CN1158704A - 蛋白质可鲁可林及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及自Curculigo latifolia的果实或其干燥物或兼自这两者中用0.01M以上浓度的盐的水溶液抽提出可鲁可林(Curculin)蛋白质的方法及利用该蛋白质对味觉产生修饰的方法，以及采用抽提出的可鲁可林蛋白质或含有可鲁可林蛋白质的成分制成的酸味性物质的味觉修饰剂、口香糖组合物及口腔清洁用组合物。

Description

蛋白质可鲁可林及其用途
本申请是发明专利申请CN89104332.2的分案申请。
本发明涉及新颖的蛋白质可鲁可林(Curculin)及其作为味觉修饰剂的用途。
在已有的技术中，作为作用于舌头的感受膜上，使食品的味觉发生变化的味觉修饰物质，已知的有含在口中之后再食用甜味物质时、或者与甜味物质一起食用时，使之不感觉到有甜味的匙羹藤(Gymnema sylvestre)的叶中所含的匙羹藤酸及枣木叶里所含的枣碱，另外，还知道与上述同样作为在食用酸味物质时使之感觉到甜味的Synsepulm dulcificum的果实中所含的米兰库林(miraculin)。
作为在口香糖中使用味觉修饰物质的例子，可参阅将米兰库林掺入口香糖组合物中或被覆于口香糖组合物上的口香糖的制造方法(特公昭49-32068号公报)。
此外，作为在清洁口腔用组合物中使用味觉修饰物的例子，有将米兰库林掺入口腔清洁用组合物中，以防止因口腔中残留的十二烷基硫酸钠引起的汁液味变化的口腔清洗用组合物的例子(参见特开昭61-36214号公报)。
另外，Curculigo latifolia是西马来西亚及泰国南部等地自生的石蒜科仙茅属的植物，其果实适于食用，已知具有增进食欲的效果。
上述的米兰库林如上所述具有味觉修辞剂的功能，但是稳定性上存在问题，尚未作为味觉修饰物质而实用化，使用米兰库林的口香糖组合物以及口腔清洁用组合物也尚未实用化。
此外，Curculigo latifolia的果实的上述外的性质方面还不了解。
本发明的第一个目的在于提供稳定性高的，新颖的味觉修饰物质。
本发明的第二个目的在于提供饮食酸性物质、在口中呈酸性的物质或含有这些物质的食物(以下称为酸味物质)时产生味觉修饰效果的、稳定度高的、新颖的、酸味物质的味觉修饰剂。
本发明的第三个目的在于，提供具有新颖的味觉修饰效果、且味觉修饰功能稳定的口香糖组合物。
本发明的第四个目的在于，提供具有新颖的味觉修饰效果的，且味觉修饰功能稳定的口腔清洁用组合物。
本发明的发明者们发现食用了Curculigo latifolia的果实后，食用酸味物质或水时会产生甜味，随后又对其诱因物质是什么进行了专门研究，结果发现Curculigo latifolia的果实中所含的特定的蛋白质(命名为可鲁可林(Curculin))为产生甜味感觉的诱因物质。
另外，本发明的发明者们发现食用Curculigo latifolia的果实后再饮食酸味物质时会感觉到甜味，因而该果实能够成为达到上述目的的酸味物质的味觉修饰剂。
此外，本发明的发明者们经过进一步锐意研究之后，结果发现将Curculigolatifolia的果实或其干燥物、或者从这些物质得到的含有可鲁可林的成分掺入口香糖而可制成达到上述的目的口香糖。
此外，本发明的发明者们经过进一步锐意研究，结果发现将Curculigolatifolia的果实或其干燥物、或者从这些物质得到的含有可鲁可林的成分掺入口腔清洁剂中而可制成达到上述目的的口腔清洁剂。
本发明就是以上述所见为根据进行的，通过提供由Curculigo latifolia的果实或其干燥物中用0.01M以上浓度的盐的水溶液抽提出的蛋白质可鲁可林(第一发明)从而达到上述第一目的。
上述的第一发明的新颖物质可鲁可林的稳定度高、可适用作味觉修饰物质，例如，在事前食用了本发明的可鲁可林或其含有物之后，饮食酸味物质或水等之时可以产生甜味，因而在食用因保存性等理由而不得不制成酸性的食品、或因健康或营养上的理由而不含有砂糖的食品时可使之产生所希望的甜味，因此，在广泛的用途方面具有利用的可能。
此外，本发明通过提供由Curculigo latifolia的果实或者其干燥物或者含有从这些物质中得到的可鲁可林成分所组合物酸味物质的味觉修饰剂(第二发明)而达到上述的第二个目的。
