CN1107680C - 澳洲茄胺盐酸盐及其生产方法和在医药上的应用 - Google Patents

Abstract

一种具有较强抗癌、抗炎、平喘、活性的新的化合物澳洲茄胺盐酸盐，分子结构为：本发明还涉及澳洲茄胺盐酸盐的生产方法，以及该化合物做为一种中药一类新药源，并在抗癌、抗炎、平喘的口服、针剂两个剂型的医药上的应用。

Description

澳洲茄胺盐酸盐及其生产方法和在医药上的应用

本发明涉及一种新的化合物澳洲茄胺盐酸盐及其生产方法和在医药上的应用。

国内外已有龙葵和澳洲茄的化学成份、澳洲茄胺的分离方法及药效活性的研究，澳洲茄胺不溶于水，溶于甲醇、氯仿和热乙醇，具有抗炎、抗S₁₈₀、升高血糖的作用，毒副作用大，含量低，至今尚未在医药上应用，其四种苷占总碱的80％以上，无抗癌、抗炎作用，仅在农业上作为杀虫剂使用。其提取过程复杂、所用试剂多、危险性大、污染严重、生产周期长、分离困难、无法应用。

本发明的目的是提供一种药效活性强，毒副作用小，可溶于水，性质稳定，生产方法简便的新的化合物澳洲茄胺盐酸盐及其生产方法，以及做为一种新药源在医药上的应用，以取代那些疗效差，毒副作用大的现有医药，造福于人。

本发明的原理是根据药物的构效关系将无抗癌、平喘、抗炎活性的澳洲茄胺的四种苷α-澳洲茄碱、β-澳洲茄碱、γ-澳洲茄碱、边缘茄碱水解，使与糖结合状态的生物碱变成游离状态的生物碱，使其产生具有抗癌、抗炎活性的3-羟基。再将分子中第六环上的仲氨基成盐，来强极化其分子母体结构上的药效活性基团，使其保持并增强3-羟基的抗癌、抗炎的药效活性，其分子的极性、溶解性、稳定性同时增强。激活其分子药效活性，用造成3-羟基和第六环上的仲铵盐基，两个活性基团共存于同一分子之中的结构特点，两个活性基团相互作用，使其分子再产生新的药效活性平喘作用。

其反应如下：

澳洲茄次碱R＝Hα-澳洲茄碱β-澳洲茄碱γ-澳洲茄碱边缘茄碱

1、本发明的化合物澳洲茄胺盐酸盐，具有以下结构及性质特征：

(1)澳洲茄胺盐酸盐的分子结构：

分子式：C₂₇H₄₄NO₂Cl分子量：448.08

(2)理化性质  澳洲茄胺盐酸盐为一种三角形片状结晶(乙醇)，300℃未达到熔点前分解，[α]20_D＝-2.2(水)，易溶于水，乙酸溶液，不溶于高浓度的甲醇、乙醇、不溶于丙酮、苯、***、石油醚等有机溶剂。

(3)药效活性

①抗癌活性澳洲茄胺盐酸盐200mg/kg能显著抑制核***，对小鼠移植性肿瘤抑制率≥65％，12小时后可使HeLa细胞解体，有明显细胞毒作用。临床实验证明，注射浓度为50mg/ml，10-30ml澳洲茄胺盐酸盐水溶液对肺癌、肝癌、乳腺癌，7-10日内得到明显的效果。配合手术用药疗效更佳。

②平喘活性  澳洲茄胺盐酸盐150mg/kg，口服或腹腔注射，能显著对抗组织胺诱发的豚鼠哮喘。临床实验证明，澳洲茄胺盐酸盐制成的胶囊或片剂，每片、粒、净含澳洲茄胺盐酸盐100mg，日服二次，每次2-3片、粒，20-30分钟内喘证消失或明显消失，肺活量明显增大，哮呜音明显减少，气色、呼吸驱于正常。重患2-3日内可正常下地行走，对血压、心脏也有所改善。

③抗炎活性  澳洲茄胺盐酸盐150mg/kg灌胃或腹腔注射能显著对抗角叉菜胶引起的小鼠足肿胀；临床实验证明，澳洲茄胺盐酸盐制成的片剂或胶囊，每片、粒净含澳洲茄胺盐酸盐100mg，日服二次，每次2-3片、粒，对肺炎、肺结核、乳腺炎、扁桃体炎、咽炎、气管炎三日内白细胞明显减少，炎症明显消失，4-7日内基本驱于正常。

