CN116286461B - 具有土壤改良作用的喜盐芽胞杆菌、筛选方法及其应用 - Google Patents
具有土壤改良作用的喜盐芽胞杆菌、筛选方法及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
具有土壤改良作用的喜盐芽孢杆菌、筛选方法及其应用，命名为NBL‑BS214(Halobacillus dabanensis strain)，该菌株于2022年09月20日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：20221370，本发明喜盐芽胞杆菌NBL‑BS214对环境适应性强，对盐分、PH以及石油均有一定的耐受性，氯化钠浓度在5％～15％生长较适宜，最适含盐量为15％；生长PH范围为4～11，最适PH为7；当柴油含量为15％之内时均可以生长，其中当添加量为1％时生长最适宜，喜盐芽胞杆菌NBL‑BS214高产有机酸，琥珀酸的含量最高，对盐分的降解率达到43.88％，对PH的降解率达20.19％，对土壤石油降解率为76％以上，喜盐芽胞杆菌NBL‑BS214具有降盐、降碱、降石油的能力，具有调节土壤酸碱度的作用，从而对土壤进行改良。
Description
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及到具有土壤改良作用的喜盐芽胞杆菌、筛选方法及其应用。
背景技术
盐土和碱土统称为盐碱土地，因其土壤中含盐量太高(大于0.3％)导致地上农作物无法生长或者产量显著降低。土壤盐碱化作为世界性问题之一，严重制约着农业发展。据统计，全世界盐碱土壤不低于9.5亿公顷，其中我国有约1亿公顷，主要分布在东北、西北、华北和沿海地区。目前，土壤盐碱化己经成为全球科研工作者的研究热点问题之一，人们及科研工作者非常重视盐渍土壤的改良及可持续利用这项工作。
目前，治理盐碱土壤的措施包括四个方面：(1)水利改良，通过灌溉、排水、放淤、种稻等措施，不断淋洗和排除土壤中的盐分，缺点是比较浪费水资源；(2)物理措施改良，以平整土地、深耕细作、施肥、轮作以及间种套种等方法为主，可以有效改善土壤的结构和渗透性能，但投资较大；(3)化学方式改良，以施用改良物质为主，如石膏、亚硫酸钙等，能够改良土壤理化性质，一定程度上降低或消除盐分，但其性能单一，必须与其他方法混合使用才能达到良好效果；(4)生物改良，主要包括耐盐作物的选择、有效微生物的利用、生物有机肥料施用等措施，其具有取于自然并还予自然，对生态环境破坏较少等优点，相对于其他改良措施而言，既保护了生态平衡又恢复和改良了盐渍土，近年来逐渐受到研究工作者青睐。
现有技术中，申请号为201710644204.2的中国发明专利公开了一种利用有益微生物菌改良盐碱土壤的方法，通过将有益微生物菌驯化后接种到生物炭、泥炭藓、玉米芯和椰糠的混合物，将生物炭、泥炭藓、玉米芯和椰糠的混合物作为有益微生物菌的依附基体可以有效提高微生物菌的活性，有益生物菌菌群数目增加，再撒入需改良的盐碱土壤中，能有效提高盐碱土壤活性。申请号为201010519297.4的中国发明专利公开了一种修复石油污染盐碱土壤的微生物复合菌剂，将3株巨大芽胞杆菌P9菌株、假单胞菌P4菌株、和木糖氧化无色杆菌P2菌株，通过液态培养得到的微生物菌体，与营养物混合，复配表面活性剂制得微生物复合菌剂，对盐碱土壤中的石油污染具有较高的去除效率，同时降低盐碱土壤的PH。
目前的盐碱土改良专利中用到的菌多为混合菌种，主要是通过提高土壤中的微生物活性，发挥盐碱土改良的目的，缺少能够同时降盐、降碱、降石油的核心菌种。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于克服上述现有技术的缺点，提供具有土壤改良作用的喜盐芽胞杆菌、筛选方法及其应用。
