CN106170290A - 取代的二氨基嘧啶基化合物、其组合物及其治疗方法 - Google Patents

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Abstract

本文提供具有下述结构的二氨基嘧啶基化合物：其中X、L、R1和R2为如本文定义的，包括有效量的二氨基嘧啶基化合物的组合物，以及用于治疗或预防PKC‑θ‑介导的病症或通过抑制激酶例如PKC‑θ可治疗或可预防的病症的方法。

Description

取代的二氨基嘧啶基化合物、其组合物及其治疗方法
本申请要求2013年12月20日提交的美国临时申请No.61/919,216的权益，将其全部内容并入本文作为参考。
发明领域
本文提供一些烷基杂芳基-二氨基嘧啶基化合物、包含有效量的这样的化合物的组合物、及用于治疗或预防PKC-θ介导的病症的方法，所述方法包括向需要其的对象施用有效量的这样的烷基杂芳基-二氨基嘧啶基化合物。
背景技术
已知异常蛋白磷酸化和疾病的病因或结果之间的联系超过20年。因此，蛋白激酶已成为一组非常重要的药物靶标。[参见Cohen，Nature，1：309-315(2002)，Gaestel etal.Curr.Med.Chem.14：2214-223(2007)；Grimminger et al.Nat.Rev.Drug Disc.9(12)：956-970(2010)]。多种蛋白激酶抑制剂已在临床上用于治疗多种疾病，比如癌症和慢性炎性疾病，包括类风湿性关节炎和银屑病。[参见Cohen，Eur.J.Biochem.，268：5001-5010(2001)；Protein Kinase Inhibitors for the Treatment of Disease：The Promise andthe Problems，Handbook of Experimental Pharmacology，Springer BerlinHeidelberg，167(2005)]。
对蛋白激酶通路的复杂性和各种蛋白激酶和激酶通路之中和之间的关系和相互作用的复杂性的阐明强调了开发能够充当对多种激酶或多种激酶通路具有有益活性的蛋白激酶调节剂(modulator)、调控剂(regulator)或抑制剂的药物。因此，仍需要新的激酶调节剂。
蛋白激酶C(PKC)家族是一组涵盖十二个相关同工酶的丝氨酸/苏氨酸激酶。PKC在大量组织和细胞类型中表达。PKC同工酶可以分为三组。I组(典型的PKC)包括Ca2+和DAG(二酰甘油)依赖性同工酶：PKC-α、PKC-βI、PKC-βII和PKC-γ。II组(新的PKC)包括Ca2+非依赖性同工酶：PKC-δ(或PKC-delta)、PKC-ε、PKC-η(或PKC-eta)和PKC-θ(或PKC-θ)。III组(非典型性的PKC)包括Ca2+和DAG非依赖性同工酶：PKC-ι、PKC-ζ和PKC-μ(蛋白激酶D)。蛋白激酶C的PKC-θ同工型在T淋巴细胞中选择性表达，并且在成熟T细胞的T细胞抗原受体(TCR)-触发的活化和随后释放细胞因子比如IL-2和T细胞增殖中起重要作用(Isakov and Altman，Annu.Rev.Immunol.，2002，20，761-94)。已经确认T细胞在调节免疫反应中起重要作用(Powrieand Coffman，Immunology Today，1993，14，270)，并且T细胞的活化通常是多种免疫学病症的起始事件。当经由TCR活化时，T细胞产生细胞因子(包括IL-2)，导致细胞增殖、分化和效应子功能。用IL-2抑制剂的临床研究已经表明在体内干扰T细胞活化和增殖能有效地抑制免疫反应(Waldmann，Immunology Today，1993，14，264)。因此，抑制T淋巴细胞活化和随后细胞因子产生的试剂治疗性用于选择性地抑制需要这种免疫抑制的患者中的免疫反应，因此用于治疗免疫病症比如自身免疫疾病和炎性疾病。PKC-θ活化也与白血病有关，因此PKC-θ的抑制剂可以用于治疗白血病(Villalba and Altman，Current Cancer Targets，2002，2，125)。
然而，PKC-Δ与PKC-θ密切相关，其显示出不同的组织表达模式且具有独特的细胞功能。虽然PKC-θ在T-淋巴细胞、NK细胞中高度表达且在骨骼肌中以较少范围表达时，但是PKC-δ在骨髓细胞和B-淋巴细胞中高度表达(ExPasy database；PRKCT and PRKCD)。PKC-δ对于调节B-细胞耐受性很重要，因此缺乏PKC-δ的小鼠显示出递增量的自我反应性B-细胞，高(elevated)IL-6表达核抗原的自身抗体，且显示出狼疮样病理(Mecklenbrauker etal.，Nature，2002，416，860-865；Miyamoto et al.，Nature，2002，416，865-869)。此外，具有幼年发作型狼疮的同胞的遗传检测鉴别了PKC-δ(PRCKD)基因的突变(Belot et al.，Arthritis&Rheumatism，2013，65，2161-2165)。为此，抑制PKC-δ可能在自身免疫疾病的治疗中是不利的，避免长期抑制该酶是合理的。之前，在急性治疗局部缺血-再灌注损伤的背景下，已临床评价了为了治疗而选择性抑制PKC-δ(delcasertib；Kai Pharmaceuticals)。
仍需要开发用于与PKC-θ的活化有关的大部分疾病和病症的有效治疗剂(Chaudhary and Kasaian，Curr Opin Investig Dmgs 20067(5)：432-437；Zhang，E.Y，Kong，K.，and Altman，A.，Adv Pharmacol 2013，Vol 66，267-312；Chand，S.，et.Al.CurrPharmaceut Design 212，Vol 18(30)：4725-4746)。因此，提供用作PKC-θ的选择性抑制剂的安全有效的化合物，且因此治疗与PKC-θ的活化有关的病症和疾病将是有益的。特别地，仍需要有效的治疗剂，其是PKC-θ的选择性抑制剂，而不会影响PKC家族的其它成员，比如PKC-δ和/或PKC-eta。
在本申请的第2节中任何参考文献的引用或确定都不应解释为承认该参考文献为本申请的现有技术。
发明简述
本文提供具有下式(I)的化合物：
或其可药用盐、互变异构体、同位素体或立体异构体，其中：L、X、R1和R2如本文定义的。
在一个方面，本文提供如本公开内容所述的二氨基嘧啶基化合物，比如例如式(I)的化合物、或来自表1或表2的化合物、或其可药用盐、互变异构体、同位素体或立体异构体。
在一个方面，本文提供药物组合物，包含有效量的如本文所述的二氨基嘧啶基化合物及可药用载体、赋形剂或溶媒。在某些实施方案中，药物组合物适于口服、肠胃外、粘膜、透皮或局部施用。
在一个方面，本文提供用于治疗或预防PKC-θ介导的病症的方法或化合物，比如移植物抗宿主疾病、器官移植排斥反应、银屑病、迪谢内肌营养不良、类风湿性关节炎、糖尿病、胰岛素抗性、重症肌无力、多发性硬化症、结肠炎、银屑病关节炎、强直性脊柱炎、特应性皮炎、干燥综合症(Sjogren syndrome)、哮喘或狼疮，其中所述方法包括向需要其的对象施用有效量的如本文所述的二氨基嘧啶基化合物。
在一个方面，本文提供用于在表达激酶的细胞中抑制所述激酶(例如PKC-θ)的方法，包括用有效量的如本文所述的二氨基嘧啶基化合物接触所述细胞。在某些实施方案中，二氨基嘧啶基化合物相对于PKC-δ选择性地抑制PKC-θ。在其它这样的实施方案中，所述二氨基嘧啶基化合物相对于PKC-δ和/或PKC-eta选择性地抑制PKC-θ。
在另一个方面，本文提供用于制备如本文所述的二氨基嘧啶基化合物的方法。
通过参照详细说明和实例可以更充分地理解本发明的实施方案，该详细说明和实例旨在举例说明非限制性实施方案。
详细说明
定义
“烷基”基团是具有1至10个碳原子，通常地1至8个碳，或在一些实施方案中中，1至6个、1至4个或2至6个碳原子的饱和、部分饱和或不饱和直链或支链非环状烃。代表性的烷基包括-甲基、-乙基、-正-丙基、-正丁基、-正戊基和-正己基；而饱和的支链烷基包括-异丙基、-仲丁基、-异丁基、-叔丁基、异戊基、-新戊基、-叔戊基、-2-甲基戊基、-3-甲基戊基、-4-甲基戊基、2，3-二甲基丁基等。不饱和的烷基的实例包括，但不限于乙烯基、烯丙基、-CH＝CH(CH3)、-CH＝C(CH3)2、-C(CH3)＝CH2、-C(CH3)＝CH(CH3)、-C(CH2CH3)＝CH2、-C≡CH、-C≡C(CH3)、-C≡C(CH2CH3)、-CH2C≡CH、-CH2C≡C(CH3)和-CH2C≡C(CH2CH3)等。烷基可以是取代的或未取代的。当本文所述烷基被认为是“取代的”时，它们可以用任何取代基取代：如本文所述示例性的化合物和实施方案中存在的那些取代基，以及卤素(氯、碘、溴或氟)；烷基；羟基；烷氧基；烷氧基烷基；氨基；烷基氨基；羧基；硝基；氰基；硫醇；硫醚；亚胺；二酰亚胺；脒；胍；烯胺；氨基羰基；酰氨基；膦酸酯；膦；硫代羰基；亚磺酰基；砜；磺酰胺；酮；醛；酯；脲；尿烷；肟；羟胺；烷氧基胺；芳烷氧基胺；N-氧化物；肼；酰肼；腙；叠氮化物；异氰酸酯；异硫氰酸酯；氰酸酯；硫氰酸酯；B(OH)2或O(烷基)氨基羰基。
“环烷基”基团为具有单个环状环或多个稠环或桥环的3至10个碳原子的饱和的或部分饱和的环状烃基，其可以任选地被1至3个烷基取代。在某些实施方案中，环烃基具有3至8个环成员，而在其他实施方式中，环碳原子的数目范围为3至5、3至6或3至7。举例来说，这样的环烷基包括单环结构，比如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、1-甲基环丙基、2-甲基环戊基、2-甲基环辛基等；或多环或桥环结构，比如1-二环[1.1.1]戊基、二环[2.1.1]己基、二环[2.2.1]庚基、二环[2.2.2]辛基、金刚烷基等。不饱和的环烷基的实例包括环己烯基、环戊烯基、环己二烯基、丁二烯基、戊二烯基、己二烯基等。环烷基可以是取代的或未取代的。举例来说，这样的取代的环烷基包括环己酮等。
“芳基”是具有单个环(例如，苯基)或多个稠环(例如，萘基或蒽基)的6至14个碳原子的芳族碳环基。在某些实施方案中，芳基基团在基团的环部分包含6-14个碳，在其他实施方案中包含6至12个或甚至6至10个碳原子。特定的芳基包括苯基、联苯基、萘基等。芳基可以是取代的或未取代的。短语“芳基基团”也包括含有稠环的基团，比如稠合芳族-脂族环***(例如，茚满基、四氢萘基等)。
“杂芳基”是在杂芳族环***中具有1至4个杂原子作为环原子的芳环***，其中其余原子为碳原子。在某些实施方案中，杂芳基在基团的环部分中含有3至6个环原子，在其他实施方案中含有6至9个或甚至6至10个原子。合适的杂原子包括氧、硫和氮。在某些实施方案中，杂芳基环***为单环或双环。非限制性实例包括但不限于下述基团：比如吡咯基、吡唑基、咪唑基、***基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、苯并异噁唑基(例如，苯并[d]异噁唑基)、噻唑基、吡咯基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、噻吩基、苯并噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、吲哚基(例如，吲哚基-2-酮基或异二氢吲哚-1-酮基)、氮杂吲哚基(吡咯并吡啶基或1H-吡咯并[2，3-b]吡啶基)、吲唑基、苯并咪唑基(例如，1H-苯并[d]咪唑基)、咪唑并吡啶基(例如，氮杂苯并咪唑基或1H-咪唑并[4，5-b]吡啶基)、吡唑并吡啶基、***并吡啶基、苯并***基(例如，1H-苯并[d][1，2，3]***基)、苯并噁唑基(例如，苯并[d]噁唑基)、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、异噁唑并吡啶基、噻萘基、嘌呤基、黄嘌呤基、腺嘌呤基、鸟嘌呤基、喹啉基、异喹啉基(例如，3，4-二氢异喹啉-1(2H)-酮基)、四氢喹啉基、喹喔啉基和喹唑啉基。
“杂环基”是其中一至四个环原子被选自O、S和N的杂原子独立地替代的芳族(也称为杂芳基)或非芳族环烷基。在某些实施方案中，杂环基基团包括3至10个环成员，而其他这样的基团具有3至5个、3至6个或3至8个环成员。杂环基也可以在任何环原子处(即，在杂环环的任何碳原子或杂原子处)结合其他基团。杂环烷基基团可以是取代的或未取代的。杂环基基团包括不饱和、部分饱和及饱和环***，比如例如，咪唑基、咪唑啉基和咪唑烷基(例如，咪唑啉-4-酮或咪唑啉-2，4-二酮基)基团。短语杂环基包括稠环类，包括包含稠合芳族和非芳族基团的那些，比如例如1-和2-氨基四氢化萘、苯并***基(例如，1H-苯并[d][1，2，3]***基)、苯并咪唑基(例如，1H-苯并[d]咪唑基)、2，3-二氢苯并[1，4]二氧杂环己烯基和苯并[1，3]间二氧杂环戊烯基。该短语也包括含有杂原子的桥接多环环***，比如但不限于奎宁环基。杂环基基团的代表性实例包括但不限于，氮丙啶基、氮杂环丁烷基、氮杂环庚烷基、氧杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基(例如咪唑啉-4-酮基或咪唑啉-2，4-二酮基)、吡唑烷基、噻唑烷基、四氢噻吩基、四氢呋喃基、间二氧杂环戊烯基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡咯啉基、咪唑基、咪唑啉基、吡唑基、吡唑啉基、***基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、苯并异噁唑基(例如，苯并[d]异噁唑基)、噻唑基、噻唑啉基、异噻唑基、噻二唑基、噁二唑基、哌啶基、哌嗪基(例如，哌嗪-2-酮基)、吗啉基、硫代吗啉基、四氢吡喃基(例如，四氢-2H-吡喃基)、四氢噻喃基、氧硫杂环已烷(oxathianyl)、二噁烷基(dioxyl)、二噻烷基、吡喃基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、三嗪基、二氢吡啶基、二氢二噻英基(dihydrodithiinyl)、二氢二亚硫酰基、1，4-二氧杂螺[4.5]癸烷基、高哌嗪基、奎宁基、吲哚基(例如，吲哚-2-酮基或异二氢吲哚-1-酮基)、二氢吲哚基、异吲哚基、异二氢吲哚基、氮杂吲哚基(吡咯并吡啶基或1H-吡咯并[2，3-b]吡啶基)、吲唑基、吲嗪基、苯并***基(例如，1H-苯并[d][1，2，3]***基)、苯并咪唑基(例如，1H-苯并[d]咪唑基或1H-苯并[d]咪唑-2(3H)-酮基)、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁二唑基、苯并噁嗪基、苯并二噻英基(benzodithiinyl)、苯并噁噻英基、苯并噻嗪基、苯并噁唑基(即，苯并[d]噁唑基))、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并[1，3]间二氧杂环戊烯基、吡唑并吡啶基(例如，1H-吡唑并[3，4-b]吡啶基、1H-吡唑并[4，3-b]吡啶基)、咪唑并吡啶基(例如，氮杂苯并咪唑基或1H-咪唑并[4，5-b]吡啶基)、***并吡啶基、异噁唑并吡啶基、嘌呤基、黄嘌呤基、腺嘌呤基、鸟嘌呤基、喹啉基、异喹啉基(例如，3，4-二氢异喹啉-1(2H)-酮基)、喹嗪基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、酞嗪基、萘啶基、蝶啶基、噻萘基、二氢苯并噻嗪基、二氢苯并呋喃基、二氢吲哚基、二氢苯并二噁烯基、四氢吲哚基、四氢吲唑基、四氢苯并咪唑基、四氢苯并***基、四氢吡咯并吡啶基、四氢吡唑并吡啶基、四氢咪唑并吡啶基、四氢***并吡啶基、四氢嘧啶-2(1H)-酮和四氢喹啉基。代表性的非芳族杂环基基团不包括那些包括稠合芳香基的稠环种类。非芳族杂环基基团的实例包括氮丙啶基、氮杂环丁烷基、氮杂环庚烷基、吡咯烷基、咪唑烷基(例如，咪唑烷基-4-酮基或咪唑啉-2，4-二酮基)、吡唑烷基、噻唑烷基、四氢噻吩基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基(例如，哌嗪-2-酮基)、吗啉基、硫代吗啉基、四氢吡喃基(例如，四氢-2H-吡喃基)、四氢噻喃基、氧杂噻烷基、二噻烷基、1，4-二氧杂螺[4.5]癸烷基、高哌嗪基、奎宁环基或四氢嘧啶-2(1H)-酮。代表性的取代的杂环基基团可以是单取代的或被取代一次以上，比如例如但不限于，吡啶基或吗啉基，其为2-、3-、4-、5-或6-取代，或被各种取代基比如以下列出的那些二取代。
“环烷基烷基”基团是式：-烷基-环烷基的基团，其中烷基和环烷基为如上定义的。取代的环烷基烷基可以在基团的烷基、环烷基或烷基和环烷基部分两者处被取代。代表性的环烷基烷基基团包括，但不限于甲基环丙基、甲基环丁基、甲基环戊基、甲基环己基、乙基环丙基、乙基环丁基、乙基环戊基、乙基环己基、丙基环戊基、丙基环己基等。
“芳烷基”基团是式：-烷基-芳基的基团，其中烷基和芳基为上述定义的。取代的芳烷基可以在基团的烷基、芳基或烷基和芳基部分两者处被取代。代表性的芳烷基包括，但不限于苄基和苯乙基和稠合的(环烷基芳基)烷基，比如4-乙基-茚满基。
“杂环基烷基”基团是式：-烷基-杂环基的基团，其中烷基和杂环基为上述定义的。取代的杂环基烷基可以在基团的烷基、杂环基或烷基和杂环基部分两者处被取代。代表性的杂环基烷基包括，但不限于4-乙基-吗啉基、4-丙基吗啉基、呋喃-2-基甲基、呋喃-3-基甲基、吡啶-3-基甲基、四氢呋喃-2-基乙基和吲哚-2-基丙基。
“卤素”为氟、氯、溴或碘。
“羟烷基”基团是被一个或多个羟基取代的如上所述烷基。
“烷氧基”是-O-(烷基)，其中烷基为上述定义的。
“烷氧基烷基”基团是-(烷基)-O-(烷基)，其中烷基为上述定义的。
“氨基”基团是式：-NH2的基团。
“烷氨基”基团是式：-NH-烷基或-N(烷基)2的基团，其中每个烷基独立地如上定义的。
“羧基”基团是式：-C(O)OH的基团。
“氨基羰基”基团是式：-C(O)N(R#)2、-C(O)NH(R#)或-C(O)NH2的基团，其中每个R#独立地为取代的或未取代的如本文定义的烷基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环基或杂环基。
“酰氨基”基团是式：-NHC(O)(R#)或-N(烷基)C(O)(R#)的基团，其中每个烷基和R#_独立地为如上定义的。
“磺酰氨基”基团是式：-NHSO2(R#)或-N(烷基)SO2(R#)的基团，其中每个烷基和R#_为上述定义的。
“脲”基团是式：-N(烷基)C(O)N(R#)2，、-N(烷基)C(O)NH(R#)，-N(烷基)C(O)NH2，、-NHC(O)N(R#)2、-NHC(O)NH(R#)或-NH(CO)NHR#的基团，其中每个烷基和R#独立地为如上定义的。
当本文所述的除烷基之外的化合物称为“取代的”时，其可以被任何适合的取代基或多个取代基取代。取代基的说明性实例是在本文所公开的示例性化合物和实施方案中可见的那些，以及卤素(氯、碘、溴或氟)；烷基；羟基；烷氧基；烷氧基烷基；氨基；烷氨基；羧基；硝基；氰基；硫醇；硫醚；亚胺；酰亚胺；脒；胍；烯胺；氨基羰基；酰胺基；膦酸基；膦；硫代羰基；亚磺酰基；砜；磺酰胺；酮；醛；酯；脲；尿烷；肟；羟胺；烷氧基胺；芳烷氧基胺；N-氧化物；肼；酰肼；腙；叠氮化物；异氰酸酯；异硫氰酸酯；氰酸酯；硫氰酸酯；氧(＝O)；B(OH)2、O(烷基)氨基羰基；环烷基，其可以是单环或稠合或非稠合多环(例如，环丙基、环丁基、环戊基或环己基)；或杂环基，其可以是单环或稠合或非稠合多环(例如，吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基或噻嗪基)；单环或稠合或非稠合多环基或杂芳基(例如，苯基、萘基、吡咯基、吲哚基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、***基、四唑基、吡唑基、吡啶基、喹啉基、异喹啉基、吖啶基、吡嗪基、哒嗪基、嘧啶基、苯并咪唑基、苯并噻吩基或苯并呋喃基)；芳氧基；芳烷氧基；杂环基氧基；和杂环基烷氧基。
如本文使用的术语“二氨基嘧啶基化合物”指式(I)的化合物，以及本文提供的进一步实施方案。在一个实施方案中，“二氨基嘧啶基化合物”为表1或2中列出的化合物。术语“二氨基嘧啶基化合物”包括本文提供的化合物的可药用盐、互变异构体、同位素体和立体异构体。
此处所用的术语“可药用盐”指由可药用无毒的酸或碱(包括无机酸和碱以及有机酸和碱)制备的盐。式(I)的化合物的合适的可药用碱加成盐包括但不限于由铝、钙、锂、镁、钾、钠和锌制成的金属盐，或由赖氨酸、N，N’-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(N-甲基葡糖胺)和普鲁卡因制成的有机盐。合适的无毒酸包括，但不限于无机酸和有机酸，比如乙酸、海藻酸、邻氨基苯甲酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、甲酸、富马酸、糠酸、半乳糖醛酸、葡糖酸、葡糖醛酸、谷氨酸、乙醇酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘液酸、硝酸、扑酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、丙酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、对氨基苯磺酸、硫酸、酒石酸和对甲苯磺酸。特定的无毒酸包括盐酸、氢溴酸、马来酸、磷酸、硫酸和甲磺酸。因此，特定盐的实例包括盐酸盐和甲磺酸盐。其他的盐是本领域熟知的，参见例如，Remington’s Pharmaceutical Sciences，18th eds.，MackPublishing，Easton PA(1990)or Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第19版.，Mack Publishing，Easton PA(1995)。
如本文所使用且除非另有说明，否则术语“立体异构体”或“立体异构纯”是指二氨基嘧啶基化合物的一种立体异构体，其基本上不含该化合物的其他立体异构体。例如，具有一个手性中心的立体异构纯化合物将基本上不含该化合物的相反对映异构体。具有两个手性中心的立体异构纯化合物将基本上不含该化合物的其他非对映异构体。典型的立体异构体纯的化合物包含大于约80％重量的化合物的一种立体异构体和少于约20％重量的该化合物的其它立体异构体、大于约90％重量的化合物的一种立体异构体和少于约10％％重量的该化合物的其它立体异构体、大于约95％重量的化合物的一种立体异构体和少于约5％重量的该化合物的其它立体异构体、或大于约97％重量的化合物的一种立体异构体和少于约3％重量的该化合物的其它立体异构体。二氨基嘧啶基化合物可以具有手性中心并且可以作为外消旋体、单个对映异构体或非对映异构体及其混合物存在。所有这种异构形式均包括在本文公开的实施方案中，包括其混合物。
这样的二氨基嘧啶基化合物的立体异构纯形式的使用，以及那些形式的混合物的使用涵盖在本文公开的实施方案中。例如，包含等量或不等量的特定二氨基嘧啶基化合物的对映异构体的混合物可用于本文公开的方法和组合物中。这些异构体可以经不对称合成或使用标准技术比如手性柱或手性拆分剂来拆分。参见例如Jacques，J.，et al.，Enantiomers，Racemates and Resolutions(Wiley-Interscience，New York，1981)；Wilen，S.H.，et al.，Tetrahedron 33：2725(1977)；Eliel，E.L.，Stereochemistry ofCarbon Compounds(McGraw-Hill，NY，1962)；and Wilen，S.H.，Tables of ResolvingAgents and Optical Resolutions p.268(E.L Eliel，Ed.，Univ.of Notre Dame Press，Notre Dame，IN，1972)。
也应注意，二氨基嘧啶基化合物可以包括E和Z异构体或其混合物，以及顺式和反式异构体或其混合物。在某些实施方案中，二氨基嘧啶基化合物分离为E或Z异构体。在其他实施方案中，二氨基嘧啶基化合物是E和Z异构体的混合物。
“互变异构体”是指彼此平衡的化合物的异构形式。异构形式的浓度将取决于化合物存在的环境，并且可以根据例如化合物是否为固体或在有机或水性溶液中而不同。例如，在水性溶液中，吡唑可以显示下述异构形式，其称为彼此的互变异构体：
如本领域技术人员容易地理解的，多种官能团和其他结构可以显示互变异构现象，并且式(I)的化合物的所有互变异构体都在本发明的范围内。
也应注意，二氨基嘧啶基化合物可以在一个或多个原子处含有非天然比例的原子同位素。例如，化合物可以使用放射性同位素进行放射性标记，所述放射性同位素比如例如氚(3H)、碘-125(125I)、硫-35(35S)，或碳-14(14C)或可以是同位素富集的，比如使用氘(2H)、碳-13(13C)或氮-15(15N)进行同位素富集。如本文所使用的，“同位素体(isotopologue)”是同位素富集的化合物。术语“同位素富集的”指具有不同于原子的天然同位素组成的同位素组成的原子。“同位素富集的”也可以指含有至少一种不同于原子的天然同位素组成的同位素组成的原子的化合物。术语“同位素组成”指给定的原子存在的每种同位素的量。放射性标记和同位素富集的化合物可用作治疗剂，例如，癌症和炎症治疗剂、研究试剂(例如，结合分析试剂)和诊断试剂(例如，体内成像剂)。如本文所述的二氨基嘧啶基化合物的所有同位素变体，无论是否具有放射性，都旨在涵盖在本文提供的实施方案的范围内。在某些实施方案中，提供了二氨基嘧啶基化合物的同位素体，例如，同位素体为氘、碳-13或氮-15富集的二氨基嘧啶基化合物。
应当理解，独立于每个L、X、R1或R2、立体异构或同位素组成的取代基的选择，本文所述的每个二氨基嘧啶基化合物可以以任何本文讨论的可药用盐形式提供。同样地，应当理解，同位素组成可以与本文所述每个二氨基嘧啶基化合物的立体异构组成独立地变化。进一步，同位素组成，虽然限于相应的二氨基嘧啶基化合物或其盐中存在的那些元素，可以以不同方式独立于每个L、X、R1或R2的取代基选择或相应的二氨基嘧啶基化合物的可药用盐选择而变化。
应当注意，如果描述的结构和结构给出的名称之间存在矛盾，则以描述的结构为准。
如本文使用的“抑制”指在二氨基嘧啶基化合物的存在下指定活性(例如，激酶或磷酸化活性)的特定反应相对地降低。激酶活性(例如PKC-θ活性)的抑制可以通过本文所属生化分析来确定。
如本文使用的“选择性的”或“选择性地”指对于特定靶标(例如激酶比如PKC-θ)具有优于其它靶标(例如激酶比如PKC-δ和/或PKC-eta)的活性优先性，其可以基于证实激酶活性的分析，如本文所公开的生化分析来定量。通过比较其在相应靶标的IC50(或者，如果使用生物体测定，EC50或ED50)确定二氨基嘧啶基化合物的选择性。例如，具有对于PKC-δ而言50nM的IC50且对于PKC-θ而言10nM的IC50的二氨基嘧啶基化合物具有对于PKC-δ相对于PKC-θ的选择比为5：1，或其对于PKC-θ的选择性为相对于PKC-δ的5倍。在某些实施方案中，二氨基嘧啶基化合物对于PKC-θ的选择性为相对于PKC-δ的约5倍、约10倍、约15倍、约20倍、约50倍、约100倍、约150倍、约200倍、约250倍、约300倍或约500倍。在其它实施方案中，二氨基嘧啶基化合物对于PKC-θ的选择性为相对于PKC-δ和PKC-eta的约5倍、约10倍、约15倍、约20倍、约50倍、约100倍、约150倍、约200倍、约250倍、约300倍或约500倍。
已经报道了PKC-θ在病症中的作用。例如，PKC-θ介导的病症包括银屑病(Skvaraet al.，J Clin Invest.2008；118(9)：3151-3159)、迪谢内肌营养不良(Duchennemuscular dystrophy)(Madaro et al，PLoS One 2012；7(2)：e31515)、类风湿性关节炎(Healy et al.，J Immunol.2006；177(3)：1886-1893；Zanin-Zhorov et al.，Science2010；328(5976)：372-726)、2型糖尿病和胰岛素抗性(Kim et al.，J Clin Invest.2004；114(6)：823-7)、重症肌无力(Miles and Wagner，J Neurosci Res.2003；71(2)：188-195)、多发性硬化症(Salek-Ardakani et al.，J Immunol.2005；175(11)：7635-41)和结肠炎((Zanin-Zhorov et al.，Science 2010；328(5976)：372-726)。
如本文使用的“治疗”指完全或部分减缓障碍、疾病或病症、或与障碍、疾病或病症相关的一种或多种症状，或者减慢或停止那些症状的进一步进展或恶化，或者减缓或根除所述障碍、疾病或病症本身的病因。在一个实施方案中，所述病症为PKC-θ介导的病症，比如例如移植物抗宿主疾病、器官移植排斥反应、银屑病、迪谢内肌营养不良、类风湿性关节炎、糖尿病、胰岛素抗性、重症肌无力、多发性硬化症、结肠炎、银屑病关节炎、强直性脊柱炎、特应性皮炎、舍格伦综合征、哮喘或狼疮。在某些实施方案中，“治疗”指完全或部分减缓障碍、疾病或病症、或与障碍、疾病或病症相关的症状，例如PKC-θ介导的障碍，比如例如移植物抗宿主疾病、器官移植排斥反应、银屑病、迪谢内肌营养不良、类风湿性关节炎、糖尿病、胰岛素抗性、重症肌无力、多发性硬化症、结肠炎、银屑病关节炎、强直性脊柱炎、特应性皮炎、舍格伦综合征、哮喘或狼疮，或减慢或停止那些症状的进一步进展或恶化。在另一个实施方案中，“治疗”指完全或部分减缓通过抑制PKC-θ可治疗或预防的障碍、疾病或病症或与病症相关的症状。在另一个实施方案中，“治疗”指完全或部分减缓通过相对于PKC-δ选择性地抑制PKC-θ可治疗或预防的障碍、疾病或病症、或与病症相关的症状。在仍然另一个实施方案中，“治疗”指完全或部分减缓通过相对于PKC-δ和/或PKC-eta而言选择性地抑制PKC-θ可治疗或可预防的障碍、疾病或病症、或与病症相关的症状。
如本文使用的“预防”指完全或部分延迟和/或阻止障碍、疾病或病症的发病、复发或传播；使对象免于获得障碍、疾病或病症；或降低对象获得障碍、疾病或病症的风险。在一个实施方案中，病症为PKC-θ介导的病症，比如例如如本文所述的移植物抗宿主疾病、器官移植排斥反应、银屑病、迪谢内肌营养不良、类风湿性关节炎、糖尿病、胰岛素抗性、重症肌无力、多发性硬化症、结肠炎、银屑病关节炎、强直性脊柱炎、特应性皮炎、舍格伦综合征、哮喘或狼疮，或其症状。
与二氨基嘧啶基化合物联用的术语“有效量”指能够治疗或预防本文公开的障碍、疾病或病症或其症状的量。
术语“对象”包括动物，包括但不限于下述动物：比如牛、猴、马、绵羊、猪、鸡、火鸡、鹌鹑、猫、狗、小鼠、大鼠、兔或豚鼠，在一个实施方案中，包括哺乳动物，在另一种实施方案中，包括人类，在另一个实施方案中，包括来自任一个前述动物的细胞。在一个实施方案中，对象为非人类动物，在另一个实施方案中，为非人类哺乳动物。在一个实施方案中，对象为患有肝纤维变性障碍或糖尿病或导致肝纤维变性障碍的代谢性综合征、或通过抑制激酶例如PKC-θ可治疗或可预防的病症、或其症状的人类或处于上述风险中的人类。
二氨基嘧啶基化合物
本文提供具有下式(I)的化合物：
可药用盐、互变异构体、同位素体或立体异构体，
其中：
X为CN或CF3；
L为(C1-4烷基)；
R1为取代的或未取代的杂芳基；和
R2为取代的或未取代的环烷基。
在式(I)的化合物的某些实施方案中，X为CN。在其它实施方案中，X为CF3。
在式(I)的化合物的某些实施方案中，L为CH2。在另一个实施方案中，L为CH2CH2或CH2CH2CH2。在仍然另一个实施方案中，L为CH2，CH2CH2或CH2CH2CH2。
在式(I)的化合物的某些实施方案中，X为CN且L为CH2(C1烷基)。在其它实施方案中，X为CF3且L为CH2(C1烷基)。在式(I)的化合物的某些实施方案中，X为CN且L为CH2CH2(C2烷基)。在其它实施方案中，X为CF3和L为CH2CH2(C2烷基)。在式(I)的化合物的某些实施方案中，X为CN且L为CH2CH2CH2(C3烷基)。在其它实施方案中，X为CF3和L为CH2CH2CH2(C3烷基)。在式(I)的化合物的某些实施方案中，X为CN且L为CH2CH2CH2CH2(C4烷基)。在其它实施方案中，X为CF3且L为CH2CH2CH2CH2(C4烷基)。
在式(I)的化合物的某些实施方案中，X为CN，L为CH2(C1烷基)且R1为取代的杂芳基。在其它实施方案中，X为CF3，L为CH2(C1烷基)且R1为取代的杂芳基。在式(I)的化合物的某些实施方案中，X为CN，L为CH2CH2(C2烷基)且R1为取代的杂芳基。在其它实施方案中，X为CF3，L为CH2CH2(C2烷基)且R1为取代的杂芳基。在式(I)的化合物的某些实施方案中，X为CN，L为CH2CH2CH2(C3烷基)且R1为取代的杂芳基。在其它实施方案中，X为CF3，L为CH2CH2CH2(C3烷基)且R1为取代的杂芳基。在式(I)的化合物的某些实施方案中，X为CN，L为CH2CH2CH2CH2(C4烷基)且R1为取代的杂芳基。在其它实施方案中，X为CF3，L为CH2CH2CH2CH2(C4烷基)且R1为取代的杂芳基。在式(I)的化合物的某些实施方案中，X为CN，L为CH2(C1烷基)且R1为未取代的杂芳基。在其它实施方案中，X为CF3，L为CH2(C1烷基)且R1为未取代的杂芳基。在式(I)的化合物的某些实施方案中，X为CN，L为CH2CH2(C2烷基)且R1为未取代的杂芳基。在其它实施方案中，X为CF3，L为CH2CH2(C2烷基)且R1为未取代的杂芳基。在式(I)的化合物的某些实施方案中，X为CN，L为CH2CH2CH2(C3烷基)且R1为未取代的杂芳基。在其它实施方案中，X为CF3，L为CH2CH2CH2(C3烷基)且R1为未取代的杂芳基。在式(I)的化合物的某些实施方案中，X为CN，L为CH2CH2CH2CH2(C4烷基)且R1为未取代的杂芳基。在其它实施方案中，X为CF3，L为CH2CH2CH2CH2(C4烷基)且R1为未取代的杂芳基。
在式(I)的化合物的某些实施方案中，X为CN，L为CH2(C1烷基)，R1为取代的杂芳基且R2为取代的环烷基。在其它实施方案中，X为CF3，L为CH2(C1烷基)，R1为取代的杂芳基且R2为取代的环烷基。在式(I)的化合物的某些实施方案中，X为CN，L为CH2CH2(C2烷基)，R1为取代的杂芳基且R2为取代的环烷基。在其它实施方案中，X为CF3，L为CH2CH2(C2烷基)，R1为取代的杂芳基且R2为取代的环烷基。在式(I)的化合物的某些实施方案中，X为CN，L为CH2CH2CH2(C3烷基)，R1为取代的杂芳基且R2为取代的环烷基。在其它实施方案中，X为CF3，L为CH2CH2CH2(C3烷基)，R1为取代的杂芳基且R2为取代的环烷基。在式(I)的化合物的某些实施方案中，X为CN，L为CH2CH2CH2CH2(C4烷基)，R1为取代的杂芳基且R2为取代的环烷基。在其它实施方案中，X为CF3，L为CH2CH2CH2CH2(C4烷基)，R1为取代的杂芳基且R2为取代的环烷基。在式(I)的化合物的某些实施方案中，X为CN，L为CH2(C1烷基)，R1为未取代的杂芳基且R2为取代的环烷基。在其它实施方案中，X为CF3，L为CH2(C1烷基)，R1为未取代的杂芳基且R2为取代的环烷基。在式(I)的化合物的某些实施方案中，X为CN，L为CH2CH2(C2烷基)，R1为未取代的杂芳基且R2为取代的环烷基。在其它实施方案中，X为CF3，L为CH2CH2(C2烷基)，R1为未取代的杂芳基且R2为取代的环烷基。在式(I)的化合物的某些实施方案中，X为CN，L为CH2CH2CH2(C3烷基)，R1为未取代的杂芳基且R2为取代的环烷基。在其它实施方案中，X为CF3，L为CH2CH2CH2(C3烷基)，R1为未取代的杂芳基且R2为取代的环烷基。在式(I)的化合物的某些实施方案中，X为CN，L为CH2CH2CH2(C4烷基)，R1为未取代的杂芳基且R2为取代的环烷基。在其它实施方案中，X为CF3，L为CH2CH2CH2CH2(C4烷基)，R1为未取代的杂芳基且R2为取代的环烷基。
在式(I)的化合物的某些实施方案中，X为CN，L为CH2(C1烷基)，R1为取代的杂芳基且R2为未取代的环烷基。在其它实施方案中，X为CF3，L为CH2(C1烷基)，R1为取代的杂芳基且R2为未取代的环烷基。在式(I)的化合物的某些实施方案中，X为CN，L为CH2CH2(C2烷基)，R1为取代的杂芳基且R2为未取代的环烷基。在其它实施方案中，X为CF3，L为CH2CH2(C2烷基)，R1为取代的杂芳基且R2为未取代的环烷基。在式(I)的化合物的某些实施方案中，X为CN，L为CH2CH2CH2(C3烷基)，R1为取代的杂芳基且R2为未取代的环烷基。在其它实施方案中，X为CF3，L为CH2CH2CH2(C3烷基)，R1为取代的杂芳基且R2为未取代的环烷基。在式(I)的化合物的某些实施方案中，X为CN，L为CH2CH2CH2CH2(C4烷基)，R1为取代的杂芳基且R2为未取代的环烷基。在其它实施方案中，X为CF3，L为CH2CH2CH2CH2(C4烷基)，R1为取代的杂芳基且R2为未取代的环烷基。在式(I)的化合物的某些实施方案中，X为CN，L为CH2(C1烷基)，R1为未取代的杂芳基且R2为未取代的环烷基。在其它实施方案中，X为CF3，L为CH2(C1烷基)，R1为未取代的杂芳基且R2为未取代的环烷基。在式(I)的化合物的某些实施方案中，X为CN，L为CH2CH2(C2烷基)，R1为未取代的杂芳基且R2为未取代的环烷基。在其它实施方案中，X为CF3，L为CH2CH2(C2烷基)，R1为未取代的杂芳基且R2为未取代的环烷基。在式(I)的化合物的某些实施方案中，X为CN，L为CH2CH2CH2(C3烷基)，R1为未取代的杂芳基且R2为未取代的环烷基。在其它实施方案中，X为CF3，L为CH2CH2CH2(C3烷基)，R1为未取代的杂芳基且R2为未取代的环烷基。在式(I)的化合物的某些实施方案中，X为CN，L为CH2CH2CH2CH2(C4烷基)，R1为未取代的杂芳基且R2为未取代的环烷基。在其它实施方案中，X为CF3，L为CH2CH2CH2CH2(C4烷基)，R1为未取代的杂芳基且R2为未取代的环烷基。