2、澳洲茄胺盐酸盐的生产方法

本发明的一种具有较强抗癌、平喘、抗炎活性的中药一类新药源澳洲茄胺(Salasadine)盐酸盐的生产方法，是以茄科茄属植物龙葵(Salanum NigrumL)和澳洲茄(Salanum aviculare Farst)的生、半成熟果为原料。

附图1是本发明生产方法的工艺流程图，下面结合附图详述本发明的生产方法：

(1)用国家发明专利《龙葵浓缩果汁的生产方法》专利号：ZL 94 1 04239.1专利权人刘良的生产方法：将龙葵或澳洲茄的生果或半成熟果经破碎压汁，汁、渣分离，粗汁经酸性乙醇提取、沉降或精滤、减压浓缩或加酶水解、灭菌、酸性乙醇提取，沉降或精滤、减压浓缩；果渣用酸性乙醇浸取后分离、浸液沉降或精滤减压浓缩制成龙葵浓缩果汁或澳洲茄浓缩果汁。

(2)分离浓缩果汁中的胶体物：向龙葵浓缩果汁或澳洲茄浓缩果汁加4-8倍(体积)量的60-100％乙醇或甲醇并激烈搅拌，使溶液呈米黄至黄褐色混浊液为止，放置、沉降，取上清液。

(3)粗总生物碱盐酸盐的提取：粗总生物碱盐酸盐的提取有二种方法：

①上清液减压浓缩，水浴温度40-90℃，真空度0.08-0.095Mpa，至黑褐色粘稠状液体比重1.09-1.45g/ml，得二次浓缩果汁，将二次浓缩果汁于室温或冰箱中放置冷却折出粗总生物碱盐酸盐结晶。

②将上清液放于室温或-10-20℃冰箱内冷却析出粗总生物碱盐酸盐结晶，滤出结晶，对滤液减压浓缩至黑褐色粘稠状液体，冷却折出结晶，再向含有结晶的二次浓缩果汁中加80-100％的乙醇或甲醇，搅拌使溶液至混浊度最大，放置沉降，取上清液，于-10-20℃温度下充分冷却后滤出结晶，结晶用80-100％乙醇或甲醇洗涤2-3次，吸滤、干燥得粗总生物盐酸盐结晶。

(4)精制：对粗总生物碱盐酸盐用乙醇或甲醇和水进行重结晶，得总生物碱盐酸盐精品，主要成分为α-澳洲茄碱盐酸盐，β-澳洲茄碱盐酸盐，γ-澳洲茄碱盐酸盐，澳洲茄边碱(边缘茄碱)盐酸盐，澳洲茄胺(澳洲茄次碱)盐酸盐。为易溶于水，不溶高浓度乙醇、甲醇的晶体。

(5)水解：将总碱盐酸盐用2.5-8％的盐酸水溶液溶解或先用少许水溶解后加乙醇或甲醇的2.5-8％盐酸溶液调至乙醇或甲醇为50-80％的2.5-8％盐酸的溶液固∶液(1∶20-100)、水浴加热至沸2小时，趁热加80-100％乙醇或甲醇当有澳洲茄胺盐酸盐结晶析出，停止加醇，加热至沸使结晶溶解，如不溶解加少量水使之全部溶解为止，至沸、停止加热，冷却，或冷却后加总碱盐酸盐投入量的1-5％的活性炭脱色或吸附杂质、至沸五分钟热过滤、滤液于常温下冷却析出澳洲茄胺盐酸盐结晶，待结晶完全析出，滤出结晶，用80-100％乙醇或甲醇洗涤1-3次，干燥得粗澳洲茄胺盐酸盐结晶。

(6)沉淀物处理：沉淀物用少许水溶解，加60-100％乙醇或甲醇至混浊，静止沉降，取上清液减压浓缩至稠状，加80-100％乙醇或甲醇，放置析出结晶，滤液浓缩加醇至再无结晶析出为止。

