DD241748A5

DD241748A5 - Reinigung biologischen materials

Info

Publication number: DD241748A5
Application number: DD85276680A
Authority: DD
Inventors: Stefan Svenson
Original assignee: Kk
Priority date: 1984-05-28
Filing date: 1985-05-24
Publication date: 1986-12-24
Also published as: ES8609474A1; JPS61502378A; ZA853918B; SE8402861L; CS368485A2; IN162119B; DK39786D0; KR860700135A; HUT39774A; IL75258A0; AU4435885A; FI860316A; US4746647A; NO860295L; NZ212155A; EP0185700A1; ES552519A0; ES552518A0; ES543512A0; WO1985005631A1

Abstract

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Reinigung eines durch rDNA-Technik hergestellten kontaminierten Produktes, wie Protein/Peptid, von ladungstragenden und vom verwendeten mikrobiellen clonierenden Wirt herruehrenden hydrophoben Verunreinigungsstoffen, ebenso das auf diese Weise gereinigte Produkt. Das kontaminierte Produkt wird einer Elektroseparation, wie Elektrodialyse unterzogen, um die Verunreinigungsstoffe zu beseitigen. Wenn die Verunreinigungsstoffe an sich nicht ausreichend aufgeladen sind, wird eine ladungsvermittelnde Vorbehandlung vorgenommen, damit sie bei der Elektroabscheidung direkt separiert werden. Daneben wird ein Verfahren zur Kontrolle der Reinheit des Produktes wie Protein/Peptid, welches durch rDNA-Technik hergestellt wurde, sowie ein Verfahren zur Kontrolle der Wirksamkeit des zur Produktreinigung angewendeten Reinigungsprozesses offenbart.

Description

Hierzu 3 Seiten Zeichnungen

Anwendungsgebiet der Erfindung

Die vorliegende Erfindung betrifft die Reinigung von biologischem Material, insbesondere die Reinigung von kontaminierten Produkten₍wie Peptiden/Proteinen, die unter Anwendung der rekombinanten DNA (rDNA)-Technik hergestellt wurden.

Charakteristik der bekannten technischen Lösungen

Bei der Herstellung von Produkten, wie Proteinen/Peptiden durch die rDNA-Technik wird von mikrobiellen clonierenden Wirten, wie Bakterien oder Hefen ausgegangen.

Für die Aufarbeitung und Reinigung dieser rDNA-hergestellten Produkte verwendet man hauptsächlich die Permeationsgelchromatographie unter Einsatz eines Mittels, daß unter dem Warenzeichen Sephadex im Handel ist, die lonenaustauschchromatographie und/oder die Hochdruck-Flüssigchromatographie mit unterschiedlichen Säulenarten einschließlich Umkehrphasensäulen. Alle diese Reinigungsmethoden zielen auf die Entfernung von mikrobiellen Verunreinigungen hin, die von den clonierenden Wirtsorganismen herrühren, sogenannte E.-coli-Peptide, EPC, wie in „Journalen", Bd.3, Nr. 12,1983, S.331-334, veröffentlicht. Diese Verfahren sind bisher als ausreichend erachtet worden, um die oben erwähnten Wirtskontaminanten zu beseitigen. Die Kontrolle der Reinheit derartiger Produkte ist mit unterschiedlichen Arten von Polyacrylamid-Gel-Elektrophoresetechniken, einschließlich des Einsatzes von dissoziierenden Agenzien, die etwa SDS usw. vorgenommen worden. Desgleichen sind unterschiedliche Arten von Immuno-Assays wie etwa ELISA und RIA angewendet worden. Darüber hinaus hat man Pyrogenitäts-Tests und Limulus-Amöboxyt-Lysat (LAL)-Tests vorgenommen.

Trotz Anwendung der genannten Reinigungsverfahren haben die durch rDNA-Technik erzeugten Produkte bei Anwendung in der Therapeutik noch immer gegen diese Produkte gerichtete Antikörper hervorgebracht. Obwohl die Bildung von Antikörpern als geringfügig und möglicherweise medizinisch hinnehmbar erachtet wurde, haben Fachleute darauf aufmerksam gemacht, daß bei der Zulassung dieser Produkte Vorsicht zu wahren ist, siehe „Läkartidningen", Bd.81, Nr.8,1984, S.636. In jenen Fällen, in denen das Protein über lange Zeitspannen hinweg zu verabreichen ist, wie etwa bei lebenslangen Erkrankungen (z.B. Diabetes), kann nicht einmal eine leichte Antikörperbildung akzeptiert werden.

