CN102959398B - 含有以HpαR为有效成份的肺癌诊断用标记 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种含有以HpαR为有效成份的肺癌诊断用标记。本发明的肺癌诊断用标记及利用其抗体的肺癌诊断试剂盒使用比较容易采集的血液作为检体，因此与以活检为对象的现有的肺癌诊断方法不同，不仅不会给患者任何负担，能够非常简便地对肺癌进行诊断，而且诊断的敏感度及筛选度高，从而非常有助于肺癌的早期诊断。

Description

含有以HpαR为有效成份的肺癌诊断用标记
技术领域
本发明涉及一种含有以HpαR为有效成份的肺癌诊断用标记及利用该标记对肺癌进行诊断的方法。
背景技术
随着吸烟人口的增加和大气污染等原因，在我们国家肺癌也是一种急剧增加的肿瘤疾病。据***最近调查，其发生频率在男性中排在胃癌之后居第2位,在女性中排在子宫癌、胃癌、肝癌、大肠癌之后居第5位，其死亡率无论男女均居癌症死亡率的第1位。
从当前的吸烟状况看，这种肺癌的发生频率及因肺癌导致死亡率的增加在今后相当长的一段时间内仍将持续。肺癌通常因癌细胞的生长而侵犯周边组织或者导致气道阻塞、***转移等症状,但是，也有10-15%左右的患者无任何症状，通过定期体检才能诊断出。另外,大部分肺癌发现时都已经发展到了第Ⅲ(3)期以上，一般都很难治愈。因此，对肺癌进行早期诊断以降低因肺癌导致的死亡率是一个紧迫的问题。
为了对肺癌进行诊断，一般都综合运用多种方法,到目前为止，大都通过检查肿瘤的大小、***是否转移等或者对肺肿瘤组织或***等做活检并通过免疫组织化学方法进行分析或者通过利用胸部X-线摄影、胸部计算机断层扫描、纤维支气管镜等进行诊断。
但是,如果采用胸部计算机断层扫描，肺癌的大小必须达到约0.1cm以上才能够进行测定，在这一时期，癌症很可能已经转移到了其它的组织。利用纤维支气管镜的方法虽然可以将内镜***支气管直接对肺内部进行观察，但是，其观察范围在空间上具有一定的局限性，很难对肺末端的肿瘤进行观察。
为了克服上述现有诊断方法的缺点，研究人员一直试图通过测定患者血液中全血细胞计数(Complete blood count，CBC)、血清电解质(含钙)、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase)、白蛋白(Albumin)、天冬氨酸转氨酶( Aspartate aminotransferase，AST)、丙氨酸转氨酶 (Alanine transaminase，ALT)、总胆红素(Total bilirubin)或者肌酐(Creatinine)的浓度从而对肺癌进行诊断。但是,虽然一直在对这种肿瘤标记(marker)作为诊断因素或预后因素的价值进行研究，到目前为止也仅限于有限使用，仍然没有建议正式使用的肺癌标记。
另外,结合珠蛋白(Haptoglobin,Hp)作为一种与IgG、白蛋白等一起大量存在于血液中的血清蛋白,主要在肝、皮肤、肺及肾脏细胞中合成，并分泌到血液中。通过由2个α chain和2个β chain形成二硫键(disulfide bond)连接的四聚体蛋白(tetrameric protein)形式存在，与红细胞中游离的血红蛋白结合，最终在血液中产生抗氧化功能 (Wassell J.(2002)Haptoglobin:function and polymorphism. Clin Lab.46,547-552/Langlois M.R.＆Delanghe J.R.(1996)Biological and clinical significance of haptoglobin polymorphism in humans.Clinical Chemistry 42,15891600)。据最近的蛋白质组学研究报告表明，皮下及腹部脂肪细胞内也能够产生并分泌非常少量的结合珠蛋白。虽然能够在成人的肝内合成,但是却不能够在胎儿的肝内合成。结合珠蛋白是在生物体内与感染或炎症反应而使血中浓度急剧增加的急性时相蛋白(acute phase protein,APP)中的一种。
