CN118126903A - 一株耐酸产碱的多功能贝莱斯芽孢杆菌、其微生物菌剂及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一株耐酸产碱的多功能贝莱斯芽孢杆菌、其微生物菌剂及其应用，该多功能贝莱斯芽孢杆菌被命名为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)Y7，在2023年7月3日，被保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC No 27762。所述微生物菌剂的活性成分为前述的贝莱斯芽孢杆菌。该菌和所述微生物菌剂可应用在解磷、解钾、固氮中，还可应用于促进植物在酸胁迫下的生长中。此外，该菌还可用于作为土壤改良剂，减缓土壤的酸化，增加植物的生物量，促进烟草生长的作用，减少化学肥料的使用，基于该菌的多功能生物学特性，菌株Y7及其微生物菌剂具有广泛的应用前景。

Description

一株耐酸产碱的多功能贝莱斯芽孢杆菌、其微生物菌剂及其 应用

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一株耐酸产碱的多功能贝莱斯芽孢杆菌、其微生物菌剂及其应用。

背景技术

土壤酸化是影响农业发展的主要因素之一，会导致土壤肥力下降、土壤结构变差，威胁作物正常的生理发育，阻碍农业发展。

目前酸性土壤种植主要存在三方面的问题，一方面是土壤酸化导致作物对肥料的利用率降低，造成资源浪费；第二方面，土壤酸化会导致土壤理化性质变差，促进有毒离子析出，从而影响作物正常生长；第三方面，土壤酸化还会导致土壤微生物群落结构发生变化，使土壤内致病菌增多，导致作物病害频发产量与品质降低。因而寻找一种绿色、安全、可持续的酸性土壤作物栽培方式、降低或避免土壤酸化对植物生长的影响成为人们关注的焦点。

其中，微生物菌剂是一种新兴的生物改良方式，与传统方式相比具有明显的安全、高效、环保的优势。微生物菌剂通过发挥耐酸性土壤微生物的多种功能直接改善植物在酸性土壤中的根际不良生长环境，有效缓解土壤酸化对作物生长的不良影响，大大改善酸性土壤的肥力。其中微生物菌剂改良作为一种新兴的生物改良措施，因其环保、生态效益高等优点而极具潜力。

但是，目前已发现的具有耐酸能力的微生物菌剂的菌种少且存在着功能单一、效果不稳定等问题，其中，其效果不稳定主要体现在两个方面，一方面是菌株的功能不稳定，随着菌株的不断继代，菌株的促生功能会不断退化，继而影响菌剂效果；另一方面是活性不稳定，在生长环境恶劣的情况下，会导致菌株大量失活，菌株作为执行功能的主体，大量失活会影响菌剂的功能。

因而筛选出高效稳定的多功能菌种并研发出一款耐酸产碱促生微生物菌剂具有重要的意义与应用价值。

因此，现有技术有待进一步改进。

发明内容

针对上述问题，本发明提供了一株耐酸产碱的多功能贝莱斯芽孢杆菌、其微生物菌剂及其应用，该多功能贝莱斯芽孢杆菌具有解磷、解钾、固氮、降酸、促进植物在酸胁迫下生长、提高环境PH值并起到改良土壤等多种性能，可用于制备微生物菌剂，在农作物生产实践中进行推广应用，提高土壤利用率。

为解决上述问题，本申请提供以下技术方案：

第一方面，本申请提供一株耐酸产碱的多功能贝莱斯芽孢杆菌，其被命名为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)Y7，其保藏号为CGMCC No 27762。

经鉴定，该贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)Y7是属于芽孢杆菌科，芽孢杆菌属，贝莱斯芽孢杆菌菌种。在2023年7月3日，该菌株被保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC No 27762，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

该菌株Y7是发明人从潍坊市酸性地土壤采集土样中分离的促生细菌，其丰富了耐酸促生的菌种资源，为研究开发促生菌菌剂奠定基础。该贝莱斯芽孢杆菌Y7的形态特征为：革兰氏阳性菌，菌株为杆状；菌落呈乳白色，在生长前期菌落呈无色透明，生长中后期呈白色，有多糖胶质产生，菌落在生长后期菌落表面产生褶皱，有芽孢产生。