上述第二发明的酸味物质的味觉修饰剂的稳定度高、如事前食用本发明的味觉修饰剂或其含有物，则在饮食酸味物质时可感到甜味，使食用为了保藏等原因而非制成酸性不可的食品时能使之产生所希望的甜味，另外，在含有具有苦味、涩味或辣味的食物上可使之产生较强的甜味，因而可以在更为广泛的用途方面得以利用。
本发明借提供以含有Curculigo latifolia的果实或其干燥物，或者从中得到的含可鲁可林的成分为特征的口香糖的组合物(第三发明)而达到上述的第三个目的。
上述的第三发明的口香糖组合物有新颖的味觉修饰效果且为味觉修饰功能稳定的口香糖组合物，不仅能长时间地保持口香糖的风味，而且嚼食口香糖之后食用的酸味物质及水感觉甜味，减轻酸味物质的酸性，增强甜味，能使具有酸味的食物成为具有甜味的易食用的食品。
另外，本发明借提供以含有可Curculigo latifolia的果实或其干燥物，或者从中得到的含有可鲁可林的成分为特征的口腔清洁用组合物(第四发明)而达到上述的第四个目的。
上述第四发明的口腔清洁用组合物，具有新颖的味觉修饰效果，且为味觉修饰功能稳定的口腔清洁用组合物，不仅使清洁口腔用的水产生甜味，而且使在使用口腔清洁用组合物之后食用的酸味物质及水产生甜味，另外即便在口腔清洁用组合物中掺合了十二烷基硫酸钠，也不会产生因该十二烷基硫酸钠而产生的余味的恶化。
首先，对本发明的第一发明的蛋白质可鲁可林作详细叙述。
本发明的可鲁可林为用0.0lM以上浓度的盐水溶液自Curculigo latifolia的果实或其干燥物抽提而得到的。
作为上述的盐，可以采用下述的盐类，即，氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁或氯化铵，磷酸钠、磷酸钾、磷酸镁或磷酸铵，碳酸钠、碳酸钾、碳酸镁或碳酸铵，钠、镁、钙或铵的硫酸盐或亚硫酸盐，钠或钾的硝酸盐或亚硝酸盐、钠或钙的乳酸盐、明矾、烧明矾、乙酸
钠、钠或钾的焦磷酸盐，钠或钾的丙酸盐、安息香酸钠、富马酸钠、聚丙烯酸钠等。
另外，作为上述的Curculigo latifolia的果实的干燥物，对其干燥手段并无特别的限制，日晒干燥物、热风干燥物、及冻结干燥浆等冻结干燥物等均可使用。
作为用上述盐水溶液抽提可鲁可林的方法，其代表性例子如下所述。
向Curculigo latifolia的果实或其干燥物中加入上述盐水溶液，经匀化后，进行过滤、离心等便可抽提出来，由于可鲁可林被含于Curculigo latifolia的果实的果肉中的水不溶部分，因而在上述的果实或其干燥物中加水进行匀化，充分水洗，除去水溶液后用上述盐水溶液从该残渣中抽提的方法可得到高纯度的可鲁可林，因而是理想的。
因用低于0.01M浓度的盐水溶液不能充分地抽出可鲁可林，因而0.01M以上的浓度的盐的水溶液是必要的。另一方面，太高浓度的盐在抽提后的脱盐工序较麻烦，因而从抽提效率与抽提后的精制手续之间均衡考虑，0.1-1.0M浓度的盐水溶液是理想的。
对从上述盐水溶液而得的抽提液进行脱盐、干燥，可得到供充分使用的含有可鲁可林的物质，但通过对抽提液进一步用CM-琼脂糖的离子交换、使用凝胶柱的HPLC进行精制，可提高纯度，此后，经脱盐、干燥而得纯的可鲁可林。当然，除上述的精制法之外，采用盐析抽提液，溶剂沉淀及其它公知的蛋白精制法进行分离也可使可鲁可林的纯度提高。
作为由此而得的本发明的可鲁可林的具体例，可举分子量约2,500道尔顿，氨基酸残基数为97，等电点为7.1的蛋白质，该蛋白质以分子量约为26,000道尔顿的二聚体存在。另外，上述蛋白质的氨基酸的组成如以下的表1所示，上述蛋白质为含天冬氨酸、亮氨酸及甘氨酸量比较多的氨基酸。
表1氨基酸组成
氨基酸 摩尔％ 残基数
Asp  17.3  17
Thr  6.4  6
Ser  7.0  7
Glu  7.2  7
Pro  1.2  1
Gly  12.5  12
Ala  5.3  5
半Cys  -  -
Val  6.8  7
Met  0.4  1
Ile  4.2  4
Leu  14.5  14
Tyr  5.2  5
Phe  1.3  1
Lys  2.7  3