Hp有2个等位型 (Hp1,Hp2)及3种基因型(Hp1-1,Hp2-1,Hp2-2)(Maeda N,McEvoy SM,Harris HF,Huisman TH,Smithies O.(1986)Polymorphisms in the human haptoglobin gene cluster:chromosomes with multiple haptoglobin-related(Hpr)genes.Proc Natl Acad Sci U S A.83,73957399/Patzelt D,Geserick G,Schroder H.(1988)The genetic haptoglobin polymorphism:relevance of paternity assessment.Electrophoresis 9,393397),Hp α 链 (Hpα)上存在α1及α2,上述 α蛋白质以多种位点变体（position variant）的形式存在(Sadrzadeh SM,Bozorgmehr J.(2004)Haptoglobin phenotypes in health and disorders.Am J Clin Pathol.121 Suppl:S97-104)。
与上述蛋白质的基因相关的疾病包括糖尿病肾病(diabetic nephropathy)、克罗恩病(Crohn’s disease)等,由急性时相蛋白感染(infection)、过度紧张(extreme stress)、烧伤(burns)、严重的挤压伤(major crush injury)、过敏(allergy)等原因而导致其血液浓度增加,最近有报告显示，Hp的血液浓度在卵巢癌等多数癌症中均增加。
但是,到目前为止，有关结合珠蛋白作为肺癌诊断用标记作用的研究仍然很少。因此，现在迫切需要一种能够对肺癌的诊断或者预后进行早期预测的肺癌诊断用标记。
发明内容
技术问题
本发明人在研究一种能够对肺癌的诊断或者预后进行早期预测的肺癌诊断用标记时发现HpαR的浓度在肺癌患者血液中都非常高，从而完成本发明。
技术方案
本发明提供一种含有以HpαR为有效成份的肺癌诊断用标记。
另外,本发明提供一种含有与HpαR特异结合抗体的肺癌诊断试剂盒。
另外,本发明提供一种包含通过血液测定HpαR步骤的肺癌诊断方法。在本发明的一个实施例中上述血液采用血清。
技术效果
本发明的肺癌诊断用标记及利用其抗体的肺癌诊断试剂盒用比较容易采集的血液作为检体，因此与以活检为对象的现有肺癌诊断方法不同，不仅不会给患者任何负担，能够非常简便地对肺癌进行诊断，而且诊断的敏感度及筛选度高，从而非常有助于肺癌的早期诊断。
附图说明
图1是利用 ELISA方法分别对含有C-末端精氨酸的肽抗原(RP)及除去精氨酸后C-末端氨基酸由谷氨酰胺构成的肽抗原(QP)的VR及VQ抗体的敏感度及筛选度进行测定的示意图；
图2是利用 ELISA方法随RP及QP肽的浓度变化而分别对其VR抗体、VQ抗体、单克隆抗体(MHα及MHβ)及多克隆抗体(Pα)的反应性进行测定的示意图；
图3是分别对RP及QP肽的VR抗体、VQ抗体及单克隆抗体(MHα及MHβ)的反应性通过免疫印迹法进行测定的示意图；
图4是利用ELISA方法对男性正常群及男性肺癌群血清中的HpαR浓度进行测定的示意图；
图5是利用ELISA方法对肺炎患者血液中HpαR、HpHpαQ、Hpα及Hpβ浓度进行测定的示意图；
图6是利用VR及VQ抗体混合物通过ELISA方法对正常群与肺癌患者群血液中相关抗原蛋白质量进行测定及其ROC曲线分析结果的示意图。
具体实施方式
下面,将对本发明中使用的术语进行说明。
术语 “HpHpα2R”是结合珠蛋白α2链变体(Hp alpha2 chain variant)的一种,是指通过其C-末端(C-terminal)的精氨酸(Arg,R)在2D胶上其位置发生变化的位点变体。
术语“HpαR”是对结合珠蛋白α1(Hp alpha1)及结合珠蛋白α2(Hp alpha2)中C-末端带有精氨酸的位点变体的总称。
术语“HpHpαQ”是对结合珠蛋白α1(Hp alpha1)及结合珠蛋白α2(Hp alpha2)中除去C-末端精氨酸的位点变体的总称。
术语“VR抗体”是为了确保只能够检测出含有结合珠蛋白α(Hp alpha)的变体蛋白质中对肺癌特别敏感的蛋白质即HpαR的C-末端精氨酸的部位而制作的抗体。
