CN1253493A - 包含能模拟视黄酸对皮肤之作用的化合物结合物的护肤组合物 - Google Patents
包含能模拟视黄酸对皮肤之作用的化合物结合物的护肤组合物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1253493A CN1253493A CN97180116A CN97180116A CN1253493A CN 1253493 A CN1253493 A CN 1253493A CN 97180116 A CN97180116 A CN 97180116A CN 97180116 A CN97180116 A CN 97180116A CN 1253493 A CN1253493 A CN 1253493A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- retinol
- skin
- ester
- chemical compound
- compositions
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/49—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/33—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing oxygen
- A61K8/35—Ketones, e.g. benzophenone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/33—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing oxygen
- A61K8/34—Alcohols
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/49—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds
- A61K8/494—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with more than one nitrogen as the only hetero atom
- A61K8/4946—Imidazoles or their condensed derivatives, e.g. benzimidazoles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/49—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds
- A61K8/4973—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with oxygen as the only hetero atom
- A61K8/498—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with oxygen as the only hetero atom having 6-membered rings or their condensed derivatives, e.g. coumarin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/67—Vitamins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/67—Vitamins
- A61K8/671—Vitamin A; Derivatives thereof, e.g. ester of vitamin A acid, ester of retinol, retinol, retinal
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q17/00—Barrier preparations; Preparations brought into direct contact with the skin for affording protection against external influences, e.g. sunlight, X-rays or other harmful rays, corrosive materials, bacteria or insect stings
- A61Q17/04—Topical preparations for affording protection against sunlight or other radiation; Topical sun tanning preparations
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Birds (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
充分抑制LRAT或ARAT催化视黄醇酯化为失活视黄酯的化合物,具有与视黄酸相同的对角化细胞的作用。因此,视黄醇或视黄酯与这些化合物组合后的作用类似于用视黄酸处理。
Description
本发明领域
本发明涉及护肤组合物,它包含某些化合物与视黄醇和/或视黄酯相结合并涉及将该组合物应用于皮肤的美容方法。
本发明背景
视黄醇(维生素A)是人体中天然存在的内源性化合物,并且是正常内皮细胞分化所必需的。天然的和合成的维生素A衍生物已广泛地用于治疗各种皮肤病,和用作皮肤修复或更新剂。视黄酸已用于治疗各种皮肤病,例如痤疮、皱纹、牛皮癣、老年斑和变色。例如见Vahlquist,A等“皮肤病学研究”(J.Invest.Dermatol.),Vol.94,HollandD.B.and Cunliffe,W.J.(1990),pp.496-498;Ellis,C.N.等“视黄醇的皮肤药理学”(“Pharmacology of Retinols in Skin”),Vasel,Karger,Vol.3,(1989),pp.249-252;Lowe,N.J.等“视黄醇的皮肤药理学”(“Pharmacology of Retinols in Skin”),Vol.3,(1989),pp.240-248;PCT专利申请号WO93/19743。
已确信,使用视黄醇或视黄醇的酯优于视黄酸。视黄醇天然存在于人体中并且认为比视黄酸安全得多。视黄醇的酯在体内水解产生视黄醇。已确信,在皮肤中,视黄醇酯和视黄醇按照下列机理通过代谢转化为视黄酸:
视黄醇酯视黄醇
↓
视黄酸
然而,在表皮细胞(角化细胞)中,大多数内源性应用的视黄醇迅速转化为非活性脂肪族酯贮存起来。在细胞中,通过酰基CoA视黄醇转移酶(ARAT)催化下,将酰基CoA的脂肪族酰基转移,或者通过卵磷脂视黄醇酰基转移酶(LRAT)催化下,将磷脂酰胆碱的酰基转移,而将视黄醇酯化成为非活性视黄酯。这些酯化作用在角化细胞中效率非常高-大多数(95%)细胞内视网膜样物质是以视黄醇脂肪族酯形式存在的。不幸的是,尽管视黄醇和视黄酯使用起来比视黄酸更安全,但它们在提供皮肤护理方面不如视黄酸有效。
本发明部分基于下列发现,即某些化合物能抑制这些酯化反应,并因此通过增加有效地转化为视黄酸的视黄醇之量来加强视黄醇的作用。因此,这些化合物与视黄醇或视黄酯的混合物类似视黄酸,使用起来仍然比视黄酸安全。
本发明概要
本发明部分包括护肤组合物,该组合物包含:
(a)、组合物重量0.001%-10%的视黄醇或视黄酯;
(b)、组合物重量0.0001%-50%的一种化合物,由体外微粒体测定所示,该化合物在100μM浓度下能抑制至少20%LRAT或ARAT催化的视黄醇酯化作用;其中,所述化合物不是脂肪酸酰胺或二甲基咪唑啉酮;和
(c)、在美容上适宜的赋形剂。
本发明所使用的优选的化合物为环状脂肪族不饱和烃、二萜、二氢黄酮、黄酮醇、脂肪族羟乙基咪唑啉表面活性剂及其混合物。本发明与视黄醇和/或视黄酯结合的该化合物的挑选,基于该组合物能模拟视黄酸对皮肤作用的能力。如果所述化合物通过了本文所描述的体外微粒体测定的标准,那么它应包括在本发明内,即使本文没有详细描述。换言之,如体外微粒体测定所示,如果某化合物足以抑制LRAT或ARAT催化的视黄醇酯化作用,那么它便能与视黄醇或视黄酯一起模拟视黄酸对角化细胞(皮肤细胞)的作用。
本发明进一步提供一种调理皮肤的美容方法,它包括将本发明组合物局部敷于皮肤。本发明也提供一种模拟视黄酸对皮肤之作用的美容方法,它包括将本发明组合物局部敷于皮肤。
本文所使用的术语“调理”是指预防和治疗一种或多种下列情况:皮肤干燥、皮肤光损伤、皱纹的出现、老年斑、老化皮肤。该组合物也用于增加角质层的弹性、减淡皮肤的颜色、控制皮脂分泌并且总的提高皮肤的质量。该组合物可用于改善皮肤的脱落和表皮的分化。
在本发明组合物中加入所选择的化合物基本上改善了视黄醇或视黄酯的性能。
按照本发明,由于在包含视黄醇或视黄酯的组合物中加有有效量的化合物,所述化合物如体外微粒体测定所示,在100μM浓度下能抑制至少20%LRAT或ARAT催化的视黄醇酯化作用,基本上改善了组合物的性能。优选实施例的描述
