CN109819649B - 氨基嘌呤化合物的固体形式及其使用方法 - Google Patents

氨基嘌呤化合物的固体形式及其使用方法 Download PDF

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Abstract

本文提供了与(1s,4s)‑4‑(2‑(((3S,4R)‑3‑氟四氢‑2H‑吡喃‑4‑基)氨基)‑8‑((2,4,6‑三氯苯基)氨基)‑9H‑嘌呤‑9‑基)‑1‑甲基环己烷‑1‑甲酰胺相关的制剂、固体形式和使用方法。

Description

氨基嘌呤化合物的固体形式及其使用方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2016年4月1日提交的美国临时专利申请号 62/317,468的优先权，所述临时专利申请以引用的方式整体且出于所有目的并入本文。
技术领域
本文提供了顺式-4-[2-{[(3S,4R)-3-氟噁烷-4-基]氨基}-8-(2,4,6-三氯苯胺基)-9H-嘌呤-9-基]-1-甲基环己烷-1-甲酰胺，或者名称为(1s,4s)-4-(2-(((3S,4R)-3-氟四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-8-((2,4,6-三氯苯基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-1-甲基环己烷-1-甲酰胺的固体形式，以及其用于治疗癌症的方法。
背景技术
鉴于固体形式的变化可能影响多种物理和化学特性，这可能会提供加工、配制、稳定性、生物利用度、储存、搬运(例如，运送)以及其他重要的药物特征方面的益处或缺点，鉴别和选择药物化合物的固体形式是复杂的。有用的药物固体包括结晶固体和非晶形固体，这取决于产品及其施用方式。非晶形固体的特征在于缺乏长程结构有序性，而结晶固体的特征在于结构周期性。所需的药物固体类别取决于具体应用；有时根据例如增强的溶解概况选择非晶形固体，而结晶固体对于诸如例如物理或化学稳定性的性质可能是合乎需要的(参见例如，S.R.Vippagunta等人,Adv.Drug.Deliv.Rev.,(2001)48:3-26；L.Yu,Adv.Drug.Deliv.Rev.,(2001)48:27-42)。
无论是结晶还是非晶形，药物化合物的固体形式包括单组分固体和多组分固体。在不存在其他化合物的情况下，单组分固体基本上由药物化合物或活性成分组成。单组分结晶材料的变异性可潜在源于多晶型现象，其中对于特定药物化合物存在多种三维排列(参见例如， S.R.Byrn等人,Solid State Chemistry of Drugs,(1999)SSCI,WestLafayette)。RitonavirTM(一种配制成软明胶胶囊的HIV蛋白酶抑制剂) 的情况强调了发现多晶型物的重要性。在所述产品投放大约两年后，制剂中新的、溶解性较差的多晶型物的意外沉淀需要将产品从市场撤回，直到可开发出更一致的配方(参见S.R.Chemburkar等人,Org. Process Res.Dev.,(2000)4:413-417)。
值得注意的是，如果化合物的结晶形式甚至存在，则不可能预测先验，更不用说如何成功地制备它们(参见例如，Braga和Grepioni, 2005,“Making crystals fromcrystals:a green route to crystal engineering and polymorphism,”Chem.Commun.:3635-3645(关于晶体工程，如果说明书不是非常精确和/或如果其他外部因素影响所述过程，则结果可能是不可预测的)；Jones等人,2006,Pharmaceutical Cocrystals:AnEmerging Approach to Physical Property Enhancement,”MRS Bulletin 31:875-879(目前通常不可能计算地预测甚至最简单分子的可观察多晶型物的数量)；Price,2004,“The computational prediction of pharmaceutical crystal structures andpolymorphism,”Advanced Drug Delivery Reviews 56:301-319(“Price”)；以及Bernstein,2004,“Crystal Structure Prediction and Polymorphism,”ACATransactions 39:14-23(在人们能够以任何置信度说明预测晶体结构、更不用说多晶型的能力之前，仍然需要学习和完成很多工作))。
各种可能的固体形式在给定药物化合物的物理和化学性质方面产生潜在多样性。固体形式的发现和选择在开发有效、稳定且可销售的药物产品中具有重要意义。
已知异常蛋白质磷酸化与疾病的原因或后果之间的联系超过20 年。因此，蛋白激酶已成为非常重要的药物靶标组。(参见Cohen, Nature,1:309-315(2002),Gaestel-等人Curr.Med.Chem.14:2214-223 (2007)；Grimminger等人Nat.Rev.Drug Disc.9(12):956-970(2010))。各种蛋白激酶抑制剂已经在临床上用于治疗多种疾病，如癌症和慢性炎性疾病，包括类风湿性关节炎和银屑病。(参见Cohen,Eur.J. Biochem.,268:5001-5010(2001)；Protein Kinase Inhibitors for the Treatment of Disease:The Promise and theProblems,Handbook of Experimental Pharmacology,Springer Berlin Heidelberg,167(2005))。
癌症的特征主要在于源自给定正常组织的异常细胞数量的增加、这些异常细胞对邻近组织的侵袭或恶性细胞向局部***和远处部位的淋巴或血源性传播(转移)。临床数据和分子生物学研究表明，癌症是以微小肿瘤前变化开始的多步骤过程，所述肿瘤前变化可在某些条件下进展为瘤形成。肿瘤病变可克隆性地演化并且发展增加的侵袭、生长、转移和异质性能力，尤其是在肿瘤细胞逃避宿主免疫监视的条件下(Roitt,I.,Brostoff,J和Kale,D.,Immunology,17.1-17.12(第3 版,Mosby,St.Louis,Mo.,1993))。
癌症是全球死亡的主要原因之一，在2012年造成820万人死亡。预计每年癌症病例将从2012年的1400万上升至未来二十年内的2200 万(参见Cancer Fact sheet No 297,World Health Organization,2014年2 月,2014年6月10日检索和Globocan 2012,IARC)。
用于癌症治疗的目前药物是高毒性的并且通常是非特异性的。目前的抗癌治疗策略通常集中于快速增殖细胞，其可缩小原发性和转移性肿瘤，但是此类作用通常是短暂的并且经常发生大多数转移性癌症的肿瘤复发。失败的一个可能原因是癌症干细胞的存在。与肿瘤内的大多数细胞不同，癌症干细胞对明确定义的化学疗法具有抗性，并且在治疗后，它们可通过其很大程度上静止性质的干细胞样行为及其丰富的药物转运蛋白表达来再生肿瘤中的所有细胞类型。
在医学文献中详细描述了各种各样的癌症。因为新的癌症发展并且因为易感群体(例如，感染AIDS或过度暴露于阳光的人)增长，癌症的发病率随着一般群体老龄化而持续攀升。然而，用于治疗癌症的选择是有限的。因此，对可用于治疗癌症患者的新方法和组合物存在巨大需求。
本申请的章节中对任何参考文献的引用或鉴别不应被解释为承认所述参考文献是本申请的现有技术。
因此，仍然需要癌症疗法，例如调节剂，并且特别是固体形式。
发明内容
本文提供了化合物1的固体形式：
Figure GDA0003834579080000031
其具有名称顺式-4-[2-{[(3S,4R)-3-氟噁烷-4-基]氨基}-8-(2,4,6-三氯苯胺基)-9H-嘌呤-9-基]-1-甲基环己烷-1-甲酰胺，或者名称为 (1s,4s)-4-(2-(((3S,4R)-3-氟四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-8-((2,4,6-三氯苯基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-1-甲基环己烷-1-甲酰胺，包括其互变异构体。
还提供了制备、分离和表征所述固体形式的方法。
在某些方面，本文所述的化合物1的固体形式适用于治疗或预防一种或多种疾病或病状，例如像癌症。
本文提供了治疗癌症，特别是实体瘤或血液癌症的方法。本文提供的本文所述的化合物1的固体形式可用于治疗或预防癌症，特别是实体瘤或血液癌症的方法中，如本文所述。所述方法包括向有需要的对象施用有效量的本文所述的化合物1的固体形式。本文还提供了用于治疗和预防癌症转移的方法，所述方法包括向有需要的对象施用有效量的本文所述的化合物1的固体形式。本文提供的本文所述的化合物1的固体形式可用于治疗和预防癌症转移的方法中。另外，本文提供了根除对象的癌症干细胞的方法，所述方法包括向有需要的对象施用有效量的本文所述的化合物1的固体形式。本文提供的本文所述的化合物1的固体形式可用于根除对象的癌症干细胞的方法中。还提供了诱导对象的癌症干细胞的分化的方法，所述方法包括向有需要的对象施用有效量的本文所述的化合物1的固体形式。本文提供的本文所述的化合物1的固体形式可用于诱导对象的癌症干细胞的分化的方法中。另一方面，提供了诱导对象的癌症干细胞死亡的方法，所述方法包括向有需要的对象施用有效量的本文所述的化合物1的固体形式。本文提供的本文所述的化合物1的固体形式可用于诱导对象的癌症干细胞死亡的方法中。
可用于本文公开的方法中的化合物包括本文所述的化合物1的固体形式，或其药学上可接受的盐、互变异构体、立体异构体、对映异构体或同位素体。
通过参考详细描述和实施例可更全面地理解本发明的实施方案，所述实施例意图举例说明非限制性实施方案。
附图说明
图1描绘了游离碱结晶形式A-I的XRPD堆叠图。
图2描绘了游离碱形式A的XRPD图。
图3描绘了游离碱形式A的SEM照片。
图4描绘了游离碱形式A的TGA热谱图。
图5描绘了游离碱形式A的DSC热谱图。
图6A描绘了游离碱形式A的DVS等温线图。图6B描绘了图 6A的等温线图的值。
图7描绘了游离碱形式A的1H NMR波谱。
图8描绘了游离碱形式B的XRPD图。
图9描绘了游离碱形式B的TGA热谱图。
图10描绘了游离碱形式B的DSC热谱图。
图11描绘了游离碱形式C的XRPD图。
图12描绘了游离碱形式C的TGA热谱图。
图13描绘了游离碱形式C的DSC热谱图。
图14描绘了游离碱形式C的1H NMR波谱。
图15描绘了游离碱形式D的XRPD图。
图16描绘了游离碱形式D的SEM照片。
图17描绘了游离碱形式D的TGA热谱图。
图18描绘了游离碱形式D的DSC热谱图。
图19描绘了游离碱形式D的1H NMR波谱。
图20描绘了游离碱形式E的XRPD图。
图21描绘了游离碱形式E的TGA热谱图。
图22描绘了游离碱形式E的DSC热谱图。
图23描绘了游离碱形式F的XRPD图。
图24描绘了游离碱形式F的SEM。
图25描绘了游离碱形式F的TGA热谱图。
图26描绘了游离碱形式F的DSC热谱图。
图27描绘了游离碱形式F的1H NMR波谱。
图28描绘了游离碱形式G的XRPD图。
图29描绘了游离碱形式G的SEM照片。
图30描绘了游离碱形式G的TGA热谱图。
图31描绘了游离碱形式G的DSC。
图32描绘了游离碱形式G的1H NMR波谱。
图33描绘了游离碱形式H的XRPD图。
图34描绘了游离碱形式H的TGA热谱图。
图35描绘了游离碱形式H的DSC热谱图。
图36描绘了游离碱形式I的XRPD图。
图37描绘了游离碱形式I的1H NMR波谱。
图38描绘了游离碱形式I的TGA热谱图。
图39描绘了游离碱形式I的DSC热谱图。
图40描绘了非晶形材料的XRPD图。
图41描绘了非晶形材料的DSC热谱图。
图42描绘了非晶形材料的1H NMR波谱。
图43A描绘了非晶形材料的DVS等温线。图43B描绘了图43A 的DVS等温线图的值。
图44描绘了柠檬酸盐形式Y和Z的XRPD堆叠图。
图45描绘了柠檬酸盐形式Y的XRPD图。
图46描绘了柠檬酸盐形式Y的SEM照片。
图47描绘了柠檬酸盐形式Y的TGA热谱图。
图48描绘了柠檬酸盐形式Y的DSC热谱图。
图49A描绘了柠檬酸盐形式Y的DVS等温线图。图49B描绘了图49A的等温线图的值。
图50描绘了柠檬酸盐形式Y的1H NMR波谱。
图51A描绘了在压缩前柠檬酸盐形式Y的XRPD图的比较。图 51B描绘了在压缩后柠檬酸盐形式Y的XRPD图的比较。
图52描绘了柠檬酸盐形式Z的XRPD图。
图53描绘了柠檬酸盐形式Z的SEM照片。
图54描绘了柠檬酸盐形式Z的TGA热谱图。
图55描绘了柠檬酸盐形式Z的DSC热谱图。
图56A描绘了柠檬酸盐形式Z的DVS等温线图。
图56B描绘了图56A的等温线图的值。
图57描绘了柠檬酸盐形式Z的1H NMR波谱。
图58描绘了柠檬酸盐形式Z的水合物形式的TGA热谱图。
图59描绘了柠檬酸盐形式Z的非化学计量形式的TGA热谱图。
图60描绘了柠檬酸盐形式Z的溶剂化物形式的TGA热谱图。
图61描绘了柠檬酸盐形式Z的溶剂化物形式的1H NMR波谱。
图62A-62B描绘了柠檬酸盐形式Z的XRPD图的比较。图62A 示出压缩之前的XRPD。图62B示出压缩之后的XRPD。
图63描绘了HCl盐起始材料的XRPD图。
图64描绘了HCl盐起始材料的TGA和DSC热谱图。
图65描绘了HCl盐起始材料的DVS等温线图。
图66描绘了HCl盐形式1的XRPD图。
图67描绘了HCl盐形式1的TGA和DSC热谱图。
图68描绘了HCl盐形式2的XRPD图。
图69描绘了HCl盐形式2的TGA和DSC热谱图。
图70描绘了HCl盐形式3的XRPD图。
图71描绘了HCl盐形式3的TGA和DSC热谱图。
图72描绘了HCl盐形式4的XRPD图。
图73描绘了HCl盐形式4的TGA和DSC热谱图。
图74描绘了HCl盐形式5的XRPD图。
图75描绘了HCl盐形式5的TGA和DSC热谱图。
图76描绘了HCl盐形式6的XRPD图。
图77描绘了HCl盐形式6的TGA和DSC热谱图。
图78描绘了HCl盐形式6的TGA热谱图。
图79描绘了HCl盐形式6的DSC热谱图。
图80描绘了HCl盐形式7的XRPD图。
图81描绘了HCl盐形式7的TGA和DSC热谱图。
图82描绘了HCl盐形式7的DSC热谱图。
图83描绘了HCl盐形式7的TGA热谱图。
图84描绘了HCl盐形式7的DVS等温线图。
图85描绘了HCl盐形式8的XRPD图。
图86描绘了HCl盐形式8的TGA和DSC热谱图。
图87描绘了HCl盐形式8的TGA热谱图。
图88描绘了HCl盐形式8的DSC热谱图。
图89描绘了化合物1的XRPD图。
图90描绘了化合物1的TGA热谱图。
图91描绘了化合物1的DSC热谱图。
图92描绘了化合物1的DVS等温线图。
图93描绘了化合物1的1H NMR。
图94描绘了从SGF中的溶解度研究分离的化合物1 HCl盐的 XRPD图。
图95描绘了从SGF中的溶解度研究分离的化合物1 HCl盐的 TGA热谱图。
图96描绘了从SGF中的溶解度研究分离的化合物1 HCl盐的 DSC热谱图。
图97描绘了从SGF中的溶解度研究分离的化合物1 HCl盐的 DVS等温线图。
图98描绘了来自SGF溶解度的化合物1 HCl盐的D6-DMSO中的1H NMR。
图99描绘了来自SVSS孔#H2的化合物1 硫酸盐的D6-DMSO 中的1H NMR。
图100描绘了硫酸盐SVSS孔#A2的TGA热谱图。
图101描绘了硫酸盐SVSS孔#A2的DSC热谱图。
图102描绘了硫酸盐SVSS孔#D2的TGA热谱图。
图103描绘了硫酸盐SVSS孔#D2的DSC热谱图。
图104描绘了硫酸盐SVSS孔#G2的TGA热谱图。
图105描绘了硫酸盐SVSS孔#A2的DSC热谱图。
图106描绘了来自EtOAc中的SVSS研究的甲磺酸盐的XRPD 图。
图107描绘了来自SVSS孔#B4的化合物1甲磺酸盐的D6-DMSO 中的1H NMR。
图108描绘了甲磺酸盐SVSS孔#A4的TGA热谱图。
图109描绘了甲磺酸盐SVSS孔#A4的DSC热谱图。
图110描绘了甲磺酸盐SVSS孔#B4的TGA热谱图。
图111描绘了甲磺酸盐SVSS孔#B4的DVS等温线图。
图112描绘了甲磺酸盐SVSS孔#E4的TGA热谱图。
图113描绘了甲磺酸盐SVSS孔#E4的DSC热谱图。
图114描绘了甲磺酸盐SVSS孔#G4的TGA热谱图。
图115描绘了甲磺酸盐SVSS孔#G4的DSC热谱图。
图116描绘了甲磺酸盐SVSS孔#H4的TGA热谱图。
图117描绘了甲磺酸盐SVSS孔#H4的DSC热谱图。
图118描绘了来自乙醇中的SVSS的化合物1柠檬酸盐的XRPD 图。
图119描绘了来自IPA中的SVSS的化合物1柠檬酸盐的XRPD 图。
图120描绘了来自3-甲基-2-丁醇中的SVSS的化合物1柠檬酸盐的XRPD图。
图121描绘了来自乙腈中的SVSS的化合物1柠檬酸盐的XRPD 图。
图122描绘了来自MTBE中的SVSS的化合物1柠檬酸盐的 XRPD图。
图123描绘了来自丙酮中的SVSS的化合物1柠檬酸盐的XRPD 图。
图124描绘了来自水中的SVSS的化合物1柠檬酸盐的XRPD图。
图125描绘了来自EtOAc中的SVSS的化合物1柠檬酸盐的 XRPD图。
图126描绘了来自乙醇、IPA、MTBA和丙酮中的SVSS的柠檬酸盐的XRPD比较图谱。
图127描绘了来自3-甲基-2-丁醇和乙腈中的SVSS的柠檬酸盐的 XRPD比较图谱。
图128描绘了来自EtOAc和IPA中的SVSS的柠檬酸盐的XRPD 比较图谱。
图129描绘了来自SVSS孔#D9的化合物1柠檬酸盐的D6-DMSO 中的1H NMR。
图130描绘了来自SVSS孔#A9的柠檬酸盐的TGA热谱图。
图131描绘了来自SVSS孔#A9的柠檬酸盐的DSC热谱图。
图132描绘了来自SVSS孔#B9的柠檬酸盐的TGA热谱图。
图133描绘了来自SVSS孔#B9的柠檬酸盐的TGA热谱图。
图134描绘了来自SVSS孔#E9的柠檬酸盐的TGA热谱图。
图135描绘了来自SVSS孔#D9的柠檬酸盐的DSC热谱图。
图136描绘了来自SVSS孔#G9的柠檬酸盐的TGA热谱图。
图137描绘了来自SVSS孔#G9的柠檬酸盐的DSC热谱图。
图138描绘了来自SVSS孔#H9的柠檬酸盐的TGA热谱图。
图139描绘了来自EtOAc孔#H9中的SVSS的柠檬酸盐的DSC 热谱图。
图140描绘了来自SVSS孔#E7的化合物1和磷酸的D6-DMSO 中的1H NMR。
图141描绘了来自SVSS孔#G10的化合物1和苹果酸的 D6-DMSO中的1H NMR。
图142描绘了来自SVSS孔#G11的化合物1和乙醇酸的 D6-DMSO中的1H NMR。
图143描绘了与来自SGF中的游离碱的溶解度的XRPD图(底图) 相比较的HCl盐的XRPD图(顶图)。
图144描绘了HCl盐一水合物(1)的TGA热谱图。
图145描绘了HCl盐一水合物(1)的DSC热谱图。
图146描绘了HCl盐的XRPD图。
图147描绘了HCl盐的TGA热谱图。
图148描绘了HCl盐的DSC热谱图。
图149描绘了在真空下在40℃下干燥的化合物1的XRPD图。
图150描绘了在真空下在40℃下干燥的化合物1的TGA热谱图。
图151描绘了在真空下在40℃下干燥的化合物1的DSC热谱图。
图152描绘了在XRD-DSC阶段加热至140℃之后化合物1HCl 盐一水合物的XRPD图。
图153描绘了化合物1硫酸盐的XRPD图。
图154描绘了化合物1硫酸盐的TGA热谱图。
图155描绘了化合物1硫酸盐的DSC热谱图。
图156描绘了化合物1甲磺酸盐的XRPD图。
图157描绘了化合物1甲磺酸盐的TGA热谱图。
图158描绘了化合物1甲磺酸盐的DSC热谱图。
图159描绘了化合物1甲磺酸盐的XRPD图。
图160描绘了化合物1甲磺酸盐的TGA热谱图。
图161描绘了化合物1甲磺酸盐的DSC热谱图。
图162描绘了在水中浆化后化合物1甲磺酸盐的XRPD图。
图163描绘了化合物1甲磺酸盐的DVS等温线图。
图164描绘了在DVS研究后化合物1甲磺酸盐的XRPD图。
图165描绘了在EtOAc-水***中化合物1柠檬酸盐的XRPD图。
图166描绘了在EtOAc-水***中化合物1柠檬酸盐的TGA热谱图。
图167描绘了在EtOAc-水***中化合物1柠檬酸盐的DSC热谱图。
图168描绘了在丙酮中化合物1柠檬酸盐的XRPD图。
图169描绘了在丙酮中化合物1柠檬酸盐的TGA热谱图。
图170描绘了在丙酮中化合物1柠檬酸盐的DSC热谱图。
图171描绘了化合物1柠檬酸盐的XRPD图。
图172描绘了化合物1柠檬酸盐的TGA热谱图。
图173描绘了化合物1柠檬酸盐的DSC热谱图。
图174描绘了化合物1柠檬酸盐的XRPD图。
图175描绘了化合物1柠檬酸盐的TGA热谱图。
图176描绘了化合物1柠檬酸盐的DSC热谱图。
图177描绘了化合物1柠檬酸盐的XRPD图。
图178描绘了化合物1柠檬酸盐的TGA热谱图。
图179描绘了化合物1柠檬酸盐的DSC热谱图。
图180描绘了化合物1柠檬酸盐的XRPD图。
图181描绘了化合物1柠檬酸盐的TGA热谱图。
图182描绘了化合物1柠檬酸盐的DSC热谱图。
图183描绘了化合物1柠檬酸盐的DVS等温线图。
图184描绘了游离碱(FB)、柠檬酸盐和HCl盐在0.01N HCl溶液中的溶解度。
图185描绘了化合物1游离碱(FB)、柠檬酸盐和HCl盐在0.001N HCl溶液中的溶解度。
图186描绘了游离碱(FB)、柠檬酸盐和HCl盐在FeSSIF中的动力学溶解度。
图187描绘了游离碱(FB)、柠檬酸盐和HCl盐在FaSSIF中的动力学溶解度。
图188示出化合物1处理引起Colo 205(mut BRAFV600E)细胞中 ERK底物pRSK1S380的持续抑制。将Colo 205细胞用DMSO或0.5 μM化合物1处理指定时间。通过MSD测定测量pRSK1 S380(上图)。通过蛋白质印迹检测DUSP4和DUSP6(下图)。
图189A-189I示出化合物1有效抑制Colo 205中的MAP激酶信号传导和下游靶基因。将结肠癌细胞系Colo 205(BRAF V600E)培养物用DMSO或递增浓度的化合物1处理2、8或24小时。图189A示出从处理的细胞中提取并使用针对DUSP4、DUSP6、细胞周期蛋白 D1、c-Myc、YAP或β-肌动蛋白的抗体通过蛋白质印迹进行分析的蛋白质。图189B-189C示出使用Cell-To-CT试剂盒提取的RNA，并且用对DUSP4、DUSP6、SPRY2、c-Myc和细胞周期蛋白D1具有特异性的探针进行定量PCR。β-肌动蛋白的特异性探针用于标准化。图 189D-189I示出化合物1处理调节Colo205(mut BRAFV600E)和 HT-29(mut BRAFV600E)细胞中MAPK驱动的mRNA水平。将Colo 205或HT-29细胞用DMSO或0.3或1μM化合物1处理6小时。使用MagMAX总RNA分离试剂盒提取mRNA并进行定量PCR。
图190A示出化合物1对Colo 205中的WNT/β-连环蛋白和 HIPPO/YAP信号传导途径靶基因的影响。将结肠癌细胞系Colo 205 (BRAF V600E)培养物用DMSO或递增浓度的化合物1处理2、8或 24小时。使用Cell-To-CT试剂盒提取RNA，并且用对Axin2、CTGF 和AREG具有特异性的探针进行定量PCR。β-肌动蛋白的特异性探针用于标准化。图190B-190E示出化合物1处理调控Colo 205(mut BRAFV600E)和HT-29(mut BRAFV600E)细胞中YAP驱动的mRNA水平。将Colo 205或HT-29细胞用DMSO或0.3或1μM化合物1 处理6小时。使用MagMAX总RNA分离试剂盒提取RNA并进行定量PCR。
图191A-191B示出化合物1下调多种癌细胞系中的PD-L1水平。图191A示出Hop66、Karpas-299和LOX-IMVI中总PD-L1的蛋白质印迹。将细胞在存在或不存在化合物1的情况下培养指定时间，然后通过蛋白质印迹测量PD-L1、DUSP4和α-微管蛋白或α-肌动蛋白的表达水平。图191B示出用荧光活化细胞分选仪(FACS)对PD-L1进行的表面染色。将细胞用指定浓度的DMSO或化合物1处理48小时，并用针对PD-L1的APC标记的抗体(克隆29E.1A3.；BioLegend,San Diego,CA)使用FACS分析检测PD-L1的细胞表面表达。通过FlowJo 10(Treestar,Ashland,OR)测定PD-L1阳性细胞的几何平均值。
图192A-192B示出化合物1处理的KARPAS-299细胞通过在体外用超抗原(SEB)刺激的PBMC源性的T细胞增加IL-2(图192A)和 IFNγ(图192B)的产生。将KARPAS-299细胞用指定浓度的DMSO(D) 或化合物1处理48小时。将来自健康供体的PBMC用或不用20ng/ml SEB处理48小时。在用PBS洗涤后，将PBMC与癌细胞一起孵育 24小时，并且收集上清液以使用MSD测定测量IL-2和IFNγ。图192C 示出在PBMC培养基中测定化合物1处理对IL-8水平的影响。从全血中分离PBMC并在RPMI培养基加10％FBS中培养。将PBMC以 1x106/毫升铺在10cm2培养皿中。将PBMC用0.1％DMSO或0.5μM 化合物1处理。在指定的时间点停止处理。将PBMC沉淀并用于蛋白质印迹分析，且取得1mL培养基进行IL-8分析。根据制造商的说明书，用中等规模V-Plex人IL-8试剂盒进行IL-8分析。显示化合物 1在不同时间点抑制IL-8水平。
图193示出化合物1在LOX-IMVI异种移植物模型中的抗肿瘤活性。将雌性SCID小鼠在右侧腹中用1x106个LOX-IMVI肿瘤细胞接种。在治疗开始时将小鼠随机分入处理组(n＝9只/组)。在第13天当肿瘤是大约240mm3时开始测试品处理。
图194示出化合物1在LOX IMVI异种移植物模型中的抗肿瘤活性。将雌性重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠在右侧腹中用1x106个 LOX-IMVI肿瘤细胞接种。在治疗开始时将小鼠随机分入处理组 (n＝10只/组)。在第13天当肿瘤是大约300mm3时开始测试品处理。在最后研究日相对于媒介物对照计算抑制百分比，并且在处理组的相应肿瘤体积旁边的括号中。虚线是给药开始时的肿瘤体积。
图195示出化合物1在Colo 205异种移植物模型中的抗肿瘤活性。将雌性SCID小鼠在右侧腹中用2x106个Colo 205肿瘤细胞接种。在治疗开始时将小鼠随机分入处理组(n＝10只/组)。在第10天当肿瘤是大约160mm3时开始测试品处理。在最后研究日相对于媒介物对照计算抑制百分比，并且在处理组的相应肿瘤体积旁边的括号中。虚线是给药开始时的肿瘤体积。
图196示出化合物1在Colo 205异种移植物模型中的抗肿瘤活性。将雌性SCID小鼠在右侧腹中用2x106个Colo 205肿瘤细胞接种。在治疗开始时将小鼠随机分入处理组(n＝10只/组)。在第10天当肿瘤是大约130或160mm3时开始测试品处理。在最后研究日相对于媒介物对照计算抑制百分比，并且在处理组的相应肿瘤体积旁边的括号中。虚线是给药开始时的肿瘤体积。
图197A-197B示出化合物1在PDX146异种移植物模型中的抗肿瘤活性。将雌性NSG小鼠在右侧腹中用细胞浆液中的25μg PDX146肿瘤接种。在治疗开始时将小鼠随机分入处理组(n＝8-10只/ 组)。在第19天当肿瘤是大约100-110mm3时开始测试品处理。图197A 示出随时间变化的肿瘤体积。图197B 示出在最后研究日，第40天的个体肿瘤体积。在最后研究日相对于媒介物对照计算抑制百分比，并且在处理组的相应肿瘤体积旁边的括号中。虚线是给药开始时的肿瘤体积。Camp＝盐酸伊立替康。
图198示出PDX146异种移植物模型中使用连续化合物1处理的肿瘤生长延迟。将雌性NSG小鼠在右侧腹中用细胞浆液中的25μg PDX146肿瘤接种。在治疗开始时将小鼠随机分入处理组(n＝8-10只/ 组)。在第16天当肿瘤是大约100-110mm3时开始测试品处理。黑色虚线是给药开始时的肿瘤体积，并且红色虚线是第43天当媒介物对照组终止时的肿瘤体积。
图199A-199D示出单剂量的化合物1抑制PDX146异种移植物模型中MAPK、Wnt和Hippo信号传导途径中的生物标志物：用化合物1处理的PDX146肿瘤中MAPK、Wnt和Hippo途径的调节。在给药后的指定时间点对从PDX146肿瘤提取的RNA进行qRT-PCR测定。数据表示为平均值±SEM。P值来自单向ANOVA与Dunnet事后分析。
图200A-200D示出在单剂量施用后化合物1抑制来自PDX146 肿瘤的MAPK、Wnt和Hippo信号传导途径中的生物标志物：用化合物1处理的PDX146肿瘤中MAPK、Wnt和Hippo途径的调节。在给药后的指定时间点对从PDX146肿瘤提取的RNA进行qRT-PCR测定。YAP数据由来自5mg/kg处理组的肿瘤的蛋白质印迹分析产生，并表示为YAP与β-肌动蛋白蛋白质表达的比率。数据表示为平均值±SEM。P值来自单向ANOVA与Dunnet事后分析。
图201A-201D示出通过单剂量施用化合物1来调节磷酸-RSK (pRSK)和磷酸-ERK(pERK)蛋白质水平(MAPK信号传导途径的生物标志物)。在给药后的指定时间点对从PDX146肿瘤提取的蛋白质进行蛋白质印迹(pRSK)或中等规模(pERK)测定。磷酸-RSK数据表示为媒介物对照的％。磷酸-ERK数据表示为平均值±SEM。
图202A-202B示出化合物1在β-连环蛋白突变体SW48结肠直肠异种移植物模型中的抗肿瘤活性。将雌性SCID小鼠在右侧腹中用 2x106个SW48肿瘤细胞接种。在治疗开始时将小鼠随机分入处理组 (n＝10只/组)。在第10天当肿瘤是大约110和105mm3时开始测试品处理(分别图202A和图202B)。黑色虚线是给药开始时的肿瘤体积。左图是剂量反应研究(图A)。右图是进展时间研究，其中将动物在研究过程期间维持服用药物(图B)。虚线是第28天当媒介物对照组终止时的肿瘤体积。
图203示出原位Hep3B2.1-7肝细胞癌异种移植物中的抗肿瘤活性。将雌性SCID小鼠用2x106个Hep3B2.1-7肿瘤细胞/只动物原位接种。在接种后7天，基于体重将动物随机分入处理组并开始处理(研究第0天)。对卫星组进行速率评估，确认100％动物的肝脏中存在肿瘤。化合物1口服给药，QD持续21天。在研究终止当天，取出肿瘤并称重。绘制各组的个体肿瘤重量和平均肿瘤重量±SEM。相对于媒介物对照计算抑制百分比，并且其高于处理组的相应肿瘤重量。P 值来自单向ANOVA与Dunnet事后分析。***＝p<0.001。与媒介物对照相比，化合物1显示肿瘤重量的统计学显著降低。
图204示出化合物1在C-Met扩增的肝细胞癌患者源性的异种移植物模型LI0612中的抗肿瘤活性。将雌性SCID小鼠在右侧腹中用肝细胞癌PDX模型LI0612肿瘤片段(直径2-4mm)接种。在治疗开始时将小鼠随机分入处理组(n＝10只/组)。在第18天当肿瘤是大约150mm3时开始测试品处理。在给药期内，肿瘤生长在媒介物对照和化合物1处理组中进展。注意到用化合物1施用生长动力学的变化，从而导致用30mg/kg处理的显著肿瘤生长抑制(TGI)(与媒介物对照相比， p＝0.038)。
图205示出具有β-连环蛋白突变的细胞系对化合物-1处理的敏感性，并且表明具有突变的β-连环蛋白的细胞系通常对化合物1处理更敏感。
图206A-206E示出细胞系对用化合物1处理的敏感性和抗性。图 206A-206C示出含有BRAF和CTNNB1突变的细胞系对用化合物1 处理比具有野生型BRAF和CTNNB1的细胞系更敏感。图206D和图206E示出在RB和PI3K/PTEN途径中具有突变的细胞系与体外对化合物1处理的抗性相关。
图207示出化合物1调节BRAF和CTNNB1突变细胞系SW48 中的MAPK、β-连环蛋白和YAP。
图208A-208B示出化合物1调节BRAF和CTNNB1突变细胞系 SW48中由MAPK、β-连环蛋白和YAP控制的靶基因表达。
图209示出化合物1抑制人支气管上皮细胞中的Axin2表达。在 24小时测量基因表达。
图210A-210D示出化合物1以高于MEK抑制剂(曲美替尼)和 ERK抑制剂(GDC0994)的水平抑制β-连环蛋白突变细胞的集落形成。图210A示出抑制SW48(colo)细胞的集落形成。图210B示出抑制 HCT-116(colo)细胞的集落形成。图210C示出抑制AGS(胃)细胞的集落形成。图210D示出抑制Hep3B(HCC)细胞的集落形成。
图211示出在集落形成测定中对MEK抑制剂曲美替尼具有抗性的AGS细胞对化合物1敏感。
图212示出用化合物1和曲美替尼处理72小时的8xGTIIC-荧光素酶WI38 VA13细胞中的TEAD报道基因活性。使用Bright Glo荧光素酶测定(Promega)分析荧光素酶活性。化合物1抑制TEAD报道基因活性，在24小时测定中平均IC50为>10μM，并且在72小时测定中平均IC50为1.85μM(三次实验的累积数据)。在三种测定中，化合物1没有可再生性地影响存活力。曲美替尼在24或72小时不抑制 TEAD报道基因活性。
具体实施方式
定义
如本文以及说明书和所附权利要求中所用，除非上下文另有明确说明，否则不定冠词“一个/种(a)”和“一个/种(an)”以及定冠词“所述”包括复数以及单个指示物。
如本文所用且除非另有说明，否则术语“约”和“大约”，在结合组合物或剂型的成分的剂量、量或重量百分比使用时，是指本领域普通技术人员所认识到的提供与从指定剂量、量或重量百分比获得的药理作用等效的药理作用的剂量、量或重量百分比。在某些实施方案中，当在此上下文中使用时，术语“约”和“大约”考虑在指定剂量、量或重量百分比的30％内、20％内、15％内、10％内或5％内的剂量、量或重量百分比。
如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“约”和“大约”当与提供用于表征特定固体形式的数值或值范围(例如，特定温度或温度范围，例如像描述熔融、脱水、去溶剂化或玻璃化转变温度的特定温度或温度范围；质量变化，例如像随温度或湿度变化的质量变化；溶剂或水含量，例如就质量或百分比而言；或峰值位置，例如像通过例如 IR或拉曼光谱学或XRPD的分析；)结合使用时，表示在仍然描述固体形式的同时，所述值或值范围可偏差至本领域普通技术人员认为合理的程度，同时仍然描述所述固体形式。用于表征晶体形式和非晶形固体的技术包括但不限于热解重量分析(TGA)、差示扫描量热法 (DSC)、X射线粉末衍射测定法(XRPD)、单晶X射线衍射测定法、振动光谱法(例如红外(IR)光谱法和拉曼光谱法、固态和溶液核磁共振 (NMR)光谱法、光学显微术、热台光学显微术、扫描电子显微术(SEM)、电子结晶学和定量分析、粒度分析(PSA)、表面面积分析、溶解度研究以及溶解研究。在某些实施方案中，术语“约”和“大约”在此上下文中使用时表示数值或值范围可在所述值或值范围的30％、20％、15％、 10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1.5％、1％、0.5％或 0.25％内变化。例如，在一些实施方案中，XRPD峰值位置的值可变化达±0.1°2θ(或±0.2°2θ)，同时仍然描述特定XRPD峰。
如本文所用并且除非另有说明，“纯”的结晶(即基本上不含其他结晶或非晶形固体)含有少于约10重量％的一种或多种其他结晶或非晶形固体、少于约5重量％的一种或多种其他结晶或非晶形固体的、少于约3重量％的一种或多种其他结晶或非晶形固体或少于约1重量％的一种或多种其他结晶或非晶形固体。
如本文所用并且除非另有说明，“基本上物理纯”的固体形式基本上不含其他固体形式。在某些实施方案中，基本上物理纯的晶体形式含有基于重量少于约10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、 1％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％、0.1％、0.05％或0.01％的一种或多种其他固体形式。其他固体形式的检测可通过对于本领域普通技术人员显而易见的任何方法实现，所述方法包括但不限于衍射分析、热分析、元素燃烧分析和/或光谱分析。
如本文所用并且除非另有说明，“基本上化学纯”的固体形式基本上不含其他化学化合物(即化学杂质)。在某些实施方案中，基本上化学纯的固体形式含有基于重量少于约10％、9％、8％、7％、6％、5％、 4％、3％、2％、1％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％、0.1％、0.05％或0.01％的一种或多种其他化学化合物。其他化学化合物的检测可通过对于本领域普通技术人员显而易见的任何方法实现，所述方法包括但不限于化学分析方法，例如像质谱分析、光谱分析、热分析、元素燃烧分析和/或色谱分析。
如本文所用，并且除非另有说明，否则“基本上不含”另一种化学化合物、固体形式或组合物的化学化合物、固体形式或组合物是指在某些实施方案中，所述化合物、固体形式或组合物含有按重量计少于约10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.4％、 0.3％、0.2％、0.1％、0.05％或0.01％的其他化合物、固体形式或组合物。
除非另外说明，否则如本文所用的术语“溶剂化物”和“溶剂化的”是指含有溶剂的物质的固体形式。术语“水合物”和“水合的”是指溶剂化物，其中所述溶剂是水。“溶剂化物的多晶型物”是指对于特定溶剂化物组合物存在多于一种固体形式。类似地，“水合物的多晶型物”是指对于特定水合物组合物存在多于一种固体形式。如本文所用，术语“去溶剂化的溶剂化物”是指物质的可通过从溶剂化物中除去溶剂而制备的固体形式。如本文所用，术语“溶剂化物”和“溶剂化的”还可指盐、共晶体或分子复合物的溶剂化物。如本文所用，术语“水合物”和“水合的”还可指盐、共晶体或分子复合物的水合物。
“互变异构体”是指彼此平衡的化合物的异构形式。异构形式的浓度将取决于发现化合物的环境，并且可取决于例如化合物是固体还是在有机或水溶液而不同。例如，在水溶液中，吡唑可表现出以下异构形式，其被称为彼此的互变异构体：
Figure GDA0003834579080000161
如本领域技术人员容易理解的，多种官能团和其他结构可表现出互变异构，并且化合物1的所有互变异构体都在本发明的范围内。
除非另外说明，否则如本文所用的术语“组合物”意图涵盖包含一种或多种指定成分(并且处于一种或多种指定量，如果指明)的产品，以及直接或间接地由一种或多种指定量的一种或多种指定成分的组合产生的任何产品。“药学上可接受的”是指制剂中的稀释剂、赋形剂或载体必须与制剂的一种或多种其他成分相容并且对于其受体无害。
术语“固体形式”是指主要不呈液态或气态的物理形式。术语“固体类型”和“类型”在本文中可与“固体形式”互换使用。如本文所用并且除非另有说明，否则术语“固体形式”当在本文中用于指化合物1时，是指包含化合物1的主要不呈液态或气态的物理形式。固体形式可以是结晶形式或其混合物。在某些实施方案中，固体形式可以是液晶。在某些实施方案中，术语“包含化合物1的固体形式”包括包含化合物 1的晶体形式。在某些实施方案中，化合物1的固体形式是形式A、形式B、形式C、形式D、形式E、形式F、形式G、形式H、形式I、非晶形固体或其混合物。在一个实施方案中，化合物1的固体形式是柠檬酸盐形式Y或柠檬酸盐形式Z。在某些实施方案中，化合物1 的固体形式是HCl盐形式1、HCl盐形式2、HCl盐形式3、HCl盐形式4、HCl盐形式5、HCl盐形式6、HCl盐形式7、HCl盐形式8、非晶形固体或其混合物。
如本文所用并且除非另有说明，否则术语“结晶”在用于描述化合物、物质、改性、材料、组分或产品时除非另外说明是指所述化合物、物质、改性、材料、组分或产品如通过X射线衍射所测定基本上是结晶的。参见例如，Remington:The Science and Practice ofPharmacy, 第21版,Lippincott,Williams and Wilkins,Baltimore,MD(2005)；TheUnited States Pharmacopeia,第23版,1843-1844(1995)。
术语“晶体形式”或“结晶形式”是指结晶的固体形式。在某些实施方案中，物质的晶体形式可基本上不含非晶形固体和/或其他晶体形式。在某些实施方案中，物质的晶体形式可含有按重量计少于约1％、少于约2％，少于约3％、少于约4％、少于约5％、少于约6％、少于约7％、少于约8％、少于约9％、少于约10％、少于约15％、少于约 20％、少于约25％、少于约30％、少于约35％、少于约40％、少于约 45％或少于约50％的一种或多种非晶形固体和/或其他晶体形式。在某些实施方案中，物质的晶体形式可以是物理和/或化学纯的。在某些实施方案中，物质的晶体形式可以是约99％、约98％、约97％、约96％、约95％、约94％、约93％、约92％、约91％或约90％物理和/或化学纯的。
除非另有说明，否则术语“非晶形”或“非晶形固体”是指所讨论的物质、组分或产品如通过X射线衍射所测定基本上不是结晶的。特别地，术语“非晶形固体”描述了无序固体形式，即缺乏长程结晶有序的固体形式。在某些实施方案中，物质的非晶形固体可基本上不含其他非晶形固体和/或晶体形式。在某些实施方案中，物质的非晶形固体可含有基于重量按重量计少于约1％、少于约2％，少于约3％、少于约4％、少于约5％、少于约10％、少于约15％、少于约20％、少于约25％、少于约30％、少于约35％、少于约40％、少于约45％或少于约50％的一种或多种其他非晶形固体和/或晶体形式。在某些实施方案中，物质的非晶形固体可以是物理和/或化学纯的。在某些实施方案中，物质的非晶形固体是约99％、约98％、约97％、约96％、约95％、约94％、约93％、约92％、约91％或约90％物理和/或化学纯的。
如本文所用的“治疗”是指全部或部分地减轻病症、疾病或病状，或与病症、疾病或病状相关的一种或多种症状，或减缓或停止那些症状的进一步进展或恶化，或减轻或根除病症、疾病或病状本身的病因。在一个实施方案中，所述病症是癌症，特别是实体瘤或血液癌症。在一些实施方案中，“治疗”是指全部或部分缓解癌症、特别是实体瘤或血液癌症或与癌症相关的症状，或减缓或停止那些症状的进一步进展或恶化。
如本文所用的“预防”是指全部或部分地延迟和/或排除癌症(特别是实体瘤或血液癌症)的发作、复发或扩散；禁止对象患上癌症(特别是实体瘤或血液癌症)；或降低对象患癌症(特别是实体瘤或血液癌症) 的风险的方法。
与固体形式的化合物1有关的术语“有效量”是指能够治疗或预防本文公开的病症、疾病或病状或其症状的量。有效量是指能够治疗或预防癌症，特别是如本文所公开的实体瘤或血液癌症或其症状的量。例如药物组合物中本文描述的化合物1的固体形式的有效量可达到将发挥所需作用的水平；例如对于肠胃外施用，单位剂量为约0.005 mg/kg对象体重至约100mg/kg患者体重。如对于本领域技术人员将显而易见的是，预期本文描述的化合物1的固体形式的有效量可取决于所治疗适应症的严重程度而变化。
如本文所用的“患者”或“对象”包括动物，包括但不限于动物如牛、猴、马、绵羊、猪、鸡、火鸡、鹌鹑、猫、狗、小鼠、大鼠、兔或豚鼠，在一个实施方案中是哺乳动物，在另一个实施方案中是人。在一个实施方案中，对象是患有癌症(特别是实体瘤或血液癌症)或其症状或处于患有癌症的风险的人。在一个实施方案中，患者是具有组织学或细胞学证实的实体瘤或血液学癌症的人，包括已经进展(或不能耐受)标准抗癌疗法或不存在标准抗癌疗法的对象。
如本文所用，并且除非另有说明，术语“癌症”是指或描述哺乳动物中通常以不受调控的细胞生长为特征的生理病状。癌症的实例包括实体瘤和血液癌症。在一些实施方案中，所述癌症是原发性癌症，在其他实施方案中，所述癌症是转移的癌症。
如本文所用，“实体瘤”包括但不限于膀胱癌(包括但不限于浅表性膀胱癌)、乳腺癌(包括但不限于管状B型、ER+、PR+和Her2+乳腺癌)、中枢神经***癌症(包括但不限于多形性成胶质细胞瘤(GBM)、神经胶质瘤、成神经管细胞瘤和星形细胞瘤)、结肠直肠癌、胃肠癌(包括但不限于胃癌、食道癌和直肠癌)、内分泌癌(包括但不限于甲状腺癌和肾上腺癌)、眼癌(包括但不限于成视网膜细胞瘤)、女性泌尿生殖***癌症(包括但不限于胎盘癌、子宫癌、外阴癌、卵巢癌、***)、头颈癌(包括但不限于咽癌、食道癌和舌癌)、肝癌、肺癌(包括但不限于非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞肺癌(SCLC)、粘液表皮样癌、支气管源性癌、鳞状细胞癌(SQCC)和未分化癌/NSCLC)、皮肤癌(包括但不限于黑色素瘤和SQCC)、软组织癌(包括但不限于肉瘤、尤文氏肉瘤和横纹肌肉瘤)、骨癌(包括但不限于肉瘤、尤文氏肉瘤和骨肉瘤)、鳞状细胞癌(包括但不限于肺癌、食道癌、***和头颈癌)、胰腺癌、肾癌(包括但不限于肾威尔姆氏肿瘤和肾细胞癌)以及***癌。在一个实施方案中，实体瘤不是三阴性乳腺癌(TNBC)。在一些实施方案中，实体瘤是乳腺癌、结肠癌、肺癌或膀胱癌。在一个这样的实施方案中，实体瘤是浅表性膀胱癌。在另一个实施方案中，实体瘤是肺鳞状细胞癌。在另一个实施方案中，实体瘤是管状B型乳腺癌。