(7)精制：用乙醇或甲醇和水重结晶得澳洲茄胺盐酸盐精品。

也可用澳洲茄胺盐酸盐柱层析分离法精制，具体操作如下：

将1.0g澳洲茄胺盐酸盐与5g硅胶G混匀，压成片，分离柱用(4∶3)苯∶甲醇洗柱，将片放于装有经110℃活化1小时的硅胶G的分离柱顶端，用苯∶甲醇(4∶3)展开剂，流速2秒/滴(用真空度控制)展开后色谱柱出现清晰的一个色谱带。用50％乙醇为洗脱剂，按上述方法重复分离，收集各色谱带流出液，减压浓缩各流出液得一种白色晶体。

澳洲茄胺盐酸盐为一种易溶水、醋酸、低浓度乙醇、低浓度甲醇，不溶于丙酮、氯仿、乙酸乙酯、苯、性质稳定的白色三角形片状晶体(乙醇)。

用上述方法生产的澳洲茄胺盐酸盐纯度≥90％，收率(干品计算)≥1.2％，澳洲茄胺盐酸盐结构为：熔点、熔点前300℃分解。

3、澳洲茄胺盐酸盐在医药上的应用

(1)抗癌作用澳洲茄胺盐酸盐200mg/kg能显著抑制核***，对动物移植性肿瘤抑制率≥65％，12小时后可使HeLa细胞解体，有明显细胞毒性；临床实验表明，澳洲茄胺盐酸盐50mg/ml，10-30ml注射液，对肺癌、肝癌、乳腺癌疗效显著。

(2)抗炎作用澳洲茄胺盐酸盐100mg/kg小鼠灌胃、腹腔注射能明显对抗角叉菜胶引起的小鼠足肿；临床实验证明，澳洲茄胺盐酸盐对肺炎、肺结核、乳腺炎、扁桃体炎、咽炎、气管炎注射或口服，日用2次，每次澳洲茄胺盐酸盐净重≥300mg，疗效显著。

(3)平喘作用澳洲茄胺盐酸盐150mg/kg能显著对抗组织胺诱发豚鼠哮喘；临疗实验证明，口服或注射日用药2-3次，每次净含澳洲茄胺盐酸盐200-300mg，对免疫性哮喘15-30分钟起效，有效时间≥24小时，多数床上重患2-3天可下床行走、喘证、哮鸣音消失或基本消失、肺活量明显增大，用药7天(一疗程)明显好转，咳、痰、炎症明显减轻或消失。

澳洲茄胺盐酸盐是一种具有显著抗癌、抗炎、平喘作用的中药一类新药，其用途主要用于治疗以下疾病的医药制造：

(1)抗癌药物的制造：

①治疗肝癌、肺癌、乳腺癌的针剂制造。

②治疗肝癌、肺癌、乳腺癌的口服制剂制造。

(2)平喘药物的制造：

①抗免疫性哮喘的针剂制造

②抗免疫性哮喘口服制剂的制造

(3)抗炎药物的制造

①治疗肺炎、肺结核、气管炎、扁桃体炎、乳腺炎、咽炎的针剂制造。

②治疗肺炎、肺结核、气管炎、扁桃体炎、乳腺炎、咽炎的口服制剂制造。

综上所述，本发明的澳洲茄胺盐酸盐为易溶于水的结晶，性质稳定，具有极强的抗癌、抗炎、平喘等活性，毒副作用小，可用于多种剂型的制药，有利于应用，澳洲茄胺盐酸盐的生产工艺操作简便，设备通用，所用试剂无毒，价低易回收，生产周期短，利于开发应用。

实施例1：称取500kg龙葵生、半成熟果去掉杂物，用粉碎机破碎，加200kg PH1-2的盐酸95％乙醇，搅拌30分钟后放置浸取4小时离心，分出酸性浸液。果渣再用100kg PH1-2的盐酸95％乙醇浸取，离心分出浸液，果渣晒干粉碎做饲料使用。合并两次酸性乙醇浸液，放置沉降24小时，取上清液减压浓缩，水浴温度70℃，真空度0.09Mpa，回收前馏乙醇，浓缩至比重为1.26mg/ml、棕黑色粘稠状液体，得龙葵浓缩果汁41kg。

