CN117603962A - 一种样本中dna与rna共提取通用方法 - Google Patents
一种样本中dna与rna共提取通用方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117603962A CN117603962A CN202410089808.5A CN202410089808A CN117603962A CN 117603962 A CN117603962 A CN 117603962A CN 202410089808 A CN202410089808 A CN 202410089808A CN 117603962 A CN117603962 A CN 117603962A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- rna
- dna
- buffer
- value
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 71
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims abstract description 37
- 238000005336 cracking Methods 0.000 claims abstract description 19
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 120
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 74
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 67
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 claims description 64
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 claims description 59
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 57
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 57
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 52
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 41
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 28
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 27
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 23
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 22
- ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N guanidinium thiocyanate Chemical compound SC#N.NC(N)=N ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 13
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 claims description 8
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 7
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 6
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 6
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 6
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 claims description 6
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 claims description 5
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 claims description 5
- VGTPCRGMBIAPIM-UHFFFAOYSA-M sodium thiocyanate Chemical compound [Na+].[S-]C#N VGTPCRGMBIAPIM-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- 238000007399 DNA isolation Methods 0.000 claims description 4
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 claims description 3
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- JGDITNMASUZKPW-UHFFFAOYSA-K aluminium trichloride hexahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.Cl[Al](Cl)Cl JGDITNMASUZKPW-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- 229940009861 aluminum chloride hexahydrate Drugs 0.000 claims description 3
