CN102321730A - 一种***炎联合检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明目的在于提供一种操作简便，快速，灵敏，不需要高端仪器设备，价格低廉的***炎联合检测试剂盒。本发明的技术方案为提供一种***炎联合检测试剂盒，包括设置有四个干化学反应盲孔的孔式卡状反应装置和稀释液、显色液，所述四个盲孔设置有过氧化氢浓度测定检测试剂垫、唾液酸苷酶活性检测试剂垫、白细胞酯酶活性测定检测试剂垫、***液pH检测试剂垫。可同时检测***分泌物的pH值、过氧化氢、唾液酸苷酶、白细胞酯酶四个指标。通过以上四个指标判定***微生态环境，***正常菌群和致病菌群状况的细菌性***病联合检测试剂盒。
Description
技术领域
本发明涉及一种***炎的联合检测试剂盒，特别用于辅助诊断女性细菌性***病。
背景技术
细菌性***病(bacterial vaginosis，简称BV)是指一类在细菌学上表现为生殖道正常菌群(产过氧化氢的乳酸杆菌)数量减少，而由多种致病性厌氧菌感染(主要是***加德纳菌)引起的无明显黏膜炎症的一种疾病。细菌性***病与滴虫感染密切相关，80％的滴虫患者同时伴有BV感染；是导致霉菌性***炎的主要原因，易造成输卵管炎、***、泌尿***感染、术后感染，与***症、***、妇科肿瘤有关。妊娠期因内分泌变化易发生BV，平均感染率为16-37％，妊娠期患BV易发生早产或分娩低体重儿，比正常的妇女高3-4倍。***致病菌可上行至羊膜，绒毛膜羊膜或羊水，导致这些部位的感染和炎症。
目前临床诊断BV公认标准是Amsel标准，Amsel法包括：①分泌物增加(均匀白色的粘性分泌物)；②pH＞4.5；③***液与等量10％KOH混合释放鱼腥味；④线索细胞超过20％(上皮细胞变成线索细胞的比例)，以上四种体征中的三种阳性可诊断为BV。此方法简单易行，但是此方法易受人为因素的影响(如检验者的经验，显微设备的质量、样本的采集以及操作者对气味的识别能力等)，及与BV感染无关的因素(如近期***、***灌洗、处于月经期或绝经后)诸多因素的影响，主观性强。而且细菌性***病是一个逐步发生的过程，对于Amsel法一分为二的诊断标准局限了它对BV的检测。
细菌性***病主要是患者***内乳酸杆菌减少而其它致病细菌大量繁殖，致使***内过氧化氢浓度减少，pH值升高；另一方面致病菌(加德纳菌、各种厌氧菌及人体支原体等)产生大量唾液酸苷酶(细菌性***病致病菌的标志性产物)，较正常人高出100-1000倍。当患者***内发生炎症反应时，多核白细胞在炎性病灶聚集而大量释放白细胞酯酶。
发明内容
本发明目的在于提供一种操作简便，快速，灵敏，不需要高端仪器设备，价格低廉的细菌性***病联合检测试剂盒，通过检测***分泌物中过氧化氢、唾液酸苷酶、白细胞酯酶及pH值等指标联合初筛细菌性***病，作为细菌性***病感染的辅助诊断。
本发明的技术方案为提供一种***炎联合检测试剂盒，包括设置有四个干化学反应盲孔的孔式卡状反应装置和稀释液、显色液，所述四个盲孔设置有过氧化氢浓度测定检测试剂垫、唾液酸苷酶活性检测试剂垫、白细胞酯酶活性测定检测试剂垫、pH检测装置。
所述稀释液为生理盐水和MES缓冲液组成的pH＝6.5的溶液，所述稀释液中的氯化钠质量百分浓度为0.9％，所述MES缓冲液在稀释液中的浓度为2mmol/L；
所述显色液为质量百分浓度0.1-0.5％的固紫B溶液。
优选的，所述的过氧化氢检测试剂垫为将垫载体在过氧化氢检测试剂中浸泡之后进行干燥处理的试剂垫，所述的过氧化氢检测试剂由以下物质组成：