经过实验发现，该菌株Y7不仅具有优异的解磷、解钾、固氮等促生作用，且具有降低环境PH的作用，可用于改良土壤；进一步的研究发现，酸胁迫下贝莱斯芽孢杆菌Y7对烟草具有较好的促进生长的特性，使烟草的株高、鲜重、叶面积和茎粗相对于对照组分别依次提高了64.43％、25.91％、45.73％和34.94％，能够明显促进作物生长。

第二方面，本申请还提供一种微生物菌剂，其活性成分为前述的贝莱斯芽孢杆菌。

基于贝莱斯芽孢杆菌Y7的前述优异的解磷、解钾、固氮、产碱和促生等综合生物学特性，可将其作为活性成分，用于制备微生物菌剂，减少化学肥料的使用，提高植物的生物量。可直接将其加工为微生物菌剂进行田间施用，所述微生物菌剂可采用该微生物的发酵液或微生物冻干粉等。

此外，该菌可用于制备微生物菌肥，可通过将上述贝莱斯芽孢杆菌Y7直接在固体发酵培养基(或液体培养基)中进行发酵直接或进一步加工(配以载体、其他助剂等)制备成不同剂型的微生物菌肥，或者进一步添加其他肥料制成复合肥。

可选地，所述微生物菌剂中，所述活性成分为前述的贝莱斯芽孢杆菌的菌体、发酵液或发酵上清液。

可选地，所述微生物菌剂，所述微生物菌剂的剂型为可湿性粉剂、水分散剂、水悬浮剂或可分散油悬浮剂。

优选地，所述微生物菌剂中，贝莱斯芽孢杆菌Y7的有效活菌数不低于0.5亿/g。

第三方面，本申请提供前述的贝莱斯芽孢杆菌或前述的微生物菌剂在解磷、解钾、固氮中的应用。

经实验证明，贝莱斯芽孢杆菌Y7能够提高环境pH、溶有机磷、难溶性钾和固氮，显然具有一定的促生特性，且解钾能力较强。

第四方面，本申请提供前述的贝莱斯芽孢杆菌或前述的微生物菌剂在提高环境PH值、改良土壤中的应用。

所述贝莱斯芽孢杆菌Y7不仅具有优异的耐酸能力，对pH有较宽的适应范围，pH3-9均可生长，且在pH为4时仍然可保持较高的菌体浓度；更重要的是，该菌株也具有降酸能力，在24h内将液体LB培养基的pH值从5提高至8.06左右；还可提高土壤的PH值，改善土壤的酸化情况。

因此，贝莱斯芽孢杆菌或前述的微生物菌剂可用于提高环境PH值，应用到改良土壤中。

第五方面，本申请提供前述的贝莱斯芽孢杆菌或前述的微生物菌剂在促进植物在酸胁迫下的生长中的应用。

实验证明，该菌株Y7在酸胁迫下能够提高烟草的叶面积、叶片数及株高，表明菌株Y7可以缓解酸胁迫对植物造成的胁迫，促进植物(如烟草)在酸胁迫环境下的生长，提高其产量；也为本发明的耐酸产碱促生菌在促生降酸方面的作用提供了依据。

可选地，所述应用中，所述植物包括烟草、辣椒。

第六方面，本申请还提供一种前述微生物菌剂的制备方法，其包括以下步骤：

将前述的贝莱斯芽孢杆菌接种至液体培养基中，在温度27～32℃、转速130～190r/min的摇瓶中培养，待该菌株生长至对数生长期时，使用无菌水或培养基稀释菌液，获得所述微生物菌剂。

优选地，所述发酵菌液的稀释范围为OD₆₀₀吸光度在1.5到1.0之间。

第七方面，本申请还提供一种土壤改良剂，其包括前述的多功能贝莱斯芽孢杆菌。

实验证明，贝莱斯芽孢杆菌Y7具有显著的降酸能力，其在24h内将液体LB培养基的pH值从5提高至8.06左右；添加菌株Y7的处理组可在28天内将植烟酸性土壤pH从5.1提高至5.3左右，而对照组的植烟酸性土壤的pH由5.1降低至4.7左右。显然，上述贝莱斯芽孢杆菌Y7可作为活性成分用于制备土壤改良剂，用于改善酸性土壤。