His  2.4  2
Arg  5.5  5
总量  97
上述的本发明的蛋白质可鲁可林适合作为味觉修饰剂使用。
由上述的可鲁可林制成的本发明的味觉修饰剂可直接摄取，也可以适当地掺入食品、饮料或药剂中使用。至于对食品等的掺合量，可参考下述可鲁可林呈现甜味的活性，随目的及用途而定。
另外，含有自可鲁可林制成的味觉修饰剂的食品等，可根据该食品等的性状，加工成为粉末状、溶液状、薄片状、喷雾状或者乳化物状。
本发明的可鲁可林，含入口中之后，食用酸味物质、无味物质或水等时，或者与酸味物质、无味物质或水等一起食用时，具有与舌部的感受膜作用，而产生甜味的效果，如果事先食用本发明的可鲁可林或含该可鲁可林的制剂或食品等，则在此后的三十分钟之内，食用
酸味物质、无味物质或水时可产生甜味。
对于各种水溶液的纯可鲁可林(4×10M浓度)的呈现甜味活性如下述的表2所示，对于酸味物质，活性尤其高。
                   表2
    水溶液   甜味呈现活性
  柠檬酸(0.02M)   与0.3M蔗糖水溶液等同
  抗坏血酸(0.02M)   与0.2M蔗糖水溶液等同
       水   与0.1M蔗糖水溶液等同
 日本茶(1g/100ml)   与0.1M蔗糖水溶液等同
  红茶(1g/100ml)(不含糖)   与0.1M蔗糖水溶液等同
另外，本发明的可鲁可林不同于ミラクルフ-ツ的果实中所含的米兰库林(miraculin)，在水溶液中也是稳定的，因而可以容易地将可鲁可林及含可鲁可林的制剂或食品等制成粉末状、片剂状、薄片状，此外还可制成溶液状、乳化物状、喷雾状。
此外，本发明的可鲁可林其自身也有微弱的甜味。
以下，对本发明的第二发明的酸味物质的味觉修饰剂进行详述。
本发明的味觉修饰剂并不限于Curculigo latifolia的果实，其干燥物也是可以的，作为该干燥物，其干燥手段无特别的限制，可以列举日晒干燥物、热风干燥物及冻结干燥浆等冻结干燥物等。
Curculigo latifolia的果实及其干燥物的使用形态无特别的限制，通常采用适宜的破碎、粉碎、膏状化等方法。
另外，本发明的味觉修饰剂，如为上述的Curculigo latifolia的果实或自其干燥物制得的含可鲁可林的成分也是可以的，作为该成分，可例举对上述果实或其干燥物中抽提出的可鲁可林、或上述果实或其干燥物进行适当处理，分离除去不含可鲁可林的成分而剩下的残渣。对于果实或其干燥物中抽提出的上述可鲁可林的精制纯度无任何限制，除高纯度物之外，也可为含多量非可鲁可林成分之物，另外，在抽提物中混合其他的成分也是可以的。
上述的可鲁可林的抽提法，虽然不一定受限制，但利用前述的第一发明中例示的抽提方法，即从Curculigo latifolia的果实或其干燥物中用0.01M以上浓度的盐水溶液抽提的方法是较好的。
上述的本发明的酸味物质的味觉修饰剂既可直接摄取，也可适宜地掺合入食品、饮料或药剂等中进行使用。本发明的味觉修饰剂对于食品等的掺合量，随其使用形态及掺合使用的食品等的差异而不同，虽不能一概而论，但通常对于100重量份的食品等，可鲁可林在0.001-1重量份的范围中选择。
本发明的味觉修饰剂，进一步通过含有具苦味、涩味或辣味的物质，而使其对于酸味物质的味觉修饰效果进一步增强。也就是说，本发明的味觉修饰剂在苦味、涩味或辣味的物质与酸味物质同时存在于口中时，可产生更强的甜味感觉。不过并不一定要使有苦味、涩味或辣味的物质与酸味物质或本发明的味觉修饰剂同时摄取，可在其少许前些或少许后些摄取也行，只要和本发明的味觉修饰剂及酸味物质同时存在于口中便可。
另外，含有本发明的味觉修饰剂的食品等，根据该食品等的性状，可以加工成为粉末状、溶液状、薄片状、喷雾状或乳化物状等。
本发明的酸味物质的味觉修饰剂，在口中含食后，饮食酸味物质时，具有作用于舌部感受膜而产生甜味的效果，如果事前食用本发明的味觉修饰剂或含该味觉修饰剂的制剂，可以在三十分钟之内饮食酸味物质时引起甜味的感觉。
另外，本发明的酸味物质的味觉修饰剂其本身也有微弱的甜味。
以下，对本发明的第三个发明的口香糖组合物进行详述。
含有在本发明的口香糖组合物中的可与Curculigo latifolia的果实、或其干燥物、或其中得到的含有可鲁可林的成分，具有如下的效果。
