reagent for the specific determination of creatinine
GB2076772A GB1359403A (en) 1971-05-05 1972-05-04 Creatinine amidinohydrolase and creatine amidinohydrolase
IL39363A IL39363A (en) 1971-05-05 1972-05-04 Process for producing creatinine amidohydrolase and optionally also creatine amidinohydrolase from micro-organisms
IT23889/72A IT954974B (it) 1971-05-05 1972-05-04 Processo per l ottenimento di creatinin amidoidrolasi
DK221472A DK137996C (da) 1971-05-05 1972-05-04 Anvendelsen af alcaligenes spec. ws 51400 eller penicillium ws 90001 til udvinding af oploeselig creatininamidohydrolase ogcreatinamidinohydrolase
FR727215955A FR2135638B1 (de) 1971-05-05 1972-05-04
NLAANVRAGE7205995,A NL175930C (nl) 1971-05-05 1972-05-04 Werkwijze voor het afscheiden van een bij de afbraak van creatinine werkzaam enzyme.
CH662172A CH572522A5 (de) 1971-05-05 1972-05-04
CH662072A CH573116A5 (de) 1971-05-05 1972-05-04
AT387972A AT311288B (de) 1971-05-05 1972-05-04 Verfahren zur Isolierung von Creatininamidohydrolase und gegebenenfalls Creatinamidinohydrolase
SU1781030A SU421200A3 (de) 1971-05-05 1972-05-04
FR7215956A FR2135301B1 (de) 1971-05-05 1972-05-04
FI721266A FI50636C (fi) 1971-05-05 1972-05-04 Menetelmä kreatiniini-amidohydrolaasin valmistamiseksi
HUBO1368A HU163492B (de) 1971-05-05 1972-05-04
NLAANVRAGE7205996,A NL175434C (nl) 1971-05-05 1972-05-04 Werkwijze voor het bereiden van een microbencultuur met extraheerbaar creatinine-amidohydrolase en/of creatine-amidinohydrolase.
FR7215957A FR2182705B1 (de) 1971-05-05 1972-05-04
CH662272A CH572067A5 (de) 1971-05-05 1972-05-04
JP4453572A JPS567674B1 (de) 1971-05-05 1972-05-04
CA141,498A CA993386A (en) 1971-05-05 1972-05-04 Creatinine amidohydrolase and process for its preparation
AT387872A AT311287B (de) 1971-05-05 1972-05-04 Verfahren zur Herstellung von löslicher Creatinin-amidohydrolase und/oder Creatin-amidinohydrolase
NLAANVRAGE7206001,A NL181816C (nl) 1971-05-05 1972-05-04 Werkwijze en reagens voor de specifieke bepaling van kreatinine.
SE7205872A SE390824B (sv) 1971-05-05 1972-05-04 Framstellning av kreatinin-amidohydrolas eller/och kreatin-amidinohydrolas genom odling av alcaligenes ws 51400 eller penicillium ws 90001 i nervaro av kreatinin
US411526A US3912588A (en) 1971-05-05 1973-10-31 Creatine amidohydrolase in the conversion of creatinine to creatine
US415463A US3907644A (en) 1971-05-05 1973-11-13 Creatinine amidohydrolase composition and process for the determination of creatinine
NLAANVRAGE8302283,A NL182576C (nl) 1971-05-05 1983-06-28 Werkwijze voor het bereiden van een penicilliumcultuur die extraheerbaar creatinine-amidohydrolase bevat.

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Application Number Priority Date Filing Date Title
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NL (3) NL175930C (de)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2659878A1 (de) * 1975-04-05 1977-11-10 Noda Inst For Scientific Res Verfahren zur herstellung von kreatinamidinohydrolase
DE2614114B2 (de) 1975-04-05 1978-08-31 Noda Institute For Scientific Research, Noda (Japan) Verfahren zur Herstellung von Kreatininamidohydrolase

