DE3685930T2 - Verfahren zur bestimmung von mimitopen. - Google Patents

Verfahren zur bestimmung von mimitopen.

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DE3685930T2 DE8686902772T DE3685930T DE3685930T2 DE 3685930 T2 DE3685930 T2 DE 3685930T2 DE 8686902772 T DE8686902772 T DE 8686902772T DE 3685930 T DE3685930 T DE 3685930T DE 3685930 T2 DE3685930 T2 DE 3685930T2
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Coselco Mimotopes Pty Ltd
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Description

  • Diese Erfindung betrifft ein Verfahren zur Bestimmung oder zum Nachweis einer Sequenz von Monomermolekülen, welche dem Ligandenmolekül für einen speziellen Rezeptor entspricht. Die Sequenz von so bestimmten Monomermolekülen ist das Mimotop (im folgenden definiert) des speziellen Liganden. Das durch diese Methode bestimmte Mimotop muß keine offensichtliche oder direkte Ähnlichkeit mit dem natürlichen Ligandenmolekül haben, aber es teilt mit ihm die Fähigkeit, mit dem Rezeptor zu reagieren, und tatsächlich kann das so bestimmte Mimotop modifiziert werden, um spezifische oder zusätzliche Eigenschaften in die Reaktion mit dem Rezeptor einzuführen. Ein solches Mimotop könnte dann verwendet werden, um den natürlichen Liganden bei der Behandlung oder Prävention einer bestimmten Krankheit zu ersetzen, oder es kann verwendet werden, um eine bestimmte biologische Wirkung zu vermitteln.
  • Die unten aufgelisteten, in dieser Beschreibung verwendeten Bezeichnungen haben die folgenden Bedeutungen:
    • Rezeptor:
  • Ein Molekül oder ein Molekularkomplex, das oder der sich spezifisch mit seinem jeweiligen Ligandenmolekül vereinigt. Es sind solche Rezeptoren vom größten Interesse, die bei Bindung mit ihrem oder ihren jeweiligen Liganden eine biologische Funktion vermitteln. Beispiele von Rezeptoren umfassen - aber sind nicht beschränkt auf - die bekannte Klasse von Rezeptoren, die mit der Oberflächenmembran von Zellen assoziiert sind, und beinhalten z.B. die immunologisch wichtigen Rezeptoren von B-Zellen, T-Zellen, Makrophagen und dgl.. Ein anderes Beispiel sind Rezeptoren für Acetylcholin auf Nervenzellen, welche die Übertragung eines Nervenpulses die Nervenzelle entlang verursachen, wenn das Rezeptormolekül mit seinem Liganden, Acetylcholin, reagiert.
    • Epitop:
  • Die spezifische Oberfläche eines Antigenmoleküls, welche durch den Bereich einer Wechselwirkung mit der Subklasse von Rezeptoren, die als Antikörper bekannt ist, charakterisiert ist.
    • Katamer:
  • Ein Polymermolekül, welches eine durch die Kondensation von kleinen Molekülen genau definierte lineare Sequenz ist. Es ist anzumerken, daß diese Bezeichnung Moleküle umfaßt, in denen unterschiedliche Typen von Kondensationsreaktionen verwendet werden, um die kleinen Moleküle zu vereinigen. Eine dem Wort "Katamer" vorangestellte Zahl bedeutet, daß das Katamer durch die Kondensation der angegebenen Zahl kleiner Moleküle gebildet wird, z.B. bedeutet 8-Katamer, daß das Katamer aus 8 kleinen Molekülen besteht. Beispiele von Katameren umfassen jedes bekannte Peptid und jedes bekannte Oligosaccharid.
    • Monomer:
  • Ein Mitglied des Satzes kleiner Moleküle, die zur Bildung eines Katamers miteinander kondensiert werden können. Der Satz von Monomeren umfaßt - aber ist nicht beschränkt auf - z.B. den Satz von gewöhnlichen L- Aminosäuren, den Satz von D-Aminosäuren, den Satz von synthetischen Aminosäuren, den Satz von Nukleotiden und den Satz von Pentosen und Hexosen.
    • Pepid:
  • Ein Katamer, in dem die kleinen Moleküle alpha-Aminosäuren sind und durch eine Peptidbindung miteinander verbunden sind. Im Zusammenhang dieser Beschreibung sollte festgestellt werden, daß die Aminosäuren das optische L-Isomere oder das optische D-Isomere sein konnen.
    • Mimotop:
  • Ein Katamer, das in mindestens einer seiner Konformationen eine Oberflächenregion mit der äquivalenten molekularen Topologie wie die Bindungsoberfläche des Ligandenmoleküls, welches es nachahmt, aufweist. Im Zusammenhang mit immunologischen Rezeptoren ahmt das Mimotop das Epitop des Antigens nach.
    • Komplementär:
  • Betrifft das Zusammenpassen der reagierenden Oberflächen eines Ligandenmoleküls und seines Rezeptors. So können der Rezeptor und sein Ligand als komplementär bezeichnet werden und weiterhin sind die Charakteristika der Kontaktoberfläche miteinander komplementär.
    • Paratop:
  • Die Bindungsstelle eines Antikörpers, die komplementär zu einem bestimmten Epitop ist.
    • Ligandenmolekül:
  • ist das Molekül, welches an einen bestimmten Rezeptor bindet und, wenn es daran gebunden ist, die mit diesem bestimmten Rezeptor assoziierte biologische Funktion vermittelt.
  • Beispiele von Rezeptoren, die durch diese Methode untersucht werden können, umfassen, aber sind nicht beschränkt auf:
    • Hormonrezeptoren:
  • z.B. die Rezeptoren für Insulin und Wachstumshormon; Bestimmung der Mimotope der an diese Rezeptoren bindenden Liganden kann zur Entwicklung eines oralen Ersatzes der täglichen Injektionen führen, die Diabetiker nehmen müssen, um die Symptome von Diabetes zu beseitigen, und im anderen Fall zu einem Ersatz für das seltene menschliche Wachstumshormon führen, das nur aus Leichen oder durch rekombinante DNA-Technologie erhalten werden kann. Andere Beispiele sind die vasokonstriktiven Hormonrezeptoren; Bestimmung des Mimotops des an diese Rezeptoren bindenden Liganden kann zur Entwicklung von Arzneimitteln zur Kontrolle des Blutdrucks führen.
    • Opiatrezeptoren:
  • Bestimmung von Mimotopen der an die Opiatrezeptoren im Gehirn bindenden Liganden kann zur Entwicklung eines weniger süchtigmachenden Ersatzes für Morphium und verwandte Arzneimittel führen.
    • Rezeptoren von Mikroorganismen:
  • Bestimmung von Mimotopen der an einen Rezeptor wie etwa für spezifische Transportproteine oder zum überleben der Mikroorganismen notwendigen Enzyme bindenden Liganden kann zu einer neuen Klasse von Antibiotika führen. Von besonderem Wert würden Antibiotika gegen Protozoen und solche Bakterien sein, die gegen zur Zeit verwendete Antibiotika resistent sind.
    • Enzyme:
  • z.B. die Enzyme, die für die Spaltung von Neurotransmittern verantwortlich sind; Bestimmung von Mimotopen, die in der Lage sind, die Wirkung der Enzyme, welche die unterschiedlichen Neurotransmitter spalten, zu modulieren, könnte zur Entwicklung von Arzneimitteln führen, die bei der Behandlung von Störungen der Nervenleitung verwendet werden können, und
    • Antikörper:
  • z.B. die Ligandenbindungsstelle auf dem Antikörpermolekül, die an das Epitop eines Antigens von Interesse bindet; Bestimmung eines Mimotops für das Epitop kann zur Entwicklung von Impfstoffen führen, bei denen das Immunogen auf einem oder mehreren Mimotopen oder diagnostischen Mitteln oder bei der therapeutischen Behandlung von Autoimmunkrankheiten geeigneten Verbindungen basiert.
  • Beispiele von Liganden, welche durch diese Methode untersucht werden können, umfassen, aber sind nicht beschränkt auf:
    • Toxine und Gifte:
  • z.B. die Bindungsstelle des Toxinmoleküls, die mit einem bestimmten Rezeptor im Körper reagiert, um das oder die jeweiligen Symptome einer Vergiftung zu ergeben; Bestimmung von Mimotopen für die Bindungsstelle des Liganden kann zur Entwicklung von Arzneimitteln führen, die zur Behandlung einer Vergiftung durch Schlangen oder andere giftige Tiere ohne die Nebenwirkungen von heterologen Antiveninen verwendet werden können.
    • Virus- und andere Mikroorganismus-Kapsidmoleküle:
  • z.B. die Bindungsstelle auf dem Virushüllmolekül, die mit einem bestimmten Rezeptor auf der Zellmembran im Körper reagiert und die dem Virus das Eindringen und somit die Infektion der jeweiligen Zelle erlaubt; Bestimmung von Mimotopen für diese Bindungsstelle kann zur Entwicklung von Arzneimitteln führen, die spezifisch ein Eindringen des Virus in die Zelle verhindern und somit seine Replikation verhindern.
  • Es ist eine Hauptaufgabe dieser Erfindung, eine oder mehrere kurze Sequenzen von Monomeren (Katameren) nachzuweisen oder zu bestimmen, die selektiv an einen bestimmten Rezeptor binden, um seine biologische Funktion zu vermitteln. Diese Katamere sind die Mimotope des Liganden. Diese Information ist für die Entwicklung von hochspezifischen diagnostischen und therapeutischen Mitteln von sehr hohem Wert.
  • Die gebräuchlichste Gruppe kleiner Moleküle, die miteinander zur Bildung eines Katamers kondensiert werden kann, ist die Gruppe von alpha-Aminosäuren. Es können jedoch auch andere Moleküle, die mit einer anderen ausgewählten Chemie vereinbar sind, verwendet werden, z.B. Katamere, die durch die spezifische sequenzielle Kondensation von Nukleotiden oder Sacchariden gebildet werden. Eine andere Gruppe von kleinen Molekülen wären die nicht-genetisch kodierten Aminosäuren, wie etwa beta-Aminosäuren, die vorteilhaft zum Einfügen einer zusätzlichen Bindung an spezifischen Positionen innerhalb des Katamers verwendet werden können.
  • Das erfindungsgemäße Verfahren beruht auf der Erkenntnis, daß ein gegebener Rezeptor spezifisch mit einem Katamer reagiert, welches das Mimotop für den Liganden ist, gegen den der Rezeptor gerichtet ist. Es beruht weiterhin auf modernen Techniken der Immunologie, um Reaktion zwischen einein Rezeptor und seinem Liganden nachzuweisen, wenn beide vorhanden sind.