本发明组合物包含作为第一必需组分的、选自视黄醇和视黄酯的化合物。术语“视黄醇”包括视黄醇的下列异构体:全反式-视黄醇、13-顺式-视黄醇、11-顺式-视黄醇、9-顺式-视黄醇、3,4-二氢-视黄醇。优选的异构体为全反式-视黄醇、13-顺式-视黄醇、3,4-二氢-视黄醇、9-顺式-视黄醇。最优选的是全反式-视黄醇,这是由于其广泛的商业来源。
视黄酯是视黄醇的酯。术语“视黄醇”已在上面定义过了。适用于本发明的视黄酯为视黄醇的C1-C30酯,优选C2-C20酯,并且最优选C2、C3和C16酯,因为它们一般是最容易获得的。视黄酯的实例包括(但不限于):棕榈酸视黄酯、甲酸视黄酯、乙酸视黄酯、丙酸视黄酯、丁酸视黄酯、戊酸视黄酯、异戊酸视黄酯、己酸视黄酯、庚酸视黄酯、辛酸视黄酯、壬酸视黄酯、癸酸视黄酯、十一烷酸视黄酯、月桂酸视黄酯、十三烷酸视黄酯、肉豆蔻酸视黄酯、十五烷酸视黄酯、十七烷酸视黄酯、硬脂酸视黄酯、异硬脂酸视黄酯、十九烷酸视黄酯、花生四烯酸视黄酯、二十二烷酸视黄酯、亚油酸视黄酯、油酸视黄酯。
本发明中所使用的优选的酯选自棕榈酸视黄酯、乙酸视黄酯和丙酸视黄酯,因为它们是最容易通过商业渠道获得的,因此也是最便宜的。亚油酸视黄酯由于其功效也是优选的。
在本发明中所使用的视黄醇和/或视黄酯的量为0.001%-10%,优选0.01%-1%,最优选0.01%-0.5%。
本发明组合物的第二必需组分是通过体外微粒体测定标准的化合物。如体外微粒体测定所示,适用于本发明的化合物在100μM浓度下能抑制至少20%LRAT或ARAT催化的视黄醇酯化作用。采用体外微粒体测定法测定包括在本发明组合物中的化合物适应性如下所述:
在优选的本发明实施例中,选择的化合物在100μM浓度下能抑制至少40%,并且最优选至少50%LRAT或ARAT催化视黄醇的酯化作用。体外微粒体测定法:
如J.C.Saari and D.L.Bredberg“视网膜色素上皮中CoA和非-CoA依赖性视黄醇的酯化作用”(“CoA and Non-CoA Dependent RetinolEsterification in Retinal Pigment Epithelium”)J.Biol.Chem.263,8084-90(1988)中所述得到微粒体。
将含0.1M PH7磷酸钠缓冲剂、5mM二硫苏糖醇、2mg/ml牛血清白蛋白、40微摩尔棕榈酰CoA、40微摩尔二月桂酰磷脂酰胆碱、10微摩尔视黄醇和试验化合物或溶剂空白的溶液在37℃下保温1小时,从牛视网膜色素上皮细胞中分离到微粒体成分。保温后,通过加入等体积的乙醇将反应骤冷,并用己烷提取所形成的视黄酯(从LRAT催化反应中得到月桂酸视黄酯,从ARAT催化反应中得到棕榈酸视黄酯)。除掉己烷层,在氮气下蒸发,并将残渣通过HPLC在3.9×300mmC19反相柱上分析,用80%甲醇/四氢呋喃作为流动相,用荧光检测(325nm激发,480nm发射)定量测定视黄酯的量。在空白溶剂中形成的视黄酯的量记作100%,并用它来计算试验化合物抑制酯形成的百分数。作为对照,将微粒体等分试样通过煮沸5分钟灭活,可使酯的形成至少95%得到抑制。
环状脂肪族不饱和烃、二萜、二氢黄酮、黄酮醇和某些脂肪族羟乙基咪唑啉表面活性剂是所述化合物的实例,它们符合上述体外微粒体测定试验。下文中一个一个地描述这些化合物。当然,本发明组合物中也包含其它本文未详细描述的化合物,只要这些化合物能通过本文所描述的体外微粒体测定试验标准。环状脂肪族不饱和化合物
按照上述体外微粒体测定试验来选择适宜的环状脂肪族不饱和化合物。
优选的环状脂肪族不饱和化合物选自环状脂肪族不饱和醛、酮、醇和酯。
优选的环状脂肪族不饱和醛、酮、醇和酯为:α-二氢大马酮、β-二氢大马酮、δ-二氢大马酮、异二氢大马酮、大马酮、α-紫罗酮、β-紫罗酮、烯丙基α-紫罗酮、异丁基紫罗酮、α-甲基紫罗酮、γ-甲基紫罗酮、婆罗门醇(brahmanol)、檀香醇(sandanol)、α-松油醇、新铃兰醛(lyral)、藏花乙酯(ethyl saffranate)及其混合物。这些化合物的结构如下:α-二氢大马酮β-二氢大马酮δ-二氢大马酮异二氢大马酮大马酮α-紫罗酮β-紫罗酮α-甲基紫罗酮烯丙基α-紫罗酮婆罗门醇新铃兰酮γ-甲基紫罗酮藏花乙酯
为了以最小的花费获得最大的性能改善,优选地,环状脂肪族不饱和化合物选自具有上述结构式的二氢大马酮和紫罗酮。
最优选环状脂肪族不饱和化合物为α-二氢大马酮和/或α-紫罗酮。
环状脂肪族不饱和化合物可以以组合物重量的0.0001%-50%包含在本发明组合物中,优选以0.01%-10%,最优选以0.1%-5%的量使用。二萜
包含在本发明中的二萜是通过上述体外微粒体测定标准的化合物。优选的二萜化合物为香叶草基香叶醇,它具有下列结构:
二萜可以以组合物重量的0.0001%-50%包含在本发明组合物中,优选以0.01%-10%,最优选以0.1%-5%的量使用。二氢黄酮和黄酮醇
包含在本发明中的二氢黄酮和黄酮醇为通过上述体外微粒体测定标准的化合物。优选的二氢黄酮和黄酮醇化合物选自4’,5,7-三羟黄烷酮、五羟黄酮及其混合物。4’,5,7-三羟黄烷酮和五羟黄酮具有下列结构:4′,5,7-三羟黄烷酮五羟黄酮
二氢黄酮和黄酮醇可以以组合物重量的0.0001%-50%包含在本发明组合物中,优选以0.01%-10%,最优选以0.1%-5%的量使用。
可以从Sigma公司得到槲皮黄酮和/或4’,5,7-三氢黄烷酮。含五羟黄酮和/或4′,5,7-三氢黄烷酮的植物提取物也适用于本发明,例如芦丁、月见草、洋葱、柑橘属类。脂肪族羟乙基咪唑啉表面活性剂
其中R为含8-20个碳原子的脂肪族饱和或不饱和的、直链或支链烃链。
适宜的脂肪族羟乙基咪唑啉的实例包括(但不限制于)椰子基羟乙基咪唑啉(R来自椰子油脂肪酸,主要是C12和某些更长的链),十二烷基羟乙基咪唑啉(R=CH3(CH2)10),肉豆蔻基羟乙基咪唑啉(R=CH3(CH2)12),硬脂酰基羟乙基咪唑啉(R=CH3(CH2)16),和油酰基羟乙基咪唑啉(R=CH3(CH2)7CH=CH(CH2)7) 。
优选脂肪族羟乙基咪唑啉中的R含8-18个碳原子,更优选11-18个碳原子。最优选肪族羟乙基咪唑啉为油酰基羟乙基咪唑啉,这归因于油酰基羟乙基咪唑啉的商业易得性及其功效。
脂肪族羟乙基咪唑啉可以以组合物重量的0.0001%-50%包含在本发明组合物中,优选以0.01%-10%,最优选以0.1%-5%的量包含在本发明组合物中。在美容应用上适宜的赋形剂
本发明组合物也包含在美容应用上适宜的赋形剂作为该组合物中活性组分的稀释剂、分散剂或载体,以便组合物应用于皮肤时促进其分布。
除了水之外的赋形剂包括液体或固体润肤剂、溶剂、湿润剂、增稠剂和粉剂。特别优选的非水性载体为聚二甲基硅氧烷和/或聚二甲基苯基硅氧烷。本发明聚硅氧烷可以是25℃下粘度为10-10,000,000mm2/s(厘沲)的聚硅氧烷。特别需要的是低粘度和高粘度硅氧烷混合物。这些硅氧烷可从General Electric Company获得,商标为Vicasil,SE和SF,和从Dow Corning Company获得,商标为200和500系列。可在本发明组合物中使用的硅氧烷的量占该组合物重量的5%-95%,优选25%-90%范围。
美容应用上适宜的赋形剂通常构成组合物重量的5%-99.9%,优选25%-80%,并且在不存在其它美容添加剂的情况下,可填补该组合物余量。优选赋形剂重量的至少50wt.%,更优选至少80wt.%为水。优选水至少构成本发明组合物重量的50wt%,最优选为组合物重量的60-80wt%。任选护肤物质和美容添加剂
油或油性物质可以与乳化剂一起加入以便提高油包水乳剂或水包油乳剂,这主要依赖于所使用乳化剂的平均亲水亲油平衡值(HLB)。
优选本发明组合物包含防晒剂。防晒剂包括通常用来阻挡紫外光的物质。该化合物的实例为PABA、肉桂酸酯和水杨酸酯的衍生物。例如,可使用甲氧基肉桂酸辛酯和2-羟基-4-甲氧基苯酮(也称之为羟苯甲酮)。甲氧基肉桂酸辛酯和2-羟基-4-甲氧基苯酮是可商购的,商标分别为parsol MCX和二苯酮-3。乳剂中所使用的防晒剂的准确量可随需要避免的太阳紫外光照射程度而改变。
另一种优选的可选择组分选自基本脂肪酸(EFAs),即所有细胞浆膜形成必需的那些脂肪酸,在角化细胞中,EFA不足使得细胞过度增殖。补充EFA可纠正该现象。EFAs也加强表皮的脂生物合成并为表皮的阻隔层形成提供脂类。优选基本脂肪酸选自亚油酸、γ-亚麻酸、高-γ-亚麻酸、耧斗草酸(columbinic acid)、二十烷-(n-6,9,13)-三烯酸、花生四烯酸、α-亚麻酸、二十碳五烯酸、六烯酸(hexaenoic)及其混合物。
通常,将润肤剂加到本发明组合物中。该润肤剂的含量可以为组合物总量的0.5%-50%,优选在5%-30%之间。按照一般化学分类方法,润肤剂可分为酯、脂肪酸和醇、多元醇和烃。
酯可以是一或二酯。适宜的脂肪酸二酯的实例包括己二酸二丁酯、癸二酸二乙酯、二腊梅酸二异丙酯(diisopropyl dimerate)和丁二酸二辛酯。适宜的支链脂肪酸酯包括2-乙基-己基肉豆蔻酸酯,硬脂酸异丙酯和棕榈酸异硬脂酯。适宜的三元酸酯包括三亚油酸三异丙酯和枸橼酸三月桂酯。适宜的直链脂肪酸酯包括棕榈酸月桂酯、乳酸肉豆蔻酯、oleyl eurcate和油酸硬脂酯(stearyl oleate)。优选的酯包括椰子基-辛酸酯/癸酸酯(椰子基-辛酸酯和椰子基-癸酸酯混合物),丙二醇肉豆蔻基醚乙酸酯,己二酸二异丙酯和辛酸鲸蜡酯。
