CN114507264A - 金丝***的提取单体***素a及其提取方法和应用 - Google Patents
金丝***的提取单体***素a及其提取方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114507264A CN114507264A CN202210009896.4A CN202210009896A CN114507264A CN 114507264 A CN114507264 A CN 114507264A CN 202210009896 A CN202210009896 A CN 202210009896A CN 114507264 A CN114507264 A CN 114507264A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- component
- gradient elution
- extract
- ethyl acetate
- extraction
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 235000007516 Chrysanthemum Nutrition 0.000 title claims abstract description 49
- 238000000605 extraction Methods 0.000 title claims abstract description 48
- 241000723353 Chrysanthemum Species 0.000 title claims abstract description 27
- 239000000178 monomer Substances 0.000 title claims abstract description 22
- RKWHWFONKJEUEF-GQUPQBGVSA-O Cyanidin 3-O-glucoside Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC2=C(O)C=C(O)C=C2[O+]=C1C1=CC=C(O)C(O)=C1 RKWHWFONKJEUEF-GQUPQBGVSA-O 0.000 title claims abstract description 19
- YTMNONATNXDQJF-UBNZBFALSA-N chrysanthemin Chemical compound [Cl-].O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC2=C(O)C=C(O)C=C2[O+]=C1C1=CC=C(O)C(O)=C1 YTMNONATNXDQJF-UBNZBFALSA-N 0.000 title claims abstract description 19
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 54
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims abstract description 45
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 31
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 30
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims abstract description 29
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 23
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- FFRBMBIXVSCUFS-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitro-1-naphthol Chemical compound C1=CC=C2C(O)=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C2=C1 FFRBMBIXVSCUFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 17
- 239000002024 ethyl acetate extract Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 13
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 11
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000012259 ether extract Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 claims abstract description 5
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 239000002021 butanolic extract Substances 0.000 claims abstract description 5
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 24
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 11
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 7
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- WGLUMOCWFMKWIL-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;methanol Chemical compound OC.ClCCl WGLUMOCWFMKWIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- SRCZQMGIVIYBBJ-UHFFFAOYSA-N ethoxyethane;ethyl acetate Chemical compound CCOCC.CCOC(C)=O SRCZQMGIVIYBBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- 241001609573 Eastwoodia elegans Species 0.000 claims 1
- 238000011894 semi-preparative HPLC Methods 0.000 claims 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 abstract description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 43