解决上述技术问题所采用的技术方案是：一种喜盐芽胞杆菌，命名为NBL-BS214(Halobacillus dabanensis strain)，该菌株于2022年09月20日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：20221370，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
喜盐芽胞杆菌的筛选方法包括以下步骤：
(1)样品采集：
分别从新疆克拉玛依石油污染区、新疆和田地区于田县巴士兰帕村、于田县木尕拉镇、于田县斯也克乡、皮山县科克铁热克乡、皮山县杜瓦镇、和田县罕艾日克镇、山东东营、辽宁吉林等地采集盐碱土样，备用；
(2)培养基的配制：
含盐培养基中含有：蛋白胨10g/L，牛肉浸粉3.0g/L，氯化钠10g/L，氯化钾5g/L，碳酸钠1g/L，硫酸镁2g/L，氯化钙0.1g/L，调节PH为9.0，固体培养基中琼脂的含量为2％；
(3)菌株的分离纯化：
将采集的土壤样品进行梯度稀释，稀释为10-1～10-7，每个梯度设3个重复，涂布于含盐固体琼脂培养基上，30℃培养，直至长出单菌落，用接种环挑取生长快、菌落规则的单菌落，在对应的固体琼脂培养基平板上划线分离，30℃培养，重复划线实验2～3次，待平板上出现长势良好且传代稳定的单菌落后，于4℃斜面保存。
喜盐芽胞杆菌在土壤改良中的应用。
进一步的，所述的土壤为盐渍化土壤或盐碱化土壤或石油污染土壤。
本发明的有益效果如下：(1)本发明的喜盐芽胞杆菌NBL-BS214分离自新疆克拉玛依石油污染区，环境适应性强，对盐分、PH以及石油均有一定的耐受性，氯化钠浓度在5％～15％生长较适宜，最适含盐量为15％；生长PH范围为4～11，最适PH为7；当柴油含量为15％之内时均可以生长，其中当添加量为1％时生长最适宜。
(2)本发明的喜盐芽胞杆菌NBL-BS214高产有机酸，产生琥珀酸、柠檬酸、乙酸、乳酸等，其中琥珀酸的含量最高，为21.92g/L，对盐分的降解率达到43.88％，对PH的降解率达20.19％，喜盐芽胞杆菌NBL-BS214具有降盐、降碱能力、调节土壤酸碱度的作用，从而达到改良盐渍化、盐碱化、碱化土壤的作用。
(3)本发明的喜盐芽胞杆菌NBL-BS214能够产生表面活性物质、乳化柴油、对土壤中石油烃的降解率达到76％以上，从而达到改良石油污染的土壤的作用。
附图说明
图1是本发明喜盐芽胞杆菌NBL-BS214的菌落形态图。
图2是本发明喜盐芽胞杆菌NBL-BS214的显微镜镜检形态。
图3是本发明喜盐芽胞杆菌NBL-BS214的进化树分析。
图4是本发明喜盐芽胞杆菌NBL-BS214对不同含量柴油的乳化情况。
图5是本发明高粱在三种CK、T1、T2不同土壤中出苗率、株高情况。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
一种喜盐芽胞杆菌，命名为NBL-BS214(Halobacillus dabanensis strain)，该菌株已于2022年09月20日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：20221370，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
喜盐芽胞杆菌的筛选方法包括以下步骤：
(1)样品采集：
分别从新疆克拉玛依石油污染区、新疆和田地区于田县巴士兰帕村、于田县木尕拉镇、于田县斯也克乡、皮山县科克铁热克乡、皮山县杜瓦镇、和田县罕艾日克镇、山东东营、辽宁吉林等地采集盐碱土样，备用。
(2)培养基的配制：
含盐培养基中含有：蛋白胨10g/L，牛肉浸粉3.0g/L，氯化钠10g/L，氯化钾5g/L，碳酸钠1g/L，硫酸镁2g/L，氯化钙0.1g/L，调节PH为9.0，固体培养基中琼脂的含量为2％。
