CN105717308A - 快速定量检测粪便乳铁蛋白的免疫层析试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明提供快速定量检测粪便乳铁蛋白的免疫层析试剂盒，属于临床体外诊断试剂技术领域。该试剂盒，包括试纸条，所述试纸条包括底板、设置于所述底板上的样品垫、标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述标记物结合垫包被有胶体金颗粒、胶体银颗粒、胶体铁颗粒、磁性颗粒、燃料颗粒、乳胶颗粒或荧光颗粒标记的乳铁蛋白单克隆抗体A，所述硝酸纤维素膜含有检测线T和质控线C，所述检测线T由乳铁蛋白单克隆抗体B形成，所述质控线C由羊抗鼠IgG形成；所述乳铁蛋白单克隆抗体A和B识别乳铁蛋白的不同表位。本发明试剂盒，具有方便快捷、操作简单、结果准确等优点，适于临床快速检测，其制备方法，简单，高效，成本低。

Description

快速定量检测粪便乳铁蛋白的免疫层析试剂盒

技术领域

本发明属于临床体外诊断试剂技术领域，具体涉及一种快速定量检测粪便乳铁蛋白的免疫层析试剂盒。

背景技术

肠易激综合症(Irritable Bowelsyndrome, IBS)是一组以腹痛及腹部不适伴排便习惯改变、粪便性状异常为特点而缺乏器质性疾病依据的症候群,是较常见的胃肠功能紊乱性疾病,其主要的病理生理基础是胃肠动力奈乱、内脏高敏感性、脑-肠轴相互作用失调等,治疗上多以饮食调节、对症治疗及心理干预为主,预后较好。炎症性肠病(Inflammatory Bowel Disease, IBD)包括溃癌性结肠炎(ulcerativecolitis,UC )和克罗恩病(Crohn's disease,CD),是一种以反复发作的腹泻、便血、发热、腹痛、体重下降为临床表现的慢性肠道疾病,通常伴有肠外表现,病理表现为胃肠點膜和(或)胃肠壁全层的慢性炎症,其发病可能与遗传、环境及肠道菌群等多种病因导致机体对肠道抗原免疫应答失调所致,治疗上需氨基水杨酸,甚至糖皮质激素、免疫抑制剂及生物制剂,且病情易于反复,可能终生用药,严重时危及生命。

典型的IBD与IBS在临床表现上各有不同,但近年来研究发现,很多IBD患者在发病初期和临床缓解期表现为IBS症状如腹胀、腹湾、胃部不适等,依据IBS罗马I诊断标准,IBS样前驱症状在UC患者可持续2.7年,在CD患者可持续6.8年,而在此阶段,即使有现行的罗马标准等指南可供参考,仅根据临床表现和体征要想准确区分IBD与IBS还是相当困难的。但因彼此的病理机制、治疗方式及预后完全不同,两者的鉴别诊断对于大部分临床医师来说是极大的挑战。

临床实践中，一般根据患者的症状、体征以及内镜和实验室检查结果综合判断IBD疾病活动度。内镜检查联合病变黏膜活检是现阶段评估肠道炎症程度的金标准，可直接观察病变部位，明确病变范围、程度及其组织学改变，但具有检查为侵入性、费时、内镜和显微镜下的各种参数难以量化等缺点；一些血液学指标如CRP、 ESR、白蛋白、PLT计数、WBC计数等虽然亦可用于评价IBD 疾病活动度，但这些指标缺乏器官特异性，全身各***炎症、感染时均可明显升高。因此,相当数量的IBS样症状患者需要接受进一步侵入性诊疗如内镜检查和放射性影像学检查以明确是否为器质性或功能性疾患,这不仅增加了患者的痛苦和相关操作的风险(特别对于儿童及部分年迈病重患者),并且加重其经济负担、造成部分医疗资源的浪费。临床资料显示,绝大多数接受内镜检查的患者实际并没有严重器质性病变,慢性腹部不适的患者在就诊初期没有必要进行内镜检查。因而,寻找一种非侵入性的、廉价安全、简便可重复、又具有较高敏感性与特异性的实验室检测指标对于IBD和IBS的鉴别诊断具有重要意义。