如本文所用，“血液癌症”包括但不限于白血病(包括但不限于急性淋巴细胞性白血病(ALL)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性T细胞白血病、B细胞前体白血病、急性早幼粒细胞白血病(APML)、浆细胞白血病、骨髓成单核细胞性/T-ALL、B骨髓单核细胞性白血病、红白血病和急性骨髓性白血病(AML))、淋巴瘤(包括但不限于霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、伯基特氏淋巴瘤(BL)、B细胞淋巴瘤、成淋巴细胞性淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤(FL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤 (DLBCL)、大细胞成免疫细胞性淋巴瘤)和多发性骨髓瘤。
在癌症的背景下，可通过疾病进展的抑制、肿瘤生长的抑制、原发性肿瘤的减少、肿瘤相关症状的缓解、肿瘤分泌因子(包括肿瘤分泌激素，如导致类癌综合征的那些)的抑制、原发性或继发性肿瘤的出现延迟、原发性或继发性肿瘤的发展减缓、原发性或继发性肿瘤的发生率降低、疾病的继发效应的严重程度减慢或降低、肿瘤生长停止和肿瘤消退、增加的进展时间(TTP)、增加的无进展存活(PFS)、增加的总体存活(OS)等。如本文所用的OS是指从治疗开始直到任何原因死亡的时间。如本文所用的TTP是指从治疗开始直到肿瘤进展的时间；TTP不包括死亡。如本文所用，PFS表示从治疗开始直到肿瘤进展或死亡的时间。在一个实施方案中，将使用卡普兰-迈耶估计来计算PFS速率。在极端情况下，完全抑制在本文中称为预防或化学预防。在此上下文中，术语“预防”包括完全预防临床上明显的癌症的发作或预防癌症的临床前明显阶段的发作。这种定义还意图涵盖预防转化为恶性细胞或阻止或逆转癌变前细胞进展为恶性细胞。这包括对处于发展癌症风险的人的预防性治疗。
在某些实施方案中，淋巴瘤的治疗可通过非霍奇金淋巴瘤(NHL) 的国际研讨会标准(IWC)(参见Cheson BD,Pfistner B,Juweid,ME,等人Revised Response Criteria forMalignant Lymphoma.J.Clin.Oncol: 2007:(25)579-586)使用以下所示的响应和终点定义进行评估：
Figure GDA0003834579080000191
Figure GDA0003834579080000201
缩写：CR，完全缓解；FDG，[18F]氟脱氧葡萄糖；PET，正电子发射断层扫描；CT，计算机断层摄影术；PR，部分缓解；SPD，直径乘积之和；SD，稳定疾病；PD，进行性疾病。
Figure GDA0003834579080000202
缩写：CR：完全缓解；PR：部分缓解。
在一个实施方案中，淋巴瘤的终点是临床益处的证据。临床益处可反映生活质量的改善，或患者症状、输血要求、频繁感染或其他参数的降低。在这一终点也可使用淋巴瘤相关症状再现或进展的时间。
在某些实施方案中，CLL的治疗可通过CLL的国际研讨会指南 (参见Hallek M,Cheson BD,Catovsky D,等人Guidelines for the diagnosis and treatment ofchronic lymphocytic leukemia:a report from the International Workshop onChronic Lymphocytic Leukemia updating the National Cancer Institute-WorkingGroup 1996guidelines.Blood, 2008；(111)12:5446-5456)使用其中所示且特别是以下的响应和终点定义进行评估：
Figure GDA0003834579080000211
A组标准定义肿瘤负荷；B组标准定义造血***(或骨髓)的功能。 CR(完全缓解)：必须满足所有标准，并且患者必须缺乏疾病相关的全身症状；PR(部分缓解)：必须满足A组的至少两项标准加上B组标准之一；SD是不存在进行性疾病(PD)并且未能实现至少PR；PD：必须满足A组或B组的上述标准中的至少一个。多个***节的乘积的总和(如通过临床试验中的CT扫描或通过一般实践中的体格检查评估)。这些参数与一些响应类别无关。
在某些实施方案中，多发性骨髓瘤的治疗可通过多发性骨髓瘤的国际统一响应标准(IURC)(参见Durie BGM,Harousseau J-L,Miguel JS,等人International uniformresponse criteria for multiple myeloma. Leukemia,2006；(10)10:1-7)使用以下所示的响应和终点定义进行评估：
Figure GDA0003834579080000221
缩写：CR，完全响应；FLC，游离轻链；PR，部分响应；SD，稳定疾病；sCR，严格完全响应；VGPR，非常好的部分响应；a所有响应类别都要求在制定任何新疗法之前随时进行两次连续评估；如果进行射线照相研究，则所有类别也不需要已知的进行性或新的骨病变的证据。射线照相研究不需要满足这些响应要求；b不需要重复骨髓活检确认；c克隆细胞的存在/不存在是基于κ/λ比。通过免疫组织化学和/或免疫荧光的异常κ/λ比需要最少100个浆细胞用于分析。反映异常克隆的存在的异常比率是>4:1或<1:2的κ/λ。d由以下测量值中的至少一个定义的可测量的疾病：骨髓浆细胞≥30％；血清M蛋白≥1g/dl (≥10-gm/l)[10g/l]；尿液M蛋白≥200mg/24小时；血清FLC测定：累及的FLC水平≥10mg/dl(≥100mg/l)；提供的血清FLC比是异常的。
在某些实施方案中，癌症的治疗可通过实体瘤的响应评价标准(RECIST 1.1)(参见Thereasse P.,等人New Guidelines to Evaluate the Response to Treatment inSolid Tumors.J.of the National Cancer Institute；2000；(92)205-216和EisenhauerE.A.,Therasse P.,Bogaerts J., 等人New response evaluation criteria in solidtumors:Revised RECIST guideline(1.1版).European J.Cancer；2009；(45)228–247)进行评估。在有或没有出现新病灶情况下，对于靶标和非靶标病灶中肿瘤响应的所有可能组合的总体响应是如下：
靶标病灶 非靶标病灶 新病灶 总体响应
CR CR 编号 CR
CR 不完全响应/SD 否 PR
PR 非PD 否 PR
SD 非PD 否 SD
PD 任何 是或否 PD
任何 PD 是或否 PD
任何 任何 是 PD
CR＝完全响应；PR＝部分响应；SD＝稳定疾病；以及PD＝进行性疾病。
关于靶标病灶的评价，完全响应(CR)是所有靶标病灶的消失，部分响应(PR)是靶标病灶的最长直径的总和减少至少30％(其采用基线总和最长直径作为参考)，进行性疾病(PD)是靶标病灶的最长直径的总和增加至少20％(其采用自治疗开始或一个或多个新病灶的出现以来记录的最小总和最长直径作为参考)，并且稳定疾病(SD)是既不足够缩小以符合部分响应、也不足够增加以符合进行性疾病(其采用自治疗开始以来的最小总和最长直径为参考)。
关于非靶标病灶的评价，完全响应(CR)是所有非靶标病灶的消失和肿瘤标志物水平的正常化；不完全响应/稳定疾病(SD)是一个或多个非靶标病灶的持续存在和/或维持肿瘤标志物水平高于正常限度，并且进行性疾病(PD)是一个或多个新病灶的出现和/或现有非靶标病灶的明确进展。
以下描述的程序、惯例和定义为实施来自神经肿瘤学响应评估 (RANO)工作组关于高级别神经胶质瘤的响应标准的建议提供指导 (Wen-P.,Macdonald,DR.,Reardon,DA.,等人Updated response assessment criteria for high-grade gliomas:Responseassessment in neuro-oncology working group.J Clin Oncol 2010；28:1963-1972)。对时间点响应(TPR)的标准的RANO标准的初步修改可包括添加用于定义糖皮质激素剂量变化的操作惯例，以及除去对象的临床恶化组分以关注客观放射学评估。基线MRI扫描被定义为在开始或重新开始化合物治疗之前在手术后休息期结束时进行的评估。基线MRI用作评估完全响应(CR)和部分响应(PR)的参考。然而，在基线或在随后的评估中获得的最小SPD(垂直直径乘积的总和)将被指定为最低点评估并用作确定进展的参考。对于任何方案定义的MRI扫描之前的5天，对象不接受糖皮质激素或接受稳定剂量的糖皮质激素。稳定剂量被定义为MRI扫描前连续5天的相同每日剂量。如果在基线扫描之前的5 天内改变开处方的糖皮质激素剂量，则需要在符合上述标准的糖皮质激素使用情况下的新基线扫描。将使用以下定义。
可测量的病灶：可测量的病灶是可二维测量的对比度增强的病灶。测量最大增强肿瘤直径(也称为最长直径，LD)。在同一图像上测量最大垂直直径。二维测量的十字准线应交叉，并将计算这些直径的乘积。
最小直径：T1加权图像，其中截面为5mm，跳跃为1mm。可测量病灶的最小LD被设定为5mm×5mm。包含和/或指定为靶标病灶可能需要更大的直径。在基线后，对于低于5mm的每个直径，小于最小测量要求或不再适合进行二维测量的靶标病灶将被记录在默认值5mm。消失的病灶将被记录为0mm×0mm。
多中心病灶：被认为是多中心(与连续相反)的病灶是在两个(或更多个)病灶之间存在正常介入脑组织的病灶。对于为增强的离散病灶的多中心病灶，方法是分别测量满足入选标准的每个增强病灶。如果两个(或更多个)病灶之间没有正常脑组织，则它们将被视为同一病灶。
不可测量的病灶：不满足如上定义的可测量疾病的标准的所有病灶将被认为是不可测量的病灶，以及所有非增强和其他真正不可测量的病灶。不可测量的病灶包括小于指定最小直径(即，小于5mm×5mm) 的增强病灶、非增强病灶(例如，如在T1加权造影后、T2加权或流体衰减反转恢复(FLAIR)图像上所观察到)、出血性或主要是囊性或坏死性病灶以及软脑膜肿瘤。出血性病灶通常具有内在T1加权的高信号，其可能被误解为增强肿瘤，并且由于这一原因，可检查造影前 T1加权图像以排除基线或间隔亚急性出血。
在基线时，病灶将被分类如下：靶标病灶：可选择代表对象的疾病的达5个可测量的病灶作为靶标病灶，每个病灶测量为至少10 mm×5mm；非靶标病灶：所有其他病灶，包括所有不可测量的病灶(包括质量效应和T2/FLAIR发现)和未被选择作为靶标病灶的任何可测量的病灶。在基线时，如在可测量病灶的定义中所描述测量靶表病灶，并确定所有靶标病灶的SPD。应记录所有其他病灶的存在。在所有治疗后评价中，将保持作为靶标和非靶标病灶的病灶的基线分类，并且将记录病灶并随时间推移以一致的方式描述病灶(例如，在源文件和 eCRF上以相同的顺序记录)。对于研究持续时间必须使用与基线相同的技术评估所有可测量和不可测量的病灶(例如，对象应在同一MRI 扫描仪上成像或至少使用相同的磁体强度)以减少解释变化的困难。在每次评价时，将测量靶标病灶并计算SPD。将定性地评估非靶标病灶，并且将单独记录新病灶(如果有的话)。在每次评价时，将确定靶标病灶、非靶标病灶和新病灶的时间点响应。即使仅评估一部分病灶，也可建立肿瘤进展。然而，除非观察到进展，否则只有在评估所有病灶时才能确定客观状态(稳定疾病、PR或CR)。
CR和PR的总体时间点响应的确认评估将在下一个预定的评估进行，但是如果扫描具有<28天的间隔则可能不会发生确认。并入确认要求的最佳响应将来自一系列时间点。
化合物1
本文提供的固体形式、制剂和使用方法涉及化合物1的固体形式 (例如，多晶型物)：
Figure GDA0003834579080000251
其具有名称(1s,4s)-4-(8-((2,4,6-三氯苯基)氨基)-2-(((3S,4R)-3-氟四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-1-甲基环己烷-1-甲酰胺，或者名称为顺式-4-[2-{[(3S,4R)-3-氟噁-4-基]氨基}-8-(2,4,6-三氯苯胺基)-9H-嘌呤-9-基]-1-甲基环己烷-1-甲酰胺，包括其互变异构体。
化合物1的固体形式
在某些实施方案中，本文提供了化合物1的固体形式。在某些实施方案中，所述固体形式是结晶。在某些实施方案中，所述固体形式是单组分固体形式。在某些实施方案中，所述固体形式是水合物。在某些实施方案中，所述固体形式是无水物。在某些实施方案中，所述固体形式是化合物1的HCl盐。在某些实施方案中，所述固体形式是化合物1的柠檬酸盐。在某些实施方案中，所述固体形式是甲磺酸盐。在某些实施方案中，所述固体形式是硫酸盐。在某些实施方案中，所述固体形式是溶剂化物。
尽管不意图受任何特定理论束缚，但某些固体形式的特征在于适用于药物和治疗剂型的物理性质，例如稳定性、溶解度和溶解速率。此外，虽然不希望受任何特定理论束缚，但某些固体形式的特征在于影响特定过程(例如，产率、过滤、洗涤、干燥、研磨、混合、压片、流动性、溶解、配制和冻干)的物理性质(例如，密度、可压缩性、硬度、形态学、裂解、粘性、溶解度、吸水性、电性质、热行为、固态反应性、物理稳定性和化学稳定性)，所述物理性质使某些固体形式适于制造固体剂型。此类性质可使用如本文所述和本领域已知的特定分析化学技术来测定，所述技术包括固态分析技术(例如，X射线衍射、显微术、光谱学和热分析)。
本文提供的固体形式(例如，化合物1的形式A、形式B、形式C、形式D、形式E、形式F、形式G、形式H、形式I和非晶形固体，以及化合物1的HCl盐形式1、HCl盐形式2、HCl盐形式3、HCl 盐形式4、HCl盐形式5、HCl盐形式6、HCl盐形式7、HCl盐形式 8、HCl盐非晶形固体，以及化合物1的柠檬酸盐形式Y、形式Z和柠檬酸盐非晶形固体)可使用本领域技术人员已知的许多方法来表征，所述方法包括但不限于单晶X射线衍射、X射线粉末衍射(XRPD)、显微术(例如，扫描电子显微术(SEM))、热分析(例如，差示扫描量热法(DSC)、动态蒸汽吸附(DVS)、热解重量分析(TGA)和热台显微术)、光谱学(例如，红外、拉曼和固态核磁共振)、超高效液相色谱法 (UHPLC)和质子核磁共振(1H-NMR)谱。本文提供的固体形式的粒度和粒度分布可通过常规方法，例如激光光散射技术来测定。
本文提供的固体形式的纯度可通过标准分析方法测定，如薄层色谱法(TLC)、凝胶电泳、气相色谱法、超高效液相色谱法(UHPLC)和质谱法(MS)。
应理解，X射线粉末衍射图的峰值的数值可从一个机器到另一个机器或从一个样品到另一个样品稍微变化，并且因此所引用的值不应被解释为绝对值，而是具有可允许的可变性，如±0.2°2θ或±0.1°2θ(参见United State Pharmacopoeia,第2228页(2003))。
在某些实施方案中，本文提供了用于制备化合物1的固体形式的方法，所述方法包括1)获得化合物1在溶剂中的浆液；2)在一定温度 (例如，约25℃或约50℃)下搅拌所述浆液持续一段时间(例如，约24 小时)；以及3)通过过滤和任选的干燥从浆液中收集固体，其中所述固体可以是形式A。在某些实施方案中，本文提供了用于制备化合物 1的固体形式的方法，所述方法包括1)获得化合物1在溶剂中的浆液； 2)在约25℃或约50℃下搅拌所述浆液约24小时；以及3)通过过滤从所述浆液中收集固体，例如通过0.45μm PTFE针筒式滤器和任选的空气干燥，其中所述固体可以是形式A。在某些实施方案中，用于制备化合物1的固体形式的方法是平衡实验，如浆液实验。
在某些实施方案中，本文提供了用于制备化合物1的固体形式的方法，所述方法包括1)将化合物1溶解在溶剂中以产生溶液；2)如果所述化合物未完全溶解，则过滤所述溶液；以及3)在一定温度(例如约25℃或约50℃)下在一定空气压力(例如约1atm)下蒸发所述溶液，以得到任选形式A的固体。在某些实施方案中，本文提供了用于制备形式A的固体形式的方法，所述方法包括1)将化合物1溶解在溶剂中以产生溶液；2)如果形式A未完全溶解，则过滤所述溶液(例如，通过0.45μm PTFE针筒式滤器)；以及3)在氮气下在约25℃或约50℃在约1atm空气压力下蒸发所述溶液以得到固体。在某些实施方案中，用于制备化合物1的固体形式的方法是蒸发实验。
在某些实施方案中，本文提供了用于制备化合物1的固体形式的方法，所述方法包括1)在第一温度(例如，约60℃)下获得形式A在溶剂中的饱和溶液；2)在所述第一温度下搅拌所述溶液持续一段时间 (例如10分钟)；3)过滤所述溶液；4)将所述溶液缓慢冷却至第二温度 (例如，约-5℃至约15℃)；以及5)从所述溶液中分离固体且任选地干燥。在某些实施方案中，本文提供了用于制备化合物1的固体形式的方法，所述方法包括1)在约60℃下获得形式A在溶剂中的饱和溶液； 2)在约60℃下搅拌所述溶液10分钟；3)过滤所述溶液(例如通过 0.45-μm PTFE针筒式滤器)；4)将所述溶液缓慢冷却至约5℃；以及 5)从所述溶液中分离固体且任选地空气干燥。在某些实施方案中，用于制备化合物1的固体形式的方法是冷却重结晶实验。
在某些实施方案中，本文提供了用于制备化合物1的固体形式的方法，所述方法包括1)在第一温度(例如，约60℃)下获得形式A在溶剂中的饱和溶液；2)在所述第一温度下将反溶剂添加至所述饱和溶液中；3)冷却至第二温度(例如，约-5℃至约15℃)；以及4)如果存在沉淀则收集固体，并且如果不存在沉淀则蒸发所述溶剂以收集固体；以及5)任选地干燥。在某些实施方案中，本文提供了用于制备化合物 1的固体形式的方法，所述方法包括1)在约60℃下获得形式A在溶剂中的饱和溶液；2)在约60℃下将反溶剂添加至所述饱和溶液中；3) 冷却至约5℃；以及4)如果存在沉淀则收集固体，并且如果不存在沉淀则蒸发所述溶剂以收集固体；以及5)任选地空气干燥。在某些实施方案中，溶剂与反溶剂的体积比是约1:9。在某些实施方案中，用于制备化合物1的固体形式的方法是反溶剂重结晶实验。
在某些实施方案中，溶剂是丙酮、DCM、EtOAc、EtOH、EtOH/H2O (约1:1)、H2O、庚烷、IPA、ACN、ACN/H2O(约1:1)、MEK、MeOH、 MTBE、n-BuOH、THF、THF/H2O(约1:1)、甲苯或环丁砜。
在某些实施方案中，反溶剂是ACN、庚烷、MTBE或水。
形式A
在某些实施方案中，本文提供了形式A。
在一个实施方案中，形式A是化合物1的固体形式。在一个实施方案中，形式A是一水合物。在一个实施方案中，形式A是化合物1的非化学计量通道水合物固体形式。在一个实施方案中，形式A 是化合物1的游离碱形式。在另一个实施方案中，形式A是结晶。
在某些实施方案中，本文提供的形式A通过平衡实验、蒸发实验和反溶剂重结晶实验获得(参见表6、表7和表9)。在某些实施方案中，形式A获自某些溶剂***，包括庚烷/水、庚烷、水、甲苯、MeCN、MeCN/水、EtOH、EtOH/H2O(约1:1)、THF/水(约1:1)以及IPA。
在一个实施方案中，制备形式A的方法包括使化合物1(例如，化合物1的结晶形式，如形式B、形式C或形式H)与包括大于约 10％-20％相对湿度(RH)的环境条件接触的步骤。
在一个实施方案中，制备形式A的方法包括将化合物1在溶剂中冷却至低于约50℃的温度并收集固体的步骤。
在某些实施方案中，如通过例如X射线粉末衍射测量所指示，本文提供的固体形式(例如形式A)是化合物1的游离碱并且是基本上结晶的。在一个实施方案中，是基本上如图2中所示的X射线粉末衍射图(XRPD)(例如形式A)。在一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如形式A)具有如图2中所描绘的在大约3.2、7.3、8.5、10.7、 11.1、12.7、13.0、13.4、13.8、14.5、14.7、15.9、16.9、17.1、17.3、 17.7、18.2、18.7、20.3、20.7、21.0、21.3、22.1、22.7、22.9、23.2、 23.6、24.0、24.8、25.5、26.1、26.4、26.8、27.9、28.1、28.8、29.4、 29.8、31.4、31.8、32.6、33.1、33.6、33.9、34.2、34.7、36.1、36.5、 37.2、37.7、38.9或39.5,°2θ(±0.2°2θ)或(±0.1°2θ)处的一个或多个特征性X射线粉末衍射峰。在一个具体实施方案中，本文提供的固体形式具有在大约7.3、8.5、10.8、14.5、14.7、15.9、16.9、17.1、18.2、21.0、21.3或28.8°2θ(±0.2°2θ)处的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个或十二个特征性X射线粉末衍射峰。在实施方案中，所述固体形式是形式A。在另一个实施方案中，本文提供的固体形式具有在大约7.3、8.5、18.2或21.3°2θ(±0.2° 2θ)处的一个、两个、三个或四个特征性X射线粉末衍射峰。在另一个实施方案中，形式A具有如表12中列出的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、十五、十六、十七、十八、十九、二十、二十一、二十二、二十三、二十四、二十五、二十六、二十七、二十八、二十九、三十、三十一、三十二、三十三、三十四、三十五、三十六、三十七、三十八、三十九、四十、四十一、四十二、四十三、四十四、四十五、四十六、四十七、四十八、四十九、五十、五十一或五十二个特征性X射线粉末衍射峰。
在一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如形式A)具有基本上如图3中所示的SEM图像。
在一个实施方案中，本文提供了固体形式，例如形式A，其具有基本上对应于如图4中描绘的代表性TGA热谱图的TGA温度记录图。在某些实施方案中，结晶形式显示TGA热谱图，包括当从大约 50℃加热至大约220℃时，在大约50℃与大约175℃之间样品总质量的大约2.8％的总质量损失。因此，在某些实施方案中，当从约环境温度加热至约220℃时，结晶形式损失约2.8％的其总质量。
在一个实施方案中，本文提供了固体形式，例如形式A，其具有基本上如图5中描绘的DSC热谱图，包括起始温度为约94℃且峰值最高温度为约117℃的吸热事件。在一个实施方案中，本文提供了固体形式，例如形式A，其具有基本上如图5中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约220℃时，起始温度为约174℃且峰值最高温度为约182℃的吸热事件。
在一个实施方案中，本文提供了具有基本上如图6A中描绘的 DVS等温线图的固体形式，例如形式A。
在一个实施方案中，本文提供了具有基本上如图7中描绘的11H NMR波谱的形式A。
在另一个实施方案中，形式A是基本上纯的。在某些实施方案中，基本上纯的形式A基本上不含其他固体形式，例如非晶形固体。在某些实施方案中，基本上纯的形式A基本上不含形式B、形式C 或形式H。在某些实施方案中，基本上纯的形式A的纯度不小于约 95％、不小于约96％、不小于约97％、不小于约98％、不小于约98.5％、不小于约99％、不小于约99.5％或不小于约99.8％。
形式B
在某些实施方案中，本文提供了形式B。
在一个实施方案中，形式B是化合物1的固体形式。在另一个实施方案中，形式B是结晶。在一个实施方案中，形式B是化合物1 的无水物形式。
在某些实施方案中，本文提供的形式B通过平衡实验、蒸发实验和反溶剂重结晶实验获得(参见表6、表7和表9)。在某些实施方案中，形式B获自某些溶剂***，包括庚烷/水、庚烷、水、甲苯、MeCN、 MeCN/水、EtOH、EtOH/H2O(约1:1)、THF/水(约1:1)以及IPA。在某些实施方案中，形式B通过将经受形式A的RH干燥或降低至低于约10％而获得。
在某些实施方案中，如通过例如X射线粉末衍射测量所指示，本文提供的固体形式(例如形式B)是基本上结晶的。在一个实施方案中，形式B具有基本上如图8中所示的X射线粉末衍射图。在一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如形式B)具有如图8中所描绘的在大约6.9、8.7、10.5、11.6、12.0、13.6、13.8、14.1、14.2、16.3、 16.9、17.5、18.0、18.4、19.1、19.5、20.0、20.8、21.1、22.1、22.7、 23.3、25.2、26.0、26.7、27.4、28.4、28.8、29.2、30.1、31.0、31.5 或31.8°2θ(±0.2°2θ)或(±0.1°2θ)处的一个或多个特征性X射线粉末衍射峰。在一个具体实施方案中，本文提供的固体形式具有在大约 8.7、11.6、12.0、13.8、14.1、17.5、18.0、19.5、20.0或20.8°2θ(±0.2° 2θ)处的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个特征性X射线粉末衍射峰。在一个具体实施方案中，本文提供的固体形式具有在大约13.8、19.5、20.0或20.8°2θ(±0.2°2θ)处的一个、两个、三个或四个特征性X射线粉末衍射峰。在一个实施方案中，所述固体形式是形式B。在另一个实施方案中，形式B具有如表13中列出的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、十五、十六、十七、十八、十九、二十、二十一、二十二、二十三、二十四、二十五、二十六、二十七、二十八、二十九、三十、三十一、三十二或三十三个特征性X射线粉末衍射峰。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式，例如形式 B，其具有基本上对应于如图9中描绘的代表性TGA热谱图的TGA 温度记录图。在某些实施方案中，结晶形式显示TGA热谱图，包括当从大约30℃加热至大约220℃时，在大约25℃与大约155℃之间样品总质量的大约0.1％的总质量损失。因此，在某些实施方案中，当从约环境温度加热至约220℃时，结晶形式损失约0.1％的其总质量。在某些实施方案中，结晶形式是化合物1的无水物并且对应于形式B。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式，其具有如图10中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约220℃时，起始温度为约174℃且峰值最高温度为约182℃的吸热事件。
在另一个实施方案中，形式B是基本上纯的。在某些实施方案中，基本上纯的形式B基本上不含其他固体形式，例如非晶形固体。在另一个实施方案中，形式B基本上不含形式A。在某些实施方案中，基本上纯的形式B的纯度不小于约95％、不小于约96％、不小于约97％、不小于约98％、不小于约98.5％、不小于约99％、不小于约99.5％或不小于约99.8％。
形式C
在某些实施方案中，本文提供了形式C。
在一个实施方案中，形式C是化合物1的固体形式。在另一个实施方案中，形式C是结晶。在一个实施方案中，形式C是化合物1 的溶剂化形式。在一个实施方案中，形式C是化合物1的乙腈(MeCN) 溶剂化形式。
在某些实施方案中，本文提供的形式C通过平衡实验、蒸发实验、冷却重结晶实验和反溶剂重结晶实验获得(参见表6、表7和表9)。在某些实施方案中，形式C从某些溶剂***获得，所述溶剂***包括 MeCN或MeCN/H2O(约1:1)。在某些实施方案中，形式C在约50℃的温度下从某些溶剂***获得，所述溶剂***包括MeCN或 MeCN/H2O(约1:1)。在另一个实施方案中，形式C从在恒定体积下在真空下在添加MeCN的情况下蒸馏的2-MeTHF/H2O(约1:1)的溶液获得。
在某些实施方案中，如通过例如X射线粉末衍射测量所指示，本文提供的固体形式(例如形式C)是基本上结晶的。在一个实施方案中，形式C具有基本上如图11中所示的X射线粉末衍射图。在一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如形式C)具有如图11中所描绘的在大约3.1、7.7、8.9、10.3、13.3、13.7、14.2、14.6、14.8、15.0、 15.3、15.5、15.7、16.9、17.4、17.8、18.3、18.7、19.5、19.9、20.7、 21.1、21.4、22.1、22.4、22.7、23.1、23.9、24.6、25.0、25.5、25.8、 26.1、26.7、26.9、27.2、27.7、28.5、29.4、29.8、30.3、30.9、31.3、 32.4、33.0、33.6、34.3、35.4、35.9、36.2、37.1、37.9或38.9°2θ(±0.2° 2θ)或(±0.1°2θ)处的一个或多个特征性X射线粉末衍射峰。在一个具体实施方案中，本文提供的固体形式具有在大约7.7、8.9、10.3、15.3、 17.4、18.3、19.9、21.4或28.5°2θ(±0.2°2θ)处的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个或九个特征性X射线粉末衍射峰。在一个实施方案中，所述固体形式是形式C。在另一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如形式C)具有在大约7.7、8.9、10.3或18.3°2θ (±0.2°2θ)处的一个、两个、三个或四个特征性X射线粉末衍射峰。在另一个实施方案中，形式C具有如表14中列出的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、十五、十六、十七、十八、十九、二十、二十一、二十二、二十三、二十四、二十五、二十六、二十七、二十八、二十九、三十、三十一、三十二、三十三、三十四、三十五、三十六、三十七、三十八、三十九、四十、四十一、四十二、四十三、四十四、四十五、四十六、四十七、四十八、四十九、五十、五十一、五十二或五十三个特征性X射线粉末衍射峰。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式，其具有基本上对应于如图12中描绘的代表性TGA热谱图的TGA温度记录图。在某些实施方案中，结晶形式显示TGA热谱图，包括当从大约25℃加热至大约220℃时，在大约50℃与大约175℃之间样品总质量的大约6.6％的总质量损失。因此，在某些实施方案中，当从约环境温度加热至约220℃时，结晶形式损失约6.6％的其总质量。化合物1的 MeCN单溶剂化物的理论MeCN含量是6.7重量％，与观察到的TGA 重量损失相匹配。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式，其具有如图13中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约300℃时，最大在约165℃的吸热事件。在另一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式，其具有如图13中描绘的DSC热谱图，进一步包括当从大约25℃加热至大约300℃时，最大在约186℃的吸热事件。
在一个实施方案中，本文提供了具有基本上如图14中描绘的1H NMR波谱的固体形式，例如形式C。
在另一个实施方案中，形式C是基本上纯的。在某些实施方案中，基本上纯的形式C基本上不含其他固体形式，例如非晶形固体。在某些实施方案中，基本上纯的形式C的纯度不小于约95％、不小于约 96％、不小于约97％、不小于约98％、不小于约98.5％、不小于约99％、不小于约99.5％或不小于约99.8％。
形式D
在某些实施方案中，本文提供了形式D。
在一个实施方案中，形式D是化合物1的固体形式。在另一个实施方案中，形式D是结晶。在一个实施方案中，形式D是化合物 1的溶剂化形式。在一个实施方案中，形式D是化合物1的IPA溶剂化形式。
在某些实施方案中，本文提供的形式D通过平衡实验、蒸发实验、冷却重结晶实验和反溶剂重结晶实验获得(参见表6、表7和表 9)。在某些实施方案中，形式D在室温下从某些溶剂***(包括IPA) 获得。
在某些实施方案中，如通过例如X射线粉末衍射测量所指示，本文提供的固体形式(例如形式D)是基本上结晶的。在一个实施方案中，形式D具有基本上如图15中所示的X射线粉末衍射图。在一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如形式D)具有如图15中所描绘的在大约3.1、5.9、7.4、8.7、10.1、11.1、13.7、14.8、15.1、16.3、 16.6、17.6、18.1、19.2、19.8、20.4、21.5、22.1、22.3、24.0、24.3、 25.0、26.2、26.9、27.3、27.6、28.2、28.6、30.9、31.4、32.9、33.6、 34.6或37.2°2θ(±0.2°2θ)或(±0.1°2θ)处的一个或多个特征性X射线粉末衍射峰。在一个具体实施方案中，本文提供的固体形式具有在大约7.4、8.7、10.1或18.1°2θ(±0.2°2θ)处的一个、两个、三个或四个特征性X射线粉末衍射峰。在一个实施方案中，所述固体形式是形式D。在另一个实施方案中，形式D具有如表15中列出的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、十五、十六、十七、十八、十九、二十、二十一、二十二、二十三、二十四、二十五、二十六、二十七、二十八、二十九、三十、三十一、三十二、三十三或三十四个特征性X射线粉末衍射峰。
在一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如形式D)具有基本上如图16中所示的SEM图像。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式，其具有基本上对应于如图17中描绘的代表性TGA热谱图的TGA温度记录图。在某些实施方案中，结晶形式显示TGA热谱图，包括当从大约25℃加热至大约220℃时，在大约100℃与大约160℃之间样品总质量的大约7.4％的总质量损失。因此，在某些实施方案中，当从约环境温度加热至约220℃时，结晶形式损失约7.4％的其总质量。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式，其具有如图18中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约220℃时，起始温度为约125℃且峰值最高温度为约154℃的吸热事件。在一个实施方案中，本文提供了化合物1的具有如图18中描绘的DSC热谱图的结晶形式，进一步包括当从大约25℃加热至大约220℃时，起始温度为约175℃且峰值最高温度为约185℃的吸热事件。
在一个实施方案中，本文提供了具有基本上如图19中描绘的1H NMR波谱的本文提供的固体形式，例如形式D。
在另一个实施方案中，形式D是基本上纯的。在某些实施方案中，基本上纯的形式D基本上不含其他固体形式，例如非晶形固体。在某些实施方案中，基本上纯的形式D的纯度不小于约95％、不小于约96％、不小于约97％、不小于约98％、不小于约98.5％、不小于约99％、不小于约99.5％或不小于约99.8％。
形式E
在某些实施方案中，本文提供了形式E。
在一个实施方案中，形式E是化合物1的固体形式。在另一个实施方案中，形式E是结晶。在一个实施方案中，形式E是化合物1 的溶剂化形式。形式E可以是乙醇溶剂化物，其中所述溶剂化物任选地含有水。
在某些实施方案中，本文提供的形式E通过平衡实验和蒸发实验获得(参见表6、表7和表9)。在某些实施方案中，形式E从某些溶剂***获得，所述溶剂***包括EtOH或EtOH/水(约1:1)。在某些实施方案中，形式E在约50℃的温度下从某些溶剂***获得，所述溶剂***包括EtOH或EtOH/水(约1:1)。
在某些实施方案中，如通过例如X射线粉末衍射测量所指示，本文提供的固体形式(例如形式E)是基本上结晶的。在一个实施方案中，形式E具有基本上如图20中所示的X射线粉末衍射图。在一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如形式E)具有如图20中所描绘的在大约3.1、5.5、7.8、11.0、13.5、14.6、15.6、16.6、17.5、18.4、 20.0、20.7、22.2、22.9、23.5、24.2、24.8、26.1、26.7、27.3、27.8、 28.4、29.5、30.0、31.1、31.6、32.1、32.6、33.6、34.0、34.5、35.4、 36.3、37.2、38.1、39.4或39.8°2θ(±0.2°2θ)或(±0.1°2θ)处的一个或多个特征性X射线粉末衍射峰。在一个具体实施方案中，本文提供的固体形式具有在大约7.8、14.6、15.6、17.5、22.2、23.5或26.1°2θ (±0.2°2θ)处的一个、两个、三个、四个、五个、六个或七个特征性X 射线粉末衍射峰。在一个实施方案中，所述固体形式是形式E。在另一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如形式E)具有在大约7.8、 14.6、17.5或22.2°2θ(±0.2°2θ)处的一个、两个、三个或四个特征性 X射线粉末衍射峰。在另一个实施方案中，形式E具有如表16中列出的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、十五、十六、十七、十八、十九、二十、二十一、二十二、二十三、二十四、二十五、二十六、二十七、二十八、二十九、三十、三十一、三十二、三十三、三十四、三十五、三十六或三十七个特征性X射线粉末衍射峰。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式，其具有基本上对应于如图21中描绘的代表性TGA热谱图的TGA温度记录图。在某些实施方案中，结晶形式显示TGA热谱图，包括当从大约35℃加热至大约220℃时，在大约35℃与大约175℃之间样品总质量的大约13.7％的总质量损失。因此，在某些实施方案中，当从约环境温度加热至约220℃时，结晶形式损失约13.7％的其总质量。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式，其具有如图22中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约220℃时，起始温度为约92℃且最大在约104℃的宽吸热事件。
在另一个实施方案中，形式E是基本上纯的。在某些实施方案中，基本上纯的形式E基本上不含其他固体形式，例如非晶形固体。在某些实施方案中，基本上纯的形式E的纯度不小于约95％、不小于约 96％、不小于约97％、不小于约98％、不小于约98.5％、不小于约99％、不小于约99.5％或不小于约99.8％。
形式F
在某些实施方案中，本文提供了形式F。
在一个实施方案中，形式F是化合物1的固体形式。在另一个实施方案中，形式F是结晶。在一个实施方案中，形式F是化合物1 的溶剂化形式。在一个实施方案中，形式F是化合物1的IPA溶剂化形式。
在某些实施方案中，本文提供的形式F通过平衡实验获得(参见表6、表7和表9)。在某些实施方案中，形式F在约50℃下从某些溶剂***(包括IPA或IPA/水)获得。
在某些实施方案中，如通过例如X射线粉末衍射测量所指示，本文提供的固体形式(例如形式F)是基本上结晶的。在一个实施方案中，形式F具有基本上如图23中所示的X射线粉末衍射图。在一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如形式F)具有如图23中所描绘的在大约4.9、7.0、9.4、11.1、11.8、15.5、15.8、17.0、17.6、18.0、 18.3、19.0、19.7、20.0、20.3、20.9、22.4、22.6、23.2、23.7、24.4、 25.1、25.4、25.6、26.4、26.8、27.3、27.7、28.6、29.2、30.0、30.4、 30.7、31.2、32.1、34.1、34.4、35.2、35.8、36.5、38.5、38.8或39.2° 2θ(±0.2°2θ)或(±0.1°2θ)处的一个或多个特征性X射线粉末衍射峰。在一个具体实施方案中，本文提供的固体形式(例如形式F)具有在大约7.0、9.4、11.8、15.5、18.0、18.3、19.7、20.0或20.9°2θ(±0.2°2θ) 处的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个或九个特征性X射线粉末衍射峰。在另一个实施方案中，本文提供的固体形式具有在大约9.4、11.8、18.0或18.3°2θ(±0.2°2θ)处的一个、两个、三个或四个特征性X射线粉末衍射峰。在一个实施方案中，所述固体形式是形式F。在另一个实施方案中，形式F具有如表17中列出的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、十五、十六、十七、十八、十九、二十、二十一、二十二、二十三、二十四、二十五、二十六、二十七、二十八、二十九、三十、三十一、三十二、三十三、三十四、三十五、三十六、三十七、三十八、三十九、四十、四十一、四十二或四十三个特征性X射线粉末衍射峰。
在一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如形式F)具有基本上如图24中所示的SEM图像。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式，其具有基本上对应于如图25中描绘的代表性TGA热谱图的TGA温度记录图。在某些实施方案中，结晶形式显示TGA热谱图，包括当从大约50℃加热至大约220℃时，在大约50℃与大约175℃之间样品总质量的大约14.3％的总质量损失。因此，在某些实施方案中，当从约环境温度加热至约220℃时，结晶形式损失约14.3％的其总质量。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式，其具有如图26中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约220℃时，起始温度为约137℃且峰值最高温度为约152℃的吸热事件。
在一个实施方案中，本文提供了具有基本上如图27中描绘的1H NMR波谱的固体形式，例如形式F。
在另一个实施方案中，形式F是基本上纯的。在某些实施方案中，基本上纯的形式F基本上不含其他固体形式，例如非晶形固体。在某些实施方案中，基本上纯的形式F的纯度不小于约95％、不小于约 96％、不小于约97％、不小于约98％、不小于约98.5％、不小于约99％、不小于约99.5％或不小于约99.8％。
形式G
在某些实施方案中，本文提供了形式G。
在一个实施方案中，形式G是化合物1的固体形式。在另一个实施方案中，形式G是结晶。在一个实施方案中，形式G是化合物 1的溶剂化形式。在一个实施方案中，形式G是化合物1的MTBE 溶剂化形式。
在某些实施方案中，本文提供的形式G通过平衡实验、蒸发实验和反溶剂重结晶实验获得(参见表6、表7和表9)。在某些实施方案中，形式G从某些溶剂***(包括MTBE)获得。在某些实施方案中，形式G在50℃的温度下从某些溶剂***(包括MTBE)获得。
在某些实施方案中，如通过例如X射线粉末衍射测量所指示，本文提供的固体形式(例如形式G)是基本上结晶的。在一个实施方案中，形式G具有基本上如图28中所示的X射线粉末衍射图。在一个实施方案中，形式G具有在大约4.5、8.0、9.0、9.9、10.0、10.2、11.6、11.9、13.5、14.4、14.6、15.3、15.9、16.4、16.9、17.5、17.7、18.0、18.4、18.7、18.8、19.4、19.6、20.3、20.8、21.2、21.6、22.0、22.2、 22.5、22.9、23.4、24.0、24.5、24.6、25.0、25.2、25.6、25.9、26.0、 26.4、26.9、27.3、27.6、28.0、28.2、28.8、29.4、29.9、30.2、30.8、 31.4、31.8、32.8、33.2、34.4、34.9、35.7、36.1、38.2或38.9°2θ(± 0.2°2θ)或(±0.1°2θ)处的一个或多个特征性X射线粉末衍射峰。在一个具体实施方案中，本文提供的固体形式(例如形式G)具有在大约 9.0、9.9、10.0、15.3、17.5、18.4、18.7、19.4、19.6、21.2或22.9°2θ (±0.2°2θ)处的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或十一个特征性X射线粉末衍射峰。在另一个实施方案中，本文提供的固体形式具有在大约9.9、15.3、18.4或22.9°2θ(±0.2° 2θ)处的一个、两个、三个或四个特征性X射线粉末衍射峰。在一个实施方案中，所述固体形式是形式G。在另一个实施方案中，形式G 具有如表18中列出的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、十五、十六、十七、十八、十九、二十、二十一、二十二、二十三、二十四、二十五、二十六、二十七、二十八、二十九、三十、三十一、三十二、三十三、三十四、三十五、三十六、三十七、三十八、三十九、四十、四十一、四十二、四十三、四十四、四十五、四十六、四十七、四十八、四十九、五十、五十一、五十二、五十三、五十四、五十五、五十六、五十七、五十八、五十九、六十或六十一个特征性X射线粉末衍射峰。