适宜的脂肪族醇和酸包括具有10-20个碳原子的化合物。特别优选的化合物如鲸蜡基、肉豆蔻基、棕榈基和硬脂基的醇和酸。
可作为润肤剂的多元醇为直链和支链烷基多羟基化合物。例如,丙二醇、山梨糖醇和甘油是优选的。也可以使用聚合的多元醇,如聚丙二醇和聚乙二醇。丁二醇和丙二醇也是特别优选的渗透增强剂。
可作为润肤剂的烃的实例为具有12-30个碳原子烃链的化合物。具体实例包括矿物油、凡士林、角鲨烯和异链烷烃。
本发明美容组合物中的另一类功能性组分为增稠剂。通常,增稠剂的含量为组合物重量的0.1%-20%,优选0.5%-10%。增稠剂的实例为交联的聚丙烯酸酯物质,购于B.F.Goodrich Company,商标为Carbopol。可使用树胶,如黄原胶、角叉菜胶、明胶、卡拉牙胶、果胶和刺槐豆胶。在某些情况下,增稠剂的功能可以由一种发挥硅氧烷或润肤剂作用的物质来完成。例如,粘度超过10厘沲的硅橡胶纯胶料和酯,如硬脂酸甘油酯,具有双重功能。
粉剂可加到本发明美容组合物中。这些粉剂包括白垩、滑石粉、高岭土、淀粉、绿土型粘土、化学改性硅酸铝镁、有机改性蒙脱石粘土、水合硅酸铝、烘制二氧化硅、淀粉辛烯基琥珀酸铝及其混合物。
其它次要的添加剂组分也可以加到所述美容组合物中。这些组分可包括着色剂、遮光剂和香料。其中,所述其它次要的添加剂组分可以为组合物重量的0.001%-20%。组合物的应用
本发明组合物主要用作一种局部涂抹到人皮肤上的产品,特别是作为一种调理皮肤和使皮肤光滑,并预防或减少皱纹或皮肤老化的试剂。
在应用中,将少量,例如1-100ml的组合物从适宜的容器或涂药器中取出涂抹到暴露的皮肤表面,并且,如果需要,用手或手指或适宜的装置将其铺开和/或摩擦到皮肤上。产品形式和包装
本发明局部皮肤治疗组合物可适宜地配制成洗剂、霜剂或凝胶。可将该组合物包装在与其粘度相适应的适宜的容器中提供给消费者使用。例如,洗剂和霜剂可包装在瓶子或可转动的球状涂药器中,或包装在推进剂驱动的气雾剂装置或装有适于手指操作的带泵容器中。当该组合物为霜剂时,它可以简单地贮存在不变形的瓶子或可挤压的容器如软管或有盖子的瓶中。
该组合物也可以包于胶囊中,如美国专利5,063,057中所描述的那些。
因此,本发明也提供一种包含本文所定义的美容上适宜的组合物的封闭容器。
下列具体实施例进一步说明本发明。材料和方法细胞培养:
将通过胰蛋白酶处理,从新生儿***上分离到的人角化细胞放在Dulbecco改性Eagle(DME)Hams F12(1∶1)培养基/10%胎牛血清中生长,其中存在经过照射的3T3鼠成纤维细胞,用于分开角化细胞菌落。让细胞在上述条件下生长直至它们的第二代并保持冷冻以便将来使用。将冷冻的第二代角化细胞解冻并铺板于上述培养基中生长5天,然后将它们转移到从Clonetics Corporation,San Diego,CA得到的含0.15mM Ca的无血清MCDB 153为基础的角化细胞生长培养基(KGM)中,或从GIBCO得到的含0.09mM Ca的角化细胞无血清培养基(KSFM)中。在第7天,当细胞80-90%融合时,将它们经胰蛋白酶作用,并铺板于无血清培养基中用于进行各种试验。胸苷测定3H-胸苷的掺入和角化细胞的增殖
将所培养的角化细胞中掺入3H-胸苷,可用来测定角化细胞的增殖。胸苷是四种脱氧核苷中的一种,所述脱氧核苷是DNA的单体单元,所述DNA是动物王国中遗传信息的万能文库。在体细胞(如角化细胞)进行细胞***前,进行细胞***的全部基因组都进行复制。这涉及细胞的大规模DNA合成,并使得两个子细胞得到相同的遗传材料的拷贝。当3H-胸苷包含在角化细胞的培养基中时,由于角化细胞正在合成DNA准备进行细胞***,这样,经标记的核苷并入新合成的DNA中。细胞群体中并入3H-胸苷的程度与这些细胞的DNA合成速度成比例,因此可表明细胞增殖情况。
将角化细胞(如上所述培养的)以每孔1ml培养基中含20,000个细胞的密度铺于24孔测平板中。将细胞孵育4天或直至细胞60-70%融合时,改变培养基。改变培养基 后24小时,加入试验化合物(一式三份)于孔中,4小时后,每孔中加入50μl培养基质中的1μCi3H-胸苷。将细胞再孵育24小时。将培养基从细胞中除掉,加入10%冰冷却的三氯乙酸(TCA)并将测定板在冰中孵育30分钟。将细胞用5%TCA洗涤5次,并用至少1小时的时间(通常过夜)溶解在500μl0.1M NaOH中。将该制剂用0.1M HCl中和;用50μl该细胞制剂来测定总蛋白含量。通过液相闪烁计数900μl细胞制剂,来测定每分钟3H标记的DNA的蜕变(DPM)。胸腺嘧啶掺入结果用DPM/μg蛋白质来表示。转谷氨酰胺酶测定转谷氨酰胺酶测定和角化细胞的分化
在表皮的最终分化过程中,细胞边缘的内表面上形成15nm厚的蛋白质层,称为角质化膜(CE)。该CE由大量不同的蛋白质组成,由于在表皮中表达的至少两种不同转谷氨酰胺酶(TG酶)的催化下,形成Nε-(γ-谷酰氨基)赖氨酸异二肽键,而使所述蛋白质交联在一起。在表皮的分化层特别是颗粒层中表达大量谷氨酰胺酶I(TG酶I),但是在未分化的基础表皮中不存在。因此,TG酶I是表皮角化细胞分化的标志,TG酶I含量高表明分化程度大。在下列实施例中,利用TG酶I抗体进行ELISA为基础的TG酶I测定,可用于评定所培养的角化细胞的分化情况。
就实施例1而言,使用下列方法:
将角化细胞(如上所述培养的)以每孔200μl培养基含3,000个细胞的密度铺于96孔平板中。孵育4天后,将培养基改为含试验化合物的培养基(每个试验做一式6份)。将培养基吸出后,将细胞再培养72小时,并将平板在-70℃下贮存。将板从冰箱中撤出,并将细胞用PBS洗涤。加入100μl无菌注射用水并通过在-70℃下冷冻再解冻,而将细胞冷冻破碎。将该细胞在室温(R/T)下用PBS/3% BSA(洗涤缓冲剂,牛血清白蛋白)孵育1小时,然后用新鲜洗涤缓冲剂等分试样漂洗。将细胞在37℃下,用50μl从Biomedical Industries获得的、用洗涤缓冲剂稀释成1∶2,000的主抗体,单克隆抗人转谷氨酰胺酶鼠抗体(IgG)孵育1小时,然后用缓冲剂漂洗2次。然后,在37℃下,将细胞用50μl以洗涤缓冲剂稀释成1∶4,000的副抗体(Fab片断,从Amersham获得的过氧化物酶结合的抗-鼠IgG)孵育1小时,然后用洗涤缓冲剂漂洗2次。在R/T下,在黑暗中(以铝箔盖上),将细胞用基底溶液(在10ml 0.1M、PH5.0枸橼酸缓冲液中的4mg邻-苯二胺和3.3μl30%H2O2)孵育5分钟。通过加入50μl4N H2SO4中止反应。在测定板阅读器上得出492nm下样品的吸光度。六份重复试验样品中四份用两种抗体处理,两份仅仅用副抗体处理(即为了测定酶结合Ab的本底结合值)。通过从各试验的读数中减去本底值而测出TG酶含量,并测出暴露于两种抗体的各重复试验的平均值±s.d.。
对于要测定其中TG酶I含量的其它实施例来说,使用下列方法:
将角化细胞(如上所述培养的)以每孔200μl培养基中含3,000个细胞的密度铺在96孔平板中。孵育4天后,将培养基改为含试验化合物的培养基(每个试验做一式6份)。将培养基吸出后,细胞再培养72小时,并将测定板在-70℃下贮存。将测定板从冰箱中撤出后,通过冷冻和解冻将细胞冷冻破碎并用PBS洗涤3次。将该细胞在室温(R/T)下用TBS/3%BSA缓冲剂孵育1小时。然后在37℃下,将细胞与100μl从Biomedical Technologies Inc.获得的、用TBS/1%BSA缓冲剂稀释成1∶2000的单克隆抗人转谷氨酰胺酶(IgG)鼠抗体(主抗体)孵育2小时,然后用洗涤缓冲剂(TBS/1%BSA/0.05%吐温-20)洗涤6次。接着,在37℃下,将细胞用100μl Fab片断,从Amersham获得的、用洗涤缓冲剂稀释成1∶4,000的过氧化物酶结合的抗-鼠IgG抗体(副抗体)孵育2小时,然后用洗涤缓冲剂洗涤3次并用PBS洗涤三次。在R/T下,在黑暗中(以铝箔覆盖),将细胞用基底溶液(在10ml0.1M、PH5.0枸橼酸缓冲液中的4mg邻-苯二胺和3.3μl 30%H2O2)孵育5分钟。在测定板阅读器上记录样品在492nm处的吸光度。在六份重复试样中,将其中四份用两种抗体处理,而其中两份仅仅用副抗体处理(即为了测定结合了Ab的酶的本底结合值)。通过从各试验的读数中减去本底而得出转谷氨酰胺酶的含量,并测定暴露到两种抗体中的重复试样的平均值±s.d.。DNA测定
将细胞处理后检测到的TG酶I的含量受细胞数量的影响,即细胞数越多,所检测到的TG酶I的含量越高。将TG酶I的含量校准为同一孔中细胞的DNA含量,这样可消除因细胞数不同引起的差异。DNA定量测量是特别有用的细胞数显示,包括角化细胞数的显示,因为各细胞具有同一基因组的全部含义和目的,因此具有相同的DNA量。因此,每孔中细胞总DNA含量是与该孔中细胞数成比例的。DNA定量测定用于针对细胞数对TG酶数据进行校准。。
将角化细胞以每孔200μl培养基中含3,000个细胞的密度放在96孔测定板中。孵育4天后,将培养基改为含试验化合物的培养基(每个试验做6份)。将培养基吸出后,将细胞再培养72小时,并将平板板在-70℃下贮存1.5小时。将板从冰箱中撤出并解冻30分钟。加入100μl/孔Hoechest染料(1μg/ml最终浓度),并将其孵育15分钟,加盖,然后在荧光计(ex.360nm并且em.460nm)中测定。除掉染料溶液并将该孔用为TG酶测定而制备的PBS漂洗。实施例1在改变角化细胞分化上,视黄酸比视黄醇更有效
测定加入视黄酸(RA)和视黄醇(ROH)后对校准为细胞DNA含量的转谷氨酰胺酶含量的影响,结果显示在表1中。
