CN107801397B

CN107801397B - Lrrk2抑制剂及其制备和使用方法

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Publication number: CN107801397B
Application number: CN201680016944.5A
Authority: CN
Inventors: N.S.格雷; J.哈彻尔; 崔焕根
Original assignee: Dana Farber Cancer Institute Inc
Current assignee: Dana Farber Cancer Institute Inc
Priority date: 2015-02-13
Filing date: 2016-02-12
Publication date: 2021-07-30
Anticipated expiration: 2036-02-12
Also published as: HK1246286A1; US20210115055A1; AU2016219102B2; CA2976109A1; US20180244676A1; WO2016130920A2; AU2016219102A1; CN113563342A; WO2016130920A3; US10913744B2; EP3778605A3; EP3256475A2; CN107801397A; EP3778605A2; EP3778604A1; EP3256475A4

Abstract

提供了具有式(I)、(II)、(III)的化合物。本申请公开的化合物可用于治疗神经退行性疾病，诸如帕金森氏病。

Description

LRRK2抑制剂及其制备和使用方法

相关申请

本申请主张2015年2月13日提交的美国临时申请号62/116,038的权益和优先权，所述美国临时申请的全部内容以其整体通过引用并入本文。

政府支持

本文所述的工作得到国立卫生研究院NIH拨款号R01CA135257的支持。美国政府对请求保护的公开内容具有某些权利。

公开领域

本公开总体涉及神经退行性疾病的分子靶向治疗。更具体地，本公开涉及可用作治疗剂的化合物家族。

背景

神经退行性疾病是一类病症，其中存在神经元的逐渐和进行性死亡。尽管神经退行性疾病通常经历可以延长数年的进行性过程，但疾病本身会自发发展，并且与外部因素无关。退行性神经***疾病的家族史是这类疾病的重要特征，并且一般疾病组通常被称为异源退行性的，然而，不以任何基本方式与遗传性病症不同的许多神经退行性疾病作为给定家族中的孤立情况零星发生。

神经退行性疾病包括但不限于帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、精神***症、进行性肌阵挛性癫痫(Unver-Richt-Lundberg Lafora疾病)、Hallervorden-Spatz疾病、色素性视网膜炎、着色性干皮病和黑色素相关疾病。

帕金森氏病(PD)，在阿尔茨海默氏病之后，是世界上第二大常见的神经退行性疾病。其影响超过一百万美国人，并且每年新诊断超过60,000个患者。PD通常通过躯体症状(包括震颤、僵硬、运动迟缓和姿势问题)进行分类。在疾病的早期阶段，可以存在姿势、运动、面部表情或言语的仅轻微的干扰。症状最初可以表现为不对称，但随着疾病进展，症状变得双侧并进行性衰弱。PD患者通常还经历痴呆、共济失调、言语障碍和情绪障碍，并且具有PD的患者的质量和预期寿命大大降低。

尽管已经做出巨大的努力来发现PD的有效治疗或治愈，但大多数PD患者从目前的治疗方案(其可以包括药物、外科手术和植入物)经历很少缓解。由标准治疗提供的许多益处相对不重要，并且经常伴有明显的毒性。目前最常见的帕金森氏病的治疗方法是口服给药L-DOPA，3-(3，4-二羟基苯基)-L-丙氨酸：

然而，因为L-DOPA是肾上腺素和黑色素的前体，所以存在与其使用相关的某些禁忌症。在患有心血管或肺部疾病、哮喘或肾、肝或内分泌疾病的患者中，L-DOPA可能恶化恶性黑色素瘤或其它皮肤病变，并且可以引起不良副作用。

仍然需要退行性神经疾病，更具体地，帕金森氏病的新治疗。

发明概述

本公开总体涉及LRRK2抑制化合物及其制备和使用方法的领域。这些化合物可用于治疗帕金森氏病。

本公开提供具有式I、II或III的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中上述式中的每个变量在以下详细描述中定义和例举。

在一个实施方案中，本公开的化合物是式Ia、IIa、IIIa、Ib1、Ib2、Ic1、Ic2、IIa1、IIa2、IIIa1或IIIa2的化合物：

在一个实施方案中，所述化合物是

根据本公开的一个方面，提供药物组合物，所述药物组合物包含本公开的化合物或其药学上可接受的盐、酯、互变异构体或前药和药学上可接受的载体。

在一个实施方案中，药物组合物的化合物是

或其药学上可接受的盐、酯、互变异构体或前药。

本公开的另一个方面提供治疗或预防受试者中涉及LRRK2的疾病或病症(例如，神经退行性诸如PD)的方法，其包括向受试者给药有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、酯、互变异构体或前药。

所述方法还可以包括口服、胃肠外或静脉内给药所述化合物或其药学上可接受的盐、酯、互变异构体或前药。

在一个实施方案中，本公开的方法中使用的化合物是

或其药学上可接受的盐、酯、互变异构体或前药。

根据实施方案，本公开的化合物可以以约1mg/Kg至约100mg/Kg的剂量给药至受试者。在一个实施方案中，所述化合物以约30mg/Kg的剂量给药至受试者。

本公开的另一个方面提供本公开的化合物或其药学上可接受的盐、酯、互变异构体或前药在治疗或预防涉及LRRK2的疾病或病症(例如，神经退行性诸如PD)中的用途。

本公开的另一个方面提供本公开的化合物或其药学上可接受的盐、酯、互变异构体或前药在制备用于治疗或预防涉及LRRK2的疾病或病症(例如，神经退行性诸如PD)的药物中的用途。

除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。在说明书中，单数形式也包括复数形式，除非上下文另有明确规定。尽管与本文所述的方法和材料类似或等效的方法和材料也可以用于本公开的实施和测试中，但下文描述合适的方法和材料。本文提及的所有出版物、专利申请、专利和其它参考文献通过引用并入。本文引用的参考文献不被承认是所请求保护的公开内容的现有技术。在冲突的情况下，将以本说明书，包括定义，为准。此外，材料、方法和实例仅是说明性的，并不意欲进行限制。

本公开的其它特征和优点从以下详述、实例和权利要求书将是显而易见的。

附图简述

图1是与LRRK2复合的化合物18的分子模型。

图2A-2D显示化合物18对LRRK2的抑制。稳定表达图2A：野生型GFP-LRRK2、图2B：GFP-LRRK2[G2019S]、图2C：GFP-LRRK2[G2019S+A2016T]、和图2D：GFP-LRRK2[A2016T]的HEK293细胞用二甲亚砜(DMSO)或渐增浓度的化合物18处理90分钟(1μM的LRRK2-IN-1用作对照)。细胞裂解物进行免疫印迹以检测在Ser910和Ser935处磷酸化的LRRK2和总LRRK2。

图3A-3C显示化合物18对内源表达的LRRK2的抑制。图3A：来自对照受试者和野生型GFP-LRRK2和LRRK2[G2019S]突变纯合的帕金森氏病患者的EBV永生化人类淋巴母细胞的内源LRRK2。用DMSO或所示浓度的18(或LRRK2-IN-1)处理细胞90分钟后，细胞裂解物用所示抗体进行免疫印迹分析用于western分析。一式两份进行免疫印迹，并且结果代表至少两次独立实验。图3B：如图3A中，除了使用小鼠Swiss 3T3细胞。图3C：化合物18的酶活性。GST-LRRK2(1326-2517)、GST-LRRK2[G2019S](1326-2517)、GST-LRRK2[A2016T](1326-2517)和GST-LRRK2[G2019S+A2016T](1326-2517)使用20μMNictide在100μM ATP存在的情况下进行测定。结果是一式两份实验的平均值。

图4显示化合物18和GNE7915的药效动力学分析。以所示剂量经口服管饲给药后脑、脾和肾的化合物18和GNE7915的药效动力学研究。收集组织，并通过SDS-PAGE分离内源LRRK2，并用针对Ser935和总LRRK2的磷酸特异性抗体印迹。

图5显示化合物18的KinomeScan分析。

公开详述

帕金森氏病(PD)在临床上通过运动迟缓、静息震颤、肌肉僵硬和姿势不稳定性的关联来定义，并且在病理学上通过黑质致密部(SNPc)和其它脑部位中的多巴胺能神经元的变性(其中在存活的神经元中形成含有泛素的包涵体(Lewy体))来定义。本公开提供可用于治疗PD的新型化合物家族。

尽管PD的原因尚不清楚，但PD阳性家族史发现于约15％至约25％的病例中，并且几种染色体基因座(称为PARK)基因和突变已通过连锁作图与家族性帕金森氏病相关。连锁作图基于遗传标记物和表型在家族中经几代的共同继承来定位突变基因。通过追踪具有主要遗传性帕金森氏病的家庭，可以将PARK基因座作图。最近，将新型PARK基因座(PARK8)作图至染色体12q12。随后致病性氨基酸取代鉴定于新型基因(富含亮氨酸的重复激酶2(LRRK2))中。LRRK2中的活化突变存在于帕金森氏病(PD)患者的子集中，并且可能代表有吸引力的治疗靶标。例如，LRRK2的G2019S错义突变增加激酶活性，其可以导致神经元死亡信号传导途径的活化，表明小分子LRRK2激酶抑制剂能够充当治疗PD的新类别的治疗剂。LRRK2的激酶依赖性过表达导致细胞毒性和神经元死亡。LRRK2至少在Ser910和Ser935位点处被磷酸化，这是关键的LRRK2激酶活性。本公开提供具有有效的LRRK2抑制剂活性和有利的药代动力学特性的新型化合物。本公开的化合物可以有利地降低或抑制在Ser910和Ser935处的LRRK2磷酸化。

此外，本公开提供合成上述化合物的方法。合成后，有效量的一种或多种化合物可以与药学上可接受的载体一起配制，用于给药至受试者，用作帕金森氏病的治疗。所述化合物或制剂可以例如经由口服或肠胃外途径给药，以向受试者提供有效量的化合物。

1.定义

如本文所用的术语“被取代的”意指在指定原子上的任何一个或多个氢被来自指定群组的选择所代替，其条件是不超过所述指定原子的正常价态，并且取代产生稳定化合物。当取代基是酮基(即，＝O)时，则原子上的2个氢被代替。酮基取代基不存在于芳族部分(例如，苯基、吡啶基等)上。如本文所用的环双键是在两个相邻的环原子之间形成的双键(例如，C＝C、C＝N或N＝N)。

本公开意欲包括在本化合物中存在的原子的所有同位素。同位素包括原子数相同、但质量数不同的那些原子。通过一般实例且无限制的方式，氢的同位素包括氚和氘，并且碳的同位素包括C-13和C-14。

本文描述的化合物可具有不对称中心。可以光学活性或外消旋形式分离含有不对称取代原子的本公开的化合物。本领域众所周知如何制备光学活性形式，诸如通过外消旋形式的拆分或通过由光学活性起始材料合成。许多烯烃、C＝N双键等的几何异构体也可存在于本文描述的化合物中，且本公开中考虑所有此类稳定的异构体。描述了本公开的化合物的顺式和反式几何异构体，并且可作为异构体的混合物或作为分开的异构形式进行分离。意欲结构的所有手性、非对映异构、外消旋和几何异构形式，除非具体指出特定的立体化学或异构形式。用于制备本公开的化合物的所有方法，以及其中制备的中间体被认为是本公开的一部分。所示或所描述的化合物的所有互变异构体也被认为是本公开的一部分。

当任何变量(例如R¹)在化合物的任何成分或式中出现多于一次时，其在各次出现时的定义与其在每次其它出现时的定义无关。因此，例如，如果显示基团被0-2个R¹部分取代，则基团可以任选地被最多达两个R¹部分取代，且R¹在各次出现时独立地选自R¹的定义。此外，可允许取代基和/或变量的组合，但仅当此类组合产生稳定的化合物时。

当显示与取代基的键穿过连接环中的两个原子的键时，则此类取代基可与环中的任何原子键合。当列举取代基而没有表明经由其此取代基键合至给定式的化合物的剩余部分的原子时，则此取代基可经由此取代基中的任何原子进行键合。可允许取代基和/或变量的组合，但仅当此类组合产生稳定的化合物时。

含有氮的本公开的化合物可以通过用氧化剂(例如，MCPBA和/或过氧化氢)处理而转化成N-氧化物以得到本公开的其它化合物。因此，所有所示和所请求保护的含氮化合物当被价态和结构允许时被视为包括如所示的化合物和其N-氧化物衍生物(其可以指定为N→O或N⁺-O^-)。此外，在其它情况下，本公开的化合物中的氮可以被转化成N-羟基或N-烷氧基化合物。例如，可以通过由氧化剂诸如MCPBA将母体胺氧化来制备N-羟基化合物。所有所示和所请求保护的含氮化合物当被价态和结构允许时也被视为涵盖所示的化合物和其N-羟基(即N-OH)和N-烷氧基(即N-OR，其中R是被取代或未被取代的C_1-6烷基、烯基、炔基、C_3-14碳环或3-14元杂环)衍生物。

当原子或化学部分后面是下标的数字范围(例如，C_1-6)时，本公开意在涵盖该范围内的每个数字以及所有中间范围。例如，“C_1-6烷基”意在包括具有1、2、3、4、5、6、1-6、1-5、1-4、1-3、1-2、2-6、2-5、2-4、2-3、3-6、3-5、3-4、4-6、4-5和5-6个碳的烷基。

如本文所用，“烷基”意欲包括具有指定数目的碳原子的支链和直链饱和脂肪烃基两者。例如C_1-6烷基意欲包括C₁、C₂、C₃、C₄、C₅和C₆烷基。烷基的实例包括，但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、仲戊基和正己基。

如本文所用，“烯基”意欲包括具有沿所述链的任何稳定点处出现的一个或多个碳-碳双键的直链或支链构型的烃链。例如，C_2-6烯基意欲包括C₂、C₃、C₄、C₅和C₆烯基。烯基的实例包括但不限于乙烯基和丙烯基。

如本文所用的“炔基”意欲包括具有沿所述链的任何稳定点处出现的一个或多个碳-碳三键的直链或支链构型的烃链。例如，C_2-6炔基意欲包括C₂、C₃、C₄、C₅和C₆炔基。炔基的实例包括但不限于乙炔基和丙炔基。

“烷氧基”是指在链中含有1-12个碳原子且含有末端“O”的直链或支链饱和烃，例如-O(烷基)。烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、叔丁氧基或戊氧基。

如本文所用，“卤素(halo)”或“卤素(halogen)”是指氟、氯、溴和碘。“抗衡离子”用于代表小的带负电的物质，诸如氯离子、溴离子、氢氧根离子、乙酸根离子和硫酸根离子。