(3)菌株的分离纯化：
将采集的土壤样品进行梯度稀释，稀释为10-1～10-7，每个梯度设3个重复，涂布于含盐固体琼脂培养基上，30℃培养，直至长出单菌落，用接种环挑取生长快、菌落规则的单菌落，在对应的固体琼脂培养基平板上划线分离，30℃培养，重复划线实验2～3次，待平板上出现长势良好且传代稳定的单菌落后，于4℃斜面保存。
(4)结果：初筛获得的152株耐盐菌株。
为了验证喜盐芽胞杆菌NBL-BS214的性能，发明人进行大量的实验室研究实验，各种实验情况如下：
一、菌种的鉴定
(1)形态学鉴定：菌株NBL-BS214在含盐培养基上30℃培养24h，其菌落形态如图1所示，菌落呈浅黄色，圆形，表面湿润光滑，不透明，边缘整齐，细胞形态如图2所示，革兰氏阳性菌，呈杆状，两端钝圆，0.9～1.0μm×1.3～2.1μm，单个或成对或短链出现，椭圆形内生芽胞，中生，胞囊膨大，芽胞大小0.93～0.97μm×1.39～1.66μm。
(2)分子遗传学鉴定：以所述菌株NBL-BS214的基因组为模板，采用16SrRNA基因通用引物27F和1492R进行扩增，扩增片段进行序列测定。菌株NBL-BS214的16S rRNA基因测序结果如下，与GenBank中的序列进行比对分析，结果显示，菌株与Halobacillus sp.的相似性达到96.99％～99.66％，将得到的16S rDNA序列在NCBI中进行的BLAST检索，下载与之最相近的已知菌种16SrDNA序列，用于构建***发育树。采用clustalW进行多序列比对，比对结果利用MEGA5.10软件并采用Neighbor-Joining统计学方法，Bootstrap值设置为1000，使用Construct/Test Neighbor-Joining Tree碱基替换模式，构建基于16SrDNA序列的***发育树。使用MEGA5.10软件中d:Transitions+Transversions法计算遗传进化距离，具体的***进化树如图3所示，结果显示NBL-BS214跟NR 042860.1Halobacillus dabanensisstrain D-8进化关系最近，因此将NBL-BS214菌株命名为Halobacillus dabanensisstrain。
二、菌株的降盐碱能力测定
(1)菌的发酵：将斜面上的菌转接入液体含盐培养基中(以不接菌的含盐培养基为对照)，培养温度为30℃，转速为150rpm，培养48h，测定发酵液中的盐分含量和PH值。
(2)发酵液盐分含量测定：采用硝酸银沉淀滴定法，取2.0mL样液于100mL容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度(如果盐分低，样液可适当多吸取)。吸取25mL上述样液于锥形瓶中，加入两滴酚酞，用稀NaOH溶液调至中性(溶液呈粉红色)，加入1mL重酪酸钾溶液(5％(W/V))，用硝酸银滴定至出现砖红色沉淀，记录消耗硝酸银的体积，做三次平行实验。
盐分含量计算公式为：
式中：X表示每一百毫升试样中氯化钠的含量，单位为g(g/V)；
c表示硝酸银标准滴定溶液的实际浓度，单位为mol/L；
V表示所吸取的试样的体积，单位为mL；
V0表示空白试验中所消耗的硝酸银标准溶液的体积，单位为mL；
V1表示试样中所消耗的硝酸银标准溶液的体积，单位为mL；
25表示每次滴定所取的样，单位为mL；
100表示样品稀释液的总体积，单位为mL；
0.05844表示每1.0mL的硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于0.05844g的氯化钠。
(3)发酵液PH值测定：采用赛多利斯PB-10酸度计。
(4)盐分和PH降解率测定方法：
盐分降解率％＝(不接菌的盐分含量-接菌的发酵液中盐分含量)/不接菌的盐分含量*100
PH降解率％＝(不接菌的PH值-接菌的发酵液PH值)/不接菌的PH值*100