Auch Verunreinigungen, die nicht an Proteine/Peptide angelagert sind und nicht von mikrobiellen clonierenden Wirtsorganismus stammen, können zu Immunreaktionen führen.

Ziel der Erfindung

Ziel der Erfindung ist es, keine Immunreaktion bei dem therapeutischen Einsatz von durch rDNA-Technik gewonnenen Produkten, wie Proteinen/Peptiden zu erhalten.

Darlegung des Wesens der Erfindung

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein Verfahren zur Abtrennung der fest an dem durch rDNA-Technik gewonnenen Produkten, wie Proteine/Peptide, anhaftenden hydrophoben Verunreinigungsstoffe zu entwickeln.

Erfindungsgemäß werden die hydrophoben Verunreinigungsstoffe, die die Bildung von Epitopen und Fusionsepitopen verursachen, durch Elektroseparation, wie Elektroabscheidung unter Einsatz von gelbildenden Substanzen oder Elektrodialyse entfernt. Die hydrophoben Verunreinigungsstoffe werden von dem Produkt, wie Peptid/Protein, abgeschieden, so daß das gereinigte Produkt bei Verabreichung an Säuger, einschließlich des Menschens, keine Immunreaktionen hervorruft.

Beim erfindungsgemäßen Verfahren zum Reinigen eines kontaminierten Produktes, wie Protein/Peptid, welches durch rDNA-Technik hergestellt wurde, wird das Produkt von ladungstragenden hydrophoben, vom verwendeten clonierenden mikrobiellen Wirt stammenden Verunreinigungen befreit, indem eine Elektroabscheidung durchgeführt wird. Die hydrophoben Verunreinigungsstoffe können erfindungsgemäß zumindest einen Teil ihrer Ladung durch eine ladungsvermittelnde Vorbehandlung, wie eine milde alkalische Behandlung, Dissoziation vermittels dissoziierender Stoffe, Behandlung mit kaotropen Ionen oder chelatbildenden Substanzen erhalten. Die bevorzugte Elektroseparation ist die Elektrodialyse. Bei einer Verzugsvariante handelt es sich bei dem kontaminierten Produkt um durch rDNA-Technik hergestelltes Insulin, und die hydrophoben Verunreinigungsstoffe sind von Escherichia coli stammende Lipopolysaccharide.

Die Erfindung umfaßt des weiteren ein Verfahren zur Kontrolle der Reinheit eines durch rDNA-Technik hergestellten Produktes, wie Protein/Peptid. Dabei werden dem Produkt Antikörper zugegeben, die gegen hydrophobe Verunreinigungsstoffe aus dem bei der Herstellung des Produktes verwendeten mikrobiellen clonierenden Wirt ansprechen. Bei Anwesenheit erfolgt eine Bildung der Antikörper an das Produkt.

Eine Überprüfungsmöglichkeit derWirksamkeit des erfindungsgemäßen Reinigungsprozesses besteht darin, daß vor der Reinigung des Produktes eine festgelegte Menge von radioaktiv oder anderweitig markiertem hydrophoben Wirts-Verunreinigungsstoff zugegeben wird. Nach dem Reinigungsprozeß wird die Menge an noch vorhandenem markiertem Verunreinigungsstoff im gereinigten Produkt bestimmt.

Weiterhin umfaßt die Erfindung das gereinigte Produkt, wie Protein/Peptid, das nach dem erfindungsgemäßen Reinigungsverfahren erhalten wurde.