(1)长时间保持口香糖的风味。
(2)通过食用口香糖而对舌部的味觉感受器官进行味觉修饰、对食用口香糖之后食用的酸味物质及水添加甜味。
(3)可避免使用以往为长期保持口香糖风味而加入的砂糖或人工甜味剂，或者可以实质上减少其使用量。
(4)不仅使口香糖成分及/或口香糖中的香料味改善，而且其自身也呈现香味，该味可以持续1小时或更长。这一点与市售的口香糖通常在咀嚼约2、3分钟之间即失去味道形成了对照。
(5)使普通掺合于口香糖中的有酸味的水果香料味得以改善。
对于作为第三发明中所用的Curculigo latifolia的果实、其干燥物及从中所得的含可鲁可林的成分，可以列举与构成前述第二发明的味觉修饰剂的Curculigo latifolia的果实或其干燥物或从中得到的含可鲁可林的成分相同的物质。
作为使上述的Curculigo latifolia的果实或其干燥物或从中所得的含可鲁可林的成分掺入口香糖组合物的方法，可以列举将上述的果实、干燥物或含可鲁可林的成分与口香糖基混合的方法，或将上述的果实、干燥物或含可鲁可林的成分被覆于由口香糖基形成的胶质周围的方法，但被覆于胶质周围的后一种方法，为了改善或持续所希望的香味，所需上述果实干燥物或含可鲁可林的成分的量较少，故较为理想。
对于上述的被覆，可以用上述果实的粉末撒在胶质四周，或用上述果实等的膏状物涂敷于胶质的四周等，或按任意的方法进行。
作为本发明的口香糖的组合物的合适的胶基，可以列举未变性的滂阡树脂胶、glutacathyan、糖胶树脂、美国专利第1930436说明书中记载的胶乳基、同一美国专利第2137746号说明书中记载的节路顿胶胶基及它们的混合物，用石蜡变性的胶基等。
对于Curculigo latifolia的果实或其干燥物、或者由此得到的含可鲁可林的成分的配比量、不受口香糖形状如何的影响，单位胶质，可鲁可林0.01以上，特别在0.1-1mg时为佳。使用多量的Curculigo latifolia果实或其干燥物，或者从中得到的含可鲁可林的成分也是可以的，但对味觉修饰效果，多量使用实质上并不有益。
本发明的口香糖组合物中，可以加入薄荷、或水果香料、或按需要也可加入砂糖。
另外，本发明的口香糖组合物，可以含有无毒性的酸。该无毒性的酸，在Curculigo latifolia的果实或其干燥物，或者从中所得的含可鲁可林的成分对舌的味觉感觉器官进行味觉修饰之后，可以增加甜味，使口香糖的口味提高，而且为含热量低的高甜度的口香糖。作为合适的无毒性的酸，可以列举，羧酸(例如柠檬酸、苹果酸、抗坏血酸、醋酸、酒石酸)、低浓度的无机酸及其混合物。上述酸是以可获0.001M乃至0.1M的有效摩尔浓度的量进行使用的。“有效摩尔浓度”即在溶解的情况下，使口香糖组合物中所含酸的量为，可提供与该摩尔浓度酸溶液同等甜味效果的量。
另外，Curculigo latifolia的果实，其自身也有微弱的甜味，仅将此加入胶基也能制成水果风味的口香糖。
以下，对于本发明的第四个发明一口腔清洁用组合物进行详述。
本发明的口腔清洁用组合物中所含的Curculigo latifolia的果实或其干燥物，或从中得到的含可鲁可林的成分，具有以下的效果。
(1)口腔清洁用组合物使用之后，对舌部的味觉感受器官进行味
觉修饰，而后使清洁口腔的水产生甜味。
(2)使口腔清洁用组合物使用后食用的酸味物质及水添加甜味。
(3)在口腔清洁用组合物中掺入十二烷基硫酸钠的场合，可防止该口腔清洁用组合物使用后，因口腔中残存十二烷基硫酸钠所引起的食物味道的恶化，并添加好吃的甜味。
(4)通过将Curculigo latifolia的果实或其干燥物、或者从中得到的含可鲁可林成分掺合于口腔清洁剂中，从而不使用小儿用的带甜味的口腔清洁剂，也可用作小儿用口腔清洁剂。
本发明的口腔清洁剂组合物的特征是作为漱口剂、液状口腔清凉剂、液态牙膏、牙膏等形式使用，含有可鲁可林的果实或其干燥物、或从中得到的含可鲁可林的成分。
作为第四发明所用的Curculigo latifoia的果实、其干燥物、及从中得到的含可鲁可林的成分，可以列举如上述的第三发明相同之物。
