CN115144598B - 一种胎儿纤维结合蛋白和胰岛素生长因子结合蛋白-1的量子点荧光检测方法及应用 - Google Patents

一种胎儿纤维结合蛋白和胰岛素生长因子结合蛋白-1的量子点荧光检测方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种胎儿纤维结合蛋白和胰岛素生长因子结合蛋白‑1的量子点荧光检测方法及应用，属于分析化学和检测技术领域。本发明基于量子点免疫荧光法，取孕产妇的宫颈***分泌物或者粘液作为待检样本，经样本稀释液前处理和检测过程优化，从而实现对fFN和IGFBP‑1的快速、准确和宽范围检测，因此具有良好的实际应用之价值。

Description

一种胎儿纤维结合蛋白和胰岛素生长因子结合蛋白-1的量子 点荧光检测方法及应用
技术领域
本发明属于分析化学和检测技术领域，具体涉及一种胎儿纤维结合蛋白和胰岛素生长因子结合蛋白-1的量子点荧光检测方法及应用。
背景技术
本发明背景技术中公开的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
早产是指妊娠28至37周间的分娩，发生率占分娩的5%-10%。目前认为早产是由内分泌、免疫等多个***参与并相互作用而产生的综合征，对新生儿的健康成长影响很大。胎膜早破是指孕产妇在胎膜在产前就已经破裂，其中未足月胎膜早破是指在妊娠28至37周时候产妇发生胎膜早破，不仅会导致胎儿早产，同时有可能引发母婴感染或者是产后脐带脱垂等情况，所以要加以***。
胎儿纤维结合蛋白（fetal fibronectin，fFN）是子宫绒毛膜细胞外的基质成分，存在于绒毛膜和蜕膜之间，主要由滋养层细胞产生。由于孕21周以后，绒毛膜与蜕膜的融合阻止了fFN的释放，而使正常的孕妇在22-35孕周时的含量极低，只有在绒毛膜与蜕膜分离、绒毛膜与蜕膜界面的细胞外基质遭到机械损伤(如子宫收缩)或蛋白水解酶的降解时，才可见于宫颈***分泌物中。因此，在孕22-35周，宫颈***分泌物中的水平与是否发生早产有很大的相关性，即妊娠晚期宫颈***分泌物中出现过量fFN是早产的标志。
胎儿***结合蛋白-1（insulin-like growth factor bindingprotein-1，IGFBP-1）属人体肝脏组织以及羊水蜕膜组织的合成物，当孕妇妊娠12周后，即会开始分泌，多出现于机体羊水中，不仅在血清组织中难以发现，而且在***分泌物以及尿液中的检测难度更大。当胎膜破裂时，羊水中的***结合蛋白-1可通过胎膜破口漏出到宫颈***中，成为胎膜早破的检测标志。IGFBP-1在羊水中的浓度比母亲血清中高100-1000倍，其他体液中较少，宫颈黏液、尿液、***对实验均无影响。因此IGFBP-1是羊水中一种预测胎膜早破的理想标志物，成为诊断胎膜早破的特异性指标。
综上，对宫颈***分泌物或者粘膜中的胎儿纤维结合蛋白（fFN）和胰岛素生长因子结合蛋白-1（IGFBP-1）可作为预测早产/胎膜早破的重要指标。
临床预测早产有生化检测、超声检查和物理推测。根据孕妇宫缩、产程、孕期及月经情况进行物理推测早产，临床价值偏低，准确率也低。
诊断胎膜早破的金标准是羊膜腔内注入染料（如美蓝），若***内有蓝色液体流出即可诊断。但该法临床很难操作，对患者造成一定的痛苦，故临床很少应用。实验室最常用的方法为硝嗪试纸法及羊齿状结晶法，但2种方法均受尿液、***、血液的影响，致使准确度、灵敏性均较差，而且对标本的采集及标本量要求高，人为因素较多，更无法检测羊水流出较少的微小破膜。