Die vom eingesetzten mikrobiellen clonierenden Wirt stammenden hydrophoben Verunreinigungsstoffe sind von sich aus ausreichend geladen und können daher direkt vom verunreinigten Produkt abgeschieden werden, wenn dieses der Elektroseparation, wie etwa einer Elektrodialyse unterzogen wird. In den Fällen, in denen die hydrophoben Verunreinigungsstoffe nicht ausreichend aufgeladen sind, wird eine aufladungsschaffende Vorbehandlung vorgenommen, wie eine milde alkalische Behandlung, Dissoziation vermittels dissoziierender Agenzien, wie etwa Harnstoff oder Guanidin-Hydrochlorid, Behandlung mit kaotropen Ionen, wie Kaliumionen oder Zugabe von chelatbildenden Substanzen, wie EDTA. Es gibt zwei Möglichkeiten zu überprüfen, ob das durch die rDNA-Technik erzeugte Produkt wie Protein/Peptid frei von kontaminierenden hydrophoben Wirts-Verunreinigungsstoffen ist. Bei der ersten Variante wird das Produkt mit Antikörpern zusammengebracht, die auf hydrophobe Verunreinigungsstofte aus dem bei der Herstellung verwendeten mikrobiellen clonierenden Wirt ansprechen. Binden sich die Antikörper an das Produkt, so ist das Produkt durch Wirts-Verunreinigungsstoffe kontaminiert. Die Bestimmung der Menge von Antikörpern, die an das Produkt gebunden worden ist, erfolgt beispielsweise durch den ELISA-Tests und stellt ein Maß für den Grad dar, in welchem das Produkt gereinigt worden ist. Dadurch kann die Wirksamkeit verschiedener Reinigungsverfahren hinsichtlich der Beseitigung von kontaminierenden Wirts-Verunreinigungsstoffen bestimmt werden. Die andere Kontrollvariante der Reinheit eines Produktes, das vermittels der rDNA-Technik hergestellt worden ist und/oder nach einem anderen Verfahren isoliert worden ist, beinhaltet das Vermischen des Produktes vor der Reinigung mit einer vorher festgelegten Menge von radioaktiv oder anderweitig markiertem hydrophoben Wirts-Verunreinigungsstoff. Das mit markiertem Wirts-Verunreinigungsstoff und möglicherweise nichtmarkiertem Wirts-Verunreinigungsstoff kontaminierte Produkt wird gereinigt und dann die Menge von markiertem Wirts-Verunreinigungsstoff im gereinigten Produkt bestimmt. Wird im Produkt kein markierter Wirts-Verunreinigungsstoff nachgewiesen, dann ist das Produkt rein. Wird im gereinigten Produkt ein markierter Wirts-Verunreinigungsstoff nachgewiesen, dann war die Reinigung nicht ausreichend, um sämtliche Wirts-Verunreinigungsstoffe zu beseitigen. Diese Kontrollvariante macht es möglich, die Wirksamkeit von unterschiedlichen Reinigungsverfahren zu bestimmen. Der gegenwärtig am häufigsten verwendete mikrobielleclonierende Wirt ist EscherichiacoliKI 2, aber auch andere bakterielle Wirte, wie beispielsweise Bacillus subtilis und Staphylococcus aureus können zu diesem Zweck verwendet werden. Desgleichen kann auch mit Hefe, wie Saccharomyces cerevisiae, gearbeitet werden.

Die rDNA-Technik wird bereits bei der Herstellung zahlreicher wirksamer Medikamente, wie humanen Wachstumshormonen, von Insulin und Interferon angewendet. Bislang ist auf dem schwedischen Markt lediglich ein einziges durch die rDNA-Technik hergestelles Protein verfügbar, und zwar Insulin, das unter dem Warenzeichen Humulin gehandelt wird. Humulin ist unter Verwendung von E. coli K12 als clonierendem Wirt hergestellt worden. Im Artikel in „Journalen", Bd.3, Nr. 12,1983, wird auf Seite berichtet, daß es möglich sei, wenngleich mit einiger Schwierigkeit, unter Verwendung von kompletten Freund's Adjuvant Antikörper zu gewinnen und Versuchstiere gegenüber E. coli — Polypeptiden (ECP), die von dem bei der Produktion von Humulin verwendeten Wirt stammen, jedoch ohne den genetischen Code für die A- und B-Ketten im Insulin, zu sensibilisieren. Zusätzlich scheint es so, daß Humulin bei Kaninchen nicht fiebererzeugend wirkt und <0,6ng/mg bakterielles sogenanntes Endotoxin enthielt, welches gleichbedeutend mit Lipolysaccharid (LPS) ist. Im Limulus-amoeboxyt-Lysat-Test (LAL-Test), der von vielen als der empfindlichste Test auf Endotoxin (LPS) angesehen wird, konnte kein Endotoxin (LPS) nachgewieen werden. Die Einschlägigkeit des LAL-Tests ist allerdings in Frage gestellt worden und dies speziell für den Fall, bei dem LPS in Kombination mit anderen hydrophoben Substanzen vorliegt.