在一个实施方案中，形式G具有基本上如图29中所示的SEM 图像。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式，其具有基本上对应于如图30中描绘的代表性TGA热谱图的TGA温度记录图。在某些实施方案中，结晶形式显示TGA热谱图，包括在大约50℃与大约140℃之间样品总质量的大约1.1％的总质量损失。在某些实施方案中，结晶形式显示TGA热谱图，包括当从大约25℃加热至大约 220℃时，在大约50℃与大约180℃之间样品总质量的大约8.7％的总质量损失。因此，在某些实施方案中，当从约环境温度加热至约220℃时，结晶形式损失约8.7％的其总质量。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式，其具有如图31中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约220℃时，起始温度为约144℃且峰值最高温度为约148℃的吸热事件。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式，其具有如图31中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约220℃时，最大在约161℃的吸热事件。
在一个实施方案中，本文提供了具有基本上如图32中描绘的1H NMR波谱的固体形式，例如形式G。在一个实施方案中，形式G的1H NMR波谱显示形式G含有显著量的MBTE。
在另一个实施方案中，形式G是基本上纯的。在某些实施方案中，基本上纯的形式G基本上不含其他固体形式，例如非晶形固体。在某些实施方案中，基本上纯的形式G的纯度不小于约95％、不小于约96％、不小于约97％、不小于约98％、不小于约98.5％、不小于约99％、不小于约99.5％或不小于约99.8％。
形式H
在某些实施方案中，本文提供了形式H。
在一个实施方案中，形式H是化合物1的固体形式。在另一个实施方案中，形式H是结晶。在一个实施方案中，形式H是化合物 1的溶剂化形式。在一个实施方案中，形式H是化合物1的EtOH溶剂化形式。在某些实施方案中，形式H可通过与包含至少20％RH 的环境接触而转化为形式A。
在某些实施方案中，本文提供的形式H通过平衡实验、蒸发实验和反溶剂重结晶实验获得(参见表6、表7和表9)。在某些实施方案中，形式H从某些溶剂***获得，所述溶剂***包括EtOH、EtOH/ 水(约1:1)或EtOAc。在某些实施方案中，形式H在50℃的温度下从某些溶剂***获得，所述溶剂***包括EtOH、EtOH/水(约1:1)或 EtOAc。
在某些实施方案中，如通过例如X射线粉末衍射测量所指示，本文提供的固体形式(例如形式H)是基本上结晶的。在一个实施方案中，形式H具有基本上如图33中所示的X射线粉末衍射图。在一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如形式H)具有如图33中所描绘的在大约6.1、7.7、8.9、10.3、10.9、11.3、11.6、13.7、14.4、15.0、15.2、15.4、15.6、15.9、16.9、17.2、17.7、18.2、18.7、19.4、19.6、 20.6、20.9、21.4、22.5、23.2、23.7、24.6、24.9、25.6、25.9、26.2、 26.9、27.4、28.1、28.4、29.0、29.4、31.1、32.2、33.1、34.1、34.7、 35.3、37.3或38.6°2θ(±0.2°2θ)或(±0.1°2θ)处的一个或多个特征性X 射线粉末衍射峰。在一个具体实施方案中，本文提供的固体形式(例如形式H)具有在大约7.7、8.9、10.3、15.2、15.4、15.6、17.2、18.2、 19.6、21.4或24.9°2θ(±0.2°2θ)处的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或十一个特征性X射线粉末衍射峰。在另一个实施方案中，本文提供的固体形式具有在大约7.7、8.9、10.3 或18.2°2θ(±0.2°2θ)处的一个、两个、三个或四个特征性X射线粉末衍射峰。在一个实施方案中，所述固体形式是形式H。在另一个实施方案中，形式H具有如表19中列出的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、十五、十六、十七、十八、十九、二十、二十一、二十二、二十三、二十四、二十五、二十六、二十七、二十八、二十九、三十、三十一、三十二、三十三、三十四、三十五、三十六、三十七、三十八、三十九、四十、四十一、四十二、四十三、四十四、四十五或四十六个特征性X射线粉末衍射峰。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式，其具有基本上对应于如图34中描绘的代表性TGA热谱图的TGA温度记录图。在某些实施方案中，结晶形式显示TGA热谱图，包括当从大约50℃加热至大约220℃时，在大约50℃与大约175℃之间样品总质量的大约6.5％的总质量损失。因此，在某些实施方案中，当从约环境温度加热至约220℃时，结晶形式损失约6.5％的其总质量。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式，其具有如图35中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约220℃时，峰值最大在约163℃的吸热事件。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式，其具有如图35中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约220℃时，起始温度为约179℃且峰值最高温度为约187℃的吸热事件。
在另一个实施方案中，形式H是基本上纯的。在某些实施方案中，基本上纯的形式H基本上不含其他固体形式，例如非晶形固体。在某些实施方案中，基本上纯的形式H的纯度不小于约95％、不小于约96％、不小于约97％、不小于约98％、不小于约98.5％、不小于约99％、不小于约99.5％或不小于约99.8％。
形式I
在某些实施方案中，本文提供了形式I。
在一个实施方案中，形式I是化合物1的固体形式。在另一个实施方案中，形式I是结晶。在一个实施方案中，形式I是化合物1的溶剂化形式。在一个实施方案中，形式I是化合物1的MeCN溶剂化形式。
在某些实施方案中，本文提供的形式I通过冷却重结晶实验和反溶剂重结晶实验获得。在某些实施方案中，形式I从某些溶剂***(包括MeCN)获得。在某些实施方案中，形式I可在室温下在MeCN浆液中转化为形式C。
在某些实施方案中，如通过例如X射线粉末衍射测量所指示，本文提供的固体形式(例如形式I)是基本上结晶的。在一个实施方案中，形式I具有基本上如图36中所示的X射线粉末衍射图。在一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如形式I)具有如图36中所描绘的在大约5.2、5.5、6.3、8.6、9.3、10.4、10.9、11.5、11.9、12.6、 15.7、16.6、17.3、18.1、18.7、19.0、20.0、20.9、22.0、22.5、23.3、 24.1、24.6、25.4、26.4、27.6、28.4、29.6、31.0、31.6、32.1、33.2、 33.9、35.3、35.9或38.5°2θ(±0.2°2θ)或(±0.1°2θ)处的一个或多个特征性X射线粉末衍射峰。在一个具体实施方案中，本文提供的固体形式具有在大约6.3、15.7、18.1或20.0°2θ(±0.2°2θ)处的一个、两个、三个或四个特征性X射线粉末衍射峰。在一个实施方案中，所述固体形式是形式I。在另一个实施方案中，形式I具有如表20中列出的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、十五、十六、十七、十八、十九、二十、二十一、二十二、二十三、二十四、二十五、二十六、二十七、二十八、二十九、三十、三十一、三十二、三十三、三十四、三十五或三十六个特征性X射线粉末衍射峰。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式，其具有基本上对应于如图38中描绘的代表性TGA热谱图的TGA温度记录图。在某些实施方案中，结晶形式显示TGA热谱图，包括当从大约50℃加热至大约220℃时，在大约50℃与大约180℃之间样品总质量的大约2.3％的总质量损失。因此，在某些实施方案中，当从约环境温度加热至约220℃时，结晶形式损失约2.3％的其总质量。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式，其具有如图39中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约220℃时，峰值最大在约75℃的吸热事件。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式，其具有如图39中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约220℃时，起始温度为约173℃且峰值最高温度为约183℃的吸热事件。
在一个实施方案中，本文提供了具有基本上如图37中描绘的1H NMR波谱的固体形式，例如形式I。
在另一个实施方案中，形式I是基本上纯的。在某些实施方案中，基本上纯的形式I基本上不含其他固体形式，例如非晶形固体。在某些实施方案中，基本上纯的形式I的纯度不小于约95％、不小于约 96％、不小于约97％、不小于约98％、不小于约98.5％、不小于约99％、不小于约99.5％或不小于约99.8％。
非晶形固体
在某些实施方案中，本文提供了化合物1的非晶形固体。
在某些实施方案中，本文提供的非晶形固体通过形式A的蒸发和/或热处理而获得。
在一个实施方案中，所述非晶形固体具有基本上如图40中所示的X射线粉末衍射光谱。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的非晶形固体，其具有如图41中描绘的DSC热谱图，包括当从大约40℃加热至大约260℃时，玻璃化转变温度为84℃。
在一个实施方案中，本文提供了具有基本上如图42中描绘的1H NMR波谱的化合物1的非晶形固体。
在一个实施方案中，本文提供了具有基本上如图43A中描绘的 DVS等温线图的化合物1的非晶形固体。
在另一个实施方案中，化合物1的非晶形固体是基本上纯的。在某些实施方案中，化合物1的基本上纯的非晶形固体基本上不含其他固体形式，例如形式A、形式B、形式C、形式D、形式E、形式F、形式G、形式H和形式I。在某些实施方案中，基本上纯的非晶形固体的纯度不小于约95％、不小于约96％、不小于约97％、不小于约 98％、不小于约98.5％、不小于约99％、不小于约99.5％或不小于约 99.8％。
柠檬酸盐形式Y
本文还提供了包括柠檬酸盐的化合物1的固体形式。
在某些实施方案中，本文提供了柠檬酸盐形式Y。
在一个实施方案中，柠檬酸盐形式Y是化合物1的固体形式。在另一个实施方案中，柠檬酸盐形式Y是结晶。在另一个实施方案中，柠檬酸盐形式Y是无水物。
在某些实施方案中，本文提供的柠檬酸盐形式Y是通过平衡实验、蒸发实验和反溶剂重结晶实验获得(参见表23、表24和表25)。在某些实施方案中，柠檬酸盐形式Y是从某些溶剂***获得，所述溶剂***包括丙酮、MeCN、正丁醇、EtOH、EtOH/水(约1:1)、EtOAc、庚烷、IPA、DCM、MeOAc、MTBE、MEK、甲苯、THF、THF/水(约 1:1)、1,4-二噁烷、MIBK、IPAc以及2-MeTHF。在某些实施方案中，柠檬酸盐形式Y是在50℃下从某些溶剂***获得，所述溶剂***包括丙酮、MeCN、正丁醇、EtOH、EtOH/水(约1:1)、EtOAc、庚烷、 IPA、DCM、MeOAc、MTBE、MEK、甲苯、THF、THF/水(约1:1)、 1,4-二噁烷、MIBK、IPAc以及2-MeTHF。在一个实施方案中，柠檬酸盐形式Y是EtOH溶剂化物。
在一个实施方案中，制备柠檬酸盐形式Y的方法包括在THF或 THF/水中冷却至低于约50℃的温度并收集固体的步骤。
在某些实施方案中，本文提供的固体形式(例如形式Y)是化合物 1的柠檬酸盐并且如通过例如X射线粉末衍射测量所指示是基本上结晶的。在一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如形式Y)具有基本上如图45中所示的X射线粉末衍射图(XRPD)。在一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如形式Y)具有如图45中所描绘的在大约4.8、 6.6、9.6、13.6、14.4、15.4、16.0、16.9、18.0、18.9、19.2、19.9、 20.1、20.9、21.8、22.4、22.7、23.2、23.4、24.0、24.1、24.3、25.1、 26.7、27.0、27.9、28.5、29.0、29.6、30.2、30.4、30.8、31.1、31.6、 32.3、33.1、33.5、34.0、34.6或35.1°2θ(±0.2°2θ)或(±0.1°2θ)处的一个或多个特征性X射线粉末衍射峰。在一个具体实施方案中，本文提供的固体形式(例如形式Y)具有在大约4.8、6.6、9.6、15.4、16.0、 16.9、18.9、19.2、19.9、20.9或28.5°2θ(±0.2°2θ)处的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或十一个特征性 X射线粉末衍射峰。在另一个实施方案中，本文提供的固体形式具有在大约4.8、9.6、18.9或19.2°2θ(±0.2°2θ)处的一个、两个、三个或四个特征性X射线粉末衍射峰。在一个实施方案中，所述固体形式是柠檬酸盐形式Y。在另一个实施方案中，柠檬酸盐形式Y具有如表27中列出的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、十五、十六、十七、十八、十九、二十、二十一、二十二、二十三、二十四、二十五、二十六、二十七、二十八、二十九、三十、三十一、三十二、三十三、三十四、三十五、三十六、三十七、三十八、三十九或四十个特征性X射线粉末衍射峰。
在一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如形式Y)具有基本上如图46中所示的SEM图像。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶柠檬酸盐，其具有基本上对应于如图47中描绘的代表性TGA热谱图的TGA温度记录图。在某些实施方案中，结晶形式显示TGA热谱图，包括当从大约50℃加热至大约220℃时，在大约50℃与大约150℃之间样品总质量的大约0.1％的总质量损失。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶柠檬酸盐，其具有基本上如图48中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约260℃时，起始温度为约213℃且峰值最高温度为约217℃的吸热事件。
在一个实施方案中，本文提供了具有基本上如图49A中描绘的 DVS等温线图的固体形式，例如形式Y。
在一个实施方案中，本文提供了具有基本上如图50中描绘的1H NMR波谱的固体形式，例如形式Y。
在另一个实施方案中，柠檬酸盐形式Y是基本上纯的。在某些实施方案中，基本上纯的柠檬酸盐形式Y基本上不含其他固体形式，例如非晶形固体。在某些实施方案中，基本上纯的柠檬酸盐形式Y 的纯度不小于约95％、不小于约96％、不小于约97％、不小于约98％、不小于约98.5％、不小于约99％、不小于约99.5％或不小于约99.8％。
柠檬酸盐形式Z
在某些实施方案中，本文提供了柠檬酸盐形式Z。
在一个实施方案中，柠檬酸盐形式Z是化合物1的固体形式。在另一个实施方案中，柠檬酸盐形式Z是结晶。在另一个实施方案中，柠檬酸盐形式Z是无水物。在另一个实施方案中，柠檬酸盐形式Z 是水合物。在一个实施方案中，柠檬酸盐形式Z是非化学计量的水合物。在另一个实施方案中，柠檬酸盐形式Z是通道水合物。在另一个实施方案中，柠檬酸盐形式Z是非化学计量的通道水合物。在另一个实施方案中，柠檬酸盐形式Z是溶剂化物。
在某些实施方案中，形式Z通过平衡实验、蒸发实验和反溶剂重结晶实验获得(参见表23、表24和表25)。在某些实施方案中，柠檬酸盐形式Z从某些溶剂***获得，所述溶剂***包括MeCN/水(约 1:1)、EtOH、EtOH/水(约1:1)或MeOH。在某些实施方案中，柠檬酸盐形式Z在约50℃的温度下从某些溶剂***获得，所述溶剂***包括MeCN/水(约1:1)、EtOH、EtOH/水(约1:1)或MeOH。
在一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如形式Z)具有基本上如图53中所示的SEM图像。
在某些实施方案中，如通过例如X射线粉末衍射测量所指示，本文提供的固体形式(例如形式Z)是基本上结晶的。在一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如形式Z)具有基本上如图52中所示的X 射线粉末衍射图。在一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如形式Z)具有如图52中所描绘的在大约4.6、6.6、9.4、13.1、14.1、15.3、 15.6、17.4、18.8、19.0、19.9、20.4、21.1、21.9、22.2、22.7、23.5、 23.9、25.2、26.3、26.8、27.8、28.3、28.7、29.8、31.2、31.9、32.6、 33.7、35.1、35.9、37.4或31.8°2θ(±0.2°2θ)或(±0.1°2θ)处的一个或多个特征性X射线粉末衍射峰。在一个具体实施方案中，本文提供的固体形式具有在大约9.4、18.8、19.0或28.7°2θ(±0.2°2θ)处的一个、两个、三个或四个特征性X射线粉末衍射峰。在一个实施方案中，所述固体形式是柠檬酸盐形式Z。在另一个实施方案中，柠檬酸盐形式Z具有如表30中列出的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、十五、十六、十七、十八、十九、二十、二十一、二十二、二十三、二十四、二十五、二十六、二十七、二十八、二十九、三十、三十一、三十二或三十三个特征性X射线粉末衍射峰。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶柠檬酸盐，其具有基本上对应于如图54中描绘的代表性TGA热谱图的TGA温度记录图。在某些实施方案中，结晶形式显示TGA热谱图，包括当从大约25℃加热至大约300℃时，在大约50℃与大约150℃之间样品总质量的大约0.1％的总质量损失。在某些实施方案中，所述结晶形式是化合物1的无水物。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶柠檬酸盐形式，其具有如图55中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约260℃时，起始温度为约217℃且峰值最高温度为约221℃的吸热事件。
在一个实施方案中，本文提供了具有基本上如图56A中描绘的 DVS等温线图的固体形式，例如形式Y。
在一个实施方案中，本文提供了具有基本上如图57中描绘的1H NMR波谱的固体形式，例如形式Z。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的柠檬酸盐的水合物，其具有基本上对应于如图58中描绘的代表性TGA热谱图的TGA温度记录图。在某些实施方案中，所述水合物显示TGA热谱图，包括当从大约25℃加热至大约300℃时，在大约25℃与大约200℃之间样品总质量的大约2％的总质量损失。在某些实施方案中，所述结晶形式是化合物1的柠檬酸盐形式的水合物。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的柠檬酸盐的非化学计量的水合物，其具有基本上对应于如图59中描绘的代表性TGA热谱图的TGA温度记录图。在某些实施方案中，所述非化学计量的水合物显示TGA热谱图，包括当从大约50℃加热至大约300℃时，在大约50℃与大约200℃之间样品总质量的大约1.7％的总质量损失。在某些实施方案中，所述结晶形式是化合物1的柠檬酸盐形式的非化学计量的水合物。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的柠檬酸盐的溶剂化物，其具有基本上对应于如图60中描绘的代表性TGA热谱图的TGA 温度记录图。在某些实施方案中，所述溶剂化物显示TGA热谱图，包括当从大约25℃加热至大约300℃时，在大约25℃与大约200℃之间样品总质量的大约1.3％的总质量损失。在某些实施方案中，所述结晶形式是化合物1的柠檬酸盐形式的溶剂化物。
在一个实施方案中，本文提供了具有基本上如图61中描绘的1H NMR波谱的固体形式，例如形式Z的溶剂化物。
在另一个实施方案中，柠檬酸盐形式Z是基本上纯的。在某些实施方案中，基本上纯的柠檬酸盐形式Z基本上不含其他固体形式，例如非晶形固体。在某些实施方案中，基本上纯的柠檬酸盐形式Z的纯度不小于约95％、不小于约96％、不小于约97％、不小于约98％、不小于约98.5％、不小于约99％、不小于约99.5％或不小于约99.8％。
HCl盐形式
在某些实施方案中，本文提供了起始材料HCl盐形式。在一个实施方案中，起始材料HCl盐形式是化合物1的固体形式。在一个实施方案中，起始材料HCl盐形式是无水物。
在一个实施方案中，起始材料HCl盐形式是通过在约25℃至约 30℃的温度下将化合物1溶解在MeOH(例如，约10体积)中而获得。添加HCl的MeOH溶液(约1.25M，1.10当量)以得到化合物1的HCl 盐形式起始材料。可将溶液真空蒸馏并将溶剂从MeOH改变为EtOAc (例如，约30-35体积)，其中温度任选地保持在约25℃至约35℃。可过滤浆液，并用EtOAc(例如，约5体积)洗涤滤饼。可将滤饼在50℃的真空烘箱中干燥。
在某些实施方案中，如通过例如X射线粉末衍射测量所指示，本文提供的固体形式(例如起始材料HCl盐形式)是基本上结晶的。在一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如起始材料HCl盐形式)具有基本上如图63中所示的X射线粉末衍射图。在一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如起始材料HCl盐形式)具有如图63中所描绘的在大约5.8、7.1、8.3、10.1、11.3、11.6、12.7、15.5、16.1、17.8、 19.2、19.7、20.5、21.1、23.0、24.0、25.5、26.3、27.2、28.4、31.0 或35.6°2θ(±0.2°2θ)或(±0.1°2θ)处的一个或多个特征性X射线粉末衍射峰。在一个具体实施方案中，本文提供的固体形式具有如图63 中所描绘的在大约21.1、19.2、20.5、17.8°2θ(±0.2°2θ)处的一个、两个、三个或四个特征性X射线粉末衍射峰。在一个实施方案中，所述固体形式是起始材料HCl盐形式。在另一个实施方案中，起始材料HCl盐形式具有如表42中列出的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、十五、十六、十七、十八、十九、二十、二十一或二十二个特征性X射线粉末衍射峰。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的起始材料HCl盐形式，其具有基本上对应于如图64中描绘的代表性TGA热谱图的TGA温度记录图。在某些实施方案中，起始材料HCl盐形式显示TGA热谱图，包括当从大约24℃加热至大约300℃时，在大约24℃与大约100℃之间样品总质量的大约1.1％的总质量损失。在某些实施方案中，所述结晶形式是化合物1的无水物。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的起始材料HCl盐形式，其具有如图64中描绘的DSC热谱图，包括当从大约24℃加热至大约300℃时，起始温度为约239℃且峰值最高温度为约249℃的吸热事件。
在一个实施方案中，本文提供了具有基本上如图65中描绘的 DVS等温线图的固体形式，例如起始材料HCl盐形式。
在另一个实施方案中，起始材料HCl盐形式是基本上纯的。在某些实施方案中，基本上纯的起始材料HCl盐形式基本上不含其他固体形式，例如非晶形固体。在某些实施方案中，基本上纯的起始材料 HCl盐形式的纯度不小于约95％、不小于约96％、不小于约97％、不小于约98％、不小于约98.5％、不小于约99％、不小于约99.5％或不小于约99.8％。
HCl盐形式1
在某些实施方案中，本文提供了化合物1的HCl盐形式1。
在一个实施方案中，HCl盐形式1是化合物1的固体形式。在一个实施方案中，HCl盐形式1是溶剂化物。在一个实施方案中，HCl 盐形式1是化合物1的IPA溶剂化物形式。在另一个实施方案中， HCl盐形式1是结晶。
在某些实施方案中，本文提供的HCl盐形式1通过平衡实验、蒸发实验和反溶剂重结晶实验获得(参见表23、表24和表25)。在某些实施方案中，HCl盐形式1从某些溶剂***(包括IPA)获得。
在一个实施方案中，制备HCl盐形式1的方法包括将化合物1 溶解在IPA中并缓慢蒸发所述IPA且收集固体的步骤。
在某些实施方案中，本文提供的固体形式(例如HCl盐形式1)是化合物1的HCl盐并且如通过例如X射线粉末衍射测量所指示是基本上结晶的。在一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如HCl盐形式1)具有基本上如图66中所示的X射线粉末衍射图(XRPD)。在一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如HCl盐形式1)具有如图66 中所描绘的在大约5.5、5.9、5.9、8.8、9.4、9.9、11.5、12.4、12.8、 15.6、15.9、16.2、17.4、18.6、20.4、20.7、21.0、21.3、21.7、22.1、 22.6、22.8、22.9、23.2、23.5、23.7、23.9、25.5、25.8、26.3、26.8、 27.0、28.4、29.3、30.3、32.1、32.2、33.5、35.5、36.6或37.6°2θ(±0.2° 2θ)或(±0.1°2θ)处的一个或多个特征性X射线粉末衍射峰。在一个具体实施方案中，本文提供的固体形式具有在大约5.5、5.9、8.8、9.4、 15.9、18.6、20.7、22.6、22.8、22.9、29.3、32.1或32.2°2θ(±0.2°2θ)处的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个或十三个特征性X射线粉末衍射峰。在一个实施方案中，所述固体形式是HCl盐形式1。在另一个实施方案中，本文提供的固体形式具有在大约8.8、9.4、15.9或20.7°2θ(±0.2°2θ)处的一个、两个、三个或四个特征性X射线粉末衍射峰。在另一个实施方案中，HCl盐形式1具有如表34中列出的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、十五、十六、十七、十八、十九、二十、二十一、二十二、二十三、二十四、二十五、二十六、二十七、二十八、二十九、三十、三十一、三十二、三十三、三十四、三十五、三十六、三十七、三十八、三十九、四十或四十一个特征性X射线粉末衍射峰。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式HCl盐，其具有基本上对应于如图67中描绘的代表性TGA热谱图的TGA温度记录图。在某些实施方案中，化合物1的结晶形式HCl盐显示TGA 热谱图，包括当从大约20℃加热至大约325℃时，在大约20℃与大约140℃之间样品总质量的大约6.6％的总质量损失。
在某些实施方案中，本文提供的固体形式显示TGA热谱图，包括当从大约20℃加热至大约325℃时，在大约150℃与大约200℃之间样品总质量的大约10％的总质量损失。因此，在某些实施方案中，当从约环境温度加热至约325℃时，化合物1的结晶形式HCl盐损失约17％的其总质量。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式HCl盐，其具有基本上如图67中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约350℃时，起始温度为约102℃且峰值最高温度为约114℃的吸热事件。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式HCl盐，其具有基本上如图67中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约350℃时，起始温度为约146℃且峰值最高温度为约181℃的吸热事件。
在另一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式HCl盐，其具有基本上如图67中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约350℃时，各自具有最高大于约250℃的多个吸热事件。
在另一个实施方案中，HCl盐形式1是基本上纯的。在某些实施方案中，基本上纯的HCl盐形式1基本上不含其他固体形式，例如非晶形固体。在某些实施方案中，基本上纯的HCl盐形式1的纯度不小于约95％、不小于约96％、不小于约97％、不小于约98％、不小于约98.5％、不小于约99％、不小于约99.5％或不小于约99.8％。
HCl盐形式2
在某些实施方案中，本文提供了HCl盐形式2。
在一个实施方案中，HCl盐形式2是化合物1的固体形式。在另一个实施方案中，HCl盐形式2是结晶。在一个实施方案中，HCl盐形式2是化合物1的无水物形式。在一个实施方案中，HCl盐形式2 是化合物1的溶剂化形式。在一个实施方案中，HCl盐形式2是化合物1的IPA溶剂化形式。在一个实施方案中，HCl盐形式2是化合物 1的甲苯溶剂化形式。
在某些实施方案中，本文提供的HCl盐形式2通过平衡实验、蒸发实验和反溶剂重结晶实验获得。在某些实施方案中，HCl盐形式2 从某些溶剂***(包括IPA/甲苯(约1:1))获得。
在某些实施方案中，如通过例如X射线粉末衍射测量所指示，本文提供的固体形式(例如HCl盐形式2)是基本上结晶的。在一个实施方案中，HCl盐形式2具有基本上如图68中所示的X射线粉末衍射图。在一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如HCl盐形式2) 具有如图68中所描绘的在大约5.5、5.8、9.0、9.8、9.9、10.7、11.0、 12.3、12.6、14.0、16.7、18.1、19.0、19.5、19.9、20.1、20.8、21.5、 21.8、22.0、22.8、23.3、24.0、24.3、24.6、24.9、25.3、26.0、26.5、 26.8、27.0、27.6、28.4、29.2、29.7、30.7、33.0或35.1°2θ(±0.2°2θ) 或(±0.1°2θ)处的一个或多个特征性X射线粉末衍射峰。在一个具体实施方案中，本文提供的固体形式(例如HCl盐形式2)具有在大约5.5、 9.0、9.8、9.9、12.3、12.6、16.7、18.1、19.0、21.5或22.8°2θ(±0.2° 2θ)处的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或十一个特征性X射线粉末衍射峰。在另一个实施方案中，本文提供的固体形式具有在大约9.0、9.8、9.9或16.7°2θ(±0.2°2θ)处的一个、两个、三个或四个特征性X射线粉末衍射峰。在一个实施方案中，所述固体形式是HCl盐形式2。在另一个实施方案中，HCl 盐形式2具有如表35中列出的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、十五、十六、十七、十八、十九、二十、二十一、二十二、二十三、二十四、二十五、二十六、二十七、二十八、二十九、三十、三十一、三十二、三十三、三十四、三十五、三十六、三十七或三十八个特征性X射线粉末衍射峰。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式HCl盐，其具有基本上对应于如图69中描绘的代表性TGA热谱图的TGA温度记录图。在某些实施方案中，结晶形式，HCl盐形式2显示TGA热谱图，包括当从大约20℃加热至大约325℃时，在大约20℃与大约 140℃之间样品总质量的大约2.6％的总质量损失。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式HCl盐，其具有基本上对应于图69中描绘的代表性TGA热谱图的TGA温度记录图，其中化合物1的结晶形式HCl盐显示TGA热谱图，包括当从大约20-℃加热至大约325℃时，在大约140℃与大约200℃之间样品总质量的大约14％的总质量损失。因此，在某些实施方案中，当从约环境温度加热至约325℃时，化合物1的结晶形式HCl盐损失约17％的其总质量。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式HCl盐，其具有如图69中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约 350℃时，起始温度为约151℃且峰值最高温度为约157℃的吸热事件。
在另一个实施方案中，HCl盐形式2是基本上纯的。在某些实施方案中，基本上纯的HCl盐形式2基本上不含其他固体形式，例如非晶形固体。在某些实施方案中，基本上纯的HCl盐形式2的纯度不小于约95％、不小于约96％、不小于约97％、不小于约98％、不小于约98.5％、不小于约99％、不小于约99.5％或不小于约99.8％。
HCl盐形式3
在某些实施方案中，本文提供了HCl盐形式3。
在一个实施方案中，HCl盐形式3是化合物1的固体形式。在另一个实施方案中，HCl盐形式3是结晶。在一个实施方案中，HCl盐形式3是化合物1的溶剂化形式。在一个实施方案中，HCl盐形式3 是化合物1的正丁醇溶剂化形式。在一个实施方案中，HCl盐形式3 是化合物1的庚烷溶剂化形式。在一个实施方案中，HCl盐形式3是化合物1的正丁醇/庚烷溶剂化形式。在一个实施方案中，HCl盐形式3是化合物1的水合形式。在一个实施方案中，HCl盐形式3是化合物1的无水物形式。
在某些实施方案中，本文提供的HCl盐形式3通过平衡实验、蒸发实验、冷却重结晶实验和反溶剂重结晶实验获得。在某些实施方案中，HCl盐形式3从某些溶剂***获得，所述溶剂***包括正丁醇、甲苯或正丁醇/甲苯(约1:1)。
在某些实施方案中，如通过例如X射线粉末衍射测量所指示，本文提供的固体形式(例如HCl盐形式3)是基本上结晶的。在一个实施方案中，HCl盐形式3具有基本上如图70中所示的X射线粉末衍射图。在一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如HCl盐形式3) 具有如图70中所描绘的在大约5.5、6.5、7.7、10.0、10.5、10.9、12.9、 14.8、15.9、16.2、18.3、18.9、19.4、20.4、21.0、21.8、22.2、22.5、 24.1、26.0、28.8、29.9、32.7或39.4°2θ(±0.2°2θ)或(±0.1°2θ)处的一个或多个特征性X射线粉末衍射峰。在一个具体实施方案中，本文提供的固体形式(例如HCl盐形式3)具有在大约5.5、6.5、10.9、16.2、 19.4、20.4、22.2或22.5°2θ(±0.2°2θ)处的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个或八个特征性X射线粉末衍射峰。在另一个实施方案中，本文提供的固体形式具有在大约5.5、16.2、19.4或20.4°2θ(±0.2°2θ)处的一个、两个、三个或四个特征性X射线粉末衍射峰。在一个实施方案中，所述固体形式是HCl盐形式3。在另一个实施方案中，HCl盐形式3具有如表36中列出的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、十五、十六、十七、十八、十九、二十、二十一、二十二、二十三或二十四个特征性X射线粉末衍射峰。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式HCl盐，其具有基本上对应于如图71中描绘的代表性TGA热谱图的TGA温度记录图。在某些实施方案中，化合物1的结晶形式HCl盐显示TGA 热谱图，包括当从大约25℃加热至大约140℃时，在大约50℃与大约175℃之间样品总质量的大约2.3％的总质量损失。在某些实施方案中，化合物1的结晶形式HCl盐显示TGA热谱图，包括当从大约25℃加热至大约140℃时，在大约140℃与大约210℃之间样品总质量的大约11％的总质量损失。因此，在某些实施方案中，当从约环境温度加热至约220℃时，化合物1的结晶形式HCl盐损失约13％的其总质量。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式HCl盐，其具有如图71中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约 350℃时，起始温度为约153℃且峰值最高温度为约168℃的吸热事件。
在另一个实施方案中，HCl盐形式3是基本上纯的。在某些实施方案中，基本上纯的HCl盐形式3基本上不含其他固体形式，例如非晶形固体。在某些实施方案中，基本上纯的HCl盐形式3的纯度不小于约95％、不小于约96％、不小于约97％、不小于约98％、不小于约98.5％、不小于约99％、不小于约99.5％或不小于约99.8％。
HCl盐形式4
在某些实施方案中，本文提供了HCl盐形式4。
在一个实施方案中，HCl盐形式4是化合物1的固体形式。在另一个实施方案中，HCl盐形式4是结晶。在一个实施方案中，HCl盐形式4是化合物1的溶剂化形式。在一个实施方案中，HCl盐形式4 是化合物1的甲醇溶剂化形式。在一个实施方案中，HCl盐形式4是化合物1的IPAc溶剂化形式。在一个实施方案中，HCl盐形式4是化合物1的MeOH/IPAc溶剂化形式。
在某些实施方案中，本文提供的HCl盐形式4通过平衡实验、蒸发实验、冷却重结晶实验和反溶剂重结晶实验获得。在某些实施方案中，HCl盐形式4从某些溶剂***(包括MeOH/IPAc)获得。
在某些实施方案中，如通过例如X射线粉末衍射测量所指示，本文提供的固体形式(例如HCl盐形式4)是基本上结晶的。在一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如HCl盐形式4)具有基本上如图 72中所示的X射线粉末衍射图。在一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如HCl盐形式4)具有如图72中所描绘的在大约7.9、8.1、 8.2、8.4、10.8、14.0、15.3、15.9、16.4、16.8、17.8、18.3、18.9、 19.1、19.7、20.3、21.0、21.6、22.1、23.3、23.6、24.9、25.3、26.3、 27.6、28.5、29.1、29.9、30.6、30.9、31.9、32.8、34.6或36.2°2θ(±0.2°2θ)或(±0.1°2θ)处的一个或多个特征性X射线粉末衍射峰。在一个具体实施方案中，本文提供的固体形式(例如HCl盐形式4)具有在大约 7.9、8.1、8.4、15.9、16.8、18.9、19.1或19.7°2θ(±0.2°2θ)处的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个或八个特征性X射线粉末衍射峰。在另一个实施方案中，本文提供的固体形式具有在大约7.9、 8.1、8.4或15.9°2θ(±0.2°2θ)处的一个、两个、三个或四个特征性X 射线粉末衍射峰。在一个实施方案中，所述固体形式是HCl盐形式4。在另一个实施方案中，HCl盐形式4具有如表37中列出的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、十五、十六、十七、十八、十九、二十、二十一、二十二、二十三、二十四、二十五、二十六、二十七、二十八、二十九、三十、三十一、三十二、三十三或三十四个特征性X射线粉末衍射峰。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式HCl盐，其具有基本上对应于如图73中描绘的代表性TGA热谱图的TGA温度记录图。在某些实施方案中，化合物1的结晶形式HCl盐显示TGA 热谱图，包括当从大约20℃加热至大约275℃时，在大约20℃与大约140℃之间样品总质量的大约4.5％的总质量损失。因此，在某些实施方案中，当从约环境温度加热至约275℃时，化合物1的结晶形式 HCl盐损失约4.5％的其总质量。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式HCl盐，其具有如图73中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约 275℃时，起始温度为约94℃且峰值最高温度为约118℃的吸热事件。在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式HCl盐，其具有如图73中描绘的DSC热谱图，进一步包括当从大约25℃加热至大约275℃时，起始温度为约219℃且峰值最高温度为约236℃的吸热事件。
在另一个实施方案中，HCl盐形式4是基本上纯的。在某些实施方案中，基本上纯的HCl盐形式4基本上不含其他固体形式，例如非晶形固体。在某些实施方案中，基本上纯的HCl盐形式4的纯度不小于约95％、不小于约96％、不小于约97％、不小于约98％、不小于约98.5％、不小于约99％、不小于约99.5％或不小于约99.8％。
HCl盐形式5
在某些实施方案中，本文提供了HCl盐形式5。
在一个实施方案中，HCl盐形式5是化合物1的固体形式。在另一个实施方案中，HCl盐形式5是结晶。在一个实施方案中，HCl盐形式5是化合物1的溶剂化形式。在一个实施方案中，HCl盐形式5 是化合物1的DMF溶剂化形式。
在某些实施方案中，本文提供的HCl盐形式5通过平衡实验、蒸气扩散和蒸发实验获得。在某些实施方案中，HCl盐形式5从某些溶剂***(包括DMF)获得。
在某些实施方案中，如通过例如X射线粉末衍射测量所指示，本文提供的固体形式(例如HCl盐形式5)是基本上结晶的。在一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如HCl盐形式5)具有基本上如图 74中所示的X射线粉末衍射图。在一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如HCl盐形式5)具有如图74中所描绘的在大约7.9、8.7、 10.0、11.7、13.3、13.6、15.1、15.7、17.2、17.9、19.9、20.6、21.3、 23.3、24.2、25.5、27.0、28.5、29.3、30.1、31.7、32.2、34.1、35.4、 37.0或38.8°2θ(±0.2°2θ)或(±0.1°2θ)处的一个或多个特征性X射线粉末衍射峰。在一个具体实施方案中，本文提供的固体形式(例如HCl 盐形式5)具有在大约7.9、8.7、10.0、11.7、15.1、15.7、17.2、19.9、 20.6、21.3、24.2或27.0°2θ(±0.2°2θ)处的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个或十二个特征性X 射线粉末衍射峰。在另一个实施方案中，本文提供的固体形式具有在大约7.9、19.9、20.6或27.0°2θ(±0.2°2θ)处的一个、两个、三个或四个特征性X射线粉末衍射峰。在一个实施方案中，所述固体形式是HCl盐形式5。在另一个实施方案中，HCl盐形式5具有如表38 中列出的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、十五、十六、十七、十八、十九、二十、二十一、二十二、二十三、二十四、二十五或二十六个特征性X射线粉末衍射峰。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式HCl盐，其具有基本上对应于如图75中描绘的代表性TGA热谱图的TGA温度记录图。在某些实施方案中，化合物1的结晶形式HCl盐显示TGA 热谱图，包括当从大约25℃加热至大约300℃时，在大约25℃与大约140℃之间样品总质量的大约4.2％的总质量损失。因此，在某些实施方案中，当从约环境温度加热至约300℃时，化合物1的结晶形式 HCl盐损失约4.2％的其总质量。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式，其具有如图75中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约220℃时，最大在约104℃的吸热事件。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式，其具有如图75中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约220℃时，起始温度为约192℃且峰值最高温度为约209℃的吸热事件。
在另一个实施方案中，HCl盐形式5是基本上纯的。在某些实施方案中，基本上纯的HCl盐形式5基本上不含其他固体形式，例如非晶形固体。在某些实施方案中，基本上纯的HCl盐形式5的纯度不小于约95％、不小于约96％、不小于约97％、不小于约98％、不小于约98.5％、不小于约99％、不小于约99.5％或不小于约99.8％。
HCl盐形式6
在某些实施方案中，本文提供了HCl盐形式6。
在一个实施方案中，HCl盐形式6是化合物1的固体形式。在另一个实施方案中，HCl盐形式6是结晶。在一个实施方案中，HCl盐形式6是化合物1的水合物。在一个实施方案中，HCl盐形式6是化合物1的五水合物。
在某些实施方案中，本文提供的HCl盐形式6通过平衡实验获得。在某些实施方案中，HCl盐形式6从某些溶剂***(包括0.1N HCl水溶液)获得。
在某些实施方案中，如通过例如X射线粉末衍射测量所指示，本文提供的固体形式(例如HCl盐形式6)是基本上结晶的。在一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如HCl盐形式6)具有基本上如图 76中所示的X射线粉末衍射图。在一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如HCl盐形式6)具有如图76中所描绘的在大约7.0、8.8、 9.9、11.5、12.2、12.4、14.7、16.3、16.7、17.5、17.9、18.2、18.6、 19.2、19.4、19.7、19.9、20.3、21.0、21.2、21.9、22.7、22.9、23.7、 24.6、25.0、25.6、26.3、26.5、26.8、27.2、27.6、28.2、28.7、29.1、 29.6、30.3、30.8、31.2、31.7、32.3、32.8、33.3、34.0、34.3、35.3、 36.2或37.0°2θ(±0.2°2θ)或(±0.1°2θ)处的一个或多个特征性X射线粉末衍射峰。在一个具体实施方案中，本文提供的固体形式(例如HCl 盐形式6)具有在大约9.9、12.4、16.3、17.5、19.2、19.7、19.9、21.0、25.0、25.6、27.2或32.3°2θ(±0.2°2θ)处的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个或十二个特征性X 射线粉末衍射峰。在另一个实施方案中，本文提供的固体形式具有在大约9.9、12.4、17.9或19.7°2θ(±0.2°2θ)处的一个、两个、三个或四个特征性X射线粉末衍射峰。在一个实施方案中，所述固体形式是HCl盐形式6。在另一个实施方案中，HCl盐形式6具有如表39 中列出的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、十五、十六、十七、十八、十九、二十、二十一、二十二、二十三、二十四、二十五、二十六、二十七、二十八、二十九、三十、三十一、三十二、三十三、三十四、三十五、三十六、三十七、三十八、三十九、四十、四十一、四十二、四十三、四十四、四十五、四十六、四十七或四十八个特征性X射线粉末衍射峰。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式HCl盐，其具有基本上对应于如图77中描绘的代表性TGA热谱图的TGA温度记录图。在某些实施方案中，化合物1的结晶形式HCl盐显示TGA 热谱图，包括当从大约20℃加热至大约300℃时，在大约25℃与大约100℃之间样品总质量的大约11.6％的总质量损失。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式HCl盐，其具有基本上对应于如图78中描绘的代表性TGA热谱图的TGA温度记录图。在某些实施方案中，化合物1的结晶形式HCl盐显示TGA 热谱图，包括当从大约20℃加热至大约300℃时，在大约25℃与大约60℃之间样品总质量的大约14.3％的总质量损失。
在某些实施方案中，化合物1的结晶形式HCl盐显示TGA热谱图，包括当从大约20℃加热至大约300℃时，在大约60℃与大约125℃之间样品总质量的大约1.6％的总质量损失。因此，在某些实施方案中，当从约环境温度加热至约100℃时，化合物1的晶体结晶形式 HCl盐损失约15.9％的其总质量。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式HCl盐，其具有如图77中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约 325℃时，起始温度为约53℃且峰值最高温度为约88℃的吸热事件。在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式HCl盐，其具有如图77中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约325℃时，起始温度为约201℃且峰值最高温度为约228℃的吸热事件。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式HCl盐，其具有如图79中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约 325℃时，起始温度为约59℃且峰值最高温度为约89℃的吸热事件。在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式HCl盐，其具有如图79中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约325℃时，起始温度为约211℃且峰值最高温度为约225℃的吸热事件。
在另一个实施方案中，HCl盐形式6是基本上纯的。在某些实施方案中，基本上纯的HCl盐形式6基本上不含其他固体形式，例如非晶形固体。在某些实施方案中，基本上纯的HCl盐形式6的纯度不小于约95％、不小于约96％、不小于约97％、不小于约98％、不小于约98.5％、不小于约99％、不小于约99.5％或不小于约99.8％。
HCl盐形式7
在某些实施方案中，本文提供了HCl盐形式7。
在一个实施方案中，HCl盐形式7是化合物1的固体形式。在另一个实施方案中，HCl盐形式7是结晶。在一个实施方案中，HCl盐形式7是化合物1的水合物。在一个实施方案中，HCl盐形式7是化合物1的一水合物。
在某些实施方案中，本文提供的HCl盐形式7通过平衡实验、蒸发实验和反溶剂重结晶实验获得。在某些实施方案中，HCl盐形式7 在室温下从某些溶剂***(包括水)获得。
在某些实施方案中，如通过例如X射线粉末衍射测量所指示，本文提供的固体形式(例如HCl盐形式7)是基本上结晶的。在一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如HCl盐形式7)具有基本上如图 80中所示的X射线粉末衍射图。在一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如HCl盐形式7)具有如图80中所描绘的在大约7.9、8.1、 8.3、10.8、13.8、14.5、15.3、15.6、16.2、16.6、17.0、17.6、18.3、 18.6、19.1、19.6、19.7、20.2、20.7、21.5、22.0、22.9、24.0、24.3、 25.2、26.2、28.4、29.0、29.5、30.2、30.8、31.2、32.5、33.1、34.7 或36.3°2θ(±0.2°2θ)或(±0.1°2θ)处的一个或多个特征性X射线粉末衍射峰。在一个具体实施方案中，本文提供的固体形式(例如HCl盐形式7)具有在大约7.9、8.1、8.3、10.8、15.3、16.2、18.3、19.1、19.6、 19.7、21.5、24.0、24.3或25.2°2θ(±0.2°2θ)处的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个或十四个特征性X射线粉末衍射峰。在另一个实施方案中，本文提供的固体形式具有在大约8.1、8.3、19.1或19.7°2θ(±0.2°2θ)处的一个、两个、三个或四个特征性X射线粉末衍射峰。在一个实施方案中，所述固体形式是HCl盐形式7。在另一个实施方案中，HCl 盐形式7具有如表40中列出的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、十五、十六、十七、十八、十九、二十、二十一、二十二、二十三、二十四、二十五、二十六、二十七、二十八、二十九、三十、三十一、三十二、三十三、三十四、三十五或三十六个特征性X射线粉末衍射峰。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式HCl盐，其具有基本上对应于如图81中描绘的代表性TGA热谱图的TGA温度记录图。在某些实施方案中，化合物1的结晶形式HCl盐显示TGA 热谱图，包括当从大约25℃加热至大约300℃时，在大约25℃与大约100℃之间样品总质量的大约3.8％的总质量损失。因此，在某些实施方案中，当从约环境温度加热至约300℃时，化合物1的结晶形式 HCl盐损失约3.8％的其总质量。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式HCl盐，其具有基本上对应于如图83中描绘的代表性TGA热谱图的TGA温度记录图。在某些实施方案中，化合物1的结晶形式HCl盐显示TGA 热谱图，包括当从大约25℃加热至大约300℃时，在大约25℃与大约100℃之间样品总质量的大约3.4％的总质量损失。因此，在某些实施方案中，当从约环境温度加热至约300℃时，化合物1的结晶形式 HCl盐损失约3.4％的其总质量。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式HCl盐，其具有如图81中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约 300℃时，起始温度为约80℃且峰值最高温度为约111℃的吸热事件。在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式HCl盐，其具有如图81中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约300℃时，起始温度为约215℃且峰值最高温度为约233℃的吸热事件。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式HCl盐，其具有如图82中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约 300℃时，起始温度为约71℃且峰值最高温度为约98℃的吸热事件。在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式HCl盐，其具有如图82中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约300℃时，起始温度为约209℃且峰值最高温度为约230℃的吸热事件。
在一个实施方案中，本文提供了具有基本上如图84中描绘的 DVS等温线图的固体形式，例如起始材料HCl盐形式。
在另一个实施方案中，HCl盐形式7是基本上纯的。在某些实施方案中，基本上纯的HCl盐形式7基本上不含其他固体形式，例如非晶形固体。在某些实施方案中，基本上纯的HCl盐形式7的纯度不小于约95％、不小于约96％、不小于约97％、不小于约98％、不小于约98.5％、不小于约99％、不小于约99.5％或不小于约99.8％。
HCl盐形式8
在某些实施方案中，本文提供了HCl盐形式8。
在一个实施方案中，HCl盐形式8是化合物1的固体形式。在另一个实施方案中，HCl盐形式8是结晶。在一个实施方案中，HCl盐形式8是化合物1的水合物。在一个实施方案中，HCl盐形式8是化合物1的一水合物。
在某些实施方案中，本文提供的HCl盐形式8通过平衡实验、蒸发实验和反溶剂重结晶实验获得。在某些实施方案中，HCl盐形式8 在50℃下从某些溶剂***(包括水)获得。
在某些实施方案中，如通过例如X射线粉末衍射测量所指示，本文提供的固体形式(例如HCl盐形式8)是基本上结晶的。在一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如HCl盐形式8)具有基本上如图 85中所示的X射线粉末衍射图。在一个实施方案中，本文提供的固体形式(例如HCl盐形式8)具有如图85中所描绘的在大约8.1、9.8、 10.1、10.8、11.1、11.6、15.7、16.2、16.9、17.4、18.0、18.7、19.2、19.6、21.4、22.1、22.9、23.8、24.2、25.1、25.5、26.2、26.7、28.2、 28.4、29.6、30.5、31.7、32.0、33.7、35.6、36.4或37.4°2θ(±0.2°2θ) 或(±0.1°2θ)处的一个或多个特征性X射线粉末衍射峰。在一个具体实施方案中，本文提供的固体形式具有在大约9.8、17.4、18.7或26.2° 2θ(±0.2°2θ)处的一个、两个、三个或四个特征性X射线粉末衍射峰。在一个实施方案中，所述固体形式是HCl盐形式8。在另一个实施方案中，HCl盐形式8具有如表41中列出的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、十五、十六、十七、十八、十九、二十、二十一、二十二、二十三、二十四、二十五、二十六、二十七、二十八、二十九、三十、三十一、三十二或三十三个特征性X射线粉末衍射峰。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式HCl盐，其具有基本上对应于如图86中描绘的代表性TGA热谱图的TGA温度记录图。在某些实施方案中，化合物1的结晶形式HCl盐显示TGA 热谱图，包括当从大约25℃加热至大约300℃时，在大约25℃与大约100℃之间样品总质量的大约3.1％的总质量损失。在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式HCl盐，其具有基本上对应于如图87中描绘的代表性TGA热谱图的TGA温度记录图。在某些实施方案中，化合物1的结晶形式HCl盐显示TGA热谱图，包括当从大约25℃加热至大约300℃时，在大约30℃与大约120℃之间样品总质量的大约3.0％的总质量损失。
在某些实施方案中，化合物1的结晶形式HCl盐显示TGA热谱图，包括当从大约30℃加热至大约300℃时，在大约125℃与大约 215℃之间样品总质量的大约2.6％的总质量损失。因此，在某些实施方案中，当从约环境温度加热至约220℃时，化合物1的结晶形式 HCl盐损失约5.6％的其总质量。一水合HCl盐形式8的理论水含量是2.9％并且与上述TGA热谱图中样品损失的总质量百分比相匹配。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式HCl盐，其具有如图86中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约 300℃时，起始温度为约117℃且峰值最高温度为约148℃的吸热事件。在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式HCl盐，其具有如图86中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约 300℃时，起始温度为约208℃且峰值最高温度为约221℃的吸热事件。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式HCl盐，其具有如图88中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约 275℃时，最大在约148℃的吸热事件。在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式HCl盐，其具有如图88中描绘的DSC热谱图，包括当从大约25℃加热至大约300℃时，起始温度为约204℃且峰值最高温度为约224℃的吸热事件。
在另一个实施方案中，HCl盐形式8是基本上纯的。在某些实施方案中，基本上纯的HCl盐形式8基本上不含其他固体形式，例如非晶形固体。在某些实施方案中，基本上纯的HCl盐形式8的纯度不小于约95％、不小于约96％、不小于约97％、不小于约98％、不小于约98.5％、不小于约99％、不小于约99.5％或不小于约99.8％。
使用方法
本文所述的化合物1的固体形式可用作治疗、预防或改善动物或人的病状的药物。因此，本文提供了可用于如本文提供的所有方法中的本文所述的化合物1的固体形式。具体地，如本文提供的化合物1 的固体形式用于治疗或预防癌症。本文提供的方法包括向有需要的对象施用有效量的本文所述的化合物1的一种或多种固体形式。应理解，本文所述的方法还包括用药物组合物(如下文提供的那些)治疗，其中所述药物组合物包含本文所述的化合物1的固体形式和任选的至少一种药学上可接受的赋形剂。
在另一方面，本文提供了用于治疗或预防癌症的方法，所述方法包括向有需要的对象施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式化合物1的固体形式。在一些实施方案中，所述癌症是实体瘤或血液肿瘤。在一些实施方案中，所述癌症不是黑色素瘤。
在一些实施方案中，所述实体瘤是黑色素瘤、结肠直肠癌、胃癌、头颈癌、甲状腺癌、膀胱癌、CNS癌、肺癌、胰腺癌以及软组织癌。在一个实施方案中，所述实体瘤是内分泌癌、膀胱癌、乳腺癌、***、结肠癌、十二指肠癌、神经胶质瘤、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌(例如非小细胞肺癌NSCLC)、食道癌、甲状腺癌或胰腺癌。
在其他实施方案中，所述癌症是膀胱癌、乳腺癌(例如，Her阳性、 Her阴性或EGFR阳性)、CNS癌症(包括成神经细胞瘤和神经胶质瘤)、结肠癌、胃肠癌(例如，胃癌和结肠癌)、内分泌癌(例如，甲状腺癌或肾上腺癌)、女性泌尿生殖***癌症(例如，***、卵巢透明细胞癌、外阴癌、子宫癌或卵巢癌)、头颈癌、造血***癌症(例如，白血病或骨髓瘤)、肾癌、肝癌、肺癌(例如，NSCLC或SCLC)、黑色素瘤、胰腺癌、***癌或软组织癌(例如，肉瘤或骨肉瘤)。
在另一个实施方案中，所述癌症是膀胱癌、乳腺癌(例如Her阳性、Her阴性或EGFR阳性)、CNS癌症(例如，神经胶质瘤或成神经细胞瘤)、结肠癌、胃肠癌(例如，胃癌)、内分泌癌(例如，甲状腺癌或肾上腺癌)、女性泌尿生殖***癌症(例如，子宫癌、***、卵巢透明细胞癌或外阴癌)、头颈癌、造血***癌症(例如，白血病或骨髓瘤)、肾癌、肝癌、肺癌(例如，NSCLC或SCLC)、黑色素瘤、胰腺癌、***癌或软组织癌(例如，肉瘤或骨肉瘤)。
在又一个实施方案中，所述癌症是表44中列出的癌症。
本文还提供了用于治疗或预防肝细胞癌(HCC)的方法，所述方法包括向有需要的对象施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式。
本文还提供了用于治疗或预防结肠直肠癌(CRC)、黑色素瘤、胃癌、HCC、肺癌、胰腺癌、白血病或多发性骨髓瘤的方法，所述方法包括向有需要的对象施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式或如本文所述的其药物组合物。在一个实施方案中，CRC、胃癌或HCC是以β-连环蛋白突变为特征的癌症。本文还提供了用于治疗或预防结肠直肠癌(CRC)、胃癌、HCC、肺癌、胰腺癌、白血病以及多发性骨髓瘤的方法，所述方法包括向有需要的对象施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式，如本文所述。
在另一个实施方案中，本文提供了治疗白血病的方法，所述方法包括施用如本文所述的化合物1的固体形式或其药物组合物。白血病可以是慢性髓性白血病(CML)。在另一个实施方案中，白血病是急性骨髓性白血病(AML)。在一个实施方案中，白血病是FLT-3突变的 AML。
在另一个实施方案中，本文提供了治疗淋巴瘤的方法，所述方法包括施用如本文所述的化合物1的固体形式或其药物组合物。淋巴瘤可以是伯基特淋巴瘤。在一个实施方案中，白血病是霍奇金淋巴瘤。在另一个实施方案中，白血病是B细胞淋巴瘤。在另一个实施方案中，白血病是T细胞淋巴瘤。在又一个实施方案中，淋巴瘤是原发性渗出性淋巴瘤(PEL)。
化合物1的固体形式在多种癌细胞系中显示出抗增殖活性。(表 44)这些癌细胞系中的抗增殖活性表明化合物1的固体形式可用于治疗癌症，包括造血***肿瘤和实体瘤。在一个实施方案中，造血***肿瘤和实体瘤选自膀胱癌、乳腺癌、CNS癌(例如，成神经细胞瘤、成神经管细胞瘤和神经胶质瘤)、结肠癌、十二指肠癌、内分泌癌(例如，甲状腺癌和肾上腺癌)、女性泌尿生殖***癌症(例如，子宫癌、***、卵巢癌和外阴癌)、头颈癌(例如食道癌)、造血***癌症和淋巴癌(例如，淋巴瘤、白血病和骨髓瘤)、肾癌、肝癌、肺癌(例如，NSCLC和SCLC)、胰腺癌、***癌、皮肤癌(例如，黑色素瘤和癌)、软组织癌(例如，肉瘤和骨肉瘤)、胃癌以及睾丸癌。在一个实施方案中，造血***肿瘤和实体瘤选自膀胱癌、乳腺癌、CNS癌(例如，成神经细胞瘤、成神经管细胞瘤和神经胶质瘤)、结肠癌、十二指肠癌、内分泌癌(例如，甲状腺癌和肾上腺癌)、女性泌尿生殖***癌症(例如，子宫癌、***和外阴癌)、头颈癌、造血***癌症和淋巴癌(例如，淋巴瘤、白血病和骨髓瘤)、肾癌、肝癌、肺癌(例如，NSCLC和SCLC)、胰腺癌、***癌、皮肤癌(例如，黑色素瘤和癌)、软组织癌(例如，肉瘤和骨肉瘤)、胃癌以及睾丸癌。
在另一个实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式在多种癌细胞系中诱导细胞凋亡。细胞凋亡的诱导表明本文所述的化合物1的固体形式可用于治疗癌症，包括造血***肿瘤和实体瘤。在一个实施方案中，造血***肿瘤和实体瘤选自膀胱癌、乳腺癌、CNS癌(例如，成神经细胞瘤和神经胶质瘤)、结肠癌、十二指肠癌、内分泌癌(例如，甲状腺癌和肾上腺癌)、女性泌尿生殖***癌症(例如，子宫癌、***、卵巢癌和外阴癌)、头颈癌(例如食道癌)、造血***癌症和淋巴癌 (例如，淋巴瘤、白血病和骨髓瘤)、肾癌、肝癌、肺癌(例如，NSCLC 和SCLC)、胰腺癌、***癌、皮肤癌(例如，黑色素瘤和癌)、软组织癌(例如，肉瘤和骨肉瘤)、胃癌以及睾丸癌。在一个实施方案中，造血***肿瘤和实体瘤选自膀胱癌、乳腺癌、CNS癌(例如，成神经细胞瘤和神经胶质瘤)、结肠癌、十二指肠癌、内分泌癌(例如，甲状腺癌和肾上腺癌)、女性泌尿生殖***癌症(例如，外阴癌)、头颈癌(例如食道癌)、造血***癌症和淋巴癌(例如，淋巴瘤和白血病)、肾癌、肝癌、肺癌(例如，NSCLC和SCLC)、胰腺癌、***癌、皮肤癌(例如，黑色素瘤)、软组织癌(例如，肉瘤和骨肉瘤)、胃癌以及睾丸癌。在一个实施方案中，造血***肿瘤和实体瘤选自膀胱癌、乳腺癌、CNS 癌(例如，成神经管细胞瘤、成神经细胞瘤和神经胶质瘤)、结肠癌、十二指肠癌、内分泌癌(例如，甲状腺癌和肾上腺癌)、女性泌尿生殖***癌症(例如，胎盘癌、子宫癌、***、卵巢癌和外阴癌)、头颈癌(例如食道癌)、造血***癌症和淋巴癌(例如，淋巴瘤、白血病和骨髓瘤)、肾癌、肝癌、肺癌(例如，NSCLC和SCLC)、胰腺癌、***癌、皮肤癌(例如，黑色素瘤和癌)、软组织癌(例如，肉瘤和骨肉瘤)、胃癌以及睾丸癌。在又一个实施方案中，所述病例是表44中列出的癌症。
本文还提供了用于治疗或预防以BRAF突变和/或β-连环蛋白突变(或者称为CTNNB1突变)为特征的癌症的方法，所述方法包括向有需要的对象施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式。在一些此类实施方案中，癌症的特征在于BRAF突变。在另一个实施方案中，癌症的特征在于β-连环蛋白突变。在另一个实施方案中，癌症的特征在于活化的β-连环蛋白途径。在一些此类实施方案中，癌症是以 BRAF突变为特征的CRC或黑色素瘤。在其他实施方案中，癌症是以β-连环蛋白突变为特征的CRC，其另外包含EGFR突变或增加的EGFR活性(例如，以活化的β-连环蛋白途径和EGFR突变为特征的 CRC，或以活化的β-连环蛋白途径和增加的EGFR活性为特征的CRC)。在其他实施方案中，癌症是以β-连环蛋白突变为特征的胃癌，其另外包含KRAS突变(即以活化的β-连环蛋白途径和KRAS突变为特征的胃癌)。在另一个实施方案中，癌症是以活化的β-连环蛋白途径为特征的HCC。在一些此类实施方案中，BRAF突变是BRAF V660E。在其他实施方案中，BRAF突变是BRAF V600E、BRAF T119S或BRAF G596R中的一种或多种。在一些此类实施方案中，β-连环蛋白突变是β-连环蛋白S33Y、G34E、S45del或S33C中的一种或多种。在一些此类实施方案中，EGFR突变是EGFRE282K、G719S、P753S 或V1011M中的一种或多种。在一些此类实施方案中，KRAS突变是A146T、G12C、G12D、G12V、G13D或Q61L。
本文还提供了用于治疗或预防表达PD-L1的癌症的方法，所述方法包括向有需要的对象施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式。在一些此类实施方案中，表达PD-L1的癌症是黑色素瘤、肺癌、肾细胞癌(RCC)或HCC。
本文还提供了用于治疗或预防以BRAF突变为特征的癌症的方法，所述方法包括向有需要的对象施用有效量的如本文所述的化合物 1的固体形式。在一些此类实施方案中，以BRAF突变为特征的癌症是CRC、甲状腺癌、黑色素瘤或肺癌。在一些此类实施方案中，以BRAF突变为特征的癌症是CRC、甲状腺癌或肺癌。在一些此类实施方案中，BRAF突变是BRAFV660E。在其他实施方案中，BRAF突变是BRAF V600E、BRAF T119S或BRAF G596R中的一种或多种。
本文还提供了用于治疗或预防以NRAS突变为特征的癌症的方法，所述方法包括向有需要的对象施用有效量的如本文所述的化合物 1的固体形式。在一些此类实施方案中，以NRAS突变为特征的癌症是黑色素瘤。
本文还提供了用于治疗或预防以KRAS突变为特征的癌症的方法，所述方法包括向有需要的对象施用有效量的如本文所述的化合物 1的固体形式。在一些此类实施方案中，以KRAS突变为特征的癌症是CRC、胰腺癌或肺癌。
本文还提供了用于治疗或预防以β-连环蛋白突变为特征的癌症的方法，所述方法包括向有需要的对象施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式。本文还提供了用于治疗或预防以活化的β-连环蛋白途径为特征的癌症的方法，所述方法包括向有需要的对象施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式。在一些此类实施方案中，以β-连环蛋白突变为特征的癌症是CRC、胃癌、HCC或肉瘤。在一些此类实施方案中，以活化的β-连环蛋白途径为特征的癌症是CRC、胃癌、HCC或肉瘤。
本文还提供了用于治疗或预防肝细胞癌(HCC)的方法，所述方法包括向有需要的对象施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式。在一些此类实施方案中，HCC的特征在于β-连环蛋白突变和/或增加的YAP表达。在一些此类实施方案中，HCC的特征在于活化的β-连环蛋白途径和/或增加的YAP扩增表达。在一些实施方案中，增加的YAP表达是由于扩增或突变。
本文还提供了用于治疗或预防结肠直肠癌(CRC)的方法，所述方法包括向有需要的对象施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式。在一些此类实施方案中，CRC的特征在于BRAF突变和/或β- 连环蛋白突变。在一些此类实施方案中，CRC的特征在于BRAF突变和/或活化的β-连环蛋白途径。
本文还提供了用于治疗或预防胃癌的方法，所述方法包括向有需要的对象施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式。在一些此类实施方案中，胃癌的特征在于β-连环蛋白突变。在一些此类实施方案中，胃癌的特征在于活化的β-连环蛋白途径。
本文还提供了用于治疗或预防黑色素瘤的方法，所述方法包括向有需要的对象施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式。在一些此类实施方案中，黑色素瘤的特征在于BRAF突变和/或NRAS突变。
本文进一步提供了用于预测患有以基因突变为特征的癌症的患者中对用本文所述的化合物1的固体形式治疗的响应的方法，所述方法包括：a)从所述患者的癌症获得生物测试样品；b)获得所述生物测试样品中选自BRAF、NRAS、KRAS和/或CTNNB1的一种或多种基因的基因序列；c)将所述基因序列与生物野生型样品的基因序列进行比较；其中突变的存在表明对所述患者的癌症的本文所述的化合物1 的固体形式治疗的响应的可能性增加。在一些此类实施方案中，所述方法另外包括施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式。
本文进一步提供了用于预测患有以基因突变为特征的癌症的患者的用于治疗的本文所述的化合物1的固体形式的治疗功效的方法，所述方法包括：a)从所述患者的癌症获得生物测试样品；b)获得所述生物测试样品中选自BRAF、NAS、KRAS和/或CTNNB1的一种或多种基因的基因序列；c)将所述基因序列与生物野生型样品的基因序列进行比较；其中突变的存在表明用于所述患者的使用本文所述的化合物1的固体形式的所述治疗的治疗功效的可能性增加。在一些此类实施方案中，所述方法另外包括施用有效量的如本文所述的化合物1 的固体形式。
在一些实施方案中，本文提供了用于治疗和预防癌症转移的方法，所述方法包括向有需要的对象施用有效量的如本文所述的化合物 1的固体形式。在一些实施方案中，所述癌症是转移性癌症，特别是转移性实体瘤或转移性血液癌症，其中所述实体瘤和血液癌症是如本文所述。在其他实施方案中，本文提供了治疗和预防癌症转移的方法，所述方法包括向有需要的对象施用有效量的如本文所述的化合物1 的固体形式。在另一方面，本文提供了根除对象的癌症干细胞的方法，所述方法包括向有需要的对象施用有效量的如本文所述的化合物1 的固体形式。在其他实施方案中，本文提供了诱导对象的癌症干细胞的分化的方法，所述方法包括向有需要的对象施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式。在其他实施方案中，本文提供了诱导对象的癌症干细胞死亡的方法，所述方法包括向有需要的对象施用有效量的本文所述的化合物1的固体形式。在一些此类实施方案中，所述癌症是如本文所述的实体瘤或血液癌症。
在一个实施方案中，本文提供了用于在患者中实现完全响应、部分响应或稳定疾病的实体瘤响应评价标准(RECIST 1.1)的方法，所述方法包括向患有癌症(特别是如本文所述的实体瘤)的患者施用有效量的本文所述的化合物1的固体形式。在另一个实施方案中，本文提供了如通过卡普兰-迈耶估计确定的增加无进展存活率的方法。
在一个实施方案中，本文提供了用于预防或延迟患者的进行性疾病的实体瘤响应评价标准(RECIST 1.1)的方法，所述方法包括向患有如本文所述的实体瘤的患者施用有效量的本文所述的化合物1的固体形式。在一个实施方案中，通过靶标病灶的总体大小(例如与治疗前相比介于-30％与+20％之间)的变化来表征或实现进行性疾病的预防或延迟。在另一个实施方案中，靶标病灶的大小变化是总体大小降低超过30％，例如与治疗前相比，靶标病灶大小降低超过50％。在另一个实施方案中，通过与治疗前相比非靶标病灶的大小减小或进展延迟来表征或实现预防。在一个实施方案中，通过与治疗前相比靶标病灶的数量减少来实现或表征预防。在另一个实施方案中，通过与治疗前相比非靶标病灶的数量或质量的降低来实现或表征预防。在一个实施方案中，通过与治疗前相比靶标病灶的不存在或消失来实现或表征预防。在另一个实施方案中，通过与治疗前相比非靶标病灶的不存在或消失来实现或表征预防。在另一个实施方案中，通过与治疗前相比新病灶的预防来实现或表征预防。在另一个实施方案中，通过与治疗前相比疾病进展的临床病征或症状(如癌症相关的恶病质或增加的疼痛)的预防来实现或表征预防。在一个实施方案中，所述病例是表44中列出的癌症。
在某些实施方案中，本文提供了用于与治疗前相比减小患者的靶标病灶的大小的方法，所述方法包括向患有癌症(特别是如本文所述的实体瘤)的患者施用有效量的本文所述的化合物1的固体形式。
在某些实施方案中，本文提供了用于与治疗前相比减小患者的非靶标病灶的大小的方法，所述方法包括向患有癌症(特别是如本文所述的实体瘤)的患者施用有效量的本文所述的化合物1的固体形式。
在某些实施方案中，本文提供了用于与治疗前相比实现患者的靶标病灶的数量减少的方法，所述方法包括向患有癌症(特别是如本文所述的实体瘤)的患者施用有效量的本文所述的化合物1的固体形式。
在某些实施方案中，本文提供了用于与治疗前相比实现患者的非靶标病灶的数量减少的方法，所述方法包括向患有癌症(特别是如本文所述的实体瘤)的患者施用有效量的本文所述的化合物1的固体形式。
在某些实施方案中，本文提供了用于实现患者的所有靶标病灶的消失的方法，所述方法包括向患有癌症(特别是如本文所述的实体瘤) 的患者施用有效量的本文所述的化合物1的固体形式。
在某些实施方案中，本文提供了用于实现患者的所有非靶标病灶的消失的方法，所述方法包括向患有癌症(特别是如本文所述的实体瘤)的患者施用有效量的本文所述的化合物1的固体形式。
在某些实施方案中，本文提供了用于治疗癌症，特别是如本文所述的实体瘤的方法，所述方法包括向患有癌症(特别是实体瘤)的患者施用有效量的本文所述的化合物1的固体形式，其中如通过实体瘤的响应评价标准(RECIST 1.1)所确定，所述治疗产生完全响应、部分响应或稳定疾病。
在某些实施方案中，本文提供了用于治疗癌症，特别是如本文所述的实体瘤的方法，所述方法包括向患有癌症(特别是如本文所述的实体瘤)的患者施用有效量的本文所述的化合物1的固体形式，其中所述治疗使得与治疗前相比，靶标病灶大小减小、非靶标病灶大小减小和/或新靶标和/或非靶标病灶不存在。在一个实施方案中，所述病例是表44中列出的癌症。
在某些实施方案中，本文提供了用于治疗癌症，特别是如本文所述的实体瘤的方法，所述方法包括向患有癌症(特别是如本文所述的实体瘤)的患者施用有效量的本文所述的化合物1的固体形式，其中所述治疗产生临床进展，如癌症相关的恶病质或增加的疼痛的预防或延迟。
在另一个实施方案中，本文提供了用于诱导患者的治疗响应的方法，所述治疗响应用NHL的国际研讨会标准(IWC)(参见Cheson BD, Pfistner B,Juweid,ME,等人RevisedResponse Criteria for Malignant Lymphoma.J.Clin.Oncol:2007:(25)579-586)进行表征，所述方法包括向患有癌症(特别是如本文所述的血液癌症如淋巴瘤)的患者施用有效量的本文所述的化合物1的固体形式。在另一个实施方案中，本文提供了用于实现完全缓解、部分缓解或稳定疾病(如通过患者的NHL 的国际研讨会标准(IWC)所确定)的方法，所述方法包括向患有癌症 (特别是如本文所述的血液癌症如淋巴瘤)的患者施用有效量的本文所述的化合物1的固体形式。在另一个实施方案中，本文提供了用于实现患者的总体存活、无进展存活、无事件存活、进展时间、无疾病存活或无淋巴瘤存活的增加(如通过NHL的国际研讨会标准(IWC)所确定)的方法，所述方法包括向患有癌症(特别是如本文所述的血液癌症如淋巴瘤)的患者施用有效量的本文所述的化合物1的固体形式。
在另一个实施方案中，本文提供了用于诱导患者的用多发性骨髓瘤的国际统一响应标准(IURC)(参见Durie BGM,Harousseau J-L, Miguel JS,等人Internationaluniform response criteria for multiple myeloma.Leukemia,2006；(10)10:1-7)评估的治疗响应的方法，所述方法包括向患有癌症(特别是多发性骨髓瘤)的患者施用有效量的化合物1的固体形式。在另一个实施方案中，本文提供了用于实现患者的严格完全响应、完全响应、非常好的部分响应或部分响应(如通过多发性骨髓瘤的国际统一响应标准(IURC)所确定)的方法，所述方法包括向患有癌症(特别是多发性骨髓瘤)的患者施用有效量的本文所述的化合物1的固体形式。在另一个实施方案中，本文提供了用于实现患者的总体存活、无进展存活、无事件存活、进展时间或无疾病存活的增加的方法，所述方法包括向患有癌症(特别是多发性骨髓瘤)的患者施用有效量的本文所述的化合物1的固体形式。
在另一个实施方案中，本文提供了用于诱导患者的用GBM的神经肿瘤学响应评估(RANO)工作组(参见Wen P.,Macdonald,DR., Reardon,DA.,等人Updated responseassessment criteria for high-grade gliomas:Response assessment in neuro-oncology working group.J.Clin. Oncol.2010；28:1963-1972)评估的治疗响应的方法，所述方法包括向患有癌症(特别是多形性成胶质细胞瘤(GBM))的患者施用有效量的本文所述的化合物1的固体形式。在一个实施方案中，相对于GBM类型的功效可评价对象，RANO将用于确立从治疗第1天起6个月无进展的对象的比例。
在另一个实施方案中，本文提供了用于改善患者的东部肿瘤协作组行为状态(ECOG)的方法，所述方法包括向患有癌症(特别是如本文所述的实体瘤或血液癌症)的患者施用有效量的本文所述的化合物1 的固体形式。
在另一个实施方案中，本文提供了用于诱导患者的通过正电子发射断层扫描(PET)结果评估的治疗响应的方法，所述方法包括向患有癌症(特别是如本文所述的实体瘤或血液癌症)的患者施用有效量的本文所述的化合物1的固体形式。在某些实施方案中，本文提供了用于治疗癌症，特别是如本文所述的实体瘤或血液癌症的方法，所述方法包括向患有癌症(特别是如本文所述的实体瘤或血液癌症)的患者施用有效量的本文所述的化合物1的固体形式，其中所述治疗使得肿瘤代谢活性降低，例如如通过PET成像所测量。
本文进一步提供了用于治疗先前已针对癌症(特别是如本文所述的实体瘤或血液癌症)治疗过的患者以及先前尚未治疗的那些患者的方法。此类方法包括施用本文所述的化合物1的固体形式。因为患有癌症的患者具有不同的临床表现和不同的临床结果，所以给予至患者的治疗可取决于他的/她的预后有所不同。熟练的临床医生将能够在没有过度实验的情况下容易地确定特定的第二药剂、手术类型以及可有效地用于治疗患有癌症的个体患者的基于非药物的标准疗法的类型。
生物标志物
在一个实施方案中，本文提供了用于调节患有如本文所述的癌症的对象中生物标志物的水平的方法，所述方法包括向所述对象施用有效量的本文所述的化合物1的固体形式。在一些此类实施方案中，在所述对象的生物样品中，例如在循环血液、皮肤活检物、肿瘤活检物、循环肿瘤细胞、毛发和/或尿液中评估所述生物标志物的调节。在一个实施方案中，所述生物样品是外周血单核细胞(PBMC)。在此类实施方案中，通过比较在施用本文所述的化合物1的固体形式或其药物组合物之前和之后的生物标志物的量来评估生物标志物调节的量。
在一些实施方案中，所述生物标志物是ERK、RSK1、DUSP4、 DUSP5、DUSP6、BMF、EFNA1、EGR1、ETV5、FOS、FOSL1、 GJA1、IL-8、cMyc、细胞周期蛋白D1、YAP、SPRY2、SPRY4、Axin2、 CTGF、AREG、CYR61、CXCL1、HAS2、HES1、MAFF、CITED2、 ELF3或PD-L1。在一些此类实施方案中，通过测量ERK和RSK1中的一种或多种的磷酸化水平的降低来测量调节。在一些实施方案中，生物标志物的调节是与基线水平相比，降低约10％、20％、25％、30％、 40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、95％、99％或约100％。在一些其他实施方案中，生物标志物的调节是与基线水平相比，增加约10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、 90％、95％、99％或约100％。
在一些实施方案中，所述生物标志物是DUSP4、DUSP6、细胞周期蛋白D1、c-Myc、SPRY2和YAP中的一种或多种。在一些此类实施方案中，通过测量DUSP4、DUSP6、细胞周期蛋白D1、c-Myc 和YAP中的一种或多种的mRNA和/或蛋白质表达水平的降低来测量调节。在一些此类实施方案中，通过测量DUSP4、DUSP6、SPRY2、 c-Myc和细胞周期蛋白D1中的一种或多种的mRNA和/或蛋白质表达水平的降低来测量调节。在一些实施方案中，生物标志物的调节是与基线水平相比，降低约10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、 70％、75％、80％、90％、95％、99％或约100％。
在一些实施方案中，所述生物标志物是DUSP5、DUSP6、EGR1、 ETV5、FOS、FOSL1、IL8、SPRY2和SPRY4中的一种或多种。在一些此类实施方案中，通过测量DUSP5、DUSP6、EGR1、ETV5、 FOS、FOSL1、IL8、SPRY2和SPRY4中的一种或多种的mRNA和/ 或蛋白质表达水平的降低来测量调节。在一些实施方案中，生物标志物的调节是与基线水平相比，降低约10％、20％、25％、30％、40％、 50％、60％、70％、75％、80％、90％、95％、99％或约100％。
在一些实施方案中，所述生物标志物是BMF和EFNA中的一种或多种。在一些此类实施方案中，通过测量BMF和EFNA1中的一种或多种的mRNA和/或蛋白质表达水平的增加来测量调节。在一些实施方案中，生物标志物的调节是与基线水平相比，增加约10％、 20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、95％、 99％或约100％。
在一些实施方案中，所述生物标志物是GJA1。在一些此类实施方案中，通过测量一种或多种GJA1的mRNA和/或蛋白质表达水平的调节来测量调节。在一些此类实施方案中，生物标志物的调节是与基线水平相比，降低约10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、95％、99％或约100％。在一些实施方案中，生物标志物的调节是与基线水平相比，增加约10％、20％、25％、30％、 40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、95％、99％或约100％。
在一些实施方案中，所述生物标志物是Axin2、CTGF、Cur61和 AREG中的一种或多种。在一些此类实施方案中，通过测量Axin2、 CTGF和AREG中的一种或多种的mRNA和/或蛋白质表达水平的降低来测量调节。在一些实施方案中，生物标志物的调节是与基线水平相比，降低约10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、 80％、90％、95％、99％或约100％。
在一些实施方案中，所述生物标志物是CYR61、CXCL1、HAS2、 HES1和MAFF中的一种或多种。在一些此类实施方案中，通过测量 CYR61、CXCL1、HAS2、HES1和MAFF中的一种或多种的mRNA 和/或蛋白质表达水平的降低来测量调节。在一些实施方案中，生物标志物的调节是与基线水平相比，降低约10％、20％、25％、30％、 40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、95％、99％或约100％。
在一些实施方案中，所述生物标志物是CITED2和ELF3中的一种或多种。在一些此类实施方案中，通过测量CITED2和ELF3中的一种或多种的mRNA和/或蛋白质表达水平的增加来测量调节。在一些实施方案中，生物标志物的调节是与基线水平相比，增加约10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、95％、 99％或约100％。
在一些实施方案中，所述生物标志物是PD-L1。在一些实施方案中，生物标志物水平的调节是PD-L1的细胞表面表达水平的降低。在一些实施方案中，生物标志物的调节是与基线水平相比，降低约 10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、95％、99％或约100％。
在另一个实施方案中，所述生物标志物是IFNγ或IL-2。在一些此类实施方案中，生物标志物水平的调节是IFNγ或IL-2的mRNA 和/或蛋白质表达水平的增加。在一些此类实施方案中，IFNγ或IL-2 的mRNA和/或蛋白质表达水平的调节是与基线水平相比，增加约10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、 95％、99％或约100％。
在另一个实施方案中，所述生物标志物是IL-8。在一些此类实施方案中，生物标志物水平的调节是IL-8的mRNA和/或蛋白质表达水平的降低。在一些此类实施方案中，IL-8的mRNA和/或蛋白质表达水平的调节是与基线水平相比，降低约10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、95％、99％或约100％。
在一个实施方案中，本文提供了用于抑制患有如本文所述的癌症的对象中ERK和/或RSK1的磷酸化的方法，所述方法包括向所述对象施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式。在一些此类实施方案中，在对象的生物样品中，例如在循环血液和/或肿瘤细胞、皮肤活检物和/或肿瘤活检物或抽吸物中评估磷酸化的抑制。在此类实施方案中，通过比较在施用本文提供的化合物1的固体形式之前和之后的磷酸-ERK和/或RSK1的量来评估磷酸化抑制的量。在某些实施方案中，本文提供了用于测量患有如本文所述的癌症的对象中ERK和/或RSK1的磷酸化的抑制的方法，所述方法包括向所述对象施用有效量的本文提供的化合物1的固体形式，测量所述对象中磷酸化的 ERK和/或RSK1的量，并且将磷酸化的ERK和/或RSK的所述量与在施用有效量的本文提供的化合物1的固体形式之前所述对象的所述量进行比较。在一些实施方案中，所述生物样品是肿瘤活检物。在另一个实施方案中，所述生物样品是PBMC。在另一个实施方案中，所述生物样品是循环肿瘤细胞。
在某些实施方案中，本文提供了用于抑制患有如本文所述的癌症的对象的生物样品中ERK和/或RSK1的磷酸化的方法，所述方法包括向所述对象施用有效量的本文提供的化合物1的固体形式，以及比较在施用本文提供的化合物1的所述固体形式之前和之后获得的对象的生物样品中磷酸化的ERK和/或RSK1的量，其中在施用本文提供的化合物1的所述固体形式之后获得的所述生物样品中磷酸化的 ERK和/或RSK1相对于在施用本文提供的化合物1的所述固体形式之前获得的所述生物样品中磷酸化的ERK和/或RSK1的量更少表明抑制。在一些实施方案中，所述生物样品是肿瘤活检物。在另一个实施方案中，所述生物样品是PBMC。在另一个实施方案中，所述生物样品是循环肿瘤细胞。
本文进一步提供了用于确定患者是否对本文所述的化合物1的固体形式敏感的方法，所述方法包括向所述患者施用本文所述的化合物1的所述固体形式以及通过测量在向所述患者施用本文所述的化合物1的固体形式之前和之后来自所述患者的生物样品中磷酸化的 ERK和/或RSK1的量来确定ERK和/或RSK1磷酸化是否在所述患者中受抑制，其中ERK和/或RSK1磷酸化的抑制表明所述患者对本文所述的化合物1的所述固体形式敏感。在一些此类实施方案中，所述方法另外包括施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式。在一些实施方案中，所述生物样品是肿瘤活检物。在另一个实施方案中，所述生物样品是PBMC。在另一个实施方案中，所述生物样品是循环肿瘤细胞。
本文进一步提供了用于确定有效量的本文所述的化合物1的固体形式用于治疗可通过抑制患者的ERK和/或RSK1的磷酸化而治疗的癌症的方法，所述方法包括向所述患者施用不同剂量的本文所述的化合物1的所述固体形式，以及通过测量在向所述患者施用每种剂量的本文所述的化合物1的固体形式之前和之后来自所述患者的生物样品中磷酸化的ERK和/或RSK1的量来确定由本文所述的化合物1 的所述固体形式的每种剂量产生的所述患者中ERK和/或RSK1磷酸化抑制的量，其中ERK和/或RSK1磷酸化抑制至少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％或大于约50％对应于本文所述的化合物1 的固体形式的有效量。在一些此类实施方案中，所述方法另外包括施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式。在一些实施方案中，所述生物样品是肿瘤活检物。在另一个实施方案中，所述生物样品是PBMC。在另一个实施方案中，所述生物样品是循环肿瘤细胞。
本文进一步提供了用于预测患有癌症的患者中对用本文所述的化合物1的固体形式治疗的响应的方法，所述方法包括：a)从所述患者的癌症获得生物测试样品；b)获得所述生物测试样品中DUSP4、 DUSP5、DUSP6、EGR1、ETV5、FOS、FOSL1、IL-8、cMyc、细胞周期蛋白D1、YAP、SPRY2、SPRY4、Axin2、CTGF、AREG、CYR61、 CXCL1、HAS2、HES1和MAFF中的一种或多种的mRNA和/或蛋白质表达水平；c)将所述mRNA和/或蛋白质表达水平与生物野生型样品的mRNA和/或蛋白质表达水平进行比较；其中相对于所述生物野生型样品，所述患者的生物测试样品中mRNA和/或蛋白质表达水平的降低表明对所述患者的癌症的用本文所述的化合物1的固体形式治疗的响应的可能性增加。在一些此类实施方案中，所述方法另外包括施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式。在一些实施方案中，所述生物样品是肿瘤活检物。在另一个实施方案中，所述生物样品是PBMC。在另一个实施方案中，所述生物样品是循环肿瘤细胞。
本文进一步提供了用于预测患有癌症的患者的用本文所述的化合物1的固体形式治疗的治疗功效的方法，所述方法包括：a)从所述患者的癌症获得生物测试样品；b)获得所述生物测试样品中DUSP4、 DUSP5、DUSP6、EGR1、ETV5、FOS、FOSL1、IL-8、cMyc、细胞周期蛋白D1、YAP、SPRY2、SPRY4、Axin2、CTGF、AREG、CYR61、 CXCL1、HAS2、HES1和MAFF中的一种或多种的mRNA和/或蛋白质表达水平；c)将所述mRNA和/或蛋白质表达水平与生物野生型样品的mRNA和/或蛋白质表达水平进行比较；其中mRNA和/或蛋白质表达水平的降低表明用于所述患者的用本文所述的化合物1的固体形式的所述治疗的治疗功效的可能性增加。在一些此类实施方案中，所述方法另外包括施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式。在一些实施方案中，所述生物样品是肿瘤活检物。在另一个实施方案中，所述生物样品是PBMC。在另一个实施方案中，所述生物样品是循环肿瘤细胞。
本文进一步提供了用于确定患者是否对本文所述的化合物1的固体形式敏感的方法，所述方法包括向所述患者施用本文所述的化合物1的固体形式并且通过测量在向所述患者施用本文所述的化合物1 的固体形式之前和之后来自所述患者的生物样品中DUSP4、DUSP5、 DUSP6、EGR1、ETV5、FOS、FOSL1、IL-8、cMyc、细胞周期蛋白 D1、YAP、SPRY2、SPRY4、Axin2、CTGF、AREG、CYR61、CXCL1、 HAS2、HES1和MAFF中的一种或多种的mRNA和/或蛋白质表达水平的量来确定DUSP4、DUSP5、DUSP6、EGR1、ETV5、FOS、FOSL1、 IL-8、cMyc、细胞周期蛋白D1、YAP、SPRY2、SPRY4、Axin2、 CTGF、AREG、CYR61、CXCL1、HAS2、HES1和MAFF中的一种或多种的mRNA和/或蛋白质表达水平是否在所述患者中受到抑制。在一些此类实施方案中，所述方法另外包括施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式。在一些实施方案中，所述生物样品是肿瘤活检物。在另一个实施方案中，所述生物样品是PBMC。在另一个实施方案中，所述生物样品是循环肿瘤细胞。
本文进一步提供了用于确定有效量的本文所述的化合物1的固体形式用于治疗可通过抑制患者中DUSP4、DUSP5、DUSP6、EGR1、 ETV5、FOS、FOSL1、IL-8、cMyc、细胞周期蛋白D1、YAP、SPRY2、SPRY4、Axin2、CTGF、AREG、CYR61、CXCL1、HAS2、HES1 和MAFF中的一种或多种的mRNA和/或蛋白质表达水平而治疗的癌症的方法，所述方法包括向所述患者施用不同剂量的本文所述的化合物1的所述固体形式并且通过测量在向所述患者施用每种剂量的本文所述的化合物1的固体形式之前和之后来自所述患者的生物样品中DUSP4、DUSP5、DUSP6、EGR1、ETV5、FOS、FOSL1、IL-8、 cMyc、细胞周期蛋白D1、YAP、SPRY2、SPRY4、Axin2、CTGF、AREG、CYR61、CXCL1、HAS2、HES1和MAFF中的一种或多种的mRNA和/或蛋白质表达水平的量来确定所述患者中由每种剂量的本文所述的化合物1的所述固体形式引起的DUSP4、DUSP5、DUSP6、 EGR1、ETV5、FOS、FOSL1、IL-8、cMyc、细胞周期蛋白D1、YAP、 SPRY2、SPRY4、Axin2、CTGF、AREG、CYR61、CXCL1、HAS2、 HES1和MAFF中的一种或多种的mRNA和/或蛋白质表达水平抑制的量。在一些此类实施方案中，所述方法另外包括施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式。在一些实施方案中，所述生物样品是肿瘤活检物。在另一个实施方案中，所述生物样品是PBMC。在另一个实施方案中，所述生物样品是循环肿瘤细胞。
本文进一步提供了用于预测患有癌症的患者中对用本文所述的化合物1的固体形式治疗的响应的方法，所述方法包括：a)从所述患者的癌症获得生物测试样品；b)获得所述生物测试样品中BMF、 EFNA1、CITED2和ELF3中的一种或多种的mRNA和/或蛋白质表达水平；c)将所述mRNA和/或蛋白质表达水平与生物野生型样品的 mRNA和/或蛋白质表达水平进行比较；其中相对于所述生物野生型样品，所述患者的生物测试样品中mRNA和/或蛋白质表达水平的增加表明对所述患者的癌症的用本文所述的化合物1的固体形式治疗的响应的可能性增加。在一些此类实施方案中，所述方法另外包括施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式。在一些实施方案中，所述生物样品是肿瘤活检物。在另一个实施方案中，所述生物样品是 PBMC。在另一个实施方案中，所述生物样品是循环肿瘤细胞。
本文进一步提供了用于预测患有癌症的患者的用本文所述的化合物1的固体形式治疗的治疗功效的方法，所述方法包括：a)从所述患者的癌症获得生物测试样品；b)获得所述生物测试样品中BMF、 EFNA1、CITED2和ELF3中的一种或多种的mRNA和/或蛋白质表达水平；c)将所述mRNA和/或蛋白质表达水平与生物野生型样品的 mRNA和/或蛋白质表达水平进行比较；其中mRNA和/或蛋白质表达水平的增加表明用于所述患者的本文所述的化合物1的所述固体形式治疗的治疗功效的可能性增加。在一些此类实施方案中，所述方法另外包括施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式。在一些实施方案中，所述生物样品是肿瘤活检物。在另一个实施方案中，所述生物样品是PBMC。在另一个实施方案中，所述生物样品是循环肿瘤细胞。
本文进一步提供了用于确定患者是否对本文所述的化合物1的固体形式敏感的方法，所述方法包括向所述患者施用本文所述的化合物1的所述固体形式以及通过测量在向所述患者施用本文所述的化合物1的固体形式之前和之后来自所述患者的生物样品中BMF、EFNA1、CITED2和ELF3中的一种或多种的mRNA和/或蛋白质表达水平的量来确定BMF、EFNA1、CITED2和ELF3中的一种或多种的mRNA和/或蛋白质表达水平是否在所述患者中增加。在一些此类实施方案中，所述方法另外包括施用有效量的如本文所述的化合物1 的固体形式。在一些实施方案中，所述生物样品是肿瘤活检物。在另一个实施方案中，所述生物样品是PBMC。在另一个实施方案中，所述生物样品是循环肿瘤细胞。
本文进一步提供了用于确定有效量的本文所述的化合物1的固体形式用于治疗可通过患者中BMF、EFNA1、CITED2和ELF3中的一种或多种的mRNA和/或蛋白质表达水平的增加而治疗的癌症的方法，所述方法包括向所述患者施用不同剂量的本文所述的化合物1的所述固体形式以及通过测量在向所述患者施用每种剂量的本文所述的化合物1的固体形式之前和之后来自所述患者的生物样品中BMF、 EFNA1、CITED2和ELF3中的一种或多种的mRNA和/或蛋白质表达水平的量来确定所述患者中由每种剂量的本文所述的化合物1的所述固体形式引起的BMF、EFNA1、CITED2和ELF3中的一种或多种的mRNA和/或蛋白质表达水平增加的量。在一些此类实施方案中，所述方法另外包括施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式。在一些实施方案中，所述生物样品是肿瘤活检物。在另一个实施方案中，所述生物样品是PBMC。在另一个实施方案中，所述生物样品是循环肿瘤细胞。
本文进一步提供了用于预测患有癌症的患者中对用本文所述的化合物1的固体形式治疗的响应的方法，所述方法包括：a)从所述患者的癌症获得生物测试样品；b)获得所述生物测试样品中GJA1的 mRNA和/或蛋白质表达水平；c)将所述mRNA和/或蛋白质表达水平与生物野生型样品的mRNA和/或蛋白质表达水平进行比较；其中相对于所述生物野生型样品，所述患者的生物测试样品中mRNA和/或蛋白质表达水平的降低表明对所述患者的癌症的用本文所述的化合物1的固体形式治疗的响应的可能性增加。在一些此类实施方案中，所述方法另外包括施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式。在一些实施方案中，所述生物样品是肿瘤活检物。在另一个实施方案中，所述生物样品是PBMC。在另一个实施方案中，所述生物样品是循环肿瘤细胞。
本文进一步提供了用于预测患有癌症的患者的用本文所述的化合物1的固体形式治疗的治疗功效的方法，所述方法包括：a)从所述患者的癌症获得生物测试样品；b)获得所述生物测试样品中GJA1的 mRNA和/或蛋白质表达水平；c)将所述mRNA和/或蛋白质表达水平与生物野生型样品的mRNA和/或蛋白质表达水平进行比较；其中 mRNA和/或蛋白质表达水平的降低表明用于所述患者的用本文所述的化合物1的固体形式的所述治疗的治疗功效的可能性增加。在一些此类实施方案中，所述方法另外包括施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式。在一些实施方案中，所述生物样品是肿瘤活检物。在另一个实施方案中，所述生物样品是PBMC。在另一个实施方案中，所述生物样品是循环肿瘤细胞。
本文进一步提供了用于确定患者是否对本文所述的化合物1的固体形式敏感的方法，所述方法包括向所述患者施用本文所述的化合物1的所述固体形式以及通过测量在向所述患者施用本文所述的化合物1的固体形式之前和之后来自所述患者的生物样品中GJA1的 mRNA和/或蛋白质表达水平的量来确定GJA1的mRNA和/或蛋白质表达水平是否在所述患者中受到抑制。在一些此类实施方案中，所述方法另外包括施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式。在一些实施方案中，所述生物样品是肿瘤活检物。在另一个实施方案中，所述生物样品是PBMC。在另一个实施方案中，所述生物样品是循环肿瘤细胞。
本文进一步提供了用于确定有效量的本文所述的化合物1的固体形式用于治疗可通过抑制患者中GJA1的mRNA和/或蛋白质表达水平而治疗的癌症的方法，所述方法包括向所述患者施用不同剂量的本文所述的化合物1的所述固体形式以及通过测量在向所述患者施用每种剂量的本文所述的化合物1的固体形式之前和之后来自所述患者的生物样品中GJA1的mRNA和/或蛋白质表达水平的量来确定所述患者中由每种剂量的本文所述的化合物1的所述固体形式引起的GJA1的mRNA和/或蛋白质表达水平抑制的量。在一些此类实施方案中，所述方法另外包括施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式。在一些实施方案中，所述生物样品是肿瘤活检物。在另一个实施方案中，所述生物样品是PBMC。在另一个实施方案中，所述生物样品是循环肿瘤细胞。
本文进一步提供了用于预测患有癌症的患者中对用本文所述的化合物1的固体形式治疗的响应的方法，所述方法包括：a)从所述患者的癌症获得生物测试样品；b)获得所述生物测试样品中GJA1的mRNA和/或蛋白质表达水平；c)将所述mRNA和/或蛋白质表达水平与生物野生型样品的mRNA和/或蛋白质表达水平进行比较；其中相对于所述生物野生型样品，所述患者的生物测试样品中mRNA和/或蛋白质表达水平的增加表明对所述患者的癌症的本文所述的化合物1 的固体形式治疗的响应的可能性增加。在一些此类实施方案中，所述方法另外包括施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式。在一些实施方案中，所述生物样品是肿瘤活检物。在另一个实施方案中，所述生物样品是PBMC。在另一个实施方案中，所述生物样品是循环肿瘤细胞。
本文进一步提供了用于预测患有癌症的患者的用本文所述的化合物1的固体形式治疗的治疗功效的方法，所述方法包括：a)从所述患者的癌症获得生物测试样品；b)获得所述生物测试样品中GJA1的 mRNA和/或蛋白质表达水平；c)将所述mRNA和/或蛋白质表达水平与生物野生型样品的mRNA和/或蛋白质表达水平进行比较；其中 mRNA和/或蛋白质表达水平的增加表明用于所述患者的用本文所述的化合物1的固体形式的所述治疗的治疗功效的可能性增加。在一些此类实施方案中，所述方法另外包括施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式。在一些实施方案中，所述生物样品是肿瘤活检物。在另一个实施方案中，所述生物样品是PBMC。在另一个实施方案中，所述生物样品是循环肿瘤细胞。
本文进一步提供了用于确定患者是否对化合物1的固体形式敏感的方法，所述方法包括向所述患者施用本文所述的化合物1的所述固体形式以及通过测量在向所述患者施用本文所述的化合物1的固体形式之前和之后来自所述患者的生物样品中GJA1的mRNA和/或蛋白质表达水平的量来确定GJA1的mRNA和/或蛋白质表达水平是否在所述患者中增加。在一些此类实施方案中，所述方法另外包括施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式。在一些实施方案中，所述生物样品是肿瘤活检物。在另一个实施方案中，所述生物样品是 PBMC。在另一个实施方案中，所述生物样品是循环肿瘤细胞。
本文进一步提供了用于确定有效量的化合物1的固体形式用于治疗可通过增加患者中GJA1的mRNA和/或蛋白质表达水平而治疗的癌症的方法，所述方法包括向所述患者施用不同剂量的本文所述的化合物1的所述固体形式以及通过测量在向所述患者施用每种剂量的本文所述的化合物1的固体形式之前和之后来自所述患者的生物样品中GJA1的mRNA和/或蛋白质表达水平的量来确定所述患者中由每种剂量的本文所述的化合物1的所述固体形式引起的GJA1的 mRNA和/或蛋白质表达水平增加的量。在一些此类实施方案中，所述方法另外包括施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式。在一些实施方案中，所述生物样品是肿瘤活检物。在另一个实施方案中，所述生物样品是PBMC。在另一个实施方案中，所述生物样品是循环肿瘤细胞。
本文进一步提供了用于预测患有癌症的患者中对用本文所述的化合物1的固体形式治疗的响应的方法，所述方法包括：a)从所述患者的癌症获得生物测试样品；b)获得所述生物测试样品中PD-L1的细胞表面表达水平；c)将PD-L1的所述细胞表面表达水平与生物野生型样品的PD-L1的细胞表面表达水平进行比较；其中PD-L1的细胞表面表达水平的降低表明对所述患者的癌症的本文所述的化合物1的固体形式治疗的响应的可能性增加。在一些此类实施方案中，所述方法另外包括施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式。在一些实施方案中，所述生物样品是肿瘤活检物。在另一个实施方案中，所述生物样品是PBMC。在另一个实施方案中，所述生物样品是循环肿瘤细胞。
本文进一步提供了用于预测患有癌症的患者的用本文所述的化合物1的固体形式治疗的治疗功效的方法，所述方法包括：a)从所述患者的癌症获得生物测试样品；b)获得所述生物测试样品中PD-L1的细胞表面表达水平；c)将PD-L1的所述细胞表面表达水平与生物野生型样品的PD-L1的细胞表面表达水平进行比较；其中PD-L1的细胞表面表达水平的降低表明用于所述患者的本文所述的化合物1的固体形式治疗的治疗功效的可能性增加。在一些此类实施方案中，所述方法另外包括施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式。在一些实施方案中，所述生物样品是肿瘤活检物。在另一个实施方案中，所述生物样品是PBMC。在另一个实施方案中，所述生物样品是循环肿瘤细胞。
本文进一步提供了用于确定患者是否对化合物1的固体形式敏感的方法，所述方法包括向所述患者施用本文所述的化合物1的所述固体形式以及通过测量在向所述患者施用本文所述的化合物1的固体形式之前和之后来自所述患者的生物样品中PD-L1的细胞表面表达水平的量来确定PD-L1的细胞表面表达水平是否在所述患者中受到抑制。在一些此类实施方案中，所述方法另外包括施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式。在一些实施方案中，所述生物样品是肿瘤活检物。在另一个实施方案中，所述生物样品是PBMC。在另一个实施方案中，所述生物样品是循环肿瘤细胞。
本文进一步提供了用于确定有效量的本文所述的化合物1的固体形式用于治疗可通过抑制患者中PD-L1的细胞表面表达水平而治疗的癌症的方法，所述方法包括向所述患者施用不同剂量的本文所述的化合物1的所述固体形式以及通过测量在向所述患者施用每种剂量的本文所述的化合物1的固体形式之前和之后来自所述患者的生物样品中PD-L1的细胞表面表达水平的量来确定所述患者中由每种剂量的本文所述的化合物1的所述固体形式引起的PD-L1的细胞表面表达水平抑制的量。在一些此类实施方案中，所述方法另外包括施用有效量的如本文所述的化合物1的固体形式。在一些实施方案中，所述生物样品是肿瘤活检物。在另一个实施方案中，所述生物样品是PBMC。在另一个实施方案中，所述生物样品是循环肿瘤细胞。
组合疗法
本文提供的化合物1的固体形式还可与适用于治疗和/或预防本文所述的癌症的其他治疗剂组合或组合使用。
在一个实施方案中，本文提供了一种治疗、预防或管理癌症的方法，所述方法包括向患者施用本文提供的化合物1的固体形式与一种或多种第二活性剂的组合，以及任选地与放射疗法、输血或外科手术的组合。本文公开了第二活性剂的实例。
如本文所用，术语“组合”包括使用多于一种疗法(例如，一种或多种预防剂和/或治疗剂)。然而，术语“组合”的使用并不限制向患有疾病或病症的患者施用疗法(例如，预防剂和/或治疗剂)的顺序。第一疗法(例如预防剂或治疗剂，如本文提供的化合物1的固体形式)可在向对象施用第二疗法(例如预防剂或治疗剂)之前(例如之前5分钟、15 分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、 24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、 6周、8周或12周)施用、与所述第二疗法同时施用或在施用所述第二疗法之后(例如之后5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、 2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96 小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)施用。本文还考虑了三联疗法。
向患者施用本文提供的化合物1的固体形式和一种或多种第二活性剂可通过相同或不同的施用途径同时或相继地发生。对于特定活性剂所采用的特定施用途径的适合性将取决于活性剂本身(例如，其是否可以在进入血流之前口服施用而不分解)和待治疗的癌症。
本文所述的化合物1的固体形式的施用途径与第二疗法的施用途径无关。因此，根据这些实施方案，静脉内施用本文所述的化合物 1的固体形式，并且所述第二疗法可通过以下方式施用：口服、肠胃外、腹膜内、静脉内、动脉内、经皮、舌下、肌内、直肠、经颊、鼻内、脂质体、经由吸入、***、眼内、经由导管或支架局部递送、皮下、脂肪内、关节内、鞘内或以缓释剂型方式。在一个实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式和第二疗法通过相同的施用模式(例如口服)施用。在另一个实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式通过一种施用模式(例如口服)施用，而第二药剂(抗癌剂)通过另一种施用模式(例如IV)施用。
在一个实施方案中，第二活性剂例如口服、静脉内或皮下并且以约1至约1000mg、约5至约500mg、约10至约350mg、约50至约200mg、约1至约100mg、约1至约200mg、约1至约300mg、约1至约400mg或约1至约500mg的量每天一次或两次施用。第二活性剂的具体量将取决于所用的具体药剂、所治疗或管理的疾病的类型、疾病的严重程度和阶段以及本文所述的化合物1的固体形式和向患者同时施用的任何任选的另外活性剂的量。
一种或多种第二活性成分或药剂可在本文提供的方法和组合物中与本文所述的化合物1的固体形式一起使用。第二活性剂可以是大分子(例如蛋白质)或小分子(例如，合成的无机、有机金属或有机分子)。
大分子活性剂的实例包括但不限于造血生长因子、细胞因子以及单克隆和多克隆抗体，特别是针对癌抗原的治疗性抗体。典型的大分子活性剂是生物分子，如天然存在的或合成的或重组的蛋白质。在本文提供的方法和组合物中特别有用的蛋白质包括在体外或体内刺激造血前体细胞淋巴细胞的存活和/或增殖的蛋白质。其他有用的蛋白质在体外或体内刺激细胞中定型造血祖细胞的***和分化。特定蛋白质包括但不限于：白细胞介素，如IL-2(包括重组IL-2(“rIL2”)和金丝雀痘IL-2)、IL-10、IL-12和IL-18；干扰素，如干扰素α-2a、干扰素α-2b、干扰素α-n1、干扰素α-n3、干扰素β-Ia和干扰素γ-Ib；GM-CF 和GM-CSF；以及EPO。
在某些实施方案中，在四或六周的周期的约五天内，皮下施用 GM-CSF、G-CSF、SCF或EPO，施用量的范围为约1至约750mg/m2/ 天、约25至约500mg/m2/天、约50至约250mg/m2/天或约50至约 200mg/m2/天。在某些实施方案中，GM-CSF可以约60至约500 mcg/m2的量经2小时静脉内施用或以约5至约12mcg/m2/天的量皮下施用。在某些实施方案中，G-CSF最初可以约1mcg/kg/天的量皮下施用并且可以根据总粒细胞计数的增长进行调整。G-CSF的维持剂量可以约300(较小患者)或480mcg的量皮下施用。在某些实施方案中， EPO可以10,000单位的量皮下施用，每周3次。
可用于所述方法和组合物的特定蛋白质包括但不限于：非格司亭、沙格司亭和重组EPO。
GM-CSF的重组和突变形式可如美国专利号5,391,485； 5,393,870；和5,229,496中所描述进行制备，所述专利全部以引用的方式并入本文。G-CSF的重组和突变形式可如美国专利号4,810,643； 4,999,291；5,528,823；和5,580,755中所描述进行制备，所述专利的全部内容以引用的方式并入本文。
还提供与本文所述的化合物1的固体形式组合使用的是天然的、天然存在的和重组的蛋白质。进一步涵盖天然存在的蛋白质的突变体和衍生物(例如，修饰形式)，所述突变体和衍生物在体内表现出它们所基于的蛋白质的至少一些药理学活性。突变体的实例包括但不限于具有一个或多个不同于天然存在形式的蛋白质中的相应残基的氨基酸残基的蛋白质。术语“突变体”还包括缺少通常存在于其天然存在形式(例如，非糖基化形式)中的碳水化合物部分的蛋白质。衍生物的实例包括但不限于聚乙二醇化衍生物和融合蛋白，如通过将IgG1或 IgG3与蛋白质或目标蛋白质的活性部分融合而形成的蛋白质。参见例如，Penichet,M.L.和Morrison,S.L.,J.Immunol.Methods 248:91-101 (2001)。
可与本文所述的化合物1的固体形式组合使用的抗体包括单克隆和多克隆抗体。抗体的实例包括但不限于曲妥珠单抗、利妥昔单抗、贝伐单抗、帕妥珠单抗、托西莫单抗、依决洛单抗和G250。本文所述的化合物1的固体形式还可与抗TNF-α抗体和/或抗EGFR抗体(例如像西妥昔单抗或帕尼单抗)组合或组合使用。
可与本文所述的化合物1的固体形式组合使用的抗体包括免疫检查点抑制剂，如抗-CTLA4、抗-PD1、抗-PD-L1、抗-Tim-3、抗-Lag-3 抗体。在一些此类实施方案中，PD-1或PD-L1抗体是例如阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗、MEDI0680、阿特珠单抗、BMS-936559、纳武单抗、派姆单抗、匹地利珠单抗或PDR-001。在一个这样的实施方案中，抗 -Lag-3抗体是BMS-986016。
可与本文所述的化合物1的固体形式组合使用的另外抗体包括抗-RSPO抗体。
大分子活性剂可以抗癌疫苗的形式施用。例如，分泌或引起细胞因子如IL-2、G-CSF和GM-CSF分泌的疫苗可用于所提供的方法和药物组合物中。参见例如，Emens,L.A.,等人,Curr.Opinion Mol.Ther. 3(1):77-84(2001)。
作为小分子的第二活性剂也可用于减轻与施用本文所述的化合物1的固体形式相关的不良作用。然而，与一些大分子一样，当与本文所述的化合物1的固体形式一起(例如，之前、之后或同时)施用时，认为许多小分子能够提供累加或协同作用。小分子第二活性剂的实例包括但不限于抗癌剂、抗生素、免疫抑制剂和类固醇。
在某些实施方案中，第二药剂是BRAF抑制剂、HSP抑制剂、蛋白酶体抑制剂、FLT3抑制剂、MEK抑制剂、PI3K抑制剂、EGFR 抑制剂、免疫调节化合物或TOR激酶抑制剂。在一些此类实施方案中，BRAF抑制剂是索拉非尼、达拉菲尼、依那可尼或威罗菲尼。在一些此类实施方案中，HSP抑制剂是格尔德霉素、伽米替尼、 luminespib或根赤壳菌素。在一些实施方案中，蛋白酶体抑制剂是硼替佐米、卡非佐米、伊沙佐米、双硫仑、奥普佐米、德兰佐米或伊沙佐米。在其他实施方案中，FLT3抑制剂是奎扎替尼、米哚妥林、索拉非尼、舒尼替尼或来他替尼。在一些此类实施方案中，MEK抑制剂是曲美替尼、卡比替尼、比美替尼、司美替尼、PD-325901、CI-1040 (PD184352)或TAK-733。在一些其他实施方案中，PI3K抑制剂是 AT7867、AZD 8055、BX-912、silmitasertib、匹克替利昔布(pictilisib)、 MK-2206或匹拉利塞(pilaralisib)。在另一个实施方案中，EGFR抑制剂是吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、奥希替尼(TAGRISSO)、诺司替尼(rociletinib)或拉帕替尼。在一些其他实施方案中，TOR激酶抑制剂是CC-115、CC-223、OSI-027、AZD8055、沙帕色替(sapanisertib)、达托利塞(dactolisib)、BGT226、voxtalisib(SAR-245409)、阿哌利塞 (apitolisib)、奥米利塞(omipalisib)(GSK-2126458)、PF-04691502、吉达利塞(gedatolisib)或PP242。在一些实施方案中，免疫调节化合物是沙利度胺、来那度胺、泊马度胺、CC-220或CC-122。
待在本文所述的方法或组合物内使用的另外抗癌剂的实例包括但不限于：阿西维辛；阿克拉霉素；盐酸阿考达唑；阿克罗宁；阿多来新；阿地白介素；六甲蜜胺；安波霉素；醋酸阿美蒽醌；安吖啶；阿那曲唑；氨茴霉素；天冬酰胺酶；曲林菌素；阿扎胞苷；阿扎替派；阿佐霉素；巴马司他；苯佐替派；比卡鲁胺；盐酸比生群；二甲磺酸双奈法德；比折来新；硫酸博来霉素；布喹那钠；溴匹立明；白消安；放线菌素C(cactinomycin)；卡鲁睾酮；卡醋胺；卡贝替姆；卡铂；卡莫司汀；盐酸卡柔比星；卡折来新；西地芬戈；塞来昔布(COX-2 抑制剂)；苯丁酸氮芥；西罗霉素；顺铂；克拉屈滨；氯法拉滨；甲磺酸克立那托；环磷酰胺；阿糖胞苷；达卡巴嗪；达拉菲尼；更生霉素；盐酸柔红霉素；地西他滨；右奥马铂；地扎胍宁；甲磺酸地扎胍宁；地吖醌；多西他赛；多柔比星；盐酸多柔比星；屈洛昔芬；柠檬酸屈洛昔芬；丙酸屈他雄酮；偶氮霉素；依达曲沙；盐酸依洛尼塞；依沙芦星；恩洛铂；恩普氨酯；依匹哌啶；盐酸表柔比星；厄布洛唑；盐酸依索比星；雌莫司汀；雌莫司汀磷酸钠；依他硝唑；依托泊苷；磷酸依托泊苷；艾托卜宁；盐酸法屈唑；法扎拉滨；维甲酰酚胺；氟尿苷；磷酸氟达拉滨；氟尿嘧啶；氟西他滨；磷喹酮；福司曲星钠；吉西他滨；盐酸吉西他滨；羟基脲；盐酸伊达比星；异环磷酰胺；伊莫福新；异丙铂；伊立替康；盐酸伊立替康；醋酸兰瑞肽；来曲唑；醋酸亮丙瑞林；盐酸利阿唑；洛美曲索钠；洛莫司汀；盐酸洛索蒽醌；马索丙考；美登素；盐酸氮芥；醋酸甲地孕酮；醋酸美仑孕酮；美法仑；美诺立尔；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；甲氨蝶呤钠；氯苯氨啶；美妥替哌；米丁度胺；米托卡星；丝裂红素；丝林霉素；丝裂马菌素；丝裂霉素；米托司培；米托坦；盐酸米托蒽醌；霉酚酸；诺考达唑；诺加霉素；奥马他辛；奥马铂；奥昔舒仑；紫杉醇；用于可注射悬浮液的紫杉醇蛋白质结合的颗粒，白蛋白结合型
Figure GDA0003834579080000791
培门冬酶；培利霉素；戊氮芥；硫酸培洛霉素；过磷酰胺；哌泊溴烷；哌泊舒凡；盐酸吡罗昔康；普卡霉素；普洛美坦；卟吩姆钠；紫菜霉素；泼尼莫司汀；盐酸丙卡巴肼；嘌呤霉素；盐酸嘌呤霉素；吡唑呋喃菌素；利波腺苷；沙芬戈；盐酸沙芬戈；司莫司汀；辛曲秦；索拉非尼；磷乙酰天冬氨酸钠；稀疏霉素；盐酸螺旋锗；螺莫司汀；螺铂；链黑菌素；链脲佐菌素；磺氯苯脲；他利霉索；替可加兰钠；多西他赛；替加氟；盐酸替托蒽酮；替莫卟吩；替尼泊苷；替罗昔隆；睾内酯；硫唑嘌呤胺；硫鸟嘌呤；噻替派；噻唑羧胺核苷；替拉扎明；柠檬酸托瑞米芬；醋酸曲托龙；磷酸曲西立滨；三甲曲沙；葡醛酸三甲曲沙；曲普瑞林；盐酸妥布氯唑；尿嘧啶氮芥；尿烷亚胺；伐普肽；威罗菲尼；维替泊芬；硫酸长春碱；硫酸长春新碱；长春地辛；硫酸长春地辛；硫酸长春匹定；硫酸长春甘酯；硫酸长春罗辛；酒石酸长春瑞滨；硫酸长春罗定；硫酸长春利定；伏氯唑；折尼铂；净司他丁；以及盐酸佐柔比星。
待包括在所述方法或组合物内的其他抗癌药物包括但不限于： 20-表-1,25二羟基维生素D3；5-乙炔基尿嘧啶；阿比特龙；阿柔比星；酰基富烯；腺环戊醇；阿多来新；阿地白介素；ALL-TK拮抗剂；六甲蜜胺；氨莫司汀；艾美多；阿米福汀；氨基乙酰丙酸；氨柔比星；安吖啶；阿那格雷；阿那曲唑；雄茸交酯；血管生成抑制剂；拮抗剂 D；拮抗剂G；安雷利克斯；抗背部化形态发生蛋白-1；抗雄激素，***癌；抗***；抗瘤酮；反义寡核苷酸；甘氨酸蚜肠霉素；细胞凋亡基因调节剂；细胞凋亡调节剂；嘌呤酸；ara-CDP-DL-PTBA；精氨酸脱氨酶；奥沙那宁；阿他美坦；阿莫司汀；阿新司坦汀1；阿新司坦汀2；阿新司坦汀3；阿扎司琼；阿扎毒素；重氮酪氨酸；巴卡亭III衍生物；班兰诺；巴马司他；BCR/ABL拮抗剂；苯并二氢卟酚；苯甲酰星形孢菌素；β内酰胺衍生物；β-阿立辛；贝他霉素B；桦木酸；bFGF抑制剂；比卡鲁胺；比生群；双吖丙啶基精胺；双萘法德；双崔特(bistratene)A；比折来新；比锐来特(breflate)；溴匹立明；布多替钛；丁硫氨酸亚砜胺；卡泊三醇；钙感光蛋白C；喜树碱衍生物；卡培他滨；甲酰胺-氨基-***；羧基酰胺基***；CaRest M3；软骨来源抑制剂；卡折来新；酪蛋白激酶抑制剂(ICOS)；栗精胺；杀菌肽B；西曲瑞克；二氢卟酚；氯喹喔啉磺酰胺；西卡前列素；顺卟啉；克拉屈滨；氯米芬类似物；克霉唑；克里斯霉素A；克里斯霉素 B；考布他丁A4；考布他汀类似物；考那格宁(conagenin)；卡那贝西汀(crambescidin)816；克雷斯托；念珠藻素8；念珠藻素A衍生物；卡拉新(curacin)A；环戊蒽醌；环铂(cycloplatam)；次帕霉素(cypemycin)；阿糖胞苷烷磷酯；溶细胞因子；磷酸己烷雌酚(cytostatin)；达昔单抗；地西他滨；去氢膜海鞘素B；地洛瑞林；***；右异环磷酰胺；右雷佐生；右维拉帕米；亚丝醌；膜海鞘素B；地多西 (didox)；二乙基去甲精胺；二氢-5-氮杂胞嘧啶核苷；9-二氢紫杉醇；二恶霉素；二苯基螺莫司汀；多西他赛；二十二醇；多拉司琼；脱氧氟尿苷；阿霉素；屈洛昔芬；屈***酚；倍癌霉素SA；依布硒啉；依考莫司汀；依地福新；依决洛单抗；依氟鸟氨酸；榄香烯；乙嘧替氟；表柔比星；爱普列特；雌莫司汀类似物；***激动剂；***拮抗剂；依他硝唑；磷酸依托泊苷；依西美坦；法屈唑；法扎拉滨；维甲酰酚胺；非格司亭；非那雄安；夫拉平度；氟卓斯汀；氟海星酮；氟达拉滨；盐酸氟道诺霉素；福酚美克；福美司坦；福司曲星；福莫司汀；钆德克萨卟啉；硝酸镓；加洛他滨；加尼瑞克；明胶酶抑制剂；吉西他滨；谷胱甘肽抑制剂；和普苏姆；和瑞古林；六亚甲基双乙酰胺；金丝桃素；伊班膦酸；伊达比星；艾多昔芬；伊决孟酮；伊莫福新；伊洛马司他；伊马替尼；咪喹莫特；免疫刺激剂肽；***-1受体抑制剂；干扰素激动剂；干扰素；白细胞介素；碘苄胍；碘多柔比星；4-甘薯醇；伊罗普拉；伊索拉定；异苯胍唑；异高软海绵素B；伊他司琼；杰斯普拉克立德(jasplakinolide)；卡哈拉得 (kahalalide)F；三乙酸片螺素-N；兰乐肽；雷纳霉素(leinamycin)；来格司亭；硫酸香菇多糖；利特斯塔汀(leptolstatin)；来曲唑；白血病抑制因子；白细胞α干扰素；亮丙立德+***+孕酮；亮丙瑞林；左旋咪唑；利阿唑；直链聚胺类似物；亲脂性二糖肽；亲脂性铂化合物；立索克林酰胺(lissoclinamide)7；洛铂；蚯蚓磷脂；洛美曲索；氯尼达明；洛索蒽醌；洛索立宾；勒托替康；德克萨斯卟啉镥；立索茶碱 (lysofylline)；裂解肽；美坦新；抑甘露糖苷酶素(mannostatin)A；马马司他(marimastat)；马索罗酚；马司非(maspin)；基质溶素抑制剂；基质金属蛋白酶抑制剂；美诺立尔；麦尔巴隆；美替瑞林；甲硫氨酸酶；甲氧氯普胺；MIF抑制剂；美服培酮；米替福新；米立司亭；米托胍腙；二溴卫矛醇；丝裂霉素类似物；米托萘胺；迈托毒素成纤维细胞生长因子-皂草素；米托蒽醌；莫法罗汀；莫拉司亭；西妥昔单抗，人绒毛膜***；单磷酰基脂质A+分枝杆菌细胞壁sk；莫哌达醇；芥末抗癌剂；美卡普罗B；分枝杆菌细胞壁提取物；美瑞泡仁(myriaporone)；N-乙酰基地那林；N-取代苯甲酰胺；那法瑞林；纳格瑞替；纳洛酮+戊唑星；纳普维；萘特非；那托司亭；奈达铂；奈莫柔比星；奈立膦酸；尼鲁米特；丽沙霉素；一氧化氮调节剂；氮氧化物抗氧化剂；里挫林；奥利默森；O6-苄基鸟嘌呤；奥曲肽；奥克恩；寡核苷酸；奥那司酮；昂丹司琼；昂丹司琼；奥拉新；口服细胞因子诱导剂；奥马铂；奥沙特隆；奥赛力铂；厄诺霉素；紫杉醇；紫杉醇类似物；紫杉醇衍生物；用于可注射悬浮液的紫杉醇蛋白质结合的颗粒，白蛋白结合型
Figure GDA0003834579080000811
帕诺明；棕榈酰基根霉素；帕米膦酸；人参三醇；帕诺米芬；帕拉贝新；帕折普汀；培门冬酶；皮地新(peldesine)；戊聚糖聚硫酸钠；喷司他汀；戍四硝唑(pentrozole)；全氟溴烷；培磷酰胺；紫苏子醇；苯连氮霉素；乙酸苯酯；磷酸酶抑制剂；皮西板尼；盐酸毛果芸香碱；吡柔比星；吡曲克辛；普来司汀 A；普来司汀B；血纤维蛋白溶酶原活化剂抑制剂；铂络合物；铂化合物；铂-三胺络合物；卟吩姆钠；泊非霉素；***；丙基双吖啶酮；***素J2；蛋白酶抑制剂；基于蛋白质A的免疫调节剂；蛋白激酶C抑制剂，微藻；蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂；嘌呤核苷磷酸化酶抑制剂；紫红素；吡唑并吖啶；吡哆醛化血红蛋白聚氧乙烯缀合物； raf拮抗剂；雷替曲赛；雷莫司琼；ras法呢基蛋白转移酶抑制剂；ras 抑制剂；ras-GAP抑制剂；去甲基化瑞替立汀；依替膦酸铼Re 186；根霉素；核酶；RII视黄酰胺；罗希吐碱；罗莫肽；罗喹美克；鲁滨吉隆(rubiginone)B1；鲁泊塞(ruboxyl)；沙芬戈；圣特平(saintopin)；萨莫司汀；沙卡弗托A；沙格司亭；Sdi 1模拟物；司莫司汀；衰老源性抑制剂1；有义寡核苷酸；信号转导抑制剂；西佐喃；索布佐生；硼卡钠；苯基乙酸钠；索佛罗；生长调节素结合蛋白；索纳明；斯帕磷酸；斯皮卡霉素(spicamycin)D；螺莫司汀；斯兰罗皮汀；海绵抑制素1；角鲨胺；斯替匹酰胺(stipiamide)；基质溶素抑制剂；索非罗新；超活性血管活性肠肽拮抗剂；苏拉迪司塔(suradista)；苏拉明；苦马豆素；他莫司汀；甲碘化他莫昔芬；牛磺莫司汀；他扎罗汀；替可加兰钠；喃氟啶、碲哌喃鎓；端粒酶抑制剂；替莫卟吩；替尼泊苷；四氯十氧化物；替唑明；噻立拉斯汀(thaliblastine)；噻考瑞林；血小板生成素；血小板生成素模拟物；胸腺法新；促胸腺生成素受体激动剂；胸腺曲南；促甲状腺激素；乙基初卟啉锡；替拉扎明；二氯化二茂钛；托普升替；托瑞米芬；翻译抑制剂、维甲酸；三乙酰基尿苷；曲西立滨；三甲曲沙；曲普瑞林；托烷司琼；妥罗雄脲；酪氨酸激酶抑制剂；酪氨酸磷酸化抑制剂；UBC抑制剂；乌苯美司；泌尿生殖窦源性生长抑制因子；尿激酶受体拮抗剂；伐普肽；凡瑞林B；维拉雷琐；凡拉明；凡啶；维替泊芬；维萨汀；维他欣；伏罗唑；扎诺特隆；折尼铂；亚苄维C(zilascorb)；以及净司他丁斯酯。
特别适用于所述方法或组合物中的特定第二活性剂包括但不限于利妥昔单抗、奥利默森、英利昔单抗、多西他赛、塞来昔布、美法仑、***、类固醇、吉西他滨、顺铂、替莫唑胺(temozolomide)、依托泊苷、环磷酰胺、替莫唑胺(temodar)、卡铂、丙卡巴肼、卡莫司汀、他莫昔芬、托泊替康、甲氨蝶呤、吉非替尼、紫杉醇、氟尿嘧啶、亚叶酸、伊立替康、卡培他滨、干扰素α、聚乙二醇化干扰素α、顺铂、噻替哌、氟达拉滨、卡铂、脂质体道诺霉素、阿糖胞苷、长春碱、 IL-2、GM-CSF、达卡巴嗪、长春瑞滨、唑来膦酸、帕米膦酸盐、克拉霉素、白消安、***、双膦酸盐、三氧化二砷、长春新碱、阿霉素、更昔洛韦、雌莫司汀磷酸钠、克里诺瑞以及依托泊苷。
在所述方法或组合物中特别有用的其他特定第二活性剂包括但不限于索拉非尼、达拉菲尼、威罗菲尼、曲美替尼、卡比替尼、比美替尼、司美替尼、PD-325901、CI-1040(PD184352)、TAK-733、AT7867、 AZD 8055、BX-912、silmitasertib、匹克替利昔布、MK-2206、匹拉利塞、吉非替尼、埃罗替尼、拉帕替尼、奥希替尼、CC-115、CC-223、 OSI-027、AZD8055、沙帕色替、达托利塞、BGT226、voxtalisib、阿哌利塞、奥米利塞、PF-04691502、吉达利塞、PP242、来那度胺、泊马度胺或CC-122。
在所述方法或组合物中特别有用的其他特定第二活性剂包括但不限于，阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗、MEDI0680、阿特珠单抗、 BMS-936559、纳武单抗、派姆单抗、匹地利珠单抗、PDR-001、索拉非尼、西妥昔单抗、帕尼单抗、埃罗替尼、曲美替尼、曲妥珠单抗、 CC-223、CC-122或拉帕替尼。
在本文提供的方法的某些实施方案中，第二活性剂与本文描述的化合物1的固体形式的组合的使用可在本文描述的化合物1的固体形式施用期间或之后不久进行修改或延迟，如本领域技术人员认为适当的。在某些实施方案中，施用单独或与其他疗法组合的本文所述的化合物1的固体形式的对象可在适当时接受支持性护理，包括止吐药、骨髓生长因子和血液制品的输注。在一些实施方案中，根据本领域技术人员的判断，施用本文所述的化合物1的固体形式的对象可施用作为第二活性剂的生长因子。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式与吉西他滨、顺铂、5-氟尿嘧啶、丝裂霉素、甲氨蝶呤、长春碱、阿霉素、卡铂、噻替派、紫杉醇、用于可注射悬浮液的紫杉醇蛋白质结合的颗粒 -白蛋白结合型
Figure GDA0003834579080000821
或多西他赛一起施用至患有局部晚期或转移性尿路上皮癌的患者。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式与如下的第二活性成分组合施用：替莫唑胺至患有复发或进行性脑肿瘤或复发性成神经细胞瘤的儿科患者；塞来昔布、依托泊苷和环磷酰胺用于复发性或进性性CNS癌症；替莫唑胺至患有复发性或进行性脑膜瘤、恶性脑膜瘤、血管外皮细胞瘤、多发脑转移、复发性脑肿瘤或新诊断的多形性成胶质细胞瘤的患者；伊立替康至患有复发性成胶质细胞瘤的患者；卡铂至患有脑干神经胶质瘤的儿科患者；丙卡巴肼至患有进性性恶性神经胶质瘤的儿科患者；环磷酰胺至患有预后不良的恶性脑肿瘤、新诊断或复发的多形性成胶质细胞瘤的患者；卡莫司汀用于高度复发性恶性神经胶质瘤；替莫唑胺和他莫昔芬用于间变性星形细胞瘤；或托泊替康用于神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、间变性星形细胞瘤或间变性少突胶质细胞瘤。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式与甲氨蝶呤、环磷酰胺、5-氟尿嘧啶、依维莫司、紫杉醇、用于可注射悬浮液的紫杉醇蛋白质结合的颗粒-白蛋白结合型
Figure GDA0003834579080000833
拉帕替尼、曲妥珠单抗、帕米膦酸二钠、甲磺酸艾日布林、依维莫司、吉西他滨、帕博西尼、伊沙匹隆、阿多-曲妥珠单抗恩他新、培妥珠单抗、噻替派、芳香酶抑制剂、依西美坦、选择性***调节剂、***受体拮抗剂、蒽环类药物、恩他新和/或吡昔替尼(pexidartinib)一起施用至患有转移性乳腺癌的患者。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式与替莫唑胺、阿霉素、依维莫司、氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶或链脲菌素一起施用至患有神经内分泌肿瘤的患者。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式与甲氨蝶呤、吉西他滨、顺铂、西妥昔单抗、5-氟尿嘧啶、博来霉素、多西他赛或卡铂一起施用至患有复发性或转移性头颈癌的患者。在一个实施方案中，本文提供的如本文所述的化合物1的固体形式与西妥昔单抗一起施用至患有头颈癌的患者。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式与吉西他滨、紫杉醇、用于可注射悬浮液的紫杉醇蛋白质结合的颗粒-白蛋白结合型
Figure GDA0003834579080000831
5-氟尿嘧啶、依维莫司、伊立替康、丝裂霉素C、舒尼替尼或埃罗替尼一起施用至患有胰腺癌的患者。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式与吉非替尼、埃罗替尼、奥沙利铂、5-氟尿嘧啶、伊立替康、卡培他滨、西妥昔单抗、雷莫芦单抗、帕尼单抗、贝伐单抗、亚叶酸钙、LONSURF、瑞格菲尼、阿柏西普、曲美替尼、紫杉醇、用于可注射悬浮液的紫杉醇蛋白质结合的颗粒-白蛋白结合型
Figure GDA0003834579080000832
和/或多西他赛组合施用至患有结肠癌的患者。在某些实施方案中，本文提供的如本文所述的化合物1的固体形式与贝伐单抗、盐酸伊立替康、卡培他滨、西妥昔单抗、雷莫芦单抗、奥沙利铂、西妥昔单抗、氟尿嘧啶、亚叶酸钙、曲氟尿苷和盐酸替吡嘧啶、帕尼单抗、瑞格菲尼或阿柏西普组合施用至患有结肠癌的患者。在一些实施方案中，本文提供的如本文所述的化合物1的固体形式与EGFR抑制剂(例如西妥昔单抗或埃罗替尼)和/或BRAF抑制剂(例如，索拉非尼、达拉菲尼或威罗菲尼)组合施用至患有结肠癌的患者。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式与卡培他滨、西妥昔单抗、埃罗替尼、曲美替尼和/或威罗菲尼一起施用至患有难治性结肠直肠癌的患者或一线治疗失败或在结肠或直肠腺癌中表现不佳的患者。在一些实施方案中，本文提供的如本文所述的化合物1的固体形式与EGFR抑制剂(例如西妥昔单抗或埃罗替尼)和 BRAF抑制剂(例如，索拉非尼、达拉菲尼或威罗菲尼)组合施用至患有难治性结肠直肠癌的患者或一线治疗失败或在结肠或直肠腺癌中表现不佳的患者。在一些实施方案中，本文提供的如本文所述的化合物1的固体形式与抗-RSPO抗体组合施用至患有难治性结肠直肠癌的患者或一线治疗失败或在结肠或直肠腺癌中表现不佳的患者。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式与氟尿嘧啶、亚叶酸、曲美替尼和/或伊立替康组合施用至患有IIIa至IV期结肠直肠癌的患者或先前已针对转移性结肠直肠癌治疗的患者。在一些实施方案中，本文提供的如本文所述的化合物1的固体形式与EGFR 抑制剂(例如西妥昔单抗或埃罗替尼)和BRAF抑制剂(例如，索拉非尼、达拉菲尼或威罗菲尼)组合施用至患有IIIa期至IV期结肠直肠癌的患者或先前已针对转移性结肠直肠癌治疗的患者。在某些实施方案中，本文提供的如本文所述的化合物1的固体形式与卡培他滨、希罗达、曲美替尼、奥沙利铂和/或伊立替康组合施用至患有难治性结肠直肠癌的患者。在一些实施方案中，本文提供的如本文所述的化合物 1的固体形式与EGFR抑制剂(例如西妥昔单抗或埃罗替尼)和BRAF 抑制剂(例如，索拉非尼、达拉菲尼或威罗菲尼)组合施用至患有难治性结肠直肠癌的患者。在某些实施方案中，本文提供的如本文所述的化合物1的固体形式与卡培他滨、曲美替尼和/或伊立替康一起施用至患有难治性结肠直肠癌的患者或患有不可切除或转移性结肠直肠癌的患者。在一些实施方案中，本文提供的如本文所述的化合物1的固体形式与EGFR抑制剂(例如西妥昔单抗或埃罗替尼)和BRAF抑制剂(例如，索拉非尼、达拉菲尼或威罗菲尼)组合施用至患有难治性结肠直肠癌的患者或患有不可切除或转移性结肠直肠癌的患者。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式单独或与干扰素α、5-氟尿嘧啶/亚叶酸或卡培他滨组合施用至患有不可切除或转移性肝细胞癌的患者；或与顺铂和噻替派一起或与索拉非尼一起施用至患有原发性或转移性肝癌的患者。在某些实施方案中，本文提供的如本文所述的化合物1的固体形式单独或与索拉非尼、舒尼替尼、埃罗替尼和/或西罗莫司组合施用至患有不可切除或转移性肝细胞癌的患者；或与索拉非尼、舒尼替尼、埃罗替尼和/或雷帕霉素一起施用至患有原发性或转移性肝癌的患者。在一些实施方案中，本文提供的如本文所述的化合物1的固体形式与免疫检查点抑制剂(例如，抗 -CTLA4、抗-PD1、抗-PD-L1、抗-Tim-3或抗-Lag-3抗体)或BRAF 抑制剂(例如，索拉非尼、达拉菲尼或威罗菲尼)组合施用至患有原发性、不可切除或转移性肝癌的患者。在一些此类实施方案中，所述抗 -PD-1或抗-PD-L1抗体是阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗、MEDI0680、阿特珠单抗、BMS-936559、纳武单抗、派姆单抗、匹地利珠单抗或 PDR-001。在某些实施方案中，本文提供的如本文所述的化合物1的固体形式单独或与来那度胺、泊马度胺或CC-122组合施用至患有原发性、不可切除或转移性肝细胞癌的患者。在某些实施方案中，本文提供的如本文所述的化合物1的固体形式单独或与CC-223组合施用至患有原发性、不可切除或转移性肝细胞癌的患者。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式与顺铂/5- 氟尿嘧啶、雷莫芦单抗、多西他赛、盐酸阿霉素、氟尿嘧啶注射液、曲妥珠单抗和/或丝裂霉素C组合施用至患有胃(胃)癌的患者。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式与免疫检查点抑制剂(例如，抗-CTLA4、抗-PD1、抗-PD-L1、抗-Tim-3或抗-Lag-3 抗体)或BRAF抑制剂(例如，索拉非尼、达拉菲尼或威罗菲尼)组合施用至患有各种类型或分期的黑色素瘤的患者。在一些实施方案中，本文提供的如本文所述的化合物1的固体形式与阿地白介素、卡比替尼、达拉菲尼、达卡巴嗪、IL-2、拉他莫金冻干混悬剂(talimogene laherparepvec)、重组干扰素α-2b、伊匹单抗、派姆单抗、拉帕替尼、曲美替尼、纳武单抗、聚乙二醇干扰素α-2b、阿地白介素、达拉菲尼和/或威罗菲尼组合施用至患有各种类型或分期的黑色素瘤的患者。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式与阿霉素、紫杉醇、用于可注射悬浮液的紫杉醇蛋白质结合的颗粒-白蛋白结合型
Figure GDA0003834579080000851
长春碱或聚乙二醇化干扰素α组合施用至患有卡波西氏肉瘤的患者。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式与甲氨蝶呤、盐酸氮芥、二马来酸阿法替尼、培美曲塞、贝伐单抗、卡铂、顺铂、色瑞替尼、克唑替尼、雷莫芦单抗、派姆单抗、多西他赛、酒石酸长春瑞滨、吉西他滨、紫杉醇、用于可注射悬浮液的紫杉醇蛋白质结合的颗粒-白蛋白结合型
Figure GDA0003834579080000852
埃罗替尼、吉非替尼和/ 或伊立替康组合施用至患有非小细胞肺癌的患者。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式与卡铂和伊立替康组合施用至患有非小细胞肺癌的患者。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式与多西他赛一起施用至先前已用卡铂/依托泊苷和放射疗法治疗的患有非小细胞肺癌的患者。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式与卡铂和/ 或多西他赛组合，或与卡铂、紫杉醇、用于可注射悬浮液的紫杉醇蛋白质结合的颗粒-白蛋白结合型
Figure GDA0003834579080000863
和/或胸部放射疗法组合施用至患有非小细胞肺癌的患者。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式与多西他赛组合施用至患有IIIB或IV期非小细胞肺癌的患者。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式与奥利默森、甲氨蝶呤、盐酸氮芥、依托泊苷、拓扑替康或阿霉素组合施用至患有小细胞肺癌的患者。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式和多西他赛施用至先前用carbo/VP 16和放射疗法治疗的患有小细胞肺癌的患者。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式与卡铂、阿霉素、吉西他滨、顺铂、卡培他滨、紫杉醇、用于可注射悬浮液的紫杉醇蛋白质结合的颗粒-白蛋白结合型
Figure GDA0003834579080000861
***、阿瓦斯汀、环磷酰胺、托泊替康、奥拉帕尼、噻替派或其组合联合施用至患有各种类型或阶段的卵巢癌如腹膜癌、***状浆液性癌、难治性卵巢癌或复发性卵巢癌的患者。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式与卡培他滨、5-氟尿嘧啶加亚叶酸、吉西他滨、伊立替康加吉西他滨、环磷酰胺、长春新碱、***、GM-CSF、塞来昔布、更昔洛韦、紫杉醇、用于可注射悬浮液的紫杉醇蛋白质结合的颗粒-白蛋白结合型
Figure GDA0003834579080000862
多西他塞、雌莫司汀、denderon、阿比特龙、比卡鲁胺、卡巴他赛、地加瑞克、恩杂鲁胺、戈舍瑞林、醋酸亮丙瑞林、盐酸米托蒽醌、***、西普鲁塞-T、二氯化镭223或其组合联合施用至患有各种类型或阶段的***癌的患者。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式与卡培他滨、IFN、他莫昔芬、IL-2、GM-CSF、塞来昔布或其组合联合施用至患有各种类型或阶段的肾细胞癌的患者。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式与IFN、更生霉素、阿霉素、甲磺酸伊马替尼、盐酸帕唑帕尼、曲贝替定、COX-2 抑制剂如塞来昔布和/或舒林酸组合施用至患有各种类型或阶段的妇科、子宫或软组织肉瘤癌的患者。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式与塞来昔布、依托泊苷、环磷酰胺、多西他赛、卡培他滨、IFN、他莫昔芬、 IL-2、GM-CSF或其组合联合施用至患有各种类型或阶段的实体瘤的患者。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式单独或与长春瑞滨组合施用至患有恶性间皮瘤或伴有胸膜植入物或恶性间皮瘤综合征的IIIB期非小细胞肺癌的患者。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式与纳维克拉 (navitoclax)、维特克拉(venetoclax)和/或奥巴克拉组合施用至患有淋巴瘤和其他血癌的患者。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式与三氧化二砷、氟达拉滨、卡铂、道诺霉素、环磷酰胺、阿糖胞苷、阿霉素、伊达比星、盐酸米托蒽醌、硫鸟嘌呤、长春新碱和/或托泊替康组合施用至患有急性骨髓性白血病(包括难治性或复发性或高危急性骨髓性白血病)的患者。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式与脂质体道诺霉素、托泊替康和/或阿糖胞苷组合施用至患有不利的核型急性成髓细胞性白血病的患者。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式单独或与第二活性成分如长春碱或氟达拉滨、苯丁酸氮芥、博来霉素、贝伦妥单抗-维多汀、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、达卡巴嗪、阿霉素、洛莫司汀、盐酸氮芥、***、盐酸丙卡巴肼或长春新碱组合施用至患有各种类型的淋巴瘤(包括但不限于霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、皮肤B细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤或复发性或难治性低级滤泡性淋巴瘤)的患者。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式与***、唑来膦酸、帕米膦酸盐、GM-CSF、克拉霉素、长春碱、美法仑、白消安、环磷酰胺、IFN、***、双膦酸盐、塞来昔布、三氧化二砷、聚乙二醇干扰素α-2b、长春新碱、卡莫司汀、硼替佐米、卡非佐米、多阿霉素、帕比司他、来那度胺、泊马度胺、沙利度胺、普乐沙福或其组合联合施用至患有各种类型或阶段的多发性骨髓瘤的患者。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式与嵌合抗原受体(CAR)T细胞组合施用至患有各种类型或阶段的多发性骨髓瘤的患者。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式与阿霉素、长春新碱和/或***组合施用至患有复发性或难治性多发性骨髓瘤的患者。
在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式与塞来昔布、依托泊苷、环磷酰胺、多西他赛、卡培他滨、IFN、他莫昔芬、 IL-2、GM-CSF或其组合联合施用至患有硬皮病或皮肤脉管炎的患者。
本文还包括一种增加可安全且有效地施用至患者的抗癌药物或药剂的剂量的方法，所述方法包括向患者(例如人)施用本文所述的化合物1的固体形式。可通过这种方法受益的患者是可能患有与用于治疗皮肤、皮下组织、***、脑、肺、肝、骨、肠、结肠、心脏、胰腺、肾上腺、肾、***、***、结肠直肠或其组合的特定癌症的抗癌药物相关的不良作用的患者。本文所述的化合物1的固体形式的施用减轻或降低了具有如此严重程度以致否则会限制抗癌药物的量的不良作用。
在一个实施方案中，在与向患者施用抗癌药物相关的不良作用出现之前、期间或之后以在约0.1至约150mg、约1至约100mg、约2 至约50mg或约1至约10mg范围内的量每日施用本文所述的化合物 1的固体形式。在某些实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式与特定药剂如肝素、阿司匹林、香豆素、抗因子Xa或G-CSF组合施用，以避免与抗癌药物相关的不良作用，如但不限于血栓栓塞、嗜中性粒细胞减少症或血小板减少症。
在一个实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式与另外的活性成分(包括但不限于抗癌药物、抗炎药、抗组胺药、抗生素和类固醇)组合施用至患有与不希望的血管生成相关或以不希望的血管生成为特征的疾病和病症的患者。
在另一个实施方案中，本文涵盖一种治疗、预防和/或管理癌症的方法，所述方法包括与常规疗法(包括但不限于，外科手术、免疫疗法、生物疗法、放射疗法或目前用于治疗、预防或管理癌症的其他非药物疗法)结合(例如之前、期间或之后)施用本文所述的化合物1的固体形式。本文提供的化合物和常规疗法的组合使用可提供在某些患者中出乎意料地有效的独特治疗方案。不受理论的限制，据信当与常规疗法同时给予时，本文所述的化合物1的固体形式可提供累加或协同作用。
如本文其他地方所讨论的，本文涵盖一种减轻、治疗和/或预防与常规疗法(包括但不限于外科手术、化学疗法、放射疗法、激素疗法、生物疗法和免疫疗法)相关的不良或不希望的作用的方法。如本文提供的化合物1的固体形式和其他活性成分可在与常规疗法相关的不良作用出现之前、期间或之后施用至患者。
周期性治疗
在某些实施方案中，本文提供的预防剂或治疗剂周期性地施用至患者。周期性疗法包括施用一段时间的活性剂，随后停药一段时间，并且重复这种顺序施用。周期性疗法可减少对一种或多种疗法的抗性的发展、避免或减少所述疗法之一的副作用和/或提高治疗的功效。
因此，在某些实施方案中，本文提供的化合物1的固体形式在四至六周的周期(其中停药期约一周或两周)内以单剂量或分次剂量每日施用。在某些实施方案中，本文提供的化合物1的固体形式以单剂量或分次剂量每天施用持续28天周期的连续1至10天，然后是停药期，其中对于28天周期的剩余时间不施用。周期性方法还允许增加给药周期的频率、数目和长度。因此，在某些实施方案中本文涵盖与单独施用时的典型周期数相比，将本文提供的化合物1的固体形式施用更多个周期。在某些实施方案中，本文提供的化合物1的固体形式以更大周期数施用，这通常将在还未施用第二活性成分的患者中导致剂量限制毒性。
在一个实施方案中，本文提供的化合物1的固体形式以约0.1至约150mg/天的剂量每天施用并连续施用三或四周，然后中断一或两周。
在另一个实施方案中，静脉内施用本文提供的化合物1的固体形式并口服施用第二活性成分，其中在4-6周的周期期间在第二活性成分之前30至60分钟进行本文描述的化合物1的固体形式的施用。在某些实施方案中，本文提供的化合物1的固体形式与第二活性成分的组合在每个周期在约90分钟内通过静脉内输注施用。在某些实施方案中，一个周期包括每天施用约0.1至约150mg/天的本文提供的化合物1的固体形式和约50至约200mg/m2/天的第二活性成分持续三至四周，且然后停药一或两周。在某些实施方案中，向患者施用组合治疗的周期数在约1至约24个周期、约2至约16个周期或约4至约 3个周期的范围内。
药物组合物和施用途径
本文所述的化合物1的固体形式可常规形式的制剂口服、局部或肠胃外施用至对象，所述制剂如胶囊、微胶囊、片剂、颗粒剂、粉末、锭剂、丸剂、栓剂、注射液、悬浮液、糖浆剂、贴剂、乳膏、洗剂、软膏、凝胶、喷雾剂、溶液以及乳液。合适的制剂可通过通常使用的方法，使用常规的有机或无机添加剂来制备，所述添加剂如赋形剂(例如，蔗糖、淀粉、甘露醇、山梨糖醇、乳糖、葡萄糖、纤维素、滑石、磷酸钙或碳酸钙)、粘合剂(例如，纤维素、甲基纤维素、羟甲基纤维素、聚丙基吡咯烷酮、聚乙烯吡咯烷酮、明胶、***树胶、聚乙二醇、蔗糖或淀粉)、崩解剂(例如淀粉、羧甲基纤维素、羟丙基淀粉、低取代的羟丙基纤维素、碳酸氢钠、磷酸钙或柠檬酸钙)、润滑剂(例如，硬脂酸镁、轻质无水硅酸、滑石或十二烷基硫酸钠)、调味剂(例如，柠檬酸、薄荷醇、甘氨酸或甜橙粉)、防腐剂(例如，苯甲酸钠、亚硫酸氢钠、对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯)、稳定剂(例如，柠檬酸、柠檬酸钠或乙酸)、悬浮剂(例如，甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或硬脂酸铝)、分散剂(例如，羟丙基甲基纤维素)、稀释剂(例如水)和基础蜡(例如，可可脂、白凡士林或聚乙二醇)。药物组合物中本文所述的化合物1的固体形式的有效量可达到将发挥所需作用的水平；例如对于口服和肠胃外施用两者，单位剂量为约0.005mg/kg对象体重至约10mg/kg患者体重。
待施用至对象的化合物1的固体形式的剂量相当广泛可变，并且可受制于卫生保健从业者的判断。一般来说，化合物1的固体形式可在对象中以约0.005mg/kg对象体重至约10mg/kg对象体重的剂量一天一至四次施用，但上述剂量可根据对象的年龄、体重和医学病状以及施用类型适当地改变。在一个实施方案中，所述剂量是约0.01mg/kg 对象体重至约10mg/kg对象体重、约0.1mg/kg对象体重至约10 mg/kg对象体重、约1mg/kg对象体重至约10mg/kg对象体重或约1 mg/kg对象体重至约5mg/kg对象体重。在一个实施方案中，每天给予一个剂量。在任何给定情况下，所施用的化合物1的固体形式的量将取决于诸如活性成分的溶解度、所用的制剂和施用途径的因素。在一个实施方案中，局部浓度的施加提供约0.01-10M的细胞内暴露或浓度。
在另一个实施方案中，本文提供了用于治疗或预防疾病或病症的方法，所述方法包括向有需要的对象施用约1mg/天至约1000mg/天、约1mg/天至约750mg/天、约1mg/天至约500mg/天、约1mg/天至约250mg/天或约100mg/天至约1000mg/天的本文所述的化合物1 的固体形式。
在另一个实施方案中，本文提供了单位剂量制剂，所述制剂包含介于约1mg与1000mg、约5mg与约1000mg、约10mg与约1000 mg、约25mg与约1000mg、约50mg与约1000mg、约100mg与约1000mg或约250mg与约1000mg之间的本文所述的化合物1的固体形式。
本文所述的化合物1的固体形式可每日一次、两次、三次、四次或更多次施用。在具体实施方案中，600mg或更少的剂量作为每日一次剂量施用，并且超过600mg的剂量以等于总每日剂量的一半的量每天两次施用。
在另一个实施方案中，本文提供了单位剂量制剂，所述制剂包含介于约1mg与200mg、约35mg与约1400mg、约125mg与约1000 mg、约250mg与约1000mg或约500mg与约1000mg之间的本文所述的化合物1的固体形式。
在一个具体实施方案中，本文提供了单位剂量制剂，所述单位剂量制剂包含约100mg或400mg本文所述的化合物1的固体形式。
在另一个实施方案中，本文提供了单位剂量制剂，所述单位剂量制剂包含1mg、5mg、10mg、15mg、20mg、30mg、35mg、50mg、 70mg、100mg、125mg、140mg、175mg、200mg、250mg、280mg、 350mg、500mg、560mg、700mg、750mg、1000mg或1400mg的本文所述的化合物1的固体形式。
本文所述的化合物1的固体形式可每日一次、两次、三次、四次或更多次施用。在具体实施方案中，600mg或更少的剂量作为每日一次剂量施用，并且超过600mg的剂量以等于总每日剂量的一半的量每天两次施用。
出于方便的原因，可口服施用本文所述的化合物1的固体形式。在一个实施方案中，当口服施用时，化合物1的固体形式与膳食和水一起施用。在另一个实施方案中，将化合物1的固体形式分散在水或果汁(例如苹果汁或橙汁)中并作为悬浮液口服施用。
本文所述的化合物1的固体形式还可皮内、肌内、腹膜内、经皮、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外、舌下、脑内、***内、经皮、经直肠、经粘膜、吸入或局部施用至耳、鼻、眼睛或皮肤。施用模式由卫生保健从业者自行判断，并且可部分取决于医学病状的部位。
在一个实施方案中，本文提供了含有本文所述的化合物1的固体形式而没有另外的载体、赋形剂或媒介物的胶囊。
在另一个实施方案中，本文提供了包含有效量的本文所述的化合物1的固体形式和药学上可接受的载体或媒介物的组合物，其中所述药学上可接受的载体或媒介物可包含赋形剂、稀释剂或其混合物。在一个实施方案中，所述组合物是药物组合物。
所述组合物可呈片剂、咀嚼片剂、胶囊、溶液、肠胃外溶液、锭剂、栓剂和悬浮液等形式。组合物可被配制成在剂量单位中含有每日剂量或每日剂量的合宜部分，其可以是单一片剂或胶囊或合宜体积的液体。在一个实施方案中，溶液由水溶性盐如盐酸盐制备。通常，所有组合物均根据药物化学中的已知方法制备。胶囊可通过将本文所述的化合物1的固体形式与合适的载体或稀释剂混合并将适量的混合物装入胶囊中来制备。通常的载体和稀释剂包括但不限于惰性粉末物质，如许多不同种类的淀粉、粉末状纤维素(特别是结晶和微晶纤维素)、糖(如果糖、甘露醇和蔗糖)、谷物粉以及类似的可食用粉末。
片剂可通过直接压制、湿法制粒或干法制粒来制备。本文所述的化合物1的固体形式的压缩可能不能降低或调节向患者施用的药物的活性。它们的制剂通常并入稀释剂、粘合剂、润滑剂和崩解剂以及化合物。典型的稀释剂包括例如，各种类型的淀粉、乳糖、甘露醇、高岭土、磷酸钙或硫酸钙、无机盐如氯化钠以及糖粉。粉末状纤维素衍生物也是有用的。典型的片剂粘合剂是诸如淀粉、明胶和糖(如乳糖、果糖、葡萄糖等)的物质。天然和合成树胶也是合宜的，包括***胶、藻酸盐、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷等。聚乙二醇、乙基纤维素和蜡也可充当粘合剂。
在片剂制剂中可能需要润滑剂以防止片剂和冲头粘在冲模中。润滑剂可选自光滑的固体，如滑石、硬脂酸镁和硬脂酸钙，硬脂酸以及氢化植物油。片剂崩解剂是在润湿时溶胀以使片剂破裂并释放化合物的物质。它们包括淀粉、粘土、纤维素、藻素和树胶。更具体地，例如可使用玉米和马铃薯淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、木纤维素、粉末状天然海绵、阳离子交换树脂、海藻酸、瓜尔胶、柑橘果肉和羧甲基纤维素以及十二烷基硫酸钠。片剂可用糖作为调味剂和密封剂包衣，或用成膜保护剂包衣以改变片剂的溶解性质。所述组合物也可被配制成咀嚼片剂，例如通过在制剂中使用诸如甘露醇的物质。
当需要作为栓剂施用本文所述的化合物1的固体形式时，可使用典型的基质。可可脂是传统的栓剂基质，其可通过添加蜡来改性以略微提高其熔点。特别是包含各种分子量的聚乙二醇的水混溶性栓剂基质广泛使用。
可通过适当的制剂延迟或延长本文所述的化合物1的固体形式的作用。例如，可制备本文所述的化合物1的固体形式的缓慢溶解球粒并将其掺入片剂或胶囊中，或作为缓释可植入装置。所述技术还包括制备几种不同溶解速率的球粒，并用所述球粒的混合物填充胶囊。片剂或胶囊可用在可预测的时间段内抵抗溶解的膜包衣。甚至肠胃外制剂也可通过将本文所述的化合物1的固体形式溶解或悬浮在允许其在血清中缓慢分散的油性或乳化载体中而制成长效制剂。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物包含形式A，包括基本上纯的形式A。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物包含HCl盐形式1，包括基本上纯的起始材料HCl盐形式。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物包含HCl盐形式1，包括基本上纯的HCl盐形式1。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物包含形式B，包括基本上纯的形式B。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物包含HCl盐形式2，包括基本上纯的HCl盐形式2。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物包含形式C，包括基本上纯的形式C。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物包含HCl盐形式3，包括基本上纯的HCl盐形式3。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物包含形式D，包括基本上纯的形式D。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物包含HCl盐形式4，包括基本上纯的HCl盐形式4。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物包含形式E，包括基本上纯的形式E。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物包含HCl盐形式5，包括基本上纯的HCl盐形式5。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物包含形式F，包括基本上纯的形式F。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物包含HCl盐形式6，包括基本上纯的HCl盐形式6。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物包含形式G，包括基本上纯的形式G。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物包含HCl盐形式7，包括基本上纯的HCl盐形式7。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物包含形式H，包括基本上纯的形式H。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物包含HCl盐形式8，包括基本上纯的HCl盐形式8。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物包含形式I，包括基本上纯的形式I。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物包含形式Y，包括基本上纯的形式Y。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物包含形式Z，包括基本上纯的形式Z。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物包含非晶形固体，例如，本文所述的游离碱、HCl盐、柠檬酸盐或其他盐，包括基本上纯的非晶形固体。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物包含化合物1的一种或多种固体形式的混合物，包括形式A、形式B、形式C、形式D、形式E、形式F、形式G、形式H、形式I、形式Y、形式Z、HCl盐形式1、HCl盐形式2、HCl盐形式3、HCl盐形式4、HCl盐形式5、 HCl盐形式6、HCl盐形式7、HCl盐形式8或本文所述的非晶形固体，其中化合物1的固体形式的每种可能的组合都是可能的。
实施例
通过说明而不是通过限制的方式呈现以下实施例。在描述和实施例中使用以下缩写：
ACN： 乙腈
Am： 非晶形
AmPhos： 对二甲基氨基苯基二丁基膦
API： 活性药物成分
Boc： 叔丁氧基羰基
n-BuOH： 正丁醇
dba： 二亚苄基丙酮
DBU： 1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯
DCM： 二氯甲烷
DIPEA： N,N-二异丙基乙胺
DMAc： N,N-二甲基乙酰胺
DMF： N,N-二甲基甲酰胺
DMSO： 二甲亚砜
DSC： 差示扫描量热法
DVS： 动态蒸汽吸附
EDTA： 乙二胺四乙酸酯
ESI： 电喷雾电离
EtOAc： 乙酸乙酯
EtOH： 乙醇
FTIR： 傅里叶变换红外光谱学
HPLC： 高效液相色谱法
IPA： 2-丙醇
IPAc： 乙酸异丙酯
LCMS： 液相色谱与质谱法
MeCN 乙腈
MEK： 甲基乙基酮
MeOH: 甲醇
2-MeTHF： 2-甲基四氢呋喃
mp： 熔点
MS: 质谱法
MTBE： 叔丁基甲基醚
NBS： N-溴琥珀酰亚胺
NMP： N-甲基-2-吡咯烷酮
NMR： 核磁共振
RH： 相对湿度
RT： 室温
Rx 重结晶
S： 溶剂
SDTA： 单差热分析
SM： 起始材料
S-SegPhos (S)-(-)-5,5-双(二苯基膦基)-4,4-二-1,3-苯并间二氧杂环戊烯
TA： 热分析
Tf： 三氟甲磺酸盐或三氟甲磺酰基
TFA： 三氟乙酸
TFE： 2,2,2-三氟乙醇
TGA： 热重量分析
TGA-MS/TG-MS： 热重量分析与质谱法结合
THF： 四氢呋喃
TLC： 薄层色谱法
XRPD： X射线粉末衍射
合成实施例
以下非限制性合成实施例显示用于制备化合物1的方法。 ACD/NAME(AdvancedChemistry Development,Inc.,Ontario,Canada) 和/或Chemdraw(Cambridgesoft,PerkinElmer,Waltham,MA)用于生成化学结构的名称并且Chemdraw用于绘制化学结构。
在一个实施方案中，化合物1以如美国专利号9,512,124的实施例53中所述的方式合成，所述专利特此以引用的方式整体并入。
化合物1盐筛选和选择
使用小体积方法进行化合物1盐形式筛选。化合物1的pKa是 5.14。选择几种抗衡离子用于盐形成，包括乙醇酸、苹果酸、柠檬酸、酒石酸、磷酸、马来酸、苯磺酸、甲磺酸、甲苯磺酸、硫酸、盐酸与各种溶剂。
游离碱化合物1是水合物材料(一水合物)。在分解之前TGA重量损失达2.9％重量损失，并且DSC显示由于脱水而在低温下较宽的两个吸热峰以及然后在182℃处的熔融峰。在水中浆液后，晶体形式保持不变。游离碱在40℃下在溶液(pH 1.2至7.5)中稳定。它在达七周的应力条件下具有固态的化学和物理稳定性。在干燥条件下，水合物形式变为部分或半水合物。盐形式可能改进固态性质和pH依赖性溶解度。除非干燥(<5％RH)或保持在较高温度(>60℃)，否则一水合物的晶体形式保持不变。一水合物游离碱具有轻微吸湿性。
使用X射线衍射仪(SmartLab,Rigaku)检查固体样品。检测器配备了带前置放大器X射线检测技术的光电倍增管。将样品从3至 40°2θ扫描，步长为0.02°2θ，且每步时间为20秒。管电压和电流分别是40KV和44mA。将样品从样品容器转移到零背景XRD-夹持器上并轻轻研磨。
TGA分析在TA Instruments TGA Q5000上进行。将大约1.50mg 样品置于去皮重的铂或铝盘中，自动称重，并***TGA炉中。将样品以10℃/分钟的速率加热至最终温度300℃。吹扫气体是氮气，分别对于平衡在约10cc/分钟下，且对于炉子在约90cc/分钟下。
DSC分析在TA Instruments Q2000上进行。校准标准是铟。将 1.50mg重量的样品置于去皮重的TA DSC盘中，并准确记录重量。将卷曲盘用于分析，并将样品在氮气(50cc/分钟)下以10℃/分钟的速率加热，直至最终温度300℃。使用热分析仪(Universal Analyzer2000, TA Instruments)处理数据。
质子NMR用于研究由盐形成产生的化合物的化学位移。使用配备有自动样品(B-ACS 60)的Bruker Advance 300 UltrashieldTM进行质子NMR。二甲亚砜-d6(DMSO-d6)用作NMR分析的溶剂。采集时间是约16秒，
使用DVS advantage(Surface Measurement Systems Ltd)测量动态蒸汽吸附(DVS)。在等温线(25℃)下以步进模式在0％至95％完整循环的目标RH下测试样品。对于等温线试验，通过在恒定25.0℃±1.0℃下的水浴保持室温度。通过将不同的湿和干氮气流与可变流速组合来产生样品室中的相对湿度。分析以10％RH增量进行。采样速率是1 秒，保存数据速率是20秒。dm/dt(％)值设定为0.001，其中dm/dt窗口为5分钟，最小稳定性持续时间为10分钟，并且最大级时间为180 分钟。记录对应于每个RH的样品平衡重量。通过绘制平衡水分含量对RH来获得吸附等温线。
将1.00克化合物1游离碱溶解于10mL甲醇中。然后将100μL 储备溶液添加至96孔板上的每个孔中。将酸溶液以1:1的摩尔比添加至板上的每个孔中，在同一行中将一种酸添加至8个孔。在干燥所述板后，将400μL的8种不同溶剂的等分部分以柱方式添加到所述板上的孔中。然后将板覆盖并在环境温度和湿度条件下在操作实验室通风橱中蒸发。溶剂，包括乙醇、2-丙醇、3-甲基-丁醇、乙腈、甲基叔丁基醚(MTBE)、丙酮、水、乙酸乙酯，用于筛选。
通过XRPD、TGA和DSC表征化合物1游离碱的起始非盐形式。它是结晶一水合物，并且在此指定为形式1。
对化合物1进行粉末X射线衍射，并且分布图在图89中示出。
在图90中，化合物1的TGA热谱图显示，由于脱水，在相对低温(<75℃)下观察到约2.9％的重量损失。最终重量损失是来自药物化合物的分解。
在图91中，化合物1的DSC热谱图显示，结晶固体在相对低温下具有对应于脱水/去溶剂化的宽吸热事件，并且吸热峰分别具有 174.6℃和182.1℃的起始温度和峰值温度，由于脱水形式的熔融所致的焓为52.0J/g。
DVS的分布图显示样品(化合物1)相对于如图92中所示的一水合物游离碱从0％-95％RH稍微吸湿(<4.3％)。一水合物游离碱在首次通过零湿度或极低湿度的干燥循环时转化为无水。然后当固体颗粒暴露于达25％RH的增加的相对湿度时，获得约2.6％(wt)的水，在此湿度范围内转化回为一水合物。另外约1.7％的水分吸附缓慢且从25至95％RH稳定地获得。在从95降至5％RH的解吸循环期间，水含量的损失非常缓慢约1.5％，保持了一水合物结构。然后，当相对湿度从5％RH降低至干燥时，剩余的约2.8％wt的水突然从样品中释放出来。3.0％水含量的水平对应于一水合物。
在30％RH以上，吸附/解吸几乎是可逆的。在30％RH以下，在解吸过程中水的释放比吸附过程中的吸收更困难。
在DMSO中检查了化合物1的质子NMR，并显示在图6中。将化合物1游离碱(1.00克)溶解在甲醇(10.0mL)中。然后将100μL溶液的等分部分分配到96孔板(1.0mL平底透明玻璃***物)上的每个孔中。将十一种酸(包括乙醇酸、苹果酸、柠檬酸、酒石酸、磷酸、马来酸、苯磺酸、甲磺酸、甲苯磺酸、硫酸、盐酸)以1:1的摩尔比添加至孔中，参见表1。在环境温度和湿度条件下在操作实验室通风橱中蒸发溶剂。在干燥后，引入用于结晶的溶剂，参见表1。然后，用圆孔盖垫w/硅酮/PTFE衬里覆盖所述板，以允许在周围环境下缓慢蒸发和结晶。
表1：96孔板中的内容物盐形成剂和溶剂。
Figure GDA0003834579080000971
在化合物1游离碱在模拟胃液(SGF)溶液中的溶解度研究期间最初发现了HCl。将约30mg化合物1游离碱称入玻璃小瓶中，并引入 1mL的SGF。混合物很快变成澄清溶液。过夜，出现沉淀。通过过滤收集固体颗粒并进行表征。XRPD分布图与游离碱不同，如图94 中所示。在分解之前，TGA在相对低温(<70℃)下显示出约3.3％的重量损失(图95)。DSC分布图具有两个吸热事件1)在相对低温下由于脱水和熔融脱水形式，起始温度和峰值温度分别为209.3℃和230.5℃ (图96)。在等温线下对此样品进行动态蒸汽吸附，如图97中所示。1HNMR显示在嘌呤和苯环中的氢上观察到化学位移，从而表明形成盐(图98)。
表2：化合物1的小体积盐筛选。
Figure GDA0003834579080000981
动态蒸汽吸附(DVS)显示HCl盐相对于一水合物HCl从0-95％RH 具有低吸湿性(<1.0％)，如图97中所示。HCl一水合物在首次通过零湿度或极低湿度的干燥循环时转化为无水。然后当固体颗粒暴露于达 25％RH的增加的相对湿度时，获得约2.9％(wt)的水，在此湿度范围内转化回为一水合物。另外约1.7％的水分吸附缓慢且从25至95％RH 稳定地获得。在从95降至5％RH的解吸循环期间，水含量的损失非常缓慢约1.5％，保持了一水合物结构。然后，当相对湿度从5％RH 降低至干燥时，剩余的约2.8％wt的水迅速从样品中释放出来。3.0％水含量的水平对应于一水合物。
在30％RH以上，吸附/解吸几乎是可逆的。在30％RH以下，在解吸过程中水的释放比吸附过程中的吸收更困难。在25％RH以下在吸附与解吸曲线之间观察到迟滞现象。
通过DMSO-d6中的1H NMR来分析来自含有化合物1游离碱和硫酸的孔#H2的样品，图99。1H NMR显示在嘌呤和苯环中的氢上观察到化学位移，从而表明形成盐。通过TGA和DSC分析选定样品，图100至图105。在相对低温下，TGA分布图都显示初始重量损失 (2.5％-3.2％)，然而，不是相同的行为。来自这些孔的DSC分布图也显示在相对低温下的宽吸热事件，但是不是相同的分布图。硫酸盐是溶剂化物，其取决于用于结晶的溶剂的用途。
发现来自各种溶剂中的SVSS的结晶甲磺酸盐，并且来自各种溶剂的结晶柠檬酸盐的XRPD分布图非常相似。来自EtOAC中SVSS 的结晶甲磺酸盐的代表性XRPD分布图显示于图106中。通过 DMSO-d6中的1H NMR对含有化合物1游离碱和甲磺酸的样品进行分析。1H NMR显示在嘌呤和苯环中的氢上观察到化学位移，从而表明形成盐。通过TGA和DSC分析选定样品，图108至图117。TGA分布图f在相对低温下都显示初始重量损失(1.4％-2.2％)，以及稍微不同的行为。来自这些孔的DSC分布图也显示在相对低温下的宽吸热事件，但在去溶剂化后不同的分布图。
发现来自各种溶剂中的SVSS的结晶柠檬酸盐，并且来自SVSS 的结晶柠檬酸盐的XRPD分布图在图118至图125中示出。来自乙醇 (A9)、IPA(B9)、3-甲基-2-丁醇(C9)、乙腈(D9)、MTBE(E9)和丙酮(F9) 的XRPD分布图看起来相似(柠檬酸盐形式1)，如图126和图127中所示。来自EtOAc(H9)中的SVSS的XRPD分布图是不同的(图128，柠檬酸盐形式2)。来自水中的SVSS的XRPD分布图(图124)非常接近于图126中的那些。通过DMSO-d6中的1H NMR对含有化合物1 游离碱和柠檬酸的样品进行分析，图129。1H NMR显示在嘌呤和苯环中未观察到氢的化学位移，从而表明在溶液相中盐形成是弱相互作用并且可认为是共晶体。通过TGA和DSC分析选定样品，图130至图139。在分解之前，TGA分布图在相对低温下都显示最小初始重量损失(<0.5％)。来自这些孔的DSC分布图也显示由于熔融的单一吸热，其中起始温度和峰值温度分别为约203℃和约211℃。
通过DMSO-d6中的1H NMR对含有化合物1游离碱和磷酸的样品进行分析，图140。1HNMR显示在嘌呤和苯环中未观察到氢的化学位移，从而表明在溶液相中可能不会形成盐。从SVSS中发现了不同的晶体结构，表明形成了磷酸盐与化合物1的共晶体。
孔B4和B6的X射线粉末衍射图是相似的，指定为磷酸盐形式 1A，图141。
孔B7和B10的X射线粉末衍射是不同的，并且也不同于形式 1A，分别指定为形式1B和1C，如图142中所示。
将HCl盐一水合物(1):240mg化合物1称重到4-mL玻璃小瓶中，且然后引入4.60mL的水中的0.1N HCl。混合物变得澄清。通过0.22 μm过滤器过滤溶液，并将上清液置于通风橱下进行结晶。很快出现沉淀。通过过滤收集固体。
固体样品被分析为一水合物(1)，并且XRPD分布图与来自SGF 中游离碱的溶解度研究的分布图相似，但具有更好的结晶度，作为 mL玻璃小瓶且然后添加3.10mL的水中的0.5N HCl。混合物变得澄清。添加另外5.0mL水。通过0.22μm过滤器过滤溶液。将上清液置于通风橱下进行结晶。很快出现沉淀。通过过滤收集固体。
将303.7mg化合物1称重在20mL玻璃小瓶中，且然后添加10mL 的SGF。混合物变得澄清。将化合物1HCl盐的固体颗粒作为晶种添加至小瓶中。在LabQuake旋转下保持悬浮液搅拌24小时。通过过滤收集固体颗粒。
在溶液沉淀过程中未观察到无水形式。脱水在XRD-DSC阶段进行。
将170mg化合物1称重到4mL玻璃小瓶中，且然后引入3.3mL 的EtOAc中的0.1MH2SO4。混合物立即变成胶状/胶凝材料。在干燥后，收集固体并通过XRPD、TGA和DSC进行分析，如图图153至图155中所示。
将105mg化合物1称重到4mL玻璃小瓶中，且然后引入2.0mL 的水中的0.1M H2SO4。混合物变成凝胶状材料，并添加1mL水。所述材料仍然像油一样粘稠。
将138mg化合物1称重到4mL玻璃小瓶中，且然后添加1.0mL 的EtOAc以首先溶解所述材料。然后，引入2.60mL的EtOAc中0.1M 甲磺酸，并且立即出现沉淀。通过过滤收集固体，并在40℃下在真空下干燥过夜，且然后通过XRPD、TGA和DSC进行分析，如图156 至图158中所示。
将34mg化合物1称重到4-mL玻璃小瓶中，且然后添加0.65mL 的乙腈中的0.1M甲磺酸。未达到明澄清溶液，但是，明显观察到新的固相。通过过滤收集固体，并在40℃下在真空下干燥过夜，且然后通过XRPD、TGA和DSC进行分析，如图159至图161中所示。
甲磺酸盐形式：在水中浆液后，XRPD分布图略有不同，如图162 中所示。
还使用动态蒸汽吸附(DVS)在水分下研究了甲磺酸盐。在吸附和解吸循环(图163)之后，XRPD分布图与起始材料略有不同，如图164 中所示。
将114mg化合物1称重在玻璃小瓶中，且然后添加0.6mL EtOAc 溶剂。搅拌后混合物变成澄清溶液。将2.20mL的水中0.1N柠檬酸添加至溶液中，立即出现棉花状沉淀。通过过滤收集固体并进行表征，如图165至图167中所示。在分解之前，TGA在相对低温度下显示很小的重量损失(<0.2％)。DSC显示出由于熔融所致的单一吸热峰，其中起始温度和峰值温度分别为205.2℃和209.5℃，焓为240.7J/g。
将95mg化合物1称重在玻璃小瓶中，且然后添加0.5mL丙酮溶剂以溶解材料。然后添加1.8mL的丙酮中的0.1N柠檬酸。将澄清溶液置于通风橱下进行结晶。很快，出现了沉淀物。
通过过滤收集固体并进行表征，如图168至图170中所示。XRPD 分布图类似于形式1。在分解之前，TGA在相对低温度下显示很小的重量损失(<0.4％)。DSC显示出由于熔融所致的单一吸热峰，其中起始温度和峰值温度分别为205.3℃和209.5℃，焓为250.2J/g。
将208mg化合物1称重在玻璃小瓶中，且然后添加1.0mL丙酮溶剂以溶解材料。然后添加4.0mL的水中的0.1N柠檬酸。将澄清溶液置于通风橱下进行结晶。很快，出现了沉淀物。通过过滤收集固体并进行表征。在分解之前，TGA在相对低温度下显示很小的重量损失(<0.4％)。DSC显示出由于熔融所致的单一吸热峰，其中起始温度和峰值温度分别为206.0℃和211.4℃，焓为257.7J/g。
TGA在分解之前几乎未显示重量损失，然而，NMR和GC分析均显示存在4000-5000ppm丙酮。
将43.02mg化合物1称重在玻璃小瓶中，且然后添加1.0mL乙醇溶剂以溶解材料(不完全)。然后添加0.82mL的水中0.1N柠檬酸，并且混合物变得澄清。将澄清溶液置于通风橱下进行结晶。很快，出现了沉淀物。添加另外1.0mL水。通过过滤收集固体并进行表征，如图174至图176中所示。
XRPD分布图与形式1、2和3不同。在分解之前，TGA在相对低温度下显示很小的重量损失(<0.3％)。DSC显示出由于熔融所致的单一吸热峰，其中起始温度和峰值温度分别为211.2℃和214.8℃，焓为277.1J/g。
将45.74mg化合物1称重在玻璃小瓶中，且然后添加1.0mL IPA 溶剂以溶解材料(混浊)。然后添加0.87mL的水中0.1N柠檬酸，并且混合物变得澄清。将澄清溶液置于通风橱下进行结晶。不久，出现了沉淀物。
通过过滤收集固体并进行表征，TGA显示出在分解之前在相对低温下的很小重量损失(<0.3％)。然而，DSC显示出在相对低温下可能由于去溶剂化和熔融峰所致的宽吸热峰，其中起始温度和峰值温度分别为207.9℃和212.7℃，焓为190.7J/g。
将51.4mg化合物1称重在玻璃小瓶中，且然后添加1.0mL的水中的0.1M柠檬酸。将悬浮液在环境温度下保持搅拌以进行转化和结晶。(添加1mL水)。通过过滤收集固体并进行表征，如图180至图 182中所示。在分解之前，TGA在相对低温度下显示很小的重量损失 (<0.1％)。DSC显示单一熔融峰，其中起始温度和峰值温度分别为 204.2℃和207.6℃，焓为249.9J/g。
如从动态蒸汽吸附(DVS)研究所证明，柠檬酸盐显示出低吸湿性 (图183)。从SVSS筛选，在各种溶剂中使用柠檬酸形成的固体形式产生类似的XRPD分布图，其可能是同构溶剂化物。TGA在相对低温下显示出轻微重量损失(<0.5％)，DSC显示出单个吸热峰，其中起始温度和峰值温度分别为205.3℃和209.5℃。柠檬酸盐在几种溶剂中产生，所述溶剂包括乙醇、IPA、丙酮和EtOAc。
在水、模拟胃液(SGF)、模拟肠液(SIF)和0.25％Tween 80中的 0.5％HPMC中测定HCl水合物形式(2)、柠檬酸盐形式Z(2)和游离碱的溶解度。在水中的溶解度因pH而异。从表3中可以看出，HCl盐一水合物在pH 3.65下在水中具有最高溶解度(微溶于水)。柠檬酸盐和游离碱在水中的溶解度分别是0.252和0.003mg/mL，这取决于pH。通过反离子和溶解度测定水介质中的pH。HCl盐在水中产生最低pH 3.65，而柠檬酸盐产生pH相对高pH＝4.61。HCl盐形式在SGF中的溶解度具有共离子的作用；然而，游离碱在SGF中具有显著高动力学溶解度，其次是柠檬酸盐。这些盐以及SIF中的游离碱的溶解度非常低，几乎不溶于SIF。
表3：各种盐形式在水、SGF、SIF以及0.25Tween80中的 0.5％HPMC中的溶解度。
Figure GDA0003834579080001021
与游离碱相比，还在生物相关介质中测定了HCl和柠檬酸盐的溶解度。在存在表面活性剂(牛磺胆酸钠和卵磷脂)的情况下，HCl盐、柠檬酸盐和游离碱的溶解度值在FeSSIF和FaSSIF两者中相似(表4)。
表4：与游离碱相比，HCl和柠檬酸盐在生物相关介质中的溶解度。
Figure GDA0003834579080001022
在游离碱、HCl和柠檬酸盐中，固态性质没有显著差异。它们在固态下都具有化学和物理稳定性。本文的数据表明，游离碱、HCl和柠檬酸盐的溶解度取决于pH、共离子的影响和表面活性剂的存在。从单犬PK比较研究中未获得总结的PK结果。所有固体形式在FeSSIF和FaSSIF两者中均显示出相似的溶解分布图(图186和图187)，并且证明了BIC在0.01N HCl和0.001N HCl中的类似溶解分布图。
表5：盐形式和游离碱的固态稳定性。
Figure GDA0003834579080001031
固体形式
分析方法–游离碱
进行化合物1的多晶型物筛选以研究在各种条件(如不同的溶剂、温度和湿度变化)下是否可产生不同的固体形式。
多晶型物筛选中使用的溶剂是HPLC或试剂级，包括乙腈 (MeCN)、MeCN/水(1:1)、正丁醇(n-BuOH)、无水乙醇(EtOH)、乙醇/ 水(1:1)、甲醇(MeOH)、2-丙醇(IPA)、乙酸乙酯(EtOAc)、乙酸甲酯 (MeOAc)、二氯甲烷(DCM)、甲基乙基酮(MEK)、甲基叔丁基醚 (MTBE)、庚烷、甲苯、乙酸甲酯(MeOAc)、乙酸异丙酯(IPAc)、甲基异丁基酮(MIBK)、2-甲基四氢呋喃(2-MeTHF)、1,4-二噁烷、四氢呋喃(THF)、THF/水(1:1)以及水。
用已知体积的测试溶剂处理称重的化合物1样品。将所得混合物在室温下搅拌约1天。如果所有固体似乎通过目视检查溶解，则基于用于提供完全溶解的溶剂的总体积来计算估计的溶解度。如果存在固体，则将已知体积的滤液蒸发至干燥并测量残余物的重量以估计溶解度。
通过XRPD分析在多晶型物筛选中产生的所有固体样品。在 PANalyticalEmpyrean X射线粉末衍射仪上进行XRPD分析，使用
Figure GDA0003834579080001032
的Cu Kα辐射。
PANalytical Empyrean仪器配备有精细聚焦X射线管。X射线发生器的电压和电流强度分别设定为45kV和40mA。发散狭缝设定为 1/16°和1/8°，并且接收狭缝设定为1/16°。使用Pixel 2D检测器测量衍射辐射。θ-2θ从3°至40°2θ以步长0.013设定，其中样品旋转速率设定为4。使用烧结氧化铝标准品检查峰位置。
DSC分析在TA Discovery差示扫描量热计上进行。铟用作校准标准。将大约1-5mg样品放入DSC盘中。将样品在氮气下以10℃/ 分钟的速率加热，直至最终温度为220℃。熔点报告为外推的起始温度。
在TA Discovery热重量分析仪上进行TGA分析。将大约2-10mg 精确称重的样品置于盘上并负载到TGA炉中。将样品在氮气下以 10℃/分钟的速率加热，直至最终温度为220℃。
样品的形态分析在Evex Mini-SEM上进行。将少量样品分散在样品支架上，使用Evex Mini Au溅射涂覆器涂覆金，并以300x至1000x 放大率成像。
在表面测量***DVS上测定吸湿性。将5-20mg的样品大小负载到DVS仪器样品盘中，并在室温下在DVS自动吸附分析仪上分析样品。相对湿度以10％RH梯度从0％增加至90％RH，然后以类似方式降低以实现完整吸附/解吸循环。
在Bruker 300MHz NMR波谱仪上获得1H NMR波谱。将样品溶解在DMSO-D6中并用8-64次扫描进行分析。
使用配备有烘箱样品处理器的Metrohm KF库仑烘箱滴定计测量卡尔费歇尔(KF)水含量。烘箱温度设定为100℃。
平衡/浆液和蒸发实验
在室温下进行平衡和蒸发实验。如果在1天后存在固体，则使用 0.45μmPTFE过滤器过滤它们并在分析之前空气干燥。将剩余的上清液蒸发至干，并且分离固体用于分析。
通过将过量的固体化合物1添加至达1mL的测试溶剂来进行在 50℃下的平衡和蒸发实验。将所得混合物分别在室温下搅拌1天且在 50℃下搅拌1天。在达到平衡后，除去饱和上清液，使用0.45μm PTFE 过滤器过滤，并分别在室温和50℃下在氮气下在开口小瓶中蒸发。分离由平衡产生的固体并在分析前空气干燥。
表6：总结平衡(EQ)和蒸发(EV)结果
Figure GDA0003834579080001041
Figure GDA0003834579080001051
-不可分析
*没有足够的结晶材料用于精确表征
反溶剂重结晶和冷却重结晶实验
为了冷却重结晶，在65℃下用固体化合物1使每种所选溶剂饱和。溶剂包括MeCN、MeCN/水(1:1)、EtOH、EtOH/水(1:1)、IPA以及THF/水(1:1)。将溶液搅拌约10分钟，使用0.45μm PTFE针筒式过滤器过滤，且然后通过将小瓶置于冰箱中冷却至约-15℃。分离由重结晶产生的固体并在分析前空气干燥。为了冷却重结晶，在60℃下用化合物1使每种所选溶剂(MeOH、EtOH和EtOH/水)饱和。将溶液在60℃下搅拌10分钟，使用0.45μm PTFE针筒式过滤器过滤，且然后自然冷却至室温，并且然后置于冰箱中。分离由重结晶产生的固体并在分析前空气干燥。
表7：冷却重结晶结果
溶剂 条件 通过XRPD的形式
MeCN 65℃至-15℃ I
MeCN/水(1:1) 65℃至-15℃ C
EtOH 65℃至-15℃ -
EtOH/水(1:1) 65℃至-15℃ -
THF/水(1:1) 65℃至-15℃ -
IPA 65℃至-15℃ -
-没有沉淀/没有足够的材料用于分析
对于反溶剂重结晶，在室温下用固体化合物1使所选溶剂MeCN 和MeOH饱和。一旦固体完全溶解，就将一部分溶液过滤到含有选定反溶剂(水)的小瓶中。通过将小瓶置于冰箱中将混合物冷却至4℃。分离由重结晶产生的固体并在分析前空气干燥。对于反溶剂重结晶，在60℃下用化合物1使选定溶剂(MeOH、EtOH、IPA和EtOAc)饱和。一旦固体完全溶解，就将一部分溶液过滤到预热的小瓶中，并在60℃下添加选定反溶剂(水、MTBE或庚烷)。将混合物自然冷却至室温，且然后置于冰箱中。分离由重结晶产生的固体并在分析前空气干燥。
表8：产生用于表征的材料的实验
Figure GDA0003834579080001061
使用MeOH、EtOH、EtOH/水、IPA和EtOAc作为单一或主要溶剂。水、MTBE和庚烷用作反溶剂。结果总结在表6中。仅使用水作为反溶剂的结晶产生形式A。所有其他溶剂或溶剂组合提供与在平衡实验期间观察到的类似的溶剂化物形式。
表9：反溶剂重结晶结果
溶剂 反溶剂 比率 通过XRPD的形式
MeCN 水 1:10 C+A
MeOH 水 1:2 非晶形
多晶型的概述
在这种多晶型物筛选研究期间，发现总共九种结晶形式和作为游离碱的化合物1的非晶形形式。九种结晶形式的XRPD分布图的叠加图在图1中示出，并且物理特性总结在表10中。非晶形形式的XRPD 图在图40中示出。
表10：化合物1游离碱的固体形式和非晶形形式的总结
Figure GDA0003834579080001062
Figure GDA0003834579080001071
-：不适用或不可获得
EQ：平衡
EV：蒸发
形式A
如上所述估计了游离碱形式A在环境温度下在各种溶剂中的近似溶解度。结果总结在表11中。发现游离碱形式A在丙酮、EtOAc、 MeOAc和THF中最可溶(>100mg/mL)。形式A在1,4-二噁烷、 2-MeTHF、DCM、MeCN/水(1:1)、IPAc、MEK、MeOH、MIBK和 THF/水(1:1)中极易溶解(>50mg/mL)。形式A在EtOH、MTBE、 n-BuOH、(>10mg/mL)在IPA、甲苯、(>3mg/mL)在MeCN和EtOH/ 水(1:1)中显示出一定溶解度(>20mg/mL)。形式A在水和庚烷中显示出低溶解度(<1mg/mL)。
表11：化合物1游离碱形式A在室温下的近似溶解度。
Figure GDA0003834579080001072
Figure GDA0003834579080001081
在50℃下的平衡实验在水和庚烷中产生形式A。指定形式E的独特形式由形式A在EtOH/水(1:1)中获得。指定形式F的独特形式从 IPA中的形式A获得。指定形式G的独特形式从MTBE中的形式A 获得。在MeCN和MeCN/水(1:1)中获得形式A和形式C的混合物。在EtOAc和EtOH中获得形式A和形式H的混合物。形式F也由形式A获得，来自IPA在50℃下的蒸发。在甲苯中蒸发产生非晶形和低结晶材料(未知形式)的混合物。在50℃下的所有其他蒸发实验产生化合物1的非晶形形式。
如上所述进行冷却重结晶实验。溶剂包括MeCN、MeCN/水(1:1)、 EtOH、EtOH/水(1:1)、THF/水(1:1)以及IPA。结果总结在表7中。证实从MeCN/水(1:1)获得的固体是形式C。从MeCN获得的固体被证实是指定形式I的独特形式。剩余的溶剂在-15℃下14天后未沉淀。
如上所述进行用反溶剂的重结晶。MeCN和MeOH用作主要溶剂。水用作反溶剂。结果总结在表10中。使用XRPD，证实从MeCN/ 水获得的固体是形式C和形式A的混合物。确认从MeOH/水获得的固体是非晶形的。
形式A是一水合物。这种形式主要通过在水性或“富含水”的溶剂***中的重结晶或浆液实验获得。
形式A也可通过暴露于具有大于约20％相对湿度(RH)的环境条件从形式B、形式C和形式H转化而获得。
在低于10％RH或高温下干燥时，形式A转化为无水形式B。
形式A具有结晶XRPD图案，如图2中所示。形式A的TGA和 DSC热谱图分别在图4和图5中示出。DSC热谱图显示两个事件，其中第一事件起始温度为约94℃且最大值为约117℃，归因于脱水；并且第二事件起始温度为约174℃且最大值为约182℃，对应于熔融/ 分解。观察到2.8％的TGA重量损失直至熔融。形式A的1H NMR 波谱与化合物1结构一致，没有显著降解或残留溶剂(参见图7)。
通过DVS测定形式A的水分吸附/解吸行为。结果总结在图6A 至图6B中。在10％与30％RH之间观察到超过3％的急剧重量变化。在解吸时在10至0％RH之间观察到类似的重量变化，这与水合物一致。在30％-90％RH之间观察到大约1.4wt％的额外水吸收，从而表明水合物略微吸湿。
图1提供了形式A的XRPD图案。形式A的X射线衍射峰的列表在下面以下表12中提供。
表12：形式A的X射线衍射峰
Figure GDA0003834579080001091
Figure GDA0003834579080001101
图3是形式A的SEM图像。
形式B
在约40℃下在真空下从干燥形式A获得形式B。形式B也可在 50℃-60℃在真空下从干燥形式C中获得。形式B在包含大于约20％ RH的环境条件下转化为形式A。形式B具有结晶XRPD图案，如图 8中所示。由丙酮获得的形式B的TGA和DSC热谱图分别在图9和图10中示出。0.1wt％的TGA重量损失对应于一个DSC峰，在所述峰周围起始为约174℃并且最大值为约182℃且对应于熔融/分解。这些观察结果表明，形式B是化合物1的无水物。
表13中提供了形式B的X射线衍射峰的列表。
表13：形式B的X射线衍射峰。
Figure GDA0003834579080001102
Figure GDA0003834579080001111
形式C
在室温或50℃下，由形式A在MeCN或MeCN/水中的平衡获得形式C。形式C也可由化合物1在MeTHF中的溶液的方法获得。在恒定体积的真空下蒸馏MeTHF(10体积)并添加MeCN(约20体积)以除去MeTHF(230托/46℃)。最后，批次中不超过5vol％MeTHF。固体在蒸馏过程中结晶。将批料冷却、老化、过滤并在不高于30℃的真空下干燥。形式C具有结晶XRPD图案，如图11中所示。由 MeCN/水获得的形式C的TGA和DSC热谱图分别在图12和图13 中示出。6.6wt％的TGA重量损失对应于165℃附近的宽DSC峰，并且可归因于形式C中的去溶剂化。起始温度为180℃且最大为约 186℃的DSC峰对应于熔融/分解。获得形式C样品的1H-NMR波谱，并且尽管存在大量MeCN，但与结构一致(图14)。化合物1的单溶剂化物的理论MeCN含量是6.7wt％，与观察到的TGA重量损失相匹配。这些观察结果表明，形式C是化合物1的乙腈单溶剂化物。在高于约 20％RH的环境温度下，形式C转化为形式A。
以下在表14中提供了形式C的X射线衍射峰的列表。
表14：形式C的X射线衍射峰。
Figure GDA0003834579080001121
Figure GDA0003834579080001131
形式D
在室温下，从IPA中的形式A的重结晶平衡获得形式D。形式D 具有结晶XRPD图案，如图15中所示。形式D的TGA和DSC热谱图分别在图17和图18中示出。大约7.4wt％的TGA重量损失对应于 154℃附近的宽DSC峰，并且可归因于形式D中溶剂的损失。起始温度为175℃且最大为约185℃的较小DSC峰对应于熔融/分解。获得形式D样品的1H-NMR波谱，并且与结构一致并含有IPA(参见图 19)。这些观察结果表明，形式D最可能是化合物1的IPA溶剂化物。
以下在表15中提供了形式D的X射线衍射峰的列表。
表15：形式D的X射线衍射峰。
Figure GDA0003834579080001132
Figure GDA0003834579080001141
形式E
形式E由形式A在EtOH/水(1:1)中在50℃下的平衡获得。形式E 具有结晶XRPD图案，如图20中所示。形式E的TGA和DSC热谱图分别在图21和图22中示出。13.7wt％的TGA重量损失对应于 104℃附近的较小宽DSC峰，并且可归因于形式E中溶剂的损失。这些观察结果表明形式E是含乙醇的溶剂化物或水合物。
以下在表16中提供了形式E的X射线衍射峰的列表。
表16：形式E的X射线衍射峰。
Figure GDA0003834579080001142
Figure GDA0003834579080001151
形式F
形式F由50℃下IPA中形式A的平衡获得。形式E具有结晶 XRPD图案，如图23中所示。形式F的SEM照片提供为图24。形式F的TGA和DSC热谱图分别在图25和图26中示出。14.3wt％的 TGA重量损失对应于起始在137℃附近的宽DSC峰，并且可归因于形式F中溶剂的损失。最高温度为153℃的DSC峰对应于熔融/分解。形式F样品的1H-NMR波谱与结构一致，但含有IPA。参见图27。这些观察结果表明，形式F是化合物1的IPA溶剂化物。
以下在表17中提供了形式F的X射线衍射峰的列表。
表17：形式F的X射线衍射峰。
Figure GDA0003834579080001152
Figure GDA0003834579080001161
形式G
形式G由50℃下MTBE中形式A的平衡获得。形式G具有结晶XRPD图案，如图28中所示。形式G的SEM照片提供为图29。形式G的TGA和DSC热谱图分别在图30和图31中示出。8.7wt％的TGA重量损失对应于147℃附近的宽DSC峰，并且可归因于形式 G中溶剂的损失。最大约161℃的DSC峰对应于熔融/分解。对于形式G样品获得的1H-NMR波谱与结构一致但含有MTBE(参见图32)。这些观察结果表明，形式G是化合物1的MTBE溶剂化物。
以下在表18中提供了形式G的X射线衍射峰的列表。
表18：形式G的X射线衍射峰。
Figure GDA0003834579080001162
Figure GDA0003834579080001171
Figure GDA0003834579080001181
形式H
形式H由形式A在EtOH/水(1:1)、EtOH或EtOAc中在50℃下获得。形式G具有结晶XRPD图案，如图33中所示。形式H的TGA 和DSC热谱图分别在图34和图35中示出。6.5wt％的TGA热谱图重量损失对应于163℃附近的宽DSC峰，并且可归因于形式H中溶剂的损失。起始温度为约179℃且最大为约187℃的DSC峰对应于熔融/分解。化合物1的单溶剂化物的理论EtOH含量是7.5％，对应于观察到的TGA重量损失。这些观察结果表明，形式H是化合物1的溶剂化物或水合物。形式转化实验表明，形式H暴露在20％RH以上产生形式A。
以下在表19中提供了形式H的X射线衍射峰的列表。
表19：形式H的X射线衍射峰。
Figure GDA0003834579080001182
Figure GDA0003834579080001191
形式I
形式I由形式A在MeCN中的冷却重结晶获得。形式I具有结晶 XRPD图案，如图36中所示。形式I的TGA和DSC热谱图分别在图38和图39中示出。2.3wt％的TGA重量损失对应于75℃附近的宽 DSC峰，并且可归因于形式I中溶剂的损失。起始温度为约173℃且最大为约183℃的DSC峰对应于熔融/分解。形式转化实验表明在室温下具有MeCN的浆液产生形式C。这些观察结果表明形式I是化合物1的溶剂化物或水合物。
以下在表20中提供了形式I的X射线衍射峰的列表。
表20：形式I的X射线衍射峰。
Figure GDA0003834579080001192
Figure GDA0003834579080001201
非晶形固体游离碱
在室温或50℃下从大多数蒸发实验获得化合物1的非晶形固体，如表6中所示。
非晶形固体具有XRPD光谱，如图40中所示。非晶形固体样品的DSC热谱图在图41中示出。非晶形固体具有大约84℃的玻璃化转变温度。非晶形固体的DVS等温线图在图43A中示出。在10％与 50％RH之间观察到约3.5％的可逆重量变化。
表21：形式转化实验的总结
Figure GDA0003834579080001202
Figure GDA0003834579080001211
固体形式
分析方法–柠檬酸盐形式
进行柠檬酸盐化合物1的多晶型物筛选以研究在各种条件(如不同的溶剂、温度和湿度变化)下是否可产生不同的固体形式。
多晶型物筛选中使用的溶剂是HPLC或试剂级，包括乙腈 (MeCN)、MeCN/水(1:1)、正丁醇(n-BuOH)、无水乙醇(EtOH)、乙醇/ 水(1:1)、甲醇(MeOH)、2-丙醇(IPA)、乙酸乙酯(EtOAc)、乙酸甲酯 (MeOAc)、二氯甲烷(DCM)、甲基乙基酮(MEK)、甲基叔丁基醚 (MTBE)、庚烷、甲苯、乙酸甲酯(MeOAc)、乙酸异丙酯(IPAc)、甲基异丁基酮(MIBK)、2-甲基四氢呋喃(2-MeTHF)、1,4-二噁烷、四氢呋喃(THF)、THF/水(1:1)、水、二甲亚砜(DMSO)、二甲基乙酰胺(DMA， DMAc)以及N-甲基吡咯烷酮(NMP)。
用已知体积的测试溶剂处理称重的化合物1柠檬酸盐样品。将所得混合物在室温下搅拌1天。如果所有固体似乎通过目视检查溶解，则基于用于提供完全溶解的溶剂的总体积来计算估计的溶解度。如果存在固体，则将已知体积的滤液蒸发至干燥并测量残余物的重量以估计溶解度。
通过XRPD分析在多晶型物筛选中产生的所有固体样品。在 PANalyticalEmpyrean X射线粉末衍射仪上进行XRPD分析，使用
Figure GDA0003834579080001212
的Cu Kα辐射。
PANalytical Empyrean仪器配备有精细聚焦X射线管。X射线发生器的电压和电流强度分别设定为45kV和40mA。发散狭缝设定为 1/16°和1/8°，并且接收狭缝设定为1/16°。使用Pixel 2D检测器测量衍射辐射。θ-2θ连续扫描从3°至40°2θ以步长0.013或0.026设定，其中样品旋转速率设定为4。使用烧结氧化铝标准品检查峰位置。
DSC分析在TA Discovery差示扫描量热计上进行。铟用作校准标准。将大约1-5mg样品放入DSC盘中。将样品在氮气下以10℃/ 分钟的速率加热，直至最终温度为260℃。熔点报告为外推的起始温度。
在TA Discovery热重量分析仪上进行TGA分析。将大约2-10mg 精确称重的样品置于盘上并负载到TGA炉中。将样品在氮气下以 10℃/分钟的速率加热，直至最终温度为300℃。
样品的形态分析在Evex Mini-SEM上进行。将少量样品分散在样品支架上，使用Evex Mini Au溅射涂覆器涂覆金，并以500x至1000x 放大率成像。
在表面测量***DVS上测定吸湿性。将5-20mg的样品大小负载到DVS仪器样品盘中，并在室温下在DVS自动吸附分析仪上分析样品。相对湿度以10％RH梯度从0％增加至90％RH，然后以类似方式降低以实现完整吸附/解吸循环。
在Bruker 300MHz NMR波谱仪上获得1H NMR波谱。将样品溶解在DMSO-D6中并用128次扫描进行分析。
通过在室温下将单独固体形式与选定溶剂混合来测定形式A和形式B在选定有机溶剂中的溶解度。在多个时间点(18小时、4天、8 天或12天)获得等分部分，过滤，并通过HPLC方法定量。通过XRPD 分析回收的固体以确认固体形式。
平衡/浆液和蒸发实验
通过将过量的化合物1柠檬酸盐固体添加至达1mL的测试溶剂来进行在室温和50℃下的平衡和蒸发实验。将所得混合物分别在室温下搅拌1天且在50℃下搅拌1天。在达到平衡后，除去饱和上清液，使用0.45μm PTFE过滤器过滤，并分别在室温和50℃下在氮气下在开口小瓶中蒸发。分离由平衡产生的固体并在分析前空气干燥。
反溶剂重结晶和冷却重结晶实验
为了冷却重结晶，在65℃下用化合物1柠檬酸盐使每种选定溶剂饱和。溶剂包括MeCN/水(1:1)、EtOH、EtOH/水(1:1)、MeOH、THF/ 水(1:1)以及THF。将溶液搅拌10分钟，使用0.45μm PTFE针筒式过滤器过滤，且然后通过将小瓶置于冰箱中冷却至-15℃。分离由重结晶产生的固体并在分析前空气干燥。
对于反溶剂重结晶，在室温下用化合物1柠檬酸盐材料使选定溶剂DMA饱和。一旦固体完全溶解，就将一部分溶液过滤到含有选定反溶剂(MeCN、MeOH、庚烷、EtOAc、甲苯和水)的小瓶中。通过将小瓶置于冷冻机或冰箱中将混合物冷却至-15℃和4℃。分离由重结晶产生的固体并在分析前空气干燥。
多晶型的概述
在这种多晶型物筛选研究期间发现了化合物1柠檬酸盐的两种结晶形式。这些形式的XRPD图案的堆积图在图44中示出，并且物理特性总结在表29中。
形式Y
形式Y由在25C将化合物1起始材料溶解在5体积丙酮中而获得。将约1.15当量的柠檬酸水溶液(约0.2M)装入所述批次中以形成化合物1柠檬酸盐。将化合物1柠檬酸盐在25℃下老化直至母液浓度低于1mg/ml。将浆液滤出并用约4体积(1:1)丙酮/H2O洗涤以洗涤滤饼。将滤饼在50℃的真空烘箱中干燥，直到通过NMR检测不到丙酮。
如上所述估计化合物1柠檬酸盐形式Y在环境温度下在各种溶剂中的近似溶解度。结果总结在表22中。发现化合物1柠檬酸盐形式Y在DMSO、DMA和NMP中最可溶(>50mg/mL)。化合物1柠檬酸盐形式Y在THF/水、(>5mg/mL)THF、(>3mg/mL)MeCN/水(1:1) 和MeOH、(>2mg/mL)1,4二噁烷中显示一定溶解度(>20mg/mL)。化合物1柠檬酸盐形式Y在所有其他测试的溶剂中显示低溶解度(<1 至2mg/mL)，所述溶剂包括丙酮、n-BuOH、MeCN、EtOH、EtOH/ 水(1:1)、IPA、EtOAc、MeOAc、DCM、MTBE、MEK、庚烷、甲苯、 2-MeTHF以及水。
表22：在室温下化合物1柠檬酸盐形式Y的近似溶解度。
Figure GDA0003834579080001231
Figure GDA0003834579080001241
如上所述，使用化合物1柠檬酸盐形式Y作为起始材料，在室温和50℃下进行平衡和蒸发实验。结果总结在表23中。在MeOH和 MeCN/水中在50℃下的平衡得到独特形式，称为柠檬酸盐形式Z。所有其他平衡实验提供化合物1柠檬酸盐形式Y或与化合物1柠檬酸盐形式Z混合的化合物1柠檬酸盐形式Y。由于溶解度相对较低，所以大多数蒸发实验不能提供可分析的固体。从EtOH和EtOH/水中蒸发得到化合物1柠檬酸盐形式Y和Z的混合物。来自MeOH蒸发的固体得到化合物1柠檬酸盐形式Z。
表23：平衡和蒸发结果的总结。
Figure GDA0003834579080001242
Figure GDA0003834579080001251
n/a：无实验
-：不可分析。
*：发生显著降解。
如上所述进行冷却重结晶实验。溶剂包括MeCN/水(1:1)、EtOH/ 水(1:1)、THF/水(1:1)、EtOH、MeOH和THF。结果总结在表24中。从THF和THF/水获得的固体被证实是化合物1柠檬酸盐形式Y。从 MeOH和MeCN/水获得的固体被证实是化合物1柠檬酸盐形式Z。从 EtOH和EtOH/水获得的固体被证实是化合物1柠檬酸盐形式Y和Z 的混合物。
表24：来自冷却重结晶的结果
溶剂 冷却分布图 通过XRPD的形式
MeCN/水(1:1) 65℃至-15℃ Z
EtOH 65℃至-15℃ Z+Y
EtOH/水(1:1) 65℃至-15℃ Z+Y
MeOH 65℃至-15℃ Z
THF 65℃至-15℃ Y
THF/水(1:1) 65℃至-15℃ Y
如上所述进行用反溶剂的重结晶。DMA用作主要溶剂。MeCN、 MeOH、庚烷、EtOAc、甲苯和水用作反溶剂。结果总结在表25中。使用XRPD，从DMA/MeCN、DMA/MeOH和DMA/水获得的固体是化合物1柠檬酸盐形式Z。从DMA/EtOAc获得的固体被证实是化合物1柠檬酸盐形式Y，并且从DMA/甲苯获得的固体被证实是化合物 1柠檬酸盐形式Y和Z的混合物。从DMA/庚烷重结晶实验中未观察到沉淀。
表25：来自反溶剂重结晶的结果
Figure GDA0003834579080001252
Figure GDA0003834579080001261
RT：室温
-：无沉淀
形式Y被指定为用作此筛选的起始材料的DSD样品的结晶形式。形式Y具有结晶XRPD图案，如图45中所示。SEM照片在图 46中示出。形式Y的TGA和DSC热谱图分别在图47和图48中示出。对于形式Y，直至150℃未观察到TGA重量损失。直至形式Y 的熔融温度观察到小的额外重量损失。DSC热谱图显示熔融事件，其中起始温度为213℃且最大为217℃。形式Y是略微吸湿的，在0％与90％RH之间具有约2.1％w/w水吸收。1H NMR波谱与柠檬酸盐的结构一致，具有约0.2％w/w残余丙酮(图50)。如通过HPLC所测定，柠檬酸含量是25.1wt％，与1:1盐一致(理论上25.2wt％的柠檬酸)。这些观察结果表明，形式Y最可能是化合物1柠檬酸盐的无水物。
通过压缩测试和形式转化实验进一步表征形式Y的稳定性。在施加2000-psi的压力约1分钟后，材料仍为形式Y(图51A和图51B)。
表26：化合物1柠檬酸盐形式Y和形式Z在室温下在选定溶剂中的HPLC溶解度。
Figure GDA0003834579080001262
-：未测试
注意：从溶解度测试中回收的所有固体通过XRPD仍然是起始形式。
以下在表27中提供了形式Y的X射线衍射峰的列表。
表27：形式Y的X射线衍射峰
Figure GDA0003834579080001263
Figure GDA0003834579080001271
形式Z
化合物1柠檬酸盐形式Z通过在MeOH和MeCN/水(1:1)中在 50℃下的平衡实验和各种重结晶实验产生，包括从MeCN/水冷却重结晶，以及从DMA/MeCN、DMA/MeOH和DMA/水反溶剂重结晶。形式Z具有结晶XRPD图案，如图52中所示。SEM照片在图53中示出。形式Z的TGA和DSC热谱图分别在图54和图55中示出。对于形式Z直至150℃未观察到显著TGA重量损失。直至形式Z的融化温度观察到额外的重量损失(达百分之几)。DSC热谱图显示熔融事件，其中起始温度为217℃且最大为221℃。形式Z是略微吸湿的，在0％与90％RH之间具有约1.6％w/w水吸收。形式Z样品在50℃下在MeCN/水中平衡的1H NMR波谱与化合物1柠檬酸盐的结构一致，具有约1.0％w/w的残余MeCN(图57)。如通过HPLC所测定，柠檬酸含量是24.6wt％，与1:1盐一致(理论上25.2wt％的柠檬酸)。这些观察结果表明，形式Z最可能是化合物1柠檬酸盐的无水物。
表28：产生用于表征的材料的实验
Figure GDA0003834579080001281
进行进一步干燥研究以理解在150℃以上观察到的重量损失。将形式Z样品的等分部分分别在150℃和180℃下在KF烘箱(具有N2吹扫)中干燥。回收的固体的柠檬酸含量分别是24.2和17.8wt％，从而表明柠檬酸的损失。干燥样品中的残留溶剂也显著低于“原样”形式 Z样品。
通过压缩测试和形式转化实验进一步表征形式Z的稳定性。在施加2000-psi压力约1分钟后，材料仍为形式Z(图62A-B)。
表29：化合物1柠檬酸盐多晶型物的表征数据的总结
Figure GDA0003834579080001282
以下在表30中提供了形式Z的X射线衍射峰的列表。
表30：形式Z的X射线衍射峰。
Figure GDA0003834579080001291
通过形式转化实验研究了两种形式之间的热力学关系(表31)。以形式Y和Z的混合物开始的竞争性浆液产生溶剂特异性结果。形式Y 由在室温下在THF中的浆液和在50℃下在THF和EtOAc中的浆液产生。形式Z由在室温和50℃下在EtOH、水、MEK和MeCN中的浆液产生。
通过溶解度实验进一步研究了两种形式之间的热力学关系(表 26)。设计这些实验以确定来自竞争性浆液的结果是由于每种形式在特定溶剂中的不同溶解/生长动力学还是总体热力学。如表26中所示，形式Z的溶解度低于形式Y在EtOH中的溶解度，而形式Y的溶解度在丙酮、MeOAc和2-MeTHF中较低。这些结果似乎与来自竞争性浆液的观察结果一致，从而表明溶解/生长动力学不是溶剂特异性形式转化的原因。
表31：形式转化实验的总结
起始形式 溶剂 温度/条件 所得形式
Y+Z 在MeCN中浆液 RT，5天 Y
Y+Z 在EtOH中浆液 RT，5天 Z
Y+Z 在EtOAc中浆液 RT，5天 Y+Z
Y+Z 在甲苯中浆液 RT，5天 Z+Y
Y+Z 在THF中浆液 RT，5天 Y
Y+Z 在水中浆液 RT，5天 Z
Y+Z 在MEK中浆液 RT，5天 Z
Y+Z 在MeCN中浆液 RT，10天 Z
Y+Z 在EtOH中浆液 RT，10天 Z
Y+Z 在EtOAc中浆液 RT，10天 Y+Z
Y+Z 在甲苯中浆液 RT，10天 Z+Y
Y+Z 在THF中浆液 RT，10天 Y
Y+Z 在MEK中浆液 RT，10天 Z
Y+Z 在MeCN中浆液 50℃，4天 Z
Y+Z 在EtOH中浆液 50℃，4天 Z
Y+Z 在EtOAc中浆液 50℃，4天 Y
Y+Z 在甲苯中浆液 50℃，4天 Z+Y
Y+Z 在THF中浆液 50℃，4天 Y
Y+Z 在MEK中浆液 50℃，4天 Z
固体形式
分析方法–HCl盐形式
进行化合物1的多晶型物筛选以研究在各种条件(如不同的溶剂、温度和湿度变化)下是否可产生不同的固体形式。
通过在25℃-30℃下将化合物1溶解在10体积MeOH中来产生起始材料。然后将1.10当量HCl的MeOH溶液(约1.25M)装入所述批次中，以形成化合物1HCl盐。进行从MeOH到EtOAc(约30-35 体积)的溶剂转换的恒定真空蒸馏，并将批温度保持在25℃-35℃。滤出浆液，并使用约5体积(1:1)的EtOAc洗涤滤饼，将所述滤饼在50℃的真空烘箱中干燥。
起始材料具有相对低的结晶度，其在TGA中达100℃的重量损失为1.1％wt％，并且在DSC中具有在238.5℃(起始温度)的一个熔融峰。
对于起始材料，在25℃下从0％RH至95％RH观察到3.6wt％的质量变化。样品具有中度吸湿性
1:1HCl盐的理论Cl含量是5.84wt％。化合物1的HCl盐的Cl 含量是5.70wt％。
通过在室温下与选定溶剂混合来测定起始物质在选定有机溶剂中的溶解度。
表32：无水物/非晶形起始材料的近似溶解度
Figure GDA0003834579080001311
在多晶型物筛选期间发现了八种结晶形式，并且在本文中称为 HCl盐形式1至HCl盐形式8。在表33中提供了结晶形式的一般特征。
表33：多晶型物表征
Figure GDA0003834579080001312
Figure GDA0003834579080001321
EV＝蒸发
RH＝相对湿度
RT＝室温
LVD＝液态蒸气扩散
SVD＝固体蒸气扩散
HCl盐形式1
如图66中所示，HCl盐形式1具有结晶XRPD图案。图67中示出HCl盐形式1的TGA和DSC热谱图。DSC热谱图显示多个热事件，一个事件起始温度为约102℃且最大值为约114℃，归因于脱水；并且第二事件起始温度为约146℃且最大值为约181℃，对应于熔融/ 分解。TGA重量损失在140℃之前是6.6％重量损失，并且在205℃之前是另一10％重量损失。用IPA缓慢蒸发获得HCl盐形式1。HCl 盐形式1是化合物1的HCl盐的IPA溶剂化物。
以下在表34中提供了HCl形式1的X射线衍射峰的列表。
表34：HCl盐形式1的X射线衍射峰。
Figure GDA0003834579080001322
Figure GDA0003834579080001331
HCl盐形式2
HCl盐形式2具有结晶XRPD图案，如图68中所示。图69中示出HCl盐形式2的TGA和DSC热谱图。DSC热谱图显示宽热事件，起始温度约为151℃，归因于熔融、分解和歧化。TGA重量损失在 140℃之前是2.6％重量损失，并且在200℃之前是另一14％重量损失。从IPA/甲苯的液体蒸汽扩散获得HCl盐形式2。
以下在表35中提供了HCl形式2的X射线衍射峰的列表。
表35：HCl盐形式2的X射线衍射峰。
Figure GDA0003834579080001332
Figure GDA0003834579080001341
HCl盐形式3
HCl盐形式3具有结晶XRPD图案，如图70中所示。图71中示出HCl盐形式3的TGA和DSC热谱图。DSC热谱图显示在153℃(起始)的宽热事件，可能归因于熔融、分解和歧化。TGA重量损失在140℃之前是2.3％重量损失，并且在210℃之前是另一11％重量损失。从与n-BuOH相关的多种条件获得HCl盐形式3。
以下在表36中提供了HCl形式3的X射线衍射峰的列表。
表36：HCl盐形式3的X射线衍射峰。
Figure GDA0003834579080001342
Figure GDA0003834579080001351
HCl盐形式4
如图72中所示，HCl盐形式4具有结晶XRPD图案。图73中示出HCl盐形式4的TGA和DSC热谱图。DSC热谱图显示在94℃下的去溶剂化吸热和随后的放热以及在219℃下的另一吸热。TGA重量损失在140℃之前是4.5％。用MeOH/IPAc从液体蒸汽扩散获得HCl 盐形式4。HCl盐形式4可以是化合物1的HCl盐的溶剂化物。
以下在表37中提供了HCl形式4的X射线衍射峰的列表。
表37：HCl盐形式4的X射线衍射峰。
Figure GDA0003834579080001352
Figure GDA0003834579080001361
HCl盐形式5
如图74中所示，HCl盐形式5具有结晶XRPD图案。图75中示出HCl盐形式5的TGA和DSC热谱图。DSC热谱图显示在约104℃和约162℃下的去溶剂化吸热，随后可能的熔融吸热，其起始温度为 192℃且最大为209℃。在140℃之前，TGA重量损失是4.2％重量损失。用DMF从固体蒸汽扩散获得HCl盐形式5。HCl盐形式5可以是化合物1的HCl盐的溶剂化物。HCl盐形式5可以是化合物1的 HCl盐的水合物。
以下在表38中提供了HCl形式5的X射线衍射峰的列表。
表38：HCl盐形式5的X射线衍射峰。
Figure GDA0003834579080001362
Figure GDA0003834579080001371
HCl盐形式6
如图76中所示，HCl盐形式6具有结晶XRPD图案。图77中示出HCl盐形式6的TGA和DSC热谱图。DSC热谱图显示在88℃下的脱水吸热，以及起始为201℃且最大为228℃的另一吸热。在100℃之前，TGA重量损失是11.6％重量损失。第二轮DSC热谱图显示在 89℃下的吸热，以及起始为211℃且最大为225℃的另一吸热(图79)。 TGA重量损失对应于在120℃之前的15.9％重量损失(图78)。样品似乎含有表面水和结晶水。五水合物和六水合物的理论水含量分别是 12.9％和15.1％。从0.1N HCl水溶液中的浆液获得HCl盐形式6。HCl 盐形式6是化合物1的HCl盐的五水合物或六水合物。
以下在表39中提供了HCl形式6的X射线衍射峰的列表。
表39：HCl盐形式6的X射线衍射峰。
Figure GDA0003834579080001372
Figure GDA0003834579080001381
HCl盐形式7
如图80中所示，HCl盐形式7具有结晶XRPD图案。图81中示出HCl盐形式7的TGA和DSC热谱图。DSC热谱图显示在80℃下起始且最大为110℃的脱水吸热，以及起始为215℃且最大为233℃的另一吸热。在100℃之前，TGA重量损失是3.8％重量损失。第二轮DSC热谱图显示在71℃下起始且最大为98℃的吸热，以及起始为 209℃且最大为230℃的另一吸热(图83)。TGA重量损失对应于在约 90℃之前的3.4％重量损失(图82)。一水合物的理论水含量是2.9％。在RT下从水浆液中获得HCl盐形式7并空气干燥2周。HCl盐形式 7是化合物1的HCl盐的一水合物。
以下在表40中提供了HCl形式7的X射线衍射峰的列表。
表40：HCl盐形式7的X射线衍射峰。
Figure GDA0003834579080001382
Figure GDA0003834579080001391
HCl盐形式8
如图85中所示，HCl盐形式8具有结晶XRPD图案。图86中示出HCl盐形式8的TGA和DSC热谱图。DSC热谱图显示在117℃下起始且最大为146℃的脱水吸热，以及起始为208℃且最大为221℃的另一吸热。在100℃之前，TGA重量损失是3.2％重量损失。第二轮DSC热谱图显示在148℃下的吸热，以及起始为204℃且最大为 224℃的另一吸热(图88)。TGA重量损失对应于在约120℃之前的 3.0％重量损失(图87)。一水合物的理论水含量是2.9％。在50℃下从水浆液中获得HCl盐形式8并空气干燥2周。HCl盐形式8是化合物1的HCl盐的一水合物。
以下在表41中提供了HCl形式8的X射线衍射峰的列表。
表41：HCl盐形式8的X射线衍射峰。
Figure GDA0003834579080001401
起始材料HCL盐形式
如图63中所示，起始材料HCl盐形式具有结晶XRPD图案。图 64中示出起始材料HCl盐形式的TGA和DSC热谱图。DSC热谱图显示一个吸热，其中起始在238℃且最大在248℃。TGA重量损失对应于在约100℃之前的约1.0％重量损失。对于起始材料，在25℃下从0％RH至95％RH观察到3.6wt％的质量变化。Cl含量是5.70wt％，与1:1HCl盐的5.84wt％的理论Cl含量一致。样品具有中度吸湿性。起始材料HCl盐形式可以是化合物1的HCl盐的无水物形式。
以下在表42中提供了用于起始材料HCl盐形式的X射线衍射峰的列表。
表42：起始材料HCl盐形式的X射线衍射峰。
Figure GDA0003834579080001411
细胞测定
多重细胞毒性测定。将细胞在RPMI1640、10％FBS、2mM L- 丙氨酰-L-谷氨酰胺、1mM丙酮酸钠或特殊培养基中在37℃下在5％ CO2的湿润气氛中生长。将细胞接种到384孔板中，并在37℃下在 5％CO2的湿润气氛中孵育。在细胞接种后24小时添加化合物。同时，产生时间零点未处理的细胞板。在72小时孵育期后，将细胞固定并用荧光标记的抗体和核染料染色，以允许可视化细胞核、凋亡细胞和有丝***细胞。使用抗活性半胱天冬酶-3抗体检测凋亡细胞。使用抗磷酸-组蛋白-3抗体检测有丝***细胞。将化合物连续稀释3.16倍，并从10μM的最高测试浓度在0.1％DMSO的最终测定浓度中在10 种浓度内测定。使用Molecular Devices ImageXpress Micro XL高含量成像仪进行自动化荧光显微术，并用4X物镜收集图像。
数据分析。用MetaXpress 5.1.0.41软件获取并分析16位TIFF图像。通过掺入的核染料的信号强度测量细胞增殖。细胞增殖测定输出被称为相对细胞计数。为了确定细胞增殖终点，使用以下公式将细胞增殖数据输出转换为对照百分比(POC)：
POC＝相对细胞计数(化合物孔)/相对细胞计数(媒介物孔)x100
相对细胞计数IC50是相对于DMSO对照，在最大可能反应的50％下的测试化合物浓度。GI50是将观察到的生长减少一半所需的浓度。这是抑制生长至未处理细胞的生长与接种在孔中的细胞数量(时间零点值)之间的中间水平的浓度。使用非线性回归计算IC50值以将数据拟合至S形4点，4参数一位点剂量反应模型，其中：
y(拟合)＝A+[(B–A)/(1+((C/x)^D))]。
活化的半胱天冬酶-3标记物标记细胞从早期到晚期细胞凋亡。引起半胱天冬酶-3信号的5倍诱导(Cal_X5)的测试化合物的浓度表明显著细胞凋亡诱导。与DMSO对照相比，化合物对半胱天冬酶3的最大诱导报告为最大_倍数_变化。
表43：用于多重细胞毒性测定的细胞系
Figure GDA0003834579080001421
Figure GDA0003834579080001431
Figure GDA0003834579080001441
Figure GDA0003834579080001451
Figure GDA0003834579080001461
Figure GDA0003834579080001471
Figure GDA0003834579080001481
Figure GDA0003834579080001491
本文所述的化合物1的固体形式显示或将显示在多种癌细胞系中具有抗增殖活性。这些癌细胞系中的抗增殖活性表明氨基嘌呤化合物可用于治疗癌症，包括实体瘤，如由黑色素瘤、结肠直肠癌、胃癌、头颈癌、甲状腺癌、膀胱癌、CNS癌、肺癌、胰腺癌和软组织癌所例示。
在另一个实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式显示或将显示在多种癌细胞系中诱导细胞凋亡。细胞凋亡的诱导表明本文所述的化合物1的固体形式可用于治疗癌症，包括实体瘤，如由膀胱癌、乳腺癌、CNS癌症(包括成神经细胞瘤和神经胶质瘤)、结肠癌、胃肠癌(例如，胃癌或结肠癌)、内分泌癌(例如，甲状腺癌或肾上腺癌)、女性泌尿生殖***癌症(例如，***或卵巢透明细胞癌、外阴癌、子宫癌或卵巢癌)、头颈癌、造血***癌症(例如，白血病或骨髓瘤)、肾癌、肝癌、肺癌(例如，NSCLC或SCLC)、黑色素瘤、胰腺癌、***癌或软组织癌(例如，肉瘤或骨肉瘤)所例示。
在另一个实施方案中，本文所述的化合物1的固体形式显示或将显示在多种癌细胞系中引起G1/S停滞。引起这些癌细胞系中的G1/S 停滞表明所述化合物可用于治疗癌症，包括实体瘤，如由膀胱癌、乳腺癌、CNS癌症(例如，神经胶质瘤和成神经细胞瘤)、结肠癌、胃肠癌(例如，胃癌)、内分泌癌(例如，甲状腺癌或肾上腺癌)、女性泌尿生殖***癌症(例如，子宫癌、***、卵巢透明细胞癌或外阴癌)、头颈癌、造血***癌症(例如，白血病或骨髓瘤)、肾癌、肝癌、肺癌(例如，NSCLC或SCLC)、黑色素瘤、胰腺癌、***癌或软组织癌(肉瘤或骨肉瘤)所例示。
多重细胞毒性测定。在另一个实验中，将细胞在RPMI1640、10％ FBS、2mM L-丙氨酰-L-谷氨酰胺、1mM丙酮酸钠或特殊培养基中在37℃下在5％CO2的湿润气氛中生长。将细胞接种到384孔板中，并在37℃下在5％CO2的湿润气氛中孵育。在细胞接种后24小时添加化合物。同时，产生时间零点未处理的细胞板。在72小时孵育期后，将细胞固定并用荧光标记的抗体和核染料染色，以允许可视化细胞核、凋亡细胞和有丝***细胞。使用抗活性半胱天冬酶-3抗体检测凋亡细胞。使用抗磷酸-组蛋白-3抗体检测有丝***细胞。将化合物连续稀释3.16倍，并从10μM的最高测试浓度在0.1％DMSO的最终测定浓度中在10种浓度内测定。使用Molecular Devices ImageXpress Micro XL高含量成像仪进行自动化荧光显微术，并用4X物镜收集图像。
数据分析。用MetaXpress 5.1.0.41软件获取并分析16位TIFF图像。通过掺入的核染料的信号强度测量细胞增殖。细胞增殖测定输出被称为相对细胞计数。为了确定细胞增殖终点，使用以下公式将细胞增殖数据输出转换为对照的百分比(POC)：
POC＝相对细胞计数(化合物孔)/相对细胞计数(媒介物孔)x100
相对细胞计数IC50是相对于DMSO对照，在最大可能反应的50％下的测试化合物浓度。GI50是指将观察到的生长减少一半所需的浓度。这对应于抑制生长至未处理细胞的生长与接种在孔中的细胞数量 (时间零点值)之间的中间水平的浓度。使用非线性回归计算IC50值以将数据拟合至S形4点，4参数一位点剂量反应模型，其中：
y(拟合)＝A+[(B–A)/(1+((C/x)^D))]。
活化的半胱天冬酶-3标记物标记细胞从早期到晚期细胞凋亡。引起半胱天冬酶-3信号的2倍(Cal-X2)或5倍诱导(Cal_X5)的测试化合物的浓度表明显著细胞凋亡诱导。与DMSO对照相比，化合物对半胱天冬酶3的最大诱导报告为最大_倍数_变化。
表44：细胞毒性测定的结果
Figure GDA0003834579080001511
Figure GDA0003834579080001521
Figure GDA0003834579080001531
Figure GDA0003834579080001541
Figure GDA0003834579080001551
Figure GDA0003834579080001561
Figure GDA0003834579080001571
Figure GDA0003834579080001581
Figure GDA0003834579080001591
Figure GDA0003834579080001601
Figure GDA0003834579080001611
Figure GDA0003834579080001621
Figure GDA0003834579080001631
对HCC增殖的作用。将HCC细胞系用DMSO或递增浓度的化合物1处理72小时。具体地，经由声学分配器(EDC ATS-100)将二甲基亚砜(DMSO)中各种浓度的化合物1点样到空384孔板中。将化合物1在板内一式两份以10点连续稀释方式(3倍稀释)点样。制备用化合物1点样的平板的复制品以用于不同的细胞系。在化合物板复制后，密封所有板(AgilentThermoLoc)并在-20℃下储存达1个月。在准备好用于测试时，就在添加测试细胞之前，将板从冷冻器中取出、解冻并开封。
在测试之前，将细胞在培养瓶中生长并扩增，以提供足够量的起始材料。然后将细胞稀释至适当的密度，并直接添加至化合物点样的 384孔板中。将细胞在37℃/5％CO2下生长72小时。在添加化合物时(t0)，通过定量由活细胞中存在的ATP产生的发光水平经由活力测定(Cell Titer-Glo)来评估初始细胞数。在72小时后，经由Cell Titer-Glo 和发光测量评估化合物处理的细胞的细胞活力。通过定量处理的细胞和DMSO对照细胞中半胱天冬酶3和半胱天冬酶7(半胱天冬酶3/7-Glo)的活性来评估对化合物1的细胞凋亡反应。
GI50和IC50值的确定。使用四参数逻辑模型(S形剂量-反应模型) 来确定化合物的GI50值。
y＝(A+((B-A)/(1+((C/x)^D))))
A＝Y最小
B＝Y最大
C＝EC50
D＝希尔斜率
GI50是当Y＝(Y最大+Yt0)/2时化合物的浓度
IC50是当Y＝DMSO对照的50％时化合物的浓度
Y＝作为发光单位测量的细胞活力
t0＝当添加化合物时的时间
使用CellTiter-Glo和半胱天冬酶3/7-Glo测量增殖和细胞凋亡。 CalX2值是与DMSO对照相比，化合物1诱导裂解的半胱天冬酶3/7 的2倍增加的最低浓度。增殖和细胞凋亡数据是3次实验的平均值。
表45：化合物1对HCC细胞系增殖的作用。
Figure GDA0003834579080001641
结论：化合物1抑制增殖并诱导多种HCC系中的细胞凋亡。
跨一组64种癌细胞系的抗增殖活性。将细胞用DMSO或递增浓度的化合物1处理72小时。如所描述使用CellTiter-Glo测量增殖。结果在表46中示出。
表46：化合物1跨一组64种癌细胞系的抗增殖活性。
Figure GDA0003834579080001651
Figure GDA0003834579080001661
Figure GDA0003834579080001671
化合物1显示抑制源自CRC、黑色素瘤、胃癌、HCC、肺癌、胰腺癌、白血病和多发性骨髓瘤的多种癌细胞系的增殖。
BRAF突变体和β-连环蛋白突变体或活性癌细胞系中的抗增殖和凋亡活性。所评价的五种细胞系中BRAF、CTNNB1、KRAS和EGFR 的突变状态是基于公开数据(COSMIC和CCLE)并内部确认。使用 TOP Flash报道***通过瞬时转染评价β-连环蛋白状态。如果Top Flash报道基因相对于Fop Flash报道基因的比率大于2，则将细胞系定义为β-连环蛋白活性的。N/A：不可获得。使用这种方法，Colo 205 (BRAF V600E)中的转染效率太低而无法获得其β-连环蛋白活性。如上所述测量五种细胞系中化合物1的抗增殖和凋亡活性。
表47：化合物1在BRAF突变体和β-连环蛋白突变体和活性细胞系中的抗增殖和凋亡活性。
Figure GDA0003834579080001672
Figure GDA0003834579080001681
化合物1有效抑制增殖并诱导BRAF突变体和β-连环蛋白突变体或活性癌细胞系，包括BRAF突变型CRC、BRAF突变型黑色素瘤、β-连环蛋白突变型/EGFR突变型CRC(即β-连环蛋白活性/EGFR 突变型CRC)、β-连环蛋白突变型/KRAS突变型胃癌(即β-连环蛋白活性/KRAS突变型胃癌)和HCC中的细胞凋亡。
致癌途径抑制。对MAPK信号传导的影响。将癌细胞以每孔 25,000个细胞的密度接种在96孔组织培养板中，并在37℃下在CO2孵育箱中孵育过夜。在用化合物1在37℃下处理2小时后，用中等规模裂解缓冲液裂解细胞，并经由中等规模ELISA技术测量每种裂解产物中的pRSK S380水平。
结论。化合物1有效抑制多种癌细胞系中的pRSK1(表48)。
表48：BRAF突变型LOX-IMVI和Colo 205癌细胞系中的化合物1 pRSK1 S380 IC50值。
细胞系(n＝3) pRSK1 S380 IC<sub>50</sub>(μM)
LOX-IMVI 0.038+/-0.009
Colo 205 0.047+/-0.01
SW48 0.021+/-0.001
AGS 0.020+/-0.001
在时程实验中，将Colo-205癌细胞用0.5μM化合物1处理不同的时间段。如所描述测量化合物1对pRSK S380的作用。经由用特异性抗体的蛋白质印迹来测量化合物1对其他MAPK途径标志物 (DUSP4和DUSP6)的作用。图188中的时程数据表明化合物1引起以下ERK靶标的持续抑制(达72小时)：pRSK1、DUSP4和DUSP6。 BRAF抑制剂(BRAFi)不会在BRAF突变型CRC系中引起持续ERK 抑制(Corcoran等人,Cancer Discov.2012,2:227-35)。ERK的充分和持续抑制似乎对BRAFi和MEK抑制剂(MEKi)在BRAF突变型黑色素瘤(Bollag等人,Nat RevDrug Disc.2012；11,873-886)和CRC患者 (Corcoran等人,Cancer Discov.2012,2:227-35)中的临床功效至关重要。BRAFi缺乏对ERK的持续抑制可能导致BRAF突变型CRC患者中缺乏BRAFi的临床活性。化合物1对ERK的持续抑制可在BRAF 突变型CRC患者中提供优于BRAFi的优点。
通过测定DUSP4和DUSP6蛋白表达来评估化合物1抑制MAPK 信号传导的能力。将结肠癌细胞系Colo 205(BRAF V600E)培养物用 DMSO或递增浓度的化合物1处理2、8或24小时。从处理的细胞中提取蛋白质并使用针对DUSP4、DUSP6、细胞周期蛋白D1、c-Myc、 YAP或β-肌动蛋白的抗体通过蛋白质印迹进行分析。使用Cell-To-CT 试剂盒提取RNA并用对DUSP4、DUSP6、SPRY2、c-Myc和细胞周期蛋白D1具有特异性的探针进行定量PCR。β-肌动蛋白的特异性探针用于标准化。
在Colo 205(BRAF V600E)中，早在第2小时化合物1显著降低 DUSP4和DUSP6，并且降低持续24小时(图189A)。化合物1处理导致在Colo 205中以浓度依赖性方式减少SPRY2转录(图189B)，与有效ERK抑制一致。评估了经典Wnt和MAPK信号传导下游的细胞周期蛋白D1和c-Myc的水平。化合物1显著降低Colo 205细胞中的细胞周期蛋白D1和c-Myc RNA以及蛋白质水平(图189A-C)。化合物1处理导致Colo 205中24小时的YAP蛋白减少(图189A)。总之，细胞数据与强烈、持续的MAPK途径抑制一致。
为了进一步评价化合物1抑制MAPK信号传导的能力，评估了另外的MAPK靶标(BMF、DUSP5、DUSP6、EFNA1、EGR1、ETV5、 FOS、FOSL1、GJA1、IL-8、SPRY2和SPRY4)的RNA表达。将结肠癌细胞系Colo 205(以BRAF V600E突变为特征)和HT-29(以 BRAF V600E突变为特征)的培养物用DMSO或化合物1以0.3或1 μM处理6小时。使用MagMAX总RNA分离试剂盒提取RNA，并用对BMF、DUSP5、DUSP6、EFNA1、EGR1、ETV5、FOS、FOSL1、 GJA1、IL-8、SPRY2、SPRY4具有特异性的探针进行定量PCR。使用18S rRNA的特异性探针进行标准化。
在两种细胞系中，化合物1降低DUSP5、DUSP6、EGR1、ETV5、 FOS、FOSL1、IL-8、SPRY2、SPRY4的mRNA水平(图189D-I)，其与ERK抑制一致。GJA1的mRNA水平在Colo205细胞中降低并且在HT29中增加的发现可能与化合物1在Colo205中具有细胞毒性且在HT29中具有细胞抑制性的发现有关。化合物1处理导致Colo 205 和HT-29中在6小时BMF和EFNA1的mRNA水平增加。总之，细胞数据与MAPK途径抑制一致。
对β-连环蛋白和YAP信号传导的影响。评价了化合物1针对β- 连环蛋白和YAP靶基因的细胞活性。将结肠癌细胞系Colo 205 (BRAF V600E)培养物用DMSO或递增浓度的化合物1处理2、8或 24小时。使用Cell-To-CT试剂盒提取RNA，并且用对Axin2、CTGF 和AREG具有特异性的探针进行定量PCR。β-肌动蛋白的特异性探针用于标准化。
化合物1处理导致Axin2 RNA增加(图190A)。化合物1在2、8 和24小时显著降低Colo 205(BRAF V600E)中Hippo/YAP靶基因 (CTGF，AREG)的表达(图190A)。总之，这些数据表明化合物1影响 Wnt信号传导并阻断Colo 205癌细胞中的Hippo信号传导。
评价了化合物1针对另外的YAP靶基因的细胞活性(图190B-E)。将结肠癌细胞系Colo 205和HT-29的培养物用DMSO或化合物1以 0.3或1μM处理6小时。使用MagMAX总RNA分离试剂盒提取RNA，并使用对CYR61、CITED2、CXCL1、ELF3、HAS2、HES1和MAFF 具有特异性的探针进行定量PCR。使用18S rRNA的特异性探针进行标准化。
在两种细胞系中，化合物1降低CYR61、CXCL1、HAS2、HES1 和MAFF的mRNA水平。CYR61 mRNA水平在Colo205细胞中降低但在HT29中未降低并且CITED2的mRNA水平在HT29中增加但在 Colo205中未增加的发现可与化合物1在Colo205中具有细胞毒性并在HT29中具有细胞抑制性的发现有关。化合物1处理导致在Colo 205 和HT-29中在第6小时CITED2和ELF3 mRNA的mRNA水平增加。 (图190B)总之，细胞数据与YAP途径抑制一致。
具有β-连环蛋白突变的细胞系中的敏感性的评价。评价了化合物1对具有β-连环蛋白突变的细胞系的作用。(图205和图206A-B)。化合物1显示针对具有突变的β-连环蛋白的细胞系的功效。此类细胞系证明以突变的β-连环蛋白为特征的癌症对用化合物1治疗更敏感。如图207中所示，化合物1进一步显示调节BRAF和CTNNB1突变细胞系中的β-连环蛋白和YAP。化合物1还调节如图208A-B中提供的BRAF和CTNNB1突变细胞系中由MAPK、β-连环蛋白和YAP控制的靶基因表达。
蛋白质印迹。通过标准蛋白质印迹评价了化合物1对MAPK、 WNT/β-连环蛋白和Hippo/YAP途径标志物的调节。将LOX-IMVI、 SW48和Colo-205细胞以每孔250,000个细胞的密度接种在6孔板中，并使其粘附过夜。将化合物1以0.03、0.1、0.3、1和3μM的浓度添加至细胞持续2、8和24小时的持续时间。收获细胞并在RIPA缓冲液(50mM Tris-HCl，pH 7.4，150mM氯化钠[NaCl]，0.25％脱氧胆酸， 1％Nonidet P-40，1mM乙二胺四乙酸[EDTA]，蛋白酶和磷酸酶抑制剂)中裂解。将细胞裂解产物在十二烷基硫酸钠(SDS)-样品缓冲液中加热，并将每种条件40-μg的细胞裂解产物负载到凝胶上，并使用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分离。将蛋白质转移到硝酸纤维素膜上，并用抗DUSP4、DUSP6、cMyc、细胞周期蛋白D1、YAP、AXIN2、HDAC5(磷酸化S498)和β-肌动蛋白抗体进行免疫印迹。在Licor Odyssey***上扫描膜。
定量聚合酶链式反应。通过实时(RT)-qPCR评价MAPK、WNT/β- 连环蛋白和Hippo/YAP途径基因的化合物1调节。将赖氨酰氧化酶 IMVI、SW48和Colo-205细胞以每孔20,000个细胞的密度铺板在96 孔板中，并使其粘附过夜。将化合物1以1nM至10μM的半对数浓度添加至细胞持续2、8和24小时的持续时间。根据产品手册使用 TaqMan Gene ExpressionCells-to-CT试剂盒收获细胞。接下来，进行 RT-PCR，并将得到的cDNA用于ViiA7实时PCR***(Thermo Fisher Scientific)上的qPCR反应中。TaqMan探针用于监测DUSP4、DUSP6、SPRY2、MYC、CCND1、AXIN2、CTGF、Cyr61、AREG和ACTB 基因的变化。将所有基因标准化为ACTB表达并报告为仅DMSO对照的百分比。
基因表达分析：将人支气管上皮细胞在T-150烧瓶中在BEpiCM 生长培养基中培养，并使其达到80％汇合。将细胞以每孔150,000个细胞在BEpiCM培养基中铺板在12孔塑料培养板中24小时。在孵育 24小时后，用作为对照的二甲亚砜(DMSO)，0.1、1、10μM的化合物1处理细胞30分钟。然后用100ng/ml重组Wnt3a(在磷酸盐缓冲盐水[PBS]中配制)、350pMRSPO3(在PBS中配制)或Wnt3和RSPO3 的组合刺激细胞24小时。使用Qiagen Rneasy微型试剂盒根据制造商的说明书分离核糖核酸(RNA)。使用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR) Taq-Man测定来测定Axin2和基因表达。使用
Figure GDA0003834579080001711
III One-Step RT-PCR***进行定量PCR(qPCR)，并在Viia 7实时PCR ***上运行。将数据标准化为甘油醛3-磷酸脱氢酶。化合物1抑制人支气管上皮细胞中的Axin2表达。在24小时测量基因表达。从这些结果显示，化合物1抑制人支气管上皮细胞中的Axin2表达。(图209)。
长期集落测定。经由长期集落形成测定评估化合物1抑制癌细胞的集落形成的能力。将细胞和化合物添加至96孔板中并监测达8周以形成集落。在整个测定过程中每1周补充化合物和培养基。经由在 IncuCyte ZOOM***上以4x成像检测集落形成。化合物1展示以高于MEK抑制剂(曲美替尼)和ERK抑制剂(GDC0994)的水平抑制β-连环蛋白突变细胞的集落形成。用化合物1处理SW48(colo)细胞、 HCT-116(colo)细胞、AGS(胃)细胞和Hep3B(HCC)细胞，并且显示出比在用MEK抑制剂或ERK抑制剂处理情况下所观察到的更高抑制水平。(图210A-210D)。化合物1进一步显示出人意料地抑制对用曲美替尼MEK抑制剂处理具有抗性的AGS细胞的集落形成。此类结果表明化合物1可用于治疗对其他治疗具有抗性的癌症。
免疫调节作用的评价。评价化合物1对PD-L1表达水平的影响。将细胞在存在或不存在化合物1的情况下培养指定时间，然后通过蛋白质印迹测量PD-L1、DUSP4和α-微管蛋白或α-肌动蛋白的表达水平。为了检测PD-L1的表面水平，将细胞用指定浓度的DMSO或化合物1处理48小时，并用针对PD-L1的APC标记的抗体(克隆 29E.1A3.；BioLegend,San Diego,CA)使用流式细胞术分析(FACS)来检测PD-L1的细胞表面表达。通过FlowJo 10(Treestar,Ashland,OR) 测定PD-L1阳性细胞的几何平均值。
结论。化合物1直接抑制多种癌细胞(包括HOP62、KARPAS-299 和LOX-IMVI(BRAFV600E))中的PD-L1表达(图191A)。FACS分析表明，在多种癌细胞系中化合物1还抑制表面PD-L1水平(图191B)。
为了确定化合物1下调PD-L1是否增强T细胞活化，将化合物处理的KARPAS-299癌细胞与用低浓度的超抗原(SEB)刺激的PBMC 源性的T细胞一起共培养。将KARPAS-299细胞用指定浓度的DMSO (D)或化合物1处理48小时。将来自健康供体的PBMC用或不用20 ng/mlSEB处理48小时。在用PBS洗涤后，将PBMC与癌细胞一起孵育24小时，并且收集上清液以使用中等规模测定测量IL-2和IFNγ。
IL-2和IFNγ的上清液水平用作T细胞活化的功能标志物。在不存在SEB的情况下，与化合物-1处理的KARPAS-299细胞共培养的 PBMC产生很少IL-2或IFNγ。在低浓度的SEB(20ng/ml)存在下，与PBMC共培养的化合物1处理的癌细胞展示IL-2和IFNγ产生的水平增加(图192A-B)。化合物1处理的癌细胞中IL-2和IFNγ的水平增加与用抗PD-L1处理(来自Biolegend的Ultra-LEAFTM)观察到的水平相似。
在PBMC培养基中测定化合物1处理对IL-8水平的影响。从全血中分离PBMC并在RPMI培养基加10％FBS中培养。将PBMC以 1x106/毫升接种在10cm2培养皿中。将PBMC用0.1％DMSO或0.5μM 化合物1处理。在指定的时间点停止处理。培养基(1mL)用于IL-8 分析。根据制造商的说明书，用中等规模V-Plex人IL-8试剂盒进行 IL-8分析。显示化合物1在不同时间点抑制IL-8水平(图192C)。
TEAD报道基因测定。使用稳定表达YAP/TAZ反应性合成启动子的WI38 VA13细胞分析TEAD报道活性，所述启动子驱动荧光素酶表达(8xGTIIC-荧光素酶)。将每孔10,000个细胞接种在白壁96孔板上并放置过夜。在16-20小时后，用化合物处理细胞，并根据制造商说明书使用Bright Glo荧光素酶测定(Promega)在24或72小时后测量TEAD报道基因活性。此测定对于化合物1进行3次，并且对于曲美替尼进行两次。参见图212。
活力测定。并行地，将表达8xGTIIC-荧光素酶的10,000个WI38 VA13细胞接种在黑壁96孔板的每个孔中。在16-20小时后，用化合物处理细胞24或72小时。此时，除去含有血清和化合物的培养基，并用100μl无血清培养基和00μl Cell Titer Fluor(Promega)代替。将板在37℃下孵育2小时，然后读取荧光输出。此测定是基于活细胞蛋白酶活性的测量。进行活力测定以确认化合物对TEAD报道基因的任何作用不是化合物对活力的作用的结果。此测定对于化合物1进行 3次，并且对于曲美替尼进行两次。
结论。这些数据提供了另外的治疗假设，从而表明用化合物1治疗将加强T细胞活化。体外数据表明，化合物1可通过抑制关键的致癌途径如MAPK途径并下调肿瘤微环境中的免疫检查点分子PD-L1 表达来增强针对癌细胞的T细胞免疫。因此，表达高水平的PD-L1 的癌症类型(例如，黑色素瘤、肺癌、RCC或HCC)可对化合物1敏感。
动物模型
异种移植物模型。对于异种移植物模型研究，将人癌细胞系注射到SCID(重症联合免疫缺陷)小鼠中。将癌细胞系在体外培养中繁殖。通过将精确确定数量的细胞注射到小鼠中来产生携带肿瘤的动物。在接种动物后，在随机化之前使肿瘤生长至一定大小。将携带在预定大小之间范围内的异种移植物肿瘤的小鼠汇集在一起并随机分成各种处理组。典型的功效研究设计涉及将一种或多种化合物以不同剂量水平施用至携带肿瘤的小鼠。另外，类似地施用并维持参考化学治疗剂 (阳性对照)和阴性对照。在研究过程中取得肿瘤测量值和体重。
用吸入的异氟烷麻醉小鼠，且然后使用配备有26号针的无菌1 mL注射器用PBS中的0.1mL单细胞悬浮液在右后腿上方皮下接种 LOX-IMVI肿瘤细胞。在接种动物后，在随机化小鼠之前使肿瘤生长至大约75-125mm3或在一些情况下250-400mm3。测量每只动物的肿瘤，并将具有适当范围的肿瘤的动物包括在研究中。然后将来自研究库的动物随机分配到各种笼子中，并将笼子随机分配至媒介物、阳性对照或测试品组。将所有小鼠在右耳上用金属耳标标记。典型的组由 8-10只动物组成。对于典型的异种移植物研究，将携带肿瘤的SCID 小鼠随机化并以不同的剂量时程(包括但不限于qd、q2d、q3d、q5d、 q7d和bid)给予例如100mg/kg至0.1mg/kg范围内的化合物。向小鼠给药1-4周。使用卡尺每周两次测量肿瘤，并使用公式W2 x L/2计算肿瘤体积。
这些研究的目的是测试化合物1在细胞系来源的异种移植物模型LOX-IMVI(黑色素瘤)和Colo205(结肠直肠)以及PDX1994060146 (患者来源的异种移植物[PDX146])结肠直肠异种移植物模型中的功效。选择这些模型，因为它们具有V600E BRAF突变。进行另外的PK/PD分析以检查PDX146异种移植物模型中化合物1介导的途径生物标志物的抑制。
LOX-IMVI皮下黑色素瘤异种移植物模型。此研究的目的是证实化合物1在LOX-IMVI黑色素瘤异种移植物模型中的功效。在 LOX-IMVI异种移植物模型中测试两种剂量水平的化合物1(15和30 mg/kg)的一项研究(图193)证明与媒介物对照相比的显著肿瘤体积减少(对于两种剂量水平p<0.001)。对于两种剂量水平，在9只动物中的9只中观察到肿瘤消退，并且在研究结束时，来自每组的9只动物中的1只没有肿瘤。
在单独的实验中，将化合物1以0.2、1、5、10和15mg/kg口服施用，QD持续8天。在LOX-IMVI异种移植物模型中用化合物1处理观察到剂量依赖性抗肿瘤活性(图194)。在10和15mg/kg剂量水平下观察到肿瘤消退。
Colo 205皮下结肠直肠异种移植物模型。Colo 205皮下结肠直肠异种移植物模 型。这些研究的目的是测试化合物1在Colo 205结肠直肠癌异种移植物模型中的功效，并确定每日两次给药(BID)是否对抗肿瘤活性具有影响。在第一实验中，将化合物1以0.2、1、5、10 和15mg/kg口服施用，QD持续15天。在Colo 205异种移植物模型中用化合物1处理观察到剂量依赖性抗肿瘤活性(图195)。进行时程研究以确定BID给药是否增加化合物1的抗肿瘤活性。在Colo 205 异种移植物模型中用化合物1处理观察到剂量依赖性抗肿瘤活性(图196)。
PDX1994060146皮下结肠直肠患者来源的异种移植物模型。这些研究的目的是测试化合物1在PDX1994060146(PDX146)结肠直肠癌异种移植物模型中的功效，并确定BID给药是否对抗肿瘤活性具有影响。进行进展时间(TTP)研究以确定较长治疗持续时间对肿瘤生长的影响。
在第一实验中，将化合物1口服施用，以1、5和15mg/kgQD 或5和15mg/kg BID持续22天。在PDX146异种移植物模型中用化合物1处理观察到剂量依赖性抗肿瘤活性(图197A-B)。与施用15 mg/kg QD相比，给与15mg/kg BID似乎增加化合物1的抗肿瘤活性。
在TTP研究中，将化合物1口服施用，1、5和15mg/kg BID持续49-77天。在整个研究持续期间向化合物1处理组给药，直到组平均值达到大约1200mm3的预定终点或研究终止。肿瘤生长延迟(TGD) 被计算为媒介物对照组(第43天)与化合物1处理组的终止之间的时间。对于1、5和15mg/kg处理组，TGD分别是8、12和>37天。(图 198)
在PDX146异种移植物模型中抑制代表三种不同途径MAPK、 Wnt和Hippo的活性的生物标志物。通过24小时观察到这些途径生物标志物的持续抑制。
化合物1在β-连环蛋白突变型SW48结肠直肠异种移植物模型中的抗肿瘤活性。将雌性SCID小鼠在右侧腹中用2x 106个SW48肿瘤细胞接种。在治疗开始时将小鼠随机分入处理组(n＝10只/组)。在第10天当肿瘤是大约110和105mm3时开始测试品处理。(参见图202A-B.)黑色虚线是给药开始时的肿瘤体积。左图是剂量反应研究。右图是进展时间研究，其中将动物在研究过程期间维持服用药物。虚线是第28天当媒介物对照组终止时的肿瘤体积。
原位Hep3B2.1-7肝细胞癌异种移植物中的抗肿瘤活性。将雌性SCID小鼠用2x 106个Hep3B2.1-7肿瘤细胞/只动物原位接种。在接种后7天，基于体重将动物随机分入处理组并开始处理(研究第0天)。对卫星组进行速率评估，确认100％动物的肝脏中存在肿瘤。开始用化合物1处理，并口服给药化合物1，QD持续21天。在媒介物对照组中观察到在这种模型情况下预期的显著平均体重损失。用15mg/kg 化合物1处理的动物显示最小的体重损失，并且在30mg/kg化合物1 处理组中观察到显著的平均体重增加。在研究终止当天，取出肿瘤并称重。绘制各组的个体肿瘤重量和平均肿瘤重量±SEM(图203)。相对于媒介物对照计算抑制百分比。P值来自单向ANOVA与Dunnet 事后分析。***＝p<0.001。
化合物1在C-Met扩增的肝细胞癌患者来源的异种移植物模型 LI0612中的抗肿瘤活性。将雌性SCID小鼠在右侧腹中用肝细胞癌 PDX模型LI0612肿瘤片段(直径2-4mm)接种。在治疗开始时将小鼠随机分入处理组(n＝10只/组)。在第18天当肿瘤的大小是大约150mm3时开始测试品处理。在给药期内，肿瘤生长在媒介物对照和化合物1 处理组中进展。用化合物1施用注意到生长动力学的变化，从而导致用30mg/kg处理的显著肿瘤生长抑制(TGI)(与媒介物对照相比， p＝0.038)。参见图204。
BRAF突变型患者来源的异种移植物模型中的药代动力学/药效动力学数据。基于通过化合物1抑制的已知激酶(ERK 1/2、NLK和 SIK)，评价了化合物处理对来自异种移植小鼠的PDX146肿瘤中的 MAPK、β-连环蛋白和Hippo途径生物标志物的影响。用单剂量的1 或5mg/kg化合物1处理携带肿瘤的小鼠(肿瘤是约400mm3)。在给药后1、2、4、8和24小时收集肿瘤组织。
通过检查肿瘤DUSP4、DUSP6和Sprouty(SPRY2)mRNA水平以及pRSK和pERK蛋白质水平来评价MAPK途径的调节。在给药后2小时开始使用化合物处理显著降低DUSP6 mRNA水平，并在两个剂量水平下保持抑制24小时(图199A)。在DUSP4和SPRY2 mRNA 水平情况下观察到类似的模式(图200A-B)。通过化合物1处理以剂量和时间依赖性方式调节磷酸-RSK(pRSK)和磷酸-ERK(pERK)蛋白质水平(图201A-D)。用化合物1处理抑制在MAPK和Wnt信号传导途径两者下游的cMyc(图199B)和细胞周期蛋白D1(图200C)的水平。化合物1处理上调Wnt靶基因，Axin2。用两种剂量水平的化合物1 处理证明在给药后24小时Axin2 mRNA水平的显著增加。在整个24 小时中观察到AREG(Hippo途径中的一种下游靶基因)mRNA水平的持续抑制。另外，化合物1以时间依赖性方式抑制YAP蛋白质水平(无显著统计学意义(参见图200D)，这可能是由于SIK抑制和Hippo途径调控或由MAPK抑制导致的间接作用。
这些数据表明，在单剂量施用后，化合物1在此BRAF突变型结肠直肠PDX模型中影响三种不同的途径，MAPK、Wnt和Hippo。
其他功效模型数据：在另外的异种移植物模型中分析化合物1，所述模型包括β-连环蛋白突变体(SW48，结肠直肠)和β-连环蛋白活化模型(原位Hep3B，肝细胞)和c-met-扩增的肝细胞PDX模型 (LI0612)。在所有模型中观察到显著抗肿瘤活性。
结论：在所有三种BRAF突变型异种移植物模型中观察到显著的剂量依赖性抗肿瘤活性(参见图202A-B、图203和图204)。在整个模型中用化合物1处理观察到肿瘤消退，并且在PDX146模型中在长期处理情况下存在显著生长延迟。
患者富集和肿瘤适应症。基于化合物1的体外和体内数据，患者富集假设和肿瘤适应症概述于表49和表50中。
表49：患者富集生物标志物和肿瘤适应症。
Figure GDA0003834579080001761
表50：
Figure GDA0003834579080001762
已经引用了众多参考文献，所述参考文献的公开内容以引用的方式整体并入本文。
尽管已经参考公开的实施方案描述了本发明，但本领域技术人员将容易理解，上文详述的具体实施例和研究仅说明本发明。应理解，可在不背离本发明的精神的情况下做出各种修改。因此，本发明仅受限于以下权利要求书。

Claims (80)

1.一种晶体形式，其包含化合物1：
Figure FDA0003970016840000011
其具有包括在7.3°±0.2°2θ、8.5°±0.2°2θ、13.8°±0.2°2θ、18.2°±0.2°2θ和21.3°±0.2°2θ处的峰的X射线粉末衍射图。
2.一种晶体形式，其包含化合物1：
Figure FDA0003970016840000012
其具有包括在13.8°±0.2°2θ、18.0°±0.2°2θ、19.5°±0.2°2θ、20.0°±0.2°2θ和20.8°±0.2°2θ处的峰的X射线粉末衍射图。
3.一种晶体形式，其包含化合物1：
Figure FDA0003970016840000013
其具有包括在7.7°±0.2°2θ、8.9°±0.2°2θ、10.3°±0.2°2θ、18.3°±0.2°2θ和26.1°±0.2°2θ处的峰的X射线粉末衍射图。
4.一种晶体形式，其包含化合物1：
Figure FDA0003970016840000021
其具有包括在7.4°±0.2°2θ、8.7°±0.2°2θ、10.1°±0.2°2θ、18.1°±0.2°2θ和20.4°±0.2°2θ处的峰的X射线粉末衍射图。
5.一种晶体形式，其包含化合物1：
Figure FDA0003970016840000022
其具有包括在7.8°±0.2°2θ、14.6°±0.2°2θ、15.6°±0.2°2θ、17.5°±0.2°2θ和22.2°±0.2°2θ处的峰的X射线粉末衍射图。
6.一种晶体形式，其包含化合物1：
Figure FDA0003970016840000023
其具有包括在9.4°±0.2°2θ、11.8°±0.2°2θ、18.0°±0.2°2θ、18.3°±0.2°2θ和20.9°±0.2°2θ处的峰的X射线粉末衍射图。
7.一种晶体形式，其包含化合物1：
Figure FDA0003970016840000031
其具有包括在9.9°±0.2°2θ、15.3°±0.2°2θ、18.4°±0.2°2θ、21.2°±0.2°2θ和22.9°±0.2°2θ处的峰的X射线粉末衍射图。
8.一种晶体形式，其包含化合物1：
Figure FDA0003970016840000032
其具有包括在7.7°±0.2°2θ、8.9°±0.2°2θ、10.3°±0.2°2θ、18.2°±0.2°2θ和21.4°±0.2°2θ处的峰的X射线粉末衍射图。
9.一种晶体形式，其包含化合物1：
Figure FDA0003970016840000033
其具有包括在6.3°±0.2°2θ、15.7°±0.2°2θ、16.6°±0.2°2θ、18.1°±0.2°2θ和20.0°±0.2°2θ处的峰的X射线粉末衍射图。
10.一种晶体形式，其包含化合物1的柠檬酸盐：
Figure FDA0003970016840000041
其具有包括在4.8°±0.2°2θ、9.6°±0.2°2θ、15.4°±0.2°2θ、18.9°±0.2°2θ和19.2°±0.2°2θ处的峰的X射线粉末衍射图。
11.一种晶体形式，其包含化合物1的柠檬酸盐：
Figure FDA0003970016840000042
其具有包括在9.4°±0.2°2θ、18.8°±0.2°2θ、19.0°±0.2°2θ、22.2°±0.2°2θ和28.7°±0.2°2θ处的峰的X射线粉末衍射图。
12.一种晶体形式，其包含化合物1的盐酸盐：
Figure FDA0003970016840000043
其具有包括在5.9°±0.2°2θ、8.8°±0.2°2θ、9.4°±0.2°2θ、15.9°±0.2°2θ和20.7°±0.2°2θ处的峰的X射线粉末衍射图。
13.一种晶体形式，其包含化合物1的盐酸盐：
Figure FDA0003970016840000051
其具有包括在9.0°±0.2°2θ、9.8°±0.2°2θ、9.9°±0.2°2θ、16.7°±0.2°2θ和19.0°±0.2°2θ处的峰的X射线粉末衍射图。
14.一种晶体形式，其包含化合物1的盐酸盐：
Figure FDA0003970016840000052
其具有包括在5.5°±0.2°2θ、16.2°±0.2°2θ、19.4°±0.2°2θ、20.4°±0.2°2θ和22.5°±0.2°2θ处的峰的X射线粉末衍射图。
15.一种晶体形式，其包含化合物1的盐酸盐：
Figure FDA0003970016840000053
其具有包括在7.9°±0.2°2θ、8.1°±0.2°2θ、8.4°±0.2°2θ、15.9°±0.2°2θ和19.1°±0.2°2θ处的峰的X射线粉末衍射图。
16.一种晶体形式，其包含化合物1的盐酸盐：
Figure FDA0003970016840000061
其具有包括在7.9°±0.2°2θ、15.7°±0.2°2θ、19.9°±0.2°2θ、20.6°±0.2°2θ和27.0°±0.2°2θ处的峰的X射线粉末衍射图。
17.一种晶体形式，其包含化合物1的盐酸盐：
Figure FDA0003970016840000062
其具有包括在9.9°±0.2°2θ、12.4°±0.2°2θ、17.4°±0.2°2θ、17.9°±0.2°2θ和19.7°±0.2°2θ处的峰的X射线粉末衍射图。
18.一种晶体形式，其包含化合物1的盐酸盐：
Figure FDA0003970016840000063
其具有包括在8.1°±0.2°2θ、8.3°±0.2°2θ、16.2°±0.2°2θ、19.1°±0.2°2θ和19.7°±0.2°2θ处的峰的X射线粉末衍射图。
19.一种晶体形式，其包含化合物1的盐酸盐：
Figure FDA0003970016840000071
其具有包括在9.8°±0.2°2θ、17.4°±0.2°2θ、18.0°±0.2°2θ、18.7°±0.2°2θ和26.2°±0.2°2θ处的峰的X射线粉末衍射图。
20.一种非晶形固体，其包含化合物1：
Figure FDA0003970016840000072
21.一种药物组合物，其包含如权利要求1-19中任一项的所述晶体形式或权利要求20所述的非晶形固体，以及药物载体。
22.如权利要求1-19中任一项的晶体形式或权利要求20所述的非晶形固体或如权利要求21所述的药物组合物在制备用于治疗或预防癌症的药物中的用途，其中所述癌症是实体瘤或血液癌症。
23.如权利要求22所述的用途，其中所述实体瘤是黑色素瘤、结肠直肠癌、胃癌、头颈癌、甲状腺癌、膀胱癌、CNS癌、
肺癌、胰腺癌或软组织癌。
24.如权利要求22所述的用途，其中所述癌症是乳腺癌、胃肠癌、内分泌癌、女性泌尿生殖***癌症、造血***癌症、
肾癌、肝癌或***癌。
25.如权利要求22所述的用途，其中所述癌症是神经胶质瘤、成神经细胞瘤、结肠癌、肾上腺癌、子宫癌、***、卵巢透明细胞癌或外阴癌、白血病、骨髓瘤、NSCLC、SCLC、肉瘤或骨肉瘤。
26.如权利要求1-19中任一项所述的晶体形式或权利要求20所述非晶形固体或如权利要求21所述的药物组合物在制备用于治疗或预防肝细胞癌(HCC)的药物中的用途。
27.如权利要求1-19中任一项的晶体形式或权利要求20所述的非晶形固体或如权利要求21所述的药物组合物在制备用于治疗或预防表达PD-L1的癌症的药物中的用途。
28.如权利要求27所述的用途，其中所述癌症是黑色素瘤、肺癌、肾细胞癌(RCC)或HCC。
29.如权利要求1-19中任一项的晶体形式或权利要求20所述的非晶形固体或如权利要求21所述的药物组合物在制备用于治疗或预防以BRAF突变为特征的癌症的药物中的用途。
30.如权利要求29所述的用途，其中所述癌症是CRC、甲状腺癌、黑色素瘤或肺癌。
31.如权利要求29所述的用途，其中所述BRAF突变是BRAFV660E。
32.如权利要求1-19中任一项的晶体形式或权利要求20所述的非晶形固体或如权利要求21所述的药物组合物在制备用于治疗或预防以NRAS突变为特征的癌症的药物中的用途。
33.如权利要求32所述的用途，其中所述癌症是黑色素瘤。
34.如权利要求1-19中任一项的晶体形式或权利要求20所述的非晶形固体或如权利要求21所述的药物组合物在制备用于治疗或预防以KRAS突变为特征的癌症的药物中的用途。
35.如权利要求34所述的用途，其中所述癌症是CRC、胰腺癌或肺癌。
36.如权利要求1-19中任一项的晶体形式或权利要求20所述的非晶形固体或如权利要求21所述的药物组合物在制备用于治疗或预防以β-连环蛋白突变为特征的癌症的药物中的用途。
37.如权利要求36所述的用途，其中所述β-连环蛋白突变是β-连环蛋白S33Y、G34E、S45del或S33C中的一种或多种。
38.如权利要求36或37所述的用途，其中所述癌症的特征在于增加的YAP表达。
39.如权利要求36所述的用途，其中该癌症的特征还包括EGFR突变或增加的EGFR活性。
40.如权利要求37所述的用途，其还包括EGFR突变或增加的EGFR活性。
41.如权利要求38所述的用途，其还包括EGFR突变或增加的EGFR活性。
42.如权利要求39所述的用途，其中所述EGFR突变是EGFRE282K、G719S、P753S或V1011M中的一种或多种。
43.如权利要求36所述的用途，其中该癌症的特征还包括BRAF突变。
44.如权利要求37所述的用途，其还包括BRAF突变。
45.如权利要求38所述的用途，其还包括BRAF突变。
46.如权利要求39所述的用途，其还包括BRAF突变。
47.如权利要求40所述的用途，其还包括BRAF突变。
48.如权利要求41所述的用途，其还包括BRAF突变。
49.如权利要求42所述的用途，其还包括BRAF突变。
50.如权利要求43-49任一项所述的用途，其中所述BRAF突变包括BRAF V660E、BRAFT119S或BRAF G596R突变。
51.如权利要求50所述的用途，其中所述BRAF突变包括BRAF V660E突变。
52.如权利要求36所述的用途，其中所述癌症是黑色素瘤，其特征在于BRAF突变和/或NRAS突变。
53.如权利要求36所述的用途，其中所述癌症是CRC、胃癌、HCC或肉瘤。
54.如权利要求1-19中任一项的晶体形式或权利要求20所述的非晶形固体或如权利要求21所述的药物组合物在制备用于治疗或预防以活化的β-连环蛋白途径为特征的癌症的药物中的用途。
55.如权利要求54所述的用途，其中所述癌症是CRC、胃癌、HCC或肉瘤。
56.如权利要求1-19中任一项的晶体形式或权利要求20所述的非晶形固体或如权利要求21所述的药物组合物在制备用于治疗或预防肝细胞癌HCC的药物中的用途，其中所述HCC的特征在于β-连环蛋白突变和/或增加的YAP表达。
57.如权利要求1-19中任一项的晶体形式或权利要求20所述的非晶形固体或如权利要求21所述的药物组合物在制备用于治疗或预防胃癌的药物中的用途。
58.如权利要求57所述的用途，其中所述胃癌的特征在于β-连环蛋白突变。
59.如权利要求57所述的用途，其中所述胃癌的特征在于活化的β-连环蛋白途径。
60.如权利要求1-19中任一项的晶体形式或权利要求20所述的非晶形固体或如权利要求21所述的药物组合物在制备用于治疗或预防黑色素瘤的药物中的用途。
61.如权利要求60所述的用途，其中所述黑色素瘤的特征在于BRAF突变和/或NRAS突变。
62.如权利要求1-19中任一项的晶体形式或权利要求20所述的非晶形固体或如权利要求21所述的药物组合物在制备用于调节患有癌症的对象的生物标志物的水平的药物中的用途。
63.如权利要求62所述的用途，其中在所述对象的生物样品中评估所述生物标志物水平的调节，所述对象的生物样品选自循环血液、皮肤活检物、肿瘤活检物、循环肿瘤细胞、毛发和尿液组成的组。
64.如权利要求62所述的用途，其中所述生物标志物是ERK、RSK1、DUSP4、DUSP5、DUSP6、BMF、EFNA1、EGR1、ETV5、FOS、FOSL1、GJA1、IL-8、cMyc、细胞周期蛋白D1、YAP、SPRY2、SPRY4、Axin2、CTGF、AREG、CYR61、CXCL1、HAS2、HES1、MAFF、CITED2、ELF3或PD-L1。
65.如权利要求62所述的用途，其中通过测量ERK和RSK1中的一种或多种的磷酸化水平的降低来测量所述调节。
66.如权利要求62所述的用途，其中通过测量DUSP4、DUSP5、DUSP6、EGR1、ETV5、FOS、FOSL1、IL-8、cMyc、细胞周期蛋白D1、YAP、SPRY2、SPRY4、Axin2、CTGF、AREG、CYR61、CXCL1、HAS2、HES1以及MAFF中的一种或多种的mRNA或蛋白质表达水平的降低来测量所述调节。
67.如权利要求62所述的用途，其中通过测量BMF、EFNA1、CITED2和ELF3中的一种或多种的mRNA或蛋白质表达水平的增加来测量所述调节。
68.如权利要求22所述的用途，其中所述药物包含至少一种药学上可接受的赋形剂。
69.如权利要求26所述的用途，其中所述药物包含至少一种药学上可接受的赋形剂。
70.如权利要求27所述的用途，其中所述药物包含至少一种药学上可接受的赋形剂。
71.如权利要求29所述的用途，其中所述药物包含至少一种药学上可接受的赋形剂。
72.如权利要求32所述的用途，其中所述药物包含至少一种药学上可接受的赋形剂。
73.如权利要求34所述的用途，其中所述药物包含至少一种药学上可接受的赋形剂。
74.如权利要求35所述的用途，其中所述药物包含至少一种药学上可接受的赋形剂。
75.如权利要求54所述的用途，其中所述药物包含至少一种药学上可接受的赋形剂。
76.如权利要求56所述的用途，其中所述药物包含至少一种药学上可接受的赋形剂。
77.如权利要求57所述的用途，其中所述药物包含至少一种药学上可接受的赋形剂。
78.如权利要求60所述的用途，其中所述药物包含至少一种药学上可接受的赋形剂。
79.如权利要求62所述的用途，其中所述药物包含至少一种药学上可接受的赋形剂。
80.如权利要求66所述的用途，其中所述药物包含至少一种药学上可接受的赋形剂。
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