CN113109333A - 一种脯氨酸氨基肽酶快速检测试纸及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种脯氨酸氨基肽酶快速检测试纸及其制备方法，包括基体、第一试剂液和第二试剂液，所述第一试剂液和所述第二试剂液依次附着在基体上；所述第一试剂液的组分为：底物0.10～10.00g/L、缓冲液50mM～250mM，缓冲液pH值6.0～7.5、第一稳定剂1.0～50.0g/L和分散剂1.0～50.0g/L；所述第二试剂液的组分为：第二稳定剂0.1～50.0g/L、有机酸1.0～50.0g/L和促进剂1.0～50.0g/L。通过添加促进剂，使反应产物与促进剂发生重氮偶合反应，加快反应显色。促进剂受金属离子或具有氧化性的物质影响，稳定性变差，因此增加第二稳定剂可有效去除干扰，提高试纸稳定性。本发明无需显色液，37℃孵育5min即可出结果，操作简单，检测速度快，灵敏度高，结果准确可靠。

Description

一种脯氨酸氨基肽酶快速检测试纸及其制备方法
技术领域
本发明涉及体外诊断试剂领域，尤其涉及一种脯氨酸氨基肽酶快速检测试纸及其制备方法。
背景技术
细菌性***病(bacterial vaginosis,BV)是常见的妇科生殖感染性疾病，BV是指一类在细菌学上表现为***正常菌群(产H2O2乳酸杆菌)数量减少或消失，正常平衡存在的厌氧菌群(***加德纳菌、消化链球菌、普雷沃菌、动弯杆菌、人型支原体、拟杆菌等)数量异常增多的临床症候群。
现阶段存在较多BV的检测方法，有Amsel法、Nugent评分法、唾液酸苷酶快速检测法、脯氨酸氨基肽酶快速检测法等。目前市面上的检测脯氨酸氨基肽酶的试纸/试剂盒需要在37℃的加热设备中孵育15min，且孵育后要添加显色液，测试时间长且操作繁琐，诊断效率有待提高。
发明内容
本发明的目的在于提供一种脯氨酸氨基肽酶快速检测试纸及其制备方法，旨在解决现有检测方法操作繁琐降低诊断效率的问题。
为实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种脯氨酸氨基肽酶快速检测试纸，包括基体、第一试剂液和第二试剂液，所述第一试剂液和所述第二试剂液依次附着在基体上；
所述第一试剂液的组分为：底物0.10～10.00g/L、缓冲液50mM～250mM，缓冲液pH值6.0～7.5、第一稳定剂1.0～50.0g/L和分散剂1.0～50.0g/L；
所述第二试剂液的组分为：第二稳定剂0.1～50.0g/L、有机酸1.0～50.0g/L和促进剂1.0～50.0g/L。
其中，所述底物为L-脯氨酸对硝基苯胺三氟乙酸盐、Z-甘氨酰脯氨酸对硝基苯胺、L-脯氨酸β-萘酰胺盐酸盐、L-脯氨酰-对硝基苯胺中任意一种。
其中，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、柠檬酸缓冲液、柠檬酸-磷酸盐缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液和TRIS-盐酸缓冲液中的任意一种。
其中，所述第一稳定剂为蔗糖、海藻糖和牛血清白蛋白的一种或是一种以上。
其中，所述分散剂为聚乙烯吡咯烷酮类、曲拉通X-100、吐温20、吐温40、吐温60、吐温80和聚乙二醇类中的一种或是一种以上。
其中，所述第二稳定剂为乙二胺四乙酸钠盐、钾盐、三-吗啉基氧化膦、维生素C乙基醚、顺丁烯二酸、氯化锌、钨酸钠和硫酸镁中的一种或一种以上。
其中，所述有机酸为酒石酸、苯甲酸、柠檬酸、苹果酸、磺基水杨酸中的一种或一种以上。