Daraus kann man schließen, daß es mit der bisherigen Technik noch nicht möglich gewesen ist, in vitro kleine Mengen von mikrobiellen Verunreinigungsstoffen darzustellen. Trotzdem können diese Produkte nichtsdestoweniger zu einer Antikörperbildung führen, nicht nur gegenüber den erwähnten Verunreinigungsstoffen, sondern auch gegenüber dem Produkt. In diesem Zusammenhang ist von speziellem Interesse, daß es sich bei Endotoxin (LPS) um eine sehr wirksame immunologische Substanz handelt. LPS ist eine der stärksten stimulierenden Substanzen für polyclonale B-Zellen, die bekannt sind. Durchgeführte Experimente haben gezeigt, daß kleine Menge von Endotoxin vom clonierenden Wirt E. coli, welche aus Lipopolysacchariden bestehen, an Humulin anhaften. Dies wurde durch Zugabe von radioaktiv markiertem Lipopolysaccharid von E. coli K12 ermittelt.

Es hat sich gezeigt, daß der radioaktiv markierte Verunreinigungsstoff das Humulin auch durch die Gelchromatographie hindurch begleitet. Anhand des kontaminierten Humulin wird dargestellt, daß sich das radioaktiv markierte Lipopolysaccharid nach Reinigung durch Elektrodialyse von selbst von E. coli K12 (d.h. dem Wirt) ablöst und vom Humulin abgeführt wird.

Ausführungsbeispiel

Die Erfindung soll nachfolgend in den Ausführungsbeispielen anhand der Figuren näher erläutert werden. Es zeigen:

Fig.1: Kurven von bei der Gelchromatographie erhaltener Werte verschiedener Substanzen; Fig.2: Kurven von bei der Elektrodialyse-Reinigung erhaltener Werte verschiedener Substanzen; Fig.3: eine offene Elektrodialyse-Reinigungsvorrichtung.

In den Ausführungsbeispielen verwendete Materialien sind reguläres Humulin für Subkutaninjektionen, 40IU/ml, der Firma Kabi-Vitrum, Schweden, U-¹⁴C-markiertes Е.-соІі-К-12-LPS 10ООсрт/рд, das in vivo mit U-¹⁴C-Galaktose und U-¹⁴Glykose markiert wurde, die unter der Bezeichnung NEC-520 und NEC-042 von der Firma NEN, Großbritannien gehandelt werden. Die Materialien wurden durch PCP-Extraktion gereinigt. Die Reinheit wurde durch SDS-Polyacrylamid-Gel-Elektrophorese mit anschließender Silverfärberung und Autoradiographie bestätigt. Eine Untersuchung mit ¹H-NMR, die einen Vergleich mit nicht-radioaktiv markiertem Bezugs-LPS von E. coli K12 einschloß, zeigte, daß dieses LPS rein war.

Für die Permeations-Gelchromatographie-Versuche wurde eine Substanz unter dem Warenzeichen Sepharose G75der Firma Pharmacia, Uppsala, Schweden, gehandelt, verwendet. Der Eluent bestand in einer Glasdestillation aus doppelt destilliertem Wasser mit einem Gehalt von 16mg/ml Glycerol p.a. der Firma Merck, BRD.

Die zum Einsatz gelangenden Membranen werden von der Firma Union« Carbide, USA, unter der Bezeichnung Union Carbide dialyse membrane 21 DMOOC227P7F20 gehandelt.

Beispiel 1

Untersuchung der Bildung von ¹⁴C-markiertem E. соІІ-К-12-LPS am Humulin In der zugehörigen Fig. 1 werden die Werte der Gelchromatographie von ¹⁴C-markiertem E.-coli-K-i 2-LPS (Kurve A), Humulin [in OD₂So] (Kurve B), ¹⁴C-markiertemE.-coli-K-12-LPS + Humulin [in cpm] (Kurve C) und ¹⁴C-markiertemE.-coli-K-12-LPS + Humulin [in OD₂₈I)] (Kurve D) dargestellt.

2,5mg Humulin (laut Bestimmung durch Bio-Rad Proteinanalyse, Bio-Rad, München, BRD) in 1,0ml Wasser/Glycerol-Gemisch wurden mit 100 μg ¹⁴C-markiertem E.-coli-K-i 2 LPS vermischt und bei Raumtemperatur (23⁰C) unter leichtem Verrühren 2 h lang bebrütet. Anschließend wurde dieses Gemisch der G75-Säule, mit den Abmessungen 9mm χ 550mm und mit Sepharose gefüllt war, aufgegeben und mit einem Wasser/Glycerol-Gemisch (16mg/ml) bei einer Durchflußgeschwindigkeit von 4ml/h eluiert. Das Fraktionsvolumen betrug 0,5ml.