上述Curculigo latifolia的果实或其干燥物、或者从中所得的含可鲁可林的成分，在掺合入口腔清洁用组合物之时对掺合形式无特别的限制，直接掺合也行，但为了稳定配合的目的，也可将Curculigo latifolia的果实或其干燥物、或者从中所得的含可鲁可林的成分微型胶囊化或以葡聚糖等包覆后掺入。
另外，对于Curculigo latifolia的果实或其干燥物、或从中所得的含可鲁可林的成分的配比量，相对于组合物总量，以1-10-3％(重量％、以下相同)可鲁可林、特别是10-1-10-2％为宜。用多于此量的Curculigo latifolia的果实或其干燥物，或从中所得的含有可鲁可林的成分也是允许的，然而对于味觉修饰效果而言，多量使用在实质上并无利益。
作为本发明的口腔清洁用组合物的成分，根据组合物的种类的不同可以采用适宜的成分。
例如，在漱口剂等为液状组合物的场合下，除了水、乙醇等溶液外，还可加入聚乙二醇、山梨糖醇、甘油、丙二醇等粘稠剂；十二烷基硫酸钠等烷基的碳原子数为8-16的烷基硫酸酯的水溶性盐、十二烷基苯磺酸钠、氢化椰子脂肪酸单甘油酯一硫酸钠、十二烷基硫代醋酸钠、十二烷基酰肌氨酸钠盐、N-酰基谷氨酸盐、十二烷基二乙醇酰胺、蔗糖脂肪酸酯等界面活性剂；还有薄荷、留兰香等精油；1-薄荷醇、香芹酮、丁子香酚、大茴香醚等香料原料之类的香料、糖精钠、蛇菊苷、新桔皮苷二氢查尔酮、甘草酸、紫苏糖、p-甲氧基肉桂醛等甜味剂、防腐剂等等。
另外，对凝胶状或练状组合物的场合，可以掺入羧甲基纤维素钠盐、羟乙基纤维素、褐藻酸盐、角叉莱胶、***树脂、聚乙烯醇等粘结剂。此外，对于牙膏类，可以掺入亚磷酸钙、碳酸钙、焦磷酸钙、不溶性偏磷酸钠、非晶体二氧化硅、晶体二氧化硅、硅铝酸盐、氧化铝、氢氧化铝、树脂等研磨剂。
另外，对于本发明的口腔清洁剂用组合物，可以掺入Chlorohexidin盐、葡聚糖酶、mutanase、山梨糖酸、アレキシジソ、日扁柏醇、氯化十六烷基吡啶盐、烷基甘氨酸、烷基二氨基乙基甘氨酸盐、尿囊素、1-氨基己酸、凝血酸、甘菊环、维生素E、水溶性磷酸二氢盐或磷酸氢盐、季铵化合物、氯化钠、生药提取物等有效成分。
本发明的口腔清洁用组合物、可以采用适应其种类的公知的方法来制造。
以下表示实施例，并对本发明作具体的说明。实施例1
在Curculigo latifolia的果实的冻结干燥浆30g中加入600ml水，用混合器在2分钟内进行匀化之后，在10,000r.p，m下用30分钟离心分离。除去上清液(着色)后，在残渣中加入600ml水、匀化、离心分离、随后直至上清液不带色为止重复四次去除上清液，得到残渣。
随后，在此残渣中加入0.5M NaCl水溶液250ml，用混合器在2分钟内匀化后，进行抽滤。滤液分取后、再向残渣中加入250ml的0.5M NaCl溶液，进行匀化及吸滤之后分取滤液。
接着，将滤液合并，之后在30,000r.p.m.下离心分离1小时，得到上清液(可鲁可林粗提取液)。
从该粗提取液经脱盐，冻结干燥，得到含有可鲁可林的物质(粗可鲁可林)。实施例2
用超滤法使由实施例1所得的可鲁可林粗抽提液500ml浓缩至30ml，在此浓缩液中加入70ml 0.01M磷酸缓冲液(pH6.8)，以100ml作为试料液，进行CM-葡聚糖柱层析[用0.01M磷酸缓冲液(pH6.8)平衡的CM-葡聚糖CL-6B]。使试料液在床体积为130ml高度为17cm的柱中流下，用0.01M磷酸缓冲液(pH6.8)洗净之后，用0-1.0M NaCl/0.01M磷酸缓冲液(pH6.8)作梯度洗脱，收集活性部分。
从该活性部分中，经脱盐、冻结干燥而得到含有可鲁可林的物质(粗精制可鲁可林)。实施例3
用超滤法对实施例2所得的活性部分进行浓缩之后，进行采用凝胶柱(东洋索达(ソ-ダ)制TSK凝胶G3,000SW)的HPL，用0.01M磷酸缓冲液(pH6.8)洗脱。
洗脱出的可鲁可林对应于具有强活性的锐利的吸收峰。
对该活性部分进行脱盐、冻结干燥得到精制的可鲁可林。
另外，对该精制的可鲁可林在8.0M尿素存在下，用SDS-PAGE进行测试，在分子量为12,500道尔顿处显示单一的吸收带，从而确认为纯品可鲁可林。
对应于30g Curculin latifolia的果实的冻结干燥浆，各实施例所得的可鲁可林的蛋白质、活性收率及比活性如下面的表3所示。