乳铁蛋白（Lactoferrin ,LF)是一种相对分子质量为76-80kD的铁结合糖蛋白，广泛存在于乳汁、唾液等外分泌或者血浆、中性粒细胞次级颗粒中，是活化的多形核中性粒细胞的主要成分，为炎症反应的一种产物。由于处于炎症的肠道黏膜中有大量中性粒细胞浸润，导致粪便中性粒细胞衍生蛋白（如乳铁蛋白等）浓度的升高，那么测定粪便中这些蛋白浓度则可以间接可靠的反应肠道炎症情况。

粪便乳铁蛋白（Fecal Lactoferrin ,FLA）作为一种肠道炎症的标记物，可用来鉴别炎症性(包括细菌感染性肠炎、活动性IBD)和非炎症性肠道疾病，用于肠道炎症的诊断、炎症活动度和药物疗效的评估以及疾病复发的预测。

目前，检测粪便乳铁蛋白（Fecal Lactoferrin ,FLA）的方法目前主要是酶联免疫技术（ELISA)，ELISA技术存在以下缺点：检测设备要求高，成本高；干扰因素较多，重复性不好；检测时间长。因此酶联免疫技术检测粪便乳铁蛋白（Fecal Lactoferrin ,FLA）不适合临床快速诊断。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种快速定量检测粪便乳铁蛋白的免疫层析试剂盒，具有方便快捷、操作简单、结果准确 等优点，适于临床快速检测。

本发明的另一目的是提供上述试剂盒的制备方法，简单，高效，成本低。

本发明的目的采用如下技术方案实现。

一种快速定量检测粪便乳铁蛋白的免疫层析试剂盒，包括试纸条，所述试纸条包括底板、设置于所述底板上的样品垫、标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述标记物结合垫包被有胶体金颗粒、胶体银颗粒、胶体铁颗粒、磁性颗粒、燃料颗粒、乳胶颗粒或荧光颗粒标记的乳铁蛋白单克隆抗体A，所述硝酸纤维素膜含有检测线T和质控线C，所述检测线T由乳铁蛋白单克隆抗体B形成，所述质控线C由羊抗鼠IgG形成；所述乳铁蛋白单克隆抗体A和B识别乳铁蛋白的不同表位。

优选的技术方案中，乳铁蛋白单克隆抗体A是购自珠海博美生物科技有限公司的Lactoferrin Monoclonal 13H1 ，产品编号为M0153；乳铁蛋白单克隆抗体B是购自珠海博美生物科技有限公司的Lactoferrin Monoclonal 5A4 ，产品编号为M0154；羊抗鼠IgG购自杭州隆基生物技术有限公司，产品编号为C56-Ab1。

优选的技术方案中，所述样品垫、标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次搭接。

优选的技术方案中， 所述试剂盒还包括卡壳，所述卡壳包括上卡壳和下卡壳，所述上、下卡壳卡接固定，所述下卡壳内设置有用于放置试纸条的定位槽，所述上卡壳对应于硝酸纤维膜的位置设有观察窗、对应于样品垫的位置设有加样孔。

优选的技术方案中，所述吸水垫的材料为纸质材料。

优选的技术方案中，所述底板对应于硝酸纤维素膜的侧面涂覆有胶黏剂，所述底板的材料为聚苯乙烯或者聚乙烯。

本发明还提供一种制备所述试剂盒的方法，包括如下步骤：

（1）将玻璃纤维素膜采用表面活性剂缓冲液浸泡，干燥，得到样品垫；

（2）采用胶体金颗粒、胶体银颗粒、胶体铁颗粒、磁性颗粒、燃料颗粒、乳胶颗粒或荧光颗粒标记乳铁蛋白单克隆抗体A，然后喷涂至玻璃纤维素膜上，干燥，得到标记物结合垫；

（3）采用喷膜仪将乳铁蛋白单克隆抗体B和羊抗鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜上，形成检测线T和质控线C，得到含有检测线T和质控线C的硝酸纤维素膜；所述乳铁蛋白单克隆抗体A和B识别乳铁蛋白的不同表位；

（4）在底板上粘贴样品垫、标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述样品垫、标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次搭接。

优选的技术方案中，采用胶体金颗粒标记乳铁蛋白单克隆抗体A的方法如下：在胶体金溶液中加入碳酸钾水溶液，搅拌；然后加入乳铁蛋白单克隆抗体A，搅拌；加入BSA水溶液，搅拌、离心、重悬，得到胶体金颗粒标记的乳铁蛋白单克隆抗体A。

优选的技术方案中，所述胶体金溶液采用如下方法制备：将氯金酸水溶液煮沸，加入柠檬酸三钠水溶液，在搅拌状态下加热，煮沸5-15分钟，在搅拌状态下冷却至室温，得到胶体金溶液。

优选的技术方案中，所述表面活性剂缓冲液是在pH8.5-9.5硼酸缓冲液中添加终浓度为4-6%的酪蛋白、4-6%的聚乙烯吡咯烷酮、0.5-1.5%的胆酸钠、1.0-2.0%的RHODASURF ON-870和0.01-0.03%叠氮钠后形成的。

本发明快速定量检测粪便乳铁蛋白的免疫层析试剂盒，采用侧向层析免疫技术与免疫反应原理，通过双抗体夹心法检测粪便乳铁蛋白。检验时，样本中的乳铁蛋白抗原首先与标记物结合垫上的胶体金颗粒、胶体银颗粒、胶体铁颗粒、磁性颗粒、燃料颗粒、乳胶颗粒或荧光颗粒标记的乳铁蛋白单克隆抗体A发生免疫反应，形成免疫复合物。其后免疫复合物随着样本在硝酸纤维素膜上层析流动，当免疫复合物层析至硝酸纤维素膜上的检测线T时，与乳铁蛋白单克隆抗体B发生反应从而被固定在硝酸纤维素膜的上。粪便样本中的乳铁蛋白越多，检测线T上的复合物越多，条带上的光密度值就越高。同时，在检测过程中，游离的带标记的乳铁蛋白单克隆抗体A则在质控线C处与羊抗鼠IgG结合而显色，作为样本是否充足、试纸条是否工作正常的依据。

由于胶体金颗粒、胶体银颗粒、胶体铁颗粒、磁性颗粒、燃料颗粒、乳胶颗粒或荧光颗粒在特定波长下，对光的吸收和散射与颗粒的量相关，因此反应结束后，可以利用定量分析仪分析检测线T和质控线C的光密度，然后根据已预先设置在定量分析仪内的标准曲线对粪便乳铁蛋白的浓度进行计算。

本发明通过大量富有创造性的劳动，选择了乳铁蛋白单克隆抗体A、B及羊抗鼠IgG来制备检测粪便乳铁蛋白的免疫层析试剂盒，该试剂盒的检测线性范围为50ng/ml〜3000ng/ml ，方便快捷、操作简单、结果准确，仅需要10分钟就能够检测样本中粪便乳铁蛋白的浓度，极大地提高了检测效率。本发明将胶体金等颗粒作为标记物，此标记物稳定性良好，有利于提高检测稳定性。本发明在卡壳设有样品添加的加样孔和供观测结果的观察窗，根据分析仪器判定结果，准确可靠。本发明制作方便，体积小、便于携带。本发明检测成本较低，稳定性好，摆脱冷链，易保存，易运输，可长期保存（24个月），有利于基层单位推广。本发明可批量生产，适用于临床快速诊断和现场快速诊断。本发明试剂盒操作简单，方便快捷，可通过智能免疫定量分析仪或者自动粪便分析仪对结果进行判读，可实现自动化，减少主观因素的影响，提供便利、快速、可靠、准确的诊断结果。

附图说明

图1是本发明试剂盒中试纸条的结构示意图，其中1：样品垫， 2：标记物结合垫， 3：硝酸纤维素膜，4：吸水垫，5：底板。

图2是本发明快速定量检测粪便乳铁蛋白的免疫层析试剂盒的主视图，其中，1：样品垫， 2：标记物结合垫， 3：硝酸纤维素膜，4：吸水垫， 5：底板，6：卡壳，7：加样孔，8：观察窗。

图3是本发明快速定量检测粪便乳铁蛋白的免疫层析试剂盒的俯视图，其中， 6：卡壳，7：加样孔，8：观察窗，9：检测线T，10：质控线C。

具体实施方式

以下将结合实施例和附图对本发明的构思、具体结构及产生的技术效果进行 清楚、完整地描述，以充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例 只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的 技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。另外，文中所提到的所有联接/连接关系，并非单指构件直接相接，而是指可根据具体 实施情况，通过添加或减少联接辅件，来组成更优的联接结构。

实施例1 定量检测粪便乳铁蛋白的免疫层析试剂盒的组成

结合图1-3对定量检测粪便乳铁蛋白的免疫层析试剂盒的结构进行描述。该免疫层析试剂盒包括试纸条，试纸条包括底板5、设置于底板5上的样品垫1、标记物结合垫2、硝酸纤维素膜3和吸水垫4，标记物结合垫2包被有胶体金颗粒标记的乳铁蛋白单克隆抗体A，硝酸纤维素膜3含有平行的检测线T和质控线C，检测线T由乳铁蛋白单克隆抗体B形成，质控线C由羊抗鼠IgG形成，乳铁蛋白单克隆抗体A、B识别乳铁蛋白的不同表位。

乳铁蛋白单克隆抗体A是购自珠海博美生物科技有限公司的Lactoferrin Monoclonal 13H1 ，是鼠源性抗体，产品编号为M0153；乳铁蛋白单克隆抗体B是购自珠海博美生物科技有限公司的Lactoferrin Monoclonal 5A4 ，产品编号为M0154；羊抗鼠IgG购自杭州隆基生物技术有限公司，产品编号为C56-Ab1。

样品垫1、标记物结合垫2、硝酸纤维素膜3和吸水垫4依次搭接。

试剂盒还包括卡壳6，卡壳6包括上卡壳和下卡壳，上、下卡壳卡接固定，下卡壳内设置有用于放置试纸条的定位槽，上卡壳对应于硝酸纤维膜的位置设有观察窗8、对应于样品垫的位置设有加样孔7。

观察窗8近似椭圆形。

吸水垫的材料为纸质材料。底板对应于硝酸纤维素膜的侧面涂覆有胶黏剂，底板的材料为聚苯乙烯或者聚乙烯。

实施例2 定量检测粪便乳铁蛋白的免疫层析试剂盒的制备

实施例1中试剂盒采用如下方法制备：

1.样品垫

将玻璃纤维素膜采用表面活性剂缓冲液浸泡，在37℃，相对湿度小于20%条件下干燥，得到样品垫。表面活性剂缓冲液是在pH9.0硼酸缓冲液中添加终浓度为5%（质量百分浓度）的酪蛋白、5%（质量百分浓度）的PVP-10（Polyvinylpyrrolidone 10）、1%（质量百分浓度）的胆酸钠、1.8%（质量百分浓度）的RHODASURF ON-870(SIGMA公司试剂)、0.02%（质量百分浓度）的叠氮钠后形成的。

pH9.0硼酸缓冲液：在6.18克硼酸中加980毫升超纯水溶解，然后用10 mol/L NaOH水溶液调pH至9.0，补加超纯水至1000毫升即得pH9.0的硼酸缓冲液。

2.标记物结合垫

在10mL、1%（质量百分浓度）氯金酸水溶液中，加入90mL超纯水中，在搅拌状态下加热，煮沸后迅速加入14mL、1%（质量百分浓度）的柠檬酸三钠水溶液，在搅拌状态下加热，煮沸10分钟后关闭加热装置，在搅拌状态下冷却至室温（18～25℃），得到胶体金溶液。

取胶体金溶液100mL,加入1mL、0.1mol/L的碳酸钾水溶液，搅拌30分钟。加入0.1mg乳铁蛋白单克隆抗体A，继续搅拌30分钟。加入1mL、10%（质量百分浓度）的BSA（牛血清白蛋白）水溶液，搅拌30分钟。在4℃、12000rpm条件下离心30分钟，去除上清液，用含1%（质量百分浓度） BSA的0.01mol/L、 pH7.0磷酸钠缓冲液重悬沉淀，得到胶体金颗粒标记的乳铁蛋白单克隆抗体A。用喷金仪将胶体金颗粒标记的乳铁蛋白单克隆抗体A喷涂在玻璃纤维素膜上，在37℃、相对湿度小于20%的烘箱干燥过夜，得到标记物结合垫。乳铁蛋白单克隆抗体A是购自珠海博美生物科技有限公司的Lactoferrin Monoclonal 13H1 ，是鼠源性抗体，产品编号为M0153。

3.硝酸纤维素膜

以0.01M、pH7.4磷酸盐缓冲液（PBS）将乳铁蛋白单克隆抗体B配制成1.0-2.0mg/ml的溶液，用喷膜仪在硝酸纤维素膜上以1.0μl/cm的参数进行划线，包被检测线T。然后，将0.5-1.5mg/ml的羊抗鼠IgG采用喷膜仪以1.0μl/cm的参数在硝酸纤维素膜上划线，包被质控线C。干燥，得到含有检测线T和质控线C的硝酸纤维素膜。检测线T和质控线C相互平行。检测线T和质控线C将硝酸纤维素膜分成了三段，包括检测线T一侧、检测线T和质控线C之间部分和质控线C一侧。

乳铁蛋白单克隆抗体B是购自珠海博美生物科技有限公司的Lactoferrin Monoclonal 5A4 ，产品编号为M0154。羊抗鼠IgG购自杭州隆基生物技术有限公司，产品编号为C56-Ab1；乳铁蛋白单克隆抗体A与乳铁蛋白单克隆抗体B识别乳铁蛋白的不同表位。

4.吸水垫和底板

吸水垫是吸水能力较强的纸质材料。底板材料为聚苯乙烯或者聚乙烯，涂覆有用于黏贴样品垫等的胶黏剂。

5.试剂盒的装配

在相对湿度小于30%的条件下，取底板，将含有检测线T和质控线C的硝酸纤维素膜3粘贴在底板的中部，在硝酸纤维素膜的检测线T一侧粘贴标记物结合垫2，在标记物结合垫2另一侧粘贴样品垫1；在硝酸纤维素膜3的质控线C一侧粘贴吸水垫4。样品垫、标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次搭接。各粘贴部分相互叠压l-2mm，粘贴好的大板切成4mm宽的试纸条。然后将试纸条分别放置于下卡壳的定位槽中，盖上上卡壳，压紧，完成试剂盒的装配。

实施例3 定量检测粪便乳铁蛋白的免疫层析试剂盒的使用方法及效果

将200份临床粪便样本用粪便标本盒采样，加入生理盐水稀释混匀。在实施例1试剂盒的加样孔7中，滴加3-4滴处理后的样本，10分钟后，利用智能免疫定量分析仪或者自动粪便分析仪分析检测线T和质控线C的光密度，根据已预先设置在分析仪内的标准曲线计算处理后样本中粪便乳铁蛋白的浓度，单位为ng/ml。计算每克粪便样本中乳铁蛋白质量，单位是ug/g。

对上述200份临床样本同时采用美国TECHLAB Inc.公司生产的 LACTOFERRIN SCAN™ 试剂盒(ELISA)进行检测，分析两种方法检测结果的相关性。结果显示两种检测方法获得的粪便乳铁蛋白浓度相关性很好，相关系数r=0.9875,P>0.05,两种方法间无统计学差异。通过以上结果可以判定本发明的性能良好，具有操作简便、反应快速、结果准确可信、适合现场检测等优点。

经过试验检测，实施例1试剂盒对处理后粪便乳铁蛋白检测的线性范围为 50ng/ml〜3000ng/ml，对粪便样本中乳铁蛋白的检测范围为5ug/g—300ug/g。

尽管上文对本发明的具体实施方式给予了详细描述和说明，但是应该指明的是，本领域的熟练技术人员无须过多实验即可对本发明所要求保护的进行实施，例用类似的胶体金替代物：胶体银颗粒、胶体铁颗粒、磁性颗粒、燃料颗粒、乳胶颗粒、或荧光颗粒代替胶体金颗粒或进行改造，或用某些在理化上相似的试剂代替本发明描述的试剂，或进行各种等效改变和修改，其所产生的功能仍未超出说明书及附图所涵盖的精神时，均应该在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种快速定量检测粪便乳铁蛋白的免疫层析试剂盒，其特征在于：包括试纸条，所述试纸条包括底板、设置于所述底板上的样品垫、标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述标记物结合垫包被有胶体金颗粒、胶体银颗粒、胶体铁颗粒、磁性颗粒、燃料颗粒、乳胶颗粒或荧光颗粒标记的乳铁蛋白单克隆抗体A，所述硝酸纤维素膜含有检测线T和质控线C，所述检测线T由乳铁蛋白单克隆抗体B形成，所述质控线C由羊抗鼠IgG形成；所述乳铁蛋白单克隆抗体A和B识别乳铁蛋白的不同表位。

2.根据权利要求1所述快速定量检测粪便乳铁蛋白的免疫层析试剂盒，其特征在于：乳铁蛋白单克隆抗体A是购自珠海博美生物科技有限公司的Lactoferrin Monoclonal 13H1 ，产品编号为M0153；乳铁蛋白单克隆抗体B是购自珠海博美生物科技有限公司的Lactoferrin Monoclonal 5A4 ，产品编号为M0154；羊抗鼠IgG购自杭州隆基生物技术有限公司，产品编号为C56-Ab1。

3.根据权利要求2所述快速定量检测粪便乳铁蛋白的免疫层析试剂盒，其特征在于：所述样品垫、标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次搭接。

4.根据权利要求3所述快速定量检测粪便乳铁蛋白的免疫层析试剂盒，其特征在于： 所述试剂盒还包括卡壳，所述卡壳包括上卡壳和下卡壳，所述上、下卡壳卡接固定，所述下卡壳内设置有用于放置试纸条的定位槽，所述上卡壳对应于硝酸纤维膜的位置设有观察窗、对应于样品垫的位置设有加样孔。

5.根据权利要求1或2或3或4所述快速定量检测粪便乳铁蛋白的免疫层析试剂盒，其特征在于：所述吸水垫的材料为纸质材料。

6.根据权利要求5所述快速定量检测粪便乳铁蛋白的免疫层析试剂盒，其特征在于：所述底板对应于硝酸纤维素膜的侧面涂覆有胶黏剂，所述底板的材料为聚苯乙烯或者聚乙烯。

7.一种制备权利要求1-6之一所述试剂盒的方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)将玻璃纤维素膜采用表面活性剂缓冲液浸泡，干燥，得到样品垫；

(2)采用胶体金颗粒、胶体银颗粒、胶体铁颗粒、磁性颗粒、燃料颗粒、乳胶颗粒或荧光颗粒标记乳铁蛋白单克隆抗体A，然后喷涂至玻璃纤维素膜上，干燥，得到标记物结合垫；

(3)采用喷膜仪将乳铁蛋白单克隆抗体B和羊抗鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜上，形成检测线T和质控线C，得到含有检测线T和质控线C的硝酸纤维素膜；所述乳铁蛋白单克隆抗体A和B识别乳铁蛋白的不同表位；

(4)在底板上粘贴样品垫、标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述样品垫、标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次搭接。

8.根据权利要求7所述制备试剂盒的方法，其特征在于：采用胶体金颗粒标记乳铁蛋白单克隆抗体A的方法如下：在胶体金溶液中加入碳酸钾水溶液，搅拌；然后加入乳铁蛋白单克隆抗体A，搅拌；加入BSA水溶液，搅拌、离心、重悬，得到胶体金颗粒标记的乳铁蛋白单克隆抗体A。

9.根据权利要求8所述制备试剂盒的方法，其特征在于：所述胶体金溶液采用如下方法制备：将氯金酸水溶液煮沸，加入柠檬酸三钠水溶液，在搅拌状态下加热，煮沸5-15分钟，在搅拌状态下冷却至室温，得到胶体金溶液。

10.根据权利要求7-9之一所述制备试剂盒的方法，其特征在于：所述表面活性剂缓冲液是在pH8.5-9.5硼酸缓冲液中添加终浓度为4-6%的酪蛋白、4-6%的聚乙烯吡咯烷酮、0.5-1.5%的胆酸钠、1.0-2.0%的RHODASURF ON-870和0.01-0.03%叠氮钠后形成的。