  • In der australischen Patentanmeldung Nr. 45339/85, veröffentlicht als AU-B-592311 und entsprechend WO-A-8600991, wird vorgeschlagen, Mimotope auf Basis einer Gesamtlänge von etwa 8 Monomeren darzustellen. Es ist jetzt klar, daß das bevorzugte Verfahren zur Darstellung von Mimotopen von kürzeren Katameren (2 oder 3 Monomere lang) ausgeht, die aus allen Monomerkombinationen hergestellt werden entweder aus:
  • (i) zwei Sätzen von Monomeren, die identisch sein können, oder
  • (ii) drei Sätzen von Monomeren, von denen das mittlere Monomer des Katamers aus einem Satz speziell ausgewählter Monomere ausgewählt wird, die die anderen beiden Monomere in bekannte räumliche Beziehungen bringen, wobei die restlichen Monomere des Katamers aus zwei Sätzen von Monomeren kommen, die identisch sein können.
  • Weiterhin ist jetzt gezeigt worden, daß die Sensitivität des Nachweises der Bindung an Rezeptoren in manchen Fällen verringert wird, wenn die Monomere in Katamerpräparationen synthetisiert werden, wie sie in der australischen Patentanmeldung Nr. 45339/85 offenbart sind.
  • EMBO J., Vol. 3 (6), (1984), S. 1295-1300 offenbart eine Untersuchung zur Charakterisierung des Epitops des monoklonalen Ratten-Antikörpers YL 1/2 unter Verwendung synthetischer Peptide und alpha-Tubulin-Derivate.
  • Die WO84/03564 offenbart ein Verfahren zur Musterung einer bekannten Aminosäuresequenz auf Epitopstellen durch Konstruktion einer Vielzahl von überlappenden kürzeren Sequenzen, die Teilen der vollständigen Sequenz entsprechen, und deren Musterung auf Epitopaktivität.
  • Die WO84/03506 offenbart synthetische Peptide, die 5, 6 oder 7 Einheiten lang sind und die Antigenizität des VPI-Proteins von Maul- und Klauenseucheviren zeigen.
  • PNAS, Vol. 87 (1984), S. 3993-4002 offenbart eine Prozedur zur Musterung der Sequenz des Maul- und Klauenseuchevirus (Typ 01) auf Epitopstellen durch Konstruktion überlappender kurzer Peptidsequenzen, die an feste Träger gekoppelt sind.
  • PNAS, Vol. 82 (1985), S. 178-182 offenbart eine Methode zur Musterung von Epitopen aus 3 Maul- und Klauenseuchevirus- Stämmen unter Verwendung von Antiserum. Die Epitopsequenzen wurden weiterhin durch Variation einzelner Aminosäuren in den kurzen Sequenzen und Bestimmung einer Änderung in der Epitopaktivität charakterisiert.
  • Wir haben gezeigt, daß Reaktion zwischen einem Rezeptor und kurzen Mimotopen auf einfache Weise nachgewiesen wird. Wenn sie miteinander kondensiert sind, binden diese kurzen Mimotope an den Rezeptor entweder mit einer höheren Affinität oder mit einer höheren Spezifität für diesen Rezeptor. Diese Reaktion kann nachgewiesen werden, selbst wenn das dem Rezeptor präsentierte kurze Mimotop nur 2 Monomermoleküle lang ist. Durch Bestimmung des optimalen kurzen Mimotops bei jeder Stufe und dem anschließenden Testen weiterer Varianten kann die endgültige Struktur eines stark bindenden Mimotops ermittelt werden.
  • Gemäß vorliegender Erfindung wird ein Verfahren zum Nachweis oder zur Bestimmung der Sequenz von Monomeren bereitgestellt, welche ein topographisches Äquivalent des Liganden ist, der zu einem bestimmten Rezeptor von Interesse komplementär ist, wobei die Sequenz mindestens teilweise unbekannt ist, wobei das Verfahren die Schritte umfaßt:
  • 1. Synthetisieren einer Vielzahl von Katameren, wobei jedes Katamer die allgemeine Formel:
  • D&sub2;-D&sub1;
  • aufweist, worin D&sub1; ein bestimmtes Monomer, ausgewählt aus einem ersten Satz von i Monomeren, darstellt und D&sub2; ein bestimmtes Monomer, ausgewählt aus einem zweiten Satz von j Monomeren, der mit dem ersten Satz von Monomeren gleich oder davon verschieden sein kann, darstellt, wobei die Vielzahl von Katameren den Satz von (i j) Katameren umfaßt;
  • 2. Kontaktieren jedes Katamers mit dem Rezeptor von Interesse und
  • 3. Nachweisen oder Bestimmen des Vorliegens oder des Fehlens einer Bindung zwischen jedem Katamer und dem Rezeptor.
  • Das Verfahren kann auch die weiteren Schritte enthalten:
  • a. Synthetisieren einer weiteren Vielzahl von Katameren, wobei jedes Katamer die allgemeine Formel:
  • D&sub3;-D&sub2;-D&sub1;
  • oder D&sub2;-D&sub1;-D&sub3;
  • aufweist, worin D&sub1; und D&sub2; wie oben definiert sind und vorzugsweise eine Kombination von Monomeren darstellen, die einem Katamer entspricht, das an den Rezeptor bindet, und D&sub3; ein bestimmtes Monomer, ausgewählt aus einem dritten Satz von Monomeren, der mit dem ersten oder zweiten Satz von Monomeren gleich oder davon verschieden sein kann, darstellt, und
  • b. Durchführen der oben beschriebenen Schritte 2 und 3 mit der weiteren Vielzahl von Katameren.
  • Die Prozedur der obigen Schritte a. und b. kann wiederholt werden, um die Katamere weiterhin durch systematisches Anfügen weiterer Monomere an die Katamere zu "verlängern" und auf dieselbe Weise wie im obigen Schritt b. zu testen.
  • Unter einem weiteren bedeutenden Gesichtspunkt kann das erfindungsgemäße Verfahren die Schritte umfassen:
  • A. Synthetisieren einer Vielzahl zusätzlicher Katamere, wobei jedes zusätzliche Katamer die allgemeine Formel:
  • D&sub2;-Sp-D&sub1;
  • aufweist, worin D&sub1; und D&sub2; wie oben definiert sind und Sp ein Spacermolekül ist, das die relative Orientierung der Monomere D&sub1; und D&sub2; modifizieren kann, und
  • B. Durchführen der oben beschriebenen Schritte 2 und 3 mit der Vielzahl von zusätzlichen Katameren.
  • Das oben beschriebene Spacermolekül "Sp" kann auch systematisch in alle möglichen Positionen der oben erwähnten "verlängerten" Katamere eingeführt und auf selbe Weise wie im obigen Schritt B. getestet werden.
  • Unter noch einem weiteren Gesichtspunkt kann das erfindungsgemäße Verfahren weiterhin die Schritte des systematischen Ersetzens der Monomere in jedem der oben genannten Katamere durch ihre optischen Isomere, entweder einzeln oder in Kombinationen von Monomeren, und des erneuten Durchführens der oben beschriebenen Schritte 2 und 3 umfassen.
  • In einem weiteren Gesichtspunkt kann das Verfahren ferner die Schritte des systematischen Ersetzens der Monomere in jedem der oben genannten Katamere, die an den Rezeptor von Interesse binden, entweder einzeln oder in Kombinationen von Monomeren, durch andere Monomere, ausgewählt aus dem oder den jeweiligen Sätzen von Monomeren, und des erneuten Durchführens der oben beschriebenen Schritte 2 und 3 umfassen.
  • Es ist klar, daß das erfindungsgemäße Verfahren keine vorherige Information über die Art des Liganden erfordert. Insbesondere erfordert es kein Vorwissen über die Sequenz von Monomeren, die den Liganden bilden. Für die Anwendung dieser Erfindung ist es in der Tat nicht erforderlich, die Quelle oder Identität des Liganden zu kennen, gegen den der Rezeptor gerichtet ist. Ferner macht diese Erfindung keine Vermutungen über die Art des Liganden des jeweiligen Rezeptors. Dieses Verfahren identifiziert Mimotope sowohl von diskontinuierlichen als auch von kontinuierlichen Liganden. Aufgrund der Art des erfindungsgemäßen Verfahrens erkennt man, daß Mimotope, die den nachgeahmten Liganden bilden, aus Mitgliedern des gleichen Satzes von Monomeren bestehen können oder nicht.
  • Die Vielzahl von Katameren, deren Synthese bei der Anwendung dieser Erfindung erforderlich ist, kann nach jeder bekannten Methode der Katamersynthese hergestellt werden. Wenn es sich bei den Monomeren um Aminosäuren handelt, sind die bevorzugten Methoden die in der australischen Patentschrift Nr. 25429/84 beschriebene Verwendung der Festphasentechnik, wobei jedes Katamer auf einem Polyethylenträger synthetisiert wird.
  • Es folgt eine genaue Beschreibung einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung, wenn sie zur Bestimmung eines Mimotops für einen Liganden angewendet wird, der an einen Rezeptor binden kann, wenn dieser Rezeptor ein Antikörper ist. In diesem Zusammenhang wird der Ligand gewöhnlich als Epitop für den Antikörper bezeichnet Vorzugsweise wird das Verfahren gemäß vorliegender Erfindung ausgeführt, indem eine Vielzahl von synthetisierten Katameren gegen den Antikörper von Interesse gemustert wird. Idealerweise ist der Antikörper ein monoklonaler Antikörper, der nach einer der gebräuchlichen Methoden hergestellt werden kann. Wenn eine Quelle von monoklonalem Antikörper mit den erwünschten Eigenschaften nicht verfügbar ist, kann polyklonales Antiserum aus Menschen oder Tieren verwendet werden, die Analyse der erhaltenen Ergebnisse kann jedoch kompliziert sein, da die beobachtete Reaktion von mehr als einem monoklonalen Antikörper sein könnte. Bei Verwendung von polyklonalem Antiserum kann es erforderlich sein, die Antikörperdiversität unter Verwendung von Techniken zu verringern, die einem Fachmann wohlbekannt sind, z.B. isoelektrische Fokussierung, Chromatographie auf HPLC-Basis oder Affinitätschromatographie.
  • Zur Zeit gibt es Hinweise, daß ein Epitop durch ein Katamer nachgeahmt wird, das üblicherweise etwa 6 Monomere lang ist, wenn die Monomere aus dem Satz von alpha-Aminosäuren kommen. Es soll jedoch klargestellt werden, daß die vorliegende Erfindung nicht auf Sequenzen beschränkt ist, die aus 6 Monomeren gebildet werden. Die Fähigkeit des 6-Katamers, das Mimotop des Epitops darzustellen, hängt nicht kritisch davon ab, daß an jeder Position ein bestimmtes Monomer ist. Es wurde festgestellt, daß bestimmte Positionen in den meisten Mimotopen zur Bindung mit dem Rezeptor nicht auf ein einziges spezielles Monomer beschränkt sind.
