CN102342945A - 救必应皂苷化合物用于制备抗炎镇痛药物 - Google Patents

Abstract

救必应皂苷化合物用于制备抗炎镇痛药物，涉及医药领域，具体涉及一种救必应皂苷化合物的用途。救必应皂苷化合物用于制备抗炎镇痛药物，所说的救必应皂苷化合物是指用下式所示

Description

救必应皂苷化合物用于制备抗炎镇痛药物

技术领域

 本发明涉及医药领域，具体涉及一种救必应皂苷化合物的用途，用于制备抗炎镇痛药物。

背景技术

中药材救必应为冬青科植物铁冬青（Ilex rotunda Thunb.）的干燥树皮，广泛分布于中国南方各省，主产于广西、广东省，民间常用于清热解毒，消肿止痛，治感冒发热，急慢性肝炎，急性肠胃炎，胃及十二指肠溃疡，风湿关节痛。救必应的化学成分研究报道不多，在文献“救必应化学成分的研究”（ 中草药，1991，22（6）：246-248）中报道了救必应中含铁冬青酸即救必应酸、具栖冬青苷即长梗冬青苷，铁冬青酸异丙叉酮缩醇，丁香苷、芥子醛 、芥子醛葡萄糖苷、丁香醛 、3一乙酰齐墩果酸及硬脂酸等。

救必应中含有大量的五环三萜类皂苷，据文献“高效液相色谱法测定救必应药材中具栖冬青苷的含量” 特产研究 2007，4：45-47报道，救必应药材中具栖冬青苷的含量高达8.8%，如果再加上其苷元救必应酸的含量，其总皂苷含量更高。因此，救必应中五环三萜类化合物的开发利用有很好的经济价值。

救必应是有着广泛用途的药材, 目前对其药理作用的研究主要集中于心血管*** ,其次是体外抗菌作用的一些研究，但从救必应提取的化学成分的有关药理活性报道较少。在中国专利CN101033245A公开了具栖冬青苷的制备方法及应用，公开了具栖冬青苷可用于治疗冠心病,心绞痛,中风,脑梗死等心脑血管***疾病。中国专利CN101342186A公开了具栖冬青苷与救必应酸用于治疗高脂血症。

抗炎镇痛药是一类具有抗炎、解热、镇痛及抗风湿作用的常用药物。由于此类药物具有糖皮质激素类又称甾体类样抗炎、抗风湿作用,但又与甾体类抗炎镇痛药物的化学结构不同,故此类药物又称非甾体类抗炎镇痛药 ,临床上广泛应用与急慢性炎症及疼痛的治疗,但长期使用易引起胃肠道、肾脏、肝脏和血液***等组织以及***的不良反应见文献：中国现代药物应用, 2008,2（15）:111-112。 中药的抗炎镇痛药物大多以复方为主，但由于未知有效成分，质量难于控制。因此，开发安全、有效、不良反应小的抗炎镇痛药药物具有重要的意义，有广阔的市场前景。

发明内容

本发明的目的是从冬青科植物铁冬青（Ilex rotunda Thunb.）植物中提取分离有效成分用于制备抗炎镇痛药物。

本发明的技术方案是：取救必应皂苷化合物用于制备抗炎镇痛药物，所说的救必应皂苷化合物是指用下式所示的化合物

其中：R为H或/和R为β-D-葡萄糖，β-D-葡萄糖的结构式为：

                       

          。

当式中的R为H时的救必应皂苷化合物名为救必应酸（Rotundic acid），又称为铁冬青酸，当式中R为β-D-葡萄糖基时的救必应皂苷化合物名为具栖冬青苷(pedunculoside)，又称为长梗冬青苷。

救必应皂苷化合物可以从冬青科植物铁冬青（Ilex rotunda Thunb.）的干燥树皮即救必应药材中提取分离制得，见文献： 中草药，1991，22（6）：246-248），也可以从救必应水提取后的药渣提取分离得到。

    取救必应药材（Ilex rotunda Thunb.）用90-95%的乙醇提取，浓缩，浓缩物加水，过滤，取不溶物即沉淀物为粗提取物，此提取物用硅藻土、或硅胶、或石英砂分散后于连续提取分离器中，先用中低极性的有机溶剂，如二氯甲烷，三氯甲烷，石油醚等的一种或二种混合溶剂加热回流提取，溶剂回收，得救必应酸粗品，再用有机溶剂重结晶得救必应酸，含量达98%以上；分离器中的残留物再用较强极性的溶剂，如乙酸乙酯，乙醇，甲醇等的一种或二种混合溶剂加热回流提取，回收溶剂，得到具栖冬青苷粗品，用浓度为30-80%的甲醇或浓度为30-80%乙醇重结晶，得到具栖冬青苷，含量达98%以上。