在式(I)的化合物的某些实施方案中，R1为取代的或未取代的吡啶基、吡啶基-1-氧化物、或嘧啶基。在某些这样的实施方案中，R1被一个或多个下述基团取代：卤素、-OR3、取代的或未取代的C1-4烷基、或取代的或未取代的芳基，其中R3为H、取代的或未取代的C1-6烷基、或取代的或未取代的芳基。在某些这样的实施方案中，R1被一个或多个下述基团取代：卤素、-OR3、取代的或未取代的C1-4烷基、或取代的或未取代的芳基，其中每个R3独立地为H、取代的或未取代的C1-6烷基、或取代的或未取代的芳基。在某些实施方案中，R1被一个或多个下述基团取代：F、Cl、Br、I、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、苯基、萘基、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CHFCH3、-CF2CH3、-C(CH3)2F、-OCH3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、-OCH2CH3、-OCH2CH2F、-OCH2CHF2、-OCH2CF3、-OCH2CH(CH3)F、-OCH2C(CH3)2F、-OCH2C(CH3)F2、-OCH2CH2CF3或-O-苯基，其中每个苯基任选地被卤素或取代的或未取代的C1-4烷基取代。例如，R1被一个或多个下述基团取代；F、甲基、乙基、异丙基、苯基、-CF3、-CF2CH3、-C(CH3)2F、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CH2F、-OCH2CHF2、-OCH2C(CH3)F2、-OCH2CH2CF3或-O-苯基，其中每个苯基任选地被F或甲基取代。
在其它实施方案中，R1为取代的或未取代的吡嗪基。在某些实施方案中，R1为取代的或未取代的吡啶基、吡啶基-1-氧化物、嘧啶基或吡嗪基。在某些这样的实施方案中，R1被一个或多个下述基团取代：Cl、或-OCH2CF3。在其它这样的实施方案中，R1被一个或多个下述基团取代：F、Cl、甲基、乙基、异丙基、苯基、-CF3、-CF2CH3、-C(CH3)2F、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CF3、-OCH2CH2F、-OCH2CHF2、-OCH2C(CH3)F2、-OCH2CH2CF3或-O-苯基，其中每个苯基任选地被F或甲基取代。
在式(I)的化合物的某些实施方案中，R1选自
其中Ra选自卤素、-OR3、取代的或未取代的C1-4烷基、或取代的或未取代的芳基，其中R3为H、取代的或未取代的C1-6烷基、或取代的或未取代的芳基；且p为0-3。在其它实施方案中，Ra选自卤素、-OR3、取代的或未取代的C1-4烷基、取代的或未取代的芳基，其中每个R3独立地为H、取代的或未取代的C1-6烷基、或取代的或未取代的芳基；且p为0-3。
在某些这样的实施方案中，Ra选自F、Cl、Br、I、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、苯基、萘基、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CHFCH3、-CF2CH3、-C(CH3)2F、-OCH3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、-OCH2CH3、-OCH2CH2F、-OCH2CHF2、-OCH2CF3、-OCH2CH(CH3)F、-OCH2C(CH3)2F、-OCH2C(CH3)F2、-OCH2CH2CF3或-O-苯基，其中每个苯基任选地被卤素或取代的或未取代的C1-4烷基取代；且p为1-2。例如，Ra选自F、甲基、乙基、异丙基、苯基、-CF3、-CF2CH3、-C(CH3)2F、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CH2F、-OCH2CHF2、-OCH2C(CH3)F2、-OCH2CH2CF3或-O-苯基，其中每个苯基任选地被F或甲基取代，且p为1或2。
在式(I)的化合物的某些其它实施方案中，Ra选自Cl或-OCH2CF3。在式(I)的化合物的某些实施方案中，Ra选自：F、Cl、甲基、乙基、异丙基、苯基、-CF3、-CF2CH3、-C(CH3)2F、-OCH3、-OCH2CH3、OCH2CF3、-OCH2CH2F、-OCH2CHF2、-OCH2C(CH3)F2、-OCH2CH2CF3或-O-苯基，其中每个苯基任选地被F或甲基取代，且p为1或2。
在式(I)的化合物的某些实施方案中，R1选自
其中Ra选自卤素、-OR3、取代的或未取代的C1-4烷基、或取代的或未取代的芳基，其中每个R3独立地为H、取代的或未取代的C1-6烷基、或取代的或未取代的芳基；且p为0-3。例如，Ra选自F、甲基、乙基、异丙基、苯基、
-CF3、-CF2CH3、-C(CH3)2F、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CH2F、-OCH2CH F2、-OCH2C(CH3)F2、-OCH2CH2CF3或-O-苯基，其中每个苯基任选地被F或甲基取代，且p为1或2。例如，Ra选自甲基、-CF3或-OCH2CH3。
在式(I)的化合物的某些实施方案中，R1为取代的或未取代的吲哚基、吲哚啉酮基(indolinonyl)、苯并噁唑基、吡咯并吡啶基、吲唑基、苯并咪唑基、二氢苯并咪唑啉酮基或喹啉基.在某些这样的实施方案中，R1被一个或多个下述基团取代：卤素、CN、-OR3、取代的或未取代的C1-4烷基、或取代的或未取代的芳基，其中每个R3独立地为H、取代的或未取代的C1-6烷基、或取代的或未取代的芳基。在某些这样的实施方案中，R1被一个或多个下述基团取代：F、Cl、CN、甲基、乙基、-CH2SO2NHCH3、-OH、-OCH3或OCF3。
在式(I)的化合物的某些实施方案中，R1选自
其中Rc选自卤素、CN、-OR3、取代的或未取代的C1-4烷基、或取代的或未取代的芳基，其中每个R3独立地为H、取代的或未取代的C1-6烷基、或取代的或未取代的芳基；R为H或C1-4烷基；且r为0-3。例如，Rc选自F、Cl、CN、甲基、乙基、-CH2SO2NHCH3、-OH、-OCH3或-OCF3。
在式(I)的化合物的某些实施方案中，R1为取代的或未取代的呋喃基、吡咯基、噻吩基、噁唑基、吡唑基、咪唑基、噁二唑基或***基。在某些这样的实施方案中，R1被一个或多个下述基团取代：卤素、CN、-OR3、取代的或未取代的C1-4烷基、或取代的或未取代的芳基，其中每个R3独立地为H、取代的或未取代的C1-6烷基、或取代的或未取代的芳基。在某些这样的实施方案中，R1被一个或多个下述基团取代：CN、甲基、乙基、-CF3或-CH2OCH3。
在式(I)的化合物的某些实施方案中，R1选自
其中Rd选自卤素、CN、-OR3、取代的或未取代的C1-4烷基、或取代的或未取代的芳基，其中每个R3独立地为H、取代的或未取代的C1-6烷基、或取代的或未取代的芳基；R独立地为H或C1-4烷基；且s为0-3。例如，Rc选自：CN、甲基、乙基、-CF3或-CH2OCH3。
在某些实施方案中，R1为取代的或未取代的吡啶基、吡啶基-1-氧化物、嘧啶基、哒嗪基、吲哚基、吲哚啉酮基、苯并噁唑基、吡咯并吡啶基、吲唑基、苯并咪唑基、二氢苯并咪唑啉酮基、喹啉基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噁唑基、吡唑基、咪唑基、噁二唑基或***基。在某些这样的实施方案中，R1被一个或多个下述基团取代：卤素、CN、-OR3、取代的或未取代的C1-4烷基、或取代的或未取代的芳基，其中每个R3独立地为H、取代的或未取代的C1-6烷基、或取代的或未取代的芳基。在某些这样的实施方案中，R1被一个或多个下述基团取代：F、Cl、CN、甲基、乙基、异丙基、苯基、-CF3、-CF2CH3、-C(CH3)2F、-CH2OCH3、-CH2SO2NHCH3、-OH、-OCH3、-OCF3、-OCH2CH3、-OCH(CH3)2、-OCH2CF3、-OCH2CH2F、-OCH2CHF 2、-OCH2C(CH3)F2、-OCH2CH2CF3或-O-苯基，其中每个苯基任选地被F或甲基取代。
在式(I)的化合物的某些实施方案中，R2为取代的或未取代的C3-12环烷基。例如，R2为取代的或未取代的环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、或金刚烷基。在某些这样的实施方案中，R2被一个或多个C1-4烷基、-OR4或-C(＝O)NR2取代，其中R4为H或C1-6烷基，且每个R独立地为H或C1-4烷基。在其它这样的实施方案中，R2被一个或多个C1-4烷基、-OR4或-C(＝O)NR2取代，其中每个R4独立地为H或C1-6烷基，且每个R独立地为H或C1-4烷基。在其它实施方案中，R2被一个或多个下述基团取代：甲基、乙基、丙基、异丙基、-CH2OH、-CH(CH3)OH、-C(CH3)2OH、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NHCH3或-C(＝O)N(CH3)2。例如，R2被一个或多个下述基团取代：甲基、-CH2OH、-C(CH3)2OH、-OH、-OCH3或-C(＝O)NHCH3。
在式(I)的化合物的某些实施方案中，R2选自
其中Rb选自C1-4烷基、-OR4或-C(＝O)NR2，其中R4为H或C1-6烷基，每个R独立地为H或C1-4烷基，且q为0-6。在其它实施方案中，Rb选自C1-4烷基、-OR4或-C(＝O)NR2，其中每个R4独立地为H或C1-6烷基，每个R独立地为H或C1-4烷基，且q为0-6。
在某些这样的实施方案中，Rb选自甲基、乙基、丙基、异丙基、-CH2OH、-CH(CH3)OH、-C(CH3)2OH、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NHCH3或-C(＝O)N(CH3)2，且q为1-5。在其它实施方案中，Rb选自甲基、-CH2OH、-C(CH3)2OH、-OH、-OCH3或-C(＝O)NHCH3且q为1-5。在某些这样的实施方案中，Rb选自***基、-C(＝O)NH2或-C(＝O)N(CH3)2。在其它实施方案中，Rb选自甲基、***基、-CH2OH、-C(CH3)2OH、-OH、-OCH3、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NHCH3或-C(＝O)N(CH3)2。
在式(I)的化合物的某些实施方案中，R2选自
其中Rb选自C1-4烷基、-OR4或-C(＝O)NR2，其中R4为H或C1-6烷基，每个R独立地为H或C1-4烷基，且t为0-5。在其它实施方案中，其中Rb选自C1-4烷基、-OR4或-C(＝O)NR2，其中每个R4独立地为H或C1-6烷基，每个R独立地为H或C1-4烷基，且t为0-5。
在某些这样的实施方案中，Rb选自甲基、乙基、丙基、异丙基、-CH2OH、-CH(CH3)OH、-C(CH3)2OH、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NHCH3、or-C(＝O)N(CH3)2且t为0-4。在其它实施方案中，Rb选自甲基、-CH2OH、-C(CH3)2OH、-OH、-OCH3或-C(＝O)NHCH3，且t为0-4。
在式(I)的化合物的某些其它实施方案中，R2选自
其中Rb选自C1-4烷基、-OR4或-C(＝O)NR2，其中R4为H或C1-6烷基，每个R独立地为H或C1-4烷基，且t为0-5。在其它实施方案中，Rb选自C1-4烷基、-OR4或-C(＝O)NR2，其中每个R4独立地为H或C1-6烷基，每个R独立地为H或C1-4烷基，且t为0-5。
在某些这样的实施方案中，Rb选自甲基、乙基、丙基、异丙基、-CH2OH、-CH(CH3)OH、-C(CH3)2OH、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NHCH3或-C(＝O)N(CH3)2，且t为0-4。在其它实施方案中，Rb选自甲基、-CH2OH，、-C(CH3)2OH、-OH、-OCH3或-C(＝O)NHCH3，且t为0-4。
在其它实施方案中，Rb选自***基、C1-4烷基、-OR4、-C(＝O)NR2，其中每个R4独立地为H或C1-6烷基，且每个R独立地为H或C1-4烷基，且t为0-5。例如，Rb选自***基、-C(＝O)NH2或-C(＝O)N(CH3)2。在其它实施方案中，Rb选自甲基、***基、-CH2OH、-C(CH3)2OH、-OH、-OCH3、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NHCH3、或-C(＝O)N(CH3)2。
在式(I)的化合物的某些实施方案中，R2选自
其中Re选自C1-4烷基、-OR4或-C(＝O)NR2，其中每个R4独立地为H或C1-6烷基，每个R独立地为H或C1-4烷基，且u为0-4。例如，Re选自甲基或-OH。
在R2的某些这样的实施方案中，R1选自
其中Ra选自卤素、-OR3、取代的或未取代的C1-4烷基、或取代的或未取代的芳基，其中R3为H、取代的或未取代的C1-6烷基、或取代的或未取代的芳基；且p为0-3。在其它实施方案中，Ra选自卤素、-OR3、取代的或未取代的C1-4烷基、或取代的或未取代的芳基，其中每个R3独立地为H、取代的或未取代的C1-6烷基、或取代的或未取代的芳基；且p为0-3。
在R2的其它的这样的实施方案中，R1选自
其中Ra选自卤素、-OR3、取代的或未取代的C1-4烷基、或取代的或未取代的芳基，其中每个R3独立地为H、取代的或未取代的C1-6烷基、或取代的或未取代的芳基；且p为0-3。
在R2的仍然其它这样的实施方案中，R1选自
其中Rc选自卤素、CN、-OR3、取代的或未取代的C1-4烷基、或取代的或未取代的芳基，其中每个R3独立地为H、取代的或未取代的C1-6烷基、或取代的或未取代的芳基；R独立地为H或C1-4烷基；且r为0-3。
在R2的仍然其它这样的实施方案中，R1选自
其中Rd选自卤素、CN、-OR3、取代的或未取代的C1-4烷基、或取代的或未取代的芳基，其中每个R3独立地为H、取代的或未取代的C1-6烷基、或取代的或未取代的芳基；R独立地为H或C1-4烷基；且s为0-3。
本文提供的进一步的实施方案包括一种或多种上述列出的具体实施方案的组合。
式(I)的代表性化合物列在表1中。
在其它实施方案中，二氨基嘧啶基化合物选自表2。
在本文所述PKC测定中测试表1和表2中列出的二氨基嘧啶基化合物，发现其具有作为PKC-θ抑制剂的活性。在一个实施方案中，二氨基嘧啶基化合物为如本文所述的化合物，其中浓度10μM的所述化合物抑制PKC-θ至少约50％或以上。在实施方案中，二氨基嘧啶基化合物为如本文所述的化合物，其中浓度100nM的所述化合物抑制PKC-θ至少约50％或以上。在某些这样的实施方案中，二氨基嘧啶基化合物对于PKC-θ选择性为相对于PKC-δ的至少5倍。在某些这样的实施方案中，二氨基嘧啶基化合物对于PKC-θ选择性为相对于PKC-δ的至少20倍。在某些这样的实施方案中，二氨基嘧啶基化合物对于PKC-θ的选择性为相对于PKC-δ的至少100倍。在某些这样的实施方案中，二氨基嘧啶基化合物对于PKC-θ的选择性为相对于PKC-δ的大于100倍。在其它实施方案中，二氨基嘧啶基化合物对于PKC-θ的选择性为相对于PKC-δ和PKC-eta的至少20倍。在其它实施方案中，二氨基嘧啶基化合物对于PKC-θ的选择性为相对于PKC-δ和PKC-eta的至少100倍。
制备二氨基嘧啶基化合物的方法
可以使用常规有机合成和市售可获得的起始材料制备二氨基嘧啶基化合物。举例且非限制，式(I)的二氨基嘧啶基化合物可以如下所示方案1和2以及本文所述实施例中描述的制备。应当注意，本领域技术人员将知道如何修饰示例性方案和实施例中所述的方法，以获得期望的产物。
方案1
方案1中显示式(I)的化合物的合成，其中X、L、R1和R2为如本文定义的。在有机溶剂(例如，DMF、THF、乙醇、甲醇或异丙醇)中，在碱(例如，DIEA、TEA、1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯、N-甲基吗啉、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸铯或磷酸钾)的存在下，用R2NH2处理含有2，4-二氯嘧啶的起始材料，得到R2侧链的引入。接着，在升高的温度(例如，60℃至80℃)下，在有机溶剂(例如，THF、乙醇、NMP、DMF、DMSO、二噁烷、1-丁醇、甲醇或异丙醇)中，在碱(例如，DIEA、1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯、N-甲基吗啉、TEA、碳酸铯、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠或磷酸钾)的存在下，用R1-L-NH2处理，得到式(I)的化合物。
方案2
可选地，可以在有机溶剂(例如，乙醇、正丁醇、NMP、DMF、DMSO或二噁烷)中，在碱(例如，DIEA、TEA、N-甲基吗啉、1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸铯或磷酸钾)的存在下，在室温下或在升高的温度(例如，25℃至70℃)下，用R2NH2处理，由4-氯-2-烷基硫代嘧啶-腈(其中Rx为C1-2烷基)制备式(I)的化合物。通过在有机溶剂(比如例如THF、DCM、NMP、DMF或DMA)中，用氧化剂(比如mCPBA、oxone、过氧化氢或3-苯基-2-(苯磺酰基)-1，2-氧氮杂环丙烷(oxaziridine))处理，获得烷基硫醇部分的氧化。在室温下或升高的温度(例如，25℃-110℃)下，在溶剂(比如，例如二噁烷、DMSO、NMP、DMF、THF或正丁醇)中，在有机碱(比如DIEA、TEA、1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯或N-甲基吗啉)的存在下，用R1-L-NH2处理得到的砜(m＝1)和亚砜(m＝2)的混合物，得到其中X为CN的式(I)的化合物。
在一个方面，本文提供用于制备式(I)的化合物的方法：
该方法包括在适于得到式(I)的化合物的条件下，在有机溶剂中，在碱的存在下，用R1-L-NH2接触式(Ia)的化合物，
其中：
X为CN或CF3；
L为(C1-4烷基)；
R1为取代的或未取代的杂芳基；和
R2为取代的或未取代的环烷基。
在一个实施方案中，溶剂为THF、乙醇、NMP、DMF、DMSO、二噁烷、1-丁醇、甲醇或异丙醇。在一个实施方案中，碱为DIEA、1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯、N-甲基吗啉、TEA、碳酸铯、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠或磷酸钾。在某些实施方案中，接触是在升高的温度例如约60℃至约80℃下进行的。
在某些实施方案中，所述方法进一步包括制备式(Ia)的化合物：
该方法包括在适于得到式(Ia)的化合物的条件下，在有机溶剂中，在碱的存在下，用R2NH2接触接触式(Ib)的化合物，
在一个实施方案中，溶剂为DMF、THF、乙醇、甲醇或异丙醇。在另一个实施方案中，碱为DIEA、TEA、1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯、N-甲基吗啉、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸铯或磷酸钾。
在一个方面，本文提供用于制备式(I)的化合物的方法：
该方法包括在适于得到式(I)的化合物的条件下，在有机溶剂中，在碱的存在下，用R1-L-NH2接触式(Ic)的化合物，
其中：
X为CN或CF3；
L为(C1-4烷基)；
R1为取代的或未取代的杂芳基；和
R2为取代的或未取代的环烷基；
Rx为C1-2烷基；和
m为1或2。
在一个实施方案中，溶剂为二噁烷、DMSO、NMP、DMF、THF或正丁醇。在另一个实施方案中，碱为DIEA、TEA、1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯、或N-甲基吗啉。在某些实施方案中，接触是在室温或升高的温度例如约25℃至约110℃下进行的。
在某些实施方案中，所述方法进一步包括制备式(Ic)的化合物：
该方法包括与适于得到式(Ic)的化合物的条件下，与有机溶剂中，用氧化剂氧化式(Ib)的化合物，
在一个实施方案中，溶剂为THF、DCM、NMP、DMF或DMA。在另一个实施方案中，氧化剂为mCPBA、oxone、过氧化氢或3-苯基-2-(苯磺酰基)-1，2-氧氮杂环丙烷(oxaziridine)。
在某些实施方案中，所述方法进一步包括制备式(Id)的化合物：
该方法包括在适于得到式(Id)的化合物的条件下，在有机溶剂中，在碱的存在下，用R2NH2接触接触式(Ie)的化合物，
在一个实施方案中，溶剂为乙醇、正丁醇、NMP、DMF、DMSO或二噁烷。在另一个实施方案中，碱为DIEA、TEA、N-甲基吗啉、1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸铯或磷酸钾。在某些实施方案中，接触是在室温或升高的温度例如约25℃至约70℃下进行的。
使用方法
二氨基嘧啶基化合物用作治疗、预防或改善动物或人类中的病症的药物。进一步，二氨基嘧啶基化合物具有针对蛋白激酶例如PKC-θ的活性。因此，本文提供二氨基嘧啶基化合物的许多用途，包括治疗或预防下述那些疾病。本文提供的方法包括向需要其的对象给药有效量的一种或多种二氨基嘧啶基化合物。
在一个方面，本文提供用于治疗或预防PKC-θ介导的病症的方法中的化合物，所述PKC-θ介导的病症为比如例如移植物抗宿主疾病、器官移植排斥反应、银屑病、迪谢内肌营养不良、类风湿性关节炎、糖尿病、胰岛素抗性、重症肌无力、多发性硬化症、结肠炎、银屑病关节炎、强直性脊柱炎、特应性皮炎、舍格伦综合征、哮喘或狼疮，所述方法包括向需要其的对象给药有效量的二氨基嘧啶基化合物。
在另一个方面，本文提供治疗或预防PKC-θ介导的病症的方法和用于该方法中的化合物，所述PKC-θ介导的病症为比如例如移植物抗宿主疾病、器官移植排斥反应、银屑病、迪谢内肌营养不良、类风湿性关节炎、糖尿病、胰岛素抗性、重症肌无力、多发性硬化症、结肠炎、银屑病关节炎、强直性脊柱炎、特应性皮炎、舍格伦综合征、哮喘或狼疮。
在一个方面，本文提供在体内、离体或体外抑制表达激酶的细胞中所述激酶的方法和用于该方法中的化合物，所述方法包括用有效量的二氨基嘧啶基化合物接触所述细胞。在一个实施方案中，激酶为PKC-θ。在某些实施方案中，二氨基嘧啶基化合物对于PKC-θ而言相对于PKC-δ具有选择性。在其它实施方案中，二氨基嘧啶基化合物对于PKC-θ而言相对于PKC-δ和PKC-eta具有选择性。
在某些这样的实施方案中，二氨基嘧啶基化合物对于PKC-θ的选择性为相对于PKC-δ的至少5倍。在某些这样的实施方案中，二氨基嘧啶基化合物对于PKC-θ的选择性为相对于PKC-δ的至少20倍。在某些这样的实施方案中，二氨基嘧啶基化合物对于PKC-θ的选择性为相对于PKC-δ的至少100倍。在某些这样的实施方案中，二氨基嘧啶基化合物对于PKC-θ的选择性为相对于PKC-δ的大于100倍。在其它实施方案中，二氨基嘧啶基化合物对于PKC-θ的选择性为相对于PKC-δ和PKC-eta的至少20倍。在其它实施方案中，二氨基嘧啶基化合物对于PKC-θ的选择性为相对于PKC-δ和PKC-eta的至少100倍。
例如，二氨基嘧啶基化合物为来自表1或表2的化合物。
药物组合物和给药途径
二氨基嘧啶基化合物可以以常规制剂形式(比如，胶囊、微胶囊、片剂、颗粒剂、散剂、锭剂、丸剂、栓剂、注射剂、混悬剂、糖浆剂、贴剂、乳膏、洗剂、软膏、凝胶剂、喷雾剂、溶液和乳剂)口服、局部或肠胃外给药至对象。合适的制剂可以通过通常使用的方法制备，其使用常规的、有机或无机的添加剂，比如赋形剂(例如，蔗糖、淀粉、甘露醇、山梨醇、乳糖、葡萄糖、纤维素、滑石粉、磷酸钙或碳酸钙)，粘合剂(例如，纤维素、甲基纤维素、羟甲基纤维素、聚丙基吡咯烷酮、聚乙烯吡咯烷酮、明胶、***胶、聚乙二醇、蔗糖或淀粉)，崩解剂(例如，淀粉、羧甲基纤维素、羟丙基淀粉、低取代的羟丙基纤维素、碳酸氢钠、磷酸钙或柠檬酸钙)，润滑剂(例如，硬脂酸镁、轻质无水硅酸、滑石粉或月桂基硫酸钠)，矫味剂(例如，柠檬酸、薄荷醇、甘氨酸或橙粉)，防腐剂(例如，苯甲酸钠、亚硫酸氢钠、尼泊金甲酯或尼泊金丙酯)，稳定剂(例如，柠檬酸、柠檬酸钠或乙酸)，助悬剂(例如，甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或硬脂酸铝)，分散剂(例如，羟丙基甲基纤维素)，稀释剂(例如，水)和底蜡(例如，可可脂、白凡士林或聚乙二醇)。药物组合物中所述二氨基嘧啶基化合物的有效量可以为产生预期效果的水平；例如，在用于口服和肠胃外给药的单位剂量中约0.005mg/kg对象体重至约10mg/kg对象体重。
向对象给药的二氨基嘧啶基化合物的剂量在相当大程度上可变化，并且可以接受健康护理执业医师的判断。通常，所述二氨基嘧啶基化合物可以以约0.005mg/kg对象体重至约10mg/kg对象体重的剂量向患者每天给药一至四次，但是上述剂量可根据对象的年龄、体重和医学病症以及给药的类型进行适当的改变。在一个实施方案中，所述剂量为约0.01mg/kg对象体重至约5mg/kg对象体重，约0.05mg/kg对象体重至约1mg/kg对象体重，约0.1mg/kg对象体重至约0.75mg/kg对象体重，或约0.25mg/kg对象体重至约0.5mg/kg对象体重。在一个实施方案中，每天给予一个剂量。在任意给定的情况下，所给药的二氨基嘧啶基化合物的量将取决于如活性成分溶解度、使用的剂型和给药途径的因素。在一个实施方案中，应用局部浓度提供细胞内暴露或约0.01-10mM的浓度。
在另一个实施方案中，本文提供用于治疗或预防疾病或病症的方法，包括向需要其的对象给药约0.375mg/天至约750mg/天、约0.75mg/天至约375mg/天、约3.75mg/天至约75mg/天、约7.5mg/天至约55mg/天或约18mg/天至约37mg/天的二氨基嘧啶基化合物。
在另一个实施方案中，本文提供用于治疗或预防疾病或病症的方法，包括向需要其的对象给药约1mg/天至约1200mg/天、约10mg/天至约1200mg/天、约100mg/天至约1200mg/天、约400mg/天至约1200mg/天、约600mg/天至约1200mg/天、约400mg/天至约800mg/天或约600mg/天至约800mg/天的二氨基嘧啶基化合物。在一个特定实施方案中，本文公开的方法包括向需要其的对象给药400mg/天、600mg/天或800mg/天的二氨基嘧啶基化合物。
在另一个实施方案中，本文提供包括在约1mg至约200mg、约35mg至约1400mg、约125mg至约1000mg、约250mg至约1000mg、或约500mg至约1000mg之间的二氨基嘧啶基化合物的单位剂量制剂。
在特定的实施方案中，本文提供包括约100mg或400mg的二氨基嘧啶基化合物的单位剂量剂型。
在另一个实施方案中，本文提供包括1mg、5mg、10mg、15mg、20mg、30mg、35mg、50mg、70mg、100mg、125mg、140mg、175mg、200mg、250mg、280mg、350mg、500mg、560mg、700mg、750mg、1000mg或1400mg的二氨基嘧啶基化合物的单位剂量剂型。
二氨基嘧啶基化合物可以每日给药一次、两次、三次、四次或更多次。在一个特定实施方案中，600mg或更少的剂量作为一次日剂量给药，而多于600mg的剂量以等于总日剂量一半的量每日两次给药。
出于方便的原因，二氨基嘧啶基化合物可以口服给药。在一个实施方案中，当口服给药时，二氨基嘧啶基化合物与食物和水一起给药。在另一个实施方案中，二氨基嘧啶基化合物分散在水或果汁(例如，苹果汁或橙汁)中并作为悬浮液口服给药。
二氨基嘧啶基化合物也可以皮内注射、肌内注射、腹膜内、经皮、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外、舌下、脑内、***内、透皮、直肠、粘膜、吸入或局部给药至耳、鼻、眼睛或皮肤。给药方式由健康护理执业医师判断，并且可以部分地取决于医学疾病的部位。
在一个实施方案中，本文提供含有二氨基嘧啶基化合物而没有额外的载体、赋形剂或溶媒的胶囊。
在另一个实施方案中，本文提供包括有效量的二氨基嘧啶基化合物和可药用载体或溶媒的组合物，其中可药用载体或溶媒可以包括赋形剂、稀释剂或其混合物。在一个实施方案中，该组合物为药物组合物。
所述组合物可以为片剂、咀嚼片、胶囊、溶液、肠胃外溶液、锭剂、栓剂和混悬剂等形式。组合物可以配制为在剂量单位中含有日剂量或合适的部分日剂量，其可以为单独的片剂或胶囊剂或适当体积的液体。在一个实施方案中，可以由水溶性盐(比如盐酸盐)制备该溶液。一般而言，所有的组合物都是根据药物化学中的已知方法制备。可以通过将二氨基嘧啶基化合物与合适的载体或稀释剂混合，并将合适量的该混合物填充在胶囊来制备胶囊剂。常用的载体和稀释剂包括，但不限于，惰性粉状物质，比如许多不同种类的淀粉，粉状纤维素(尤其是结晶和微晶纤维素)，糖(比如，果糖、甘露醇和蔗糖)，谷类粉以及类似的可食用粉末。
片剂可以通过直接压缩、通过湿法制粒或通过干法制粒制备。它们的制剂通常包含稀释剂、粘合剂、润滑剂和崩解剂以及该化合物。典型的稀释剂包括，例如各种类型的淀粉、乳糖、甘露醇、高龄土、磷酸钙或硫酸钙，无机盐(比如氯化钠)和粉状糖。粉状纤维素衍生物也是有用的。典型的片剂粘合剂为物质，比如淀粉、明胶和糖，比如乳糖、果糖、葡萄糖等。天然和合成的树胶也是合适的，包括***胶、藻酸盐、甲基纤维素、聚乙烯基吡咯烷等。聚乙二醇、乙基纤维素和蜡也可以用作粘合剂。
润滑剂可能是片剂配制中必需的，用于防止片剂和冲压机与模具粘连。润滑剂可以选自如光滑的固体，如滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸和氢化植物油。片剂崩解剂是在润湿后膨胀使片剂破碎并释放出化合物的物质。它们包括淀粉、粘土、纤维素、褐藻胶和树胶。更特别地，可以使用例如玉米淀粉和马铃著淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、木纤维素、粉状天然海绵、阳离子交换树脂、藻酸、瓜尔胶、柑桔渣和羧甲基纤维素以及月桂基硫酸钠。片剂可以用糖作为调味剂和密封剂包衣，或者用成膜保护剂包衣以改善片剂的溶出性质。组合物也可以通过例如在制剂中使用物质比如甘露醇配制为咀嚼片。
当期望将二氨基嘧啶基化合物作为栓剂给药时，可以使用典型的基质。可可脂是传统的栓剂基质，其可以通过加入蜡略微提高其熔点得到改良。广泛使用水可混溶性栓剂基质，特别是包括不同分子量的聚乙二醇的这种基质。
二氨基嘧啶基化合物的作用可以通过适当的制剂延迟或延长。例如，可制备二氨基嘧啶基化合物的缓慢溶解性微丸并结合到片剂或胶囊中，或者制成缓释的可植入装置。该技术还包括制备几种不同溶出速率的微丸，并用微丸的混合物填充胶囊。片剂或胶囊可以用能耐受可预测时间段的溶出的薄膜包衣。即使胃肠外制剂也可通过将二氨基嘧啶基化合物溶解或悬浮于可使其在血清中缓慢分散的油性或乳化溶媒中而制成长效制剂。
实施例
提供下述实施例作为示例，不限于此。使用Chemdraw Ultra 9.0(Cambridgesoft)中提供的自动生成名称的工具命名化合物，其生成化学结构的***名，且对于立体化学支持Cahn-Ingold-Prelog规则。本领域技术人员可以修饰示例性的实施例中列出的方法，以获得期望的产物，例如表1和2中所列的化合物。
使用的缩写：
化合物合成
实施例1：2-(((4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)嘧啶-5-甲腈
A. 7，7-二甲基-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-酮。在0℃下，在氮气下，向1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-酮(1.0当量)在无水THF(0.6M)中的溶液中加入氢化钠(2.0当量，在矿物油中60％)。在室温下，搅拌得到的反应混合物60分钟，加入碘代甲烷(2.5当量)。在10℃下，搅拌该反应过夜。TLC(石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1)显示反应完成。用饱和的氯化铵水溶液淬灭该反应，并用乙酸乙酯萃取水层。用盐水洗涤合并的有机层，经无水硫酸钠干燥并过滤。在真空下浓缩滤液，并通过硅胶柱色谱(在石油醚中的10％乙酸乙酯)纯化残余物，得到呈无色油状物的7，7-二甲基-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-酮(产率40％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)3.99(s，4H)，2.55-2.58(m，2H)，1.97-2.00(m，2H)，1.87(s，2H)，1.16(s，6H)。
B. 7，7-二甲基-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-醇。在0℃下，在氮气下，向7，7-二甲基-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-酮(1.0当量)在MeOH(0.5M)中的溶液中慢慢地加入硼氢化钠(1.0当量)，并在室温下搅拌得到的反应混合物60分钟。TLC(石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1)显示反应完成。加入水，并在减压下除去溶剂。用DCM萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。在真空下浓缩滤液，得到7，7-二甲基-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-醇(产率99％)，其用于下一步而无需进一步纯化。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)3.85-3.94(m，4H)，3.37-3.40(m，1H)，1.41-1.81(m，7H)，0.97(s，6H)。
C. 4-羟基-3，3-二甲基环己酮。在室温下，搅拌7，7-二甲基-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-醇(1.0当量)在2.0N盐酸水溶液(3.7当量)和MeOH(0.9M)中的溶液过夜。TLC(石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1)显示反应完成。在减压下除去溶剂，用饱和的碳酸氢钠水溶液碱化得到的残余物，并用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。在真空下浓缩滤液，得到4-羟基-3，3-二甲基环己酮(产率88％)，其用于下一步而无需进一步纯化。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)3.69-3.71(m，1H)，2.42-2.45(m，2H)，2.09-2.25(m，1H)，2.04-2.08(m，4H)，1.91-1.95(m，1H)，0.98(s，6H)
D. (E)-4-羟基-3，3-二甲基环己酮肟。在室温下，搅拌4-羟基-3，3-二甲基环己酮(1.0当量)、盐酸羟胺(2.0当量)和碳酸氢钠(2.5当量)在MeOH(0.7M)中的混合物过夜。除去溶剂，并使残余物通过短硅胶柱(在石油醚中50％乙酸乙酯)，得到呈无色油状物的粗(E)-4-羟基-3，3-二甲基环己酮肟(产率96％)。
E. 4-氨基2，2-二甲基环己醇。向(E)-4-羟基-3，3-二甲基环己酮肟(1.0当量)在MeOH(0.8M)中的溶液中加入Raney-Ni(10当量)。在室温下，在氢气氛下，搅拌该反应混合物过夜。TLC(DCM∶MeOH＝10∶1)显示反应完成。过滤该混合物，并在真空中浓缩滤液，得到4-氨基-2，2-二甲基环己醇(产率92％)，其用于下一步而无需进一步纯化。
F. (4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基甲酸苄酯。在0℃下，向4-氨基-2，2-二甲基环己醇(1.0当量)在1.7M碳酸钠溶液(1.3当量)和THF(1.3M)中的混合物中慢慢地加入氯甲酸苄基酯(1.5当量)。在加入之后，在室温下搅拌该混合物过夜。TLC(二氯甲烷∶MeOH＝10∶1)显示反应完成。过滤该混合物，并用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。在真空中浓缩滤液，得到粗外消旋产物，将其通过硅胶柱色谱(DCM∶MeOH＝20∶1)纯化，得到呈无色油状物的(4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基甲酸苄酯(110g，49.4％)。
G. (4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基甲酸苄酯。通过手性超临界流体色谱(仪器：Thar 200制备SFC，柱：ChiralPak AD-10μm，300×50mm I.D，流动相：A：CO2和40％B：乙醇(0.1％NH3·H2O)，流速：240mL/min，背压：100bar，柱温：38℃，波长：210nm，循环时间：～4.0min)分离外消旋混合物(1.0当量)，分离峰1，得到(4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基甲酸苄酯(产率22％)的1种异构体。
H. (1S，4R)-4-氨基-2，2-二甲基环己醇。在室温下，在氢气球下，搅拌在MeOH(0.37M)中的苄基-4-羟基-3，3-二甲基环己基氨基甲酸酯(峰1)(1.0当量)和钯碳(10％)过夜。TLC(DCM∶MeOH＝10∶1)显示反应完成。将该混合物过滤通过硅藻土垫料，并在减压下蒸发溶剂，得到呈白色固体的4-氨基-2，2-二甲基环己醇(产率95％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)3.70(s，2H)，3.16(s，1H)，2.65-2.71(m，1H)，1.18-1.65(m，6H)，0.83(m，6H)。