    • A: Synthese einer Vielzahl von Katameren
  • Wie oben erwähnt, ist es das bevorzugte Verfahren zur Anwendung dieser Erfindung, die Katamere auf einem festen Träger zu synthetisieren. In dieser Ausführungsform hat die Vielzahl von Katameren insgesamt die allgemeine Formel:
  • Y-D&sub2;-D&sub1;-Lk-(fester Träger),
  • wobei "Lk" ein Linkermolekül darstellt, welches eine geeignete Endgruppe zur Kondensation der Monomere an den festen Träger darstellt. "D&sub1;" und "D&sub2;" stellen spezifische Positionen dar, die durch Monomere besetzt werden, die aus bekannten Sätzen von Monomeren ausgewählt werden, die aber systematisch zwischen Katameren verändert werden. Es sollte festgestellt werden, daß der für die mit D&sub1; bezeichnete Position verwendete Satz von Monomeren nicht derselbe Satz von Monomeren sein muß, der für die mit D&sub2; bezeichnete Position verwendet wird. "Y" in der allgemeinen Formel ist eine Endgruppe des Katamers und kann - aber muß nicht notwendigerweise - z.B. ein Wasserstoffatom oder eine Acetylgruppe sein. "Y" kann auch ein anderes Molekül sein, das an das Katamer gekoppelt ist, um spezielle Charakteristiken der molekularen Umgebung einer Peptidbindung an der als Aminoterminus bezeichneten Position zu bewahren.
  • Wenn i die Zahl von Mitgliedern in dem Satz von Monomeren ist, der in der D&sub1;-Position gekoppelt werden soll, und j die Anzahl von Mitgliedern in dem Satz von Monomeren ist, der in der D&sub2;-Position gekoppelt werden soll, dann werden insgesamt i j unterschiedliche Katamere synthetisiert.
  • In der vorliegenden Ausführungsform werden die Trägerstäbe so hergestellt, daß die Monomere an sie gekoppelt werden können, indem sie an ein geeignetes Linkermolekül gekoppelt werden.
  • Zur Kopplung an der D&sub1;-Position behandelt man jeden Stab mit einem Reaktionsgemisch, das nur ein einziges Monomer, wie etwa eine geschützte Aminosäure oder dgl. enthält. In dieser Position werden alle i Monomere an j Stäbe gekoppelt. Zur Kopplung an der D&sub2;-Position wird jeder Stab mit einem Reaktionsgemisch behandelt, welches ein einziges Monomer, wie etwa eine geschütze Aminosäure oder dgl. enthält. Jeder der j Stäbe, der ein bestimmtes Monomer in der D&sub1;-Position aufweist, hat ein unterschiedliches Monomer an der D&sub2;-Position gekoppelt. Auf diesem Weg findet man jede Kombination der Mitglieder des Satzes oder der Sätze von Monomeren in den i j Stäben.
  • Die erwünschte Endgruppe "Y" wird anschließend unter Verwendung der geeigneten Chemie gekoppelt.
  • Nach Synthese der Vielzahl von Katameren werden alle Seitenkettenschutzgruppen von den Katameren unter Verwendung der geeigneten Techniken entfernt und die stabgekoppelten Katamere werden gewaschen.
  • Es wurde gefunden, daß es eine bevorzugte Ausführungsform der Erfindung ist, zur Unterstützung bei der Analyse von Daten mehr als einen Satz einer Vielzahl von Katameren zu synthetisieren. Somit kann man ebenso wie Katamere mit der allgemeinen Formel
  • Y-D&sub2;-D&sub1;-Lk-(fester Träger)
  • wie oben beschrieben zu synthetisieren, zusätzliche Sätze von Katameren mit der allgemeinen Formel
  • Y-D&sub2;-Sp-D&sub1;-Lk-(fester Träger)
  • herstellen, wobei "Sp" ein Spacermolekül ist, das die relative Orientierung der Monomere an den bezeichneten Positionen auf eine oder mehrere bestimmte geometrische Konfigurationen beschränken kann. Das Spacermolekül kann auch bewußt gewählt werden, um eine größere Flexibilität für die relative geometrische Konfiguration zwischen Monomeren an den mit D&sub1; und D&sub2; bezeichneten Positionen zu ermöglichen. Es sollte festgestellt werden, daß Mitglieder des Satzes von Spacermolekülen durch die Kondensation von mehr als einem Monomer gebildet werden können. Beispiele für Spacermoleküle umfassen - aber sind nicht beschränkt auf - Glycin (annähernd lineare Verlängerung), beta-Alanin (erhöhte Flexibilität), Prolin (erzwungener Knick), Glycyl-Prolin (verlängerter Knick, auch als reverser Knick in der Terminologie von Proteinstrukturen bekannt) und o-Aminobenzoesäure (ein planarer Knick).
  • Durch Analyse der Ergebnisse aus diesen Sätzen von Katameren können die bevorzugten räumlichen Beziehungen zwischen Monomeren in den Mimotopen abgeleitet werden, wie in den unten angegebenen entsprechenden Beispielen gezeigt wird.
    • B. Testen der Vielzahl von Katameren
  • Die wie in A. oben hergestellte Vielzahl von Katameren wird dann mit dem bestimmten Antikörper von Interesse in Kontakt gebracht. Die Reaktion zwischen Antikörper und jedem Katamer kann dann durch eine beliebige gebräuchliche Methode, z.B. Radioimmuntest (RIA) nachgewiesen werden. Die bevorzugte Methode zum Nachweis ist die Verwendung des wohlbekannten enzymgekoppelten Immunsorbenstests (ELISA).
  • Am Ende von jedem Test können Antikörper von den Katameren durch z.B. Waschen mit einer Lösung von 8 M Harnstoff, 0,1 % 2-Mercaptoethanol und 0,1 % Natriumdodecylsulfat, gefolgt von mehreren Waschgängen in phosphatgepufferter Salzlösung entfernt werden. Auf diese Weise kann die Vielzahl von Katameren zum Test mit vielen anderen Antikörpern verwendet werden.
    • C. Analyse der Daten
  • Beim Test eines Satzes von Katameren mit Antikörper wurde festgestellt, daß bestimmte Katamere nachweisbare Bindung mit dem Antikörper zeigen. Diese reagierenden Katamere stellen nützliche Kombinationen der Mitglieder des Satzes oder der Sätze von Monomeren dar. Diese Kombinationen von Monomeren sind kurze Mimotope, die bei Verlängerung mit einer größeren Affinität oder geänderten Spezifität an den Antikörper binden können. Die Analyse der Daten wird stark erleichtert, indem man eine Anzahl von Kontrollpeptiden in die Synthese einschließt, welche die Bestimmung signifikanter Reaktionen unterstützen. Eine weitere Analyse der Ergebnisse kann auf verschiedene Arten durchgeführt werden. Diese umfassen:
  • 1. Permutation von jeder dieser reagierenden Kombinationen von Monomeren, um eine Liste von Katameren zu erzeugen, die an das Paratop bindende Mimotope enthält; jedes Katamer in dieser Liste kann als mögliches Mimotop angesehen werden;
  • 2. Auswahl von Kandidaten aus der Liste von reagierenden Kombinationen von Monomeren und weitere Synthese von Sätzen von Katameren, in denen die bekannte reagierende Kombination von Monomeren konstant gehalten wird und weitere Monomere an jedem Ende systematisch angefügt werden; somit würde in dem obigen Beispiel ein geeigneter Satz von solchen Katameren Katamere mit den Formeln
  • Y-D&sub3;-A&sub2;-A&sub1;-Lk-(fester Träger)
  • und
  • Y-A&sub2;-A&sub1;-D&sub3;-Lk-(fester Träger)
  • enthalten, wobei A&sub1; und A&sub2; die reagierende Kombination von Monomeren aus vorherigen Ergebnissen darstellen und mit D&sub3; die neue Position bezeichnet wird, an der jedes der Mitglieder des Satzes von Monomeren systematisch variiert wird, und
  • 3. Kombination der Ergebnisse von unterschiedlichen Sätzen einer Vielzahl von Katameren und Analyse der Ergebnisse, um eine einzige Sequenz von Monomeren oder eine kleine Anzahl solcher Sequenzen abzuleiten, die an den Antikörper von Interesse binden würde. Die Analyse dieser Daten ist möglich, da man die reagierenden Kombinationen von Monomeren, wenn sie einander benachbart sind, sowie die reagierenden Kombinationen von Monomeren, wenn spezielle geometrische Konfigurationen zwischen ihnen liegen, jetzt kennt. Auf diese Weise können dann diese Daten interpretiert werden, um die Struktur des Mimotops vorherzusagen, wenn es an den Antikörper gebunden ist; diese Methode ist von größtem Nutzen, wenn der zum Testen der Vielzahl von Katameren verwendete Antikörper ein monoklonaler Antikörper ist.
  • Die unter 2. oben angegebene Prozedur kann wiederholt werden, bis keine weitere Verbesserung der Bindung durch zusätzliche Verlängerung des Mimotops erreicht wird. Idealerweise sollte die Sequenz des Mimotops durch reguläre Synthese und Test von Austauschsätzen des Mimotops überprüft werden, um das optimal bindende Mimotop zur weiteren Verlängerung zu erhalten, wie in der australischen Patentschrift Nr. 25428/84 beschrieben ist.
    • D. Synthese von ausgewählten Katameren
  • Die ausgewählten Katamere können unter Verwendung ähnlicher Methoden wie in A. synthetisiert werden. Nachdem man die ausgewählten Katamere synthetisiert hat, werden sie mit dem Antikörper von Interesse umgesetzt. Es ist dann einfach, das Katamer auszuwählen, welches am stärksten mit dem Antikörper bindet.
  • Die Bindung des Mimotops mit dem Antikörper kann weiterhin durch Synthese einer weiteren Vielzahl von Katameren auf Basis der Sequenz des am stärksten bindenden Mimotops verbessert werden. Diese Vielzahl von Katameren wird durch die systematische Anfügung von Spacermolekülen (-Sp-) an allen Positionen des Mimotops und, sofern möglich, durch den systematischen Austausch jedes Monomers des Katamers mit seinem optischen Isomer gebildet. Ein Test dieses Satzes von Katameren mit dem Antikörper ergibt eine wertvolle Information über die relative Orientierung der Monomere und ihre Stereochemie, die für die Bindung mit dem Antikörper erforderlich ist.
  • In den unten angegebenen Beispielen 1, 2, 3 und 4 werden die Mimotope für das Antigen bestimmt, gegen das unterschiedliche monoklonale Antikörper hergestellt wurden. Der definierte Satz von Monomeren ist der Satz der gewöhnlichen L-alpha- Säuren, sofern nichts anderes angegeben ist. Das Linkermolekül -Lk- war 3-Amino-N¹(6-aminohexyl)-propanamid und die Endgruppe Y- war die Acetylgruppierung. Im nachfolgenden Beispiel 5 wird das Mimotop für eine antigene Determinante von humanem Choriongonadotropin bestimmt, die einen monoklonalen Antikörper induzierte. Das Linkermolekül -Lk- ist gleich wie in den vorhergehenden Beispielen. Die Endgruppe Y ist entweder β-Alanyl-β-alanin oder β-Alanin. Der definierte Satz von Monomeren wurde erweitert, um die optischen D-Isomere der gewöhnlichen alpha-Aminosäuren und verschiedene ungewöhnliche Aminosäuren einzuschließen. Im nachfolgenden Beispiel 6 wird das Mimotop für eine Rezeptorstelle auf Viren bestimmt. Das Linkermolekül -Lk- ist gleich wie in den vorhergehenden Beispielen. Die Endgruppe Y- ist entweder β-Alanyl-β-alanin oder β-Alanin. Der definierte Satz von Monomeren wurde wie für Beispiel 5 beschrieben erweitert.