表1
处理方式 | 平均TG酶/DNA×10-4±s.d(%对照) | 与对照组相对比的P值 | 与2.5×10-7MROH相对比的P值 | 与2.5×10-8MROH相对比的P值 | 与2.5×10-9MROH相对比的P值 |
对照组 | 2.44±0.24(100%) | - | 0.001 | 0.001 | 0.001 |
2.5×10-7M RA | 0.16±0.11(7%) | 0.001 | 0.001 | 0.001 | 0.001 |
2.5×10-7M ROH | 1.14±0.22(47%) | 0.001 | - | 0.001 | 0.001 |
2.5×10-8M RA | 1.34±0.40(55%) | 0.001 | -0.2 | 0.001 | 0.001 |
2.5×10-8M ROH | 1.89±0.30(77%) | 0.001 | 0.001 | - | 0.001 |
2.5×10-9M RA | 1.87±0.49(77%) | 0.001 | 0.001 | 0.784 | 0.001 |
2.5×10-9M ROH | 2.70±0.59(>100%) | 0.001 | 0.001 | 0.001 | - |
与乙醇对照组相比,所有浓度,即2.5×10-7M、2.5×10-8M和2.5×10-9M的试验用视黄酸都降低角化细胞的分化,并且与相应2.5×10-7M、2.5×10-8M和2.5×10-9M的视黄醇处理相比,视黄酸降低程度明显大于视黄醇。对于视黄酸和视黄醇来说,转谷氨酰胺酶水平的降低是剂量依赖性的。这与视黄酸对表皮分化的抑制作用大于视黄醇是一致的。实施例2体外微粒体中视黄醇酯化的方法
如下列文献中所述得到微粒体:J.C.Saari and D.L.Bredberg,“视网膜色素表皮细胞中CoA和非CoA依赖性视黄醇酯化作用”(“CoAand Non-CoA Dependent Retinol Esterification in Retinal PigmentEpithelium”J.Biol.Chem.23,8084-90(1988))。
将含0.1M PH7磷酸钠缓冲液、5mM二硫苏糖醇、2mg/ml牛血清白蛋白、40微摩尔棕榈酰辅酶A、40微摩尔二月桂酰磷脂酰基胆碱、10微摩尔视黄醇和试验化合物或溶剂空白的溶液在37℃下孵育1小时,微粒体碎片从牛视网膜色素的表皮细胞中分离出来。孵育后,通过加入等体积的乙醇中止反应,将所形成的视黄酯(从ARAT催化反应中形成棕榈酸视黄酯,从LRAT催化的反应中形成月桂酸视黄酯)用己烷提取。将己烷层除掉,在氮气环境下蒸发,并通过在3.9×300mmC18反相柱上进行HPLC来分析残渣,通过使用80%甲醇/四氢呋喃流动相和荧光检测(325nm激发,480nm发射)来确定视黄酯的量。将在溶剂空白存在下形成的酯量记作100%,并用它来计算试验化合物抑制酯形成的百分数,通过煮沸5分钟,将等分试样的微粒体灭活作为对照,它生至少95%酯抑制作用。
所得到的结果见表2中。
表2化合物 浓度(μM) 抑制%,ARAT 抑制%,LRAT油酰基羟乙基咪唑啉 100 90 95油酰基羟乙基咪唑啉 10 14 28辛酸基羟乙基咪唑啉 100 - 8Diazolidinyl urea 100 0 0硫胺 100 0 0咖啡因 100 0 0腺嘌呤 100 0 0苯基苯并咪唑磺酸 100 0 0尿嘧啶 100 0 0色氨酸 100 0 0椰子基谷氨酸 100 0 0二甲基2-绰昔古柯 100 0 0碱氧化物两性二乙酸二钠盐 100 0 0油酰氨丙基甜菜碱 100 0 0油胺氧化物 100 0 0月桂酰肌氨酸 100 20 0
可见,羟乙基咪唑啉表面活性剂是有效的酯化抑制剂,而其它表面活性剂和其它杂环化合物基本上是非活性的。辛酸基羟乙基咪唑啉(R=CH3(CH3)6)不足以抑制LRAT。实施例3
用各种具有表3所示R基的羟乙基咪唑啉表面活性剂来重复实施例2。所得到的结果见表3中。
表3
R基 | 浓度(微摩尔) | 抑制%,ARAT | 抑制%,LRAT |
油酰基 | 100 | 90 | 90 |
油酰基 | 10 | 15 | 12 |
月桂基 | 100 | 53 | 47 |
月桂基 | 10 | 0 | 0 |
椰子基 | 100 | 68 | 65 |
椰子基 | 10 | 0 | 0 |
表3结果表明,相对活性是油酰基>椰子基>月桂基。椰子基是更优选的,因为它不单纯是C12,它还具有某些较长的链烷基。
表2中关于辛酸基羟乙基咪唑啉的数据表明,在100微摩尔时,它只有8%抑制作用。所得到的数据清楚地表明,相对活性是油酰基>椰子基>月桂基>辛酸基。实施例4
利用油酰基羟乙基咪唑啉(OHI)、视黄酸(RA)、视黄醇(ROH)和棕榈酸视黄酯(RP)测定转谷氨酰胺酶。
所得到的结果见表4中。
表4实验号 化合物 浓度(微摩尔) 与对照物相比的%1 RA 0.25 35.11 ROH 0.25 76.21 OHI 1 80.71 ROH+OHI 0.25+1 45.12 RA 0.25 43.42 ROH 0.025 91.62 OHI 1 78.22 ROH+OHI 0.025+1 57.93 RA 0.25 45.93 RP 0.25 91.63 OHI 1 91.13 RP+OHI 0.25+1 71.6
从表4结果可见,视黄酸基本上可降低角化细胞的分化,而视黄醇、油酰基羟乙基咪唑啉和棕榈酸视黄酯在单独使用时不影响角化细胞分化,或者其影响比视黄酸小得多。
在试验1和2中,当将视黄醇与油酰基羟乙基咪唑啉合用时,其结果是协同地降低角化细胞的分化,其降低程度接近视黄酸的作用。
在试验3中,当将油酰基羟乙基咪唑啉与棕榈酸视黄酯合用时,其结果不像试验1和2那么明显,然而还是可以观察到协同降低作用。
该实施例也表明,当通过本文上述体外微粒体测定标准的化合物与视黄醇合用时,实际上具有对角化细胞的作用,其作用程度类似于视黄酸的作用。实施例5
将表5A和5B中所列化合物进行体外微粒体测定试验。
将表5A中所列出的化合物以100μM浓度进行试验。将表5B中所列出的化合物以10μM浓度进行试验。
表5A
化合物 | 抑制%,ARAT | 抑制%,LRAT |
α-二氢大马酮 | 83 | 98 |
β-二氢大马酮 | 84 | 92 |
δ-二氢大马酮 | 87 | 95 |
异二氢大马酮 | 80 | 92 |
大马酮 | 70 | 79 |
α-紫罗酮 | 45 | 49 |
β-紫罗酮 | 22 | 24 |
烯丙基α-紫罗酮 | 22 | 36 |
异丁基紫罗酮 | 8 | 45 |
α-甲基紫罗酮 | 67 | 77 |
γ-甲基紫罗酮 | 21 | 38 |
婆罗门醇 | 70 | 75 |
檀香醇 | 15 | 43 |
α-松油醇 | 26 | 25 |
(timberol)木材醇 | 34 | 33 |
新铃兰醛 | 76 | 71 |
(tonalid)吐纳麝香 | 50 | 33 |
藏花乙酯 | 51 | 49 |
traseolide | 41 | 21 |
檀香酮 | 23 | 12 |
表5B
化合物 | 抑制%,ARAT | 抑制%,LRAT |
α-二氢大马酮 | 67 | 87 |
β-二氢大马酮 | 45 | 52 |
δ-二氢大马酮 | 58 | 64 |
大马酮 | 23 | 29 |
烯丙基α-紫罗酮 | 16 | 17 |
从表5B和5A中可见,某些环状脂肪族不饱和化合物是有效的LRAT和ARAT催化的视黄醇酯化作用的抑制剂。比较实施例6
用其它环状脂肪族不饱和化合物进行体外微粒体测定试验。所得到的结果见表6中。
表6中的化合物以100μM的浓度进行试验。
表6
化合物 | 抑制%,ARAT | 抑制%,LRAT |
二氢α-紫罗酮 | 13 | 18 |
α-紫罗醇 | 0 | 0 |
β-紫罗醇 | 0 | 0 |
肉桂醛 | 0 | 0 |
香草醛 | 0 | 0 |
桉树脑 | 0 | 0 |
薄荷脑 | 0 | 0 |
麝香草酚 | 0 | 0 |
香芹酮 | 0 | 0 |
樟脑 | 0 | 0 |
薄荷酮 | 0 | 0 |
小茴香醇 | 12 | 4 |
异环香叶醇 | 18 | 16 |
二甲基紫罗酮 | 0 | 9 |
β甲基紫罗酮 | 0 | 10 |
从表6的结果可见,所有的环状脂肪族不饱和化合物都抑制或充分抑制LRAT和ARAT催化的视黄醇酯化。实施例7
验证表7中所列出的化合物和组合物对角化细胞分化的作用。结果用与对照物相比的%表示。转谷氨酰胺酶含量校正为DNA水平。数据来自两个视黄醇浓度不同的试验。所得到的结果见表7中。
表7
试验# | 处理 | 浓度mM | 与对照物相比的% |
1 | 视黄酸 | 0.00025 | 24 |
1 | 视黄醇 | 0.001 | 67 |
1 | α-二氢大马酮 | 1 | 92 |
1 | 视黄醇+α-二氢大马酮 | 0.001+1 | 34 |
2 | 视黄酸 | 0.00025 | 8 |
2 | 视黄醇 | 0.00025 | 63.5 |
2 | α-二氢大马酮 | 1 | 86 |
2 | 视黄醇+α-二氢大马酮 | 0.00025+1 | 30 |
表7的结果表明,尽管单一的α-二氢大马酮和单一的视黄醇不是非常有效,但它们的组合物通过模拟视黄酸对角化细胞分化的作用,可协同降低转谷氨酰胺酶。该实施例也在微粒体测定和细胞培养物的数据之间建立起良好的相关性。实施例8