本发明具有以下有益效果：

1、本发明提供一株新分离的多功能贝莱斯芽孢杆菌Y7及其应用，该菌株是从常年植烟的酸性土壤中筛选到的高效稳定的多功能菌种，该菌不仅具有优异的耐酸能力，最适pH为4-9，适应范围广，且性能稳定；并且，该菌还具有降酸、解有机磷、解钾和固氮等多种促生特性，贝莱斯芽孢杆菌Y7菌剂能在酸胁迫下显著提高烟草的耐酸能力，减缓土壤酸化的影响，促进烟草生长，提高烟草生物量；从另一方面来看，其减少化学肥料的使用。

基于贝莱斯芽孢杆菌Y7的上述综合生物学特性，该耐酸产碱的多功能菌菌株及其微生物菌剂具有广泛的应用前景。

2、本申请提供的贝莱斯芽孢杆菌的微生物制剂制备方法简单，生产效率高，培养条件要求低，生产成本低，周期短，适合工业化大批量生产的需要，便于推广使用。

附图说明

图1为贝莱斯芽孢杆菌Y7的菌落形态图；

图2为贝莱斯芽孢杆菌Y7的功能性鉴定结果；

图3为贝莱斯芽孢杆菌Y7的耐酸性分析结果；

图4为贝莱斯芽孢杆菌Y7的降酸性分析；

图5为贝莱斯芽孢杆菌Y7的稳定性检测结果；

图6为贝莱斯芽孢杆菌Y7的16SrDNA的电泳结果与基于16SrDNA基因的序列构建的***发育树；

图7为贝莱斯芽孢杆菌Y7对酸胁迫下烟草生长的促进作用；

图8为贝莱斯芽孢杆菌Y7对植烟酸性土壤pH的影响。

图9为贝莱斯芽孢杆菌Y7对植烟酸性土壤酸度指标的影响。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。在本发明中，若非特指，所采用的设备和原料等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。

实施例1菌株Y7的分离筛选

1、实验方法：

从潍坊常年植烟酸性土壤中采集土样，从中分离出不同的微生物，并将菌株通过平板划线保存于LB固体培养基平板上，待用。LB成品培养基中加入10％的稀硫酸，将其配制成pH为5的液体培养基，再将活化24h的菌株分别稀释成1×10^-5、1×10^-6的菌液，各吸取1mL接种到不同pH的LB液体培养基中，在温度27～32℃、转速130～190r/min的摇瓶中培养24h，通过检测OD₆₀₀分析鉴定菌株的耐酸性，并对筛选出的生长良好的菌株进行反复平板划线纯化。

2、实验结果及分析：

经过筛选和纯化后，得到单一菌落的耐酸菌株，将该单一菌落命名为菌株Y7，其菌落和菌体形态具体见图1。

实施例2菌株Y7的鉴定

1.形态学鉴定

如图1所示，Y7为革兰氏阳性菌，菌株为杆状；菌落呈乳白色，在生长前期菌落呈无色透明，生长中后期呈白色，有多糖胶质产生，菌落在生长后期菌落表面产生褶皱，有芽孢产生。

2.生理生化鉴定

根据《常见细菌***鉴定手册》对Y7进行生理生化鉴定。

生理生化鉴定的结果具体见下表1。从表1可知，该菌的V-P测定为阳性，可以水解甘露醇和淀粉、液化明胶、产硫化氢和硝酸还原酶等。

表1菌株Y7的生理生化鉴定

3.分子生物学鉴定

在前述形态学鉴定和生理生化鉴定的基础上，进一步对菌株Y7进行分子生物学鉴定。

(1)实验方法：

提取菌株Y7的DNA并将其作为模板，采用16SrDNA通用上游引物27F和下游引物1492R对该菌的16S rDNA核苷酸片段进行扩增，扩增体系见表2，将扩增得到的产物送至生工公司进行测序。