色原：质量浓度为8.0-25.0g/L，所述色原为N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐或3，5-二氯-2-羟基苯磺酸钠；
过氧化氢显色剂：质量浓度为0.02-0.68g/L；所述过氧化氢显色剂为1、3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙盐酸盐水合物；
过氧化物酶：200-1000KU/L。
优选的，所述的白细胞酯酶检测试剂垫为将垫载体在由白细胞酯酶检测试剂中经浸泡之后进行干燥处理的试剂垫，所述的白细胞酯酶检测试剂由以下物质组成：
酶底物A：质量浓度为0.5-3.5g/L，所述的酶底物A为5-溴-4氯-3吲哚乙酸盐；
糖类：质量浓度为35-55g/L，所述糖类为蔗糖或海藻糖。
优选的，所述的唾液酸苷酶检测试剂垫为将垫载体在唾液酸苷酶活性检测试剂中经浸泡之后进行干燥处理的试剂垫，所述唾液酸苷酶活性检测试剂由以下物质组成：
酶底物B：质量浓度为0.5-5g/L，所述的酶底物B为5-溴-4氯-3-吲哚-N乙酰-α-唾液酸苷、硝基苯-N-乙酰-α-唾液酸苷、萘酚-N-乙酰-α-唾液酸苷或5-溴-4氯-3-吲哚基乙酰神经氨酸盐；
糖类：质量浓度为35-65g/L，所述糖类为蔗糖或海藻糖。
优选的，所述垫载体为滤纸玻璃纤维膜或层析纸。
优选的，所述pH检测装置为pH试纸。
本发明的有益效果为本发明的细菌性***病联合检测试剂盒通过四个干式化学反应盲孔的反应结果联合判断***内的情况。通过以上四个指标判定***微生态环境，***正常菌群和致病菌群状况的细菌性***病联合检测试剂盒。其对细菌性***病的诊断具有较高的敏感性和特异性，与传统的Amsel诊断法和临床镜检相比较具有较高的符合率。且本发明对***分泌物的检测具有操作简便、可重复、客观、快速和价廉，以及不需要特殊仪器等特点，可为临床检验带来许多便利。它可对可疑似的***感染进行确诊、在无症状个体中发现感染、调查对常规治疗产生耐药的病例、帮助临床选择治疗方案、判断愈合后以及开展***感染的患病率调查等，是一类极有前途的妇科诊断技术，应在妇科诊断领域大力推广应用。
具体实施方式
实施例1本发明联合检测试剂盒的制备：
在孔式卡状反应装置四个孔内分别装有孔径4.5mm的whatman玻璃微纤维滤纸23SL做载体的过氧化氢浓度试剂垫，白细胞酯酶测定试剂垫，唾液酸苷酶测定试剂垫，脯氨酸氨基肽酶测定试剂垫。
过氧化氢试剂垫的制作：将垫载体在下述浸泡液(过氧化氢检测试剂)中浸泡之后进行干燥处理，所述浸泡液为8.0g/L的N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐(TOOS)。
白细胞酯酶检测试剂垫的制作：将垫载体在下述浸泡液(白细胞酯酶检测试剂)中浸泡，所述浸泡液为：5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸盐0.5g/L；蔗糖35g/L。
唾液酸苷酶检测试剂垫的制作：将垫载体在下述浸泡液中浸泡之后进行干燥处理，所述浸泡液为：之后进行干燥处理的试剂垫。所述唾液酸苷酶活性检测试剂由以下物质组成：硝基苯-N-乙酰-α-唾液酸苷0.5g/L；蔗糖：35g/L；0.1％固紫B溶液，之后进行干燥处理。
市场购得pH检测试纸。
稀释液配制：由生理盐水和MES缓冲液组成的pH＝6.5的溶液，所述生理盐水在稀释液中的质量百分浓度为0.9％，所述MES缓冲液在稀释液中的浓度为2mmol/L。
显色液为质量百分浓度0.1％的固紫B溶液。
