CN115850218B

CN115850218B - 一种乌药烷型倍半萜二聚体及其制备方法与应用

Info

Publication number: CN115850218B
Application number: CN202310024518.8A
Authority: CN
Inventors: 文松松; 张娜; 刘永军
Original assignee: Shandong University
Current assignee: Shandong University
Priority date: 2023-01-09
Filing date: 2023-01-09
Publication date: 2023-05-05
Anticipated expiration: 2043-01-09
Also published as: CN115850218A

Abstract

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种乌药烷型倍半萜二聚体及其制备方法与应用。从樟科山胡椒属植物乌药的干燥块根中分离得到了1个结构新颖的乌药烷倍半萜二聚体，该化合物为两个乌药烷倍半萜通过亚甲基桥连接而成具有C31骨架的二聚体化合物，而大多数的乌药烷倍半萜为C30骨架，该结构在天然界中较为罕见。本发明丰富了乌药的化学成分多样性研究，为化合物领域增加了1种新的化合物，也为乌药的化学分类学研究提供了新的参考。

Description

一种乌药烷型倍半萜二聚体及其制备方法与应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及从传统中药樟科山胡椒属植物乌药( Lindera aggregata)中分离得到的一种乌药烷型倍半萜二聚体，及其制备方法及应用。

背景技术

酒在中国人饮食生活中占有重要地位。而过量饮酒不仅导致酒精依赖，还会增加人们患病的危险。过量饮酒会给人体带来很多疾病，如长期饮酒导致酒精性脂肪肝、肝硬化、酒精性肝炎、消化***疾病、神经障碍等多种疾病。酒精性肝损伤所导致的氧化应激、脂肪积累、炎症反应、细胞凋亡会进一步威胁人类健康。例如氧化应激会使细胞暴露于高浓度氧分子或氧的化学衍生物而引起的细胞损伤。此时氧自由基通过于蛋白质和脂肪以及DNA等生物大分子相互作用，引发DNA片段断裂、蛋白质功能缺陷以及各种毒性物聚集，同时使机体的氧化防御***出现变化，最终导致如糖尿病、炎症以及癌症等疾病的发生。因此从天然界中发现具有氧化应激保护作用的先导化合物对于预防或治疗酒精性损伤具有重要意义。

乌药(Lindera aggregata)为樟科山胡椒属植物，该植物为2020版《中国药典》收录的乌药的唯一品种，有悠久的使用历史。本品辛、温。归肺、脾、肾、膀胱经，具有行气止痛，温肾散寒的功效，用于治疗寒凝气滞、胸腹胀痛、气逆喘急、膀胱虚冷，遗尿尿频，疝气疼痛，经寒腹痛等病症。

发明内容

本发明的目的在于提供一种乌药烷型倍半萜二聚体的制备方法及其在治疗酒精氧化损伤方面的应用。

本申请的技术方案如下：

一种乌药烷型倍半萜二聚体，命名为Aggreganoid G，其化学结构式如式1所示：

式1。

本发明的另一个目的，保护上述乌药烷型倍半萜二聚体的制备方法，包括以下步骤：

（1）乌药干燥块根粉碎，获得粗粉；然后用乙醇加热回流提取，过滤，合并提取液，减压浓缩，得到总浸膏；

（2）将步骤（1）的总浸膏分散于水中，然后用等体积石油醚萃取，得到石油醚相提取物；

（3）将步骤（2）的提取物先经过硅胶柱层析，石油醚-丙酮梯度洗脱，薄层色谱检视后，得到A–G七个组分，组分F经过反相C-18柱层析，甲醇-水梯度洗脱后，再分别经过反相C-8乙腈-水等度洗脱和反相C-18甲醇-水等度洗脱，得到乌药烷倍半萜二聚体，即Aggreganoid G。

进一步地，所述步骤（3）的石油醚-丙酮梯度洗脱过程中，石油醚和丙酮的体积比为100:0至0:100。

进一步地，所述步骤（3）的甲醇-水梯度洗脱中，甲醇和水的体积比为20:80至100:0。

进一步地，所述步骤（3）的乙腈-水等度洗脱的乙腈和水的体积比为55:45；甲醇-水等度洗脱的甲醇和水的体积比为65:35。

本发明的另一个目的，保护上述乌药烷型倍半萜二聚体在制备预防酒精氧化损伤方面的药物上的应用。

优选地，在制备治疗肝纤维化的药物上的应用。

本发明的有益效果：

1. 新化合物

本发明从樟科山胡椒属植物乌药的干燥块根中分离得到了1个结构新颖的乌药烷倍半萜二聚体，该化合物为两个乌药烷倍半萜通过亚甲基桥连接而成具有C31骨架的二聚体化合物，而大多数的乌药烷倍半萜为C30骨架，该结构在天然界中较为罕见。本发明丰富了乌药的化学成分多样性研究，为化合物领域增加了1种新的化合物，也为乌药的化学分类学研究提供了新的参考。