    • BEISPIEL 1
  • Es wurde ein monoklonaler Antikörper gegen Pottwal-Myoglobin unter Verwendung der üblichen Techniken hergestellt. Dieser monoklonale Antikörper wurde gegen einen Satz von Katameren mit der allgemeinen Formel:
  • Y-D&sub2;-D&sub1;-Lk-(fester Träger)
  • getestet. Drei Paare reagierender Monomere in den Katameren banden mit etwa gleicher Reaktivität und waren erheblich besser als andere Paare von Monomeren. Die Sequenzen waren E- F, E-L und E-H.
  • Es wurde ein weiterer Satz von Katameren synthetisiert, der alle 4-Katamere enthielt, die aus dem Satz von Monomeren: Glutaminsäure (E), Phenylalanin (F), Histidin (H) und Leucin (L) gemacht werden konnten. Es wurde gefunden, daß die folgenden Katamere signifikant besser als die restlichen Katamere binden:
  • Diese kleine Gruppe von kurzen Mimotopen können jetzt die Kandidaten für weitere Verlängerungen werden.
    • BEISPIEL 2
  • Es wurde ein monoklonaler Antikörper gegen Pottwal-Myoglobin unter Verwendung der gebräuchlichen Techniken hergestellt. Dieser monoklonale Antikörper wurde gegen einen Satz von Katameren mit der allgemeinen Formel:
  • Y-D&sub2;-D&sub1;-Lk-(fester Träger)
  • getestet. Drei Paare von reagierenden Monomeren in den Katameren banden mit etwa gleicher Reaktivität und waren erheblich besser als andere Paare von Monomeren. Die Sequenzen waren E-F, E-L und E-H.
  • Es wurden sechs weitere Sätze von Katameren synthetisiert, wobei die Paare E-F, E-L und E-H als Ausgangspunkte verwendet wurden. Unter Verwendung des E-F-Paares hatten die Katamere beispielsweise in jedem Satz die allgemeine Formel:
  • Y-E-F-Lk-(fester Träger)
  • oder
  • Y-E-Sp-F-Lk-(fester Träger),
  • wobei Sp ein Spacermolekül aus dem Satz von β-Alanin, Glycin und L-Prolin ist. Weiterhin wurden das optische D-Isomere sowohl der Glutaminsäure als auch des Phenylalanins systematisch anstelle des optischen L-Isomeren eingesetzt.
  • Die Katamere, welche die beste Reaktion aus jedem Satz von Katameren ergaben, waren
  • D-Glutaminsäure - L-Prolin - L-Phenylalanin
  • L-Glutaminsäure - L-Leucin und
  • D-Glutaminsäure - L-Prolin - D-Histidin.
  • Diese Ergebnisse zeigen, daß die Monomere F und H besser nicht benachbart zu E angeordnet waren; weiterhin sind E und L am besten in Nachbarschaft angeordnet. Die optischen Isomere in den Katameren, welche die beste Bindung ergaben, lassen für ein stark bindendes Mimotop eine Struktur, wie im folgenden ausgeführt, vermuten. Es soll festgestellt werden, daß das Pottwal-Myoglobinmolekül eine Region aufweist, die dem vorhergesagten Mimotop ähnlich ist. Offenbar wird dieses vorhergesagte Mimotop ein Kandidat für eine weitere Verlängerung.
  • Die folgende Struktur ist eine zweidimensionale Darstellung der räumlichen Beziehung zwischen den Aminosäuren F, E, L und H, wenn sie an einen monoklonalen Antikörper gegen Pottwal- Myoglobin gebunden sind (siehe Beispiel 2). Es ist festzustellen, daß dies nur eine Veranschaulichung ist und nicht mit einer solchen Bedeutung interpretiert werden darf, daß das veranschaulichte Katamer planar ist. Weiterhin sollen die Bindungen, die F mit E und L mit H verknüpfen, eine Entfernung darstellen, die größer als die einer Peptidbindung ist.
  • Wenn man diese Struktur mit der Röntgenkristallstruktur von Myoglobin vergleicht, ist es von beträchtlichem Interesse, festzustellen, daß die Sequenz -F-L-E-L- an den Positionen 135 bis 138 erscheint und daß dort zwei Histidinreste (an den Positionen 81 und 82) in naher Nachbarschaft zur Glutaminsäure an position 136 sind. Dies gibt der postulierten Struktur des Paratops des monoklonalen Antikörpers eine beträchtliche Glaubwürdigkeit.
    • BEISPIEL 3
  • Es wurde ein Mimotop für ein monoklonales Antiserum, das gegen Maul- und Klauenseuchevirus hergestellt worden war, auf die Sequenz W-Q-M-G-H-S eingegrenzt. Es wurde eine Serie von Katameren synthetisiert, in denen ein β-Alaninrest systematisch zwischen den Monomeren eingeführt wurde. Die Sequenz W- Q-M-β-G-H-S gab eine Reaktion, die erheblich größer als die der Basissequenz war, wobei β β-Alanin darstellt. Es wurde weiterhin festgestellt, daß eine hervorragende Bindung an den Antikörper mit den Sequenzen:
  • erreicht wurde, was vermuten läßt, daß das Glycin im Ausgangsmimotop ein Spacer zwischen zwei reagierenden Elementen W-Q-M und H-S war. Somit ist es klar ersichtlich, daß das Mimotop aus zwei Teilen besteht; weiterhin ist die Verbindung dieser Teile nicht kritisch für die Fähigkeit des Mimotops, stark mit dem Antikörper zu reagieren.
  • Es wurde ein weiterer Satz von Katameren synthetisiert, in denen das optische D-Isomere systematisch das optische L- Isomermonomer im Ausgangsmimotop ersetzte. Die Ergebnisse von Tests mit dem Antikörper zeigten, daß die Monomere in jedem Element für die stärkste Bindung dasselbe optische Isomer aufweisen sollten und daß es einen Vorzug für die optischen D-Isomere als Monomere im W-Q-M-Element gab, während die Monomere im Element H-S die optischen L-Isomere sein sollten. Die Bedeutung dieser Ergebnisse kann so interpretiert werden, daß das Epitop gegen den Antikörper aus zwei benachbarten antiparallelen Ketten besteht, in denen die Kettenrichtung M- Q-W und die zweite Kette H-S ist. Diese Vorhersage führt zur Annahme, daß ein anderes Mimotop für den monoklonalen Antikörper:
  • G-H-S-β-G-W-Q-M
  • sein würde. Dieses wurde synthetisiert und es wurde festgestellt, daß es an den Antikörper mit vergleichbarer Bindung wie das stark bindende Katamer:
  • W-Q-M-β-G-H-S
  • bindet. Somit ist die Art, in der die beiden Elemente W-Q-M und H-S miteinander verbunden werden, für die Fähigkeit zur Bindung mit dem Antikörper irrelevant, so lange wie ihre relativen Positionen gleich bleiben. Das als potentielles Immunogen beste Mimotop wird eines sein, in dem diese Elemente von beiden Seiten miteinander verbunden sind, um die Beweglichkeit der Konformation zu minimieren.
    • BEISPIEL 4
  • Ein gegen Maul- und Klauenseuchevirus hergestellter monoklonaler Antikörper (S093-7) wurde mit Katameren der allgemeinen Formel:
  • Y-D&sub2;-D&sub1;-Lk-(fester Träger)
  • getestet. Es wurde festgestellt, daß das Dipeptid Q-F erheblich stärker mit dem monoklonalen Antikörper als jedes andere Dipeptid reagierte.
  • Es wurden weitere Sätze von Katameren mit den allgemeinen Formeln:
  • Y-Q-F-D&sub3;-Lk-(fester Träger)
  • und
  • Y-D&sub3;-Q-F-Lk-(fester Träger)
  • synthetisiert. Bei Reaktion dieser Sätze von Katameren mit dem Antiserum wurde festgestellt, daß die folgenden Katamere erheblich besser mit dem monoklonalen Antikörper als alle anderen reagierten:
  • Diese kleine Gruppe kurzer Mimotope kann jetzt zu den Kandidaten für weitere Verlängerungen werden.
    • BEISPIEL 5
  • Es wurde ein monoklonaler Antikörper (S218-4) gegen humanes Choriongonadotropin unter Verwendung der üblichen Techniken hergestellt. Dieser wurde mit Katameren der allgemeinen Formel:
  • Y&sub1;-D&sub2;-D&sub1;-Lk-(fester Träger)
  • getestet, wobei Y&sub1;- β-Alanyl-β-alanin ist. Es wurde festgestellt, daß das Dipeptid in den angegebenen Positionen, das die stärkste Bindung an den monoklonalen Antikörper zeigte, F-A war.
  • Es wurden weitere Sätze von Katameren der allgemeinen Formeln:
  • Y&sub2;-D&sub3;-Sp-F-A-Lk-(fester Träger)
  • und
  • Y&sub1;-F-A-Sp-D&sub3;-Lk-(fester Träger)
  • synthetisiert, wobei Sp ein Spacer, der ein Element des Satzes (Null, β-Alanin) ist, und Y&sub2;- die Endgruppe β-Alanyl ist. Der in der mit D&sub3; bezeichneten Position verwendete Satz von Monomeren wurde ausgedehnt, um sowohl die optischen L- als auch die D-Isomere der gewöhnlichen alpha-Aminosäuren und die ungebräuchlichen Aminosäuren alpha-Aminobuttersäure, gamma- Aminobuttersäure, L-Norleucin, Sarcosin, Ornithin, L-Norvalin, L-Homophenylalanin, β-Alanin zu umfassen. Bei Reaktion dieser Sätze von Katameren mit dem monoklonalen Antikörper wurde festgestellt, daß die stark reagierenden Katamere
  • Y&sub2;-PD-F-A
  • und
  • Y&sub2;-AD-F-A
  • waren, wobei PD und AD die optischen D-Isomere von Prolin bzw. Alanin darstellen.
  • Es wurden weitere Sätze von Katameren mit den allgemeinen Formeln:
  • Y&sub2;-D&sub4;-Sp-PD-F-A-Lk-(fester Träger)
  • Y&sub1;-PD-F-A-Sp-D&sub4;-Lk-(fester Träger)
  • Y&sub2;-D&sub4;-Sp-AD-F-A-Lk-(fester Träger)
  • und
  • Y&sub1;-AD-F-A-Sp-D&sub4;-Lk-(fester Träger)
  • synthetisiert, wobei der ausgeweitete Satz von Monomeren in der mit D&sub4; bezeichneten Position verwendet wurde. Bei Reaktion dieser Sätze von Katameren mit dem monoklonalen Antikörper wurde festgestellt, daß das am stärksten reagierende Katamer:
  • Y&sub1;-PD-F-A-DD
  • war, wobei DD das optische D-Isomere von Asparaginsäure darstellt.