引物序列如下：

上游引物27F：5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′(SEQ ID No:1)；

下游引物1492R：5′-TACGGTTACCTTGTTACGACTT-3′(SEQ ID No:2)。

表2 16S rDNA的PCR体系

(2)实验结果及分析

测序结果显示，菌株Y7的16SrDNA的长度为1436bp，序列如序列表中的SEQ ID No:3所示。将测序得到的序列提交到NCBI进行BLAST比对，选择相似度较高的菌株序列进行下载。利用软件MEGA 6.0构建***发育进化树，具体见图5。16SrDNA的序列比对结果显示，菌株Y7与Bacillus velezensis的序列相似度最高。

因此，结合该菌的形态、生理生化特征和16S rDNA序列分析结果可确定，该菌株为贝莱斯芽孢杆菌，将其命名为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)Y7。

实施例3菌株Y7的功能定性鉴定

本实施例目的在于分析菌株Y7在增加可溶性钾、可溶性有机磷、可溶性无机磷含量及固氮的应用潜力，确定菌株Y7的溶有机磷、难溶性钾和固氮的性能。

1、本实验采用的培养基及其配方：

有机磷培养基：葡萄糖10.0g/L，硫酸铵0.5g/L，酵母浸粉0.5g/L，氯化0.3g/L，氯化钾0.3g/L，硫酸镁0.3g/L，硫酸亚铁0.03g/L，硫酸锰0.03g/L，卵磷脂0.2g/L，碳酸钙1.0g/L，琼脂15g/L，pH7.0。

无机磷培养基：葡萄糖10.0g/L，硫酸铵0.5g/L，酵母浸粉0.5g/L，氯化钠0.3g/L，氯化钾0.3g/L，硫酸镁0.3g/L，硫酸亚铁0.03g/L，硫酸锰0.03g/L，磷酸钙5.0g/L，琼脂15.0g/L，pH7.0。

阿须贝氏培养基：磷酸二氢钾0.2g/L，硫酸镁0.2g/L，氯化钠0.2g/L，碳酸钙5.0g/L，甘露醇10.0g/L，硫酸钙0.1g/L，琼脂15g/L，pH7.0。

解钾培养基：葡萄糖10g/L，磷酸氢二钠0.2g/L，硫酸镁0.2g/L，氯化钠0.2g/L，硫酸钙0.2g/L，碳酸钙5g/L，钾长石粉25g/L，琼脂20g/L，pH7.2。

2、实验方法：

将Y7进行摇瓶培养，活化扩繁，分别按照上述配方分别配制解钾、解磷及固氮固体培养基，准备好灭好菌的平板，培养基灭好菌之后倒板，待凝固之后，吸取菌液1μL点到各种平板上，封好板放置28℃倒置培养，待有透明水解圈或者菌落时，观察实验结果。

解钾解磷评估标准：直径比＝透明圈直径/菌斑直径

固氮评估标准：测定菌落直径。

表3菌株Y7的解钾解钾固氮性能分析

3、实验结果及分析

从表3的结果可知，所述菌株具有一定的解钾、解有机磷、解无机磷、固氮的促生特性，其中对于解钾的能力较强，其溶解指数可以达到7.38。

实施例4菌株Y7的耐酸性测定

1、实验方法：

将菌株Y7的菌液分别接种到不同pH的LB液体培养基中，本实施例中，液体培养基pH为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12，在温度28℃、转速130～190r/min的摇瓶中培养24h，通过检测OD₆₀₀分析不同pH条件下菌株的生长情况，从而确定耐酸产碱促生菌菌株的耐酸性，结果如图3所示。

2、实验结果及分析

图3的结果显示，耐酸产碱促生菌菌株Y7对pH有较大的适应范围，其在pH3-9的范围内均可生长，且在pH4-8的范围内有较强的活性，这说明菌株Y7可耐受的pH区间范围较大，耐酸碱能力强。