- 244000189548 Chrysanthemum x morifolium Species 0.000 description 24
- HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 2-(3,4-dimethoxyphenyl)-5-hydroxy-7-methoxychromen-4-one Chemical compound C=1C(OC)=CC(O)=C(C(C=2)=O)C=1OC=2C1=CC=C(OC)C(OC)=C1 HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N Deuterated methanol Chemical compound [2H]OC([2H])([2H])[2H] OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N 0.000 description 8
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 6
- 230000007760 free radical scavenging Effects 0.000 description 6
- 150000001336 alkenes Chemical class 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 5
- 150000004945 aromatic hydrocarbons Chemical class 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 4
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 4
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 4
- DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N (R)-(-)-Propylene glycol Chemical compound C[C@@H](O)CO DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 3
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 150000000780 D-glucose derivatives Chemical class 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-ZZWDRFIYSA-N L-glucose Chemical compound OC[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-ZZWDRFIYSA-N 0.000 description 3
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 3
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 3
- KXMTXZACPVCDMH-UHFFFAOYSA-N methyl 4-[5-(hydroxymethyl)-7-methoxy-1,3-benzodioxol-4-yl]-7-methoxy-1,3-benzodioxole-5-carboxylate Chemical compound COC(=O)C1=CC(OC)=C2OCOC2=C1C1=C2OCOC2=C(OC)C=C1CO KXMTXZACPVCDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JRZJOMJEPLMPRA-UHFFFAOYSA-N olefin Natural products CCCCCCCC=C JRZJOMJEPLMPRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 241000208838 Asteraceae Species 0.000 description 2
- 235000009604 Chrysanthemum X morifolium Nutrition 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001040 L-glucose derivatives Chemical class 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 125000005704 oxymethylene group Chemical group [H]C([H])([*:2])O[*:1] 0.000 description 2
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- 229940109850 royal jelly Drugs 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000001026 1H--1H correlation spectroscopy Methods 0.000 description 1
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000008495 Chrysanthemum leucanthemum Nutrition 0.000 description 1
- 244000192528 Chrysanthemum parthenium Species 0.000 description 1
- 235000000604 Chrysanthemum parthenium Nutrition 0.000 description 1
- 244000301850 Cupressus sempervirens Species 0.000 description 1
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000008151 D-glucosides Chemical class 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241001092073 Filipendula Species 0.000 description 1