                  表3
  蛋白质重量   活性收率   比活性
  冻结干燥浆   30g   作为100   作为1
  实施例1   38mg   85.4   672
  实施例2   11.5mg   73.6   1920
  实施例3   10mg   66.7   2000
实施例4
将实施例1所得的粗的可鲁可林10mg及食盐1mg溶于20ml水中，成为0.05％的水溶液。该水溶液于室温下(25℃前后)放置1个月之后也是稳定的。将该水溶液1ml含于口中1分钟再吐出后，分别饮用0.02M柠檬酸、水、红茶。将此时的甜味感示于下记的表4。
                    表4
饮食物 甜味感
0.02M柠檬酸 与10％砂糖水溶液相等
水 与3％砂糖水溶液相等
红茶(不含糖) 与2％砂糖水溶液相等
对于红茶，如同饮用普通的添加砂糖的红茶的感觉一样。实施例5
用下记的表5所示的配比，制成清咖啡冻胶(A)及加入砂糖的咖啡果冻(B)。
                         表5
  A(％)   B(％)
咖啡抽提物     2     2
咖啡抽提液     8     8
焦糖     0.1     0.1
明胶     2     2
    0.5     0.5
水     87.4     83.4
  (上白糖)     -     4
另一方，将市售的新鲜奶油(C)中加入实施例1所得的粗可鲁可林0.005％，制成含有可鲁可林的新鲜奶油(D)。
将咖啡冻胶(A)溶解后，注入杯中，在冷却而结成的冻状物之上，挤上新鲜奶油(D)中加入10％砂糖加以搅拌之物约10g，得到奶油咖啡冻胶。另外用和上述同样方法可得到在咖啡冻胶(B)之上，浇有新鲜奶油(C)中加入10％砂糖搅拌而成之物的奶油咖啡冻胶。
食用搅拌奶油(D)之后食用咖啡冻胶(A)时，感受到如同食用搅拌奶油(C)之后食用咖啡冻胶(B)时一样的风味。实施例6
代替实施例5中所用的搅拌奶油(D)，把加入实施例1所得的粗可鲁可林0.2％而作成的可食用的薄膜0.2g在兼有防止干燥的情况下以薄膜状盖在实施例5的咖啡冻胶(A)的表面。食用该可食性薄膜之后，再食用咖啡冻胶时，感受到如同食用实施例5的咖啡冻胶(B)时一样的风味。实施例7
在30g Curculigo latifolia的果实的干燥物中加入600ml水，用混合器匀化2分钟之后，在30分钟内以10,000r.p.m.进行离心分离。除去上清液(着色)之后，在残渣中加入600ml水，匀化，离心分离，直至上清液不再着色为止，重复除去上清液四次，得到残渣。
接着，在该残渣中加入0.5M NaCl水溶液250ml，用混合器匀化2分钟之后，进行吸滤。分取滤液后，再在残渣中加入250ml 0.5M NaCl水溶液，进行匀化和抽滤，分取滤液。
随后，合并滤液之后，以30,000r.p.m.离心分离1小时，得到上清液(可鲁可林粗抽提液)。
从该粗抽提液经脱盐、干燥而得到含可鲁可林(粗可鲁可林)的物质。实施例8
对实施例7所得的可鲁可林抽提液500ml通过超滤浓缩至30ml，向此浓缩液中加入0.01M磷酸缓冲液(pH6.8)70ml，以100ml为试料液，进行CM-琼脂糖柱层析[用0.01M磷酸缓冲液(pH6.8)平衡的CM-琼脂糖CL-6B]。使试料液自床体积为130ml高度为17cm的柱中流下，用0.01M磷酸缓冲液(pH6.8)洗净后，用0-1.0M NaCl/0.01M磷酸缓冲液(pH6.8)的梯度洗脱液进行洗脱，收集活性部分。
从该活性部分经脱盐、干燥，得到含有可鲁可林(粗精制的可鲁可林)的物质。实施例9
用超滤法对实施例8所得的活性部分进行浓缩之后，向用凝胶柱(东洋索达制TSK凝胶G 3,000SW)的HPLC进行上柱，用0.01M磷酸缓冲液(pH6.8)进行洗脱。
洗脱出的可鲁可林相应于特强活性的尖锐的吸收峰。
对该活性部分进行脱盐、干燥、得到精制的可鲁可林。
另外，该精制的可鲁可林在8.0M尿素存在下用SDS-PAGE进行测试，在12,500道尔顿之处显示单一的吸收带，确认为可鲁可林的纯品。
对于平均30g Curculigo latifolia的果实的干燥物，各实施例中所得的可鲁可林的蛋白量、活性收率及比活性如下记的表6所示。