测定结果如表1所示：其中有6株菌对盐分的降解率达到25％以上，对PH值的降解率达到18％以上，效果最好的为BS214，对盐分的降解率达到43.88％，对PH的降解率达20.19％，该菌株分离自新疆克拉玛依石油污染地区。
表1不同菌株的盐分和PH降解能力测定
| 菌株编号 | 盐分降解率％ | PH降解率％ |
| BS165 | 26.40 | 18.93 |
| BS125 | 25.30 | 18.37 |
| BS162 | 27.50 | 19.15 |
| BS141 | 33.98 | 18.82 |
| BS137 | 37.39 | 20.27 |
| BS214 | 43.88 | 20.19 |
三、菌株产酸性能测定
(1)试剂：草酸标准品、酒石酸标准品、苹果酸标准品、乳酸标准品、乙酸标准品、柠檬酸标准品、琥珀酸标准品、磷酸二氢铵、色谱甲醇。以上标准品购自上海源叶生物科技有限公司。
(2)色谱分离条件：
色谱柱：C18柱4.6mm×200mm；
流动相：磷酸盐溶液(20mM磷酸二氢铵，PH2.3)：100％甲醇＝98:2；
流速：0.8mL/min；
检测波长：276nm；
进液量：10μL。
(3)菌株产酸性能测定：菌株接入含盐液体培养基中，发酵2d，发酵液离心，取上清用无菌滤膜过滤，准确吸取10μL注入高效液相色谱仪分离测定，以标准品峰的保留时间定性，以峰面积外标法定量。
(4)测定结果如表2：
表2菌株产酸性能测定
结果标明，NBL-BS214高产有机酸，产生琥珀酸、柠檬酸、乙酸、乳酸等，其中琥珀酸的含量最高，为21.92g/L。
四、菌种的耐受性评价
(1)试验方法
1)盐的耐受性：以含盐培养基为基础培养基，调节氯化钠的量使培养基中氯化钠的浓度分别为0％、5％、10％、15％、20％、25％、30％，接种BL-BS214菌种，以不接菌为对照，测定发酵24h发酵液的OD值。
2)PH的耐受性：以含盐培养基为基础培养基，调节PH为4、5、6、7、8、9、10、11，接种BL-BS214菌种，以不接菌为对照，测定发酵24h发酵液的OD值。
3)石油的耐受性：采用无机盐培养基(磷酸氢二钠3.8g/L,磷酸二氢钾1g/L，氯化钠5g/L，氯化铵0.5g/L，硫酸镁0.5g/L，调节PH7.0)，添加柴油含量分别为1％、3％、5％、10％、15％，以不接菌为对照，测定发酵24h发酵液的OD值。
(2)试验结果如表3～表5：
表3培养基中含不同浓度的氯化钠的发酵液OD值
表4培养基中含不同PH的发酵液OD值
| 培养基PH | 发酵液OD值 |
| 4 | 0.43±0.03 |
| 5 | 0.51±0.01 |
| 6 | 0.73±0.02 |
| 7 | 1.39±0.05 |
| 8 | 1.14±0.02 |
| 9 | 1.03±0.01 |
| 10 | 0.85±0.02 |
| 11 | 0.69±0.01 |
表5培养基中不同柴油含量的发酵液OD值
| 培养基柴油含量 | 发酵液OD值 |
| 1％ | 1.35±0.04 |
| 3％ | 1.11±0.03 |
| 5％ | 0.74±0.02 |
| 10％ | 0.65±0.01 |
| 15％ | 0.42±0.02 |
由上表3～表5可以看出，菌株NBL-BS214对盐分、PH以及石油均有一定的耐受性，氯化钠浓度在5％～15％生长较适宜，最适含盐量为15％；
生长PH范围为4～11，最适PH为7；
当柴油含量为15％之内时均可以生长，其中当添加量为1％时生长最适宜。
五、菌株降解石油能力测定
(1)采用无机盐培养基(磷酸氢二钠3.8g/L，磷酸二氢钾1g/L，氯化钠5g/L，氯化铵0.5g/L，硫酸镁0.5g/L，调节PH7.0)，添加柴油含量分别为3％、10％，以不接菌为对照，在发酵过程中，发生柴油乳化现象，如图4所示，推测其产生表面活性物质。