发明人发现，现有针对fFN和IGFBP-1的检测方法主要包括酶联免疫吸附法(ELISA)、胶体金法等。ELISA法的操作时间长，检测结果易受产妇血液、pH、蛋白、离子等的影响；而胶体金法的检出限高、无法准确定量，且靠肉眼观察容易出现误判，因此在临床上的使用均比较受限。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供一种胎儿纤维结合蛋白和胰岛素生长因子结合蛋白-1的量子点荧光检测方法及应用。本发明基于量子点免疫荧光法，取孕产妇的宫颈***分泌物或者粘液作为待检样本，经样本稀释液前处理和检测过程优化，从而实现对fFN和IGFBP-1的快速、准确和宽范围检测。基于上述研究成果，从而完成本发明。
具体的，本发明涉及以下技术方案：
本发明的第一个方面，提供一种胎儿纤维结合蛋白和胰岛素生长因子结合蛋白-1的量子点荧光检测方法，所述方法包括采用双抗夹心法，以固相免疫层析形式对胎儿纤维结合蛋白和胰岛素生长因子结合蛋白-1进行测定。
具体的，所述检测方法具体包括：
S1、将待测样品加入样本稀释液中进行稀释并预处理，消除其中蛋白、pH值、离子强度等变化对检测结果可能产生的影响；
S2、将上述待测物加入基于量子点的免疫层析试纸条上，对显色完成的试纸条进行荧光检测。
所述待测样品优选为宫颈***分泌物（如宫颈***粘液）。
其中，所述样本稀释液由含有0.15-0.5%EDTA、0.5-2%PEG20000和0.4-1.2%S9（TETRONIC1307）的0.1-0.3M Tris-HCl缓冲液构成，其中，Tris-HCl缓冲液有助于稳定待测样本pH值，EDTA用于螯合二价金属离子，PEG20000、S9作为封闭剂和表面活性剂使用，有助于提升检测的特异性并且能消除非特异性吸附。
基于量子点的免疫层析试纸条，所述基于量子点的免疫层析试纸条包括底板，所述底板上依次设置有滤血膜、缓冲垫、检测垫和吸水垫，相邻各垫在连接处交叠连接。
其中，所述检测垫以硝酸纤维素膜（NC膜）为基垫，硝酸纤维素膜上依次设置标记物线、检测线和质控线。
当待测物为胎儿纤维结合蛋白（fFN）时，
所述标记物线上包被有量子点标记抗fFN单克隆抗体（Q-Ab）；
所述检测线包被有fFN捕捉抗体；
当待测物为胰岛素生长因子结合蛋白-1（IGFBP-1）时，
所述标记物线上包被有量子点标记的抗IGFBP-1单克隆抗体；
所述检测线包被有IGFBP-1捕捉抗体；
所述质控线包被有羊抗鸡IgY；
所述吸水垫可以为吸水纸，所述底板可采用PVC板。
本发明的第二方面，提供了一种胎儿纤维结合蛋白和胰岛素生长因子结合蛋白-1的量子点荧光检测试剂盒，所述检测试剂盒至少包含免疫层析试纸条（或检测卡）；
所述基于量子点的免疫层析试纸条包括底板，所述底板上依次设置有滤血膜、缓冲垫、检测垫和吸水垫，相邻各垫在连接处交叠连接。
其中，所述检测垫以硝酸纤维素膜（NC膜）为基垫，硝酸纤维素膜上依次设置标记物线、检测线和质控线。
当待测物为胎儿纤维结合蛋白（fFN）时，
所述标记物线上包被有量子点标记抗fFN单克隆抗体（Q-Ab）；
所述检测线包被有fFN捕捉抗体；
当待测物为胰岛素生长因子结合蛋白-1（IGFBP-1）时，
所述标记物线上包被有量子点标记的抗IGFBP-1单克隆抗体；
所述检测线包被有IGFBP-1捕捉抗体；
所述质控线包被有羊抗鸡IgY；
所述吸水垫可以为吸水纸，所述底板可采用PVC板。
具体的，所述免疫层析试纸条，其包括采用如下方法制备得到：
S1、制备检测线与质控线区域的包被膜：取NC膜和PVC板，将NC膜非点样面贴于PVC板的既定位置，取胎儿纤维结合蛋白抗体和胰岛素生长因子结合蛋白-1抗体以及羊抗鸡IgY，划膜包被于NC膜的检测线（包括第一检测线和第二检测线）和质控线位置，干燥后即；