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 claims description 3
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 claims description 3
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 claims description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 14
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract description 11
- 238000000658 coextraction Methods 0.000 abstract description 10
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 24
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 16
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 8
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- MCMNRKCIXSYSNV-UHFFFAOYSA-N Zirconium dioxide Chemical compound O=[Zr]=O MCMNRKCIXSYSNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 4
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 239000006004 Quartz sand Substances 0.000 description 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 3
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 3
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- -1 for example Substances 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 2
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 2
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 2
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000004500 asepsis Methods 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 238000011095 buffer preparation Methods 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- FFYPMLJYZAEMQB-UHFFFAOYSA-N diethyl pyrocarbonate Chemical compound CCOC(=O)OC(=O)OCC FFYPMLJYZAEMQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000383 hazardous chemical Substances 0.000 description 1
- 238000013090 high-throughput technology Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
- C12N15/1006—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及DNA与RNA共提取技术领域,本发明公开了一种样本中DNA与RNA共提取通用方法,包括下列步骤:1)柱膜准备,2)裂解,将缓冲液1A与缓冲液1B加入所述裂解介质管;3)去杂,4)DNA/RNA分离,5)RNA纯化,6)DNA纯化,7)漂洗8)洗脱,将柱子转移到DNA与RNA回收管;收集的滤液为RNA/DNA,用于下游应用;本发明简化了操作步骤,缩短了操作时间,降低了操作失误,提高了提取效果;有效提高产量与纯度,将潜在污染风险降低,提高了结果的准确性与可靠性;适用于高通量处理,满足了大规模样本处理的要求;适用于大部分样本。
Description
技术领域
本发明涉及DNA与RNA共提取技术领域,尤其涉及一种样本中DNA与RNA共提取通用方法。
背景技术
随着科技的进步与发展,人们在生物医学、基因组学、药物开发、农业科学等领域中的样本需要进行DNA/RNA提取,所以往往需要进行DNA与RNA的共提取;DNA和RNA共提取技术具有重要的实用价值,可以为基础科学研究、医学诊断和药物开发等领域提供更全面的信息和便利。
DNA与RNA共提取技术的发展一直在不断进行,以满足研究人员对于同时获得DNA和RNA的需求。现有社会下,DNA与RNA共提取技术在简化操作、提高效率和保证质量等方面有了显著的进展。这些技术的不断发展为分子生物学研究、临床诊断和个体化医学等领域提供了更多的可能性,并促进了对基因组和转录组的全面理解。
虽然DNA和RNA共提取技术在分子生物学研究中得到了广泛应用,但也存在一些缺点和限制。以下是一些常见的DNA与RNA共提取技术的缺点:
1.复杂操作:传统的DNA和RNA共提取方法通常需要多个步骤和复杂的实验操作,包括细胞破碎、核酸分离、洗涤和纯化等。这些步骤需要耗费大量时间和精力,并且容易出现操作失误,影响提取效果。