实施例2本发明联合检测试剂盒的另一实施例：
过氧化氢试剂垫的制作：将垫载体在下述浸泡液中浸泡之后进行干燥处理，所述浸泡液为15g/L的3，5-二氯-2-羟基苯磺酸钠(DHBS)，之后进行干燥处理。
白细胞酯酶检测试剂垫的制作：将垫载体在下述浸泡液中浸泡，所述浸泡液为：5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸盐2g/L；蔗糖40g/L。
唾液酸苷酶检测试剂垫的制作：将垫载体在检测试剂下述浸泡液(唾液酸苷酶活性检测试剂)中浸泡之后进行干燥处理，所述浸泡液为：之后进行干燥处理的试剂垫。所述唾液酸苷酶活性检测试剂由以下物质组成：硝基苯-N-乙酰-α-唾液酸苷0.5-5g/L；蔗糖：40g/L；0.1-1.0％固紫B溶液，之后进行干燥处理。
市场购得pH检测试纸。
稀释液配制：由生理盐水和MES缓冲液组成的pH＝6.5的溶液，所述生理盐水在稀释液中的质量百分浓度为0.9％，所述MES缓冲液在稀释液中的浓度为2mmol/L，
显色液为质量百分浓度0.2％的固紫B溶液。
实施例3本发明联合检测试剂盒的又一实施例：
过氧化氢试剂垫的制作：将垫载体在下述浸泡液中浸泡之后进行干燥处理，所述浸泡液为25g/L的3，5-二氯-2-羟基苯磺酸钠(DHBS)，之后进行干燥处理。
白细胞酯酶检测试剂垫的制作：将垫载体在下述浸泡液中浸泡，所述浸泡液为：5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸盐2g/L；蔗糖60g/L。
唾液酸苷酶检测试剂垫的制作：将垫载体在检测试剂下述浸泡液中浸泡之后进行干燥处理，所述浸泡液为：之后进行干燥处理的试剂垫。所述唾液酸苷酶活性检测试剂由以下物质组成：硝基苯-N-乙酰-α-唾液酸苷5g/L；蔗糖：60g/L；0.5％固紫B溶液，之后进行干燥处理。
市场购得pH检测试纸。
稀释液配制：由生理盐水和MES缓冲液组成的pH＝6.5的溶液，所述生理盐水在稀释液中的质量百分浓度为0.9％，所述MES缓冲液在稀释液中的浓度为2mmol/L，
显色液为质量百分浓度0.2％的固紫B溶液。
实施例4本发明试剂盒的使用：
A.过氧化氢浓度检测：过氧化氢垫上1，5-二甲基-2-苯基-4-氨基-3-吡唑酮在过氧化氢的作用下与显色剂DHBS发生反应生成有色产物。当标本中含有一定量的过氧化氢时，反应结果显红色或***，颜色深度与过氧化氢浓度成正比，当标本中过氧化氢浓度低于一定量时，反应垫不变色。
B.唾液酸苷酶活性检测：唾液酸苷酶垫上底物--5-溴-4-氯-3-吲哚基乙酰神经氨酸钠盐经***内唾液酸苷酶水解后，其产物之一与显色指示剂起反应后显示红色或红紫色，呈色深度与唾液酸苷酶活性成正比。
C.白细胞酯酶活性检测：白细胞酯酶垫上底物--5-溴-4-氯-3-吲哚基乙酸酯经***内白细胞酯酶水解，其产物之一在空气中氧作用下发生自我聚合后呈蓝绿色或蓝色，呈色深度与白细胞酯酶活性成正比。
D.pH值检测：pH值垫上指示剂底物在不同酸碱值，显示对应颜色变化。
细菌性***病联合检测试剂盒操作如下：
1.用无菌棉拭子在***后穹窿或***深处旋转2-10周，停留10-20秒，尽可能多的采集患者***分泌物，以清晰见到棉拭子上有分泌物附着为准。取样后的标本应及时测定，否则应保存在2-8℃，24小时内完成测定。
2.取一无菌加样试管，滴加稀释液12-15滴，将一已经取样的试子置于该试管中，反复挤压试子，使***分泌物充分释出，得到样本液。
3.用吸管吸取样本液，在检测卡的四个孔中各加1滴样本液(约30μL)，然后在设有唾液酸苷酶检测试剂垫的孔中加入显色液一滴。