术语“VQ抗体”为了确保只能够检测出含有HpHpαQ的C-末端谷氨酰胺(Gln,Q)的部位而制作的抗体。
下面,将对本发明进行详细说明。
本发明将正常群与肺癌群的血清蛋白通过2D电泳展开，发现了在肺癌患者群中增加的蛋白质点(spot)，对其蛋白质进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDITOF）质量分析,结果表明，肺癌标记候选蛋白质是结合珠蛋白α链变体的一种，通过其C-末端的精氨酸在2D胶(Gel)上其位置发生变化的变体。
在本发明中，上述HpαR以与肺癌相关的2D电泳实验结果为基础,制造出与之特异结合的抗体，再以肺癌患者的血液样品为对象通过免疫化学法分析,并获得有价值的结果，确认上述HpαR可以作为肺癌诊断标记使用。
由此，本发明提供含有以HpαR为有效成份的肺癌诊断用标记。
依据本发明的实施例,通过ELISA方法对正常群与肺癌患者群血液中本发明的HpαR浓度进行观察,结果表明，随着肺癌的发展血液中HpαR的浓度增加，但是，HpαQ在Ⅱ期之前一直增加，而从Ⅲ/Ⅳ期开始减少,Hpα及Hpβ血液中蛋白质浓度在肺癌发生时增加，此后随着肺癌的发展就显著减少。因此,唯有HpαR蛋白质随着肺癌周期而增加,所以，HpαR可以作为能够跟踪肺癌发展的标记。
如上所述,本发明的HpαR在肺癌患者的血液中的浓度显著升高,从而可以对肺癌的诊断或预后进行早期预测,并可以作为肺癌诊断用标记使用。
另外,本发明提供一种含有与HpαR特异结合抗体的肺癌诊断试剂盒。
本发明的诊断试剂盒不仅包含与HpαR特异结合的抗体，而且还包含通常在相关领域用于免疫学分析的工具、试剂等,并且利用上述标记通过在该领域通常使用的制造方法就能够很容易地制造出来。
依据本发明的一个实施例,上述肺癌诊断试剂盒包括：与HpαR特异结合的抗体;接合有通过与基质的反应着色标记体的2次抗体共轭物(conjugate);与上述标记体发生着色反应的发色基质溶液;洗涤液;以及酶反应停止液。
依据本发明的肺癌诊断试剂盒可以通过抗原-抗体结合反应对抗体蛋白质的抗原进行定量或者定性分析从而对肺癌进行诊断,上述抗原-抗体结合反应可以通过普通的酶联免疫吸附试验(ELISA)、放射免疫测定(radioimmunoassay,RIA)、夹心法(sandwich assay)、免疫印迹法、免疫沉淀法、免疫组化染色(immunohistochemical staining)、免疫荧光法、酶基质着色法、抗原-抗体混凝法等方法进行测定。例如为了确保能够利用表面涂布有检体及对照群的96孔微量滴定板等实施与重组单克隆抗体蛋白质反应的ELISA以提供上述诊断试剂盒。
作为进行抗原-抗体结合反应的固定体可以使用硝酸纤维素膜、PVDF膜、由聚乙烯(polyvinyl)树脂或聚苯乙烯(polystyrene)树脂合成的孔板(Well plate)、由玻璃制成的载玻片、蛋白质结合用树脂(Resin)等。
优选地，上述2次抗体共轭物的标记体采用发生着色反应的普通着色剂,可以使用辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase)、胶体金 (colloid gold)、聚-L-赖氨酸-异硫氰酸荧光素(poly L-lysine-fluoresceinisothiocyanate，FITC)、罗丹明-B-异硫氰酸酯 (rhodamine-B-isothiocyanate，RITC)等荧光素(fluorescein)及色素(dye)等的标记体。
优选地，诱导着色的上述发色基质根据发生着色反应的标记体确定,可以使用3,3’,5,5’-四甲基联苯胺 (3,3’,5,5’-tetramethyl bezidine，TMB), 2,2’-连氮双（3- 乙基并噻 -6- 磺酸 [2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonicacid)，ABTS], 邻苯二胺 (ophenylenediamine，OPD)等。在这种情况下,发色基质更优先为以溶解于缓冲溶液(0.1M NaAc,pH5.5)中的形式提供。