2.低产量和低纯度:传统方法在提取过程中可能会导致DNA/RNA的损失和降解,从而导致提取的产量较低和纯度较差。特别是对于某些难以裂解的样本(如硬质组织),传统方法的效果更为有限。
3.潜在污染风险:传统方法中使用的有机溶剂和试剂可能会引入潜在的污染物,例如酚/氯仿等有机溶剂可能含有有害物质。这些污染物可能对后续的实验和分析产生干扰,特别是对于低丰度的目标核酸,影响结果的准确性和可靠性。
4.不适用于高通量处理:传统方法通常是手工操作,适用于小规模的样本处理。大规模样品处理时,可能需要进行分批处理,增加实验的复杂性和时间成本。随着高通量技术的发展和需求的增加,传统方法无法满足大规模样本处理的要求,效率较低且容易出现操作误差。
5.样品限制:某些DNA和RNA共提取方法对样品处理量有限制,对提取样本的类型有限制,多集中在细胞和组织等样品,对于其他样品类型,如土壤、粪便等环境样本,血液、尿液、唾液等体液样本处理能力有限。
通过上述描述,可知,现有情况下急需一种样本中DNA与RNA共提取通用方法来解决问题。
发明内容
为了解决上述问题本发明提供了一种样本中DNA与RNA共提取通用方法。
本发明的方案是:
一种样本中DNA与RNA共提取通用方法,包括下列步骤:
1)柱膜准备
DNA提取柱与RNA提取柱分别加入平衡缓冲液,等待≥1min,最大速度离心10s,将硅胶柱膜分别转移到相应新的收集管中;
2)裂解
称量样本添加到裂解介质管中;将缓冲液1A与缓冲液1B加入所述裂解介质管;通过设备裂解;通过设备离心;缓冲液1A与缓冲液1B的使用,避免使用酚/氯仿裂解;
3)去杂
取上清液转入2.0 mL 微型离心管;加入缓冲液2号沉淀污染物,涡旋1s,最大速度离心2min;
4)DNA/RNA分离
将上清液转移到2.0 mL 微型离心管中,加入缓冲液3号,旋涡1s,得到溶液A;上清液与缓冲液3号的体积比为1:1;
向DNA提取柱中加入溶液A,离心,滤液用于RNA纯化;
5)RNA纯化
滤液中加入缓冲液4号,涡旋1s,得到溶液B;上清液、缓冲液3号与缓冲液4号的体积比为1:1:1;
将溶液B加入RNA提取柱,离心10s,弃滤液;重复此步骤直至全部过柱;
将RNA提取柱转移到新的RNA 收集管中;准备漂洗;
6)DNA纯化:
DNA提取柱关闭收集管盖子,准备漂洗;
7)漂洗
在柱子中心加入缓冲液5号,离心,弃滤液;
在柱子中心加入缓冲液6号,离心,弃滤液;
在柱子中心加入缓冲液6号,离心30s;
将柱子放入新的收集管,最大速度离心1min;
8)洗脱
将柱子转移相匹配的DNA与RNA回收管;
向柱子中央加入无酶无菌水,最大速度离心1min;收集的滤液分别为RNA与DNA,用于下游应用。
作为优选的技术方案,所述5)获得的RNA收集管中RNA提取柱与6)步骤获得的DNA收集管中DNA提取柱分别执行7)步骤。
作为优选的技术方案,所述2)中将缓冲液1A与缓冲液1B加入所述裂解介质管,还加入β-巯基乙醇。
作为优选的技术方案,所述裂解介质管中的裂解介质为氧化锆珠和石英砂的混合物。
作为优选的技术方案,所述缓冲液1A制备方法为:
1)称取表面活性剂、磷酸二氢钠、EDTA-2Na到配液桶中,向配液桶中加入焦碳酸二乙酯处理水,搅拌≥10分钟直至固体溶解,溶液澄清透明;
2)用pH计测试溶液的pH值,pH值为3.7~4.3;使用氢氧化钠溶液调节溶液pH至6.0~6.6,获得缓冲液1A。
作为优选的技术方案,所述表面活性剂为十二烷基硫酸钠 、Triton X-100 、Tween20其中的一种。
作为优选的技术方案,所述缓冲液1B制备方法为:
1)称取硫氰酸钠溶液、磷酸二氢钠放入到配液桶中;向配液桶中加入焦碳酸二乙酯处理水,搅拌≥10分钟,直至固体溶解,溶液澄清透明;
2)用pH计测试溶液的pH值,pH值为3.4~4.0;使用氢氧化钠溶液调节溶液pH至7.4~8.0,pH调好后,向溶液中加入表面活性剂,搅拌至溶解,获得缓冲液1B。
作为优选的技术方案,所述表面活性剂为十二烷基硫酸钠 、Triton X-100 、Tween20其中的一种。
作为优选的技术方案,所述缓冲液2号制备方法为:
1)称取氯化铝六水合物、乙酸铵到配液桶;向配液桶中加入焦碳酸二乙酯处理水,搅拌≥10分钟直至固体溶解,溶液澄清透明;
2)用pH计测试溶液的pH值,pH值为6.5~7.1,获得缓冲液2号,配制完成在2~8℃保存;所述缓冲液2号用量为300 µL/样品。
作为优选的技术方案,所述缓冲液3号制备方法为:
1)称取硫氰酸胍、Tris-HCl放入到配液桶中;向配液桶中加入焦碳酸二乙酯处理水,45℃水浴加热溶解,搅拌≥10分钟直至固体溶解,溶液澄清透明;
2)用pH计测试溶液的pH值,pH值为4.3~4.9;使用氢氧化钠溶液调节溶液pH至6.0~6.6,获得缓冲液3号。
作为优选的技术方案,所述缓冲液4号制备方法为:1)称取硫氰酸胍、Tris-HCl放入到配液桶中;向配液桶中加入焦碳酸二乙酯处理水,搅拌、水浴加热溶解;搅拌≥10分钟直至固体溶解,溶液澄清透明;
2)用pH计测试溶液的pH值,pH值为4.3~4.9;使用氢氧化钠溶液调节溶液pH至6.0~6.6;
3)按照40~60%比例向溶液中加入异丙醇,获得缓冲液4号。
作为优选的技术方案,所述缓冲液5号制备方法:
1)称取硫氰酸胍、Tris-HCl放入到配液桶中;向配液桶中加入焦碳酸二乙酯处理水,搅拌、水浴加热溶解,搅拌≥10分钟直至固体溶解,溶液澄清透明;
2)用pH计测试溶液的pH值,pH值为4.3-4.9;使用氢氧化钠溶液调节溶液pH至7.0~7.6;
3)按照10~30%比例向溶液中加入乙醇,获得缓冲液5号。
作为优选的技术方案,所述缓冲液6号制备方法:
1)称取Tris-HCl与Tris放入到塑料配液桶中;向配液桶中加入焦碳酸二乙酯处理水,搅拌≥10分钟直至固体溶解,溶液澄清透明;
2)用pH计测试溶液的pH值,pH值为6.2~6.8;使用氢氧化钠溶液调节溶液pH至7.0~7.6;
3)按照70~90%比例向溶液中加入乙醇,获得缓冲液6号。
作为优选的技术方案,适用样本的种类包括土壤、粪便、血液、尿液、唾液中的任意一种。