Families Citing this family (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2122255B2 (de) * 1971-05-05 1979-01-11 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren zur spezifischen Bestimmung von Creatinin
US4134793A (en) * 1975-08-28 1979-01-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Creatinine desimidase in the quantitative determination of creatinine
US4087329A (en) * 1975-08-28 1978-05-02 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Creatinine desimidase and its method of production
US4176008A (en) * 1978-02-24 1979-11-27 Eastman Kodak Company Method, composition and element for the detection of nitrogen-containing compounds
US4194063A (en) * 1978-02-24 1980-03-18 Eastman Kodak Company Method, composition and elements for the detecting of nitrogen-containing compounds
US4215197A (en) * 1978-08-04 1980-07-29 Miles Laboratories, Inc. Test means and method for creatinine determination
CA1187388A (en) * 1978-09-20 1985-05-21 American Monitor Corporation Stabilization of working reagent solutions containing nadh, nadph, and/or enzymes, and the use of such stabilized reagents in enzymes or substrate assays
JPS568687A (en) * 1979-07-04 1981-01-29 Toyo Jozo Co Ltd Preparation of creatinase
US4276377A (en) * 1979-11-05 1981-06-30 Eastman Kodak Company Creatinine iminohydrolase free from urease activity
US4275164A (en) * 1979-11-05 1981-06-23 Eastman Kodak Company Process and nutrient medium for growing microorganism
DE3248145A1 (de) * 1982-12-27 1984-06-28 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren und reagenz zur bestimmung von n-carbamoylsarcosin und hierfuer geeignetes neues enzym
JPS60114193A (ja) * 1983-11-22 1985-06-20 Toyo Jozo Co Ltd 新規なマルトースデヒドロゲナーゼおよびその製法それを用いる分析法
DE3406770A1 (de) * 1984-02-24 1985-08-29 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Nucleosidtriphosphat-abhaengige 1-methylhydantoinase und ihre verwendung
US4812399A (en) * 1986-04-21 1989-03-14 Eastman Kodak Company Analytical element and method for the determination of creatinine or creatine
JPH0698032B2 (ja) * 1987-01-23 1994-12-07 財団法人野田産業科学研究所 クレアチンもしくはクレアチニンの測定法及びこれらの測定用試薬
US5456932A (en) * 1987-04-20 1995-10-10 Fuisz Technologies Ltd. Method of converting a feedstock to a shearform product and product thereof
US5387431A (en) * 1991-10-25 1995-02-07 Fuisz Technologies Ltd. Saccharide-based matrix
DE3803175A1 (de) * 1987-05-12 1988-11-24 Boehringer Mannheim Gmbh Stabile creatinamidinohydrolase-mutanten
US5143841A (en) * 1987-08-28 1992-09-01 Toyo Jozo Company, Ltd. Ganglioside ceramidase and process for producing same
JP2527035B2 (ja) * 1989-06-16 1996-08-21 東洋紡績株式会社 クレアチニン・アミドヒドロラ―ゼをコ―ドする遺伝子を含有するｄｎａ断片、該ｄｎａ断片を有する組換えベクタ―及び該組換えベクタ―を有する形質転換体、並びにクレアチニン・アミドヒドロラ―ゼの製造方法
DE4028086A1 (de) * 1990-09-05 1992-03-12 Boehringer Mannheim Gmbh Stabile 6-phosphogluconolactonase, verfahren zu deren gewinnung sowie verwendung des enzyms zur bestimmung
CA2109622A1 (en) * 1991-05-17 1992-11-26 Richard C. Fuisz New thermoplastic polymeric material and process for making same
US5576042A (en) * 1991-10-25 1996-11-19 Fuisz Technologies Ltd. High intensity particulate polysaccharide based liquids
US5346377A (en) * 1993-10-07 1994-09-13 Fuisz Technologies Ltd. Apparatus for flash flow processing having feed rate control
US5445769A (en) * 1994-06-27 1995-08-29 Fuisz Technologies Ltd. Spinner head for flash flow processing
US5582855A (en) * 1994-07-01 1996-12-10 Fuisz Technologies Ltd. Flash flow formed solloid delivery systems
US5556652A (en) * 1994-08-05 1996-09-17 Fuisz Technologies Ltd. Comestibles containing stabilized highly odorous flavor component delivery systems
US5587198A (en) * 1995-05-31 1996-12-24 Fuisz Technologies Ltd. Positive hydration method of preparing confectionery and product therefrom
JP3075390B2 (ja) 1996-02-13 2000-08-14 東洋紡績株式会社 新規なクレアチンアミジノヒドロラーゼ、その製法およびその用途
ATE196777T1 (de) * 1996-07-08 2000-10-15 Lonza Ag Verfahren zur herstellung von d-prolinderivaten mittels mikroorganismen
JP2000157279A (ja) * 1998-11-25 2000-06-13 Kikkoman Corp クレアチンアミジノハイドロラーゼ及びその製造法
JP3773160B2 (ja) * 1999-01-01 2006-05-10 キッコーマン株式会社 耐熱性クレアチンアミジノハイドロラーゼ及びその製造法
US6399661B1 (en) 2000-06-26 2002-06-04 Jeffrey M. Golini Oral creatine supplement and method for making same
DK1692522T3 (da) * 2003-11-28 2012-04-02 Radiometer Medical Aps Referencevæske
CN110088013B (zh) 2016-12-19 2022-03-18 祖尔·格兰恩威茨 用于监测食品新鲜度的装置及其使用方法
GB201712592D0 (en) * 2017-08-04 2017-09-20 Imp Innovations Ltd Novel compositions and uses thereof

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2122255B2 (de) * 1971-05-05 1979-01-11 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren zur spezifischen Bestimmung von Creatinin

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2659878A1 (de) * 1975-04-05 1977-11-10 Noda Inst For Scientific Res Verfahren zur herstellung von kreatinamidinohydrolase
DE2614114B2 (de) 1975-04-05 1978-08-31 Noda Institute For Scientific Research, Noda (Japan) Verfahren zur Herstellung von Kreatininamidohydrolase

Also Published As

Publication number Publication date
NL7206001A (de) 1972-11-07
NL175434C (nl) 1984-06-01
GB1359402A (en) 1974-07-10
US3912588A (en) 1975-10-14
NL7205996A (de) 1972-11-07
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AT315131B (de) 1974-05-10
DE2122255B2 (de) 1979-01-11

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