S2、制备标记物线区域的包被膜：
a：取硒化镉量子点，加入到MES缓冲液中，活化处理；
b：取步骤a制备的量子点标记液，向其中依次加入EDC和NHS，再加入胎儿纤维结合蛋白抗体进行避光反应；
c：取步骤b中的标记后混合液离心，并用硼酸盐缓冲液作为洗脱液进行洗脱；
d：应用复溶液对步骤c中得到的标记后溶液进行稀释，并混匀，即得到量子点标记的胎儿纤维结合蛋白抗体；所述复溶液其成分包括：0.1-0.3M HEPES缓冲体系，含有0.5-2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP）K-30，1-3%酪蛋白，3-8%羟丙基β-环糊精和0.5-2%Tween20；
e：按照上述步骤a~d同样的方法制备量子点标记胰岛素生长因子结合蛋白-1抗体和量子点标记鸡IgY抗体；然后将三种标记抗体混匀后制成结合垫包被液，划线于NC膜的标记物线区域，干燥后即得；
S3、制备滤血膜；
S4、制备缓冲垫，包括：
a：配制缓冲垫处理液，所述缓冲垫处理液成分包括0.1M Tris-HCl缓冲体系（稳定待测样本pH值），20-150μg/ml 抗红细胞抗体（RBC抗体）用于结合血液中的红细胞，4-10%海藻糖用于保护抗体的稳定性、0.2-0.8%Tween80作为表面活性剂；
b：将玻纤膜裁切，涂布预处理；干燥；
S5、组装：
将底板上对应位置的粘纸撕去，将吸水纸粘贴在包被膜的NC膜上方，覆盖NC膜；将缓冲垫粘贴在包被膜的NC膜下方，覆盖NC膜；将滤血膜粘贴在缓冲垫下方，覆盖缓冲垫，即可得到组装好的大板。
S6、切条装壳：设置试纸条宽度后，进行裁切，即为制备好的试纸条；
S7、将试纸条正向放入检测卡壳中，压壳封装好，即得到单人份胎儿纤维结合蛋白、胰岛素生长因子结合蛋白-1联合检测卡。
所述检测试剂盒还包括样本稀释液；
其中，所述样本稀释液由含有EDTA、PEG20000和S9（TETRONIC1307）的0.1M Tris-HCl缓冲液构成，具体的，所述样本稀释液由含有0.15-0.5%EDTA、0.5-2%PEG20000和0.4-1.2%S9（TETRONIC1307）的0.1-0.3M Tris-HCl缓冲液构成。
其中，缓冲液有助于稳定待测样本pH值，EDTA用于螯合金属离子，PEG20000、S9作为封闭剂和表面活性剂使用，有助于提升检测的特异性并且能消除非特异性吸附。
本发明的第三方面，提供上述检测方法和/或试剂盒在如下任意一种或多种中的应用：
1）胎儿纤维结合蛋白检测；
2）胰岛素生长因子结合蛋白-1检测；
3）早产/胎膜早破诊断或辅助诊断。
以上一个或多个技术方案的有益技术效果：
上述技术方案通过对胎儿纤维结合蛋白和胰岛素生长因子结合蛋白-1的前处理和检测过程进行优化，从而实现对上述物质的快速（3min内即可检测完成）、准确和宽范围检测，因此具有良好的实际应用之价值。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1为本发明试纸条结构示意图；
其中，1-滤血膜，2-缓冲垫，3-NC膜，4-吸水垫，5-PVC底板，6-检测线，7-质控线，8-标记物线；箭头方向为层析方向；
图2为本发明检测卡外部结构示意图：
其中，9-加样孔，10-观察窗（视窗）；箭头方向为层析方向；
图3为本发明胎儿纤维结合蛋白标准曲线图；
图4为本发明胰岛素生长因子结合蛋白-1标准曲线图。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。下列具体实施方式中如果未注明具体条件的实验方法，通常按照本领域技术内的生物学的常规方法和条件，这种技术和条件在文献中有完整解释。