具栖冬青苷和救必应酸也可以从四季青叶中提取分离得到，即四季青叶粉碎后，用丙酮浸提，提取液回收溶剂，浓缩，过滤，滤液经Sephadex LH-20柱层析，用水-甲醇洗脱，分离得到，见文献：赵浩如等，中国中药杂志，1993，18（4）：226-228。

当式中的R为β-D-葡萄糖基时，化学名为具栖冬青苷（pedunculoside），它可从冬青科植物铁冬青（Ilex rotunda Thunb.）的干燥树皮即救必应药材中提取分离制得，可依专利CN101033245A公开的具栖冬青苷的制备方法制备。

以下通过试验证明本发明提供的救必应皂苷化合物的用于制备抗炎镇痛药物的用途。

试验例1 具栖冬青苷和救必应酸的抗炎镇痛作用

1．         材料

1.1 实验动物：清洁级ICR小鼠与SD大鼠，由扬州大学比较医学中心提供，合格证号：SYXK（苏）2007-0009。全价饲料喂养，自由饮食饮水，给予充足光照。

1.2 试剂与仪器：

1.2.1 受试药物：救必应酸，具栖冬青苷。

1.2.3 ELX800UV酶标仪：美国BIO-TEK公司。

2．方法

2.1 二甲苯致小鼠耳廓肿胀

ICR小鼠60只，♀、♂各半，随机分为6组，每组10只，分别为空白对照组、阿司匹林组（100 mg/kg）、救必应酸、具栖冬青苷低、高（50、100mg/kg）剂量组。阿司匹林组灌胃（ig）阿司匹林CMC-Na溶液0.1ml/10g，救必应酸、具栖冬青苷ig不同浓度的CMC-Na溶液0.1ml/10g，空白对照组ig相应体积的CMC-Na溶液，每天1次，连续3天。末次给药后1h于小鼠右耳前后两面均匀涂抹二甲苯0.05ml，左耳作对照，1.5h后将小鼠脱颈处死，沿耳廓基线剪下两耳，用直径8mm的打孔器分别在同一部位打下圆耳片，用电子天平称重，以左右耳片重量之差为肿胀度。

2.2 醋酸致血管通透性增加试验

ICR小鼠60只，♀、♂各半，动物分组及给药（同2.1）。末次给药后1h，尾静脉注射0.5% Evans blue溶液0.1ml/10g，随即腹腔注射0.6%醋酸0.1ml/10g，20min后，脱颈椎处死，腹腔注射6ml生理盐水，轻揉腹部，剪开腹腔，用吸管吸出洗涤液，加入生理盐水至10ml，3000rpm离心15min，取上清液，590nm处测OD值。

2.3 角叉菜胶致大鼠足趾肿胀

SD大鼠60只，♀、♂各半，动物分组及给药（同2.1），连续给药1w。末次给药后1h于每鼠右后足趾皮下注射1％角叉菜胶溶液0.1ml致炎，用足趾容积测定仪分别测定致炎前和致炎后1、3、5、7h足趾容积，以各鼠致炎前后容积的差值为肿胀度。

2.4 大鼠棉球肉芽肿

SD大鼠60只，♀、♂各半，动物分组及给药（同2.1），用3%戊巴比妥钠0.15ml/100g腹腔注射麻醉，仰卧位固定，在无菌条件下，将无菌棉球（每个50±1mg，外形一致，121℃高压灭菌30min后每个棉球滴加氨苄西林1mg/0.1ml，50℃烘干）植入大鼠腹股沟皮下，在伤口处滴加少量青霉素防止感染。手术当天开始ig给药，连续给药一周。第8天将大鼠脱颈处死，取出棉球，置60℃烤箱烤至恒重，减去原棉球重量，即为肉芽肿净重，以肉芽肿净重mg/100g体重表示。