  • Es wurden weitere Sätze von Katameren der allgemeinen Formeln:
  • Y&sub2;-D&sub5;-Sp-PD-F-A-DD-Lk-(fester Träger)
  • und
  • Y&sub1;-PD-F-A-DD-Sp-D&sub5;-Lk-(fester Träger)
  • synthetisiert, wobei der erweiterte Satz von Monomeren an der mit D&sub5; bezeichneten Position verwendet wurde. Bei Reaktion dieser Sätze von Katameren mit dem monoklonalen Antikörper wurde festgestellt, daß das am stärksten mit dem Antikörper reagierende Katamer:
  • Y&sub2;-RD-β-PD-F-A-DD
  • war, wobei β β-Alanin darstellt und bei der Synthese des Katamers als Spacer eingeschlossen wurde.
  • Eine Vorbehandlung des monoklonalen Antikörpers mit humanem Choriongonadotropin beseitigte vollständig die Fähigkeit des Antikörpers, mit dem Katamer β-RD-β-PD-F-A-DD zu reagieren, wodurch die Spezifität des Mimotops veranschaulicht wird.
    • BEISPIEL 6
  • Dieses Beispiel veranschaulicht die Anwendung der Erfindung zum Nachweis eines Mimotops für einen Rezeptor, bei dem es sich nicht um ein Antigen handelt, gegen das ein Antikörper hergestellt worden ist. Dieses Beispiel weist Mimotope eines Rezeptors nach, an den ein Virion bindet. In diesem Falle muß das Testsystem zum Nachweis der Bindung an Katamere modifiziert werden. Bei diesem Beispiel läßt man die synthetisierten Katamere mit Influenzaviruspartikeln (Stamm A- Shearwater/1/72) reagieren. Nach Reaktion werden die Katamere zur Entfernung nicht gebundener Viruspartikel gewaschen. Das Vorhandensein gebundener Viruspartikel wurde durch Reaktion mit einem polyklonalen Antikörper (S227-1) nachgewiesen, der gegen Hämaglutinin von Influenzavirus A/Shearwater/1/72 hergestellt worden war. Antikörper, die mit dem gebundenen Virus reagiert hatten, wurden auf übliche Weise durch ELISA nachgewiesen.
  • Es wurde ein Satz von Katameren mit der allgemeinen Formel:
  • Y&sub1;-D&sub2;-D&sub1;-Lk-(fester Träger)
  • synthetisiert, wobei die Endgruppe Y&sub1;- β-Alanyl-β-alanin ist. Der in den mit D&sub1; und D&sub2; bezeichneten Positionen verwendete Satz von Monomeren bestand aus den optischen D- und L-Isomeren der gewöhnlichen alpha-Aminosäuren. Bei Reaktion der Katamere mit einer Suspension von Influenzavirionen des Stammes A/Shearwater/1/72 banden Partikel an die Peptide an den bezeichneten Positionen:
  • wobei die Anfügung "D" das optische D-Isomere der angegebenen Aminosäure bedeutet. Nach Entfernung des gebundenen Virus von den Katameren ließ man die Katamere mit dem polyklonalen Antikörper S227-1 mit derselben Konzentration, wie zum Nachweis von gebundenem Virus verwendet wurde, reagieren, um sicherzustellen, daß die gefundenen Peaks auf eine Bindung des Virus statt auf eine Bindung des polyklonalen Antikörpers zurückzuführen waren.
  • Es wurden weitere Sätze von Katameren mit den allgemeinen Formeln:
  • Y&sub2;-D&sub3;-Sp-AD-K-Lk-(fester Träger)
  • Y&sub1;-AD-K-SP-D&sub3;-Lk-(fester Träger)
  • synthetisiert, wobei Y&sub1;- die β-Alanin-Endgruppe darstellt und Sp ein Element des Satzes von Spacern (Null, β-Alanin) ist. Der an der mit D&sub3; bezeichneten Position verwendete Satz von Monomeren war der in Beispiel 5 beschriebene ausgeweitete Satz. Bei Reaktion dieser Sätze von Katameren mit Influenzaviren des Stammes A/Shearwater/1/72 banden Virionen am stärksten an das Katamer:
  • Y&sub1;-AD-K-KD
  • Dieses Beispiel zeigt, daß die Erfindung auf die Bestimmung von Mimotopen von Rezeptormolekülen und Liganden im allgemeinen angewendet werden kann. Der Einsatz der Methode ist nur durch die Fähigkeit zum Nachweis der Bindung an den Satz von Katameren beschränkt.

Claims (9)

1. Verfahren zum Nachweis oder zur Bestimmung der Sequenz von Monomeren, die ein topographisches Äquivalent des Liganden ist, welcher komplementär zu einem bestimmten Rezeptor von Interesse ist, wobei die Sequenz mindestens teilweise unbekannt ist, wobei das Verfahren die Schritte umfaßt:
1. Synthese einer Vielzahl von Katameren, wobei jedes Katamer die allgemeine Formel:
D&sub2;-D&sub1;
aufweist, worin D&sub1; ein bestimmtes Monomer, ausgewählt aus einem ersten Satz von i Monomeren, darstellt und D&sub2; ein bestimmtes Monomer, ausgewählt aus einem zweiten Satz von j Monomeren, der gleich wie der erste Satz von Monomeren oder unterschiedlich davon sein kann, darstellt, wobei die Vielzahl von Katameren den Satz von (i j) Katameren umfaßt;
2. Kontaktieren jedes Katamers mit dem Rezeptor von Interesse und
3. Nachweis oder Bestimmung des Vorhandenseins oder des Fehlens einer Bindung zwischen jedem Katamer und dem Rezeptor.
2. Verfahren nach Anspruch 1, umfassend die weiteren Schritte:
a. Synthese einer weiteren Vielzahl von Katameren, wobei jedes Katamer die allgemeine Formel aufweist:
D&sub3;-D&sub2;-D&sub1; oder
D&sub2;-D&sub1;-D&sub3;
worin D&sub1; und D&sub2; wie oben in Anspruch 1 definiert sind und D&sub3; ein bestimmtes Monomer, ausgewählt aus einem dritten Satz von Monomeren, der gleich wie der erste oder zweite Satz von Monomeren oder unterschiedlich davon sein kann, darstellt und
b. Durchführen der Schritte 2 und 3, wie in Anspruch 1 definiert, mit der weiteren Vielzahl von Katameren.
3. Verfahren nach Anspruch 2, worin die Schritte a. und b. mit dem systematischen Anfügen weiterer Monomere an die Katamere wiederholt werden.
4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, umfassend die weiteren Schritte:
A. Synthese einer Vielzahl zusätzlicher Katamere, wobei jedes zusätzliche Katamer die allgemeine Formel aufweist:
D&sub2;-Sp-D&sub1;
worin D&sub1; und D&sub2; wie in Anspruch 1 definiert sind und Sp ein Spacermolekül ist, welches die relative Orientierung der Monomere D&sub1; und D&sub2; modifizieren kann und
B. Durchführen der Schritte 2 und 3, wie in Anspruch 1 definiert, mit der Vielzahl von zusätzlichen Katameren.
5. Verfahren nach einem der Ansprüche 2 bis 4, worin die Schritte a. und b. mit der systematischen Einführung eines Spacermoleküls Sp, wie in Anspruch 4 definiert, in alle möglichen Positionen der weiteren Vielzahl von Katameren, wie in Anspruch 2 oder Anspruch 3 definiert, wiederholt werden.
6. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 5, umfassend den weiteren Schritt des systematischen Ersetzens der Monomere in jedem der oben erwähnten Katamere durch ihre optischen Isomere, entweder einzeln oder in Kombinationen von Monomeren, und des erneuten Durchführens der Schritte 2 und 3, wie in Anspruch 1 definiert.
7. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 6, umfassend den weiteren Schritt des systematischen Ersetzens der Monomere in jedem der mit dem Rezeptor von Interesse bindenden Katamere durch andere Monomere, ausgewählt aus einem oder mehreren jeweiligen Sätzen von Monomeren, entweder einzeln oder in Kombinationen von Monomeren, und des erneuten Durchführens der Schritte 2 und 3, wie in Anspruch 1 definiert.
8. Verfahren nach Anspruch 1, worin jedes aus der Vielzahl von Katameren auf einem festen Träger synthetisiert wird und die allgemeine Formel aufweist:
Y-D&sub2;-D&sub1;-Lk-(fester Träger)
worin D&sub1; und D&sub2; wie in Anspruch 1 definiert sind, Lk ein Linkermolekül darstellt und Y eine Endgruppe des Katamers ist.
9. Verfahren nach Anspruch 4, worin jedes aus der Vielzahl der zusätzlichen Katamere auf einem festen Träger synthetisiert wird und die allgemeine Formel aufweist:
Y-D&sub2;-Sp-D&sub1;-Lk-(fester Träger)
worin D&sub1; und D&sub2; wie in Anspruch 1 definiert sind, Sp wie in Anspruch 4 definiert ist und Lk und Y wie in Anspruch 8 definiert sind.