用二萜化合物、香叶基香叶醇或金合欢醇进行体外微粒体测定试验。
所得到的结果见表8。
表8
1 从TCI美国(波特兰,俄勒冈)得到。也可以从Sigma和CTC有机物公司(Atlanta,乔治亚州)得到。2 从Givaudan CO.,Bedoukian CO.,或Dragoco Co.得到。
化合物 | 浓度(μM) | 抑制%,ARAT | 抑制%,LRAT |
香叶基香叶醇1 | 100 | 81 | 77 |
香叶基香叶醇 | 10 | 38 | 16 |
金合欢醇2 | 100 | 43 | 43 |
金合欢醇 | 10 | 20 | 10 |
从表8的结果可见,香叶基香叶醇或金合欢醇都抑制视黄醇酯化。实际上,香叶基香叶醇是比金合欢醇更有效的酯化抑制剂,其结构如下:实施例9
按照上文材料和方法部分所述的过程测量并入的3H-胸苷。所得结果见表9A和9B。
表9A
实验#1 | |||
处理方式 | DPM/微克蛋白 | 与对照物相比的% | |
平均值 | SD | ||
对照 | (278) | 100 | |
250nM视黄醇 | 2082 | (146) | 108 |
250nM视黄酸 | 3013 | (226) | 156 |
250nM视黄醇+10nM香叶基香叶醇 | 2970 | (308) | 154 |
表9B
实验#2 | |||
处理方式 | DPM/微克蛋白 | 与对照物相比的% | |
平均值 | SD | ||
对照 | (322) | 100 | |
250nM视黄醇 | 974 | (148) | 107 |
250nM视黄酸 | 1494 | (45) | 163 |
250nM视黄醇+10nM香叶基香叶醇 | 1450 | (318) | 159 |
由上表结果可见,香叶基香叶醇能够显著增加视黄醇的增殖增强作用,使之达到类似于相当量的视黄酸的作用。而且证明微粒体测定试验和化合物对细胞培养的影响之间存在良好的相关性。实施例10
对表10中的化合物进行体外微粒体测定。所得结果见表10。以100μM浓度试验表10化合物。
表10
实施例114′,5,7-三羟黄烷酮和视黄醇协同抑制角化细胞的分化
化合物 | %抑制率,ARAT | %抑制率,LRAT |
对照 | 0 | 0 |
4′,5,7-三羟黄烷酮 | 33 | 14 |
五羟黄酮 | 25 | 14 |
用试验化合物处理72小时来测试对校准为细胞DNA含量的TG酶I水平的影响。结果见表11。从Sigma获得4′,5,7-三羟黄烷酮。
表11
处理方式 | 平均TG酶/DNA×105±s.d(%对照) | 与对照相比的P值 | 与2.5×10-9M ROH相比的P值 | 与2.5×10-7M RA相比的P值 | 与2.5×10-7M4′,5,7-三羟黄烷酮相比的P值 |
对照物 | 52.78±5.69(100%) | - | 0.235 | 0.001 | 0.329 |
2.5×10-7MRA | 22.47±2.31(42%) | 0.001 | 0.001 | - | 0.001 |
2.5×10-9MROH | 48.31±5.31(92%) | 0.235 | - | 0.001 | 0.585 |
10-7M 4′,5,7-三羟黄烷酮 | 49.84±2.76(94%) | 0.329 | 0.585 | 0.001 | - |
2.5×10-9MROH+10-7M4′,5,7-三羟黄烷酮 | 27.61±10.79(53%) | 0.002 | 0.005 | 0.328 | 0.002 |
由表11结果可见,2.5×10-7M视黄酸对于抑制角化细胞TG酶I水平(为对照物的42%)来看是非常有效的。2.5×10-9M视黄醇是无效的(91%),并且单独使用时,10-7M 4’,5,7-三羟黄烷酮对角化细胞TG酶I水平没有抑制作用。然而,2.5×10-9M视黄醇+10-7M 4′,5,7-三羟黄烷酮抑制角化细胞的TG酶I降到对照物53%的水平。所以,4’,5,7-三羟黄烷酮和视黄醇以类似于视黄酸的作用方式协同抑制角化细胞的分化。实施例124′,5,7-三羟黄烷酮和棕榈酸视黄酯协同抑制角化细胞的分化
用试验化合物处理72小时来测试对TG酶I水平(校正为细胞DNA含量)的影响。结果见表12。
表12
棕榈酸视黄酯与4′,5,7-三羟黄烷酮
对角化细胞TG酶/DNA的影响
处理方式 | 平均TG酶/DNA×105±s.d(%对照) | 与对照相比的P值 | 与2.5×10-8M RP相比的P值 | 与2.5×10-7M RA相比的P值 | 与2.5×10-8M4′,5,7-三羟黄烷酮相比的P值 |
对照 | 50.64±1.74(100%) | - | 0.143 | 0.001 | 0.001 |
2.5×10-7MRA | 16.31±2.58(32%) | 0.001 | 0.001 | - | 0.001 |
2.5×10-8M棕榈酸视黄酯(RP) | 47.32±4.22(93%) | 0.143 | - | 0.001 | 0.296 |
10-8M 4′,5,7-三羟黄烷酮 | 45.01±1.90(89%) | 0.001 | 0.296 | 0.001 | - |
2.5×10-8MRP+10-8M4′,5,7-三羟黄烷酮 | 43.12±13.01(85%) | 0.005 | 0.036 | 0.001 | 0.065 |
由表12结果可见,2.5×10-7M视黄酸对于抑制角化细胞TG酶I水平(为对照物的32%)是非常有效的。2.5×10-9M棕榈酸视黄酯是无效的(93%)并且单独使用时,10-8M 4’,5,7-三羟黄烷酮对角化细胞TG酶I水平具有很小的抑制作用。然而,2.5×10-8M视黄醇+10-9M 4′,5,7-三羟黄烷酮抑制角化细胞的TG酶I到对照物85%的水平。所以,4′,5,7-三羟黄烷酮和棕榈酸视黄酯以类似于视黄酸的作用方式协同抑制角化细胞的分化。实施例13五羟黄酮和视黄醇协同抑制角化细胞的分化
用试验化合物处理72小时来测试对TG酶I水平(校正为细胞的DNA含量)的影响。结果见表13。从Sigma购得五羟黄酮。
表13
处理方式 | 平均TG酶/DNA×105±s.d(%对照) | 与对照相比的P值 | 与2.5×10-7M ROH相比的P值 | 与2.5×10-7M RA相比的P值 | 与10-6M五羟黄酮相比的P值 |
对照 | 69.16±4.26(100%) | - | 0.042 | 0.001 | 0.003 |
2.5×10-7M RA | 35.91±3.01(52%) | 0.001 | 0.001 | - | 0.001 |
2.5×10-7M视黄醇 | 61.93±5.18(90%) | 0.042 | - | 0.001 | 0.328 |
10-6M五羟黄酮 | 59.04±3.38(85%) | 0.003 | 0.328 | 0.001 | - |
2.5×10-7M ROH+10-6M五羟黄酮 | 48.45±8.60(70%) | 0.001 | 0.017 | 0.015 | 0.034 |
由表13结果可见,2.5×10-7M视黄酸对于抑制角化细胞TG酶I水平(为对照物的52%)是非常有效的。2.5×10-7M视黄醇是无效的(90%)并且单独使用时,10-6M五羟黄酮对角化细胞TG酶I水平仅仅具有很小的抑制作用。然而,2.5×10-7M视黄醇+10-6M五羟黄酮抑制角化细胞的TG酶I到对照物70%的水平。所以,五羟黄酮和视黄醇以类似于视黄酸的作用方式协同抑制角化细胞的分化。
在这些研究过程中,视黄酸用作阳性对照和参考化合物,与其它被分析的化合物进行比较。视黄酸以剂量依赖的方式降低皮肤角化细胞中的转谷氨酰胺酶I的水平。换言之,视黄酸降低角化细胞分化。视黄醇和棕榈酸视黄酯抑制角化细胞分化作用明显低于视黄酸。
然而,上述实施例所表明的意想不到的结果是视黄醇或视黄酯对培养的角化细胞的作用可通过视黄醇或酯与0.0001%到50%的某些化合物组合来增强到近乎视黄酸的水平,所述化合物通过体外微粒体测定以100μM的浓度至少抑制20%的LRAT和ARAT催化的视黄醇酯化。该作用不仅大于视黄醇或酯或所述化合物本身的作用,而且两种组分相互协同起作用,以增强其对角化细胞的类似视黄酸的反应。
上述结果表明通过体外微粒体测定的所述化合物与视黄醇和视黄酯协同作用以降低角化细胞的分化和/或增加角化细胞的增殖,模拟视黄酸对角化细胞的作用。
实施例14-19举例说明本发明的主题组合物。这些组合物可以常规方法来制备。它们适于美容使用。具体来说,这些组合物适用于出现皱纹、粗糙、干燥、薄而易剥落、老化和/或UV损害的皮肤,以改善其外观和感觉并也适用于健康皮肤以预防或延缓其衰老。实施例14
该实施例说明本发明组合物中的高内相油包水乳剂。
*布里杰92是聚氧乙烯(2)油基醚实施例15
%w/w | ||||
A | B | C | D | |
视黄醇 | 0.5 | --- | --- | 0.01 |
棕榈酸视黄酯 | --- | 0.15 | 0.15 | --- |
全氢化的椰子油 | 3.9 | 3.9 | 3.9 | 3.9 |
4′,5,7-三羟黄烷酮 | --- | 5 | 0.1 | 5 |
五羟黄酮 | 1 | 1 | --- | --- |
布里杰92* | 5 | 5 | 5 | 5 |
有机皂土-38 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