2.5 小鼠热板试验

经55℃热板筛选痛阈值5～30s ICR雌性小鼠60只，随机分成空白对照组，阿司匹林组，救必应酸、具栖冬青苷低、高（50、100mg/kg）剂量组，每组10只。各小鼠测2次痛阈值，取均值作为基础痛阈值，然后各组小鼠分别灌胃给药，体积均为0.1ml/10g，连续给药5d。末次给药后1、2、3、4h分别测定小鼠痛阈值。

2.6 小鼠醋酸扭体试验

ICR小鼠60只，♀、♂各半，动物分组及给药（同2.1）。每天1次，连续5天，末次给药后0.5h，每只小鼠腹腔注射0.7%醋酸溶液0.2ml，计数15min内小鼠出现的扭体反应（伸展后肢、腹部内凹和臀部抬高）次数，计算镇痛率。

2.7 统计学方法：

所有数据均用SPSS10.0统计软件处理。计数指标采用（

±S）表示。组间均数比较采用单因素方差分析，P<0.05有统计学意义。

3．结果

3.1救必应酸、具栖冬青苷对小鼠耳廓肿胀的影响

结果见表1，二甲苯能明显诱导小鼠耳肿胀。致炎前连续给药3d，发现救必应酸、具栖冬青苷（50、100mg/kg）对二甲苯致小鼠耳廓急性炎症有不同程度的抑制作用，小鼠耳肿胀有明显抑制作用。

3.2救必应酸、具栖冬青苷对血管通透性的影响

结果见表1。实验表明，救必应酸、具栖冬青苷高剂量组和阿司匹林组腹腔渗出液中Evans Blue的吸光度明显低于空白对照(p<0.01)，救必应酸、具栖冬青苷低剂量组与空白对照组吸光度的差异有显著性意义(p<0.05)。由此可知，救必应酸、具栖冬青苷对醋酸所致毛细血管通透性增加有抑制作用。

表1  救必应酸、具栖冬青苷对小鼠耳廓肿胀和血管通透性的影响

（±S，n=10）

注：与空白对照组比较：*P<0.05，**P<0.01；

3.3救必应酸、具栖冬青苷对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀的影响

结果如表2，角叉菜胶致炎后1h，大鼠足趾开始急性炎症样红、肿等变化，约3h肿胀达高峰。救必应酸、具栖冬青苷于致炎后1h开始产生疗效，在1h、 3h、5h、7h各个时间点对角叉菜胶诱导的大鼠足肿胀均有明显地抑制作用。

表2  救必应酸、具栖冬青苷对足趾肿胀大鼠足趾容积的影响（

±S，n=10）

注：与空白对照组比较：*P<0.05，**P<0.01

3.4救必应酸、具栖冬青苷对大鼠棉球肉芽肿的影响

结果如表3所示，救必应酸、具栖冬青苷高剂量对大鼠棉球肉芽增生有抑制作用。

表3  救必应酸、具栖冬青苷对大鼠棉球肉芽肿的影响（

±S，n=10）

注：与空白对照组比较：*P<0.05，**P<0.01

3.5救必应酸、具栖冬青苷对热板试验小鼠痛阈值的影响

结果如表4所示，救必应Ⅰ、救必应Ⅱ连续ig给药5d后，与空白对照组比较，各剂量组均可明显延长小鼠热痛反应潜伏期，提高痛阈值。

3.6救必应酸、具栖冬青苷对醋酸致小鼠扭体反应的影响

结果见表5，救必应酸、具栖冬青苷连续ig给药5d后，各剂量组均能减少醋酸所致的小鼠扭体反应次数，具有镇痛作用，与空白对照组相比差异显著，且高剂量镇痛率高于50%。表明救必应酸、具栖冬青苷对化学性刺激引起的疼痛有明显的抑制作用。

表4 救必应酸、具栖冬青苷对小鼠痛阈值的影响（

±S，n=10）

注：与空白对照组比较：*P<0.05，**P<0.01

表5  救必应酸、具栖冬青苷对小鼠扭体反应的影响（

±S，n=10）

注：与空白对照组比较：*P<0.05，**P<0.01 

4．结论

救必应酸、具栖冬青苷能够减少渗出，减轻急性炎症，对慢性炎症有作用。救必应酸、具栖冬青苷有镇痛作用。

试验例2

救必应酸、具栖冬青苷的小鼠急性毒性试验

救必应酸、具栖冬青苷，剂量分别为1.25、2.5、5、10g/kg，分别给小鼠灌胃，两周内未见死亡及其它异常反应发生，无法测出受试药物小鼠灌胃的LD50。小鼠以最大浓度、最大体积，24h内三次灌胃给药后无明显毒性反应，一周内亦无死亡。测得小鼠灌胃给药的最大给药量，救必应酸为60 g/kg。具栖冬青苷为60 g/kg。