                         表6
蛋白质重量 活性收率 比活性
干燥物 30g 作为100 作为1
实施例 38mg 85.4 672
实施例8 11.5mg 73.6 1920
实施例9 10mg 66.7 2000
实施例10
用20ml水溶解实施例7所得的可鲁可林100mg及食盐1mg，配成0.5％的水溶液。该水溶液在室温(25℃前后)放置1个月后也是稳定的。将该水溶液1ml含于口中1分钟，吐出之后，分别食用0.02M柠檬酸、水、红茶(清)。此时所感到的甜味示于下记的表7。
                              表7
饮食物     甜味感
0.02 M柠檬酸 与10％砂糖水溶液相同
水 与3％砂糖水溶液相同
红茶(清) 与2％砂糖水溶液相同
红茶(清)与普通的添加砂糖的红茶有同样的味道。实施例11
用下记的表8所示的配方制成清红茶咖啡冻胶(A)及加入砂糖的咖啡冻胶(B)。
                           表8
 A(％) B(％)
上白糖 - 4
咖啡抽提物 2 2
咖啡抽提液 8 8
焦糖 0.1 0.1
明胶 2 2
焦糖苦碱 0.5 0.5
水 87.4 83.4
另一方面，在市售的新鲜奶油(C)加入0.05％实施例7所得的粗可鲁可林，制成含有可鲁可林的新鲜奶油(D)。
将咖啡冻胶(A)溶解后，注入杯中，冷却而固结成冻胶状，在其之上加盖由新鲜奶油(D)中加入10％砂糖搅拌而成之物10g，得到奶油咖啡冻胶。另外，用与上述同样方法，即在咖啡冻胶(B)之上浇盖由新鲜奶油(C)中加入10％砂糖并搅拌而成之物，制得奶油咖啡冻胶。
在食用搅拌奶油(D)后食用咖啡冻胶(A)之时，与食用搅拌奶油(C)之后食用咖啡冻胶(B)时，产生同样的味觉。实施例12
代替实施例11所用的搅拌奶油(D)，将添加实施例7所得的粗可鲁可林0.5％制成的可食性薄膜0.2g在兼防止干燥下，以薄膜状盖在实施例11的咖啡冻胶(A)的表面。食用该可食性薄膜之后再食用咖啡冻胶(A)时，与食用实施例11的咖啡冻胶(B)时产生同样的味觉。实施例13-18
除分别采用0.5M KCl水溶液(实施例13)、0.5M CaCl2水溶液(实施例14)、0.5M NaHCO3水溶液(实施例15)、0.5M MgCO3水溶液(实施例16)、0.2M KH2PO4水溶液(实施例17)、0.2M NaH2PO4水溶液(实施例18)代替实施例7所用的0.5M NaCl水溶液之外，其余均以与实施例7相同的方法分别制成含有可鲁可林(粗可鲁可林)的物质。实施例19
将Curculigo latifolia的果实在乳钵中研碎，得到浆状的样品(本发明的味觉修饰剂)。将该浆状样品0.5g含于口中使与整个舌面接触。1分钟后，将100ml柠檬果汁含于口中，可使柠檬果汁增加甜味而呈桔汁般的味道。实施例20
将Curculigo latifolia的果实剥皮并除去种子，仅取出果肉。将该果肉于4℃干燥24小时，用混合器粉碎2分钟，得粉碎状样品(本发明的味觉修饰剂)。将该粉末状样品0.2g含于口中，使之与整个舌面接触。1分钟后，将0.5gl-抗坏血酸粉末含于口中，因此甜味将酸味遮盖而呈爽口的甘甜微酸的口感。实施例21
将0.9g实施例20的粉末状样品及0.1g柠檬酸粉末形成的混合物含于口中，产生酸甜而适口的良好味觉。实施例22
在Curculigo latifolia的果肉20Kg中加入100 l水，匀化之后，在10,000r.p.m下离心分离30分钟。除去上清液之后，在残渣中加入100 l水，再次进行上述的匀化，离心分离，清除上清液，得到残渣。接着，在该残渣中加入0.5M NaCl水溶液30 1，用混合器在2分钟之内进行匀化，之后进行抽滤。分取滤液后，再在残渣中加入0.5M NaCl水溶液30 l，进行匀化并抽滤，分取滤液。
随后，合并滤液，再在30,000r.p.m.下离心分离1小时、得到上清液(可鲁可林的粗抽提液)。
用超滤法对该粗抽提液进行脱盐，冻结干燥而得含有可鲁可林的成分。
采用该含可鲁可林的成分，根据下述的配方制得咖啡饮料，对该咖啡饮料采用阿鲁法拉巴鲁公司制的VTIS杀菌装置，在140℃下杀菌3秒钟之后，无菌充填在容器内而制得无糖咖啡饮料。