I. 4-(((1S，4R)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。向4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.0当量)和DIEA(3.0当量)在THF(0.05M)中的混合物中加入4-氨基-2，2-二甲基环己醇(峰1，上述得到的)(1.2当量)。在50℃下，搅拌该混合物过夜。在反应完成之后，在减压下除去溶剂，并通过硅胶柱色谱(在石油醚中20％乙酸乙酯)纯化残余物，得到呈白色固体的标题化合物(产率82％)。MS(ESI)m/z 293.1[M+H]+。在装有Mo Kα放射的Bruker Kappa APEX-II CCD衍射仪上进行单晶X-射线衍射研究。通过将戊烷汽相扩散到异丙醇溶液中，使目标化合物的晶体生长。将0.215×0.183×0.055mm无色块用帕拉通油(paratone oil)固定在Cryoloop 上。在氮气流中，在90(2)K，使用和ω扫描，收集数据。晶体与检测器的距离为60mm，使用0.5°的扫描宽度，每帧曝光时间为5秒。在θ中，到25.00°时数据收集完成99.9％。收集覆盖指数-53＜＝h＜＝56，-14＜＝k＜＝13，-23＜＝1＜＝27的总共45590个反射。发现21888个反射是不依赖对称的，具有0.0549的Rint。指数化和单位晶胞精修表明C-中心的、单斜点阵。发现空间群为C2。使用Bruker SAINT软件程序整合数据，并使用SADABS软件程序度量(scaled)。直接方法解决(Solution by direct methods)(SHELXS)产生与提出的结构一致的完整阶段模式。
所有非氢原子都采用全矩阵最小二乘法(SHELXL-2013)进行各向异性精修。使用骑式模型(riding model)放置所有氢原子。使用SHELXL-2013中的合适HFIX命令限制它们相对于它们的母原子的位置。它们的绝对立体化学显示为4-(((1S，4R)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。
J. 4-(((1S，4R)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲基亚磺酰基)嘧啶-5-甲腈和4-(((1S，4R)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈。在0℃下，向4-(((1S，4R)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.0当量)在THF(0.1M)中的溶液中加入3-氯过苯甲酸(85％，2.0当量)。然后，在室温下，搅拌该混合物2小时。在反应完成之后，在减压下除去溶剂，并通过硅胶柱色谱(在石油醚中50％乙酸乙酯)纯化残余物，得到呈黄色固体的标题化合物，MS(ESI)m/z 309.1，325.1[M+H]+，其用于下一步而无需进一步纯化。
K. 4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-甲腈。用60％NaH(1.1当量)处理2，2-二氟丙-1-醇(1.2当量)在无水DMSO(1.0M)中的溶液。在室温下，搅拌得到的混合物5分钟，接着一次性加入4-氯嘧啶-5-甲腈(1.0当量)。在室温下，搅拌反应混合物1小时。加入乙酸乙酯，并用水和盐水分配反应物。浓缩有机层，得到黄色油状物(4.19g)，将其通过硅胶柱色谱(在己烷中0-75％乙酸乙酯，100g柱)纯化。合并期望的级分，并在减压下除去挥发性溶剂。将残余物与己烷一起研磨，并在减压下除去挥发性溶剂，得到呈黄色油状物的4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-甲腈(产率72.4％)。MS(ESI)m/z 199.8[M+1]+。
L. (4-2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲胺。将4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-甲腈(1.0当量)溶于乙醇和乙酸乙酯(0.2M)的1∶1混合物中。向反应容器中加入海绵镍催化剂(50％含水浆液)(19当量)和氢氧化铵(12当量)，用氢气充分吹扫，并允许在室温下搅拌16小时。将反应混合物过滤通过含有硅藻土的微纤维过滤器，用乙醇洗涤，并在减压下除去挥发性溶剂。使用硅胶色谱(在己烷中60-100％的乙酸乙酯，接着是在乙酸乙酯中1-20％MeOH)纯化残余物。合并期望的级分，并在减压下除去挥发性溶剂，得到(4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲胺(产率82％)。MS(ESI)m/z 204.1[M+1]+。
M. 2-(((4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在110℃下，加热4-(((1S，4R)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲基亚磺酰基)嘧啶-5-甲腈(1.0当量)和(4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲胺(1.5当量)在二噁烷(0.15M)中的溶液1小时。标准处理，得到2-(((4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)嘧啶-5-甲腈(产率69.6％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)8.72(s，1H)，8.26(s，1H)，8.18(s，1H)，7.99(t，J＝5.66Hz，1H)，7.17(d，J＝7.81Hz，1H)，4.64(t，J＝12.89Hz，2H)，4.39-4.49(m，2H)，4.29(d，J＝3.51Hz，1H)，3.85-4.00(m，1H)，3.12(br.s.，1H)，1.73(t，J＝19.14Hz，4H)，1.42-1.55(m，3H)，1.21-1.33(m，3H)，1.10(br.s.，1H)，0.59-0.78(m，5H).MS(ESI)m/z448.2[M+1]+。
实施例2：4-(((1S，4R)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-((2-(5-甲基-1H-四唑-1-基)苄基)氨基)嘧啶-5-甲腈
A. 4-(((1S，4R)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。向4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.0当量)和DIEA(3.0当量)在THF(0.05M)中的混合物中加入(1R，4S)-4-氨基-2，2-二甲基环己醇(如上所述确定立体化学)(1.2当量)。在50℃下，搅拌该混合物过夜。在反应完成之后，在减压下除去溶剂，并通过硅胶柱色谱(在石油醚中20％乙酸乙酯)纯化残余物，得到呈白色固体的标题化合物(产率82％)。MS(ESI)m/z 293.1[M+H]+。
B. 4-(((1S，4R)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲基亚磺酰基)嘧啶-5--甲腈和4-(((1S，4R)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈的混合物。在0℃下，向4-(((1S，4R)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.0当量)在THF(0.1M)中的溶液中加入3-氯过苯甲酸(85％，2.0当量)。然后，在室温下搅拌该混合物2小时。在反应完成之后，在真空下除去溶剂，并通过硅胶柱色谱(在石油醚中50％乙酸乙酯) 纯化残余物，得到呈黄色固体的标题混合化合物，MS(ESI)m/z 309.1，325.1[M+H]+，其用于下一步而无需进一步纯化。
C. N-(2-溴苯基)乙酰胺。在0℃下，向2-溴苯胺(1.0当量)在DCM(0.2M)中的溶液中加入乙酰氯(1.5M)。在该温度下，搅拌得到的混合物过夜。加入1N盐酸(0.4当量)淬灭反应。用DCM和碳酸氢钠萃取该混合物，并用盐水洗涤合并的有机层，经硫酸钠干燥，浓缩并与在石油醚中的16％乙酸乙酯研磨，得到呈白色粉末的期望产物(产率73％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)8.33-8.31(m，1H)，7.61(br，1H)，7.54-7.52(m，1H)，7.33-7.26(m，1H)，6.99-6.95(m，1H)，2.24(s，3H)；MS(ESI)m/z 203.2[M+H]+。
D. 1-(2-溴苯基)-5-甲基-1H-四唑。在5℃下，向N-(2-溴苯基)乙酰胺(1.0当量)在乙腈(0.4M)中的溶液中滴加三氟甲烷磺酸酸酐(2.0当量)，并搅拌该混合物5分钟。慢慢地加入三甲基甲硅烷基叠氮化物(4.0当量)，同时保持温度在-5℃下，然后在0℃下，搅拌该混合物80分钟。将混合物倾倒入冰冷的碳酸氢钠溶液中，用乙酸乙酯萃取，并将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗残余物。通过硅胶柱色谱(在石油醚中16％乙酸乙酯)纯化残余物，得到呈黄色固体的期望产物(产率44％)。MS(ESI)m/z 239.1[M+H]+。
E. 2-(5-甲基-1H-四唑-1-基)苄腈。在90℃下，搅拌1-(2-溴苯基)-5-甲基-1H-四唑(1.0当量)、锌粉(0.25M)、氰化锌(0.65当量)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0.1当量)和1，1′-二茂铁二基-双(二苯基膦)(0.08当量)在乙二醇二甲醚(0.2M)中的混合物过夜。在反应完成之后，在减压下除去溶剂，并通过硅胶色谱(在石油醚中50％乙酸乙酯)纯化残余物，得到呈黄色固体的标题化合物(产率65％)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)7.958-7.956(m，1H)，7.94-7.87(m，1H)，7.80-7.76(m，1H)，7.59-7.57(m，1H)，2.63(S，3H)；MS(ESI)m/z186.1[M+H]+.
F. (2-(5-甲基-1H-四唑-1-基)苯基)甲胺盐酸盐。向2-(5-甲基-1H-四唑-1-基)苄腈(1.0当量)在MeOH(0.4M)中的溶液中加入钯炭和浓盐酸(1.0当量)。在室温下，在氢气氛(50psi)下搅拌该反应混合物过夜。在反应完成之后，将该混合物过滤通过硅藻土。在真空中浓缩滤液，得到粗产物(产率81％)，其用于下一步而无需进一步纯化。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)7.85-7.75(m，3H)，7.66-7.64(m，1H)，3.96(s，2H)，2.60(s，3H)；MS(ESI)m/z190.1[M+H]+。
G. 4-(((1S，4R)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-((2-(5-甲基-1H-四唑-1-基)苄基)氨基)嘧啶-5-甲腈。向4-(((1S，4R)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲基亚磺酰基)嘧啶-5-甲腈和4-(((1S，4R)-4-羟基-3，3-二甲基环己基) 氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈(1.0当量)在二噁烷(0.4M)中的混合物中加入(2-(5-甲基-1H-四唑-1-基)苯基)甲胺盐酸盐(1.0当量)和DIEA(2.0当量)。在120℃下，在微波中搅拌该混合物2小时。在反应完成和标准处理之后，得到期望产物(产率37％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)8.12(s，1H)，7.82-7.78(m，1H)，7.63-7.61(m，1H)，7.58-7.51(m，3H)，7.02-6.92(m，1H)，4.32-4.17(m，3H)，4.01-3.99(m，1H)，3.21-3.14(m，1H)，2.41-2.36(m，3H)，1.65-1.47(m，1H)，1.36(br，1H)，1.23-1.17(m，2H)，0.81(s，3H)，0.73(s，3H)；MS(ESI)m/z 434.2[M+H]+。
实施例3：2-(((4-(4-氟苯基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1s，4s)-4-羟基环己基)氨基)嘧啶-5-甲腈
A. 4-(4-氟苯基)嘧啶-5-甲腈.用氮气吹扫4-氯嘧啶-5-甲腈(1.0当量)、(4-氟苯基)硼酸(1.2当量)、1，1′-双(二苯基膦基二茂铁-二氯化钯(ii)二氯甲烷复合物(10mol％)和碳酸钾(3.0当量)在二噁烷/水3∶1(0.5M)中的混合物3分钟。将压力反应容器紧紧地封盖，并在100℃下加热5小时。加入乙酸乙酯和水，并分离各层。将有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到褐色、粘性油状物，通过硅胶柱色谱(在己烷中0-30％乙酸乙酯，100g柱)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(产率58％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ(ppm)9.39(s，1H)，9.06(s，1H)，8.23-8.17(m，2H)，7.31-7.27(m，2H).MS(ESI)m/z200.2[M+1]+。
B. (4-(4-氟苯基)嘧啶-5-基)甲胺。在真空下，使4-(4-氟苯基)嘧啶-5-甲腈(1.0当量)和Raney-nickel(20mol％)在MeOH(0.1M)中的混合物脱气，接着加入30％氢氧化铵(10当量)。在室温下，用氢气氢化得到的混合物过夜。将该混合物过滤通过硅藻土垫，并用MeOH洗涤滤饼。浓缩滤液，并进一步干燥，得到褐色油状物，通过硅胶柱色谱(在DCM中0-10％MeOH，25g柱)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(产率32％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)9.19(s，1H)，8.88(s，1H)，7.71-7.78(m，2H)，7.17-7.24(m，2H)，3.99(s，2H)，1.41(br.s.，2H).MS(ESI)m/z204.1[M+1]+。
2-(((4-(4-氟苯基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1s，4s)-4-羟基环己基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在120℃下，通过微波加热4-(((1s，4s)-4-羟基环己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈和4-(((1s，4s)-4-羟基环己基)氨基)-2-(甲基亚磺酰基)嘧啶-5-甲腈(1.0当量)和粗(4-(4-氟苯基)嘧啶-5-基)甲胺(2.0当量)的混合物在二噁烷(0.2M)中的悬浮液1小时。加入水和乙酸乙酯。标准处理方法得到呈白色固体的标题化合物(产率10％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)9.12(s，1H)，8.75(s，1H)，8.24(t，J＝5.7Hz，1H)，8.15(s，1H)，7.76(dd，J＝5.5，8.6Hz，2H)，7.37(t，J＝8.8Hz，2H)，7.08(d，J＝7.4Hz，1H)，4.64-4.54(m，2H)，4.37-4.27(m，1H)，3.66(br.s.，1H)，3.46(d，J＝7.0Hz，1H)，1.72-1.52(m，2H)，1.52-1.37(m，3H)，1.24-1.08(m，3H).MS(ESI)m/z 420.1[M+1]+。
实施例4：顺式-1-甲基-4-((2-(((4-(对-甲苯氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)环己醇
A. 4-(对-甲苯氧基)嘧啶-5-甲腈。将对甲酚(1.0当量)置于含有DMSO(1.0M)和氢化钠(0.9当量)的圆底烧瓶中。在环境温度下，搅拌该反应混合物5分钟。向该混合物中加入4-氯嘧啶-5-甲腈(1.0当量)。在25℃下，搅拌该反应2小时。将反应混合物分配在乙酸乙酯和水之间。用盐水(3x)洗涤有机层，并经硫酸钠干燥。在减压下除去挥发性有机溶剂，得到呈浅褐色固体的4-(对-甲苯氧基)嘧啶-5-甲腈(产率41.6％)，其用于下一步而无需进一步纯化。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)9.24(s，1H)，8.94(s，1H)，7.29(dd，J＝0.8，8.6Hz，2H)，7.21-7.16(m，2H)，2.34(s，3H).MS(ESI)m/z 211.7[M+1]+。
B. (4-(4-(三氟甲基)苯氧基)嘧啶-5-基)甲胺。向在2-丙醇(0.3M)中的4-(对-甲苯氧基)嘧啶-5-甲腈(1.0当量)中加入氢氧化铵(1.2当量)和拉尼镍。用氢气充分吹扫反应容器，并允许在室温下搅拌16小时。将反应混合物过滤通过含有硅藻土的微纤维过滤器，并用MeOH洗涤。在减压下除去挥发性有机溶剂。将残余物负载在硅胶柱上，并使用在DCM中的0-15％MeOH纯化。合并期望的级分，并在减压下除去所述溶剂，得到呈琥珀色油状物的(4-(4-(三氟甲基)苯氧基)嘧啶-5-基)甲胺，在16小时之后其转化成黄色固体。
C. 4-氯-N-((4-(对-甲苯氧基)嘧啶-5-基)甲基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-胺。将(4-(对-甲苯氧基)嘧啶-5-基)甲胺(1.0当量)置于含有DIEA(1.0当量)和DMF(0.4M)的圆底烧瓶中。将该烧瓶置于冷却浴中，并冷却至-10℃。向烧瓶中加入2，4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶(1.0当量)，并在-10℃下继续搅拌。经3小时，使反应混合物升温至室温。将反应混合物直接地负载在硅胶柱(100g)上，并使用在己烷中的5-27％乙酸乙酯，接着使用在己烷中的27％乙酸乙酯纯化。合并含有期望产物的级分(通过薄层色谱检测的较低Rf点)，并在减压下除去溶剂，得到呈浅黄色固体的4-氯-N-((4-(对-甲苯氧基)嘧啶-5-基)甲基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-胺(产率27.0％)。MS(ESI)m/z 396.2[M+1]+
D. (1s，4s)-1-甲基-4-((2-(((4-(对-甲苯氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)环己醇。将4-氯-N-((4-(对-甲苯氧基)嘧啶-5-基)甲基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-胺(1.0当量)置于含有(1s，4s)-4-氨基-1-甲基环己醇(1.0当量)、DIEA(1.2当量)和THF(0.1M)的可密封烧瓶中。用氮气吹扫该烧瓶，并密封。将反应混合物加热至60℃18小时。将反应混合物直接负载在硅胶柱上，并使用在DCM中的0-10％MeOH纯化。合并含有期望产物的级分，并在减压下除去挥发性有机溶剂，得到黄白色泡沫状物。使用标准方法纯化该泡沫状物，得到呈白色固体的顺式-1-甲基-4-((2-(((4-(对-甲苯氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)环己醇(产率40.0％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)8.51(s，1H)，8.44(s，1H)，7.99(s，1H)，7.24(d，J＝8.59Hz，2H)，7.02-7.09(m，2H)，4.67(s，2H)，3.87(br.s.，1H)，2.36(s，3H)，1.56(br.s.，6H)，1.27(br.s.，2H)，1.12(br.s.，3H).MS(ESI)m/z 489.3[M+1]+
实施例5：5-((4-((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)甲基)-2-甲基-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物
A. ((6-甲基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯.将6-甲基-4-(三氟甲基)烟腈(1.0当量)溶于MeOH(0.1M)中，加入湿的拉尼镍，接着加入氢氧化铵(32当量)。将反应容器抽空三次，用氢气再填充，然后装入氢气球，并在室温下搅拌48小时。使该混合物过滤通过短的硅藻土垫，用MeOH洗涤。当浓缩时，加入乙醇以除去过量的水。除去挥发性溶剂，得到粗产物，将其溶于DCM中。加入DIEA(1.8当量)，接着加入BOC2O (0.95当量)。在室温下，搅拌该反应1小时。除去挥发性溶剂，并经由Biotage色谱(在己烷中10-100％乙酸乙酯)纯化残余物，得到((6-甲基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(产率90％)；MS(ESI)m/z 290.3[M+1]+。
B. 5-(氨基甲基)-2-甲基-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物。向圆底烧瓶中加入溶于DCM(0.7M)中的((6-甲基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(1.0当量)。向该溶液中加入间-氯过苯甲酸(1.3当量)，并在室温下搅拌该混合物12小时。除去溶剂，得到粗固体，将其溶于MeOH中，并在室温下加入在二噁烷中的4N HCl(4.2当量)。搅拌该混合物24小时，开始形成一些沉淀。在减压下除去挥发性溶剂，得到粗残余物。将残余物溶于甲醇中，并将得到的混合物负载在Strata离子交换柱上。用水、乙腈、MeOH和在MeOH中的7N氨水连续冲洗柱。用在MeOH洗脱液中的7N氨水洗脱产物，并在减压下浓缩含有产物的洗脱液，得到呈游离碱的5-(氨基甲基)-2-甲基-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物(产率90％)；MS(ESI)m/z207.0[M+I]+。
C. 5-((4-((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)甲基)-2-甲基-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物.在110℃下加热(1S，4R)-2，2-二甲基-4-((2-(甲基亚磺酰基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)环己醇(1.0当量)和5-(氨基甲基)-2-甲基-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物(1.0当量)在在二噁烷(0.15M)中的溶液14小时。标准处理，得到5-(((4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)甲基)-2-甲基-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物(产率30％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)8.06(s，1H)7.81-7.99(m，3H)5.94-6.14(m，1H)4.53(m，2H)4.24-4.42(m，1H)3.91(m，1H)2.98-3.24(m，1H)2.23-2.39(m，3H)1.28-1.75(m，4H)0.83-1.24(m，3H)0.74(s，3H)0.57(s，3H)；MS(ESI)m/z 494.3[M+1]+。
实施例6：(1S，3R)-3-(2-((4-异丙基嘧啶-5-基)甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基氨基)-2，2-二甲基环丁醇
A. ((4-异丙基嘧啶-5-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯。在THF(0.25M)中混合(4-异丙基嘧啶-5-基)甲胺(1.0当量)、二碳酸二叔丁酯(1.0当量)和三乙胺(2.5当量)。环境温度下，搅拌该溶液。在90分钟之后，LCMS显示期望的产物混合物。将该溶液直接倾倒在100克biotage柱(在己烷中0-20％乙酸乙酯，然后在己烷中20％乙酸乙酯，之后在己烷中30％乙酸乙酯)，得到((4-异丙基嘧啶-5-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(产率33.5％)。MS(ESI)m/z252.0[M+1]+。
B. (4-异丙基嘧啶-5-基)甲胺二盐酸盐。在DCM(3.8M)中混合((4-异丙基嘧啶-5-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(1.0当量)，并冷却至0℃。然后，经由注射器加入在二噁烷(3.1当量)中的氯化氢(4M)。在环境温度下，搅拌该溶液。在5小时之后，加入氯化氢(4M)在二噁烷中的另外的溶液，并继续搅拌。在另外2小时之后，在减压下除去挥发性有机溶剂，得到呈双盐酸盐的(4-异丙基嘧啶-5-基)甲胺二盐酸盐(产率95％)。MS(ESI)m/z 151.3[M+1]+。
C. 2，2-二甲基-3-氧代环丁烷羧酸甲酯。在氮气下，向1-氯-N，N，2-三甲基丙-1-烯-1-胺(1.0当量)和三氟甲烷磺酸锌(1.3当量)的搅拌混合物中加入丙烯酸甲酯(1.2当量)。然后，将得到的混合物超声处理12小时。在反应完成之后，加入碳酸氢钠水溶液，并用乙酸乙酯萃取该混合物，用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。在真空下浓缩滤液，并通过硅胶柱色谱(在石油醚中20％乙酸乙酯)纯化残余物，得到呈黄色油状物的标题产物(产率37％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)3.76(s，3H)，3.59-3.51(m，1H)，3.15-3.06(m，1H)，2.99-2.94(m，1H)，1.32(s，3H)，1.12(s，3H)。
D. 2，2-二甲基-3-氧代环丁烷羧酸。向2，2-二甲基-3-氧代环丁烷羧酸甲酯(1.0当量)在MeOH(1.1M)中的溶液中加入氢氧化钠水溶液(4.48N，2.0当量)，并在50℃下搅拌得到的混合物2小时。如通过薄层色谱监测起始材料的消耗，用在石油醚中的20％乙酸乙酯洗脱。在除去挥发性溶剂之后，将盐酸盐水溶液(2N，1.4当量)加入到反应混合物中，并用乙酸乙酯萃取该混合物。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。在真空中浓缩滤液，得到呈白色固体的产物(产率88％)，其用于下一步而无需进一步纯化。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ(ppm)12.4(br，1H)，3.31-3.23(m，1H)，3.17-3.08(m，1H)，2.97-2.91(m，1H)，1.22(s，3H)，1.04(s，3H)。
E. (2，2-二甲基-3-氧代环丁基)氨基甲酸叔丁酯。在0℃下，向2，2-二甲基-3-氧代环丁烷羧酸(1.0当量)和三乙胺(1.5当量)在甲苯(0.2M)中的溶液中慢慢地加入二苯基磷酰基叠氮化物(1.5当量)。然后，在100℃下搅拌该混合物4小时。将反应混合物冷却至室温，并加入叔丁醇(2.5当量)。然后，将得到的混合物回流15小时。在反应完成之后，加入碳酸氢钠水溶液，并用乙酸乙酯萃取该混合物，用碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤有机层，经无水硫酸钠干燥并过滤。在真空下浓缩滤液，并通过硅胶柱色谱(在石油醚中7％乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题产物(产率16％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)4.79(br，1H)，4.03-4.01(m，1H)，3.43(dd，J1＝18.0Hz，J2＝9.0Hz，1H)，2.94(dd，J1＝18.0Hz，J2＝6.9Hz，1H)，1.48(s，9H)，1.28(s，3H)，1.13(s，3H)。
F. (3-羟基-2，2-二甲基环丁基)氨基甲酸叔丁酯。在0℃下，向(2，2-二甲基-3-氧代环丁基)氨基甲酸叔丁酯(1.0当量)在MeOH(0.1M)中的溶液中分小批加入硼氢化钠(1.0当量)。在加入之后，在室温下搅拌该混合物2小时，然后用丙酮淬灭该混合物。在真空下除去溶剂，使残余物通过短硅胶柱色谱(在石油醚中40％乙酸乙酯)，得到粗标题产物(产率85％)，其用于下一步而无需进一步纯化。MS(ESI)m/z 216.2[M+H]+。
G. 3-氨基-2，2-二甲基环己醇。在0℃下，向(3-羟基-2，2-二甲基环丁基)氨基甲酸叔丁酯(1.0当量)在无水DCM(0.5M)中的溶液中加入TFA(1.4当量)，并在室温下搅拌该混合物30分钟。在除去挥发性溶剂之后，用氨水的MeOH溶液中和残余物，并浓缩最终得到的混合物，得到粗标题产物，其用于下一步而无需进一步纯化。MS(ESI)m/z 116.2[M+H]+。
H. 3-氨基-2，2-二甲基环丁醇盐酸盐。通过手性SFC(仪器：Thar200制备SFC，柱：ChiralPak IC-10μm，250×30mm I.D，流动相A：CO2和25％B：异丙醇，流速：200mL/min，背压：100bar，柱温：38℃，波长：210nm，循环时间：～4.5min)分离3-氨基-2，2-二甲基环丁醇。分离峰1，得到3-羟基-2，2-二甲基环丁基氨基甲酸酯的一种异构体。为了分离化合物，在0℃下，加入HCl(g)/MeOH(4.0当量)，然后在室温下搅拌20分钟。在减压下浓缩该混合物，得到呈白色固体的3-氨基-2，2-二甲基环丁醇盐酸盐(产率22％)。1H NMR(DMSO-d6 400MHz)δ(ppm)8.26(s，3H)，3.53-3.57(m，1H)，2.84-2.85(m，1H)，2.35-2.40(m，1H)，1.85-1.88(m，1H)，1.06(s，3H)，0.99(s，3H)。
I. (1S，3R)-2，2-二甲基-3-((2-(甲硫基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)环丁醇。在圆底烧瓶中，在THF(1.0M)和DMF(1.0M)中混合3-氨基-2，2-二甲基环丁醇盐酸盐(峰1，上述得到的)(1.0当量)和DIEA(1.3当量)。在0℃下，向该溶液中加入4-氯-2-(甲硫基)-5-(三氟甲基)嘧啶(1.0当量)。经2小时使该混合物升温至室温。LCMS显示期望产物。加入乙酸乙酯，分离有机相，并经硫酸钠干燥。过滤有机相，并浓缩成残余物。通过硅胶色谱(Biotage柱，在乙酸乙酯中0-50％己烷；340g SNAP柱)纯化干残余物。浓缩期望的级分，得到标题化合物。如对于本文所述其它中间体所述的，通过X-射线晶体衍射测定立体化学。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ(ppm)8.22(d，J＝0.63Hz，1H)5.21(br.s.，1H)4.08-4.23(m，1H)3.78-3.91(m，1H)2.80(dt，J＝11.66，7.41Hz，1H)2.52-2.57(m，3H)1.79(ddd，J＝11.66，9.46，7.88 Hz，1H)1.67(d，J＝6.31Hz，1H)1.24-1.32(m，3H)0.97-1.06(m，3H)。
J. (1S，3R)-3-(2-((4-异丙基嘧啶-5-基)甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基氨基)-2，2-二甲基环丁醇。在圆底烧瓶中，在THF(0.5M)中混合(1S，3R)-2，2-二甲基-3-((2-(甲硫基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)环丁醇(1.0当量)和3-氯苯并过氧酸(2.0当量)。在25℃下，搅拌该反应45分钟。用乙酸乙酯稀释混合物。向该溶液中加入碳酸钾(4.0当量)。在室温下，搅拌该混合物30分钟，然后过滤。浓缩滤液，得到粗产物。在环境温度下，在二噁烷(0.4M)中混合(1S，3R)-2，2-二甲基-3-((2-(甲基磺酰基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)环丁醇(1.0当量)、DIEA(3.0当量)和(4-异丙基嘧啶-5-基)甲胺二盐酸盐(1.5当量)，并搅拌。加入另外的二噁烷以确保溶解。在室温下1小时之后，LCMS指示存在一些产物。在12小时之后，将反应加热至75℃6小时。标准处理得到标题化合物(产率39％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)8.97(s，1H)8.32-8.68(m，1H)8.03(s，1H)7.26-7.93(m，1H)6.07(d，J＝7.03Hz，1H)4.79(m，1H)4.54(br.s.，2H)3.80-3.96(m，1H)3.37-3.59(m，1H)2.15-2.41(m，1H)2.05(m，1H)1.06-1.24(m，6H)0.67-0.92(m，6H)；MS(ESI)m/z 411.3[M+1]+。
实施例7：4-((1R，3S)-3-羟基-2，2-二甲基环丁基氨基)-2-((4-异丙基嘧啶-5-基)甲基氨基)嘧啶-5-甲腈；4-((1S，3R)-3-羟基-2，2-二甲基环丁基氨基)-2-((4-异丙基嘧啶-5-基)甲基氨基)嘧啶-5-甲腈
A. 4-(3-乙氧基-2，2-二甲基环丁基氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。用碳酸钾粉末(3.0当量)处理3-乙氧基-2，2-二甲基环丁烷胺(1.0当量)和4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.1equiv.)在叔丁醇/1，2-二氯乙烷(0.5M)中的溶液。然后，在70℃下，在氮气下加热得到的反应混合物3小时。在冷却之后，加入乙酸乙酯，并强力搅拌该混合物。通过真空-过滤除去固体。浓缩滤液，并进一步干燥，得到蜡状、黄色固体(产率100％)，其用于下一步而无需进一步纯化。MS(ESI)m/z 293.0[M+1]+。
B. 4-(3-羟基-2，2-二甲基环丁基氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。用在DCM(3.0当量)中的1.0M三溴硼烷处理4-((3-乙氧基-2，2-二甲基环丁基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.0当量)在DCM(0.7M)中的冷却的(0℃)、搅拌溶液。除去冷却浴，并在室温下搅拌该反应混合物1小时。用MeOH淬灭反应。加入DCM和饱和的碳酸氢钠。用DCM萃取分离的水层。将有机萃取物经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到褐色油状物，通过硅胶柱色谱(在己烷中0-45％乙酸乙酯，25g柱)纯化，得到黄色固体(产率37％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)8.24(s，1H)，5.42(d，J＝7.03Hz，1H)，4.09(dt，J＝7.62，9.37Hz，1H)，3.80-3.89(m，1H)，2.77(dt，J＝7.42，11.72Hz，1H)，2.48-2.54(m，3H)，1.84(ddd，J＝8.20，9.47，11.62Hz，1H)，1.74(d，J＝6.25Hz，1H)，1.23-1.28(m，3H)，0.99-1.03(m，3H).MS(ESI)m/z 264.8[M+1]+。
C. 4-(3-羟基-2，2-二甲基环丁基氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈。在室温下，用77％的3-氯过苯甲酸(2.0当量)分批(portion-wise)处理4-((3-羟基-2，2-二甲基环丁基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.0当量)在THF(0.25M)中的溶液，并慢慢地保持温度降低。在室温下，搅拌反应溶液1小时，LCMS显示完全反应，形成上述两种产物。用乙酸乙酯稀释该反应，并用碳酸钾粉末(4.0当量)处理。强力搅拌该混合物2小时并过滤。用乙酸乙酯充分冲洗滤饼。浓缩滤液，得到0.76g(粗100％)的黄色泡沫状物，其用于下一步而无需进一步纯化。MS(ESI)m/z 297.1[M+1]+.MS(ESI)m/z 281.1[M+1]+。
D. (4-异丙基嘧啶-5-基)甲胺。在真空下，使4-(2-氟丙-2-基)嘧啶-5-甲腈(1.0当量)和拉尼镍在THF(0.5M)中的混合物脱气。在室温下，在完全充气的气球下，氢化得到的混合物过夜。将该混合物过滤通过硅藻土垫，并用MeOH洗涤滤饼。浓缩滤液，并进一步干燥，得到褐色油状物，通过硅胶柱色谱(在乙酸乙酯中0-20％MeOH，50g柱)纯化，得到(产率30％)呈上述两种产物的3∶2混合物的浅黄色油状物。MS(ESI)m/z 152.0[M+1]+.MS(ESI)m/z 170.0[M+1]+。
E. 4-((1R，3S)-3-羟基-2，2-二甲基环丁基氨基)-2-((4-异丙基嘧啶-5-基)甲基氨基)嘧啶-5-甲腈和4-((1S，3R)-3-羟基-2，2-二甲基环丁基氨基)-2-((4-异丙基嘧啶-5-基)甲基氨基)嘧啶-5-甲腈.在110℃下，通过微波加热粗(4-异丙基嘧啶-5-基)甲胺(2.0当量)和4-((3-羟基-2，2-二甲基环丁基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈(1.0当量)在二噁烷(0.2M)中的溶液1小时。浓缩该反应，得到固体残余物，通过标准手性分离方法纯化，得到下述两种化合物。
4-((1R，3S)-3-羟基-2，2-二甲基环丁基氨基)-2-((4-异丙基嘧啶-5-基)甲基氨基)嘧啶-5-甲腈.对于其它化合物，如本文所述的确定绝对立体化学。99.5％ee。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)8.96-9.03(m，1H)，8.43-8.54(m，1H)，8.17-8.24(m，1H)，8.11(t，J＝5.66Hz，1H)，7.29(d，J＝7.42Hz，1H)，4.81(d，J＝5.47Hz，1H)，4.50-4.62(m，2H)，3.74-3.85(m，1H)，3.39-3.54(m，1H)，3.28(dt，J＝6.69，13.57Hz，1H)，2.19-2.36(m，1H)，2.08-2.19(m，1H)，1.18(d，J＝5.47Hz，3H)，1.20(d，J＝5.47Hz，3H)，1.14(s，1H)，0.87(s，2H)，0.78(s，3H)；MS(ESI)m/z 368.1[M+1]+。
4-((1S，3R)-3-羟基-2，2-二甲基环丁基氨基)-2-((4-异丙基嘧啶-5-基)甲基氨基)嘧啶-5-甲腈。100％ee。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)8.98-9.03(m，1H)，8.44-8.53(m，1H)，8.17-8.24(m，1H)，8.11(t，J＝5.86Hz，1H)，7.29(d，J＝7.42Hz，1H)，4.81(d，J＝5.08Hz，1H)，4.49-4.62(m，2H)，3.74-3.85(m，1H)，3.41-3.55(m，1H)，3.28(dt，J＝6.54，13.47Hz，1H)，2.19-2.35(m，1H)，2.09-2.19(m，1H)，1.19(d，J＝0.78Hz，3H)，1.19(d，J＝11.72Hz，3H)，1.14(s，1H)，0.87(s，2H)，0.78(s，3H)；MS(ESI)m/z 368.1[M+1]+。
实施例8：(1S，3R)-3-((2-(((4-(2-氟丙烷-2-基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基环丁醇
A. ((4-(2-氟丙烷-2-基)嘧啶-5-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯。在THF(0.25M)中混合(4-(2-氟丙烷-2-基)嘧啶-5-基)甲胺和(4-异丙基嘧啶-5-基)甲胺(1.0当量)、二碳酸二叔丁酯(1.0当量)和三乙胺(2.5当量.)的混合物。在环境温度下，搅拌该溶液。在90分钟之后，将溶液直接倾倒在100克biotage柱(在己烷(2.5L)中0-20％乙酸乙酯，接着在己烷中20％乙酸乙酯，之后在己烷中30％乙酸乙酯)上，得到期望的氟代产物(产率39％)。MS(ESI)m/z 270.0[M+1]+。
B. (4-(2-氟丙烷-2-基)嘧啶-5-基)甲胺二盐酸盐。环境温度下，在DCM(1.5M)中混合((4-(2-氟丙烷-2-基)嘧啶-5-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(1.0当量)，并经由注射器加入在二噁烷中的4.0M氯化氢。在环境温度下，搅拌该溶液。在16小时之后，在减压下浓缩溶液，得到呈白色固体的标题化合物(产率100％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 9.17(d，J＝1.56Hz，1H)，8.89(s，1H)，8.32(br.s.，2H)，4.22(dd，J＝5.66，3.32Hz，2H)，1.59-1.84(m，6H)；MS(ESI)m/ [M+1]+。
C. (1S，3R)-2，2-二甲基-3-((2-(甲基磺酰基)-5-(三氟甲基)-嘧啶-4-基)氨基)环丁醇和(1S，3R)-2，2-二甲基-3-((2-(甲基亚磺酰基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)环丁醇。经30秒，用3-氯过苯甲酸(2.0当量)分批处理(1S，3R)-2，2-二甲基-3-((2-(甲硫基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)环丁醇(1.0当量)在THF(0.5M)中的溶液。在环境温度下，搅拌反应溶液。在45分钟之后，用乙酸乙酯稀释该溶液，接着加入颗粒状碳酸钾(4.0当量)。在环境温度下，搅拌混合物30分钟。然后，将该溶液过滤通过纸滤料(paper frit)，并在减压下浓缩滤液，得到80％砜和20％亚砜的白色泡沫状物(产率96％)。MS(ESI)m/z324.0[M+1]+and MS(ESI)m/z340.4[M+1]+。
D. (1S，3R)-3-((2-(((4-(2-氟丙烷-2-基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基环丁醇。在环境温度下，在二噁烷(0.4M)中混合(1S，3R)-2，2-二甲基-3-((2-(甲基磺酰基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)环丁醇(1.0当量)和(4-(2-氟丙烷-2-基)嘧啶-5-基)甲胺二盐酸盐(1.3当量)，并搅拌。在1小时之后，将该溶液加热至75℃。在16小时之后，在减压下浓缩溶液，并在标准处理之后，得到标题化合物(产率50.9％)。如本文对于其它化合物所述，使用手性中间体，确定绝对立体化学。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)9.01(s，1H)，8.47-8.67(m，1H)，7.94-8.14(m，1H)，7.78(br.s.，1H)，6.07(d，J=7.81Hz，1H)，4.66-4.91(m，2H)，3.35(br.s.，1H)，1.96-2.22(m，1H)，1.62-1.82(m，6H)，0.54-1.23(m，6H)；MS(ESI)m/z429.3[M+1]+。
实施例9：3-(((5-氰基-4-(((1s，4s)-4-羟基-4-甲基环己基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物
A. 3-(((5-氰基-4-(((1s，4s)-4-羟基-4-甲基环己基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物.将3-(((4-氯-5-氰基嘧啶-2-基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物(1.0当量)置于含有(1s，4s)-4-氨基-1-甲基环己醇(1.1当量)、DIEA(1.1当量)和THF(0.3M)的可密封烧瓶中。用氮气吹扫烧瓶并密封。将反应混合物加热至60℃18小时。在标准处理之后，得到3-(((5-氰基-4-(((1s，4s)-4-羟基-4-甲基环己基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物(产率57％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)8.26-8.35(m，1H)8.15-8.25(m，2H)7.94-8.09(m，1H)7.70-7.81(m，1H)7.31(d，J=7.42Hz，1H)4.44-4.66(m，2H)3.85-4.10(m，1H)1.54-1.71(m，1H)1.43(m，1H)1.22(m，1H)0.92-1.14(m，4H)；MS(ESI)m/z423.4[M+1]+。
实施例10：2-(((2-氟-4-苯基嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1s，4s)-4-羟基-4-甲基环己基)氨基)嘧啶-5-甲腈
A. 4-(((1s，4s)-4-羟基-4-甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。在50℃，搅拌4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.0当量)、(1s，4s)-4-氨基-1-甲基环己醇(1.2当量)和DIEA(2.4当量)在THF(0.2M)中的混合物2小时。在反应完成之后，在减压下除去溶剂，并通过硅胶柱色谱(在石油醚中20％乙酸乙酯)纯化残余物，得到呈白色固体的标题化合物(产率83％)。MS(ESI)m/z279.1[M+H]+。
B. 4-(((1s，4s)-4-羟基-4-甲基环己基)氨基)-2-(甲基亚磺酰基)嘧啶-5-甲腈和4-(((1s，4s)-4-羟基-4-甲基环己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈的混合物。在0℃下，向4-(((1s，4s)-4-羟基-4-甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.0当量)在DCM(0.5M)中的冷却溶液中分小批加入3-氯过苯甲酸(1.1当量)。然后，在室温下搅拌该混合物1小时。在反应完成之后，浓缩反应混合物。通过硅胶柱色谱(在DCM中10％MeOH)纯化残余物，得到呈白色固体的期望产物，其用于下一步而没有进一步纯化。MS(ESI)m/z＝295.2[M+1]+/311.2[M+1]+。
C. 3-氧代-3-苯基丙腈。在氮气下，向苯甲酸甲酯(1.0当量)和甲基氰(2.0当量)在无水THF(1.0M)中的溶液中加入氢化钠(在矿物油中60％，2当量)。在将搅拌得到的反应混合物在70℃下过夜之后，用冰-水淬灭反应混合物，并用乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤合并的有机层，经无水硫酸钠干燥并过滤。在真空下浓缩，得到呈褐色固体的粗产物。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)7.94-7.92(m，2H)，7.69-7.65(m，1H)，7.55-7.54(m，2H)，4.08(s，2H)。
D. 2-氨基-4-苯基嘧啶-5-甲腈。在50℃下，在氮气下，搅拌3-氧代-3-苯基丙腈(1.0当量)在1，1-二甲氧基-N，N-二甲基甲胺(2.2M)中的溶液过夜。在反应完成之后，浓缩该反应混合物。通过硅胶柱色谱(在石油醚中30％乙酸乙酯)纯化残余物，得到呈黄色油状物的2-苯甲酰基-3-(二甲基氨基)丙烯腈(产率8％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)7.83(s，1H)，7.61-7.60(m，2H)，7.52-7.50(m，1H)，7.47-7.45(m，2H)，3.37(s，3H)，3.28(s，3H)；MS (ESI)m/z＝201.2[M+1]+。
在80℃下，在氮气下，搅拌2-苯甲酰基-3-(二甲基氨基)丙烯腈(1.0当量)、碳酸钾(2.0当量)和硝酸胍(1.3当量)在乙醇(0.2M)中的溶液过夜。在反应完成之后，浓缩该反应混合物。通过硅胶柱色谱(在石油醚中30％乙酸乙酯)纯化残余物，得到呈黄色固体的期望混合物产物(产率48％)，其用于下一步而无需进一步纯化。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)8.73(s，1H)，7.87-7.83(m，4H)，7.58-7.56(m，3H)；MS(ESI)m/z＝197.2[M+1]+。
E. 5-(氨基甲基)-4-苯基嘧啶-2-胺。向2-氨基-4-苯基嘧啶-5-甲腈(1.0当量)在THF(0.15M)中的溶液中加入氢氧化铵和拉尼镍。在室温下，在氢气氛下，搅拌该混合物过夜，然后使反应混合物过滤通过硅藻土。在真空中浓缩滤液，得到呈黄色固体的粗标题化合物(产率56％)。使用该产物而无需进一步纯化。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ(ppm)8.34(s，1H)，7.69-7.65(m，2H)，7.46-7.44(m，3H)，6.50(br，2H)，3.54(s，2H)，1.70(br，2H)；MS(ESI)m/z＝201.2[M+1]+。
F. 2-(((2-氨基-4-苯基嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1s，4s)-4-羟基-4-甲基环己基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在微波反应器中，在120℃下，搅拌4-(((1s，4s)-4-羟基-4-甲基环己基)氨基)-2-(甲基亚磺酰基)嘧啶-5-甲腈和4-(((1s，4s)-4-羟基-4-甲基环己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈(1.0当量)、5-(氨基甲基)-4-苯基嘧啶-2-胺(1.0当量)和DIEA(1.7当量)在THF(0.2M)中的混合物2小时。在反应完成之后，在减压下除去溶剂，并通过硅胶色谱(在DCM中5％甲醇)纯化残余物，得到呈黄色固体的期望产物(产率74％)。MS(ESI)m/z431.2[M+H]+。
G. 2-(((2-氟-4-苯基嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1s，4s)-4-羟基-4-甲基环己基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在0℃下，经30分钟，向2-(((2-氨基-4-苯基嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1s，4s)-4-羟基-4-甲基环己基)氨基)嘧啶-5-甲腈(1.0当量)在四氟硼酸和丙酮中的悬浮液中滴加亚硝酸钠(1.7当量)水溶液，然后在室温下搅拌该反应混合物2小时。用碳酸氢钠粉末淬灭反应，并标准处理，得到呈白色固体的标题化合物(产率6％)。1H-NMR(400MHz，CD30D)δ(ppm)8.59(s，1H)，7.97(s，1H)，7.61-7.60(m，2H)，7.47-7.46(m，3H)，4.60(s，2H)，3.55-3.53(m，1H)，1.65-1.49(m，6H)，1.40-1.35(m，2H)，1.10(s，3H)；MS(ESI)m/z433.2[M+H]+。
实施例11：3-(((4-(((1R，3S)-3-(羟甲基)-2，2-二甲基环丁基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物
A. 3-(((4-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物。将3-(氨基甲基)-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物盐酸盐(1.0当量)溶于DIEA(2.5当量)和DMF(0.4M)中。使用冰和盐水浴将该均质溶液冷却至-20℃。向该溶液中加入2，4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶(1.0当量)。在-20℃下，搅拌该溶液10分钟，然后升温至环境温度30分钟。在30分钟之后，用乙酸乙酯和水稀释该溶液。分离水层，并用乙酸乙酯(3X)萃取。合并有机层，并经硫酸镁干燥，过滤并在减压下除去溶剂，得到白色固体。经由biotage色谱(在己烷中0-60％乙酸乙酯，然后60％乙酸乙酯)纯化固体，得到呈白色固体的标题化合物(产率47％)。MS(ESI)m/z372.8[M]+。
B. 3-(((4-(((1R，3S)-3-(羟甲基)-2，2-二甲基环丁基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物。在乙醇(0.1M)中混合3-(((4-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物(1.0当量)、((1S，3R)-3-氨基-2，2-二甲基环丁基)MeOH和DIEA(1.2当量)。在螺帽的(screw capped)闪烁瓶中，在85℃下搅拌该溶液。在16小时之后，在减压下浓缩溶液，并通过标准手性分离方法纯化残余物，得到标题化合物(产率54％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)8.26(d，J＝6.64Hz，1H)，8.07(s，1H)，7.96-8.03(m，1H)，7.89-7.96(m，1H)，7.75(d，J＝6.64Hz，1H)，6.30(d，J＝7.81Hz，1H)，4.61(br.s.，2H)，4.25-4.41(m，1H)，4.04-4.18(m，1H)，1.90-2.02(m，1H)，1.73-1.89(m，1H)，1.54-1.69(m，1H)，1.21(br.s.，1H)，0.68-0.92(m，6H)；MS(ESI)m/z466.2[M+1]。
实施例12：(1R，2R，5S)-2-甲基-5-(5-(三氟甲基)-2-((4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基氨基)嘧啶-4-基氨基)环己醇
A. 4-氯-5-(三氟甲基)-N-((4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)嘧啶-2-胺.将(4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲胺HCl(1.0当量)置于含有DIEA(2.5M)和DMF(0.6M)的圆底烧瓶中。将该烧瓶冷却至0℃，并慢慢地分批加入2，4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶(1.0当量)。将反应混合物搅拌过夜，并使其升温至室温。将反应混合物直接负载在硅胶柱上，并使用在己烷中的0-20％乙酸乙酯，接着使用在己烷中的20％乙酸乙酯纯化。合并含有期望异构体的级分(通过薄层色谱检测的较低Rf点)，并在减压下除去挥发性有机溶剂，得到呈白色固体的4-氯-5-(三氟甲基)-N-((4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)嘧啶-2-胺(产率17.2％)。MS(ESI)m/z357.2[M+1]+。
B. (1R，2R，5S)-2-甲基-5-(5-(三氟甲基)-2-((4-(三氟甲基)-吡啶-3-基)甲基氨基)嘧啶-4-基氨基)环己醇。将4-氯-5-(三氟甲基)-N-((4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)嘧啶-2-胺(1.0当量)置于含有(1R，2R，5S)-5-氨基-2-甲基环己醇(1.1当量)、DIEA(2.0当量)和THF(0.1M)的可密封烧瓶中。用氮气吹扫该烧瓶并密封。将反应混合物加热至60℃18小时。标准处理，得到呈白色固体的(1R，2R，5S)-2-甲基-5-(5-(三氟甲基)-2-((4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基氨基)嘧啶-4-基氨基)环己醇(产率47.3％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)8.65-8.76(m，2H)8.01-8.14(m，1H)7.71(d，J=5.08Hz，1H)5.74(br.s.，1H)4.67-4.80(m，1H)4.57-4.67(m，1H)4.54(br.s.，1H)4.39(d，J=4.30Hz，1H)4.14(br.s.，1H)3.21-3.31(m，1H)1.78(br.s.，1H)1.54(br.s.，1H)1.41(br.s.，1H)1.33(br.s.，1H)1.10-1.24(m，1H)0.96(br.s.，1H)0.81-0.89(m，2H).MS(ESI)m/z450.2[M+1]+
实施例13：顺式-4-((5-氰基-2-(((4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N-甲基环己烷甲酰胺
A. 4-氯-2-((4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基氨基)嘧啶-5-甲腈。向在DMF(1.0M)中的(4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲胺盐酸盐(1.0当量)中加入DIEA(2.5当量)。将该反应冷却至-20℃(冰/盐水浴)，然后加入2，4-二氯嘧啶-5-甲腈(1.0当量)。搅拌该反应混合物10分钟，然后从冰浴移出，并允许搅拌30分钟。将反应混合物用乙酸乙酯稀释，并用水分配。分离有机层，并在减压下除去挥发性溶剂。使用硅胶色谱(在己烷中的5-50％乙酸乙酯)纯化残余物。合并期望的级分，并在减压下除去挥发性溶剂。将残余物在己烷中的10％乙酸乙酯中研磨，过滤，用己烷洗涤，并在真空中干燥，得到呈浅黄褐色固体的4-氯-2-(((4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)氨基)嘧啶-5-甲腈(产率43.0％)；MS(ESI)m/z 314.0[M+1]+。
B. 顺式-4-((5-氰基-2-(((4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N-甲基环己烷甲酰胺。将4-氯-2-(((4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)氨基)嘧啶-5-甲腈(1.0当量)置于含有(1s，4s)-4-氨基-N-甲基环己烷甲酰胺(1.0当量)、1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(1.2当量)和THF(0.1M)的可密封烧瓶中。用氮气吹扫该烧瓶并密封。将反应混合物加热至60℃18小时。标准处理得到呈白色固体的顺式-4-((5-氰基-2-(((4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N-甲基环己烷甲酰胺(产率48.2％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)8.73(d，J＝5.08Hz，1H)，8.64-8.69(m，1H)，8.29(t，J＝5.66Hz，1H)，8.21(s，1H)，7.72(d，J＝5.08Hz，1H)，7.53-7.66(m，1H)，7.00-7.12(m，1H)，4.62-4.73(m，2H)，3.69(br.s.，1H)，2.53-2.61(m，3H)，2.15-2.30(m，1H)，1.70-1.97(m，2H)，1.42-1.62(m，3H)，1.15-1.27(m，3H).MS(ESI)m/z434.3[M+1]+
实施例14：3-((4-(3-羟基-2，2，4，4-四甲基环丁基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)甲基)-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物
A. 3-((4-(3-羟基-2，2，4，4-四甲基环丁基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)甲基)-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物。将DIEA(3.0当量)置于含有3-(((4-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物(1.0当量)、3-氨基-2，2，4，4-四甲基环丁醇(2.0当量)(制备参见J.Med.Chem.2011，54，7693-7704)和乙醇的可密封烧瓶中。用氮气吹扫烧瓶并密封。将反应混合物加热至80℃9小时。标准处理得到下述化合物。基于在本文所述生物化学测定中如本文提供的其它化合物类似的活性对立体化学进行归属。
3-((4-((1R，3R)-3-羟基-2，2，4，4-四甲基环丁基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)甲基)-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.28(d，J=6.25Hz，1H)8.09-8.18(m，1H)8.00-8.08(m，1H)7.96(s，1H)7.75(m，1H)5.26(m，1H)4.60(m，2H)3.77(m，1H)3.34(s，1H)0.71-1.15(m，12H)；MS(ESI)m/z 480.0[M+1]+。
3-((4-((1S，3S)-3-羟基-2，2，4，4-四甲基环丁基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)甲基)-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)8.27(d，J=6.64Hz，1H)8.06-8.17(m，2H)8.00(s，1H)7.75(m，1H)5.12(m，1H)4.90(br.s.，1H)4.60(m，2H)3.65-3.86(m，1H)3.26(br.s.，1H)3.14(m，1H)0.68-0.93(m，12H)；MS(ESI)m/z 480.0[M+1]+。
实施例15：2-(((4-乙基嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1S，3R)-3-羟基-2，2，3-三甲基环丁基)氨基)嘧啶-5-甲腈，2-(((4-乙基嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1R，3S)-3-羟基-2，2，3-三甲基环丁基)氨基)嘧啶-5-甲腈
A. 4-乙基嘧啶-5-甲腈.在室温下，搅拌3-氧代戊烷腈(1.0当量)和1，1-二甲氧基-N，N-二甲基甲胺(4.3M)在THF(1.6M)中的混合物过夜。在反应完成之后，在真空中除去溶剂，得到粗2-((二甲基氨基)亚甲基)-3-氧代戊烷腈(0.98当量)，其用于下一步而无需进一步纯化。MS(ESI)m/z152.1[M+H]+0
将粗2-((二甲基氨基)亚甲基)-3-氧代戊烷腈(0.98当量)、甲脒盐酸盐(2.0当量)和三乙胺(2.0当量)在乙醇(1.0M)中的混合物回流36小时。除去溶剂，并通过二氧化硅柱色谱(在石油醚中20％乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题产物(产率35％)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)9.20(s，1H)，8.83(s 1H)，2.98(d，J＝7.6Hz，2H)，1.32(t，J＝7.6Hz，3H)；MS(ESI)m/z134.1[M+H]+。
B. (4-乙基嘧啶-5-基)甲胺。向4-乙基嘧啶-5-甲腈(1.0当量)在MeOH(0.4M)中的溶液中加入氢氧化铵和拉尼镍。在氢气氛下，在室温下，搅拌该混合物过夜，然后将反应混合物过滤通过硅藻土。在真空中浓缩滤液，得到粗标题化合物(59％)，其用于下一步而无需进一步纯化。MS(ESI)m/z138.1/[M+H]+。
C. 4-氯-2-(((4-乙基嘧啶-5-基)甲基)氨基)嘧啶-5-甲腈。向2，4-二氯嘧啶-5-甲腈(1.0当量，61.4)和(4-乙基嘧啶-5-基)甲胺(1.0当量)在异丙醇(0.2M)中的混合物中加入DIEA(2.0当量)。在氮气下，在室温下，搅拌该混合物过夜。用乙酸乙酯萃取反应混合物，用氯化铵溶液洗涤有机层，并在真空下浓缩得到粗产物，通过硅胶色谱(在石油醚中30％乙酸乙酯)纯化，得到呈褐色固体的标题化合物(产率11.4％)。1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)9.95(d，J＝3.2Hz，1H)，8.64(d，J＝12.0Hz，1H)，8.58(d，J＝19.6Hz，1H)，4.70(d，J＝20.4Hz，2H)，2.97-2.87(m，2H)，1.33-1.27(m，3H)；MS(ESI)m/z 275.1[M+H]+。
D. 2，2-二甲基-3-氧代环丁烷羧酸甲酯。在氮气氛下，向1-氯-N，N，2-三甲基丙-1-烯-1-胺(1.0当量)和三氟甲烷磺酸锌(1.3当量)的混合物中加入丙烯酸甲酯(1.3当量)，同时搅拌。然后，将得到的混合物超声处理12小时。用水淬灭该混合物，并用DCM萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。在减压下蒸发滤液，并通过硅胶色谱(在石油醚中8％乙酸乙酯)纯化残余物，得到呈浅黄色油状物的标题化合物(产率37％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)3.76(s，3H)，3.59-3.51(m，1H)，3.15-3.06(m，1H)，2.99-2.94(m，1H)，1.32(s，3H)，1.12(s，3H)。
E. 2，2-二甲基-3-氧代环丁烷羧酸。向2，2-二甲基-3-氧代环丁烷羧酸甲酯(1.0当量)在MeOH(1.1M)中的溶液中加入氢氧化钠水溶液(4.48N，2.0当量)，并在50℃下搅拌得到的混合物2小时。在反应完成之后，在减压下除去过量的MeOH，并用***萃取该混合物，然后用盐酸(4N，2.9当量)中和水溶液。用乙酸乙酯萃取该混合物，用盐水洗涤有机层，经无水硫酸钠干燥并过滤。在真空下浓缩滤液，得到呈白色固体的标题产物(产率88％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ(ppm)12.4(br，1H)，3.31-3.23(m，1H)，3.17-3.08(m，1H)，2.97-2.91(m，1H)，1.22(s，3H)，1.04(s，3H)。
F. (2，2-二甲基-3-氧代环丁基)氨基甲酸叔丁酯。在冰-水浴下，向2，2-二甲基-3-氧代环丁烷羧酸(1.0当量)和三乙胺(1.5当量)在甲苯(0.2M)中的溶液中慢慢地加入二苯基磷酰基叠氮化物(2.0当量)。然后，在100℃下搅拌该混合物4小时。将反应混合物冷却至室温，并加入叔丁醇(2.2当量)。将得到的混合物回流15小时。在混合物冷却之后，加入碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯。分离有机层，并用乙酸乙酯萃取水溶液。将合并的有机层用碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。在真空下浓缩滤液，通过硅胶柱色谱(在石油醚中7％乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题产物(产率16％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)4.81-4.70(m，1H)，4.05-3.93(m，1H)，3.37(dd，J1＝18.0Hz，J2＝9.0Hz，1H)，2.89(dd，J1＝18.0Hz，J2＝6.9Hz，1H)，1.48(s，9H)，1.28(s，3H)，1.13(s，3H)。
G. (3-羟基-2，2，3-三甲基环丁基)氨基甲酸叔丁酯。在氮气下，向(2，2-二甲基-3-氧代环丁基)氨基甲酸叔丁酯(1.0当量)在无水THF(0.15M)中的溶液中分批加入甲基锂(在***中1.6M，4.0当量)，保持温度低于-70℃。在该温度下搅拌该混合物1小时。用氯化铵水溶液淬灭该混合物，并用乙酸乙酯萃取该混合物，用碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。在真空下浓缩滤液，通过硅胶柱色谱(在石油醚中5％至25％乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题产物(产率30％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)4.65-4.52(m，1H)，3.60-3.49(m，1H)，2.37-2.28(m，1H)，1.84-1.76(m，1H)，1.66(s，1H)，1.44(s，9H)，1.28(s，3H)，1.06(s，3H)，1.01(s，3H)；MS(ESI)m/z230.2[M+H]+。
H. 3-氨基-1，2，2-三甲基环丁醇。在0℃下，向(3-羟基-2，2，3-三甲基环丁基)氨基甲酸叔丁酯(1.0当量)在无水DCM(0.5M)中的溶液中加入三氟乙酸(1.0M)，并在室温下搅拌该混合物30分钟。在除去挥发性溶剂之后，通过氨水MeOH溶液中和残余物，并浓缩最终得到的混合物，得到粗标题产物，其用于下一步而无需进一步纯化。MS(ESI)m/z130.1[M+H]+。
I. 2-(((4-乙基嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1S，3R)-3-羟基-2，2，3-三甲基环丁基)氨基)嘧啶-5-甲腈和2-(((4-乙基嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1R，3S)-3-羟基-2，2，3-三甲基环丁基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在微波反应器中，在120℃下，加热乙基二异丙胺(2.0当量)、3-氨基-1，2，2-三甲基环丁醇(1.0当量)和4-氯-2-(((4-乙基嘧啶-5-基)甲基)氨基)嘧啶-5-甲腈(2.0当量)在二噁烷(0.2M)中的混合物2小时。在反应完成之后，在减压下除去溶剂，并通过标准手性分离方法纯化残余物，得到标题化合物。基于在本文所述生物化学测定中与本文提供的其它化合物类似的活性对立体化学进行归属。
2-(((4-乙基嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1S，3R)-3-羟基-2，2，3-三甲基环丁基)氨基)嘧啶-5-甲腈(手性HPLC 100％e.e.，保留时间＝2.63min).1H NMR(400MHz，DMSO-d6，T＝323K)δ(ppm)8.96(s，1H)，8.48(s，1H)，8.19(s，1H)，7.98(s，1H)，6.91(s，1H)，4.55(d，J＝5.6Hz，2H)，4.37(s，1H)，3.92-3.83-(m，1H)，2.81(q，J＝7.2Hz，2H)，2.24(t，J＝10.4Hz，1H)，2.02(s，1H)，1.23(t，J＝7.6Hz，3H)，1.13(s，3H)，0.87(s，3H)，0.80(s，3H)；MS(ESI)m/z368.2[M+H]+。
2-(((4-乙基嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1R，3S)-3-羟基-2，2，3-三甲基环丁基)氨基)嘧啶-5-甲腈(手性HPLC 99％e.e.，r.t.＝6.16min).1H NMR(400MHz，DMSO-d6，T＝323K)δ8.95(s，1H)，8.47(s，1H)，8.19(s，1H)，7.98(s，1H)，6.90(s，1H)，4.54(d，J＝6.4Hz，2H)，4.37(s，1H)，3.90-3.83(m，1H)，2.82(q，J＝7.6Hz，2H)，2.24(t，J＝10.0Hz，1H)，2.02(s，1H)，1.23(t，J＝7.6Hz，3H)，1.13(s，3H)，0.87(s，3H)，0.80(s，3H)；MS(ESI)m/z368.2[M+H]+。
实施例16：4-(((1R，3S)-3-(羟甲基)-2，2-二甲基环丁基)氨基)-2-(((4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)氨基)嘧啶-5-甲腈
A. 2，2-二甲基-3-氧代环丁烷羧酸甲酯。在N2下，在室温下，搅拌丙烯酸甲酯(1.3当量)、1-氯-N，N，2-三甲基丙-1-烯-1-胺(1.0当量)和三氟甲烷磺酸锌(0.25当量)的悬浮液以混合其内容物15分钟。然后，在36-39℃下，将该混合物超声处理(100W)24小时。向该混合物中加入THF：H2O＝10：1的混合物，并超声处理。浓缩该混合物，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。在减压下蒸发滤液，并通过硅胶色谱(石油醚；石油醚∶乙酸乙酯＝50∶1，10∶1)纯化残余物，得到呈浅黄色油状物的标题化合物2，2-二甲基-3-氧代环丁烷羧酸甲酯(产率29％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)3.73(s，3H)，3.51(dd，J＝7.6Hz，18.4Hz，1H)，3.07(q，J＝9.2Hz，18Hz 1H)，2.94(t，J＝7.2Hz，8.8Hz，1H)，1.29(s，3H)，1.09(s，3H)。
B. 3-(羟基亚氨基)-2，2-二甲基-环丁烷羧酸甲酯。将2，2-二甲基-3-氧代环丁烷羧酸甲酯(1.0当量)、盐酸羟胺(1.4当量)和碳酸氢钠(2.5当量)的混合物悬浮在MeOH(0.6M)中，并在11℃下搅拌12小时。在减压下除去溶剂，并加入水。将该混合物用乙酸乙酯萃取，用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。在减压下浓缩溶剂，得到呈黄色油状物的粗标题产物3-(羟基亚氨基)-2，2-二甲基-环丁烷羧酸甲酯(产率92.7％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)3.73(s，3H)，3.27(dd，J＝7.6Hz，18.4Hz，1H)，3.04(q，J＝9.2Hz，18Hz 1H)，2.89(t，J＝7.2Hz，8.8Hz，1H)，1.57(s，1H)，1.40(s，2H)，1.28(s，1H)，1.19(s，2H).