以上试验初步表明具栖冬青苷、救必应酸，可以用于制备低毒性的抗炎镇痛药物。可以单一成分应用，或二个成分合并应用。为了患者服用的方便和根据化合物的特性，可将化合物添加制备不同剂型时所需的各种常规辅料，按常规的中药制剂工艺制成任何一种口服制剂如片剂、硬胶囊、软胶囊、颗粒剂、咀嚼片，含片，滴丸剂或缓释片等，也可制成注射剂。

本发明的药物具有抗炎镇痛作用。本发明的有益效果：1、药物活性成分的提取，原料易得，工艺简单、操作方便，可大批量投入生产；2、 产品质量易控制；3、是毒性低，副作用小，有效的抗炎镇痛药物。

具体实施方式

实施例1  具栖冬青苷和救必应酸的制备

取救必应药材（Ilex rotunda Thunb.）20Kg用95%的乙醇提取，提取液浓缩至5.6Kg，加16Kg水，过滤，取不溶物即沉淀物为粗提取物，此提取物用硅胶分散后于连续提取分离器中，先用二氯甲烷加热回流提取，溶剂回收，得救必应酸粗品，再用二氯甲烷重结晶得救必应酸，用高效液相色谱法测定含量达98.8%；分离器中的残留物用乙酸乙酯加热回流提取，回收溶剂，得到具栖冬青苷粗品，产品用60％的乙醇液重结晶，得到具栖冬青苷，用高效液相色谱法测定含量达99.2%。

实施例2  具栖冬青苷胶囊剂的制备 

 取具栖冬青苷210g，研成细粉，加入20%淀粉糊约150g，混合，14目筛制粒，于100℃干燥，整粒，加入淀粉20g，硬脂酸镁2g，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。每粒重0.25g，含具栖冬青苷200mg。

实施例3  救必应酸片剂的制备

取救必应酸160g，研成细粉，加入20%淀粉糊约150g，混合，14目筛制粒，于100℃干燥，整粒，加入淀粉20g，硬脂酸镁2g，混匀，压制成1000片，即得。每片重0.2g，含救必应酸150mg。

实施例4  具栖冬青苷片剂的制备

取具栖冬青苷100g，取救必应酸100g，研成细粉，加入20%淀粉糊约150g，混合，14目筛制粒，于100℃干燥，整粒，加入淀粉20g，硬脂酸镁2g，混匀，压制成1000片，即得。每片重0.25g，含具栖冬青苷100mg，救必应酸100mg。

实施例5   救必应酸软胶囊的制备

取救必应酸16g，加入丙二醇0.2g，卵磷脂0.9g，大豆油18g，振动磨超微20分钟，使混匀，制成软胶囊100粒，即得。每粒内容物重0.35g，含救必应酸150mg。

实施例6  具栖冬青苷颗粒剂的制备

取具栖冬青苷20.5g，研成细粉，加入糊精25g，乳糖455g，混合均匀，制粒，于80℃干燥，整粒，分装，制100包，即得。每包重5g，含具栖冬青苷200mg。

实施例7   救必应酸缓释片的制备

取救必应酸12g，研成细粉，过100目筛，HPMC 10.3g，乳糖16g，十二烷基硫酸钠1g过100目筛，混合均匀，加入2%聚维酮（95%乙醇）黏合剂制软材，过20目筛制粒，于50℃干燥，过18目筛整粒，干颗粒采用外加法加入2%硬脂酸镁，混匀，压片，制成缓释片100片，即得。每片重500mg，含救必应酸120mg。

实施例8   救必应酸滴丸是制备

取救必应酸10.5g，研成细粉，另取24.6g聚乙二醇4000加热熔融，加入救必应酸，振动磨超微20分钟，使混合均匀，滴制成滴丸，即得。每丸重0.35g，,含救必应酸100mg。

Claims (1)

1.救必应皂苷化合物用于制备抗炎镇痛药物，所说的救必应皂苷化合物是指用下式所示化合物

其中：R为H或/和 R为β-D-葡萄糖基，β-D-葡萄糖基的结构式为：

                

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