胎膜早破问题发生后，孕妇子宫结构以及理化环境都会出现变化，宫颈/***粘液中会沾上大量蛋白、蜕膜细胞碎片、血细胞（发生***流血）等，且pH值会发生改变。而所有这些变化会影响现有技术的检测准确度。
有鉴于此，本发明提供一种胎儿纤维结合蛋白和胰岛素生长因子结合蛋白-1的检测方法，具体的，本发明基于量子点荧光技术胎儿纤维结合蛋白（fFN）检测方法原理如下：
本试剂盒采用双抗夹心法，检测垫的硝酸纤维素膜（NC膜）上依次设置标记物线、检测线和质控线：其中NC膜上端划量子点标记fFN抗体（Q-Ab）与量子点标记鸡IgY抗体的混合物作为标记物线；划fFN捕捉抗体作为检测线，划羊抗鸡IgY作为质控线。加样后样本中待测抗原（fFN）分别与量子点标记抗体结合形成量子点标记抗体-抗原复合物。随后，样本通过固化有fFN捕捉抗体的检测线区域，并与检测线抗体结合形成量子点标记抗体-抗原-抗体复合物，未结合的量子点标记鸡IgY抗体继续前移，与质控线区域的羊抗鸡IgY抗体结合，完成质控校准反应。通过配套仪器激发量子点产生荧光信号，并获得定量检测结果，样品中待测抗原（fFN）的含量与荧光信号强度在一定范围内呈正相关，通过标准曲线计算即可得出待测样品浓度。
本发明基于量子点荧光技术胰岛素生长因子结合蛋白-1（IGFBP-1）检测方法原理如下：
本试剂盒采用双抗夹心法，检测垫的硝酸纤维素膜（NC膜）上依次设置标记物线、检测线和质控线：其中NC膜上端划量子点标记IGFBP-1抗体（Q-Ab）与量子点标记鸡IgY抗体的混合物作为标记物线；划IGFBP-1捕捉抗体作为检测线，划羊抗鸡IgY作为质控线。加样后样本中待测抗原（IGFBP-1）分别与量子点标记抗体结合形成量子点标记抗体-抗原复合物。随后，样本通过固化有IGFBP-1捕捉抗体的检测线区域，并与检测线抗体结合形成量子点标记抗体-抗原-抗体复合物，未结合的量子点标记鸡IgY抗体继续前移，与质控线区域的羊抗鸡IgY抗体结合，完成质控校准反应。通过配套仪器激发量子点产生荧光信号，并获得定量检测结果，样品中待测抗原（IGFBP-1）的含量与荧光信号强度在一定范围内呈正相关，通过标准曲线计算即可得出待测样品浓度。
本发明将宫颈***分泌物（如宫颈***粘液）样本经样本稀释液处理后，直接用移液器取样本滴加入加样孔中，进行加样，展板3min后，取出检测。尤其值得一提的是，鉴于待测物的浓度区间较宽，本发明涉及产品对检测范围要求要尽可能大，因此我们采用将标记物划到NC膜上的形式，既加快了展板又增加了检测范围，3min即可出现稳定准确的结果。
1）所得实验结果准确度好，与标准品的相对偏差在±10%以内；
2）所得实验结果重复性好，CV不超过10%；
3）样本无需特殊处理，有少许***流血现象的样本均可用于检测；
4）试剂盒和样本稀释液无需冷藏，常温运输储藏即可。
以下通过实施例对本发明做进一步解释说明，但不构成对本发明的限制。应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
实施例
本实施例胎儿纤维结合蛋白和胰岛素生长因子结合蛋白-1联合检测用试剂盒，包括PVC板、设置在PVC板上的硝酸纤维素膜（NC膜），NC膜上端设置有玻璃纤维素膜材质的缓冲垫，缓冲垫上端设置有滤血膜，与此二者相对应的NC膜的另一端设有吸水垫（纸）。所述硝酸纤维素膜（NC膜）上标记物线区域包被有质量比为1：1：1的量子点标记胎儿纤维结合蛋白抗体、量子点标记胰岛素生长因子结合蛋白-1抗体和量子点标记鸡IgY抗体的混合物；所述NC膜上依次设置有检测线I、检测线II和质控线，所述检测线I上包被有胎儿纤维结合蛋白抗体、所述检测线II上包被有胰岛素生长因子结合蛋白-1抗体，所述质控线上包被有羊抗鸡IgY；所述量子点为硒化镉量子点，如图1所示。
本实施例胎儿纤维结合蛋白、胰岛素生长因子结合蛋白-1联合检测用试剂盒的制备方法，具体操作步骤为：
1）制备包被膜（检测线与质控线区域）：取NC膜和PVC板，将NC膜非点样面贴于PVC板的既定位置，取浓度为1.2mg/ml的胎儿纤维结合蛋白抗体、胰岛素生长因子结合蛋白-1抗体、羊抗鸡IgY，应用划膜喷金仪按1μl/cm划膜包被于NC膜的检测线I、检测线II和质控线位置，37℃烘干8h，即得所述的包被膜。
2）制备包被膜（标记物线区域）：
a：取30μl硒化镉量子点，加入到3ml浓度为50mM的MES缓冲液（pH6.5）中，活化15min，4℃避光保存备用；
b：取步骤a制备的量子点标记液，向其中依次加入20mg/ml EDC、20mg/ml NHS各5μl，再加入5mg/ml胎儿纤维结合蛋白抗体200μl，避光反应2h；
c：取步骤b中的标记后混合液转移至100KD超滤管中进行离心，以4000g/min离心15min，确保离心后液体体积小于原体积的1/10；用0.1M硼酸盐缓冲液（pH8.0）作为洗脱液，洗脱5次，确保每次离心后液体体积小于原体积的1/10；
d：应用复溶液对步骤c中得到的标记后溶液进行稀释，并混匀，即得到量子点标记的胎儿纤维结合蛋白抗体；所述复溶液的配方为：0.2M HEPES缓冲体系，1%PVP K-30，2%酪蛋白，5%羟丙基β-环糊精，1%Tween20；
e：按照上述步骤a~d同样的方法制备量子点标记胰岛素生长因子结合蛋白-1抗体和量子点标记鸡IgY抗体；然后将三种标记抗体按照体积比1：1：1混匀后制成结合垫包被液，应用划膜喷金仪按照1.5μl/cm划线于NC膜的标记物线区域，37℃干燥4小时，即可得到所述的包被膜；
3）制备滤血膜：裁切玻璃纤维素膜作为滤血膜。
4）制备缓冲垫：
a：配制缓冲垫处理液，配方为：0.1M Tris-HCl缓冲液，100μg/ml抗红细胞抗体（RBC抗体），5%海藻糖、0.5%Tween80；
b：将玻纤膜裁切，应用缓冲垫处理液对其进行涂布预处理；
c：放入烘箱中，37℃干燥6h。
5）组装：
将底板上对应位置的粘纸撕去，将吸水纸粘贴在包被膜的NC膜上方，覆盖NC膜1.5mm；将缓冲垫粘贴在包被膜的NC膜下方，覆盖NC膜1.5mm；将滤血膜粘贴在缓冲垫下方，覆盖缓冲垫2mm，即可得到组装好的大板。
6）切条装壳：应用微电脑斩切机，设置好试纸条宽度后，进行裁切，即为制备好的试纸条；将试纸条正向放入检测卡壳中，压壳封装好，即得到单人份胎儿纤维结合蛋白、胰岛素生长因子结合蛋白-1联合检测卡，如图2所示。
此外，需要说明的是，上述实施例中提供的是胎儿纤维结合蛋白、胰岛素生长因子结合蛋白-1联合检测卡。当然，也可以制备单独检测胎儿纤维结合蛋白试纸条和单独检测胰岛素生长因子结合蛋白-1的试纸条，区别仅在于当制备单独检测胎儿纤维结合蛋白抗体试纸条时，结合垫上包被有质量比为1：1的量子点标记胎儿纤维结合蛋白抗体和量子点标记鸡IgY抗体的混合物；所述硝酸纤维素膜（NC膜）上仅设置有一条检测线和质控线，所述检测线上包被有胎儿纤维结合蛋白抗体抗原，所述质控线上包被有羊抗鸡IgY；当制备单独检测胰岛素生长因子结合蛋白-1试纸条时，结合垫上包被有质量比为1：1的量子点标记胰岛素生长因子结合蛋白-1抗体和量子点标记鸡IgY抗体的混合物；所述硝酸纤维素膜（NC膜）上仅设置有一条检测线和质控线，所述检测线上包被有胰岛素生长因子结合蛋白-1抗原，所述质控线上包被有羊抗鸡IgY。具体制备方法做相应调整即可。