- 238000005033 Fourier transform infrared spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000004566 IR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 206010024652 Liver abscess Diseases 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N Thermopsosid Natural products O(C)c1c(O)ccc(C=2Oc3c(c(O)cc(O[C@H]4[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O4)c3)C(=O)C=2)c1 GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- PQLVXDKIJBQVDF-UHFFFAOYSA-N acetic acid;hydrate Chemical compound O.CC(O)=O PQLVXDKIJBQVDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003796 beauty Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000001914 calming effect Effects 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000002072 distortionless enhancement with polarization transfer spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004438 eyesight Effects 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 235000008384 feverfew Nutrition 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 229930003944 flavone Natural products 0.000 description 1
- 150000002212 flavone derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000011949 flavones Nutrition 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 125000004395 glucoside group Chemical group 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 210000000514 hepatopancreas Anatomy 0.000 description 1
- 238000003919 heteronuclear multiple bond coherence Methods 0.000 description 1
- 238000001052 heteronuclear multiple bond coherence spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000000990 heteronuclear single quantum coherence spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000007365 immunoregulation Effects 0.000 description 1
- 230000004377 improving vision Effects 0.000 description 1
- -1 isothiocyanate salt Chemical class 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- MCYHPZGUONZRGO-VKHMYHEASA-N methyl L-cysteinate Chemical compound COC(=O)[C@@H](N)CS MCYHPZGUONZRGO-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 229960005489 paracetamol Drugs 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000019605 sweet taste sensations Nutrition 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000005292 vacuum distillation Methods 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 description 1
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 description 1
- VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N vitamin p Natural products O1C2=CC=CC=C2C(=O)C=C1C1=CC=CC=C1 VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/18—Acyclic radicals, substituted by carbocyclic rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
- A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
- C07H1/06—Separation; Purification
- C07H1/08—Separation; Purification from natural products
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及中药技术,公开了一种金丝***的提取单体***素A及其提取方法和应用。本发明提供的金丝***的提取单体***素A如式(I)所示,具体的提取方法包括以下步骤:将金丝黄菊花经干燥、粉碎后,与提取溶剂I混合进行提取得到提取液,将所述提取液浓缩后得到提取浸膏;将所述提取浸膏依次经石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取后进行浓缩得到石油醚浸膏、乙酸乙酯浸膏和正丁醇浸膏;将所述乙酸乙酯浸膏进行梯度洗脱分离I得到组分Fr.1‑Fr.M,将所述组分Fr.7进行梯度洗脱分离II得到组分Fr.7.1‑Fr.7.N,然后将所述组分Fr.7.4进行梯度洗脱分离III得到组分Fr.7.4.1‑Fr.7.4.Q,将所述组分Fr.7.4.8过半制备高效液相分离。***素A具有良好的抗氧化能力和保肝活性。
Description
技术领域
本发明涉及中药技术,具体涉及一种金丝***的提取单体***素A及其提取方法和应用。
背景技术
菊花为菊科植物菊花的干状头状花序,是我国的传统名花,其集观赏、食用和保健于一身,具有巨大的开发利用价值。《神农本草经》记载菊花“久服利血气,轻身耐老延年”,药典记载其性凉、味甘、苦,微寒,有散风清热、平肝明目、清热解毒的作用。