其中，所述促进剂为固紫B盐、固蓝BB盐、固蓝RR盐、固红B盐、固蓝B盐中的任意一种。
第二方面，本发明还提供一种脯氨酸氨基肽酶快速检测试纸的制备方法，包括：
将第一试剂液附着在基体上，并取出干燥；将第二试剂液附着在干燥后的基体上，并取出干燥。
本发明的一种脯氨酸氨基肽酶快速检测试纸及其制备方法，包括基体、第一试剂液和第二试剂液，所述第一试剂液和所述第二试剂液依次附着在基体上；所述第一试剂液的组分为：底物0.10～10.00g/L、缓冲液50mM～250mM，缓冲液pH值6.0～7.5、第一稳定剂1.0～50.0g/L和分散剂1.0～50.0g/L；所述第二试剂液的组分为：第二稳定剂0.1～50.0g/L、有机酸1.0～50.0g/L和促进剂1.0～50.0g/L。通过添加促进剂，使反应产物与促进剂发生重氮偶合反应，加快反应显色。促进剂受金属离子或具有氧化性的物质影响，稳定性变差，因此增加第二稳定剂可有效去除干扰，提高试纸稳定性。本发明无需显色液，37℃孵育5min即可出结果，操作简单，检测速度快，灵敏度高，结果准确可靠。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明的一种脯氨酸氨基肽酶快速检测试纸的制备方法的流程图。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
第一方面，本发明提供一种脯氨酸氨基肽酶快速检测试纸，包括：
基体、第一试剂液和第二试剂液，所述第一试剂液和所述第二试剂液依次附着在基体上；
所述第一试剂液的组分为：底物0.10～10.00g/L、缓冲液50mM～250mM，缓冲液pH范围在6.0～7.5、第一稳定剂1.0～50.0g/L和分散剂1.0～50.0g/L；
所述第二试剂液的组分为：第二稳定剂0.1～50.0g/L、有机酸1.0～50.0g/L和促进剂1.0～50.0g/L。
所述底物为L-脯氨酸对硝基苯胺三氟乙酸盐、Z-甘氨酰脯氨酸对硝基苯胺、L-脯氨酸β-萘酰胺盐酸盐、L-脯氨酰-对硝基苯胺中任意一种。
所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、柠檬酸缓冲液、柠檬酸-磷酸盐缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液和TRIS-盐酸缓冲液中的任意一种。
所述分散剂为聚乙烯吡咯烷酮类、曲拉通X-100、吐温20、吐温40、吐温60、吐温80和聚乙二醇类中的一种或是一种以上。
所述第二稳定剂为乙二胺四乙酸钠盐、钾盐、三-吗啉基氧化膦、维生素C乙基醚、顺丁烯二酸、氯化锌、钨酸钠和硫酸镁中的一种或一种以上。
所述有机酸为酒石酸、苯甲酸、柠檬酸、苹果酸、磺基水杨酸中的一种或一种以上。
所述促进剂为固紫B盐、固蓝BB盐、固蓝RR盐、固红B盐、固蓝B盐中的任意一种。
在本实施例中，目前市面上检测脯氨酸氨基肽酶的干化学法分为一步法和两步法。其中一步法脯氨酸氨基肽酶水解底物释放出对硝基苯胺，显黄色为阳性，该一步法灵敏度较低。两步法为脯氨酸氨基肽酶水解底物得到产物A，滴加显色液后，产物A与显色液反应呈色，该两步法操作较为繁琐。而本发明通过添加重氮盐，使反应产物与重氮盐发生重氮偶合反应，加快反应显色。重氮盐受金属离子或具有氧化性的物质影响，稳定性变差，因此乙二胺四乙酸钠盐或是钾盐，三-吗啉基氧化膦，维生素C乙基醚、顺丁烯二酸、氯化锌、钨酸钠、硫酸镁等稳定剂可有效去除干扰，提高试纸稳定性。本发明无需显色液，37℃孵育5min即可出结果，操作简单，检测速度快，灵敏度高，结果准确可靠，从而解决现有检测方法操作繁琐降低诊断效率的问题。