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Families Citing this family (220)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5866363A (en) 1985-08-28 1999-02-02 Pieczenik; George Method and means for sorting and identifying biological information
JP2525798B2 (ja) * 1987-03-12 1996-08-21 第一製薬株式会社 ペプチド誘導体
US5300425A (en) * 1987-10-13 1994-04-05 Terrapin Technologies, Inc. Method to produce immunodiagnostic reagents
US5217869A (en) * 1987-10-13 1993-06-08 Terrapin Technologies, Inc. Method to produce immunodiagnostic reagents
US5200320A (en) * 1987-12-07 1993-04-06 National Jewish Center For Immunology And Respiratory Medicine Method for identifying useful polypeptide vaccines
US5266684A (en) * 1988-05-02 1993-11-30 The Reagents Of The University Of California Peptide mixtures
US6309822B1 (en) 1989-06-07 2001-10-30 Affymetrix, Inc. Method for comparing copy number of nucleic acid sequences
US6955915B2 (en) * 1989-06-07 2005-10-18 Affymetrix, Inc. Apparatus comprising polymers
US6416952B1 (en) 1989-06-07 2002-07-09 Affymetrix, Inc. Photolithographic and other means for manufacturing arrays
US5547839A (en) * 1989-06-07 1996-08-20 Affymax Technologies N.V. Sequencing of surface immobilized polymers utilizing microflourescence detection
US6551784B2 (en) 1989-06-07 2003-04-22 Affymetrix Inc Method of comparing nucleic acid sequences
US6040138A (en) 1995-09-15 2000-03-21 Affymetrix, Inc. Expression monitoring by hybridization to high density oligonucleotide arrays
US6406844B1 (en) 1989-06-07 2002-06-18 Affymetrix, Inc. Very large scale immobilized polymer synthesis
US5424186A (en) * 1989-06-07 1995-06-13 Affymax Technologies N.V. Very large scale immobilized polymer synthesis
US5925525A (en) * 1989-06-07 1999-07-20 Affymetrix, Inc. Method of identifying nucleotide differences
US5143854A (en) 1989-06-07 1992-09-01 Affymax Technologies N.V. Large scale photolithographic solid phase synthesis of polypeptides and receptor binding screening thereof
US6919211B1 (en) * 1989-06-07 2005-07-19 Affymetrix, Inc. Polypeptide arrays
US6346413B1 (en) 1989-06-07 2002-02-12 Affymetrix, Inc. Polymer arrays
US5744101A (en) * 1989-06-07 1998-04-28 Affymax Technologies N.V. Photolabile nucleoside protecting groups
US5800992A (en) 1989-06-07 1998-09-01 Fodor; Stephen P.A. Method of detecting nucleic acids
US5959087A (en) * 1989-08-07 1999-09-28 Peptide Technology, Ltd. Tumour necrosis factor binding ligands
US20030225254A1 (en) 1989-08-07 2003-12-04 Rathjen Deborah Ann Tumour necrosis factor binding ligands
EP0486526B2 (de) 1989-08-07 2001-03-07 Peptech Limited Bindeligande für tumornekrosisfaktor
US6506558B1 (en) 1990-03-07 2003-01-14 Affymetrix Inc. Very large scale immobilized polymer synthesis
US5503978A (en) * 1990-06-11 1996-04-02 University Research Corporation Method for identification of high affinity DNA ligands of HIV-1 reverse transcriptase
US6177557B1 (en) 1990-06-11 2001-01-23 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. High affinity ligands of basic fibroblast growth factor and thrombin
US5543293A (en) * 1990-06-11 1996-08-06 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. DNA ligands of thrombin
US5707796A (en) * 1990-06-11 1998-01-13 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. Method for selecting nucleic acids on the basis of structure
US6759392B1 (en) * 1990-06-11 2004-07-06 Gilead Sciences, Inc. High affinity RNA ligands of basic fibroblast growth factor
US5723286A (en) 1990-06-20 1998-03-03 Affymax Technologies N.V. Peptide library and screening systems
US5650489A (en) * 1990-07-02 1997-07-22 The Arizona Board Of Regents Random bio-oligomer library, a method of synthesis thereof, and a method of use thereof
US5476839A (en) * 1990-07-10 1995-12-19 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Basophil granule proteins
US6197529B1 (en) 1990-11-21 2001-03-06 Torrey Pines Institute For Molecular Studies Linear substituted oligoalkyleneimine libraries
DE69126301T2 (de) * 1990-11-27 1998-01-02 Biogen, Inc., Cambridge, Mass. Hiv-induzierte synzytien blockierender anti-cd-4-antikörper
EP1231282A3 (de) 1990-12-06 2005-05-18 Affymetrix, Inc. Verfahren und Zussamensetzungen für den Nachweis von Polymeren
IL102168A (en) * 1991-06-18 1998-12-06 Lilly Co Eli Rapid synthesis and filtration of peptide mimetics
AU2547592A (en) * 1991-08-23 1993-03-16 Isis Pharmaceuticals, Inc. Synthetic unrandomization of oligomer fragments
US5747253A (en) * 1991-08-23 1998-05-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Combinatorial oligomer immunoabsorbant screening assay for transcription factors and other biomolecule binding
US5698391A (en) * 1991-08-23 1997-12-16 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for synthetic unrandomization of oligomer fragments
WO1993006121A1 (en) 1991-09-18 1993-04-01 Affymax Technologies N.V. Method of synthesizing diverse collections of oligomers
US5639603A (en) * 1991-09-18 1997-06-17 Affymax Technologies N.V. Synthesizing and screening molecular diversity
US6764681B2 (en) * 1991-10-07 2004-07-20 Biogen, Inc. Method of prophylaxis or treatment of antigen presenting cell driven skin conditions using inhibitors of the CD2/LFA-3 interaction
US5270170A (en) * 1991-10-16 1993-12-14 Affymax Technologies N.V. Peptide library and screening method
US5733731A (en) * 1991-10-16 1998-03-31 Affymax Technologies N.V. Peptide library and screening method
US6864101B1 (en) 1991-11-22 2005-03-08 Affymetrix, Inc. Combinatorial strategies for polymer synthesis
US6943034B1 (en) 1991-11-22 2005-09-13 Affymetrix, Inc. Combinatorial strategies for polymer synthesis
EP0624059A4 (en) * 1991-11-22 1994-12-21 Affymax Technologies N.V. Combinatorial strategies for polymer synthesis.
US6468740B1 (en) 1992-11-05 2002-10-22 Affymetrix, Inc. Cyclic and substituted immobilized molecular synthesis
US5871734A (en) * 1992-01-13 1999-02-16 Biogen, Inc. Treatment for asthma with VLA-4 blocking agents
US5932214A (en) * 1994-08-11 1999-08-03 Biogen, Inc. Treatment for inflammatory bowel disease with VLA-4 blockers
JPH07509400A (ja) * 1992-07-27 1995-10-19 テラピン　テクノロジーズ，インク． 吸着剤群
US5565324A (en) * 1992-10-01 1996-10-15 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Complex combinatorial chemical libraries encoded with tags
US6503759B1 (en) 1992-10-01 2003-01-07 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Complex combinatorial chemical libraries encoded with tags
US5721099A (en) * 1992-10-01 1998-02-24 Trustees Of Columbia University In The City Of New York Complex combinatorial chemical libraries encoded with tags
NZ262615A (en) * 1993-02-09 1996-02-27 Biogen Inc Treating insulin dependent diabetes (type i) with anti vla4 (very late antigen) antibodies
US5367053A (en) * 1993-05-19 1994-11-22 Houghten Pharmaceuticals, Inc. Opioid peptide inhibitors
US6632613B1 (en) 1993-06-02 2003-10-14 University Of Utah Research Foundation Compositions and kits for fluorescence polarization assay of large molecules
US5480971A (en) * 1993-06-17 1996-01-02 Houghten Pharmaceuticals, Inc. Peralkylated oligopeptide mixtures
US5846731A (en) * 1993-06-17 1998-12-08 Torry Pines Institute For Molecular Studies Peralkylated oligopeptide mixtures
US5380668A (en) * 1993-07-06 1995-01-10 University Of Utah Research Foundation Compounds having the antigenicity of hCG
US6576419B1 (en) 1993-07-23 2003-06-10 University Of Utah Research Foundation Assay procedure using fluorogenic tracers
CN1154640C (zh) * 1993-10-01 2004-06-23 纽约市哥伦比亚大学理事 用标示物编码的多元组合化学库
WO1995010296A1 (en) * 1993-10-12 1995-04-20 Glycomed Incorporated A library of glyco-peptides useful for identification of cell adhesion inhibitors
US6165778A (en) * 1993-11-02 2000-12-26 Affymax Technologies N.V. Reaction vessel agitation apparatus
US5503805A (en) * 1993-11-02 1996-04-02 Affymax Technologies N.V. Apparatus and method for parallel coupling reactions
US6287787B1 (en) 1993-11-24 2001-09-11 Torrey Pines Institute For Molecular Studies Dimeric oligopeptide mixture sets
CA2180844A1 (en) * 1994-01-13 1995-07-20 W. Clark Still Synthetic receptors, libraries and uses thereof
US5593853A (en) * 1994-02-09 1997-01-14 Martek Corporation Generation and screening of synthetic drug libraries
US6936477B2 (en) * 1994-04-13 2005-08-30 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Complex combinatorial chemical libraries encoded with tags
US5846841A (en) * 1994-05-20 1998-12-08 Selectide Corporation Motif Libraries
US7378236B1 (en) 1994-06-17 2008-05-27 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Method for analyzing gene expression patterns
US7323298B1 (en) 1994-06-17 2008-01-29 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Microarray for determining the relative abundances of polynuceotide sequences
US5582997A (en) * 1994-08-24 1996-12-10 Torrey Pines Institute For Molecular Studies Lysine/leucine polypeptides, mixture sets and libraries thereof
US5645996A (en) * 1994-08-24 1997-07-08 Torrey Pines Institute For Molecular Studies Melittin-related polypeptides, mixture sets and libraries thereof
US6020312A (en) * 1994-09-13 2000-02-01 Nce Pharmaceuticals, Inc. Synthetic antibiotics
US5885782A (en) * 1994-09-13 1999-03-23 Nce Pharmaceuticals, Inc. Synthetic antibiotics
US5602097A (en) * 1994-09-13 1997-02-11 Ceres Technologies, Inc. Synthetic antibiotics
US8236493B2 (en) * 1994-10-21 2012-08-07 Affymetrix, Inc. Methods of enzymatic discrimination enhancement and surface-bound double-stranded DNA
US5747458A (en) * 1995-06-07 1998-05-05 Chiron Corporation Urokinase receptor ligands
US5958792A (en) * 1995-06-07 1999-09-28 Chiron Corporation Combinatorial libraries of substrate-bound cyclic organic compounds
EP0880598A4 (de) 1996-01-23 2005-02-23 Affymetrix Inc Verfahren zur analyse von nukleinsäure
WO1998014569A1 (en) 1996-10-02 1998-04-09 Bloch Donald B Leukocyte-specific protein and gene, and methods of use thereof
US6096496A (en) * 1997-06-19 2000-08-01 Frankel; Robert D. Supports incorporating vertical cavity emitting lasers and tracking apparatus for use in combinatorial synthesis
US6312689B1 (en) 1998-07-23 2001-11-06 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Anti-CCR2 antibodies and methods of use therefor
WO2000012113A2 (en) * 1998-08-31 2000-03-09 Biogen, Inc. Method of modulating memory effector t-cells using a cd2-binding agent, and compositions
PL203114B1 (pl) 1998-09-14 2009-08-31 Regents Board Of Zastosowania przeciwciała przeciw VLA-4 lub jego fragmentu wiążącego antygen, przeciwciała przeciw integrynie alfa-4/beta7 lub jego fragmentu wiążącego antygen lub przeciwciała przeciw VCAM-1 lub jego fragmentu wiążącego antygen, zastosowania rozpuszczalnych polipeptydów VLA-4 lub VCAM-1, które antagonizują interakcję VLA-4/VCAM-1
US6545264B1 (en) 1998-10-30 2003-04-08 Affymetrix, Inc. Systems and methods for high performance scanning
US20030166003A1 (en) * 1999-06-14 2003-09-04 Cochran Andrea G. Structured peptide scaffold for displaying turn libraries on phage
ES2242620T3 (es) 1999-06-14 2005-11-16 Genentech, Inc. Estructuras peptidicas para exhibir bibliotecas de giros de un fago.