如本文所用，“碳环(carbocycle)”或“碳环(carbocyclic ring)”意指具有指定数目的碳的任何稳定的单环、双环或三环，其中的任何一个可以是饱和的、不饱和的或芳族的。例如，C_3-14碳环意指具有3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14个碳原子的单环、双环或三环。碳环的实例包括，但不限于，环丙基、环丁基、环丁烯基、环戊基、环戊烯基、环己基、环庚烯基、环庚基、环庚烯基、金刚烷基、环辛基、环辛烯基、环辛二烯基、芴基、苯基、萘基、茚满基、金刚烷基和四氢萘基。在碳环的定义中还包括桥环，包括但不限于例如[3.3.0]二环辛烷、[4.3.0]二环壬烷、[4.4.0]二环癸烷和[2.2.2]二环辛烷。当一个或多个碳原子连接两个非相邻碳原子时，桥环出现。优选的桥包括但不限于一个或两个碳原子。注意，桥总是将单环转化为三环。当环被桥连时，对于该环所述的取代基也可存在于桥上。还包括稠环(例如，萘基和四氢萘基)和螺环。

如本文所用，术语“杂环(heterocycle)”或“杂环的(heterocyclic)”意指任何稳定的单环、双环或三环，其为饱和的、不饱和的或芳香族的，且包含碳原子和一个或多个环杂原子，例如1或1-2或1-3或1-4或1-5或1-6个独立地选自氮、氧和硫的杂原子。双环或三环杂环可以具有位于一个环中的一个或多个杂原子，或者所述杂原子可以位于多于一个环中。氮和硫杂原子可任选地被氧化(即N→O和S(O)_p，其中p＝1或2)。当环中包括氮原子时，其为N或NH，这取决于其是否附着至环中的双键(即，如果需要维持氮原子的三价，则存在氢)。氮原子可以是取代的或非取代的(即N或NR，其中R是H或另一取代基，如果定义的话)。杂环可在产生稳定结构的任何杂原子或碳原子处连接至其侧链基团。如果所得化合物是稳定的，本文描述的杂环可在碳原子上或在氮原子上被取代。杂环中的氮可任选地被季铵化。优选当杂环中S和O原子的总数超过1时，则这些杂原子不彼此邻接。杂环的定义中也包括桥环。当一个或多个原子(即C、O、N或S)连接两个非相邻的碳原子或氮原子时，桥环出现。优选的桥包括，但不限于，一个碳原子、两个碳原子、一个氮原子、两个氮原子和碳-氮基团。注意，桥总是将单环转化为三环。当环被桥连时，对于该环所述的取代基也可存在于桥上。还包括螺环和稠环。

如本文所用，术语“芳族杂环”(“aromatic heterocycle”)或“杂芳基”(“heteroaryl”)意指稳定的5、6或7元单环或双环芳族杂环或7、8、9、10、11或12元双环芳香杂环，其由碳原子和一个或多个杂原子，例如1或1-2或1-3或1-4或1-5或1-6个独立地选自氮、氧和硫的杂原子组成。在双环芳族杂环的情况下，两个环中的仅一个需要是芳族的(例如2，3-二氢吲哚)，尽管两者均可为芳族的(例如，喹啉)。第二环也可如上对于杂环所定义被稠合或桥连。氮原子可以被取代或未被取代(即，N或NR，其中R是H或另一个取代基，如所定义)。氮和硫杂原子可任选地被氧化(即，N→O和S(O)_p，其中p＝1或2)。应当注意的是，芳族杂环中的S和O原子的总数不超过1。

杂环的实例包括但不限于，吖啶基、吖辛因基(azocinyl)、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并硫代呋喃基(benzothiofuranyl)、苯并噻吩基(benzothiophenyl)、苯并噁唑基、苯并噁唑啉基、苯并噻唑基、苯并***基、苯并四唑基、苯并异噁唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、4aH-咔唑基、咔啉基、色满基、色烯基、噌啉基、十氢喹啉基、2H，6H-1，5，2-二噻嗪基、二氢呋喃并[2，3-b]四氢呋喃、呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、indolenyl、二氢吲哚基、中氮茚基、吲哚基、3H-吲哚基、isatinoyl、异苯并呋喃基、异色满基、异吲唑基、异二氢吲哚基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异噁唑基、亚甲基二氧基苯基、吗啉基、萘啶基、八氢异喹啉基、噁二唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，4-噁二唑基、1，2，5-噁二唑基、1，3，4-噁二唑基、噁唑烷基、噁唑基、羟吲哚基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁噻基(phenoxathinyl)、吩噁嗪基、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、胡椒基(piperonyl)、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并噁唑、吡啶并咪唑、吡啶并噻唑、吡啶基(pyridinyl)、吡啶基(pyridyl)、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹噁啉基、奎宁环基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、四唑基、6H-1，2，5-噻二嗪基、1，2，3-噻二唑基、1，2，4-噻二唑基、1，2，5-噻二唑基、1，3，4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、噻吩基、噻吩并噻唑基、噻吩并噁唑基、噻吩并咪唑基、噻吩基、三嗪基、1，2，3-***基、1，2，4-***基、1，2，5-***基、1，3，4-***基和呫吨基。

如本文所用，短语“药学上可接受的”是指在合理的医学判断的范围内适合用于与人类和动物的组织接触而没有过度毒性、刺激、过敏反应或其它问题或并发症，与合理的效益/风险比相当的那些化合物、材料、组合物、载体和/或剂型。

如本文所用，“药学上可接受的盐”是指所公开的化合物的衍生物，其中母体化合物通过制备其酸式或碱式盐来修饰。药学上可接受的盐的实例包括但不限于，碱性残基诸如胺的无机或有机酸盐，酸性残基诸如羧酸的碱性或有机盐等。药学上可接受的盐包括例如自无毒无机或有机酸形成的母体化合物的常规的无毒盐或季铵盐。例如，此类常规的无毒盐包括，但不限于，由无机酸和有机酸衍生的那些，所述无机酸和有机酸选自2-乙酰氧基苯甲酸、2-羟基乙磺酸、乙酸、抗坏血酸、苯磺酸、苯甲酸、重碳酸、碳酸、柠檬酸、依地酸、乙二磺酸、乙磺酸、富马酸、葡庚糖酸、葡萄糖酸、谷氨酸、乙醇酸、乙醇对氨苯基胂酸(glycollyarsanilic)、己基间苯二酚酸(hexylresorcinic)、hydrabamic、氢溴酸、氢氯酸、氢碘酸、羟基马来酸、羟基萘甲酸、羟乙磺酸、乳酸、乳糖酸、月桂基磺酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、萘磺酸(napsylic)、硝酸、草酸、扑酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、聚半乳糖醛酸、丙酸、水杨酸、硬脂酸、碱式乙酸、琥珀酸、氨基磺酸、对氨基苯磺酸、硫酸、单宁酸、酒石酸和甲苯磺酸。

本公开的药学上可接受的盐可通过常规化学方法自含有碱性或酸性部分的母体化合物合成。通常，所述盐可通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计量量的适当的碱或酸在水中或在有机溶剂中或在这两者的混合物中反应来制备；通常，优选非水介质如***、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。合适的盐的列表见于Remington′s PharmaceuticalSciences，第18版(Mack Publishing Company，1990)。

因为已知前药增强许多期望的药物质量(例如，溶解度、生物利用度、制造等)，所以可以前药形式来递送本公开的化合物。因此，本公开意欲覆盖目前所请求保护的化合物的前药、递送其的方法和含有其的组合物。“前药”意欲包括任何共价键合的载体，当此类前药被给药至受试者时，所述载体在体内释放本公开的活性母体药物。通过以使得以常规操作或在体内使修饰裂解成母体化合物的方式修饰存在于化合物中的官能团来制备本公开的前药。前药包括本公开的化合物，其中羟基、氨基或巯基与任何基团键合，当将本公开的前药给药至受试者时，所述前药被裂解，以分别形成游离羟基、游离氨基或游离巯基。前药的实例包括，但不限于本公开的化合物中的醇和胺官能团的乙酸酯、甲酸酯和苯甲酸酯衍生物。

“稳定的化合物”和“稳定的结构”意欲表示这样的化合物：其足够稳健以经受住从反应混合物被分离至有用程度的纯度并配制成有效的治疗剂。

如本文所用，术语“治疗(treat)”、“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”是指在目前患有疾病的患者中以任何明显的程度降低疾病的症状、标志物和/或任何负面影响。治疗是指减轻或减少疾病和/或其伴随症状的方法。

如本文所用，术语“预防(prevent)”、“预防(prevention)”或“预防(preventing)”是指部分或完全预防或延迟疾病的一种或多种症状或特征的发作的任何方法。预防可以给予没有表现出疾病体征的受试者。

如本文所用，术语“有效量”是指本公开的化合物或化合物的组合当单独或作为抗增殖和/或抗感染剂组合给药时有效的量。化合物的组合优选是协同组合。当化合物组合给药时的效果大于化合物作为单一药剂单独给药时的累加作用时，发生协同作用。通常，在所述化合物的次优化剂量下最明显地表明协同作用。协同作用可以是在组合与单个组分相比，较低的细胞毒性、增加的抗增殖和/或抗感染作用或一些其它有益效果。

如本文所用的术语“受试者”是指哺乳动物。因此，受试者是指例如狗、猫、马、母牛、猪、豚鼠等。优选地，受试者是人。当受试者是人时，受试者在本文中可以称为患者。

除非另外指明，本文使用的所有百分比和比率以重量计。

在说明书通篇中，当组合物被描述为具有、包括或包含特定组分时，考虑组合物也基本上由所述组分组成，或由所述组分组成。类似地，当方法被描述为具有、包括或包含特定方法步骤，所述方法也基本上由所述加工步骤组成、或由所述加工步骤组成。另外，应当理解，步骤的次序或用于实施某些操作的次序是不重要的，只要本公开保持可操作。此外，可同时进行两个或更多个步骤或操作。

2.本公开的化合物

在一个方面，本公开提供式I、II或III的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

R_X是NR_AR_B、

或选自以下的包含一个或两个6元杂环的环体系：

其中每个环体系任选地被1、2、3、4、5或6个R₅₁取代；

每个R₅₁独立地是未取代或取代的C₁-C₆烷基、C(O)NR₆₁R₆₂、C(O)OR₆₃或NR₆₄R₆₅；

R₅₂是H或R₅₁；

R₅₃是H、OH或R₅₁；

R₆₁、R₆₂和R₆₃各自独立地是H、未取代或取代的C₁-C₆烷基或未取代或取代的C₂-C₆烯基；

R₆₄和R₆₅各自独立地是H或未取代或取代的C₁-C₆烷基；

是选自以下的包含一个或两个6元杂环的环体系：

每个R₄独立地是未取代或取代的C₁-C₆烷基；

n是0、1、2、3、4、5或6；

R_A和R_B各自独立地是未取代或取代的C₁-C₆烷基或C(O)R7；

R₇是未取代或取代的C₁-C₆烷基、未取代或取代的C₂-C₆烯基或未取代或取代的C₂-C₆炔基；

X₁、X₂和X₃各自独立地是N、NR₃₁或CR₃₂，

其中X₁、X₂和X₃中的至少一个是N或NR₃₁；

每个R₃₁独立地是H或未取代或取代的C₁-C₆烷基；

每个R₃₂独立地是H、未取代或取代的C₁-C₆烷基、卤素或NR₈₁R₈₂；

R₈₁是H或未取代或取代的C₁-C₆烷基；

R₈₂是C(O)R₈₃；

R₈₃是未取代或取代的C₁-C₆烷基、未取代或取代的C₂-C₆烯基或未取代或取代的C₂-C₆炔基；

R_N是H或未取代或取代的C₁-C₆烷基；

每个R₁独立地是未取代或取代的C₁-C₆烷基、未取代或取代的C₁-C₆烷氧基或卤素；

m是0、1、2或3；

R₂是H、未取代或取代的C₁-C₆烷基、未取代或取代的C₁-C₆烷氧基、卤素、NR_N1R_N2或OR_N3；

R_N1和R_N2各自独立地是H、未取代或取代的C₁-C₆烷基、未取代或取代的C₂-C₆烯基、(CH₂)_1-3-O-C₁-C₆烷基或(CH₂)_0-3-R₉₁，或R_N1和R_N2与它们所键合的氮原子一起形成任选地包含1或2个选自N和O的额外杂原子的5或6元杂环；

R_N3是(CH₂)_0-3-R₉₂；

R₉₁是未取代或取代的C₃-C₈环烷基、未取代或取代的包含一个5或6元环和1-3个选自N、O和S的杂原子的杂环或被S(O)₂R₁₀、NHC(O)R₁₁、C(O)R₁₂或C(O)NHR₁₃取代的苯基；

R₉₂是未取代或取代的C₃-C₈环烷基、未取代或取代的包含一个5或6元环和1-3个选自N、O和S的杂原子的杂环或被NO₂，S(O)₂R₁₀、NHC(O)R₁₁、C(O)R₁₂或C(O)NHR₁₃取代的苯基；且

R₁₀、R₁₁、R₁₂和R₁₃各自独立地是未取代或取代的C₁-C₆烷基、未取代或取代的C₂-C₆烯基、NH-C₁-C₆烷基、未取代或取代的包含一个5或6元环和1-3个选自N、O和S的杂原子的杂环、未取代或取代的苯基或未取代或取代的包含一个5或6元环和1-3个选自N、O和S的杂原子的杂芳基。

在一个实施方案中，

是

在一个其它实施方案中，

是

在一个实施方案中，

是

在一个其它实施方案中，

是

在一个实施方案中，

是

在一个其它实施方案中，

是

在一个实施方案中，每个R₃₁是H。在另一个实施方案中，至少一个R₃₁是C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代)。在一个其它实施方案中，至少一个R₃₁是被一个或多个卤素(例如氟、氯、溴或碘)取代的C₁-C₆烷基。

在一个实施方案中，每个R₃₂是H。在另一个实施方案中，至少一个R₃₂是C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代)。在一个其它实施方案中，至少一个R₃₂是被一个或多个卤素(例如氟、氯、溴或碘)取代的C₁-C₆烷基。在另一个实施方案中，至少一个R₃₂是卤素(例如氟、氯、溴或碘)。在一个其它实施方案中，至少一个R₃₂是氟或氯。在一个其它实施方案中，至少一个R₃₂是氯。在另一个实施方案中，至少一个R₃₂是NR₈₁R₈₂。

在一个实施方案中，每个R₃₁是H，且每个R₃₂是H。在另一个实施方案中，每个R₃₁是H，且至少一个R₃₂是卤素(例如氟、氯、溴或碘)。在一个其它实施方案中，每个R₃₁是H，且至少一个R₃₂是氟或氯。在另一个实施方案中，每个R₃₁是H，且至少一个R₃₂是NR₈₁R₈₂。

在一个实施方案中，R₈₁是H，且R₈₂是C(O)R₈₃.在另一个实施方案中，R₈₁是C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代)，且R₈₂是C(O)R₈₃。