具体的检测方法为：取按规定稀释好的***分泌物样本，滴加一滴在试纸上，于37℃下孵育5min观察脯氨酸氨基肽酶试纸块颜色变化，试纸块不显色或显淡淡黄色为阴性，显浅黄色为弱阳性，显黄色/紫黄色/粉红色/***为阳性。
第二方面，请参阅图1，本发明还提供一种脯氨酸氨基肽酶快速检测试纸的制备方法，包括：
S101将第一试剂液附着在基体上，并取出干燥；
基体可以是滤纸，可以将基体在第一试剂液中浸润干燥制得，还可以将第一试剂液5-30ul滴加在冲压好基体的反应孔中制得。
S102将第二试剂液附着在干燥后的基体上，并取出干燥。
可以将干燥后的基体放在第二试剂液中浸润干燥制得，还可以将第二试剂液5-30ul滴加在干燥后基体的反应孔中制得。
在做好后还可以添加基片以及双面胶对滤纸进行封装保存。
以下提供几种具体的实施例：
实施案例一
A液
底物：1g/kg L-脯氨酸β-萘酰胺盐酸盐；
缓冲液：pH 6.5、100mM柠檬酸缓冲液；
稳定剂：5g/kg蔗糖；
分散剂：1g/kg曲拉通X-100。
B液
稳定剂：5g/kg乙二胺四乙酸钠盐，5g/kg三-吗啉基氧化膦；
有机酸：10g/kg酒石酸；
促进剂：1g/kg固紫B盐。
试纸制作方法同步骤S101-S102。
实施案例二
A液
底物：2g/kg L-脯氨酸对硝基苯胺三氟乙酸盐；
缓冲液：pH 6.5、50mM磷酸盐缓冲液；
稳定剂：5g/kg牛血清白蛋白、5g/kg蔗糖；
分散剂：5g/kg PVP-K90。
B液
稳定剂：2g/kg钨酸钠、2g/kg硫酸镁；
有机酸：10g/kg柠檬酸；
促进剂：1g/kg固蓝BB盐。
试纸制作方法同步骤S101-S102。
实施案例三
A液
底物：2g/kg Z-甘氨酰脯氨酸对硝基苯胺；
缓冲液：pH 7.5、50mM硼酸-硼砂缓冲液；
稳定剂：10g/kg牛血清白蛋白、5g/kg蔗糖；
分散剂：1g/kg聚乙二醇-400。
B液稳定剂：5g/kg乙二胺四乙酸钠盐，2g/kg维生素C乙基醚，2g/kg硫酸镁；有机酸：10g/kg苹果酸；
促进剂：1g/kg固蓝B盐。
试纸制作方法同步骤S101-S102。
实施案例四
A液
底物：5g/kg L-脯氨酰-对硝基苯胺；
缓冲液：pH 7.0、50mM TRIS-盐酸缓冲液；
稳定剂：5g/kg牛血清白蛋白、5g/kg海藻糖；
分散剂：5g/kg吐温20。
B液
稳定剂：5g/kg氯化锌，2g/kg钨酸钠，5g/kg硫酸镁；
有机酸：10g/kg苯甲酸；
促进剂：1g/kg固红B盐。
试纸制作方法同步骤S101-S102。
实施案例五
A液
底物：5g/kg L-脯氨酸β-萘酰胺盐酸盐；
缓冲液：pH 6.5、50mM磷酸盐缓冲液；
稳定剂：5g/kg海藻糖；
分散剂：5g/kg PVP-K30。
B液
稳定剂：5g/kg氯化锌，5g/kg钨酸钠；
有机酸：10g/kg磺基水杨酸；
促进剂：2g/kg固红B盐。
试纸制作方法同步骤S101-S102。