4.将检测卡置37℃温育15分钟，判读结果。
根据试剂盒提供的比色卡进行判读结果：
细菌性***病主要是患者***内乳酸杆菌减少而其它致病细菌大量繁殖，致使***内过氧化氢浓度减少，pH值升高；另一方面致病菌(加德纳菌、各种厌氧菌及人体支原体等)产生大量唾液酸苷酶(细菌性***病致病菌的标志性产物)，较正常人高出100-1000倍。当患者***内发生炎症反应时，多核白细胞在炎性病灶聚集而大量释放白细胞酯酶。
过氧化氢指标：正常显红色或紫色，不正常无色或微红色；
唾液酸苷酶指标：正常不显色，显红色或紫色为阳性；
白细胞酯酶指标：正常不显色，显蓝色或绿色为阳性；
pH值检测：pH值垫上指示剂底物在不同酸碱值，显示对应颜色变化。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及内所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
Claims (6)
1.一种***炎联合检测试剂盒，其特征在于，包括设置有四个干化学反应盲孔的孔式卡状反应装置和稀释液、显色液，所述四个盲孔设置有过氧化氢浓度测定检测试剂垫、唾液酸苷酶活性检测试剂垫、白细胞酯酶活性测定检测试剂垫、pH检测装置，
所述稀释液为生理盐水和MES缓冲液组成的pH＝6.5的溶液，所述稀释液中的氯化钠质量百分浓度为0.9％，所述MES缓冲液在稀释液中的浓度为2mmol/L；
所述显色液为质量百分浓度0.1-0.5％的固紫B溶液。
2.按权利要求1所述的***炎联合检测试剂盒，其特征在于，所述的过氧化氢检测试剂垫为将垫载体在过氧化氢检测试剂中浸泡之后进行干燥处理的试剂垫，所述的过氧化氢检测试剂由以下物质组成：
色原：质量浓度为8.0-25.0g/L，所述色原为N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐或3，5-二氯-2-羟基苯磺酸钠；
过氧化氢显色剂：质量浓度为0.02-0.68g/L；所述过氧化氢显色剂为1、3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙盐酸盐水合物；
过氧化物酶：200-1000KU/L。
3.按权利要求1所述的***炎联合检测试剂盒，其特征在于，所述的白细胞酯酶检测试剂垫为将垫载体在由白细胞酯酶检测试剂中经浸泡之后进行干燥处理的试剂垫，所述的白细胞酯酶检测试剂由以下物质组成：
酶底物A：质量浓度为0.5-3.5g/L，所述的酶底物A为5-溴-4氯-3吲哚乙酸盐；
糖类：质量浓度为35-55g/L，所述糖类为蔗糖或海藻糖。
4.按权利要求1所述的***炎联合检测试剂盒，其特征在于，所述的唾液酸苷酶检测试剂垫为将垫载体在唾液酸苷酶活性检测试剂中经浸泡之后进行干燥处理的试剂垫，所述唾液酸苷酶活性检测试剂由以下物质组成：
酶底物B：质量浓度为0.5-5g/L，所述的酶底物B为5-溴-4氯-3-吲哚-N乙酰-α-唾液酸苷、硝基苯-N-乙酰-α-唾液酸苷、萘酚-N-乙酰-α-唾液酸苷或5-溴-4氯-3-吲哚基乙酰神经氨酸盐；
糖类：质量浓度为35-65g/L，所述糖类为蔗糖或海藻糖。
5.按权利要求1所述的***炎联合检测试剂盒，其特征在于，所述垫载体为滤纸玻璃纤维膜或层析纸。
6.按权利要求1所述的***炎联合检测试剂盒，其特征在于，所述pH检测装置为pH试纸。
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