MgSO4 7H2O | 0.3 | 0.3 | 0.3 | 0.3 |
丁基化的羟基甲苯 | 0.01 | 0.01 | 0.01 | 0.01 |
香料 | 适量 | 适量 | 适量 | 适量 |
水 | 到100 | 到100 | 到100 | 到100 |
该实施例说明本发明的水包油霜剂。
*布里杰56是鲸蜡醇POE(10)Alfol 16RD为鲸蜡醇实施例16
%w/w | ||||
A | B | C | D | |
棕榈酸视黄酯 | --- | 0.15 | 0.15 | --- |
视黄醇 | 0.15 | --- | 0.001 | 0.15 |
矿物油 | 4 | 4 | 4 | 4 |
α-紫罗兰酮 | 1 | --- | --- | 1 |
α-甲基紫罗兰酮 | --- | 0.5 | --- | --- |
新铃兰醛 | --- | --- | --- | 0.2 |
异二氢大马酮 | --- | --- | 0.3 | --- |
布里杰56* | 4 | 4 | 4 | 4 |
Alfol 16RD* | 4 | 4 | 4 | 4 |
三乙醇胺 | 0.75 | 0.75 | 0.75 | 0.75 |
丁-1,3-二醇 | 3 | 3 | 3 | 3 |
黄原胶 | 0.3 | 0.3 | 0.3 | 0.3 |
香料 | 适量 | 适量 | 适量 | 适量 |
丁基化的羟基甲苯 | 0.01 | 0.01 | 0.01 | 0.01 |
水 | 到100 | 到100 | 到100 | 到100 |
本实施例说明本发明的醇性洗剂。
实施例17
%w/w | ||||
A | B | C | D | |
视黄醇 | --- | 0.15 | 0.15 | --- |
棕榈酸视黄酯 | 0.15 | --- | --- | 0.15 |
α-二氢大马酮 | 0.1 | --- | 0.1 | --- |
香叶基香叶醇 | --- | 1 | --- | 0.2 |
乙醇 | 40 | 40 | 40 | 40 |
香料 | 适量 | 适量 | 适量 | 适量 |
丁基化的羟基甲苯 | 0.01 | 0.01 | 0.01 | 0.01 |
水 | 到100 | 到100 | 到100 | 到100 |
该实施例说明含本发明组合物的另一醇性洗剂。
实施例18
%w/w | |
视黄醇 | 0.15 |
油基羟基乙基咪唑啉 | 0.1 |
乙醇 | 40 |
抗氧剂 | 0.1 |
香料 | 适量 |
水 | 到100 |
该实施例说明掺有本发明组合物的防晒霜:
实施例19
%w/w | |
棕榈酸视黄酯 | 0.01 |
椰子基羟基乙基咪唑啉 | 0.1 |
硅油200cts | 7.5 |
单硬脂酸甘油酯 | 3 |
Cetosteryl alcohol | 1.6 |
聚氧乙烯-(20)-鲸蜡醇 | 1.4 |
黄原胶 | 0.5 |
Parsol 1789 | 1.5 |
辛基甲氧基琥珀酸酯(ParsolMCX) | 7 |
香料 | 适量 |
色素 | 适量 |
水 | 到100 |
该实施例说明掺有本发明组合物的非水护肤组合物。
1二甲基硅氧烷聚合物具有至少50000的分子量和在25℃时至少10000厘沲的浓度,购自GEC2二甲基硅氧烷环状五聚物,购自Dow Corning公司3二甲基硅氧烷四聚物,购自Dow Corning公司。
%w/w | |
棕榈酸视黄酯 | 0.15 |
月桂基羟基乙基咪唑啉 | 1 |
硅氧烷胶SE-301 | 10 |
硅氧烷液 3452 | 20 |
硅氧烷液 3443 | 55.79 |
角鲨烯 | 10 |
亚麻酸 | 0.01 |
胆固醇 | 0.03 |
2-羟基-正辛酸 | 0.7 |
维生素E亚麻酸酯 | 0.5 |
植物油 | 0.5 |
乙醇 | 2 |
如果在实施例中没有描述,本发明中所使用的材料经如下途径获得:
棕榈酰辅酶A,BSA,二月桂酰基磷脂酰胆碱,视黄醇,视黄酸二硫代苏醇来自Sigma。
环状脂肪族化合物:
二氢大马酮来自Firmenich;
紫罗兰酮来自IFF;
其它来自Allured Pub.Co.出版的“香料和芳香材料”1991中所述的供应商。咪唑啉表面活性剂:
油酰基咪唑啉是来自Scher化学公司的Schercozoline;其它来自McIntyre,名称为Mackazoline,辛基、椰子基、月桂基分别为:Mackazoline CY,C和L。
Claims (10)
1、一种护肤组合物,含有:
(a)、0.001%-10%选自视黄醇、视黄酯及其混合物的化合物;
(b)、0.0001%-50%的一种化合物,按体外微粒体测定法所示,所述化合物在100μM下抑制至少20%LRAT或ARAT催化的视黄醇酯化作用;其中,所述化合物不是脂肪酸酰胺或二甲基咪唑啉酮;和
(c)、从美容上可接受的赋形剂。
2、权利要求1的组合物,其中所述化合物(b)选自环状脂肪族不饱和烃、二萜、二氢黄酮、黄酮醇、脂肪羟基乙基咪唑啉表面活性剂及其混合物。
3、权利要求2的组合物,其中环状脂肪族不饱和化合物选自α-二氢大马酮、β-二氢大马酮、δ-二氢大马酮、异二氢大马酮、大马酮、α-紫罗酮、β-紫罗酮、烯丙基α-紫罗酮、异丁基紫罗酮、α-甲基紫罗酮、γ-甲基紫罗酮、婆罗门醇(brahmanol)、檀香醇(sandanol)、α-松油醇、新铃兰醛、藏花乙酯(ethyl saffranate)及其混合物。
4、权利要求2或3的组合物,其中二萜为香叶基香叶醇。
5、权利要求2-4的任一组合物,其中二氢黄酮为4′,5,7-三羟黄烷酮。
6、权利要求2-5的任一组合物,其中黄酮醇为五羟黄酮。
8、权利要求1-7的任一组合物,其中视黄酯选自棕榈酸视黄酯、乙酸视黄酯、丙酸视黄酯、亚油酸视黄酯及其混合物。
9、一种调理皮肤的美容方法,该方法包括将权利要求1-8的任一组合物局部涂于皮肤上。
10、一种模拟视黄酸作用皮肤的美容方法,该方法包括将权利要求1-8的任一组合物涂在皮肤上。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US2682496P | 1996-09-27 | 1996-09-27 | |
US60/026,824 | 1996-09-27 | ||
US60/026824 | 1996-09-27 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN1253493A true CN1253493A (zh) | 2000-05-17 |
CN1105554C CN1105554C (zh) | 2003-04-16 |
Family
ID=21833981
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN97180116A Expired - Lifetime CN1105554C (zh) | 1996-09-27 | 1997-09-18 | 包含能模拟视黄酸对皮肤之作用的化合物结合物的护肤组合物 |
Country Status (16)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0932387B1 (zh) |
JP (1) | JP3589469B2 (zh) |
KR (1) | KR100330678B1 (zh) |
CN (1) | CN1105554C (zh) |
AR (1) | AR009096A1 (zh) |
AU (1) | AU714271B2 (zh) |
BR (1) | BR9712124A (zh) |
CA (1) | CA2265635C (zh) |
CZ (1) | CZ295983B6 (zh) |
DE (1) | DE69719528T2 (zh) |
ES (1) | ES2193357T3 (zh) |
ID (1) | ID21932A (zh) |
PL (1) | PL188574B1 (zh) |
TW (1) | TW503112B (zh) |
WO (1) | WO1998013020A1 (zh) |
ZA (1) | ZA978660B (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1330291C (zh) * | 2000-12-28 | 2007-08-08 | 荷兰联合利华有限公司 | 稳定的含有类维生素a和类维生素a增强剂***的护肤组合物 |
CN109689033A (zh) * | 2016-04-28 | 2019-04-26 | 星火治疗有限公司 | 病毒载体编码异构水解醇的相对效力测定 |
Families Citing this family (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1053988B1 (en) * | 1998-02-02 | 2008-12-31 | Takasago International Corporation | Trimethylcyclohexane derivatives and melanin-formation inhibitors and perfume-holding agents with the use of the same |