Das Elutionsprofil dieses Gemisches ist in den Kurven C und D dargestellt. Dieses Experiment zeigt deutlich, daß ein Hauptanteil des ¹⁴C-markierten LPS mit Humulin mitwanderte. Darüber hinaus zeigt Fig. 1, daß Humulin allein eine Retentionszeit aufweist, die weitgehend mit der Retentionszeit des experimentell kontaminierten Humulins identisch ist, siehe Kurve B. Aus Kurve A ist zu entnehmen, daß bei ausschließlicher Anwendung von ¹⁴C-markiertem LPS dieses mit der Anfangsfraktion herauseluiert (verworfen) wurde, es also eine Retentionszeit aufweist, die sich deutlich von der des Mischproduktes unterscheidet. Der Grund dafür, warum dieses zuletzt erwähnte Elutionsprofil lediglich mit ¹⁴C-markiertem LPS gewonnen wird, besteht darin, daß dieses LPS in Form von Mizellen vorliegt.

Zusammenfassend kann gesagt werden, daß ¹⁴C-markiertes E. coli-K-12-LPS stark an Humulin gebunden wird.

Beispiel 2

Untersuchung der Reinigung von experimentell kontaminiertem Humulin durch Elektrodialyse In der zugehörigen Fig. 2 werden die Werte der Elektrodialyse-Reinigung von Humulin von kontaminierendem E.-coli-K-12-LPS, wobei Kurve A den Prozentsatz von verbleibendem Humulin und Kurve B den Prozentsatz von verbleibendem ¹⁴C-markiertem radioaktiven E.-coli-K-12-LPS angibt, dargestellt.

Das gemäß Beispiel 1 durch Gelpermeationschromatographieauf der G 75 — Sau Ie gereinigte Humulin der Fraktionen 48 bis 63 wurde zusammengefaßt und die gesamte Radioaktivität in einer Gesamtmenge von 7,53ml mit 6000cpm (Zählimpuls pro Minute) ermittelt. Diese Radioaktivität in Humulin entspricht somit mit einer Menge von 6 мд LPS auf 2,5 mg Humulin verteilt, d. h.

jedes Milligramm Humulin trägt 2,4pg kontaminierenden E.-coli-K-i2-LPS. Das Beispiel gibt durch die Beseitigung dieses Verunreinigungsstoffes durch Elektroseparation an, wobei das obengenannte Material und die in Fig.3 gezeigte Vorrichtung verwendet wurde.

Sie besteht aus einem offenen Elektrodialyse-Gefäß 1, beispielsweise aus Plexiglas, sowie einer durch zwei Dialysemembranen 2 verschlossenen röhrenförmigen Dialysekammer 3.4 und 5 bezeichnen jeweils eine Platin-Anode und eine Platin-Katode.

Die kontaminierte Humulin-Fraktion wurde einer Elektrodialyse bei 160 V und 20 mA unterzogen, wobei zu verschiedenen Zeitpunkten Proben entnommen wurden. Bestimmt wurden die Menge an Radioaktivität in den Dialysemembranen sowie die Menge an Humulin. Aus der Kurve A ist zu ersehen, daß während der gesamten Versuchszeit sämtlicher Humulin in den Dialysemembranen verblieb, sich aber das ¹⁴C-markierte E.-coli-LPS bereits nach einer Elektrodialysezeit von 40min auf 55% vermindert hatte, wie aus Kurve B zu entnehmen war. Nach zweistündiger Elektrodialyse blieben nur noch 17% des kontaminierenden LPS übrig.

Es kann gesagt werden, daß durch Elektrodialyse, die vom Wirt stammenden kontaminierenden hydrophoben Substanzen (LPS) wirkungsvoll von rDNA-erzeugten Produkten, wie Proteinen/Peptiden, beseitigt werden können.

Beispiel 3

Überprüfung der Reinheit eines Produktes durch Vermischen des Produktes mit Antikörpern, die hydrophobe Verunreinigungsstoffe anzeigen