在一个实施方案中，R₈₃是C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代)。在一个其它实施方案中，R₈₃是甲基或乙基。在一个其它实施方案中，R₈₃是被一个或多个卤素(例如F、Cl、Br或I)取代的C₁-C₆烷基。在另一个实施方案中，R₈₃是C₂-C₆烯基(例如，乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基或己烯基，其各自任选地被取代)。在一个其它实施方案中，R₈₃是乙烯基。在另一个实施方案中，R₈₃是C₂-C₆炔基(例如，乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基或己炔基，其各自任选地被取代)。

在一个实施方案中，R_X是

在一个实施方案中，

是

在一个其它实施方案中，

是

在另一个其它实施方案中，

是

在另一个实施方案中，

是

在一个实施方案中，n是0。在一个实施方案中，n是1。在一个实施方案中，n是2。在一个实施方案中，n是3。在一个实施方案中，n是4。在一个实施方案中，n是5。在一个实施方案中，n是6。

在一个实施方案中，至少一个R₄是C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代)。在一个其它实施方案中，至少一个R₄是被一个或多个卤素(例如氟、氯、溴或碘)取代的C₁-C₆烷基。

在一个实施方案中，R_X是选自以下的环体系：

在一个其它实施方案中，R_X是

在一个其它实施方案中，R_X是

在另一个其它实施方案中，R_X是

在另一个实施方案中，R_X是选自以下的环体系：

在一个其它实施方案中，R_X是

在一个实施方案中，至少一个R₅₁是C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代)。在另一个实施方案中，至少一个R₅₁是C(O)NR₆₁R₆₂或C(O)OR₆₃。在另一个实施方案中，至少一个R₅₁是NR₆₄R₆₅。

在一个实施方案中，R₆₁和R₆₂之一是H，且另一者是C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代)，或C₂-C₆烯基(例如，乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基或己烯基，其各自任选地被取代)。在另一个实施方案中，R₆₁和R₆₂之一是C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代)，且另一者是C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代)，或C₂-C₆烯基(例如，乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基或己烯基，其各自任选地被取代)。

在一个实施方案中，R₆₃是C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代)。在另一个实施方案中，R₆₃是C₂-C₆烯基(例如，乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基或己烯基，其各自任选地被取代)。

在一个实施方案中，R₆₄和R₆₅之一是H，且另一者是C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代)。在另一个实施方案中，R₆₄和R₆₅各自独立地是C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代)。

在一个实施方案中，R₅₂是H。在另一个实施方案中，R₅₂是R₅₁。

在一个实施方案中，R₅₃是H。在另一个实施方案中，R₅₃是OH。在另一个实施方案中，R₅₃是R₅₁。

在一个实施方案中，R_X是NR_AR_B。

在一个实施方案中，R_A和R_B各自独立地是C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代)。在另一个实施方案中，R_A是C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代)，且R_B是C(O)R₇。在一个其它实施方案中，R_A是甲基，且R_B是C(O)R₇。

在一个实施方案中，R₇是C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代)。在一个其它实施方案中，R₇是甲基或乙基。在另一个实施方案中，R₇是C₂-C₆烯基(例如，乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基或己烯基，其各自任选地被取代)。在另一个实施方案中，R₇是C₂-C₆炔基(例如，乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基或己炔基，其各自任选地被取代)。

在一个实施方案中，R_N是H。在另一个实施方案中，R_N是C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代)。在一个其它实施方案中，R_N是被一个或多个卤素(例如氟、氯、溴或碘)取代的C₁-C₆烷基。在一个其它实施方案中，R_N是甲基、乙基或丙基，其各自任选地被取代。

在一个实施方案中，m是0。在一个实施方案中，m是1。在一个实施方案中，m是2。在一个实施方案中，m是3。

在一个实施方案中，至少一个R₁是C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代)。在一个其它实施方案中，至少一个R₁是被一个或多个卤素(例如，氟、氯、溴或碘)取代的C₁-C₆烷基。

在一个实施方案中，至少一个R₁是C₁-C₆烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基或己氧基，其各自任选地被取代)。在一个实施方案中，至少一个R₁是甲氧基、乙氧基或异丙氧基。在一个其它实施方案中，至少一个R₁是甲氧基或乙氧基。在一个其它实施方案中，至少一个R₁是甲氧基。在一个其它实施方案中，至少一个R₁是被一个或多个卤素(例如，氟、氯、溴或碘)取代的C₁-C₆烷氧基。

在一个实施方案中，至少一个R₁是卤素(例如氟、氯、溴或碘)。在一个其它实施方案中，至少一个R₁是氟或氯。在一个其它实施方案中，至少一个R₁是氟。

在一个实施方案中，R₂是H。

在一个实施方案中，R₂是C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代)。在一个其它实施方案中，R₂是被一个或多个卤素(例如，氟、氯、溴或碘)取代的C₁-C₆烷基。

在一个实施方案中，R₂是卤素(例如，氟、氯、溴或碘)。在一个其它实施方案中，R₂是氟或氯。

在一个实施方案中，R₂是未取代或取代的C₁-C₆烷氧基或NR_N1R_N2。

在一个实施方案中，R₂是C₁-C₆烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基或己氧基，其各自任选地被取代)。在一个其它实施方案中，R₂是被一个或多个卤素(例如，氟、氯、溴或碘)取代的C₁-C₆烷氧基。在一个其它实施方案中，R₂是甲氧基。

在一个实施方案中，R₂是NR_N1R_N2。

在一个实施方案中，R_N1和R_N2各自是H。

在一个实施方案中，R_N1和R_N2之一是H，且另一者是未取代或取代的C₁-C₆烷基、未取代或取代的C₂-C₆烯基、(CH₂)_1-3-O-C₁-C₆烷基或(CH₂)_0-3-R₉₁。

在一个实施方案中，R_N1和R_N2之一是H，且另一者是C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代)。在一个其它实施方案中，R_N1和R_N2之一是H，且另一者是被一个或多个选自卤素(例如，氟、氯、溴或碘)、OH和苯基的取代基取代的C₁-C₆烷基。在一个其它实施方案中，R_N1和R_N2之一是H，且另一者是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基。

在一个实施方案中，R_N1和R_N2之一是H，且另一者是C₂-C₆烯基(例如，乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基或己烯基，其各自任选地被取代)。在一个其它实施方案中，R_N1和R_N2之一是H，且另一者是乙烯基或丙烯基。

在一个实施方案中，R_N1和R_N2之一是H，且另一者是(CH₂)-O-C₁-C₆烷基。在另一个实施方案中，R_N1和R_N2之一是H，且另一者是(CH₂)₂-O-C₁-C₆烷基。在另一个实施方案中，R_N1和R_N2之一是H，且另一者是(CH₂)₃-O-C₁-C₆烷基。在一个其它实施方案中，C₁-C₆烷基选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代。在一个其它实施方案中，R_N1和R_N2之一是H，且另一者是(CH₂)₂-O-甲基、(CH₂)₂-O-乙基或(CH₂)₂-O-丙基。在一个其它实施方案中，R_N1和R_N2之一是H，且另一者是(CH₂)₂-O-甲基。

在一个实施方案中，R_N1和R_N2之一是H，且另一者是(CH₂)_0-3-R₉₁。在一个其它实施方案中，(CH₂)_0-3-R₉₁是R₉₁。在另一个实施方案中，(CH₂)_0-3-R₉₁是(CH₂)-R₉₁。在另一个实施方案中，(CH₂)_0-3-R₉₁是(CH₂)₂-R₉₁。在另一个实施方案中，(CH₂)_0-3-R₉₁是(CH₂)₃-R₉₁。

在一个实施方案中，R_N1和R_N2各自独立地是C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代)。在一个其它实施方案中，R_N1和R_N2各自独立地是被一个或多个卤素(例如，氟、氯、溴或碘)取代的C₁-C₆烷基。

在一个实施方案中，R_N1和R_N2之一是C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代)，且另一者是(CH₂)_1-3-O-C₁-C₆烷基。在一个其它实施方案中，(CH₂)_1-3-O-C₁-C₆烷基是(CH₂)-O-C₁-C₆烷基。在另一个实施方案中，(CH₂)_1-3-O-C₁-C₆烷基是(CH₂)₂-O-C₁-C₆烷基。在另一个实施方案中，(CH₂)_1-3-O-C₁-C₆烷基是(CH₂)₃-O-C₁-C₆烷基。在一个其它实施方案中，C₁-C₆烷基选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代。

在一个实施方案中，R_N1和R_N2之一是C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代)，且另一者是(CH₂)_0-3-R₉₁。在一个其它实施方案中，(CH₂)_0-3-R₉₁是R₉₁。在另一个实施方案中，(CH₂)_0-3-R₉₁是(CH₂)-R₉₁。在另一个实施方案中，(CH₂)_0-3-R₉₁是(CH₂)₂-R₉₁。在另一个实施方案中，(CH₂)_0-3-R₉₁是(CH₂)₃-R₉₁。

在一个实施方案中，R₉₁是C₃-C₈环烷基(例如，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基，其各自任选地被取代)。在一个其它实施方案中，R₉₁是被一个或多个独立地选自以下的基团取代的C₃-C₈环烷基：卤素(例如，氟、氯、溴或碘)、C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基)和C₁-C₆烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基或己氧基)。在一个其它实施方案中，R₉₁是环丙基、环丁基、环戊基或环己基。

在一个实施方案中，R₉₁是包含一个5或6元环和1-3个选自N、O和S的杂原子的杂环。在一个其它实施方案中，R₉₁是选自以下的杂环：吡咯烷、吡唑烷、咪唑烷、***烷、噁唑烷、异噁唑烷、二噁唑烷、噁二唑烷、噻唑烷、异噻唑烷、二噻唑烷、噻二唑烷、哌啶、哌嗪、吗啉、硫吗啉、六氢嘧啶、六氢哒嗪和四氢呋喃。在一个其它实施方案中，R₉₁是选自以下的杂环：吡咯烷、哌啶、哌嗪、吗啉和四氢呋喃。在一个其它实施方案中，R₉₁是吡咯烷或四氢呋喃。在一个实施方案中，R₉₁是被一个或多个独立地选自以下的基团取代的杂环：卤素(例如，氟、氯、溴或碘)、C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基)和C₁-C₆烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基或己氧基)。在一个实施方案中，R₉₁是被S(O)₂R₁₀、NHC(O)R₁₁、C(O)R₁₂或C(O)NHR₁₃取代的杂环。

在一个实施方案中，R₉₁是被S(O)₂R₁₀、NHC(O)R₁₁、C(O)R₁₂或C(O)NHR₁₃取代的苯基。

在一个实施方案中，R₂是OR_N3。

在一个实施方案中，R_N3是(CH₂)_0-3-R₉₂。在一个其它实施方案中，(CH₂)_0-3-R₉₂是R₉₂。在另一个实施方案中，(CH₂)_0-3-R₉₂是(CH₂)-R₉₂。在另一个实施方案中，(CH₂)_0-3-R₉₂是(CH₂)₂-R₉₂。在另一个实施方案中，(CH₂)_0-3-R₉₂是(CH₂)₃-R₉₂。

在一个实施方案中，R₉₂是C₃-C₈环烷基(例如，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基，其各自任选地被取代)。在一个其它实施方案中，R₉₂是被一个或多个独立地选自以下的基团取代的C₃-C₈环烷基：卤素(例如，氟、氯、溴或碘)、C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基)和C₁-C₆烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基或己氧基)。

在一个实施方案中，R₉₂是包含一个5或6元环和1-3个选自N、O和S的杂原子的杂环。在一个其它实施方案中，R₉₂是选自以下的杂环：吡咯烷、吡唑烷、咪唑烷、***烷、噁唑烷、异噁唑烷、二噁唑烷、噁二唑烷、噻唑烷、异噻唑烷、二噻唑烷、噻二唑烷、哌啶、哌嗪、吗啉、硫吗啉、六氢嘧啶和六氢哒嗪。在一个其它实施方案中，R₉₂是选自吡咯烷、哌啶、哌嗪和吗啉的杂环。在一个其它实施方案中，R₉₂是吡咯烷。在一个实施方案中，R₉₂是被一个或多个独立地选自以下的基团取代的杂环：卤素(例如，氟、氯、溴或碘)、C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基)和C₁-C₆烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基或己氧基)。在一个实施方案中，R₉₂是被S(O)₂R₁₀、NHC(O)R₁₁、C(O)R₁₂或C(O)NHR₁₃取代的杂环。

在一个实施方案中，R₉₂是被NO₂、S(O)₂R₁₀、NHC(O)R₁₁、C(O)R₁₂或C(O)NHR₁₃取代的苯基。

在一个实施方案中，R₁₀是C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代)。在一个其它实施方案中，R₁₀是甲基、乙基或异丙基。在另一个实施方案中，R₁₀是C₂-C₆烯基(例如，乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基或己烯基，其各自任选地被取代)。

在一个实施方案中，R₁₀是NH-C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代)。在一个其它实施方案中，R₁₀是NH-叔丁基。

在一个实施方案中，R₁₀是包含一个5或6元环和1-3个选自N、O和S的杂原子的杂环。

在一个其它实施方案中，R₁₀是选自以下的杂环：吡咯烷、吡唑烷、咪唑烷、***烷、噁唑烷、异噁唑烷、二噁唑烷、噁二唑烷、噻唑烷、异噻唑烷、二噻唑烷、噻二唑烷、哌啶、哌嗪、吗啉、硫吗啉、六氢嘧啶和六氢哒嗪。在一个其它实施方案中，R₁₀是选自吡咯烷、哌啶、哌嗪和吗啉的杂环。在一个实施方案中，R₁₀是被一个或多个独立地选自以下的基团取代的杂环：卤素(例如，氟、氯、溴或碘)、C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基)和C₁-C₆烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基或己氧基)。

在一个实施方案中，R₁₀是被一个或多个独立地选自以下的基团取代的苯基：卤素(例如，氟、氯、溴或碘)、C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基)和C₁-C₆烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基或己氧基)。

在一个实施方案中，R₁₀是包含一个5或6元环和1-3个选自N、O和S的杂原子的杂芳基。在一个其它实施方案中，R₁₀是选自吡咯、吡唑、咪唑、***、噁唑、异噁唑、二噁唑、噻唑、异噻唑、吡啶、吡嗪和嘧啶的杂芳基。在一个其它实施方案中，R₁₀是选自吡咯、吡啶和嘧啶的杂芳基。在一个实施方案中，R₁₀是被一个或多个独立地选自以下的基团取代的杂芳基：卤素(例如，氟、氯、溴或碘)、C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基)和C₁-C₆烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基或己氧基)。

在一个实施方案中，R₁₁是C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代)。在一个其它实施方案中，R₁₁是甲基或乙基。在一个其它实施方案中，R₁₁是被一个或多个卤素(例如F、Cl、Br或I)取代的C₁-C₆烷基。在另一个实施方案中，R₁₁是C₂-C₆烯基(例如，乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基或己烯基，其各自任选地被取代)。在一个其它实施方案中，R₁₁是乙烯基。

