CN109867676B - 一种吡咯并嘧啶衍生的化合物、药物组合物以及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种如通式(Ⅰ)所示的吡咯并嘧啶衍生的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、同位素标记物、异构体或前药。本发明还提供了包含其的药物组合物以及所述化合物、药物组合物在制备用于治疗JAK激酶介导的疾病的药物中的用途。本发明提供的吡咯并嘧啶衍生的化合物及其药物组合物具有显著的JAK激酶抑制活性和优异的药代动力学性质，尤其是具备高选择性的JAK1酶抑制活性，可在保证JAK1酶优异抑制效果的同时，避免抑制其它JAK激酶所带来的潜在副作用，因而非常具备应用潜力。
Description
技术领域
本发明涉及医药领域，具体涉及一种吡咯并嘧啶衍生的化合物、包含所述化合物的药物组合物以及其作为两面神激酶抑制剂的用途。
背景技术
两面神激酶(Janus kinase，JAK)是一类非受体型酪氨酸激酶(PTK)，该族成员有7个同源区(JH1～7)，其中JH1区为激酶区，JH2区为伪激酶区。与其它PTK不同，JAK内无Src同源区2(SH2)结构，因其既能催化与之相连的细胞因子受体发生酪氨酸磷酸化，又能磷酸化多种含特定SH2区的信号分子从而使其激活。Janus激酶有4个家族成员，分别是JAK1、JAK2、TYK2和JAK3。前3者广泛存在于各种组织和细胞中，而JAK3仅存在于骨髓和淋巴***。JAK-STAT信号通路是近年来发现的一条与炎症细胞因子、肿瘤密切相关的细胞信号传导通路，广泛参与人类健康和疾病过程中的细胞增殖、分化、转移凋亡、调节免疫反应与细胞稳态等重要的生物学过程。通过JAK-STAT通路传导细胞因子刺激信号。JAK-STAT通路将细胞外的化学信号经细胞膜传导入位于细胞核内DNA上的基因启动子上，最终影响细胞中DNA转录与活性水平发生改变。JAK-STAT通路由三个主要部分组成：1)受体；2)两面神激酶(JAK)和3)信号转导和转录激活蛋白(STAT)。所述受体可由干扰素、白细胞介素、生长因子或其它化学信使激活，激活导致JAK自身磷酸化；接下来STAT蛋白与磷酸化受体结合，使得STAT被JAK磷酸化；然后磷酸化STAT蛋白从受体上分离、二聚并易位到细胞核中，以结合到特异性DNA位点并改变转录(Scott,M.J.,C.J.Godshall et al.(2002).“Jaks,STATs,Cytokines,andSepsis”Clin Diagn Lab Immunol 9(6):1153-9)。
两面神激酶家族在涉及免疫应答的细胞增殖和功能性细胞因子依赖性调节中产生作用。其主要用于筛选类风湿性关节炎、血液***疾病、肿瘤以及其它皮肤免疫性疾病等治疗药物。目前，两面神激酶或相关激酶的抑制剂已有很多报道，并已经有Tofacitinib和Ruxolitinib被FDA批准上市。
JAK1在多种细胞因子和生长因子信号传导途径中起着重要的作用，其失调与多种疾病相关。例如，类风湿关节炎中IL-6水平的升高，与该病密切相关(Fonesca,J.E等，Autoirnmunity Reviews,8:538-42,2009)。而IL-6部分地通过JAK1进行信号传导，通过抑制JAK1直接或间接拮抗IL-6，可缓解内风湿性关节炎的病症(Smolen,J.S.等Lancet371:987,2008)。而且，一些癌症中JAK1的突变，导致了肿瘤细胞的异常生长和存活(MullighanC G,Proc Natl Acad Sci U S A.106:9414-8,2009；Flex E.等J ExpMed.205:751-8,2008)。在其它自身免疫性疾病和癌症中，JAK1通路激活的炎症细胞因子全身水平的提高也可促成这些疾病及相关症状的发生。因此，抑制JAK1可使得患有此类疾病的患者获益。选择性JAK1抑制剂，可望保证上述疾病治疗效果的同时，规避抑制其它JAK激酶(JAK2和/或JAK3)所带来的潜在免疫抑制、贫血和血小板减少症等副作用。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种新型化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、同位素标记物、异构体或前药，其具备优异的JAK激酶抑制活性。
本发明的另一目的是提供一种药物组合物。
本发明的另一目的是提供新型化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、同位素标记物、异构体或前药的用途。
本发明提供了一种如通式(Ⅰ)所示的吡咯并嘧啶衍生的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、同位素标记物、异构体或前药，
Ⅰ
其中，
L选自-C(＝O)-、-S(＝O)2-或-CONH-；
X选自CR4或N；
Ar选自取代或未取代的以下基团：C3～8环烷基、C3～8杂环基、C6～20芳基或C5～20杂芳基，取代基选自卤素、C1～8烷基、C1～8卤代烷基或C1～8烷氧基；
R1选自取代或未取代的以下基团：卤素、氨基、C1～8烷基、C1～8烷氧基、C2-8烯基、C2-8炔基、C3～8环烷基、C3～8杂环基、C6～20芳基或C5～20杂芳基；取代基选自卤素、C1～8烷基、C1～8卤代烷基、C1～8烷氧基、C3～8环烷基、C3～8杂环基、C6～20芳基、C5～20杂芳基、氰基、氨基、羟基、羧基或巯基；
R2选自-NHR7、羟基或巯基，其中的R7选自取代或未取代的以下基团：氢、卤素、C1～6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1～6烷基酰基、C1～6烷基磺酰基、C1～6卤代烷基或C1～6烷氧基；取代基选自氰基、氨基、羟基、羧基、巯基、C3～6环烷基、C3～8杂环基、C6～20芳基或C5～20杂芳基；
R3选自氢、卤素、C1～6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1～6卤代烷基、C1～6烷氧基、氰基、氨基、羟基、羧基或巯基；
R4选自氢、卤素或C1～6烷基；
R5选自氰基、-CONH2或羧基；
R6选自氢、卤素或C1～6烷基。
本发明人研究了JAK激酶抑制剂Itacitinib后发现：式a为Itacitinib的优势构象，向吡咯环上引进氨基、羟基、巯基等取代基之后，可使取代基上的氢原子与嘧啶上的氮原子形成分子内氢键(以-NH2为例，如式b所示)，从而稳定这一优势构象，由此可进一步提高化合物的生物活性及药代动力学性能，而且，还可提高JAK1酶的选择性抑制活性。
在根据本发明的一个实施方式中，当所述取代基团Ar选自杂环基或杂芳基时，所述取代基团L可与所述杂环基或杂芳基的杂原子相连。
在根据本发明的一个实施方式中，当所述取代基团L选自-CONH-时，所述取代基团Ar与该取代基团中的羰基相连。
在根据本发明的一个实施方式中，所述取代基团Ar可选自取代或未取代的以下基团：C5～7环烷基、C6～12芳基或含有至少一个杂原子的C5～12杂环基或C5～12杂芳基，所述杂原子选自N、O或S；在根据本发明的一个优选实施方式中，所述取代基团Ar可选自取代或未取代的含有1～3个N原子的C5～6杂环基或C5～6杂芳基。在根据本发明的一个更优选实施方式中，Ar可选自取代或未取代的哌啶基、哌嗪基、吡啶基、吡嗪基、哒嗪基、三嗪基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯基、咪唑基、三氮唑基、四氮唑基、环戊基、环己基、苯基、联苯基、萘基等。
在根据本发明的一个实施方式中，所述取代基团Ar的取代基可以为卤素，即基团Ar可以被氟、氯、溴、碘原子取代，取代基的数量可以为一个或多个，种类可以相同也可不同。
在根据本发明的一个实施方式中，所述取代基团R2可选自-NHR7，其中的R7可选自取代或未取代的以下基团：氢、卤素、C1～4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1～4烷基酰基、C1～4烷基磺酰基、C1～4卤代烷基或C1～4烷氧基；取代基可选自氰基、氨基、羟基、羧基、巯基、C3～5环烷基、C3～6杂环基、C6～12芳基或C5～12杂芳基。在根据本发明的一个优选实施方式中，R7可选自氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、甲基酰基、乙基酰基、丙基酰基、甲基磺酰基、乙基磺酰基、丙基磺酰基、甲氧基、乙氧基、丙氧基等，可选的取代基可以为氟、氯、溴、碘、氰基、氨基、羟基、羧基、巯基、
苯基、萘基、五元或六元的杂环基或杂芳基，其中的杂原子可以为N、O、S中的至少一个，取代基的数量可以为一个或多个，种类可以相同也可不同。
在根据本发明的一个实施方式中，所述取代基团X可选自CH。
在根据本发明的一个实施方式中，所述取代基团R1可选自取代或未取代的以下基团：C1～6烷基、C1～6烷氧基、C3～6环烷基、C6～12芳基、含有至少一个杂原子的C3～6杂环基或C5～12杂芳基，所述杂原子选自N、O或S。在根据本发明的一个优选实施方式中，所述取代基团R1可选自取代或未取代的以下基团：C1～4烷基、C1～4烷氧基、苯基、联苯基、萘基、含有1～3个N原子的C5～6杂环基或C5～6杂芳基。所述取代基团R1的可选的取代基可以为卤素、C1～4烷基或C1～4卤代烷基。在根据本发明的一个更优选的实施方式中，R1可选自甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、乙烯基、丙烯基、乙炔基、丙炔基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、
环戊基、环己基、苯基、联苯基、萘基、哌啶基、哌嗪基、吡啶基、吡嗪基、哒嗪基、三嗪基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯基、咪唑基、三氮唑基、四氮唑基等；可选的取代基可以为氟、氯、溴、碘、甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、三氟甲基、三溴甲基等，取代基的数量可以为一个或多个，种类可以相同也可不同。
在根据本发明的一个实施方式中，所述取代基团R3可选自氢、卤素、C1～4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1～4卤代烷基、C1～4烷氧基、氰基、氨基、羟基、羧基或巯基。在根据本发明的一个优选实施方式中，取代基团R3可选自氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、氰基、氨基、羟基、羧基、巯基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、三氟甲基。
在根据本发明的一个实施方式中，所述取代基团R5可选自氰基。
在根据本发明的一个实施方式中，所述取代基团R6可选自氢。
本发明提供的化合物优选选自以下结构：
本发明还提供了一种药物组合物，其包含以上技术方案任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、同位素标记物、异构体或前药，以及药学可接受的载体。
所述药物组合物包括但不限于口服剂型、胃肠外给药剂型、外用剂型、直肠给药剂型等。例如，所述药物组合物可以是口服的片剂、胶囊、丸剂、粉剂、缓释制剂、溶液和悬浮液，用于胃肠外注射的无菌溶液、悬浮液或乳液，用于外用的软膏、乳膏、凝胶剂等，或者用于直肠给药的栓剂。
所述药物组合物还可以包括其他活性成分或药物，与所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、同位素标记物、异构体或前药联合用药。
本发明还提供了上述化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、同位素标记物、异构体或前药，以及上述的药物组合物在制备用于治疗JAK激酶介导的疾病的药物中的用途。
特别地，本发明所述的用途为制备用于治疗JAK1激酶介导的疾病的药物中的用途。
进一步地，所述JAK激酶介导的疾病可以为肿瘤或自身免疫性疾病。
进一步地，所述JAK激酶介导的疾病可包括但不限于白血病、非小细胞肺癌、结肠癌、淋巴瘤、骨髓增殖性肿瘤、骨髓异常综合征等肿瘤疾病；也包括但不限于类风湿性关节炎、银屑病性关节炎、移植物抗宿主病、非感染性葡萄膜炎、克罗恩病、溃疡性结肠炎、强直性脊柱炎、自身免疫性皮肤病等自身免疫性疾病。
更进一步地，所述JAK激酶介导的疾病可包括但不限于银屑病、特异性皮炎、白癜风、瘙痒症、硬皮病、斑秃、全秃、普秃、雄激素性秃发等自身免疫性皮肤病。
具体地，本发明所述的淋巴瘤可以包括但不限于霍奇金病(Hodgkins disease)或非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkins leukemia)，所述非霍奇金淋巴瘤包括但不限于B-细胞淋巴瘤(B-cell lymphoma)或T-细胞淋巴瘤(T-cell lymphoma)。
本发明所述的白血病包括但不限于急性淋巴细胞白血病(Acute lymphoblasticleukemia)、慢性淋巴细胞白血病(Chronic lymphocytic leukemia)、急性粒细胞白血病(Acute myeloid leukemia)、慢性粒细胞白血病(Chronic myelocytic leukemia)。
本发明所述的骨髓增生异常综合征(Myelodysplastic Syndrome)和骨髓增殖性肿瘤(Myeloproliferative Neoplasm)包括但不限于骨髓纤维化(Myelofibrosis)、原发性骨髓纤维化(Primary myelofibrosis)、原发性血小板增多症骨髓纤维化(Post-essentialThrombocythemia Myelofibrosis)、真性红细胞增多症骨髓纤维化(Post-polycythemiaVera Myelofibrosis)、原发性血小板增多症(Essential Thrombocythemia)、真性红细胞增多症(Polycythemia Vera)、多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma)。
本发明所述的肿瘤除淋巴瘤、白血病外，还包括但不限于非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肝癌、肾癌、***癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、结肠癌、黑色素瘤、头颈癌等实体瘤。
本发明所述的自身免疫性疾病包括但不限于类风湿性关节炎(RheumatoidArthritis)、幼年特发性关节炎(Juvenile Idiopathic Arthritis)、青少年型皮肌炎(Juvenile Dermatomyositis)、特异性皮炎(Atopic Dermatitis)、巨细胞动脉炎(GiantCell Arteritis)、多发性大动脉炎(Takayasu Arteritis)、川崎病(Kawasaki Disease)、带状疱疹(Herpes Zoster)、自身炎症性疾病(Autoinflammatory Syndromes)、强直性脊柱炎(Ankylosing Spondylitis)、Aicardi-Goutières综合征(Aicardi-GoutièresSyndrome)、斑秃(Alopecia Areata)、全秃(Alopecia Totalis)、普秃(AlopeciaUniversalis)、雄激素性秃发(Androgenetic Alopecia)、白塞病(Behcet’s Disease/
Syndrome)、CANDLE综合征(Chronic Atypical Neutrophilic Dermatosis WithLipodystrophy and Elevated Temperature)、移植物抗宿主病(Graft-versus-hostDisease)、糖尿病肾脏疾病(Diabetic Kidney Disease)、干眼症(Dry Eye Syndromes/Keratoconjunctivitis Sicca)、非感染性葡萄膜炎(Non-infectious Uveitis)、搔痒症(Pruritis)、银屑病(Psoriasis)、斑块状银屑病(Plaque Psoriasis)、银屑病性关节炎(Psoriatic Arthritis)、炎症性肠病(Inflammatory Bowel Disease)、克罗恩病(Crohn'sDisease)、小肠克罗恩病(Small Bowel Crohn's Disease)、瘘管克罗恩病(FistulizingCrohn's Disease)、溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis)、SVAI病(Stimulator ofInterferon Genes(STING)-Associated Vasculopathy With Onset During Infancy)、***性红斑狼疮(Systemic Lupus Erythematosus)、硬皮病(Systemic Sclerosis/Scleroderma)、白癜风(Vitiligo)、慢性铍尘病(Chronic Beryllium Disease)。
本发明提供的吡咯并嘧啶衍生的化合物及其药物组合物具有显著的JAK激酶抑制活性和优异的药代动力学性质，尤其是具备高选择性的JAK1酶抑制活性，可在保证JAK1酶优异抑制效果的同时，避免抑制其它JAK激酶(JAK2和/或JAK3)所带来的潜在副作用，因而非常具备应用潜力。
详述
除非另有定义，否则本文所有科技术语具有的涵义与权利要求主题所属领域技术人员通常理解的涵义相同。除非另有说明，本文全文引用的所有专利、专利申请、公开材料通过引用方式整体并入本文。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。
应理解，上述简述和下文的详述为示例性且仅用于解释，而不对本文发明主题做任何限制。在本申请中，必须注意，除非文中另有清楚的说明，否则在本说明书和权利要求书中所用的单数形式包括所指事物的复数形式。还应注意，除非另有说明，否则所用“或”、“或者”表示“和/或”。此外，所用术语“包括”以及其他形式，例如“包含”、“含”和“含有”并非限制性。
标准化学术语的定义可以在文献著作中找到，包括Carey和Sundberg的“AdvancedOrganic Chemistry 4th Ed,Vol A(2000)and B(2001),Plenum Press,New York。除非另有说明，否则采用本领域技术范围内的常规方法，如质谱、NMR、HPLC、蛋白质化学、生物化学、重组DNA技术和药理学方法。除非提出具体定义，否则本文在分析化学、有机合成化学以及医学和药物化学等化学上的相关的命名和实验室操作和技术，是本领域技术人员已知的。标准技术可以用于化学合成，化学分析，药物制备，制剂，递药和患者的治疗。标准技术可以用于重组DNA，寡核苷酸合成，以及组织培养和转化(例如电穿孔、脂质传染法)。举例来说，可以使用附有生厂商提供的说明书的试剂盒，或者按照本领域公知的方法，或者按照本发明表述的方法，来实施反应和纯化技术。一般而言，前述技术和步骤可以通过本领域众所周知的和在各种一般文献或更具体文献中描述的常规方法来实施，这些文献在本发明中被引用和讨论。
当通过从左向右书写的常规化学式描述取代基时，该取代基也同样包括从右向左书写结构式时所得到的在化学上等同的取代基。举例而言，CH2O等同于OCH2。
术语“任选”或“任选地”是指随后描述的事件或情况可能发生或可能不发生，该描述包括发生所述事件或情况和不发生所述事件或情况。例如，乙基“任选”被卤素取代，指乙基可以是未被取代的(-CH2CH3)、单取代的(如-CH2CH2F)、多取代的(如-CHFCH2F、-CH2CHF2等)或完全被取代的(-CF2CF3)。本领域技术人员可理解，对于包含一个或多个取代基的任何基团，不会引入任何在空间上不可能存在和/或不能合成的取代或取代模式。
术语“取代”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的即可。当取代基为氧代(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代，氧代不会发生在芳香基上。
当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0-2个R所取代，则所述基团可以任选地至多被两个R所取代，并且每种情况下的R都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
本文所用Cm～n指该部分中具有m～n个碳原子。举例而言，所述“C1～8”基团是指该部分中具有1-8个碳原子，即基团包含1个碳原子，2个碳原子、3个碳原子……8个碳原子。因此，举例而言“C1～8烷基”是指含有1-8个碳原子的烷基，即所述烷基选自甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基……辛基等。本文中的数字范围，例如“1-8”是指给定范围中的各个整数，例如“1-8个碳原子”是指该基团可具有1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子、4个碳原子、5个碳原子、6个碳原子、7个碳原子或8个碳原子。
术语“烷基”是指任选取代的直链或任选取代的支链的饱和脂肪族烃基团，其通过单键与分子的其余部分连接。本文的“烷基”可具有1-约8个碳原子，例如具有1-6个碳原子，或1-4个碳原子或1-3个碳原子。本文的“烷基”实施例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、2-甲基-l-丙基、2-甲基-2-丙基、2-甲基-1-丁基、3-甲基-l-丁基、2-甲基-3-丁基、2,2-二甲基-1-丙基、2-甲基-1-戊基、3-甲基-1-戊基、4-甲基-l-戊基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、2,2-二甲基-l-丁基、3,3-二甲基-1-丁基、2-乙基-1-丁基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、叔戊基、己基等，以及更长的烷基基团，如庚基和辛基等。本文定义的基团，如“烷基”出现数字范围时，例如“C1-8烷基”是指可由1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子、4个碳原子、5个碳原子、6个碳原子、7个碳原子、8个碳原子构成的烷基，再例如，“C1-4烷基”是指可由1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子、4个碳原子构成的烷基。本文的烷基也包含未指定数字范围的情况。
术语“烯基”是指任选取代的直链或任选取代的支链的一价烃基，其具有至少一个C＝C双键。所述烯基具有但不限于2-约8个碳原子，如2-约6个碳原子，2-约4个碳原子。这些基团中的双键可以为顺式或反式构象，并应被理解为包含所述两种异构体。烯基实施例包括但不限于乙烯基(CH＝CH2)、1-丙烯基(CH2CH＝CH2)、异丙烯基(C(CH3)＝CH2)、丁烯基和1,3-丁二烯基等。本文定义的烯基出现数字范围时，例如“C2-8烯基”是指可由2个碳原子、3个碳原子、4个碳原子、5个碳原子、6个碳原子、7个碳原子、8个碳原子构成的烯基，本文的烯基也涵盖未指定数字范围的情况。
术语“炔基”是指任选取代的直链或支链的一价烃基，其具有至少一个C≡C三键。所述炔基具有但不限于2-约8个碳原子，例如2-约6个碳原子，或2-约4个碳原子。本文的炔基实施例包括但不限于乙炔基、2-丙炔基、2-丁炔基和1,3-丁二炔基等。本文定义的炔基出现数字范围时，例如“C2-8炔基”是指可由2个碳原子、3个碳原子、4个碳原子、5个碳原子、6个碳原子、7个碳原子、8个碳原子构成的炔基基团，本文的炔基也涵盖未指定数字范围的情况。
术语“环烷基”是指非芳香的含碳环，包括饱和碳环(如环烷基)或不饱和碳环(如环烯基)。碳环包括单碳环(具有一个环)，例如可以是单环环烷基；双碳环(具有两个环)，例如可以是双环环烷基；多碳环(具有两个以上的环)。环之间可以是桥合或螺环。碳环(如环烷基或环烯基)可以具有3至8个碳原子，例如具有3-约6个成环碳原子或3-约5个成环碳原子。
术语“芳基”是指任选取代的芳香烃基，其具有6-约20个，如6-12个或6-10个成环碳原子，其可以是单环芳基、双环芳基或更多环芳基。双环芳基或更多环芳基可以是一个单环芳基与其它独立环，如脂环、杂环、芳环、芳杂环相稠合。单环芳基的非限定性实施例包括6至约12个、6至约10个或6至约8个成环碳原子的单环芳基，例如苯基；双环芳基例如为萘基；多环芳基例如为菲基、蒽基、薁基。
术语“杂芳基”是指任意取代的杂芳基，其包含约5至约20个，如5至12个或5至10个骨架成环原子，其中至少一个(如1-4个、1-3个、1-2个)成环原子为杂原子，所述杂原子独立地选自氧、氮、硫、磷、硅、硒和锡中的杂原子，但不限于此。杂芳基包括单环杂芳基(具有一个环)、双环杂芳基(具有两个环)或多环杂芳基(具有两个以上的环)。在环中出现两个或更多杂原子的实施方式中，所述两个或更多杂原子可彼此相同，或者所述两个或更多杂原子中的一些或全部彼此不同。双环杂芳基或更多环杂芳基可以是一个单环杂芳基与其它独立环，如脂环、杂环、芳环、芳杂环相稠合(可统称为稠合环杂芳基)。杂芳基的非限制性实例包括但不限于吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、喹啉基、异喹啉基、四唑基、***基、三嗪基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、异吲哚基等。
术语“杂环基”是指非芳香杂环，其包括饱和杂环或不饱和杂环(含不饱和键)，不具有完全共轭的π-电子体系，可分为无芳香性的单环、稠合多环、桥环或螺环体系。其中一个或者多个(如1-4个、1-3个、1-2个)成环的原子是杂原子，如氧、氮或硫原子。杂环可以包括单杂环(具有一个环)或双杂环(具有两个桥合的环)或多杂环(具有两个以上桥合的环)；也包括螺环。杂环基可具有3至约20个，如3-约10个、3-约8个、4-8个、4-7个、5-约8个或5-约6个成环原子。杂环基的非限制性实例包括环氧乙烷基、环硫乙烷基、环氮乙烷基、吖丁啶基、噁丁环基、噻丁环基、四氢呋喃基、吡咯烷基、噁唑烷基、四氢吡唑基、吡咯啉基、二氢呋喃基、二氢噻吩基、哌啶基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、吗啉基、哌嗪基、二氢吡啶基、四氢吡啶基、二氢吡喃基、四氢吡喃基、二氢噻喃基、氮杂环庚烷基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚烷基、氧杂氮杂双环[2.2.1]庚基和氮杂螺[3.3]庚基等。
术语“卤代”或“卤素”是指任选被取代的基团(如烷基、烯基、炔基、烷氧基等)的其中至少一个氢原子被替换成卤素(如氟、氯、溴、碘或其组合)。在一些实施方式中，使用彼此相同的卤素替换两个或多个氢(例如二氟甲基、三氟甲基)；在其它实施方式中使用彼此并不完全相同的卤素替换两个或多个氢(例如1-氯-1-氟-1-碘乙基)。
术语“烷氧基”是指烷基醚基(O-烷基)，烷氧基的非限定性实施例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基等。
术语“烷基酰基”是指烷基与-CO-相连而构成的基团，该术语的非限制性实例包括甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基等。例如，术语“C1-6烷基酰基”指C1-6烷基与-CO-相连而构成的基团。再例如，术语“C1-4烷基酰基”指C1-4烷基与-CO-相连而构成的基团。
术语“烷基磺酰基”是指烷基与-SO2-相连而构成的基团，该术语的非限制性实例包括甲磺酰基、乙磺酰基、丙磺酰基、丁磺酰基等。例如，术语“C1-6烷基磺酰基”指C1-6烷基与-SO2-相连而构成的基团。再例如，术语“C1-4烷基磺酰基”指C1-4烷基与-SO2-相连而构成的基团。
术语“氨基”指-NH2基团、-NH(C1～6烷基)基团或-N(C1～6烷基)2基团。氨基的具体例子包括但不限于-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHC2H5、-N(C2H5)2、-N(C3H7)2、-N(CH3)C2H5等。
本文的其他基团术语还包括：“羟基”指-OH基团、“巯基”指-SH基团、“氰基”指-CN基团、“羧基”指-COOH基团。
术语“元”是指构成环的骨架原子的个数。例如吡啶是六元环，吡咯是五元环。
术语“药学上可接受的”是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
术语“药物组合物”是指任选的混合有至少一种药学上可接受的化学成分或试剂的生物活性化合物，所述药学上可接受的化学成分或试剂即为“载体”，其有助于将化合物引入到细胞或组织中，包括但不限于稳定剂、稀释剂、悬浮剂、增稠剂和/或赋形剂。
术语“药学上可接受的盐”是指保留了指定化合物的游离酸和游离碱的生物效力，并且在生物学或其它方面上没有不良作用的盐。除特别指示外，本发明中的盐可以提及金属盐、铵盐、与有机碱形成的盐、与无机酸形成的盐、与有机酸形成的盐、与碱性或者酸性氨基酸形成的盐等。金属盐的非限制性实例包括但不限于碱金属的盐，例如钠盐、钾盐等；碱土金属的盐，例如钙盐、镁盐、钡盐等；铝盐等。与有机碱形成的盐的非限制性实例包括但不限于与三甲胺、三乙胺、吡啶、甲基吡啶、2,6-二甲基吡啶、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、环己胺、二环己基胺等形成的盐。与无机酸形成的盐的非限制性实例包括但不限于与盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸、磷酸等形成的盐。与有机酸形成的盐的非限制性实例包括但不限于与甲酸、乙酸、三氟乙酸、富马酸、草酸、苹果酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲基苯磺酸等形成的盐。与碱性氨基酸形成的盐的非限制性实例包括但不限于与精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸等形成的盐。与酸性氨基酸形成的盐的非限制性实例包括但不限于与天冬氨酸、谷氨酸等形成的盐。
药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。一般地，优选醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈等非水介质。
术语“溶剂化物”是指本发明中的一个化合物与一个或多个溶剂分子形成的物理聚集体，这个物理聚集体包括离子的不同程度和共价键，例如氢键。已证实这个溶剂化物可以被分离，例如，当晶体的晶格中混有一个或多个溶剂分子时。“溶剂化物”包括溶剂相和可分离的溶剂化物两部分。相应的溶剂化物例子有很多，包括乙醇溶剂化物、甲醇溶剂化物等。“水合物”是一种以水(H2O)分子为溶剂的溶剂化物。本发明中的一个或多个化合物都可以随意的制备成溶剂化物。溶剂化物的制备众所周知。例如M.Caira et al,J.Pharmaceutical Sci.,93(3),601-611(2004)中描述了抗真菌药氟康唑的溶剂化物的制备，即用乙酸乙酯和水制备。E.C.van Tonder et al,AAPS PharmSciTech.,5(1),article12(2004)；和A.L.Bingham et al,Chem.Commun.,603-604(2001)中也描述了溶剂化物、水合物的类似制备方法。一种典型的、非限制性的制备过程是在高于常温的温度时将发明的化合物溶解于所需要量的理想溶剂中(有机溶剂或水或它们的混合溶剂)，降温，放置析晶，然后用标准的方法分离挑出晶体。用I.R.光谱学分析技术可以证实结晶中形成溶剂化物(水合物)的溶剂(水)的存在。
术语“活性代谢物”是指在化合物代谢时形成的该化合物的具有活性的衍生物。
术语“多晶型物”是指以不同的晶格形式存在的本发明化合物。
术语“同位素标记物”是指有同位素标记的本发明化合物。例如本发明的化合物中的同位素可包括H,C,N,O,P,F,S等元素的各种同位素,如2H,3H,13C,14C,15N,18O,17O,31P,32P,35S,18F和36S。
术语“药学上可接受的前药”或“前药”是指本发明化合物的任何药学上可接受的盐、酯、酯的盐或其它衍生物，其在向受体施用后能够直接或间接地提供本发明的化合物或其具有药学活性的代谢物或残基。特别优选的衍生物或前药是在施用于患者时可以提高本申请化合物生物利用度的那些化合物(例如，可以使口服的化合物更易于被吸收到血液中)，或者促进母体化合物向生物器官或作用位点(例如脑部或淋巴***)递送的那些化合物。可通过常规操作或在体内，按可分解为母体化合物的修饰方式，修饰存在于化合物中的官能团，制备前药。各种前药形式是本领域熟知的。参见，在T.Higuchi和V.Stella所著的Pro-drugs as Novel Delivery Systems(1987)Vol.14of the A.C.S.Symposium Series,Bioreversible Carriers in Drug Design,(1987)Edward B.Roche,ed.,AmericanPharmaceutical Association和在Pergamon Press中提供了有关前药的讨论。Design ofProdrugs,Bundgaard,
A.Ed.,Elseview,1985and Method in Enzymology,Widder,K.et al.,Ed.；Academic,1985,vol.42,p.309-396；Bundgaard,H."Design and Application ofProdrugs"in A Textbook of Drug Design and Development,Krosgaard-Larsen andH.Bundgaard,Ed.,1991,第五章，113-191页；以及Bundgaard,H.,Advanced Drug DeliveryReview,1992,8,1-38，以上文献通过引用并入本文。
术语“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体。本发明化合物含有不对称或手性中心、双键等结构，因此，本发明的化合物可能包括光学异构体、几何异构体、互变异构体、阻转异构体等多种异构体形式，这些异构体及其单一异构体、外消旋体等等都包括在本发明的范围之内。例如，对于光学异构体而言，可以通过手性拆分、手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(R)-和(S)-异构体以及D和L异构体。例如，可通过与适当的光学活性物质(例如手性醇或Mosher`s莫氏酰氯)反应转换为非对映异构体，将其分离并转化(如水解)为相对应的单一的异构体。再例如，还可通过色谱柱进行分离。
本文的“药物组合物”可按药剂领域中熟知的方式制备，并可通过多种途径给予或施用它们，这取决于是否需要局部或全身治疗和所治疗的区域。可局部(例如，透皮、皮肤、眼和粘膜包括鼻内、***和直肠递药)、肺(例如，通过吸入或吹入粉末或气雾剂，包括通过喷雾器；气管内、鼻内)、口服或肠胃外给药。肠胃外给药包括静脉内、动脉内、皮下、腹膜内或肌内注射或输注；或颅内例如鞘内或脑室内给药。可按单次大剂量形式肠胃外给药，或可通过例如连续灌注泵给药。本文的药物组合物包括但不限于以下形式：片剂、丸剂、散剂、锭剂、小药囊、扁囊剂、酏剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂、气雾剂(固体或溶于液体溶媒)；含例如高达10％重量活性化合物的软膏剂、软和硬明胶胶囊、栓剂、无菌注射溶液和无菌包装粉末等。
本文的药物组合物可按单位剂型配制，每一剂量可含约0.1～1000mg，通常约5～1000mg活性成分，更通常约100～500mg活性成分。术语“单位剂型”是指物理上分离的适宜作为用于人患者和其它哺乳动物的单一剂量单位，各单位含有与适宜的药物载体混合的经计算可产生所需疗效的预定量的活性物质。
术语“个体”是指患有疾病、病症或病况等的个体，包括哺乳动物和非哺乳动物。哺乳动物的实施例包括但不限于哺乳动物纲的任何成员：人，非人的灵长类动物(例如黑猩猩和其它猿类和猴)；家畜，例如牛、马、绵羊、山羊、猪；家养动物，例如兔、狗和猫；实验室动物，包括啮齿类动物，例如大鼠、小鼠和豚鼠等。
术语“治疗”和其它类似的同义词包括缓解、减轻或改善疾病或病症症状，预防其它症状，改善或预防导致症状的潜在代谢原因，抑制疾病或病症，例如阻止疾病或病症的发展，缓解疾病或病症，使疾病或病症好转，缓解由疾病或病症导致的症状，或者中止疾病或病症的症状，此外，该术语还可包含预防的目的。该术语还包括获得治疗效果和/或预防效果。所述治疗效果是指治愈或改善所治疗的潜在疾病。此外，对与潜在疾病相关的一种或多种生理症状的治愈或改善也是治疗效果，例如尽管患者可能仍然受到潜在疾病的影响，但观察到患者情况改善。就预防效果而言，可向具有患特定疾病风险的患者施用所述组合物或化合物，或者即便尚未做出疾病诊断，但向出现该疾病的一个或多个生理症状的患者施用所述组合物或化合物。
术语“获得必要的治疗效果的计量”或“治疗有效量”是指施用后足以在某种程度上缓解所治疗的疾病或病症的一个或多个症状的至少一种药剂或化合物的量。其结果可以为迹象、症状或病因的消减和/或缓解，或生物***的任何其它所需变化。可使用诸如剂量递增试验的技术测定适合于任意个体病例中的有效量。实际给予的化合物、药物组合物或药剂的量通常由医师根据相关情况决定，包括所治疗的病症、所选择的给药途径、所给予的实际化合物；患者个体的年龄、重量和反应；患者症状的严重程度等。
本发明化合物在药用组合物中的比例或浓度可不固定，取决于多种因素，它们包括剂量、化学特性(例如疏水性)、给药途径等。例如可通过含约0.1～10％w/v该化合物的生理缓冲水溶液提供本发明化合物，用于肠胃外给药。某些典型剂量范围为约1μg/kg～约1g/kg体重/日。在某些实施方案中，剂量范围为约0.01mg/kg～约100mg/kg体重/日。剂量很可能取决于此类变量，如疾病或病症的种类和发展程度、具体患者的一般健康状态、所选择的化合物的相对生物学效力、赋形剂制剂及其给药途径。
术语“施用”是指能够将化合物或组合物递送到进行生物作用的所需位点的方法。这些方法包括但不限于口服途径、经十二指肠途径、胃肠外注射(包括静脉内、皮下、腹膜内、肌内、动脉内注射或输注)、外用和经直肠给药。本领域技术人员熟知可用于本文所述化合物和方法的施用技术，例如在Goodman and Gilman,The Pharmacological Basis ofTherapeutics,current ed.；Pergamon；and Remington's,Pharmaceutical Sciences(current edition),Mack Publishing Co.,Easton,Pa中讨论的那些。
术语“IC50”是指在测量这样的效应的分析中获得最大效应的50％抑制。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将进一步描述本发明的示例性实施例的技术方案。
本发明可以通过下述方法制备本发明所述的化合物。以下方法和实施例是为了说明这些方法。这些流程和实施例不应以任何方式被解释为对本发明的限制。也可使用本领域技术人员已知的标准合成技术合成本文所述的化合物，或者组合使用本领域已知方法和本文所述方法。
本发明实施例的化学反应是在合适的溶剂中完成的，所述的溶剂须适合于本发明的化学变化及其所需的试剂和物料。为了获得本发明的化合物，有时需要本领域技术人员在已有实施方式的基础上对合成步骤或者反应流程进行修改或选择。
本领域任何合成路线规划中的一个重要考量因素是为反应性官能团(如本发明中的氨基)选择合适的保护基。对于经过训练的从业者来说，Greene and Wuts的(ProtectiveGroups In Organic Synthesis,Wiley and Sons,1991)是这方面的权威。本发明引用的所有参考文献整体上并入本发明。
可按照本领域中已知的任何合适的方法监测本文中所述的反应。例如，可通过广谱方法例如核磁共振波谱(例如1H或13C)、红外光谱、分光光度测定(例如UV-可见光)、质谱等，或通过色谱例如高效液相色谱(HPLC)或薄层层析监测产物形成。
实施例1 2-(3-(3-氨基-4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基)-1-
(1-(3-氟-2-(三氟甲基)异烟酰基)哌啶-4-基)氮杂环丁-3-基)乙腈
步骤A：叔丁基4-(3-(氰基亚甲基)氮杂环丁-1-基)哌啶-1-碳酸脂
将40g(0.3mol,1.0eq)2-(氮杂环丁-3-亚基)乙腈盐酸盐(参照专利US2014/256941A1Paragraph0145来制备化合物)与61g(0.3mol,1.0eq)N-叔丁氧羰基-4-哌啶酮溶解在500mL二氯甲烷中，氮气保护下冰水浴降温到0℃，分批次缓慢加入130克(0.6mol,2.0eq)醋酸硼氢化钠，加完后保持冰浴反应，TLC监控反应完毕。将反应液缓慢倒入水中，用二氯甲烷萃取水相。合并有机相，将有机相依次用水和饱和碳酸氢钠洗涤，将有机相通过无水硫酸钠干燥，减压蒸干，残余物通过柱层析得产物(40g,收率＝85％)。
步骤B：2-(1-(哌啶-4-基)氮杂环丁-3-亚基)乙腈盐酸盐
将40g(0.14mol,1.0eq)叔丁基4-(3-(氰基亚甲基)氮杂环丁-1-基)哌啶-1-碳酸脂溶解在250mL无水乙醇中，氮气保护下冰水浴降温到0℃，缓慢滴加40g浓盐酸，加完后缓慢升至室温反应，TLC监控反应完毕。将悬浊液过滤，滤饼用无水乙醇洗涤，真空干燥得产物(24g,收率＝81％)。
步骤C：2-(1-(1-(3-氟-2-(三氟甲基)异烟酰基)哌啶-4-基)氮杂环丁-3-亚基)乙腈
室温下将650mg(3.0mmol,1.0eq)2-(1-(哌啶-4-基)氮杂环丁-3-亚基)乙腈盐酸盐、630mg(3.0mmol,1.0eq)2-氟-3-三氟甲基吡啶甲酸和2g(15mmol,5.0eq)N,N-二异丙基乙基胺溶解在30mL二氯甲烷中，加入1.4g(3.6mmol,1.2eq)HATU，室温搅拌反应过夜。加入100mL水淬灭反应，用二氯甲烷萃取水相，将有机相通过无水硫酸钠干燥，减压蒸干，残余物通过柱层析(PE:EA＝1:1～0:1)得产物(1.1g,收率＝98％)。1H-NMR(400MHz,DMSO-D6):δ8.67(d,J＝4.5Hz,1H),7.91(t,J＝4.5Hz,1H),5.69-5.71(m,1H),3.90-4.15(m,5H),3.25-3.50(m,2H),3.07-3.20(m,1H),2.51-2.64(m,1H),1.55-1.85(m,2H),1.10-1.30(m,2H)。
步骤D：4-氯-7-([2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶
冰浴搅拌下，38.4g(250.4mmol,1.0eq.)4-氯-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶的溶于200mL干燥DMF溶液中，加入13g(305mmol,1.2eq)57％含量的NaH。反应物室温搅拌1小时，再在冰浴冷却下滴加50.9g SEMCl(305mmol,1.2eq.)。加毕，反应物冰浴搅拌1小时，加水淬灭，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到目标化合物(71g,收率＝100％)。
步骤E：2-氰基-2-(7-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)乙酸乙酯
室温搅拌下，33.5g(118mmol,1.0eq.)4-氯-7-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶加入到40.1g(354.0mmol,3.0eq.)氰基乙酸乙酯和33.0g(238mmol,2.0eq.)碳酸钾的混合物中。反应物升温到60℃反应0.5小时，然后升温至130℃反应1.0小时。冷却至室温，加水淬灭，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到目标化合物(30.6g,收率＝72％)。
步骤F：2-(7-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)乙腈
室温搅拌下，50g(855.6mmol,10.0eq.)氯化钠加入到30.6g(84.9mmol,1.0eq.)2-氰基-2-(7-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)乙酸乙酯的DMSO和水的混合溶剂中。反应液氮气保护下150℃反应6天。冷却至室温，加水淬灭，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到目标化合物(18.1g,收率＝74％)。
步骤G：4-(7-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-氨基-1H-吡唑
室温搅拌下，37g 85％含量水合肼(628mmol,10.0eq.)加入到18.1g(62.8mmol,1.0eq.)2-(7-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)乙腈和22.4g(188mmol,3eq.)DMF-DMA的80mL DMF溶液中。反应液氮气保护下90℃搅拌回流3小时。冷却至室温，加100mL水搅拌，抽滤，干燥得目标化合物(11.0g,收率＝53％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.13(brs,1H),8.65(s,1H),8.18(brs,1H),7.61(d,J＝3.2Hz,1H),7.01(d,J＝3.6Hz,1H),6.55(brs,2H),5.60(s,2H),3.52(t,J＝8.0Hz,2H),0.83(t,J＝8.0Hz,2H),-0.10(s,9H).LC-MS:m/z＝331[M+1]+。
步骤H：2-(3-(3-氨基-4-(7-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基)-1-(1-(3-氟-2-(三氟甲基)异烟酰基)哌啶-4-基)氮杂环丁-3-基)乙腈
800mg(2.4mmol,1.2eq)4-(7-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-胺和740mg(2.0mmol,1.0eq)2-(1-(1-(3-氟-2-(三氟甲基)异烟酰基)哌啶-4-基)氮杂环丁-3-亚基)乙腈溶解在15mL乙腈中，室温下将920mg(6.0mmol,3.0eq)1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯缓慢滴加至反应体系，室温搅拌反应过夜。用50mL饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应，用乙酸乙酯萃取水相，将有机相通过无水硫酸钠干燥，减压蒸干，残余物通过柱层析(PE:EA＝1:1～0:1)得产物(878mg,收率＝63％)。
步骤I：2-(3-(3-氨基-4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基)-1-(1-(3-氟-2-(三氟甲基)异烟酰基)哌啶-4-基)氮杂环丁-3-基)乙腈
方法1：室温下将260mg(0.37mmol,1.0eq)2-(3-(3-氨基-4-(7-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基)-1-(1-(3-氟-2-(三氟甲基)异烟酰基)哌啶-4-基)氮杂环丁-3-基)乙腈溶解在8mL二氯甲烷和1mL三氟乙酸混合液中，室温反应过夜，减压蒸干溶剂，将残余物溶解在10mL甲醇中，室温下加入0.5mL乙二胺，室温搅拌反应30分钟，将反应液倒入50mL水中，用乙酸乙酯萃取水相，将有机相通过无水硫酸钠干燥，减压蒸干，残余物通过柱层析(EA:MeOH＝1:0～25:1)得产物(150mg,收率＝70％)。
方法2：室温下将478mg(0.7mmol,1.0eq)2-(3-(3-氨基-4-(7-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基)-1-(1-(3-氟-2-(三氟甲基)异烟酰基)哌啶-4-基)氮杂环丁-3-基)乙腈溶解在15mL乙腈中，冰浴下缓慢滴加500mg(3.5mmol,5.0eq)三氟化硼***络合物，加毕室温反应4小时，将反应体系冰浴降温至5℃以下，向体系缓慢滴加8mL 25％氨水溶液，室温搅拌反应60分钟，将反应液倒入80mL水中，用乙酸乙酯萃取水相，将有机相通过无水硫酸钠干燥，减压蒸干，残余物通过柱层析(EA:MeOH＝1:0～25:1)得产物(195mg,收率＝50％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ10.15(s,1H),8.82(s,1H),8.60(d,J＝4.5Hz,1H),8.06(s,1H),7.56(t,J＝4.4Hz,1H),7.37(dd,1H),6.69(dd,1H),5.74(s,2H),4.17-4.29(m,1H),3.76-3.69(m,2H),3.57-3.64(m,2H),3.42-3.54(s,2H),3.34(s,2H),3.07-3.20(m,1H),2.54-2.64(m,1H),1.60-1.92(m,2H),1.37-1.57(m,2H).LC-MS:m/z＝569[M+1]+。
实施例2 2-(3-(3-氨基-4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基)-1-
(1-(2-氟-3-(三氟甲基)苯基)哌啶-4-基)氮杂环丁-3-基)乙腈
步骤A：2-(1-(1-(2-氟-3-(三氟甲基)苯甲酰基)哌啶-4-基)氮杂环丁-3-亚基)乙腈
参照实施例1中所述的步骤C来制备化合物(550mg,收率＝98％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.71(t,J＝7.0Hz,1H),7.62(t,J＝6.2Hz,1H),7.37(t,J＝7.7Hz,1H),5.29-5.36(m,1H),4.20-4.30(m,1H),4.10(s,2H),4.01(s,2H),3.48-3.59(m,1H),3.37-3.48(m,1H),3.10-3.25(m,1H),2.52-2.63(m,1H),1.65-1.95(m,2H),1.25-1.59(m,2H)。
步骤B：2-(3-(3-氨基-4-(7-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基)-1-(1-(2-氟-3-(三氟甲基)苯甲酰基)哌啶-4-基)氮杂环丁-3-基)乙腈
参照实施例1中所述的步骤H来制备化合物(720mg,收率＝71％)。
步骤C：2-(3-(3-氨基-4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基)-1-(1-(2-氟-3-(三氟甲基)苯甲酰基)哌啶-4-基)氮杂环丁-3-基)乙腈
参照实施例1中所述的步骤E中的方法1来制备化合物(210mg,收率＝36％)。1HNMR(400MHz,DMSO-D6):δ12.09(s,1H),8.68(s,1H),8.54(s,1H),7.90(t,J＝7.1Hz,1H),7.79(t,J＝6.6Hz,1H),7.54(dd,J＝16.7,8.9Hz,2H),7.09(d,J＝1.7Hz,1H),6.36(s,2H),4.02-4.22(m,1H),3.65-3.78(m,2H),3.46-3.57(m,4H),3.40-3.45(m,1H),3.22-3.33(m,1H),3.03-3.15(m,1H),2.50-2.60(m,1H),1.74-1.84(m,1H),1.61-1.73(m,1H),1.16-1.37(m,2H).LC-MS:m/z＝568[M+1]+。
实施例3 2-(3-(3-氨基-4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基)-1-
(1-(嘧啶-4-甲酰基)哌啶-4-基)氮杂环丁-3-基)乙腈
步骤A：2-(1-(1-(嘧啶-4-甲酰基)哌啶-4-基)氮杂环丁-3-亚基)乙腈
参照实施例1中所述的步骤C来制备化合物(570mg,收率＝99％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.28(s,1H),8.93(d,J＝5.0Hz,1H),7.63(d,J＝4.8Hz,1H),5.33(s,1H),4.17-4.26(m,1H),4.11(s,2H),4.01(s,2H),3.70-3.87(m,1H),3.40-3.50(m,1H),3.24-3.37(m,1H),2.54-2.65(m,1H),1.70-1.92(m,2H),1.41-1.59(m,2H)。
步骤B：2-(3-(3-氨基-4-(7-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基)-1-(1-(嘧啶-4-甲酰基)哌啶-4-基)氮杂环丁-3-基)乙腈
参照实施例1中所述的步骤H来制备化合物(980mg,收率＝82％)。
步骤C：2-(3-(3-氨基-4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基)-1-(1-(嘧啶-4-甲酰基)哌啶-4-基)氮杂环丁-3-基)乙腈
参照实施例1中所述的步骤E中的方法1来制备化合物(150mg,收率＝20％)。1HNMR(400MHz,DMSO):δ12.06(s,1H),9.24(s,1H),8.95(d,J＝5.1Hz,1H),8.65(s,1H),8.50(s,1H),7.65(d,J＝5.1Hz,1H),7.54(s,1H),7.06(s,1H),6.33(s,2H),4.02-4.13(m,1H),3.68(d,J＝7.7Hz,2H),3.38-3.54(m,5H),3.16-3.26(m,1H),3.03-3.14(m,1H),2.50-2.57(m,1H),1.72-1.82(m,1H),1.59-1.70(m,1H),1.18-1.33(m,2H).LC-MS:m/z＝484[M+1]+。
实施例4 2-(3-(3-氨基-4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基)-1-
(1-(2-三氟甲基嘧啶-4-甲酰基)哌啶-4-基)氮杂环丁-3-基)乙腈
步骤A：2-(1-(1-(2-三氟甲基嘧啶-4-甲酰基)哌啶-4-基)氮杂环丁-3-亚基)乙腈
参照实施例1中所述的步骤C来制备化合物(480mg,收率＝95％)。
步骤B：2-(3-(3-氨基-4-(7-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基)-1-(1-(2-三氟甲基嘧啶-4-甲酰基)哌啶-4-基)氮杂环丁-3-基)乙腈
参照实施例1中所述的步骤H来制备化合物(780mg,收率＝78％)。
步骤C：2-(3-(3-氨基-4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基)-1-(1-(2-三氟甲基嘧啶-4-甲酰基)哌啶-4-基)氮杂环丁-3-基)乙腈
参照实施例1中所述的步骤E中的方法1来制备化合物(185mg,收率＝32％)。LC-MS:m/z＝552[M+1]+。
实施例5 4-(3-(3-氨基-4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基)-3-
(氰基甲基)氮杂环丁-1-基)-N-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-甲酰胺
步骤A：4-(3-(氰基甲叉)氮杂环丁-1-基)-N-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-甲酰胺
将325mg(1.8mmol,1.2eq)4-氟-2-三氟甲基苯胺和760mg(7.5mmol,5.0eq)三乙胺溶于20mL二氯甲烷中，冰浴下加入225mg(0.76mmol,0.5eq)三光气，保持冰浴搅拌反应5分钟，一次性加入320mg(1.5mmol,1.0eq)2-(1-(哌啶-4-基)氮杂环丁-3-亚基)乙腈盐酸盐，加0毕缓慢升至室温反应过夜。向反应体系加入50mL水淬灭反应，用二氯甲烷萃取水相，将有机相通过无水硫酸钠干燥，减压蒸干，残余物通过柱层析(PE:EA＝1:1～0:1)得产物(324mg,收率＝57％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.98(dd,J＝8.9,5.0Hz,1H),7.25-7.32(m,1H),7.19-7.24(m,1H),6.66(s,1H),5.28(s,1H),4.02-4.09(m,2H),3.92-4.01(m,2H),3.77-3.85(m,2H),3.15-3.20(m,2H),2.42-2.53(m,1H),1.71-1.82(m,2H),1.44-1.37(m,2H)。
步骤B：4-(3-(3-氨基-4-(7-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基)-3-(氰基甲基)氮杂环丁-1-基)-N-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-甲酰胺
参照实施例1中所述的步骤H来制备化合物(500mg,收率＝84％)。
步骤C：4-(3-(3-氨基-4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基)-3-(氰基甲基)氮杂环丁-1-基)-N-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-甲酰胺
参照实施例1中所述的步骤E中的方法1来制备化合物(90mg,收率＝22％)。1H NMR(400MHz,DMSO):δ12.09(s,1H),8.68(s,1H),8.53(s,1H),8.25(s,1H),7.62-7.44(m,4H),7.09(s,1H),6.36(s,2H),3.80-3.93(m,2H),3.66-3.75(m,2H),3.55-3.46(m,4H),2.94-3.09(m,2H),2.37-2.49(m,1H),1.63-1.75(m,2H),1.10-1.24(m,2H).LC-MS:m/z＝583[M+1]+。
实施例6甲基5-(3-(3-氨基-4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基)-
3-(氰基甲基)氮杂环丁-1-基)吡嗪-2-羧酸
步骤A：甲基5-(3-(氰基甲叉)氮杂环丁-1-基)吡嗪-2-羧酸
将520mg(4.0mmol,1.0eq)5-氯吡嗪-2-羧酸甲酯、690mg(4.0mmol,1.0eq)2-(1-(哌啶-4-基)氮杂环丁-3-亚基)乙腈盐酸盐和1.6g(12mmol,3.0eq)N-N-二异丙基乙基胺溶于20mL二氧六环中，将反应体系搅拌下加热回流2小时。TLC监控反应完毕，将体系冷却至室温，将体系倒入150mL水中，将悬浊液过滤，滤饼依次用水和***洗涤，收集滤饼，真空干燥得产物(840mg,收率＝91％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.85(s,1H),7.89(s,1H),5.53(s,1H),5.01(s,2H),4.93(s,2H),3.97(s,3H)。
步骤B：甲基5-(3-(3-氨基-4-(7-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基)-3-(氰基甲基)氮杂环丁-1-基)吡嗪-2-羧酸
参照实施例1中所述的步骤H来制备化合物(820mg,收率＝86％)。
步骤C：甲基5-(3-(3-氨基-4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基)-3-(氰基甲基)氮杂环丁-1-基)吡嗪-2-羧酸
参照实施例1中所述的步骤E中的方法2来制备化合物(40mg,收率＝48％)。1H NMR(400MHz,DMSO-D6):δ12.09(s,1H),8.71(d,J＝1.3Hz,1H),8.67(d,J＝2.6Hz,2H),8.07(d,J＝1.3Hz,1H),7.59-7.54(m,1H),7.11(dd,J＝3.5,1.6Hz,1H),6.43(s,2H),4.81(d,J＝10.0Hz,2H),4.48(d,J＝9.9Hz,2H),3.82(s,3H),3.73(s,2H).LC-MS:m/z＝431[M+1]+。
实施例7(S)-4-(3-(3-氨基-4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基)-
3-(氰基甲基)氮杂环丁-1-基)-2,5-二氟-N-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)苯甲酰胺
步骤A：(S)-4-氯-2,5-二氟-N-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)苯甲酰胺
将1.5g(10.0mmol,1.0eq)(S)-1,1,1-三氟丙烷-2-胺盐酸盐和3.9g(30.0mmol,3.0eq)N,N-二异丙基乙基胺溶解于30mL二氯甲烷中，冰浴下缓慢加入2.11g(10.0mmol,1.0eq)4-氯-2,5-二氟苯甲酰氯，加毕缓慢升至室温反应1小时。TLC监控反应完毕，加入100mL饱和碳酸氢钠淬灭反应，用二氯甲烷萃取水相，将有机相通过无水硫酸钠干燥，减压蒸干，残余物通过柱层析得产物(2.5g,收率＝87％)。
步骤B:(S)-4-(3-(氰基甲叉)氮杂环丁-1-基)-2,5-二氟-N-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)苯甲酰胺
参照专利US20150246046A1 Paragraph0166中所述的方法来制备化合物(350mg,收率＝56％)。
步骤C：(S)-4-(3-(3-氨基-4-(7-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基)-3-(氰基甲基)氮杂环丁-1-基)-2,5-二氟-N-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)苯甲酰胺
参照实施例1中所述的步骤H来制备化合物(260mg,收率＝82％)。
步骤D：(S)-4-(3-(3-氨基-4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基)-3-(氰基甲基)氮杂环丁-1-基)-2,5-二氟-N-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)苯甲酰胺
参照实施例1中所述的步骤E中的方法2来制备化合物(46mg,收率＝53％)。LC-MS:m/z＝546[M+1]+。
实施例8 5-(3-(3-氨基-4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基)-3-
(氰基甲基)氮杂环丁-1-基)-N-异丙基吡嗪-2-甲酰胺
步骤A：5-(3-(3-氨基-4-(7-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基本)-3-(氰基甲基)氮杂环丁-1-基)吡嗪-2-羧酸
将200mg(0.37mmol,1.0eq)甲基5-(3-(3-氨基-4-(7-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基)-3-(氰基甲基)氮杂环丁-1-基)吡嗪-2-羧酸溶解在10mL甲醇和3mL水的混合液中，加入52mg(1.1mmol,3.0eq)一水和氢氧化锂，室温搅拌反应过夜。TLC监控反应完毕，蒸干溶剂，加入15mL水，用0.5N盐酸溶液调节pH至2～3，将悬浊液过滤，滤饼用水洗涤，收集滤饼，真空干燥得产物(195mg,quant)。
步骤B:5-(3-(3-氨基-4-(7-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-yl)-1H-吡唑-1-基)-3-(氰基甲基)氮杂环丁-1-基)-N-异丙基吡嗪-2-甲酰胺
参照实施例1中所述的步骤C来制备化合物(100mg,收率＝49％)。
步骤C:5-(3-(3-氨基-4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基)-3-(氰基甲基)氮杂环丁-1-基)-N-异丙基吡嗪-2-甲酰胺
参照实施例1中所述的步骤E中的方法2来制备化合物(60mg,收率＝77％)。1H NMR(400MHz,DMSO-D6):δ12.09(s,1H),8.71-8.62(m,3H),8.13(d,J＝8.4Hz,1H),7.97(d,J＝1.4Hz,1H),7.57(dd,J＝3.5,2.5Hz,1H),7.11(dd,J＝3.6,1.8Hz,1H),6.43(s,2H),4.78(d,J＝9.7Hz,2H),4.45(d,J＝9.6Hz,2H),4.15-4.06(m,1H),3.73(s,2H),1.17(d,J＝6.6Hz,6H).LC-MS:m/z＝458[M+1]+。
实施例9 2-(3-(3,5-二氨基-4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基)-
1-(1-(3-氟-2-(三氟甲基)异烟酰基)哌啶-4-基)氮杂环丁-3-基)乙腈
步骤A：2-(7-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)丙二腈
室温搅拌下，10.0g(35.2mmol,1.0eq.)4-氯-7-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶加入到3.5g(53mmol,1.5eq.)丙二腈和7.2g(53mmol,1.5eq.)碳酸钾的混合物中。反应物升温到60℃反应6小时。冷却至室温，加水淬灭，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到目标化合物(9.3g,收率＝84％)。
步骤B：4-(7-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,5-二氨基-1H-吡唑
室温搅拌下，7.5g 85％含量水合肼(127mmol,10.0eq.)加入到4.0g(12.8mmol,1.0eq.)2-(7-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)丙二腈的100mL无水乙醇溶液中。反应液氮气保护下90℃搅拌回流过夜。冷却至室温，减压浓缩，抽滤，干燥得目标化合物(1.98g,收率＝45％)。LC-MS:m/z＝346[M+1]+。
步骤C：2-(3-(3,5-二氨基-4-(7-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基)-1-(1-(3-氟-2-(三氟甲基)异烟酰基)哌啶-4-基)氮杂环丁-3-基)乙腈
参照实施例1中所述的步骤H来制备化合物(110mg,收率＝60％)。
步骤D：2-(3-(3,5-二氨基-4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基)-1-(1-(3-氟-2-(三氟甲基)异烟酰基)哌啶-4-基)氮杂环丁-3-基)乙腈
参照实施例1中所述的步骤I来制备化合物(54mg,收率＝51％)。LC-MS:m/z＝584[M+H]+.
实施例10-16
以下化合物按照上述实施例用类似的方法合成。
实施例17 2-(3-(3-氨基-4-(9H-嘌呤-6-基)-1H-吡唑-1-基)-1-(1-(3-氟-2-(三
氟甲基)异烟酰基)哌啶-4-基)氮杂环丁-3-基)乙腈
参照实施例1中所述的步骤，将4-氯-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶替换为6-氯嘌呤，用来制备目标化合物(67mg)。LC-MS:m/z＝570[M+H]+.
实施例18-24
以下化合物按照上述实施例用类似的方法合成。
实施例25 2-(3-(3,5-二氨基-4-(9H-嘌呤-6-基)-1H-吡唑-1-基)-1-(1-(3-氟-
2-(三氟甲基)异烟酰基)哌啶-4-基)氮杂环丁-3-基)乙腈
参照实施例1和实施例9中所述的步骤，将4-氯-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶替换为6-氯嘌呤，用来制备目标化合物(68mg)。LC-MS:m/z＝585[M+H]+.
实施例26-32
以下化合物按照上述实施例用类似的方法合成。
效果评估
1.化合物酶学活性(IC50)检测
采取Lance Ultra原理建立JAK1/2/3激酶活性检测平台，进行化合物活性的测定，同时测定已知的Itacitinib作为对照。在检测板中，将酶、Ulight标记的多肽底物、ATP以及检测化合物混合，并孵育反应。反应后，加入EDTA终止反应，并同时加入Eu标记的抗体进行检测。检测板使用PE公司的Envision进行分析，分析模式为TR-FRET，数据分别用荧光信号665nm和615nm的读数来表示。其中665nm/615nm的高比值表示酶活性较高，而665nm/615nm的低比值则表示酶活性受到抑制。
试剂：激酶(JAK1/2/3)、底物(ULight-JAK-1peptide和ATP)、检测试剂(Eu-W1024Anti-phosphotyrosine和EDTA)。
仪器：Echo、Envision。
将待测化合物溶解成10mM的DMSO溶液，并放置于氮气柜中长期保存。取10μL10mM待测化合物溶液稀释成为1mM的工作溶液，用Echo按照3倍进行稀释，共11个浓度，最终反应体系中化合物的浓度为10μM至0.17nM。用电动移液器向检测板中加入5μL酶和多肽底物混合液，离心检测板，将检测板置于室温(23℃)孵育15分钟，用电动移液器向检测板中加入5μL含有ATP的激酶缓冲液，离心检测板，并使用铝箔封板，将检测板置于室温(23℃)孵育90分钟。终止反应，用电动移液器向检测板中加入检测试剂，离心检测板，并使用铝箔封板，将检测板置于室温(23℃)孵育半小时，用Envision仪器检测反应板的信号值。结果如表1所示。
表1.化合物的JAK酶抑制活性
2.药代动力学实验
将雌性SD大鼠分组，每组3只，分别口服单次灌胃给予实施例化合物以及Itacitinib的混悬液(5mg/kg)。动物在实验前禁食过夜，禁食时间从给药前10小时至给药后4小时。口服组给药后0.25、0.5、1、2、4、8、12、和24小时采血。使用小动物麻醉机经异氟烷麻醉后通过眼底静脉丛采取0.3mL全血，放于肝素抗凝管中，样品于4℃、4000rpm离心5min，血浆转移至离心管中，并放于-80℃保存直到分析。血浆中样品使用蛋白质沉淀法萃取，萃取液通过LC/MS/MS分析。药代动力学实验结果如表2所示。
表2.大鼠灌胃给予5mg/kg不同化合物后的药代动力学参数
由表2结果可知，本发明的实施例1化合物的药代动力学性能明显优于现有化合物Itacitinib。按照同样的方法测试本发明其余的实施例化合物，所得的药代动力学性能也明显优于Itacitinib。
3.在小鼠皮下异种移植瘤模型中有效性的测定
SPF级CB-17SCID小鼠，雌性，4-5周龄，按每组5只进行分组。将无血清培养基混悬的HEL细胞悬液0.1ml(含5.0×106cells，30％Matrigel)皮下注射于每只小鼠左右两侧腋下部位。待平均肿瘤体积大于100mm3时，将各鼠按流水号标记，分别测量其肿瘤大小及体重，按肿瘤体积从小到大随机分组，并适当调整使各组动物的平均体重亦处于同一水平。分组当天开始口服给药，期间每周测量肿瘤体积及体重2次，以肿瘤生长抑制率(TGI)为检测指标。
肿瘤生长抑制率计算公式为TGI(％)＝(1-(治疗组肿瘤体积-治疗组分组时肿瘤体积)/(对照组肿瘤体积-对照组分组时肿瘤体积))×100％
结果如表3所示。
表3.小鼠体内药效模型
由表3结果可知，本发明的实施例1化合物对小鼠具有良好的肿瘤抑制效果，同样剂量下明显优于现有化合物Itacitinib。按照同样的方法测试本发明其余的化合物，所得的肿瘤抑制效果也明显优于Itacitinib。
虽然为了说明本发明，已经公开了本发明的优选实施方案，但是本领域的技术人员应当理解，在不脱离权利要求书所限定的本发明构思和范围的情况下，可以对本发明做出各种修改、添加和替换。
Claims (16)
1.一种如通式(Ⅰ)所示的吡咯并嘧啶衍生的化合物或其药学上可接受的盐，
其中，
L选自-C(＝O)-、-S(＝O)2-或-CONH-；
X选自CR4或N；
Ar选自取代或未取代的以下基团：C3～8环烷基、C3～8杂环基、C6～20芳基或C5～20杂芳基，取代基选自卤素、C1～8烷基、C1～8卤代烷基或C1～8烷氧基；
R1选自取代或未取代的以下基团：卤素、氨基、C1～8烷基、C1～8烷氧基、C2-8烯基、C2-8炔基、C3～8环烷基、C3～8杂环基、C6～20芳基或C5～20杂芳基；取代基选自卤素、C1～8烷基、C1～8卤代烷基、C1～8烷氧基、C3～8环烷基、C3～8杂环基、C6～20芳基、C5～20杂芳基、氰基、氨基、羟基、羧基或巯基；
R2选自-NHR7、羟基或巯基，其中的R7选自取代或未取代的以下基团：氢、卤素、C1～6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1～6烷基酰基、C1～6烷基磺酰基、C1～6卤代烷基或C1～6烷氧基；取代基选自氰基、氨基、羟基、羧基、巯基、C3～6环烷基、C3～8杂环基、C6～20芳基或C5～20杂芳基；
R3选自氢、卤素、C1～6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1～6卤代烷基、C1～6烷氧基、氰基、氨基、羟基、羧基或巯基；
R4选自氢、卤素或C1～6烷基；
R5选自氰基、-CONH2或羧基；
R6选自氢、卤素或C1～6烷基。
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，当Ar选自杂环基或杂芳基时，L与所述杂环基或杂芳基的杂原子相连；和\或
当L选自-CONH-时，Ar与羰基相连。
3.根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述Ar选自取代或未取代的以下基团：C5～7环烷基、C6～12芳基或含有至少一个杂原子的C5～12杂环基或C5～12杂芳基，所述杂原子选自N、O或S；取代基选自卤素。
4.根据权利要求3所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述Ar选自取代或未取代的含有1～3个N原子的C5～6杂环基或C5～6杂芳基。
5.根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述R2选自-NHR7，其中的R7选自取代或未取代的以下基团：氢、卤素、C1～4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1～4烷基酰基、C1～4烷基磺酰基、C1～4卤代烷基或C1～4烷氧基；取代基选自氰基、氨基、羟基、羧基、巯基、C3～5环烷基、C3～6杂环基、C6～12芳基或C5～12杂芳基。
6.根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述X选自CH。
7.根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述R1选自取代或未取代的以下基团：C1～6烷基、C1～6烷氧基、C3～6环烷基、C6～12芳基、含有至少一个杂原子的C3～6杂环基或C5～12杂芳基，所述杂原子选自N、O或S。
8.根据权利要求7所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述R1选自取代或未取代的以下基团：C1～4烷基、C1～4烷氧基、苯基、联苯基、萘基、含有1～3个N原子的C5～6杂环基或C5～6杂芳基；取代基选自卤素、C1～4烷基或C1～4卤代烷基。
9.根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述R3选自氢、卤素、C1～4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1～4卤代烷基、C1～4烷氧基、氰基、氨基、羟基、羧基或巯基。
10.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述化合物选自以下结构：
11.一种药物组合物，其包含权利要求1-10任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学可接受的载体。
12.权利要求1-10任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及权利要求11所述的药物组合物在制备用于治疗两面神激酶介导的疾病的药物中的用途。
13.根据权利要求12所述的用途，其中，所述两面神激酶介导的疾病为肿瘤或自身免疫性疾病。
14.根据权利要求12所述的用途，其中，所述两面神激酶介导的疾病为白血病、淋巴瘤、非小细胞肺癌、结肠癌、骨髓增殖性肿瘤或骨髓异常综合征。
15.根据权利要求12所述的用途，其中，所述两面神激酶介导的疾病为类风湿性关节炎、银屑病性关节炎、移植物抗宿主病、非感染性葡萄膜炎、克罗恩病、溃疡性结肠炎、强直性脊柱炎或自身免疫性皮肤病。
16.根据权利要求15所述的用途，其中，所述自身免疫性皮肤病为银屑病、特异性皮炎、白癜风、瘙痒症、硬皮病、斑秃、全秃、普秃或雄激素性秃发。
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