实施例5菌株Y7的降酸能力测定

1、实验方法

为了研究菌株Y7的降酸能力，配制pH为5的LB液体培养基，以接种量为1％向该培养基中接种菌株Y7，在28℃下分别培养24h、36h和48h后，使用pH计检测液体培养基pH的变化。

2、实验结果及分析

如表4的结果显示，在24h内菌株Y7将LB液体培养基的pH从5提高至7.92，在48小时内菌株Y7将LB液体培养基的pH提高至8.04，这说明该菌株具有较强的产碱能力，显著提高了培养基的pH值。

表4接种菌株Y7的液体培养基pH变化

实施例6菌株Y7的稳定性测试

1、实验方法

为了研究菌株Y7的降酸能力的稳定性，配制pH为5的LB液体培养基，以接种量为1％接种菌株Y7，在28℃下摇瓶培养24h后进行继代，并使用pH计检测液体培养基pH的变化。

为了研究菌株Y7的促生能力的稳定性，将继代完成的菌株接种到解钾、解磷及固氮固体培养基，28℃下倒置培养，记录透明水解圈或者菌落的大小。

2、实验结果及分析

如图5的结果显示，在继代40次后，菌株Y7仍可以将pH为5的LB液体培养基pH从5提高至8.12左右，这说明该菌株不仅具有较强的产碱能力，还具有极高的稳定性，在多次继代后仍可以，有效提高培养基pH。

如表5结果显示，继代40次后，将菌株Y7接种到对应的培养基中，观察菌落与水解圈大小，发现菌株Y7的解钾、解有机磷、解无机磷、固氮能力未有明显退化，这说明其稳定性好。

表5多次继代后菌株Y7的促生功能分析

实施例6菌株Y7对酸胁迫下烟草生长的影响

1、实验方法：

将烟草种子播种装有泥炭土的到穴盘中，按每穴孔2粒的量进行播种，上覆盖0.5cm的泥炭土，将穴盘置于托盘中，加入1L水，待种子发芽，每周浇水2次，每次1L水，待烟草幼苗长至四叶一心期，移栽入花盆中(高10cm、上口直径10cm)，一周后再次移栽入大花盆中(高20cm、上口直径20cm)，进行盆栽实验。烟草盆栽实验是在青岛农业大学温室进行，温度为28C、光周期为14h/10h、光照强度为1000Lux，酸性土壤初始pH为5.1，正常土壤初始pH为6.1。

对烟草分别设置以下三个处理组：

①空白对照组(pH为6.1的正常土壤)；

②酸胁迫处理组(pH为5.1的酸性土壤)；

③酸性土壤和Y7菌液共同处理(28℃，培养24h后的菌液稀释10倍后进行灌根使用，使用量按水土质量比1：10使用)。

对以上各个处理的烟草幼苗移栽后7天进行按水土质量比1：10的固定用量采用稀释后菌液进行灌根。期间使用吡蚜酮和烯啶虫胺进行喷洒，防止病虫害。待烟草生长5周后对其进行生长指标的测量。

各个生长指标的测定方法：生长35d后用直尺测烟草的自然高度，并测定最大叶面积的长宽，通过称重法计算叶面积；用叶绿素仪测定从下到上第3片叶的叶绿素含量，将根部冲洗洗净后用根系扫描仪测定根系的长度和表面积等指标。

2、实验结果及分析

从图7和表5可知，酸胁迫条件下耐酸产碱菌株Y7能够有效促进烟草的生长；相对于酸胁迫处理组，酸胁迫下使用Y7菌液处理组的烟草的株高、鲜重、叶面积和茎粗显著增加，分别依次提高了64.43％、25.91％、45.73％和34.94％。上述实验结果说明，菌株Y7能够有效缓解酸胁迫对植物生长的影响，且对植物生长具有促进作用。

表5Y7对烟草生长的影响

实施例7菌株Y7对植烟酸性土壤的影响

1、实验方法：

将四叶一心期的烟草幼苗长移栽至花盆中(高10cm、上口直径10cm)，一周后再次移栽入大花盆中(高20cm、上口直径20cm)，进行盆栽实验。每隔七天取土样检测土壤pH变化，待生长5周后，取土样检测酸度指标变化。分别设置以下三个处理组：