ES2415708T3 (es) 1999-12-16 2013-07-26 Biogen Idec Ma Inc. Métodos de tratamiento de la lesión isquémica o hemorrágica del sistema nervioso central mediante el uso de antagonistas anti-integrina alfa4
EP1930023A3 (de) 2001-04-09 2008-08-06 East Carolina University Erythropoietin reduziert die Chemotherapie-induzierte in vivo Toxizität
US20020169128A1 (en) * 2001-04-09 2002-11-14 Geroge Sigounas Erythropoietin ameliorates chemotherapy-induced toxicity in vivo
US6914123B2 (en) * 2001-04-17 2005-07-05 Genentech, Inc. Hairpin peptides with a novel structural motif and methods relating thereto
US20070160576A1 (en) 2001-06-05 2007-07-12 Genentech, Inc. IL-17A/F heterologous polypeptides and therapeutic uses thereof
US20050107595A1 (en) * 2001-06-20 2005-05-19 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
US7803915B2 (en) * 2001-06-20 2010-09-28 Genentech, Inc. Antibody compositions for the diagnosis and treatment of tumor
KR100607612B1 (ko) 2001-06-20 2006-08-02 제넨테크, 인크. 종양의 진단 및 치료를 위한 방법 및 이를 위한 조성물
US20030013208A1 (en) * 2001-07-13 2003-01-16 Milagen, Inc. Information enhanced antibody arrays
CA2454618C (en) * 2001-07-24 2012-04-03 Biogen Idec Ma, Inc. Methods for treating or preventing sclerotic disorders using cd2-binding agents
EP2153843B1 (de) 2001-09-18 2012-08-15 Genentech, Inc. Zusammensetzungen und Verfahren zur Behandlung und Diagnose von Tumoren
EP1326076A3 (de) * 2001-10-26 2004-01-28 Millenium Pharmaceuticals, Inc. Verfahren zur Identifizierung von Liganden oder Modulatoren von 2871 G-Protein gekoppelten Rezeptoren
US20030228305A1 (en) 2002-01-02 2003-12-11 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
EP1482963A4 (de) 2002-03-08 2010-06-09 Univ Texas Kontrollierte modulation der aminosäure-seitenkettenlänge von peptidantigenen
EP1571968A4 (de) 2002-04-16 2007-10-17 Genentech Inc Zusammensetzungen und verfahren zur diagnose und behandlung von tumoren
EP2305710A3 (de) 2002-06-03 2013-05-29 Genentech, Inc. Synthetische Antikörperphagenbibliotheken
SI1540335T1 (sl) 2002-08-19 2010-10-29 Helicon Therapeutics Inc Izloäśilni postopki za kognitivne pospeĺ evalce
KR20050057047A (ko) * 2002-08-29 2005-06-16 제넨테크, 인크. 아캐트-스큐트 유사-2 폴리펩티드 및 코딩 핵산 및 종양의진단 및 치료 방법
US6910785B2 (en) * 2003-01-22 2005-06-28 Cooper Technologies Company Industrial luminaire with prismatic refractor
US20040185499A1 (en) * 2003-03-20 2004-09-23 Jolley Michael E. Method of epitope scanning using fluorescence polarization
US8613922B2 (en) 2003-04-24 2013-12-24 The University Of North Carolina At Chapel Hill Methods for inhibiting diabetic retinopathy with an antibody against integrin associated protein (IAP)
DE10329087B4 (de) * 2003-06-27 2014-02-13 Biomedical International R + D Gmbh Antigenhaltige Mikrosphären zur Allergietherapie
PL2784084T3 (pl) 2003-07-08 2020-03-31 Genentech, Inc. Przeciwciała antagonistyczne wobec heterologicznych polipeptydów IL-17A/F
US20050095648A1 (en) * 2003-10-30 2005-05-05 Mario Geysen Method for designing linear epitopes and algorithm therefor and polypeptide epitopes
US20050158741A1 (en) 2003-11-14 2005-07-21 Children's Hospital Self-cleaving ribozymes and uses thereof
SI2161283T1 (sl) 2003-11-17 2014-10-30 Genentech, Inc. Sestavki, ki obsegajo protitelesa proti CD79b, konjugirana na sredstvo, ki inhibira rast, ali na citotoksično sredstvo, in postopki za zdravljenje tumorja hematopoetskega izvora
EP1631311A4 (de) 2003-12-10 2007-04-11 Millennium Pharm Inc Humanisierte anti-ccr2-antikörper und anwendungsverfahren
CA2555144A1 (en) * 2004-02-06 2005-08-25 Astellas Us Llc Methods of treating skin disorders
EP1722771B1 (de) 2004-03-02 2014-04-23 McGill University Zusammensetzungen und verfahren zur prävention oder behandlung einer entzündlichen reaktion
CN1997756A (zh) * 2004-05-04 2007-07-11 杰耐萨斯药品公司 单倍型标记和利用其确定对于治疗的反应的方法
US7662921B2 (en) * 2004-05-07 2010-02-16 Astellas Us Llc Methods of treating viral disorders
CA2478458A1 (en) * 2004-08-20 2006-02-20 Michael Panzara Treatment of pediatric multiple sclerosis
EP1827491A4 (de) * 2004-11-19 2010-07-14 Biogen Idec Inc Behandlung von multipler sklerose
EP2050763A3 (de) 2005-03-10 2009-07-15 Genentech, Inc. Verfahren und Zusammensetzungen zur Modulation der Gefäßintegrität
AU2006242154B2 (en) 2005-05-02 2011-11-03 Cold Spring Harbor Laboratory Composition and methods for cancer diagnosis utilizing the mir 17-92 cluster
AU2006255686A1 (en) 2005-06-06 2006-12-14 Genentech, Inc. Transgenic models for different genes and their use for gene characterization
EP2364998A1 (de) 2005-06-16 2011-09-14 The Feinstein Institute for Medical Research Antikörper gegen HMGB1 und Fragmente davon
CA2619577A1 (en) 2005-08-15 2007-02-22 Genentech, Inc. Gene disruptions, compositions and methods relating thereto
US8945573B2 (en) 2005-09-08 2015-02-03 The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine, Inc. Targeted identification of immunogenic peptides
US20090293137A1 (en) 2005-11-21 2009-11-26 Genentech, Inc. Novel Gene Disruptions, Compositions and Methods Relating Thereto
CN105859886A (zh) 2005-12-02 2016-08-17 健泰科生物技术公司 牵涉与il-22和il-22r结合的抗体的组合物和方法
US20080311107A1 (en) 2006-02-17 2008-12-18 Genetech, Inc. Novel Gene Disruptions, Compositions and Methods Relating Thereto
EP2614839A3 (de) 2006-04-05 2015-01-28 Genentech, Inc. Verfahren zur Verwendung von BOC/CDO zur Modulation der Hedgehog-Signalisierung
EP2082645A1 (de) 2006-04-19 2009-07-29 Genentech, Inc. Neuartige Genunterbrechungen, dazugehörige Zusammensetzungen und Verfahren in Zusammenhang damit
WO2007134132A2 (en) * 2006-05-12 2007-11-22 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of bladder and urinary tract tumors
US20080015145A1 (en) * 2006-07-11 2008-01-17 Maria Gyongyossy-Issa Mimotope receptors and inhibitors for platelet-platelet and platelet-endothelium interactions
CA2660286A1 (en) 2006-08-09 2008-02-21 Homestead Clinical Corporation Organ-specific proteins and methods of their use
CA2662236A1 (en) 2006-09-12 2008-03-20 Genentech, Inc. Methods and compositions for the diagnosis and treatment of cancer
WO2008103962A2 (en) 2007-02-22 2008-08-28 Genentech, Inc. Methods for detecting inflammatory bowel disease
WO2009043104A1 (en) * 2007-10-04 2009-04-09 Bionomics Limited Markers of endothelial cells and uses thereof
CA2705007A1 (en) 2007-11-07 2009-05-14 Genentech, Inc. Compositions and methods for treatment of microbial disorders
US9182406B2 (en) * 2008-08-04 2015-11-10 Biodesy, Inc. Nonlinear optical detection of molecules comprising an unnatural amino acid possessing a hyperpolarizability
EP4169951A1 (de) 2008-12-09 2023-04-26 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-pd-l1-antikörper und deren verwendung zur verbesserung der t-zell-funktion
MX2011010971A (es) * 2009-04-17 2012-01-19 Biogen Idec Inc Composiciones y metodos para tratar leucemia mielogena aguda.
US9885711B2 (en) 2009-09-25 2018-02-06 Xoma Technology Ltd. Screening methods
US8926976B2 (en) 2009-09-25 2015-01-06 Xoma Technology Ltd. Modulators
SG10201406116RA (en) * 2009-09-29 2014-11-27 Dart Neuroscience Cayman Ltd Genes, methods, and compositions related to neurogenesis and its modulation
WO2011041790A1 (en) 2009-10-02 2011-04-07 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Piscine reovirus diagnostic compositions
CN102711826B (zh) 2009-10-22 2017-03-29 霍夫曼-拉罗奇有限公司 用于调控巨噬细胞刺激性蛋白的hepsin活化的方法和组合物
CN102892748A (zh) * 2009-11-12 2013-01-23 德克萨斯理工大学 用于治疗过度增生性疾病的组合物和方法
PE20121584A1 (es) 2009-11-30 2012-11-29 Genentech Inc Composiciones y metodos para el diagnostico y el tratamiento de tumores
RU2587619C2 (ru) 2010-02-18 2016-06-20 Дженентек, Инк. Антагонисты неурегулина и применение их в лечении злокачественного новообразования
AR080243A1 (es) 2010-02-23 2012-03-21 Genentech Inc Composiciones y metodos para el diagnostico y tratamiento de tumores
SI3202789T1 (sl) 2010-04-16 2020-11-30 Biogen Ma Inc. Protitelesa anti-vla 4
MA34291B1 (fr) 2010-05-03 2013-06-01 Genentech Inc Compositions et méthodes de diagnostic et de traitement d'une tumeur
WO2012071436A1 (en) 2010-11-24 2012-05-31 Genentech, Inc. Method of treating autoimmune inflammatory disorders using il-23r loss-of-function mutants
US9428789B2 (en) 2011-03-21 2016-08-30 Biodesy, Inc. Classification of kinase inhibitors using nonlinear optical techniques
US10352936B2 (en) 2011-04-14 2019-07-16 Apoplogic Pharmaceuticals, Inc. Use of tumor Fas expression to determine response to anti-cancer therapy
US9139824B2 (en) 2011-04-21 2015-09-22 The University Court Of The University Of Aberdeen Sapolegina protein in for use as a medicament
EP2715352B1 (de) 2011-05-31 2019-04-24 Biogen MA Inc. Verfahren zur beurteilung eines pml-risikos
KR20190133790A (ko) 2011-08-01 2019-12-03 제넨테크, 인크. Pd-1 축 결합 길항제 및 mek 억제제를 사용하는 암 치료 방법
MX2014003094A (es) 2011-09-15 2014-04-25 Genentech Inc Metodos para promover diferenciacion.