优选地，洗涤液包括磷酸盐缓冲溶液、NaCl及吐温20(Tween 20),更优先地采用由0.02M磷酸盐缓冲溶液、0.13M NaCl及0.05% 吐温20构成的缓冲溶液(PBST)。洗涤液在完成抗原-抗体结合反应后使抗原-抗体结合体与2次抗体发生反应，然后取适当量加入到固定体中并洗涤3至6次。优选地，反应停止液使用硫酸溶液(H2SO4)。
另外,本发明提供一种包含通过血液测定HpαR步骤的肺癌诊断方法。即,通过利用血液中与肺癌诊断用标记即HpαR特异结合抗体的抗原-抗体结合反应以对肺癌进行诊断或者预测。优选地，上述血液采用血清。
下面,为了有助于对本发明的理解，列举优选的实施例。但是，下述实施例仅为了更加容易地理解本发明,它并不限定本发明的内容。
[实施例]
实施例1.研究对象
用于本研究的正常人(normal control)及癌症患者的血清(serum)通过白种人(White caucasian)获取。为了确保所有的血清都适合生物标记(Biomarker)的研究，均根据美国食品和药物管理局 (the Food and Drug Administration，FDA)及美国国家癌症研究所 (National Cancer Institute，NCI)指南进行收集及处理, 从事先获得IRB及HIPAA批准而收集的血液中获取。所有的血清及其临床信息均由Bioserve公司(美国)提供,与之相关的概要信息如表1所示。
[表1]
另外,为了测定血液中蛋白质的量,就需要利用ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay)完成下述反应。
采取正常人及癌症患者的血液后,经离心分离仅留下血清，再通过利用各种抗体的酶联免疫试剂盒（ELISA kit）测定血清中所含蛋白质的量。酶联免疫试剂盒采用兔子抗体用美国GenScript公司的Express ELISA kit,使用的各种蛋白质的肽抗体采用将与KLH蛋白质结合的肽(肽-KLH共轭物)注入兔子后形成的抗血清（Antiserum）及将相关肽与树脂结合后形成的肽-亲和层析柱（Peptide-Affinity Column）提纯精炼后获得的单特异性（Mono-specific）抗体。
在450nm的条件下测定吸光度后,利用将各种抗原肽用作标准物质绘制的标准曲线计算出血液中所含的浓度。测定值取3次测定的平均值,统计处理采用 GraphPad Software公司(美国)产品即GraphPad Prism(ver5.04)所含的统计程序。
实施例2.VR及VQ抗体性能实验
2-1.VR及VQ抗体的敏感度及筛选度实验
利用ELISA(在25℃条件下实施10分钟)对含有C-末端精氨酸的肽抗原(RP)及除去精氨酸后C-末端氨基酸由谷氨酰胺构成的肽抗原(QP)的VR及VQ抗体的敏感度及筛选度进行测定,其结果见图1。RP肽为CKLPECEAVCGKPKNPANPVQR,QP肽为从RP肽中将C-末端 R除去后的肽。
如图1所示,VR抗体仅识别RP肽,VQ抗体仅识别QP肽,肽RP及QP的VR及VQ抗体滴度(Titer)为 2种抗体全部1/512,000稀释倍数以上,可以确认，与VQ抗体相比，VR抗体对各种抗原的敏感度大约强2倍左右。
2-2. 与多克隆(polyclonal)及单克隆(monoclonal)抗体间的性能比较实验
甲．ELISA分析
为了调查识别结合珠蛋白的抗体即VR抗体、VQ抗体、单克隆抗体(Monoclonal Ab:MHα及MHβ)及多克隆抗体(Polyclonal Ab: Pα)的RP及QP肽的抗体反应性，通过ELISA方法(在25℃条件下实施20分钟)根据各种肽的浓度变化测定各种抗体的反应性,其结果见图2。
如图2所示,抗体VR及VQ分别识别各自的抗原肽(图2A),但是，两种单克隆抗体(MHα及MHβ)则完全不能识别RP及RQ肽(图2B的3,4) (在MHβ的情况下与MHα的实验结果类似，就不再用图表示意),多克隆抗体(Pα)虽然能够有选择性地识别QP，但是对于RP来说，其反应性非常弱(图2B的1,2)。
上述结果表明，Pα抗体虽然与RP的结合非常弱，但作为可以主要识别QP的抗体,它主要识别结合珠蛋白链的C-末端部位，但仅识别除去精氨酸后的C-末端(QP),MHα不能够识别RP及QP,因此，它是不能够识别结合珠蛋白 α 链的C-末端部位的抗体。
（2）2D-免疫印迹分析
通过免疫印迹法分别对VR抗体、VQ抗体及从AbFRONTIER公司购买的单克隆抗体(单克隆 Ab: MHα及MHβ)和多克隆抗体(多克隆 Ab: Pα)的RP及QP 肽的抗体反应性进行分析。在Bio-Rad 7-cm,pH4-7, IPG(固定化pH梯度，Immobilized pH gradient) 胶条条件下进行等电聚焦(isoelectric focusing)。然后， 通过执行12% SDS-PAGE的2维凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis)进行划分,从而完成免疫印迹分析,其结果见图3。
如图3所示,VR抗体仅有选择性地识别Hpα2的3种位点变体中的Hpα2R(位点1),VQ抗体有选择性地识别另2种Hpα2 位点变体(位点2, 位点3)。另外，VR抗体仅识别结合珠蛋白 α1位置变体(位点4至6)中的位点4变体,VQ抗体仅识别位点5及位点6变体。上述结果表明，只有α1位置变体中的位点4是C-末端带有精氨酸的蛋白质。
Pα抗体与MHα类似，识别所有的结合珠蛋白α链位置变体(位点1至6) ,这是由Pα抗体的特性决定的。
另外,MHα只能够检测结合珠蛋白的α链，MHβ只能够检测结合珠蛋白的β 链。
上述结果表明，VR抗体是一种有选择性地识别HpαR的C-末端精氨酸部位的抗体,VQ抗体是一种有选择性地识别HpαQ的C-末端谷氨酰胺部位的抗体。
实施例3.作为肺癌特异性标记进行HpαR分析
3-1.ELISA分析
利用ELISA方法对从男性正常群(正常人,白种人)(年龄:44.64±2.09)获得的40份血清及从男性肺癌群获得的60份血清(白种人,Ⅰ期：20,Ⅱ期：20,Ⅲ期:14,Ⅳ期:6)中的HpαR浓度进行测定,其结果见图4。
如图4所示,利用VR抗体测定的HpαR正常群的平均浓度为0.07195±0.001596mg/ml,肺癌群的平均浓度为0.1039±0.002634 mg/ml,肺癌群的平均浓度与正常群的平均浓度相比大约高44.4%,Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ/Ⅳ期肺癌群的平均浓度分别为0.09724±0.003673,0.1008±0.003543,0.1136±0.005548 mg/ml,从Ⅰ期到Ⅲ/Ⅳ期，HpαR的浓度大约增加11.7%。通过ANOVA 试验分析，对于HpαR而言，随着肺癌的发展导致HpαR的浓度差异具有统计学方面的意义(p=0.026)。
利用VQ抗体测定的HpαQ正常群的平均浓度为0.3178±0.01212 mg/ml,肺癌群的平均浓度为0.4833±0.01728 mg/ml,肺癌群的平均浓度与正常群的平均浓度相比大约高52%,Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ/Ⅳ期肺癌群的平均浓度分别为0.4799±0.03066,0.49061±0.03256,0.4738±0.02771 mg/ml,从Ⅰ期到Ⅱ期平均浓度大约增加3.4%。但是，到Ⅲ/Ⅳ期时反而减少了4.5%。
MHα只能够检测结合珠蛋白的α链，MHβ只能够检测结合珠蛋白的β链(参照图3),利用上述2种单克隆抗体测定的数值变化可以分别看作是结合珠蛋白的α链及结合珠蛋白的β链的量的变化。这种情况与VR抗体的情况相反，肺癌周期越增加，结合珠蛋白的α链及结合珠蛋白的β链反而减少。
Pα的结果与VQ抗体的结果类似，在初期(Ⅰ/Ⅱ期)增加，在末期(Ⅲ/Ⅳ期)减少,上述结果与针对VQ及Pα的QP的类似反应性结果一致。
另外,与正常群相比，肺癌患者群的Hpα浓度大约增加50%,Hpβ浓度大约增加51.2%。但是，从肺癌初期(Ⅰ期)到末期(Ⅲ/Ⅳ期)各自的蛋白质浓度在Hpα的情况下大约减少23.3%,在Hpβ的情况下大约减少32.4%。
上述结果表明,只有HpαR蛋白质随肺癌周期而增加,因此，HpαR是一种能够跟踪肺癌发展的标记。
3-2.ROC曲线(curve)分析
以正常群和肺癌患者群的血清为对象，对利用各种抗体(VR,VQ, Pα, MHα及MHβ)获得的ELISA测定值进行ROC曲线分析，求出其各自的AUC值、敏感度(sensitivity)及筛选度(specificity),其结果见表2。
[表2]
如表2所示,如果利用VR抗体测定血液中HpαR浓度，当AUC(曲线下面积，Area Under Curve)值为0.961±0.0190, 临界值为0.0866mg/ml时，敏感度及筛选度分别为88.3%及92.5%,与通过利用其它抗体的测定值导出的值比较，其是最优秀的。
上述结果表明，与HpαQ、Hpα(人类结合珠蛋白α链多克隆抗体)、MHα及MHβ(人类结合珠蛋白α及β链单克隆抗体)相比，HpαR是最优秀的肺癌 标记。
实施例4.作为肺炎(pneumonia)标记进行HpαR性能实验
4-1.ELISA分析
为了分析HpαR与Hp蛋白质的临时性增加而导致其增加的炎症机理之间的关联性，利用ELISA方法测定肺炎患者(男性,白种人,n=40)血液中HpαR及HpαQ浓度,并通过相同的方法利用能够对Hp蛋白质的α及β本身进行测定的Pα、MHα及MHβ分别测定肺炎患者血液中Hpα及Hpβ的浓度,其结果见图5。
如图5所示,只有利用VR抗体测定的HpαR数值,其肺炎患者群与肺癌患者群之间的差异从统计学的角度看没有意义,除了HpαR之外的所有情况，肺炎患者群的相关蛋白质的浓度与肺癌患者群的浓度相比大约高2倍以上，而且从统计学的角度看，两个群之间具有明显的差异(p＜0.0001) (利用Pα抗体的测定值增加倍数: 2.45,VQ:3.9, MHα:3.06, MHβ:2.3,VR:1,38)。
4-2.ROC曲线(curve)分析
以正常群与肺炎患者群的血清为对象，对利用各种抗体(VR,VQ, Pα, MHα及MHβ)获得的ELISA测定值进行ROC曲线分析，分别求出其AUC值、敏感度(sensitivity)及筛选度(specificity),其结果见表3。
[表3]
如表3所示,与表2的结果比较，只是在利用VR抗体测定HpαR的情况下，肺炎群分析结果与肺癌群结果相比，其AUC、敏感度及筛选度指标值才不佳,上述结果表明,随肺癌发展导致HpαR蛋白质浓度的增加并非由肺炎的炎症机理引发的现象。即,当利用VR抗体测定时，带有结合珠蛋白α链蛋白质内C-末端精氨酸的HpαR变体浓度增加像其它情况一样，与单纯由结合珠蛋白浓度增加而导致的结果相比，反而是由肺癌发生而引发的现象。因此,肺癌患者血液中HpαR浓度增加与其它的情况不同，除了是由Hp蛋白质本身增加而引发的之外,肺癌患者血液中HpαR浓度增加的主要原因也可能是由与肺癌发病及发展相关的所有Hp蛋白质内HpαR比率增加而引发的。
实施例5. 作为HpαR及HpαQ 变体的肺癌标记进行互补性实验
为了使VR与VQ抗体的蛋白质之合维持在1/128,000(各抗体的非饱和状态)，通过ELISA方法利用使两种抗体的成份比率发生变化的抗体混合物同时测定正常群与肺癌群血液中相关抗原蛋白质量,并对其测定值进行ROC 曲线分析，导出显示癌症患者判别概率的AUC值,其结果见图6。
如图6所示,与单独使用各抗体的情况(VR100及VQ100)相比，对于含有等量两种抗体的抗体混合物(VR50VQ50)而言，其AUC指标值分别增加约30%。这一结果表明，当使用上述混合抗体时，肺癌辨别力明显提高，而且其作为HpαR及HpαQ的肺癌标记能够独立发挥作用。即，综合判断,肺癌判别力的明显提高是由肺癌发展而导致HpαR增加的机理与肺癌发病初期结合珠蛋白的合成增加而导致HpαQ增加的机理之间的联合效应引发的。
在上述说明过程中，列举实施例对本发明进行了说明。通过上述的说明内容，相关工作人员完全可以在不偏离本发明技术思想的范围内，进行多样的变更以及修改。因此，上述实施例仅为了从各方面对本发明进行示例说明，并不限定本发明的内容。
工业实用性
依据本发明的HpαR在肺癌患者血液中的浓度显著增高。因此,其可以对肺癌的诊断或预后进行早期预测,可以作为肺癌诊断用标记使用。

Claims (2)

1.一种含有与HpαR特异结合的抗体的非小细胞肺癌诊断用组合物，其特征在于：
所述抗体可特异性结合由CKLPECEAVCGKPKNPANPVQR的氨基酸序列构成的HpαR的C-末端肽。
2.一种包含权利要求1所述组合物的非小细胞肺癌诊断试剂盒。
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