此外，所述试剂盒还含有样本稀释液，所述样本稀释液由含有0.2% EDTA、1%PEG20000和1%S9的0.2M Tris-HCl缓冲液构成。
试验例：
将胎儿纤维结合蛋白稀释为20ng/ml、50ng/ml、200ng/ml、500ng/ml、1500ng/ml、4000ng/ml；将胰岛素生长因子结合蛋白-1稀释为10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml、80ng/ml、400ng/ml、800ng/ml、1200ng/ml作为标准品溶液，并同时配制空白溶液。
分别取各浓度的标准品溶液70μl分别加入到实施例1制备的检测卡的样品垫上，3min后将展板完成的检测卡放入荧光免疫分析仪（山东子峰生物技术有限公司）进行判读，获取不同浓度检测线、质控线的荧光值，并记录各浓度标准品的荧光比值（T1/C、T2/C）与标准品浓度之间的对应关系。根据测量结果的荧光信号——标定浓度值，制定标准曲线方程。如图3-4所示，胎儿纤维结合蛋白的标准曲线回归方程为：LOG（Y-0.0027）=1.1373×LOG（X）-3.3496；胰岛素生长因子结合蛋白-1的标准曲线方程为：LOG（Y-0.0415）=1.2175×LOG（X）-2.5062。将标准曲线烧录到ID卡中，制成胎儿纤维结合蛋白、胰岛素生长因子结合蛋白-1校准卡。
另外，取空白溶液加入到实施例1制备的检测卡中，胎儿纤维结合蛋白的反代浓度显示为0ng/ml，胰岛素生长因子结合蛋白-1的反代浓度为0ng/ml。
取100例随机临床样本，采用本发明实施例1制备的试剂盒对胎儿纤维结合蛋白、胰岛素生长因子结合蛋白-1的浓度进行检测，检测方法为：取校准卡***到荧光免疫分析仪（山东子峰生物技术有限公司）中，对仪器进行校准；取10μl样本中加入到90μl样品稀释液中，混匀后取70μl样本液滴加至加样孔中，展板3min放入荧光免疫分析仪（山东子峰生物技术有限公司）中，测得胎儿纤维结合蛋白、胰岛素生长因子结合蛋白-1的检测结果并记录。所测得结果如下表1所示：
表1胎儿纤维结合蛋白、胰岛素生长因子结合蛋白-1的检测结果
Figure DEST_PATH_IMAGE001
Figure 580120DEST_PATH_IMAGE002
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由此可见，本试剂盒可以直接定量检测胎儿纤维结合蛋白、胰岛素生长因子结合蛋白-1的浓度，方便快速，3min即可获得结果，适合在产科医院推广和使用。
最后应该说明的是，以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。上述虽然对本发明的具体实施方式进行了描述，但并非对本发明保护范围的限制，所属领域技术人员应该明白，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围以内。

Claims (5)

1.一种胎儿纤维结合蛋白和胰岛素生长因子结合蛋白-1的量子点荧光检测方法，所述方法包括采用双抗夹心法，以固相免疫层析形式对胎儿纤维结合蛋白和胰岛素生长因子结合蛋白-1进行测定；
所述检测方法具体包括：
S1、将待测样品加入样本稀释液中进行稀释并预处理；
S2、将上述待测物加入基于量子点的免疫层析试纸条上，对显色完成的试纸条进行荧光检测；
所述待测样品为宫颈***分泌物；
所述样本稀释液由含有0.15-0.5%EDTA、0.5-2%PEG20000和0.4-1.2%S9的0.1-0.3MTris-HCl缓冲液构成；