C. 3-氨基-2，2-二甲基环丁烷羧酸甲酯。向3-(羟基亚氨基)-2，2-二甲基环丁烷羧酸甲酯(1.0当量)在MeOH(0.4M)中的溶液中加入氢氧化铵(0.2M)和拉尼镍(20wt％)。在50psi氢气氛下，在50℃下，搅拌该混合物约6小时。在反应完成之后，将该混合物过滤通过硅藻土。在真空中浓缩滤液，得到呈绿色液体的粗标题化合物3-氨基-2，2-二甲基环丁烷羧酸甲酯(产率82.3％)。使用该产物而无需进一步纯化。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)3.56(s，3H)，2.50(s，0.4H)，2.14(s，0.24H)，1.94(s，0.35H)，1.71(s，0.73H)，1.05(s，2.0H)，0.76(s，2H)。
D. (3-氨基-2，2-二甲基环丁基)甲醇。在0℃下，向氢化铝锂(2.8当量)在无水THF(1.7M)中的悬浮液中加入粗3-氨基-2，2-二甲基环丁烷羧酸甲酯(1.0当量)在无水THF(0.7M)中的溶液。然后，在10℃下，强力搅拌该混合物0.5小时，之后加热至35-40℃12小时。通过慢慢地加入在0℃下的水、氢氧化钠水溶液(3N)和水淬灭反应。在10℃下，搅拌该混合物20分钟，过滤通过硅藻土，并用乙酸乙酯洗涤。经无水硫酸钠干燥有机相并过滤。在真空中浓缩滤液，得到呈外消旋混合物的粗标题化合物(3-氨基-2，2-二甲基环丁基)甲醇(产率89.7％)。
E. 3-(羟甲基)-2，2-二甲基环丁基)氨基甲酸苄酯。在0℃下，向在饱和的碳酸钠水溶液(1.3当量)中的4-氨基-2，2-二甲基环己醇(1.0当量)在水(1.7M)和THF(1.4M)中的混合物中慢慢地加入氯甲酸苄基酯(2.1当量)。在0℃下，搅拌该反应混合物0.5小时。除去水性溶剂，并将残余物溶于H2O中，用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。在减压下浓缩滤液，得到粗产物，通过硅胶柱色谱(在DCM中5％MeOH)纯化，得到呈外消旋混合物的3-(羟甲基)-2，2-二甲基环丁基)氨基甲酸苄酯(产率59％)。通过手性超临界流体色谱(柱：ChiralPak AY-H，300×50mmI.D.)，使用20％乙醇/CO2，流速＝200mL/min，循环时间3min，纯化外消旋混合物，以分离异构体。在下一个反应中使用第一个洗脱峰。
F. 3-氨基-2，2-二甲基环丁基)甲醇盐酸盐。在H2下，在室温下，搅拌在MeOH(0.4M)中的3-(羟甲基)-2，2-二甲基环丁基)氨基甲酸苄酯(峰1，上述获得的)(1.0当量)和钯碳(10％)12小时。在反应完成之后，将该混合物过滤通过硅藻土垫，并用MeOH洗涤。在减压下蒸发溶剂，得到呈白色固体的粗产物3-氨基-2，2-二甲基环丁基)MeOH，其用于下一步而无需纯化。在0℃下，将粗产物溶于HCl/MeOH(4N，10.0当量)中，在18℃下搅拌2小时，并除去溶剂，得到呈固体的3-氨基-2，2-二甲基环丁基)MeOH盐酸盐(产率85％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)8.21(s，1H)，3.96(s，1H)，3.29-3.40(m，2H)，3.12-3.16(m，1H)，2.06-2.09(m，1H)，1.87-1.88(m，1H)，1.61-1.67(m，1H)，1.02(d，J=25.2Hz，6H)；MS(ESI)m/z(M+H)+130.0。
G. 4-(((1R，3S)-3-(羟甲基)-2，2-二甲基环丁基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。将上述分离的化合物、3-氨基-2，2-二甲基环丁基)MeOH盐酸盐(1.0当量)和4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.0当量)溶于DIEA(3.0当量)和乙醇(0.4M)中。将该溶液加热至40℃1小时。在减压下浓缩反应物，并经由biotage色谱(在己烷中0-60％乙酸乙酯，然后在己烷中60％乙酸乙酯)纯化黄色残余物，得到标题化合物(产率96％)。MS(ESI)m/z278.6[M]+。
在装有Cu Kα放射(λ＝1.5478)的Bruker D8Smart APEX CCD衍射仪上进行单晶X-射线衍射研究。通过将戊烷汽相扩散到二氯乙烷溶液中，使目标化合物的晶体生长。将0.115×0.087×0.082mm无色块用帕拉通油(paratone oil)固定在cryoloop上。在氮气流中，在100(2)K，使用和ω扫描，收集数据。晶体与检测器的距离为50mm，使用可变曝光时间(2s-10s)，取决于θ与1.0°的扫描宽度。在θ中，到68.00°时数据收集完成98.2％。收集覆盖指数-13＜＝h＜＝13，-8＜＝k＜＝9，-28＜＝1＜＝28的总共23976个反射。发现7222个反射是不依赖对称的，具有0.0328的Rint。指数化和单位晶胞精修表明初级的单斜点阵。发现空间群为P21。使用Bruker SAINT软件程序整合数据，并使用SADABS软件程序度量。直接方法解决(SHELXS)产生与提出的结构一致的完整阶段模式(complete phasing model)。确定绝对立体构型与其一致。所有非氢原子都采用全矩阵最小二乘法(SHELXL-2013)进行各向异性精修。使用骑式模型(riding model)放置所有氢原子。使用SHELXL 2013中的合适HFIX命令限制它们相对于它们的母原子的位置。确定绝对立体构型与4-(((1R，3S)-3-h羟甲基)-2，2-二甲基环丁基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈一致。
H. 4-(((1R，3S)-3-(羟甲基)-2，2-二甲基环丁基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈和4-(((1R，3S)-3-(羟甲基)-2，2-二甲基环丁基)氨基)-2-(甲基亚磺酰基)嘧啶-5-甲腈。在DCM(0.2M)中混合4-(((1R，3S)-3-(羟甲基)-2，2-二甲基环丁基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.0当量)和3-氯苯并过氧酸(2.2当量)，并在环境温度下允许搅拌。在16小时之后，将该溶液加入到含有另外的DCM的分液漏斗中，并用饱和的硫酸氢钠洗涤有机层，接着用饱和的碳酸氢钠洗涤，最后用饱和的氯化钠溶液洗涤。经硫酸镁干燥有机层，过滤并在减压下除去溶剂，得到标题化合物(产率71％)。MS(ESI)m/z311.3[M+1]+。
I. 4-(((1R，3S)-3-(羟甲基)-2，2-二甲基环丁基)氨基)-2-(((4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在乙醇(0.1M)中混合4-(((1R，3S)-3-(羟甲基)-2，2-二甲基环丁基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈和4-(((1R，3S)-3-(羟甲基)-2，2-二甲基环丁基)氨基)-2-(甲基亚磺酰基)嘧啶-5-甲腈(1.0当量)、(4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲胺盐酸盐(1.0当量)和DIEA(3.0当量)的混合物，并加热至80℃。在2小时之后，使用标准方法处理混合的反应物，得到标题化合物(产率45％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)8.71(d，J＝5.08Hz，1H)，8.57-8.65(m，1H)，8.15-8.25(m，2H)，7.65-7.75(m，1H)，7.19-7.32(m，1H)，4.70(d，J＝5.08Hz，2H)，4.23(t，J＝4.88Hz，1H)，3.96(q，J＝8.33Hz，1H)，3.20-3.29(m，1H)，1.73-1.96(m，2H)，1.53-1.68(m，1H)，1.20(s，1H)，0.86(s，1H)，0.62-0.77(m，6H)：MS(ESI)m/z407.3[M+I]+。
实施例17：2-(((4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1R，4R)-4-羟基-3，3，4-三甲基环己基)氨基)嘧啶-5-甲腈
A. ((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基甲酸叔丁酯。在0℃下，向(1S，4R)-4-氨基-2，2-二甲基环己醇(1.00g，6.99mmol)在THF(22mL)中的溶液中慢慢地加入碳酸氢二叔丁酯(1.81g，8.39mmol)。在55℃下，搅拌得到的混合物2小时。将反应混合物用水稀释，并用乙酸乙酯(2×200mL)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。在减压下蒸发滤液，得到呈黄色油状物的粗产物(2.00g粗物质)，其直接用于下一步而无需纯化。MS(ESI)m/z244.2[M+H]+。
B. (R)-(3，3-二甲基-4-氧代环己基)氨基甲酸叔丁酯。向((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基甲酸叔丁酯(2g粗物质)在DCM(110mL)中的溶液中加入Dess-Martin过碘烷(4.24g，10mmol)，保持温度低于5℃。在室温下，搅拌得到的混合物1小时。将反应物用DCM稀释，并用饱和碳酸氢钠溶液洗涤。经无水硫酸钠干燥分离的有机层，并过滤。在减压下，蒸发滤液，并通过硅胶色谱(在石油醚中6％乙酸乙酯)纯化残余物，得到呈黄色油状物的标题化合物(1.10g，4.56mmol，经2步骤产率65％)。MS(ESI)m/z242.2[M+H]+。
C. ((1R)-4-羟基-3，3，4-三甲基环己基)氨基甲酸叔丁酯。在氮气下，在-30℃至40℃下，向(R)-(3，3-二甲基-4-氧环己基)氨基甲酸叔丁酯(550mg，2.28mmol)在***(15mL)中的溶液中加入溴化甲基镁(3M，3.00mL)。在该温度下搅拌该混合物0.5小时，并用饱和的氯化铵水溶液(150mL)淬灭。用乙酸乙酯(300mL×3)萃取水层。将合并的有机层用盐水(150mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。在减压下蒸发滤液。通过硅胶色谱柱(在石油醚中12％乙酸乙酯)纯化残余物，得到呈黄色油状物的标题化合物(520mg，5.02mmol，产率88％)。MS(ESI)m/z258.2[M+H]+。
D. (4R)-4-氨基-1，2，2-三甲基环己醇.在0℃，向((1R)-4-羟基-3，3，4-三甲基环己基)氨基甲酸叔丁酯(520mg，2.15mmol)在DCM(6.00mL)中的溶液中加入TFA(3.00mL)。在室温下，搅拌得到的混合物1小时。在真空中浓缩反应，得到粗产物粗产物(450mg，粗物质)，其直接用于下一步而无需进一步纯化。MS(ESI)m/z158.1[M+H]+。
E. 4-(((1R，4R)-4-羟基-3，3，4-三甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈和4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3，4-三甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。向(4R)-4-氨基-1，2，2-三甲基环己醇(323mg，2.06mmol)和4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(450mg，粗物质)在异丙醇(5.00mL)中的混合物中加入DIEA(800mg，6.60mmol)。在90℃下，搅拌得到的溶液1.5小时。蒸发溶剂，并通过硅胶色谱(在石油醚中30％乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(380mg，1.24mmol，产率60％)。通过超临界流体色谱(柱：AD，0.46cm I.D.×15cmL；流动相：CO2/EtOH/DEA＝70/30/0.1(v/v/v)；流速：1.5ml/min；WL：UV254nm；T＝35℃)进一步分离标题化合物，得到标题化合物。
4-(((1R，4R)-4-羟基-3，3，4-三甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(120mg，0.391mmol，手性SFC：d.e.＝100％)。
4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3，4-三甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(240mg，0.782mmol，手性SFC：d.e.＝100％)。
F. 4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-甲腈。在0℃下，向氢化钠(60％分散在矿物油中，315mg，7.88mmol)在THF(20mL)中的悬浮液中加入2，2-二氟丙-1-醇(757mg，7.88mmol)，并搅拌得到的混合物1小时。然后，分批加入4-氯嘧啶-5-甲腈(1.00g，7.16mmol)，并在室温下搅拌30分钟。用饱和的氯化铵水溶液淬灭该反应，并用乙酸乙酯(500mL×2)萃取。将合并的有机层干燥并浓缩，并通过硅胶色谱柱(在石油醚中12％乙酸乙酯)纯化残余物，得到呈黄色固体的标题化合物(850mg，4.27mmol，产率58％)。MS(ESI)m/z200.0[M+H]+。
G. (4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲胺。向4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-甲腈(850mg，4.27mmol)在THF(30mL)中的溶液中加入拉尼镍(600mg)。使该混合物在真空下脱气10分钟，然后在在室温下，在全充气(fully-inflated)气球下氢化过夜。将该混合物过滤通过硅藻土垫，并用乙酸乙酯(200mL)洗涤滤饼。在真空下除去滤液，并通过制备HPLC(在水中5％至60％乙腈)纯化残余物，得到呈黄色油状物的产物(260mg，1.28mmol，产率30％)。MS(ESI)m/z204.0[M+H]+。
H. 4-(((1R，4R)-4-羟基-3，3，4-三甲基环己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴下，向4-(((1R，4R)-4-羟基-3，3，4-三甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(80mg，0.261mmol)在DCM(3.00mL)中的溶液中加入3-氯过苯甲酸(85％，114mg，0.653mmol)。在室温下，搅拌该混合物2小时。将反应物用DCM稀释，并用硫代硫酸钠水溶液洗涤，然后用碳酸钾水溶液洗涤。经无水硫酸钠干燥分离的有机层并浓缩，得到粗标题化合物(90mg粗物质)。MS(ESI)m/z323.1，339.1[M+H]+。
I. 2-(((4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1R，4R)-4-羟基-3，3，4-三甲基环己基)氨基)嘧啶-5-甲腈。向4-(((1R，4R)-4-羟基-3，3，4-三甲基环己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈(90mg，粗物质)在THF(2.8mL)中的溶液中加入(4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲胺(50mg，0.246mmol)和DIEA(100mg，0.738mmol)。在微波反应器中，在100℃下，搅拌得到的混合物2小时。蒸发溶剂，并经由标准方法纯化残余物，得到标题化合物(34.2mg，0.074mmol，产率30％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)8.70(s，1H)，8.34-8.32(m，1H)，8.13(s，1H)，4.70(t，J=12.0Hz，1H)，4.64-4.59(m，2H)，4.18-4.15(m，1H)，1.81-1.74(m，3H)，1.68-1.41(m，6H)，1.32-1.30(s，3H)，0.92-0.85(s，6H).MS(ESI)m/z462.2[M+H]+。
实施例18：2-(((4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3，4-三甲基环己基)氨基)嘧啶-5-甲腈
A. ((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基甲酸叔丁酯。在0℃下，向(1S，4R)-4-氨基-2，2-二甲基环己醇(1.00g，6.99mmol)在THF(22mL)中的溶液中慢慢地加入碳酸氢二叔丁酯(1.81g，8.39mmol)。在55℃下，搅拌得到的混合物2小时。将反应混合物用水稀释，并用乙酸乙酯(2×200mL)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。在减压下蒸发滤液，得到呈黄色油状物的粗产物(2.00g粗物质)，其直接用于下一步而无需纯化。MS(ESI)m/z244.2[M+H]+。
B. (R)-(3，3-二甲基-4-氧代环己基)氨基甲酸叔丁酯.向((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基甲酸叔丁酯(2g粗物质)在DCM(110mL)中的溶液中加入Dess-Martin过碘烷(4.24g，10mmol)，保持温度低于5℃。在室温下，搅拌得到的混合物1小时。将反应物用DCM稀释，并用饱和碳酸氢钠溶液洗涤。经无水硫酸钠干燥分离的有机层，并过滤。在减压下，蒸发滤液，并通过硅胶色谱(在石油醚中6％乙酸乙酯)纯化残余物，得到呈黄色油状物的标题化合物(1.10g，4.56mmol，经2步骤产率65％)。MS(ESI)m/z242.2[M+H]+。
C. ((1R)-4-羟基-3，3，4-三甲基环己基)氨基甲酸叔丁酯.在氮气下，在-30℃至-40℃下，向(R)-(3，3-二甲基-4-氧代环己基)氨基甲酸叔丁酯(550mg，2.28mmol)在***(15mL)中的溶液中加入溴化甲基镁(3M，3.00mL)。在该温度下搅拌该混合物0.5小时，并用饱和的氯化铵水溶液(150mL)淬灭。用乙酸乙酯(300mL×3)萃取水层。将合并的有机层用盐水(150mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。在减压下蒸发滤液。通过硅胶色谱柱(在石油醚中12％乙酸乙酯)纯化残余物，得到呈黄色油状物的标题化合物(520mg，5.02mmol，产率88％)。MS(ESI)m/z 258.2[M+H]+。
D. (4R)-4-氨基-1，2，2-三甲基环己醇。在0℃下，向((1R)-4-羟基-3，3，4-三甲基环己基)氨基甲酸叔丁酯(520mg，2.15mmol)在DCM(6.00mL)中的溶液中加入TFA(3.00mL)。在室温下，搅拌得到的混合物1小时。在真空中浓缩反应物，得到粗产物(450mg，粗物质)，其直接用于下一步而无需进一步纯化。MS(ESI)m/z 158.1[M+H]+。
E. 4-(((1R，4R)-4-羟基-3，3，4-三甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈和4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3，4-三甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。向(4R)-4-氨基-1，2，2-三甲基环己醇(323mg，2.06mmol)和4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(450mg，粗物质)在异丙醇(5.00mL)中的混合物中加入DIEA(800mg，6.60mmol)。在90℃下，搅拌得到的溶液1.5小时。蒸发溶剂，并通过硅胶色谱(在石油醚中30％乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(380mg，1.24mmol，产率60％)。通过超临界流体色谱(柱：AD，0.46cm I.D.×15cmL；流动相：CO2/EtOH/DEA＝70/30/0.1(v/v/v)；流率：1.5ml/min；WL：UV 254nm；T＝35℃)进一步分离标题化合物，得到标题化合物。
4-(((1R，4R)-4-羟基-3，3，4-三甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(120mg，0.391mmol，手性SFC：d.e.＝100％)。
4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3，4-三甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(240mg，0.782mmol，手性SFC：d.e.＝100％)。
F. 4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-甲腈。在0℃下，向氢化钠(60％分散在矿物油中，315mg，7.88mmol)在THF(20mL)中的悬浮液中加入2，2-二氟丙-1-醇(757mg，7.88mmol)，并搅拌得到的混合物1小时。然后，分批加入4-氯嘧啶-5-甲腈(1.00g，7.16mmol)，并在室温下，搅拌该混合物30分钟。用饱和的氯化铵水溶液淬灭反应，并用乙酸乙酯(500mL×2)萃取。将合并的有机层干燥并浓缩，并通过硅胶色谱柱(在石油醚中12％乙酸乙酯)纯化残余物，得到呈黄色固体的标题化合物(850mg，4.27mmol，产率58％)。MS(ESI)m/z 200.0[M+H]+。
G. (4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲胺.向4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-甲腈(850mg，4.27mmol)在THF(30mL)中的溶液中加入拉尼镍(600mg)。使该混合物在真空下脱气10分钟，然后在在室温下，在全充气(fully-inflated)气球下氢化过夜。将该混合物过滤通过硅藻土垫，并用乙酸乙酯(200mL)洗涤滤饼。在真空下除去除去滤液，并通过制备HPLC(在水中的5％至60％乙腈)纯化残余物，得到呈黄色油状物的产物((260mg，1.28mmol，产率30％)。MS(ESI)m/z 204.0[M+H]+。
H. 4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3，4-三甲基环己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴下，向4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3，4-三甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(80mg，0.261mmol)在DCM(3.00mL)中的溶液中加入3-氯过苯甲酸(85％，114mg，0.653mmol)。在室温下，搅拌该混合物2小时。将反应物用DCM稀释，并用硫代硫酸钠水溶液洗涤，然后用碳酸钾水溶液洗涤。经无水硫酸钠干燥分离的有机层并浓缩，得到粗化合物(90mg粗物质)。MS(ESI)m/z 323.1，339.1[M+H]+。
I. 2-(((4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3，4-三甲基环己基)氨基)嘧啶-5-甲腈。向4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3，4-三甲基环己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈(90mg，粗物质)在THF(2.8mL)中的溶液中加入(4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲胺(50mg，0.246mmol)和DIEA(100mg，0.738mmol)。在微波微波反应器中，在100℃下，搅拌得到的混合物2小时。蒸发溶剂，并通过标准方法纯化残余物，得到标题化合物(38.7mg，0.084mmol，产率34％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)8.90(s，1H)，8.57-8.54(s，1H)，8.34(s，1H)，4.92(t，J＝12.0Hz，1H)，4.81-4.78(m，2H)，4.34-4.28(m，1H)，2.04-1.95(m，3H)，1.92-1.68(m，6H)，1.47-1.45(m，3H)，1.09-1.01(m，6H).MS(ESI)m/z 462.2[M+H]+。
实施例19：2-((4-氰基-3-(三氟甲氧基)苯乙基)氨基)-4-(((1R，3S)-3-羟基-2，2-二甲基环丁基)氨基)嘧啶-5-甲腈
A. 4-氨基-3-(三氟甲氧基)苯甲酸甲酯。在室温下，搅拌4-氨基-3-(三氟甲氧基)苯甲酸(8.88g 40.2mmol)、MeOH(142mL)和盐酸1，4-二噁烷(4.0M，142mL，568mmol)中的混合物72小时。在除去有机溶剂之后，将残余物的pH调节至pH 8，并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取水层。将合并的有机层干燥并在真空中浓缩，得到标题化合物(9.3g，39.6mmol，产率95％)。MS(ESI)m/z 236.1[M+1]+。
B. 4-溴-3-(三氟甲氧基)苯甲酸甲酯。向4-氨基-3-(三氟甲氧基)苯甲酸甲酯(9.3g，39.6mmol)和亚硝酸叔丁酯(6.77mL，57.6mmol)在乙腈(300mL)和水(30mL)中的混合物中加入溴化铜(10.3g，46.2mmol)。在75℃下，搅拌得到的反应混合物1.5小时。将反应物用水处理，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用饱和的碳酸氢钠洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。在真空下蒸发滤液，得到标题化合物(10.6g，35.6mmol，产率90％)。MS(ESI)m/z299.1，300.1[M+1]+。
C. (4-溴-3-(三氟甲氧基)苯基)甲醇。在0℃下，向硼氢化锂(1.16g，53.4mmol)在THF(100mL)中的溶液中加入4-溴-3-(三氟甲氧基)苯甲酸甲酯(10.6g，35.6mmol)，并在氮气氛下，在70℃下，加热得到的溶液3小时。用水淬灭反应，并用乙酸乙酯萃取该混合物。将合并的有机层用饱和的盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。在真空下蒸发滤液，得到粗标题产物(9.17g，34mmol)。MS(ESI)m/z 270.1[M]+，272.1[M+2]+。
D. 1-溴-4-(溴乙基)-2-(三氟甲氧基)苯。在-10℃下，向(4-溴-3-(三氟甲氧基)苯基)MeOH(5g，18.5mmol)和三苯基膦(8.24g，31.45mmol)在无水DCM(50mL)中的混合物中加入N-溴琥珀酰亚胺(5.83g，32.92mmol)。在氮气下，在室温下，搅拌得到的反应混合物0.5小时。加入水，并用DCM(3×40mL)萃取该混合物。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。在真空下蒸发滤液，得到粗产物，通过硅胶柱色谱(在石油醚中5％乙酸乙酯)纯化，得到标题化合物(4.3g，12.9mmol，产率67％，经两个步骤)。MS(ESI)m/z 332.8，334.8，336.8[M+H]+。
E. 2-(4-溴-3-(三氟甲氧基)苯基)乙腈。向1-溴-4-(溴乙基)-2-(三氟甲氧基)苯(1g，3.0mmol)在EtOH(20mL)和水(5mL)中的混合物中加入***(390mg，6mmol)。在85℃下，搅拌得到的混合物2小时。加入碳酸氢钠，并用乙酸乙酯萃取该混合物。将有机层用盐水洗涤，干燥并浓缩，得到粗标题产物(800mg，2.86mmol)。MS(ESI)m/z 279.9[M]+，281.1[M+2]+。
F. 2-(4-溴-3-(三氟甲氧基)苯基)乙胺。在0℃下，向2-(4-溴-3-(三氟甲氧基)苯基)乙腈(800mg，2.86mmol)在THF(40mL)中的溶液中加入硼烷二甲基硫醚复合物(2M，2.15mL，4.3mmol)。在氮气氛下，在75℃下，加热得到的溶液2小时。在0℃下，用MeOH(10mL)淬灭反应，并在真空下浓缩，得到粗标题产物(720mg，2.54mmol)。MS(ESI)m/z 283.9[M]+，291.1 [M+2]+。
G. 4-溴-3-(三氟甲氧基)苯乙基氨基甲酸叔丁酯。向2-(4-溴-3-(三氟甲氧基)苯基)乙胺(720mg，2.54mmol)在THF(10mL)中的溶液中加入二碳酸二叔丁酯(575mg，2.66mmol)。在75℃下，搅拌得到的反应混合物2小时。浓缩该反应混合物，得到粗产物，通过硅胶柱色谱(在石油醚中5％乙酸乙酯)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(460mg，1.2mmol，产率40％，经3个步骤)。MS(ESI)m/z 384.1[M+1]+。
H. 4-氰基-3-(三氟甲氧基)苯乙基氨基甲酸叔丁酯。在氮气下，在160℃下，搅拌4-溴-3-(三氟甲氧基)苯乙基氨基甲酸叔丁酯(460mg，1.2mmol)、氰化锌(463mg，1.56mmol)和四(三苯基膦)钯(69mg，0.06mmol)在DMF(10mL)中的混合物1小时。用饱和的碳酸氢钠处理该反应，并用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥，浓缩并通过制备薄层色谱(在DCM中2.9％MeOH)纯化，得到标题化合物(150mg，0.45mmol，产率38％)。MS(ESI)m/z 331.1[M+1]+。
I. 4-(2-氨基乙基)-2-(三氟甲氧基)苄腈。向4-氰基-3-(三氟甲氧基)苯乙基氨基甲酸酯(150mg，0.45mmol)在DCM(3mL)中的溶液中加入TFA(1.5mL)。在室温下，搅拌得到的反应混合物1.5小时。浓缩该混合物，得到粗标题产物(120mg，粗物质)，其直接用于下一步而无需进一步纯化。MS(ESI)m/z 231.1[M+H]+。
J. 4-(((1R，3S)-3-羟基-2，2-二甲基环丁基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。在85℃下，搅拌(1S，3R)-3-氨基-2，2-二甲基环丁醇(550mg，粗物质)、4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(887mg，4.78mmol)和DIEA(1.12g，8.7mmol)在异丙醇(20mL)中的混合物3小时。在冷却至室温之后，浓缩该反应混合物，并通过硅胶柱色谱(在DCM中0.6％MeOH)纯化残余物，得到标题化合物(760mg，2.88mmol，产率66.3％)。MS(ESI)m/z 265.1[M+1]+。
K. 4-(((1R，3S)-3-羟基-2，2-二甲基环丁基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈。向4-(((1R，3S)-3-羟基-2，2-二甲基环丁基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(760mg，2.88mmol)在DCM(10mL)中的溶液中加入间-氯过苯甲酸(85％，1.25g，6.18mmol)。在室温下，搅拌得到的混合物1小时。用硫代硫酸钠水溶液淬灭该反应混合物，并用DCM萃取。将合并的有机层用碳酸钾水溶液和盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到标题化合物(550mg，粗物质)，其直接用于下一步而无需进一步纯化。MS(ES1)m/z 281.1，297.1[M+1]+。
L. 2-((4-氰基-3-(三氟甲氧基)苯乙基)氨基)-4-(((1R，3S)-3-羟基-2，2-二甲基环丁基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在微波反应器中，在100℃下，搅拌4-(((1R，3S)-3-羟基-2，2-二甲基环丁基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈(80 mg，0.27mmol)、4-(2-氨基乙基)-2-(三氟甲氧基)苄腈(60mg，粗物质))和DIEA(105mg，0.81mmol)在THF(2mL)中的混合物1.5小时。在冷却至室温之后，浓缩反应混合物，并通过标准方法纯化残余物，得到标题化合物(34.4mg，0.077mmol，产率40％，经2个步骤)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.14-8.07(m，1H)，7.82-7.80(m，1H)，7.45-7.43(m，2H)，3.97-3.93(m，1H)，3.83-3.70(m，2H)，3.68-3.59(m，1H)，3.10-2.01(m，2H)，2.58-2.54(m，1H)，2.15-2.06(m，1H)，1.21(s，3H)，0.95(s，3H).MS(ESI)m/z 447.2[M+1]+。
实施例20：2-((4-(2，2-二氟丙氧基)苯乙基)氨基)-4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)嘧啶-5-甲腈
A. 4-羟基苯乙基氨基甲酸叔丁酯。向4-(2-氨基乙基)苯酚(1.00g，7.30mmol)在THF(10mL)中的溶液中加入焦碳酸二叔丁酯(1.89g，8.79mmol)。在室温下，搅拌得到的反应混合物16小时。浓缩该混合物以除去溶剂，用乙酸乙酯稀释，过滤并浓缩，得到粗标题产物(1.65g，6.96mmol，产率95％)。MS(ESI)m/z 238.1[M+H]+。
B. 2，2-二氟丙基甲磺酸酯。在0℃下，向2，2-二氟丙-1-醇(2.00g，20.8mmol)和TEA(3.16g，31.25mmol)在无水DCM(20mL)中的混合物中加入甲磺酰氯(2.84g，24.96mmol)。在室温下，搅拌得到的反应混合物1.5小时。加入水，并用DCM(3×100mL)萃取该混合物。将合并的有机层用饱和的氯化铵水溶液、盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。在真空下蒸发滤液，得到标题产物(2.70g，15.52mmol，产率75％)，其直接用于下一步而无需进一步纯化。
C. 4-(2，2-二氟丙氧基)苯乙基氨基甲酸叔丁酯。在微波反应器中，在115℃下，搅拌4-羟基苯乙基氨基甲酸叔丁酯(700g，2.94mmol)、2，2-二氟丙基甲磺酸酯(668mg，3.84mmol)和碳酸铯(1.92g，5.88mmol)在DMF(5mL)中的混合物3小时。在冷却至室温之后，加入水，并用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。在真空下蒸发滤液，得到粗产物，通过制备薄层色谱(在石油醚中22％乙酸乙酯)纯化，得到标题化合物(130mg，0.41mmol，产率14％)。MS(ESI)m/z 316.1[M+H]+。
D. 2-(4-(2，2-二氟丙氧基)苯基)乙胺。在0～5℃下，向4-(2，2-二氟丙氧基)苯乙基氨基甲酸酯(95mg，0.30mmol)在DCM(2mL)中的溶液中加入TFA(1mL)。在室温下，搅拌得到的反应混合物1.5小时。浓缩该反应混合物，得到粗产物，其直接用于下一步而无需进一步纯化(70mg，粗物质)。MS(ESI)m/z 216.1[M+H]+。
E. 4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。在100℃下，加热4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(2.15g，11.6mmol))、(1S，4R)-4-氨基-2，2-二甲基环己醇(1.51g，10.5mmol)和DIEA(2.72mg，21.1mmol)在异丙醇(30mL)中的混合物3小时。在减压下除去有机溶剂之后，用水处理残余物，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到粗产物，通过硅胶柱色谱(在石油中15％乙酸乙酯)纯化，得到呈浅黄色固体的标题化合物(2.2g，7.53mmol，产率72％)。MS(ESI)m/z 293.2[M+H]+。
F. 4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴中冷却下，向4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.02g，3.48mmol)在无水DCM(20mL)中的溶液中加入间-氯过苯甲酸(85％，1.78g，8.79mmol)。在室温下，搅拌得到的混合物3小时。用硫代硫酸钠水溶液淬灭反应，并用DCM萃取。将合并的有机层用碳酸钾水溶液和盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到呈浅黄色固体的标题化合物(0.9g，粗物质)。MS(ESI)m/z 309.2，325.2[M+H]+。
J. 2-((4-(2，2-二氟丙氧基)苯乙基)氨基)-4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在微波反应器中，在100℃下，搅拌4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈(90mg，0.28mmol)、2-(4-(2，2-二氟丙氧基)苯基)乙胺(70mg，粗物质)和DIEA(85mg，0.66mmol)在THF(2mL)中的混合物1.5小时。在冷却至室温之后，浓缩该反应混合物，并通过标准方法纯化残余物，得到标题产物(38.6mg，0.084mmol，产率28％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)8.15-7.97(m，1H)，7.15(d，J＝8.4Hz，2H)，6.87(d，J＝8.4Hz，2H)，4.39-4.22(m，1H)，4.12(t，J＝11.6Hz，2H)，3.66-3.49(m，2H)，3.41-3.35(m，1H)，2.88-2.77(t，J＝7.2Hz，2H)，1.96-1.82(m，1H)，1.80-1.42(m，8H)，1.03-0.95(m，6H).MS(ESI)m/z 460.2[M+H]+。
实施例21：3-氯-5-(2-((5-氰基-4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)乙基)吡啶1-氧化物
A. (5-氯-吡啶-3-基)-甲醇。在0℃下，向5-氯-烟酸(2g，12.7mmol)和TEA(1.52g，15mmol)在THF(30mL)中的溶液中慢慢地加入氯甲酸甲酯(1.42g，15mmol)。在室温下，搅拌得到的混合物过夜。用乙酸乙酯稀释反应物，用饱和的氯化氨洗涤，并经无水硫酸钠干燥。浓缩有机层，得到粗产物(2.8g，粗物质)，将其溶于THF(40mL)中，并冷却至-78℃。分批加入氢化铝锂(570mg，15mmol)。搅拌得到的混合物30分钟。用氢氧化钠水溶液淬灭该反应，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到粗产物，通过硅胶柱色谱(在石油醚中30％乙酸乙酯)纯化，得到标题化合物(1.4g，9.72mmol，产率76％)。MS(ESI)m/z 144.1[M+H]+。
B. (5-氯吡啶-3-基)甲基甲磺酸酯。在0℃下，向(5-氯吡啶-3-基)MeOH(1.60g，11.3mmol)和TEA(1.7g，16.8mmol)在无水DCM(30mL)中的混合物中加入甲磺酰氯(1.53g，13.4mmol)。在室温下，搅拌得到的反应混合物1.5小时。加入水，并用DCM(3×100mL)萃取该混合物。将合并的有机层用饱和的氯化铵水溶液、盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。在真空下蒸发滤液，得到呈黄色油状物的粗标题化合物(2.09g，粗物质)，其直接用于下一步而无需进一步纯化。MS(ESI)m/z 222.0[M+H]+。
C. 3-氯-5-(异氰基甲基)吡啶。向(5-氯吡啶-3-基)甲基甲磺酸酯(2.09g，粗物质)在EtOH(45mL)和水(5mL)中的混合物中加入***(926mg，14.3mmol)，并在85℃下搅拌得到的混合物2小时。加入碳酸氢钠，并用乙酸乙酯萃取该混合物，用盐水洗涤有机层，经无水硫酸钠干燥并浓缩。通过硅胶色谱柱(在石油醚中50％乙酸乙酯)纯化残余物，得到呈黄色固体的标题化合物(820mg，5.43mmol，产率48％，2个步骤)。MS(ESI)m/z 153.1[M+H]+。
D. 2-(5-氯吡啶-3-基)乙胺。向3-氯-5-(异氰基甲基)吡啶(810mg，5.36mmol)在MeOH(15mL)中的溶液中加入拉尼镍和氨水。在氢气下，在室温下，搅拌得到的反应混合物5小时。过滤该反应混合物，并浓缩滤液，得到粗标题化合物(780mg，粗物质)。MS(ESI)m/z157.0[M+H]+。
E. (2-(5-氯吡啶-3-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯。在0℃下，向2-(5-氯吡啶-3-基)乙胺(780mg，crude)在THF(10mL)中的溶液中加入二碳酸二叔丁酯(1.1g，5.1mmol)。在室温下，搅拌得到的反应混合物2小时。在真空中浓缩该反应混合物，并通过硅胶柱色谱(在石油醚中20％乙酸乙酯)纯化残余物，得到呈黄色固体的标题化合物(650mg，2.54mmol，产率48％，2个步骤)。MS(ESI)m/z 257.1[M+H]+。
F. 3-(2-((叔-丁氧基羰基)氨基)乙基)-5-氯吡啶1-氧化物。在0℃下，向(2-(5-氯吡啶-3-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(93mg，0.36mmol)在DCM(4mL)中的溶液中加入3-氯过苯甲酸(85％，94.8mg，0.54mmol)。用硫代硫酸钠水溶液淬灭反应，并用DCM萃取。将合并的有机层用碳酸钾水溶液和盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到粗产物，其直接用于下一步而无需进一步纯化(90mg，粗物质)。MS(ESI)m/z 273.1[M+H]+。
G. 3-(2-氨基乙基)-5-氯吡啶1-氧化物。在0℃下，向3-(2-((叔-丁氧基羰基)氨基)乙基)-5-氯吡啶1-氧化物(90mg，粗物质)在DCM(3mL)中的溶液中加入TFA(1.5mL)。在室温下，搅拌得到的反应混合物1.5小时。浓缩该反应混合物，得到粗标题产物，其直接用于下一步而无需进一步纯化(80mg，粗物质)。MS(ESI)m/z 173.1[M+H]+。
H. 4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。在100℃下，加热4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(2.15g，11.6mmol))、(1S，4R)-4-氨基-2，2-二甲基环己醇(1.51g，10.5mmol)和DIEA(2.72mg，21.1mmol)在异丙醇(30mL)中的混合物3小时。在减压下除去有机溶剂之后，用水处理残余物，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到粗产物，通过硅胶柱色谱(在石油中15％乙酸乙酯)纯化，得到呈浅黄色固体的标题化合物(2.2g，7.53mmol，产率72％)。MS(ESI)m/z 293.2[M+H]+。
I. 4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴中冷却下，向4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.02g，3.48mmol)在无水DCM(20mL)中的溶液中加入间-氯过苯甲酸(85％，1.78g，8.79mmol)。在室温下，搅拌得到的混合物3小时。用硫代硫酸钠水溶液淬灭反应，并用DCM萃取。将合并的有机层用碳酸钾水溶液和盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到呈浅黄色固体的标题化合物(0.9g，粗物质)。MS(ESI)m/z 309.2，325.2[M+H]+。
J. 3-氯-5-(2-((5-氰基-4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)乙基)吡啶1-氧化物。在微波反应器中，在85℃下，搅拌4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈(80mg，粗物质)、3-(2-氨基乙基)-5-氯吡啶1-氧化物(80mg，粗物质)和DIEA(169mg，1.31mmol)在THF(2mL)中的混合物1小时。在冷却至室温之后，将反应混合物浓缩，并通过标准方法纯化残余物，得到标题产物(32.6mg，0.08mmol，产率22％，经3个步骤)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)8.30(s，1H)，8.16(s，1H)，8.08(s，1H)，7.51(s，1H)，4.32-4.25(m，1H)，3.77-3.65(m，2H)，3.42-3.40(s，1H)，2.99-2.93(m，2H)，1.95-1.50(m，6H)，1.03(s，3H)，0.99(s，3H).MS(ESI)m/z 417.2[M+H]+。
实施例22：4-(((1S，3S)-3-氨基-2，2-二甲基环丁基)氨基)-2-((3-氯苯乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈
4-(((1R，3R)-3-氨基-2，2-二甲基环丁基)氨基)-2-((3-氯苯乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈
4-(((1S，3R)-3-氨基-2，2-二甲基环丁基)氨基)-2-((3-氯苯乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈
4-(((1R，3S)-3-氨基-2，2-二甲基环丁基)氨基)-2-((3-氯苯乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈
A. 2，2-二甲基-3-氧代环丁烷羧酸甲酯。向1-氯-N，N，2-三甲基丙-1-烯-1-胺(15mL，114mmol)和三氟甲烷磺酸锌(9.3g，142mmol)的混合物中加入丙烯酸甲酯(12.6mL，142mmol)，同时在氮气下搅拌。然后，将得到的混合物超声处理12小时。用碳酸氢钠水溶液淬灭该反应混合物，并用乙酸乙酯萃取该混合物。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。在真空下浓缩滤液，并通过硅胶柱色谱(在石油醚中5-8％的乙酸乙酯)纯化残余物，得到呈黄色油状物的标题化合物(5.8g，37.2mmol，产率33％)。1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-d)δ3.76(s，3H)，3.59-3.51(m，1H)，3.15-3.06(m，1H)，2.99-2.94(m，1H)，1.32(s，3H)，1.12(s，3H)。
B. 2，2-二甲基-3-氧代环丁烷羧酸。向2，2-二甲基-3-氧代环丁烷羧酸甲酯(5.0g，32.1mmol)在MeOH(37.5mL)中的溶液中加入氢氧化钠水溶液(4.48N，18.5mL，84mmol).。在50℃下，搅拌得到的混合物2小时。在完成之后，在减压下除去过量的MeOH，并用***(15mL)萃取混合物。用盐酸(4N，30mL)中和水溶液，并用乙酸乙酯(100mL×2)萃取该混合物。将合并的有机层用盐水(15mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。在真空下浓缩滤液，得到呈白色固体的标题产物(3.9g，27.5mmol，产率86％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ(ppm)12.4(br，1H)，3.31-3.23(m，1H)，3.17-3.08(m，1H)，2.97-2.91(m，1H)，1.22(s，3H)，1.04(s，3H)。
C. (2，2-二甲基-3-氧代环丁基)氨基甲酸叔丁酯。在冰-水浴中冷却下，向2，2-二甲基-3-氧代环丁烷羧酸(3.9g，27.5mmol)和TEA(5.75g，57mmol)在甲苯(160mL)中的溶液中慢慢地加入二苯基磷酰基叠氮化物(11.5mL，57mmol)。在100℃下，搅拌该混合物4小时。将该反应混合物冷却至室温，并加入叔丁醇(82mL，925mmol)。将得到的混合物回流过夜。用碳酸氢钠水溶液(150mL)处理反应混合物，并用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取水溶液。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。在真空下浓缩滤液，并通过硅胶柱色谱(在石油醚中2-7％的乙酸乙酯)纯化残余物，得到呈黄色油状物的标题化合物(650mg，3.05mmol，产率11％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)4.81-4.70(m，1H)，4.05-3.93(m，1H)，3.37(dd，J1＝18.0Hz，J2＝9.0Hz，1H)，2.89(dd，J1＝18.0Hz，J2＝6.9Hz，1H)，1.48(s，9H)，1.28(s，3H)，1.13(s，3H)。
D. (3-(羟基亚氨基)-2，2-二甲基环丁基)氨基甲酸叔丁酯肟。在室温下，搅拌(2，2-二甲基-3-氧代环丁基)氨基甲酸叔丁酯(645mg，3.00mmol)、盐酸羟胺(312mg，4.50mmol)和碳酸钠(240mg，2.25mmol)在MeOH和水(7mL和7mL)中的混合物过夜。将反应物用水处理，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并过滤。在真空下浓缩滤液，得到呈白色固体的粗标题化合物(730mg，粗物质)。MS(ESI)m/z 229.2[M+H]+。
E. (3-氨基-2，2-二甲基环丁基)氨基甲酸叔丁酯。向(3-(羟基亚氨基)-2，2-二甲基环丁基)氨基甲酸叔丁酯肟(730mg，粗物质)在MeOH和氨水(12.5mL和2.5mL)中的溶液中加入Raney-Ni(430mg，粗物质)。在室温下，在氢气氛下搅拌该反应混合物过夜。使反应过滤通过硅藻土，并在真空下浓缩滤液。通过硅胶柱色谱(在DCM中2-5％MeOH)纯化残余物，得到标题化合物(490mg，2.29mmol，两步的产率76％)。MS(ESI)m/z 215.2[M+H]+。
F. 4-氯-2-((3-氯苯乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在50℃下，搅拌2，4-二氯嘧啶-5-甲腈(5.0g，28.90mmol)、2-(3-氯苯基)乙胺(4.78g，28.9mmol)和DIEA(7.45g，57.8mmol)在THF(50mL)中的混合物3小时。在冷却至室温之后，加入水(80mL)，并用乙酸乙酯(3×100mL)萃取水层。将合并的有机层用饱和的氯化铵水溶液、盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。在真空中蒸发滤液，得到粗产物，将其用乙酸乙酯(30mL)处理并搅拌30分钟。将混合物过滤并干燥，得到标题化合物(3.20g，10.92mmol，产率38％)。MS(ESI)m/z 293.1，294.1[M+H]+。
G. ((1S，3S)-3-((2-((3-氯苯乙基)氨基)-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基环丁基)氨基甲酸叔丁酯、((1R，3R)-3-((2-((3-氯苯乙基)氨基)-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基环丁基)氨基甲酸叔丁酯、((1R，3S)-3-((2-((3-氯苯乙基) 氨基)-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基环丁基)氨基甲酸叔丁酯和((1S，3R)-3-((2-((3-氯苯乙基)氨基)-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基环丁基)氨基甲酸叔丁酯。向4-氯-2-((3-氯苯乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈(600mg，2.04mmol)和(3-氨基-2，2-二甲基环丁基)氨基甲酸叔丁酯(490mg，2.29mmol)在二噁烷(20mL)中的混合物中加入DIEA(738mg，5.73mmol)。在125℃下，在微波照射下，搅拌得到的混合物5小时。在减压下，除去有机溶剂之后，将残余物用乙酸乙酯稀释，并用氯化铵水溶液洗涤有机层。分离有机层，经硫酸钠干燥并在真空下浓缩，得到粗产物，通过硅胶色谱(在石油中10％至33％的乙酸乙酯)纯化，得到呈浅黄色固体的标题化合物(610mg，1.30mmol，产率63％)。通过手性制备超临界流体色谱(手性柱：OJ，柱尺寸0.46cm I.D.×25cm L，5um；流动相：CO2∶MeOH∶DEA＝60∶40∶0.1，流率2.5mL/min，220nmT＝35℃)分离外消旋产物(500mg，1.06mmol)，得到四种异构体：((1S，3S)-3-((2-((3-氯苯乙基)氨基)-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基环丁基)氨基甲酸叔丁酯(峰1，100mg，0.21mmol，产率20％，RT＝7.88min，d.e.＝100％，e.e.＝100％)、((1R，3R)-3-((2-((3-氯苯乙基)氨基)-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基环丁基)氨基甲酸叔丁酯(峰3，102mg，0.22mmol，产率20％，RT＝9.37min，d.e.＝100％，e.e.＝100％)、((1R，3S)-3-((2-((3-氯苯乙基)氨基)-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基环丁基)氨基甲酸叔丁酯(峰2，85mg，0.18mmol，产率17％，RT＝8.29min，d.e.＝100％，e.e.＝100％)和((1S，3R)-3-((2-((3-氯苯乙基)氨基)-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基环丁基)氨基甲酸叔丁酯(峰4，82mg，0.17mmol，产率17％，RT＝10.96min，d.e.＝100％，e.e.＝100％).MS(ESI)m/z 471.2[M+H]+
H. 4-(((1S，3S)-3-氨基-2，2-二甲基环丁基)氨基)-2-((3-氯苯乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴中冷却下，向((1S，3S)-3-((2-((3-氯苯乙基)氨基)-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基环丁基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.21mmol)在无水DCM(2mL)中的溶液中滴加TFA(1.5mL)。在室温下，搅拌得到的混合物30分钟。在除去有机溶剂之后，用氨水中和残余物，并用DCM萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到粗产物，通过标准方法纯化，得到标题化合物(49.7mg，0.13mmol，产率64％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)8.06(s，1H)，7.29-7.15(m，4H)，4.33(dd，J1＝5.6Hz，J2＝9.2Hz，1H)，3.72-3.50(m，2H)，3.18-3.12(m，1H)，2.93-2.86(m，2H)，2.45-2.39(m，1H)，2.17-2.12(m，1H)，1.20(s，3H)，0.98(s 3H).MS(ESI)m/z 371.2[M+H]+。
4-(((1R，3R)-3-氨基-2，2-二甲基环丁基)氨基)-2-((3-氯苯乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴中冷却下，向((1R，3R)-3-((2-((3-氯苯乙基)氨基)-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基环丁基)氨基甲酸叔丁酯(102mg，0.22mmol)在无水DCM(2mL)中的溶液中滴加TFA(1.5mL)。在室温下，搅拌得到的混合物30分钟。在除去有机溶剂之后，用氨水中和残余物，并用DCM萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到粗产物，通过标准方法纯化，得到标题化合物(43.8mg，0.118mmol，产率54％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)8.06(s，1H)，7.29-7.15(m，4H)，4.33(dd，J1＝5.6Hz，J2＝9.2Hz，1H)，3.72-3.50(m，2H)，3.18-3.12(m，1H)，2.93-2.86(m，2H)，2.45-2.39(m，1H)，2.17-2.12(m，1H)，1.20(s，3H)，0.98(s3H).MS(ESI)m/z 371.2[M+H]+。
4-(((1S，3R)-3-氨基-2，2-二甲基环丁基)氨基)-2-((3-氯苯乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在冰水浴中，向((1S，3R)-3-((2-((3-氯苯乙基)氨基)-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基环丁基)氨基甲酸叔丁酯(85mg，0.18mmol)在无水DCM(2mL)中的溶液中滴加TFA(1.5mL)。在室温下，搅拌得到的混合物30分钟。在除去有机溶剂之后，用氨水中和残余物，并用DCM萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到粗产物，通过标准方法纯化，得到标题化合物(48.7mg，0.131mmol，产率73％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)8.04(s，1H)，7.27-7.14(m，4H)，4.16-3.97(m，1H)，3.74-3.49(m，2H)，2.90-2.85(m，3H)，2.60-2.49(m，1H)，1.92-1.86(m，1H)，1.22(s，3H)，0.92(s3H).MS(ESI)m/z 371.2[M+H]+。
4-(((1R，3S)-3-氨基-2，2-二甲基环丁基)氨基)-2-((3-氯苯乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴中冷却下，向((1R，3S)-3-((2-((3-氯苯乙基)氨基)-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基环丁基)氨基甲酸叔丁酯(82mg，0.17mmol)在无水DCM(2mL)中的溶液中滴加三氟乙酸(1.5mL)。在室温下，搅拌得到的混合物30分钟。在除去有机溶剂之后，用氨水中和残余物，并用DCM萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到粗产物，通过标准方法纯化，得到标题化合物(34.3mg，0.092mmol，产率55％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)8.04(s，1H)，7.27-7.14(m，4H)，4.16-3.97(m，1H)，3.74-3.49(m，2H)，2.90-2.85(m，3H)，2.60-2.49(m，1H)，1.92-1.86(m，1H)，1.22(s，3H)，0.92(s 3H).MS(ESI)m/z 371.2[M+H]+。
实施例23：4-((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基氨基)-2-(3-(5-甲基-1H-四唑-1-基)苯乙基氨基)嘧啶-5-甲腈
A. (3-氨基-苯基)-乙腈。在85℃下，将(3-硝基-苯基)-乙腈(2.00g，12.35mmol)、铁粉(2.07g，37.03mmol)和氯化铵(1.96g，37.03mmol)在EtOH(20mL)和水(4mL)中的混合物回流1小时。将反应混合物过滤通过硅藻土，并用EtOH洗涤。浓缩合并的滤液，并通过硅胶柱色谱(在石油醚中20％乙酸乙酯)纯化残余物，得到呈浅黄色固体的标题化合物(1.57g，11.89mmol，产率96％)。MS(ESI)m/z 133.1[M+H]+。
B. N-(3-氰基甲基-苯基)-乙酰胺。在0℃下，向(3-氨基-苯基)-乙腈(500mg，3.79mmol)和TEA(498mg，4.93mmol)的混合物中慢慢地加入乙酰氯(387mg，4.93mmol)。在室温下，搅拌得到的混合物10分钟。用饱和的氯化铵水溶液淬灭反应混合物，并用DCM萃取两次。将合并的有机层用氯化铵水溶液和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到呈浅黄色固体的标题化合物(558mg，3.20mmol，产率85％)。MS(ESI)m/z 175.1[M+H]+。
C. [3-(5-甲基-四唑-1-基)-苯基]-乙腈。在-5℃下，向N-(3-氰基甲基-苯基)-乙酰胺(500mg，2.87mmol)在无水乙腈(5mL)中的溶液中慢慢地加入三氟甲烷磺酸酸酐(1.62g，5.74mmol)。搅拌得到的混合物5，慢慢地加入三甲基甲硅烷基叠氮化物(1.32g，11.48mmol)，同时保持温度低于-5℃。在-5℃下，搅拌得到的混合物1小时。将该反应物倾倒到冷却氯化氨水溶液中，并用乙酸乙酯萃取三次。经硫酸钠干燥合并的有机层并浓缩，得到粗产物，通过硅胶柱色谱(在DCM中1-2％MeOH)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(260mg，1.31mmol，产率45％)。MS(ESI)m/z 199.9[M+H]+。
D. 2-[3-(5-甲基-四唑-1-基)-苯基]-乙胺。在0℃下，向[3-(5-甲基-四唑-1-基)-苯基]-乙腈(180mg，0.90mmol)在THF(3mL)中的溶液中慢慢地加入硼烷-甲基硫化物复合物在THF(2M，0.8mL，1.60mmol)中的溶液，并在80℃下，在氮气下将得到的混合物回流2小时。用MeOH淬灭反应，并在室温下搅拌1小时。浓缩该混合物，得到粗产物，通过硅胶柱色谱(在石油醚中10-26％乙酸乙酯)纯化，得到标题化合物(85mg，0.42mmol，产率46％)。MS(ESI)m/z 204.1[M+H]+。
F. 4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。在100℃下，加热4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(2.15g，11.6mmol))、(1S，4R)-4-氨基-2，2-二甲基环己醇(1.51g，10.5mmol)和DIEA(2.72g，21.1mmol)在异丙醇(30mL)中的混合物3小时。在减压下除去有机溶剂之后，用水处理残余物，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到粗产物，通过硅胶柱色谱(在石油中15％乙酸乙酯)纯化，得到呈浅黄色固体的标题化合物(2.2g，7.53mmol，产率72％)。MS(ESI)m/z 293.2[M+H]+.
G. 4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈和4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲基亚磺酰基)嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴中冷却下，向4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.02g，3.48mmol)在无水DCM(20mL)中的溶液中加入间-氯过苯甲酸(85％，1.78g，8.79mmol)。在室温下，搅拌得到的混合物3小时。用硫代硫酸钠水溶液淬灭反应，并用DCM萃取。将合并的有机层用碳酸钾水溶液和盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到呈浅黄色固体的标题化合物(0.9g，粗物质)。MS(ESI)m/z 309.2，325.2[M+H]+。
H. 4-((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基氨基)-2-(3-(5-甲基-1H-四唑-1-基)苯乙基氨基)嘧啶-5-甲腈。在100℃下，在微波照射下，搅拌2-(2-(5-甲基-1H-四唑-1-基)苯基)乙胺(85mg，0.42mmol)、4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈和4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲基亚磺酰基)嘧啶-5-甲腈(90mg，0.27mmol)和DIEA(105mg，0.81mmol)的混合物1.5小时。在冷却至室温之后，浓缩反应混合物，并通过标准方法纯化残余物，得到标题化合物(44.3mg，0.073mmol，产率21％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)7.92(m，1H)，7.50-7.40(m，2H)，7.34-7.25(m，2H)，4.25-4.15(m，1H)，3.68-3.49(m，2H)，3.25-3.22(m，1H)，3.00-2.87(m，2H)，2.46(s，3H)，1.79-1.22(m，6H)，0.88-0.83(m，6H).MS(ESI)m/z 448.2[M+H]+。
实施例24：2-((3-氯-2-(三氟甲基)苯乙基)氨基)-4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)嘧啶-5-甲腈
A. (3-氯-2-(三氟甲基)苯基)甲醇。在0℃至5℃下，向3-氯-2-(三氟甲基)苯甲酸(0.15g，0.668mmol)在THF(5mL)中的溶液中加入硼烷二甲基硫醚复合物(2M，0.70mL，1.40mmol)。在氮气氛下，在75℃下，加热得到的溶液2小时。在0℃下，用MeOH(1mL)淬灭反应，并在真空下浓缩，得到粗标题产物(0.12g)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)7.66-7.64(m，1H)，7.48-7.44(m，2H)，4.90(d，J＝2.0Hz，2H)，3.70(t，J＝2.0Hz，1H)。
B. 3-氯-2-(三氟甲基)苄基甲磺酸酯。在0℃下，向(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)MeOH(0.12g，粗物质)和TEA(0.115g，1.14mmol)在无水DCM(5mL)中的混合物中滴加甲磺酰氯(98.0mg，0.855mmol)。在室温下，搅拌得到的反应混合物2小时。加入水，并用DCM(10mL×3)萃取该混合物。将合并的有机层用饱和的氯化铵水溶液、盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。在真空下蒸发滤液，得到粗标题产物(0.150g)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)7.62-7.43(m，3H)，5.41(d，J＝1.8Hz，2H)，3.03(s，3H)。
C. 2-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)乙腈。向3-氯-2-(三氟甲基)苄基甲磺酸酯(0.150g，粗物质)和三甲基硅烷睛(119mg，1.2mmol)在乙腈(5mL)中的混合物中加入氟化四丁铵在THF(1M，1.2mL，1.2mmol)中的溶液。在室温下，搅拌该反应2小时。用乙酸乙酯和水处理反应物，并将分离的有机层用盐水洗涤，干燥并浓缩，得到粗产物，通过硅胶柱色谱(在石油醚中的10％乙酸乙酯)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(0.10g，3.03mmol，经3步的产率68％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)7.56-7.48(m，3H)，3.99(d，J＝2.0Hz，2H).
D. 2-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)乙胺。向2-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)乙腈(0.10g，3.03mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中加入拉尼镍(100mg)。在真空下，使该混合物脱气10分钟，然后在在室温下，在全充气气球下氢化过夜。将该混合物过滤通过硅藻土垫，并用MeOH(10mL)洗涤滤饼。在真空下浓缩滤液，得到粗产物(100mg)。MS(ESI)m/z 224.1[M+H]+。
E. 4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。在100℃下，加热4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(2.15g，11.6mmol))、(1S，4R)-4-氨基-2，2-二甲基环己醇(1.51g，10.5mmol)和DIEA(2.72mg，21.1mmol)在异丙醇(30mL)中的混合物3小时。在减压下除去有机溶剂之后，用水处理残余物，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到粗产物，通过硅胶柱色谱(在石油中15％乙酸乙酯)纯化，得到呈浅黄色固体的标题化合物(2.2g，7.53mmol，产率72％)。MS(ESI)m/z 293.2[M+H]+。
F. 4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴中冷却下，向4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.02g，3.48mmol)在无水DCM(20mL)中的溶液中加入间-氯过苯甲酸(85％，1.78g，8.79mmol)。在室温下，搅拌得到的混合物3小时。用硫代硫酸钠水溶液淬灭反应，并用DCM萃取。将合并的有机层用碳酸钾水溶液和盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到呈浅黄色固体的标题产物(0.9g，粗物质)。MS(ESI)m/z 309.2，325.2[M+H]+。
G. 2-((3-氯-2-(三氟甲基)苯乙基)氨基)-4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在微波反应器中，在100℃下，搅拌4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈(75mg，0.23mmol)、2-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)乙胺(100mg，粗物质)和DIEA(85mg，0.66mmol)在THF(2mL)中的混合物1.5小时。在冷却至室温之后，将反应混合物浓缩，并通过标准方法纯化残余物，得到标题化合物(42.2mg，0.090mmol，产率39％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)8.10-8.03(m，1H)，7.48-4.41(m，2H)，7.30(m，1H)，4.31-4.28(m，1H)，3.73-3.69(m，1H)，3.63-3.56(m，1H)，3.39-3.37(m，1H)，3.17-3.14(m，2H)，1.88-1.44(m，6H)，0.97(s，3H)，0.96(s，3H).MS(ESI)m/z468.1[M+H]+。
实施例25：4-氯-2-(2-(5-氰基-4-((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基氨基)嘧啶-2-基氨基)乙基)苯磺酰胺
A. N-[2-(3-氯-苯基)-乙基]-乙酰胺。在0℃下，向2-(3-氯-苯基)-乙胺(3.00g，19.28mmol)和TEA(2.9g，28.92mmol)在无水DCM(30mL)中的溶液中滴加乙酰氯(2.27g，28.92mmol)。在室温下，搅拌得到的混合物1小时。用水淬灭反应，并用乙酸乙酯萃取该混合物。将合并的有机层用饱和的氯化铵水溶液、盐水洗涤，并浓缩，得到呈黄色油状物的标题化合物(3.60g，18.27mmol，产率94％)。MS(ESI)m/z 198.1，200.1[M+H]+。
B. 2-(2-乙酰氨基-乙基)-4-氯-苯磺酰氯。在0-5℃下，将N-[2-(3-氯-苯基)-乙基]-乙酰胺(400mg，2.02mmol)慢慢地加入到氯磺酸(4mL)中。在室温下，搅拌得到的混合物2小时。将该反应混合物倾倒入冰-水中，并搅拌10分钟。用DCM萃取该混合物。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到呈褐色固体的标题化合物(288mg，0.97mmol，产率48％)。MS(ESI)m/z 296.0，298.0，300.0[M+H]+.
C. N-[2-(5-氯-2-氨磺酰基-苯基)-乙基]-乙酰胺。在0-5℃下，向2-(2-乙酰氨基-乙基)-4-氯-苯磺酰氯(288mg，1.04mmol)在无水DCM(4mL)中的溶液中慢慢地加入氨溶液(2mL)。在室温下，搅拌得到的反应混合物1小时。加入水，并用氯仿/异丙醇(3∶1)萃取该混合物。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到粗产物，通过硅胶色谱(209mg，0.76mmol，产率78％)纯化。MS(ESI)m/z 277.0，279.0[M+H]+。
D. 2-(2-氨基-乙基)-4-氯-苯磺酰胺。在100℃下，搅拌N-[2-(5-氯-2-氨磺酰基-苯基)-乙基]-乙酰胺(209mg，0.76mmol)和氢氧化钾水溶液(2mol/L，3mL，6mmol)的混合物4小时。在冷却至室温之后，用2N盐酸水溶液中和反应。将该混合物浓缩至无水，并用溶剂(在DCM中3％MeOH，200mL)稀释残余物，并搅拌小时。过滤混合物，并浓缩滤液，得到呈灰色固体的标题化合物(150mg，0.64mmol，产率85％)。MS(ESI)m/z 235.1，237.1[M+H]+。
E. 4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。在100℃下，加热4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(2.15g，11.6mmol))、(1S，4R)-4-氨基-2，2-二甲基环己醇(1.51g，10.5mmol)和DIEA(2.72g，21.1mmol)在异丙醇(30mL)中的混合物3小时。在减压下除去有机溶剂之后，用水处理残余物，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到粗产物，通过硅胶柱色谱(在石油中15％乙酸乙酯)纯化，得到呈浅黄色固体的标题化合物(2.2g，7.53mmol，产率72％)。MS(ESI)m/z 293.2[M+H]+。
F. 4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴中冷却下，向4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.02g，3.48mmol)在无水DCM(20mL)中的溶液中加入间-氯过苯甲酸(85％，1.78g，8.79mmol)。在室温下，搅拌得到的混合物3小时。用硫代硫酸钠水溶液淬灭反应，并用DCM萃取。将合并的有机层用碳酸钾水溶液和盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到呈浅黄色固体的标题产物(0.9g，粗物质)。MS(ESI)m/z 309.2，325.2[M+H]+.
4-氯-2-(2-(5-氰基-4-((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基氨基)嘧啶-2-基氨基)乙基)苯磺酰胺。在微波反应器中，在100℃下，搅拌4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈(100mg，0.31mmol)、2-(2-氨基-乙基)-4-氯-苯磺酰胺(150mg，0.64mmol)和DIEA(80mg，0.62mmol)在THF(4mL)中的混合物1小时。在冷却至室温之后，将反应混合物浓缩，并通过标准方法纯化残余物，得到标题化合物(53.3mg，0.060mmol，产率26％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)8.18-8.00(m，1H)，7.96(d，J＝8.0Hz，1H)，7.50-7.34(m，2H)，4.41-4.23(m，1H)，3.89-3.51(m，2H)，3.41-3.33(m，2H)，3.29-3.22(m，1H)，2.04-1.80(m，1H)，1.80-1.68(m，2H)，1.67-1.38(m，3H)，1.05-0.93(m，6H).MS(ESI)m/z 479.1，481.1[M+H]+。
实施例26：2-氯-4-(2-(5-氰基-4-((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基氨基)嘧啶-2-基氨基)乙基)苯磺酰胺
A. N-苯乙基乙酰胺。在0℃下，向2-苯基乙胺(5.00g，41.32mmol)和TEA(6.26g，61.98mmol)在无水DCM(50mL)中的溶液中滴加乙酰氯(3.57g，45.45mmol)。在室温下，搅拌得到的反应混合物30分钟。加入水，并用DCM萃取该混合物。将合并的有机层用饱和的氯化铵水溶液、盐水洗涤，并浓缩，得到呈黄色油状物的标题产物(6.06g，37.19mmol，产率90％)。MS(ESI)m/z 164.1[M+H]+。
B. 4-(2-乙酰胺基乙基)苯-1-磺酰氯。在0-5℃下，将N-苯乙基乙酰胺(4.50g，27.6mmol)慢慢地加入到氯磺酸(30mL)中。在室温下，搅拌得到的反应混合物2小时。将该反应混合物倾倒入冰-水中，并搅拌10分钟。用DCM萃取该混合物。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到呈褐色固体的标题化合物(3.30g，12.64mmol，产率45％)。MS(ESI)m/z 262.1[M+H]+。
C. N-[2-(4-氨磺酰基-苯基)-乙基]-乙酰胺。在0-5℃下，向4-(2-乙酰胺基乙基)苯-1-磺酰氯(3.30g，12.64mmol)在无水DCM(30mL)中溶液中加入氨溶液(15mL)。在室温下，搅拌得到的反应混合物1小时。加入水，并用氯仿/异丙醇(3∶1)萃取该混合物。经过无水硫酸钠干燥合并的有机层，并浓缩，得到粗产物，通过硅胶色谱(在DCM中1-2％MeOH)纯化，呈褐色固体(2.5g，10.33mmol，产率82％)。MS(ESI)m/z 243.1[M+H]+。
D. N-[2-(3-氯-4-氨磺酰基-苯基)-乙基]-乙酰胺。在0℃下，向N-[2-(4-氨磺酰基-苯基)-乙基]-乙酰胺(780mg，3.21mmol)、N-氯琥珀酰亚胺(216mg，1.60mmol)、过硫酸钠(573mg，2.41mmol)和双乙酸钯(108mg，0.48mmol)在二氯乙烷(30mL)中的混合物中加入三氟甲磺酸(843mg，5.62mmol)。在密封管中，在75℃下，搅拌得到的混合物7小时。用氨水中和反应混合物，并用DCM萃取该混合物。经过无水硫酸钠干燥合并的有机层，并浓缩，得到粗产物，通过硅胶色谱(在DCM中1-3％MeOH)纯化，得到呈褐色固体的标题化合物(350mg，1.27mmol，产率39％)。MS(ESI)m/z 276.0[M+H]+。
E. 4-(2-氨基-乙基)-2-氯-苯磺酰胺。在100℃下，搅拌N-[2-(3-氯-4-氨磺酰基-苯基)-乙基]-乙酰胺(350mg，1.27mmol)和氢氧化钾水溶液(2mol/L，8mL，16mmol)的混合物4小时。在冷却至室温之后，用2N盐酸水溶液中和反应。将该混合物浓缩至无水，用溶剂(在DCM中3％MeOH，200mL)稀释残余物，并搅拌1小时。过滤该混合物，并浓缩滤液，得到呈浅绿色固体的标题化合物(240mg，1.03mmol，产率81％)。MS(ESI)m/z235.1[M+H]+。
F. 4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。在100℃下，加热4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(2.15g，11.6mmol))、(1S，4R)-4-氨基-2，2-二甲基环己醇(1.51g，10.5mmol)和DIEA(2.72g，21.1mmol)在异丙醇(30mL)中的混合物3小时。在减压下除去有机溶剂之后，用水处理残余物，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到粗产物，通过硅胶柱色谱(在石油中15％乙酸乙酯)纯化，得到呈浅黄色固体的标题化合物(2.2g，7.53mmol，产率72％)。MS(ESI)m/z 293.2[M+H]+。
G. 4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈和4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲基亚磺酰基)嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴冷却下，向4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.02g，3.48mmol)在无水DCM(20mL)中的溶液中加入间-氯过苯甲过苯甲酸(85％，1.78g，8.79mmol)。在室温下，搅拌得到的混合物3小时。用硫代硫过苯甲酸钠水溶液淬灭反应，并用DCM萃取。将合并的有机层用碳酸钾水溶液和盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到呈浅黄色固体的标题化合物(0.9g，粗物质)。MS(ESI)m/z 309.2，325.2[M+H]+。
H. 2-氯-4-{2-[5-氰基-4-(4-羟基-3，3-二甲基-环己基氨基)-嘧啶-2-基氨基]-乙基}-苯磺酰胺。在微波反应器中，在100℃下，搅拌4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈(90mg，0.28mmol)和4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲基亚磺酰基)嘧啶-5-甲腈、4-(2-氨基-乙基)-2-氯-苯磺酰胺(90mg，0.38mmol)和DIEA(72mg，0.56mmol)在THF(4mL)中的混合物1小时。在冷却至室温之后，浓缩反应混合物，并通过标准方法纯化残余物，得到标题化合物(28.6mg，0.060mmol，产率26％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)7.93(s，1H)，7.85(d，J＝8.0Hz，1H)，7.35(s，1H)，7.20(d，J＝8.0Hz，1H)，4.26-4.12(m，1H)，3.66-3.46(m，2H)，3.31-3.25(m，1H)，2.87(t，J＝6.8Hz，2H)，1.86-1.35(m，6H)，0.90(s，3H)，0.88(s，3H).MS(ESI)m/z 479.1[M+H]+。
实施例27：2-(((4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1S，3R)-3-羟基-3-甲基环己基)氨基)嘧啶-5-甲腈
A. 4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-甲腈。在0℃下，向氢化钠(分散在矿物油中60％，1.84g，46mmol)在THF(30.0mL)中的悬浮液中加入2，2-二氟丙-1-醇(4.42g，46.0mmol)。在室温下，搅拌得到的混合物1小时，然后在0℃下，分批加入4-氯嘧啶-5-甲腈(6g，43.2mmol)。在加入以后，在室温下搅拌反应混合物30分钟。用饱和的氯化铵水溶液淬灭反应，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并浓缩，得到粗产物，通过硅胶柱色谱(在石油醚中10％乙酸乙酯)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(4.40g，22.1mmol，产率51％)。MS(ESI)m/z 200.0[M+H]+。
B. (4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲胺。向4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-甲腈(1.7g，8.54mmol)在THF(30mL)中的溶液中加入拉尼镍(500mg，粗物质)。在室温下，在氢气氛，搅拌得到的混合物过夜。过滤反应物，在真空中浓缩滤液，并通过硅胶柱色谱(在DCM中5％MeOH)纯化，得到呈黄色固体的期望产物(650mg，3.20mmol，产率37％)。MS(ESI)m/z204.1[M+H]+。
C. (3-羟基环己基)氨基甲酸叔丁酯。向3-氨基环己醇(3.0g，26.0mol)在THF(30mL)中的溶液中加入二碳酸二叔丁酯(6.74g，31.2mmol)。在50℃下，搅拌得到的混合物16小时。然后，在真空中浓缩反应混合物，并通过硅胶柱色谱(在石油醚中30％乙酸乙酯)纯化，得到期望的化合物(4.40g，20.46mmol，产率78％)。MS(ESI)m/z 216.1[M+H]+。
D. (3-氧代环己基)氨基甲酸叔丁酯。在冰浴中冷却下，向(3-羟基环己基)氨基甲酸叔丁酯(4.40g，20.46mmol)在DCM(250mL)中的溶液中分批加入Dess-Martin过碘烷(13.0g，30.70mmol)。在室温下，搅拌该混合物2小时。用DCM稀释该反应，并用碳酸钠水溶液洗涤。经无水硫酸钠干燥分离的有机层，并浓缩。通过硅胶柱色谱(在石油醚中40％乙酸乙酯)纯化粗化合物，得到标题化合物(4.0g，18.78mmol，产率91％)。MS(ESI)m/z 214.1[M+H]+。
E. (3-羟基环己基)氨基甲酸叔丁酯。在-75℃下，向(3-氧代环己基)氨基甲酸叔丁酯(4.0g，18.78mmol)在无水THF 200mL)中的脱气悬浮液中加入甲基锂在THF(3M，25.0mL，75mmol)中的溶液。在-75℃下，搅拌得到的反应混合物1小时。在-75℃下，加入甲基锂在THF(3M，25.0mL，75mmol)中的溶液，并搅拌该混合物1小时。滴加氯化氨水溶液以淬灭反应。在室温下，继续搅拌得到的反应混合物2小时。用乙酸乙酯(150mL×3)萃取反应混合物。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在真空下浓缩，得到粗产物(4.0g，粗物质)，其直接用于下一步而无需进一步纯化。MS(ESI)m/z 230.1[M+H]+。
F. 3-氨基-1-甲基环己醇。在冰浴中冷却下，向(3-羟基环己基)氨基甲酸叔丁酯(4.0g，粗物质)在DCM(40mL)中的溶液中加入TFA(20mL)。在室温下，搅拌得到的反应混合物2小时。浓缩该混合物，得到粗产物(3.0g，粗物质)，其用于下一步而无需进一步纯化。MS(ESI)m/z 130.1[M+H]+。
G. 4-(((1S，3R)-3-羟基-3-甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈and4-(((1R，3S)-3-羟基-3-甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈.在100℃下，加热4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(3.71g，20mmol))、3-氨基-1-甲基环己醇(3.0g，粗物质)和DIEA(2.72mg，21.1mmol)在异丙醇(30mL)中的混合物3小时。在减压下除去有机溶剂。用水处理残余物，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到粗产物，通过硅胶柱色谱(在石油中20％乙酸乙酯)纯化，得到顺式-异构体(0.90g，3.24mmol，3个步骤的产率17％)和反式-异构体(1.80g，6.47mmol，3个步骤的产率34％)。通过手性SFC(柱IF；方法：70-30-CO2-MeOH；CO2流速：2.1；柱温＝40℃)分离顺式-异构体(0.90g，3.24mmol)，得到4-(((1S，3R)-3-羟基-3-甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(峰1∶300mg，1.08mmol，产率33％，100％e.e.)和4-(((1R，3S)-3-羟基-3-甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(峰2∶310mg，1.12mmol，产率34％，100％e.e.)，MS(ESI)m/z 279.1[M+H]+。
H. 4-(((1S，3R)-3-羟基-3-甲基环己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴中冷却下，向4-(((1S，3R)-3-羟基-3-甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(峰1∶250mg，0.90mmol)在无水DCM(5mL)中的溶液中加入间-氯过苯甲酸(85％，366mg，1.80mmol)。在室温下，搅拌得到的混合物1小时。用硫代硫酸钠水溶液淬灭反应，并用DCM萃取。将合并的有机层用碳酸钾水溶液和盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到呈浅黄色固体的标题化合物(230mg，粗物质)。MS(ESI)m/z 311.2[M+H]+。
I. 2-(((4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1S，3R)-3-羟基-3-甲基环己基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在微波反应器中，在100℃下，搅拌4-(((1S，3R)-3-羟基-3-甲基环己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈(80mg，粗物质)、(4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲胺(50mg 0.246mmol)和DIEA(85mg，0.66mmol)在THF(2mL)中的混合物1小时。将反应物冷却至室温，浓缩该混合物。通过标准方法纯化残余物，得到期望产物(26.1mg，0.060mmol，产率24％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)8.69(s，1H)，8.41(s，1H)，8.11(s，1H)，4.73-4.50(m，4H)，4.34-4.23(m，1H)，1.92-1.08(m，14H).MS(ESI)m/z 434.2[M+H]+。
实施例28：(1s，3s)-3-((2-((2-(1H-吲哚-3-基)乙基)氨基)-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)环丁烷甲酰胺
A. (1s，3s)-甲基3-((叔丁氧基羰基)氨基)环丁烷-羧酸酯。在0℃下，向(1s，3s)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)环丁烷羧酸(600mg，2.79mmol)和碳酸钾(577mg，4.18mmol)在DMF(4mL)中的混合物中加入碘代甲烷(593mg，4.18mmol)，在室温下搅拌得到的混合物3小时。用水和乙酸乙酯处理反应混合物。将分离的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到呈黄色固体的标题化合物(590mg，2.58mmol，产率92％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)4.85-4.68(brs，1H)，4.16-4.08(m，1H)，3.68(s，3H)，2.82-2.71(m，1H)，2.67-2.54(m，2H)，2.14-2.04(m，2H)。
B. (1s，3s)-甲基3-氨基环丁烷羧酸酯。在～0℃至5℃下，向(1s，3s)-甲基3-((叔丁氧基羰基)氨基)环丁烷羧酸酯(590mg，2.58mmol)在DCM(5mL)中的溶液中加入TFA(2.5mL)。在室温下，搅拌得到的反应混合物1.5小时。浓缩反应混合物，得到产物，其用于下一步而没有进一步纯化(300mg，粗物质)。MS(ESI)m/z 130.1[M+H]+
C. 4-氯-2-[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基氨基]-嘧啶-5-甲腈。在50℃下，搅拌2，4-二氯-嘧啶-5-甲腈(2.0g，11.5mmol)、2-(1H-吲哚-3-基)-乙胺(1.83g，11.4mmol)和DIEA(1.94g，15.0mmol)在THF(50mL)中的混合物3小时。在冷却至室温之后，浓缩反应混合物，并用乙酸乙酯(150mL)稀释残余物。将有机层用饱和的氯化铵水溶液、盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。在真空中蒸发滤液，得到粗产物，通过硅胶柱色谱(在石油醚中20％乙酸乙酯)纯化，得到呈褐色固体的标题化合物(1.3g，4.38mmol，产率38％)。MS(ESI)m/z 298.1[M+H]+。
D. (1s，3s)-3-((2-((2-(1H-吲哚-3-基)乙基)氨基)-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)环丁烷-羧酸甲酯。在微波反应器中，在125℃下，搅拌2-((2-(1H-吲哚--3-基)乙基)氨基)-4-氯嘧啶-5-甲腈(713mg，2.40mmol)、(1s，3s)-3-氨基环丁烷羧酸甲酯(300mg，粗物质)和DIEA(619mg，4.80mmol)在DMA(5mL)中的混合物4小时。在冷却至室温之后，浓缩反应混合物，并用乙酸乙酯(100 mL)稀释残余物。用饱和的氯化铵水溶液、盐水洗涤洗涤有机层，经无水硫酸钠干燥并过滤。在真空中蒸发滤液，得到粗产物，通过硅胶柱色谱(在DCM中0.6％MeOH)纯化，得到呈褐色固体的标题化合物(720mg，1.85mmol，产率75％)。MS(ESI)m/z391.1[M+H]+。
E. (1s，3s)-3-((2-((2-(1H-吲哚--3-基)乙基)氨基)-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)环丁烷甲酰胺。在密封管中，在65℃下，搅拌(1s，3s)-甲基3-((2-((2-(1H-吲哚--3-基)乙基)氨基)-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)环丁烷羧酸酯(130mg，0.33mmol)在氨水的MeOH溶液(5mL，5mol/L)中的溶液72小时。在冷却至室温之后，浓缩反应混合物，并通过标准方法纯化残余物，得到期望产物(27.5mg，0.073mmol，产率22％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)8.02(s，1H)，7.59(d，J＝8.0Hz，1H)，7.33(J＝7.2Hz，1H)，7.11-6.98(m，3H)，4.55-4.40(m，1H)，3.68(t，J＝7.2Hz，2H)，3.03(t，J＝7.2Hz，2H)，2.78-2.69(m，4H)，2.55-2.49(m，2H)，2.26-2.18(m，2H).MS(ESI)m/z 376.2[M+H]+。
实施例29：4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-((2-(3-甲基-2-氧代-2，3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈
A. (2-(2-氧代-2，3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯。在0℃下，向1-(2-氨基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-2(3H)-酮盐酸盐(180mg，0.84mmol)和TEA(255mg，2.52mmol)在THF(15mL)中的溶液中加入焦碳酸二叔丁酯(218mg，1.01mmol)。在50℃下，搅拌得到的反应混合物3小时。在冷却至室温之后，浓缩混合物以除去溶剂，用乙酸乙酯稀释残余物，过滤并浓缩得到粗产物，通过硅胶柱色谱(在石油醚中20％乙酸乙酯)纯化，得到标题化合物(198mg，0.72mmol，产率85％)。MS(ESI)m/z 278.1[M+H]+。
B. (2-(3-甲基-2-氧代-2，3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯。在密封管中，在0℃下，在氮气下，向(2-(2-氧代-2，3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(190mg，0.69mmol)在THF(10mL)中的溶液中加入氢化钠(34.5mg，0.86mmol，在矿物油中60％)。在室温下搅拌得到的反应混合物20分钟之后，在0℃下，在氮气下，加入在THF(2mL)中的碘代甲烷(112mg，0.79mmol)。在室温下，搅拌反应4小时。用饱和的氯化铵水溶液淬灭反应，并用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。在真空下浓缩，得到粗产物，通过硅胶柱色谱(在石油醚中20％乙酸乙酯)纯化，得到标题化合物(100mg，0.345mmol，产率50％)。MS(ESI)m/z 292.1[M+H]+。
C. 1-(2-氨基-乙基)-3-甲基-1，3-二氢-苯并咪唑-2-酮.在0℃至5℃下，向(2-(3-甲基-2-氧代-2，3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.345mmol)在DCM(3mL)中的溶液中加入TFA(1.5mL)。在室温下，搅拌得到的反应混合物2小时。浓缩该反应混合物，得到粗产物，其用于下一步而无需进一步纯化(140mg粗物质)。MS(ESI)m/z 192.1[M+H]+。
D. 4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。在100℃下，加热4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(2.15g，11.6mmol))、(1S，4R)-4-氨基-2，2-二甲基环己醇(1.51g，10.5mmol)和DIEA(2.72mg，21.1mmol)在异丙醇(30mL)中的混合物3小时。在减压下除去有机溶剂之后，用水处理残余物，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到粗产物，通过硅胶柱色谱(在石油中15％乙酸乙酯)纯化，得到呈浅黄色固体的期望化合物(2.2g，7.53mmol，产率72％)。MS(ESI)m/z 293.2[M+H]+。
E. 4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴中冷却下，向4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.02g，3.48mmol)在无水DCM(20mL)中的溶液中加入间-氯过苯甲酸(85％，1.78g，8.79mmol)。在室温下，搅拌得到的混合物3小时。用硫代硫酸钠水溶液淬灭反应，并用DCM萃取。将合并的有机层用碳酸钾水溶液和盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到呈浅黄色固体的期望产物(0.9g，粗物质)。MS(ESI)m/z 309.2，325.2[M+H]+。
F. 4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-((2-(2-氧代-2，3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在微波反应器中，在100℃下，搅拌4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈(100mg，0.308mmol)、1-(2-氨基-乙基)-3-甲基-1，3-二氢-苯并咪唑-2-酮(140mg，粗物质)和DIEA(85mg，0.66mmol)在THF(2mL)中的混合物1.5小时。在冷却至室温之后，将反应混合物浓缩，并通过制备标准方法纯化残余物，得到标题化合物(36.7mg，0.084mmol，经2个步骤的产率24％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)8.08-7.94(m，1H)，7.11-7.08(m，4H)，4.26-4.10(m，3H)，3.89-3.66(m，2H)，3.40-3.35(m，4H)，1.96-1.51(m，6H)，1.05-0.99(m，6H)。MS(ESI)m/z 436.2[M+H]+。
实施例30：4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-((2-(1-甲基-1H-吲哚--3-基)乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈
A. (2-(1H-吲哚--3-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯。向2-(1H-吲哚-3-基)乙胺(1.00g，6.25mmol)在THF(10mL)中的溶液中加入二碳酸二叔丁酯(1.42g，6.56mmol)。在室温下，搅拌得到的反应混合物16小时。浓缩该混合物，得到粗产物，通过硅胶柱色谱(在石油醚中20％乙酸乙酯)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(1.50g，5.77mmol，产率92％)。MS(ESI)m/z 261.1[M+H]+。
B. (2-(1-甲基-1H-吲哚--3-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯。在0℃下，在氮气下，向(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)氨基甲酸酯(1.50g，5.77mmol)在无水THF(15mL)中的溶液中加入氢化钠(300mg，7.50mmol，在矿物油中60％)。在室温下，搅拌得到的反应混合物15分钟之后，在0℃下，慢慢地加入在THF(5mL)中的碘代甲烷(982mg，6.92mmol)。在室温下，搅拌得到的混合物3小时，并用饱和的氯化铵水溶液淬灭。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。在减压下除去有机溶剂，并通过硅胶柱色谱(在DCM中0.6％MeOH)纯化残余物，得到呈褐色固体的标题化合物(1.29g，4.71mmol，产率81％)。MS(ESI)m/z 275.1[M+H]+。
C. 2-(1-甲基-1H-吲哚--3-基)乙胺。在～0℃至5℃下，向(2-(1-甲基-1H-吲哚--3-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.29g，4.71mmol)在DCM(15mL)中的溶液中加入TFA(7mL)。在室温下，搅拌得到的反应混合物1小时。浓缩反应混合物，得到粗产物，用DCM稀释并用碳酸氢钠水溶液洗涤。将有机层用盐水洗涤，干燥并浓缩，得到呈黄色油状物的期望产物(700mg，4.02mmol，产率85％)。MS(ESI)m/z 175.1[M+H]+。
D. 4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。在100℃下，加热4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(2.15g，11.6mmol))、(1S，4R)-4-氨基-2，2-二甲基环己醇(1.51g，10.5mmol)和DIEA(2.72g，21.1mmol)在异丙醇(30mL)中的混合物3小时。在减压下除去有机溶剂之后，用水处理残余物，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到粗产物，通过硅胶柱色谱(在石油中15％乙酸乙酯)纯化，得到呈浅黄色固体的标题化合物(2.2g，7.53mmol，产率72％)。MS(ESI)m/z 293.2[M+H]+。
E. 4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴中冷却下，向4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.02g，3.48mmol)在无水DCM(20mL)中的溶液中加入间-氯过苯甲酸(85％，1.78g，8.79mmol)。在室温下，搅拌得到的混合物3小时。用硫代硫酸钠水溶液淬灭反应，并用DCM萃取。将合并的有机层用碳酸钾水溶液和盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到呈浅黄色固体的期望产物(0.9g，粗物质)。MS(ESI)m/z 309.2，325.2[M+H]+。
F. 4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-((2-(1-甲基-1H-吲哚--3-基)乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在微波反应器中，在100℃下，搅拌4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈(90mg，粗物质)、2-(1-甲基-1H-吲哚--3-基)乙胺(60mg，0.34mmol)和DIEA(72mg，0.56mmol)在THF(3mL)中的混合物1小时。在冷却至室温之后，将反应混合物浓缩，并通过标准方法纯化残余物，得到标题化合物(21.5mg，0.051mmol，产率15％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)8.00(s，1H)，7.52(d，J＝8.0Hz，1H)，7.30(d，J＝8.0Hz，1H)，7.14(t，J＝7.6Hz，1H)，7.00(t，J＝8.0Hz，1H)，6.94(s，1H)，4.28-4.23(m，1H)，3.75(s，3H)，3.75-3.62(m，2H)，3.02(t，J＝7.6Hz，1H)，1.82-1.26(m，6H)，1.02-0.87(m，6H).MS(ESI)m/z 419.2[M+H]+。
实施例31：顺式-2-(((4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-((6-羟基-6-甲基螺[3.3]庚烷-2-基)氨基)嘧啶-5-甲腈
反式-2-(((4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-((6-羟基-6-甲基螺[3.3]庚烷-2-基)氨基)嘧啶-5-甲腈
A. (6-氧代螺[3.3]庚-2-基)氨基甲酸叔丁酯。在～0℃至10℃下，向(6-羟基螺[3.3]庚-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1.00g，4.40mmol)在DCM(10mL)中的溶液中加入Dess-Martin过碘烷(2.80g，6.60mmol)。在室温下，搅拌得到的反应混合物1.5小时。用碳酸氢钠水溶液处理反应混合物，并用DCM萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。在真空下浓缩，得到粗产物，通过硅胶柱色谱(在石油醚中22％乙酸乙酯)纯化，得到呈浅黄色固体的标题化合物(800mg，3.55mmol，产率80％)。MS(ESI)m/z 226.1[M+H]+。
B. (6-羟基-6-甲基螺[3.3]庚-2-基)氨基甲酸叔丁酯。在-78℃下，在氮气下，向(6-氧代螺[3.3]庚-2-基)氨基甲酸叔丁酯(800mg，3.55mmol)在无水THF(15mL)中的溶液中加入甲基锂在THF中的溶液(2.36mL，3mol/L，7.50mmol)。在室温下，搅拌得到的混合物2小时。将反应混合物用饱和的氯化铵水溶液淬灭，并用乙酸乙酯萃取该混合物。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，并在真空中浓缩，得到呈褐色固体的标题化合物(760mg，粗物质)，其用于下一步而无需进一步纯化。MS(ESI)m/z 242.2[M+H]+。
C. 6-氨基-2-甲基螺[3.3]庚-2-醇。在～0℃至5℃下，向(6-羟基-6-甲基螺[3.3]庚-2-基)氨基甲酸酯(760mg，粗物质)在DCM(7mL)中的溶液中加入TFA(3.5mL)。在室温下，搅拌得到的反应混合物1小时。浓缩该反应混合物，得到呈褐色油状物的粗产物(500mg，粗物质)，其用于下一步而无需进一步纯化。MS(ESI)m/z 142.1[M+H]+。
D. 顺式-4-((6-羟基-6-甲基螺[3.3]庚-2-基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈和反式-4-((6-羟基-6-甲基螺[3.3]庚-2-基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。将6-氨基-2-甲基螺[3.3]庚-2-醇(500mg，粗物质)、4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(656mg，3.54mmol)和DIEA(913mg，7.08mmol)在异丙醇(8mL)中搅拌回流2小时。在冷却至室温之后，浓缩反应混合物，并通过硅胶柱色谱(在石油醚中22％乙酸乙酯)纯化残余物，得到呈褐色固体的外消旋化合物(700mg，2.41mmol，经3个步骤的产率68％)。MS(ESI)m/z 291.1[M+H]+。通过手性制备超临界流体色谱(柱：Chirlpak IF 5μm，柱尺寸4.6*250mm；流动相己烷∶乙醇＝70∶30；流速：1.0mL/min 230nm，T＝30℃)分离外消旋化合物，得到顺式-4-((6-羟基-6-甲基螺[3.3]庚-2-基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(160mg，0.55mmol，100％e.e.)和反式-4-((6-羟基-6-甲基螺[3.3]庚-2-基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(160mg，0.55mmol，99.4％e.e.)。
E. 4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-甲腈。在0℃下，向氢化钠(分散在矿物油中60％，1.84g，46mmol)在THF(30.0mL)中的悬浮液中加入2，2-二氟丙-1-醇(4.42g，46.0mmol)。在室温下，搅拌得到的混合物1小时，然后在0℃下，分批加入4-氯嘧啶-5-甲腈(6g，43.2mmol)。在加入以后，在室温下搅拌反应混合物30分钟。用饱和的氯化铵水溶液淬灭反应，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并浓缩，得到粗产物，通过硅胶柱色谱(在石油醚中10％乙酸乙酯)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(4.40g，22.1mmol，产率51％)。MS(ESI)m/z 200.0[M+H]+。
F. (4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲胺。向4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-甲腈(1.7g，8.54mmol)在THF(30mL)中的溶液中加入拉尼镍(500mg，粗物质)。在室温下，在氢气氛，搅拌得到的混合物过夜。过滤反应物，在真空中浓缩滤液得到粗产物，并通过硅胶柱色谱(在DCM中5％MeOH)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(650mg，3.20mmol，产率37％)。MS(ESI)m/z 204.1[M+H]+。
G. 顺式-4-((6-羟基-6-甲基螺[3.3]庚-2-基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈。向顺式-4-((6-羟基-6-甲基螺[3.3]庚-2-基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(80mg，0.276mmol)在DCM(3mL)中的溶液中加入3-氯过苯甲酸(85％，113mg，0.552mmol)。在室温下，搅拌得到的反应混合物1小时。加入硫代硫酸钠水溶液，并用DCM(50mL×2)萃取。将合并的有机层用碳酸钠水溶液和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到呈灰色固体的标题化合物(80mg，粗物质)。MS(ESI)m/z 323.1[M+H]+。
H. 反式-4-((6-羟基-6-甲基螺[3.3]庚-2-基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈。向反式4-((6-羟基-6-甲基螺[3.3]庚-2-基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(80mg，0.276mmol)在DCM(3mL)中的溶液中加入3-氯过苯甲酸(85％，113mg，0.552mmol)。在室温下，搅拌得到的反应混合物1小时。加入硫代硫酸钠水溶液，并用DCM(50mL×2)萃取。将合并的有机层用碳酸钠水溶液和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到呈灰色固体的标题化合物(80mg，粗物质)。MS(ESI)m/z 323.1[M+H]+。
I. 顺式-2-(((4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-((6-羟基-6-甲基螺[3.3]庚-2-基)氨基)嘧啶-5-甲腈。向顺式-4-((6-羟基-6-甲基螺[3.3]庚-2-基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈(80mg，粗物质)在THF(2.0mL)中的溶液中加入(4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲胺(56mg，0.276mmol)和DIEA (71mg，0.55mmol)。在微波反应器中，在100℃下，搅拌得到的混合物1小时。蒸发溶剂，并通过标准方法纯化残余物，得到标题化合物(33.9mg，0.076mmol，经两个步骤的产率28％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)8.68(s，1H)，8.36(s，1H)，8.10(s，1H)，4.70(t，J＝12.0Hz，2H)，4.61(s，2H)，4.50-4.20(m，1H)，2.50-1.95(m，8H)，1.74(t，J＝18.8Hz，3H)，1.26(s，3H).MS(ESI)m/z 446.1[M+H]+。
J. 反式-2-(((4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-((6-羟基-6-甲基螺[3.3]庚-2-基)氨基)嘧啶-5-甲腈。向反式4-((6-羟基-6-甲基螺[3.3]庚-2-基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈(80mg，粗物质)在THF(2.0mL)中的溶液中加入(4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲胺(100mg，粗物质)和DIEA(71mg，0.55mmol)。在微波反应器中，在100℃下，搅拌得到的混合物1小时。蒸发溶剂，并通过标准方法纯化残余物，得到标题化合物(36.9mg，0.083mmol，经两个步骤的产率30％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)8.68(s，1H)，8.36(s，1H)，8.10(s，1H)，4.70(t，J＝12.0Hz，2H)，4.61(s，2H)，4.50-4.20(m，1H)，2.50-1.95(m，8H)，1.74(t，J＝18.8Hz，3H)，1.26(s，3H).MS(ESI)m/z 446.1[M+H]+。
实施例32：2-(((4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1R，3S)-3-羟基-2，2-二甲基环己基)氨基)嘧啶-5-甲腈
A. 2，2-二甲基环己烷-1，3-二酮。将环己烷-1，3-二酮(10.0g，89.3mmol)、碳酸钾(24.6g，178.6mmol)和碘代甲烷(28.5g，201mmol)在丙酮(50mL)中的混合物回流过夜。浓缩反应混合物，并通过硅胶柱色谱(在石油醚中5-10％乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(3.5g，25.0mmol，产率28％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)2.69(t，J＝6.8Hz，4H)，1.52(m，2H)1.31(s，6H)。
B. 3-羟基-2，2-二甲基环己酮。在0℃下，向2，2-二甲基环己烷-1，3-二酮(2.00g，14.3mmol)在MeOH(20mL)中的溶液中分批加入硼氢化钠(135mg，3.58mmol)。在室温下，搅拌得到的溶液1小时。用水淬灭反应，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到标题化合物(1.6g，粗物质)。MS(ESI)m/z143.2[M+H]+。
C. 3-羟基-2，2-二甲基环己酮肟。在25℃下，搅拌3-羟基-2，2-二甲基环己酮(1.6g，粗物质)、盐酸羟胺(2.98g，42.9mmol)和碳酸钠(4.54g，42.9mmol)在EtOH(30mL)和水(3mL)中的混合物6小时。在减压下除去有机溶剂，并用乙酸乙酯(2×200mL)萃取残余物。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到标题化合物(1.8g，粗物质)。MS(ESI)m/z158.2[M+H]+。
D. 3-氨基-2，2-二甲基环己醇。在25℃下，在氢气氛下，搅拌3-羟基-2，2-二甲基环己酮肟(1.8g，粗物质)和拉尼镍(1.5g)在MeOH(50mL)和氨水(5mL)中的混合物过夜。将反应混合物过滤通过硅藻土，并用MeOH(50mL)洗涤滤饼。浓缩滤液，得到标题化合物(1.30g，粗物质)。MS(ESI)m/z144.2[M+H]+。
E. 4-((3-羟基-2，2-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。在90℃下，搅拌3-氨基-2，2-二甲基环己醇(1.30g，粗物质)和4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.35g，7.27mmol)和DIEA(1.93g，15.0mmol)在异丙醇(14mL)中的混合物1小时。在除去溶剂之后，通过硅胶柱色谱(在石油醚中10％-30％乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(820mg，2.81mmol，产率38％)，通过手性柱(超手性S-AD，0.46cm I.D.×25cm L，5μl，CO2/MeOH/DEA＝80/20/0.05(v/v/v)；流速：2.5ml/min，254nm，T＝35℃)，然后通过手性柱：ChiralpakIC，0.46cm I.D.×25cm L，5μl，CO2/MeOH/DEA＝70/30/0.05(v/v/v)；流速2.5ml/min，254nm，T＝35℃)分离，得到四种异构体(峰1：90mg，d.e.＝100％，e.e.＝100％，峰2：220mg，d.e.＝99.7％，e.e.＝100％，峰3：210mg，d.e.＝100％，e.e.＝97.3％，峰4：125mg，d.e.＝99.6％，e.e.＝100％。通过2D-NMR确定峰1和峰4为顺式-异构体，峰2和峰3为反式-异构体)。MS(ESI)m/z293.1[M+H]+
F. 4-(((1R，3S)-3-羟基-2，2-二甲基环己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴中冷却下，向4-(((1R，3S)-3-羟基-2，2-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(120mg，0.411mmol)在DCM(2.00mL)中的溶液中加入3-氯过苯甲酸(85％，168mg，0.822mmol)。在室温下，搅拌该混合物2小时。用DCM稀释反应物，并用硫代硫酸钠水溶液洗涤，然后用碳酸钾水溶液洗涤。经无水硫酸钠干燥分离的有机物，并浓缩，得到粗化合物(130mg粗物质)，其直接用于下一步而无需进一步纯化。MS(ESI)m/z325.1[M+H]+。
G.. 2-(((4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1R，3S)-3-羟基-2，2-二甲基环己基)氨基)嘧啶-5-甲腈。向4-(((1R，3S)-3-羟基-2，2-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(130mg，粗物质)在THF(3.0mL)中的溶液中加入(4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲胺(84mg，0.411mmol)和DIEA(158mg，1.23mmol)。在微波反应器中，在100℃下，搅拌得到的混合物1小时。蒸发溶剂，并通过标准方法纯化残余物，得到标题化合物(33.6mg，0.075mmol，两个步骤的产率20％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)8.69(s，1H)，8.40(s，1H)，8.13(s，1H)，4.72(t，J＝12.0Hz，2H)，4.57(s，2H)，4.05-3.91(m，1H)，3.45-3.42(m，1H)，1.82-1.72(m，5H)，1.70-1.50(m，2H)，1.50-1.30(m，2H)，1.03-0.91(m，6H).MS(ESI)m/z 448.2[M+H]+。
实施例33：4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-((2-((S)-3-甲基-2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈
4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-((2-((R)-3-甲基-2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈
A. 2-(2-(2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)异吲哚啉-1，3-二酮。3-(2-氨乙基)吲哚啉-2-酮盐酸盐(3.20g，15.06mmol)、邻苯二甲酸酐(3.34g，22.59mmol)和TEA(4.56g，45.18mmol)在甲苯/NMP(20mL/10mL)中的混合物。将该混合物加热回流3小时。浓缩反应混合物，并用饱和的氯化铵水溶液和盐水洗涤得到的混合物。经无水硫酸钠干燥分离的有机层，并过滤。在真空下浓缩，得到粗产物，通过硅胶柱色谱(在石油醚中30％乙酸乙酯)纯化，得到呈褐色固体的标题化合物(2.60g，8.50mmol，产率56％)。MS(ESI)m/z307.2[M+H]+。
B. 3-(2-(1，3-二氧代吲哚啉-2-基)乙基)-2-氧代异吲哚啉-1-羧酸叔丁酯。向2-(2-(2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)异吲哚啉-1，3-二酮(2.60g，8.50mmol)和碳酸钠(1.35g，12.75mmol)在无水THF(30mL)中的混合物中加入焦碳酸酯二叔丁酯(2.02g，9.35mmol)。在室温下，搅拌得到的混合物20小时。用水处理该混合物，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，并在真空下浓缩，得到粗产物，通过硅胶柱色谱(在石油醚中10-20％乙酸乙酯)纯化，得到呈浅黄色固体的标题化合物(2.00g，4.93mmol，产率58％)。MS(ESI)m/z407.1[M+H]+。
C. 3-(2-(1，3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙基)-3-甲基-2-氧代吲哚啉-1-羧酸叔丁酯。在～0℃至5℃下，向3-(2-(1，3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙基)-2-氧代吲哚啉-1-羧酸酯(1.00g，2.46mmol)和碳酸钾(679mg，4.92mmol)在DMF(5mL)中的混合物中加入碘代甲烷(524mg，3.69mmol)。在室温下，搅拌得到的反应混合物16小时。用水处理得到的混合物，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到粗产物，通过硅胶柱色谱(在石油醚中10-25％乙酸乙酯)纯化，得到呈褐色固体的标题化合物(700mg，1.66mmol，产率67％)。MS(ESI)m/z421.1[M+H]+。
D. 3-(2-氨乙基)-3-甲基吲哚啉-2-酮盐酸盐。在100℃下，搅拌叔丁基3-(2-(1，3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙基)-3-甲基-2-氧代吲哚啉-1-羧酸叔丁酯(600mg，1.43mmol)和盐酸(5mL)在密封管中的混合物72小时。在冷却至室温之后，用乙酸乙酯萃取反应混合物。将水层浓缩至干，得到呈黄色固体的粗产物(350mg，粗物质)，其直接用于下一步而需进一步纯化。MS(ESI)m/z191.1[M+H]+
E. 4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-((2-((S)-3-甲基-2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈和4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-((2-((R)-3-甲基-2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在80℃下，搅拌4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈(350mg，1.08mmol)、3-(2-氨乙基)-3-甲基吲哚啉-2-酮(350mg，粗物质)和DIEA(557mg，4.32mmol)在DMA(4mL)中的混合物2小时。在冷却至室温之后，向反应混合物中加入饱和的氯化铵水溶液，并用乙酸乙酯萃取该混合物。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥并浓缩，得到粗产物，通过硅胶柱色谱(在DCM中0.6％MeOH)纯化，得到呈褐色固体的外消旋化合物(340mg，0.78mmol，产率74％)。MS(ESI)m/z435.2[M+H]+。通过标准方法分离外消旋化合物(340mg，0.78mmol)，得到4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-((2-((S)-3-甲基-2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈(峰1：80.5mg，0.185mmol，产率24％，100％e.e.)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)7.85(s，1H)，7.13(d，J＝7.6Hz，1H)，7.10(t，J＝7.2Hz，1H)，6.94(t，J＝7.6Hz，1H)，6.76(d，J＝8.0Hz，1H)，4.08-3.98(m，1H)，3.27-3.20(m，2H)，2.91-2.86(m，1H)，2.20-1.26(m，8H)，1.25(s，3H)，0.84-0.82(m，6H).MS(ESI)m/z435.2[M+H]+和4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-((2-((R)-3-甲基-2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈(峰2：22.4mg，0.052mmol，产率6.6％，99.1％e.e.)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)7.85(s，1H)，7.13(d，J＝7.6Hz，1H)，7.10(t，J＝7.2Hz，1H)，6.94(t，J＝7.6Hz，1H)，6.76(d，J＝8.0Hz，1H)，4.08-3.98(m，1H)，3.27-3.20(m，2H)，2.91-2.86(m，1H)，2.20-1.26(m，8H)，1.25(s，3H)，0.84-0.82(m，6H).MS(ESI)m/z435.2[M+H]+。
实施例34：2-((2-(6-氟-2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)氨基)-4-(((1S，3S)-3-羟基-2，2-二甲基环己基)氨基)嘧啶-5-甲腈
2-((2-(6-氟-2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)氨基)-4-(((1R，3R)-3-羟基-2，2-二甲基环己基)氨基)嘧啶-5-甲腈
2-((2-(6-氟-2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)氨基)-4-(((1S，3R)-3-羟基-2，2-二甲基环己基)氨基)嘧啶-5-甲腈
2-((2-(6-氟-2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)氨基)-4-(((1R，3S)-3-羟基-2，2-二甲基环己基)氨基)嘧啶-5-甲腈
A. 2，2-二甲基环己烷-1，3-二酮。将环己烷-1，3-二酮(10.0g，89.3mmol)、碳酸钾(24.6g，178.6mmol)和碘代甲烷(28.5g，201mmol)在丙酮(50mL)中的混合物回流过夜。在完整之后，在减压下除去溶剂，并通过硅胶柱色谱(在石油醚中5-10％乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(3.5g，25.0 mmol，产率28％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)2.69(t，J＝6.8Hz，4H)，1.52(m，2H)1.31(s，6H)。
B. 3-羟基-2，2-二甲基环己酮。在0℃下，向2，2-二甲基环己烷-1，3-二酮(2.00g，14.3mmol)在MeOH(20mL)中的溶液中分批加入硼氢化钠(135mg，3.58mmol)。在室温下，搅拌得到的溶液1小时。用水淬灭反应，并用乙酸乙酯萃取该混合物。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到标题化合物(1.6g，粗物质)。MS(ESI)m/z143.2[M+H]+.