金丝***属于菊花的一种,发源于位于江西西北部奉新县,不仅具有很好的观赏价值,而且气味芬芳,属药、茶两用佳品,更因其个大形美、口感清香甘甜被誉为菊花中的上品。金丝***中黄酮素的含量极高,且富含多种氨基酸、维生素和微量元素,具有“香、甜、润”三大特点,还有散风热、清肝明目等功效,深受消费者的青睐。
肝脏是人体消化***中最大的消化腺,也是新陈代谢的重要器官,肝脏对来自体内和体外的许多非营养性物质如各种药物、毒物以及体内某些代谢产物,具有生物转化作用;通过新陈代谢将它们彻底分解或以原形排出体外。因此,肝脏在人的代谢、消化、解毒、凝血、免疫调节等方面均起着非常重要的作用。随着生活压力的增加和环境污染的加重,肝炎、肝硬化、肝脓肿、原发性肝癌等肝脏相关的疾病正侵蚀着人类的身体健康。经文献检索,迄今尚未见有金丝***提取物用于肝脏相关疾病或者在保肝、护肝方面的报道。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术存在的问题,提供一种金丝***的提取单体***素A及其提取方法和应用,该***素A具有良好的抗氧化能力和保肝活性。
为了实现上述目的,本发明第一方面提供一种金丝***的提取单体***素A,所述***素A的结构式如式(I)所示:
本发明第二方面提供一种金丝***的提取单体***素A的提取方法,包括以下步骤:
(1)将金丝黄菊花经干燥、粉碎后,与提取溶剂I混合进行提取得到提取液,将所述提取液浓缩后得到提取浸膏;
(2)将所述提取浸膏依次经石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取后进行浓缩得到石油醚浸膏、乙酸乙酯浸膏和正丁醇浸膏;
(3)将所述乙酸乙酯浸膏进行梯度洗脱分离I得到组分Fr.1-Fr.M,将所述组分Fr.7进行梯度洗脱分离II得到组分Fr.7.1-Fr.7.N,然后将所述组分Fr.7.4进行梯度洗脱分离III得到组分Fr.7.4.1-Fr.7.4.Q,将所述组分Fr.7.4.8过半制备高效液相分离得到如式(I)所示的***素A;
其中,M≥11,N≥8,Q≥9,
优选地,步骤(1)中所述提取溶剂I为乙醇-水溶液。
优选地,所述提取溶剂I中乙醇与水的体积比为10-20:1。
优选地,所述提取的次数为2-3次,每次所述提取的过程中所述提取溶剂I与所述金丝黄菊花的质量比为3-8:1、时间为4-6天。
优选地,步骤(2)中所述石油醚、所述乙酸乙酯和所述正丁醇各自与所述提取浸膏的质量比为3-8:1。
优选地,步骤(3)中所述梯度洗脱分离I的过程包括:将所述乙酸乙酯浸膏装样硅胶柱,然后用洗脱剂I进行梯度洗脱,再经点板合并得到所述组分Fr.1-Fr.M。
优选地,所述洗脱剂I为二氯甲烷-甲醇溶液。
优选地,所述梯度洗脱中二氯甲烷与甲醇的体积比依次为100:1,50:1,20:1,10:1,5:1,2:1,1:1,0:1。
优选地,步骤(3)中所述梯度洗脱分离II的过程包括:将所述组分Fr.7过反相柱,用洗脱剂II进行梯度洗脱,再经点板合并得到所述组分Fr.7.1-Fr.7.N。
优选地,所述洗脱剂II为甲醇-水溶液。
优选地,所述梯度洗脱中甲醇-水的体积比依次为0:1,1:9,2:8,3:7,4:6,5:5,6:4,7:3,8:2,9:1,1:0。
优选地,步骤(3)中所述梯度洗脱分离III的过程包括:将所述组分Fr.7.4过硅胶柱,用洗脱剂III进行梯度洗脱得到所述组分Fr.7.4.1-Fr.7.4.Q。
优选地,所述洗脱剂III为石油醚-乙酸乙酯溶液。
优选地,所述梯度洗脱中石油醚与乙酸乙酯的体积比依次为5:1,4:1,3:1,2:1,1:1,0:1。
优选地,所述半制备高效液相分离的流速为2-4mL/min。
本发明第三方面提供上述的金丝***的提取单体***素A在制备抗氧化药物中的应用。
本发明第四方面提供上述的金丝***的提取单体***素A在制备保肝药物中的应用。
通过上述技术方案,本发明的有益效果为:
本发明采用多次硅胶柱梯度洗脱和半制备高效液相分离技术,从金丝***花中分离、纯化得到一种新的单体化合物——***素A,并利用现代波谱方法确定***素A的结构,鉴定为1'-O-苯甲基-4'-O-E-咖啡酰基-β-D-葡萄糖苷(1'-O-benzyl-4'-O-E-caffeoyl-β-D-glucopyranoside);经ABTS+自由基清除活性筛选和保肝活性筛选,发现***素A具有良好的抗氧化能力和保肝能力,对人肝癌细胞HepG2的增殖具有促进作用。
有关本发明的其他优点以及优选实施方式的技术效果,将在下文的具体实施方式中进一步说明。
附图说明
图1是实施例1中组分JS-2-119-36的HR-ESI-MS谱图;
图2是实施例1中组分JS-2-119-36的IR谱图;
图3是实施例1中组分JS-2-119-36的1H-NMR谱图;
图4是实施例1中组分JS-2-119-36的13C-NMR谱图;
图5是实施例1中组分JS-2-119-36的Dept谱图;
图6是实施例1中组分JS-2-119-36的HSQC谱图;
图7是实施例1中组分JS-2-119-36的HMBC谱图;
图8是实施例1中组分JS-2-119-36的1H-1H COSY谱图;
图9是实施例1中D-葡萄糖衍生物的HPLC谱图;
图10是实施例1中L-葡萄糖衍生物的HPLC谱图;
图11是实施例1中组分JS-2-119-36的酸水解衍生物的HPLC谱图。
具体实施方式
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值,这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说,各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间,以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围,这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
本发明第一方面提供一种金丝***的提取单体***素A,所述***素A的结构式如式(I)所示:
本发明提供的金丝***的提取单体——***素A为浅黄色固体,薄层色谱(TLC)在254nm紫外下有荧光;高分辨电喷雾质谱(HR-ESI-MS):m/z 455.1314[M+Na]+(计算值C22H24O9Na+,455.1318),确定其分子式为C22H24O9,不饱和度为11;红外谱图(IR谱图)显示该化合物含有羟基(3361cm-1),烯烃(1676cm-1)和芳香烃(699cm-1)等基团。
***素A的核磁共振谱图特征为:
1H-NMR(600MHz,CD3OD):δH7.60(1H,d,J=15.6Hz,H-7”),7.44(2H,dd,J=7.8Hz,H-2,6),7.34(2H,t,J=7.8Hz,H-3,5),7.28(1H,t,J=7.8Hz,H-4),7.05(1H,d,J=1.8Hz,H-2”),6.96(1H,dd,J=8.4,1.8Hz,H-6”),6.78(1H,d,J=8.4Hz,H-5”),6.30(1H,d,J=15.6Hz,H-8”),4.96(1H,d,J=12.0Hz,H-7a),4.86(1H,m,H-4'),4.70(1H,d,J=12.0Hz,H-7b),4.43(1H,d,J=7.8Hz,H-1'),3.64(1H,m,H-6'a),3.62(1H,m,H-3'),3.58(1H,m,H-6'b),3.51(1H,m,H-5'),3.37(1H,m,H-2')。
13C-NMR(150MHz,CD3OD):δC 168.6(C-9”),149.7(C-4”),147.6(C-7”),146.9(C-3”),139.0(C-1),129.3(C-3,5),129.2(C-2,6),128.7(C-4),127.7(C-1”),123.1(C-6”),116.5(C-5”),115.2(C-2”),114.7(C-8”),103.3(C-1'),76.2(C-5'),75.8(C-3'),75.3C-2'),72.6(C-4'),62.6(C-6')。
本发明第二方面提供一种金丝***的提取单体***素A的提取方法,包括以下步骤:
(1)将金丝黄菊花经干燥、粉碎后,与提取溶剂I混合进行提取得到提取液,将所述提取液浓缩后得到提取浸膏;
(2)将所述提取浸膏依次经石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取后进行浓缩得到石油醚浸膏、乙酸乙酯浸膏和正丁醇浸膏;
(3)将所述乙酸乙酯浸膏进行梯度洗脱分离I得到组分Fr.1-Fr.M,将所述组分Fr.7进行梯度洗脱分离II得到组分Fr.7.1-Fr.7.N,然后将所述组分Fr.7.4进行梯度洗脱分离III得到组分Fr.7.4.1-Fr.7.4.Q,将所述组分Fr.7.4.8过半制备高效液相分离得到如式(I)所示的***素A;
其中,M≥11,N≥8,Q≥9,
根据本发明,金丝黄菊花指的是菊科菊属菊花(Chrysanthemum morifoliumRamat.)——金丝***的花朵部分,其具体的干燥、粉碎可以采用本领域内常规的干燥和粉碎的方式,例如干燥可以采用烘干、晒干或者真空干燥等方式,粉碎可以采用粉碎机、研磨等方式。步骤(1)和步骤(2)中浓缩的方式均可以采用减压蒸馏的方式,也可以采用其他常规的浓缩方式。
根据本发明,提取溶剂I可以采用低级脂肪醇或者低级脂肪醇的水溶液,其中,低级脂肪醇可以是甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇等。为了提高***素A从金丝黄菊花中溶出与提取的效果,优选地,步骤(1)中所述提取溶剂I为乙醇-水溶液。进一步优选地,所述提取溶剂I中乙醇与水的体积比为10-20:1。
根据本发明,对金丝黄菊花进行提取的次数、提取溶剂的用量和时间没有特殊的限定,能够将包括***素A在内的物质进行有效提取即可。优选地,所述提取的次数为2-3次,每次所述提取的过程中所述提取溶剂I与所述金丝黄菊花(干重)的质量比为3-8:1、时间为4-6天。在进行多次提取时,将每次获得的提取液合并后,进行浓缩得到提取浸膏。
根据本发明,在提取溶剂I对金丝黄菊花进行提取后,通过固液分离的方式获得提取液,例如采用过滤、离心的方式。
根据本发明,步骤(2)中提取浸膏在利用石油醚进行萃取前,与适量水混合进行悬浮,以提高石油醚、乙酸乙酯和正丁醇的萃取效率。优选地,步骤(2)中所述石油醚、所述乙酸乙酯和所述正丁醇各自与所述提取浸膏的质量比为3-8:1。
根据本发明,优选地,步骤(3)中所述梯度洗脱分离I的过程包括:将所述乙酸乙酯浸膏装样硅胶柱,然后用洗脱剂I进行梯度洗脱,再经点板合并得到所述组分Fr.1-Fr.M。
根据本发明,优选地,所述洗脱剂I为二氯甲烷-甲醇溶液。
根据本发明,优选地,所述梯度洗脱中二氯甲烷与甲醇的体积比依次为100:1,50:1,20:1,10:1,5:1,2:1,1:1,0:1。
根据本发明,优选地,步骤(3)中所述梯度洗脱分离II的过程包括:将所述组分Fr.7过反相柱,用洗脱剂II进行梯度洗脱,再经点板合并得到所述组分Fr.7.1-Fr.7.N。
根据本发明,优选地,所述洗脱剂II为甲醇-水溶液。
根据本发明,优选地,所述梯度洗脱中甲醇-水的体积比依次为0:1,1:9,2:8,3:7,4:6,5:5,6:4,7:3,8:2,9:1,1:0。
根据本发明,优选地,步骤(3)中所述梯度洗脱分离III的过程包括:将所述组分Fr.7.4过硅胶柱,用洗脱剂III进行梯度洗脱得到所述组分Fr.7.4.1-Fr.7.4.Q。
根据本发明,优选地,所述洗脱剂III为石油醚-乙酸乙酯溶液。
根据本发明,优选地,所述梯度洗脱中石油醚与乙酸乙酯的体积比依次为5:1,4:1,3:1,2:1,1:1,0:1。
根据本发明,半制备高效液相分离可以采用本领域内常规的方法和仪器设备进行;优选地,所述半制备高效液相分离的流速为2-4mL/min。
根据本发明一种特别优选的实施方式,金丝***的提取单体***素A的提取方法,包括以下步骤:
(1)将金丝黄菊花经干燥、粉碎后,与乙醇-水溶液(乙醇与水的体积比为19:1)混合进行2-3次提取,每次提取的过程中提取溶剂I与金丝黄菊花的质量比为3-8:1、时间为4-6天,经固液分离后得到提取液,将提取液浓缩后得到提取浸膏;
(2)将步骤(1)得到的提取浸膏加入适量水悬浮后,依次经石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取后进行浓缩得到石油醚浸膏、乙酸乙酯浸膏和正丁醇浸膏,其中,石油醚、乙酸乙酯和正丁醇各自与提取浸膏的质量比为3-8:1;
(3)将步骤(2)得到的乙酸乙酯浸膏装样硅胶柱,然后以二氯甲烷-甲醇溶液为洗脱剂I进行梯度洗脱(二氯甲烷与甲醇的体积比依次为100:1,50:1,20:1,10:1,5:1,2:1,1:1,0:1),再经点板合并得到所述组分Fr.1-Fr.M;将组分Fr.7过反相柱,以甲醇-水溶液为洗脱剂II进行梯度洗脱(甲醇-水的体积比依次为0:1,1:9,2:8,3:7,4:6,5:5,6:4,7:3,8:2,9:1,1:0),再经点板合并得到所述组分Fr.7.1-Fr.7.N;然后将组分Fr.7.4过硅胶柱,以石油醚-乙酸乙酯溶液为洗脱剂III进行梯度洗脱(石油醚与乙酸乙酯的体积比依次为5:1,4:1,3:1,2:1,1:1,0:1)得到组分Fr.7.4.1-Fr.7.4.Q,然后将所述组分Fr.7.4.8用半制备高效液相(流速为2-4mL/min)分离得到***素A。
基于上述提供的金丝***的提取单体***素A,本发明第三方面提供上述的***素A在制备抗氧化药物中的应用。
基于上述提供的金丝***的提取单体***素A,本发明第四方面提供上述的***素A在制备保肝药物中的应用。
以下将通过实施例对本发明进行详细描述。
以下实施例中,核磁共振分析采用Bruker AV-600核磁共振光谱仪,紫外光谱分析采用Hewlett-Packard 8452AUV-vis紫外光谱仪,红外光谱分析采用Bruker Tensor 27和MIRacleATR FT-IR红外分析仪,高效液相色谱分析采用美国Agilent 1260高效液相色谱仪,半制备高效液相分离采用美国Agilent 1260,Agilent ZORBAX XDB C18色谱柱(9.4×250mm,5μm);金丝***花采自湖南省永州市宁远县,经湖南中医药大学药学院王炜教授鉴定为菊科菊属菊花(Chrysanthemum morifolium Ramat.),D-葡萄糖和L-葡萄糖采购自默克公司,ABTS试剂盒采购自索莱宝(Solarbio)公司,人肝癌细胞HepG2采购自索莱宝(Solarbio)公司,在无特别说明的情况下,其他试剂和原料均为常规的市售品。
以下实施例中,在无特别说明的情况下,室温为25±5℃。
实施例1
(1)取9.9kg金丝***花,经干燥、粉碎后,用乙醇-水溶液(乙醇与水的体积比为19:1)浸提2次,每次浸提的过程中乙醇-水溶与金丝黄菊花干重的质量比为5:1、浸提时间为5天,两次浸提后分别进行过滤,合并滤液得到提取液,将提取液进行减压浓缩得到提取浸膏;
(2)将步骤(1)得到的提取浸膏加入适量水悬浮,依次用石油醚,乙酸乙酯,正丁醇萃取后进行浓缩得到石油醚浸膏、乙酸乙酯浸膏和正丁醇浸膏,其中,石油醚、乙酸乙酯和正丁醇各自与提取浸膏的质量比为5:1;
(3)将步骤(2)得到的乙酸乙酯浸膏(475.87g)装样硅胶柱,然后以二氯甲烷-甲醇溶液为洗脱剂I进行梯度洗脱(二氯甲烷与甲醇的体积比依次为100:1,50:1,20:1,10:1,5:1,2:1,1:1,0:1),再经点板(采用青岛海洋化工厂生产的GF254薄层板,20×20cm)合并得到11个组分,分别为组分Fr.1-Fr.11;
将组分Fr.7(30.46g)过反相柱,以甲醇-水溶液为洗脱剂II进行梯度洗脱(甲醇-水的体积比依次为0:1,1:9,2:8,3:7,4:6,5:5,6:4,7:3,8:2,9:1,1:0),再经点板合并得到8个组分,分别为组分Fr.7.1-Fr.7.8;
将组分Fr.7.4(3.65g)过硅胶柱,以石油醚-乙酸乙酯溶液为洗脱剂III进行梯度洗脱(石油醚与乙酸乙酯的体积比依次为5:1,4:1,3:1,2:1,1:1,0:1)得到组分Fr.7.4.1-Fr.7.4.9,然后将组分Fr.7.4.8用半制备高效液相(流速为3mL/min)分离得到组分JS-2-119-36(8.3mg,tR=15.1min;CH3CN/H2O,32:68)。
组分JS-2-119-36为浅黄色固体;薄层色谱(TLC)在254nm紫外下有荧光;将高分辨电喷雾质谱(HR-ESI-MS)分析结果见图1,HR-ESI-MS谱图显示m/z 455.1314[M+Na]+(计算值C22H24O9Na+,455.1318),确定其分子式为C22H24O9,不饱和度为11;红外(IR)分析结果见图2,IR谱图显示该化合物含有羟基(3361cm-1),烯烃(1676cm-1)和芳香烃(699cm-1)等基团。
组分JS-2-119-36的核磁共振(NMR)分析结果见图3-图8,NMR谱图显示:
1H-NMR(600MHz,CD3OD):δH7.60(1H,d,J=15.6Hz,H-7”),7.44(2H,dd,J=7.8Hz,H-2,6),7.34(2H,t,J=7.8Hz,H-3,5),7.28(1H,t,J=7.8Hz,H-4),7.05(1H,d,J=1.8Hz,H-2”),6.96(1H,dd,J=8.4,1.8Hz,H-6”),6.78(1H,d,J=8.4Hz,H-5”),6.30(1H,d,J=15.6Hz,H-8”),4.96(1H,d,J=12.0Hz,H-7a),4.86(1H,m,H-4'),4.70(1H,d,J=12.0Hz,H-7b),4.43(1H,d,J=7.8Hz,H-1'),3.64(1H,m,H-6'a),3.62(1H,m,H-3'),3.58(1H,m,H-6'b),3.51(1H,m,H-5'),3.37(1H,m,H-2')。
13C-NMR(150MHz,CD3OD):δC168.6(C-9”),149.7(C-4”),147.6(C-7”),146.9(C-3”),139.0(C-1),129.3(C-3,5),129.2(C-2,6),128.7(C-4),127.7(C-1”),123.1(C-6”),116.5(C-5”),115.2(C-2”),114.7(C-8”),103.3(C-1'),76.2(C-5'),75.8(C-3'),75.3C-2'),72.6(C-4'),62.6(C-6')。
在1H-NMR谱图中,推测存在1个苄基基团[δH7.44(2H,d,J=7.8Hz;H-2,6),7.34(2H,t,J=7.8Hz),7.28(1H,t,J=7.8Hz),4.96(1H,d,J=12.0Hz),4.70(1H,d,J=12.0Hz)];1个咖啡酰基基团[δH7.05(1H,d,J=1.8Hz),6.96(1H,dd,J=8.4,1.8Hz),6.78(1H,d,J=8.4Hz),δH7.60(1H,d,J=15.6Hz)and 6.30(1H,d,J=15.6Hz)];1个葡萄糖苷基团[δH4.86(1H,overlapped),4.43(1H,d,J=7.8Hz),3.62(1H,m),3.51(1H,m),3.37(1H,m)and 3.64(1H,m),3.58(1H,m)]。在13C NMR谱中显示有22个碳信号,推测存在1个酯基(δc168.6),14个芳香碳(2个苯基和1个烯烃基团),5个连氧次甲基碳(δC103.3,76.2,75.8,75.3和72.6)和2个连氧亚甲基碳(δC71.8和62.6),具体数据见表1。
表1
将组分JS-2-119-36进行酸水解及高效液相色谱法分析:
a、取1.2mg组分JS-2-119-36,加入10mL浓度为2mol/L的盐酸溶液,在80℃水浴加热回流5h,然后将回流得到的溶液减压浓缩至干得到反应产物;
b、将反应产物加入适量的水溶解,用乙酸乙酯萃取后得到水层溶液,将水层溶液减压浓缩至干后加入无水吡啶1mL溶解,再加入2mg的L-半胱氨酸甲酯,然后置于60℃烘箱内反应1h后,再加入2mg异硫氰酸酯盐,继续置于60℃烘箱内反应1h,得到反应液。
c、将反应液取出放冷,过0.22μm微孔滤膜,进高效液相色谱(HPLC)进行分析,HPLC色谱条件为:C18反相色谱柱,流动相:25%乙腈-0.05%乙酸水,检测波长入=250nm,流速v=0.8mL/min,进样量10μL;
取D-葡萄糖和L-葡萄糖作为标准品,分别按上述步骤a-步骤c的衍生化方法进行处理,并进行HPLC分析。
组分JS-2-119-36、D-葡萄糖和L-葡萄糖的衍生物HPLC谱图如图9-图11所示,D-葡萄糖衍生物的出峰时间为17.0min,L-葡萄糖衍生物的出峰时间为15.6min,组分JS-2-119-36的酸水解衍生物的出峰时间为17.2min,与D-葡萄糖衍生物出峰时间相似,故确定该化合物的糖苷为D-葡萄糖苷(tR=17.19min)。
根据以上HR-ESI-MS谱图、IR谱图、NMR谱图以及HPLC谱图的数据,推测组分JS-2-119-36的结构为1'-O-苯甲基-4'-O-E-咖啡酰基-β-D-葡萄糖苷(1'-O-benzyl-4'-O-E-caffeoyl-β-D-glucopyranoside),结构式如式(I)所示,并命名为***素A,
组分JS-2-119-36的1H-1HCOSY,HMBC相关性如式(II)所示,
实施例2组分JS-2-119-36的ABTS+自由基清除活性筛选
采用ABTS+自由基清除法(ABTS试剂盒)评价金丝***花中分离得到的组分JS-2-119-36的抗氧化能力。
将组分JS-2-119-36配制成浓度分别为1.0、0.5、0.2、0.1、0.05mmol/L的溶液,阳性对照药维生素C(Vc)配制成浓度分别为1.0、0.8、0.6、0.4、0.2mmol/L的溶液,各取10μL分别独立地添加到96孔板中,再分别取190μL的ABTS+溶液添加到96孔板的各孔中,混匀后在室温下避光静置6min,然后检测96孔板的各孔在405nm处的吸光度(A),计算自由基清除率和IC50值,结果见表2,
自由基清除率=[A空白-(A测定-A对照)]/A空白;
表2的数据显示,组分JS-2-119-36具有ABTS+自由基清除活性,其IC50为11.34±1.56μM/L,强于阳性对照药Vc的IC50(22.00±1.29μM/L)。