DE19834816A1 (de) * | 1998-08-01 | 2000-02-03 | Merck Patent Gmbh | Verwendung von Ectoin oder Ectoin-Derivaten in kosmetischen Formulierungen |
GB9918022D0 (en) * | 1999-07-30 | 1999-09-29 | Unilever Plc | Skin care composition |
GB9918025D0 (en) * | 1999-07-30 | 1999-09-29 | Unilever Plc | Skin care composition |
EP1104672A1 (de) * | 1999-12-02 | 2001-06-06 | Laboratoires Serobiologiques(Societe Anonyme) | Kosmetische und/oder pharmazeutische Zubereitungen |
BR0112142A (pt) * | 2000-06-30 | 2003-10-07 | Unilever Nv | Composição para cuidado com a pele e métodos cosméticos de condicionar a pele e de reproduzir o efeito sobre a pele de ácido retinóico |
KR100432797B1 (ko) * | 2000-08-03 | 2004-05-24 | 민병무 | 레티노산 화합물을 유효성분으로 함유하는 인간 정상 피부의 복제 노화 예방용 화장품 |
US7048910B2 (en) | 2000-09-07 | 2006-05-23 | Merck Patent Gmbh | Use of ectoine or ectoine derivatives for oral care |
AU2002226373A1 (en) * | 2000-12-28 | 2002-07-16 | Unilever Plc | Skin care product containing a retinoid and a retinoid booster system in a dual compartment package |
US20020168389A1 (en) * | 2000-12-28 | 2002-11-14 | Prem Chandar | Stable skin conditioning compositions containing retinoid boosters |
WO2002067988A2 (en) * | 2001-02-27 | 2002-09-06 | The Regents Of The University Of Michigan | Use of natural egfr inhibitors to prevent side effects due to retinoid therapy, soaps, and other stimuli that activate the epidermal growth receptor |
DE10214257A1 (de) | 2002-03-28 | 2003-10-16 | Merck Patent Gmbh | Verwendung von kompatiblen Soluten zur Inhibierung der Freisetzung von Ceramiden |
JP3926711B2 (ja) * | 2002-08-30 | 2007-06-06 | 株式会社ファンケル | 表皮の偏平化を予防、防止、改善する皮膚老化防止用組成物 |
US20080227868A1 (en) | 2004-03-26 | 2008-09-18 | Volker Schehlmann | Composition Comprising an Hdac Inhibitor in Combination with a Retinoid |
US7175836B1 (en) | 2005-12-23 | 2007-02-13 | Conopco, Inc. | Oil continuous phase cosmetic emulsions with conjugated linoleic acid |
US7175835B1 (en) | 2005-12-23 | 2007-02-13 | Conopco, Inc. | Cosmetic emulsions with inorganic sunscreens stabilized with conjugated linoleic acid |
US7172754B1 (en) | 2005-12-23 | 2007-02-06 | Conopco, Inc. | Cosmetic emulsions with sunscreens and conjugated linoleic acid |
FR2968972B1 (fr) * | 2010-12-17 | 2012-12-14 | Oreal | Utilisation du linoleate de retinyle comme agent apaisant, pour la prevention et/ou le traitement de reactions cutanees specifiques |
WO2015046315A1 (ja) * | 2013-09-30 | 2015-04-02 | 学校法人東京女子医科大学 | 細胞の培養法 |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2558058B1 (fr) * | 1984-01-18 | 1987-03-20 | Pf Medicament | Compositions dermatologiques a usage topique externe, a base de metronidazole utiles pour le traitement de l'acne |
FR2666226B1 (fr) * | 1990-08-30 | 1994-10-28 | Jean Noel Thorel | Composition protectrice de la peau. |
RO109503B1 (ro) * | 1992-02-17 | 1995-03-30 | Constantin Nistor | Cremă antisolară |
ES2289370T3 (es) * | 1992-07-13 | 2008-02-01 | Shiseido Company, Ltd. | Composicion estabilizada para tratamiento cutaneo externo que comprende retinol. |
EP0601698B1 (en) * | 1993-10-22 | 1998-07-08 | Shiseido Company Limited | Topical composition comprising tocopherol |
US5818139A (en) * | 1994-07-25 | 1998-10-06 | Daikin Industries, Ltd. | Brushless DC motor |
IT1273742B (it) * | 1994-08-01 | 1997-07-09 | Lifegroup Spa | Composizioni ad elevata bioadesivita' e mucoadesivita' utili per il trattamento di epitali e mucose |
US5536740A (en) * | 1995-06-01 | 1996-07-16 | Elizabeth Arden Company, Division Of Conopco, Inc. | Skin care compositions containing dimethyl imidazolidinone and retinol or retinyl ester |
US5665367A (en) * | 1996-09-27 | 1997-09-09 | Chesebrough-Pond's Usa Co., Division Of Conopco, Inc. | Skin care compositions containing naringenin and/or quercetin and a retinoid |
-
1997
- 1997-09-18 CA CA002265635A patent/CA2265635C/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-09-18 WO PCT/EP1997/005150 patent/WO1998013020A1/en active IP Right Grant
- 1997-09-18 AU AU47758/97A patent/AU714271B2/en not_active Ceased