EP2766000A2 (de) 2011-10-15 2014-08-20 F.Hoffmann-La Roche Ag Scd1-antagonisten zur behandlung von krebs
EP2804630B1 (de) 2012-01-18 2017-10-18 F. Hoffmann-La Roche AG Verfahren zur verwendung von fgf19-modulatoren
KR102148303B1 (ko) 2012-02-11 2020-08-26 제넨테크, 인크. R-스폰딘 전위 및 그의 사용 방법
KR20140135198A (ko) 2012-03-16 2014-11-25 에프. 호프만-라 로슈 아게 Pak1 억제제로 흑색종을 치료하는 방법
US9139863B2 (en) 2012-03-16 2015-09-22 Genentech, Inc. Engineered conformationally-stabilized proteins
MX2014010943A (es) 2012-03-16 2014-11-26 Genentech Inc Proteinas estabilizadas conformacionalmente de ingenieria.
JP6302460B2 (ja) 2012-04-25 2018-03-28 バイオデシー， インコーポレイテッド タンパク質のアロステリックモジュレーターを検出するための方法
WO2013170191A1 (en) 2012-05-11 2013-11-14 Genentech, Inc. Methods of using antagonists of nad biosynthesis from nicotinamide
CA2874144C (en) 2012-05-31 2023-12-19 Genentech, Inc. Methods of treating cancer using pd-l1 axis binding antagonists and vegf antagonists
BR112015017903A2 (pt) 2013-01-28 2017-11-21 Univ Danmarks Tekniske vacina de subunidade de mycobacterium avium subsp. paratuberculosis única ou de múltiplos estágios
KR20150118159A (ko) 2013-02-22 2015-10-21 에프. 호프만-라 로슈 아게 암의 치료 방법 및 약물 내성의 예방 방법
RU2015137610A (ru) 2013-03-06 2017-04-10 Дженентек, Инк. Способы лечения и профилактики лекарственной резистентности злокачественных опухолей
CA2905070A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Genentech, Inc. Methods of treating cancer and preventing cancer drug resistance
CN110079599B (zh) 2013-03-15 2024-06-04 豪夫迈·罗氏有限公司 治疗pd-1和pd-l1相关疾患的生物标志物和方法
US20160143910A1 (en) 2013-03-15 2016-05-26 Constellation Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating cancer and preventing cancer drug resistance
SG11201507429TA (en) 2013-03-15 2015-10-29 Genentech Inc Il-22 polypeptides and il-22 fc fusion proteins and methods of use
TWI685349B (zh) 2013-07-16 2020-02-21 建南德克公司 利用ｐｄ-１軸結合拮抗劑及ｔｉｇｉｔ抑制劑治療癌症之方法
BR112016013741A2 (pt) 2013-12-17 2017-10-03 Genentech Inc Usos de antagonistas de ligação de eixo de pd-1 e um anticorpo de anti-cd20, e kit compreendendo os mesmos
WO2015116902A1 (en) 2014-01-31 2015-08-06 Genentech, Inc. G-protein coupled receptors in hedgehog signaling
ES2818823T3 (es) 2014-02-27 2021-04-14 Biogen Ma Inc Método de evaluación del riesgo de LMP
EP3636073B1 (de) 2014-05-05 2023-11-15 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Humanisierte c5- und c3-tiere
EP3146071B1 (de) 2014-05-23 2020-09-02 F. Hoffmann-La Roche AG Mit-biomarker und verfahren mit verwendung davon
WO2015191986A1 (en) 2014-06-13 2015-12-17 Genentech, Inc. Methods of treating and preventing cancer drug resistance
AR101210A1 (es) 2014-07-15 2016-11-30 Genentech Inc Métodos de tratamiento de cáncer usando antagonistas de unión al eje pd-1 e inhibidores de mek
WO2016037157A2 (en) 2014-09-05 2016-03-10 The Johns Hopkins University Targeting capn9/capns2 activity as a therapeutic strategy for the treatment of myofibroblast differentiation and associated pathologies
PL3789402T3 (pl) 2014-11-20 2022-10-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Terapia skojarzona składająca się z dwuswoistych cząsteczek wiążących antygen aktywujących limfocyty T oraz antagonistów wiązania osi PD-1
JP2017537929A (ja) 2014-12-05 2017-12-21 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｐｄ−１軸アンタゴニスト及びｈｐｋ１アンタゴニストを用いたがん治療のための方法及び組成物
EP3237906B8 (de) 2014-12-23 2020-10-28 Bluelight Therapeutics, Inc. Befestigung von proteinen an schnittstellen zur verwendung in nicht-linearer optischer detektion
CA2981068C (en) 2015-03-26 2021-12-14 Women & Infants Hospital Of Rhode Island Therapy for malignant disease comprising the inhibition of human epididymal secretory protein e4 and immune checkpoint inhibitors
CA3176224A1 (en) 2015-05-22 2016-12-01 Translational Drug Development Llc Benzamide and active compound compositions and methods of use
US20180188257A1 (en) 2015-06-19 2018-07-05 University Of Rochester Septin proteins as novel biomarkers for detection and treatment of müllerian cancers
EP3314258B1 (de) 2015-06-26 2023-11-15 The Regents of the University of California Antigene peptide und verwendungen davon zur diagnose und behandlung von autismus
EP3355902B1 (de) 2015-09-30 2022-04-13 Merck Patent GmbH Kombination eines pd-1-achsen-bindungsantagonisten und eines alk-inhibitors zur behandlung von alk-negativem krebs
WO2017079442A1 (en) 2015-11-04 2017-05-11 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Methods of treating tumors and cancer, and identifying candidate subjects for such treatment
EP3405478A4 (de) 2015-12-23 2019-10-30 Moonshot Pharma LLC Verfahren zur induzierung einer immunantwort durch hemmung von nonsense-vermitteltem zerfall
CA3013829A1 (en) 2016-02-09 2017-08-17 Alexander Krantz Site-selective functionalization of proteins using traceless affinity labels
US11246868B2 (en) 2016-04-26 2022-02-15 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Treatment of hippo pathway mutant tumors and methods of identifying subjects as candidates for treatment
WO2018009417A1 (en) 2016-07-05 2018-01-11 Blade Therapeutics, Inc. Calpain modulators and therapeutic uses thereof
KR20190063473A (ko) 2016-09-28 2019-06-07 블레이드 테라퓨틱스, 인크. 칼페인 조정자 및 그 치료학적 용도
EP3544601B1 (de) 2016-11-23 2024-03-20 Translational Drug Development, LLC Eine zusammensetzung, die ein benzamid und einen tnfrsf-agonisten umfasst, der an 4-1bb oder gitr bindet, und die verwendung derselben bei der behandlung von krebs.
WO2018140510A1 (en) 2017-01-25 2018-08-02 Biogen Ma Inc. Compositions and methods for treatment of stroke and other cns disorders
WO2018152496A1 (en) 2017-02-17 2018-08-23 The Usa, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services Compositions and methods for the diagnosis and treatment of zika virus infection
CA3054167A1 (en) 2017-02-27 2018-08-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Humanized model of kidney and liver disorders
CA3059615A1 (en) 2017-04-21 2018-10-25 Genentech, Inc. Use of klk5 antagonists for treatment of a disease
EP3615569A1 (de) 2017-04-25 2020-03-04 The U.S.A. As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Antikörper und verfahren zur diagnose und behandlung von epstein-barr-virus-infektionen
US11654135B2 (en) 2017-06-22 2023-05-23 Moonshot Pharma Llc Methods for treating colon cancer with compositions comprising amlexanox and immune checkpoint inhibitors
WO2019018629A1 (en) 2017-07-19 2019-01-24 The Usa, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services ANTIBODIES AND METHODS FOR DIAGNOSING AND TREATING INFECTION WITH HEPATITIS B VIRUS
EP3703676A4 (de) 2017-11-04 2021-12-15 Advanced Proteome Therapeutics, Inc. Zusammensetzung und verfahren zur modifizierung von polypeptiden
WO2019126472A1 (en) 2017-12-22 2019-06-27 Genentech, Inc. Use of pilra binding agents for treatment of a disease
WO2019236417A1 (en) 2018-06-04 2019-12-12 Biogen Ma Inc. Anti-vla-4 antibodies having reduced effector function
US20220241412A1 (en) 2019-05-24 2022-08-04 Pfizer Inc. Combination therapies using cdk inhibitors
WO2021099446A1 (en) 2019-11-20 2021-05-27 Intervet International B.V. A novel vaccine against heamophilus parasuis
BR112022009507A2 (pt) 2019-11-20 2022-08-16 Intervet Int Bv Uma nova vacina contra heamophilus parasuis
BR112022008142A2 (pt) 2019-11-20 2022-08-23 Intervet Int Bv Nova vacina contra heamophilus parasuis
CA3190782A1 (en) 2020-10-20 2022-04-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy of pd-1 axis binding antagonists and lrrk2 inhibitors
WO2022118197A1 (en) 2020-12-02 2022-06-09 Pfizer Inc. Time to resolution of axitinib-related adverse events
WO2022159414A1 (en) 2021-01-22 2022-07-28 University Of Rochester Erythropoietin for gastroinfestinal dysfunction
BR112023025738A2 (pt) 2021-06-09 2024-02-27 Hoffmann La Roche Combinação de um inibidor de braf e um antagonista de ligação ao eixo pd-1, uso de uma combinação de um inibidor de braf e um antagonista de ligação ao eixo pd-1, método para o tratamento ou profilaxia de câncer, composição farmacêutica e invenção
WO2023057882A1 (en) 2021-10-05 2023-04-13 Pfizer Inc. Combinations of azalactam compounds with a pd-1 axis binding antagonist for the treatment of cancer

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4554101A (en) * 1981-01-09 1985-11-19 New York Blood Center, Inc. Identification and preparation of epitopes on antigens and allergens on the basis of hydrophilicity
AU582731B2 (en) * 1983-01-21 1989-04-13 Milton David Goldenberg Specific cea-family antigens, antibodies specific thereto and their methods of use
NZ207394A (en) * 1983-03-08 1987-03-06 Commw Serum Lab Commission Detecting or determining sequence of amino acids
EP0291636A1 (de) * 1983-11-07 1988-11-23 The Wistar Institute Von Anti-Idiotyp-Antikörpern induzierte Immunreaktion gegen Viren
CA1255586A (en) * 1984-07-24 1989-06-13 Hendrik M. Geysen Method of determining mimotopes

Also Published As

Publication number Publication date
EP0220245A4 (de) 1988-01-26
NZ215865A (en) 1988-10-28
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MY102884A (en) 1993-03-31
EP0220245A1 (de) 1987-05-06
DE3685930D1 (de) 1992-08-13
DK624986A (da) 1987-02-22
NO865215L (no) 1986-12-22
CA1267084A (en) 1990-03-27
NO168793B (no) 1991-12-23
US4833092A (en) 1989-05-23
DK165197B (da) 1992-10-19

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