在一个实施方案中，R₁₁是NH-C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代)。

在一个实施方案中，R₁₁是包含一个5或6元环和1-3个选自N、O和S的杂原子的杂环。在一个其它实施方案中，R₁₁是选自以下的杂环：吡咯烷、吡唑烷、咪唑烷、***烷、噁唑烷、异噁唑烷、二噁唑烷、噁二唑烷、噻唑烷、异噻唑烷、二噻唑烷、噻二唑烷、哌啶、哌嗪、吗啉、硫吗啉、六氢嘧啶和六氢哒嗪。在一个其它实施方案中，R₁₁是选自吡咯烷、哌啶、哌嗪和吗啉的杂环。在一个实施方案中，R₁₁是被一个或多个独立地选自以下的基团取代的杂环：卤素(例如，氟、氯、溴或碘)、C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基)和C₁-C₆烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基或己氧基)。

在一个实施方案中，R₁₁是被一个或多个独立地选自以下的基团取代的苯基：卤素(例如，氟、氯、溴或碘)、C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基)和C₁-C₆烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基或己氧基)。

在一个实施方案中，R₁₁是包含一个5或6元环和1-3个选自N、O和S的杂原子的杂芳基。在一个其它实施方案中，R₁₁是选自吡咯、吡唑、咪唑、***、噁唑、异噁唑、二噁唑、噻唑、异噻唑、吡啶、吡嗪和嘧啶的杂芳基。在一个其它实施方案中，R₁₁是选自吡咯、吡啶和嘧啶的杂芳基。在一个实施方案中，R₁₁是被一个或多个独立地选自以下的基团取代的杂芳基：卤素(例如，氟、氯、溴或碘)、C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基)和C₁-C₆烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基或己氧基)。

在一个实施方案中，R₁₂是C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代)。在一个其它实施方案中，R₁₂是甲基或乙基。在一个其它实施方案中，R₁₂是被一个或多个卤素(例如F、Cl、Br或I)取代的C₁-C₆烷基。在另一个实施方案中，R₁₂是C₂-C₆烯基(例如，乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基或己烯基，其各自任选地被取代)。在一个其它实施方案中，R₁₂是乙烯基。

在一个实施方案中，R₁₂是NH-C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代)。

在一个实施方案中，R₁₂是包含一个5或6元环和1-3个选自N、O和S的杂原子的杂环。在一个其它实施方案中，R₁₂是选自以下的杂环：吡咯烷、吡唑烷、咪唑烷、***烷、噁唑烷、异噁唑烷、二噁唑烷、噁二唑烷、噻唑烷、异噻唑烷、二噻唑烷、噻二唑烷、哌啶、哌嗪、吗啉、硫吗啉、六氢嘧啶和六氢哒嗪。在一个其它实施方案中，R₁₂是选自吡咯烷、哌啶、哌嗪和吗啉的杂环。在一个实施方案中，R₁₂是被一个或多个独立地选自以下的基团取代的杂环：卤素(例如，氟、氯、溴或碘)、C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基)和C₁-C₆烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基或己氧基)。

在一个实施方案中，R₁₂是被一个或多个独立地选自以下的基团取代的苯基：卤素(例如，氟、氯、溴或碘)、C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基)和C₁-C₆烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基或己氧基)。

在一个实施方案中，R₁₂是包含一个5或6元环和1-3个选自N、O和S的杂原子的杂芳基。在一个其它实施方案中，R₁₂是选自以下的杂芳基：吡咯、吡唑、咪唑、***、噁唑、异噁唑、二噁唑、噻唑、异噻唑、吡啶、吡嗪和嘧啶。在一个其它实施方案中，R₁₂是选自吡咯、吡啶和嘧啶的杂芳基。在一个实施方案中，R₁₂是被一个或多个独立地选自以下的基团取代的杂芳基：卤素(例如，氟、氯、溴或碘)、C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基)和C₁-C₆烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基或己氧基)。

在一个实施方案中，R₁₃是C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代)。在一个其它实施方案中，R₁₃是甲基。在另一个实施方案中，R₁₃是C₂-C₆烯基(例如，乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基或己烯基，其各自任选地被取代)。

在一个实施方案中，R₁₃是NH-C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代)。

在一个实施方案中，R₁₃是包含一个5或6元环和1-3个选自N、O和S的杂原子的杂环。在一个其它实施方案中，R₁₃是选自以下的杂环：吡咯烷、吡唑烷、咪唑烷、***烷、噁唑烷、异噁唑烷、二噁唑烷、噁二唑烷、噻唑烷、异噻唑烷、二噻唑烷、噻二唑烷、哌啶、哌嗪、吗啉、硫吗啉、六氢嘧啶、六氢哒嗪和四氢吡喃。在一个其它实施方案中，R₁₃是选自吡咯烷、哌啶、哌嗪、吗啉和四氢吡喃的杂环。在一个实施方案中，R₁₃是被一个或多个独立地选自以下的基团取代的杂环：卤素(例如，氟、氯、溴或碘)、C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基)和C₁-C₆烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基或己氧基)。

在一个实施方案中，R₁₃是被一个或多个独立地选自以下的基团取代的苯基：卤素(例如，氟、氯、溴或碘)、C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基)和C₁-C₆烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基或己氧基)。

在一个实施方案中，R₁₃是包含一个5或6元环和1-3个选自N、O和S的杂原子的杂芳基。在一个其它实施方案中，R₁₃是选自以下的杂芳基：吡咯、吡唑、咪唑、***、噁唑、异噁唑、二噁唑、噻唑、异噻唑、吡啶、吡嗪和嘧啶。在一个其它实施方案中，R₁₃是选自吡咯、吡啶和嘧啶的杂芳基。在一个实施方案中，R₁₃是被一个或多个独立地选自以下的基团取代的杂芳基：卤素(例如，氟、氯、溴或碘)、C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基)和C₁-C₆烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基或己氧基)。

在一个实施方案中，R_N1和R_N2与它们所键合的氮原子一起形成5或6元杂环。在一个其它实施方案中，杂环选自吡咯烷、吡唑烷、咪唑烷、***烷、噁唑烷、异噁唑烷、二噁唑烷、噁二唑烷、噻唑烷、异噻唑烷、二噻唑烷、噻二唑烷、哌啶、哌嗪、吗啉、硫吗啉、六氢嘧啶、六氢哒嗪和哌嗪酮。在一个其它实施方案中，杂环是哌嗪酮或哌啶。在一个其它实施方案中，杂环被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基)、卤素(例如，氟、氯、溴或碘)和NHC(O)-C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基)。

如上面各个实施方案中所述的

R_X、R_A、R_B、X₁、X₂、X₃、R₁、R₂、R₃₁、R₃₂、R₄、R₅₁、R₅₂、R₅₃、R₆₁、R₆₂、R₆₃、R₆₄、R₆₅、R7、R₈₁、R₈₂、R₈₃、R9₁、R9₂、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R_N、R_N1、R_N2、R_N3、m和n的任何一个、两个或更多个的任何取代基基团可以与如各个实施方案中所述的

R_X、R_A、R_B、X₁、X₂、X₃、R₁、R₂、R₃₁、R₃₂、R₄、R₅₁、R₅₂、R₅₃、R₆₁、R₆₂、R₆₃、R₆₄、R₆₅、R₇、R₈₁、R₈₂、R₈₃、R₉₁、R₉₂、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R_N、R_N1、R_N2、R_N3、m和n的剩余部分的任何一个、两个或更多个的任何取代基基团进行组合。

在一个实施方案中，式I、II或III的化合物是式Ia、IIa或IIIa的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中R_X、R₁、R₂、R_N、X₁、X₂、X₃和m各自如式I、II或III中所定义，且R_O是未取代或取代的C₁-C₆烷基。

在一个实施方案中，R_X、R₁、R₂、R_N、X₁、X₂、X₃和m各自可以选自本文例举的任何取代基基团(例如，对于式I、II或III)。

在一个实施方案中，R_O是C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代)。在一个其它实施方案中，R_O是被一个或多个卤素(例如，氟、氯、溴或碘)取代的C₁-C₆烷基。在一个其它实施方案中，R_O是甲基、乙基或异丙基，其各自任选地被取代。在一个其它实施方案中，R_O是甲基。

如上面各个实施方案中所述的R_X、R₁、R₂、R_N、R_O、X₁、X₂、X₃和m的任何一个、两个或更多个的任何取代基基团可以与如各个实施方案中所述的R_X、R₁、R₂、R_N、R_O、X₁、X₂、X₃和m的剩余部分的任何一个、两个或更多个的任何取代基基团进行组合。

在一个实施方案中，式I的化合物是式Ib1或Ib2的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中R₁、R₂、R₄、R_N、X₁、X₂、X₃、m、n和

各自如式I中所定义，且R_O是未取代或取代的C₁-C₆烷基。

在一个实施方案中，R₁、R₂、R₄、R_N、X₁、X₂、X₃、m、n和

各自可以选自本文例举的任何取代基基团(例如，对于式I)。

如上面各个实施方案中所述的R₁、R₂、R₄、R_N、R_O、X₁、X₂、X₃、m、n和

的任何一个、两个或更多个的任何取代基基团可以与如各个实施方案中所述的R₁、R₂、R₄、R_N、R_O、X₁、X₂、X₃、m、n和

的剩余部分的任何一个、两个或更多个的任何取代基基团进行组合。

在一个实施方案中，式I的化合物是式Ic1或Ic2的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

R_X1是选自以下的包含一个或两个6元杂环的环体系：

其中每个环体系任选地被1、2、3、4、5或6个R₅₁取代；

R₂₁是NHR_N4或OR_N5；

R_N4是包含一个5或6元环和1-3个选自N、O和S的杂原子的杂环，或苯基，其中杂环或苯基被S(O)₂R₁₀、NHC(O)R₁₁、C(O)R₁₂或C(O)NHR₁₃取代；

R_N5是包含一个5或6元环和1-3个选自N、O和S的杂原子的杂环，或苯基，其中杂环或苯基被NO₂、S(O)₂R₁₀、NHC(O)R₁₁、C(O)R₁₂或C(O)NHR₁₃取代；且

R₁、R_N、X₁、X₂、X₃、R₅₁、R₅₂、R₅₃、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃和m各自如式I中所定义。

在一个实施方案中，R₁、R_N、X₁、X₂、X₃、R₅₁、R₅₂、R₅₃、R₁₀、R_n、R₁₂、R₁₃和m各自可以选自本文例举的任何取代基基团(例如，对于式I)。

在一个实施方案中，R_O是C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，其各自任选地被取代)。在一个其它实施方案中，R_O是被一个或多个卤素(例如，氟、氯、溴或碘)取代的C₁-C₆烷基。在一个其它实施方案中，R_O是甲基、乙基或丙基，其各自任选地被取代。在一个其它实施方案中，R_O是甲基。

在一个实施方案中，R₂₁是NHR_N4。在另一个实施方案中，R₂₁是OR_N5。

在一个实施方案中，R_N4是包含一个5或6元环和1-3个选自N、O和S的杂原子的杂环。在一个其它实施方案中，R_N4是选自以下的杂环：吡咯烷、吡唑烷、咪唑烷、***烷、噁唑烷、异噁唑烷、二噁唑烷、噁二唑烷、噻唑烷、异噻唑烷、二噻唑烷、噻二唑烷、哌啶、哌嗪、吗啉、硫吗啉、六氢嘧啶和六氢哒嗪。在一个其它实施方案中，R_N4是选自吡咯烷、哌啶、哌嗪和吗啉的杂环。在一个其它实施方案中，R_N4是吡咯烷。在一个实施方案中，R_N4是被一个或多个独立地选自以下的基团取代的杂环：卤素(例如，氟、氯、溴或碘)、C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基)和C₁-C₆烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基或己氧基)。在一个实施方案中，R_N4是被S(O)₂R₁₀、NHC(O)R₁₁、C(O)R₁₂或C(O)NHR₁₃取代的杂环。

在一个实施方案中，R_N4是被S(O)₂R₁₀、NHC(O)R₁₁、C(O)R₁₂或C(O)NHR₁₃取代的苯基。

在一个实施方案中，R_N5是包含一个5或6元环和1-3个选自N、O和S的杂原子的杂环。在一个其它实施方案中，R_N5是选自以下的杂环：吡咯烷、吡唑烷、咪唑烷、***烷、噁唑烷、异噁唑烷、二噁唑烷、噁二唑烷、噻唑烷、异噻唑烷、二噻唑烷、噻二唑烷、哌啶、哌嗪、吗啉、硫吗啉、六氢嘧啶和六氢哒嗪。在一个其它实施方案中，R_N5是选自吡咯烷、哌啶、哌嗪和吗啉的杂环。在一个其它实施方案中，R_N4是吡咯烷。在一个实施方案中，R_N5是被一个或多个独立地选自以下的基团取代的杂环：卤素(例如，氟、氯、溴或碘)、C₁-C₆烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基)和C₁-C₆烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基或己氧基)。在一个实施方案中，R_N5是被S(O)₂R₁₀、NHC(O)R₁₁、C(O)R₁₂或C(O)NHR₁₃取代的杂环。

在一个实施方案中，R_N5是被NO₂、S(O)₂R₁₀、NHC(O)R₁₁、C(O)R₁₂或C(O)NHR₁₃取代的苯基。

如上面各个实施方案中所述的R_X1、R₁、R₂₁、R_N、X₁、X₂、X₃、R₅₁、R₅₂、R₅₃、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R_N4、R_N5和m的任何一个、两个或更多个的任何取代基基团可以与如各个实施方案中所述的R_X1、R₁、R2₁、R_N、X₁、X₂、X₃、R₅₁、R₅₂、R₅₃、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R_N4、R_N5和m的剩余部分的任何一个、两个或更多个的任何取代基基团进行组合。

在一个实施方案中，R₂₁是NHR_N4；R_N4是被S(O)₂R₁₀取代的苯基；且R₁₀是甲基、乙基、丙基或异丙基。在一个其它实施方案中，R₁₀是异丙基。

在一个实施方案中，式II的化合物是式IIa1或IIa2的化合物：

各自如式II中所定义，且R_O是未取代或取代的C₁-C₆烷基。

各自可以选自本文例举的任何取代基基团(例如，对于式I、II或III)。

在一个实施方案中，式III的化合物是式IIIa1或IIIa2的化合物：

各自如式III中所定义，且R_O是未取代或取代的C₁-C₆烷基。

本公开的代表性化合物列于表A中。

表A

本公开的化合物是高效、选择性和脑渗透性LRRK2抑制剂。具体地，本公开的化合物有效地抑制LRRK2的野生型和G2019S突变体和/或A2016T突变体两者。

在一个实施方案中，本公开的化合物以低于200nM、190nM、180nM、170nM、160nM、150nM、100nM、90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM、30nM、20nM、10nM或5nM的IC₅₀抑制野生型LRRK2。在一个其它实施方案中，本公开的化合物以低于50nM、40nM、30nM、20nM、10nM或5nM的IC₅₀抑制野生型LRRK2。在一个其它实施方案中，本公开的化合物以低于20nM、10nM或5nM的IC₅₀抑制野生型LRRK2。在一个其它实施方案中，本公开的化合物以低于20nM的IC₅₀抑制野生型LRRK2。在一个其它实施方案中，本公开的化合物以低于10nM或5nM的IC₅₀抑制野生型LRRK2。在一个其它实施方案中，本公开的化合物以低于10nM的IC₅₀抑制野生型LRRK2。在一个其它实施方案中，本公开的化合物以低于5nM的IC₅₀抑制野生型LRRK2。