由于采用了上述技术方案一种样本中DNA与RNA共提取通用方法,包括下列步骤:1)柱膜准备,DNA提取柱与RNA提取柱分别加入平衡缓冲液,等待≥1min,最大速度离心10s,将硅胶柱膜分别转移到相应新的收集管中;2)裂解,称量样本添加到裂解介质管中;将缓冲液1A与缓冲液1B加入所述裂解介质管;通过设备裂解;通过设备离心;3)去杂,取上清液转入2.0 mL 微型离心管;加入缓冲液2号沉淀污染物,涡旋1s,最大速度离心2min;4)DNA/RNA分离,将上清液转移到2.0 mL 微型离心管中,加入缓冲液3号,旋涡1s,得到溶液A;上清液与缓冲液3号的体积比为1:1;向DNA提取柱中加入溶液A,离心,滤液用于RNA纯化;5)RNA纯化,滤液中加入缓冲液4号,涡旋1s,得到溶液B;上清液、缓冲液3号与缓冲液4号的体积比为1:1:1;将溶液B加入RNA提取柱,离心10s,弃滤液;重复此步骤直至全部过柱;将RNA提取柱转移到新的RNA 收集管中;准备漂洗;6)DNA纯化,DNA提取柱关闭收集管盖子,准备漂洗;7)漂洗,在柱子中心加入缓冲液5号,离心,弃滤液;在柱子中心加入缓冲液6号,离心,弃滤液;在柱子中心加入缓冲液6号,离心30s;将柱子放入新的收集管,最大速度离心1min;8)洗脱,将柱子转移到相匹配的DNA与RNA回收管;向柱子中央加入无酶无菌水,最大速度离心1min;收集的滤液分别为RNA与DNA,用于下游应用。
本发明的优点:
本发明简化了操作步骤,缩短了操作时间,降低了操作失误,提高了提取效果;有效提高产量与纯度,将潜在污染风险降低,提高了结果的准确性与可靠性;适用于高通量处理,满足了大规模样本处理的要求;适用于大部分样本。
附图说明
图1为本发明实施例1测试缓冲液2号不同用量的DNA-Nano浓度数据图;
图2为本发明实施例1测试缓冲液2号不同用量的DNA-260/280数据图;
图3为本发明实施例1测试缓冲液2号不同用量的DNA-260/230数据图;
图4为本发明实施例1测试缓冲液2号不同用量提取250mg SG4土壤DNA的电泳图;
图5为本发明实施例1测试缓冲液2号不同用量提取500mg SG4土壤DNA的电泳图;
图6为本发明实施例1测试缓冲液2号不同用量的RNA-Nano浓度数据图;
图7为本发明实施例1测试缓冲液2号不同用量的RNA-260/280数据图;
图8为本发明实施例1测试缓冲液2号不同用量的RNA-260/230数据图;
图9为本发明实施例1测试缓冲液2号不同用量提取250mg SG4土壤RNA的电泳图;
图10为本发明实施例1测试缓冲液2号不同用量提取500mg SG4土壤RNA的电泳图;
图11为本发明实施例1测试缓冲液2号不同用量和加入缓冲液2号后不同离心时间对DNA和RNA提取的数据表图;
图12为本发明实施例1测试缓冲液2号不同用量和加入缓冲液2号后不同离心时间对DNA影响的电泳图;
图13为本发明实施例1测试缓冲液2号不同用量和加入缓冲液2号后不同离心时间对RNA影响的电泳图;
图14为本发明实施例1测试缓冲液2号不同用量和加入缓冲液2号后不同离心时间对DNA和RNA的Nano浓度数据图;
图15为本发明实施例1测试缓冲液2号不同用量和加入缓冲液2号后不同离心时间对DNA和RNA的A260/A280数据图;
图16为本发明实施例1测试缓冲液2号不同用量和加入缓冲液2号后不同离心时间对DNA和RNA的A260/A230数据图;
图17为本发明实施例1中测试对DNA提取的数据图;
图18为本发明实施例1中测试缓冲液4号中异丙醇不同比例对RNA影响的数据图;
图19为本发明实施例1中测试对DNA提取的电泳图;
图20为本发明实施例1中测试缓冲液4号中异丙醇不同比例对RNA影响的电泳图;
图21为本发明实施例1中测试不同DNA提取柱对DNA与RNA提取影响的数据图;
图22为本发明实施例1中测试不同DNA提取柱对DNA提取影响的电泳图;
图23为本发明实施例1中测试不同DNA提取柱对RNA提取影响的电泳图;
图24为本发明实施例1中测试不同DNA提取柱对DNA与RNA提取的Nano浓度数据图,其中横向坐标轴上组别中数字分别对应图22中设置的相应数字组;
图25为本发明实施例1中测试不同DNA提取柱对DNA与RNA提取的A260/A280数据图,其中横向坐标轴上组别中数字分别对应图22中设置的相应数字组;
图26为本发明实施例1中测试不同DNA提取柱对DNA与RNA提取的A260/A230数据图,其中横向坐标轴上组别中数字分别对应图22中设置的相应数字组;
图27为本发明实施例1中测试不同RNA提取柱对DNA和RNA提取的影响数据图;
图28为本发明实施例1中测试不同RNA提取柱对RNA提取影响的电泳图;
图29为本发明实施例1中测试对DNA提取的电泳图;
图30为本发明实施例1中测试不同RNA提取柱对DNA和RNA提取的Nano浓度数据图,其中横向坐标轴上组别中数字分别对应图28中设置的相应数字组;
图31为本发明实施例1中测试不同RNA提取柱对DNA和RNA提取的A260/A280数据图,其中横向坐标轴上组别中数字分别对应图22中设置的相应数字组;
图32为本发明实施例1中测试不同RNA提取柱对DNA和RNA提取的A260/A230数据图,其中横向坐标轴上组别中数字分别对应图22中设置的相应数字组;
图33为本发明测试实施例1与对比例对相同样本DNA和RNA提取的Nano浓度数据差别图;
图34为本发明测试实施例1与对比例对相同样本DNA和RNA提取的A260/A280数据差别图;
图35为本发明测试实施例1与对比例对相同样本DNA和RNA提取的A260/A230数据差别图;
图36为本发明测试实施例1与对比例对相同样本DNA提取的电泳差别图;
图37为本发明测试实施例1与对比例对相同样本RNA提取的电泳差别图;
图38为本发明测试实施例1与对比例对DNA提取的Nano浓度数据差别图;
图39为本发明测试实施例1与对比例对RNA提取的Nano浓度数据差别图;
图40为本发明测试实施例1与对比例对DNA与RNA提取的电泳差别图;
图41为本发明测试实施例1与对比例对DNA提取的A260/A280数据差别图;
图42为本发明测试实施例1与对比例对DNA提取的A260/A230数据差别图;
图43为本发明测试实施例1与对比例对RNA提取的A260/A280数据差别图;
图44为本发明测试实施例1与对比例对RNA提取的A260/A230数据差别图;