(2)BS214对石油土壤中柴油的降解能力测定
500mL三角瓶中加入300g土，并加入15mL柴油，混合均匀，使土壤中柴油含量为5％。并在土壤中接入10％的BS214发酵液(活菌数为1×106cfu/mL)，以不接菌的土壤作为对照。室温下培养，观测其对土壤中柴油的降解效果。每次取土样2g。每个处理设置三个重复。将取出的2g土样于通风橱处风干，同时准备好100mL锥形瓶至烘箱中烘干至恒重，称重为W1。土样风干后与等量的无水硫酸钠混合，溶剂为二氯甲烷30mL萃取。后收集萃取液于烘干称重后的三角瓶中，利用旋转蒸发仪将溶剂旋转蒸发，再次烘干后称重，称重为W2，两次重量差即W2-W1为总石油烃的重量。
按公式计算样品中残留总石油烃含量：
总石油烃含量(mg/kg)＝(W2(g)-W1(g))×106/2g
总石油烃降解率(％)＝[W0-(W2(g)-W1(g))×106/2g]/W0
式中，W0为不接菌土壤中的总石油烃含量，mg/kg
结果：BS214对土壤中总石油烃的降解率达76％以上。
六、缓解作物盐胁迫
(1)试验试剂：3％次氯酸钠，混合盐(NaHCO3为8.41，Na2CO3为10.6g，Na2SO4为14.2g，NaCl为5.85g)
(2)试验处理：土壤处理采集耕作层的土壤，经过风干、研磨、过筛(20目)，设置5个处理组，分别为：CK0-土壤中不添加盐；CK1和T1-土壤中添加混合盐，使土壤中盐分浓度达到0.6％；CK2和T2-土壤中添加混合盐，使土壤中盐分浓度达到1.2％。
种子消毒处理：每个处理设置5个重复，每个重复播种20粒种子，各处理组小麦种子均采用3％的次氯酸钠消毒3min，酒精消毒30s，用清水冲洗干净；随后，CK0、CK1、CK2组种子用清水浸泡2小时，播种至土壤中；T1、T2组用BS214菌液(活菌数为1×106cfu/mL)浸泡2小时，播种至土壤中。
播种后处理：播种后种子上覆土，将其置于室温下，光暗周期为14hr/10hr的温室培养，期间适当浇自来水。T1、T2组于播种后1d、7d喷洒BS214菌液(活菌数为1×106cfu/mL),CK0、CK1、CK2组不做此处理。20天后统计小麦发芽率，测定小麦植株对应指标和土壤指标。
(3)指标测定：
A、发芽率％＝发芽数/播种数*100
B、株高：将整株小麦挖出，清洗干净根系并用滤纸吸干水。将小麦平置于操作台上，使用直尺测量植株从根际部位至顶部叶片叶尖处的长度并记录。
C、根长：用镊子将根系拉直，选取最长的主根用直尺进行根系长度的测量。
D、土壤盐分检测：采用烘干残渣法测定土壤可溶性盐分含量
(4)试验结果
1)不同处理对小麦发芽率的影响
表6不同处理对小麦发芽率的影响
| 处理 | 发芽率(％) |
| CK0 | 89.4±5.8 |
| CK1 | 46.3±4.3 |
| T1 | 75.8±6.3 |
| CK2 | 27.1±3.5 |
| T2 | 42.5±1.4 |
由表6可以看出，与正常土壤相比，添加0.6％和1.2％的盐胁迫，分别导致小麦发芽率降低48.21％和69.69％。在0.6％和1.2％的盐胁迫下，用BS214菌液浸泡种子结合菌液处理土壤，能够使发芽率分别提高63.71％和56.83％。
2)不同处理对小麦生长指标的影响
表7不同处理对小麦生长指标的影响
| 处理 | 株高(cm) | 根长(cm) |
| CK0 | 15.3±2.8 | 4.8±0.7 |
| CK1 | 6.4±4.3 | 3.5±0.9 |
| T1 | 10.8±1.3 | 5.8±0.4 |
| CK2 | 4.1±3.5 | 2.2±0.6 |
| T2 | 7.5±1.4 | 3.5±0.8 |
由表7可以看出，在0.6％和1.2％的盐分胁迫下，用BS214菌液浸泡种子结合菌液处理土壤，能够使小麦株高分别提高68.75％和82.93％，根长分别增加65.71％和59.09％。