在一个实施方案中，本公开的化合物以低于150nM、100nM、90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM、30nM、20nM、10nM或5nM的IC₅₀抑制G2019S突变体LRRK2。在一个其它实施方案中，本公开的化合物以低于50nM、40nM、30nM、20nM、10nM或5nM的IC₅₀抑制G2019S突变体LRRK2。在一个其它实施方案中，本公开的化合物以低于20nM、10nM或5nM的IC₅₀抑制G2019S突变体LRRK2。在一个其它实施方案中，本公开的化合物以低于20nM的IC₅₀抑制G2019S突变体LRRK2。在一个其它实施方案中，本公开的化合物以低于10nM或5nM的IC₅₀抑制G2019S突变体LRRK2。在一个其它实施方案中，本公开的化合物以低于10nM的IC₅₀抑制G2019S突变体LRRK2。在一个其它实施方案中，本公开的化合物以低于5nM的IC₅₀抑制G2019S突变体LRRK2。

在一个实施方案中，本公开的化合物以低于200nM、190nM、180nM、170nM、160nM、150nM、100nM、90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM、30nM、20nM、10nM或5nM的IC₅₀抑制A2016T突变体LRRK2。在一个其它实施方案中，本公开的化合物以低于150nM、100nM、90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM、30nM、20nM、10nM或5nM的IC₅₀抑制A2016T突变体LRRK2。在一个其它实施方案中，本公开的化合物以低于100nM、90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM、30nM、20nM、10nM或5nM的IC₅₀抑制A2016T突变体LRRK2。在一个其它实施方案中，本公开的化合物以低于50nM、40nM、30nM、20nM、10nM或5nM的IC₅₀抑制A2016T突变体LRRK2。在一个其它实施方案中，本公开的化合物以低于50nM的IC₅₀抑制A2016T突变体LRRK2。

在一个实施方案中，本公开的化合物以低于150nM、100nM、90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM、30nM、20nM、10nM或5nM的IC₅₀抑制野生型和G2019S突变体LRRK2两者。在一个其它实施方案中，本公开的化合物以低于100nM、90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM、30nM、20nM、10nM或5nM的IC₅₀抑制野生型和G2019S突变体LRRK2两者。在一个其它实施方案中，本公开的化合物以低于50nM、40nM、30nM、20nM、10nM或5nM的IC₅₀抑制野生型和G2019S突变体LRRK2两者。在一个其它实施方案中，本公开的化合物以低于20nM、10nM或5nM的IC₅₀抑制野生型和G2019S突变体LRRK2两者。在一个其它实施方案中，本公开的化合物以低于20nM的IC₅₀抑制野生型和G2019S突变体LRRK2两者。在一个其它实施方案中，本公开的化合物以低于10nM或5nM的IC₅₀抑制野生型和G2019S突变体LRRK2两者。在一个其它实施方案中，本公开的化合物以低于10nM的IC₅₀抑制野生型和G2019S突变体LRRK2两者。在一个其它实施方案中，本公开的化合物以低于5nM的IC₅₀抑制野生型和G2019S突变体LRRK2两者。

在一个实施方案中，本公开的化合物以低于150nM、100nM、90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM、30nM、20nM、10nM或5nM的IC₅₀抑制野生型LRRK2，且以低于200nM、190nM、180nM、170nM、160nM、150nM、100nM、90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM、30nM、20nM、10nM或5nM的IC₅₀抑制A2016T突变体LRRK2。在一个其它实施方案中，本公开的化合物以低于50nM、40nM、30nM、20nM、10nM或5nM的IC₅₀抑制野生型LRRK2，且以低于150nM、100nM、90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM、30nM、20nM、10nM或5nM的IC₅₀抑制A2016T突变体LRRK2。在一个其它实施方案中，本公开的化合物以低于50nM、40nM、30nM、20nM、10nM或5nM的IC₅₀抑制野生型LRRK2，且以低于100nM、90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM、30nM、20nM、10nM或5nM的IC₅₀抑制A2016T突变体LRRK2。在一个其它实施方案中，本公开的化合物以低于50nM的IC₅₀抑制野生型LRRK2，且以低于50nM的IC₅₀抑制A2016T突变体LRRK2。在一个其它实施方案中，本公开的化合物以低于20nM的IC₅₀抑制野生型LRRK2，且以低于50nM的IC₅₀抑制A2016T突变体LRRK2。在一个其它实施方案中，本公开的化合物以低于10nM的IC₅₀抑制野生型LRRK2，且以低于50nM的IC₅₀抑制A2016T突变体LRRK2。在一个其它实施方案中，本公开的化合物以低于5nM的IC₅₀抑制野生型LRRK2，且以低于50nM的IC₅₀抑制A2016T突变体LRRK2。

在一个实施方案中，本公开的化合物以低于1μM、0.9μM、0.8μM、0.7μM、0.6μM、0.5μM、0.4μM、0.3μM或0.2μM的浓度抑制LRRK2的野生型和G2019S突变体两者。例如，本公开的化合物以0.1-0.3μM之间的浓度抑制LRRK2的野生型和G2019S突变体两者。

在另一个方面，本公开提供包含有效量的一种或多种本公开的化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。合适的配制剂详细描述于本文部分5中。

根据本公开的一个方面，治疗或预防涉及LRRK2的疾病或病症的方法，其包括向受试者给药有效量的根据本公开的化合物或其药学上可接受的盐、酯、互变异构体或前药。

在另一个方面，本公开提供用于治疗或预防受试者中的神经退行性病症(例如PD)的方法。所述方法包括例如经由口服或肠胃外途径给药有效量的一种或多种本公开的化合物或药物组合物。

本公开进一步提供治疗受试者中的病症的方法，其包括向受试者给药有效量的一种或多种本公开的化合物、从而改善特定病症的症状的步骤。这种病症可以是神经退行性病症，并且可以是例如帕金森氏病。

3.本公开的化合物的合成和分析

本公开的化合物可以通过本领域技术人员熟悉的各种方法方便地制备。本文所述的各式的化合物可以根据以下程序由市售的起始材料或可以使用文献程序制备的起始材料制备。这些程序显示本公开的代表性化合物的制备。应当理解，除了以下方案中说明的化合物之外，本公开的化合物，可以使用具有本领域通常已知的修改的这些方案(例如，使用不同的起始材料、改变反应溶剂或调节反应持续时间或温度)来制备。

方案1

方案1.

试剂和条件：a)NCS，THF/DCM，90℃，2.5h，93％，b)NaH，SEMCl，0℃至RT3h，90％，c)33％MeNH₂/EtOH，EtOH，70℃1h，93％，d)32，Pd₂(dba)₃，XPhos，K₂CO₃，sec-BuOH 90℃，6h，e)(i)TFA，DCM RT，2h，(ii)NaHCO₃，THF，H₂O，12h，58％，f)(i)甲苯，亚硫酰氯，120℃，2h(ii)DIEA，吗啉，THF，0℃至RT，1h，92％，g)10％Pd/C，MeOH，RT，12h，98％。

方案1-1

方案2

方案3

在与PD相关的基因中，LRRK2是独特的，因为错义突变G2019S经常发现于家族性和零星帕金森氏病病例中。G2019S突变导致激酶活性增加两或三倍，这可导致神经元死亡信号传导途径的活化。例如，12至16个月龄的转基因G2019S LRRK2小鼠展现SNPc多巴胺能神经元的进行性变性和帕金森氏病的运动功能障碍的表型，表明G2109S突变可以在功能上与该疾病相关。此外，其它突变，例如A2016T也可以在该疾病中发挥作用。这表明，小分子LRRK2激酶抑制剂能够充当新类别的治疗剂用于治疗PD。

已经报道了几种基于2，4-二氨基嘧啶的LRRK2抑制剂，包括LRRK2-IN-1、CSC-25146和TAE684。另外，发现GSK2578215A(苯甲酰胺ATP位点定向的支架)是LRRK2的有效和选择性抑制剂。

然而，上述化合物无一能够以高达100mg/Kg的腹膜内剂量有效地抑制小鼠脑中LRRK2的Ser910和Ser935的磷酸化，其限制它们作为鼠PD模型中的工具的用途。

已经开发了额外的2，4-二氨基嘧啶类化合物，包括HG-10-102-01和GNE7915，其为可以穿过血-脑屏障的有效和选择性的LRRK2抑制剂。显示这些二氨基嘧啶类化合物在口服给药后显著降低G2019S LRRK2转基因小鼠脑中的LRRK2活性，其通过其降低依赖于LRRK2催化活性的LRRK2在Ser935处磷酸化的能力来判断。最近报道了吡咯并嘧啶PF-06447474也是一种有效和选择性的LRRK2抑制剂，其能够在口服给药后降低G2019S LRRK3小鼠脑中的LRRK2活性。已经报道的额外的ATP-竞争性LRRK2抑制剂包括噌啉类化合物、***并哒嗪类化合物和3-氰基喹唑啉类化合物等。上面提及的LRRK2抑制剂如下所示。

LRRK2激酶活性被认为依赖于蛋白的活化区段的磷酸化。在蛋白激酶的催化结构域中，连接小的N端叶和较大C端叶以形成其中三磷酸腺苷(ATP)和蛋白底物可以反应的裂缝，其被称为活化区段。LRRK2的活化区段被认为是大C端叶的2017至2042个氨基酸的蛋白的条带。由保守的三肽“铰链”限定的区域可以用于阻止底物进入催化位点。不希望受单一理论束缚，能够与LRRK2结合(更具体地，结合活化位点并与激酶的铰链区域相互作用)的分子可以抑制LRRK2激酶活性。

由于GNE7915具有抑制磷酸化的能力，所述化合物是进一步研究的候选者。基于GNE7915的结构分析，分子内氢键键合可能存在于C-5三氟甲基和C-6氢之间，以得到假双环。根据实施方案，通过修饰化合物以呈现GNE7915的稠合双环类似物，与LLRK2活化位点的结合亲和力可以相对于标准GNE7915增加。由于在7-位置的额外氢键供体，结合亲和力可以用稠合双环类似物增加。该修饰可以有利地增强结合亲和力而不较大地增加分子量。不希望受单一理论束缚，稠合的双环化合物也可以更好地填充铰链区域周围的疏水区域，导致结合亲和力增加，因此导致更好的LRRK2抑制。此外，嘧啶的5-位置处的氯可以有利地通过与EGFR的看门人Met790和Met1947残基相互作用而增加结合亲和力。

因此，本公开提供具有增强的结合亲和力的化合物，其可以减少或抑制LRRK2的磷酸化和因此激酶活性，并且可以例如用于治疗帕金森氏征。根据实施方案，使用一系列6，5-稠环类似物构建GNE7915的闭环版本。选择吡咯并嘧啶以允许在C-5位置安装氯杂原子。

吡咯并嘧啶类似物用在C-4位置的各种取代合成，并用于制备本公开的化合物。胺取代基在野生型LRRK2和LRRK2[G2019S]酶促测定中表现出优异的功效，而在C-4位置具有甲氧基或无取代基的化合物显示降低的活性。具有C-5位置处的氯和C-4位置处的各种胺取代基的化合物在野生型和LRRK2[G2019S]激酶测定中也显示优异的功效。表1显示具有取代的吡咯并嘧啶类的本公开的化合物的非限制性实例及其抑制LRRK2的能力。

表1：具有酶IC50的吡咯并嘧啶SAR

用于上述激酶测定的ATP的量基于ATP野生型和LRRK[G2019S]的Km值，其分别为36μm和112μm。

已知的LRRK2抑制剂和化合物18(本文也称为(18))在100μm ATP存在的情况下使用20μM Nictide进行测定，以比较每种化合物在抑制野生型LRRK2、LRRK2[G2019S]、LRRK2[A2016T]和LRRK2[G20192+A2016T]方面的有效性，如表2中所示。

本文部分4中进一步讨论了测定程序。

表2：与化合物18相比的已知LRRK2抑制剂

表2：与化合物18相比的已知LRRK2抑制剂。GST-LRRK2(1,326-2,517)、GST-LRRK2[G2019S](1,326-2,527)、GST-LRRKT[A2016T](1,326-2,517)和GST-LRRK2[G2019S+A2016T](1,326-2,517)使用20mM Nictide在100μM ATP存在的情况下进行测定。结果是一式两份实验的平均值。

(18)用于抑制野生型LRRK2和LRRK2[G2019S]的生物化学效力优于所测定的每种已知抑制剂。值得注意的是，(18)用于抑制LRRK2和LRRK2[G2019S]的功效与对于LRRK2-IN-1所观察到的功效相似，但(18)维持A2016T突变的抑制，而A2016T突变诱导对LRRK2-IN-1的显著抗性。

本公开进一步提供用于制备本公开的化合物的方法和中间体。以下方案描绘可用于合成本公开的化合物的一些示例性化学。然而，应当理解，所需化合物可以使用本领域中已知的替代化学合成。

方案1显示由具有取代的吡咯并嘧啶的类似物制备的化合物(例如，化合物18)的非限制性合成。

方案1

方案1.