图45为本发明测试实施例2与对比例对DNA与RNA提取的Nano浓度数据差别图;
图46为本发明测试实施例2与对比例对DNA与RNA提取的A260/A280数据差别图;
图47为本发明测试实施例2与对比例对DNA与RNA提取的A260/A230数据差别图;
图48为本发明测试实施例2与对比例对DNA与RNA提取的电泳差别图。
具体实施方式
本发明提供了一种样本中DNA与RNA共提取通用方法。
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解,下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。
1)柱膜准备
DNA提取柱与RNA提取柱分别加入平衡缓冲液,等待≥1min,最大速度离心10s,将硅胶柱膜分别转移到相应新的收集管中;
2)裂解
称量样本添加到裂解介质管中;将150μL缓冲液1A与600μL缓冲液1B加入所述裂解介质管(如果担心核酸完整性可添加8 μL β-巯基乙醇);2500~2700rpm 涡旋15 min或设备以5m/sec裂解35sec;最大速度离心2min;
3)去杂
取上清液转入2.0 mL 微型离心管;加入300μL缓冲液2号沉淀污染物,涡旋1s,最大速度离心2min;
4)DNA/RNA分离
将上清液转移到2.0 mL 微型离心管中,加入1体积的缓冲液3号,旋涡1s,得到溶液A;上清液与缓冲液3号的体积比为1:1;
向DNA提取柱中加入700μL溶液A,15000rpm离心10s,收集滤液,盖上装有滤液的收集管盖子;
将DNA提取柱放入新的DNA收集管中,将剩余的溶液A加入DNA提取柱,15000rpm离心10s,收集滤液,盖上装有滤液的收集管盖子;将DNA 提取柱放入新的DNA收集管中,并将两次的滤液混合用于RNA纯化;
5)RNA纯化
滤液中加入步骤4)上清液1体积的缓冲液4号,涡旋1s,得到溶液B;上清液、缓冲液3号与缓冲液4号的体积比为1:1:1;
将800μL溶液B加入RNA提取柱,15000rpm离心10s,弃滤液;重复此步骤直至全部过柱;
将RNA提取柱转移到新的RNA 收集管中,准备漂洗;
6)DNA纯化:
DNA提取柱关闭收集管盖子,准备漂洗;
7)漂洗
向DNA提取柱和RNA提取柱中心分别加入700μL缓冲液5号,15000rpm离心10s,弃滤液;
向DNA提取柱和RNA提取柱中心分别加入700μL缓冲液6号,15000rpm离心10s,弃滤液;
向DNA提取柱和RNA提取柱中心分别加入500μL缓冲液6号,15000rpm离心30s;
将DNA提取柱和RNA提取柱分别放入新的收集管,最大速度离心1min;
8)洗脱
将DNA提取柱和RNA提取柱分别转移到DNA收集管和RNA收集管;
向DNA提取柱和RNA提取柱中心分别加入100μL无酶无菌水,最大速度离心1min;收集的滤液分别为DNA与RNA,用于下游应用。
所述裂解介质管中的裂解介质为氧化锆珠和石英砂的混合物。
裂解介质配制表
所述样本为250~500mg的土壤(SG4)。
1.焦碳酸二乙酯处理水配制
表1:
(1)称量纯化水加入到玻璃配液瓶中,用移液枪准确抽取DEPC液体,加入到称好的纯化水中,盖好瓶盖,将玻璃配液瓶水平放在桌面上,快速摇动直至有大量白色气泡产生,再继续摇2min,竖起玻璃配液瓶后气泡快速消失,目视DEPC已完全融入水中,瓶身上无明显DEPC挂壁痕迹,再静置12小时以上。
(2)溶液静置后,需高温灭菌处理。配液瓶盖拧松后,将配液瓶放入高温灭菌锅中,121℃灭菌30分钟。配制完成后盖好盖子存放备用,并在两周内使用,过期作废。
2.缓冲液 1A配制
表2:
(1)称取表面活性剂、磷酸二氢钠、EDTA-2Na到配液桶中,向配液桶中加入焦碳酸二乙酯处理水,至少搅拌10分钟直至固体溶解,溶液澄清透明。所述表面活性剂为十二烷基硫酸钠。
(2)用pH计测试溶液的pH值,pH值(25 ℃)应在3.7-4.3。使用氢氧化钠溶液调节溶液pH至6.0-6.6。
3.缓冲液1B配制
表3:
(1)称取硫氰酸钠溶液、磷酸二氢钠放入到配液桶中。向配液桶中加入焦碳酸二乙酯处理水,至少搅拌10分钟直至固体溶解,溶液澄清透明。
(2)用pH计测试溶液的pH值,pH值(25 ℃)应在3.4~4.0。使用NaOH溶液调节溶液pH至7.4~8.0。pH调好后,向溶液中加入表面活性剂,搅拌至溶解。所述表面活性剂为Triton X-100 。
4.缓冲液2号配制
表4:
(1)称取氯化铝六水合物、乙酸铵到配液桶。向配液桶中加入焦碳酸二乙酯处理水,至少搅拌10分钟直至固体溶解,溶液澄清透明。
(2)用pH计测试溶液的pH值,pH值(25℃)应为6.5-7.1,此溶液不用调节pH值。注意:配好后需2-8℃保存。
缓冲液2号操作过程中用量为300 µL/样品,分别测试过150/200/250/300 µL四种不同用量,随着使用量的增加,提取DNA和RNA的收率会有不同程度降低,但是纯度会提升,经验证将这一步骤的离心时间由1分钟增加到2分钟,在用量是300 µL/样品的情况下增加收率并保持高纯度(详见图1、图2、图3、图4、图5、图6、图7、图8、图9、图10、图11、图12、图13、图14、图15与图16)
5.缓冲液3号配制
表5:
(1)称取硫氰酸胍、Tris-HCl放入到配液桶中。向配液桶中加入焦碳酸二乙酯处理水,至少搅拌10分钟直至固体溶解,溶液澄清透明。
(2)用pH计测试溶液的pH值,pH值(25℃)应在4.3~4.9。使用NaOH溶液调节溶液pH至6.0~6.6。
6.缓冲液4号配制
表6:
(1)称取硫氰酸胍、Tris-HCl放入到配液桶中。向配液桶中加入焦碳酸二乙酯处理水,至少搅拌10分钟直至固体溶解,溶液澄清透明。
(2)用pH计测试溶液的pH值,pH值(25℃)应在4.3~4.9。使用NaOH溶液调节溶液pH至6.0~6.6。
(3)按照40~60%比例向溶液中加入异丙醇。效果详见图17、图18、图19与图20。
7.缓冲液5号配制
表7:
(1)称取硫氰酸胍、Tris-HCl放入到配液桶中。向配液桶中加入焦碳酸二乙酯处理水,至少搅拌10分钟直至固体溶解,溶液澄清透明。