C. 3-羟基-2，2-二甲基环己酮肟。在25℃下，搅拌3-羟基-2，2-二甲基环己酮(1.6g，粗物质)、盐酸羟胺(2.98g，42.9mmol)和碳酸钠(4.54g，42.9mmol)在EtOH(30mL)和水(3mL)中的混合物6小时。在除去EtOH之后，用乙酸乙酯(2×200mL)萃取残余物。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到标题化合物(1.8g，粗物质)。MS(ESI)m/z158.2[M+H]+。
D. 3-氨基-2，2-二甲基环己醇。在25℃下，在氢气氛下，搅拌3-羟基-2，2-二甲基环己酮肟(1.8g，粗物质)和拉尼镍(1.5g)在MeOH(50mL)和氨水(5mL)中的混合物过夜。将反应混合物过滤通过硅藻土，并用MeOH(50mL)洗涤滤饼。浓缩滤液，得到标题化合物(1.30g，粗物质)。MS(ESI)m/z144.2[M+H]+。
E. 4-(((1S，3S)-3-羟基-2，2-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈，4-(((1R，3R)-3-羟基-2，2-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈，4-(((1S，3R)-3-羟基-2，2-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈和4-(((1R，3S)-3-羟基-2，2-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。在90℃下，搅拌3-氨基-2，2-二甲基环己醇(1.30g，粗物质)和4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.35g，7.27mmol)和DIEA(1.93g，15.0mmol)在异丙醇(14mL)中的混合物1小时。在除去溶剂之后，通过硅胶柱色谱(在石油醚中10％-30％乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(820mg，2.81mmol，产率38％)，通过手性柱(超手性S-AD，0.46cm I.D.×25cm L，5μl，CO2/MeOH/DEA＝80/20/0.05(v/v/v)；流速：2.5ml/min，254nm，T＝35℃)，然后通过手性柱：(Chiralpak IC，0.46cm I.D.×25cm L，5μl，CO2/MeOH/DEA＝70/30/0.05(v/v/v)；流速：2.5ml/min，254nm，T＝35℃)分离，得到四种异构体(峰1：90mg，d.e.＝100％，e.e.＝100％，峰2：220mg，d.e.＝99.7％，e.e.＝100％，峰3：210mg，d.e.＝100％，e.e.＝97.3％，峰4：125mg，d.e.＝99.6％，e.e.＝100％。通过2D-NMR确定峰1和峰4是顺式-异构体，峰2和峰3是反式-异构体)。MS(ESI)m/z 293.1[M+H]+。
F. 4-(((1S，3S)-3-羟基-2，2-二甲基环己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴中冷却下，向4-(((1S，3S)-3-羟基-2，2-二甲基环己基)氨基)-2-( 甲硫基)嘧啶-5-甲腈(峰1：85mg，0.291mmol)在DCM(2.00mL)中的溶液中加入3-氯过苯甲酸(85％，119mg，0.582mmol)。在室温下，搅拌该混合物2小时。用DCM稀释反应物，并用硫代硫酸钠水溶液洗涤，然后用碳酸钾水溶液洗涤。经无水硫酸钠干燥分离的有机物，并浓缩，得到粗化合物(90mg粗物质)。MS(ESI)m/z325.1[M+H]+。
4-(((1R，3R)-3-羟基-2，2-二甲基环己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴中冷却下，向4-(((4 1R，3R)-3-羟基-2，2-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(峰4：85mg，0.291mmol)在DCM(2.00mL)中的溶液中加入3-氯过苯甲酸(85％，119mg，0.582mmol)。在室温下，搅拌该混合物2小时。用DCM稀释反应物，并用硫代硫酸钠水溶液洗涤，然后用碳酸钾水溶液洗涤。经无水硫酸钠干燥分离的有机物，并浓缩，得到粗标题化合物(92mg，粗物质)。MS(ESI)m/z325.1[M+H]+。
4-(((1S，3R)-3-羟基-2，2-二甲基环己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴中冷却下，向4-(((1S，3R)-3-羟基-2，2-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(峰2：100mg，0.342mmol)在无水DCM(2.00mL)中的溶液中加入3-氯过苯甲酸(85％，139mg，0.684mmol)。在室温下，搅拌该混合物2小时。用DCM稀释反应物，并用硫代硫酸钠水溶液洗涤，然后用碳酸钾水溶液洗涤。经无水硫酸钠干燥分离的有机层，并浓缩，得到粗标题化合物(110mg，粗物质)。MS(ESI)m/z325.1[M+H]+。
4-(((1R，3S)-3-羟基-2，2-二甲基环己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴中冷却下，向4-(((1R，3S)-3-羟基-2，2-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(峰3：100mg，0.342mmol)在DCM(2.00mL)的溶液中加入3-氯过苯甲酸(85％，139mg，0.684mmol)。在室温下，搅拌该混合物2小时。用DCM稀释反应物，并用硫代硫酸钠水溶液洗涤，然后用碳酸钾水溶液洗涤。经无水硫酸钠干燥分离的有机层，并浓缩，得到粗标题化合物(110mg，粗物质)。MS(ESI)m/z325.1[M+H]+。
G. 3-(2-氨乙基)-6-氟吲哚啉-2-酮盐酸盐。向2-(6-氟-1H-吲哚--3-基)乙胺盐酸盐(500mg，2.3mmol)在DMSO(0.8mL)中的溶液中加入盐酸(36％，1.3g，12.8mmol)。在密封管中，在50℃下，搅拌得到的反应混合物6小时。在冷却至室温之后，过滤反应混合物。在EtOH(5mL)中搅拌得到的滤饼。将该混合物过滤并干燥，得到呈黄色固体的期望产物(250mg，1.28mmol，产率47％)。MS(ESI)m/z195.1[M+H]+。
H. 2-((2-(6-氟-2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)氨基)-4-(((1S，3S)-3-羟基-2，2-二甲基环己基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在90℃下，搅拌4-(((1S，3S)-3-羟基-2，2-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(90mg，粗物质)、3-(2-氨乙基)-6- 氟吲哚啉-2-酮盐酸盐(95mg，0.41mmol)和DIEA(122mg，0.94mmol)在DMA(2mL)中的混合物1小时。蒸发溶剂，并通过标准方法纯化残余物，得到标题化合物(23.7mg，0.054mmol，两个步骤的产率19％)。1HNMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)8.05(s，1H)，7.34-7.29(m，1H)，6.79-6.69(m，1H)，6.69-6.61(m，1H)，4.67-4.59(m，1H)，3.60-3.44(m，4H)，2.29-2.08(m，2H)，1.93-1.67(m，3H)，1.67-1.49(m，3H)，1.02-0.97(m，6H).MS(ESI)m/z 439.2[M+H]+。
2-((2-(6-氟-2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)氨基)-4-(((1R，3R)-3-羟基-2，2-二甲基环己基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在90℃下，搅拌4-(((1R，3R)-3-羟基-2，2-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(92mg，粗物质)、3-(2-氨乙基)-6-氟吲哚啉-2-酮盐酸盐(95mg，0.41mmol)和DIEA(122mg，0.94mmol)在DMA(2mL)中的混合物1小时。蒸发溶剂，并通过标准方法纯化残余物，得到标题化合物(36.7mg，0.083mmol，两个步骤的产率29％)。1HNMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)8.05(s，1H)，7.34-7.29(m，1H)，6.79-6.69(m，1H)，6.69-6.61(m，1H)，4.67-4.59(m，1H)，3.60-3.44(m，4H)，2.29-2.08(m，2H)，1.93-1.67(m，3H)，1.67-1.49(m，3H)，1.02-0.97(m，6H).MS(ESI)m/z 439.2[M+H]+。
2-((2-(6-氟-2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)氨基)-4-(((1S，3R)-3-羟基-2，2-二甲基环己基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在90℃下，搅拌4-(((1S，3R)-3-羟基-2，2-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(110mg，粗物质)、3-(2-氨乙基)吲哚啉-2-酮盐酸盐(95mg，0.41mmol)和DIEA(122mg，0.94mmol)在N，N-二甲基乙酰胺(2mL)中的混合物1小时。蒸发溶剂，并通过标准方法纯化残余物，得到标题化合物(27.3mg，0.062mmol，两个步骤的产率18％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)8.05(s，1H)，7.31-7.28(m，1H)，6.77-6.73(m，1H)，6.68(d，J＝8.0Hz，1H)，4.11-4.08(m，1H)，3.56-3.46(m，4H)，2.23-2.10(m，2H)，1.84-1.31(m，6H)，1.02(s，3H)，1.00(s，3H).MS(ESI)m/z 439.2[M+H]+。
2-((2-(6-氟-2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)氨基)-4-(((1R，3S)-3-羟基-2，2-二甲基环己基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在90℃下，搅拌4-(((1R，3S)-3-羟基-2，2-二甲基环己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(110mg，粗物质)、3-(2-氨乙基)吲哚啉-2-酮盐酸盐(95mg，0.41mmol)和DIEA(122mg，0.94mmol)在N，N-二甲基乙酰胺(2mL)混合物1小时。蒸发溶剂，并通过标准方法纯化残余物，得到标题化合物(27.3mg，0.062mmol，两个步骤的产率18％)。1HNMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)8.05(s，1H)，7.31-7.28(m，1H)，6.77-6.73(m，1H)，6.68(d，J＝8.0Hz，1H)，4.11-4.08(m，1H)，3.56-3.46(m，4H)，2.23-2.10(m，2H)，1.84-1.31(m，6H)，1.02(s，3H)，1.00(s，3H).MS(ESI)m/z 439.2[M+H]+。
实施例35：4-(((1R，3S)-2，2-二甲基-3-(1H-1，2，4-triazol-3-基)环丁基)氨基)-2-((2-(2 -氧代吲哚啉-3-基)乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈
A. ((1R，3S)-3-(羟甲基)-2，2-二甲基环丁基)氨基甲酸苄酯。在0℃下，向((1S，3R)-3-氨基-2，2-二甲基环丁基)MeOH盐酸盐(1.8g，10.9mmol)和碳酸钠(2.31g，21.8mmol)在乙酸乙酯(54mL)和水(18mL)中的混合物中慢慢地加入氯甲酸苄酯(2.23g，13.1mmol)。在室温下，搅拌得到的混合物2小时。分离有机层，并用乙酸乙酯萃取水溶液。将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到粗产物，通过硅胶柱色谱(在石油醚中10％-20％乙酸乙酯)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(2.75g，10.4mmol，产率95％)。MS(ESI)m/z264.2[M+H]+。
B. (1S，3R)-3-(((苄氧基)羰基)氨基)-2，2-二甲基环丁烷羧酸。在室温下，向((1R，3S)-3-(羟甲基)-2，2-二甲基环丁基)氨基甲酸苄酯(2.75g，10.4mmol)在四氯化碳(14mL)中的溶液中加入高碘酸钠(6.68g，31.2mmol)、水(21mL)和乙腈(14mL)，接着加入氯化钌(III)水合物(52mg，0.2mmol，在0.5mL的水中)。在室温下，强力搅拌得到的双相混合物1小时。用水稀释反应混合物，并用DCM(2×150mL)萃取。经硫酸钠干燥合并的有机层并浓缩，得到标题化合物(2.6g，粗物质)，其直接用于下一步而无需进一步纯化。MS(ESI)m/z278.1[M+H]+。
C. ((1R，3S)-3-氨基甲酰基-2，2-二甲基环丁基)氨基甲酸苄酯。在室温下，搅拌(1S，3R)-3-(((苄氧基)羰基)氨基)-2，2-二甲基环丁烷羧酸(2.6g，9.38mmol)、氯化铵(2.0g，37.5mmol)、TEA(2.84g，28.2mmol)和2-(7-氮杂-1H-苯并***-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸酯(5.35g，14.1mmol)在无水DMF(52mL)中的混合物1小时。用水淬灭反应，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到粗产物，通过HPLC(在水中10-50％乙腈)纯化，得到标题化合物(1.86g，6.71mnmol，两个步骤的产率66％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ(ppm)7.40-7.30(m，5H)，5.51-5.37(m，1H)，5.27-5.17(m，1H)，5.15-4.96(m，3H)，3.96-3.87(m，1H)，2.48-2.39(m，1H)，2.37-2.27(m，1H)，2.15-2.05(m，1H)，1.31(s，3H)，0.96(s，3H).MS(ESI)m/z277.1[M+H]+。
D. ((1R，3S)-3-((E)-((二甲基氨基)亚甲基)氨基甲酰基)-2，2-二甲基环丁基)氨基甲酸苄酯。在120℃下，搅拌((1R，3S)-3-氨基甲酰基--2，2-二甲基环丁基)氨基甲酸酯(638mg，2.30mmol)在N，N-二甲基甲酰胺二甲基乙缩醛(13mL)中的混合物过夜。在真空中，在50℃下浓缩反应混合物，得到呈黄色油状物的粗产物(850mg)，其直接用于下一步而无需进一步纯化。MS(ESI)m/z332.2[M+H]+。
E. ((1R，3S)-2，2-二甲基-3-(1H-1，2，4-***-3-基)环丁基)-氨基甲酸苄酯。在80下，搅拌((1R，3S)-3-((E)-((二甲基氨基)亚甲基)氨基甲酰基)-2，2-二甲基环丁基)氨基甲酸酯(850mg，粗物质)、肼(0.5mL)和乙酸(0.5mL)在EtOH(10mL)中的混合物2小时。除去有机溶剂，并通过硅胶色谱(在DCM中10％MeOH)纯化残余油状物，得到标题化合物(380mg，1.26mmol，两个步骤的产率55％)。MS(ESI)m/z 301.4[M+H]+。
F. ((1R，3S)-2，2-二甲基-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-1，2，4-***-3-基)环丁基)氨基甲酸苄酯。向((1R，3S)-2，2-二甲基-3-(1H-1，2，4-***-3-基)环丁基)氨基甲酸苄酯(380mg，1.26mmol)和3，4-二氢-2H-吡喃(127mg，1.51mmol)在无水DCM(10mL)中的混合物中加入4-甲基苯磺酸吡啶鎓(476mg，1.89mmol)。将该混合物回流过夜。在除去溶剂之后，通过硅胶柱色谱(在石油醚中12％乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(438mg，1.14mmol，产率90％)。MS(ESI)m/z 385.4[M+H]+。
G. (1R，3S)-2，2-二甲基-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-1，2，4-***-3-基)环丁胺(cyclobutanamine)。在25℃下，在氢气氛下，搅拌((1R，3S)-2，2-二甲基-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-1，2，4-***-3-基)环丁基)氨基甲酸酯(438mg，1.14mmol)和活性碳上的钯(10％Pd，50mg)在MeOH(15mL)中的混合物5小时。将反应混合物过滤通过硅藻土，并浓缩滤液，得到粗标题化合物(340mg，粗物质)。MS(ESI)m/z 251.2[M+H]+。
H. 4-(((1R，3S)-2，2-二甲基-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-1，2，4-***-3-基)环丁基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。在90℃下，搅拌(1R，3S)-2，2-二甲基-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-1，2，4-***-3-基)环丁胺(340mg，粗物质)和4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(210mg，1.14mmol)和DIEA(450mg，3.50mmol)在异丙醇(5mL)中的混合物1小时。在除去溶剂之后，通过硅胶柱色谱(在石油醚中10％-30％乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(290mg，0.727mmol，两个步骤的产率65％)。MS(ESI)m/z 400.2[M+H]+。
I. 4-(((1R，3S)-2，2-二甲基-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-1，2，4-***-3yl)环丁基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴冷却下，向4-(((1R，3S)-2，2-二甲基-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-1，2，4-***-3-基)环丁基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(150mg，0.376mmol)在NMP(2.0mL)中的溶液中加入3-氯过苯甲酸(85％，154mg，0.752mmol)。在室温下，搅拌该混合物2小时。将反应物用DCM稀释，并用硫代硫酸钠水溶液洗涤，然后用碳酸钾水溶液洗涤。经无水硫酸钠干燥分离的有机层并浓缩，得到粗标题化合物(140mg，粗物质)。MS(ESI)m/z432.2[M+H]+。
J. 3-(2-氨基乙基)吲哚啉-2-酮盐酸盐。向2-(1H-吲哚--3-基)乙胺(6.00g，37.50mmol)在DMSO(8.0mL，112.50mmol)中的溶液中慢慢地加入浓盐酸(9.5mL，112.50mmol)。在密封管中，在50℃下，搅拌得到的反应混合物16小时。在冷却至室温之后，过滤反应混合物。在EtOH(15mL)中搅拌得到的滤饼。将混合物过滤并干燥，得到呈褐色固体的期望的标题化合物(5.00g，23.64mmol，产率63％)。MS(ESI)m/z 177.2[M+H]+。
K. 4-(((1R，3S)-2，2-二甲基-3-(1H-1，2，4-***-3-基)环丁基)氨基)-2-((2-(2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在100℃下，搅拌4-(((1R，3S)-2，2-二甲基-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-1，2，4-***-3-基)环丁基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈(140mg，粗物质)、3-(2-氨乙基)吲哚啉-2-酮盐酸盐(80mg，0.376mmol)和DIEA(194mg，1.50mmol)在NMP(2.0mL)中的混合物1小时。用水稀释反应物，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到粗产物，将其溶于盐酸盐在MeOH(2N，5mL)中的溶液中，并在室温下搅拌5小时。用氨水中和该反应，并浓缩。通过标准方法纯化残余物，得到标题化合物(33.4mg，0.075mmol，两个步骤的产率20％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)13.49(brs，1H)，10.24(s，1H)，8.52-7.41(m，3H)，7.29(t，J＝7.6Hz，1H)，7.25-7.07(m，2H)，7.01-6.93(m，1H)，6.87-6.82(m，1H)，4.41-4.29(m，1H)，3.59-3.43(m，2H)，3.42-3.25(m，1H)，3.10-2.96(m，1H)，2.81-2.66(m，1H)，2.49-2.34(m，1H)，2.16-1.94(m，2H)，1.49-1.00(m，3H)，0.63-0.62(m，3H).MS(ESI)m/z 444.2[M+H]+。
实施例36：(1S，3R)-3-(5-氰基-2-(2-(1-甲基-2-氧代吲哚啉-3-基)乙氨基)嘧啶-4-基氨基)-2，2-二甲基环丁烷甲酰胺
A. (2-(1H-吲哚--3-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯。向2-(1H-吲哚-3-基)乙胺(3.00g，18.75mmol)在THF(30mL)中的溶液中加入焦碳酸二叔丁酯(4.36g，20mmol)。在室温下，搅拌得到的反应混合物16小时。浓缩该混合物，得到粗产物，通过硅胶柱色谱(在石油醚中20％乙酸乙酯)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(4.70g，18.01mmol，产率95％)。MS(ESI)m/z261.1[M+H]+。
B. (2-(1-甲基-1H-吲哚--3-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯。在0℃下，在氮气下，向(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)氨基甲酸酯(4.70g，18.01mmol)在无水THF(50mL)中的溶液中加入氢化钠(800mg，20mmol，在矿物油中60％)。在室温下，搅拌得到的反应混合物15分钟之后，在0℃下，慢慢地加入在THF(15mL)中的碘代甲烷(2.84g，20mmol)。在室温下，搅拌得到的混合物3小时，并用饱和的氯化铵水溶液淬灭。用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。在真空下浓缩，得到粗产物，通过硅胶柱色谱(在DCM中0.6％MeOH)纯化，得到呈褐色固体的标题化合物(4g，14.6mmol，产率80％)。MS(ESI)m/z275.1[M+H]+。
C. 2-(1-甲基-1H-吲哚--3-基)乙胺。在～0℃至5℃下，向(2-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(4g，14.6mmol)在DCM(30mL)中的溶液中加入TFA(15mL)。在室温下，搅拌得到的反应混合物1小时。浓缩该反应混合物，得到呈黄色油状物的粗标题化合物(2.5g，粗物质)。MS(ESI)m/z175.1[M+H]+。
D. 3-(2-氨乙基)-1-甲基吲哚啉-2-酮盐酸盐。向2-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)乙胺(2.5g，粗物质)在DMSO(1.33g，17.0mmol)的溶液中慢慢地加入浓盐酸(1.2mL)。在密封反应器中，在室温下下，搅拌得到的反应混合物16小时。浓缩反应混合物，并通过制备HPLC纯化残余物，得到呈黄色固体的标题化合物(1.5g，6.59mmol，经两个步骤的产率45％)。MS(ESI)m/z 191.1[M+H]+。
E. ((1R，3S)-3-(羟甲基)-2，2-二甲基环丁基)氨基甲酸苄酯。在0℃下，向((1S，3R)-3-氨基-2，2-二甲基环丁基)MeOH盐酸盐(1.8g，10.9mmol)和碳酸钠(2.31g，21.8mmol)在乙酸乙酯(54mL)和水(18mL)中的混合物中慢慢地加入氯甲酸苄酯(2.23g，13.1mmol)。在室温下，搅拌得到的混合物2小时。分离有机层，并用乙酸乙酯萃取水溶液。将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到粗产物，通过硅胶柱色谱(在石油醚中10％-20％乙酸乙酯)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(2.75g，10.4mmol，产率95％)。MS(ESI)m/z264.2[M+H]+。
F. (1S，3R)-3-(((苄氧基)羰基)氨基)-2，2-二甲基环丁烷羧酸。在室温下，向((1R，3S)-3-(羟甲基)-2，2-二甲基环丁基)氨基甲酸苄酯(2.75g，10.4mmol)在四氯化碳(14mL)中的溶液中加入高碘酸钠(6.68g，31.2mmol)、水(21 mL)和乙腈(14mL)，接着加入氯化钌(III)水合物(52mg，0.2mmol，在0.5mL的水中)。在室温下，强力搅拌得到的双相混合物1小时。用水稀释反应混合物，并用DCM(2×150mL)萃取。经硫酸钠干燥合并的有机层并浓缩，得到标题化合物(2.6g，粗物质)，其直接用于下一步而无需进一步纯化。MS(ESI)m/z278.1[M+H]+。
G. ((1R，3S)-3-氨基甲酰基-2，2-二甲基环丁基)氨基甲酸苄酯。在室温下，搅拌(1S，3R)-3-(((苄氧基)羰基)氨基)-2，2-二甲基环丁烷羧酸(2.6g，9.38mmol)、氯化铵(2.0g，37.5mmol)、TEA(2.84g，28.2mmol)和2-(7-氮杂-1H-苯并***-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸酯(5.35g，14.1mmol)在无水DMF(52mL)中的混合物1小时。用水淬灭反应，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到粗产物，通过HPLC(在水中10-50％乙腈)纯化，得到标题化合物(1.86g，6.71mnmol，两个步骤的产率66％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ(ppm)7.40-7.30(m，5H)，5.51-5.37(m，1H)，5.27-5.17(m，1H)，5.15-4.96(m，3H)，3.96-3.87(m，1H)，2.48-2.39(m，1H)，2.37-2.27(m，1H)，2.15-2.05(m，1H)，1.31(s，3H)，0.96(s，3H).MS(ESI)m/z277.1[M+H]+。
H. (1S，3R)-3-氨基-2，2-二甲基环丁烷甲酰胺。在25℃下，在氢气氛下，搅拌((1R，3S)-3-氨基甲酰基-2，2-二甲基环丁基)氨基甲酸苄酯(193mg，0.70mmol)和活性碳上的钯(10％Pd，30mg)在MeOH(5mL)中的混合物5小时。将反应混合物过滤通过硅藻土，并浓缩滤液，得到粗标题化合物(120mg，粗物质)。MS(ESI)m/z 143.1[M+H]+。
I. (1S，3R)-3-((5-氰基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基环丁烷甲酰胺。在80℃下，搅拌(1S，3R)-3-氨基-2，2-二甲基环丁烷甲酰胺(120mg，粗物质)、氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(130mg，0.70mmol)和DIEA(129mg，1.0mmol)在异丙醇(5mL)中的混合物2小时。在除去溶剂之后，通过硅胶柱色谱(在石油醚中10％-30％乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物(160mg，0.55mmol，两个步骤的产率78％)。MS(ESI)m/z 292.2[M+H]+。
J. (1S，3R)-3-((5-氰基-2-(甲基磺酰基)嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基环丁烷甲酰胺。在冰-水浴中，在冷却下，向(1S，3R)-3-((5-氰基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基环丁烷甲酰胺(150mg，0.51mmol)在NMP(1.5mL)中的溶液中加入3-氯过苯甲酸(85％，230mg，1.12mmol)。在室温下，搅拌该混合物2小时。将反应混合物直接地用于下一步而无需进一步纯化。MS(ESI)m/z324.2[M+H]+。
K. (1S，3R)-3-(5-氰基-2-(2-(1-甲基-2-氧代吲哚啉-3-基)乙基氨基)嘧啶-4-基氨基)-2，2-二甲基环丁烷甲酰胺。在0℃下，将3-(2-氨基乙基)-1-甲基吲哚啉-2-酮(231mg，1.02mmol)和DIEA(197mg，1.53mmol)加入到(1S，3R)-3-(5-氰基-2-(甲基磺酰基)嘧啶-4-基氨基)-2，2-二甲基环丁烷甲酰胺(如上所述制备的)的反应混合物中，并在90℃下，搅拌1小时。用水稀释反应，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并浓缩，得到粗产物，通过标准方法纯化，得标题题化合物(17.7mg，0.041mmol，两个步骤的产率8％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)8.12-8.01(m，1H)，7.42-7.33(m，2H)，7.17-6.93(m，2H)，4.36-4.09(m，1H)，3.62-3.60(m，2H)，3.23-3.13(m，4H)，2.60-2.25(m，5H)，1.39-0.88(m，6H).MS(ESI)m/z 433.8[M+H]+。
实施例37：4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-((2-(5-甲氧基吡啶-3-基)乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈
A. (2-(5-甲氧基吡啶-3-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯。向装有垫片盖和搅拌棒的20mL小瓶中装入碳酸铯(977mg，3.00mmol)、3-溴-5-甲氧基吡啶(188mg，1.00mmol)、[2-(叔丁氧基羰基氨基)乙基]三氟硼酸钾(301mg，1.20mmol)、二-(1-金刚烷基)-正-丁基膦(35.8mg，0.100mmol)和乙酸钯(II)(11.2mg，0.050mmol)。加入甲苯(3mL)和水(2mL)，用氮气吹扫小瓶并密封。在80℃下，强力搅拌该混合物24小时，冷却至室温，并除去水层。用硫酸钠干燥有机层，并通过硅胶色谱(在DCM中0-10％MeOH)纯化粗产物溶液，得到呈无色糖浆状的(2-(5-甲氧基吡啶-3-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(153mg，0.606mmol，61％)。1H NMR(CDCl3，500MHz)：δ(ppm)8.21(d，J＝6.14Hz，1H)，8.09(d，J＝1.58Hz，1H)，6.98-7.16(m，1H)，4.53-4.90(m，1H)，3.87(s，3H)，3.33-3.47(m，2H)，2.82(t，J＝6.78Hz，2H)，1.46ppm(s，9H)。
B. 2-(5-甲氧基吡啶-3-基)乙-1-胺二盐酸盐。向(2-(5-甲氧基吡啶-3-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(153mg，0.606mmol)在异丙醇(2mL)中的溶液中加入在二噁烷中的4M HCl(2mL)，并在室温下搅拌混合物16小时。浓缩该混合物，用***洗涤残余固体，并在真空中干燥，得到呈白色固体的标题化合物(103mg，0.458mmol，75％)。1H NMR(500MHz，CD3OD)：δ(ppm)8.56(d，J＝2.52Hz，1H)，8.51(s，1H)，8.27(s，1H)，4.15(s，3H)，3.23-3.38ppm(m，4H)。
C. 4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-((2-(5-甲氧基吡啶-3-基)乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈。向装有垫片盖的1打小瓶中装入4-(((1R，4S)-4-羟基-3，3-二甲基环己基)氨基)-2-(甲基亚磺酰基)嘧啶-5-甲腈(55.0mg，0.178mmol)、2-(5-甲氧基吡啶-3-基)乙-1-胺二盐酸盐(56.3mg，0.214mmol)和DMSO(1.4mL)。用DIEA(0.125mL，0.715mmol)处理得到的溶液，密封小瓶并在60℃下振摇(250rpm)14小时。将该混合物冷却至室温，用DMSO(1.5mL)稀释，并过滤。通过标准方法纯化溶液，得到标题化合物。MS(ESI)m/z379.2[M+1]+。
分析
生物化学分析
PKC-θ分析。使用384-孔时间分辨的荧光分析监测PKC-θ活性。在下述分析缓冲液中进行PKC-θ分析：50mM HEPES pH 7.6，10mM MgCl2，1mM DT T，0.01％Triton X-100，0.01％BSA和0.1mM EDTA。为了引发反应，对于每个孔中25μL的总分析体积，将200nM的Fam-标记的S6-来源的肽(Molecular Devices)和10μM的ATP与142pM的His-PKC-θ(Invitrogen)混合。在室温下，培养所述分析物2小时，并使用60μL/孔的检测结合溶液的混合物终止：70％IMAP Progressive Binding Buffer A、30％IMAP Progressive Binding Buffer B、1∶600 Progressive Binding Reagent和1∶400 TR-FRET Tb Donor(Molecular Devices)。然后，在室温下培养分析板过夜，并在Perkin-Elmer Envision Reader上读取。IC50值计算为荧光信号水平降低为信号窗的50％的化合物浓度。
PKCδ分析。使用384-孔时间分辨荧光分析监测PKCδ活性。在下述分析缓冲液中进行PKCδ分析：50mM HEPES pH 7.6，10mM MgCl2，1mM DTT，0.01％Triton X-100，0.01％BSA和0.1mM EDTA。为了引发反应，对于每个孔中25μL的总分析体积，将200nM的Fam-标记的S6-来源的肽(Molecular Devices)和10μM的ATP与1.5nM的PKC-δ(Invitrogen)混合。在室温下，培养该分析物2小时，并使用60μL/孔的检测结合溶液混合物终止：70％IMAPProgressive Binding Buffer A，30％IMAP Progressive Binding Buffer B，1∶600Progressive Binding Reagent和1∶400 TR-FRET Tb Donor(Molecular Devices)。然后，在室温下培养分析板过夜，并在Perkin-Elmer Envision Reader上读取。IC50值计算为荧光信号水平降低为信号窗的50％的化合物浓度。
表1显示在PKC激酶酶催化分析中二氨基嘧啶基化合物的作用。表1的某些二氨基嘧啶基化合物显示在PKC激酶酶催化分析中，对于PKC-θ的IC50值的范围为0.0001-10μM，相对于PKC-δ而言对于PKC-θ的选择性范围为5至＞100倍。
表2显示一些化合物在PKC激酶酶催化分析中的作用。表2的一些化合物显示在PKC激酶酶催化分析中对于PKC-θ的IC50值的范围为0.001-10μM，相对于PKC-δ而言，对于PKC-θ的选择性为5至＞100倍。
细胞分析
Jurkat细胞分析：CD3/CD8-刺激的IL-2分泌。在人Jurkat细胞中，通过测量IL-2细胞因子产生来评价在测试化合物浓度范围内PKC-θ的细胞内抑制。对于这些研究，使用来自ATCC的人Jurkat克隆E6-1。用抗-CD3(Life Technologies/Invitrogen)和抗-人类CD28(BDBiosciences)体外活化细胞，以表达促炎细胞因子。在补充有1.0mM丙酮酸钠、2mM L-谷氨酰胺、10mM Hepes、1.0mM非必需氨基酸、100IU/mL青霉素、100μg/mL链霉素和10％胎牛血清的RPMI 1640培养基中培养Jurkat细胞。将细胞以50万个细胞/孔的密度铺板在透明的96孔圆底板上的RPMI完全培养基中(每孔200μL)。
通过首先在100％DMSO中稀释至适合的浓度，然后1∶50稀释到无血清RPMI培养基中，由10mM储液制备化合物稀释液。接着，将化合物以1∶10的稀释度加入到指定孔中；每个孔中，化合物的最终稀释度为1∶500，且最终DMSO浓度为0.2％。在37℃下，将细胞暴露0、0.01、0.03、0.1、0.3、1、3和10μM剂量的化合物30分钟，一式三份。最后，通过加入25μL/孔的15μL抗-CD3 Dynabeads和2μg/mL纯的抗-CD28抗体(在无血清RPMI培养基中制备的)，并在37℃下培养20小时活化细胞。在培养之后，由每个孔收集100μL的培养基。根据制造商的方案，使用用于人IL-2的MesoScale Discovery(MSD)单-plex细胞因子分析测量所分泌的IL-2的水平。使用来自IDBS的XLfit分析原始数据，以计算每种浓度的抑制百分比。在XLfit中用于确定IC50的公式的型号205，其利用S形剂量-应答模型计算IC50值。从多因素试验得到的IC50值必须在彼此的2倍之内才可接受(n＝3)为正确的IC50。IC50值报告为平均值。
在该分析中，来自表1和表2的一些二氨基嘧啶基化合物具有范围0.01-10μM的IC50值。
人全血：CD3/CD8-刺激的IL-2分泌。通过测量IL-细胞因子产生来评价在人全血中在测试化合物浓度范围内PKCθ的细胞内抑制。人全血是在IRB方案下从正常健康供体获得的。用CD3ε(R&DSystems)和CD28(BD Biosciences)的交联抗体体外活化全血以表达促炎细胞因子。
为了制备CD3ε涂层板，将50μL的具有在无菌D-PBS(不含Ca++/Mg++)中的1μg/mL抗-人CD3ε(克隆UCHTl)加入到96孔CovaLinkNH模块板(Fisher Scientific)的每个孔中，并在4℃下培养16-20小时。除去CD3，并用100μL的D-PBS洗涤各孔，之后将预处理的血液转移到板。
为了制备人全血，用无血清RPMI培养基1∶1稀释血液，并轻轻混合。将稀释的血液铺板到96孔U型底板中(每孔160μL)。通过首先在100％DMSO中稀释至适合的浓度，然后1∶50稀释到无血清RPMI培养基中，由10mM储液制备化合物稀释液。接着，将化合物以1∶10的稀释度加入到指定孔中。化合物的最终稀释度为1∶500，并且每个孔的最终DMSO浓度为0.2％。在37℃下，将稀释的全血暴露于0、0.01、0.03、0.1、0.3、1、3和10μM剂量的化合物30分钟，一式三份。将预处理的血液转移到预涂层CD3ε板的指定孔。最后，通过加入20μL/孔的2μg/mL纯的抗-CD28抗体(在无血清RPMI培养基中制备的)，并在37℃下培养20小时活化，活化血液。在培养之后，从每个孔收集100μL的培养基。根据制造商的方案，使用用于人IL-2的MesoScale Discovery(MSD)Ultrasensitive单-plex细胞因子分析测量IL-2的水平。使用来自IDBS的XLfit分析原始数据，以计算每种浓度的抑制百分比。在XLfit中用于测定IC50的公式为型号205，其使用S形剂量-应答模型计算IC50值。从多因素试验得到的IC50值必须在彼此的2倍之内才可接受(n＝3)为正确的IC50。IC50值报告为平均值。
在该分析中，来自表1和表2的一些二氨基嘧啶基化合物具有范围0.01-10μM的IC50值。
动物模型
急性T细胞活化模型。小鼠中SEB介导的细胞因子释放。因为葡萄球菌肠毒素(SEA、B、C、和E)对于广谱T细胞的强作用，其被称为超级抗原(sAgs)。它们进行有丝***为人类、鼠科动物和兔子T细胞，因此细胞因子比如IL-2、IFN-g和IL-6的大量释放。SEB介导的T细胞活化的小鼠和大鼠模型是识别抑制T-细胞活化的化合物的禁食稳健模型。
之前通过口服、静脉内(i.v.)、腹膜内(i.p.)或皮下(s.c.)途径给药试验制品或溶媒最多24小时。向雄性C57/B16小鼠i.p.注射25-100μg的SEB。在SEB之后2小时采集血浆或淋巴器官比如脾或***(LN)，使用标准商业ELISA试剂盒测量IL-2细胞因子水平。
如本文所述的一些二氨基嘧啶基化合物具有或预期具有＜100mg/kg的ED50值，某些化合物具有＜10mg/kg的ED50，并且其它化合物具有＜1mg/kg的ED50。
移植物抗宿主疾病模型。称为移植物抗宿主疾病(GVHD)的不想要的免疫反应，主要由T细胞介导，是异源器官移植接受者中移植物衰竭的主要原因。在啮齿类动物中通过如下方式对该现象进行造模：通过将异源脾的或分离的T细胞注射到供体中，接着测量GVHD应答，其能够识别抑制T细胞活化的治疗化合物。
使用C57B1/6小鼠作为供体细胞的来源，B6D2F1(C57B1/6×DBA/2的F1)用作接受者。从供体动物(C57B1/6)取出脾，并在磷酸盐缓冲盐水中制备细胞悬液。将总共20-30×106个细胞注射到接受者(B6D2F1)动物左足趾底的掉皮的足底皮下组织中。制备来自接受者动物系的细胞悬液，并同样地注射到接受者动物的右足作为同系对照组。在注射后4天，取出左侧和右侧的腘***，剥去附着的脂肪组织，并称重。通过口服、i.v.、i.p.或s.c.途径给药试验制品或溶媒最多24小时，然后注射脾细胞。当用试验制品处理的***肿大与用溶媒处理的***肿大相比的差异表示为抑制％。
如本文所述的一些二氨基嘧啶基化合物具有或预期具有＜100mg/kg的ED50值，某些化合物具有＜10mg/kg的ED50，并且其它化合物具有＜1mg/kg的ED50。
活性表
在一个或多个生物化学分析中测试表1和2中的每种化合物，发现其具有的活性，所有化合物在PKC-θ分析中都具有低于10μM的IC50，某些化合物具有低于100nM的IC50(活性水平D)，某些化合物具有在100nM和800nM之间的IC50(活性水平C)，某些化合物具有在800nM和2μM之间的IC50(活性水平B)，其它化合物具有在2μM和10μM之间的IC50(活性水平A)。也发现化合物相对于PKC-δ而言，对于PKC-θ具有选择性，某些化合物显示＞100倍的选择性(选择性水平＝IC50PKC-δ/IC50PKC-θ之比)(选择性水平E)，某些化合物显示在20和100倍之间的选择性(选择性水平F)，某些化合物显示在5-和20倍之间的选择性(选择性水平G)，其它化合物具有5-倍或更小的选择性水平(选择性水平H)。
表1。
表2
已经引用了许多参考文献，将其公开内容以其全文通过引用并入本文。

Claims (34)

1.式(I)的化合物：
或其可药用盐、互变异构体、同位素体或立体异构体，
其中：
X为CN或CF3；
L为(C1-4烷基)；
R1为取代的或未取代的杂芳基；和
R2为取代的或未取代的环烷基。
2.权利要求1的化合物，其中X为CN。
3.权利要求1的化合物，其中X为CF3。
4.权利要求1的化合物，其中L为CH2、CH2CH2或CH2CH2CH2。
5.权利要求1的化合物，其中R1为取代的或未取代的吡啶基、吡啶基-1-氧化物或嘧啶基。
6.权利要求5的化合物，其中R1被一个或多个下述基团取代：卤素、-OR3、取代的或未取代的C1-4烷基、或取代的或未取代的芳基，其中每个R3独立地为H、取代的或未取代的C1-6烷基、或取代的或未取代的芳基。
7.权利要求5的化合物，其中R1被一个或多个下述基团取代：F、Cl、Br、I、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、苯基、萘基、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CHFCH3、-CF2CH3、-C(CH3)2F、-OCH3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、-OCH2CH3、-OCH2CH2F、-OCH2CHF2、-OCH2CF3、-OCH2CH(CH3)F、-OCH2C(CH3)2F、-OCH2C(CH3)F2、-OCH2CH2CF3或–O-苯基，其中每个苯基任选地被卤素或取代的或未取代的C1-4烷基取代。
8.权利要求5的化合物，其中R1被一个或多个下述基团取代：F、Cl、甲基、乙基、异丙基、苯基、-CF3、-CF2CH3、-C(CH3)2F、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CF3、-OCH2CH2F、-OCH2CHF2、-OCH2C(CH3)F2、-OCH2CH2CF3或-O-苯基，其中每个苯基任选地被F或甲基取代。
9.权利要求1的化合物，其中R1为取代的或未取代的吲哚基、吲哚啉酮基、苯并噁唑基、吡咯并吡啶基、吲唑基、苯并咪唑基、二氢苯并咪唑啉酮基或喹啉基。
10.权利要求9的化合物，其中R1被一个或多个下述基团取代：卤素、CN、-OR3、取代的或未取代的C1-4烷基、或取代的或未取代的芳基，其中每个R3独立地为H、取代的或未取代的C1-6烷基、或取代的或未取代的芳基。
11.权利要求9的化合物，其中R1被一个或多个下述基团取代：F、Cl、CN、甲基、乙基、-CH2SO2NHCH3、-OH、-OCH3或OCF3。
12.权利要求1的化合物，其中R1为取代的或未取代的呋喃基、吡咯基、噻吩基、噁唑基、吡唑基、咪唑基、噁二唑基或***基。
13.权利要求12的化合物，其中R1被一个或多个下述基团取代：卤素、CN、-OR3、取代的或未取代的C1-4烷基、或取代的或未取代的芳基，其中每个R3独立地为H、取代的或未取代的C1-6烷基、或取代的或未取代的芳基。
14.权利要求12的化合物，其中R1被一个或多个下述基团取代：CN、甲基、乙基、-CF3或-CH2OCH3。
15.权利要求1的化合物，其中R2为取代的或未取代的C3-12环烷基。
16.权利要求15的化合物，其中R2为取代的或未取代的环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、或金刚烷基。
17.权利要求15的化合物，其中R2被一个或多个下述基团取代：C1-4烷基、-OR4或-C(＝O)NR2，其中每个R4独立地为H或C1-6烷基，并且每个R独立地为H或C1-4烷基。
18.权利要求15的化合物，其中R2被一个或多个下述基团取代：甲基、乙基、丙基、异丙基、-CH2OH、-CH(CH3)OH、-C(CH3)2OH、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NHCH3或-C(＝O)N(CH3)2。
19.权利要求15的化合物，其中R2被一个或多个下述基团取代：甲基、-CH2OH、-C(CH3)2OH、-OH、-OCH3或-C(＝O)NHCH3。
20.权利要求15的化合物，其中R2为取代的或未取代的螺[3.3]]庚基或双环辛基。
21.权利要求15的化合物，其中R2被一个或多个下述基团取代：C1-4烷基、-OR4、-C(＝O)NR2或***基，其中每个R4独立地为H或C1-6烷基，并且每个R独立地为H或C1-4烷基。
22.权利要求15的化合物，其中R2被一个或多个下述基团取代：甲基、***基、-CH2OH、-C(CH3)2OH、-OH、-OCH3、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NHCH3或-C(＝O)N(CH3)2。
23.权利要求1的化合物，其中10μM浓度的所述化合物抑制PKC-θ至少约50％。
24.权利要求20的化合物，其中所述化合物选自表1。
25.选自表2的化合物。
26.药物组合物，包括有效量的权利要求1、24或25的化合物，或其可药用盐、互变异构体、同位素体或立体异构体，及可药用载体、赋形剂或溶媒。
27.一种抑制表达激酶的细胞中所述激酶的方法，包括用有效量的权利要求1、24或25的化合物或其可药用盐、互变异构体、同位素体或立体异构体接触所述细胞。
28.权利要求27的方法，其中所述激酶为PKC-θ。
29.权利要求28的方法，其中相对于PKC-δ，所述化合物对于PKC-θ是选择性的。
30.权利要求28的方法，其中相对于PKC-δ和PKC-eta，所述化合物对于PKC-θ是选择性的。
31.权利要求29的方法，其中所述化合物对于PKC-θ的选择性是相对于PKC-δ的至少5倍。
32.权利要求29的方法，其中所述化合物对于PKC-θ的选择性是相对于PKC-δ的大于100倍。
33.一种用于治疗或预防PKC-θ介导的病症的方法，所述方法包括向需要其的对象给药有效量的权利要求1、24或25的化合物或其可药用盐、互变异构体、同位素体或立体异构体。
34.权利要求33的方法，其中所述PKC-θ介导的病症选自移植物抗宿主疾病、器官移植排斥反应、银屑病、迪谢内肌营养不良、类风湿性关节炎、糖尿病、胰岛素抗性、重症肌无力、多发性硬化症、结肠炎、银屑病关节炎、强直性脊柱炎、特应性皮炎、干燥综合症、哮喘或狼疮。
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