表2
实施例3
采用对乙酰氨基酚(APAP)诱导人肝癌细胞HepG2损伤模型,利用MTT法测定组分JS-2-119-36的保肝活性。
将人体肝癌细胞HepG2细胞添加到含10%胎牛血清的MEM培养基中,置于含有5体积%CO2,温度为37℃的恒温培养箱中培养过夜;将培养得到的细胞经浓度为0.25重量%的胰蛋白酶溶液和浓度为0.02重量%的EDTA溶液进行消化,将消化得到的细胞以1×105个/孔的密度接种在96孔板中,在温度为37℃,含有5体积%CO2的恒温培养箱中培养过夜后,分为三组,每组10个孔,分别为模型组、阳性对照组(双环醇)和处理组(组分JS-2-119-36),将阳性对照组每孔加入组分双环醇和APAP,使得双环醇的浓度为10μM、APAP的浓度为6mM,将处理组每孔加入组分JS-2-119-36和APAP,使得组分JS-2-119-36的浓度为10μM、APAP的浓度为6mM;再继续培养48h,取下培养基后,每孔加入100μL浓度为0.5mg/mL的MTT溶液,孵育4h,再加入100μL的DMSO溶解,最后用微孔板读卡器分别在490nm和630nm处测定福马赞溶液的光密度(OD)。
结果显示,与模型组(存活率为50.74%)相比,组分JS-2-119-36对APAP诱导的HepG2细胞损伤具有显著的保护作用,在10μM时细胞存活率为61.53%,阳性对照组的细胞存活率仅为58.41%。
以上详细描述了本发明的优选实施方式,但是,本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内,可以对本发明的技术方案进行多种简单变型,包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合,这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容,均属于本发明的保护范围。
Claims (10)
2.一种金丝***的提取单体***素A的提取方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将金丝黄菊花经干燥、粉碎后,与提取溶剂I混合进行提取得到提取液,将所述提取液浓缩后得到提取浸膏;
(2)将所述提取浸膏依次经石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取后进行浓缩得到石油醚浸膏、乙酸乙酯浸膏和正丁醇浸膏;
(3)将所述乙酸乙酯浸膏进行梯度洗脱分离I得到组分Fr.1-Fr.M,将所述组分Fr.7进行梯度洗脱分离II得到组分Fr.7.1-Fr.7.N,然后将所述组分Fr.7.4进行梯度洗脱分离III得到组分Fr.7.4.1-Fr.7.4.Q,将所述组分Fr.7.4.8过半制备高效液相分离得到如式(I)所示的***素A;
其中,M≥11,N≥8,Q≥9,
3.根据权利要求2所述的提取方法,其特征在于,步骤(1)中所述提取溶剂I为乙醇-水溶液;
优选地,所述提取溶剂I中乙醇与水的体积比为10-20:1;
优选地,所述提取的次数为2-3次,每次所述提取的过程中所述提取溶剂I与所述金丝黄菊花的质量比为3-8:1、时间为4-6天。
4.根据权利要求2所述的提取方法,其特征在于,步骤(2)中所述石油醚、所述乙酸乙酯和所述正丁醇各自与所述提取浸膏的质量比为3-8:1。
5.根据权利要求2至4中任意一项所述的提取方法,其特征在于,步骤(3)中所述梯度洗脱分离I的过程包括:将所述乙酸乙酯浸膏装样硅胶柱,然后用洗脱剂I进行梯度洗脱,再经点板合并得到所述组分Fr.1-Fr.M;
优选地,所述洗脱剂I为二氯甲烷-甲醇溶液;
优选地,所述梯度洗脱中二氯甲烷与甲醇的体积比依次为100:1,50:1,20:1,10:1,5:1,2:1,1:1,0:1。
6.根据权利要求2至4中任意一项所述的提取方法,其特征在于,步骤(3)中所述梯度洗脱分离II的过程包括:将所述组分Fr.7过反相柱,用洗脱剂II进行梯度洗脱,再经点板合并得到所述组分Fr.7.1-Fr.7.N;
优选地,所述洗脱剂II为甲醇-水溶液;
优选地,所述梯度洗脱中甲醇-水的体积比依次为0:1,1:9,2:8,3:7,4:6,5:5,6:4,7:3,8:2,9:1,1:0。
7.根据权利要求2至4中任意一项所述的提取方法,其特征在于,步骤(3)中所述梯度洗脱分离III的过程包括:将所述组分Fr.7.4过硅胶柱,用洗脱剂III进行梯度洗脱得到所述组分Fr.7.4.1-Fr.7.4.Q;
优选地,所述洗脱剂III为石油醚-乙酸乙酯溶液;
优选地,所述梯度洗脱中石油醚与乙酸乙酯的体积比依次为5:1,4:1,3:1,2:1,1:1,0:1。
8.根据权利要求2至4中任意一项所述的提取方法,其特征在于,所述半制备高效液相分离的流速为2-4mL/min。
9.权利要求1所述的金丝***的提取单体***素A在制备抗氧化药物中的应用。
10.权利要求1所述的金丝***的提取单体***素A在制备保肝药物中的应用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210009896.4A CN114507264A (zh) | 2022-01-06 | 2022-01-06 | 金丝***的提取单体***素a及其提取方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210009896.4A CN114507264A (zh) | 2022-01-06 | 2022-01-06 | 金丝***的提取单体***素a及其提取方法和应用 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN114507264A true CN114507264A (zh) | 2022-05-17 |
Family
ID=81550419
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202210009896.4A Pending CN114507264A (zh) | 2022-01-06 | 2022-01-06 | 金丝***的提取单体***素a及其提取方法和应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN114507264A (zh) |
Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101513426A (zh) * | 2009-03-06 | 2009-08-26 | 中国人民解放军第二军医大学 | 肉桂酸脂类化合物及其在制备白三烯a4水解酶功能调节药物中的应用 |
CN101973883A (zh) * | 2010-09-26 | 2011-02-16 | 云南烟草科学研究院 | 一种烟草中的酚类化合物及其制备方法和应用 |
CN102319276A (zh) * | 2011-09-28 | 2012-01-18 | 河南大学 | 南湖菱壳提取物在制备保肝护肝药物方面的应用 |
CN104244943A (zh) * | 2012-04-20 | 2014-12-24 | 寶佳生物科技有限公司 | 预防和治疗病毒感染的材料与方法 |
CN108484695A (zh) * | 2018-04-08 | 2018-09-04 | 湖南中医药大学 | 一种从密蒙花中同时提取苯乙醇苷和黄酮类化合物的方法 |
CN109988206A (zh) * | 2019-04-30 | 2019-07-09 | 河南中医药大学 | 一种从怀菊花中制备菊花新木脂素a的方法及其应用 |
CN110156857A (zh) * | 2019-05-17 | 2019-08-23 | 湖南中医药大学 | 一种黄烷-4-醇苷的提取方法 |
CN111574573A (zh) * | 2020-05-21 | 2020-08-25 | 深圳市人民医院 | 十五种苯乙醇苷类化合物及其分离纯化方法与应用 |
-
2022
- 2022-01-06 CN CN202210009896.4A patent/CN114507264A/zh active Pending
Patent Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101513426A (zh) * | 2009-03-06 | 2009-08-26 | 中国人民解放军第二军医大学 | 肉桂酸脂类化合物及其在制备白三烯a4水解酶功能调节药物中的应用 |
CN101973883A (zh) * | 2010-09-26 | 2011-02-16 | 云南烟草科学研究院 | 一种烟草中的酚类化合物及其制备方法和应用 |
CN102319276A (zh) * | 2011-09-28 | 2012-01-18 | 河南大学 | 南湖菱壳提取物在制备保肝护肝药物方面的应用 |
CN104244943A (zh) * | 2012-04-20 | 2014-12-24 | 寶佳生物科技有限公司 | 预防和治疗病毒感染的材料与方法 |
CN108484695A (zh) * | 2018-04-08 | 2018-09-04 | 湖南中医药大学 | 一种从密蒙花中同时提取苯乙醇苷和黄酮类化合物的方法 |
CN109988206A (zh) * | 2019-04-30 | 2019-07-09 | 河南中医药大学 | 一种从怀菊花中制备菊花新木脂素a的方法及其应用 |
CN110156857A (zh) * | 2019-05-17 | 2019-08-23 | 湖南中医药大学 | 一种黄烷-4-醇苷的提取方法 |
CN111574573A (zh) * | 2020-05-21 | 2020-08-25 | 深圳市人民医院 | 十五种苯乙醇苷类化合物及其分离纯化方法与应用 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
JONG HOON AHN 等: "Identification of antioxidant constituents of the aerial part of Plantago asiatica using LC–MS/MS coupled DPPH assay", PHYTOCHEMISTRY LETTERS, vol. 26, 31 December 2018 (2018-12-31), pages 20 - 24 * |
JORG HEILMANN 等: "Radical Scavenger Activity of Phenylethanoid Glycosides in FMLP Stimulated Human Polymorphonuclear Leukocytes: Structure-Activity Relationships", PLANTA MEDICA, vol. 66, 31 December 2000 (2000-12-31), pages 746 - 748 * |
YING-GUO LIU 等: "Synthetic phenylethanoid glycoside derivatives as potent neuroprotective agents", EUROPEAN JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY, vol. 95, 31 December 2015 (2015-12-31), pages 313 - 323 * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN107698546B (zh) | 马齿苋中化合物Oleracone D及其提取分离方法 | |
EP3412679B1 (en) | Baicalin magnesium, preparation method thereof and application of same | |
CN107746397B (zh) | 马齿苋中化合物Oleracone C及其提取分离方法 | |
CN106916193B (zh) | 一种从紫荆叶中提取阿福豆苷的方法 | |
CN108558809A (zh) | 马齿苋中化合物Oleracone F及其提取分离方法 | |
CN107827726B (zh) | 马齿苋中化合物Oleracone E及其提取分离方法 | |
CN112300000A (zh) | 马齿苋中一种具有抗肿瘤和抗胆碱酯酶活性的酯类化合物及其提取分离方法和应用 | |
CN109942649B (zh) | 一种吲哚苷类化合物及其提取分离方法和应用 | |
CN113264886B (zh) | 马齿苋中一种哒嗪类化合物的提取分离方法及其应用 | |
CN115850218B (zh) | 一种乌药烷型倍半萜二聚体及其制备方法与应用 | |
CN115340512B (zh) | 水母雪莲中三种二芳基丁内酯型木脂素类化合物及其提取分离方法和应用 | |
CN114507264A (zh) | 金丝***的提取单体***素a及其提取方法和应用 | |
CN110551163A (zh) | 一种从小叶莲中提取黄酮苷类化合物的方法及其应用 | |
CN112939737B (zh) | 一个从牛蒡叶中提取的具有保护酒精性肝损伤的化合物及其制备方法与应用 | |
CN112194704B (zh) | 一种甾体皂苷类化合物及其制备方法和应用 | |
CN114835668A (zh) | 青龙衣中一种环醚型二芳基庚烷的制备方法和应用 | |
CN114736251B (zh) | 金丝***的提取单体***素b及其提取方法和应用 | |
CN112920151B (zh) | 异戊烯基黄酮类化合物及其制备方法和应用 | |
CN107325069B (zh) | 一种倍半萜类化合物的提取方法 | |
CN111777533B (zh) | 一类异戊烯基砜酰胺类化合物及其制备方法和用途 | |
CN116903578B (zh) | 连钱草中的酚酸类化合物及其提取分离方法与应用 | |
CN115925760A (zh) | 金丝***中提取的咖啡酰基糖苷类化合物及其提取方法和应用 | |
CN111484411B (zh) | 艾叶抗炎有效成分的提取方法和应用 | |
CN110251552B (zh) | 一种龙脷叶总黄酮的制备方法 | |
CN112920148B (zh) | 一种从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的新化合物nby-16及其制备方法与应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |