CN106536503B - 一种酪氨酸激酶抑制剂及其用途 - Google Patents

一种酪氨酸激酶抑制剂及其用途 Download PDF

Info

Publication number
CN106536503B
CN106536503B CN201580013620.1A CN201580013620A CN106536503B CN 106536503 B CN106536503 B CN 106536503B CN 201580013620 A CN201580013620 A CN 201580013620A CN 106536503 B CN106536503 B CN 106536503B
Authority
CN
China
Prior art keywords
cell
cancer
mutation
base
egfr
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201580013620.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106536503A (zh
Inventor
吴永谦
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
BEIJING TIANXINYUAN PHARMACEUTICAL SCIENCE AND TECHNOLOGY DEVELOPMENT Co Ltd
Beijing Sihuan Pharmaceutical Co Ltd
Beijing Ao He Research Institute Co Ltd
Jilin Shengtong Chemical Co Ltd
Original Assignee
Beijing Ao He Research Institute Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beijing Ao He Research Institute Co Ltd filed Critical Beijing Ao He Research Institute Co Ltd
Publication of CN106536503A publication Critical patent/CN106536503A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106536503B publication Critical patent/CN106536503B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4545—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pipamperone, anabasine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/72—Nitrogen atoms
    • C07D213/74—Amino or imino radicals substituted by hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/46—Two or more oxygen, sulphur or nitrogen atoms
    • C07D239/48—Two nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D451/00—Heterocyclic compounds containing 8-azabicyclo [3.2.1] octane, 9-azabicyclo [3.3.1] nonane, or 3-oxa-9-azatricyclo [3.3.1.0<2,4>] nonane ring systems, e.g. tropane or granatane alkaloids, scopolamine; Cyclic acetals thereof
    • C07D451/02—Heterocyclic compounds containing 8-azabicyclo [3.2.1] octane, 9-azabicyclo [3.3.1] nonane, or 3-oxa-9-azatricyclo [3.3.1.0<2,4>] nonane ring systems, e.g. tropane or granatane alkaloids, scopolamine; Cyclic acetals thereof containing not further condensed 8-azabicyclo [3.2.1] octane or 3-oxa-9-azatricyclo [3.3.1.0<2,4>] nonane ring systems, e.g. tropane; Cyclic acetals thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/08—Bridged systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/10—Spiro-condensed systems

Abstract

本发明涉及通式(Ⅰ)所示的可用作酪氨酸激酶抑制剂的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物以及其立体异构体，其中R1、R2、R3、Z1、Z2、A、B、C、X、Y如说明书中所定义。本发明还涉及这些化合物的制备方法，含有这些化合物的药物组合物和试剂盒，以及这些化合物的用途。例如，本发明的化合物可以用作酪氨酸激酶抑制剂，或用于降低或抑制细胞中EGFR或其突变体(例如包含T790M突变的EGFR突变体)的活性，或用于治疗和/或预防与EGFR过度活性相关的疾病(例如癌症)，特别是具有由EGFR突变(例如EGFR的T790M突变)引起的耐药性的疾病(例如癌症)。

Description

一种酪氨酸激酶抑制剂及其用途
技术领域
本发明属于医药技术领域。特别地，本发明涉及一种新的可用作酪氨酸激酶抑制剂的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物以及其立体异构体，含有所述化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物和/或其立体异构体的药物组合物和试剂盒，制备所述化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物以及其立体异构体的方法，以及所述化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物以及其立体异构体的用途。例如，本发明的化合物可以用作酪氨酸激酶抑制剂，或用于降低或抑制细胞中EGFR或其突变体(例如包含T790M突变的EGFR突变体)的活性，或用于治疗和/或预防与EGFR过度活性相关的疾病(例如癌症疾病，例如肺癌)，特别是具有由EGFR突变(例如EGFR的T790M突变)引起的耐药性的疾病(例如癌症疾病，例如肺癌)。
背景技术
癌症，又称恶性肿瘤，已严重威胁着人类的健康和生命。2004年，全球有740万人死于癌症。2008年，中国进行了第三次全国死因情况调查；结果表明，中国癌症死亡率在过去30年间增长了八成左右，每年死于癌症的人接近200万，形势非常严峻。
肺癌是临床常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率均列恶性肿瘤之首。从组织病理学角度来看，肺癌分为两种类型：小细胞肺癌(small cell lung cancer SCLC)和非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)。NSCLC包括鳞癌、腺癌、大细胞癌等SCLC以外的肺癌，占肺癌总数的80-85％。70％的NSCLC在确诊时已属于晚期，很难通过手术或放疗进行根治性治疗。另外，超过50％的早期患者尽管经历了手术、放疗以及辅助化疗等积极治疗，但是仍出现局部复发或远处转移。因此，基于化疗的全身治疗对于NSCLC的治疗具有重要意义。
近年来，随着对肿瘤细胞信号传导途径的深入研究，以表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)为靶点的小分子酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)作为靶向药物在NSCLC的治疗中取得了较好的成果。EGFR是一种跨膜蛋白，属于受体酪氨酸激酶(ERBB)家族，其家族有四种亚型：EGFR(ERBB1或HER-1)、HER-2(ERBB2)、HER-3(ERBB3)和HER-4(ERBB4)，在肿瘤的转化和增长中发挥着主要作用。FDA已先后快速批准两个可逆单靶点小分子EGFR TKI，即吉非替尼(efitinib，Iressa)和厄洛替尼(Erlotinib，Tarcewa)，用于治疗一线治疗失败的晚期NSCLC。2013年，FDA又批准了第一个不可逆多靶点的EGFR TKI，阿法替尼，以更好地治疗NSCLC。
已上市的EGFR TKI仅对EGFR突变的NSCLC人群治疗敏感，其中，超过90％的EGFR突变为外显子19的缺失和位于外显子21的L858R突变，常见于亚洲、不吸烟、女性患者。患者在应用EGFR TKI初期，疗效较明显，无疾病进展期(progression-free survival,PFS)延长，客观反映率(objective response rate,ORR)提高，生活质量得到极大改善。然而，大部分患者在平均治疗10个月后会出现对此类药物的耐药性。另外，已有的EGFR TKI能够作用于野生型EGFR，导致产生皮疹、腹泻等副作用，这制约了其临床应用。因此，需要研发选择性更强并且减少或避免耐药性产生的EGFR TKI，以更好地治疗NSCLC。
在出现耐药性的患者中，50％的患者包含位于外显子20的T790M突变，其它突变(如D761Y，L747S，T845A)只占不到5％；另外还有20％的患者包含由MET肿瘤基因扩增导致的耐药性，这些患者中有一半也存在着T790M突变。这说明，T790M突变是肿瘤细胞对EGFRTKI产生耐药性的主要原因。T790M突变是EGFR 790位上的苏氨酸被甲硫氨酸所取代，其引起耐药性的机制还不完全清楚。可能的机制为，甲硫氨酸比苏氨酸空间占位大，形成空间位阻，改变了EGFR激酶对ATP的亲和性，导致EGFR-TKI类小分子药物不能有效地阻断EGFR活化信号，从而失去对肿瘤细胞的杀伤作用，产生耐药性。
迄今为止，仍没有针对T790M突变的EGFR TKI药物上市。WO2012061299A1(公开日2012.05.10)公开了由Avila Therapeutics公司开发的处于临床实验III期的药物CO-1686，其针对T790M突变，用于治疗具有EGFR TKI耐药性的NSCLC，并可以选择性地抑制突变型EGFR，具有较高的安全性。这一技术已在临床上得到了一定的验证。CO-1686的具体结构如下：
一个用于成药的化合物，除了良好的活性及安全性之外，还应具有较好的理化性质(溶解性、稳定性、渗透性等方面)。因此，开发不同结构的针对T790M突变的EGFR TKI，使其具有更高的选择性、更强的药理活性，更高的安全性或更好的理化性质，对于治疗NSCLC具有非常重要的意义。
发明内容
本发明要解决的技术问题之一是提供一种新的可用作酪氨酸激酶抑制剂的化合物，其能够用于降低或抑制细胞中EGFR或其突变体(例如包含T790M突变的EGFR突变体)的活性，和/或，用于治疗和/或预防与EGFR过度活性相关的疾病(例如癌症疾病，例如肺癌)，特别是具有由EGFR突变(例如EGFR的T790M突变)引起的耐药性的疾病(例如癌症疾病，例如肺癌)。
本发明的技术方案如下：
方案1.下述式(Ⅰ)所示的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体，
其中，
Z1、Z2分别独立地选自N或CR4；并且，Z1和Z2中至少一个为N；
X选自O、S、C(R5R5′)或NR5，或不存在；
Y选自O、S、C(R5R5′)或NR5；
环A选自任选被取代基取代的6-8元芳基、5-8元杂芳基、3-8元杂环基或3-8元环烷基，所述取代基选自氢原子、卤素原子、羟基、氨基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基、C1-6烷基羰基、C1-6烷基羰基氧基、C1-6烷基氨基、二C1-6烷基氨基、C1-6烷基磺酰氨基、C1-6烷基磺酰基或3-8元环烷基；
环B、环C分别独立地为不存在，或任选被取代基取代的3-14元环状结构，或环B与环C稠合形成任选被取代基取代的3-14元含氮稠杂环基，所述取代基选自氢原子、卤素原子、羟基、氨基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基、C1-6烷基羰基、C1-6烷基羰基氧基、C1-6烷基氨基、二C1-6烷基氨基、C1-6烷基磺酰氨基、C1-6烷基磺酰氧基、C1-6烷基磺酰基、C1-6烷基磺酰基C1-6烷氧基、3-8元环烷基或3-8元杂环基；
R1选自卤素原子、氰基、羟基、氨基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基羰基、C1-6烷基磺酰基或硝基；
R2选自氢原子、-N(R6)(R7)、-N(R6)C(O)(R7)、-N(R6)S(O)(R7)、-N(R6)SO2(R7)、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基、3-8元环烷基、6-8元芳基、5-8元杂芳基或3-8元杂环基；
R3选自氢原子，或任选被取代基取代的C1-6烷基、C1-6烷氧基、-C(O)-R8、3-8元杂环基、6-8元芳基或5-8元杂芳基，所述取代基选自氢原子、卤素原子、羟基、氨基、硝基、C1-6烷基或C1-6烷基磺酰基；
R4、R5、R5′分别独立地选自氢原子、卤素原子、羟基、氨基、氰基、硝基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基或3-8元环烷基；
R6、R7分别独立地选自氢原子、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、3-8元环烷基或3-8元杂环基；
R8选自氢原子、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基、任选被取代基取代的3-8元环烷基或任选被取代基取代的3-8元杂环基，所述取代基选自氢原子、卤素原子、羟基、氨基、氰基、C1-6烷氧基或C1-6烷基。
在某些优选的实施方案中，所述3-14元环状结构选自6-8元芳基、6-14元稠芳基、3-8元环烷基、3-14元稠环基、3-14元螺环基、3-14元桥环基、3-10元杂环基、3-14元稠杂环基、3-14元螺杂环基、3-14元桥杂环基、5-8元杂芳基、5-14元稠杂芳基。
在某些优选的实施方案中，当环A为苯基，环B为苯基，并且环B与环C通过化学键相连接时，环C不为哌嗪基或吗啉基。
方案2.上述方案1中所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体，其中，
Z1、Z2分别独立地选自N或CR4；并且，Z1和Z2中至少一个为N；
X选自C(R5R5′)或NR5，或不存在；
Y选自C(R5R5′)或NR5；
环A选自任选被取代基取代的6-8元芳基、5-6元杂芳基、3-8元杂环基或3-8元环烷基，所述取代基选自氢原子、卤素原子、羟基、氨基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基或3-8元环烷基；
环B、环C分别独立地为不存在，或任选被取代基取代的3-10元环状结构，或环B与环C稠合形成任选被取代基取代的3-10元含氮稠杂环基，所述取代基选自氢原子、卤素原子、羟基、氨基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基、C1-6烷基磺酰基、C1-6烷基磺酰氧基、C1-6烷基磺酰基C1-6烷氧基、3-6元环烷基或3-6元杂环基；
R1选自卤素原子、氰基、羟基、氨基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基或C1-6烷氧基；
R2选自氢原子、-N(R6)(R7)、-N(R6)C(O)(R7)、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷基、3-6元环烷基、6-8元芳基、5-8元杂芳基或3-6元杂环基；
R3选自氢原子，或任选被取代基取代的C1-6烷基、C1-6烷氧基或-C(O)-R8，所述取代基选自氢原子、卤素原子、氨基、硝基、C1-6烷基或C1-6烷基磺酰基；
R4、R5、R5′分别独立地选自氢原子、卤素原子、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基或3-8元环烷基；
R6、R7分别独立地选自氢原子、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C2-6烯基或C2-6炔基；
R8选自氢原子、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基或任选被取代基取代的3-8元环烷基，所述取代基选自氢原子、卤素原子、羟基、氨基、氰基、C1-6烷氧基或C1-6烷基。
在某些优选的实施方案中，所述3-10元环状结构选自6-8元芳基、6-10元稠芳基、3-8元环烷基、3-10元稠环基、3-10元螺环基、3-10元桥环基、3-10元杂环基(例如3-10元含氮杂环基、3-10元含氧杂环基)、3-10元稠杂环基(例如3-10元含氮稠杂环基)、3-10元螺杂环基、3-10元桥杂环基、5-8元杂芳基或5-10元稠杂芳基。
在某些优选的实施方案中，当环A为苯基，环B为苯基，并且环B与环C通过化学键相连接时，环C不为哌嗪基或吗啉基。
方案3.上述方案2中所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体，其中，
Z1、Z2分别独立地选自N或CH；并且，Z1和Z2中至少一个为N；
X为NR5或不存在；
Y为NR5；
环A选自任选被取代基取代的6-8元芳基、5-6元杂芳基或3-6元杂环基，所述取代基选自氢原子、卤素原子、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基或卤代C1-4烷基；
环B、环C分别独立地为不存在，或任选被取代基取代的6-8元芳基、5-6元杂芳基、5-10元含氮杂环基、6-11元稠杂环基、7-10元螺杂环基或7-9元桥杂环基，或环B与环C稠合形成任选被取代基取代的9-10元含氮稠杂环基，所述取代基选自氢原子、卤素原子、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤代C1-4烷基、卤代C1-4烷氧基、C1-4烷基磺酰基、C1-4烷基磺酰氧基、C1-4烷基磺酰基C1-4烷氧基、3-6元环烷基或3-6元含氧杂环基；
R1选自卤代C1-4烷基或C1-4烷氧基；
R2选自氢原子、-N(R6)(R7)、-N(R6)C(O)(R7)、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷基、3-6元环烷基、6-8元芳基、5-8元杂芳基或3-6元杂环基；
R3选自氢原子，或任选被取代基取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基或-C(O)-R8，所述取代基选自氢原子、卤素原子、氨基、硝基、C1-4烷基或C1-4烷基磺酰基；
R5选自氢原子、卤素原子、C1-4烷基或3-6元环烷基；
R6、R7分别独立地选自氢原子、C1-4烷基、卤代C1-4烷基、C2-4烯基或C2-4炔基；
R8选自氢原子、C1-4烷基或C1-4烷氧基。
在某些优选的实施方案中，当环A为苯基，环B为苯基，并且环B与环C通过化学键相连接时，环C不为哌嗪基或吗啉基。
方案4.上述方案3中所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体，其中，
Z1为N；Z2为N；
X为NR5或不存在；
Y为NR5；
环A选自任选被取代基取代的苯基或吡啶基，所述取代基选自氢原子、卤素原子、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基或卤代C1-4烷基；
环B、环C分别独立地为不存在，或任选被取代基取代的苯基、5-6元杂芳基、5-6元含氮杂环基、7-10元含氮稠杂环基、7-9元螺杂环基或8元桥杂环基，所述取代基选自氢原子、卤素原子、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤代C1-4烷基、卤代C1-4烷氧基、C1-4烷基磺酰基、C1-4烷基磺酰氧基、C1-4烷基磺酰基C1-4烷氧基或3-6元含氧杂环基；并且当环A为苯基且环B为苯基时，环C不为哌嗪基或吗啉基；
R1选自卤代甲基或卤代乙基；
R2选自氢原子、-N(R6)(R7)、-N(R6)C(O)(R7)、C1-4烷基或3-6元环烷基；
R3选自氢原子，或任选被取代基取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基或-C(O)-R8，所述取代基选自氢原子、卤素原子或C1-4烷基或C1-4烷基磺酰基；
R5选自氢原子、卤素原子或C1-4烷基；
R6、R7分别独立地选自氢原子、C1-4烷基、卤代C1-4烷基或C2-4烯基；
R8选自氢原子、甲基、乙基或甲氧基。
方案5、上述方案4中所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体，其中，
Z1为N；Z2为N；
X、Y分别为NH；
环A选自任选被取代基取代的苯基或吡啶基，所述取代基选自氟原子、氯原子、甲基、乙基或三氟甲基；
环B选自任选被取代基取代的苯基，所述取代基选自氟原子、氯原子、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、甲基磺酰基丙氧基或乙基磺酰基丙氧基；
环C为不存在，或任选被取代基取代的氮杂环丁烷基、吡咯烷基、二氢吡咯基、咪唑烷基、噻唑烷基、噁唑烷基、哌啶基、哌啶酮基、哌嗪基、四氢吡啶基、四氢吡啶酮基、二氢哌啶酮基、2-氮杂螺[3.5]壬烷基、8-氮杂双环[3.2.1]辛烷基、八氢环戊烯并[c]吡咯基、2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷、2-氮杂螺[3.3]庚烷、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷基或六氢吡咯[3,4-c]吡咯基，所述取代基选自氟原子、氯原子、甲基、乙基、甲氧基、三氟甲基、甲磺酰基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基或吗啉基，并且当环A为苯基且环B为苯基时，环C不为哌嗪基或吗啉基；
R1为三氟甲基；
R2为-NHC(O)CH＝CH2；
R3选自氢原子、甲基、乙基、三氟甲基、甲氧基、2-氟乙基、乙酰基、丙酰基、3-氟丙酰基或3-甲磺酰丙氧基。
方案6、上述方案5中所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体，其中，
环A选自任选被取代基取代的苯基或吡啶基，所述取代基选自氟原子、氯原子、甲基、乙基或三氟甲基；
环B选自任选被取代基取代的苯基，所述取代基选自氟原子、氯原子、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、甲基磺酰基丙氧基或乙基磺酰基丙氧基；
环C为不存在，或任选被取代基取代的氮杂环丁烷基、吡咯烷基、二氢吡咯基、咪唑烷基、噻唑烷基、噁唑烷基、哌啶基、哌啶酮基、哌嗪基、四氢吡啶基、四氢吡啶酮基或二氢哌啶酮基，所述取代基选自氟原子、氯原子、甲基、乙基、甲氧基、三氟甲基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基或吗啉基，并且当环A为苯基且环B为苯基时，环C不为哌嗪基或吗啉基。
方案7、上述方案3中所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体，其中，
Z1为N、Z2为CH；或Z1为CH、Z2为N；
X为NR5或不存在；
Y为NR5；
环A选自任选被取代基取代的苯基或吡啶基，所述取代基选自氢原子、卤素原子、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基或卤代C1-4烷基；
环B、环C分别独立地为不存在，或任选被取代基取代的苯基、5-6元杂芳基、5-6元含氮杂环基、7-10元含氮稠杂环基、7-9元螺杂环基或8元桥杂环基，所述取代基选自氢原子、卤素原子、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤代C1-4烷基、卤代C1-4烷氧基、C1-4烷基磺酰基、C1-4烷基磺酰氧基、C1-4烷基磺酰基C1-4烷氧基或3-6元含氧杂环基，并且，当环A为苯基且环B为苯基时，环C不为哌嗪基或吗啉基；
R1选自卤代甲基或卤代乙基；
R2选自氢原子、-N(R6)(R7)、-N(R6)C(O)(R7)、C1-4烷基或3-6元环烷基；
R3选自氢原子，或任选被取代基取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基或-C(O)-R8，所述取代基选自氢原子、卤素原子、C1-4烷基或C1-4烷基磺酰基；
R5选自氢原子、卤素原子或C1-4烷基；
R6、R7分别独立地选自氢原子、C1-4烷基、卤代C1-4烷基或C2-4烯基；
R8选自氢原子、甲基、乙基或甲氧基。
方案8、上述方案7中所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体，其中，
Z1为N、Z2为CH，或Z1为CH、Z2为N；
X为NR5或不存在；
Y为NR5；
环A选自任选被取代基取代的苯基或吡啶基，所述取代基选自氟原子、氯原子、甲基、乙基或三氟甲基；
环B选自任选被取代基取代的苯基，所述取代基选自氟原子、氯原子、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、甲基磺酰基丙氧基或乙基磺酰基丙氧基；
环C为不存在，或任选被取代基取代的氮杂环丁烷基、吡咯烷基、二氢吡咯基、咪唑烷基、噻唑烷基、噁唑烷基、哌啶基、哌啶酮基、哌嗪基、四氢吡啶基、四氢吡啶酮基、二氢哌啶酮基、2-氮杂螺[3.5]壬烷基、8-氮杂双环[3.2.1]辛烷基、八氢环戊烯并[c]吡咯基、2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷、2-氮杂螺[3.3]庚烷、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷基或六氢吡咯[3,4-c]吡咯基，所述取代基选自氟原子、氯原子、甲基、乙基、甲氧基、三氟甲基、甲磺酰基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基或吗啉基，并且，当环A为苯基且环B为苯基时，环C不为哌嗪基或吗啉基；
R1为三氟甲基；
R2为-NHC(O)CH＝CH2；
R3选自氢原子、甲基、乙基、三氟甲基、甲氧基、2-氟乙基、乙酰基、丙酰基、3-氟丙酰基或3-甲磺酰丙氧基。
方案9.上述方案3中所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体，其中，
Z1、Z2分别独立地选自N或CH；并且，Z1和Z2中至少一个为N；
X为NR5或不存在；
Y为NR5；
环A选自任选被取代基取代的6-8元芳基或5-6元杂芳基，所述取代基选自氢原子、卤素原子、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基或卤代C1-4烷基；
环B与环C稠合形成任选被取代基取代的苯并5元含氮杂环基或苯并6元含氮杂环基，所述取代基选自氢原子、卤素原子、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤代C1-4烷基、卤代C1-4烷氧基、C1-4烷基磺酰基、C1-4烷基磺酰氧基、C1-4烷基磺酰基C1-4烷氧基、3-6元环烷基或3-6元含氧杂环基；
R1选自卤代C1-4烷基或C1-4烷氧基；
R2选自氢原子、-N(R6)(R7)、-N(R6)C(O)(R7)、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷基、3-6元环烷基、6-8元芳基、5-8元杂芳基或3-6元杂环基；
R3选自氢原子，或任选被取代基取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基或-C(O)-R8，所述取代基选自氢原子、卤素原子、氨基、硝基、C1-4烷基或C1-4烷基磺酰基；
R5选自氢原子、卤素原子、C1-4烷基或3-6元环烷基；
R6、R7分别独立地选自氢原子、C1-4烷基、卤代C1-4烷基、C2-4烯基或C2-4炔基；
R8选自氢原子、C1-4烷基或C1-4烷氧基。
方案10.上述方案9中所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体，其中，
Z1、Z2分别为N；
X为NH或不存在；Y为NH；
环A选自任选被取代基取代的苯基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、吡啶基或嘧啶基，所述取代基选自氟原子、氯原子、甲基或乙基；
环B与环C稠合形成任选被取代基取代的吲哚基、二氢吲哚基、苯并吡咯烷基、苯并二氢吡咯基、异吲哚基、二氢异吲哚基、吲唑基、二氢吲唑基、苯并二氢吡唑基、苯并噁唑烷基、苯并噻唑烷基、苯并咪唑烷基、苯并咪唑基、苯并二氢咪唑基、1,2,3,4-四氢异喹啉基或1,2,3,4-四氢喹啉基，所述取代基选自甲氧基、甲基或乙基；
R1为三氟甲基；
R2为-NHC(O)CH＝CH2；
R3选自氢原子、甲基、乙基、甲氧基或乙酰基。
方案11.上述方案1中的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体，所述化合物选自下表：
本发明还涉及了所公开的化合物的各种用途。因此，本发明还涉及下述示例性技术方案：
方案12.一种药物组合物，其包含方案1-11中任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体。
在某些优选的实施方案中，所述的药物组合物还含有一种或多种第二治疗剂。在某些优选的实施方案中，所述第二治疗剂选自：DNA复制抑制剂(例如拓扑异构酶抑制剂和烷基化试剂)，有丝***抑制剂，血管生成抑制剂，生长因子抑制剂，抗体，抗代谢物，抗肿瘤激素类药物，铂类药物，免疫抑制剂，另外的酪氨酸激酶抑制剂。在某些优选的实施方案中，所述第二治疗剂选自：甲氨蝶呤、卡培他滨、吉西他滨、去氧氟尿苷、培美曲塞二钠、帕唑帕尼、伊马替尼、埃罗替尼、拉帕替尼、吉非替尼、凡德他尼、赫赛汀、贝伐单抗、利妥昔单抗、曲妥珠单抗、紫杉醇、长春瑞滨、多西他赛、多柔比星、羟基喜树碱、丝裂霉素、表柔比星、吡柔比星、博来霉素、来曲唑、他莫西芬、氟维司群、曲谱瑞林、氟他胺、亮丙瑞林、阿那曲唑、异环磷酰胺、白消安、环磷酰胺、卡莫司汀、尼莫司汀、司莫司汀、氮芥、马法兰、瘤可宁、卡铂、顺铂、奥沙利铂、络铂、拓扑特肯、喜树碱、拓扑替康、依维莫司、西罗莫斯、特癌适、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、硫唑嘌呤、菌素D、柔红霉素、阿霉素、米托蒽醌、争光霉素、普卡霉素或氨鲁米特。
在某些优选的实施方案中，所述的药物组合物还含有一种或多种药用载体和/或稀释剂。
方案13.方案1-11中任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体用于制备药物的用途，所述药物用于治疗和/或预防受试者中与EGFR过度活性相关的疾病。
在某些优选的实施方案中，所述疾病为过度增殖性疾病，例如癌症和非癌性疾病。在某些优选的实施方案中，所述癌症选自：食管癌(例如食管腺癌和食管鳞状细胞癌)、脑瘤、肺癌(例如小细胞性肺癌和非小细胞性肺癌)、鳞状上皮细胞癌、膀胱癌、胃癌、卵巢癌、腹膜癌、胰腺癌、乳腺癌、头颈癌、子***、子宫内膜癌、结直肠癌、肝癌、肾癌、实体瘤、非霍奇金淋巴瘤、中枢神经***肿瘤(例如神经胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、胶质瘤或肉瘤)、***癌和甲状腺癌。在某些优选的实施方案中，所述非癌性疾病为例如皮肤或***的良性增生。在某些优选的实施方案中，所述疾病为慢性阻塞性肺病。
在某些优选的实施方案中，EGFR的过度活性是由EGFR的过度表达导致的。在某些优选的实施方案中，所述疾病(例如癌症疾病)具有由EGFR突变体引起的耐药性。在某些优选的实施方案中，所述EGFR突变体包含下列中的任一项或多项：T790M突变，L858R突变，和d746-750突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR突变体包含T790M突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR突变体包含T790M突变和L858R突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR突变体包含T790M突变和d746-750突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR突变体包含T790M突变，L858R突变，和d746-750突变。
在某些优选的实施方案中，所述受试者为哺乳动物，例如牛科动物、马科动物、羊科动物、猪科动物、犬科动物、猫科动物、啮齿类动物、灵长类动物；其中，特别优选的受试者为人。
在某些优选的实施方案中，所述的药物还含有一种或多种第二治疗剂。在某些优选的实施方案中，所述第二治疗剂选自：DNA复制抑制剂(例如拓扑异构酶抑制剂和烷基化试剂)，有丝***抑制剂，血管生成抑制剂，生长因子抑制剂，抗体，抗代谢物，抗肿瘤激素类药物，铂类药物，免疫抑制剂，另外的酪氨酸激酶抑制剂。在某些优选的实施方案中，所述第二治疗剂选自：甲氨蝶呤、卡培他滨、吉西他滨、去氧氟尿苷、培美曲塞二钠、帕唑帕尼、伊马替尼、埃罗替尼、拉帕替尼、吉非替尼、凡德他尼、赫赛汀、贝伐单抗、利妥昔单抗、曲妥珠单抗、紫杉醇、长春瑞滨、多西他赛、多柔比星、羟基喜树碱、丝裂霉素、表柔比星、吡柔比星、博来霉素、来曲唑、他莫西芬、氟维司群、曲谱瑞林、氟他胺、亮丙瑞林、阿那曲唑、异环磷酰胺、白消安、环磷酰胺、卡莫司汀、尼莫司汀、司莫司汀、氮芥、马法兰、瘤可宁、卡铂、顺铂、奥沙利铂、络铂、拓扑特肯、喜树碱、拓扑替康、依维莫司、西罗莫斯、特癌适、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、硫唑嘌呤、菌素D、柔红霉素、阿霉素、米托蒽醌、争光霉素、普卡霉素或氨鲁米特。
方案14.一种治疗和/或预防受试者中与EGFR过度活性相关的疾病的方法，其包括给有此需要的受试者施用治疗和/或预防有效量的方案1-11中任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体，或者方案12的药物组合物。
在某些优选的实施方案中，所述疾病为过度增殖性疾病，例如癌症和非癌性疾病。在某些优选的实施方案中，所述癌症选自：食管癌(例如食管腺癌和食管鳞状细胞癌)、脑瘤、肺癌(例如小细胞性肺癌和非小细胞性肺癌)、鳞状上皮细胞癌、膀胱癌、胃癌、卵巢癌、腹膜癌、胰腺癌、乳腺癌、头颈癌、子***、子宫内膜癌、结直肠癌、肝癌、肾癌、实体瘤、非霍奇金淋巴瘤、中枢神经***肿瘤(例如神经胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、胶质瘤或肉瘤)、***癌和甲状腺癌。在某些优选的实施方案中，所述非癌性疾病为例如皮肤或***的良性增生。在某些优选的实施方案中，所述疾病为慢性阻塞性肺病。
在某些优选的实施方案中，EGFR的过度活性是由EGFR的过度表达导致的。在某些优选的实施方案中，所述疾病(例如癌症疾病)具有由EGFR突变体引起的耐药性。在某些优选的实施方案中，所述EGFR突变体包含下列中的任一项或多项：T790M突变，L858R突变，和d746-750突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR突变体包含T790M突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR突变体包含T790M突变和L858R突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR突变体包含T790M突变和d746-750突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR突变体包含T790M突变，L858R突变，和d746-750突变。
在某些优选的实施方案中，所述受试者为哺乳动物，例如牛科动物、马科动物、羊科动物、猪科动物、犬科动物、猫科动物、啮齿类动物、灵长类动物；其中，特别优选的受试者为人。
在某些优选的实施方案中，所述方法还包括，给所述受试者施用一种或多种第二治疗剂。在某些优选的实施方案中，所述第二治疗剂选自：DNA复制抑制剂(例如拓扑异构酶抑制剂和烷基化试剂)，有丝***抑制剂，血管生成抑制剂，生长因子抑制剂，抗体，抗代谢物，抗肿瘤激素类药物，铂类药物，免疫抑制剂，另外的酪氨酸激酶抑制剂。在某些优选的实施方案中，所述第二治疗剂选自：甲氨蝶呤、卡培他滨、吉西他滨、去氧氟尿苷、培美曲塞二钠、帕唑帕尼、伊马替尼、埃罗替尼、拉帕替尼、吉非替尼、凡德他尼、赫赛汀、贝伐单抗、利妥昔单抗、曲妥珠单抗、紫杉醇、长春瑞滨、多西他赛、多柔比星、羟基喜树碱、丝裂霉素、表柔比星、吡柔比星、博来霉素、来曲唑、他莫西芬、氟维司群、曲谱瑞林、氟他胺、亮丙瑞林、阿那曲唑、异环磷酰胺、白消安、环磷酰胺、卡莫司汀、尼莫司汀、司莫司汀、氮芥、马法兰、瘤可宁、卡铂、顺铂、奥沙利铂、络铂、拓扑特肯、喜树碱、拓扑替康、依维莫司、西罗莫斯、特癌适、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、硫唑嘌呤、菌素D、柔红霉素、阿霉素、米托蒽醌、争光霉素、普卡霉素或氨鲁米特。在某些优选的实施方案中，在施用所述化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物、其立体异构体、或者所述药物组合物之前、同时或之后，施用所述第二治疗剂。
方案15.方案1-11中任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体，其用于治疗和/或预防受试者中与EGFR过度活性相关的疾病。
在某些优选的实施方案中，所述疾病为过度增殖性疾病，例如癌症和非癌性疾病。在某些优选的实施方案中，所述癌症选自：食管癌(例如食管腺癌和食管鳞状细胞癌)、脑瘤、肺癌(例如小细胞性肺癌和非小细胞性肺癌)、鳞状上皮细胞癌、膀胱癌、胃癌、卵巢癌、腹膜癌、胰腺癌、乳腺癌、头颈癌、子***、子宫内膜癌、结直肠癌、肝癌、肾癌、实体瘤、非霍奇金淋巴瘤、中枢神经***肿瘤(例如神经胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、胶质瘤或肉瘤)、***癌和甲状腺癌。在某些优选的实施方案中，所述非癌性疾病为例如皮肤或***的良性增生。在某些优选的实施方案中，所述疾病为慢性阻塞性肺病。
在某些优选的实施方案中，EGFR的过度活性是由EGFR的过度表达导致的。在某些优选的实施方案中，所述疾病(例如癌症疾病)具有由EGFR突变体引起的耐药性。在某些优选的实施方案中，所述EGFR突变体包含下列中的任一项或多项：T790M突变，L858R突变，和d746-750突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR突变体包含T790M突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR突变体包含T790M突变和L858R突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR突变体包含T790M突变和d746-750突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR突变体包含T790M突变，L858R突变，和d746-750突变。
在某些优选的实施方案中，所述受试者为哺乳动物，例如牛科动物、马科动物、羊科动物、猪科动物、犬科动物、猫科动物、啮齿类动物、灵长类动物；其中，特别优选的受试者为人。
在某些优选的实施方案中，所述化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体与一种或多种第二治疗剂联合使用。在某些优选的实施方案中，所述第二治疗剂选自：DNA复制抑制剂(例如拓扑异构酶抑制剂和烷基化试剂)，有丝***抑制剂，血管生成抑制剂，生长因子抑制剂，抗体，抗代谢物，抗肿瘤激素类药物，铂类药物，免疫抑制剂，另外的酪氨酸激酶抑制剂。在某些优选的实施方案中，所述第二治疗剂选自：甲氨蝶呤、卡培他滨、吉西他滨、去氧氟尿苷、培美曲塞二钠、帕唑帕尼、伊马替尼、埃罗替尼、拉帕替尼、吉非替尼、凡德他尼、赫赛汀、贝伐单抗、利妥昔单抗、曲妥珠单抗、紫杉醇、长春瑞滨、多西他赛、多柔比星、羟基喜树碱、丝裂霉素、表柔比星、吡柔比星、博来霉素、来曲唑、他莫西芬、氟维司群、曲谱瑞林、氟他胺、亮丙瑞林、阿那曲唑、异环磷酰胺、白消安、环磷酰胺、卡莫司汀、尼莫司汀、司莫司汀、氮芥、马法兰、瘤可宁、卡铂、顺铂、奥沙利铂、络铂、拓扑特肯、喜树碱、拓扑替康、依维莫司、西罗莫斯、特癌适、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、硫唑嘌呤、菌素D、柔红霉素、阿霉素、米托蒽醌、争光霉素、普卡霉素或氨鲁米特。在某些优选的实施方案中，在施用所述化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物、其立体异构体、或者所述药物组合物之前、同时或之后，施用所述第二治疗剂。
方案16.方案1-11任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体用于制备制剂的用途，所述制剂用作酪氨酸激酶抑制剂，或用于降低或抑制细胞中EGFR或其突变体的活性。
在某些优选的实施方案中，所述制剂用于体内或者体外施用。在某些优选的实施方案中，所述制剂被施用至受试者(例如哺乳动物；例如牛科动物、马科动物、羊科动物、猪科动物、犬科动物、猫科动物、啮齿类动物、灵长类动物；例如，人)体内，以降低或抑制受试者体内细胞中的EGFR或其突变体的活性。在某些优选的实施方案中，所述制剂被施用至体外细胞(例如细胞系或者来自受试者的细胞，例如癌症细胞)，以降低或抑制体外细胞中的EGFR或其突变体的活性。
在某些优选的实施方案中，所述EGFR的突变体包含下列中的任一项或多项：T790M突变，L858R突变，和d746-750突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR的突变体包含T790M突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR的突变体包含T790M突变和L858R突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR的突变体包含T790M突变和d746-750突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR的突变体包含T790M突变，L858R突变，和d746-750突变。
在某些优选的实施方案中，所述细胞选自食管癌细胞(例如食管腺癌细胞和食管鳞状细胞癌细胞)、脑瘤细胞、肺癌细胞(例如小细胞性肺癌细胞和非小细胞性肺癌细胞)、鳞状上皮细胞癌细胞、膀胱癌细胞、胃癌细胞、卵巢癌细胞、腹膜癌细胞、胰腺癌细胞、乳腺癌细胞、头颈癌细胞、子***细胞、子宫内膜癌细胞、结直肠癌细胞、肝癌细胞、肾癌细胞、实体瘤细胞、非霍奇金淋巴瘤细胞、中枢神经***肿瘤细胞(例如神经胶质瘤细胞、多形性胶质母细胞瘤细胞、胶质瘤细胞或肉瘤细胞)、***癌细胞和甲状腺癌细胞。
在某些优选的实施方案中，所述细胞为来自受试者的原代细胞或其培养物，或已建立的细胞系。在某些优选的实施方案中，所述受试者为哺乳动物，例如牛科动物、马科动物、羊科动物、猪科动物、犬科动物、猫科动物、啮齿类动物、灵长类动物；其中，特别优选的受试者为人。
方案17.一种降低或抑制细胞中EGFR或其突变体的活性的方法，其包括给所述细胞施用有效量的方案1-11任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体。
在某些优选的实施方案中，所述方法在体内或者体外进行。在某些优选的实施方案中，所述方法在体内进行，例如应用于受试者(例如哺乳动物；例如牛科动物、马科动物、羊科动物、猪科动物、犬科动物、猫科动物、啮齿类动物、灵长类动物；例如，人)体内，以降低或抑制受试者体内细胞中的EGFR或其突变体的活性。在某些优选的实施方案中，所述方法在体外进行，例如应用于体外细胞(例如细胞系或者来自受试者的细胞，例如癌症细胞)，以降低或抑制体外细胞中的EGFR或其突变体的活性。
在某些优选的实施方案中，所述EGFR的突变体包含下列中的任一项或多项：T790M突变，L858R突变，和d746-750突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR的突变体包含T790M突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR的突变体包含T790M突变和L858R突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR的突变体包含T790M突变和d746-750突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR的突变体包含T790M突变，L858R突变，和d746-750突变。
在某些优选的实施方案中，所述细胞选自食管癌细胞(例如食管腺癌细胞和食管鳞状细胞癌细胞)、脑瘤细胞、肺癌细胞(例如小细胞性肺癌细胞和非小细胞性肺癌细胞)、鳞状上皮细胞癌细胞、膀胱癌细胞、胃癌细胞、卵巢癌细胞、腹膜癌细胞、胰腺癌细胞、乳腺癌细胞、头颈癌细胞、子***细胞、子宫内膜癌细胞、结直肠癌细胞、肝癌细胞、肾癌细胞、实体瘤细胞、非霍奇金淋巴瘤细胞、中枢神经***肿瘤细胞(例如神经胶质瘤细胞、多形性胶质母细胞瘤细胞、胶质瘤细胞或肉瘤细胞)、***癌细胞和甲状腺癌细胞。
在某些优选的实施方案中，所述细胞为来自受试者的原代细胞或其培养物，或已建立的细胞系。在某些优选的实施方案中，所述受试者为哺乳动物，例如牛科动物、马科动物、羊科动物、猪科动物、犬科动物、猫科动物、啮齿类动物、灵长类动物；其中，特别优选的受试者为人。
方案18.方案1-11任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体，其用于降低或抑制细胞中EGFR或其突变体的活性。
在某些优选的实施方案中，所述化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体用于体内或者体外施用。在某些优选的实施方案中，所述化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体被施用至受试者(例如哺乳动物；例如牛科动物、马科动物、羊科动物、猪科动物、犬科动物、猫科动物、啮齿类动物、灵长类动物；例如，人)体内，以降低或抑制受试者体内细胞中的EGFR或其突变体的活性。在某些优选的实施方案中，所述化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体被施用至体外细胞(例如细胞系或者来自受试者的细胞，例如癌症细胞)，以降低或抑制体外细胞中的EGFR或其突变体的活性。
在某些优选的实施方案中，所述EGFR的突变体包含下列中的任一项或多项：T790M突变，L858R突变，和d746-750突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR的突变体包含T790M突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR的突变体包含T790M突变和L858R突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR的突变体包含T790M突变和d746-750突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR的突变体包含T790M突变，L858R突变，和d746-750突变。
在某些优选的实施方案中，所述细胞选自食管癌细胞(例如食管腺癌细胞和食管鳞状细胞癌细胞)、脑瘤细胞、肺癌细胞(例如小细胞性肺癌细胞和非小细胞性肺癌细胞)、鳞状上皮细胞癌细胞、膀胱癌细胞、胃癌细胞、卵巢癌细胞、腹膜癌细胞、胰腺癌细胞、乳腺癌细胞、头颈癌细胞、子***细胞、子宫内膜癌细胞、结直肠癌细胞、肝癌细胞、肾癌细胞、实体瘤细胞、非霍奇金淋巴瘤细胞、中枢神经***肿瘤细胞(例如神经胶质瘤细胞、多形性胶质母细胞瘤细胞、胶质瘤细胞或肉瘤细胞)、***癌细胞和甲状腺癌细胞。
在某些优选的实施方案中，所述细胞为来自受试者的原代细胞或其培养物，或已建立的细胞系。在某些优选的实施方案中，所述受试者为哺乳动物，例如牛科动物、马科动物、羊科动物、猪科动物、犬科动物、猫科动物、啮齿类动物、灵长类动物；其中，特别优选的受试者为人。
方案19.一种试剂盒，其包含方案1-11任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体，且任选地还包括使用说明。
在某些优选的实施方案中，所述试剂盒用于降低或抑制细胞中EGFR或其突变体的活性。在某些优选的实施方案中，所述EGFR的突变体包含下列中的任一项或多项：T790M突变，L858R突变，和d746-750突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR的突变体包含T790M突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR的突变体包含T790M突变和L858R突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR的突变体包含T790M突变和d746-750突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR的突变体包含T790M突变，L858R突变，和d746-750突变。
在某些优选的实施方案中，所述细胞选自食管癌细胞(例如食管腺癌细胞和食管鳞状细胞癌细胞)、脑瘤细胞、肺癌细胞(例如小细胞性肺癌细胞和非小细胞性肺癌细胞)、鳞状上皮细胞癌细胞、膀胱癌细胞、胃癌细胞、卵巢癌细胞、腹膜癌细胞、胰腺癌细胞、乳腺癌细胞、头颈癌细胞、子***细胞、子宫内膜癌细胞、结直肠癌细胞、肝癌细胞、肾癌细胞、实体瘤细胞、非霍奇金淋巴瘤细胞、中枢神经***肿瘤细胞(例如神经胶质瘤细胞、多形性胶质母细胞瘤细胞、胶质瘤细胞或肉瘤细胞)、***癌细胞和甲状腺癌细胞。在某些优选的实施方案中，所述细胞为来自受试者的原代细胞或其培养物，或已建立的细胞系。在某些优选的实施方案中，所述受试者为哺乳动物，例如牛科动物、马科动物、羊科动物、猪科动物、犬科动物、猫科动物、啮齿类动物、灵长类动物；其中，特别优选的受试者为人。
发明详述
在本申请的说明书和权利要求书中，化合物都是依据化学结构式而命名的，如果表示同一化合物时化合物的命名与化学结构式不符，以化学结构式或化学反应式为准。
在本申请中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。然而，为了更好地理解本发明，下面提供了部分相关术语的定义和解释。另外，当本申请所提供的术语的定义和解释与本领域技术人员所通常理解的含义不一致时，以本申请所提供的术语的定义和解释为准。
本发明所述“卤代”是指被“卤素原子”取代，“卤素原子”是指氟原子、氯原子、溴原子、碘原子等。
如本申请所使用的，本发明化合物(例如，式(Ⅰ)所示的化合物)中的实线表示化学键，虚线表示可以存在或者不存在的化学键。例如，环B与环C之间的虚线表示：(1)环B与环C之间存在化学键，即，二者通过化学键相连接；或者，(2)环B与环C之间不存在化学键，即，二者稠合形成稠合的环基(例如，任选被取代基取代的3-14元含氮稠杂环基)。
本发明所述“C1-6烷基”表示直链或支链的含有1-6个碳原子的烷基，包括例如“C1-4烷基”、“C1-3烷基”等，具体实例包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、2-甲基丁基、新戊基、1-乙基丙基、正己基、异己基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、1,2-二甲基丙基等。本发明所述的“C1-4烷基”指C1-6烷基中的含有1-4个碳原子的具体实例。
本发明所述的“卤代C1-6烷基”指一个或多个“卤素原子”取代“C1-6烷基”上的一个或多个氢原子所衍生的基团，所述“卤素原子”和“C1-6烷基”如前文所定义。本发明所述的“卤代C1-4烷基”指卤代C1-6烷基中的含有1-4个碳原子的具体实例。
本发明所述的“C2-6烯基”是指含有至少一个双键且碳原子数为2-6的直链、支链或环状的烯基，包括例如“C2-4烯基”等。其实例包括但不限于：乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、1,3-丁二烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、1,3-戊二烯基、1,4-戊二烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、1,4-己二烯基、环戊烯基、1,3-环戊二烯基、环己烯基、1,4-环己二烯基等。本发明所述的“C2-4烯基”指C2-6烯基中的含有2-4个碳原子的具体实例。
本发明所述的“C2-6炔基”是指含有至少一个三键且碳原子数为2-6的直链或支链的炔基，包括例如“C2-4炔基”等。其实例包括但不限于：乙炔基、丙炔基、2-丁炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-甲基-2-戊炔基、2-己炔基、3-己炔基、5-甲基-2-己炔基等。本发明所述的“C2-4炔基”指C2-6炔基中的含有2-4个碳原子的具体实例。
本发明所述的“C1-6烷氧基、C1-6烷基羰基、C1-6烷基羰基氧基、C1-6烷基氨基、二C1-6烷基氨基、C1-6烷基磺酰氨基、C1-6烷基磺酰氧基、C1-6烷基磺酰基、C1-6烷基磺酰基C1-6烷氧基”是指以C1-6烷基-O-、C1-6烷基-C(O)-、C1-6烷基-C(O)-O-、C1-6烷基-NH-、(C1-6烷基)2-N-、C1-6烷基-SO2-NH-、C1-6烷基-SO2-O-、C1-6烷基-SO2-、C1-6烷基-SO2-C1-6烷基-O-方式连接的基团，其中“C1-6烷基”如前文所定义。本发明所述的“C1-4烷氧基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氧基、C1-4烷基氨基、二C1-4烷基氨基、C1-4烷基磺酰氨基、C1-4烷基磺酰氧基、C1-4烷基磺酰基、C1-4烷基磺酰基C1-4烷氧基”指上述实例中的烷基中含有1-4个碳原子的具体实例。
本发明所述的“3-8元环烷基”是指含有3-8个碳原子的饱和的环状烷基，包括例如“3-6元环烷基”、“4-6元环烷基”等。具体实例包括但不限于：环丙烷基、环丁烷基、环戊烷基、环己烷基、环庚烷基、环辛烷基等。“3-6元环烷基”是指含有3-6个碳原子的饱和的环状烷基.
本发明所述的“3-14元环状结构”是指含有3-14个环原子的环状基团，包括但不限于6-8元芳基、6-14元稠芳基、3-8元环烷基、3-14元稠环基、3-14元螺环基、3-14元桥环基、3-10元杂环基、3-14元稠杂环基、3-14元螺杂环基、3-14元桥杂环基、5-8元杂芳基、5-14元稠杂芳基。本发明所述的“3-10元环状结构”是指3-14元环状结构中含有3-10个环原子的具体实例。
本发明所述的“6-8元芳基”是指含有6-8个环碳原子的单环芳基，其实例包括但不限于：苯基、环辛四烯基等。
本发明所述的“6-14元稠芳基”是指由两个或两个以上环状结构彼此共用两个相邻的原子所形成的、含有6-14个环碳原子的、不饱和的、具有芳香性的环状基团。具体实例包括但不仅限于：萘基、蒽基、菲基等。所述的“6-10元稠芳基”是指6-14元稠芳基中环原子个数为6-10个的具体实例。
本发明所述的“3-14元稠环基”是指由两个或两个以上环状结构彼此共用两个相邻的原子所形成的、含有3-14个碳原子或/和杂原子的环状结构，包括例如“4-11元稠环基”、“6-11元稠环基”、“5-10元稠环基”、“7-10元稠环基”、“3-12元稠环基”、“9-10元稠环基”、“3-10元稠环基”等。其实例包括但不限于： 等。所述的“3-10元稠环基”是指3-14元稠环基中含有3-10个环原子的具体实例。
本发明所述的“3-14元螺环基”是指由两个或两个以上环状结构彼此共用一个碳原子所形成的、含有3-14个环碳原子的环状结构。任选地，环状结构中的碳原子可以被氧代。“3-14元螺环基”包括例如“4-11元螺环基”、“6-11元螺环基”、“5-10元螺环基”、“7-10元螺环基”、“7-9元螺环基”、“7-8元螺环基”、“9-10元螺环基”、“3-10元螺环基”等。具体实例包括但不仅限于： 等。所述的“3-10元螺环基”是指3-14元螺环基中含有3-10个环原子的具体实例。
本发明所述的“3-14元桥环基”是指由两个或两个以上环状结构彼此共用两个非相邻碳原子所形成的、含有3-14个环碳原子的环状结构。任选地，环状结构中的碳原子可以被氧代。“3-14元桥环基”包括例如“5-11元桥环基”、“6-11元桥环基”、“5-10元桥环基”、“7-10元桥环基”、“7-9元桥环基”、“7-8元桥环基”、“9-10元桥环基”、“3-10元桥环基”等。具体实例包括但不仅限于： 等。
本发明所述的“3-10元杂环基”是指含有3-10个环原子(其中至少一个环原子为杂原子，例如氮原子、氧原子或硫原子)的环状基团。任选地，环状结构中的环原子(例如碳原子、氮原子或硫原子)可以被氧代。“3-10元杂环基”包括例如“3-10元含氮杂环基”、“3-10元含氧杂环基”、“3-8元杂环基”、“3-7元杂环基”、“3-6元杂环基”、“3-6元含氧杂环基”、“4-7元杂环基”、“4-6元杂环基”、“5-7元杂环基”、“5-6元杂环基”、“5-6元含氮杂环基”、“6-8元杂环基”等，优选为“5-6元杂环基”。具体实例包括但不仅限于：氮杂环丙烷基、2H-氮杂环丙烷基、二氮杂环丙烷基、3H-二氮杂环丙烯基、氮杂环丁烷基、1,4-二氧杂环己烷基、1,3-二氧杂环己烷基、1,3-二氧杂环戊烷基、1,4-二氧杂环己二烯基、四氢呋喃基、二氢吡咯基、吡咯烷基、咪唑烷基、4,5-二氢咪唑基、吡唑烷基、4,5-二氢吡唑基、2,5-二氢噻吩基、四氢噻吩基、4,5-二氢噻唑基、噻唑烷基、哌啶基、四氢吡啶基、哌啶酮基、四氢吡啶酮基、二氢哌啶酮基、哌嗪基、吗啉基、4,5-二氢噁唑基、4,5-二氢异噁唑基、2,3-二氢异噁唑基、噁唑烷基、2H-1,2-噁嗪基、6H-1,3-噁嗪基、4H-1,3-噻嗪基、6H-1,3-噻嗪基、2H-吡喃基、2H-吡喃-2-酮基、3,4-二氢-2H-吡喃基等。所述的“3-8元杂环基”和“3-6元杂环基”分别是指3-10元杂环基中含有3-8个环原子和3-6个环原子的具体实例。
本发明所述的“3-10元含氮杂环基”是指含有3-10个环原子且其中至少一个环原子为氮原子的杂环基，包括例如“5-6元含氮杂环基”、“5～10元含氮杂环基”、“9-10元含氮杂环基”等。
本发明所述的“3-10元含氧杂环基”是指含有3-10个环原子且其中至少一个环原子为氧原子的杂环基，包括例如“3-6元含氧杂环基”、“5-6元含氧杂环基”、“9-10元含氧杂环基”等。
本发明所述的“3-14元稠杂环基”是指由两个或两个以上环状结构彼此共用两个相邻的原子所形成的、含有3-14个环原子(其中至少一个环原子为杂原子，例如氮原子、氧原子或硫原子)的环状结构。任选地，环状结构中的环原子(例如碳原子、氮原子或硫原子)可以被氧代。“3-14元稠杂环基”包括例如“3-14元含氮稠杂环基”、“4-12元稠杂环基”、“6-11元稠杂环基”、“5-10元稠杂环基”、“7-10元稠杂环基”、“3-10元稠杂环基”、“3-10元含氮稠杂环基”、“9-10元稠杂环基”、“9-10元含氮稠杂环基”等。具体实例包括但不仅限于：四氢咪唑并[4,5-c]吡啶基、3,4-二氢喹唑啉基、1,2-二氢喹喔啉基、苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯基、1,3-二氢异苯并呋喃基、2H-色原烯基、2H-色原烯-2-酮基、4H-色烯基、4H-色烯-4-酮基、色满基、4H-1,3-苯并噁嗪基、4,6-二氢-1H-呋喃并[3,4-d]咪唑基、3a,4,6,6a-四氢-1H-呋喃并[3,4-d]咪唑基、4,6-二氢-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑基、4,6-二氢-1H-吡咯并[3,4-d]咪唑基、苯并咪唑烷基、八氢-苯并[d]咪唑基、十氢喹啉基、六氢噻吩并咪唑基、六氢呋喃并咪唑基、4,5,6,7-四氢-1H-苯并[d]咪唑基、八氢环戊烯并[c]吡咯基、二氢吲哚基、二氢异吲哚基、苯并噁唑烷基、苯并噻唑烷基、1,2,3,4-四氢异喹啉基、1,2,3,4-四氢喹啉基、4H-1,3-苯并噁嗪基等。
本发明所述的“3-14元含氮稠杂环基”是指含有至少一个环氮原子的3-14元稠杂环基，具体实例包括例如“3-10元含氮稠杂环基”、“6-11元含氮稠杂环基”、“7-10元含氮稠杂环基”、“9-10元含氮稠杂环基”等。
本发明所述的“3-14元螺杂环基”是指由两个或两个以上环状结构彼此共用一个环原子所形成的、含有3-14个环原子(其中至少一个环原子为杂原子，例如氮原子、氧原子或硫原子)的环状结构。任选地，环状结构中的环原子(例如碳原子、氮原子或硫原子)可以被氧代。“3-14元螺杂环基”包括例如“5-11元螺杂环基”、“6-11元螺杂环基”、“5-10元螺杂环基”、“7-11元螺杂环基”、“7-10元螺杂环基”、“7-9元螺杂环基”、“7-8元螺杂环基”、“9-10元螺杂环基”、“3-10元螺杂环基”等。具体实例包括但不仅限于： 等。所述“3-10元螺杂环基”是指3-14元螺杂环基中含有3-10个环原子的具体实例。
本发明所述的“3-14元桥杂环基”是指由两个或两个以上环状结构彼此共用两个非相邻的环原子所形成的、含有3-14个环原子(其中至少一个环原子为杂原子，例如氮原子、氧原子或硫原子)的环状结构。任选地，环状结构中的环原子(例如碳原子、氮原子或硫原子)可以被氧代。“3-14元桥杂环基”包括例如“5-10元桥杂环基”、“6-11元桥杂环基”、“6-9元桥杂环基”、“6-10元桥杂环基”、“7-10元桥杂环基”、“7-9元桥杂环基”、“7-8元桥杂环基”、“8元桥杂环基”、“9-10元桥杂环基”、“3-10元桥杂环基”等。具体实例包括但不仅限于： 等。所述“3-10元桥杂环基”是指3-14元桥杂环基中含有3-10个环原子的具体实例。
本发明所述的“5-8元杂芳基”是指含有5-8个环原子(其中至少一个环原子为杂原子，例如氮原子、氧原子或硫原子)的具有芳香性的环状基团。任选地，环状结构中的环原子(例如碳原子、氮原子或硫原子)可以被氧代。“5-8元杂芳基”包括例如“5-7元杂芳基”、“5-6元杂芳基”等。具体实例包括但不仅限于呋喃基、噻吩基、吡咯基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、咪唑基、吡唑基、1,2,3-***基、1,2,4-***基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、吡啶基、2-吡啶酮基、4-吡啶酮基、嘧啶基、1,4-二氧杂环己二烯基、哒嗪基、吡嗪基、1,2,3-三嗪基、1,3,5-三嗪基、1,2,4,5-四嗪基、氮杂环庚三烯基、1,3-二氮杂环庚三烯基、氮杂环辛四烯基等。所述“5-6元杂芳基”是指5-8元杂芳基中含有5-6个环原子的具体实例。
本发明所述的“5-14元稠杂芳基”是指由两个或两个以上环状结构彼此共用两个相邻的原子所形成的、含有5-14个环原子(其中至少一个环原子为杂原子，例如氮原子、氧原子或硫原子)的、不饱和的具有芳香性的环状结构。任选地，环状结构中的环原子(例如碳原子、氮原子或硫原子)可以被氧代。“5-14元稠杂芳基”包括例如“5-10元稠杂芳基”、“7-10元稠杂芳基”、“9-10元稠杂芳基”等。具体实例包括但不限于：苯并呋喃基、苯并异呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、异吲哚基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、吲唑基、苯并***基、喹啉基、2-喹啉酮基、4-喹啉酮基、1-异喹啉酮基、异喹啉基、吖啶基、菲啶基、苯并哒嗪基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、酚嗪基、喋啶基、嘌呤基、萘啶基、吩嗪基、吩噻嗪基等。所述“5-10元稠杂芳基”是指5-14元稠杂芳基中含有5-10个环原子的具体实例。
本发明所述的“碳原子、氮原子或硫原子被氧代”是指形成C＝O、N＝O或S＝O的结构。
本发明式(I)所示化合物的“药学上可接受的盐”是指式(I)化合物中存在的酸性官能团(例如-COOH、-OH、-SO3H等)与适当的无机或者有机阳离子(碱)形成的盐，包括与碱金属或碱土金属形成的盐、铵盐，以及与含氮有机碱形成的盐；以及式(I)化合物中存在的碱性官能团(例如-NH2等)与适当的无机或者有机阴离子(酸)形成的盐，包括与无机酸或有机酸(例如羧酸等)形成的盐。
本发明通式(I)所示化合物的“酯”表示当式(I)所示化合物存在羧基时，可与醇发生酯化反应而形成的酯，当式(I)所示化合物存在羟基时，可与有机酸、无机酸、有机酸盐等发生酯化反应而形成的酯。酯在酸或者碱存在的条件下，可发生水解反应生成相应的酸或醇。
本发明式(I)所示化合物的“溶剂化物”是指其与溶剂分子缔合形成的物质。所述溶剂可以是有机溶剂(例如甲醇、乙醇、丙醇、乙腈等)、水等。例如，本发明式(I)化合物可以与乙醇形成乙醇化物，与水形成水合物。
本发明化合物的“立体异构”分为构象异构和构型异构，而构型异构还分为顺反异构和旋光异构。构象异构是指具有一定构型的有机物分子由于碳、碳单键的旋转或扭曲而使得分子各原子或原子团在空间产生不同的排列方式的一种立体异构现象，常见的有烷烃和环烷烃类化合物的结构，如环己烷结构中出现的椅式构象和船式构象。“立体异构体”，指当本发明化合物含有一个或多个不对称中心，因而可作为外消旋体和外消旋混合物、单一对映异构体、非对映异构体混合物和单一非对映异构体。本发明化合物有不对称中心，这类不对称中心各自会独立地产生两个光学异构体，本发明的范围包括所有可能的光学异构体和非对映异构体混合物和纯的或部分纯的化合物。本发明所述的化合物若含有烯烃双键，除非特别说明，本发明包括顺式异构体和反式异构体。本发明所述的化合物可以以互变异构体形式存在，其通过一个或多个双键位移而具有不同的氢的连接点。例如，酮和它的烯醇形式是酮-烯醇互变异构体。各互变异构体及其混合物都包括在本发明的化合物中。所有式(I)化合物的对映异构体、非对映异构体、消旋异构体、顺反异构体、互变异构体、几何异构体、差向异构体及其混合物，均包括在本发明范围中。
本发明所述的“EGFR”是指表皮生长因子受体(epidermal growth factorreceptor)，其是一种属于受体酪氨酸激酶(ERBB)家族的跨膜蛋白，在肿瘤的转化和增长中发挥着主要作用。EGFR的氨基酸序列是本领域技术人员已知的，并且可见于各种公共数据库，例如NCBI数据库。EGFR的示例性氨基酸序列可参见例如SEQ ID NO:1。在本发明中，当提及或涉及EGFR的氨基酸序列时，其使用SEQ ID NO:1所示的序列来进行描述。例如，表述“EGFR的第790位氨基酸残基”是指，SEQ ID NO:1所示序列的第790位氨基酸残基。然而，本领域技术人员理解，在EGFR中，可天然产生或人工引入突变或变异(包括但不限于，置换，缺失和/或添加)，而不影响其生物学功能。因此，在本发明中，术语“EGFR”应包括所有此类序列，包括例如SEQ ID NO:1所示序列以及其天然或人工的变体。并且，当描述EGFR序列的位置或片段时，其不仅包括SEQ ID NO:1所示序列的位置或片段，还包括SEQ ID NO:1所示序列的天然或人工变体中的相应位置或片段。例如，表述“EGFR的第790位氨基酸残基”包括，SEQ ID NO:1所示序列的第790位氨基酸残基，以及SEQ ID NO:1所示序列的变体(天然或人工)中的相应位置。例如，表述“EGFR的第746-750位氨基酸残基”包括，SEQ ID NO:1所示序列的第746-750位氨基酸残基，以及SEQ ID NO:1所示序列的变体(天然或人工)中的相应片段。
根据本发明，表述“相应序列片段”或“相应片段”是指，当对序列进行最优比对时，即当序列进行比对以获得最高百分数同一性时，进行比较的序列中位于等同位置的片段。根据本发明，表述“相应位置”是指，当对序列进行最优比对时，即当序列进行比对以获得最高百分数同一性时，进行比较的序列中位于等同位点的位置。根据本发明，术语“同一性”用于指两个多肽之间或两个核酸之间序列的匹配情况。当两个进行比较的序列中的某个位置都被相同的碱基或氨基酸单体亚单元占据时(例如，两个DNA分子的每一个中的某个位置都被腺嘌呤占据，或两个多肽的每一个中的某个位置都被赖氨酸占据)，那么各分子在该位置上是同一的。两个序列之间的“百分数同一性”是由这两个序列共有的匹配位置数目除以进行比较的位置数目×100的函数。例如，如果两个序列的10个位置中有6个匹配，那么这两个序列具有60％的同一性。例如，DNA序列CTGACT和CAGGTT共有50％的同一性(总共6个位置中有3个位置匹配)。通常，在将两个序列比对以产生最大同一性时进行比较。这样的比对可通过使用，例如，可通过计算机程序例如Align程序(DNAstar,Inc.)方便地进行的Needleman等人(1970)J.Mol.Biol.48：443-453的方法来实现。还可使用已整合入ALIGN程序(版本2.0)的E.Meyers和W.Miller(Comput.Appl Biosci.，4:11-17(1988))的算法，使用PAM120权重残基表(weight residue table)、12的缺口长度罚分和4的缺口罚分来测定两个氨基酸序列之间的百分数同一性。此外，可使用已整合入GCG软件包(可在www.gcg.com上获得)的GAP程序中的Needleman和Wunsch(J MoI Biol.48:444-453(1970))算法，使用Blossum62矩阵或PAM250矩阵以及16、14、12、10、8、6或4的缺口权重(gap weight)和1、2、3、4、5或6的长度权重来测定两个氨基酸序列之间的百分数同一性。
此外，在本发明中，除非另外明确指出或根据上下文能够直接判断，否则当提及EGFR时，其不仅包括野生型EGFR，而且还包括野生型EGFR的各种突变体(天然的或人工的)。例如，表述“EGFR的过度表达”包括，野生型EGFR和突变型EGFR的过度表达。又如，本领域技术人员易于理解，表述“EGFR或其突变体”是指，野生型EGFR或其突变体。另外，如本文中所使用的，“EGFR突变体”和“突变型EGFR”具有相同的含义，二者可互换使用。
如本文中所使用的，除非另外明确指出，否则“EGFR的活性”是指，EGFR的酪氨酸激酶活性。如本文中所使用的，“EGFR过度活性”是指，细胞的EGFR酪氨酸激酶活性高于天然状态(即，生理状态或正常状态)下的细胞的EGFR酪氨酸激酶活性，这例如可导致细胞不受控制地增殖(即，过度增殖)。EGFR过度活性可例如由EGFR的过度表达和/或EGFR突变导致。如本文中所使用的，“与EGFR过度活性相关的疾病”意指，患有所述疾病的受试者的细胞表现出EGFR过度活性。在此类疾病中，EGFR过度活性可导致所述疾病的起始，加速所述疾病的进展，和/或影响患有所述疾病的受试者对治疗的响应。与EGFR过度活性相关的疾病可包括但不限于过度增殖性疾病，例如癌症和非癌性疾病。
如本文中所使用的，“由EGFR突变体引起的耐药性”意指，因EGFR中的突变而导致细胞对EGFR TKI不敏感。已报道了数种可导致对EGFR TKI的耐药性的EGFR突变，包括但不限于，T790M突变，L858R突变，和d746-750突变。
如本文中所使用的，EGFR的T790M突变是指，EGFR的第790位氨基酸残基由T突变成M。如本文中所使用的，EGFR的L858R突变是指，EGFR的第858位氨基酸残基由L突变成R。如本文中所使用的，EGFR的d746-750突变是指，EGFR的第746-750位氨基酸残基被缺失。本领域技术人员将理解，其他类似的表述具有类似的含义。
如本文中所使用的，术语“有效量”是指足以获得或至少部分获得期望的效果的量。例如，预防疾病(例如与EGFR过度活性相关的疾病)有效量是指，足以预防，阻止，或延迟疾病(例如与EGFR过度活性相关的疾病)的发生的量；治疗疾病有效量是指，足以治愈或至少部分阻止已患有疾病的患者的疾病和其并发症的量。测定这样的有效量完全在本领域技术人员的能力范围之内。例如，对于治疗用途有效的量将取决于待治疗的疾病的严重度、患者自己的免疫***的总体状态、患者的一般情况例如年龄，体重和性别，药物的施用方式，以及同时施用的其他治疗等等。
本发明还提供了式(I)化合物的制备方法，但不仅限于下列方法：
工艺路线一：
工艺路线二：
其中，上述反应方程式中的R1、R2、R3、Z1、Z2、A、B、C、X和Y如前文所述
反应步骤一：
1、中间体1的制备
将原料1溶于适当的有机溶剂(例如四氢呋喃、乙醇、甲醇)，低温(例如0℃)下加入原料2(R2Cl)，室温搅拌至反应完毕，加水淬灭，用有机溶剂(例如乙酸乙酯、二氯甲烷)萃取，有机相干燥浓缩，经纯化得到中间体1。
2、中间体3的制备
中间体1和碱(例如三乙胺、二乙胺)溶于适当溶剂(例如四氢呋喃、乙醇、甲醇)，慢慢加入原料3，室温搅拌至反应完毕，加水淬灭，用有机溶剂(例如乙酸乙酯、二氯甲烷)萃取，有机相干燥浓缩，经纯化得到中间体3。
3、中间体4的制备
将原料4和原料5溶于适当溶剂(例如N,N-二甲基甲酰胺、二氯亚砜)，加入适量碱(例如碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯)和适当的金属钯催化剂(例如[1,1'-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯)，氮气保护下加热(例如90℃)反应，反应完毕后降至室温，加水淬灭，用有机溶剂(例如乙酸乙酯)萃取，有机相干燥浓缩，经纯化得到中间体4。
4、中间体5的制备
将中间体4溶于适当溶剂(例如二氯甲烷、乙醇、乙腈)，加入三乙胺后加入原料6(R3Cl)，室温搅拌至反应完毕，加水淬灭，用二氯甲烷萃取，有机相干燥浓缩，经纯化得到中间体5。
5、式(I)所示化合物的制备
将中间体3和中间体5溶于适当溶剂(例如1,4-二氧六环)适量三氟乙酸，氮气保护下加热(例如70℃)反应，反应完毕后降至室温，有机相干燥浓缩，经纯化得到本发明式(I)化合物。
反应步骤二：
1、中间体2的制备
原料1和碱(例如三乙胺、二乙胺)溶于适当有机溶剂(例如四氢呋喃、乙醇、甲醇)，慢慢加入原料3，室温搅拌至反应完毕，加水淬灭，用有机溶剂(例如乙酸乙酯、二氯甲烷)萃取，有机相干燥浓缩，经纯化得到中间体2。
2、中间体3的制备
将中间体2溶于适当溶剂(例如二氯甲烷、乙醇、乙腈)，低温(例如0℃)下加入R2Cl，室温搅拌至反应完毕，加水淬灭，用有机溶剂(例如二氯甲烷、乙酸乙酯)萃取，有机相干燥浓缩，经纯化得到中间体3。
3、中间体6的制备
将原料7溶于适当溶剂(例如四氢呋喃、乙醇)，加入三乙胺后加入原料6(R3Cl)，室温搅拌至反应完毕，加水淬灭，用有机溶剂(例如乙酸乙酯、二氯甲烷)萃取，有机相干燥浓缩，经纯化得到中间体6。
4、中间体5的制备
原料5和中间体6溶于适当溶剂(例如乙腈、甲醇、二氯甲烷)，加入适量碱(例如碳酸铯、碳酸钠、碳酸钾)，加热至反应结束，降至室温，加水淬灭，用有机溶剂(例如乙酸乙酯、乙醇、乙腈)萃取，有机相干燥浓缩，经纯化得到中间体5。
5、式(I)所示化合物的制备
将中间体3和中间体5溶于适当溶剂(例如1,4-二氧六环、二氯亚砜、乙醇、乙腈)，加入碳酸钾和适当的金属钯催化剂(例如三(二亚苄基丙酮)二钯)和配体(例如2-二环己基磷-2',4',6'-三异丙基联苯)，氮气保护下加热(例如微波加热110℃)反应，反应完毕后降至室温，加水淬灭，用有机溶剂(例如乙酸乙酯、二氯甲烷)萃取，有机相干燥浓缩，经纯化得到本发明式(I)化合物。
本发明还涉及，包括式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体，以及任选的一种或多种药用载体和/或稀释剂的药物组合物。所述药物组合物可以制成药学上可接受的任一剂型。例如，本发明的化合物或药物组合物可以配制为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂、注射剂(包括注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液)、栓剂、吸入剂或喷雾剂。
此外，本发明的所述药物组合物还可以以任何合适的给药方式，例如口服、肠胃外、直肠、经肺或局部给药等方式施用于需要这种治疗的患者或受试者。当用于口服给药时，所述药物组合物可制成口服制剂，例如口服固体制剂，如片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂等；或，口服液体制剂，如口服溶液剂、口服混悬剂、糖浆剂等。当制成口服制剂时，所述药物组合物还可包含适宜的填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等。当用于肠胃外给药时，所述药物组合物可制成注射剂，包括注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液。当制成注射剂时，所述药物组合物可采用现有制药领域中的常规方法来进行生产。当配制注射剂时，所述药物组合物中可以不加入附加剂，也可根据药物的性质加入适宜的附加剂。当用于直肠给药时，所述药物组合物可制成栓剂等。用于经肺给药时，所述药物组合物可制成吸入剂或喷雾剂等。
在某些优选的实施方案中，本发明的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体以治疗和/或预防有效量存在于药物组合物或药物中。在某些优选的实施方案中，本发明的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体以单位剂量的形式存在于药物组合物或药物中。
本发明式(I)化合物或其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体可以单独给药，或者与一种或多种第二治疗剂联合使用。因此，在某些优选的实施方案中，所述的药物组合物还含有一种或多种第二治疗剂。在某些优选的实施方案中，所述第二治疗剂选自：DNA复制抑制剂(例如拓扑异构酶抑制剂和烷基化试剂)，有丝***抑制剂，血管生成抑制剂，生长因子抑制剂，抗体，抗代谢物，抗肿瘤激素类药物，铂类药物，免疫抑制剂，另外的酪氨酸激酶抑制剂。在某些优选的实施方案中，所述第二治疗剂选自：甲氨蝶呤、卡培他滨、吉西他滨、去氧氟尿苷、培美曲塞二钠、帕唑帕尼、伊马替尼、埃罗替尼、拉帕替尼、吉非替尼、凡德他尼、赫赛汀、贝伐单抗、利妥昔单抗、曲妥珠单抗、紫杉醇、长春瑞滨、多西他赛、多柔比星、羟基喜树碱、丝裂霉素、表柔比星、吡柔比星、博来霉素、来曲唑、他莫西芬、氟维司群、曲谱瑞林、氟他胺、亮丙瑞林、阿那曲唑、异环磷酰胺、白消安、环磷酰胺、卡莫司汀、尼莫司汀、司莫司汀、氮芥、马法兰、瘤可宁、卡铂、顺铂、奥沙利铂、络铂、拓扑特肯、喜树碱、拓扑替康、依维莫司、西罗莫斯、特癌适、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、硫唑嘌呤、菌素D、柔红霉素、阿霉素、米托蒽醌、争光霉素、普卡霉素或氨鲁米特。
待组合的各成分(例如，本发明的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物、其立体异构体与第二治疗剂)可同时给药或依次顺序地分开用药。例如，可以在施用本发明化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物、或其立体异构体之前、同时或之后，施用第二治疗剂。此外，待组合的各成分还可以以同一制剂形式或以分开的不同制剂的形式联合给药。
本发明式(I)化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体可用于治疗与EGFR过度活性相关的疾病。因此，本申请还涉及，本发明式(I)化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体用于制备药物的用途，所述药物用于治疗和/或预防受试者中与EGFR过度活性相关的疾病。此外，本申请还涉及，一种治疗和/或预防受试者中与EGFR过度活性相关的疾病的方法，其包括给有此需要的受试者施用治疗和/或预防有效量的本发明式(I)化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体，或者本发明的药物组合物。此外，本申请还涉及，本发明式(I)化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体，其用于治疗和/或预防受试者中与EGFR过度活性相关的疾病。
在某些优选的实施方案中，所述疾病为过度增殖性疾病，例如癌症和非癌性疾病。在某些优选的实施方案中，所述癌症选自：食管癌(例如食管腺癌和食管鳞状细胞癌)、脑瘤、肺癌(例如小细胞性肺癌和非小细胞性肺癌)、鳞状上皮细胞癌、膀胱癌、胃癌、卵巢癌、腹膜癌、胰腺癌、乳腺癌、头颈癌、子***、子宫内膜癌、结直肠癌、肝癌、肾癌、实体瘤、非霍奇金淋巴瘤、中枢神经***肿瘤(例如神经胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、胶质瘤或肉瘤)、***癌和甲状腺癌。在某些优选的实施方案中，所述非癌性疾病为例如皮肤或***的良性增生。在某些优选的实施方案中，所述疾病为慢性阻塞性肺病。
在某些优选的实施方案中，EGFR的过度活性是由EGFR的过度表达导致的。在某些优选的实施方案中，EGFR的过度活性是由EGFR的突变导致的。
在某些优选的实施方案中，所述疾病(例如癌症疾病)具有由EGFR突变体引起的耐药性。之前的研究已显示，EGFR的突变可导致细胞产生对EGFR TKI的耐药性。此类突变包括但不限于，T790M突变，L858R突变，和d746-750突变。因此，在某些优选的实施方案中，所述EGFR突变体包含下列中的任一项或多项：T790M突变，L858R突变，和d746-750突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR突变体包含T790M突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR突变体包含T790M突变和L858R突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR突变体包含T790M突变和d746-750突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR突变体包含T790M突变，L858R突变，和d746-750突变。
在某些优选的实施方案中，所述受试者为哺乳动物，例如牛科动物、马科动物、羊科动物、猪科动物、犬科动物、猫科动物、啮齿类动物、灵长类动物；其中，特别优选的受试者为人。
在某些优选的实施方案中，所述的药物还含有一种或多种第二治疗剂。在某些优选的实施方案中，所述方法还包括，给所述受试者施用一种或多种第二治疗剂。在某些优选的实施方案中，所述化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体与一种或多种第二治疗剂联合使用。
在某些优选的实施方案中，所述第二治疗剂选自：DNA复制抑制剂(例如拓扑异构酶抑制剂和烷基化试剂)，有丝***抑制剂，血管生成抑制剂，生长因子抑制剂，抗体，抗代谢物，抗肿瘤激素类药物，铂类药物，免疫抑制剂，另外的酪氨酸激酶抑制剂。在某些优选的实施方案中，所述第二治疗剂选自：甲氨蝶呤、卡培他滨、吉西他滨、去氧氟尿苷、培美曲塞二钠、帕唑帕尼、伊马替尼、埃罗替尼、拉帕替尼、吉非替尼、凡德他尼、赫赛汀、贝伐单抗、利妥昔单抗、曲妥珠单抗、紫杉醇、长春瑞滨、多西他赛、多柔比星、羟基喜树碱、丝裂霉素、表柔比星、吡柔比星、博来霉素、来曲唑、他莫西芬、氟维司群、曲谱瑞林、氟他胺、亮丙瑞林、阿那曲唑、异环磷酰胺、白消安、环磷酰胺、卡莫司汀、尼莫司汀、司莫司汀、氮芥、马法兰、瘤可宁、卡铂、顺铂、奥沙利铂、络铂、拓扑特肯、喜树碱、拓扑替康、依维莫司、西罗莫斯、特癌适、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、硫唑嘌呤、菌素D、柔红霉素、阿霉素、米托蒽醌、争光霉素、普卡霉素或氨鲁米特。
在某些优选的实施方案中，在施用所述化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物、其立体异构体、或者所述药物组合物之前、同时或之后，施用所述第二治疗剂。
本发明式(I)化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体可用作酪氨酸激酶抑制剂，或用于降低或抑制细胞中EGFR或其突变体的活性。因此，本申请还涉及，本发明式(I)化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体用于制备制剂的用途，所述制剂用作酪氨酸激酶抑制剂，或用于降低或抑制细胞中EGFR或其突变体的活性。此外，本申请还涉及，一种降低或抑制细胞中EGFR或其突变体的活性的方法，其包括给所述细胞施用有效量的本发明式(I)所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体。此外，本申请还涉及，本发明式(I)所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体，其用于降低或抑制细胞中EGFR或其突变体的活性。
在某些优选的实施方案中，所述制剂或者所述化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体用于体内或者体外施用。在某些优选的实施方案中，所述制剂或者所述化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体被施用至受试者(例如哺乳动物；例如牛科动物、马科动物、羊科动物、猪科动物、犬科动物、猫科动物、啮齿类动物、灵长类动物；例如，人)体内，以降低或抑制受试者体内细胞中的EGFR或其突变体的活性。在某些优选的实施方案中，所述制剂或者所述化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体被施用至体外细胞(例如细胞系或者来自受试者的细胞，例如癌症细胞)，以降低或抑制体外细胞中的EGFR或其突变体的活性。
在某些优选的实施方案中，所述方法在体内或者体外进行。在某些优选的实施方案中，所述方法在体内进行，例如应用于受试者(例如哺乳动物；例如牛科动物、马科动物、羊科动物、猪科动物、犬科动物、猫科动物、啮齿类动物、灵长类动物；例如，人)体内，以降低或抑制受试者体内细胞中的EGFR或其突变体的活性。在某些优选的实施方案中，所述方法在体外进行，例如应用于体外细胞(例如细胞系或者来自受试者的细胞，例如癌症细胞)，以降低或抑制体外细胞中的EGFR或其突变体的活性。
在某些优选的实施方案中，所述EGFR的突变体包含下列中的任一项或多项：T790M突变，L858R突变，和d746-750突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR的突变体包含T790M突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR的突变体包含T790M突变和L858R突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR的突变体包含T790M突变和d746-750突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR的突变体包含T790M突变，L858R突变，和d746-750突变。
在某些优选的实施方案中，所述细胞选自食管癌细胞(例如食管腺癌细胞和食管鳞状细胞癌细胞)、脑瘤细胞、肺癌细胞(例如小细胞性肺癌细胞和非小细胞性肺癌细胞)、鳞状上皮细胞癌细胞、膀胱癌细胞、胃癌细胞、卵巢癌细胞、腹膜癌细胞、胰腺癌细胞、乳腺癌细胞、头颈癌细胞、子***细胞、子宫内膜癌细胞、结直肠癌细胞、肝癌细胞、肾癌细胞、实体瘤细胞、非霍奇金淋巴瘤细胞、中枢神经***肿瘤细胞(例如神经胶质瘤细胞、多形性胶质母细胞瘤细胞、胶质瘤细胞或肉瘤细胞)、***癌细胞和甲状腺癌细胞。
在某些优选的实施方案中，所述细胞为来自受试者的原代细胞或其培养物，或已建立的细胞系。在某些优选的实施方案中，所述受试者为哺乳动物，例如牛科动物、马科动物、羊科动物、猪科动物、犬科动物、猫科动物、啮齿类动物、灵长类动物；其中，特别优选的受试者为人。
本申请还涉及一种试剂盒，其包含本发明式(I)化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体，且任选地还包括使用说明。
在某些优选的实施方案中，所述试剂盒用于降低或抑制细胞中EGFR或其突变体的活性。在某些优选的实施方案中，所述EGFR的突变体包含下列中的任一项或多项：T790M突变，L858R突变，和d746-750突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR的突变体包含T790M突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR的突变体包含T790M突变和L858R突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR的突变体包含T790M突变和d746-750突变。在某些优选的实施方案中，所述EGFR的突变体包含T790M突变，L858R突变，和d746-750突变。
在某些优选的实施方案中，所述细胞选自食管癌细胞(例如食管腺癌细胞和食管鳞状细胞癌细胞)、脑瘤细胞、肺癌细胞(例如小细胞性肺癌细胞和非小细胞性肺癌细胞)、鳞状上皮细胞癌细胞、膀胱癌细胞、胃癌细胞、卵巢癌细胞、腹膜癌细胞、胰腺癌细胞、乳腺癌细胞、头颈癌细胞、子***细胞、子宫内膜癌细胞、结直肠癌细胞、肝癌细胞、肾癌细胞、实体瘤细胞、非霍奇金淋巴瘤细胞、中枢神经***肿瘤细胞(例如神经胶质瘤细胞、多形性胶质母细胞瘤细胞、胶质瘤细胞或肉瘤细胞)、***癌细胞和甲状腺癌细胞。在某些优选的实施方案中，所述细胞为来自受试者的原代细胞或其培养物，或已建立的细胞系。在某些优选的实施方案中，所述受试者为哺乳动物，例如牛科动物、马科动物、羊科动物、猪科动物、犬科动物、猫科动物、啮齿类动物、灵长类动物；其中，特别优选的受试者为人。
发明的有益效果
与现有技术相比，本发明的技术方案具有以下优点：
(1)本发明式(I)化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体具有优异的EGFR激酶抑制活性，显示出优异的抗肿瘤作用，对过度增殖性疾病和慢性阻塞性肺病具有优良的治疗效果。
(2)与对野生型EGFR的抑制作用相比，本发明式(I)化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体以更高的活性(即，更低的IC50)抑制EGFR突变体。也即，本发明的化合物对突变型EGFR(特别是包含T790M突变的EGFR)具有更高的活性和特异性。这使得本发明的化合物能够以更低的剂量使用，并且显著减少了由对野生型EGFR的抑制作用所引发的副作用，例如皮疹和腹泻。
(3)本发明式(I)化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体能够抑制EGFR突变体的酪氨酸激酶活性。这使得本发明的化合物能够用于治疗耐药性疾病(例如癌症疾病，例如肺癌)，特别是具有由EGFR突变(例如EGFR的T790M突变)引起的耐药性的疾病(例如癌症疾病，例如肺癌)。
(4)本发明式(I)化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其溶剂化物或其立体异构体制备工艺简单，质量稳定，具备良好的理化性质，易于进行大规模工业生产。
具体实施方式
以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制。本领域技术人员根据本发明的教导，可以做出各种修改或改进，而不脱离本发明的基本思想和范围。
实验方案
以下提供本发明的部分化合物的示例性实验方案，以显示本发明化合物的有利活性和有益技术效果。但是应当理解，下述实验方案仅仅是对本发明内容的示例，而不是对本发明范围的限制。本领域技术人员在本说明书的教导下，能够对本发明的技术方案进行适当的修改或改变，而不背离本发明的精神和范围。
实验例1本发明化合物的体外酶学活性实验
供试品：本发明部分化合物，其化学名称和制备方法见各化合物的制备实施例。
对照药：CO-1686，自制(参考WO2012061299A1中的方法制备)，其结构式如背景技术所述。
下述实验中的缩写所代表的含义如下：
EDTA：乙二胺四乙酸
DMSO：二甲基亚砜
SD：标准差
FAM：羧基荧光素
Brij-35：十二烷基聚乙二醇醚
HEPES：羧乙基哌嗪乙硫磺酸
DTT：二硫苏糖醇
实验方法：利用Mobility Shift Assay的方法，在Km ATP的情况下，使用激酶EGFR和EGFR_T790M来对化合物进行筛选。
1、试剂配制
(1)用于检测激酶野生型EGFR(简称为WT EGFR或WT)、EGFR(d746-750)(简称为d746-750)、EGFR(d746-750)-T790M(简称为(d746-750)-T790M)的1倍激酶缓冲液：50mMHEPES(pH 7.5)、0.0015％Brij-35、10mM MgCl2、10mM MnCl2、2mM DTT；
(2)用于检测激酶EGFR T790M(简称为T790M)、EGFR L858R(简称为L858R)、EGFRT790M-L858R(简称为T790M-L858R)的1倍激酶缓冲液：50mM HEPES(pH 7.5)、0.0015％Brij-35、5mM MgCl2、2mM DTT
(3)终止液
100mM HEPES(pH 7.5)、0.015％Brij-35、0.2％Coating Reagent#3、50mM EDTA
2、化合物溶液配制
(1)在96孔板的第二个孔中加入5μL的10mM化合物(溶于DMSO中)，加入95μL的100％DMSO，配成100μL的0.5mM化合物。
(2)其他孔加入60μL的100％DMSO。从第2孔中取20μL化合物加入第3孔中，依次往下做4倍稀释，共稀释10个浓度。
(3)在上述96孔板中第1孔和第12孔中分别加入100μL 100％DMSO，做为对照孔。
(4)从上述96孔板的每一孔取10μL到另一块96孔板中，加入90μL 1倍激酶缓冲液。
(5)从上述96孔板中取出5μL到一块384孔反应板，例如，96孔板的A1孔转移到384孔板的A1和A2孔中，96孔板的A2孔转移到384孔板的A3和A4孔中，以此类推。
3、激酶反应
(1)配制2.5倍酶溶液
将激酶加入1倍激酶缓冲液，形成2.5倍酶溶液。
(2)配制2.5倍的底物溶液
将FAM标记的多肽和ATP加入1倍激酶缓冲液，形成2.5倍底物溶液。
(3)向384孔板中加入2.5倍酶溶液
在384孔反应板中加入10μL的2.5倍酶溶液，室温下孵育10分钟。
(4)向384孔板中加入2.5倍的底物溶液
在384孔反应板中加入10μL的2.5倍底物溶液。
(5)激酶反应和终止
28℃下孵育一定时间(由各个激酶决定)，加25μL终止液终止反应。
4、Caliper读取转化率数据
5、数据分析
(1)利用Caliper program获得酶活力的数据；
(2)通过下述公式，利用酶活力的数据来计算酶活力的抑制率：
抑制率(％)＝(最大值-测试化合物的测量值)/(最大值-最小值)*100
其中，“最大值”表示，DMSO对照的测量值；“最小值”表示，空白对照的测量值。
(3)利用XLFit excel计算IC50值。
实验结果和结论：
1、本发明化合物对野生型EGFR及EGFR T790M的IC50值测定结果
表1本发明化合物对野生型EGFR及EGFR T790M的IC50值及选择性
表2本发明化合物对野生型EGFR及EGFR T790M的IC50值及选择性
表3本发明化合物对野生型EGFR及EGFR T790M的IC50值及选择性
表4本发明化合物对野生型EGFR及EGFR T790M的IC50值及选择性
2、本发明化合物对EGFR双突变激酶的IC50值测定结果
表5本发明化合物对EGFR双突变激酶的IC50值(nM)及选择性
表6本发明化合物对EGFR双突变激酶的IC50值(nM)及选择性
表7本发明化合物对EGFR双突变激酶的IC50值(nM)及选择性
表8本发明化合物对EGFR双突变激酶的IC50值(nM)
实验结论：化合物对野生型EGFR的IC50值越大，对EGFR突变体(例如T790M)的IC50值越小，则说明化合物对EGFR突变体(例如T790M)的选择性越好。根据上述实验数据可知，本发明化合物对野生型EGFR、EGFR L858R、EGFR T790M的活性及选择性优于对照药，或者与对照药相当；本发明化合物对EGFR突变体(EGFR T790M-L858R、EGFR(d746-750)、EGFR(d746-750)-T790M)的活性及选择性优于对照药，或者与对照药相当。
实验例2本发明化合物的体外细胞学活性实验
供试品：本发明的部分化合物，其化学名称和制备方法见各化合物的制备实施例。
对照药：CO-1686，自制(参考WO2012061299A1中的方法制备)，其结构式如背景技术所述。
所使用的细胞：H1975细胞(其是包含EGFR-T790M/L858R双突变的细胞)，和A431细胞(其是包含野生型EGFR基因的细胞)。
下述实验中的缩写所代表的含义如下：
PBS：磷酸盐缓冲液
DMSO：二甲基亚砜
FBS：胎牛血清
1.细胞培养
1.1细胞悬液的制备
①去除培养瓶中的培养基；
②加入PBS润洗细胞；
③加胰酶消化离心收集；
④用含10％胎牛血清的培养基重悬，计数并调整到2×104/mL或3×104/mL浓度(细胞活力必须大于90％)；
⑤将细胞悬液加入96孔板，每孔100μL，即H1975细胞2000/孔；A431细胞3000/孔；
⑥37℃,5％CO2培养箱中培养过夜。
2.化合物溶液的配制
化合物在DMSO(或者注射用水)中稀释
①将化合物用DMSO从10mM稀释5倍到2mM，然后从2mM开始四倍稀释，共10个浓度；
②High control(HC，没有化合物抑制的对照)是：0.5％DMSO；
③Low control(LC，有化合物抑制的对照)是：1000nM。
3.化合物处理细胞(细胞铺板后24小时加化合物)
ⅰ.每孔补99μL含10％FBS的生长培养基，然后加1μL稀释好的化合物到孔中，孔中的总体积为200μL，检测化合物终浓度。
测试化合物浓度：10000,2500,625,156.25,39.06,9.76,2.44,0.61,0.15,0.04[nM]
ⅱ.将细胞板放置培养箱72小时，Celltiter-Glo方法检测
将待测板放置于室温，平衡30分钟，弃掉80μL培养基。加60μL CTG试剂(Celltiter-Glo试剂盒)，放置快速振荡器中振荡2min，再在室温下放置10min。用Envision仪器读值。
4.数据分析
用GraphPad Prism 5software计算IC50。
％inhibition(抑制率)＝100×(HC-测试化合物孔读值)/(HC-LC)
实验结果：
表9本发明化合物对H1975和A431细胞的IC50值
表10本发明化合物对H1975和A431细胞的IC50值
实验结论：本发明化合物的特点是对具有EGFR突变体的细胞(H1975)具有选择性抑制作用，但对具有野生型EGFR的细胞(A431)作用较弱。从上述结果可以看出，对于具有EGFR突变体的H1975细胞和具有野生型EGFR的A431细胞而言，本发明化合物对H1975的选择性优于对照药，或至少与对照药相当。
实验例3本发明化合物的大鼠体内药代动力学实验
供试品：本发明部分化合物，其化学名称和制备方法见各化合物的制备实施例。
受试动物：雄性SD大鼠，3只，体重200-250g/只。
供试品溶液制备：
化合物2、27的灌胃(po)给药空白溶媒：0.1％吐温80+2％HPC(羟丙基纤维素)，
配制方法：称取HPC(羟丙基纤维素)(20g)，缓慢加入搅拌着的纯化水(1000mL)中，再加入吐温80(1mL)，搅拌至澄清，得到0.1％吐温80+2％HPC的空白溶媒。分别称取化合物2(3.21mg)、27(3.03mg)，加入溶媒并置于组织研磨器中，1000转速/分钟的转速，分散均匀即得理论浓度为0.5mg/mL灌胃给药溶液；称取对照药CO-1686(6.14mg)，加入溶媒并置于组织研磨器中，1000转速/分钟的转速，分散均匀即得理论浓度为1.0mg/mL灌胃给药溶液。实测浓度见下表。
化合物2、27、31的静脉注射(iv)给药空白溶媒：5％DMSO+10％PEG400+85％(28％HP-β-CD)
分别称取化合物2(2.98mg)、27(2.98mg)、31(3.27mg)，加入静脉给药空白溶媒溶解，涡旋混匀，置于50℃恒温水浴锅中保温20min，过0.22μm滤膜即得澄清透明的理论浓度为0.5mg/mL静脉注射给药溶液。实测浓度见下表。
28％HP-β-CD溶液配制方法：称取HP-β-CD(羟丙基倍他环糊精)(2.8g)，用少量纯化水超声溶解，用纯化水定容至10mL，得到28％HP-β-CD溶液。
化合物31的静脉注射(iv)给药处方：20％DMF+20％PEG400+60％灭菌注射用水
称取化合物31(3.10mg)，加入1.262mL的DMF(N,N-二甲基甲酰胺)超声溶解，再加入1.262mL的PEG400涡旋混匀，再加入3.786mL的灭菌注射用水，涡旋混匀即得澄清透明的理论浓度为0.5mg/ml静脉注射给药溶液。实测浓度见下表。
实验方法
给药：
将供试品药液按照下表方法进行给药：
采血:
采集时间点：iv:药后0.083h,0.25h,0.5h,1h,2h,4h,6h,8h,24h.
po:药后0.167h,0.5h,1h,2h,4h,6h,8h,24h.
每个时间点通过尾静脉采取100μL左右全血，加入到K2EDTA抗凝管里，低温离心机中8000转/分钟离心6min分离血浆，血浆于-80℃冰箱冻存。
血浆样品分析：
化合物2、27、31的血浆样品分析均采用蛋白沉淀法：取30μL血浆，加入200μL内标(含CNX-2006，结构式为按照专利WO2012064706A1中的方法制备)，50ng/mL的乙腈溶液)，1000转/分钟涡旋10min，然后4000转/分钟离心20min，取上清液100μL，再加入100μL水，涡旋混匀，LC-MS/MS分析。
实验结果：
表11 SD大鼠PK评价结果(iv)
表12 SD大鼠PK评价结果(po)
AUClast代表药时曲线下面积0→t
CL代表清除率
Vss表示稳态表观分布容积
Tmax代表血药浓度达峰时间
Cmax代表血药浓度达峰浓度
F％代表绝对生物利用度
实验结论：
由表11和表12的实验结果可知，本发明化合的CL低、AUClast、F数值较高，本发明化合物在SD大鼠体内药代动力学性质良好。
实验例4本发明化合物的犬体内药代动力学实验
供试品：本发明部分化合物，其化学名称和制备方法见各化合物的制备实施例。
受试动物：雄性Beagle犬，3只/给药途径/化合物，体重7-12kg。
供试品溶液制备：
本发明化合物31的静脉(iv)溶媒：20％DMF(N,N-二甲基甲酰胺)+20％PEG400(聚乙二醇400)+60％灭菌注射用水
分别称取化合物31(15.40mg)，按照静脉溶媒超声溶解，涡旋混匀，即得理论浓度为0.5mg/mL的澄清透明溶液。
化合物2、28的静脉(iv)溶媒：5％DMSO+10％PEG400+85％(28％HP-β-CD)
分别称取化合物2(20.72mg)、化合物28(16.16mg)，加入静脉溶媒溶解，涡旋混匀，置于50℃恒温水浴锅中保温20min，涡旋混匀，即得理论浓度为0.5mg/mL澄清透明溶液。实际浓度见下表。
28％HP-β-CD的配制方法：称取HP-β-CD(28g)，加入少量灭菌注射用水超声使溶解，加入灭菌注射用水定容至100mL，涡旋混匀即得。
本发明化合物2、28、31的灌胃(po)溶媒：0.1％吐温80+2％HPC(羟丙基纤维素)
配制方法：称取HPC(羟丙基纤维素)(20g)，缓慢加入搅拌着的纯化水(1000mL)中，再加入吐温80(1mL)，搅拌至澄清,得到灌胃给药的溶媒。称取各化合物2(41.77mg)、化合物31(31.35mg)、化合物28(31.10mg)，加入灌胃给药溶媒溶解，置于组织研磨器中，1000转速/分钟的转速，分散均匀即得灌胃给药溶液。
实验方法
给药
将供试品药液按照下表方法进行给药：
采血时间点
IV给药组：给药后0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8、24h。
PO给药组：给药后0.167、0.5、1、2、4、6、8、24h。
采血方式：给药后根据时间点设置进行犬前肢静脉采血，每个时间点采集全血400μL，加入到K2EDTA抗凝管里，在8000转/分钟、4℃离心机离心6min，分离血浆并保存于-80℃冰箱。
血浆样品分析
采用蛋白沉淀法：取血浆30μL，加入内标(含CNX-2006 50ng/mL的乙腈溶液)(200μL)，1500转/分钟涡旋10min，然后12000转/分钟离心5min，取适量上清液，再加入适量水，涡旋混匀，LC-MS/MS分析。
实验结果：
表13本发明化合物的犬PK评价结果(iv)
表14本发明化合物的犬PK评价结果(po)
AUClast代表药时曲线下面积0→t
CL代表清除率
Vss表示稳态表观分布容积
Tmax代表血药浓度达峰时间
Cmax代表血药浓度达峰浓度
F％代表绝对生物利用度
实验结论：
由表13和表14的实验结果可知，本发明化合物2、31、28的清除率CL，AUClast、F数值较高，可见本发明化合物2、28、31的药代动力学性质均较好。
实验例5本发明化合物的裸鼠体内药代动力学实验
供试品：本发明部分化合物，其化学名称和制备方法见各化合物的制备实施例。
对照药：CO-1686，自制(参考WO2012061299A1中的方法制备)，其结构式如背景技术所述。
受试动物：雌性裸鼠(BALB/c)，体重20-25g/只。
供试品溶液制备：
静脉(iv)溶媒：5％DMSO+10％PEG400+85％(28％HP-β-CD)
灌胃给药溶媒(po)：2％HPC+0.1％吐温80
静脉给药：
对照药CO-1686:称取对照药CO-1686(4.042mg)，加入静脉溶媒配制成理论浓度1.0mg/mL的澄清透明溶液，并分别加入0.1283mL、0.1059mL的1M盐酸溶液调节pH为4。
化合物2、27：分别称取化合物27(3.18mg)，化合物2(3.17mg)，加入静脉给药溶媒配制成理论理论浓度为1.0mg/mL的澄清透明溶液。
灌胃给药：
对照药CO-1686、化合物2：分别称取对照药CO-1686(3.59mg)，化合物2(5.08mg)加入灌胃给药空白溶媒2％HPC+0.1％吐温80溶解，并置于组织研磨器中，1000转速/分钟的转速，分散均匀即得理论浓度为1.0mg/mL的混悬液。
化合物27：称取化合物27的固体分散样品(22.9mg)，加入pH 4.0缓冲液5.84mL，涡旋5min，用组织研磨器400rpm研磨5min，即得理论浓度为1.0mg/mL的混悬液。以上药液实测浓度均见下表。
pH 4.0缓冲液的配制方法：甲液：取枸橼酸(21g)或无水枸橼酸(19.2g)，加水使溶解成1000mL，置冰箱内保存。乙液：取磷酸氢二钠(71.63g)，加水使溶解成1000mL。取上述甲液61.45mL与乙液38.55mL混合，摇匀，即得。
实验方法
给药
将供试品药液按照下表方法进行给药：
采血：
采集时间点：给药后0.083h,0.25h,0.5h,1h,2h,4h,6h,8h。
每个时间点通过眼内眦采集60μL全血，低温离心机中8000转/分钟离心6min分离血浆，血浆于-80℃冰箱冻存。
血浆样品分析
化合物27、对照药CO-1686血浆样品分析采用蛋白沉淀法：10μL血浆加入10μL空白工作液，加入70μL含内标CNX-2006 20ng/mL乙腈溶液，涡旋3min后，离心5min(12000rpm)。取出50μL上清加入50μL纯水，涡旋混匀，LC-MS/MS进样分析。
化合物2：血浆样品采用蛋白沉淀法，移取10μL样品至1.5mL EP管中，加入10μL空白血浆，涡旋混匀。加入200μL内标乙腈溶液(含内标CNX-2006 25ng/mL)涡旋3min后，离心5min(12000rpm)。精密移取150μL上清液，加入50μL水，涡旋3min，LC-MS/MS进样分析。
实验结果：
表15裸鼠PK评价结果(iv)
表16裸鼠PK评价结果(po)
AUClast代表药时曲线下面积0→t
CL代表清除率
Vss表示稳态表观分布容积
Tmax代表血药浓度达峰时间
Cmax代表血药浓度达峰浓度
F％代表绝对生物利用度
实验结论：
由表15和表16的实验结果可知，与对照药相比，本发明化合物药代动力学性质良好，AUClast和F均明显高于对照药。
实验例6本发明化合物的体内药效实验
供试品：本发明部分化合物，其化学名称和制备方法见各化合物的制备实施例。
对照药：CO-1686，自制(参考WO2012061299A1中的方法制备)，其结构式如背景技术所述。
试验方法
1.实验动物
种属：Rodent，品系：BALB/c nude，周龄：6-8周，性别：雌性，体重：18-22g。实验动物提供商：北京安凯毅博生物技术有限公司，生产许可证号：SCXK(京)2012-0009。质量合格证号：11402400000256
2.细胞培养
用含有灭活的10％胎牛血清，100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素以及2mM谷氨酰胺的RPMI-1640培养基在37℃、5％CO2的培养箱中培养H1975癌细胞。细胞培养起始浓度为5×105个/mL，每隔3至4天待细胞长满后分瓶传代。将处于对数生长期的肿瘤细胞用于体内肿瘤接种。
3.细胞接种与分组
将无血清的RPMI-1640培养液重悬的H1975肿瘤细胞5×106个/0.1mL接种于实验动物的右侧肋部皮下。肿瘤长至100mm3左右时分组给药，每组8只。
4.溶媒和供试品溶液的配制
4.1溶媒选择与配制
CO-1686，化合物2，化合物28：0.1％吐温80+2％HPC
溶剂对照：pH4.0枸橼酸钠缓冲液，0.1％吐温80+2％HPC
0.1％吐温80+2％HPC：称取2g的羟丙基纤维素，加入双蒸水溶解，再加入0.5mLTween-80，定容至100mL，充分混匀，0.22μm滤器过滤除菌，4℃保存。
pH4.0缓冲液配制方法：甲液：取枸橼酸21g，加水使溶解成1000mL，置冰箱内保存。乙液：取磷酸氢二钠71.63g，加双蒸水使溶解成1000mL。取上述甲液61.45mL与乙液38.55mL混合，摇匀即得，4℃保存。
4.2供试品溶液配制
供试品每日给药前配制。
5.结果观察及测量
每周使用游标卡尺对肿瘤体积进行2次测量，测量肿瘤的长径和短径，其体积计算公式为：体积＝0.5×长径×短径2。根据测量结果计算相对肿瘤体积(relative tumorvolume,RTV)和相对肿瘤体积增比值(T/C)。RTV＝Vt/V0，其中Vt为分组给药后第t天的肿瘤体积均值，V0为分组当天的肿瘤体积均值。T/C＝TRTV/CRTV x100％，其中TRTV为治疗组RTV,CRTV为溶剂对照组RTV。肿瘤生长抑制率(％，TGI)按如下公式计算：(1－T/C)×100％。
6.统计学分析
应用SPSS17.0统计学软件进行One-Way ANOVA检验，对肿瘤体积进行组间统计学分析。P<0.05认为有显著性差异。
7.实验结果
表17本发明化合物对H1975人源非小细胞肺癌异种移植荷瘤裸鼠的抑瘤作用(PO给药)
注：a.均数±标准误；b.与对照组比较；
表18本发明化合物对H1975人源非小细胞肺癌异种移植荷瘤裸鼠的抑瘤作用(PO给药)
注：a.均数±标准误；b.与对照组比较；
实验结论：
由表17和18中的数据可判断，本发明化合物的体内药效好，抑制肿瘤效果显著。
制备方案
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
下述实施例中的缩写代表的含义如下：
Pd(dppf)Cl2:[1,1'-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯
Pd/C:钯碳
NBS:N-溴代丁二酰亚胺
DMF:N,N-二甲基甲酰胺
DCM:二氯甲烷
THF:四氢呋喃
LC-MS:液相色谱-质谱联用
TLC:薄层色谱
Pd2(dba)3:三(二亚苄基丙酮)二钯
XPhos:2-二环己基膦-2’,4’,6’-三异丙基联苯
PPA:多聚磷酸
制备例1 N-(6-氨基吡啶-2-基)丙烯酰胺的制备
将吡啶-2,6-二胺(5.0g,45.8mmol)和三乙胺(4.6g,45.8mmol)溶解于二氯甲烷(50mL)中，0℃下滴加入丙烯酰氯(2.1g,22.9mmol)，室温反应1小时。加入水(50mL)和二氯甲烷(30mL)，分液，水相用二氯甲烷(50mL×2)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩得到粗产物，其进一步经制备色谱分离得到白色粉末状标题化合物(1.6g,产率43％)。
制备例2 叔丁基4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸酯的制备
将4-氯-2-甲氧基-1-硝基苯(5.0g,26.7mmol)和叔丁基4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸酯(9.9g,32mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(50mL)和水(10mL)混合溶剂中，加入碳酸钠(5.66g,53.4mmol)和Pd(dppf)Cl2(978mg,1.3mmol)，氮气保护下，90℃反应16小时。冷却至室温，加入水(100mL)和乙酸乙酯(200mL)，分液，水相用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)纯化，得到黄色粉末状标题化合物(6.2g,产率70％)。
制备例3 4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-1,2,3,6-四氢吡啶的制备
将4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(1g,2.99mmol)溶于二氯甲烷(50mL)中，加入三氟乙酸(5mL)，室温下搅拌12小时，TLC检测原料消失。加水，用二氯甲烷萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得标题化合物(0.665g,产率95％)。
制备例4 1-(4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙酮的制备
将4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-1,2,3,6-四氢吡啶(4.04g,17.3mmol)溶于二氯甲烷(50mL)中，冰水浴冷却，缓慢加入三乙胺(3.5g,34.6mmol)，然后加入醋酸酐(1.94g,19.0mmol)，0℃下搅拌1小时，室温搅拌2小时。反应完毕，用水(50mL×2)洗涤，有机相干燥，过滤，浓缩，得到标题化合物(4.44g,收率93％)。
制备例5 1-(4-(4-氨基-3-甲氧基苯基)哌啶-1-基)乙酮的制备
将1-(4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙酮(2.22g,8.0mmol)溶于甲醇(50mL)中，氮气保护下向该体系中加入Pd/C(200mg)，在氢气环境下室温搅拌反应16小时。反应完毕，过滤，浓缩滤液得到标题化合物(1.7g,产率87％)。
制备例6 1-(4-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙酮的制备
将1-(4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙酮(2.22g,8.0mmol)溶于乙醇(50mL)和水(10mL)的混合溶剂中，加入铁粉(2.2g,40mmol)和氯化铵(53mg,1mmol)，80℃反应2小时。冷却至室温，过滤，浓缩，残渣溶于乙酸乙酯(100mL)中，用碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到黄褐色固体标题化合物(1.55g,产率79％)。
制备例7 叔丁基(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)氨基羧酸酯的制备
将叔丁基(3-氨基苯基)氨基羧酸酯(8.32g,40mmol)溶于四氢呋喃(150mL)中，加入三乙胺(6.06g,60mmol)，冰水浴冷却，滴加2,4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶(8.68g,40mmol)，滴加完毕后升至室温，反应16小时。加水(200mL)，用乙酸乙酯萃取(250mL×3)，有机相合并，用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品先经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝0-1:5)，然后用异丙醇和甲醇(3:1)重结晶得到白色固体状标题化合物(2.1g,产率13.5％)。
制备例8 N1-(2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)苯基-1,3-二胺的制备
将叔丁基(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)氨基羧酸酯(2.1g,5.4mmol)溶于二氯甲烷(30mL)中，加入三氟乙酸(15mL)，室温搅拌3小时。减压浓缩除去溶剂，加入饱和碳酸氢钠溶液，用乙酸乙酯萃取(150mL×3)，有机相合并，用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩除去溶剂得白色固体状标题化合物(1.45g,产率93％)。
制备例9 N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将N1-(2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)苯基-1,3-二胺(1.45g,5.0mmol)溶于四氢呋喃(150mL)中，冷却至-35℃，向其中滴加丙烯酰氯(680mg,7.5mmol)，滴加完毕后，保持-35℃反应2小时，升温至0℃反应2小时。加入饱和碳酸氢钠溶液(100mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(150mL×3)，有机相合并，用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝0-1:2)得到白色固体状标题化合物(1.2g,产率69.5％)。
制备例10 N2-(2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)吡啶-2,6-二胺的制备
将吡啶-2,6-二胺(1.12g,10.3mmol)溶于四氢呋喃(50mL)中，加入三乙胺(2.08g,20.6mmol)，冰水浴冷却，滴加2,4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶(2.235g,10.3mmol)，滴加完毕后升至室温反应16小时。加水(100mL)，用乙酸乙酯萃取(100mL×3)，有机相合并，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝1:10)纯化，得到白色固体状标题化合物(426mg,产率14.3％)。
制备例11 N-(6-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)丙烯酰胺的制备
将N2-(2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)吡啶-2,6-二胺(426mg,1.47mmol)溶于四氢呋喃(50mL)中，冷却至-35℃，向其中滴加丙烯酰氯(399.4mg,4.41mmol)，滴加完毕后-35℃反应2小时，升温至0℃反应2小时。加入饱和碳酸氢钠溶液(100mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(150mL×3)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝1:20)纯化，得到白色固体状标题化合物(200mg,产率39.6％)。
制备例12 叔丁基(3-((2-氯-5-(三氟甲基)吡啶-4-基)氨基)苯基)氨基羧酸酯的制备
将2-氯-4-碘-5-(三氟甲基)吡啶(5g,16.3mmol)、(3-氨基苯基)氨基甲酸叔丁酯(3.7g,17.9mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(1.49g,1.63mmol)、2-二环己基磷-2',4',6'-三异丙基联苯(1.55g,3.26mmol)和碳酸铯(10.7g,32.6mmol)加入到1,4-二氧六环(200mL)中。氮气保护下，80℃反应12小时。体系降至室温，减压抽滤，所得滤液浓缩，粗品先经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝30:1)纯化，然后用二氯甲烷重结晶得到淡黄色固体状标题化合物(1.5g,产率23.8％)。
制备例13 N1-(2-氯-5-(三氟甲基)吡啶-4-基)苯-1,3-二胺的制备
将叔丁基(3-((2-氯-5-(三氟甲基)吡啶-4-基)氨基)苯基)氨基羧酸酯(1.5g,3.9mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，再加入三氟乙酸(10mL)，室温下反应2小时。反应液浓缩，加入碳酸氢钠水溶液中和残留的三氟乙酸，然后用二氯甲烷萃取，所得有机相用无水硫酸钠干燥，真空浓缩得到褐色油状标题化合物(1g,产率90.1％)。
制备例14 N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)吡啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将N1-(2-氯-5-(三氟甲基)吡啶-4-基)苯-1,3-二胺(1g,3.5mmol)加入到二氯甲烷(30mL)中，冷却至-30℃，滴加丙烯酰氯(950mg,10.5mmol)，滴加完毕后升至室温反应24小时。加水淬灭反应，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝40:1)纯化，得到白色固体状标题化合物(377mg,产率31.6％)。
制备例15 甲基(4-甲氧基苯乙基)氨基羧酸酯的制备
将4-甲氧基苯乙胺盐酸盐(22.5g,120mmol)加入到四氢呋喃(300mL)中，加入三乙胺(30.3g,300mmol)，冰水浴冷却，小心地滴加氯甲酸甲酯(56.7g,600mmol)，滴加完毕后在冰水浴条件下反应4小时，升至室温反应16小时，倒入水中，用乙酸乙酯萃取(250mL×3)，有机相合并，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品加入乙酸乙酯，滤掉固体，滤液浓缩，得到淡黄色固体状标题化合物(19g,产率75.8％)。
制备例16 7-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮的制备
将多聚磷酸(150g)加热至120℃，搅拌下分批加入甲基(4-甲氧基苯乙基)氨基羧酸酯(19g,90.9mmol)，加完后，升温至140℃反应20分钟，冷却至70℃，倒入冰水(300mL)中，用二氯甲烷萃取(200mL×5)，有机相合并，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到灰白色固体状标题化合物(5.4g,产率33.6％)。
制备例17 7-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉的制备
将7-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮(5.4g,30.51mmol)溶于无水四氢呋喃(150mL)中，冰水浴冷却，加入四氢铝锂(1.28g,33.7mmol)，加完后升温至70℃反应5小时。冷却至室温，小心地加入水淬灭，加入3mol/L氢氧化钠溶液，用硅藻土过滤，分液，水相用乙酸乙酯萃取(150mL×3)，有机相合并，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到淡黄色油状标题化合物(3.9g,产率78.4％)，不经纯化直接用于下步。
制备例18 叔丁基7-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸酯的制备
将7-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉(3.9g,23.9mmol)和三乙胺(4.83g,47.8mmol)溶解于二氯甲烷(50mL)中，加入二碳酸二叔丁酯(7.8g,35.8mmol)，室温下搅拌4小时，浓缩，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝0-1:10)纯化，得到淡黄色油状标题化合物(3.65g,产率58.1％)。
制备例19 叔丁基7-甲氧基-6-硝基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸酯的制备
将叔丁基7-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸酯(3.65g,13.88mmol)溶解于硝基甲烷(50mL)中，加入乙酸酐(7.08g,69.4mmol)，冰水浴冷却，滴加浓硝酸(质量分数65％,2.02g,20.8mmol)，滴加完毕后在冰水浴条件下，搅拌5小时，加入饱和碳酸氢钠溶液(100mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(150mL×3)，有机相合并，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯:二氯甲烷＝0-1:6)纯化，得到淡黄色固体状标题化合物(1.41g,产率33.0％)。
制备例20 7-甲氧基-6-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉的制备
将叔丁基7-甲氧基-6-硝基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸酯(400mg,1.3mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(10mL)，室温搅拌3小时。减压除去溶剂，加入饱和碳酸氢钠溶液，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，得淡黄色油状标题化合物(260mg,产率96％)。
制备例21 1-(7-甲氧基-6-硝基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-酮的制备
将7-甲氧基-6-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉(260mg,1.25mmol)和三乙胺(379mg,3.75mmol)溶解于二氯甲烷(50mL)中，加入乙酸酐(255mg,2.5mmol)，室温下搅拌4小时，浓缩，粗品经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝8:1)纯化，得到淡黄色固体状标题化合物(300mg,产率96％)。
制备例22 1-(6-氨基-7-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-酮的制备
将1-(7-甲氧基-6-硝基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-酮(300mg,1.2mmol)和钯碳(30mg)悬浮于甲醇(50mL)中，体系抽真空，置换氢气。室温下反应16小时，反应液用硅藻土过滤，减压除去溶剂，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷＝0-1:10)纯化，得白色固体状标题化合物(250mg,产率95％)。
制备例23 5-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉的制备
冰水浴条件下，将5-硝基异喹啉(3.48g,20mmol)溶于冰醋酸(15mL)中，缓慢加入硼氢化钠(3.78g,100mmol)，滴加完毕，升至室温反应1小时。反应完毕，将反应液倒入冰块(50g)中，用乙酸乙酯萃取(100mL×2)，有机相经无水硫酸钠干燥后，浓缩，经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)得标题化合物(2.32g,产率65％)。
制备例24 1-(4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)乙烷-1-酮的制备
将1-(哌嗪-1-基)乙烷-1-酮(2.56g,20mmol)和4-氟-2-甲氧基-1-硝基苯(3.42g,20mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中，加入碳酸钾(5.52g,40mmol)，70℃反应16小时。反应液冷却至室温，倒入水(150mL)中，用乙酸乙酯萃取(150mL×4)，分液，有机相合并，经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝1:10-2:1)纯化，得到淡黄色固体状标题化合物(4.8g,产率86.0％)。
制备例25 1-(4-(4-氨基-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙烷-1-酮的制备
将1-(4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)乙烷-1-酮(2.4g,8.6mmol)加入到甲醇(100mL)中，向此体系中加入钯碳(0.24g)，室温下通氢气反应12小时。反应液通过硅藻土减压抽滤，所得滤液真空浓缩，得到红褐色固体状标题化合物(2g,产率93.4％)。
制备例26 1,2,3,4-四氢异喹啉-8-醇的制备
冰水浴条件下，将异喹啉-8-醇(2.9g,20mmol)溶于冰醋酸(15mL)中，缓慢加入硼氢化钠(3.78g,100mmol)，滴加完毕，升至室温反应1小时。反应完毕，将反应液倒入冰块(50g)中，用乙酸乙酯萃取(100mL×2)，有机相经无水硫酸钠干燥后，浓缩，经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)纯化，得标题化合物(2.12g,产率71％)。
制备例27 2-乙酰基-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-基乙酸酯的制备
冰水浴条件下，将1,2,3,4-四氢异喹啉-8-醇(2.0g,13.4mmol)和三乙胺(5.41g,53.6mmol)溶于二氯甲烷(40mL)中，缓慢滴加乙酰氯(3.16g,40.2mmol)，滴加完毕，升至室温反应2小时。反应完毕，过滤，滤液浓缩，经硅胶柱层析(洗脱剂为石油醚:乙酸乙酯＝5:1)纯化，得标题化合物(2.22g,产率71％)。
制备例28 1-(8-羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-酮的制备
将2-乙酰基-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-基乙酸酯(2.0g,8.57mmol)溶于甲醇(10mL)中，滴加NaOH(1M,15mL)，室温下反应8小时。反应完毕，蒸干溶剂，得固体标题化合物粗品(2.3g)，不经纯化直接用于下一步反应。
制备例29 1-(8-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-酮的制备
将1-(8-羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-酮(2.3g粗品)溶于N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中，加入碳酸钾(2.37g,17.14mol)，搅拌下滴加碘甲烷(1.46g,10.28mmol)，室温下搅拌反应12小时。反应完毕，向反应液中加入水(100mL)，用乙酸乙酯萃取(150mL×2)，分液得有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)纯化，得标题化合物(1.05g,两步产率60％)。
制备例30 1,2-双(溴甲基)-3-甲氧基苯的制备
将1-甲氧基-2,3-二甲基苯(13.6g,100mmol)、NBS(39.2g,220mmol)和过氧化苯甲酰(242mg,1mmol)溶于四氯化碳(200mL)中，升至90℃反应12小时，反应完毕，冷却至室温，过滤，滤液浓缩，得标题化合物粗品(30g)。
制备例31 2-苄基-4-甲氧基异吲哚啉的制备
冰水浴条件下，将1,2-双(溴甲基)-3-甲氧基苯粗品(30g)和苯基三乙基氯化铵(1.1g,5mmol)溶于氢氧化钠溶液(50％,50mL)和甲苯(200mL)的混合溶液中，搅拌下，滴加苄胺(11.79g,110mmol)，加毕，升至室温，搅拌反应12小时。反应完毕，静置分层，将有机相用饱和食盐水洗涤(100mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩，经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)纯化，得标题化合物(5.02g,两步产率21％)。
制备例32 4-甲氧基异吲哚啉的制备
室温下，2-苄基-4-甲氧基异吲哚啉(5g,20.9mmol)溶于甲醇(100mL)中，加入钯碳(10％,0.5g)，置换氢气后，室温下反应12小时。反应完毕，过滤，滤液浓缩，得标题化合物(2.84g,产率91％)。
制备例33 1-(4-甲氧基异吲哚啉-2-基)乙烷-1-酮的制备
冰水浴条件下，将4-甲氧基异吲哚啉(2.5g,16.8mmol)和三乙胺(3.39g,33.6mmol)溶于二氯甲烷(40mL)中，缓慢滴加乙酰氯(1.59g,20.2mmol)，滴加完毕，升至室温反应2小时。反应完毕，过滤，滤液浓缩，经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)纯化，得标题化合物(2.44g,产率76％)。
实施例1 N-(6-((2-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)丙烯酰胺(化合物1)的制备
(1)1-(4-(4-((4-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙酮的制备
将1-(4-(4-氨基-3-甲氧基苯基))哌嗪-1-基))乙烷-1-酮(1.0g,4.0mmol)和三乙胺(0.41g,4.0mmol)溶于二氯甲烷(30mL)中，置于冰水浴条件下。将2,4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶(0.87g,4.0mmol)溶于无水二氯甲烷(10mL)中，缓慢加入上述体系中，逐渐升到室温，并搅拌4小时，浓缩，反相色谱分离(水:甲醇＝1.5:1-1:1.1)得到标题产物(620mg,产率36％)。
(2)N-(6-((2-((4-((4-乙酰基哌嗪-1-基))-2-甲氧基苯基))氨基)-5-(三氟甲基))嘧啶-4-基))氨基)吡啶-2-基))丙烯酰胺的制备
将1-(4-(4-((4-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙酮(430mg,1.0mmol)、N-(6-氨基吡啶-2-基)丙烯酰胺(164mg,1.0mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(43mg,0.05mmol)、2-二环己基磷-2',4',6'-三异丙基联苯(86mg,0.18mmol)、碳酸钾(210mg,1.5mmol)溶于1,4-二氧六环(5mL)中，110℃微波反应1小时，反相色谱(水:甲醇＝3:1-1:1.5)分离得产物(56mg,产率10％)。
分子式：C26H27F3N8O3 分子量：556 LC-MS(m/z)：557(M+H)
1H-NMR(400MHz,MeOD)δ:.8.28(s,1H),7.80-7.85(m,1H),7.50-7.79(m,3H),6.69(s,1H),6.51-6.68(m,1H,),6.37-6.50(m,2H),5.79-5.82(m,1H),3.82(s,3H),3.69-3.76(m,4H),3.15-3.22(m,4H),2.16(s,3H).
实施例2 N-(3-((2-((4-(1-乙酰基哌啶-4-基)-2-甲氧苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物2)的制备
(1)N-(3-((2-((4-(1-乙酰基哌啶-4-基)-2-甲氧苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将1-(4-(4-氨基-3-甲氧基苯基)哌啶-1-基)乙酮(52mg,0.21mmol)和N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(60mg,0.18mmol)溶于1,4-二氧六环(10mL)中，向该体系中加入催化量的三氟乙酸，加热至70℃并搅拌反应16小时。反应完毕，向反应液中加入乙酸乙酯(50mL)，然后用水(50mL×2)洗涤，有机相干燥，浓缩，经制备色谱分离得到标题化合物(18mg,产率18％)。
分子式：C28H29F3N6O3 分子量：554.56 LC-MS(m/z):555.3(M+H)
1H-NMR(400MHz,MeOD)δ:8.26(s,1H),7.86-7.88(m,1H),7.72-7.75(m,2H),7.37-7.39(m,1H),7.14-7.16(m,1H),6.81(s,1H),6.34-6.48(m,3H),5.76-5.78(m,1H),4.64-4.66(m,1H),3.99-4.03(m,1H),3.87(s,3H),3.16-3.22(m,1H),2.67-2.70(m,2H),2.15(s,3H),1.78-1.82(m,2H),1.40-1.63(m,2H).
实施例3 N-(3-((2-((4-(1-乙酰基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-2-甲氧苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物3)的制备
(1)N-(3-((2-((4-(1-乙酰基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-2-甲氧苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将1-(4-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙酮(69mg,0.28mmol)和N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(80mg,0.23mmol)溶于1,4-二氧六环(10mL)中，向该体系中加入催化量的三氟乙酸，加热至70℃，搅拌反应16小时。反应完毕，向反应液中加入乙酸乙酯(50mL)，然后用水(50mL×2)洗涤，干燥，浓缩，经制备色谱分离得到标题化合物(35mg,产率27.6％)。
分子式：C28H27F3N6O3 分子量：552.55 LC-MS(m/z):553.3(M+H)
1H-NMR(400MHz,MeOD)δ:8.27(s,1H),7.92(d,J＝8.0Hz,1H),7.71-7.77(m,2H),7.39(t,J＝8.0Hz,1H),7.13(d,J＝8.0Hz,1H),6.97(s,1H),6.66(s,1H),6.31-6.39(m,2H),6.03(s,1H),5.73-5.76(m,1H),4.18(s,2H),3.90(s,3H),3.69-3.78(m,2H),2.47-2.55(m,2H),2.14-2.19(m,3H).
实施例4 N-(6-((2-((4-(1-乙酰基哌啶-4-基)-2-甲氧苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)丙烯酰胺(化合物4)的制备
(1)1-(4-(4-((4-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌啶-1-基)乙酮的制备
将1-(4-(4-氨基-3-甲氧基苯基)哌啶-1-基)乙酮(1.7g,6.9mmol)和2,4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶(1.8g,8.3mmol)溶于二氯甲烷(50mL)中，加入三乙胺(1.0g,10.3mmol)，室温搅拌16小时。用水(50mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，经制备色谱分离得到黄褐色固体标题化合物(400mg,产率13％)。
(2)N-(6-((2-((4-(1-乙酰基哌啶-4-基)-2-甲氧苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)丙烯酰胺的制备
将1-(4-(4-((4-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌啶-1-基)乙酮(100mg,0.23mmol)，N-(6-氨基吡啶-2-基)丙烯酰胺(190mg,1.17mmol)溶于1,4-二氧六环(20mL)中，加入2-二环己基磷-2',4',6'-三异丙基联苯(19mg,0.04mmol)，碳酸铯(149mg,0.46mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(18mg,0.02mmol)，氮气保护下加热至110℃反应16h。冷却至室温，浓缩，加入水，用乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(DCM:MeOH＝15:1)纯化得淡黄色固体标题化合物(28mg,产率22％)。
分子式：C27H28F3N7O3 分子量：555.55 LC-MS(m/z):556.3(M+H)
1H-NMR(400MHz,MeOD-d4)δ:8.30(s,1H),7.86-7.88(m,1H),7.73-7.75(m,2H),7.61(s,1H),6.90(s,1H),6.75-6.77(m,1H),6.37-6.49(m,2H),5.78-5.81(m,1H),4.66-4.69(m,1H),4.02-4.05(m,1H),3.85(s,3H),3.19-3.25(m,1H),2.67-2.83(m,2H),2.15(s,3H),1.85-1.93(m,2H),1.55-1.75(m,2H).
实施例5 N-(6-((2-((4-(1-乙酰基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)丙烯酰胺(化合物5)的制备
(1)1-(4-(4-((4-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)-3,6-二氢吡啶-1-(2H)-基)乙酮的制备
将1-(4-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙酮(1.5g,6.1mmol)和2,4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶(1.6g,7.3mmol)溶于二氯甲烷(50mL)中，加入三乙胺(924mg,9.1mmol)，室温搅拌16小时。用水(50mL×2)洗涤，分出有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，经反相色谱分离纯化得到黄褐色固体标题化合物(227mg,产率9％)。
(2)N-(6-((2-((4-(1-乙酰基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)丙烯酰胺的制备
将1-(4-(4-((4-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)-3,6-二氢吡啶-1-(2H)-基)乙酮(100mg,0.23mmol)，N-(6-氨基吡啶-2-基)丙烯酰胺(190mg,1.17mmol)溶于1,4-二氧六环(20mL)中，加入2-二环己基磷-2',4',6'-三异丙基联苯(19mg,0.04mmol)，碳酸铯(149mg,0.46mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(18mg,0.02mmol)，氮气保护下加热至110℃反应16h。冷却至室温，浓缩，加入水，用乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝15:1)纯化得淡黄色固体标题化合物(10mg,产率8％)。
分子式：C27H26F3N7O3 分子量：553.54 LC-MS(m/z):554.3(M+H)
1H-NMR(400MHz,MeOD)δ:8.35(s,1H),7.87-7.91(m,2H),7.75-7.73(m,1H),7.65-7.69(m,1H),7.07(s,1H),6.94-6.97(m,1H),6.38-6.50(m,2H),6.14(s,1H),5.78-5.82-(m,1H),4.20-4.22(m,2H),3.90(s,3H),3.79-3.82(m,1H),3.73-3.76(m,1H),2.64(s,1H),2.56(s,1H),2.16-2.21(m,3H).
实施例6 N-(3-((2-((4-(8-乙酰基-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物7)的制备
(1)叔丁基8-乙酰基-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸酯的制备
将叔丁基3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸酯(212mg,1.0mmol)溶于四氢呋喃(20mL)，加入三乙胺(202mg,2.0mmol)和乙酰氯(117mg,1.5mmol)，室温下反应过夜。反应完成，将溶剂旋干，加入乙酸乙酯(30mL)和水(20mL)，分液，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取，合并有机相，浓缩，剩余物经柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)纯化，得标题化合物(220mg,产率86.6％)。
(2)1-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)乙烷-1-酮的制备
将叔丁基8-乙酰基-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸酯(220mg,0.866mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，室温下反应4小时，反应完成，将溶剂旋干，加入乙酸乙酯(50mL)和碳酸氢钠(10mL)溶液，分液，水相用乙酸乙酯(40mL)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，得标题化合物(100mg,产率74.9％)。
(3)1-(3-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)乙烷-1-酮的制备
将1-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)乙烷-1-酮(100mg,0.649mmol)和4-氯-2-甲氧基-1-硝基苯(121.7mg,0.649mmol)溶于1,4-二氧六环(15mL)中，加入三(二亚苄基丙酮)二钯(59.5mg,0.065mmol)、2-二环己基膦-2’,4’,6’-三异丙基联苯(62mg,0.13mmol)和碳酸铯(632.8mg,1.95mmol)，加热至110℃，反应过夜。反应完成，将反应液过滤，滤液浓缩，剩余物经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝30:1)纯化，得到标题化合物(140mg,产率70.7％)。
(4)1-(3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)乙烷-1-酮的制备
将1-(3-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)乙烷-1-酮(140mg,0.458mmol)溶于甲醇(20mL)中，氮气保护条件下加入钯碳(10％,20mg)，在氢气氛围下室温反应过夜。反应完成，将反应液过滤，滤液浓缩，剩余物(粗品100mg)直接用于下一步。
(5)N-(3-((2-((4-(8-乙酰基-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将1-(3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)乙烷-1-酮(100mg,0.364mmol)和N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(186.4mg,0.545mmol)溶于1,4-二氧六环(15mL)中，加入三(二亚苄基丙酮)二钯(33mg,0.036mmol)、2-二环己基膦-2’,4’,6’-三异丙基联苯(34mg,0.071mmol)和碳酸铯(355mg,1.09mmol)，加热至110℃，反应过夜，LC-MS检测反应完成。将反应液过滤，滤液浓缩，剩余物经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝15:1)纯化，得到标题化合物(15mg,产率7.1％)。
分子式:C29H30F3N7O3 分子量:581.59 LC-MS(m/z):582.3(M+H+)
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.15(s,1H),8.6(brs,1H),8.25(s,1H),8.06(s,1H),7.7(brs,1H),7.42-7.52(m,2H),7.12-7.25(m,2H),6.42-6.49(m,2H),6.22-6.39(m,2H),5.73-5.76(m,1H),4.57(s,1H),4.30-4.33(m,1H),3.74(s,3H),3.36-3.41(m,2H),2.67-2.76(m,2H),2.01(s,3H),1.75-1.89(m,4H).
实施例7 N-(3-((2-((4-(8-乙酰基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物8)的制备
(1)叔丁基3-氧代-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸酯的制备
将8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-酮(5.0g,40mmol)溶解于二氯甲烷(100mL)中，加入二碳酸二叔丁酯(10.5g,48mmol)、三乙胺(8.1g,80mmol)和4-二甲氨基吡啶(488mg,4mmol)，室温搅拌反应16小时。反应完毕，加入水(100mL)，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)纯化，得到标题化合物(8.5g,产率94％)。
(2)叔丁基3-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-2-烯-8-羧酸酯的制备
将叔丁基3-氧代-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸酯(8.5g,37.8mmol)溶解于四氢呋喃(80mL)中，-78℃下向该体系中缓慢滴加二异丙基氨基锂的四氢呋喃/正庚烷/乙苯溶液(28mL,56mmol,2M)，搅拌10分钟后加入1,1,1-三氟-N-苯基-N-((三氟甲基)磺酰基)甲磺酰胺(14.8g,41.6mmol)的四氢呋喃(50mL)溶液，搅拌30分钟后移至室温下反应2小时。反应完毕，浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝20:1)纯化，得到标题化合物(9.8g,产率72.6％)。
(3)叔丁基3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-2-烯-8-羧酸酯的制备
将叔丁基3-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-2-烯-8-羧酸酯(9.8g,27.4mmol)、联硼酸频那醇酯(10.4g,40.9mmol)、醋酸钾(5.4g,55mmol)、1,1-双(二苯基膦)二茂铁二氯化钯二氯甲烷络合物(1.15g,1.4mmol)和1,1'-双(二苯基膦)二茂铁(776mg,1.4mmol)溶解于1,4-二氧六环(100mL)中，氮气保护下，80℃搅拌反应16小时。反应完毕，冷却至室温，加入水(100mL)，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝20:1)纯化，得到标题化合物(7.3g,收率79％)。
(4)叔丁基3-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-2-烯-8-羧酸酯的制备
将4-氯-2-甲氧基-1-硝基苯(2.0g,10.7mmol)和叔丁基3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-2-烯-8-羧酸酯(4.3g,12.8mmol)溶解于1,4-二氧六环(50mL)和水(10mL)混合溶剂中，向该体系中加入碳酸钠(2.27g,21.4mmol)和1,1-双(二苯基膦)二茂铁二氯化钯二氯甲烷络合物(436mg,0.54mmol)，氮气保护下，在90℃下搅拌反应16小时。反应完毕，冷却至室温，加入水(100mL)，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)纯化，得到标题化合物(2.4g,产率62％)。
(5)3-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-2-烯的制备
将叔丁基3-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-2-烯-8-羧酸酯(2.4g,6.7mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，加入三氟乙酸(10mL)，搅拌2小时。反应完毕，将反应液浓缩，依次用碳酸氢钠溶液、食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得标题化合物(1.65g,产率95％)。
(6)1-(3-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-2-烯-8-基)乙烷-1-酮的制备
将3-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-2-烯(1.65g,6.3mmol)溶于二氯甲烷(50mL)中，冰水浴冷却，缓慢加入三乙胺(1.27g,12.6mmol)，然后加入醋酸酐(771mg,7.6mmol)，0℃下搅拌1小时，然后恢复至室温搅拌2小时。反应完毕，用水(50mL×2)洗涤，分液，有机相干燥，浓缩，得到标题化合物(1.8g,收率94.7％)。
(7)1-(3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)乙烷-1-酮的制备
将1-(3-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-2-烯-8-基)乙烷-1-酮(1.8g,5.96mmol)溶于甲醇(30mL)中，氮气保护下向该体系中加入钯碳(200mg)，然后体系在氢气环境下室温搅拌反应16小时。反应完毕，过滤，浓缩滤液得到标题化合物(1.5g,产率92％)。
(8)N-3-((2-((4-(8-乙酰基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将1-(3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)乙烷-1-酮(100mg,0.36mmol)和N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(137mg,0.4mmol)加至异丙醇(10mL)中，加入催化量的三氟乙酸，将该体系加热至70℃，搅拌反应16小时。反应完毕后，反应液中加入乙酸乙酯(50mL)，然后用水(50mL×2)洗涤，分液，有机相干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化，得到标题化合物(51mg,收率24.5％)。
分子式:C30H31F3N6O3 分子量:580.60 LC-MS(m/z):581.3(M+H+)
1H-NMR(400MHz,MeOD)δ:8.25(s,1H),7.66-7.86(m,3H),7.35-7.40(m,1H),7.13(d,J＝7.2Hz,1H),6.79-6.83(m,1H),6.34-6.52(m,3H),5.78(d,J＝8.8Hz,1H),4.60-4.66(m,1H),4.28-4.33(m,1H),3.87(s,3H),2.34-2.51(m,2H),2.07-2.14(m,4H),1.93-1.97(m,2H),1.61-1.80(m,4H).
实施例8 N-(3-((2-((4-((顺式)-5-乙酰基六氢吡咯[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物9-1)的制备
(1)顺式-叔丁基5-乙酰基六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-羧酸酯的制备
将顺式-叔丁基六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-羧酸酯(318mg,1.5mmol)和三乙胺(227mg,2.25mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，冰水浴冷却，缓慢加入乙酰氯(142mg,1.8mmol)，加完后室温搅拌30分钟。向反应体系加入水(20mL)，用二氯甲烷萃取，有机相干燥，浓缩，得到粗产物(370mg)，不经纯化直接用于下一步反应。
(2)1-((顺式)-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2-(1H-基)乙烷-1-酮的制备
将顺式-叔丁基5-乙酰基六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-羧酸酯(370mg)溶于二氯甲烷和三氟乙酸(5mL,1:1)的混合溶液中，室温搅拌30分钟，减压除去溶剂，加入碳酸氢钠饱和溶液(10mL)，用二氯甲烷萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝10:1)得产物(180mg,两步合计产率78％)。
(3)4-氟-2-甲氧基-1-硝基苯的制备
将5-氟-2硝基苯酚(7.85g,0.05mol)、碘甲烷(8.52g,0.06mol)和碳酸钾(10.35g,0.075mol)加入到乙腈(150mL)中，50℃加热3小时，减压除去溶剂，加入水(200mL)，用乙酸乙酯(200mL)萃取，有机相干燥，浓缩，得产物(8.4g,产率98％)。
(4)1-((顺式)-5-(3-甲氧基-4-硝基苯基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)乙烷-1-酮的制备
将4-氟-2-甲氧基-1-硝基苯(220mg,1.29mmol)、1-((顺式)-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2-(1H)-基)乙烷-1-酮(180mg,1.17mmol)和碳酸钾(242mg,1.76mmol)加入到N,N-二甲基乙酰胺(5mL)中，120℃加热5小时。加入乙酸乙酯(50mL)，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相干燥，浓缩，经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)得产物(198mg,产率56％)。
(5)1-((顺式)-5-(4-胺基-3-甲氧基苯基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)乙烷-1-酮的制备
将1-((顺式)-5-(3-甲氧基-4-硝基苯基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)乙烷-1-酮(198mg,0.65mmol)溶于甲醇(5mL)中，加入钯碳催化剂(10％,30mg)，置换氢气，室温搅拌2小时，抽滤，用少量甲醇洗涤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝10:1)得产物(149mg,产率84％)。
(6)N-(3-((2-((4-((顺式)-5-乙酰基六氢吡咯[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将1-((顺式)-5-(4-胺基-3-甲氧基苯基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)乙烷-1-酮(40mg,0.146mmol)、N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(50mg,0.146mmol)和催化量的三氟乙酸(10mg)加入到的异丙醇(3mL)中，70℃加热1.5小时。加入乙酸乙酯(20mL)，用饱和碳酸氢钠溶液(20mL)洗涤，有机相干燥，浓缩，制备色谱分离得产物(24mg,产率28％)。
分子式:C29H30F3N7O3 分子量:581 LC-MS(m/z):582(M+H+)
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.26(s,1H),7.87(d,J＝8.8Hz,2H),7.50-7.78(m,2H),7.41-7.50(m,1H),7.28-7.38(m,1H),7.12-7.19(m,1H),6.84(s,1H),6.42(dd,J1＝1.2Hz,J2＝16.8Hz,1H),6.12-6.20(m,1H),6.11(d,J＝2.0Hz,1H),6.00(brs.,1H),5.73(dd,J1＝1.2Hz,J2＝10.0Hz,1H),3.85(s,3H),3.74-3.78(m,2H),3.47-3.54(m,3H),3.38(dd,J1＝5.2Hz,J2＝10.0Hz,1H),3.17-3.22(m,2H),2.99-3.10(m,2H),2.05(d,J＝3.6Hz,3H).
实施例9 N-(3-((2-((4-(((顺式))-2-乙酰八氢环戊并[c]吡咯-5-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物10)的制备
(1)叔丁基(顺式)-5-氧代六氢环戊并[c]吡咯-2(1H)-羧酸酯的制备
将(顺式)-六氢环戊并[c]吡咯-5(1H)-酮(2.0g,16mmol)溶于二氯甲烷(50mL)中，加入二碳酸二叔丁酯(5.2g,24mmol)，三乙胺(3.2g,32mmol)和4-二甲氨基吡啶(195mg,1.6mmol)，室温搅拌反应16小时。反应完毕，加入水(100mL)，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)纯化，得到标题化合物(3.4g,产率94.4％)。
(2)叔丁基(顺式)-5-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3,3a,4,6a-四氢环戊并[c]吡咯-2(1H)-羧酸酯的制备
将叔丁基(顺式)-5-氧代六氢环戊并[c]吡咯-2(1H)-羧酸酯(3.4g,15.1mmol)溶于四氢呋喃(50mL)中，-78℃下向该体系中缓慢滴加二异丙基氨基锂的四氢呋喃/正庚烷/乙苯溶液(11mL,22mmol,2M)，搅拌10分钟后加入1,1,1-三氟-N-苯基-N-((三氟甲基)磺酰基)甲磺酰胺(6.47g,18.1mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液，搅拌30分钟后升至室温，反应2小时。反应完毕，浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝20:1)纯化，得到标题化合物(4.15g,产率77％)。
(3)叔丁基(顺式)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊烷-2-基)-3,3a,4,6a-四氢环戊并[c]吡咯-2(1H)-羧酸酯的制备
将叔丁基(顺式)-5-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3,3a,4,6a-四氢环戊并[c]吡咯-2(1H)-羧酸酯(4.15g,11.6mmol)，联硼酸频那醇酯(4.4g,17.4mmol)，醋酸钾(2.3g,23.5mmol)、1,1-双(二苯基膦)二茂铁二氯化钯二氯甲烷络合物(473mg,0.6mmol)和1,1'-双(二苯基膦)二茂铁(332mg,0.6mmol)溶于1,4-二氧六环(50mL)中，氮气保护下，80℃搅拌反应16小时。反应完毕，冷却至室温，加入水(100mL)，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝20:1)纯化，得到标题化合物(2.95g,产率76％)。
(4)叔丁基(顺式)-5-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-3,3a,4,6a-四氢环戊并[c]吡咯-2(1H)羧酸酯的制备
将4-氯-2-甲氧基-1-硝基苯(1.36g,7.3mmol)和叔丁基(顺式)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊烷-2-基)-3,3a,4,6a-四氢环戊并[c]吡咯-2(1H)-羧酸酯(2.95g,8.8mmol)溶于1,4-二氧六环(30mL)和水(10mL)混合溶剂中，向该体系中加入碳酸钠(1.55g,14.6mmol)和1,1-双(二苯基膦)二茂铁二氯化钯二氯甲烷络合物(326mg,0.4mmol)，氮气保护下，在90℃搅拌反应16小时。反应完毕，冷却至室温，加入水(100mL)，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)纯化，得到标题化合物(1.7g,产率65％)。
(5)(顺式)-5-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-1,2,3,3a,4,6a-六氢环戊并[c]吡咯的制备
将叔丁基(顺式)-5-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-3,3a,4,6a-四氢环戊并[c]吡咯-2(1H)羧酸酯(1.7g,4.7mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，加入三氟乙酸(10mL)，搅拌2小时。反应完毕，将反应液浓缩，依次用NaHCO3溶液、食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩得标题化合物(1.11g，产率91％)。
(6)1-((顺式)-5-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-3,3a,4,6a-四氢环戊并[c]吡咯-2(1H)-基)乙酮的制备
将(顺式)-5-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-1,2,3,3a,4,6a-六氢环戊并[c]吡咯(1.11g,4.27mmol)溶于二氯甲烷(50mL)中，冰水浴冷却，缓慢加入三乙胺(863mg,8.54mmol)，然后加入醋酸酐(653mg,6.4mmol)，0℃下搅拌1小时，室温搅拌2小时。反应完毕，反应混合物用水(50mL×2)洗涤，干燥，过滤，浓缩，得到标题化合物(1.1g,产率85％)。
(7)1-((顺式)-5-(4-氨基-3-甲氧基苯基)六氢环戊并[c]吡咯-2(1H)-基)乙酮的制备
将1-((顺式)-5-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-3,3a,4,6a-四氢环戊并[c]吡咯-2(1H)-基)乙酮(1.1g,3.64mmol)溶于甲醇(30mL)中，氮气保护下向该体系中加入Pd/C(100mg)，然后体系在氢气环境下室温搅拌反应16小时。反应完毕，过滤，浓缩滤液得到标题化合物(967mg,产率97％)。
(8)N-3-((2-((4-(((顺式))-2-乙酰八氢环戊并[c]吡咯-5-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将1-((顺式)-5-(4-氨基-3-甲氧基苯基)六氢环戊并[c]吡咯-2(1H)-基)乙酮(100mg,0.36mmol)和N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(137mg,0.4mmol)加至异丙醇(10mL)中，向该体系中加入催化量的三氟乙酸，加热至70℃下搅拌反应16小时。反应完毕，反应液中加入乙酸乙酯(50mL)，然后用水(50mL×2)洗涤，干燥，浓缩，经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化，得到标题化合物(62mg,产率29.8％)。26.7％
分子式：C30H31F3N6O3 分子量：580.60 LC-MS(m/z):581.3(M+H+)
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.13(s,1H),8.79(s,1H),8.28(s,1H),8.03(s,1H),7.64-7.73(m,2H),7.53(d,J＝8.0Hz,1H),7.26(t,J＝8.0Hz,1H),7.07-7.11(m,1H),6.82(s,1H),6.38-6.45(m,2H),6.20-6.25(m,1H),5.72(dd,J1＝2.0Hz,J2＝10.0Hz,1H),3.78(s,3H),3.58-3.63(m,1H),3.41-3.50(m,1H),3.00-3.16(m,1H),2.64-2.75(m,2H),2.15-2.20(m,2H),1.95(s,3H),1.33-1.39(m,2H).
实施例10 N-(3-((2-((2-乙酰基-7-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物11)的制备
(1)N-(3-((2-((2-乙酰基-7-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(343mg,1.0mmol)和1-(6-氨基-7-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酮(220mg,1.0mmol)溶于异丙醇(40mL)中，加入三氟乙酸(34mg,0.3mmol)，氮气保护下70℃反应16小时。冷却至室温，浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液，用乙酸乙酯萃取(100mL×3)，有机相合并，用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷＝0-1:10)得到灰白色固体状标题化合物(360mg,产率68％)。
分子式：C26H25F3N6O3 分子量：526.5 LC-MS(m/z):
527.3(M+H)
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.17-10.19(m,1H),8.81(brs,1H),8.33(s,1H),8.05(s,1H),7.70-7.80(m,1H),7.49-7.61(m,2H),7.28-7.32(m,1H),7.10-7.16(m,1H),6.80-6.82(m,1H),6.37-6.44(m,1H),6.21-6.27(m,1H),5.72-5.76(m,1H),4.47-4.52(m,2H),3.76-3.77(m,3H),3.49-3.54(m,2H),2.31-2.45(m,2H),2.04(s,3H).
实施例11 N-(6-((2-((2-乙酰基-7-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)丙烯酰胺(化合物12)的制备
(1)N-(6-((2-((2-乙酰基-7-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)丙烯酰胺的制备
将N-(6-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)丙烯酰胺(200mg,0.58mmol)和1-(6-氨基-7-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-酮(128mg,0.58mmol)溶解于异丙醇(40mL)中，加入三氟乙酸(20mg,0.17mmol)，氮气保护下70℃反应16小时。冷却至室温，浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液，用乙酸乙酯萃取(100mL×3)，有机相合并，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷＝0-1:10)纯化，得到灰白色固体状标题化合物(125mg,产率40.9％)。
分子式:C25H24F3N7O3 分子量:527.5 LC-MS(m/z):528.2(M+H+)
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.38(s,1H),7.97-8.14(m,4H),7.65-7.74(m,2H),7.36(s,1H),6.62-6.65(m,1H),6.47-6.51(m,1H),6.28-6.35(m,1H),5.84(d,J＝10.4Hz,1H),4.60-4.70(m,2H),3.83-3.89(m,3H),3.80-3.82(m,2H),2.71-2.76(m,2H),2.20-2.21(m,3H).
实施例12 N-(3-((2-((2-乙酰基-6-甲氧基异吲哚啉-5-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物13)的制备
(1)甲基2-氰基-4-甲氧基苯甲酸酯的制备
将甲基2-溴-4-甲氧基苯甲酸酯(20g,0.082mol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中，加入氰化亚铜(10.95g,0.123mol)，150℃反应4小时，冷却，倒入饱和氯化铵水溶液中，用乙酸乙酯(150mL×3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)纯化，得标题化合物(9.8g,产率62％)。
(2)5-甲氧基异吲哚啉-1-酮的制备
将甲基2-氰基-4-甲氧基苯甲酸酯(5g,0.026mmol)溶于甲醇(150mL)中,加入氨水(10mL)和雷尼镍(1g)，氢气环境下室温反应过夜。过滤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，得标题化合物(3.2g,产率76％)。
(3)5-甲氧基-6-硝基异吲哚啉-1-酮的制备
将5-甲氧基异吲哚啉-1-酮(3g,0.018mol)溶解于乙腈(10mL)和三氟乙酸酐(10mL)中，0℃下分批加入硝酸钾(2g,0.0198mmol)，室温下搅拌1小时，反应混合物倒入冰水中，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，饱和碳酸氢钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯洗脱)纯化，得标题化合物(1.1g,产率29％)。
(4)叔丁基5-甲氧基-6-硝基异吲哚啉-2-羧酸酯的制备
将5-甲氧基-6-硝基异吲哚啉-1-酮(1g,4.8mmol)溶于四氢呋喃(50mL)中，0℃下滴加硼烷-二甲硫醚溶液(2mol/L,9.6mL,19.2mmol)，滴加完毕后反应回流过夜。冷却至0℃，滴加甲醇(10mL)淬灭反应，再加入盐酸(4mol/L,10mL)，回流4小时。冷却后旋干，加水稀释，加入氢氧化钠溶液调至pH＝10，加入二碳酸二叔丁酯(1.05g,4.8mmol)，室温搅拌1小时，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)纯化，得标题化合物(0.45g,产率32％)。
(5)5-甲氧基-6-硝基异吲哚啉的制备
将叔丁基5-甲氧基-6-硝基异吲哚啉-2-羧酸酯(0.4g,1.36mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，加入三氟乙酸(3mL)，室温反应1小时，浓缩，粗品经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)纯化，得标题化合物(0.25g,产率96％)。
(6)1-(5-甲氧基-6-硝基异吲哚啉-2-基)乙烷-1-酮的制备
将5-甲氧基-6-硝基异吲哚啉(0.25g,1.29mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，缓慢加入三乙胺(196mg,1.94mmol)，冷却至0℃，加入乙酰氯(121mg,1.55mmol)，加料完毕后升至室温搅拌2小时。反应液用饱和碳酸氢钠溶液洗，有机相浓缩，粗品经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)纯化，得标题化合物(0.22g,产率72％)。
(7)1-(5-氨基-6-甲氧基异吲哚啉-2-基)乙烷-1-酮的制备
将1-(5-甲氧基-6-硝基异吲哚啉-2-基)乙烷-1-酮(0.22g,0.93mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，加入锌粉(1.21g,18.6mmol)，冷却至0℃，加入盐酸(4mol/L,2.33mL,9.3mmol)，加料完毕后升至室温搅拌1小时。过滤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，得标题化合物(0.15g,产率79％)。
(8)N-(3-((2-((2-乙酰基-6-甲氧基异吲哚啉-5-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(100mg,0.29mmol)和1-(5-氨基-6-甲氧基异吲哚啉-2-基)乙烷-1-酮(60mg,0.29mmol)溶于异丙醇(8mL)中，加入三氟乙酸(6.6mg,0.058mmol)，加热至75℃反应过夜。冷却至室温，真空浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷＝0-1:20,加0.5％三乙胺)纯化，得到白色固体状标题化合物(35mg,产率23.5％)。
分子式:C25H23F3N6O3 分子量:512.5 LC-MS(m/z):513(M+H+)
1H-NMR(400MHz,MeOD-d4)δ:8.27(s,1H),8.06-7.91(m,1H),7.81(s,1H),7.62-7.39(m,2H),7.16-7.12(m,1H),6.91-6.89(m,1H),6.46-6.29(m,2H),5.77-5.73(m,1H),4.60(s,4H),3.89-3.88(m,3H),2.17-2.15(m,3H).
实施例13 N-(3-((2-((2-乙酰基-7-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物14)的制备
(1)1-(6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-酮的制备
将6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉盐酸盐(2.0g,10mmol)和三乙胺(3.03g,30mmol)溶于二氯甲烷(100mL)中，加入乙酸酐(1.53g,15mmol)，室温下反应2小时。加水(50mL)，分液，水相用二氯甲烷萃取(50mL×2)，有机相合并，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得到淡黄色油状标题化合物(2.2g粗品)。
(2)1-(6-甲氧基-7-硝基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-酮的制备
将1-(6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-酮(2.2g粗品,10mmol)溶解于乙腈(50mL)中，冰水浴冷却，加入三氟乙酸酐(10mL)和硝酸钾(1.21g,12mmol)，冰浴下反应4小时，加入甲醇(20mL)，减压蒸除溶剂，加入水(50mL)和乙酸乙酯(100mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(100mL×2)，有机相合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝0-1:7)纯化，得到淡黄色固体状标题化合物(1.2g,产率48％)。
(3)1-(7-氨基-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-酮的制备
将1-(6-甲氧基-7-硝基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-酮(400mg,1.6mmol)溶于乙醇和水中(2:1,60mL)，加入饱和氯化铵水溶液(10mL)和锌粉(523mg,8.0mmol)，升温至70℃反应3小时。冷却至室温，通过硅藻土过滤，滤液浓缩，加水(50mL)，用乙酸乙酯萃取(100mL×3)，有机相合并，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝0-1:4)纯化，得到淡黄色油状标题化合物(260mg,产率74％)。
(4)N-(3-((2-((2-乙酰基-7-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(335mg,0.98mmol)和1-(7-氨基-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-酮(260mg,1.18mmol)溶解于异丙醇(30mL)中，加入三氟乙酸(223mg,1.96mmol)，氮气保护下70℃反应16小时。冷却至室温，浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液(50mL)，用乙酸乙酯萃取(100mL×3)，有机相合并，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷＝0-1:15)纯化，得到灰白色固体状标题化合物(300mg,产率58％)。
分子式:C26H25F3N6O3 分子量:526.51 LC-MS(m/z):527.3(M+H+)
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.18-10.11(m,1H),8.85-8.70(m,1H),8.34-8.33(m,1H),8.05-8.04(m,1H),7.82-7.77(m,1H),7.56-7.30(m,3H),7.20-7.12(m,1H),6.78-6.77(m,1H),6.41-6.37(m,1H),6.25-6.20(m,1H),5.75-5.71(m,1H),4.23-4.10(m,2H),3.79-3.77(m,3H),3.58-3.55(m,2H),2.77-2.74(m,1H),2.65-2.63(m,1H),2.06-2.01(m,3H).
实施例14 N-(3-((2-((2-乙酰基-4-甲氧基异吲哚啉-5-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物15)的制备
(1)1-(4-甲氧基-5-硝基异吲哚啉-2-基)乙烷-1-酮的制备
-20℃下，将1-(4-甲氧基异吲哚啉-2-基)乙烷-1-酮(2.0g,10.46mmol)溶于乙酸和乙酸酐(10mL,体积比1:1)的混合溶液中，滴加发烟硝酸(725mg,11.5mmol)，滴加完毕，升至室温反应30分钟后，冷却至0℃，向反应液中加入水(30mL)，用乙酸乙酯萃取(50mL×2)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，得标题化合物(0.77g,产率31％)。
(2)1-(5-胺基-4-甲氧基异吲哚啉-2-基)乙烷-1-酮的制备
将1-(4-甲氧基-5-硝基异吲哚啉-2-基)乙烷-1-酮(0.6g,2.54mmol)和钯碳(10％,60mg)悬浮于甲醇(50mL)，体系抽真空，置换氢气，室温下反应3小时，过滤，滤液浓缩，经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)纯化，得到标题化合物(0.47g,产率90％)。
(3)N-(3-((2-((2-乙酰基-4-甲氧基异吲哚啉-5-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将1-(5-胺基-4-甲氧基异吲哚啉-2-基)乙烷-1-酮(100mg,0.48mmol)和N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(164.5mg,0.48mmol)溶于异丙醇(10mL)中，滴加1滴三氟乙酸，升温至70℃反应12小时，反应完毕，将溶液蒸干，经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化，得标题化合物(115.6mg,产率47％)。
分子式:C25H23F3N6O3 分子量:512.48 LC-MS(m/z):513.2(M+H+)
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.15(s,1H),8.74(s,1H),8.48(d,J＝4.8Hz,1H),8.33(s,1H),7.80(d,J＝10.4Hz,1H),7.61-7.64(m,1H),7.42-7.47(m,1H),7.23-7.27(m,1H),7.14(d,J＝8.0Hz,1H),6.70-6.75(m,1H),6.39-6.45(m,1H),6.24(dd,J1＝4.8Hz,J2＝2.4Hz,1H),5.72-5.75(m,1H),4.88(s,1H),4.68(d,J＝18.0Hz,2H),4.50(s,1H),3.75(d,,J＝3.6Hz,3H),2.05(d,J＝10.4Hz,3H).
实施例15 N-(3-((2-((2-乙酰基-5-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物16)的制备
(1)2-乙酰基-1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基乙酸酯的制备
在冰水浴条件下，将1,2,3,4-四氢异喹啉-5-醇(1.49g,10mmol)和三乙胺(4.04g,40mmol)溶于二氯甲烷(40mL)中，缓慢滴加乙酰氯(2.4g,30mmol)，滴加完毕，升至室温反应2小时。反应完毕，滤液浓缩，经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)纯化，得标题化合物(1.8g,产率77％)。
(2)1-(5-羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-酮的制备
将2-乙酰基-1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基乙酸酯(1.17g,5mmol)溶于甲醇(10mL)中，滴加氢氧化钠(1M,15mL)，室温下反应8小时，反应完毕，蒸干溶剂，得固体标题化合物(1.5g,粗品)，不经提纯直接用于下一步反应。
(3)1-(5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-酮的制备
将1-(5-羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-酮(1.5g粗品)溶于DMF(20mL)中，加入碳酸钾(1.38g,10mol)，搅拌下滴加碘甲烷(1.07g,7.5mmol)，室温下搅拌反应8小时。反应完毕，向反应液中加入水(50mL)，用乙酸乙酯萃取(50mL×2)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，滤液浓缩，经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)纯化，得标题化合物(0.78g,两步产率76％)。
(4)1-(5-甲氧基-6-硝基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-酮的制备
-20℃下，将1-(5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-酮(0.7g,3.4mmol)溶于乙酸和乙酸酐(5mL,V:V＝1:1)的混合溶液中，滴加发烟硝酸2(14mg)，滴加完毕，升至室温反应30分钟后，冷却至0℃，向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取(30mL×2)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，得标题化合物(0.3g,产率35％)。
(5)1-(6-氨基-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-酮的制备
将1-(5-甲氧基-6-硝基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-酮(0.3g,1.2mmol)和钯碳(30mg)悬浮于甲醇(20mL)中，体系抽真空，置换氢气，室温下反应6小时，过滤，浓缩，经柱层析(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化，得到标题化合物(0.23g,产率87％)。
(6)N-(3-((2-((2-乙酰基-5-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将1-(6-氨基-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-酮(100mg,0.45mmol)和N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(154mg,0.45mmol)溶于异丙醇(10mL)中，滴加1滴三氟乙酸，升至70℃反应12小时，反应完毕，将溶液蒸干，经硅胶柱层析(洗脱剂为二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化，得标题化合物(152mg,产率64％)。
分子式:C26H25F3N6O3 分子量:526.52 LC-MS(m/z):527.3(M+H+)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.15(s,1H),8.74(s,1H),8.401(s,1H),8.396(s,1H),7.80(d,J＝8.0Hz,1H),7.56(dd,J1＝8.0Hz,J2＝5.2Hz,1H),7.41-7.42(m,1H),7.22-7.26(m,1H),7.21-7.15(m,1H),6.66(brs.,1H),6.39-6.46(m,1H),6.24(dd,J1＝2.0Hz,J2＝15.2Hz,1H),5.73-5.76(m,1H),4.50(d,J＝18.8Hz,2H),3.63(s,3H),3.60(dd,J1＝5.2Hz,J2＝5.2Hz,2H),2.78(t,J＝6.0Hz,1H),2.68(t,J＝5.6Hz,1H),2.06(d,J＝3.6Hz,3H).
实施例16 N-(3-((2-((2-乙酰基-8-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物17)的制备
(1)1-(8-甲氧基-7-硝基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-酮的制备
0℃下，将1-(8-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-酮(1.0g,4.87mmol)溶于乙酸和乙酸酐(10mL,体积比1:1)的混合溶液中，滴加发烟硝酸(337mg,5.36mL)，滴加完毕，升至室温反应30分钟后，冷却至0℃，向反应液中加入水(40mL)，用乙酸乙酯萃取(100mL×2)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，得标题化合物(0.41g,产率34％)。
(2)1-(7-氨基-8-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-酮的制备
将1-(8-甲氧基-7-硝基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-酮(0.4g,1.6mmol)和钯碳(10％,40mg)悬浮于甲醇(20mL)中，体系抽真空，置换氢气，室温下反应6小时，过滤，浓缩，经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化，得到标题化合物(0.3g,产率86％)。
(3)N-(3-((2-((2-乙酰基-8-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将1-(7-氨基-8-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙烷-1-酮(150mg,0.68mmol)和N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(233mg,0.68mmol)溶于异丙醇(10mL)中，滴加1滴三氟乙酸，升至70℃反应12小时，反应完毕，将溶液蒸干，经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化，得标题化合物(168mg,产率47％)。
分子式:C26H25F3N6O3 分子量:526.52 LC-MS(m/z):527.2(M+H+)
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.15(s,1H),8.69(s,1H),8.50(d,J＝18.40Hz,1H),8.32(s,1H),7.78(d,J＝6.0Hz,1H),7.40-7.49(m,2H),7.16-7.25(m,2H),6.66-6.68(d,J＝8.0Hz,1H),6.41-6.45(m,1H),6.24(dd,J1＝1.6Hz,J2＝16.8Hz,1H),5.75(dd,J1＝2.0Hz,J2＝10.0Hz,1H),4.54(d,J＝3.2Hz,1H),3.36-3.66(m,5H),2.75(t,J＝5.8Hz,1H),2.62-2.66(m,1H),2.06(d,J＝3.2Hz,3H).
实施例17 N-(3-((2-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物18)的制备
(1)N-(3-((2-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将1-(4-(4-氨基-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙烷-1-酮(275mg,1.1mmol)、N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)吡啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(377mg,1.1mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(128.7mg,0.22mmol)、双(二亚芐基丙酮)钯(101.2mg,0.176mmol)和叔丁醇钾(246mg,2.2mmol)溶于1,4-二氧六环(15mL)中，微波下140℃反应2小时。反应完毕后减压抽滤，固体用甲醇洗涤多次，滤液真空浓缩，粗品经反相柱色谱(甲醇/水,0-50％,加0.2％三氟乙酸)分离得到白色固体状标题化合物(20mg,产率3.3％)。
分子式:C28H29F3N6O3 分子量:554.56 LC-MS(m/z):555.3(M+H+)
1H-NMR(400MHz,MeOD-d4)δ:8.03(s,1H),7.69(s,1H),7.40(d,J＝8.0Hz,1H),7.35-7.23(m,2H),6.96-6.93(m,1H),6.59-6.58(m,1H),6.50-6.37(m,2H),6.19-6.17(m,1H),5.80(dd,J1＝1.8Hz,J2＝9.8Hz,1H),3.77(s,3H),3.74-3.59(m,4H),3.16-3.01(m,4H),2.14(s,3H).
实施例18 N-(3-((6-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-甲氧苯基)氨基)-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物19)的制备
(1)1-(4-(4-((6-氯-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙烷-1-酮的制备
将1-(4-(4-氨基-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙烷-1-酮(3.9g,15.6mmol)和2,6-二氯-3-(三氟甲基)吡啶(3.37g,15.6mmol)溶于二甲基亚砜(30mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(4.03g,31.2mmol)，85℃反应17小时。反应液冷却至室温，倒入水(150mL)中，用乙酸乙酯萃取(150mL×3)，合并有机相，用水洗涤(150mL×2)，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝0-1:5)纯化，得到淡黄色固体状标题化合物(3.2g,产率47.8％)。
(2)叔丁基(3-((6-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基)苯基)氨基羧酸酯的制备
将1-(4-(4-((6-氯-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基)-3-甲氧苯基)哌嗪-1-基)乙烷-1-酮(0.2g,0.46mmol)、叔丁基(3-氨基苯基)氨基羧酸酯(0.2g,0.96mmol)和碳酸铯(0.3g,0.92mmol)溶于DMSO(3mL)中，在N2保护下向该体系中加入三(二亚苄基丙酮)二钯(45mg,0.05mmol)和2-二环己基膦-2',4',6'-三异丙基联苯(47mg,0.1mmol)，微波150℃反应3小时。反应完毕，用乙酸乙酯(20mL)稀释并用水洗涤两次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，残余物经制备薄层层析分离(石油醚:乙酸乙酯＝1:5)得到标题化合物(0.12g,产率42.8％)。
(3)1-(4-(4-((6-((3-氨基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙烷-1-酮的制备
将叔丁基(3-((6-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基)苯基)氨基羧酸酯(0.12g,0.2mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(5mL)，25℃搅拌一小时。反应完毕，将反应液浓缩，再加入二氯甲烷(20mL)并依次用碳酸氢钠溶液、食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液蒸干，得标题化合物(80mg,产率80％)。
(4)N-(3-((6-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-甲氧苯基)氨基)-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
室温下，将丙烯酰氯(29mg,0.32mmol)滴入到1-(4-(4-((6-((3-氨基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙烷-1-酮(80mg,0.16mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液中，25℃搅拌反应1小时。反应完毕，将反应液浓缩，再加入二氯甲烷(20mL)，依次用NaHCO3溶液、食盐水洗涤，有机相用无水Na2SO4干燥，过滤，滤液蒸干，残余物经制备薄层层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:5)分离，得标题化合物(15mg,产率16.9％)。
分子式:C28H29F3N6O3 分子量:554.6 LC-MS(m/z):555.3(M+H+)
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.84(s,2H),7.55(d,J＝8.4Hz,2H),7.27-7.35(m,2H),7.15(d,J＝7.6Hz,1H),6.86(s,1H),6.72(s,1H),6.53(s,1H),6.32-6.48(m,2H),6.07-6.28(m,2H),5.74(d,J＝10.0Hz,1H),3.88(s,3H),3.78(s,2H),3.61(s,2H),3.10(s,4H),2.15(s,3H).
实施例19 N-(3-((2-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-甲氧基-5-甲基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物20)的制备
(1)5-氟-4-甲基-2-硝基苯酚的制备
将3-氟-4-甲基苯酚(5.0g,39.7mmol)溶解于二氯甲烷(100mL)中，向该体系中加入硝酸(70％,5mL)，室温反应1小时。反应完毕，用水(50mL×2)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到标题化合物(4.48g,产率66％)。
(2)1-氟-5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯的制备
将5-氟-4-甲基-2-硝基苯酚(4.48g,26.2mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(50mL)中，向体系中加入碳酸钾(5.4g,39.3mmol)和碘甲烷(4.46g,31.4mmol)，室温搅拌16小时。反应完毕，将反应液倒入水(100mL)中，并搅拌至有固体析出，过滤，滤饼用水洗涤，干燥得到标题化合物(4.2g,产率87％)。
(3)1-(4-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)乙烷-1-酮的制备
将1-氟-5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯(4.2g,22.7mmol)和1-(哌嗪-1-基)乙烷-1-酮(2.9g,22.7mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，加入碳酸钾(6.3g,45.4mmol)，至120℃下搅拌16小时。反应完毕，冷却至室温，加入水(50mL)，用乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机相，干燥，过滤，浓缩，经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:2)纯化，得到标题化合物(2.26g,产率34％)。
(4)1-(4-(4-氨基-5-甲氧基-2-甲基苯基)哌嗪-1-基)乙烷-1-酮的制备
将1-(4-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)乙烷-1-酮(2.26g,7.7mmol)溶于乙醇(50mL)和水(10mL)的混合溶剂中，向该体系中加入铁粉(2.1g,38.5mmol)和氯化铵(53mg,1mmol)，升温至80℃下搅拌反应2小时。反应完毕，冷却至室温，过滤，滤液用碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤，干燥，过滤，浓缩，得到标题化合物(1.64g,产率81％)。
(5)N-(3-((2-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-甲氧基-5-甲基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将1-(4-(4-氨基-5-甲氧基-2-甲基苯基)哌嗪-1-基)乙烷-1-酮(92mg,0.35mmol)和N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(100mg,0.29mmol)加至1,4-二氧六环(10mL)中，向该体系中加入催化量的三氟乙酸(20mg)，加热至70℃下搅拌反应16小时。反应完毕，反应液用乙酸乙酯(50mL)处理，然后用水(50mL×2)洗涤，干燥，浓缩，经制备色谱分离纯化得到标题化合物(24mg,产率14.5％)。
分子式:C28H30F3N7O3 分子量:569.58 LC-MS(m/z):570.3(M+H+)
1H-NMR(400MHz,MeOD)δ:8.24(s,1H),7.74-7.66(m,3H),7.35(t,J＝8.0Hz,1H),7.20(d,J＝8.0Hz,1H,),6.66(s,1H),6.39-6.31(m,2H),5.76(d,J＝8.8Hz,1H),3.84(s,3H),3.69-3.64(m,4H),2.85-2.79(m,4H),2.14(s,3H),1.96(s,3H).
实施例20 N-(3-((2-((2-甲氧基-4-(1-甲基-2-氧代哌啶-4-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物21)的制备
(1)4-溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮的制备
将4-溴吡啶-2(1H)-酮(1.0g,5.75mmol)溶于四氢呋喃(20mL)中，氮气保护下降温至0℃，加入氢化钠(质量分数60％,0.23g,5.75mmol)，升至室温搅拌15分钟，缓慢滴加碘甲烷(1.10mL,17.24mmol)，滴加完毕后室温搅拌16小时，TLC检测反应完全，加入水和乙酸乙酯，分液，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得标题化合物(1.02g,产率94.4％)。
(2)叔丁基(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基羧酸酯的制备
将4-溴-2-甲氧基苯胺(6.8g,33.7mmol)和二碳酸二叔丁酯(8.9g,40.8mmol)溶于四氢呋喃(100mL)中，氮气保护下回流反应22小时，降温，减压蒸除溶剂，加入乙酸乙酯(150mL),用1mol/L盐酸洗涤，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩，得标题化合物(8.3g,产率81.6％)。
(3)叔丁基(2-甲氧基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基)氨基羧酸酯的制备
将叔丁基(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基羧酸酯(5.0g,16.56mmol)、联硼酸频那醇酯(5.05g,19.88mmol)和醋酸钾(4.88g,49.80mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中，氮气保护下加入1,1'-双(二苯基膦)二茂铁二氯化钯二氯甲烷络合物(410mg,0.50mmol)，升温至80℃反应过夜，降至室温后加入水和二氯甲烷，分液，有机相用饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝100:1)纯化，得标题化合物(4.8g,产率83.0％)。
(4)叔丁基(2-甲氧基-4-(1-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-4-基)苯基)氨基羧酸酯的制备
将叔丁基(2-甲氧基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基)氨基羧酸酯(1.49g,4.26mmol)、4-溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(800mg,4.26mmol)和碳酸钾(1.18g,8.55mmol)加入到1,4-二氧六环(50mL)和水(10mL)中，氮气保护下加入1,1'-双(二苯基膦)二茂铁二氯化钯(190mg,0.26mmol)后升温至90℃，搅拌反应过夜，抽滤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)纯化，得标题化合物(816mg,产率58.0％)。
(5)叔丁基(2-甲氧基-4-(1-甲基-2-氧代哌啶-4-基)苯基)氨基羧酸酯的制备
将叔丁基(2-甲氧基-4-(1-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-4-基)苯基)氨基羧酸酯(816mg,2.47mmol)溶于甲醇(50mL)中，加入二氧化铂(408mg,与前文所述酯的质量比为1:2)，氢气环境下室温搅拌过夜，抽滤，滤液浓缩得产物，直接用于下一步反应。
(6)4-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-甲基哌啶-2-酮的制备
将叔丁基(2-甲氧基-4-(1-甲基-2-氧代哌啶-4-基)苯基)氨基羧酸酯(825mg,2.47mmol)溶于二氯甲烷(6mL)和三氟乙酸(6mL)中，室温下搅拌0.5小时，减压浓缩得产物，直接用于下一步反应。
(7)N-(3-((2-((2-甲氧基-4-(1-甲基-2-氧代哌啶-4-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(200mg,0.58mmol)和4-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-甲基哌啶-2-酮(112.3mg,0.48mmol)加入到异丙醇(20mL)中，加入催化量的三氟乙酸，氮气保护下70℃搅拌过夜，加入氨水调节溶液pH>7，浓缩，粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝15:1)纯化，得标题化合物(110mg,产率42.4％)。
分子式:C27H27F3N6O3 分子量:540.5 LC-MS(m/z):541.3(M+H+)
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.32(s,1H),8.12(d,J＝7.6Hz,1H),7.97(s,1H),7.73(s,1H),7.59(s,1H),7.40-7.33(m,2H),6.88(s,1H),6.67(d,J＝1.6Hz,1H),6.55(s,1H),6.46(dd,J1＝1.2Hz,J2＝16.8Hz,1H),6.32-6.26(m,1H),5.79(dd,J1＝1.2Hz,J2＝10.0Hz,1H),3.87(s,3H),3.38-3.26(m,2H),3.10-3.02(m,1H),2.99(s,3H),2.73-2.67(m,1H),2.52-2.45(m,1H),2.09-1.95(m,2H).
实施例21 N-(3-((2-((2-甲氧基-4-(2-氧代哌啶-4-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物22)的制备
(1)4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮的制备
将4-溴吡啶-2-(1H)-酮(1.0g,5.7mmol)、联硼酸频那醇酯(1.6g,6.3mmol)和醋酸钾(0.84g,8.55mmol)加入到1,4-二氧六环(20mL)中，氮气保护下加入三环己基膦(193mg)和三(二亚苄基丙酮)二钯(300mg)，升温至85℃反应3小时，降至室温，抽滤，滤液浓缩后直接用于下一步反应。
(2)4-(4-氨基-3-甲氧基苯基)吡啶-2(1H)-酮的制备
将4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮(1.27g,5.7mmol)、4-溴-2-甲氧基苯胺(1.16g,5.7mmol)和碳酸钾(1.97g,14.3mmol)加入到1,4-二氧六环(50mL)和水(10mL)中，氮气保护下加入1,1'-双(二苯基膦)二茂铁二氯化钯(417mg)，升温至90℃反应12小时，抽滤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝50:1)纯化，得标题化合物(600mg,产率48.8％)。
(3)4-(4-氨基-3-甲氧基苯基)哌啶-2-酮的制备
将4-(4-氨基-3-甲氧基苯基)吡啶-2(1H)-酮(600mg,2.78mmol)溶于甲醇(50mL)中，加入二氧化铂(300mg,质量比50％)，氢气环境下室温搅拌过夜，抽滤，滤液浓缩得标题化合物(610mg,产率99.8％)。
(4)N-(3-((2-((2-甲氧基-4-(2-氧代哌啶-4-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(100mg,0.29mmol)和4-(4-氨基-3-甲氧基苯基)哌啶-2-酮(59.4mg,0.27mmol)加入到1,4-二氧六环(20mL)中，加入催化量的三氟乙酸，氮气保护下50℃搅拌过夜，加入氨水调节溶液pH>7，浓缩，粗品先经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝15:1)纯化，再用甲醇洗涤得标题化合物(100mg,产率70％)。
分子式:C26H25F3N6O3 分子量:526.5 LC-MS(m/z):527.2(M+H+)
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.32(s,1H),8.13(d,J＝6.8Hz,1H),7.97(s,1H),7.73(s,1H),7.61(s,1H),7.41-7.34(m,2H),6.89(s,1H),6.69(s,1H),6.66(s,1H),6.59(d,J＝12.0Hz,1H),6.31-6.24(m,1H),5.86(s,1H),5.79(d,J＝10.0Hz,1H),3.88(s,3H),3.40-3.30(m,2H),3.11-3.02(m,1H),2.71-2.65(m,1H),2.52-2.45(m,1H),2.05-2.00(m,1H),1.95-1.91(m,1H).
实施例22 N-(3-((2-((4-(1-(2-氟乙基)-2-氧代哌啶-4-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物23)的制备
(1)4-溴-1-(2-氟乙基)吡啶-2(1H)-酮的制备
将4-溴吡啶-2(1H)-酮(1.0g,5.75mmol)溶于乙腈(50mL)中，加入1-溴-2-氟乙烷(1.1g,8.66mmol)和碳酸铯(5.62g,17.25mmol)，氮气保护下50℃反应36小时，降至室温，抽滤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)纯化，得标题化合物(1.15g,产率91％)。
(2)1-(2-氟乙基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮的制备
将4-溴-1-(2-氟乙基)吡啶-2(1H)-酮(1.0g,4.55mmol)、联硼酸频那醇酯(1.27g,5mmol)和醋酸钾(0.67g,6.84mmol)加入到1,4-二氧六环(20mL)中，氮气保护下加入三环己基膦(154mg,0.55mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(210.6mg,0.23mmol)，升温至85℃反应3小时，降至室温，抽滤，滤液浓缩后直接用于下一步反应。
(3)叔丁基(4-(1-(2-氟乙基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-4-基)-2-甲氧基苯基)氨基羧酸酯的制备
将1-(2-氟乙基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮(1.21g,4.53mmol)、叔丁基(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基羧酸酯(1.37g,4.53mmol)和碳酸钾(1.26g,9.13mmol)加入到1,4-二氧六环(50mL)和水(10mL)中，氮气保护下加入1,1'-双(二苯基膦)二茂铁二氯化钯(200mg,0.27mmol)，升温至90℃反应过夜，抽滤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)纯化，得标题化合物(930mg,产率56.7％)。
(4)叔丁基(4-(1-(2-氟乙基)-2-氧代哌啶-4-基)-2-甲氧基苯基)氨基羧酸酯的制备
将叔丁基(4-(1-(2-氟乙基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-4-基)-2-甲氧基苯基)氨基羧酸酯(900mg,2.48mmol)溶于甲醇(50mL)中，加入二氧化铂(50％,450mg)，氢气环境下室温搅拌过夜，抽滤，滤液浓缩得产物，直接用于下步反应。
(5)4-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-(2-氟乙基)哌啶-2-酮的制备
将叔丁基(4-(1-(2-氟乙基)-2-氧代哌啶-4-基)-2-甲氧基苯基)氨基羧酸酯(908mg,2.48mmol)溶于二氯甲烷(6mL)和三氟乙酸(6mL)中，室温搅拌0.5小时，浓缩得产物，直接用于下一步反应。
(6)N-(3-((2-((4-(1-(2-氟乙基)-2-氧代哌啶-4-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(200mg,0.58mmol)和4-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-(2-氟乙基)哌啶-2-酮(128mg,0.48mmol)加入到异丙醇(20mL)中，加入催化量的三氟乙酸，氮气保护下70℃反应6小时，加入氨水调节溶液pH>7，浓缩，粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)纯化，得标题化合物(20mg,产率7.3％)。
分子式:C28H28F4N6O3 分子量:572.2 LC-MS(m/z):573.3(M+H+)
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.30(s,1H),8.15-8.10(m,1H),7.94(s,1H),7.74(s,1H),7.49-7.28(m,3H),6.89(s,1H),6.69(s,1H),6.60(s,1H),6.46(dd,J1＝1.2Hz,J2＝16.8Hz,1H),6.29-6.21(m,1H),5.79(dd,J1＝1.2Hz,J2＝10.4Hz,1H),4.72-4.69(m,1H),4.59-4.57(m,1H),3.88(s,3H),3.75-3.66(m,2H),3.58-3.43(m,2H),3.10-3.03(m,1H),2.75-2.71(m,1H),2.54-2.47(m,1H),2.15-1.92(m,2H).
实施例23 N-(3-((2-((2-甲氧基-4-(1-丙酰基哌啶-4-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物24)的制备
(1)1-(4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙烷-1-酮的制备
将4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-1,2,3,6-四氢吡啶(600mg,2.56mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，加入三乙胺(775.7mg,7.68mmol)，0℃下滴加丙酰氯(284.2mg,3.07mmol)，室温下搅拌12小时，TLC检测原料消失。加水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得标题化合物(580mg,产率78％)。
(2)1-(4-(4-氨基-3-甲氧基苯基)哌啶-1-基)丙烷-1-酮的制备
将1-(4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙烷-1-酮(580mg,2.0mmol)溶于甲醇(20mL)中，加入钯碳(58mg,质量比10％)，室温下搅拌12小时，反应完毕，过滤，除去溶剂得标题产物(500mg,产率95.4％)。
(3)N-(3-((2-((2-甲氧基-4-(1-丙酰基哌啶-4-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将1-(4-(4-氨基-3-甲氧基苯基)哌啶-1-基)丙烷-1-酮(100mg,0.381mmol)和N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(130.6mg,0.381mmol)溶于异丙醇(10mL)中，加入催化量三氟乙酸，回流反应12小时，TLC检测原料消失。加水，用乙酸乙酯萃取2次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷＝1:50)纯化，得黄色固体状标题化合物(50mg,产率23.1％)。
分子式:C29H31F3N6O3 分子量:568.6 LC-MS(m/z):569.3(M+H+)
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.35(s,1H),8.14(d,J＝8.8,1H),7.87(s,1H),7.74(s,1H),7.52(s,1H),7.38-7.26(m,3H),6.88(s,1H),6.69(d,J＝1.6Hz,1H),6.62(d,J＝7.6Hz,1H),6.46(dd,J1＝0.8Hz,J2＝16.8Hz,1H),6.25-6.18(m,1H),5.79(dd,J1＝1.2Hz,J2＝10.4Hz,1H),4.81(d,J＝13.2Hz,1H),3.97(d,J＝13.2Hz,1H),3.88(s,3H),3.15-3.05(m,1H),2.69-2.61(m,2H),2.43-2.37(m,2H),1.86-1.84(m,2H),1.64-1.61(m,2H),1.23-1.17(m,3H).
实施例24 N-(3-((2-((4-(1-(3-氟丙酰基)哌啶-4-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物25)的制备
(1)3-羟基-1-(4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙烷-1-酮的制备
将4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-1,2,3,6-四氢吡啶(665mg,2.84mmol)溶于四氢呋喃(20mL)中，加入三乙胺(860.5mg,8.52mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(1.62g,4.26mmol)和3-羟基丙酸(30％水溶液,852.8mg,2.84mmol)，室温搅拌12h，TLC检测原料消失。加水，乙酸乙酯萃取2次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，得标题化合物(500mg,产率57.5％)。
(2)3-氟-1-(4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙烷-1-酮的制备
将3-羟基-1-(4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙烷-1-酮(500mg,1.63mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，冷却至-78℃，加入二乙胺基三氟化硫(525.5mg,3.26mmol)，加毕后升至室温，TLC跟踪反应完毕后加水，用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷＝1:100)纯化，得黄色固体状标题化合物(75mg,产率15％)。
(3)1-(4-(4-氨基-3-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-氟丙烷-1-酮的制备
将3-氟-1-(4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙烷-1-酮(75mg,0.245mmol)溶于甲醇(20mL)中，加入钯碳(10％,7.5mg)，室温下搅拌12小时，反应完毕，滤去钯碳，减压除去溶剂得标题化合物(60mg,产率88％)。
(4)N-(3-((2-((4-(1-(3-氟丙酰基)哌啶-4-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将1-(4-(4-氨基-3-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-氟丙烷-1-酮(60mg,0.214mmol)和N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(73.3mg,0.214mmol)溶于异丙醇(10mL)中，加入催化量三氟乙酸，回流反应12小时，TLC检测原料消失。加水，用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷＝1:50)纯化，得白色固体状标题化合物(20mg,产率15.9％)。
分子式:C29H30F4N6O3 分子量:586.58 LC-MS(m/z):587.3(M+H+)
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.31(s,1H),8.13(d,J＝8.0,1H),7.86(s,1H),7.74(s,1H),7.61(s,1H),7.52(s,1H),7.37-7.26(m,2H),6.89(s,1H),6.68(d,J＝1.2Hz,1H),6.60(s,1H),6.45(dd,J1＝1.2Hz,J2＝16.8Hz,1H),6.27-6.20(m,1H),5.76(dd,J1＝0.8Hz,J2＝10.4Hz,1H),4.89-4.86(m,1H),4.81-4.74(m,2H),3.98(d,J＝13.2Hz,1H),3.87(s,3H),3.18-3.08(m,1H),2.84-2.76(m,2H),2.68-2.63(m,2H),1.90-1.84(m,2H),1.64-1.57(m,2H).
实施例25 N-(3-((2-((4-(1-(2-氟乙基)哌啶-4-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物26)的制备
(1)叔丁基(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基羧酸酯的制备
将4-溴-2-甲氧基苯胺(6.8g,33.7mmol)和二碳酸二叔丁酯(8.9g,40.8mmol)溶于四氢呋喃(100mL)中，氮气保护下回流反应22小时，降温，减压除去溶剂，加入乙酸乙酯(150mL)，用盐酸(1mol/L)洗涤，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩，得标题化合物(8.3g,产率81.6％)。
(2)叔丁基(2-甲氧基-4-(吡啶-4-基)苯基)氨基羧酸酯的制备
将吡啶-4-硼酸(1.19g,9.7mmol)、叔丁基(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基羧酸酯(2.93g,9.7mmol)和碳酸钾(2.68g,19.4mmol)加入到1,4-二氧六环(50mL)和水(10mL)的混合溶剂中，氮气保护下加入1,1'-双(二苯基膦)二茂铁二氯化钯(709mg,0.97mmol)，升温至90℃反应过夜，抽滤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，得标题化合物(2.5g,产率85.9％)。
(3)叔丁基(2-甲氧基-4-(哌啶-4-基)苯基)氨基羧酸酯的制备
将叔丁基(2-甲氧基-4-(吡啶-4-基)苯基)氨基羧酸酯(1.2g,4mmol)溶于乙酸(30mL)中，加入二氧化铂(30％,360mg)和三氟乙酸(912mg,8mmol)，氢气环境下室温搅拌过夜，抽滤，滤液浓缩，加入饱和碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩得产物，直接用于下步反应。
(4)叔丁基(4-(1-(2-氟乙基)哌啶-4-基)-2-甲氧基苯基)氨基羧酸酯的制备
将叔丁基(2-甲氧基-4-(哌啶-4-基)苯基)氨基羧酸酯(306mg,1mmol)溶于乙腈(30mL)中，加入1-溴-2-氟乙烷(190mg,1.5mmol)和碳酸铯(814.5mg,2.5mmol)，氮气保护下50℃反应22小时，降至室温，抽滤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)纯化，得标题化合物(200mg,产率56.7％)。
(5)4-(1-(2-氟乙基)哌啶-4-基)-2-甲氧基苯胺的制备
将叔丁基(4-(1-(2-氟乙基)哌啶-4-基)-2-甲氧基苯基)氨基羧酸酯(200mg,0.57mmol)溶于二氯甲烷(4mL)和三氟乙酸(4mL)中，室温搅拌0.5小时，浓缩得产物，直接用于下一步反应。
(6)N-(3-((2-((4-(1-(2-氟乙基)哌啶-4-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(200mg,0.58mmol)和4-(1-(2-氟乙基)哌啶-4-基)-2-甲氧基苯胺(121mg,0.48mmol)加入到异丙醇(20mL)中，加入催化量的三氟乙酸，氮气保护下70℃搅拌6小时，加入氨水调节溶液pH>7，浓缩，粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)纯化，得标题化合物(210mg,产率78.4％)。
分子式:C28H30F4N6O2 分子量:558.6 LC-MS(m/z):559.3(M+H+)
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:10.17(s,1H),8.76(s,1H),8.31(s,1H),8.06(s,1H),7.78(s,1H),7.64(d,J＝8.4Hz,1H),7.54(d,J＝8.4Hz,1H),7.28(t,J＝8.0Hz,1H),7.12(d,J＝8.0Hz,1H),6.83(d,J＝1.2Hz,1H),6.45-6.38(m,2H),6.24(dd,J1＝2.0Hz,J2＝17.2Hz,1H),5.74(dd,J1＝2.0Hz,J2＝10.0Hz,1H),4.59(t,J＝5.0Hz,1H),4.47(t,J＝5.0Hz,1H),3.78(s,3H),2.95(d,J＝11.2Hz,2H),2.65(t,J＝5.0Hz,1H),2.58(t,J＝5.0Hz,1H),2.42-2.33(m,1H),2.08-2.02(m,2H),1.68-1.59(m,4H).
实施例26 N-(3-((2-((2-甲氧基-4-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备(化合物27)的制备
(1)叔丁基(2-甲氧基-4-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基)苯基)氨基羧酸酯
将叔丁基(2-甲氧基-4-(哌啶-4-基)苯基)氨基羧酸酯(214mg,0.7mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，搅拌条件下加入甲基磺酰氯(160.4mg,1.4mmol)和N,N-二异丙基乙胺(361.2mg,2.8mmol)，室温搅拌6小时，浓缩，加水(50mL)和乙酸乙酯(50mL)，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，得标题化合物(200mg,74.3％)。
(2)2-甲氧基-4-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基)苯胺的制备
将叔丁基(2-甲氧基-4-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基)苯基)氨基羧酸酯(200mg,0.52mmol)溶于二氯甲烷(5mL)和三氟乙酸(5mL)中，室温搅拌0.5小时，浓缩得产物，直接用于下一步反应。
(3)N-(3-((2-((2-甲氧基-4-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(200mg,0.58mmol)和2-甲氧基-4-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基)苯胺(136mg,0.48mmol)加入到异丙醇(20mL)中，加入催化量的三氟乙酸，氮气保护下70℃搅拌6小时，加入氨水调节溶液pH>7，浓缩，粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)纯化，得标题化合物(220mg,产率77.7％)。
分子式:C27H29F3N6O4S 分子量:590.6 LC-MS(m/z):591.2(M+H+)
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.30(s,1H),9.52(s,1H),8.88(s,1H),8.47(s,1H),7.80(s,1H),7.57-7.55(m,2H),7.36-7.32(m,1H),7.09(d,J＝7.6Hz,1H),6.90(s,1H),6.48-6.41(m,2H),6.25(dd,J1＝1.8Hz,J2＝17.0Hz,1H),5.76-5.73(m,1H),3.81(s,3H),3.65(d,J＝11.6Hz,2H),2.89(s,3H),2.78-2.73(m,2H),2.55-2.52(m,1H),1.78(d,J＝12.0Hz,2H),1.68-1.58(m,2H).
实施例27 N-(3-((2-((2-甲氧基-4-(4-吗啉代哌啶-1-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物28)的制备
(1)4-氟-2-甲氧基-1-硝基苯的制备
在冰水浴条件下，将5-氟-2-硝基苯酚(4.7g,30mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(50mL)中，加入无水碳酸钾(12.4g,90mmol)，然后缓慢滴加碘甲烷(6.4g,45mmol)，滴加完毕，升至60℃反应5小时，反应完毕，冷却至室温，过滤，滤饼用乙酸乙酯(10mL×3)洗涤，向滤液中加入水(150mL)，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥后蒸干溶剂，得标题化合物(4.5g,产率88％)。
(2)叔丁基4-吗啉代哌啶-1-羧酸酯的制备
在冰水浴条件下，将叔丁基4-氧代哌啶-1-羧酸酯(2.99g,15mmol)，吗啉(1.44g,16.5mmol)，冰乙酸(1.08g,18mmol)溶于二氯甲烷(30mL)中，搅拌下加入三乙酰氧基硼氢化钠(6.36g,30mmol)，加毕，升至室温反应2小时，反应完毕，加入氢氧化钠溶液(2N,10mL)，洗涤，分离有机相，用无水硫酸钠干燥，经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)纯化，得标题化合物(3.49g,产率86％)。
(3)4-(哌啶-4-基)吗啉的制备
将叔丁基4-吗啉代哌啶-1-羧酸酯(3.0g,11.1mmol)溶于二氯甲烷(30mL)中，加入三氟乙酸(5mL)，室温搅拌6小时，减压除去溶剂，滴加饱和碳酸氢钠溶液，调至pH＝8，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩溶液得标题化合物(1.5g,产率79％)。
(4)4-(1-(3-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)吗啉的制备
室温下，将4-(哌啶-4-基)吗啉(1.5g,8.8mmol)，碳酸钾(3.0g,22mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中，加入4-氟-2-甲氧基-1-硝基苯(1.7g,9.7mmol)，加毕，升温至60℃反应12小时。反应完毕，将反应液倒入水(150mL)中，用乙酸乙酯萃取(200mL×3)，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，经硅胶柱层析(洗脱剂为石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化得标题化合物(2.0g,产率71％)。
(5)2-甲氧基-4-(4-吗啉代哌啶-1-基)苯胺的制备
将4-(1-(3-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)吗啉(2.0g,6.2mmol)和钯碳(10％,200mg)悬浮于甲醇(100mL)中，体系抽真空，置换氢气，室温下反应3小时，过滤，滤液蒸干得到标题化合物(1.6g,产率88％)。
(6)N-(3-((2-((2-甲氧基-4-(4-吗啉代哌啶-1-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将2-甲氧基-4-(4-吗啉代哌啶-1-基)苯胺(500mg,1.7mmol)和N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(583mg,1.7mmol)溶于异丙醇(10mL)中，滴加催化量的三氟乙酸，升至70℃反应12小时，反应完毕，将溶液浓缩，经硅胶柱层析(洗脱剂为二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化得标题化合物(760mg,产率76％)。
分子式：C30H34F3N7O3 分子量：597.63 LC-MS(m/z)：598.0(M+H+)
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.83(s,1H),10.26(s,1H),8.64((s,1H),8.26(s,1H),8.10(s,1H),7.74(brs,1H),7.56(d,1H,J＝7.6Hz),7.47(d,1H,J＝8.8Hz),7.23-7.27(m,1H),7.15(s,1H),6.44-6.50(m,1H),6.25(dd,1H,J1＝2.0Hz,J2＝17.2Hz),5.74-5.77(m,1H),3.96(s,2H),3.73-3.84(m,8H),3.42-3.49(m,2H),3.00-3.12(m,2H),2.60(t,2H,J＝12.2Hz),2.13(d,2H,J＝10.8Hz),1.72-1.78(m,2H).
实施例28 N-(3-((2-((2-甲氧基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物29)的制备
(1)叔丁基4-(4-氨基-3-甲氧基苯基)哌啶-1-羧酸酯的制备
将叔丁基4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸酯(500mg,1.5mmol)溶于甲醇(20mL)中，氮气保护下向该体系中加入Pd/C(50mg)，然后体系在氢气环境下室温搅拌反应16小时。反应完毕，过滤，浓缩滤液得到标题化合物(430mg,产率94％)。
(2)2-甲氧基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯胺的制备
将叔丁基4-(4-氨基-3-甲氧基苯基)哌啶-1-羧酸酯(430mg,1.4mmol)溶于四氢呋喃(20mL)中，冰水浴冷却，缓慢加入四氢铝锂(106mg,2.8mmol)，室温搅拌2小时。反应完毕，用水(50mL×2)洗涤，干燥，过滤，浓缩，得到标题化合物(268mg,收率87％)。
(3)N-(3-((2-((2-甲氧基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将2-甲氧基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯胺(220mg,1.0mmol)和N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(342mg,1.0mmol)加入异丙醇(10mL)中，向该体系中加入催化量的三氟乙酸，加热至70℃下搅拌反应16小时。反应完毕，向反应液中加入乙酸乙酯(50mL)，然后用水(50mL×2)洗涤，干燥，浓缩，经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化，得到标题化合物(35mg,收率6.7％)。
分子式：C27H29F3N6O2 分子量：526.55 LC-MS(m/z):527.3(M+H+)
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.31(s,1H),8.12(d,J＝8.4Hz,1H),7.91(s,1H),7.71(s,1H),7.49-7.54(m,1H),7.29-7.41(m,1H),6.87(s,1H),6.76(s,1H),6.67(d,J＝7.2Hz,1H),6.43-6.47(m,1H),6.18-6.24(m,1H),5.78(d,J＝10.8Hz,1H),3.86(s,3H),2.98(d,J＝10.8Hz,2H),2.38-2.46(m,1H),2.33(s,3H),2.00-2.07(m,2H),1.72-1.82(m,4H).
实施例29 N-(3-((2-((4-(1-(2-氟乙基)哌啶-4-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物30)的制备
(1)1-(2-氟乙基)-4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-1,2,3,6-四氢吡啶的制备
将4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-1,2,3,6-四氢吡啶(2.1g,9.0mmol)、1-溴-2-氟-乙烷(1.36g,10.8mmol)和碳酸钾(2.5g,18.0mmol)加入到乙腈(50mL)中，升温至50℃反应6小时。抽滤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝50:1)纯化得标题化合物(1.1g,产率43.6％)。
(2)4-(1-(2-氟乙基)哌啶-4-基)-2-甲氧基苯胺的制备
将1-(2-氟乙基)-4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-1,2,3,6-四氢吡啶(1.1g,3.9mmol)溶解到甲醇(100mL)中，加入钯碳(390mg)，氢气环境下室温搅拌16小时，抽滤，滤液浓缩得标题化合物(700mg,产率71.2％)。
(3)叔丁基(3-((2-((4-(1-(2-氟乙基)哌啶-4-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-4-基)氨基)苯基)羧酸酯的制备
将4-(1-(2-氟乙基)哌啶-4-基)-2-甲氧基苯胺(700mg,2.78mmol)、叔丁基(3-((2-氯-5-(三氟甲基)吡啶-4-基)氨基)苯基)氨基羧酸酯(1.08g,2.78mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(256mg,0.28mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(318mg,0.55mmol)和碳酸铯(1.8g,5.5mmol)加入到1,4-二氧六环(40mL)中，氮气保护下升温至120℃反应16小时，浓缩，粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)纯化，得标题化合物(360mg,产率21.4％)。
(4)N4-(3-氨基苯基)-N2-(4-(1-(2-氟乙基)哌啶-4-基)-2-甲氧基苯基)-5-(三氟甲基)吡啶-2,4-二胺的制备
将叔丁基(3-((2-((4-(1-(2-氟乙基)哌啶-4-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-4-基)氨基)苯基)羧酸酯(360mg,0.60mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(1mL)室温搅拌反应2小时，加入二氯甲烷(90mL)和水(50mL)，分液，有机相用饱和碳酸氢钠溶液(50mL)和饱和食盐水(80mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩得标题化合物(250mg,产率82.8％)。
(5)N-(3-((2-((4-(1-(2-氟乙基)哌啶-4-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将N4-(3-氨基苯基)-N2-(4-(1-(2-氟乙基)哌啶-4-基)-2-甲氧基苯基)-5-(三氟甲基)吡啶-2,4-二胺(250mg,0.50mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)中，降温至-20℃，滴加丙烯酰氯(90mg,1.0mmol)，滴加完毕后搅拌0.5小时，加入水(0.5mL)和甲醇(1mL)淬灭。溶液浓缩，粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)纯化，得标题化合物(40mg,产率14.3％)。
分子式:C29H31F4N5O2 分子量:557.6 LC-MS(m/z):558.0(M+H+)
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.58(s,1H),8.23(s,1H),7.91(s,1H),7.70(d,J＝8.4Hz,1H),7.59(s,1H),7.31-7.29(m,1H),6.95-6.88(m,2H),6.73-6.72(m,2H),6.47-6.43(m,2H),6.32-6.25(m,2H),5.78(dd,J1＝1.2Hz,J2＝10.4Hz,1H),4.66(t,J＝5.0Hz,1H),4.54(t,J＝5.0Hz,1H),3.77(s,3H),3.07(d,J＝11.2Hz,2H),2.77(t,J＝5.0Hz,1H),2.70(t,J＝5.0Hz,1H),2.46-2.41(m,1H),2.17-2.15(m,2H),1.81-1.78(m,4H).
实施例30 N-(3-((2–((4-(6-乙酰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物31)的制备
(1)叔丁基6-乙酰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸酯的制备
将叔丁基2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸酯半草酸盐(400mg,1.65mmol)溶于四氢呋喃(20mL)，加入三乙胺(333mg,3.3mmol)和乙酰氯(193mg,2.5mmol)，室温下反应过夜，LC-MS检测反应完成。将溶剂浓缩，加入乙酸乙酯(30mL)和水(20mL)，分液，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取，合并有机相，浓缩，剩余物经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)纯化，得标题化合物(360mg,产率90.9％)。
(2)(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)乙烷-1-酮的制备
将叔丁基6-乙酰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸酯(360mg,1.5mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，室温下反应4小时，LC-MS检测反应完成，将溶剂旋干，加入乙酸乙酯(50mL)和碳酸氢钠饱和溶液(10mL)，分液，水相用乙酸乙酯(40mL)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，得标题化合物(140mg,产率66.7％)。
(3)1-(6-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)乙烷-1-酮的制备
将(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)乙烷-1-酮(140mg,1.0mmol)和4-氯-2-甲氧基-1-硝基苯(187mg,1.0mmol)溶于1,4-二氧六环(15mL)中，加入三(二亚苄基丙酮)二钯(92mg,0.1mmol)、2-二环己基膦-2’,4’,6’-三异丙基联苯(95mg,0.2mmol)和碳酸铯(975mg,3.0mmol)，加热至110℃，反应过夜，LC-MS检测反应完成。将反应液过滤，滤液浓缩，剩余物经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝30:1)纯化，得到标题化合物(195mg,产率67％)。
(4)1-(6-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)乙烷-1-酮的制备
将1-(6-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)乙烷-1-酮(195mg,0.67mmol)溶于甲醇(20mL)中，在氮气保护下向该体系中加入钯碳(20mg)，然后体系在氢气环境下室温搅拌反应过夜，LC-MS检测反应完成。将反应液过滤，滤液浓缩，剩余物直接用于下一步。
(5)N-(3-((2–((4-(6-乙酰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将1-(6-(4-氨基-3-甲氧基)苯基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)乙烷-1-酮(175mg,0.67mmol)和N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(229mg,0.67mmol)溶于1,4-二氧六环(15mL)中，加入三(二亚苄基丙酮)二钯(61mg,0.067mmol)、2-二环己基膦-2’,4’,6’-三异丙基联苯(64mg,0.134mmol)和碳酸铯(436mg,1.34mmol)，加热至110℃，反应过夜，LC-MS检测反应完成。将反应液过滤，滤液浓缩，剩余物经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝15:1)纯化，得到标题化合物(15mg,产率3.95％)。
分子式:C28H28F3N7O3 分子量:567.6 LC-MS(m/z):568.3(M+H+)
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)10.10(s,1H),8.41-8.52(m,1H),8.24(s,1H),8.07(s,1H),7.75-7.84(m,1H),7.48(d,J＝7.2Hz,1H),7.36(d,J＝8.4Hz,1H),7.17-7.24(m,2H),6.40(dd,J1＝16.8Hz,J2＝10.0Hz,1H),6.25(dd,J1＝2.0Hz,J2＝17.2Hz,1H),6.04(s,1H),5.77(s,1H),4.26(s,2H),3.98(s,2H),3.86(s,4H),3.71(s,3H),1.75(s,3H).
实施例31 N-(3-((2-((2-甲氧基-4-(6-甲基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物33)的制备
(1)叔丁基6-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸酯的制备
将4-氟-2-甲氧基-1-硝基苯(0.2g,1.17mmol)，叔丁基2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸酯(0.23g,1.17mmol)和碳酸钾(0.32g,2.34mmol)加入到乙腈(4mL)中，然后加热至80℃反应16小时。反应结束后，过滤，滤液减压蒸干溶剂后得到标题化合物(0.3g,产率73.47％)。
(2)2-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷的制备
将叔丁基6-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸酯(0.3g,0.86mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(5mL)，25℃搅拌一小时。反应完毕，将反应液浓缩，再加入甲醇(20mL)，再次减压除去溶剂得标题化合物(0.2g,产率93.4％)。
(3)2-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-6-甲基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷的制备
将2-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷(0.2g,0.8mmol)和甲醛(0.19g,2.41mmol,37％水溶液)加入到甲醇(5mL)中，室温搅拌1小时，然后将硼氢化钠(0.12g,3.21mmol)分次加入到反应液中，继续反应2小时。反应完毕，将反应液减压蒸干，残渣经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝20:1-3:1)纯化得标题化合物(0.15g,产率71％)。
(4)2-甲氧基-4-(6-甲基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯胺的制备
将2-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-6-甲基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷(0.15g,0.57mmol)和Pd/C(50mg,10％)加入到甲醇(30mL)中，然后体系在氢气环境下室温搅拌反应1小时。反应完毕，过滤，浓缩得到标题化合物(90mg,产率67.7％)。
(5)N-(3-((2-((2-甲氧基-4-(6-甲基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将2-甲氧基-4-(6-甲基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯胺(90mg,0.39mmol)，N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(159mg,0.46mmol)，碳酸铯(377mg,1.16mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(38mg,0.04mmol)，2-二环己基膦-2',4',6'-三异丙基联苯(35mg,0.073mmol)，依次加入到二氧六环(5mL)中，氮气保护下100℃反应16小时。反应完毕，浓缩，残余物经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝30:1)得标题化合物(17mg,产率8.1％)。
分子式：C27H28F3N7O2 分子量：539.6 LC-MS(m/z):540.3(M+H+)
1H-NMR(400MHz,MeOD)δ:8.45(s,1H),8.08(s,1H),7.46(d,J＝8.8Hz,1H),7.40(t,J＝8.0Hz,1H),7.19(d,J＝8.0Hz,1H),6.70(s,1H),6.46–6.53(m,1H),6.34–6.39(m,1H),6.15(s,2H),5.78(dd,J1＝1.6Hz,J2＝10.0Hz,1H),4.39(s,2H),3.82(s,2H),3.30–3.35(m,7H),3.12(s.,3H).
实施例32 N-(3-((2-((7-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物34)的制备
(1)叔丁基6-氨基-7-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸酯的制备
将叔丁基7-甲氧基-6-硝基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸酯(300mg,0.97mmol)和钯碳(30mg)悬浮于甲醇(50mL)中，体系抽真空，置换氢气，室温下反应16小时。硅藻土过滤，减压除去溶剂，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷＝0-1:10)纯化，得白色固体状标题化合物(257mg,产率95％)。
(2)叔丁基6-((4-((3-丙烯酰胺苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-7-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸酯的制备
将N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(316mg,0.925mmol)和叔丁基6-氨基-7-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸酯(257mg,0.925mmol)溶解于异丙醇(40mL)中，加入三氟乙酸(32mg,0.28mmol)，氮气保护下70℃反应16小时。冷却至室温，浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液，用乙酸乙酯萃取(100mL×3)，有机相合并，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷＝0-1:10)纯化，得到灰白色固体状标题化合物(150mg,产率27.7％)。
(3)N-(3-((2-((7-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将叔丁基6-((4-((3-丙烯酰胺苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-7-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸酯(150mg,0.256mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(10mL)，室温搅拌3小时。减压除去溶剂，加入饱和碳酸氢钠溶液，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，有机相合并，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂，得淡黄色油状标题化合物(88mg,产率70.9％)。
分子式:C24H23F3N6O2 分子量:484.5 LC-MS(m/z):485(M+H+)
1H-NMR(400MHz,MeOD-d4)δ:8.38(s,1H),7.76(d,J＝8.0Hz,1H),7.67(s,2H),7.44(t,J＝8.0Hz,1H),7.18-7.17(m,1H),6.80(s,1H),6.46-6.38(m,2H),5.81-5.78(m,1H),4.23(s,2H),3.88(s,3H),3.38-3.35(m,2H),2.65-2.58(m,2H).
实施例33 N-(3-((2-((2-乙酰基-8-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物35)的制备
(1)1-(8-甲氧基-5-硝基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酮的制备
0℃下，将1-(8-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酮(1.0g,4.87mmol)溶于乙酸和乙酸酐的混合溶液(10mL,体积比1:1)中，滴加发烟硝酸(337mg,5.36mL)，滴加完毕，升至室温反应30分钟后，冷却至0℃，向反应液中加入水(40mL)，用乙酸乙酯萃取(100mL×2)，分层得有机相，无水硫酸钠干燥，经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化得标题化合物(0.33g,产率27％)。
(2)1-(5-氨基-8-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酮的制备
将1-(8-甲氧基-5-硝基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酮(0.3g,1.2mmol)和钯碳(10％,30mg)悬浮于甲醇(20mL)，体系抽真空，置换氢气，室温反应6小时，过滤，浓缩，经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化得到标题化合物(0.24g,产率91％)。
(3)N-(3-((2-((2-乙酰基-8-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将1-(5-氨基-8-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酮(100mg,0.45mmol)和N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(154mg,0.45mmol)溶于异丙醇(10mL)，滴加催化量的三氟乙酸，升至70℃反应12小时，反应完毕，将溶液浓缩，经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝10:1)得标题化合物(93.2mg,产率39％)。
分子式：C26H25F3N6O3 分子量：526.52 LC-MS(m/z)：527.2(M+H+)
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.06(s,1H),8.92(brs,1H),8.45(s,1H),8.25(s,1H),7.67-7.71(d,J＝16.0Hz,1H),7.07-7.38(m,4H),6.71(s,1H),6.40-6.47(m,1H),6.24(d.,J＝16.8Hz,1H),5.73-5.77(m,1H),4.41(s,2H),3.75-3.80(m,3H),3.48(d,J＝5.2Hz,2H),2.60(t,J＝5.6Hz，1H),2.04(s,1H),1.98(s,2H).
实施例34 N-(3-(2-((2-乙酰基-7-甲氧基异吲哚啉-4-基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物36)的制备
(1)1-(4-甲氧基-7-硝基异吲哚啉-2-基)乙烷-1-酮
-20℃下，将1-(4-甲氧基异吲哚啉-2-基)乙烷-1-酮(1.3g，6.8mmol)溶于乙酸和乙酸酐(7mL,体积比1:1)的混合溶液中，滴加发烟硝酸(471mg,7.48mmol)，滴加完毕，升至室温反应30分钟后，冷却至0℃，向反应液中加入水(30mL)，用乙酸乙酯萃取(50mL×2)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化得标题化合物(0.53g,产率33％)。
(2)1-(4-氨基-7-甲氧基异吲哚啉-2-基)乙烷-1-酮的制备
将1-(4-甲氧基-7-硝基异吲哚啉-2-基)乙烷-1-酮(0.4g,1.69mmol)和钯碳(10％,60mg)悬浮于甲醇(50mL)，体系抽真空，置换氢气，室温下反应3小时，过滤，滤液浓缩，经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)纯化得到标题化合物(0.32g,产率91％)。
(3)N-(3-(2-((2-乙酰基-7-甲氧基异吲哚啉-4-基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将1-(4-氨基-7-甲氧基异吲哚啉-2-基)乙烷-1-酮(100mg,0.48mmol)和N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(164.5mg,0.48mmol)溶于异丙醇(10mL)中，滴加催化量的三氟乙酸，升至70℃反应12小时，反应完毕，将溶液蒸干，经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化得标题化合物(76mg,产率31％)。
分子式：C25H23F3N6O3 分子量：512.48 LC-MS(m/z)：513.2(M+H+)
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.05(s,1H),9.12(s,1H),8.63(d,1H,J＝20.0Hz),8.29(s,1H),7.73(s,1H),7.47-7.62(m,1H),7.15-7.26(m,3H),6.68(brs,1H),6.36-6.44(m,1H),6.19-6.26(m,1H),5.72-5.76(m,1H),4.57-4.63(m,2H),4.40(s,2H),3.72-3.76(m,3H),2.03(s,3H).
实施例35 N-(3-((2-((2-乙酰基-1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物37)的制备
(1)1-(5-硝基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙-1-酮的制备
在冰水浴条件下，将5-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉(1.2g,6.73mmol)，三乙胺(1.02g,10.1mmol)溶于二氯甲烷(40mL)中，缓慢滴加乙酰氯(0.64g,8.1mmol)，滴加完毕，升至室温反应2小时。反应完毕后将滤液蒸干，经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)纯化得标题化合物(1.1g,产率74％)。
(2)1-(5-氨基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙-1-酮的制备
将1-(5-硝基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙-1-酮(1.0g,4.54mmol)和钯碳(10％,100mg)悬浮于甲醇(30mL)，体系抽真空，置换氢气，室温下反应6小时，过滤，浓缩，经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝10:1)得到标题化合物(0.77g,产率89％)。
(3)N-(3-((2-((2-乙酰基-1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将1-(5-氨基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙-1-酮(100mg,0.53mmol)和N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(182mg,0.53mmol)溶于异丙醇(10mL)中，滴加催化量的三氟乙酸，升至70℃反应12小时，反应完毕，将溶液蒸干，经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化得标题化合物(95mg,产率36％)。
分子式：C25H23F3N6O2 分子量：496.48 LC-MS(m/z)：497.2(M+H+)
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.07(s,1H),9.02(s,1H),8.53(s,1H),8.28(s,1H),7.71(d,1H,J＝17.2Hz),6.93-7.39(m,6H),6.43(dd,1H,J1＝10.4Hz,J2＝17.2Hz),6.23(dd,1H,J1＝2.0Hz,J2＝17.2Hz),5.73-5.76(m,1H),4.51-4.56(m,2H),3.48-3.50(m,2H),2.64(t,1H,J＝5.6Hz),2.53-2.56(m,1H),1.98-2.03(d,3H).
实施例36 N-(3-(2-(1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物38)的制备
(1)叔丁基5-硝基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸酯的制备
将5-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉(2.0g,11.2mmol)，4-二甲氨基吡啶(13.4mg,0.11mmol)，三乙胺(1.70g,16.8mmol)溶于四氢呋喃(40mL)中，滴加二碳酸二叔丁酯(2.92g,13.4mmol)，室温反应6小时。反应完毕，将反应液浓缩，经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝10：1)纯化得标题化合物(2.65g,产率85％)。
(2)叔丁基5-氨基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸酯的制备
将叔丁基5-硝基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸酯(2.0g,7.2mmol)和钯碳(10％,200mg)悬浮于甲醇(100mL)，体系抽真空，置换氢气，室温下反应6小时，过滤，浓缩，经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化得到标题化合物(1.57g,产率88％)。
(3)叔丁基5-((4-((3-丙烯酰氨基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸酯的制备
将叔丁基5-氨基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酯(150mg,0.60mmol)和N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(206mg,0.60mmol)溶于异丙醇(10mL)中，滴加催化量的三氟乙酸，升至70℃反应12小时，反应完毕，将溶液浓缩，经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝30:1)得标题化合物(133mg,产率40％)。
(4)N-(3-(2-(1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将叔丁基5-((4-((3-丙烯酰氨基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸酯(130mg,0.23mmol)溶于二氯甲烷(10mL)，滴加三氟乙酸(5mL)，室温反应2小时，反应完毕，将溶液浓缩，滴加饱和碳酸氢钠溶液调至pH＝8，用乙酸乙酯萃取(100mL×2)，有机相经无水硫酸钠干燥后，浓缩，经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化得标题化合物(92mg,产率88％)。
分子式：C23H21F3N6O 分子量：454.45 LC-MS(m/z)：455.2(M+H+)
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.28(s,1H),9.06(s,1H),8.53(s,1H),8.28(s,1H),7.83(s,1H),7.43(d,J＝7.6Hz,1H),7.31-7.33(m,1H),7.12-7.18(m,1H),7.02-7.06(m,1H),6.89(d,J＝7.6Hz,1H),6.47-6.54(m,1H),6.24(dd,J1＝2.0Hz,J2＝17.2Hz,1H),5.72-5.76(m,1H),4.07(s,2H),3.12-3.16(m,2H),2.76-2.79(m,2H).
实施例37 N-(3-((2-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物39)的制备
(1)3-碘-1H-吲哚的制备
将吲哚(11.72g,100mmol)和氢氧化钾(6.73g,119.9mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(200mL)中，将单质碘(25.4g,100mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(50mL)中，滴入反应液中，反应1小时，TLC检测原料反应完全。加水，用乙酸乙酯萃取2次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，真空浓缩得黄色固体状标题化合物(23.1g,产率95％)。
(2)3-碘-1-甲基-1H-吲哚的制备
将3-碘-1H-吲哚(2.43g,10mmol)溶于四氢呋喃(50mL)中，加入氢化钠(质量分数60％,800mg,20mmol)，滴加碘甲烷(2.84g,20mmol)，室温下搅拌12小时，TLC检测原料消失。加水，用乙酸乙酯萃取2次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，真空浓缩得标题化合物(1.88g,产率73％)。
(3)(1-甲基-1H-吲哚-3-基)硼酸的制备
将硼酸三乙酯(2.56g,17.53mmol)溶于(20mL)四氢呋喃中，降温至-78℃，加入正丁基锂(2.4mol/L,7.3mL,17.53mmol)，搅拌半小时，加入3-碘-1-甲基-1H-吲哚(1.5g,5.84mmol)，缓慢升温至室温搅拌2小时，TLC检测原料消失。加水，用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，真空浓缩得标题化合物(500mg)，不经纯化直接用于下一步。
(4)N-(3-((2-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将(1-甲基-1H-吲哚-3-基)硼酸(500mg,粗品)溶于1,4-二氧六环(20mL)中，加入N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(490mg,1.43mmol)、1,1'-双(二苯基膦)二茂铁二氯化钯(50mg,质量比10％)和碳酸铯(1.4g,4.29mmol)，升温至90℃反应过夜。反应完毕后，滤去不溶物，加水，用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷＝1:50)纯化，得黄色固体状标题化合物(50mg,产率8％)。
分子式:C23H18F3N5O 分子量:437.42 LC-MS(m/z):438.2(M+H+)
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.25(s,1H),8.87(s,1H),8.60(s,1H),8.29(s,1H),8.08-8.02(m,2H),7.54(d,J＝8.4Hz,1H),7.45(d,J＝8.4Hz,1H),7.41-7.37(m,1H),7.21-7.14(m,2H),6.95-6.91(m,1H),6.47-6.41(m,1H),6.25(dd,J1＝2.0Hz,J2＝17.2Hz,1H),5.74(dd,J1＝2.0Hz,J2＝10.0Hz,1H),3.84(s,3H).
实施例38 N-(3-((2-((8-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物40)的制备
(1)乙基(3-甲氧基苯乙基)氨基羧酸酯的制备
将2-(3-甲氧基苯基)乙烷-1-胺(30.24g,200mmol)溶于二氯甲烷(500mL)中，加入三乙胺(60.6g,600mmol)，冰水浴冷却，滴加氯甲酸乙酯(49g,451mmol)，25℃搅拌16小时。加水(500mL)稀释，水相用二氯甲烷萃取(300mL×2)，有机相合并，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得标题化合物(32.2g,产率72％)。
(2)8-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮的制备
将乙基(3-甲氧基苯乙基)氨基羧酸酯(32g,143.3mmol)溶于多聚磷酸(300mL)中，加热至140℃反应30分钟，加水(1L)，用乙酸乙酯萃取(400mL×2)，有机相合并，用无水硫酸钠干燥，真空浓缩，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯:甲醇＝20:1)纯化，得标题化合物(2.54g,产率10％)。
(3)8-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉的制备
将8-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮(2.5g,14.1mmol)溶于四氢呋喃(50mL)中，冰水浴冷却，缓慢加入四氢铝锂(1.07g,28.2mmol)，加完后升温至回流，反应4小时，依次加入水(1g)、氢氧化钠水溶液(质量分数15％,1mL)和水(1g)，抽滤，滤液真空浓缩，得标题化合物(1.4g,产率61％)。
(4)8-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉的制备
将8-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉(1.4g,8.6mmol)溶于甲醇(50mL)中，加入甲醛水溶液(质量分数35％,3.69g,43mmol)，搅拌半小时，加入氰基硼氢化钠(1.62g,25.8mmol)，25℃反应16小时。加水(100mL)，用二氯甲烷萃取(200mL×2)，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得标题化合物(1.1g,产率72.4％)。
(5)8-甲氧基-2-甲基-5-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉的制备
将8-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉(1.1g,6.2mmol)溶于三氟乙酸酐(20mL)中，加入硝酸钾(3.13g,31mmol)，搅拌0.5小时，升温至60℃反应16小时，滤去不溶物，滤液真空浓缩，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯洗脱)纯化，得标题化合物(300mg,产率21.7％)。
(6)8-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-5-胺的制备
将8-甲氧基-2-甲基-5-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉(300mg,1.35mmol)溶于甲醇(20mL)中，加入钯碳(30mg)，25℃通入氢气反应16小时，过滤，滤液真空浓缩，得目标化合物(220mg,产率84.7％)。
(7)N-(3-((2-((8-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将8-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-5-胺(100mg,0.52mmol)和N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(178.2mg,0.52mmol)溶于异丙醇(10mL)中，加入三氟乙酸(0.05mL)，回流反应16小时。加水(10mL)稀释，用乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷＝1:50)纯化，得黄色固体状标题化合物(120mg,产率46.3％)。
分子式:C25H25F3N6O2 分子量:498.5 LC-MS(m/z):250.2(M/2+H+)
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.08(s,1H),8.75(s,1H),8.40(s,1H),8.22(s,1H),7.71(s,1H),7.35(s,1H),7.13-7.10(m,3H),6.60(s,1H),6.47-6.40(m,1H),6.26-6.21(m,1H),5.75-5.72(m,1H),3.70(s,3H),2.60(t,J＝5.4Hz,2H),2.41(t,J＝5.6Hz,2H),2.28(s,3H).
实施例39 N-(3-((2-((2-甲氧基-4-(1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物41)的制备
(1)苄基(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基甲酸酯的制备
氮气保护下，将4-溴-2-甲氧基苯胺(15g,74.24mmol)溶于1,4-二氧六环(250mL)中，加入碳酸氢钠(15.8g,188.07mmol)的水(150mL)溶液。0℃下向反应体系中滴加氯甲酸苄酯(19.1g,111.96mmol)，滴加完毕后室温下反应20分钟，TLC检测原料消失。用乙酸乙酯萃取(100mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(100mL×2)，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝1:5)纯化得白色固体状目标化合物(15g,产率60％)。
(2)叔丁基4-(4-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-甲氧基苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸酯的制备
将苄基(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基甲酸酯(9g,26.77mmol)溶解于1,4-二氧六环和水中(2:1，210mL)，加入碳酸钠(8.5g,80.20mmol)、叔丁基4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(9.9g,32.00mmol)和二(三苯基膦)二氯化钯(1.1g,1.6mmol)，氮气保护下100℃反应5小时。冷却至室温，用乙酸乙酯萃取(100mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(100mL×2)，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝1:5)纯化得黄色固体状目标化合物(10g,产率85％)。
(3)苄基(2-甲氧基-4-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)苯基)氨基甲酸酯三氟乙酸盐的制备
将叔丁基4-(4-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-甲氧基苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸酯(10g,22.80mmol)溶于二氯甲烷(100mL)中，0℃滴加三氟乙酸(26g,230.01mmol)，滴加完毕后升至室温反应过夜，反应液真空浓缩得到黄色固体状目标化合物(11g粗品)。
(4)苄基(2-甲氧基-4-(1-(氧杂环丁烷-3-基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)苯基)氨基甲酸酯的制备
将苄基(2-甲氧基-4-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)苯基)氨基甲酸酯三氟乙酸盐(11g粗品)于四氢呋喃(110mL)中，搅拌下滴加三乙胺(4.9g,48.42mmol)，加完后搅拌10分钟，加入氧杂环丁烷-3-酮(2.1g,29.14mmol)。分批加入催三乙酰氧基硼氢化钠(12.9g,61.00mmol)，加完后室温反应过夜。用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(50mL)，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，粗品加入乙酸乙酯(5mL)，析出固体抽滤得灰白色固体状目标化合物(5g,产率52％)。
(5)2-甲氧基-4-(1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)苯胺的制备
将苄基(2-甲氧基-4-(1-(氧杂环丁烷-3-基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)苯基)氨基甲酸酯(5g,12.68mmol)溶于四氢呋喃和甲醇(5:3,80mL)中，氮气保护下加入干钯炭(1g)，体系抽真空置换氢气。室温下反应过夜，过滤，滤液真空浓缩得到棕色固体状目标化合物(2g,产率60％)。
(6)N-(3-((2-((2-甲氧基-4-(1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将2-甲氧基-4-(1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)苯胺(262.3mg,1.0mmol)和N-(3-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(343mg,1.0mmol)溶于异丙醇(10mL)中，加入催化量的三氟乙酸，回流反应12小时，TLC检测原料消失，浓缩，粗品经硅胶柱层析(甲醇:二氯甲烷＝1:100)纯化，得白色固体状标题化合物(50mg,产率8.8％)。
分子式:C29H31F3N6O3 分子量:568.59 LC-MS(m/z):285.2(M/2+H+)
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.15(s,1H),8.76(s,1H),8.31(s,1H),8.06(s,1H),7.77(s,1H),7.64(d,J＝8.0Hz,1H),7.55(d,J＝7.6Hz,1H),7.29(t,J＝8.0Hz,1H),7.13(d,J＝7.6Hz,1H),6.84(s,1H),6.52-6.38(m,2H),6.25(dd,J1＝2.0Hz,J2＝16.8Hz,1H),5.76-5.72(m,1H),4.54(t,J＝6.6Hz,2H),4.43(t,J＝6.0Hz,2H),3.79(s,3H),3.42-3.27(m,2H),2.77(d,J＝10.8Hz,2H),1.83-1.77(m,2H),1.69-1.60(m,4H).
实施例40 N-(3-((2-(2-甲氧基-4-(3-(甲基磺酰基)丙氧基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物43)的制备
(1)3-甲氧基-4-硝基苯酚的制备
将2-甲氧基-4-氟硝基苯(3.4g,19.88mmol)溶于二甲基亚砜(30mL)中，加入氢氧化钠溶液(1N,40mL,40mmol)，加热至50℃，反应3小时。反应完成，加入水(100mL)，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，有机相合并，浓缩，剩余物经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)纯化得到标题化合物(2.5g,产率74.4％)。
(2)4-(3-氯丙氧基)-2-甲氧基-1-硝基苯的制备
将3-甲氧基-4-硝基苯酚(2.5g,14.79mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中，加入3-碘-1-氯丙烷(3.62g,17.74mmol)和碳酸钾(3.1g,22.30mmol)，室温下反应过夜。反应完成，加入水(100mL)，用乙酸乙酯(3×50mL)萃取，有机相合并，浓缩，剩余物经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝4:1)纯化得到标题化合物(2.3g,产率63.5％)。
(3)(3-(3-甲氧基-4-硝基苯氧基)丙基)(甲基)硫醚的制备
将4-(3-氯丙氧基)-2-甲氧基-1-硝基苯(2.3g,9.39mmol)溶于甲醇(30mL)中，加入甲硫醇钠水溶液(2N,5.6mL,11.2mmol)，室温下反应过夜。反应完成，加入水(100mL)，用乙酸乙酯(3×50mL)萃取，有机相合并，浓缩，剩余物经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)纯化得到标题化合物(2.0g,产率83％)。
(4)2-甲氧基-4-(3-(甲基磺酰基)丙氧基)-1-硝基苯的制备
将(3-(3-甲氧基-4-硝基苯氧基)丙基)(甲基)硫醚(2.0g,7.78mmol)溶于二氯甲烷(30mL)中，加入间氯过氧苯甲酸(2.0g,11.7mmol)，室温下反应3小时。反应完成，加入水(100mL)，用二氯甲烷(3×50mL)萃取，有机相合并，浓缩，剩余物经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)得到标题化合物(1.5g,产率：66.7％)。
(5)2-甲氧基-4-(3-(甲基磺酰基)丙氧基)苯胺的制备
将2-甲氧基-4-(3-(甲基磺酰基)丙氧基)-1-硝基苯(1.5g,5.19mmol)溶于甲醇(30mL)中，加入雷尼镍，通氢气，室温下反应过夜。反应完成，过滤，浓缩，剩余物直接用于下一步(1.0g,产率74.6％)。
(6)N-(3-((2-(2-甲氧基-4-(3-(甲基磺酰基)丙氧基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将2-甲氧基-4-(3-(甲基磺酰基)丙氧基)苯胺(120mg,0.463mmol)溶于溶于异丙醇(10mL)中，加入N-(3-((2-氯-5-三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(158mg,0.462mmol)和催化量的三氟乙酸，加热至70℃，反应过夜。反应完成，将体系浓缩，加入乙酸乙酯(50mL)，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，水相用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，有机相合并，浓缩，剩余物经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)纯化得到标题化合物(50mg,产率19.1％)。
分子式：C25H26F3N5O5S 分子量：565.1 LC-MS(m/z)：566.2(M+H+)
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.12(s,1H),8.62(brs,1H),8.27(s,1H),8.15(s,1H),7.75(brs,1H),7.46-7.75(m,2H),7.24(t,J＝8.0Hz,1H),7.17(brs,1H),6.57(d,J＝2.4Hz,1H),6.42(dd,J＝16.8Hz,10.4Hz,1H),6.24(dd,J＝16.8Hz,2.0Hz,2H),5.74(dd,J＝10.0Hz,2.0Hz,1H),4.00-4.04(m,2H),3.75(s,3H),3.23-3.27(m,2H),3.01(s,3H),2.07-2.14(m,2H).
实施例41 N-(3-(2-(2-(3-(甲基磺酰基)丙氧基)苯基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物44)的制备
(1)1-(3-氯丙氧基)-2-硝基苯的制备
将2-硝基苯酚(2.0g,14.39mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中，加入3-碘-1-氯丙烷(3.52g,17.25mmol)和碳酸钾(3.0g,21.58mmol)，室温下反应过夜。反应完成，加入水(100mL)，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，有机相合并，浓缩，剩余物经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝4:1)得到标题化合物(2.0g,产率64.7％)。
(2)甲基(3-(2-硝基苯氧基)丙基)硫醚的制备
将1-(3-氯丙氧基)-2-硝基苯(2.0g,9.30mmol)溶于甲醇(30mL)中，加入甲硫醇钠水溶液(2N,5.6mL,11.2mmol)，室温下反应过夜。反应完成，加入水(100mL)，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，有机相合并，浓缩，剩余物经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)纯化得到标题化合物(1.8g,产率85.7％)。
(3)1-(3-(甲基磺酰基)丙氧基)-2-硝基苯的制备
将甲基(3-(2-硝基苯氧基)丙基)硫醚(1.8g,7.93mmol)溶于二氯甲烷(30mL)中，加入间氯过氧苯甲酸(2.03g,11.87mmol)，室温下反应3小时。反应完成，加入水(100mL)，用二氯甲烷(50mL×3)萃取，有机相合并，浓缩，剩余物经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)纯化得到标题化合物(1.2g,产率58.5％)。
(4)2-(3-(甲基磺酰基)丙氧基)苯胺的制备
将1-(3-(甲基磺酰基)丙氧基)-2-硝基苯(1.2g,4.63mmol)溶于甲醇(30mL)中，加入雷尼镍，通氢气，室温下反应过夜。反应完成，过滤，浓缩，剩余物直接用于下一步(0.8g,产率75.5％)。
(5)N-(3-(2-(2-(3-(甲基磺酰基)丙氧基)苯基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将2-(3-(甲基磺酰基)丙氧基)苯胺(100mg,0.437mmol)溶于异丙醇(10mL)中，加入N-(3-((2-氯-5-三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(170mg,0.497mmol)和催化量的三氟乙酸，加热至70℃反应过夜。反应完成后，将体系浓缩，加入乙酸乙酯(50mL)，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，水相用乙酸乙酯(20mL×2)萃取，有机相合并，浓缩，剩余物经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)纯化得到标题化合物(120mg,产率51.5％)。
分子式：C24H24F3N5O4S 分子量：535.1 LC-MS(m/z)：536.2(M+H+)
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.13(s,1H),8.78(s,1H),8.36(s,1H),8.33(s,1H),7.77(s,1H),7.72(d,J＝7.6Hz,1H),7.48(d,J＝8.4Hz,1H),7.27(t,J＝8.0Hz,1H),7.13(d,J＝8.0Hz,1H),6.89-6.94(m,2H),6.62(br,1H),6.42(dd,J＝16.8Hz,10.0Hz,1H),6.23(dd,J＝16.8Hz,2.0Hz,1H),5.74(dd,J＝10.0Hz,2.0Hz,1H),4.06(t,J＝6.4Hz,2H),3.25-3.29(m,2H),2.96(s,3H),2.11-2.16(m,2H).

