CN106083828A - 含吖丙啶环侧链的芳胺嘧啶衍生物及制备和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种如式I所示的含吖丙啶环侧链的芳胺嘧啶衍生物或其对映异构体，主要是以芳胺嘧啶为母核，通过与吖丙啶甲酸一步缩合得到目标化合物。实验证明，在细胞水平上对与EGFR酪氨酸激酶活性相关的肿瘤细胞(过表达EGFR的人表皮癌细胞株A431、对Gefitinib耐药的人肺腺癌细胞株H1975)具有显著的增殖抑制作用，特别是对耐药细胞株H1975有较好的选择性，同时对EGFR激酶也有较好的抑制效果，可制备相应抗肿瘤细胞药物。结构通式：
Description
技术领域
本发明属于制药领域，具体涉及一种含吖丙啶环侧链的芳胺嘧啶衍生物、制备方法、中间体、及其应用。
背景技术
表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)是目前备受瞩目的肿瘤治疗靶点。EGFR抑制剂更是晚期非小细胞肺癌(NSCLC)治疗的重要组成部分。在经历了第一代EGFR抑制剂和第二代EGFR抑制剂之后，以嘧啶为骨架的第三代EGFR抑制剂横空出世。该类抑制剂是高度选择性、有效对抗EGFR-TKI获得性T790M耐药的新一代抑制剂，毒副反应相对较小，尤其不似以往EGFR-TKI治疗，该类抑制剂出现的皮肤副反应较低。
吖丙啶是一类三元杂环，由于高度的环张力，其可以接受多种亲核试剂的进攻从而生成各种具有区域选择性和立体选择性的开环产物。有研究报道，在生理环境下，吖丙啶环能与半胱氨酸残基发生温和的共价加成反应。因此吖丙啶环相对丙烯酰胺较弱的共价加成能力既可以保持与EGFR激酶上的相关部位(Cys797)发生作用，同时较低的反应活性可以使药物在维持甚至增加药效的同时有效地降低其毒副作用。
发明内容
本发明的目的是提供一种含吖丙啶环侧链的芳胺嘧啶衍生物及其对映异构体，该化合物具有较佳的抗肿瘤活性，同时可以规避传统的双键不可逆片段的不良反应。具有以下结构通式I：
其中：
R1为三氟甲基、氯、氢，
R2为氢、甲基、甲氧基、氟、氯，
R3为乙酰哌嗪基、甲基哌嗪基、吗啉基、哌啶基、二甲胺基。
本发明所述的含吖丙啶环侧链的芳胺嘧啶衍生物或其对应异构体为如下任一化合物：
(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物1)；
(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物2)；
(R)-N-(3-((2-((4-(4-吗啉-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物3)；
(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物4)；
(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物5)；
(R)-N-(3-((2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物6)；
(R)-N-(3-((2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物7)；
(S)-N-(3-((2-((4-(4-哌啶-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物8)；
(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物9)；
(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物10)；
(S)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物11)；
(S)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物12)；
(S)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物13)；
(S)-N-(3-((2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物14)；
(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)-3-氯苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物15)；
(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)-3-氟苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物16)；
(S)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)-3-甲基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物17)；
(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)-3-甲基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物18)；
(R)-N-(3-((2-((4-(4-哌啶-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物19)；
(S)-N-(3-((2-((4-(4-吗啉-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物20)；
(S)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)-3-氟苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物21)；
(S)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)-3-氯苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物22)；
(R)-N-(3-((5-氯-2-((4-(二甲氨基)-2-甲氧基苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物23)；
(S)-N-(3-((5-氯-2-((4-(二甲氨基)-2-甲氧基苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物24)；
(S)-N-(3-((2-((4-(4-吗啉-1-基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物25)；
(S)-N-(3-((2-((4-(4-哌啶-1-基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物26)。
本发明的另一个目的是提供所述的含吖丙啶环侧链的芳胺嘧啶衍生物或其对应异构体的制备方法，通过以下步骤实现：
以5-位取代尿嘧啶1为起始原料，在N，N-二异丙基乙胺为碱三氯氧磷作溶剂条件110℃回流生成5-位取代2,4-二氯嘧啶2，中间体2与单Boc保护的间苯二胺在正丁醇中反应生成4,5-位取代的2-氯嘧啶3，中间体3与取代的苯胺在1N HCl催化下生成2,4,5-位取代的嘧啶4，中间体4在三氟乙酸条件下脱保护得到中间体5，中间体5再与三苯亚甲基保护的吖丙啶-2-酸缩合生成化合物6，化合物6最后脱保护基得到目标产物I。反应式如下：
其中，各基团的定义同前通式I所述。
本发明所涉及的原料或中间体，可直接购买，或按照实施例部分提及的文献方法制备。
本发明制备方法中所述的式I化合物，可以用有机合成和药物化学领域及技术人员熟知的多种方法制备，可以使用上面所描述的方法来制备本发明的化合物，将理解的是当给出典型的或优选的工艺操作条件(即反应温度、时间、反应物的摩尔比、溶剂、压力等等)，还可以使用其他工艺操作条件，除非另有说明。最佳反应条件可以随所用的具体反应物或溶剂而变化，但这些条件可以由本领域技术人员通过常规最佳化过程加以确定。通常，可以使用如上所述的反应路线及工艺制备本发明化合物，但并不限于反应条件中的试剂和溶剂。
本发明的再一个目的是提供了所述的含吖丙啶环侧链的芳胺嘧啶衍生物或其对应异构体在制备抗肿瘤药物中的应用，所述肿瘤细胞是指过表达EGFR的人表皮癌细胞株A431、对Gefitinib耐药的人肺腺癌细胞株H1975，所述EGFR激酶是指野生型EGFR激酶和L858R/T790M双突变型EGFR激酶。其药效学实施例实验数据显示，其在分子水平对突变型的EGFR酪氨酸激酶具有较好抑制作用，在细胞水平对EGFR突变型的肿瘤细胞也具有显著的增殖抑制作用，可制备相应的抗肿瘤药物。
本发明提供了一类全新的芳胺嘧啶衍生物，其中的吖丙啶环可作为新型的非可逆共价反应官能团，可以规避不饱和双键的脱靶标等副作用，其药效学实施例实验数据显示，在细胞水平对与EGFR酪氨酸激酶活性相关的肿瘤细胞(过表达EGFR的人表皮癌细胞株A431、对Gefitinib耐药的人肺腺癌细胞株H1975)具有显著的增殖抑制作用，特别是对耐药细胞株H1975有较好的抑制效果，在分子水平对突变型的EGFR酪氨酸激酶具有抑制作用，可以为设计新型克服Gefitinib耐药的EGFR抑制剂提供可能。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中，下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
实施例1(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺
原料1:3-[2-[[2-甲氧基-4-(4-乙酰基-1-哌嗪基)苯基]氨基]-5-(氯)-4-嘧啶基]甲酸叔丁酯氨基苯按照文献Cancer Discov.2013,12,1404-1415的方法制备；
步骤：将(R)-1-三苯甲基吖丙啶-2-羧酸(0.38g，1.15mmol)溶于干燥的四氢呋喃中(15mL)，在-10℃下，加入三乙胺(0.322mL，2.31mmol)，搅拌15分钟后，滴加氯甲酸异丁酯(0.125mL，0.98mmol)，继续-10℃反应45分钟。将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酰基哌嗪-1基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶(0.27g，0.575mmol)溶于干燥的四氢呋喃中(10mL)，冷至-10℃加入到上述反应体系中，由-10℃自然升温至室温反应过夜。待反应完毕，加入乙酸乙酯，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤三次，有机层减压旋干，经柱层析纯化得到棕色固体。将该固体溶解在二氯甲烷(2.5mL)和甲醇(4.7mL)中，冷却至0℃-2℃，滴入三氟乙酸(0.896mL，12mmol)的二氯甲烷溶液(2mL)，继续低温反应约2小时。待反应完全，减压旋蒸，然后加入乙酸乙酯，用冷的饱和碳酸氢钠中和三次，合并有机相，减压旋干，硅胶柱层析纯化(流动相为CH2Cl2:MeOH＝20:1)，回收、干燥即得固体产物，两步反应产率为41.6％。m.p.:206-208℃；1H-NMR(500MHz,DMSO)δ10.54(s,1H),8.84(s,1H),8.00(s,1H),7.93(s,1H),7.70(s,1H),7.69(s,1H),7.39(d,J＝7.7Hz,1H),7.31(d,J＝7.5Hz,1H),7.24(t,J＝8.0Hz,1H),6.65(d,J＝2.1Hz,1H),6.34(d,J＝8.1Hz,1H),3.80(s,3H),3.59(m,4H),3.07(m,4H),2.58(s,1H),2.06(s,3H),1.77(m,2H),1.24(s,1H).HRMS(ESI)calcd.forC26H29ClN8O3[M+H]+＝537.2129,found 537.2128。
按照实施例1相同方法，采用不同原料，制备以下化合物。
实施例2(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺；
参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶替换成2-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-三氟甲基嘧啶。产率为38.4％。m.p.:147-150℃；1H-NMR(500MHz,DMSO)δ10.61(s,1H),9.55(s,1H),8.75(s,1H),8.32(s,1H),7.72(s,1H),7.56(d,J＝6.2Hz,1H),7.37(m,3H),7.12(m,1H),6.69(m,2H),3.57(m,4H),2.98(m,4H),2.55(s,1H),1.78(s,1H),1.67(s,1H),1.24(s,2H).HRMS(ESI)calcd.for C26H27F3N8O2[M+H]+＝541.2287,found 541.2286。
实施例3(R)-N-(3-((2-((4-(4-吗啉-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺；
参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶替换成2-((2-甲氧基-4-(4-吗啉-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶。产率为45.4％。m.p.:138-141℃；1H-NMR(500MHz,DMSO)δ10.55(s,1H),8.84(s,1H),8.07(s,1H),7.93(s,1H),7.69(s,1H),7.67(s,1H),7.38(d,J＝7.9Hz,1H),7.31(m,1H),7.25(m,1H),6.62(d,J＝1.8Hz,1H),6.33(d,J＝8.2Hz,1H),3.80(s,3H),3.76–3.73(m,4H),3.09–3.03(m,4H),2.58(s,1H),1.80(s,1H),1.68(s,1H),1.24(s,1H).HRMS(ESI)calcd.for C24H26ClN7O3[M+H]+＝496.1864,found 496.1865。
实施例4(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺；
参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶替换成2-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶。产率为39.4％。m.p.:145-147℃；1H-NMR(500MHz,DMSO)δ10.57(s,1H),9.11(s,1H),8.86(s,1H),8.10(s,1H),7.83(s,1H),7.47(m,3H),7.30(m,2H),6.77(d,J＝8.7Hz,2H),3.61–3.54(m,4H),3.05–2.93(m,4H),2.58(s,1H),2.05(s,3H),1.79(s,1H),1.68(s,1H),1.24(s,1H).HRMS(ESI)calcd.for C25H27ClN8O2[M+H]+＝507.2024,found 507.2025。
实施例5(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺；
参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶替换成2-((2-甲氧基-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-三氟甲基嘧啶。产率为39.2％。m.p.:155-156℃；1H-NMR(500MHz,DMSO)δ10.55(s,1H),8.64(s,1H),8.29(s,1H),8.11(s,1H),7.73(s,1H),7.50(d,J＝8.6Hz,1H),7.46(d,J＝7.7Hz,1H),7.28–7.24(m,1H),7.17(s,1H),6.62(d,J＝1.9Hz,1H),6.26(s,1H),3.78(s,3H),3.58(m,4H),3.07(m,4H),2.55(m,1H),2.06(s,3H),1.80(d,J＝9.7Hz,1H),1.68(s,1H),1.24(s,1H).HRMS(ESI)calcd.for C27H29F3N8O3[M+H]+＝571.2393,found 571.2395。
实施例6(R)-N-(3-((2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺；
参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶替换成2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶。产率为45.4％。m.p.:164-166℃；1H-NMR(500MHz,DMSO)δ10.45(s,1H),9.11(s,1H),8.85(s,1H),8.09(s,1H),7.86(s,1H),7.45(m,3H),7.29(d,J＝4.5Hz,2H),6.75(d,J＝8.6Hz,2H),3.05(m,4H),2.59(m,5H),2.32(s,3H),1.74(m,2H).HRMS(ESI)calcd.for C24H27ClN8O[M+H]+＝479.2025,found 479.2027。
实施例7(R)-N-(3-((2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺；
参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶替换成2-((2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶。产率为46.5％。m.p.:140-142℃；1H-NMR(500MHz,DMSO)δ10.52(s,1H),8.82(s,1H),8.06(s,1H),7.93(s,1H),7.68(s,1H),7.65(d,J＝8.8Hz,2H),7.38(d,J＝8.0Hz,1H),7.31(d,J＝7.7Hz,1H),7.23(t,J＝8.0Hz,1H),6.60(d,J＝2.5Hz,1H),6.32(d,J＝7.9Hz,1H),3.79(s,3H),3.11–3.06(m,4H),2.58(s,2H),2.48(m,4H),2.24(s,3H),1.76(m,2H),1.24(s,1H).HRMS(ESI)calcd.for C25H29ClN8O2[M+H]+＝509.2180,found 509.2179。
实施例8(S)-N-(3-((2-((4-(4-哌啶-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺；
参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶替换成2-((2-甲氧基-4-(4-哌啶-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶，只是将(R)-1-三苯甲基吖丙啶-2-羧酸替换成(S)-1-三苯甲基吖丙啶-2-羧酸。产率为48.7％。m.p.:123-126℃；1H-NMR(500MHz,DMSO)δ10.54(s,1H),8.83(s,1H),8.06(s,1H),7.93(s,1H),7.64(m,2H),7.39(d,J＝7.7Hz,1H),7.32(d,J＝7.3Hz,1H),7.27–7.21(m,1H),6.58(d,J＝2.5Hz,1H),6.32(d,J＝7.6Hz,1H),3.79(s,3H),3.10–3.01(m,4H),2.57(s,1H),2.03(d,J＝74.8Hz,1H),1.81(d,J＝9.5Hz,1H),1.68(s,1H),1.67–1.61(m,4H),1.53(m,2H),1.24(s,1H).HRMS(ESI)calcd.forC25H28ClN7O2[M+H]+＝494.2071,found 494.2074。
实施例9(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺；
参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶替换成2-((2-甲氧基-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-嘧啶。产率为31.3％。m.p.:161-163℃；1H-NMR(500MHz,DMSO)δ10.49(s,1H),9.37(s,1H),7.96(s,1H),7.95(s,1H),7.91(d,J＝8.7Hz,1H),7.53(s,1H),7.43(m,1H),7.20(m,2H),6.68(d,J＝2.4Hz,1H),6.47(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),6.19(d,J＝5.8Hz,1H),3.84(s,3H),3.60(dd,J＝10.3,6.1Hz,4H),3.09(m,4H),2.59(s,1H),2.06(s,3H),1.78(m,2H),1.24(s,1H).HRMS(ESI)calcd.for C26H30N8O3[M+H]+＝503.2519,found 503.2521。
实施例10(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺；
参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶替换成2-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-嘧啶。产率为29.5％。m.p.:169-171℃；1H-NMR(500MHz,DMSO)δ10.51(s,1H),9.34(s,1H),8.92(s,1H),7.97(d,J＝5.5Hz,2H),7.80(s,1H),7.59(m,3H),7.23(m,2H),6.87(d,J＝8.4Hz,2H),6.18(d,J＝5.5Hz,1H),3.58(m,4H),3.02(m,4H),2.58(s,1H),2.05(s,3H),1.75(m,2H),1.27(s,1H).HRMS(ESI)calcd.for C25H28N8O2[M+H]+＝473.2413,found 473.2412。
实施例11(S)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺；
参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶替换成2-((2-甲氧基-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-三氟甲基嘧啶，只是将(R)-1-三苯甲基吖丙啶-2-羧酸替换成(S)-1-三苯甲基吖丙啶-2-羧酸。产率为37.8％。m.p.:145-146℃；1H-NMR(500MHz,DMSO)δ10.58(s,1H),8.68(s,1H),8.29(s,1H),8.13(s,1H),7.73(s,1H),7.50(d,J＝8.7Hz,1H),7.47(d,J＝8.1Hz,1H),7.22(m,2H),6.63(d,J＝1.9Hz,1H),6.25(m,1H),3.79(s,3H),3.62–3.55(m,4H),3.07(m,4H),2.56(m,1H),1.80(m,1H),1.69(m,1H),1.25(s,1H).HRMS(ESI)calcd.for C27H29F3N8O3[M+H]+＝571.2393,found 571.2394。
实施例12(S)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺；
参照实施例1的方法，只是将(R)-1-三苯甲基吖丙啶-2-羧酸替换成(S)-1-三苯甲基吖丙啶-2-羧酸。产率为42.8％。m.p.:149-150℃；1H-NMR(500MHz,DMSO)δ10.56(s,1H),8.87(s,1H),8.08(s,1H),7.93(s,1H),7.69(d,J＝8.6Hz,2H),7.40(d,J＝7.5Hz,1H),7.31(m,1H),7.27–7.21(m,1H),6.65(d,J＝2.3Hz,1H),6.34(d,J＝7.4Hz,1H),3.80(s,3H),3.58(dd,J＝10.2,5.7Hz,4H),3.11–2.96(m,4H),2.56(m,1H),1.81(d,J＝8.9Hz,1H),1.68(m,1H),1.25(s,1H).HRMS(ESI)calcd.for C26H29ClN8O3[M+H]+＝537.2129,found537.21230。
实施例13(S)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺；
参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶替换成2-((4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶，只是将(R)-1-三苯甲基吖丙啶-2-羧酸替换成(S)-1-三苯甲基吖丙啶-2-羧酸。产率为39.7％。m.p.:204-206℃；1H-NMR(500MHz,DMSO)δ10.58(s,1H),9.13(s,1H),8.88(s,1H),8.10(s,1H),7.83(s,1H),7.47(m,3H),7.30(m,2H),6.77(d,J＝8.4Hz,2H),3.60–3.54(m,4H),2.97(m,4H),2.58(s,1H),1.79(s,1H),1.68(s,1H),1.24(s,1H).HRMS(ESI)calcd.for C25H27ClN8O2[M+H]+＝507.2024,found 507.2026。
实施例14(S)-N-(3-((2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺；
参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶替换成2-((2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶，只是将(R)-1-三苯甲基吖丙啶-2-羧酸替换成(S)-1-三苯甲基吖丙啶-2-羧酸。产率为44.5％。m.p.:189-191℃；1H-NMR(500MHz,DMSO)δ10.56(s,1H),8.83(s,1H),8.07(s,1H),7.94(s,1H),7.69(s,1H),7.65(d,J＝8.7Hz,1H),7.39(d,J＝8.0Hz,1H),7.31(d,J＝7.7Hz,1H),7.23(t,J＝8.0Hz,1H),6.60(d,J＝2.4Hz,1H),6.32(d,J＝8.1Hz,1H),3.79(s,3H),3.13–3.02(m,4H),2.59(m,1H),2.48(m,4H),2.24(s,3H),1.76(m,2H),1.24(s,1H).HRMS(ESI)calcd.for C25H29ClN8O2[M+H]+＝509.2180,found 509.2185。
实施例15(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)-3-氯苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺；
参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶替换成2-((3-氯-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶。产率为39.4％。m.p.:220-221℃；1H-NMR(500MHz,DMSO)δ10.59(s,1H),9.42(s,1H),8.99(s,1H),8.16(s,1H),7.82(s,1H),7.75(s,1H),7.52(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),7.48(d,J＝7.5Hz,1H),7.32(m,2H),6.92(d,J＝8.7Hz,1H),3.60–3.54(m,4H),2.89–2.76(m,4H),2.56(m,1H),2.04(s,3H),1.80–1.73(m,1H),1.67(m,1H),1.23(s,1H).HRMS(ESI)calcd.for C25H26Cl2N8O2[M+H]+＝541.1634,found541.1633。
实施例16(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)-3-氟苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺；
参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶替换成2-((3-氟-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶。产率为38.5％。m.p.:215-216℃；1H-NMR(500MHz,DMSO)δ10.58(s,1H),9.40(s,1H),8.98(s,1H),8.15(s,1H),7.84(s,1H),7.58(d,J＝14.8Hz,1H),7.48(d,J＝7.3Hz,1H),7.29(m,3H),6.83(t,J＝9.3Hz,1H),3.62–3.52(m,4H),2.87(dt,J＝31.2,4.5Hz,4H),2.56(m,1H),2.04(s,3H),1.77(m,1H),1.67(m,1H),1.23(s,1H).HRMS(ESI)calcd.for C25H26ClFN8O2[M+H]+＝525.1930,found 525.1933。
实施例17(S)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)-3-甲基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺；
参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶替换成2-((3-甲基-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶，只是将(R)-1-三苯甲基吖丙啶-2-羧酸替换成(S)-1-三苯甲基吖丙啶-2-羧酸。产率为43.6％。m.p.:189-190℃；1H-NMR(500MHz,Acetic)δ10.55(s,1H),9.15(s,1H),8.88(s,1H),8.11(s,1H),7.80(s,1H),7.48(s,1H),7.38(m,2H),7.30(m,2H),6.79(d,J＝8.4Hz,1H),3.56–3.51(m,5H),2.76–2.65(m,6H),2.54(m,1H),2.11(s,3H),2.04(s,3H),1.78(d,J＝9.2Hz,1H),1.66(m,1H),1.23(s,1H).HRMS(ESI)calcd.for C26H29ClN8O2[M+H]+＝521.2180,found 521.2184。
实施例18(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)-3-甲基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺；
参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶替换成2-((3-甲基-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶。产率为46.8％。m.p.:211-212℃；1H-NMR(500MHz,DMSO)δ10.56(s,1H),9.16(s,1H),8.89(s,1H),8.11(s,1H),7.81(s,1H),7.49(s,1H),7.39(m,2H),7.31(m,2H),6.80(d,J＝8.3Hz,1H),3.55(m,4H),2.71(m,4H),2.56(m,1H),2.12(s,3H),2.04(s,3H),1.78(m,1H),1.67(m,1H),1.24(s,1H).HRMS(ESI)calcd.forC26H29ClN8O2[M+H]+＝521.2180,found 521.2185。
实施例19(R)-N-(3-((2-((4-(4-哌啶-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺
参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶替换成2-((2-甲氧基-4-(4-哌啶-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶。产率为43.7％。1H-NMR(500MHz,DMSO)δ10.54(s,1H),8.83(s,1H),8.06(s,1H),7.93(s,1H),7.65(m,2H),7.39(d,J＝7.7Hz,1H),7.32(d,J＝7.0Hz,1H),7.24(t,J＝8.0Hz,1H),6.58(d,J＝2.5Hz,1H),6.32(d,J＝7.8Hz,1H),3.79(s,3H),3.09–3.02(m,4H),2.57(m,1H),1.81(d,J＝9.7Hz,1H),1.68(m,1H),1.67–1.60(m,4H),1.52(dt,J＝11.1,5.7Hz,2H),1.23(s,1H).HRMS(ESI)calcd.for C25H28ClN7O2[M+H]+＝494.2071,found 494.2075。
实施例20(S)-N-(3-((2-((4-(4-吗啉-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺；
参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶替换成2-((2-甲氧基-4-(4-吗啉-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶，只是将(R)-1-三苯甲基吖丙啶-2-羧酸替换成(S)-1-三苯甲基吖丙啶-2-羧酸。产率为43.7％。1H-NMR(500MHz,DMSO)δ10.53(s,1H),8.83(s,1H),8.07(s,1H),7.94(s,1H),7.69(m,2H),7.38(d,J＝7.9Hz,1H),7.32(d,J＝7.8Hz,1H),7.24(t,J＝7.9Hz,1H),6.62(d,J＝2.5Hz,1H),6.33(d,J＝7.8Hz,1H),3.80(s,3H),3.77–3.73(m,4H),3.08–3.04(m,4H),2.58(m,1H),1.80(m,1H),1.69(m,1H),1.24(s,1H).HRMS(ESI)calcd.for C24H26ClN7O3[M+H]+＝496.1864,found 496.1868。
实施例21(S)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)-3-氟苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺；
参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶替换成2-((3-氟-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶，只是将(R)-1-三苯甲基吖丙啶-2-羧酸替换成(S)-1-三苯甲基吖丙啶-2-羧酸。产率为37.4％。1H-NMR(500MHz,DMSO)δ10.57(s,1H),9.38(s,1H),8.92(m,1H),8.14(s,1H),7.89–7.78(m,1H),7.59(m,2H),7.46(m,2H),7.34–7.20(m,3H),6.82(t,J＝9.3Hz,1H),3.56(m,4H),2.92–2.81(m,4H),2.56(m,1H),2.06(s,3H),1.77(m,1H),1.66(m,1H),1.23(s,1H).HRMS(ESI)calcd.for C25H26ClFN8O2[M+H]+＝525.1930,found 525.1934。
实施例22(S)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)-3-氯苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺；
参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶替换成2-((3-氯-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶，只是将(R)-1-三苯甲基吖丙啶-2-羧酸替换成(S)-1-三苯甲基吖丙啶-2-羧酸。产率为36.2％。1H-NMR(500MHz,DMSO)δ10.56(s,1H),9.38(s,1H),8.96(s,1H),8.15(s,1H),7.82(s,1H),7.74(s,1H),7.51(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),7.47(d,J＝7.7Hz,1H),7.35–7.23(m,2H),6.92(d,J＝8.8Hz,1H),3.59–3.52(m,4H),2.85(m,4H),2.54(m,1H),2.04(s,3H),1.77(d,J＝10.0Hz,1H),1.66(m,1H),1.27(s,1H).HRMS(ESI)calcd.for C25H26Cl2N8O2[M+H]+＝541.1634,found 541.1636。
实施例23(R)-N-(3-((5-氯-2-((4-(二甲氨基)-2-甲氧基苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺；
参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶替换成2-((2-甲氧基-4-二甲氨基-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶。产率为31.2％。1H-NMR(500MHz,DMSO)δ10.51(s,1H),8.76(s,1H),8.04(s,1H),7.94(s,1H),7.65(s,1H),7.55(d,J＝8.7Hz,1H),7.36(d,J＝7.3Hz,2H),7.22(t,J＝8.0Hz,1H),6.38(d,J＝2.5Hz,1H),6.16(d,J＝7.7Hz,1H),3.79(s,3H),2.87(s,6H),2.57(m,1H),1.81(d,J＝9.8Hz,1H),1.68(m,1H),1.24(s,1H).HRMS(ESI)calcd.for C22H24ClN7O2[M+H]+＝454.1758,found 454.1756。