(2)用pH计测试溶液的pH值,pH值(25℃)应在4.3~4.9。使用NaOH溶液调节溶液pH至7.0~7.6。
(3)按照10~30%比例向溶液中加入乙醇。
8.缓冲液6号配制
表8:
(1)用电子秤称取Tris-HCl和Tris放入到塑料配液桶中。向配液桶中加入焦碳酸二乙酯处理水,开启电动搅拌器,至少搅拌10分钟直至固体溶解,溶液澄清透明。
(2)用pH计测试溶液的pH值,pH值(25℃)应为6.2~6.8。使用NaOH溶液调节溶液pH至7.0~7.6。
(3)按照70~90%比例向溶液中加入乙醇。
9.无酶无菌水
配液表1:
10.平衡缓冲液配制
表9:
(1)称取氢氧化钠放入到配液桶中,加入焦碳酸二乙酯处理水,至少搅拌10分钟直至固体溶解,溶液澄清透明。
所述DNA提取柱为DNA Column 、RNA提取柱为 RNA Column。硅胶柱膜高效分离DNA与RNA。
对比实验1
实施例1制备测量收率与纯度为实施例组;
对比例1,按照实施例1步骤,唯一区别为DNA提取柱为生工,测量收率与纯度;
对比例2,按照实施例1步骤,唯一区别为DNA提取柱为Jie Tee,测量收率与纯度;
对比例3,按照实施例1步骤,唯一区别为DNA提取柱为Magen,测量收率与纯度;
进行对比,结果发现生工和Jie Tee与目前所用DNA Column相当,Magen收率偏低,从DNA纯度来看,但考虑到成本及稳定性来说,最终确定为目前所用的DNA Column。(见图21、图22、图23、图24、图25与图26)。
比较了RNA提取柱,最终选择了目前所用的RNA Column。所选 RNA Column与新景在收率和纯度结果上均相当,所选 RNA Column稳定性更好(见图27、图28、图29、图30、图31与图32)。
对比实验4
使用本申请配制的各缓冲液,DNA和RNA提取柱分别采用本实施例1(图示实施例组)和对比例4(图示Zymo),从结果看出,对比例DNA提取柱膜对DNA的提取不完全,导致提取出来的RNA中有明显的DNA残留,不满足DNA和RNA分离的目的(见图33、图34、图35、图36与图37)。
对比实验5
提取土壤样本250mg,采用实施例1提取,对比例5使用Zymo产品进行提取,两者提取后分别进行收率与纯度检测,结果详见图38、图39、图40、图41、图42、图43与图44。
实施例2
样本为提取血液样本200µL。
1)柱膜准备
DNA提取柱与RNA提取柱分别加入平衡缓冲液,等待≥1min,最大速度离心10s,将硅胶柱膜分别转移到相应新的收集管中;
2)裂解
称量样本添加到裂解介质管中;将150μL缓冲液1A与600μL缓冲液1B加入所述裂解介质管;(如果担心核酸完整性可添加8 μL β-巯基乙醇);2500~2700rpm 涡旋15 min或设备以5m/sec裂解35sec;最大速度离心2min;
3)去杂
取上清液转入2.0 mL 微型离心管;加入300μL缓冲液2号沉淀污染物,涡旋1s,最大速度离心2min;
4)DNA/RNA分离
将上清液转移到2.0 mL 微型离心管中,加入1体积的缓冲液3号,旋涡1s,得到溶液A;上清液与缓冲液3号的体积比为1:1;
向DNA提取柱中加入700μL溶液A,15000rpm离心10s,收集滤液,盖上装有滤液的收集管盖子;
将DNA提取柱放入新的DNA收集管中,将剩余的溶液A加入DNA提取柱,15000rpm离心10s,收集滤液,盖上装有滤液的收集管盖子;将DNA 提取柱放入新的DNA收集管中,并将两次的滤液混合用于RNA纯化;
5)RNA纯化
滤液中加入步骤4)上清液1体积的缓冲液4号,涡旋1s,得到溶液B;上清液、缓冲液3号与缓冲液4号的体积比为1:1:1;
将800μL溶液B加入RNA提取柱,15000rpm离心10s,弃滤液;重复此步骤直至全部过柱;
将RNA提取柱转移到新的RNA 收集管中,准备漂洗;
6)DNA纯化:
DNA提取柱关闭收集管盖子,准备漂洗;
7)漂洗
向DNA提取柱和RNA提取柱中心分别加入700μL缓冲液5号,15000rpm离心10s,弃滤液;
向DNA提取柱和RNA提取柱中心分别加入700μL缓冲液6号,15000rpm离心10s,弃滤液;
向DNA提取柱和RNA提取柱中心分别加入500μL缓冲液6号,15000rpm离心30s;
将DNA提取柱和RNA提取柱分别放入新的收集管,最大速度离心1min;
8)洗脱
将DNA提取柱和RNA提取柱分别转移到DNA收集管和RNA收集管;
向DNA提取柱和RNA提取柱中心分别加入100μL无酶无菌水,最大速度离心1min;收集的滤液分别为DNA与RNA,用于下游应用。
所述裂解介质管中的裂解介质为氧化锆珠和石英砂的混合物。
裂解介质配制、焦碳酸二乙酯处理水配制、缓冲液 1A配制、缓冲液1B配制、缓冲液2号配制、缓冲液3号配制、缓冲液4号配制、缓冲液5号配制、缓冲液6号配制、无酶无菌水与平衡缓冲液配制与实施例1中各配置相同。
所述DNA提取柱为DNA Column 、RNA提取柱为 RNA Column。硅胶柱膜高效分离DNA与RNA。
对比实验6
提取血液样本200µL,采用实施例2提取,对比例6使用Zymo产品进行提取,两者提取后分别进行收率与纯度检测,结果详见图45、图46、图47与图48。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征及本发明的优点。本行业的技术人员应该了解,本发明不受上述实施例的限制,上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理,在不脱离本发明精神和范围的前提下,本发明还会有各种变化和改进,这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (8)
1.一种样本中DNA与RNA共提取通用方法,其特征在于,包括下列步骤:
1)柱膜准备
DNA提取柱与RNA提取柱分别加入平衡缓冲液,等待≥1min,最大速度离心10s,将硅胶柱膜分别转移到相应新的收集管中;
2)裂解
称量样本添加到裂解介质管中;将缓冲液1A与缓冲液1B加入所述裂解介质管;通过设备裂解;通过设备离心;
3)去杂