向比重为1.26mg/ml的龙葵浓缩果汁中加250kg95％乙醇中细流慢倒并激烈搅拌，至溶液呈乳液，常温下放置3-4小时，取上清液，于-10-20℃冰箱中冷却24小时，使龙葵总生物碱盐酸盐结晶充分析出，吸滤分出结晶，滤液减压浓缩至粘稠状液体得二次浓缩果汁15kg。向二次浓缩果汁中加60-80％回收乙醇50kg，时时搅拌使黑棕色粘液溶解龙葵总生物碱盐酸盐结晶析出，放于冰箱中冷却(条件同上)过滤，吸滤，分出粗结晶，结晶用95％乙醇洗涤三次，得粗龙葵总生物碱盐酸盐结晶2140g。

精制将2140g龙葵总生物碱盐酸盐粗品放于50L³陶瓷夹套反应釜中，加15.0L³水使之溶解，加95％乙醇至结晶析出，加热至沸使结晶刚好溶解，停止加热冷却至40-45℃，加活性炭500g，加热至沸5分钟后，热过滤，冷却，待结晶析出完全吸滤用5000ml95％乙醇洗涤一次，干燥得龙葵总生物碱盐酸盐1640g精品。

水解  将1640g龙葵总生物碱盐酸盐精品用10L³ 5％HCl水溶液溶解于500L³陶瓷夹套反应釜内，加含5％盐酸的80％乙醇50L³，加热至沸2小时，趁热向釜内加95％乙醇至结晶析出，加热至沸，调至有少许结晶不溶为止，加少许水使结晶刚好溶解为止，冷却至室温，滤出结晶，并用5000ml 95％乙醇洗涤一次，干燥得澳洲茄胺盐酸盐粗结晶991g。

精制  将991g澳洲茄胺盐酸盐溶于5000ml水中，放于50L³釜内，加95％乙醇至结晶析出，加热至沸，使结晶溶解，再加95％乙醇至结晶析出加热至沸，结晶不再溶解，加水少许刚好结晶溶解趁热过滤，滤液冷却至室温、吸滤，用95％乙醇1000ml洗涤2次，于室温下干燥，，称量得625g澳洲茄胺盐酸盐精品，封瓶于冰箱中保存。产率为1.25‰，按干品计算产率为1.25％。

澳洲茄胺盐酸盐柱层析分离

将1.0g澳洲茄胺盐酸盐与5g硅胶G混匀，压成片，(分离柱用(4∶3)苯∶甲醇洗柱)分别放于装有经110℃活化1小时的硅胶G的分离柱顶端，用苯∶甲醇(4∶3)展开剂，流速2秒/滴(用真空度控制)展开后色谱柱出现清晰的一个色谱带。用50％乙醇为洗脱剂，按上述方法重复分离，收集色谱带流出液，减压浓缩各流出液得一种白色晶体。

实施例2：取澳洲茄生和半熟果500kg按上述从龙葵果中提取制备澳洲茄胺盐酸盐的方法完全相同，得611g澳洲茄胺盐酸盐精品。产率1.22％，按干品计算产率1.22％。

用上述生产方法从两种不同的原料中提取，制备出的澳洲茄胺盐酸盐用硅胶GF₂₅₄板，苯∶甲醇(4∶3)为展开剂，在紫外光入＝254nm下，各出现一个斑点，R_f值＝0.67，说明每种原料提取，制备的结晶为一种化合物，两种结晶是同一物质。

用下列方法检测澳洲茄胺盐酸盐：

1.高效液相色谱法：

将澳洲茄胺盐酸盐水溶液用5N NaOH调至碱性，用二氯甲烷萃取，用无水硫酸钠干燥萃取液、减压浓缩，干燥后用于做下列实验。

经上述处理后的样品用40％(V/V)的甲醇溶解，通过含BondapakC18的Waters Seppak C18净化柱(Cartrdges)，用下列条件分析：

(1)澳洲茄胺盐酸盐和澳洲茄碱盐酸盐

在μ BondapaK18(30CM×3.9mmi.d.)用甲醇-0.01M Tris缓冲溶液(75∶25)注流动相，流速2ml/mim，温度为25℃，在UV205检测。图2、图3给出标准样图谱，图2是澳洲茄碱和澳洲茄次碱的层析图谱，图中1α-澳洲茄碱、2β-澳洲茄碱、3γ-澳洲茄碱、4澳洲茄次碱，图3是澳洲茄碱的层析图谱，图中1α-澳洲茄碱、2β-澳洲茄碱、3γ-澳洲茄碱。检测结果：出峰时间15min，纯度90.4％。

(2)澳洲茄胺盐酸盐的测定：

用乙醇-戊烷(4∶1)溶解澳洲茄胺(上述经处理后的样品用高效液相分析澳洲茄胺的含量来确定澳洲茄胺盐酸盐含量)层析柱30cm×4.6cm，填装Zorbax SLL(6μm)，另配有填装poasilA(37-75μm)长前置柱。流动相为-已烷∶甲醇∶丙酮(18∶1∶1)流速效ml/min。

实施例3：用天平精称纯度为97％的澳洲茄胺盐酸盐103.10g，研细，与乳糖67g可溶性沉粉30g研细后混匀；分成两份，每份各100g，其中100g用压片机压片，每片200mg，得澳洲茄胺盐酸盐片497片，用铝塑封板，小盒包装，每盒24片，每片净含澳洲茄胺盐酸盐活性单体≥100mg，得澳洲茄胺盐酸盐片剂20盒。另100g灌装胶囊，每粒200mg，得澳洲茄胺盐酸盐胶囊499粒，用铝塑封板、小盒包装，每盒24粒，每粒净含澳洲茄胺盐酸盐活性单体≥100mg，得澳洲茄胺盐酸盐胶囊20盒。

实施例4：精称103.10g纯度为97％的澳洲茄胺盐酸盐，在无菌下装于安瓶内，每瓶515.5mg，封瓶，所用安瓶容量为30ml±1ml，得澳洲茄胺盐酸盐注射剂200瓶，小盒包装，每盒10支，每支净含澳洲茄胺盐酸盐活性单体≥500mg，得澳洲茄胺盐酸盐注射剂20盒。

Claims (3)

1、一种下述通式(I)的澳洲茄胺盐酸盐化合物：

2、权利要求1的化合物的生产方法，该方法包括以下步骤：

(1)将龙葵或澳洲茄的生果或半成熟果经破碎压汁，汁、渣分离，粗汁经酸性乙醇提取、沉降或精滤、减压浓缩或加酶水解、灭菌、酸性乙醇提取，沉降或精滤、减压浓缩；果渣用酸性乙醇浸取后分离、浸液沉降或精滤减压浓缩制成龙葵浓缩果汁或澳洲茄浓缩果汁；

(2)分离浓缩果汁中的胶体物：向浓缩果汁加4-8倍体积量的60-100％乙醇或甲醇，搅拌至果汁混浊为止；

(3)粗总生物碱盐酸盐的提取方法有两种方法；

①对上清液减压浓缩至比重1.09-1.45g/ml，室温放置或冰箱中冷却放置析出结晶；

②对上清液于室温放置或-10～20℃下冷却，分出结晶，再对滤液减压浓缩加醇至沉淀，上清液冷却再分出结晶，沉淀所用醇为80-100％的乙醇或甲醇；

(4)精制  用水和乙醇或甲醇重结晶；

(5)水解  将总碱盐酸盐用2.5-8％的盐酸水溶液溶解或先用少许水溶解后加乙醇或甲醇的2.5-8％盐酸溶液调至乙醇或甲醇为50-80％的2.5-8％盐酸的溶液固∶液1∶20-100、水浴加热至沸2小时，趁热加80-100％乙醇或甲醇当有澳洲茄胺盐酸盐结晶析出，停止加醇，加热至沸使结晶溶解，如不溶解加少量水使之全部溶解为止，至沸、停止加热，冷却，或冷却后加总碱盐酸盐投入量的1-5％的活性炭脱色或吸附杂质、至沸五分钟热过滤、滤液于常温下冷却析出澳洲茄胺盐酸盐结晶，待结晶完全析出，滤出结晶，用80-100％乙醇或甲醇洗涤1-3次，干燥得粗澳洲茄胺盐酸盐结晶；

(6)沉淀物处理  用水溶解，加60-100％乙醇或甲醇再次沉淀，上清液减压浓缩后加醇放置析出结晶，重复提取至无结晶析出为止；

(7)精制  用乙醇或甲醇和水重结晶，也可用硅胶G层析分离提纯，所用展开剂为笨；甲醇4∶3，洗脱剂为50％乙醇。

3、权利要求1的化合物在制备抗癌、平喘、抗炎的药物中的用途。

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