Monoclonale Antikörper der IgG- und IgM-Klassen wurden in Balb/-c-Mäusen durch Hybridisation von Lymphozyten produziert, welche aus der Milz von Mäusen isoliert wurden, die ihrerseits mit gereinigtem Lipopolysaccharid (LPS) von E. coli K12 mit sp2-Zellen immunisiert waren, um Hybridoma-Clonezu erbringen, die vermittels enzymelinked immunosorbent-assay (ELISA) hinsichtlich spezifischer Expression von Ig mit Spezifität bezüglich des Coreoligosaccharid-Anteils des genannten LPS's ausgelesen wurden, wobei das LPS als Hüll-Antigen in der ELISA-Tests verwendet wurde. Nach anschließender Subclonierung zum Erhalt monoclonaler antikörpererzeugender Hybridomas durch Verdünnungstechnik wurden diese Hybridomas sowohl in vitro als auch in vivo (d. h. als Aszites in Balb/c-Mäusen) vermehrt. Die monoclonalen Antikörper wurden entweder unter Anwendung der konventionellen Gelpermeationschromatographie (IgM) oder durch Anwendung des Protein-A-Affinitäts-Chromatographieverfahrens zum Isolieren von IgG-monoclonalen Antikörpern isoliert.

Die Reinheit jeder der verwendeten monoclonalen Antikörper-Präparate wurde durch isoelektrisch fokussierende Muster, Subklassen- und Leichtketten-Identifikation unter Einsatz im Handel erhältlicher Leicht- und schwerkettenspezifischer Antimaus-Antikörper in doppeltradialen Immundiffusionstests kontrolliert.

Gereinigtes Schweineinsulin der Firma Novo Industri A/S, Dänemark, wurde mit ¹⁴C-markiertem gereinigten E. coli LPS verunreinigt, indem 400IE Actrapid mit 0,1 mg LPS in einem Gesamtvolumen von 10ml vermischt wurden. Nach 5stündiger Inkubation bei 25⁰C wurde das Gemisch auf Sepharose in einer GTB-Säulechromatographiert, und das durch Messungen der optischen Dichte bei 280 Nanometer erkannte Insulin gesammelt.

Die gesammelten Fraktionen wurden nach Beendigung der Dialyse gegenüber 1 % Glycerol und 0,7 Μ NaCI enthaltendem destillierten Wasser als Hüll-Antigen im ELISA-Test verwendet und mit dem nicht verunreinigten Originalprodukt hinsichtlich der spezifischen Bindung von Maus-AntiE.coliK^coreoligosaccharid-spezifischen monoclonalen IgG-Antikörpern verglichen, die in der oben beschriebenen Weise hergestellt worden waren. Die Umhüllungsdosierungen eines jedem der zwei Antigene waren logarithmische Verdünnungen von 1 000 Mikrogramm Protein bis zu 0,001 Mikrogramm pro ml, entsprechend der Messung nach Lowry et al.

In den ELISA-Tests zeigte das experimentell kontaminierte Produkt eine Bindung der monoclonalen Maus-Anti-E.-coli-Coreoligosaccarid-lgG-Antikörper bis hinunter zu einem Verunreinigungsgrad von weniger als 0,01 Mikrogramm Е.-СОІІ.-К-12-LPS pro mg Insulin.

Das Beispiel zeigt, daß sich monoclonale Antikörper, die gegen das Produktprotein begleitende hydrophobe Wirts-Verunreinigungsstoffe (LPS) gerichtet sind, an das Produktprotein binden, sofern diese kontaminiert ist.

Claims

Erfindungsanspruch:

1. Verfahren zum Reinigen eines durch die rDNA-Technik hergestellten kontaminierten Produktes, wie Protein/Peptid, gekennzeichnet dadurch, daß das kontaminierte Produkt von ladungstragenden und vom verwendeten mikrobiellen clonierenden Wirt stammenden hydrophoben Verunreinigungsstoffen durch eine Elektroseparation gereinigt wird.
2. Verfahren nach Punkt 1, gekennzeichnet dadurch, daß den hydrophoben Verunreinigungsstoffen ein Teil ihrer Ladung durch eine aufladungsvermittelnde Vorbehandlung gegeben wird.
3. Verfahren nach Punkt 2, gekennzeichnet dadurch, daß die Vorbehandlung aus einer milden alkalischen Behandlung, Dissoziation dissoziierender Stoffe, Behandlung mit kaotropen Ionen oder mit chelatbildenden Substanzen besteht.
4. Verfahren nach Punkt 1, gekennzeichnet dadurch, daß die Elektroseparation durch Elektrodialyse vorgenommen wird.
5. Verfahren nach Punkt !,gekennzeichnet dadurch, daß das kontaminierte Produkt aus Insulin besteht, welches durch die rDNA-Technik hergestellt wurde.
6. Verfahren nach Punkt 1, gekennzeichnet dadurch, daß die hydrophoben Verunreinigungsstoffe aus Lipopolysacchariden bestehen, die von Escherichia coli stammen.