本发明的一种脯氨酸氨基肽酶快速检测试纸及其制备方法，包括基体、第一试剂液和第二试剂液，所述第一试剂液和所述第二试剂液依次附着在基体上；所述第一试剂液的组分为：底物0.10～10.00g/L、缓冲液50mM～250mM，缓冲液pH值6.0～7.5、第一稳定剂1.0～50.0g/L和分散剂1.0～50.0g/L；所述第二试剂液的组分为：第二稳定剂0.1～50.0g/L、有机酸1.0～50.0g/L和促进剂1.0～50.0g/L。通过添加重氮盐，使反应产物与重氮盐发生重氮偶合反应，加快反应显色。重氮盐受金属离子或具有氧化性的物质影响，稳定性变差，因此乙二胺四乙酸钠盐或是钾盐，三-吗啉基氧化膦，维生素C乙基醚、顺丁烯二酸、氯化锌、钨酸钠、硫酸镁等稳定剂可有效去除干扰，提高试纸稳定性。本发明检测试纸可以快速检测女性***分泌物中的脯氨酸氨基肽酶一步法操作，检测无需加显色液，操作简单，避免误操作，有利于自动化检测；反应只需要孵育5分钟即可进行检测，检测时间短，缩短TAT时间，适合临床试验检测特别是医院门诊检测筛查；采用重氮盐偶氮结合显色，反应显色明显，易于观察，适合于目测，应用场景可从专业市场拓展与个人检测监测且无需专业设备。
以上所揭露的仅为本发明一种较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，本领域普通技术人员可以理解实现上述实施例的全部或部分流程，并依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于发明所涵盖的范围。

Claims (9)

1.一种脯氨酸氨基肽酶快速检测试纸，其特征在于，
包括基体、第一试剂液和第二试剂液，所述第一试剂液和所述第二试剂液依次附着在基体上；
所述第一试剂液的组分为：底物0.10～10.00g/L、缓冲液50mM～250mM，缓冲液pH值6.0～7.5、第一稳定剂1.0～50.0g/L和分散剂1.0～50.0g/L；
所述第二试剂液的组分为：第二稳定剂0.1～50.0g/L、有机酸1.0～50.0g/L和促进剂1.0～50.0g/L。
2.如权利要求1所述的一种脯氨酸氨基肽酶快速检测试纸，其特征在于，
所述底物为L-脯氨酸对硝基苯胺三氟乙酸盐、Z-甘氨酰脯氨酸对硝基苯胺、L-脯氨酸β-萘酰胺盐酸盐、L-脯氨酰-对硝基苯胺中任意一种。
3.如权利要求1所述的一种脯氨酸氨基肽酶快速检测试纸，其特征在于，
所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、柠檬酸缓冲液、柠檬酸-磷酸盐缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液和TRIS-盐酸缓冲液中的任意一种。
4.如权利要求1所述的一种脯氨酸氨基肽酶快速检测试纸，其特征在于，
所述第一稳定剂为蔗糖、海藻糖和牛血清白蛋白的一种或是一种以上。
5.如权利要求1所述的一种脯氨酸氨基肽酶快速检测试纸，其特征在于，
所述分散剂为聚乙烯吡咯烷酮类、曲拉通X-100、吐温20、吐温40、吐温60、吐温80和聚乙二醇类中的一种或是一种以上。
6.如权利要求1所述的一种脯氨酸氨基肽酶快速检测试纸，其特征在于，
所述第二稳定剂为乙二胺四乙酸钠盐、钾盐、三-吗啉基氧化膦、维生素C乙基醚、顺丁烯二酸、氯化锌、钨酸钠和硫酸镁中的一种或一种以上。
7.如权利要求1所述的一种脯氨酸氨基肽酶快速检测试纸，其特征在于，
所述有机酸为酒石酸、苯甲酸、柠檬酸、苹果酸、磺基水杨酸中的一种或一种以上。
8.如权利要求1所述的一种脯氨酸氨基肽酶快速检测试纸，其特征在于，
所述促进剂为固紫B盐、固蓝BB盐、固蓝RR盐、固红B盐、固蓝B盐中的任意一种。
9.一种脯氨酸氨基肽酶快速检测试纸的制备方法，应用于制备如权利要求1-8任意一项所述的一种脯氨酸氨基肽酶快速检测试纸，其特征在于，
包括将第一试剂液附着在基体上，并取出干燥；
将第二试剂液附着在干燥后的基体上，并取出干燥。
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