实施例24(S)-N-(3-((5-氯-2-((4-(二甲氨基)-2-甲氧基苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺；
参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶替换成2-((2-甲氧基-4-二甲氨基-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶，只是将(R)-1-三苯甲基吖丙啶-2-羧酸替换成(S)-1-三苯甲基吖丙啶-2-羧酸。产率为29.3％。1H-NMR(500MHz,DMSO)δ10.51(s,1H),8.76(s,1H),8.04(s,1H),7.94(s,1H),7.65(s,1H),7.55(d,J＝8.7Hz,1H),7.36(d,J＝7.3Hz,2H),7.22(t,J＝8.0Hz,1H),6.38(d,J＝2.5Hz,1H),6.16(d,J＝7.7Hz,1H),3.79(s,3H),2.87(s,6H),2.57(m,1H),1.81(d,J＝9.8Hz,1H),1.68(m,1H),1.24(s,1H).HRMS(ESI)calcd.forC22H24ClN7O2[M+H]+＝454.1758,found 454.1757。
实施例25(S)-N-(3-((2-((4-(4-吗啉-1-基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺；
参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶替换成2-((4-(4-吗啉-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶，只是将(R)-1-三苯甲基吖丙啶-2-羧酸替换成(S)-1-三苯甲基吖丙啶-2-羧酸。产率为40.7％。1H-NMR(500MHz,DMSO)δ10.57(s,1H),9.09(s,1H),8.86(s,1H),8.09(s,1H),7.83(s,1H),7.45(d,J＝8.6Hz,3H),7.30(d,J＝3.6Hz,2H),6.74(d,J＝8.7Hz,2H),3.74–3.69(m,4H),3.02–2.94(m,4H),2.56(m,1H),1.79(d,J＝9.7Hz,1H),1.67(m,1H),1.22(s,1H).HRMS(ESI)calcd.for C23H24ClN7O2[M+H]+＝466.1758,found466.1756。
实施例26(S)-N-(3-((2-((4-(4-哌啶-1-基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺；
参照实施例1的方法，只是将2-((2-甲氧基-4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶替换成2-((4-(4-哌啶-1-基)-苯基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶，只是将(R)-1-三苯甲基吖丙啶-2-羧酸替换成(S)-1-三苯甲基吖丙啶-2-羧酸。产率为47.7％。1H-NMR(500MHz,DMSO)δ10.56(s,1H),9.04(s,1H),8.84(s,1H),8.08(s,1H),7.83(s,1H),7.45(d,J＝3.2Hz,1H),7.42(d,J＝8.9Hz,2H),7.29(m,1H),6.72(d,J＝8.7Hz,2H),3.00–2.95(m,4H),2.56(s,1H),1.79(d,J＝9.4Hz,1H),1.67(s,1H),1.64–1.58(m,4H),1.49(dt,J＝11.2,5.7Hz,2H),1.22(s,1H).HRMS(ESI)calcd.for C24H26ClN7O2[M+H]+＝464.1966,found 464.1968。
实施例27：本发明部分化合物对EGFR酪氨酸激酶活性的抑制作用
受试化合物对激酶的抑制活性用半抑制浓度IC50值来表示。该类试验采用均相时间分辨荧光(HTRF)技术进行测定，方法如下：将一系列梯度浓度的化合物，在室温条件下与特定浓度的酶溶液共同孵育5分钟，之后加入适量的酶反应底物、ATP，启动酶反应过程，30分钟后，向酶反应体系中加入适量的反应终止液和检测液，孵育1小时后，在Moleculardevice公司的Flexstation III多功能酶标仪上，测定特定化合物浓度下的酶活力，并计算不同浓度的化合物对酶活力的抑制活性，之后根据四参数方程，对不同浓度化合物下酶活力的抑制活性进行拟合，计算出IC50值。本实施例所采用的激酶EGFR购自Sigma Aldrich，检测试剂盒HTRF KinEASE-TK购自Cisbio Bioassays公司，ATP购自Sigma Aldrich公司。本发明受试化合物的IC50数据见表1。
表1
实施例28：化合物对A431、H1975细胞增殖抑制活性测定
本例用于测定本发明化合物对于EGFR野生型高表达细胞株A431及T790M点突变细胞株H1975的增殖抑制活性，化合物对细胞增殖的抑制活性用半数抑制浓度IC50来表示。试验方案如下：EGFR野生型高表达细胞株A431及T790M点突变细胞株H1975细胞均购于ATCC，以适宜的细胞浓度(A431：20000个细胞/ml培养基；H1975：15000个细胞/ml培养基)将细胞接种于白色不透明的384孔培养板上；之后将细胞放置于37℃，5％CO2的环境中进行培养，24小时后，向培养的细胞培养基中加入一系列浓度梯度的药物，一般选择10个浓度，之后将细胞放回原培养环境中继续培养48小时，之后按照CellTiter-Glo Luminescent CellViability Assay的方法，测定受试化合物对A431及H1975细胞增殖的影响，并计算不同浓度的化合物对细胞增殖的抑制活性，CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay检测试剂购自Promega。之后对不同浓度的化合物下A431及H1975细胞增殖抑制活性进行四参数拟合，本发明受试化合物的IC50数据如下表2。
表2
本发明化合物结构上具有新颖性，是首次提出的新型非可逆共价结合片段，同时体外生物活性评价结果显示，本发明的化合物对过表达EGFR的人表皮癌细胞株A431、对Gefitinib耐药的人肺腺癌细胞株H1975及突变型EGFR激酶具有明显的抑制增殖活性。
Claims (4)
1.一种含吖丙啶环侧链的芳胺嘧啶衍生物或其对映异构体，其特征在于，结构通式I如下所示：
其中：
R1为三氟甲基、氯、氢，
R2为氢、甲基、甲氧基、氟、氯，
R3为乙酰哌嗪基、甲基哌嗪基、吗啉基、哌啶基、二甲胺基。
2.根据权利要求1所述的一种含吖丙啶环侧链的芳胺嘧啶衍生物或其对应异构体，其特征在于：所述的式I化合物为如下任一化合物：
(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物1)；
(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物2)；
(R)-N-(3-((2-((4-(4-吗啉-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物3)；
(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物4)；
(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物5)；
(R)-N-(3-((2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物6)；
(R)-N-(3-((2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物7)；
(S)-N-(3-((2-((4-(4-哌啶-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物8)；
(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物9)；
(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物10)；
(S)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物11)；
(S)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物12)；
(S)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物13)；
(S)-N-(3-((2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物14)；
(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)-3-氯苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物15)；
(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)-3-氟苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物16)；
(S)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)-3-甲基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物17)；
(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)-3-甲基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物18)；
(R)-N-(3-((2-((4-(4-哌啶-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物19)；
(S)-N-(3-((2-((4-(4-吗啉-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物20)；
(S)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)-3-氟苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物21)；
(S)-N-(3-((2-((4-(4-乙酰哌嗪-1-基)-3-氯苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物22)；
(R)-N-(3-((5-氯-2-((4-(二甲氨基)-2-甲氧基苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物23)；
(S)-N-(3-((5-氯-2-((4-(二甲氨基)-2-甲氧基苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物24)；
(S)-N-(3-((2-((4-(4-吗啉-1-基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物25)；
(S)-N-(3-((2-((4-(4-哌啶-1-基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)吖丙啶-2-甲酰胺(化合物26) 。
3.根据权利要求1或2所述的一种含吖丙啶环侧链的芳胺嘧啶衍生物或其对应异构体的制备方法，其特征在于，通过以下步骤实现：
以5-位取代尿嘧啶1为起始原料，在N，N-二异丙基乙胺为碱，三氯氧磷作溶剂条件下110℃回流生成5-位取代2,4-二氯嘧啶2，中间体2与单侧Boc保护的间苯二胺在正丁醇中反应生成4,5-位取代的2-氯嘧啶3，中间体3与取代的苯胺在1N HCl催化下生成2,4,5-位取代的嘧啶4，中间体4在三氟乙酸条件下脱保护得到中间体5，中间体5再与三苯亚甲基保护的吖丙啶-2-酸缩合生成化合物6，化合物6最后脱保护基得到目标产物式I化合物；反应式如下：
其中取代基的定义同权利要求1。
4.根据权利要求1或2所述的一种含吖丙啶环侧链的芳胺嘧啶衍生物或其对应异构体在制备抗肿瘤细胞和靶向EGFR激酶药物中的应用，其特征在于，所述肿瘤细胞是指过表达EGFR的人表皮癌细胞株A431、对Gefitinib耐药的人肺腺癌细胞株H1975，所述EGFR激酶是指野生型EGFR激酶、L858R/T790M双突变型EGFR激酶。
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-
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