所述基于量子点的免疫层析试纸条，包括底板，所述底板上依次设置有滤血膜、缓冲垫、检测垫和吸水垫，相邻各垫在连接处交叠连接；
所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上依次设置标记物线、检测线和质控线；
当待测物为胎儿纤维结合蛋白时，
所述标记物线上包被有量子点标记抗fFN单克隆抗体；
所述检测线包被有fFN捕捉抗体；
当待测物为胰岛素生长因子结合蛋白-1时，
所述标记物线上包被有量子点标记的抗IGFBP-1单克隆抗体；
所述检测线包被有IGFBP-1捕捉抗体；
所述质控线包被有羊抗鸡IgY；
所述吸水垫为吸水纸，所述底板采用PVC板。
2.一种胎儿纤维结合蛋白和胰岛素生长因子结合蛋白-1的量子点荧光检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒至少包含免疫层析试纸条；
所述免疫层析试纸条，其采用如下方法制备得到：
S1、制备检测线与质控线区域的包被膜：取NC膜和PVC板，将NC膜非点样面贴于PVC板的既定位置，取胎儿纤维结合蛋白抗体和胰岛素生长因子结合蛋白-1抗体以及羊抗鸡IgY，划膜包被于NC膜的检测线和质控线位置，干燥后即得；
S2、制备标记物线区域的包被膜：
a：取硒化镉量子点，加入到MES缓冲液中，活化处理；
b：取步骤a制备的量子点标记液，向其中依次加入EDC和NHS，再加入胎儿纤维结合蛋白抗体进行避光反应；
c：取步骤b中的标记后混合液离心，并用硼酸盐缓冲液作为洗脱液进行洗脱；
d：应用复溶液对步骤c中得到的标记后溶液进行稀释，并混匀，即得到量子点标记的胎儿纤维结合蛋白抗体；所述复溶液其成分包括：0.1-0.3M HEPES缓冲体系，含有0.5-2%聚乙烯吡咯烷酮K-30，1-3%酪蛋白，3-8%羟丙基β-环糊精和0.5-2%Tween20；
e：按照上述步骤a~d同样的方法制备量子点标记胰岛素生长因子结合蛋白-1抗体和量子点标记鸡IgY抗体；然后将三种标记抗体混匀后制成标记物线包被液，划线于NC膜的标记物线区域，干燥后即得；
S3、制备滤血膜；
S4、制备缓冲垫，包括：
a：配制缓冲垫处理液，所述缓冲垫处理液成分含有0.1M Tris-HCl缓冲体系，20-150μg/ml抗红细胞抗体，4-10%海藻糖，0.2-0.8%Tween80；
b：将玻纤膜裁切，涂布预处理；干燥；
S5、组装：
将底板上对应位置的粘纸撕去，将吸水纸粘贴在包被膜的NC膜上方，覆盖NC膜；将缓冲垫粘贴在包被膜的NC膜下方，覆盖NC膜；将缓冲膜粘贴在结合垫下方，覆盖缓冲垫，即可得到组装好的大板；
S6、切条装壳：设置试纸条宽度后，进行裁切，即为制备好的试纸条。
3.如权利要求2所述的量子点荧光检测试剂盒，其特征在于，所述免疫层析试纸条，其制备方法还包括：
S7、将试纸条正向放入检测卡壳中，压壳封装好，即得到单人份胎儿纤维结合蛋白、胰岛素生长因子结合蛋白-1联合检测卡。
4.如权利要求2所述的量子点荧光检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括样本稀释液；所述样本稀释液由含有0.15-0.5%EDTA、0.5-2%PEG20000和0.4-1.2%S9的0.1-0.3M Tris-HCl缓冲液构成。
5.权利要求1所述检测方法或权利要求2-4任一项所述试剂盒在如下任意一种或多种中的应用：
1）胎儿纤维结合蛋白检测；
2）胰岛素生长因子结合蛋白-1检测。
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