- 1997-09-18 ES ES97910315T patent/ES2193357T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-09-18 CZ CZ19991089A patent/CZ295983B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1997-09-18 DE DE69719528T patent/DE69719528T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-09-18 JP JP51524198A patent/JP3589469B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1997-09-18 ID IDW990131A patent/ID21932A/id unknown
- 1997-09-18 CN CN97180116A patent/CN1105554C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1997-09-18 PL PL97332430A patent/PL188574B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1997-09-18 BR BR9712124-0A patent/BR9712124A/pt not_active Application Discontinuation
- 1997-09-18 EP EP97910315A patent/EP0932387B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-09-18 KR KR1019997002662A patent/KR100330678B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1997-09-26 ZA ZA978660A patent/ZA978660B/xx unknown
- 1997-09-29 AR ARP970104468A patent/AR009096A1/es active IP Right Grant
- 1997-12-16 TW TW086118986A patent/TW503112B/zh not_active IP Right Cessation
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1330291C (zh) * | 2000-12-28 | 2007-08-08 | 荷兰联合利华有限公司 | 稳定的含有类维生素a和类维生素a增强剂***的护肤组合物 |
CN109689033A (zh) * | 2016-04-28 | 2019-04-26 | 星火治疗有限公司 | 病毒载体编码异构水解醇的相对效力测定 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DE69719528T2 (de) | 2003-11-06 |
BR9712124A (pt) | 1999-08-31 |
ZA978660B (en) | 1999-03-26 |
TW503112B (en) | 2002-09-21 |
PL332430A1 (en) | 1999-09-13 |
EP0932387A1 (en) | 1999-08-04 |
DE69719528D1 (de) | 2003-04-10 |
AU4775897A (en) | 1998-04-17 |
ID21932A (id) | 1999-08-12 |
CZ295983B6 (cs) | 2005-12-14 |
AR009096A1 (es) | 2000-03-08 |
KR20000048705A (ko) | 2000-07-25 |
PL188574B1 (pl) | 2005-02-28 |
KR100330678B1 (ko) | 2002-04-03 |
WO1998013020A1 (en) | 1998-04-02 |
AU714271B2 (en) | 1999-12-23 |
JP3589469B2 (ja) | 2004-11-17 |
CA2265635C (en) | 2005-07-05 |
CA2265635A1 (en) | 1998-04-02 |
CZ108999A3 (cs) | 1999-08-11 |
JP2000503031A (ja) | 2000-03-14 |
ES2193357T3 (es) | 2003-11-01 |
CN1105554C (zh) | 2003-04-16 |
EP0932387B1 (en) | 2003-03-05 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN1105554C (zh) | 包含能模拟视黄酸对皮肤之作用的化合物结合物的护肤组合物 | |
CN1208045C (zh) | 含有脂肪酸酰胺、唑类化合物和视黄醇或视黄酯的护肤组合物 | |
CN1104889C (zh) | 含有酰胺和类视色素的皮肤护理组合物 | |
CN1162145C (zh) | 化妆组合物 | |
CN1100528C (zh) | 在包含羟基酸或类视色素的组合物中作为抗刺激剂的琉璃苣种子油 | |
CN1237897A (zh) | 含有酸和类视色素的皮肤护理组合物 | |
TWI245633B (en) | A composition for external application of skin | |
CN1133417C (zh) | 维生素b3化合物调节皮肤外观的方法 | |
DE69616414T2 (de) | Hautpflegemittel enthaltend Fettsäureamide und Retinol oder Retinylester | |
AU681805B2 (en) | Product for topical application containing a lipase and an active ingredient precursor | |
DE69618276T2 (de) | Hautpflegemitteln enthaltende Dimethylimidazolidone und Retinol- oder Retinyl-ester | |
CN1093757C (zh) | 含有酰胺和视黄醇或视黄酯的皮肤护理组合物 | |
CN1248908A (zh) | 抗皮脂和抗氧化剂的组合物 | |
CN1376051A (zh) | 皮肤护理组合物 | |
CN1787806A (zh) | 皮肤病的局部治疗 | |
CN1423550A (zh) | 含有鹰嘴豆提取物和类维生素a化合物的化妆品组合物 | |
CN1188109C (zh) | 含岩芹酸的护肤组合物 | |
CN1287764C (zh) | 在双室包装中含有类维生素a和植物***的皮肤护理产品 | |
CN1108147C (zh) | 含亚油甲苄胺和类视黄酸的护肤组合物 | |
CN1226995C (zh) | 含有茴香提取物和类维生素a化合物的化妆品组合物 | |
CN1255090C (zh) | 在双室包装中含有类维生素a、类维生素a增效剂和植物***的皮肤护理产品 | |
WO1995035092A1 (fr) | Activateur dermatologique accelerant la production de glucosaminoglycane | |
US20180280287A1 (en) | Method and composition for a sacha inchi perennial plant extract based health and beauty aid | |
CN1241534C (zh) | 含有枯醇的美容皮肤护理组合物 | |
CN1224376C (zh) | 含支链醇和/或其乙氧基化物的羧甲基化物的护肤化妆品组合物 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
C56 | Change in the name or address of the patentee |
Owner name: UNILEVER N.V. Free format text: FORMER NAME: UNILEVER NV |
|
CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: Rotterdam Patentee after: Unilever N. V. Address before: Rotterdam Patentee before: Unilever NV |
|
CX01 | Expiry of patent term |
Granted publication date: 20030416 |
|
CX01 | Expiry of patent term |