试剂和条件：a)NCS，THF/DCM，90℃，2.5h，93％，b)NaH，SEMCl，0℃至RT 3h，90％，c)33％MeNH₂/EtOH，EtOH，70℃1h，93％，d)32，Pd₂(dba)₃，XPhos，K₂CO₃，sec-BuOH 90℃，6h，e)(i)TFA，DCM RT，2h，(ii)NaHCO₃，THF，H₂O，12h，58％，f)(i)甲苯，亚硫酰氯，120℃，2h(ii)DIEA，吗啉，THF，0℃至RT，1h，92％，g)10％Pd/C，MeOH，RT，12h，98％。

如方案1中所示，由吡咯并嘧啶类似物制备的化合物(例如，化合物18)可以由市售的2，4-二氯吡咯并嘧啶和3-甲氧基-4-硝基苯甲酸制备。根据方案1，3-甲氧基-4-硝基苯甲酸(30)经受用亚硫酰氯(SOCl₂)氯化，随后与吗啉(C₄H₉NO)反应，以生成酰胺(31)，其通过氢化还原以得到苯胺。2，4-二氯吡咯并嘧啶(25)使用硫氰酸盐(thyocynate，NCS)氯化，随后进行SEM([2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基)保护，以得到SEM-保护的三氯吡咯并嘧啶(27)。化合物27用甲胺区域选择性胺化，以得到2，5-二氯-N-甲基吡咯并嘧啶-4-胺(28)。化合物28用苯胺使用Buchwald偶联条件胺化，随后去除SEM基团以提供所需化合物，在该非限制性实施方案中为化合物18。

还进行吡唑并嘧啶类化合物和嘌呤类似物的评估。根据实施方案，嘌呤环的吡唑化合物的额外氮可以通过引入额外的氢键受体来增强功效。化合物用在C-4位置分别具有N-甲基(21)和O-甲基(22)取代的吡唑并嘧啶类化合物合成(表3)。令人惊讶地，具有吡唑并嘧啶且在C-4位置具有甲氧基取代基的化合物(22)与相应的N-甲基取代化合物(21)相比在野生型LRRK2和G2019S酶促测定中显示更大的功效，其与在吡咯并嘧啶系列中观察到的情况相反(表2)。

在C-4位置具有N-甲基和O-甲基取代的嘌呤类似物然后使用类似取代的化合物(分别为23和24)的合成来制备。在该情况下，具有嘌呤与N-甲基取代基的化合物与具有甲氧基取代基的相应嘌呤化合物相比更有效。表3显示具有取代的吡咯并嘧啶类和嘌呤类的化合物的非限制性实例及其抑制LRRK2的能力。

表3：具有酶IC50的吡唑并嘧啶和嘌呤SAR

方案2显示由嘌呤类似物制备的化合物(例如，化合物23)的非限制性合成。

方案2

方案3显示本公开的化合物的进一步非限制性合成。

方案3

根据本文公开的方法合成的本公开的示例性化合物显示于表4中。

表4

4.本公开的化合物的表征

本文描述的化合物，一旦产生，可以使用本领域技术人员已知的多种测定法来表征，以确定所述化合物是否具有所需生物学活性。例如，所述分子可以通过常规测定法来表征，以确定它们是否具有预测的活性、结合活性和/或结合特异性，所述常规测定法包括但不限于所描述的那些测定法(例如，用测试化合物处理目标细胞，诸如HEK293细胞、Swiss3T3细胞和来自LRRK2[G2019S]突变纯合的帕金森氏病患者的人类淋巴母细胞，然后进行针对所示蛋白诸如野生型LRRK2和LRRK2[G2019S]的免疫印迹，或用测试化合物处理某些目标细胞，然后测定在Ser910处的LRRK2磷酸化、在Ser935处的LRRK2磷酸化和总LRRK2)。

本公开的化合物的药代动力学概况可以使用已知化合物作为对照通过腹膜内注射至小鼠中来评估。治疗后，可以处死小鼠，并且可以解剖某些组织，例如肾、脾和脑组织，以确定生物利用度、半衰期和血浆暴露。

对于本文讨论的已知技术或等效技术的详细描述，本领域技术人员可以参考通用参考文本。这些文本包括Ausubel等人，Current Protocols in Molecular Biology，JohnWiley and Sons，Inc.(2005)；Sambrook等人，Molecular Cloning，A Laboratory Manual(第3版)，Cold Spring Harbor Press，Cold Spring Harbor，New York(2000)；Coligan等人，Current Protocols in Immunology，John Wiley&Sons，N.Y.；Enna等人，CurrentProtocols in Pharmacology，John Wiley&Sons，N.Y.；Fingl等人，The PharmacologicalBasis of Therapeutics(1975)，Remington′s Pharmaceutical Sciences，MackPublishing Co.，Easton，PA，第18版(1990)。当然，也可以在进行或使用本公开的一个方面中参考这些文本。

5.制剂和给药

本公开的化合物可用于预防或治疗帕金森氏病。考虑一旦鉴定，就在使用前将本公开的活性分子并入任何合适的载体。活性分子的剂量、给药模式和合适的载体的使用将取决于预期接受者。根据本公开的化合物的制剂通常包括与药学上可接受的载体结合的此类化合物。

从与制剂的其它成分可相容并且不对接受者有害的意义上来说，(一种或多种)载体应当是“可接受的”。在这方面，药学上可接受的载体意欲包括与药物给药相容的任何和所有的溶剂、分散介质、包衣、抗细菌和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂等。本领域中已知此类介质和试剂用于药学活性物质的用途。除非任何常规介质或试剂与活性化合物不相容，考虑其用于组合物中。补充的活性化合物(根据本公开鉴定或设计和/或本领域中已知)也可并入组合物中。制剂可方便地以剂量单元形式呈现，且可通过药学/微生物学领域中众所周知的任何方法来制备。通常，一些制剂通过使所述化合物与液态载体或细分的固体载体或两者结合来制备，且然后，如果需要，将产物成形为所需制剂。

本公开的药物组合物应当配制为可与其预期给药途径相容。给药途径的实例包括口服或胃肠外，例如静脉内、皮内、吸入和经粘膜给药。用于肠胃外、真皮内或皮下应用的溶液或悬浮液可包括以下组分：无菌稀释剂，诸如注射用水、盐水溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗细菌剂，诸如苄醇或羟苯甲酸甲酯；抗氧化剂，诸如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，诸如乙二胺四乙酸；缓冲剂，诸如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，以及用于调节张性(tonicity)的试剂，诸如氯化钠或右旋糖。可以用酸或碱，诸如盐酸或氢氧化钠来调节pH。

用于口服或胃肠外给药的有用的溶液可以通过药学领域中众所周知的任何方法来制备，所述方法描述于，例如，Remington′s Pharmaceutical Sciences，第18版(MackPublishing Company，1990)中。胃肠外制剂可封装于安瓿、一次性注射器或由玻璃或塑料制成的多剂量小瓶中。制剂还可包括，例如，聚亚烷基二醇类，诸如聚乙二醇、植物来源的油和氢化萘。用于这些药物的其它可能有用的胃肠外载体包括乙烯-乙酸乙烯酯共聚物颗粒、渗透泵、可植入输液***和脂质体。

适合于口服给药的本公开的制剂可为以下形式：离散单元，诸如胶囊、明胶胶囊、小药囊(sachets)、片剂、***片(troches)或锭剂(lozenges)，其各自含有预定量的药物；粉末或颗粒状组合物；以水性液体或非水性液体的溶液或悬浮液；或水包油乳液或油包水乳液。药物还可以大丸剂(bolus)、药糖剂或糊剂的形式给药。片剂可通过将药物任选地与一种或多种辅剂成分压制或模制来制备。压制片剂可通过在合适的机器中压制任选地与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、表面活性剂或分散剂混合的自由流动形式(诸如粉末或颗粒)的药物来制备。模制片剂可通过在合适的机器中模制用惰性液体稀释剂润湿的粉末状药物和合适的载体的混合物来制备。

口服组合物通常包括惰性稀释剂或可食用的载体。为了口服治疗给药的目的，活性化合物可以并入赋形剂。药学上相容的粘合剂、和/或辅料可作为组合物的一部分被包括。片剂、丸剂(pills)、胶囊、***片等可含有以下成分或类似性质的化合物中任一种：粘合剂，诸如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂，诸如淀粉或乳糖；崩解剂，诸如海藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂，诸如硬脂酸镁或Sterotes；助流剂，诸如胶体二氧化硅；甜味剂，诸如蔗糖或糖精；或调味剂，诸如胡椒薄荷、水杨酸甲酯或橙调味剂。

适合于可注射使用的药物组合物包括无菌水溶液(在可溶于水的情况下)或分散体和用于临时制备无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。对于静脉内给药，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、Cremophor ELTM(BASF，Parsippany，N.J.)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。其在制造和储存条件下应当是稳定的，并应当被保存免于微生物诸如细菌和真菌的污染作用。载体可以是含有，例如，水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)，以及它们的合适的混合物的溶剂或分散介质。可以，例如，通过使用包衣诸如卵磷脂、在分散体的情况下通过维持所需的粒径和通过使用表面活性剂来维持适当的流动性。在许多情况下，将优选在组合物中包括等渗剂，例如，糖类、多元醇类诸如甘露糖醇、山梨糖醇、和/或氯化钠。可通过在组合物中包括延缓吸收的试剂例如，单硬脂酸铝和明胶来致使可注射组合物的延长吸收。

无菌可注射溶液可以通过如下来制备：在适当溶剂中并入所需量的活性化合物与以上列举的成分中的一种或组合，如所需，随后进行过滤除菌。通常，分散体通过如下来制备：将活性化合物并入无菌媒介物中，所述无菌媒介物含有基础分散介质和来自以上列举的那些的所需的其它成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，制备方法包括真空干燥和冷冻干燥，其产生来自其先前无菌过滤的溶液的活性成分加上任何额外所需成分的粉末。

适合于关节内给药的制剂可以是药物的无菌水性制备物的形式，其可以是微晶形式，例如，呈水性微晶悬浮液的形式。脂质体制剂或生物可降解的聚合物体系也可用于呈现用于关节内给药和眼部给药两者的药物。

全身给药也可以通过经粘膜或经皮方式。对于经粘膜或经皮给药，在制剂中使用适合于渗透屏障的渗透剂。此类渗透剂通常是本领域已知的，并且包括，例如，用于经粘膜给药的去垢剂和胆汁盐。经粘膜给药可以通过使用鼻喷剂或栓剂来完成。对于经皮给药，通常将活性化合物配制成如本领域通常已知的软膏剂、软膏(salves)、凝胶剂或霜剂。

活性化合物可以用将保护化合物免于从身体快速清除的载体来制备，诸如受控释放制剂，包括植入物和微囊化递送***。可以使用生物可降解的、生物相容的聚合物，诸如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐类、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯类和聚乳酸。用于制备此类制剂的方法对于本领域技术人员将是显而易见的。脂质体悬浮液也可用作药学上可接受的载体。这些可根据本领域技术人员已知的方法来制备，所述方法例如，如美国专利号4,522,811中所述。

为了给药的容易和剂量的一致性，口服或胃肠外组合物可以剂量单元形式来配制。剂量单元形式是指适合作为单一剂量用于待治疗的受试者的物理离散单元；各单元含有预定量的活性化合物，所述预定量被计算为与所需的药物载体结合以产生所需治疗效果。本公开的剂量单元形式的规格由以下规定并直接取决于以下：活性化合物的独特特性和待实现的具体治疗效果、以及混合用于治疗个体的此类活性化合物的技术中固有的限制。另外，给药可通过定期注射大丸剂来实现、或可通过来自外部储器(例如，静脉内袋)的静脉内、肌内或腹膜内给药而使得更连续。

在活性化合物待用作移植程序的一部分的情况下，可在从供体移除组织或器官之前将活性化合物提供给待移植的活组织或器官。可将化合物提供给供体宿主。可替代地或，除此以外，一旦从供体移除，就可将器官或活组织置于含有活性化合物的储存溶液中。在所有情况下，使用本文描述的和/或本领域已知的任何方法和制剂，可将活性化合物直接给药至所需组织，如通过向组织注射，或可通过口服或胃肠外给药将其全身提供。在所述药物包含组织或器官储存溶液的一部分的情况下，可有利地使用任何市售的储存溶液。例如，本领域已知的有用的溶液包括Collins溶液、Wisconsin溶液、Belzer溶液、Eurocollins溶液和乳酸盐化的林格氏溶液。

通过本文所述的方法鉴定或设计的活性化合物可以给药至个体以(预防性或治疗性)治疗病症。连同此类治疗，可考虑药物基因组学(即个体的基因型和该个体对于外来化合物或药物的响应之间的关系的研究)。治疗学的代谢差异可通过改变药理学活性药物的剂量和血液浓度之间的关系来导致严重的毒性或治疗失败。因此，内科医师或临床医师在确定是否给药药物以及调整用药物治疗的剂量和/或治疗方案时可考虑应用在相关的药物基因组学研究中获得的知识。

在用于治疗、预防或抵抗受试者中的神经退行性的治疗用途中，所述化合物或其药物组合物将以一定剂量口服或肠胃外给药以获得和维持浓度，即在经历治疗的动物中将有效的活性组分的量或血液水平或组织水平。术语“有效量”被理解为意味着本公开的化合物以足以引发生物活性(例如，抑制LRRK2激酶活性)的量存在于受体中或受体上。通常，活性组分的剂量的有效量将在约0.1至约100mg/kg体重/天的范围内，更优选在约1.0至约50mg/kg体重/天的范围内。给药的量将也可能取决于诸如以下的变量：待治疗的疾病或适应症的类型和程度、特定患者的总体健康状况、递送的化合物的相对生物效力、药物的制剂、制剂中的赋形剂的存在和类型，以及给药途径。此外，应当理解，可以增加给药的初始剂量超出上述上限水平，以快速实现所需血液水平或组织水平，或初始剂量可以小于最佳量，并且每日剂量可以根据具体情况在治疗过程期间进行性增加。如果需要，每日剂量也可以分为多个剂量用于给药，例如每天两至四次。

实施例

一般合成方法

所有反应都通过具有0.25mm E的薄层色谱法(TLC)监测。使用SunFire^TMC18柱(4.6x 50mm，5μm粒径)的Merck预包被的硅胶板(60F₂₅₄)和Waters LCMS***(Waters2489UV/Visible Detector，Waters 3100Mass，Waters 515HPLC泵，Waters 2545二元梯度模块，Waters Reagent Manager，Waters 2767Sample Manager)：溶剂梯度＝在0min 100％A，在5min 1％A；溶剂A＝0.035％TFA/水；溶剂B＝0.035％TFA/MeOH；流速：2.5mL/min.反应产物的纯化通过快速色谱法使用具有Teledyne Isco

Rf High Performance Gold或Silicycle SiliaSep^TMHigh Performance柱(4g、12g、24g、40g或80g)的

Rf实施。所有化合物的纯度均超过95％，并用Waters LCMS***进行分析。¹H NMR和¹³C NMR光谱使用Varian Inova-400(对于¹H，400MHz，且对于¹³C，75MHz)光谱仪获得。相对于氯仿(δ＝7.24)(对于¹H NMR)或二甲亚砜(δ＝2.50)(对于¹H NMR)和二甲亚砜(δ＝39.51)(对于¹³CNMR)报告化学位移。数据被报告为(br＝宽峰，s＝单峰，d＝双峰，t＝三重峰，q＝四重峰，m＝多重峰)。表5的化合物根据上述方法合成。

实施例1

(4-((5-氯-4-(甲基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)(吗啉代)甲酮(18)的合成

化合物18根据方案1且如下所详述合成。

实施例1.1：7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2，4-二醇

在70-75℃的温度下向6-氨基尿嘧啶(12.7g，100mmol)和乙酸钠(8.2g，100mmol)于H₂O(100mL)中的悬浮溶液中添加氯乙醛的溶液(50％，在水中，23.6g，150mmol)。将所得反应混合物在80℃下搅拌20分钟，然后冷却至室温。将所得固体通过过滤收集，用水和丙酮洗涤，并在真空中干燥，以得到作为浅棕色固体的标题化合物(14.74g，98％产率)。

¹H NMR(DMSO-d₆，400NHz)δ11.38(br，1H)，11.10(br，1H)，10.46(s，1H)，6.53(s，1H)，6.18(s，1H)，MS mz152.43[M+1].

实施例1.2：2，4-二氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶

在室温下将POCl₃(229mmol)缓慢添加至11.5g 7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2，4-二醇(76mmol)于甲苯(60mL)中的悬浮液。将反应混合物加热至70℃，并经2小时(hr)的时段逐滴添加26.5mL N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)(153mmol)，此时反应温度增加至106℃并将混合物搅拌过夜。冷却至室温之后，将反应混合物倒入200mL EtOAc和300mL冰水的混合物中，然后过滤通过硅藻土。水层用EtOAc(3x 200mL)萃取，并将合并的有机层用盐水洗涤，用活性炭脱色，过滤通过硅藻土并浓缩，以得到标题化合物。MS m/z 189.64[M+1]。

实施例1.3：2，4，5-三氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶

向2，4-二氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(2.0g，10.64mmol)于二氯甲烷/四氢呋喃(DCM/THF)(15mL/6mL)中的溶液中添加NCS(1.70g，12.76mmol)。将混合物在微波照射下加热至90℃持续2.5小时。在真空中去除溶剂，并将粗产物通过快速柱色谱法使用9∶1v/v己烷∶乙酸乙酯纯化，以得到作为白色结晶固体的标题化合物(2.2g，93％产率)。MS m/z 223.48[M+1]。

实施例1.4：2，4，5-三氯-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶

在0℃下向2，4，5-三氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(2.0g，8.99mmol)于N，N-二甲基甲酰胺(30mL)中的溶液中添加氢化钠(60％，432mg，10.78mmol)。使反应混合物搅拌30分钟，此时之后添加2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯(1.91mL，10.78mmol)。将反应混合物在室温下进一步搅拌3小时的时段，此时之后添加水，并将所得混合物搅拌20分钟。将所得沉淀物过滤并干燥，以得到作为棕色固体的标题化合物(2.85g，90％产率)。MS m/z 353.84[M+1]。

实施例1.5：2，5-二氯-N-甲基-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺

向2，4，5-三氯-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(1g，2.8mmol)于MeOH(15mL)中的溶液中添加33％甲胺于MeOH中的溶液(0.29mL，3.11mmol)。将混合物加热至70℃持续1小时，随后冷却至室温，此时在真空中去除溶剂，并将粗产物通过快速柱色谱法使用9∶1v/v己烷∶乙酸乙酯纯化，以得到作为白色固体的标题化合物(916mg，93％产率)。MS m/z 348.08[M+1]。

实施例1.6：(4-((5-氯-4-(甲基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)(吗啉代)甲酮(18)

向2，5-二氯-N-甲基-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(100mg，0.28mmol)于仲丁醇(5mL)中的溶液中添加(4-氨基-3-甲氧基苯基)(吗啉代)甲酮(82mg，0.35mmol)和K₂CO₃(77.4mg，0.56mmol)。将反应混合物脱气5分钟，然后添加Pd₂(dba)₃(三(二亚苄基丙酮)二钯(0))(15.4mg，0.017mmol)和2-二环己基膦基-2′，4′，6′-三异丙基联苯(12mg，0.025mmol)。将反应烧瓶在90℃下搅拌6小时。冷却至室温之后，将反应混合物过滤通过硅藻土垫，并分配于乙酸乙酯和水之间。分离有机层，并用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并浓缩。将粗产物溶解于DCM(10mL)中，并添加TFA(2mL)。将所得混合物在50℃下搅拌3小时，然后在真空中去除溶剂。将粗物质溶解于THF(10mL)中，并添加NaHCO₃的饱和溶液(10mL)，并将所得混合物搅拌6小时。将混合物用乙酸乙酯萃取，并将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并浓缩。通过HPLC纯化，得到作为棕色固体的标题化合物(68mg，58％产率)。

¹H NMR400MHz(DMSO-d₆)δ11.43(br，1H)，8.62(d，J＝4Hz，1H)，7.44(s，1H)，7.03(m，1H)，6.6(m，1H)，3.95(s，3H)，3.62-3.5(m，8H)，2.48(s，3H)，¹³C NMR100MHz(DMSO-d₆)δ169.65，156.91，150.37，146.98，131.83，127.29，120.39，116.70，116.43，110.00，102.03，95.63，66.59，56.42，28.17，MS mz：417.34[M+1].

实施例2

(3-甲氧基-4-((4-甲氧基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯基)(吗啉代)甲酮(9)的合成

实施例2.1：2-氯-4-甲氧基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶

向2-氯-4-甲氧基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(1g，5.4mmol)于MeOH(15mL)的溶液中添加33％甲胺于MeOH中的溶液(0.56mL，5.9mmol)。将混合物加热至70℃持续1小时，随后冷却至室温，此时在真空中去除溶剂，并将粗产物通过快速柱色谱法使用9∶1v/v己烷∶乙酸乙酯作为溶剂纯化，以得到965mg作为白色固体的标题化合物(95％产率)。MS m/z 184.08[M+1]。

实施例2.2：(4-((5-氯-4-甲氧基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)(吗啉代)甲酮(9)

向2-氯-4-甲氧基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(100mg，0.54mmol)于仲丁醇(5mL)中的溶液中添加(4-氨基-3-甲氧基苯基)(吗啉代)甲酮(154mg，0.65mmol)和K₂CO₃(150mg，1.08mmol)。将反应混合物脱气5分钟，然后添加Pd₂(dba)₃(30mg，0.032mmol)和2-二环己基膦基-2′，4′，6′-三异丙基联苯(23mg，0.049mmol)。将反应烧瓶在110℃下搅拌8小时。冷却至室温之后，将反应混合物过滤通过硅藻土垫，并分配于乙酸乙酯和水之间。分离有机层，并用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并浓缩。通过HPLC纯化，得到作为棕色固体的标题化合物(64mg，31％产率)。

¹H NMR 400MHz(DMSO-d₆)δ11.58(br，1H)，8.58(d，J＝7Hz，1H)，7.67(m，1H)，7.07-6.99(m，2H)，6.34-6.31(m，1H)，4.01(s，1H)，3.92(s，3H)，2.52(s，1H)2.51-2.46(m，8H)MSmz：384.58[M+1].

实施例3

(3-甲氧基-4-((4-(甲基氨基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)(吗啉代)甲酮(23)的合成

化合物23根据方案2且如下进一步所述合成。

实施例3.1：2，4，6-三氯嘧啶-5-甲醛

在0℃下将DMF(12mL)逐滴添加至POCl₃(75mL，800mmol)中，随后将巴比妥酸(15g，118mmol)逐批添加至混合物中。将所得混合物在120℃下搅拌16小时。在真空中去除过量POCl₃，并将所得残余物逐渐倒入冰水中。将混合物用DCM萃取，并将有机层用饱和NaHCO₃溶液洗涤，干燥并浓缩，以得到作为黄色固体的标题化合物(19.0g，77％产率)。

¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ10.45(s，1H).MS m/z212.81[M+1].

实施例3.2：4，6-二氯-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶

向2，4，6-三氯嘧啶-5-甲醛(19.0g，990mmol)于甲醇(300mL)中的溶液中在0℃下逐滴添加一水合肼(4.8mL)于甲醇(80mL)中的溶液，随后在0℃下逐滴添加三乙胺(13mL)/甲醇(80mL)。将混合物在相同温度下搅拌30分钟。去除溶剂，并将残余物通过快速色谱法纯化，以得到作为黄色固体的标题化合物(10.3g，62％产率)。

¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ11.56(br，1H)8.43(s，1H).MS mz190.68[M+1].

实施例3.3：6-氯-N-甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺

向4，6-二氯-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(1g，5.29mmol)于MeOH(15mL)的溶液中添加33％甲胺于MeOH中的溶液(0.55mL，5.89mmol)。将混合物加热至70℃持续1小时，随后冷却至室温。将所得沉淀物过滤，用冰冷的MeOH洗涤并干燥，以得到作为白色固体的标题化合物(874mg，90％产率)。MS m/z184.73[M+1]。

实施例3.4：3-甲氧基-4-((4-(甲基氨基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)(吗啉代)甲酮(23)

向6-氯-N-甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(100mg，0.54mmol)于仲丁醇(5mL)中的溶液中添加(4-氨基-3-甲氧基苯基)(吗啉代)甲酮(154mg，0.65mmol)和K₂CO₃(150mg，1.08mmol)。将反应混合物脱气5分钟，然后添加Pd₂(dba)₃(30mg，0.032mmol)和2-二环己基膦基-2′，4′，6′-三异丙基联苯(23mg，0.049mmol)。将反应烧瓶在110℃下搅拌8小时。冷却至室温之后，将反应混合物过滤通过硅藻土垫，并分配于乙酸乙酯和水之间。分离有机层，并用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并浓缩。通过HPLC纯化，得到作为棕色固体的标题化合物(64mg，31％产率)。

¹H NMR400MHz(CD₃OD)δ8.18(m，1H)，8.10(br，1H)，8.02(m，1H)，7.83(m，1H)，7.58(m，1H)，7.20(m，1H)，6.86(m，1H)，4.05(m，1H)，3.97(s，3H)，3.80(m，2H)，3.50(m，2H)，2.20(m，2H)，1.98(m，2H)，1.18(d，J＝6.6Hz，6H)，MS mz：384.63[M+1].

实施例4

(3-甲氧基-4-((4-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)(吗啉代)甲酮(24)的合成

实施例4.1：6-氯-4-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶

向6-氯-4-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(1g，5.29mmol)于MeOH(15mL)的溶液中添加25％NaOMe于MeOH中的溶液(1.26mL，5.89mmol)。将混合物加热至80℃持续1小时，随后冷却至室温。将所得沉淀物过滤，用冰冷的MeOH洗涤并干燥，以得到作为白色固体的标题化合物(910mg，92％产率)。MS m/z 185.46[M+1]。

实施例4.2：(3-甲氧基-4-((4-甲氧基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)(吗啉代)甲酮(24)

向6-氯-4-甲氧基-1H-唑并[3，4-d]嘧啶(100mg，0.54mmol)于仲丁醇(5mL)中的溶液中添加(4-氨基-3-甲氧基苯基)(吗啉代)甲酮(154mg，0.65mmol)和K₂CO₃(150mg，1.08mmol)。将反应混合物脱气5分钟，然后添加Pd₂(dba)₃(30mg，0.032mmol)和2-二环己基膦基-2′，4′，6′-三异丙基联苯(23mg，0.049mmol)。将反应烧瓶在110℃下搅拌8小时。冷却至室温之后，将反应混合物过滤通过硅藻土垫，并分配于乙酸乙酯和水之间。分离有机层，并用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并浓缩。通过HPLC纯化，得到58mg作为浅棕色固体的标题化合物(28％产率)。

¹H NMR400MHz(DMSO-d₆)δ13.31(br，1H)，8.39(d，J＝4Hz，1H)，7.98(d，J＝8Hz，1H)7.01(m，2H)，4.05(s，3H)，3.98(s，3H)，2.46(m，8H)，MS mz：385.23[M+1].

实施例5

(3-甲氧基-4-((6-(甲基氨基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯基)(吗啉代)甲酮(21)的合成

化合物21根据方案2且如下所详述合成。

实施例5.1：2-氯-N-甲基-9H-嘌呤-6-胺

向2，6-二氯-9H-嘌呤(1g，5.29mmol)于MeOH(15mL)的溶液中添加33％甲胺于MeOH中的溶液(0.55mL，5.89mmol)。将混合物加热至70℃持续1小时，随后冷却至室温。将所得沉淀物过滤，用冰冷的MeOH洗涤并干燥，以得到880mg作为白色固体的标题化合物(92％产率)。MS m/z184.73[M+1]。

实施例5.2：(3-甲氧基-4-((6-(甲基氨基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯基)(吗啉代)甲酮(21)

向2-氯-N-甲基-9H-嘌呤-6-胺(100mg，0.54mmol)于仲丁醇(5mL)中的溶液中添加(4-氨基-3-甲氧基苯基)(吗啉代)甲酮(154mg，0.65mmol)和K₂CO₃(150mg，1.08mmol)。将反应混合物脱气5分钟，然后添加Pd₂(dba)₃(30mg，0.032mmol)和2-二环己基膦基-2′，4′，6′-三异丙基联苯(23mg，0.049mmol)。将反应烧瓶在110℃下搅拌8小时。冷却至室温之后，将反应混合物过滤通过硅藻土垫，并分配于乙酸乙酯和水之间。分离有机层，并用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并浓缩。通过HPLC纯化，得到70mg作为浅棕色固体的标题化合物(35％产率)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.39(d，J＝9Hz，1H)，8.06(s，1H)，7.06-7.02(m，1H)，6.98(d，J＝3Hz，1H)，3.85(s，1H)，2.47(s，3H)，2.45-2.51(m，8H)，MS mz384.19[M+1].

实施例6

(3-甲氧基-4-((6-甲氧基-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯基)(吗啉代)甲酮(22)的合成

实施例6.1：2-氯-6-甲氧基-9H-嘌呤

向2，6-二氯-9H-嘌呤(1g，5.29mmol)于MeOH(15mL)的溶液中添加25％NaOMe于MeOH中的溶液(1.26mL，5.89mmol)。将混合物加热至80℃持续1小时，随后冷却至室温。将所得沉淀物过滤，用冰冷的MeOH洗涤并干燥，以得到920mg作为白色固体的标题化合物(94％产率)。MS m/z 185.36[M+1]。

实施例6.2：(3-甲氧基-4-((6-甲氧基-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯基)(吗啉代)甲酮(22)

向2-氯-6-甲氧基-9H-嘌呤(100mg，0.54mmol)于仲丁醇(5mL)中的溶液中添加(4-氨基-3-甲氧基苯基)(吗啉代)甲酮(154mg，0.65mmol)和K₂CO₃(150mg，1.08mmol)。将反应混合物脱气5分钟，然后添加Pd₂(dba)₃(30mg，0.032mmol)和2-二环己基膦基-2′，4′，6′-三异丙基联苯(23mg，0.049mmol)。将反应烧瓶在110℃下搅拌8小时。冷却至室温之后，将反应混合物过滤通过硅藻土垫，并分配于乙酸乙酯和水之间。分离有机层，并用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并浓缩。通过HPLC纯化，得到作为浅棕色固体的标题化合物(50mg，24％产率)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.46(d，J＝9Hz，1H)，8.01(s1H)，7.89(s，1H)，7.04(m，1H)，4.03(s，3H)，3.96(s，3H)，2.48-2.40(m，8H)，MS m/z385.62[M+1].

实施例7

以下示例性化合物根据方案3且如下所详述合成。

(4-((3-氯-7-(甲基氨基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)氨基)-3-甲氧基苯基)(吗啉代)甲酮的合成

实施例7.1：5，7-二氯吡唑并[1，5-a]嘧啶

将POCl₃(130mL)添加至吡唑并[1，5-a]嘧啶-5，7-二醇(10g，66mmol)中。将悬浮液冷却至0℃，并缓慢添加N，N-二甲基苯胺(23mL，179mmol)。温热至室温之后，将反应物在60℃下在N₂下加热16小时。冷却后，将反应混合物在真空中浓缩，以得到棕色粘性液体，将其缓慢倒入冰上，并使其温热至室温。将pH用饱和NaHCO₃调节至pH～8。然后将有机层用CH₂Cl₂(4x 50mL)萃取，干燥(MgSO₄)，并在真空中浓缩，以得到棕色液体。通过快速柱色谱法使用1∶1v/v DCM∶己烷至2∶1v/v DCM∶己烷纯化，得到作为白色结晶固体的标题化合物(10.7g，86％产率)。MS m/z 189.36[M+1]。

实施例7.2：3，5，7-三氯吡唑并[1，5-a]嘧啶

向5，7-二氯吡唑并[1，5-a]嘧啶(2.0g，10.64mmol)于CHCl₃(15mL)中的溶液中添加NCS(1.70bg，12.76mmol)。将混合物在微波照射下加热至90℃持续2.5小时。在真空中去除溶剂，并将粗产物通过快速柱色谱法使用9∶1v/v己烷∶乙酸乙酯纯化，以得到作为白色结晶固体的标题化合物(2.0g，90％产率)。MS m/z 223.76[M+1]。

实施例7.3∶3，5-二氯-N-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺

向3，5，7-三氯吡唑并[1，5-a]嘧啶(1g，4.5mmol)于MeOH(15mL)的溶液中添加33％甲胺于MeOH中的溶液(0.47mL，4.95mmol)。将混合物加热至70℃持续1小时，随后冷却至室温。将所得沉淀物过滤，用冰冷的MeOH洗涤并干燥，以得到作为白色固体的标题化合物(859mg，88％产率)。MS m/z 218.43[M+1]。

实施例7.4：(4-((3-氯-7-(甲基氨基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)氨基)-3-甲氧基苯基)(吗啉代)甲酮

向3，5-二氯-N-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺(100mg，0.46mmol)于仲丁醇(5mL)中的溶液中添加(4-氨基-3-甲氧基苯基)(吗啉代)甲酮(130mg，0.55mmol)和K₂CO₃(127mg，0.92mmol)。将反应混合物脱气5分钟，然后添加Pd₂(dba)₃(25mg，0.028mmol)和2-二环己基膦基-2′，4′，6′-三异丙基联苯(20mg，0.0414mmol)。将反应烧瓶在100℃下搅拌6小时。冷却至室温之后，将反应混合物过滤通过硅藻土垫，并分配于乙酸乙酯和水之间。分离有机层，并用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并浓缩。通过HPLC纯化，得到作为浅棕色固体的标题化合物(84mg，44％产率)。

实施例7.5：(4-((3，5-二氯吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基)氨基)-3-甲氧基苯基)吗啉代)甲酮

向3，5，7-三氯吡唑并[1，5-a]嘧啶(0.5g，2.3mmol)于THF(15mL)中的溶液中添加(4-氨基-3-甲氧基苯基)(吗啉代)甲酮(637mg，2.7mmol)，随后添加KOt-Bu(2.7mL，2.7mmol)。将混合物加热至70℃持续1小时，随后冷却至室温。将反应物用水淬灭，用乙酸乙酯萃取，经(MgSO₄)干燥，并浓缩，以得到浅棕色固体，其不经进一步纯化即使用。MS m/z423.23[M+1]。

实施例7.6：(4-((3-氯-5-(甲基氨基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基)氨基)-3-甲氧基苯基)(吗啉代)甲酮

向(4-((3，5-二氯吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基)氨基)-3-甲氧基苯基)吗啉代)甲酮(100mg，0.23mmol)于MeOH(5mL)中的溶液中添加33％甲胺于MeOH中的溶液(0.11mL，1.15mmol)。将混合物加热至90℃持续1小时，随后冷却至室温。在真空中去除溶剂，并将粗物质通过柱色谱法使用DCM/MeOH 10∶1纯化，以得到作为白色固体的标题化合物(71mg，74％产率)。MSm/z 417.43[M+1]。

实施例8：本公开的化合物的表征

试剂、生物材料和一般方法

组织培养试剂来自Life Technologies。P81磷酸纤维素纸来自Whatman且[γ-32P]-ATP来自Perkin Elmer。Nictide和LRRKtide由Pepceuticals合成。蛋白G琼脂糖来自Amersham。使用Qiagen或Invitrogen质粒Maxi试剂盒根据制造商的方案从大肠杆菌DH5α中纯化用于转染的DNA构建体。所有DNA构建体都通过DNA测序进行验证，所述DNA测序通过TheSequencing Service，School of Life Sciences，University of Dundee，Scotland，U.K.使用DYEnamic ET终止化学(Amersham Biosciences)在Applied Biosystems自动化DNA测序仪上进行。

细胞培养、处理和细胞裂解

将HEK293和Swiss 3T3细胞在补充有10％FBS(胎牛血清)、2mM谷氨酰胺和1×青霉素/链霉素溶液的DMEM(Dulbecco氏改良的Eagle氏培养基)中培养。将HEK-293T-Rex细胞系在补充有10％(v/v)FBS和2mM谷氨酰胺、1×青霉素/链霉素溶液、15μg/ml blastocidin和100μg/ml潮霉素的DMEM中培养。通过在培养基中包括0.1μg/ml多西环素24-48小时来诱导T-Rex培养物以表达所示蛋白。将人类淋巴母细胞在具有10％FBS、2mM谷氨酰胺、1×青霉素/链霉素溶液的RPMI1640中维持，并以0.3×10⁶-2×10⁶个细胞/ml的细胞密度维持。来自一个对照受试者和LRRK2[G2019S]突变纯合的一个帕金森氏疾病患者的EB病毒永生化的原代人类淋巴母细胞由Alastair Reith(GSK)友好提供并且先前已经描述。对于抑制剂实验，将化合物18和/或LRRK2-IN-1溶解于DMSO中并以所示浓度利用。培养基中DMSO的浓度不超过1％。处理后，将细胞用PBS洗涤一次，并用含有50mM Tris/HCl(pH7.5)、1mM EGTA、1mMEDTA、1mM原钒酸钠、10mM β-甘油磷酸钠、50mM NaF、5mM焦磷酸钠、0.27M蔗糖、1mM苄脒、2mM苯基甲磺酰氟(PMSF)和1％Triton X-100的缓冲液裂解。

当不立即使用时，将所有裂解物上清液在液氮中快速冷冻并储存在-80℃，直至使用。在4℃下以16,000x g离心裂解物20分钟后使用Bradford方法以BSA作为标准品测定蛋白浓度。HEK293细胞的瞬时转染使用PEI方法进行。

IC₅₀测定

在适当cDNA构建体的瞬时转染后36小时，用谷胱甘肽琼脂糖从HEK293细胞裂解物纯化活性GST-LRRK2(1326-2527)、GST-LRRK2[G2019S](1326-2527)、GST-LRRK2[A2016T](1326-2527)和GST-LRRK2[A2016T+G2019S](1326-2527)酶。将以一式三份进行的肽激酶测定设置在含有50mM Tris/HCl(pH7.5)、0.1mM EGTA、10mM MgCl₂、20μ M Nictide、0.1μM[γ-32P]ATP(～500cpm/pmol)中的0.5μg LRRK2激酶(其在约10％纯度得到8nM的最终浓度)和所示浓度的溶解于DMSO中的抑制剂的40μl的总体积中。在30℃下孵育15分钟之后，通过将35μl反应混合物点样至P81磷酸纤维素纸上并浸入50mM磷酸中来终止反应。将样品充分洗涤，并通过Cerenkov计数定量[γ-32P]ATP掺入Nictide中。用GraphPad Prism使用非线性回归分析计算IC₅₀值。

免疫印迹程序

将来自Swiss 3T3细胞、人类淋巴母细胞细胞、表达GFP-LRRK2的稳定细胞系和小鼠组织的细胞裂解液以1μg/μl的最终浓度洗脱于65μl 2x LDS样品缓冲液(Invitrogen)中。在70℃下加热10分钟后，将15μl等分试样在8％SDS聚丙烯酰胺凝胶上分离，并转移至硝酸纤维素膜上，用于使用含有0.1％叠氮化钠(Epitomics)的PBS中的纯化的兔单克隆抗体(LRRK2磷酸-丝氨酸910克隆、LRRK2磷酸-丝氨酸935克隆和LRRK2 100-500克隆)检测在Ser910磷酸化的LRRK2、在Ser935磷酸化的LRRK2和总LRRK2。在Epson 4990扫描仪上扫描免疫印迹膜，并使用Adobe Photoshop管理图像。

实施例9：(18)的分子对接研究

基于Roco激酶(PDB登录号：4F1T)的晶体结构研究化合物18的分子对接研究，其揭示与骨架M1949、A1950和吡咯并嘧啶之间的铰链区域的三个氢键。此外，对接研究证实与M1947和吡咯并嘧啶的5-位的氯的卤素相互作用，如图1中所示。

实施例10：与LRRK2-IN-1相比的化合物的进一步评估

进一步评估了与LRRK2-IN-1相比在细胞环境中显示在酶促测定中抑制LRRK2的最大功效的双环化合物。由于没有验证的LRRK2的直接磷酸化底物，监测Ser910和Ser935(已知其磷酸化依赖于LRRK2激酶活性的两个残基)的磷酸化。化合物18作为最有效的化合物出现，并且在稳定转染至HEK293细胞中的野生型LRRK2和LRRK2[G2019S]两者中诱导Ser910和Ser935磷酸化的剂量依赖性抑制，如图2A和图2B中所示。对于野生型LRRK2和LRRK2[G2019S]，在约0.3μM浓度的化合物18下观察到Ser910和Ser935的实质性去磷酸化，其为与对LRRK2-IN-1观察到的功效相似的功效。与生物化学结果一致，化合物18还以约0.3μM至约1μM的浓度诱导抗药性LRRK2[A2016T+G2019S]和LRRK2[A2016T]突变体中的Ser910和Ser935的去磷酸化，揭示A2016T突变不是诱导对化合物18的抗性的有效途径。

然后检查化合物18对衍生自对照和LRRK2[G2019S]突变纯合的帕金森氏病患者的人类淋巴母细胞中的内源表达的LRRK2的作用。结果显示于图3A中。如图2A和图2B与图3A的比较所示，增加(18)的剂量导致内源LRRK2在Ser910和Ser935处的类似去磷酸化，如在稳定表达野生型LRRK2或LRRK2[G2019S]的HEK293细胞中所观察到的那样。与HEK293细胞中观察到的趋势一致，内源LRRK2对化合物18也比LRRK2-IN-1更敏感。化合物18在小鼠Swiss 3T3细胞中诱导内源LRRK2的类似的剂量依赖性Ser935去磷酸化，如图3B中所示。计算(18)针对野生型LRRK2、G2019S、A2016T和G2019S+A2016T突变体的IC50，其显示与已知化合物相比，化合物18针对所有突变体的效力增加(图3C)。

实施例11：小鼠中的(18)的药代动力学研究

将化合物18溶解于5％1-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)/95％PEG 300(Sigma)溶液中，并通过腹膜内注射以0、3、10、30、50和100mg/kg的剂量给药至野生型雄性C57BL/6小鼠中，并且以100mg/kg LRRK2-IN-1作为比较对照。对照小鼠用等体积的NMP/PEG溶液处理。给药后1小时，通过颈脱位法处死小鼠，并迅速解剖肾脏、脾脏和脑组织，并在液氮中快速冷冻。动物实验由邓迪大学伦理委员会(University of Dundee Ethics Committee)批准，并在英国内政部项目许可下进行。

如表5中所示，化合物18的小鼠药代动力学曲线表明在10mg/kg p.o.给药后良好的口服生物利用度(116％F)、0.66小时的半衰期和3094.58(hr*ng/mL，AUC_最后)的血浆暴露。另外，2mg/kg i.v.给药后，化合物18显示532.67(hr*ng/mL，AUC_最后)的血浆暴露和239.31(hr*ng/mL，AUC_最后)的脑暴露，其等于0.45的脑/血浆浓度比。

如图4中所示，通过监测腹膜内递送100mg/kg的化合物18和GNE7915后小鼠肾、脾和脑中LRRK2Ser910/Ser935磷酸化的抑制，将化合物18的药代动力学特性与GNE7915的药代动力学特性进行比较。对于两种化合物，在该剂量下，在所有组织(包括脑)中都观察到LRRK2的Ser935的接近完全去磷酸化。然后以50、30和10mg/kg的较低剂量的(18)和GNE7915重复该研究。用化合物18，在30mg/kg观察到所有组织中的接近完全抑制，但仅在10mg/kg剂量下在脑中观察到部分抑制。然而，用GNE7915，仅在100mg/kg下观察到脑中的完全抑制。不希望受理论束缚，这些结果表明(18)是用于实现脑中的Ser935的去磷酸化的有希望的化学类型。

表5：化合物18的药代动力学参数

^aC_o，i.v.组的反外推浓度

^bAUC_最后被考虑用于计算生物利用度。

实施例12：邓迪曲线分析

(18)的激酶选择性进一步使用针对138种激酶的组的标准放射性基础酶促测定进行评价(邓迪曲线分析)。在1μM的浓度下，化合物18仅将SmMLCK和CHK2的激酶活性抑制至DMSO对照的大于90％。剂量-响应分析揭示以81.3nM的IC₅₀抑制SmMLCK且以27.6nM的IC₅₀抑制CHK2。不希望受理论束缚，表6中显示的结果显示相对于DMSO对照的剩余酶促活性百分比，且表明化合物18是高度选择性的LRRK2抑制剂。

表6

实施例13：化合物18的激酶选择性的进一步评估

化合物18的激酶选择性通过KinomeScan进一步评估。在1μM的浓度下针对451种激酶的接近综合组的KinomeScan分析导致没有检测到与除LRRK2[G2019S]以外的激酶的相互作用，除了TTK和RPS6KA4，表明该抑制剂的突出选择性。表7和图5中显示的这些结果表明(18)是高度选择性的LRRK2抑制剂。

表7

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