Claims (59)

1.通式(Ⅰ)所示的化合物或其药学上可接受的盐：
其中，
Z1为N；Z2为N；
X、Y分别为NH；
环A选自苯基或吡啶基；
环B为任选被取代基取代的苯基，所述取代基选自卤素原子、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤代C1-4烷基或卤代C1-4烷氧基；
环C为任选被取代基取代的7-10元含氮稠杂环基、7-9元螺杂环基或8元桥杂环基，所述取代基选自氢原子、卤素原子、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤代C1-4烷基、卤代C1-4烷氧基、C1-4烷基磺酰基、C1-4烷基磺酰氧基、C1-4烷基磺酰基C1-4烷氧基或3-6元含氧杂环基；
或者环C选自被取代基取代的5-6元含氮杂环基，所述取代基选自3-6元含氧杂环基；
并且当环A为苯基且环B为苯基时，环C不为哌嗪基或吗啉基；
R1为三氟甲基；
R2为-NHC(O)CH＝CH2；
R3为氢原子，或选自任选被取代基取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基或-C(O)-R8，所述取代基选自氢原子、卤素原子、C1-4烷基或C1-4烷基磺酰基；
R8选自氢原子、甲基、乙基或甲氧基；
环B与环C之间的虚线表示环B与环C之间存在化学键，二者通过化学键相连接。
2.权利要求1中所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，
Z1为N；Z2为N；
X、Y分别为NH；
环A选自苯基或吡啶基；
环B选自任选被取代基取代的苯基，所述取代基选自氟原子、氯原子、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基或三氟甲氧基；
环C为任选被取代基取代的2-氮杂螺[3.5]壬烷基、8-氮杂双环[3.2.1]辛烷基、八氢环戊烯并[c]吡咯基、2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷、2-氮杂螺[3.3]庚烷、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷基或六氢吡咯[3,4-c]吡咯基，所述取代基选自氟原子、氯原子、甲基、乙基、甲氧基、三氟甲基、甲磺酰基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基或吗啉基；
或者环C为被取代基取代的氮杂环丁烷基、吡咯烷基、二氢吡咯基、咪唑烷基、噻唑烷基、噁唑烷基、哌啶基、哌啶酮基、哌嗪基、四氢吡啶基、四氢吡啶酮基、二氢哌啶酮基，所述取代基选自氧杂环丁烷基、四氢呋喃基或吗啉基；
并且当环A为苯基且环B为苯基时，环C不为哌嗪基或吗啉基；
R1为三氟甲基；
R2为-NHC(O)CH＝CH2；
R3选自氢原子、甲基、乙基、三氟甲基、甲氧基、2-氟乙基、乙酰基、丙酰基、3-氟丙酰基或3-甲磺酰丙氧基。
3.权利要求2中所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，
环A选自苯基或吡啶基；
环B选自任选被取代基取代的苯基，所述取代基选自氟原子、氯原子、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基或三氟甲氧基；
环C为被取代基取代的氮杂环丁烷基、吡咯烷基、二氢吡咯基、咪唑烷基、噻唑烷基、噁唑烷基、哌啶基、哌啶酮基、哌嗪基、四氢吡啶基、四氢吡啶酮基或二氢哌啶酮基，所述取代基选自氧杂环丁烷基、四氢呋喃基或吗啉基，并且当环A为苯基，且环B为苯基时，环C不为哌嗪基或吗啉基。
4.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述化合物选自：
。
5.一种药物组合物，含有权利要求1-4任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐；
任选地，所述药物组合物还含有一种或多种第二治疗剂；
任选地，所述药物组合物还含有一种或多种药用载体和/或稀释剂。
6.权利要求5中所述的药物组合物，其中，所述第二治疗剂选自：DNA复制抑制剂，有丝***抑制剂，血管生成抑制剂，生长因子抑制剂，抗体，抗代谢物，抗肿瘤激素类药物，铂类药物，免疫抑制剂，另外的酪氨酸激酶抑制剂。
7.权利要求6中所述的药物组合物，其中，所述DNA复制抑制剂选自拓扑异构酶抑制剂和烷基化试剂。
8.权利要求5中所述的药物组合物，其中，所述第二治疗剂选自：甲氨蝶呤、卡培他滨、吉西他滨、去氧氟尿苷、培美曲塞二钠、帕唑帕尼、伊马替尼、埃罗替尼、拉帕替尼、吉非替尼、凡德他尼、赫赛汀、贝伐单抗、利妥昔单抗、曲妥珠单抗、紫杉醇、长春瑞滨、多西他赛、多柔比星、羟基喜树碱、丝裂霉素、表柔比星、吡柔比星、博来霉素、来曲唑、他莫西芬、氟维司群、曲谱瑞林、氟他胺、亮丙瑞林、阿那曲唑、异环磷酰胺、白消安、环磷酰胺、卡莫司汀、尼莫司汀、司莫司汀、氮芥、马法兰、瘤可宁、卡铂、顺铂、奥沙利铂、络铂、拓扑特肯、喜树碱、拓扑替康、依维莫司、西罗莫斯、特癌适、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、硫唑嘌呤、菌素D、柔红霉素、阿霉素、米托蒽醌、争光霉素、普卡霉素或氨鲁米特。
9.权利要求1-4任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐用于制备药物的用途，所述药物用于治疗和/或预防受试者中与EGFR过度活性相关的疾病。
10.权利要求9中所述的用途，其中，所述疾病为过度增殖性疾病，或者为慢性阻塞性肺病。
11.权利要求10中所述的用途，其中，所述过度增殖性疾病选自癌症和非癌性疾病。
12.权利要求11中所述的用途，其中，所述癌症选自：食管癌、脑瘤、肺癌、鳞状上皮细胞癌、膀胱癌、胃癌、卵巢癌、腹膜癌、胰腺癌、乳腺癌、头颈癌、子***、子宫内膜癌、结直肠癌、肝癌、肾癌、实体瘤、非霍奇金淋巴瘤、中枢神经***肿瘤、***癌和甲状腺癌。
13.权利要求12中所述的用途，其中，所述食管癌选自食管腺癌和食管鳞状细胞癌。
14.权利要求12中所述的用途，其中，所述肺癌选自小细胞性肺癌和非小细胞性肺癌。
15.权利要求12中所述的用途，其中，所述中枢神经***肿瘤选自神经胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤或肉瘤。
16.权利要求11中所述的用途，其中，所述非癌性疾病为皮肤或***的良性增生。
17.权利要求9中所述的用途，其中，所述EGFR的过度活性是由EGFR的过度表达导致的。
18.权利要求9中所述的用途，其中，所述疾病具有由EGFR突变体引起的耐药性。
19.权利要求18中所述的用途，其中，所述疾病为癌症疾病。
20.权利要求18中所述的用途，其中，所述EGFR突变体包含下列中的任一项或多项：T790M突变，L858R突变，和d746-750突变。
21.权利要求20中所述的用途，其中，所述EGFR突变体包含T790M突变，或者T790M突变和L858R突变，或者T790M突变和d746-750突变，或者T790M突变，L858R突变和d746-750突变。
22.权利要求9中所述的用途，其中，所述受试者为哺乳动物。
23.权利要求22中所述的用途，其中，所述受试者选自牛科动物、马科动物、羊科动物、猪科动物、犬科动物、猫科动物、啮齿类动物、灵长类动物。
24.权利要求23中所述的用途，其中，所述受试者为人。
25.权利要求9中所述的用途，其中，所述的药物还含有一种或多种第二治疗剂。
26.权利要求25中所述的用途，其中，所述第二治疗剂选自：DNA复制抑制剂，有丝***抑制剂，血管生成抑制剂，生长因子抑制剂，抗体，抗代谢物，抗肿瘤激素类药物，铂类药物，免疫抑制剂，另外的酪氨酸激酶抑制剂。
27.权利要求26中所述的用途，其中，所述DNA复制抑制剂选自拓扑异构酶抑制剂和烷基化试剂。
28.权利要求1-4任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐用于制备制剂的用途，所述制剂用作酪氨酸激酶抑制剂，或用于降低或抑制细胞中EGFR或其突变体的活性。
29.权利要求28中所述的用途，其中，所述制剂用于体内或者体外施用。
30.权利要求29中所述的用途，其中，所述制剂被施用至受试者体内，以降低或抑制受试者体内细胞中的EGFR或其突变体的活性；或者，所述制剂被施用至体外细胞，以降低或抑制体外细胞中的EGFR或其突变体的活性。
31.权利要求30中所述的用途，其中，所述受试者为哺乳动物。
32.权利要求31中所述的用途，其中，所述受试者选自牛科动物、马科动物、羊科动物、猪科动物、犬科动物、猫科动物、啮齿类动物、灵长类动物。
33.权利要求32中所述的用途，其中，所述受试者为人。
34.权利要求30中所述的用途，其中，所述体外细胞为细胞系或者来自受试者的细胞。
35.权利要求34中所述的用途，其中，所述体外细胞为癌症细胞。
36.权利要求30中所述的用途，其中，所述EGFR突变体包含下列中的任一项或多项：T790M突变，L858R突变，和d746-750突变。
37.权利要求36中所述的用途，其中，所述EGFR突变体包含T790M突变，或者T790M突变和L858R突变，或者T790M突变和d746-750突变，或者T790M突变，L858R突变和d746-750突变。
38.权利要求28中所述的用途，其中，所述细胞选自食管癌细胞、脑瘤细胞、肺癌细胞、鳞状上皮细胞癌细胞、膀胱癌细胞、胃癌细胞、卵巢癌细胞、腹膜癌细胞、胰腺癌细胞、乳腺癌细胞、头颈癌细胞、子***细胞、子宫内膜癌细胞、结直肠癌细胞、肝癌细胞、肾癌细胞、实体瘤细胞、非霍奇金淋巴瘤细胞、中枢神经***肿瘤细胞、***癌细胞和甲状腺癌细胞；或者，所述细胞为来自受试者的原代细胞或其培养物，或已建立的细胞系。
39.权利要求38中所述的用途，其中，所述食管癌细胞选自食管腺癌细胞和食管鳞状细胞癌细胞。
40.权利要求38中所述的用途，其中，所述肺癌细胞选自小细胞性肺癌细胞和非小细胞性肺癌细胞。
41.权利要求38中所述的用途，其中，所述中枢神经***肿瘤细胞选自神经胶质瘤细胞、多形性胶质母细胞瘤细胞或肉瘤细胞。
42.一种降低或抑制细胞中EGFR或其突变体的活性的方法，其包括给所述细胞施用有效量的权利要求1-4任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐；所述方法在体外进行；所述方法不用于疾病的诊断或治疗目的。
43.权利要求42中所述的方法，所述方法应用于体外细胞，以降低或抑制体外细胞中的EGFR或其突变体的活性。
44.权利要求42中所述的方法，其中，所述体外细胞为细胞系或者来自受试者的细胞。
45.权利要求44中所述的方法，其中，所述体外细胞为癌症细胞。
46.权利要求42中所述的方法，其中，所述EGFR突变体包含下列中的任一项或多项：T790M突变，L858R突变，和d746-750突变。
47.权利要求46中所述的方法，其中，所述EGFR突变体包含T790M突变，或者T790M突变和L858R突变，或者T790M突变和d746-750突变，或者T790M突变，L858R突变和d746-750突变。
48.权利要求42中所述的方法，其中，所述细胞选自食管癌细胞、脑瘤细胞、肺癌细胞、鳞状上皮细胞癌细胞、膀胱癌细胞、胃癌细胞、卵巢癌细胞、腹膜癌细胞、胰腺癌细胞、乳腺癌细胞、头颈癌细胞、子***细胞、子宫内膜癌细胞、结直肠癌细胞、肝癌细胞、肾癌细胞、实体瘤细胞、非霍奇金淋巴瘤细胞、中枢神经***肿瘤细胞、***癌细胞和甲状腺癌细胞；或者，所述细胞为来自受试者的原代细胞或其培养物，或已建立的细胞系。
49.权利要求48中所述的方法，其中，所述食管癌细胞选自食管腺癌细胞和食管鳞状细胞癌细胞。
50.权利要求48中所述的方法，其中，所述肺癌细胞选自小细胞性肺癌细胞和非小细胞性肺癌细胞。
51.权利要求48中所述的方法，其中，所述中枢神经***肿瘤细胞选自神经胶质瘤细胞、多形性胶质母细胞瘤细胞或肉瘤细胞。
52.一种试剂盒，其包含权利要求1-4任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，且任选地还包括使用说明。
53.权利要求52中所述的试剂盒，所述试剂盒用于降低或抑制细胞中EGFR或其突变体的活性。
54.权利要求53中所述的试剂盒，其中，所述EGFR突变体包含下列中的任一项或多项：T790M突变，L858R突变，和d746-750突变，
55.权利要求54中所述的试剂盒，其中，所述EGFR突变体包含T790M突变，或者T790M突变和L858R突变，或者T790M突变和d746-750突变，或者T790M突变，L858R突变和d746-750突变。
56.权利要求53中所述的试剂盒，其中，所述细胞选自食管癌细胞、脑瘤细胞、肺癌细胞、鳞状上皮细胞癌细胞、膀胱癌细胞、胃癌细胞、卵巢癌细胞、腹膜癌细胞、胰腺癌细胞、乳腺癌细胞、头颈癌细胞、子***细胞、子宫内膜癌细胞、结直肠癌细胞、肝癌细胞、肾癌细胞、实体瘤细胞、非霍奇金淋巴瘤细胞、中枢神经***肿瘤细胞、***癌细胞和甲状腺癌细胞；或者，所述细胞为来自受试者的原代细胞或其培养物，或已建立的细胞系。
57.权利要求56中所述的试剂盒，其中，所述食管癌细胞选自食管腺癌细胞和食管鳞状细胞癌细胞。
58.权利要求56中所述的试剂盒，其中，所述肺癌细胞选自小细胞性肺癌细胞和非小细胞性肺癌细胞。
59.权利要求56中所述的试剂盒，其中，所述中枢神经***肿瘤细胞选自神经胶质瘤细胞、多形性胶质母细胞瘤细胞或肉瘤细胞。
CN201580013620.1A 2014-04-18 2015-04-20 一种酪氨酸激酶抑制剂及其用途 Active CN106536503B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410158807 2014-04-18
CN2014101588078 2014-04-18
PCT/CN2015/076988 WO2015158310A1 (zh) 2014-04-18 2015-04-20 一种酪氨酸激酶抑制剂及其用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106536503A CN106536503A (zh) 2017-03-22
CN106536503B true CN106536503B (zh) 2019-09-06