       配方
  咖啡抽提物    2％
  咖啡抽出液    8％
  焦糖          0.1％
  焦糖苦碱      0.5％
  含可鲁可林的成0.5％
  分
  水            88.9％
饮用该无糖的咖啡饮料时，未感到有苦味，而比仅仅饮食酸味物质之时感到更强的甜味。实施例23
按照以下的配方，如下所述制成含有柠檬香料的口香糖。
  糖胶树胶    130.00g
  石蜡        37.00g
  吐鲁香脂油  6.50g
  金鸡纳香脂  3.00g
  柠檬酸      55.00g
  食盐        5.00g
  水          170.00g
  黄色人工色素1.00g
  人工柠檬香料10.00g
采用混合搅拌机在90℃对上述材料混合20分钟。接着，将胶体制成棒状。用Curculigo latifolia的果实经干燥、粉碎而成的粉末(干燥粉末)撒到该棒状口香糖上使各个棒状口香糖上被覆20至30mg干燥粉末。
如嚼食由此所得的含有柠檬香料的口香糖，可长时间保持口香糖的风味，尽管不含有砂糖也能感到甜味。另外嚼食口香糖之后食用柠檬时，味觉可变成饮用了桔汁似的。实施例24
将Curculigo latifolia的果实剥皮并除去种子，而仅取其果肉。将该果肉于40℃下干燥24小时，用混合器粉碎2分钟，使成粉末状。采用该果肉粉末以下述的配方制成牙膏制剂。
磷酸氢钙               45.0％
羟甲基纤维素钠         0.8％
山梨糖醇               15.0％
丙二醇                 3.0％
二氧化硅凝胶           3.0％
十二烷基硫酸钠         1.5％
香料                   1.0％
可鲁可林果·兰其弗利阿 2.0％
果肉粉末
水                     余量
                       100％
如使用由此所得的牙膏制剂，牙膏制剂其自身带甜味，而且漱口水也可感到甜味。另外，使用牙膏制剂之后食用柠檬时，味觉变成似乎食用了甜桔子一般。实施例25
将Curculigo latifolia的果实剥皮，除去种子，仅取出果肉。将该果肉30g在乳钵中研碎之后，向果肉中加入100ml水。接着用混合器匀化2分钟后，以10,000r.p.m.离心分离30分钟。除去上清液后，向残渣中加入100ml水，再次进行上述的匀化、离心分离并除去上清液，得到残渣(Curculigo latifolia的果实处理物)。使用该残渣，制成以下配方的漱口剂。
乙醇20.0％十二烷酰肌氨酸钠      0.5％
十二烷酰肌氨酸钠                0.5％
香料                            1.0％
一氟代磷酸钠                    0.15％
磷酸氢二钠                      0.3％
磷酸二氢钠                      0.7％
Curculigo latifolia果实处理物   0.5％
水                              余量
                                100％如使用由此而得的漱口剂，漱口后食用不加砂糖的咖啡也可感到很甜。

Claims (3)

1.一种味觉修饰方法，特征在于，通过采用0.01M以上浓度的盐水溶液从Curculigo latifolia的果实或其干燥物中抽提而得到的蛋白质可鲁可林(curculin)对味觉进行修饰。
2一种对酸味物质的味觉修饰方法，其特征在于，通过自Curculigo latifolia的果实或其干燥物或兼自这两者中所得的含有可鲁可林的成分对酸味物质进行味觉修饰。
3如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的酸味物质含有带苦味、涩味或辣味的物质。
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