3)不同处理对土壤盐分的影响
表8不同处理对土壤中盐分含量的影响
| 处理 | 盐分(％) |
| CK0 | 0.09±0.02 |
| CK1 | 0.54±0.13 |
| T1 | 0.38±0.04 |
| CK2 | 1.10±0.25 |
| T2 | 0.87±0.07 |
由表8看出，在0.6％和1.2％的盐胁迫条件下，用BS214菌液处理，对土壤盐分降低率分别为29.63％和20.91％。
七、盐碱土改良盆栽试验评价
(1)试验样品：采集东营盐碱土，土壤盐分0.82％，PH值8.3～8.5。
(2)试验菌剂：利用NB液体培养基将BS214进行活化和发酵培养，30℃，180r/min培养48h，4℃冷冻离心机内4000r/min下离心15min，离心后的菌体沉淀干燥即可获得菌粉，将制得菌粉用纯净水制成1×106cfu/mL的菌液备用。
(3)试验设计：试验设置3个组，分别为：CK组为纯盐碱土，T1组为喜盐芽胞杆菌NBL-BS214处理，T2组为大水浸泡洗盐组。播种高粱种子，期间CK组正常用水管理，T1组使用与CK组等量的用水管理，且每隔7d喷施一次菌液，T2组每隔7d采用CK组5倍用量的水进行浸泡洗盐处理。
(4)检测指标
1)土壤盐分测定：采用硝酸银沉淀滴定法测定处理前后不同组土壤中的盐分。
2)土壤PH值测定：利用NYT1121.2-2006土壤检测第2部分：土壤pH的测定中的方法检测处理前后不同组土壤的PH值。
3)出苗率和平均株高的测定
(5)试验结果如表9所示，
表9不同PH、盐分的出苗率和平均株高
结果表明，盐碱土经过喜盐芽胞杆菌NBL-BS214处理后，盐分含量降低，且出苗率和平均株高较对照组显著提高，且效果优于大水浸泡洗盐组，平均株高提高43％,如图5所示。
八、耐盐降碱菌改良盐碱地大田试验
1、试验方案
模拟盐碱化：通过向试验土壤中添加外源盐碱的方式模拟盐碱土，用于耐盐降碱菌改良盐碱地的示范试验。根据黄淮海平原盐碱土的盐分含量和各种盐离子含量(黄淮海平原盐碱土各类盐离子含量mg/kg：Na+0.2656-6.8978、K+
0.005-0.117、Mg2+0.5、Ca2+0.099-0.527、HCO3 2-0.2、SO4 2-0.276-1.334、Cl-0.175-14.744)，向土壤中按比例添加氯化钠、氯化钙、硫酸镁、碳酸氢钠、氢氧化钠将土壤进行盐碱化。
处理方式：将试验区域分为5个小区，分别对应CK1、CK2、T1、T2、T3处理。其中，CK1为不进行盐碱化处理的正常土，CK2、T1、T2、T3盐碱化后进行相应改良处理。处理完成后种植小麦，品种为胜麦711。
表10耐盐降碱菌改良盐碱地大田试验
| 处理方式(以下均为每亩添加量) | |
| CK1 | 深翻，正常农艺管理 |
| CK2 | 深翻，浇水20吨 |
| T1 | 深翻后耐盐降碱菌液25L随20吨水浇灌 |
| T2 | 深翻后耐盐降碱菌液50L随20吨水浇灌 |
| T3 | 深翻后耐盐降碱菌液75L随20吨水浇灌 |
耐盐降碱菌液：BS214采用NB液体培养基进行活化和发酵培养，30℃，180r/min培养48h，使活菌数达到108cfu/mL。)
指标测定：土壤指标：分别测定试验小区原土、盐碱化后土壤、耐盐降碱菌添加7d后、21d后土壤的pH、EC、水溶性全盐含量。
作物指标：小麦的出苗率、60d的株高和收获后的产量指标(穗数、穗粒数、千粒重、产量)。理论产量(kg/亩)＝穗数(万/亩)×穗粒数(粒)×千粒重(g)/100×85％。
2、试验结果：
(1)不同处理对小麦土壤指标的影响
表11不同处理对土壤PH变化的影响
| 处理 | 原土 | 盐碱化后 | 改良后7d | 改良后21d |
| CK1 | 7.73 | 7.63 | 7.53 | 7.65 |
| CK2 | 7.78 | 8.27 | 8.09 | 8.31 |
| T1 | 7.64 | 8.33 | 7.97 | 7.87 |
| T2 | 7.61 | 8.38 | 7.94 | 7.85 |
| T3 | 7.65 | 8.26 | 7.77 | 7.74 |
表12不同处理对土壤电导率的影响
| 处理 | 原土 | 盐碱化后 | 改良后7d | 改良后21d |
| CK1 | 352us/cm | 162.8us/cm | 289us/cm | 209us/cm |
| CK2 | 289us/cm | 5.91ms/cm | 3.85ms/cm | 4.02ms/cm |
| T1 | 305us/cm | 5.74ms/cm | 2.96ms/cm | 2.77ms/cm |
| T2 | 453us/cm | 6.85ms/cm | 1.89ms/cm | 1.57ms/cm |
| T3 | 352us/cm | 6.18ms/cm | 1.73ms/cm | 1.46ms/cm |
表13不同处理对土壤水溶性全盐含量的影响
结果：各处理改良方案实施后土壤的pH、EC值和水溶性全盐含量均显著降低。耐盐降碱菌剂施入7天后T1、T2、T3的pH值分别较未改良前下降0.36、0.44、0.49个单位，碱度的下降程度与耐盐降碱菌液的施用量成正相关。CK2仅较改良前下降0.14个单位，说明耐盐降碱菌剂对盐碱土碱度降低效果要优于大水洗盐。T1、T2、T3三个处理EC值、水溶性全盐含量也显著降低，且降低程度随着耐盐降碱菌液的增加而增加，三个处理均由未改良前的中度盐碱化程度降为轻度盐碱化。CK2处理大水洗盐后EC值和水溶性全盐含量虽也明显降低，但降低程度低于T1、T2、T3处理，且改良后水溶性全盐含量为0.571％，仍为中度盐碱化程度。耐盐降碱菌施入21d后土壤的碱度和盐分含量仍有降低的趋势，可以看出耐盐降碱菌对盐碱地的改良呈现长效化。
(2)不同处理对小麦指标的影响
表14不同处理对小麦出苗率的影响
| 处理 | CK1 | CK2 | T1 | T2 | T3 |
| 出苗率 | 92.2％ | 75.8％ | 83.7％ | 84.2％ | 87.6％ |
表15不同处理对小麦生长60d株高的影响
| 处理 | CK1 | CK2 | T1 | T2 | T3 |
| 60d | 17.59 | 15.95 | 16.77 | 17.18 | 17.31 |
表16不同处理对小麦产量的影响
结果：经过耐盐降碱菌改良后，T1、T2、T3三种处理的小麦种子的出苗率均达到80％以上，其中T3出苗率达到87.6％以上，接近正常土CK1的出苗水平，而CK2的出苗率仅为75.8％。小麦生长60d的株高同为施加耐盐降碱菌处理的T1、T2、T3优于CK2处理。说明盐碱地施用耐盐降碱菌后，不仅土壤盐碱化程度有所降低，小麦植株对土壤盐碱的耐受性也有所提高。从小麦产量指标可以看出，T1、T2、T3的产量分别较CK2提高23.9％、36.0％、42.4％，与耐盐降碱菌的添加量呈正相关，T3处理仅较正常土CK1处理低4.8％。穗数、穗粒重和千粒重等指标也基本呈相同趋势。
以上所述，仅为本发明的较佳实施例而已，并非用于限定本发明的保护范围。
Claims (3)
1.达坂喜盐芽胞杆菌，命名为NBL-BS214(Halobacillus dabanensis strain)，该菌株于2022年09月20日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：20221370。
2.权利要求1达坂喜盐芽胞杆菌在土壤改良中的应用。
3.根据权利要求2所述的达坂喜盐芽胞杆菌在土壤改良中的应用，所述的土壤为盐渍化土壤或盐碱化土壤或碱化土壤或石油污染土壤。
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