Family

ID=54323511

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201580013620.1A Active CN106536503B (zh) 2014-04-18 2015-04-20 一种酪氨酸激酶抑制剂及其用途

Country Status (3)

Country Link
US (1) US10300058B2 (zh)
CN (1) CN106536503B (zh)
WO (1) WO2015158310A1 (zh)

Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105384694B (zh) * 2014-08-22 2020-09-04 四川海思科制药有限公司 一种取代的氨基嘧啶衍生物及其制备方法和药物用途
CN105198821B (zh) * 2015-10-26 2017-12-05 苏州明锐医药科技有限公司 洛昔替尼的制备方法
RU2607371C1 (ru) * 2015-11-19 2017-01-10 Закрытое акционерное общество "Р-Фарм"(ЗАО "Р-Фарм") Замещенные N2-(4-амино-2-метоксифенил)-N4-[2-(диметилфосфорил)-фенил]-5-хлор-пиримидин-2,4-диамины в качестве модуляторов ALK и EGFR, предназначенные для лечения рака
CN105461640B (zh) * 2015-12-02 2017-11-21 芷威（上海）化学科技有限公司 一种酪氨酸激酶抑制剂的制备方法
CA3228632A1 (en) 2015-12-24 2017-06-29 Kyowa Kirin Co., Ltd. .alpha.,.beta.-unsaturated amide compound
CN106928150B (zh) * 2015-12-31 2020-07-31 恩瑞生物医药科技（上海）有限公司 丙烯酰胺苯胺衍生物及其药学上的应用
CN105646371B (zh) * 2016-01-19 2019-10-01 浙江大学 含异羟肟酸片段的2,4-二芳胺基嘧啶类衍生物及制备和应用
CN106243044A (zh) * 2016-06-30 2016-12-21 浙江大学 含卤代丙烯酰胺侧链的嘧啶类衍生物及制备和应用
CN106083828A (zh) * 2016-06-30 2016-11-09 浙江大学 含吖丙啶环侧链的芳胺嘧啶衍生物及制备和应用
CN114478544B (zh) * 2017-09-28 2023-06-16 上海海雁医药科技有限公司 4,6,7-三取代1,2-二氢吡咯并[3,4-c]吡啶/嘧啶-3-酮衍生物及用途
CN112601742A (zh) * 2018-06-30 2021-04-02 北京生命科学研究所 组织蛋白酶c抑制剂
CN108997200A (zh) * 2018-07-17 2018-12-14 成都睿智化学研究有限公司 一种5-氨甲基-哌啶-2-酮的制备方法
CN113164776A (zh) * 2018-09-25 2021-07-23 黑钻治疗公司 酪氨酸激酶抑制剂组合物、其制备方法和使用方法
CN111410667A (zh) * 2019-01-08 2020-07-14 武汉宇科源医药生物科技有限公司 新型(1,2,4)***并(1,5-a)吡啶基磷氧化物及其用途
CN110256429B (zh) * 2019-06-17 2021-06-22 广东药科大学 一种具有螺环结构的氨基嘧啶类化合物及其制备方法和应用
KR20220028075A (ko) 2019-07-03 2022-03-08 스미토모 다이니폰 파마 온콜로지, 인크. 티로신 키나제 비-수용체 1 (tnk1) 억제제 및 그의 용도
AU2020406824A1 (en) * 2019-12-16 2022-08-11 Korea Research Institute Of Chemical Technology Novel pyrimidine derivative and use thereof
BR112022011834A2 (pt) * 2019-12-16 2022-08-30 Korea Res Inst Chemical Tech Derivado de pirimidina e uso do mesmo
CA3171187A1 (en) * 2020-02-14 2021-08-19 Salk Institute For Biological Studies Inhibitors of ulk1/2 and methods of using same
CN115260195B (zh) * 2021-04-30 2023-07-04 上海齐鲁制药研究中心有限公司 Egfr降解剂
WO2023106881A1 (ko) * 2021-12-09 2023-06-15 주식회사 온코빅스 암세포 성장 억제 효과를 나타내는 신규 헤테로 고리 치환 피리미딘 유도체 및 그를 포함하는 약학 조성물
CN115536699B (zh) * 2022-12-01 2023-05-23 北京鑫开元医药科技有限公司 一种新型EGFR-TKIs、制备方法、药物组合物及其应用

Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006074057A2 (en) * 2004-12-30 2006-07-13 Exelixis, Inc. Pyrimidine derivatives as kinase modulators and method of use
WO2008005538A2 (en) * 2006-07-05 2008-01-10 Exelixis, Inc. Methods of using igf1r and abl kinase modulators
WO2009017838A3 (en) * 2007-08-01 2009-07-02 Exelixis Inc Combinations of jak-2 inhibitors and other agents
CN101903357A (zh) * 2007-07-17 2010-12-01 里格尔药品股份有限公司 作为pkc抑制剂的环状胺取代的嘧啶二胺
CN102083800A (zh) * 2008-06-27 2011-06-01 阿维拉制药公司 杂芳基化合物和其用途
WO2012064706A1 (en) * 2010-11-10 2012-05-18 Avila Therapeutics, Inc. Mutant-selective egfr inhibitors and uses thereof
CN102740847A (zh) * 2009-12-29 2012-10-17 阿维拉制药公司 杂芳基化合物和其用途
CN103153064A (zh) * 2010-10-14 2013-06-12 阿里亚德医药股份有限公司 抑制egfr导致的癌症中细胞增殖的方法
CN103269704A (zh) * 2010-11-01 2013-08-28 西建阿维拉米斯研究公司 杂环化合物和其用途

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BRPI0510963A (pt) * 2004-05-14 2007-11-20 Pfizer Prod Inc derivados pirimidina para o tratamento do crescimento anormal de células
US8097630B2 (en) * 2006-10-10 2012-01-17 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Pinane-substituted pyrimidinediamine derivatives useful as Axl inhibitors

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006074057A2 (en) * 2004-12-30 2006-07-13 Exelixis, Inc. Pyrimidine derivatives as kinase modulators and method of use
WO2008005538A2 (en) * 2006-07-05 2008-01-10 Exelixis, Inc. Methods of using igf1r and abl kinase modulators
CN101903357A (zh) * 2007-07-17 2010-12-01 里格尔药品股份有限公司 作为pkc抑制剂的环状胺取代的嘧啶二胺
WO2009017838A3 (en) * 2007-08-01 2009-07-02 Exelixis Inc Combinations of jak-2 inhibitors and other agents
CN102083800A (zh) * 2008-06-27 2011-06-01 阿维拉制药公司 杂芳基化合物和其用途
CN102740847A (zh) * 2009-12-29 2012-10-17 阿维拉制药公司 杂芳基化合物和其用途
CN103153064A (zh) * 2010-10-14 2013-06-12 阿里亚德医药股份有限公司 抑制egfr导致的癌症中细胞增殖的方法
CN103269704A (zh) * 2010-11-01 2013-08-28 西建阿维拉米斯研究公司 杂环化合物和其用途
WO2012064706A1 (en) * 2010-11-10 2012-05-18 Avila Therapeutics, Inc. Mutant-selective egfr inhibitors and uses thereof

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Discovery of a mutant-selective covalent inhibitor of EGFR that overcomes T790M-mediated resistance in NSCLC;Annette O. Walter等;《Cancer Discov.》;20131231;第3卷(第12期);1401-1415
New Pyrimidine Derivatives possessing ALK Inhibitory Activities;Eun Hye Yang等;《Bull. Korean Chem. Soc.》;20131231;第34卷(第10期);第3130页表1
Trifluoromethylpyrimidine-based inhibitors of proline-rich tyrosine kinase 2 (PYK2): Structure-activity relationships and strategies for the elimination of reactive metabolite formation;Daniel P. Walker;《Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters》;20081011;第23卷(第18期);第6075页

Also Published As

Publication number Publication date
WO2015158310A1 (zh) 2015-10-22
US20170112833A1 (en) 2017-04-27
CN106536503A (zh) 2017-03-22
US10300058B2 (en) 2019-05-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106536503B (zh) 一种酪氨酸激酶抑制剂及其用途
CN105085489B (zh) 嘧啶或吡啶类化合物、其制备方法和医药用途
CN105461714B (zh) 并环类pi3k抑制剂
TWI615393B (zh) 丙烯酸類衍生物、其製備方法及其在醫藥上的用途
TWI304061B (en) Nitrogen-containing aromatic ring derivatives
CN109219604A (zh) 四氢异喹啉***受体调节剂及其用途
CN108218868B (zh) 多激酶抑制剂化合物、其晶型及用途
CN107849013A (zh) 作为dub抑制剂用于治疗癌症的氰基吡咯烷类
CN106928247A (zh) 螺羟吲哚化合物及其作为治疗剂的用途
CN106573906A (zh) 哌啶‑二酮衍生物
BRPI0912475B1 (pt) compostos como inibidores de quinase, método para produção dos ditos compostos e composição farmacêutica
CN109415341A (zh) 作为TGF-βR1抑制剂的苯并三氮唑衍生的α，β不饱和酰胺类化合物
CN105524068A (zh) 氮杂双环衍生物、其制法与医药上的用途
CN105884695B (zh) 杂环衍生物类酪氨酸激酶抑制剂
CN107108586A (zh) 多环类间变性淋巴瘤激酶抑制剂
CN104487434B (zh) 双环取代的嘧啶类化合物
CN109568321A (zh) RORγ调节剂
CN102887889B (zh) 杂环取代的嘧啶类化合物
AU2019311121B2 (en) Fused ring derivative used as FGFR4 inhibitor
CN105541792B (zh) 多环类pi3k抑制剂
CN108948019A (zh) 黏着斑激酶抑制剂及其用途
EP3303335B1 (en) Heterocyclic compounds for treating psoriasis
CN110650961B (zh) Parp抑制剂、其药物组合物、制备方法和应用
CN104230960B (zh) 四并环类间变性淋巴瘤激酶抑制剂
CN109705191A (zh) Iap抑制剂及其在药物中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1230591

Country of ref document: HK

TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20190710

Address after: 101113 Room 301, Building 3, East of Qishanzhuang Village, Zhangjiawan Town, Tongzhou District, Beijing (in Beijing Sihuan Pharmaceutical Co., Ltd.)

Applicant after: Beijing Aohe Pharmaceutical Research Institute Co., Ltd.

Address before: 250101 No. 2518 Tianchen Street, Jinan High-tech Zone, Shandong Province

Applicant before: Shandong Xuanzhu Medical Technology Co., Ltd.

TA01 Transfer of patent application right
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20191204

Address after: No. 996, Zhengda street, Jilin economic and Technological Development Zone, Jilin City, Jilin Province

Co-patentee after: Beijing Tianxinyuan Pharmaceutical Science and Technology Development Co., Ltd.

Patentee after: Jilin Shengtong Chemical Co., Ltd.

Co-patentee after: Beijing Sihuan Pharmaceutical Co., Ltd.

Co-patentee after: Beijing Aohe Pharmaceutical Research Institute Co., Ltd.

Address before: 101113 Room 301, Building 3, East of Qishanzhuang Village, Zhangjiawan Town, Tongzhou District, Beijing (in Beijing Sihuan Pharmaceutical Co., Ltd.)

Patentee before: Beijing Aohe Pharmaceutical Research Institute Co., Ltd.

TR01 Transfer of patent right