2. 提取方法简单

该化合物的制备方法都采用了天然产物化学领域较为成熟的技术手段，在实际操作容易实现。

3. 治疗肝纤维化

体外细胞实验表明，Aggreganoid G对于3%乙醇诱导的HepG2细胞具有显著的保护作用，细胞存活率为97.81%，3%乙醇诱导的HepG2细胞存活率为43.73%。

附图说明

图1 化合物Aggreganoid G的高分辨质谱；

图2 化合物Aggreganoid G的氢谱；

图3化合物Aggreganoid G的碳谱；

图4 化合物Aggreganoid G的1H-1H COSY 谱；

图5 化合物Aggreganoid G的HSQC谱；

图6 化合物Aggreganoid G的HMBC谱；

图7 化合物Aggreganoid G的NOESY谱；

图8 化合物Aggreganoid G的紫外吸收图谱；

图9化合物Aggreganoid G的红外图谱。

具体实施方式

实施例1 Aggreganoid G的制备

提取：将樟科山胡椒属植物乌药(5.0 kg)的干燥块根乌药的干燥块根粉碎，以80%乙醇回流提取4次，每次1至2小时，过滤合并提取液，提取液减压浓缩，提取浓缩液加水稀释后用等体积的石油醚萃取4次，减压回收溶剂分别得到石油醚相提取物。

分离：将上一步得到的石油醚相提取物(127.5 g)经硅胶柱层析，以体积比石油醚-丙酮(100:0至0:100)梯度洗脱，薄层色谱检视后，得到A–G七个组分，组分F进一步经过反相C18硅胶柱层析甲醇-水(20:80至100:0)梯度洗脱，再经过半制备高效液相色谱C8柱分离乙腈-水(55:45)洗脱，最后经过半制备高效液相色谱C18柱分离甲醇-水(65:35)得到Aggreganoid G (5.0 mg)。

然后对其结构进行分析检测，Aggreganoid G的相关数据见图1-9；

–176.3 ( c 0.3, MeOH)；

紫外光谱 (甲醇): λ _max (log ε): 195 (4.23), 275 (3.75)；

红外光谱, ν _max3440, 2940, 1748, 1645, 1390, 1329, 1125, 1054, 994 cm^-1；

核磁数据见表1；

高分辨质谱 m/z 473.2683 [M + H]⁺ (计算值为 C₃₁H₃₇O₄, 473.2692)。

表1 化合物Aggreganoid G的核磁数据 (氘代氯仿)

根据以上分析，推出化学结构式如式1所示：

式1。

实施例2 体外细胞酒精损伤实验

细胞培养：HepG2细胞培养于含有10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 EMEMU/mL链霉素的培养基中，在5%二氧化碳饱和的培养箱中37^oC培养，取细胞对数期进行实验。调整细胞悬液的浓度为2×10⁵ cell/mL，将细胞接种于96孔板，置于二氧化碳培养箱中培养24h后，空白对照组加入培养基，模型对照组加入3%乙醇，样品组加入10 µM的Aggreganoid G溶液，共培养24小时后，以MTT法测定细胞存活率。结果显示，乙醇诱导组的细胞存活率为43.73±0.95%，样品组的细胞存活率为97.80±0.98%，该化合物具有对乙醇诱导的细胞损伤具有一定的保护作用。

Claims

1.一种乌药烷型倍半萜二聚体，其特征在于，命名为Aggreganoid G，其化学结构式如式1所示：

式1。

2.一种权利要求1所述的乌药烷型倍半萜二聚体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（3）将将步骤（2）的提取物先经过硅胶柱层析，石油醚-丙酮梯度洗脱，薄层色谱检视后，得到A–G七个组分，组分F经过反相C-18柱层析，甲醇-水梯度洗脱后，再分别经过反相C-8乙腈-水等度洗脱和反相C-18甲醇-水等度洗脱，得到乌药烷倍半萜二聚体，即Aggreganoid G；

所述步骤（3）的石油醚-丙酮梯度洗脱过程中，石油醚和丙酮的体积比为100:0至0:100；

所述步骤（3）的甲醇-水梯度洗脱中，甲醇和水的体积比为20:80至100:0；

所述步骤（3）的乙腈-水等度洗脱的乙腈和水的体积比为55:45；甲醇-水等度洗脱的甲醇和水的体积比为65:35。

3.权利要求1所述的乌药烷型倍半萜二聚体在制备预防酒精氧化损伤方面的药物上的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，在制备治疗肝纤维化的药物上的应用。