取上清液转入2.0 mL 微型离心管;加入缓冲液2号沉淀污染物,涡旋1s,最大速度离心2min;
4)DNA/RNA分离
将上清液转移到2.0 mL 微型离心管中,加入缓冲液3号,旋涡1s,得到溶液A;上清液与缓冲液3号的体积比为1:1;
向DNA提取柱中加入溶液A,离心,滤液用于RNA纯化;
5)RNA纯化
滤液中加入缓冲液4号,涡旋1s,得到溶液B;上清液、缓冲液3号与缓冲液4号的体积比为1:1:1;
将溶液B加入RNA提取柱,离心10s,弃滤液;重复此步骤直至全部过柱;
将RNA提取柱转移到新的RNA 收集管中,准备漂洗;
6)DNA纯化
DNA提取柱关闭收集管盖子,准备漂洗;
7)漂洗
在柱子中心加入缓冲液5号,离心,弃滤液;
在柱子中心加入缓冲液6号,离心,弃滤液;
在柱子中心加入缓冲液6号,离心30s;
将柱子放入新的收集管,最大速度离心1min;
8)洗脱
将柱子转移到相应的DNA与RNA回收管;
向柱子中央加入无酶无菌水,最大速度离心1min;收集的滤液分别为RNA与DNA,用于下游应用。
2.如权利要求1所述的一种样本中DNA与RNA共提取通用方法,其特征在于,所述缓冲液1A制备方法为:
1)称取表面活性剂、磷酸二氢钠、EDTA-2Na到配液桶中,向配液桶中加入焦碳酸二乙酯处理水,搅拌≥10分钟直至固体溶解,溶液澄清透明;
2)用pH计测试溶液的pH值,pH值为3.7~4.3;使用氢氧化钠溶液调节溶液pH至6.0~6.6,获得缓冲液1A。
3.如权利要求1所述的一种样本中DNA与RNA共提取通用方法,其特征在于,所述缓冲液1B制备方法为:
1)称取硫氰酸钠溶液、磷酸二氢钠放入到配液桶中;向配液桶中加入焦碳酸二乙酯处理水,搅拌≥10分钟,直至固体溶解,溶液澄清透明;
2)用pH计测试溶液的pH值,pH值为3.4~4.0;使用氢氧化钠溶液调节溶液pH至7.4~8.0,pH调好后,向溶液中加入表面活性剂,搅拌至溶解,获得缓冲液1B。
4.如权利要求1所述的一种样本中DNA与RNA共提取通用方法,其特征在于,所述缓冲液2号制备方法为:
1)称取氯化铝六水合物、乙酸铵到配液桶;向配液桶中加入焦碳酸二乙酯处理水,搅拌≥10分钟直至固体溶解,溶液澄清透明;
2)用pH计测试溶液的pH值,pH值为6.5~7.1,获得缓冲液2号,配制完成在2~8℃保存;所述缓冲液2号用量为300 µL/样品。
5.如权利要求1所述的一种样本中DNA与RNA共提取通用方法,其特征在于,所述缓冲液3号制备方法为:
1)称取硫氰酸胍、Tris-HCl放入到配液桶中;向配液桶中加入焦碳酸二乙酯处理水,45℃水浴加热溶解,搅拌≥10分钟直至固体溶解,溶液澄清透明;
2)用pH计测试溶液的pH值,pH值为4.3~4.9;使用氢氧化钠溶液调节溶液pH至6.0~6.6,获得缓冲液3号。
6.如权利要求1所述的一种样本中DNA与RNA共提取通用方法,其特征在于,所述缓冲液4号制备方法为:
1)称取硫氰酸胍、Tris-HCl放入到配液桶中;向配液桶中加入焦碳酸二乙酯处理水,搅拌、水浴加热溶解;搅拌≥10分钟直至固体溶解,溶液澄清透明;
2)用pH计测试溶液的pH值,pH值为4.3~4.9;使用氢氧化钠溶液调节溶液pH至6.0~6.6;
3)按照40~60%比例向溶液中加入异丙醇,获得缓冲液4号。
7.如权利要求1所述的一种样本中DNA与RNA共提取通用方法,其特征在于,所述缓冲液5号制备方法:
1)称取硫氰酸胍、Tris-HCl放入到配液桶中;向配液桶中加入焦碳酸二乙酯处理水,搅拌、水浴加热溶解,搅拌≥10分钟直至固体溶解,溶液澄清透明;
2)用pH计测试溶液的pH值,pH值为4.3-4.9;使用氢氧化钠溶液调节溶液pH至7.0~7.6;
3)按照10~30%比例向溶液中加入乙醇,获得缓冲液5号。
8.如权利要求1所述的一种样本中DNA与RNA共提取通用方法,其特征在于,所述缓冲液6号制备方法:
1)称取Tris-HCl与Tris放入到塑料配液桶中;向配液桶中加入焦碳酸二乙酯处理水,搅拌≥10分钟直至固体溶解,溶液澄清透明;
2)用pH计测试溶液的pH值,pH值为6.2~6.8;使用氢氧化钠溶液调节溶液pH至7.0~7.6;
3)按照70~90%比例向溶液中加入乙醇,获得缓冲液6号。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202410089808.5A CN117603962A (zh) | 2024-01-23 | 2024-01-23 | 一种样本中dna与rna共提取通用方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202410089808.5A CN117603962A (zh) | 2024-01-23 | 2024-01-23 | 一种样本中dna与rna共提取通用方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN117603962A true CN117603962A (zh) | 2024-02-27 |
Family
ID=89958284
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202410089808.5A Pending CN117603962A (zh) | 2024-01-23 | 2024-01-23 | 一种样本中dna与rna共提取通用方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN117603962A (zh) |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101845436A (zh) * | 2010-06-28 | 2010-09-29 | 湖南大学 | 一种同时提取堆肥中总dna和rna的方法 |
CN102812118A (zh) * | 2010-04-08 | 2012-12-05 | 恰根有限公司 | 分离和纯化核酸的方法 |
WO2019180519A1 (en) * | 2018-03-17 | 2019-09-26 | Metagenom Bio Holdings Pte Ltd. | Method and kit for isolation of nucleic acids from a sample |