①空白对照组(pH为6.1的正常土壤)；

②酸胁迫处理组(pH为5.1的酸性土壤)；

③酸性土壤和Y7菌液共同处理(28℃，培养24h后的菌液稀释10倍使用)。

对以上各个处理的烟草幼苗移栽后7天进行按水土质量比1：10固定用量灌根。期间使用吡蚜酮和烯啶虫胺进行喷洒，防止病虫害。酸性土壤初始pH为5.1，正常土壤初始pH为6.1。

2、实验结果及分析

(1)如图8所示，添加菌株Y7的处理可以在28天内将酸性土壤pH从5.1提高至5.3左右，而未添加菌株Y7的处理土壤pH均有下降，正常土壤的pH由6.1降低至5.3左右，酸性土壤的pH由5.1降低至4.7左右，分析原因可能是烟草在生长过程中根系会产生酸性物质导致土壤酸化，而添加菌株Y7可缓解这一现象。

(2)如图9所示，添加菌株Y7的处理相较于酸性土壤未菌株Y7的处理，其水解性总酸、可交换氢、可交换酸和可交换铝分别降低了43.47％、97.52％、35.67％和20.57％。上述实验结果说明，菌株Y7能够有效缓解土壤酸化，且有效降低土壤酸度指标。

实施例8菌株Y7对辣椒生长的影响

1、实验方法

将辣椒种子以双粒播种的方式播种到穴盘中育苗，待种子发芽，每周浇水2次，每次1L水，待辣椒幼苗长4周后，选择生长情况一致的幼苗移栽入花盆中(高10cm、上口直径10cm)，一周后再次移栽入大花盆中(高20cm、上口直径20cm)，进行盆栽实验。

辣椒盆栽实验是在青岛农业大学温室进行，温度为28℃、光周期为14h/10h、光照强度为1000Lux，酸性土壤初始pH为5.1，正常土壤初始pH为6.1。

对烟草分别设置以下三个处理组：

①空白对照组(pH为6.1的正常土壤)；

②酸胁迫处理组(pH为5.1的酸性土壤)；

③酸性土壤和Y7菌液共同处理(28℃，培养24h后的菌液稀释10倍使用)。

对以上各个处理的辣椒幼苗移栽后7天，按150ml/株的量灌根。待辣椒生长5周后对其进行生长指标进行测量。

2、实验结果及分析

如表6所示，使用菌液处理可以有效促进辣椒的生长与果实的成熟，相较于酸性土壤，添加Y7菌液的处理对辣椒的株高、最大叶面积和辣椒果实的长度与鲜重分别提高了12.2％、19.6％、38.1％和53.1％；该菌液处理有效的缓解酸性土壤对于辣椒苗本身的胁迫，也可明显促进辣椒果实的生长发育。

表6Y7对辣椒生长的影响

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Claims (10)

1.一株耐酸产碱的多功能贝莱斯芽孢杆菌，其特征在于，被命名为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)Y7，其保藏号为CGMCC No 27762。

2.一种微生物菌剂，其特征在于，活性成分为如权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌。

3.根据权利要求2所述的微生物菌剂，其特征在于，所述活性成分为权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌的菌体、发酵液或发酵上清液。

4.根据权利要求2所述的微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂的剂型为可湿性粉剂、水分散剂、水悬浮剂或可分散油悬浮剂。

5.如权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌或如权利要求2所述的微生物菌剂在解磷、解钾、固氮中的应用。

6.如权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌或如权利要求2所述的微生物菌剂在提高环境PH值、改良土壤中的应用。

7.如权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌或如权利要求2所述的微生物菌剂在促进植物在酸胁迫下的生长中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述植物包括烟草、辣椒。

9.一种如权利要求2所述的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌接种至液体培养基中，在温度27～32℃、转速130～190r/min的摇瓶中培养，待该菌株生长至对数生长期时，将菌液进行稀释后，获得所述微生物菌剂。

10.一种土壤改良剂，其特征在于，包括如权利要求1所述的多功能贝莱斯芽孢杆菌。