CN112195177A (zh) * | 2020-10-28 | 2021-01-08 | 上海慕柏生物医学科技有限公司 | 一种核酸提取方法及试剂盒 |
CN112313344A (zh) * | 2018-04-24 | 2021-02-02 | 凯杰科技有限公司 | 从复杂样品中分离核酸并去除抑制剂 |
-
2024
- 2024-01-23 CN CN202410089808.5A patent/CN117603962A/zh active Pending
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102812118A (zh) * | 2010-04-08 | 2012-12-05 | 恰根有限公司 | 分离和纯化核酸的方法 |
CN101845436A (zh) * | 2010-06-28 | 2010-09-29 | 湖南大学 | 一种同时提取堆肥中总dna和rna的方法 |
WO2019180519A1 (en) * | 2018-03-17 | 2019-09-26 | Metagenom Bio Holdings Pte Ltd. | Method and kit for isolation of nucleic acids from a sample |
CN112313344A (zh) * | 2018-04-24 | 2021-02-02 | 凯杰科技有限公司 | 从复杂样品中分离核酸并去除抑制剂 |
CN112195177A (zh) * | 2020-10-28 | 2021-01-08 | 上海慕柏生物医学科技有限公司 | 一种核酸提取方法及试剂盒 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
E. TOURNIER ET AL.: "Modification of a commercial DNA extraction kit for safe and rapid recovery of DNA and RNA simultaneously from soil, without the use of harmful solvents", 《METHODSX》, vol. 2, 28 March 2015 (2015-03-28), pages 183 * |
MP BIOMEDICALS: "SPINeasy® DNA/RNA Kit for Soil", 《产品简介》, 31 May 2023 (2023-05-31), pages 7 - 9 * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US5346994A (en) | Shelf-stable product and process for isolating RNA, DNA and proteins | |
KR101005924B1 (ko) | 핵산 추출 장치 | |
CN101979539B (zh) | 用于分离纯化的rna的试剂和方法 | |
EP2315619B1 (en) | Nucleic acid extraction method | |
JPH0515373A (ja) | ヒトゲノムdnaの抽出および精製方法 | |
CN110257368A (zh) | 从含有游离核酸的样品中分离游离核酸的方法和*** | |
US20220073965A1 (en) | Method for quickly extracting long-fragment genomic dna by single reaction tube, and kit | |
CN111487404A (zh) | 体液肿瘤细胞dna提取试剂盒 | |
CN111304291A (zh) | 一种dna提取试剂、试剂盒及提取方法 | |
CN110938624A (zh) | 一种用于基因组dna提取的试剂盒及其应用 | |
CN115125238B (zh) | 一种肿瘤细胞外囊泡dna的分离纯化方法 | |
DE19856415A1 (de) | Verfahren zur Reinigung bzw. Isolierung viraler Nukleinsäuren | |
CN117603962A (zh) | 一种样本中dna与rna共提取通用方法 | |
CN113930418B (zh) | 核酸释放剂及其核酸释放方法 | |
WO2022068826A1 (zh) | 从生物材料中分离纯化核酸固体的方法 | |
CN113337637B (zh) | 一种分子检测SARS-CoV-2冠状病毒的引物组和试剂盒 | |
CN112014198B (zh) | 一种用于富集内源性低分子量蛋白和多肽的试剂盒及方法 | |
CN113322303A (zh) | 一种石蜡切片样本核酸提取液及提取方法 | |
CN109439655B (zh) | 适用于超微量细胞核酸提取的试剂盒及方法 | |
CN111378647A (zh) | 一种快速制备单分子光学图谱标记文库的方法和试剂盒 | |
CN102191238A (zh) | 小分子rna的提取方法 | |
EP4253538A1 (en) | Method for isolating nucleic acid using binding buffer including compound having low or intermediate dielectric constant | |
Dehqonboeva et al. | METHODS FOR ISOLATING NUCLEIC ACIDS | |
CN115786328A (zh) | 基于硅藻壳的快速核酸提取方法 | |
CN117487796A (zh) | 一种细胞dna快提取试剂盒及其使用方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |