CN105683195A

CN105683195A - 新的喹啉取代的化合物

Info

Publication number: CN105683195A
Application number: CN201480058192.XA
Authority: CN
Inventors: 宇野贵夫; 野野下克昌; 岛村整
Original assignee: Taiho Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Taiho Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2013-08-22
Filing date: 2014-08-22
Publication date: 2016-06-15
Anticipated expiration: 2034-08-22
Also published as: RU2689158C2; RU2016110096A; EP3037424A1; AU2014309788A1; PH12016500225B1; CA2922077C; US9650386B2; PT3037424T; DK3037424T3; TW201542547A; WO2015025936A1; CA2922077A1; KR20160043114A; SG11201600759XA; KR101906688B1; PH12016500225A1; US20160194332A1; MX370808B; JP6161705B2; EP3037424A4

Abstract

本发明要实现的目的是提供具有EGFR抑制作用和细胞生长抑制作用的新化合物，以及基于EGFR抑制作用可用于预防和/或治疗癌症的药物。本发明提供由下式(I)表示的化合物或其盐

Description

新的喹啉取代的化合物

相关申请的交叉引用

本申请要求2013年8月22日提交的日本专利申请第2013-172746号说明书(全部公开内容引入本说明书以供参考)的优先权。

技术领域

本发明涉及对表皮生长因子受体(EGFR)具有抑制作用的喹啉取代的化合物，以及包含该化合物作为活性成分的药物组合物。

背景技术

EGFR是受体型酪氨酸激酶，在正常组织中其在与作为配体的表皮生长因子(EGF)结合时发挥其生理功能，且有助于上皮组织中的生长、细胞凋亡抑制等(非专利文献(NPD)1)。

此外，EGFR是致癌基因之一，且在各种癌症类型例如头颈癌、乳腺癌、结肠直肠癌、食道癌、胰腺癌、肺癌、卵巢癌、肾癌、膀胱癌、皮肤癌和脑肿瘤中观察到EGFR基因的扩增及其蛋白的高表达或突变(非专利文献(NPD)2)。在日本和西方国家，每年每100,000人中约170～375人因癌症死亡，且癌症作为死亡原因排名靠前(非专利文献(NPD)3)。这之中，全世界每年因肺癌引起的死亡人数达到约1,400,000人，并且由于非小细胞肺癌占肺癌的80％或更高，存在开发其有效疗法的需要(非专利文献(NPD)4)。

近年来，逐渐识别出这些癌症的负责基因，并且EGFR基因突变也是其中之一且产生活性的突变EGFR蛋白质。活性突变EGFR蛋白质为例如在第746-750位的氨基酸缺失(EGFR(d746-750))、第858位从亮氨酸至精氨酸的氨基酸突变(EGFR(L858R))等。这样的突变在例如在日本的20-40％的非小细胞肺癌案例中，以及在西方国家的10-15％的非小细胞肺癌案例中报道过。由于具有这些突变的非小细胞肺癌对于吉非替尼(产品名称：Iressa(注册商标))和埃罗替尼(产品名称：Tarceva(注册商标))高度易感，其中吉非替尼和埃罗替尼是抑制EGFR激酶活性的化学药剂(EGFR抑制剂)，因此在日本和西方国家将这些化学药剂用作治疗剂。然而，癌症在从开始使用吉非替尼和埃罗替尼6-12个月后获得针对其的耐药性，治疗效果变差。因此，该获得性耐药成为治疗具有高度易感突变EGFR的非小细胞肺癌的严重问题。已显示出，约50％的获得性耐药是由于耐药性突变EGFR蛋白质(EGFR(d746-750/T790M)或EGFR(T790M/L858R))的出现，该耐药性突变EGFR蛋白质在EGFR基因中具有第二突变，引起第790位氨基酸从苏氨酸变成甲硫氨酸。开发有效针对具有该耐药性突变EGFR的非小细胞肺癌的治疗剂是重要任务(非专利文献(NPD)5)。

另一方面，皮肤异常和消化道病症被报道为目前在临床上用作治疗剂的EGFR抑制剂吉非替尼和埃罗替尼和处于临床试验中的EGFR抑制剂例如BIBW2992等的常见副作用。广泛认为，这些副作用是由于EGFR抑制剂不仅抑制非小细胞肺癌中表达的突变EGFR的活性，还抑制皮肤或消化道中表达的野生型EGFR(EGFR(WT))的活性(非专利文献(NPD)1)。从减少副作用的角度出发，认为优选的是针对正常组织中的EGFR(WT)具有较弱的抑制活性。

因此，期望可以通过施用当与针对第790位氨基酸突变为甲硫氨酸的耐药性突变EGFR的抑制活性相比，针对野生型EGFR的抑制活性更弱的化学试剂，抑制具有耐药性突变EGFR的非小细胞肺癌细胞的生长，施用剂量为对皮肤和消化道的副作用并不强烈地出现。预期这助于治疗癌症，且延长患者的生命和改善患者的QOL。此外，如果化学试剂针对野生型EGFR具有较弱抑制活性，但针对耐药性突变EGFR、还针对高度易感突变EGFR例如EGFR(d746-750)和EGFR(L858R)等(它们对吉非替尼和埃罗替尼高度易感)都具有较强抑制活性，则预期可以以对皮肤或消化道的副作用不强烈出现的施用剂量抑制表达高度易感突变EGFR或耐药性突变EGFR的非小细胞肺癌细胞的生长，或预期可以降低耐药性突变EGFR作为获得性耐药性在表达高度易感突变EGFR的非小细胞肺癌中呈现的频率。预期这有助于治疗癌症，且延长患者的生命和改善患者的QOL。另外，由于高度易感突变EGFR和耐药性突变EGFR的表达可以在实际治疗场景中作为分层指标用于实现患者的选择，因此从伦理观出发它们大大有利。

作为具有与本发明化合物类似结构的化合物，已知N-(3-(4-氨基-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-5-基)苯基)苯甲酰胺衍生物(专利文献(PTD)1)。尽管专利文献1描述了使用酰胺化合物来治疗以B-RAF激酶为特征的疾病，但该文献并没公开证实激酶抑制活性的具体测试和其结果，且这样的活性并未得到确认。

引用列表

专利文献

PTD1：国际公开第WO2006/102079号小册子

非专利文献

NPD1：NatureRev.Cancer,vol.6,pp803-811(2006)

NPD2：J.Clin.Oncol.,vol.19,32s-40s(2001)

NPD3：MinistryofInternalAffairsandCommunicationsStatisticsBureauhomepage/statisticaldata/worldstatistics“WorldStatistics2011”

NPD4：LungCancer,vol.69,pp1-12(2010)

NPD5：NatureRev.Cancer,vol.10,pp760-774(2010)

发明内容

技术问题

如上所述，尽管期望EGFR抑制剂在癌症治疗中有效，但目前在临床中效果尚不足。

因此，本发明的目的是提供一种强烈抑制EGFR的新化合物或其盐。本发明的另一目的是提供：抑制突变EGFR例如EGFR(d746-750)、EGFR(L858R)、EGFR(d746-750/T790M)、和EGFR(T790M/L858R)，但不抑制EGFR(WT)的新化合物；或其盐。

问题的解决方案

本发明的发明人已进行了深入研究以实现上述目的。结果，他们发现本发明的一组喹啉取代的化合物对EGFR具有优异的抑制活性且具有抑制癌细胞生长的作用，并且可用作癌症治疗药物。本发明的发明人因而实现了本发明。

因此，本发明提供以下项。

第1项.一种由下式(I)表示的化合物或其盐：

其中基团

是(1)由式A1表示的基团：

(在式A1中，B是由表示的基团，

[R₁是氢原子或C1-C6烷基；且R₂是由表示的基团，

其中R₃、R₄和R₅相同或不同，并且各自表示氢原子、卤原子、C1-C6烷基、C6-C12芳基、C4-C9杂芳基、可以被C1-C6烷基取代的氨甲基、或1-哌啶子基甲基，

或由表示的基团，

其中R₆表示氢原子或C1-C6烷基]，

R₇和R₈相同或不同，并且各自表示氢原子或C1-C6烷基；m是0或1；且n是1或2)；

(2)由式A2表示的基团：

(在式A2中，B和n如式A1中所定义；且R₉是氢原子或C1-C6烷基)；或

(3)由式A3表示的基团：

(在式A3中，B、m和n如式A1中所定义；且R₁₀是C1-C6烷基)。

第2项.根据第1项所述的化合物或其盐，其中R₂是由表示的基团，

其中R₃、R₄和R₅相同或不同，并且各自表示氢原子、卤原子、C1-C6烷基、可以被C1-C6烷基取代的氨甲基、或1-哌啶子基甲基，或由表示的基团，

其中R₆表示氢原子或C1-C6烷基。

第3项.根据第1或第2项所述的化合物或其盐，其中R₂是由表示的基团，

其中R₃、R₄和R₅相同或不同，并且各自表示氢原子、卤原子、可以被甲基取代的氨甲基、或1-哌啶子基甲基。

第4项.根据第1-3项中任一项所述的化合物或其盐，其中基团

是(1)由式A1表示的基团：

(在式A1中，B是由表示的基团，

其中R₁是氢原子或C1-C6烷基；且R₂是由表示的基团，

其中R₃、R₄和R₅相同或不同，并且各自表示氢原子或卤原子，

R₇和R₈相同或不同，并且各自表示氢原子或C1-C6烷基；m是0或1；且n是1)；或

(2)由式A2表示的基团：

(在A2中，B和n如式A1中所定义；且R₉是氢原子或C1-C6烷基)。

第5项.根据第1-4项中任一项所述的化合物或其盐，其中基团

是(1)由式A1表示的基团：

(在式A1中，B是由表示的基团，

其中R₁是氢原子；且R₂是由表示的基团，

其中R₃、R₄和R₅各自表示氢原子，

R₇和R₈各自表示氢原子；m是0；且n是1)；或

(2)由式A2表示的基团：

(在式A2中，B和n如式A1中所定义；且R₉表示C1-C6烷基)。

第6项.根据第1-5项中任一项所述的化合物或其盐，其中所述化合物选自以下化合物：

(S)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)丙烯酰胺(化合物1)；

(S)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)甲基丙烯酰胺(化合物2)；

(S)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)丁-2-烯酰胺(E和Z的混合物)(化合物3)；

(S,E)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺(化合物4)；

(S,E)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)-3-氯丙烯酰胺(化合物5)；

(S,Z)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)-3-氯丙烯酰胺(化合物6)；

(S,E)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)-4-(哌啶-1-基)丁-2-烯酰胺(化合物7)；

(S)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)丙炔酰胺(化合物8)；

(S)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)丁-2-炔酰胺(化合物9)；

(S,E)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)-4-(二乙基氨基)丁-2-烯酰胺(化合物10)；

(S,E)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)-4-(乙基(甲基)氨基)丁-2-烯酰胺(化合物11)；

(S,E)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)-4-(异丙基(甲基)氨基)丁-2-烯酰胺(化合物12)；

(R)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-7-基)丙烯酰胺(化合物13)；

(S)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8,9-二氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺(化合物14)；

(S)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺(化合物15)；

(R)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8,9-二氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺(化合物16)；

(R)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺(化合物17)；

(S)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8,9,10-四氢-6H-嘧啶并[5’,4’:4,5]吡咯并[1,2-a]氮杂-8-基)丙烯酰胺(化合物18)；

(S,E)-N-(4-氨基-6-亚乙基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺(化合物19)；

(S)-N-(4-氨基-6-异丙基-5-(喹啉-3-基)-8,9-二氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺(化合物20A)；

(S)-N-(4-氨基-6-(丙-2-亚基)-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺(化合物20B)；

(R)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)-N-甲基丙烯酰胺(化合物21)；

(R)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)-N-甲基丙烯酰胺(化合物22)；

(R)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8,9-二氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)-N-甲基丙烯酰胺(化合物23)；

N-((7S)-4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)丙烯酰胺(化合物24)；

(R)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)丙烯酰胺(化合物25)；

(S)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)-N-甲基丙烯酰胺(化合物26)；

(S)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-8,9-二氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺(化合物27)；

(R)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-9,10-二氢-8H-嘧啶并[5’,4’:4,5]吡咯并[1,2-a]氮杂-8-基)丙烯酰胺(化合物28)；

N-((6R*,8S)-4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺(化合物29A)；和

N-((6S*,8S)-4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺(化合物29B)。

第7项.根据第1-5项中任一项所述的化合物或其盐，其中所述化合物选自以下化合物：

(R)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8,9-二氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)-N-甲基丙烯酰胺(化合物23)；和

(R)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-9,10-二氢-8H-嘧啶并[5’,4’:4,5]吡咯并[1,2-a]氮杂-8-基)丙烯酰胺(化合物28)。

第8项.(S)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)丙烯酰胺(化合物1)或其盐。

第9项.(S)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8,9-二氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺(化合物14)或其盐。

第10项.一种EGFR抑制剂，包括作为活性成分的根据第1-9项中任一项所述的化合物或其盐。

第11项.一种药物组合物，包括根据第1-9项中任一项所述的化合物或其盐。

第12项.一种抗肿瘤剂，包括作为活性成分的根据第1-9项中任一项所述的化合物或其盐。

第13项.一种用于治疗或预防癌症的方法，所述方法包括以有效治疗或预防癌症的剂量向哺乳动物施用根据第1-9项中任一项所述的化合物或其盐的步骤。

第14项.根据第1-9项中任一项所述的化合物或其盐在制造抗肿瘤剂中的用途。

第15项.根据第1-9项中任一项所述的化合物或其盐，其用于预防或治疗癌症。

本发明的有益效果

根据本发明，提供可用作EGFR抑制剂的由上式(I)表示的新化合物或其盐。

已阐明本发明的化合物或其盐具有优异的EGFR抑制活性和癌细胞株生长抑制作用。另外，由于针对EGFR的优异选择性，本发明的化合物或其盐有利地几乎不具有副作用。因此，本发明的化合物或其盐可用作用于预防和/或治疗癌症的试剂。

具体实施方式

根据本发明的由式(I)表示的化合物是具有喹啉结构和α,β-不饱和酰胺结构的喹啉取代的化合物，且是在上述现有技术文献等中未公开过的新化合物。

具体地，PTD1中具体公开的化合物是N-(3-(4-氨基-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-5-基)苯基)苯甲酰胺衍生物。本发明的化合物与PTD1中公开的化合物的不同之处在于本发明的化合物具有喹啉结构和α,β-不饱和酰胺结构。

在本发明的说明书中，“卤原子”的例子包括氟、氯、溴和碘。

在本发明的说明书中，术语“C1-C6烷基”是指具有1～6个碳原子的线性或支链烷基。其具体例子包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基和己基。

在本发明的说明书中，术语“C6-C12芳基”是指具有6～12个碳原子的芳基。其具体例子包括苯基、萘基和联苯基。

在本发明的说明书中，术语“C4-C9杂芳基”是指含有1～3个选自氮、氧和硫原子的相同或不同杂原子的单环或双环C4-C9杂芳基；且优选为含有1～3个氮原子的单环或双环C4-C9杂芳基。其具体例子包括噻吩基、呋喃基、吡咯基、***基、咪唑基、吡唑基、异噻唑基、异噁唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、异苯并呋喃基、吲嗪基、异吲哚基、吲哚基、吲唑基、喹啉基、异喹啉基、酞嗪基、和萘啶基(naphthyridinyl)。

在本发明的说明书中，术语“可以被C1-C6烷基取代的氨甲基”是指氨基部分的至少一个氢原子可以被具有1～6个碳原子的线性或支链烷基取代的氨甲基。其具体例子包括氨甲基、N-甲基氨甲基、N,N-二甲基氨甲基、N-乙基氨甲基、N,N-二乙基氨甲基、N-甲基N-乙基氨甲基、N-甲基N-异丙基氨甲基、N-丙基氨甲基、N-丁基氨甲基、N-戊基氨甲基、和N-己基氨甲基。

在上式(I)中，由表示的部分是(1)由式A1表示的基团：

(在式A1中，B、m、n、R₇、和R₈如上文所定义)；

(2)由式A2表示的基团：

(在式A2中，B、n和R₉如上文所定义)；或

(3)由式A3表示的基团：

(在式A3中，B、m、n、R₇、和R₈如上文所定义)，且优选是

(1)由式A1表示的基团：

(在该式中，B、m、n、R₇、和R₈如上文所定义)，或

(2)由式A2表示的基团：

(在该式中，B、n和R₉如上文所定义)。

式(I)中的m优选为0。

式(I)中的n优选为1。

式(I)中的R₁优选为氢原子。

式(I)中的R₂优选为由表示的基团，其中R₃、R₄和R₅如上文所定义。

式(I)中的R₃、R₄和R₅优选为相同或不同，且各自表示氢原子、卤原子、C1-C6烷基、可以被C1-C6烷基取代的氨甲基、或1-哌啶子基甲基；更优选地，R₃、R₄和R₅相同或不同，并且各自表示氢原子、卤原子、可以被甲基取代的氨甲基、或1-哌啶子基甲基；进一步优选地，R₃、R₄和R₅相同或不同，并且各自表示氢原子或卤原子，特别优选为氢原子。

式(I)中的R₇和R₈优选为相同或不同，且各自表示氢原子或C1-C6烷基(优选C1-C3烷基，更优选甲基)；进一步优选地，R₇和R₈中的至少一者是氢原子；特别优选地，R₇和R₈均为氢原子。

式(I)中的R₉优选为C1-C6烷基，更优选为C1-C3烷基，进一步优选为甲基。

本发明的化合物或其盐优选针对EGFR(T790M/L858R)具有强的酶抑制活性；更优选地，可以使50％的酶受到抑制的化合物浓度为2nM或更低。另外，本发明的化合物或其盐优选针对EGFR(d746-750/T790M)具有强的酶抑制活性；化合物的50％抑制浓度也优选为2nM或更低。另外，本发明的化合物或其盐优选针对携带EGFR(T790M/L858R)的肿瘤细胞具有强的细胞生长抑制作用；化合物更优选具有200nM或更低的50％抑制浓度，进一步优选为100nM或更低，特别优选为40nM或更低。

随后说明本发明的化合物的制造方法。

本发明的化合物(I)可以例如通过以下制造方法、实施例中的制造方法等制备。然而，本发明化合物的制造方法不限于这些反应例。

制备方法1

其中P₁是氨基保护基；L₁是离去基团；且R₂、R₇、R₈、m、和n如上文所定义。

步骤a

在该步骤中，通过Mitsunobu反应使用由式(II)和(III)表示的化合物制造由式(IV)表示的化合物。

在由式(II)表示的化合物中由L₁表示的离去基团的例子包括溴或碘原子。由式(II)表示的化合物可以是市售产品，或者可以通过已知方法制备。在式(III)中由P₁表示的氨基保护基的例子包括叔丁氧羰基和苯甲酰基。由式(III)表示的化合物可以是市售产品，或者可以通过已知方法制备。相对于每摩尔由式(II)表示的化合物，由式(III)表示的化合物的使用量可以为1-10摩尔，且优选1-5摩尔。

Mitsunobu反应可以根据已知方法(例如，在Synthesis,p.1,1981中公开的方法)或相似方法进行。

偶氮二羧酸酯的例子包括偶氮二甲酸二乙酯和偶氮二甲酸二异丙酯。相对于每摩尔由式(II)表示的化合物，这样的偶氮二羧酸酯的使用量可以为1～10摩尔，且优选1～5摩尔。

作为膦化合物，可以使用三苯基膦、三丁基膦等。相对于每摩尔由式(II)表示的化合物，膦化合物的使用量可以为1～10摩尔，且优选1～5摩尔。

作为溶剂，可以单独使用四氢呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、1,4-二噁烷、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、二甲亚砜、N-甲基吡咯烷-2-酮等或将其作为混合物使用。反应时间是0.1～100小时，且优选0.1～24小时。反应温度是0℃至溶剂的沸点温度，且优选0℃～100℃。

由此得到的由式(IV)表示的化合物可以在通过已知的分离和纯化方式例如浓缩、真空浓缩、结晶、溶剂萃取、再沉淀和层析进行分离或纯化之后或者不经分离或纯化进行后续步骤。

步骤b

在该步骤中，由式(IV)表示的化合物与氨或其盐反应，以制备由式(V)表示的化合物。

该步骤中使用的氨或其盐的量相对于每摩尔由式(IV)表示的化合物通常是等摩尔量的至过摩尔量的。

可以使用任何不会不利地影响反应的反应溶剂。可用的反应溶剂的例子包括水、甲醇、乙醇、异丙醇、叔丁醇、四氢呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、1,4-二噁烷、N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷-2-酮、二甲亚砜、及它们的混合物。

反应温度通常为0℃～200℃，优选为室温至150℃。反应时间通常为5分钟至7天，且优选30分钟至24小时。

由此得到的由式(V)表示的化合物可以在通过已知的分离和纯化方式例如浓缩、真空浓缩、结晶、溶剂萃取、再沉淀和层析进行分离和纯化之后或者不经分离和纯化进行后续步骤。

步骤c

在该步骤中，由式(V)表示的化合物与3-喹啉硼酸或3-喹啉硼酸酯进行偶联反应，以制备由式(VI)表示的化合物。

该步骤可以根据通常已知的方法(例如ChemicalReviews,Vol.95,p.2457,1995)进行。该步骤可以在存在过渡金属催化剂和碱的情况下在不会不利影响反应的溶剂中进行。

相对于每摩尔由式(V)表示的化合物，3-喹啉硼酸或3-喹啉硼酸酯的使用量可以是1～10摩尔，且优选1～3摩尔。

过渡金属催化剂的例子包括钯催化剂(例如乙酸钯、氯化钯、四(三苯基膦)钯、1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)、和三(二亚苄基丙酮)二钯(0))、镍催化剂(例如氯化镍)等。如果需要，可以添加配体(例如，三苯基膦、三叔丁基膦、或2-二环己基膦基-2’,4’,6’-三异丙基联苯)，且可以使用金属氧化物(例如铜氧化物或银氧化物)作为助催化剂。过渡金属催化剂的使用量可以根据催化剂的类型变化。相对于每摩尔由式(V)表示的化合物，过渡金属催化剂的使用量通常为0.0001～1摩尔，且优选为0.01～0.5摩尔。相对于每摩尔由式(V)表示的化合物，配体的使用量通常为0.0001～4摩尔，且优选为0.01～2摩尔。相对于每摩尔由式(V)表示的化合物，助催化剂的使用量通常为0.0001～4摩尔，且优选为0.01～2摩尔。

可用的碱的例子包括有机胺(例如三甲胺、三乙胺、二异丙基乙胺、N-甲基吗啉、1,8-二氮杂双环[5,4,0]十一碳-7-烯、吡啶、和N,N-二甲基苯胺)，碱金属盐(例如，碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、磷酸钠、磷酸钾、氢氧化钠、和氢氧化钾)，金属氢化物(例如，氢化钾和氢化钠)，碱金属醇盐(例如，甲醇钠、乙醇钠、叔丁醇钠、和叔丁醇钾)，碱金属二硅叠氮化物(disilazides)(例如，二硅叠氮化锂、二硅叠氮化钠和二硅叠氮化钾)，等等。在这之中，优选碱金属盐例如碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、磷酸钠、和磷酸钾；碱金属醇盐例如叔丁醇钠和叔丁醇钾；以及有机胺例如三乙胺和二异丙基乙胺。相对于每摩尔由式(V)表示的化合物，碱的使用量通常为0.1～10摩尔，且优选为1～5摩尔。

可以使用任何不会不利地影响反应的溶剂。可用的溶剂的例子包括烃(例如，苯、甲苯、和二甲苯)、卤代烃(例如，氯仿和1,2-二氯乙烷)、腈(例如，乙腈)、醚(例如，1,2-二甲氧基乙烷、四氢呋喃、和1,4-二噁烷)、醇(例如，甲醇和乙醇)、非质子极性溶剂(例如，N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜和六甲基磷酰胺)、水以及它们的混合溶剂。反应时间是0.1～100小时，且优选为0.5～24小时。反应温度为0℃至溶剂的沸点温度，且优选为20～150℃。

由此获得的由式(VI)表示的化合物可以在通过已知的分离和纯化方式例如浓缩、真空浓缩、结晶、溶剂萃取、再沉淀和层析进行分离和纯化之后或者不经分离和纯化进行后续步骤。

步骤d

在该步骤中，由式(VI)表示的化合物通过与N-溴代琥珀酰亚胺进行反应而溴化，以产生由式(VII)表示的化合物。

卤化可以通过WO2006/102079中公开的方法或通过类似的方法进行。

相对于每摩尔由式(VI)表示的化合物，在该步骤中使用的N-溴代琥珀酰亚胺的量为0.5～2.0摩尔，且优选为0.9～1.2摩尔。

可以使用任何不会不利地影响反应的溶剂。例如，优选可以使用四氢呋喃、1,4-二噁烷、N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷-2-酮、或它们的混合溶剂。

反应温度通常为-20～50℃，且优选为0℃至室温。反应时间通常为1分钟至2天，且优选为5分钟至12小时。

由此获得的由式(VI)表示的化合物可以在通过已知的分离和纯化方式例如浓缩、真空浓缩、结晶、溶剂萃取、再沉淀和层析进行分离或纯化之后或者不经分离或纯化进行后续步骤。

步骤e

该步骤使由式(VII)表示的化合物进行分子内环化反应，以产生由式(VIII)表示的化合物。

该步骤可以根据通常已知的方法(例如ChemicalReviews,Vol.103,p.2945,2003中公开的方法)进行。

过渡金属催化剂的例子包括二价钯催化剂(例如乙酸钯、氯化钯、1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)等)，和零价钯催化剂(例如，四(三苯基膦)钯、三(二亚苄基丙酮)二钯等)。如果需要的话，可以添加配体(例如，三苯基膦、三叔丁基膦等)。所使用的过渡金属催化剂的量可根据催化剂的类型而变化。相对于每摩尔由式(VII)表示的化合物，过渡金属催化剂的使用量通常为0.0001～1摩尔，且优选为0.01～0.5摩尔。相对于每摩尔由式(VII)表示的化合物，配体的使用量通常为0.0001～4摩尔，且优选为0.01～2摩尔。

可用的碱的例子包括无机碱例如碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铯、氢化钠、或氢化钾。相对于每摩尔由式(VII)表示的化合物，这样的碱的使用量可以为1～100摩尔，且优选为2～20摩尔。

可以使用任何不会不利地影响反应的溶剂。可用的溶剂的例子包括烃(例如，苯、甲苯、和二甲苯)、醚(例如，1,2-二甲氧基乙烷、四氢呋喃、和1,4-二噁烷)、非质子极性溶剂(例如，N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜和六甲基磷酰胺)、水以及它们的混合溶剂。反应时间为0.1～100小时，且优选为0.5～24小时。反应温度为-20℃至溶剂的沸点温度，且优选为0℃～150℃。

由此获得的由式(VIII)表示的化合物可以在通过已知的分离和纯化方式例如浓缩、真空浓缩、结晶、溶剂萃取、再沉淀和层析进行分离或纯化之后或者不经分离或纯化进行后续步骤。

步骤f

在该步骤中，对由式(VIII)表示的化合物的受保护氨基进行去保护，以产生由式(IX)表示的化合物。

去保护可以通过已知方法例如在ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis,T.W.Greene,JohnWiley&Sons(1981)中描述的方法来进行，或通过类似方法来进行。

当使用叔丁氧羰基作为保护基时，使用盐酸、硫酸、甲磺酸、三氟乙酸等作为去保护试剂。相对于每摩尔化合物(VIII)，试剂的使用量优选为1～100摩尔。

可以使用任何不会不利地影响反应的溶剂。可用的溶剂的例子包括水、甲醇、乙醇、二氯甲烷、氯仿等以及它们的混合溶剂。反应时间为0.1～100小时，且优选为0.5～24小时。反应温度为0℃至溶剂的沸点温度，且优选为0～50℃。

由此获得的由式(IX)表示的化合物可以在通过已知的分离和纯化方式例如浓缩、真空浓缩、结晶、溶剂萃取、再沉淀和层析进行分离和纯化之后或者不经分离或纯化进行后续步骤。

步骤g

在该步骤中，用α,β-不饱和羧酸或者α,β-不饱和酰基氯或酰基溴使由式(IX)表示的化合物酰胺化，以产生本发明的由式(I-1)表示的化合物。

当使用羧酸作为酰胺化试剂时，在适当的缩合剂的存在下，相对于每摩尔由式(IX)表示的化合物，羧酸的使用量可以为0.5～10摩尔，优选为1～3摩尔。羧酸可以是市售产品，或可以根据已知方法制造。

可以使用任何不会不利地影响反应的反应溶剂。可用溶剂的例子包括甲苯、苯、二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、1,4-二噁烷、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷-2-酮、二甲亚砜以及它们的混合溶剂。反应温度通常为-78～200℃，且优选为0～50℃。反应时间通常为5分钟至3天，且优选为5分钟至10小时。

缩合剂的例子包括二苯基磷酰基叠氮化物、N,N’-二环己基碳二亚胺、苯并***-1-基氧基-三二甲基氨基鏻盐、4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺和1-羟基苯并***的组合、2-氯-1,3-二甲基咪唑鎓氯化物、O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基六脲鎓六氟磷酸盐(O-(7-azabenzotriazo-1-yl)-N,N,N’,N’-tetramethylhexauroniumhexafluorophosphate)等。

如果需要的话，可以任选地添加碱以用于反应。可用的碱的例子包括有机碱例如三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶、卢剔啶、可力丁、4-(N,N-二甲基氨基)吡啶、叔丁酸钾、叔丁酸钠、甲醇钠、乙醇钠、六甲基二硅叠氮化锂、六甲基二硅叠氮化钠、六甲基二硅叠氮化钾和丁基锂；和无机碱，例如碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、氢氧化钠、和氢化钠。相对于每摩尔由式(IX)表示的化合物，这样的碱的添加量可以为1～100摩尔，且优选为1～10摩尔。

当使用酰基氯或酰基溴作为酰胺化试剂时，相对于每摩尔由式(IX)表示的化合物，酰基卤的使用量为0.5～5摩尔，且优选为0.9～1.1摩尔。酰基卤可以是市售产品，或可以根据已知方法制造。

可以使用任何不会不利地影响反应的溶剂。其例子包括甲苯、苯、二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、1,4-二噁烷、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷-2-酮、乙腈、水、及其混合溶剂。反应温度通常为-78～200℃，且优选为0～50℃。反应时间通常为5分钟至3天，且优选为5分钟至10小时。

如果需要的话，可以添加碱以用于反应。可用的碱的例子包括有机碱例如三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶、卢剔啶、可力丁、4-(N,N-二甲基氨基)吡啶、叔丁酸钾、叔丁酸钠、甲醇钠、乙醇钠、六甲基二硅叠氮化锂、六甲基二硅叠氮化钠、六甲基二硅叠氮化钾和丁基锂；和无机碱，例如碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、氢氧化钠、和氢化钠。相对于每摩尔由式(IX)表示的化合物，这样的碱的添加量可以为1～100摩尔，且优选为1～20摩尔。由此获得的由式(I-1)表示的化合物可以通过已知的分离和纯化方式例如浓缩、真空浓缩、结晶、溶剂萃取、再沉淀和层析进行分离和纯化。

制造方法2

其中P₁表示氨基保护基；且R₂、R₇、R₈、R₉和n如上文所定义。

步骤h

在该步骤中，对由式(X)表示的化合物的受保护氨基进行去保护，以产生由式(XI)表示的化合物。

去保护可以通过已知方法例如ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis,T.W.Greene,JohnWiley&Sons(1981)中描述的方法来进行，或通过类似方法来进行。

当使用叔丁氧羰基作为保护基时，使用盐酸、硫酸、甲磺酸、三氟乙酸等作为去保护试剂。相对于每摩尔化合物(X)，试剂的使用量优选为1～100摩尔。

可以使用任何不会不利地影响反应的溶剂。可用的溶剂的例子包括水、甲醇、乙醇、二氯甲烷、氯仿、及其混合溶剂。反应时间为0.1～100小时，且优选为0.5～24小时。反应温度为0℃至溶剂的沸点温度，且优选为50℃至溶剂的沸点温度。

由此获得的由式(XXI)表示的化合物可以在通过已知的分离和纯化方式例如浓缩、真空浓缩、结晶、溶剂萃取、再沉淀和层析进行分离和纯化之后或者不经分离或纯化进行后续步骤。

步骤i

该步骤可以以与步骤g相同的方式进行。

制造方法3

其中P₁表示氨基保护基；L₁和L₂表示离去基团；且R₁、R₂、R₇、R₈、m、和n如上文所定义。

步骤j

在该步骤中，在碱的存在下使用由式(IV)和(XII)表示的化合物通过烷基化反应来制造由式(XIII)表示的化合物。

在由式(XII)表示的化合物中，由L₂表示的离去基团的例子包括溴原子、碘原子、甲磺酸酯、对甲苯磺酸酯等。由式(XII)表示的化合物可以是市售产品，或者可以通过已知方法制备。相对于每摩尔由式(IV)表示的化合物，由式(XII)表示的化合物的使用量可以为1～10摩尔，且优选为1～5摩尔。可用的碱的例子包括有机胺(例如三甲胺、三乙胺、二异丙基乙胺、N-甲基吗啉、1,8-二氮杂双环[5,4,0]十一碳-7-烯、吡啶、和N,N-二甲基苯胺)，碱金属盐(例如，碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、磷酸钠、磷酸钾、氢氧化钠、和氢氧化钾)，金属氢化物(例如，氢化钾和氢化钠)，碱金属醇盐(例如，甲醇钠、乙醇钠、叔丁醇钠、和叔丁醇钾)，碱金属二硅叠氮化物(例如，二硅叠氮化锂、二硅叠氮化钠和二硅叠氮化钾)，等等。其中，优选碱金属盐例如碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、磷酸钠、和磷酸钾；和金属氢化物例如氢化钠；碱金属醇盐例如叔丁醇钠和叔丁醇钾。相对于每摩尔由式(V)表示的化合物，碱的使用量通常为0.1～10摩尔，且优选为1～5摩尔。

作为溶剂，可以单独使用四氢呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、1,4-二噁烷、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、二甲亚砜、N-甲基吡咯烷-2-酮等，或使用其混合物。反应时间为0.1～100小时，且优选为0.5～24小时。反应温度为0℃至溶剂的沸点温度，且优选为20℃～150℃。

由此获得的由式(XIII)表示的化合物可以在通过已知的分离和纯化方式例如浓缩、真空浓缩、结晶、溶剂萃取、再沉淀和层析进行分离和纯化之后或者不经分离或纯化进行后续步骤。

步骤k

该步骤可以以与步骤b相同的方式进行。

步骤l

该步骤可以以与步骤c相同的方式进行。

步骤m

该步骤可以以与步骤d相同的方式进行。

步骤n

该步骤可以以与步骤e相同的方式进行。

步骤o

该步骤可以以与步骤f相同的方式进行。

步骤p

该步骤可以以与步骤g相同的方式进行。

制造方法4

其中P₁表示氨基保护基；且R₁、R₂、R₇、R₈、R₉、和n如上文所定义。

步骤q

该步骤可以以与步骤h相同的方式进行。

步骤r

该步骤可以以与步骤g相同的方式进行。

制造方法5

其中P₁表示氨基保护基；且R₁、R₂、R₇、R₈、R₁₀、m和n如上文所义。

步骤s

在该步骤中，在催化剂的存在下，针对由式(XVII)表示的化合物，通过氢化制造由式(XX)表示的化合物。

催化剂的例子包括钯-碳催化剂、氢氧化钯-碳催化剂、和兰尼(Raney)镍催化剂。相对于每摩尔由式(XVII)表示的化合物，催化剂的使用量可以为0.01摩尔至过量，优选为0.1～10摩尔。

氢化可以在1atm～100atm、优选1atm～10atm下进行。作为溶剂，可以单独使用甲醇、乙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、1,4-二噁烷、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷-2-酮、水等，或其混合物。反应时间为0.1～100小时，且优选择为0.5～48小时。反应温度范围为室温至溶剂的沸点温度，优选室温至100℃。

由此获得的由式(XX)表示的化合物可以在通过已知的分离和纯化方式例如浓缩、真空浓缩、结晶、溶剂萃取、再沉淀和层析进行分离和纯化之后或者不经分离或纯化进行后续步骤。

步骤t

该步骤可以以与步骤f相同的方式进行。

步骤u

该步骤可以以与步骤g相同的方式进行。

制造方法6

其中P₁表示氨基保护基；且R₂和n如上文所定义。

步骤v

在该步骤中，使有机硼烷试剂作用于由式(XXII)表示的化合物，以在体系中制备烷基硼烷中间体，然后在过渡金属催化剂和碱的存在下制造由式(XXIII)表示的化合物。

该步骤可以根据通常已知的方法(例如WO2006/102079)进行。

有机硼烷试剂的例子包括9-BBN(9-硼二环[3.3.1]-壬烷)、9-BBN(9-硼二环[3.3.1]-壬烷)二聚体、二异戊基硼烷(disiamylborane)(双(1,2-二甲基丙基)硼烷)、叔己基硼烷(thexylborane)(1,1,2-三甲基丙基)硼烷)等。有机硼烷试剂优选为9-BBN(9-硼二环[3.3.1]-壬烷)或9-BBN(9-硼二环[3.3.1]-壬烷)二聚体，且特别优选为9-BBN(9-硼二环[3.3.1]-壬烷)。有机硼烷试剂的使用量并不特别限定，只要可以产生烷基硼烷中间体即可。相对于每摩尔由式(XXII)表示的化合物，有机硼烷试剂的使用量可以为1～20摩尔；从促进反应进程的角度而言，有机硼烷试剂的量优选为6～10摩尔。

作为过渡金属催化剂，可以使用例如二价钯催化剂(例如乙酸钯、氯化钯、和1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II))。如果需要的话，可以使用配体(例如三苯基膦和三叔丁基膦)。过渡金属催化剂的使用量可以根据催化剂的类型而变化。相对于每摩尔由式(XXII)表示的化合物，过渡金属催化剂的使用量通常为0.0001～1摩尔，且优选为0.01～0.5摩尔。相对于每摩尔由式(XXII)表示的化合物，配体的使用量通常为0.0001～4摩尔，且优选为0.01～2摩尔。

或者，例如，可以使用零价钯催化剂。零价钯催化剂的例子包括四(三苯基膦)钯、三(二亚苄基丙酮)二钯、钯碳等。优选四(三苯基膦)钯或三(二亚苄基丙酮)二钯，且特别优选四(三苯基膦)钯。零价钯催化剂的使用量并不特别限定，只要可以进行分子内环化反应即可，并且该使用量可以根据催化剂的类型而变化。相对于每摩尔由式(XXII)表示的化合物，零价钯催化剂的使用量可以为0.0001～1摩尔，且优选为0.01～0.5摩尔。

如果需要的话，可以与零价钯催化剂一起添加配体。这样的配体的例子包括三苯基膦、1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁、三叔丁基膦、三环己基膦、2-二环己基膦基-2’,6’-二甲氧基联苯基、2-二环己基膦基-2’,4’,6’-三异丙基联苯基、2-(二叔丁基膦基)联苯基、2-二环己基膦基-2’-(N,N-二甲基氨基)联苯基、4,5’-双(二苯基膦基)-9,9’-二甲基氧杂蒽等。当使用三(二亚苄基丙酮)二钯作为零价钯催化剂时，可以添加三苯基膦作为配体。配体的使用量并不特别限定，只要可以进行分子内环化反应即可。相对于每摩尔由式(XXII)表示的化合物，配体的使用量可以为0.0001～4摩尔，且优选为0.01～2摩尔。

碱的例子包括无机碱例如碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯和碱金属氢氧化物。优选碱金属氢氧化物。碱金属氢氧化物的例子包括氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、和氢氧化铯。优选使用氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、或氢氧化铯。特别优选氢氧化锂或氢氧化钠。碱的使用量并不特别限定，只要反应进行即可。相对于每摩尔由式(XXII)表示的化合物，碱的使用量可以为1～100摩尔，且优选为2～20摩尔。碱金属氢氧化物的使用形式可以为碱金属氢氧化物水溶液。

作为有机硼烷试剂、碱金属氢氧化物和零价钯催化剂的组合，优选的有机硼烷试剂、优选的碱金属氢氧化物和优选的零价钯催化剂的组合是优选的。特别优选的有机硼烷试剂、特别优选的碱金属氢氧化物和特别优选的零价钯催化剂的组合是特别优选的。

可以使用任何不会不利地影响反应的溶剂。其例子包括烃(例如，苯、甲苯、和二甲苯)、醚(例如，1,2-二甲氧基乙烷、四氢呋喃、和1,4-二噁烷)、非质子极性溶剂(例如，N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜和六甲基磷酰胺)、水及其混合物。优选使用1,2-二甲氧基乙烷或四氢呋喃。从有机硼烷试剂和生成的烷基硼烷中间体的稳定性角度而言，特别优选四氢呋喃。溶剂的使用量并不特别限定，只要反应进行即可。溶剂的使用量可以为由式(XXII)表示的化合物的重量的1～300倍，且优选为10～96倍。

反应时间并不特别限定，只要可以获得式(XXIII)的化合物即可。反应时间可以为0.1～100小时，且优选为0.5～24小时.

反应温度并不特别限定，只要最终可以获得由式(XXIII)表示的化合物即可。反应温度可以为-20℃至溶剂的沸点温度，且优选为0℃～150℃。在使用零价钯催化剂和碱金属氢氧化物水溶液的烷基硼烷中间体的分子内环化反应过程中，较低的反应温度倾向于引起副反应，这引起较低的收率。因此，温度优选为61℃或更高。

由此获得的由式(XXIII)表示的化合物可以在通过已知的分离和纯化方式例如浓缩、真空浓缩、结晶、溶剂萃取、再沉淀和层析进行分离和纯化之后或者不经分离或纯化进行后续步骤。

在该步骤中，可以确认在体系中生成烷基硼烷中间体。例如，可以使用LCMS谱作为确认方法。

步骤w

在该步骤中，通过使由式(XXIII)表示的化合物与二乙酸碘苯进行反应来制造由式(XXIV)表示的化合物。

相对于每摩尔由式(XXIII)表示的化合物，该步骤中二乙酸碘苯的使用量是1～10摩尔，优选1～2摩尔。

在上述反应中，如果需要的话，可以添加四丁基碘化铵。相对于每摩尔由式(XXIII)表示的化合物，四丁基碘化铵的添加量可以为0.01～10摩尔，优选为0.1～1摩尔。

可以使用任何不会不利地影响反应的溶剂。适当的反应溶剂的例子包括二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、乙酸及其混合溶剂。

反应温度通常为0℃至溶剂的沸点温度，且优选为0℃至室温。反应时间为0.1～100小时，且优选0.1～24小时。

由此获得的由式(XXIV)表示的化合物可以在通过已知的分离和纯化方式例如浓缩、真空浓缩、结晶、溶剂萃取、再沉淀和层析进行分离或纯化之后或者不经分离或纯化进行后续步骤。

步骤x

在该步骤中，对由式(XXIV)表示的化合物的受保护羟基进行去保护，以产生式(XXV)的化合物。

当对乙酰基进行去保护时，去保护试剂的例子包括氢氧化钠、氢氧化钾等。相对于每摩尔由式(XXIV)表示的化合物，该试剂的使用量优选为1～100摩尔。

可以使用任何不会不利地影响反应的溶剂。溶剂的例子包括水、甲醇、乙醇、四氢呋喃、及其混合溶剂。反应时间为0.1～100小时，且优选为0.5～24小时。反应温度为0℃至溶剂的沸点温度，且优选为0～50℃。

由此获得的由式(XXV)表示的化合物可以在通过已知的分离和纯化方式例如浓缩、真空浓缩、结晶、溶剂萃取、再沉淀和层析进行分离或纯化之后或者不经分离或纯化进行后续步骤。

步骤y

在该步骤中，通过使由式(XXV)表示的化合物进行消除反应来制造由式(XXVI)表示的化合物。

在消除反应中，使用例如对甲苯磺酸一水合物、10-樟脑磺酸等。相对于每摩尔由式(XXV)表示的化合物，该酸的使用量为0.1～100摩尔，优选1～10摩尔。

可以使用任何不会不利地影响反应的溶剂。溶剂的例子包括甲苯、二甲苯、及其混合溶剂。反应时间为0.1～100小时，且优选为0.5～24小时。反应温度范围为室温至溶剂的沸点温度。

由此获得的由式(XXVI)表示的化合物可以在通过已知的分离和纯化方式例如浓缩、真空浓缩、结晶、溶剂萃取、再沉淀和层析进行分离或纯化之后或者不经分离或纯化进行后续步骤。

步骤z

该步骤可以以与步骤g相似的方式进行。

在上述制造方法1～6中，对于具有活性质子的官能团例如氨基、亚氨基、羟基、羧基、羰基和酰胺基以及吲哚，可以使用受保护试剂，或者可以根据常见方法将保护基引入这样的官能团；之后，可以在各制造方法中在合适的步骤中移除保护基。

“氨基保护基或亚氨基保护基”并不特别限定，只要其具有保护功能即可。这样的保护基的例子包括芳烷基，例如苄基、对甲氧基苄基、3,4-二甲氧基苄基、邻硝基苄基、对硝基苄基、二苯甲基、三苯甲基和枯基；低级烷酰基，例如甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、新戊酰基、三氟乙酰基和三氯乙酰基；苯甲酰基；芳基烷酰基，例如苯基乙酰基和苯氧基乙酰基；低级烷氧基羰基，例如，甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基和叔丁氧基羰基；芳烷氧基羰基，例如对硝基苄氧基羰基和苯乙氧基羰基；低级烷基甲硅烷基，例如三甲基甲硅烷基和叔丁基二甲基甲硅烷基；四氢吡喃基；三甲基甲硅烷基乙氧基甲基；低级烷基磺酰基，例如甲磺酰基、乙磺酰基和叔丁基磺酰基；低级烷基亚磺酰基，例如叔丁基亚磺酰基；芳基磺酰基，例如苯磺酰基和甲苯磺酰基；和酰亚氨基，例如酞酰亚氨基。具体地，优选三氟乙酰基、乙酰基、叔丁氧基羰基、苄氧基羰基、三甲基甲硅烷基乙氧基甲基、枯基等。

“羟基保护基”并不特别限定，只要其具有保护功能即可。这样的保护基的例子包括低级烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基和叔丁基；低级烷基甲硅烷基，例如三甲基甲硅烷基和叔丁基二甲基甲硅烷基；低级烷氧基甲基，例如甲氧基甲基和2-甲氧基乙氧基甲基；四氢吡喃基；三甲基甲硅烷基乙氧基甲基；芳烷基，例如苄基、对甲氧基苄基、2,3-二甲氧基苄基、邻硝基苄基、对硝基苄基和三苯甲基；以及酰基，例如甲酰基、乙酰基和三氟乙酰基。具体地，优选甲基、甲氧基甲基、四氢吡喃基、三甲基甲硅烷基乙氧基甲基、叔丁基二甲基甲硅烷基和乙酰基。

“羧基保护基”并不特别限定，只要其具有保护功能即可。这样的保护基的例子包括低级烷基，例如，甲基、乙基、丙基、异丙基和叔丁基；卤代低级烷基，例如2,2,2-三氯乙基；低级烯基，例如，烯丙基；三甲基甲硅烷基乙氧基甲基；以及芳烷基，例如苄基、对甲氧基苄基、对硝基苄基、二苯甲基和三苯甲基。具体地，优选甲基、乙基、叔丁基、烯丙基、苄基、对甲氧基苄基、三甲基甲硅烷基乙氧基甲基等。

“羰基保护基”并不特别限定，只要其具有保护功能即可。这样的保护基的例子包括亚乙基缩酮、三亚甲基缩酮、二甲基缩酮和类似缩酮和缩醛。

用于移除这样的保护基的方法可以根据保护基的类型、所需化合物(I)的稳定性等而变化。例如，可以使用以下方法：根据出版物(ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis,thirdedition,T.W.Green,JohnWiley&Sons(1999))中公开的方法使用酸或碱的溶剂分解或类似方法，即，包括与0.01摩尔或大大过量的酸(优选三氟乙酸、甲酸、或盐酸)或等摩尔至大量摩尔过量的碱(优选氢氧化钾或氢氧化钙)进行反应的方法；使用金属氢化物复合物等的化学还原；或使用钯-碳催化剂、兰尼镍催化剂等的催化还原。

本发明的化合物可以通常常规分离和纯化方式进行分离和纯化。这样的方式的例子包括溶剂萃取、重结晶、制备型反相高效液相色谱、柱色谱、制备型薄层色谱等。

当本发明的化合物具有异构体，例如光学异构体、立体异构体、区域异构体(regioisomers)和旋转异构体时，任何异构体及其混合物均包括在本发明化合物的范围之内。例如，当化合物具有光学异构体时，由外消旋混合物分离出的光学异构体也包括在本发明化合物的范围之内。这些异构体中的每一种均可以作为单独的化合物通过已知的合成和分离方式(例如，浓缩、溶剂萃取、柱色谱、重结晶等)得到。

在本发明中，与式(I)中的取代基B结合的碳原子是不对称碳；因此，化合物包括异构体。如上所述，除非另外指出，本发明的化合物包括所有的对映异构体及其混合物。本发明的化合物可以是R和S对映异构体的混合物。这样的混合物可以是包括90％或更多、95％或更多、或者99％或更多的R对映异构体的混合物；或者包括90％或更多、95％或更多或者、99％或更多的S对映异构体的混合物。

手性拆分方法包括，例如：使手性拆分试剂作用于本发明的化合物以形成盐、并使用得到的盐的溶解性差异等拆分出对映异构体中的一种的非对映异构体法；向外消旋体的过饱和溶液中加入对映异构体中的一种作为种子用于结晶的优先结晶法；和使用手性柱的柱色谱，例如HPLC。非对映异构体法中可以使用的手性拆分试剂可以适当地选自，例如，酸拆分试剂，例如，酒石酸、苹果酸、乳酸、扁桃酸、10-樟脑磺酸及其衍生物；以及碱性拆分试剂，例如，马钱子碱、番木鳖碱、奎宁和类似的生物碱化合物、氨基酸衍生物、金鸡尼丁和α-甲基苄基胺。此外，单独的本发明化合物的对映异构体的一种不仅可以通过获得作为各个对映异构体的混合物的本发明的化合物、然后进行上述手性拆分方法得到，而且可以通过以下方法得到：通过上述方法的手性拆分得到本发明化合物的一种对映异构体，并使用其作为合成原料。而且，获得本发明化合物的对映异构体的一种或其原料化合物的方法包括通过在产生不对称碳的反应步骤中调节催化剂反应条件等而优先获得对映异构体的一种的方法。

本发明的化合物或其盐可以是晶体形式。单晶和多晶形混合物均包括在本发明的化合物或其盐的范围以内。这样的晶体可以通过根据本领域本身已知的结晶方法进行结晶而产生。本发明的化合物或其盐可以是溶剂化物(例如水合物)或非溶剂化物。任何这样的形式均包括在本发明的化合物或其盐的范围以内。同位素(例如3H、14C、35S和125I)标记的化合物也包括在本发明的化合物或其盐的范围以内。

本发明化合物或其中间体的盐是指有机化学领域中使用的常见盐。这样的盐的例子包括羧基的碱加成盐(当化合物具有羧基时)、和氨基或碱性杂环基的酸加成盐(当化合物具有氨基或碱性杂环基时)。

碱加成盐的例子包括碱金属盐，例如钠盐和钾盐；碱土金属盐，例如钙盐和镁盐；铵盐；以及有机胺盐，例如三甲胺盐、三乙胺盐、二环己胺盐、乙醇胺盐、二乙醇胺盐、三乙醇胺盐、普鲁卡因盐、和N,N'-二苄基乙二胺盐。

酸加成盐的例子包括无机酸盐，例如，盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐和高氯酸盐；有机酸盐，例如，乙酸盐、甲酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、抗坏血酸盐和三氟乙酸盐；以及磺酸盐，例如，甲磺酸盐、羟乙基磺酸盐、苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐。

本发明的化合物或其盐具有优异的EGFR抑制活性，且可用作抗肿瘤剂。而且，本发明的化合物或其盐针对EGFR具有优异的选择性，且由其它激酶导致的副作用有利地较少。本发明的化合物或其盐将要治疗的恶性肿瘤的类型没有特别限定。恶性肿瘤的例子包括上皮癌(例如呼吸***癌症、消化***癌症、生殖***癌症、分泌***癌症等)、肉瘤、造血系肿瘤、中枢神经***肿瘤、和外周神经肿瘤。优选的例子包括上皮癌。更优选的例子包括呼吸***癌。而且，形成肿瘤的器官没有特别限定。例子包括头颈癌、食道癌、胃癌、结肠癌、直肠癌、肝癌、胆囊癌、胆管癌、胆道癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、子***、子宫内膜癌、肾癌、膀胱癌、***癌、睾丸肿瘤、骨肉瘤、软组织肉瘤、血癌、多发性骨髓瘤、皮肤癌、脑肿瘤和间皮瘤。优选地，目标癌症是头颈癌、胃癌、结肠癌、直肠癌、肝癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、肾癌或***癌，特别优选为肺癌。

此外，本发明的化合物或其盐针对突变EGFR具有优异的抑制活性。这样的突变EGFR的例子包括耐药性突变EGFR和高度易感突变EGFR。因此，本发明的化合物或其盐可用作治疗具有突变EGFR的上述恶性肿瘤的抗肿瘤剂。

当将本发明的化合物或其盐用作药物制剂时，如果需要，可以加入药物载体，从而根据预防和治疗目的形成适当的剂型。剂型的例子包括口服制剂、注射剂、栓剂、软膏剂、贴剂等。在这些当中，优选口服制剂。这些剂型可以通过本领域技术人员已知的常规方法形成。

作为药物载体，可以将各种用作制剂材料的常规有机或无机载体材料作为赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂或着色剂混合在固体制剂中；或者作为溶剂、增溶剂、助悬剂、等渗剂、缓冲剂或安抚剂(soothingagent)混合在液体制剂中。而且，如果需要，还可以使用药物制剂添加剂，例如，防腐剂、抗氧化剂、着色剂、甜味剂和稳定剂。

口服固体制剂如下制备。在将赋形剂任选地与粘合剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、掩味剂或调味剂等加入到本发明的化合物中之后，通过常规方法将所得的混合物配制成片剂、包衣片剂、颗粒剂、粉剂、胶囊等。

赋形剂的例子包括乳糖、蔗糖、D-甘露醇、葡萄糖、淀粉、碳酸钙、高岭土、微晶纤维素和硅酸酐。粘合剂的例子包括水、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、单糖浆(simplesyrup)、液体葡萄糖、液体α-淀粉、液体明胶、D-甘露醇、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基淀粉、甲基纤维素、乙基纤维素、虫胶、磷酸钙、聚乙烯吡咯烷酮等。崩解剂的例子包括干燥淀粉、藻酸钠、粉末琼脂、碳酸氢钠、碳酸钙、月桂基硫酸钠、硬脂酸单甘油酯、乳糖等。润滑剂的例子包括纯化滑石、硬脂酸钠盐、硬脂酸镁、硼砂、聚乙二醇等。着色剂的例子包括二氧化钛、氧化铁等。掩味剂或调味剂的例子包括蔗糖、苦橙皮、柠檬酸、酒石酸等。

当制备用于口服给药的液体制剂时，可以将掩味剂、缓冲剂、稳定剂、调味剂等加入到本发明的化合物中；并且可以根据常规方法将所得的混合物配制成口服液体制剂、糖浆、酏剂等。

在该情况下，可以使用与上文所述相同的掩味剂或调味剂。缓冲剂的例子为柠檬酸钠，稳定剂的例子包括黄芪胶、***胶和明胶。如果需要，例如，出于效果持久的目的，这些用于口服给药的制剂可以根据本领域已知的方法用肠溶衣或其他包衣进行包衣。这些包衣剂的例子包括羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚氧乙二醇和Tween80(注册商标)。

当制备注射剂时，可以将pH调节剂、缓冲剂、稳定剂、等渗剂、局部麻醉剂等加入到本发明的化合物中；并且可以根据常规方法将混合物配制成皮下、肌肉内或静脉内注射剂。

在此使用的pH调节剂和缓冲剂的例子包括柠檬酸钠、乙酸钠和磷酸钠。稳定剂的例子包括焦亚硫酸钠、EDTA、巯基乙酸和巯基乳酸。局部麻醉剂的例子包括盐酸普鲁卡因和盐酸利多卡因。等渗剂的例子包括氯化钠、葡萄糖(dextrose)、D-甘露醇和甘油。

当制备栓剂时，可以将本领域已知的药学可接受载体，例如聚乙二醇、羊毛脂、可可脂和脂肪酸三甘油酯、以及表面活性剂(如果需要)例如Tween80(注册商标)加入到本发明的化合物中，并且可以根据常规方法将所得的混合物配制成栓剂。

当制备软膏剂时，如果需要，可以将常用的基质(base)、稳定剂、润湿剂、防腐剂等混合到本发明的化合物中；并且可以根据常规方法将得到的混合物混合并配制成软膏剂。

基质的例子包括液状石蜡、白凡士林、白蜂蜡、辛基十二烷基醇和石蜡。

防腐剂的例子包括对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯和对羟基苯甲酸丙酯。

当制备贴剂时，可以根据常规方法将上述的软膏剂、乳膏、凝胶、糊剂等应用于常规基底。

作为基底，合适的是包括棉、短纤维或化学纤维的织物或无纺织物；软的乙烯基氯、聚乙烯、聚氨酯等的膜或泡沫片材。

每种这样的单位剂型中待引入的本发明化合物的量取决于待施用化合物的患者的症状、其剂型等。通常，在口服药剂的情况下，化合物的量为0.05-1000mg/单位剂型。在注射剂的情况下，化合物的量为0.01-500mg/单位剂型；且在栓剂的情况下，化合物的量为1-1000mg/单位剂型。

这些剂型的药物日剂量取决于患者的症状、体重、年龄、性别等，不能普遍化。例如，成人(体重：50kg)的日剂量通常可以为0.05-5,000mg，优选0.1-1,000mg；优选每天以一剂或分开的两剂或三剂给药。

待施用本发明化合物的哺乳动物的例子包括人、猴、小鼠、大鼠、兔、狗、猫、牛、马、猪和绵羊。

实施例

下面将参考实施例更具体地解释本发明；然而，本发明并不限于这些实施例。

在实施例中，除非另外指明，使用市售的试剂。将MoritexCorp.制造的SI(由ShokoScientificCo.,Ltd.制造)；Biotage制造的硅胶预填充柱；Biotage制造的HP-Sil(r)硅胶预填充柱、或Biotage制造的硅胶预填充柱用于硅胶柱色谱。将MoritexCorp.制造的NH(由ShokoScientificCo.,Ltd.制造)；或Biotage制造的预填充柱用于基础硅胶柱色谱。将Merck制造的KieselgelTM60F254,Art.5744或Wako制造的NH2SilicaGel60F254板用于制备型薄层色谱。NMR谱通过使用AL400(400MHz；由JEOL制造)、或Mercury400(400MHz；由AgilentTechnologies,Inc.制造)光谱仪加以测量。当氘代溶剂含有四甲基硅烷时，使用四甲基硅烷作为内标。否则，使用NMR溶剂作为内标。所有的δ值显示为ppm。微波反应使用Biotage制造的Initiator进行。

此外，LCMS谱使用WatersCorporation制造的AcquitySQD(四极)在以下条件下加以测量。

柱：AcquityBEHC18，2.1X50mm，1.7μm，由WatersCorporation制造

MS检测：ESI正

UV检测：254和210nm

柱流速：0.5mL/min

流动相：水/乙腈(0.1％甲酸)

进样量：1μL

梯度(表1)

反相制备型HPLC纯化使用从Gilson可得的制备性分离***进行。

柱：CombiPrepProC18，50X30mmI.D.，S-5μm(由YMC制造)。

UV检测：254nm

柱流速：40mL/min

流动相：水/乙腈(0.1％三氟乙酸)

进样量：0.1～1mL。

各符号表示如下。

s：单峰

d：二重峰

t：三重峰

q：四重峰

dd：双二重峰

dt：双三重峰

ddd：两个双二重峰

m：多重峰

brs：宽单峰

DMSO-d₆：氘代二甲亚砜

CDCl₃：氘代氯仿

CD₃OD：氘代甲醇

THF：四氢呋喃

DMF：N,N-二甲基甲酰胺

DME：1,2-二甲氧基乙烷

DMSO：二甲亚砜

HATU：O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基四甲基脲鎓六氟磷酸盐

实施例1

(S)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪- 7-基)丙烯酰胺(化合物1)

步骤1：(S)-(1-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯的合成

将偶氮二甲酸二异丙酯(2.44ml)在冰冷却下缓慢添加到三苯基膦(13.1g)于THF(70ml)中的溶液中。将反应混合物在冰冷却下搅拌1小时，然后向其中缓慢添加根据NPDOrg.Lett.,2005,vol.7,No.5,pp.847-849中公开的方法合成的(S)-(1-羟基丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯(7.0g)和4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(6.97g)于THF(35ml)中的溶液。在将反应混合物在室温搅拌2小时之后，在减压下蒸馏掉溶剂。将所得的残余物通过硅胶柱色谱纯化(展开剂：己烷/乙酸乙酯)，从而获得标题化合物(20.84g)，其为浅黄色油状物质。

ESI-MSm/z448,450[M+H]⁺.

步骤2：(S)-(1-(4-氨基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯的合成

将8N氨-甲醇溶液(89.4ml)添加到步骤1中获得的(S)-(1-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯(20.84g)中，并将混合物在高压釜中在120℃搅拌6小时。将反应混合物用冰冷却，并在减压下蒸馏掉溶剂。在将所得残余物用少量甲醇稀释之后，将所得沉淀通过过滤收集，用冷甲醇(11ml)洗涤，然后在减压下干燥，从而获得标题化合物(8.28g)，其为乳白色固体。

ESI-MSm/z430[M+H]⁺.

步骤3：(S)-(1-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯的合成

将步骤2中获得的(S)-(1-(4-氨基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯(8.26g)、3-喹啉硼酸(4.99g)、碳酸铯(12.54g)、1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)(785.6mg)、DME(66ml)、和水(33ml)的混合物在氮氛下在100℃搅拌2小时。在冷却反应混合物之后，向其中添加水和乙酸乙酯，以分离有机层。然后将水层用乙酸乙酯萃取两次。将所得有机层经无水硫酸镁干燥，并在减压下蒸馏掉溶剂。将所得的残余物通过硅胶柱色谱纯化(展开剂：己烷/乙酸乙酯、乙酸乙酯/甲醇)，从而获得标题化合物(8.0g)，其为浅橙色固体。

ESI-MSm/z431[M+H]⁺.

步骤4：(S)-(1-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯的合成

在-15℃将N-溴代琥珀酰亚胺(3.63g)添加到步骤3中获得的(S)-(1-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯(7.98g)于DMF(64ml)中的溶液中，并将混合物在-15℃搅拌1小时。将10％硫代硫酸钠水溶液和乙酸乙酯添加到反应混合物中，并在室温搅拌10分钟。分离有机层，并将水层用乙酸乙酯萃取两次。将所得的有机层用饱和氯化钠溶液洗涤两次，并经无水硫酸镁干燥。在减压下蒸馏掉溶剂。将所得的残余物通过硅胶柱色谱纯化(展开剂：乙酸乙酯/甲醇)，从而获得标题化合物(6.30g)，其为浅棕色固体。

ESI-MSm/z509,511[M+H]⁺.

步骤5：(S)-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)氨基甲酸叔丁酯的合成

将4N氢氧化钠水溶液(28.8ml)添加到步骤4中获得的(S)-(1-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯(5.00g)于THF(100ml)中的溶液中，并使混合物在减压下脱气，随后进行氮吹扫。在添加四(三苯基膦)钯(1.13g)之后，将混合物搅拌过夜，同时加热回流。在将反应混合物冷却至室温之后，使用乙酸乙酯进行萃取，并将所得的有机层用饱和氯化钠溶液洗涤且经无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩之后，将所得的残余物通过硅胶色谱纯化(展开剂：乙酸乙酯/甲醇)，从而获得标题化合物(5.01g)，其为橙色固体。

ESI-MSm/z429[M+H]⁺.

步骤6：化合物1的合成

将4N氯化氢-二噁烷溶液(1ml)和甲醇(1ml)加到步骤5中获得的(S)-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)氨基甲酸叔丁酯(100mg)于氯仿(1ml)中的溶液中，并将混合物在室温搅拌5小时。将反应混合物在减压下浓缩，从而得到(S)-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-4,7-二胺盐酸盐。

将二异丙基乙胺(0.187ml)添加到(S)-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-4,7-二胺盐酸盐于氯仿(4ml)中的溶液中，并在冰冷却下添加丙烯酰氯于氯仿(0.19ml)中的100mg/ml溶液。将混合物搅拌40分钟。将反应混合物通过硅胶色谱纯化(展开剂：乙酸乙酯/甲醇)；在浓缩之后，使所得残余物在乙酸乙酯/己烷中混悬和洗涤。将所得固体通过过滤收集并减压干燥，从而获得标题化合物(49mg)，其为浅绿色固体。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ:3.88-3.93(1H,m),4.57-4.63(1H,m),5.03(1H,d,J＝2.4Hz),5.24(1H,d,J＝2.4Hz),5.55-5.62(1H,m),5.68(1H,dd,J＝10.0,2.4Hz),6.12-6.38(4H,m),7.65(1H,dd,J＝7.8,7.8Hz),7.77-7.83(1H,m),8.04-8.11(2H,m),8.15(1H,s),8.41(1H,d,J＝2.2Hz),8.82(1H,d,J＝7.8Hz),8.98(1H,d,J＝2.2Hz).

ESI-MSm/z383[M+H]⁺.

实施例2

(S)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪- 7-基)甲基丙烯酰胺(化合物2)

步骤1：(S)-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-4,7-二胺的合成

将5N盐酸(12ml)添加到在实施例1步骤5中获得的(S)-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)氨基甲酸叔丁酯(5.01g)于乙醇(25ml)中的溶液中，并将所得混合物在70～80℃的外部温度下搅拌1小时。在将反应混合物冷却至室温之后，将反应混合物用氯仿洗涤，并使用5N氢氧化钠水溶液将水层调整至约pH10，随后用氯仿进行萃取。将所得的有机层经无水硫酸钠干燥，随后进行过滤和浓缩。将所得残余物通过基础硅胶色谱纯化(展开剂：氯仿/甲醇)，从而获得标题化合物(2.10g)，其为黄色固体。

ESI-MSm/z329[M+H]⁺.

步骤2：化合物2的合成

在0℃将二异丙基乙胺(0.0318ml)和甲基丙烯酰氯(0.0148ml)相继添加到步骤1中获得的(S)-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-4,7-二胺(50.0mg)于乙腈(2.0ml)和水(2.0ml)中的溶液中，并将所得混合物在相同温度搅拌45分钟。将反应混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，随后用氯仿进行萃取。在将有机层经无水硫酸钠干燥之后，在减压下蒸馏掉溶剂。将所得的残余物通过硅胶柱色谱纯化(展开剂：乙酸乙酯/甲醇)，从而获得标题化合物(38.0mg)，其为浅黄色固体。

¹H-NMR(CDCl₃)δ:2.02(3H,s),4.03(1H,dd,J＝11.6,4.9Hz),4.70(1H,dd,J＝11.6,8.2Hz),5.20-5.22(3H,m),5.44(2H,d,J＝1.7Hz),5.73-5.75(1H,m),5.82(1H,s),6.89(1H,d,J＝7.6Hz),7.61-7.65(1H,m),7.76-7.80(1H,m),7.87(1H,d,J＝8.3Hz),8.15(1H,d,J＝8.5Hz),8.21-8.25(2H,m),9.06(1H,d,J＝2.2Hz).

ESI-MSm/z397[M+H]⁺.

实施例3

(S)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪- 7-基)丁-2-烯酰胺(E和Z的混合物)(化合物3)

使用巴豆酰氯代替在实施例2步骤2中使用的甲基丙烯酰氯，进行与实施例2步骤2中相同的合成，从而获得标题混合物(8.8mg)，其为浅黄色固体。

¹H-NMR(CDCl₃)δ:1.83-1.90(3H,m),4.01(1H,dd,J＝11.6,5.2Hz),4.73(1H,dd,J＝11.6,8.2Hz),5.00(2H,s),5.19(1H,d,J＝1.5Hz),5.44(1H,d,J＝2.0Hz),5.75-5.77(1H,m),5.87-5.91(1H,m),6.27(1H,d,J＝8.3Hz),6.92-7.01(1H,m),7.62-7.66(1H,m),7.78-7.82(1H,m),7.88(1H,d,J＝7.3Hz),8.18(1H,d,J＝8.0Hz),8.28-8.29(2H,m),9.08(1H,d,J＝2.2Hz).

ESI-MSm/z397[M+H]⁺.

实施例4

(S,E)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺(化合物4)

将(E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酸盐酸盐(60.6mg)、HATU(139mg)、二异丙基乙胺(0.106ml)、和DMF(1.0ml)在室温相继添加到实施例2步骤1中获得的(S)-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯烷-4,7-二胺(100mg)于二氯甲烷(3.0ml)中的混悬液中，并将混合物在相同温度搅拌1.5小时。将反应混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液，随后用乙酸乙酯进行萃取。在将有机层经无水硫酸钠干燥，在减压下蒸馏掉溶剂。将所得的残余物通过硅胶柱色谱纯化(展开剂：乙酸乙酯/甲醇)，从而获得标题化合物(114mg)，其为浅黄色固体。

¹H-NMR(CDCl₃)δ:2.23(6H,s),3.07(2H,dd,J＝6.0,1.3Hz),4.01(1H,dd,J＝11.6,5.0Hz),4.70(1H,dd,J＝11.6,8.2Hz),5.09(2H,brs),5.20(1H,d,J＝2.0Hz),5.43(1H,d,J＝2.0Hz),5.73-5.79(1H,m),6.07(1H,dt,J＝15.4,1.3Hz),6.72(1H,brs),6.94(1H,dt,J＝15.4,6.0Hz),7.61-7.65(1H,m),7.77-7.81(1H,m),7.87(1H,d,J＝8.0Hz),8.16(1H,d,J＝8.5Hz),8.25-8.26(2H,m),9.05(1H,d,J＝2.0Hz).

ESI-MSm/z440[M+H]⁺.

实施例5

(S,E)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)-3-氯丙烯酰胺(化合物5)

使用反-3-氯丙烯酸代替在实施例4中使用的(E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酸盐酸盐，进行与实施例4中相同的合成，从而获得标题化合物(49.2mg)，其为黄色固体。

¹H-NMR(CDCl₃)δ:4.04(1H,dd,J＝11.7,4.6Hz),4.69(1H,dd,J＝11.7,8.0Hz),5.03(2H,s),5.22(1H,d,J＝1.7Hz),5.44(1H,d,J＝1.7Hz),5.72-5.75(1H,m),6.34(1H,d,J＝13.0Hz),6.89(1H,brs),7.41(1H,d,J＝13.0Hz),7.63-7.65(1H,m),7.79-7.81(1H,m),7.87(1H,d,J＝8.0Hz),8.16(1H,d,J＝8.3Hz),8.25-8.26(2H,m),9.02(1H,d,J＝2.0Hz).

ESI-MSm/z417,419[M+H]⁺.

实施例6

(S,Z)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)-3-氯丙烯酰胺(化合物6)

使用顺-3-氯丙烯酸代替在实施例4中使用的(E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酸盐酸盐，进行与实施例4中相同的合成，从而获得标题化合物(74.7mg)，其为黄色固体。

¹H-NMR(CDCl₃)δ:4.07(1H,dd,J＝11.6,5.4Hz),4.82(1H,dd,J＝11.6,8.2Hz),4.96(2H,s),5.26(1H,d,J＝2.0Hz),5.48(1H,d,J＝2.0Hz),5.75-5.78(1H,m),6.28(1H,d,J＝8.3Hz),6.61(1H,d,J＝8.3Hz),6.81(1H,d,J＝7.3Hz),7.64-7.67(1H,m),7.79-7.83(1H,m),7.90(1H,d,J＝7.1Hz),8.19(1H,d,J＝8.5Hz),8.31(1H,d,J＝2.0Hz),8.33(1H,s),9.12(1H,d,J＝2.2Hz).

ESI-MSm/z417,419[M+H]⁺.

实施例7

(S,E)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)-4-(哌啶-1-基)丁-2-烯酰胺(化合物7)

使用(E)-4-(哌啶-1-基)丁-2-烯酸盐酸盐代替在实施例4中使用的(E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酸盐酸盐，进行与实施例4中相同的合成，从而获得标题化合物(122mg)，其为黄色固体。

¹H-NMR(CDCl₃)δ:1.42-1.59(5H,m),2.14(1H,s),2.39(4H,brs),3.10(2H,dd,J＝6.0,1.4Hz),4.01(1H,dd,J＝11.6,5.0Hz),4.69(1H,dd,J＝11.5,8.0Hz),5.10(2H,brs),5.20(1H,d,J＝2.1Hz),5.43(1H,d,J＝2.1Hz),5.73-5.79(1H,m),6.06(1H,dt,J＝15.3,1.4Hz),6.76(1H,brs),6.96(1H,dt,J＝15.3,6.0Hz),7.62-7.64(1H,m),7.77-7.80(1H,m),7.87(1H,d,J＝8.0Hz),8.16(1H,d,J＝8.3Hz),8.24-8.25(2H,m),9.04(1H,d,J＝2.0Hz).

ESI-MSm/z480[M+H]⁺.

实施例8

(S)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪- 7-基)丙炔酰胺(化合物8)

使用丙炔酸代替在实施例4中使用的(E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酸盐酸盐，进行与实施例4中相同的合成，从而获得标题化合物(30.0mg)，其为黄色固体。

¹H-NMR(CDCl₃)δ:2.91(1H,s),4.08(1H,dd,J＝11.7,4.9Hz),4.76(1H,dd,J＝11.7,8.0Hz),4.91(2H,s),5.24(1H,d,J＝1.2Hz),5.49(1H,d,J＝1.7Hz),5.68-5.69(1H,m),6.34-6.37(1H,m),7.65-7.67(1H,m),7.81-7.83(1H,m),7.90(1H,d,J＝8.3Hz),8.20(1H,d,J＝8.5Hz),8.30(1H,d,J＝2.0Hz),8.34(1H,s),9.11(1H,d,J＝2.2Hz).

ESI-MSm/z381[M+H]⁺.

实施例9

(S)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪- 7-基)丁-2-炔酰胺(化合物9)

使用丁-2-炔酸代替实施例4中使用的(E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酸盐酸盐，进行与实施例4中相同的合成，从而获得标题化合物(98.0mg)，其为黄色固体。

¹H-NMR(CDCl₃)δ:1.96(3H,s),4.02(1H,dd,J＝11.6,5.0Hz),4.70(1H,dd,J＝11.6,8.3Hz),5.05(2H,s),5.24(1H,d,J＝1.6Hz),5.45(1H,d,J＝1.6Hz),5.70-5.72(1H,m),6.95-7.01(1H,brs),7.63-7.67(1H,m),7.78-7.83(1H,m),7.88(1H,d,J＝8.3Hz),8.21(1H,d,J＝8.5Hz),8.26-8.28(2H,m),9.02(1H,d,J＝2.0Hz).

ESI-MSm/z395[M+H]⁺.

实施例10

(S,E)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)-4-(二乙基氨基)丁-2-烯酰胺(化合物10)

使用(E)-4-(二乙基氨基)丁-2-烯酸盐酸盐代替在实施例4中使用的(E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酸盐酸盐，进行与实施例4中相同的合成，从而获得标题化合物(38.2mg)，其为黄色固体。

¹H-NMR(CDCl₃)δ:1.00(6H,t,J＝7.2Hz),2.51(4H,q,J＝7.2Hz),3.22(2H,dd,J＝5.9,1.5Hz),4.00(1H,dd,J＝11.5,4.9Hz),4.62(1H,dd,J＝11.5,8.2Hz),5.22-5.24(3H,m),5.40(1H,d,J＝2.0Hz),5.74-5.80(1H,m),6.12(1H,dt,J＝15.4,1.5Hz),6.98(1H,dt,J＝15.4,5.9Hz),7.50(1H,brs),7.58-7.62(1H,m),7.74-7.78(1H,m),7.84(1H,d,J＝7.6Hz),8.12-8.14(2H,m),8.22(1H,d,J＝1.7Hz),8.99(1H,d,J＝2.0Hz).

ESI-MSm/z468[M+H]⁺.

实施例11

(S,E)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)-4-(乙基(甲基)氨基)丁-2-烯酰胺(化合物11)

使用(E)-4-(乙基(甲基)氨基)丁-2-烯酸盐酸盐代替在实施例4中使用的(E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酸盐酸盐，进行与实施例4中相同的合成，从而获得标题化合物(13.5mg)，其为黄色固体。

¹H-NMR(CDCl₃)δ:1.06(3H,t,J＝7.2Hz),2.24(3H,s),2.44(2H,q,J＝7.2Hz),3.15(2H,dd,J＝6.0,1.6Hz),4.03(1H,dd,J＝11.6,5.1Hz),4.73(1H,dd,J＝11.6,8.2Hz),5.01(2H,s),5.20(1H,d,J＝1.7Hz),5.44(1H,d,J＝1.7Hz),5.75-5.77(1H,m),6.05(1H,dt,J＝15.4,1.6Hz),6.42(1H,d,J＝6.8Hz),6.96(1H,dt,J＝15.4,6.0Hz),7.62-7.66(1H,m),7.78-7.82(1H,m),7.88(1H,d,J＝8.0Hz),8.18(1H,d,J＝8.5Hz),8.29(2H,s),9.08(1H,d,J＝2.2Hz).

ESI-MSm/z454[M+H]⁺.

实施例12

(S,E)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)-4-(异丙基(甲基)氨基)丁-2-烯酰胺(化合物12)

使用(E)-4-(异丙基(甲基)氨基)丁-2-烯酸盐酸盐代替在实施例4中使用的(E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酸盐酸盐，进行与实施例4中相同的合成，从而获得标题化合物(25.8mg)，其为黄色固体。

¹H-NMR(CDCl₃)δ:1.00(6H,d,J＝6.6Hz),2.15-2.36(3H,m),2.79-2.88(1H,m),3.18(2H,dd,J＝5.9,1.5Hz),4.01(1H,dd,J＝11.5,5.0Hz),4.70(1H,dd,J＝11.5,8.0Hz),5.11(2H,s),5.21(1H,d,J＝1.8Hz),5.43(1H,d,J＝1.8Hz),5.73-5.79(1H,m),6.10(1H,dt,J＝15.4,1.5Hz),6.74(1H,brs),6.94(1H,dt,J＝15.4,5.9Hz),7.61-7.65(1H,m),7.77-7.81(1H,m),7.87(1H,d,J＝8.5Hz),8.16(1H,d,J＝8.8Hz),8.23-8.26(2H,m),9.05(1H,d,J＝2.2Hz).

ESI-MSm/z468[M+H]⁺.

实施例13

(R)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-7- 基)丙烯酰胺(化合物13)

步骤1：(R)-(1-羟基-5-(甲基硫基)戊-3-基)氨基甲酸叔丁酯的合成

在-10℃将N-甲基吗啉(3.63ml)和氯甲酸乙酯(3.01ml)添加到(R)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-5-(甲基硫基)戊酸(7.92g)于THF(79.2ml)中的溶液中。在-10℃搅拌15分钟之后，将生成的不可溶物质过滤掉。将硼氢化钠(1.55g)的水溶液(15ml)在-10℃添加到滤液中，并将混合物在-10℃搅拌1小时。将饱和氯化铵水溶液添加到反应混合物中，并将混合物在室温搅拌30分钟。将乙酸乙酯添加到反应混合物中以分离有机层。将有机层用0.5N硫酸氢钾水溶液、水、0.5N氢氧化钠水溶液、和饱和氯化钠溶液洗涤，并经无水硫酸钠干燥。然后将溶剂在减压下蒸馏掉。将所得的残余物通过硅胶柱色谱纯化(展开剂：氯仿/乙酸乙酯)，从而获得标题化合物(7.18g)，其为浅黄色油状物质。

步骤2：((3R)-1-羟基-5-(甲基亚磺酰基)戊-3-基)氨基甲酸叔丁酯的合成

将过碘酸钠(7.0g)于水(32ml)中的混悬液在10℃或更低的温度添加到步骤1中获得的(R)-(1-羟基-5-(甲基硫基)戊-3-基)氨基甲酸叔丁酯(8.16g)于甲醇(98ml)中的溶液中，并将混合物在室温搅拌2小时。将生成的不可溶物质过滤掉，并将滤液在减压下蒸馏。将所得残余物溶解于饱和氯化钠溶液中，随后用氯仿萃取3次。将有机层经无水硫酸钠干燥，并在减压下蒸馏掉溶剂，从而获得标题化合物(9.38g)，其为浅黄色固体。

步骤3：(R)-(5-羟基戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯的合成

将乙酸钠(13.45g)在室温添加到步骤2中获得的((3R)-1-羟基-5-(甲基亚磺酰基)戊-3-基)氨基甲酸叔丁酯(9.38g)于1,2-二氯苯(140ml)中的溶液中。将混合物在166℃的内部温度搅拌18小时。在冷却反应混合物之后，过滤掉不可溶物质，并在减压下蒸馏掉1,2-二氯苯。将所得残余物溶解于乙酸乙酯中，用次氯酸钠水溶液、水、和饱和氯化钠溶液洗涤，并经无水硫酸钠干燥。然后在减压下蒸馏掉溶剂。将所得的残余物通过硅胶柱色谱纯化(展开剂：己烷/乙酸乙酯)，从而获得标题化合物(2.50g)，其为浅黄色油状物质。

步骤4：(R)-(5-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯的合成

将三苯基膦(3.25g)在冰冷却下添加并溶解于步骤3中获得的(R)-(5-羟基戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯(2.5g)和4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(2.31g)于DME(23ml)中的溶液中。之后，逐渐添加偶氮二甲酸二异丙酯(2.44ml)。将反应混合物在冰冷却下搅拌30分钟，并在室温搅拌1小时，然后在减压下蒸馏掉溶剂。将所得残余物溶解于乙酸乙酯中，用水洗涤，并经无水硫酸钠干燥。然后在减压下蒸馏掉溶剂。将所得的残余物通过硅胶柱色谱纯化(展开剂：己烷/乙酸乙酯)，从而获得标题化合物(3.49g)，其为浅黄色固体。

ESI-MSm/z463,465[M+H]⁺.

步骤5：(R)-(5-(4-氨基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯的合成

将28％氨水(17.5ml)添加到在步骤4中获得的(R)-(5-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯(3.49g)于DME(17.5ml)中的溶液中，并将混合物在高压釜中在105℃的内部温度搅拌8小时。在冷却反应混合物之后，添加水(70ml)，并将混合物在室温搅拌4小时。将所得沉淀通过过滤收集，用水洗涤，并干燥，从而获得标题化合物(3.20g)，其为浅黄色固体。

ESI-MSm/z444[M+H]⁺.

步骤6：(R)-(5-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯的合成

将在步骤5中获得的(R)-(5-(4-氨基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯(3.2g)、3-喹啉硼酸(1.37g)、碳酸钠(843mg)、四(三苯基膦)钯(250mg)、DME(32ml)和水(32ml)的混合物在氮氛下在100℃搅拌6小时。在冷却反应混合物之后，添加饱和碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯。将所得混合物在室温搅拌30分钟。在过滤掉不可溶物质之后，将有机层分离并经无水硫酸钠干燥。然后在减压下蒸馏掉溶剂。将所得的残余物通过硅胶柱色谱纯化(展开剂：己烷/乙酸乙酯、乙酸乙酯/甲醇)，从而获得标题化合物(3.21g)，其为浅橙色固体。

ESI-MSm/z445[M+H]⁺.

步骤7：(R)-(5-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯的合成

将N-溴代琥珀酰亚胺(1.35g)于THF(23ml)中的溶液在冰冷却下在30分钟内添加到在步骤6中获得的(R)-(5-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯(3.21g)于THF(26ml)中的溶液中。将混合物在冰冷却下搅拌30分钟。在将5％硫代硫酸钠水溶液添加到反应混合物中之后，将混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液，随后用乙酸乙酯进行萃取。将有机层用饱和氯化钠溶液洗涤，并经无水硫酸钠干燥。然后在减压下蒸馏掉溶剂。将所得的残余物通过硅胶柱色谱纯化(展开剂：己烷/乙酸乙酯、乙酸乙酯/甲醇)，从而获得标题化合物(3.15g)，其为浅棕色固体。

ESI-MSm/z523,525[M+H]⁺.

步骤8：(R)-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-7-基)氨基甲酸叔丁酯的合成

将4N氢氧化钠水溶液(0.454ml)添加到在步骤7中获得的(R)-(5-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯(475mg)于THF(5ml)中的溶液中。之后，使混合物在减压下脱气，随后进行氮吹扫。在添加四(三苯基膦)钯(41.6mg)之后，将混合物搅拌过夜，同时加热回流。在将反应混合物冷却至室温之后，将反应混合物倒入水中，并用乙酸乙酯进行萃取。将所得的有机层用饱和氯化钠溶液洗涤，并经无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩之后，将所得的残余物通过硅胶色谱纯化(展开剂：乙酸乙酯/甲醇)，从而获得标题化合物(293mg)，其为黄色固体。

ESI-MSm/z443[M+H]⁺.

步骤9：(R)-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-4,7-二胺的合成

将5N盐酸(1ml)添加到在步骤8中获得的(R)-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-7-基)氨基甲酸叔丁酯(290mg)于乙醇(4ml)中的溶液中。之后，将混合物在70℃搅拌6小时。在将反应混合物冷却至室温之后，使用5N氢氧化钠水溶液将反应混合物调整至约pH10，随后用氯仿进行萃取。将所得的有机层经无水硫酸钠干燥，随后进行过滤和浓缩。将所得残余物通过基础硅胶色谱纯化(展开剂：氯仿/甲醇)，从而获得标题化合物(218mg)，其为浅棕色固体。

ESI-MSm/z343[M+H]⁺.

步骤10：化合物13的合成

将二异丙基乙胺(0.129ml)和丙烯酰氯(56.1mg)于氯仿(0.5ml)中的溶液在冰冷却下添加到在步骤9中获得的(R)-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-4,7-二胺(215mg)于氯仿(4ml)中的溶液中，并将所得混合物搅拌30分钟。在将反应混合物浓缩之后，将残余物通过硅胶色谱纯化(展开剂：乙酸乙酯/甲醇)，从而获得标题化合物(117mg)，其为黄色固体。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：2.28-2.41(2H,m),4.32-4.50(2H,m),4.64(2H,brs),4.97(1H,s),5.07(1H,s),5.05-5.12(1H,m),5.72(1H,dd,J＝10.2,1.2Hz),5.75-5.85(1H,m),6.14(1H,dd,J＝16.8,10.2Hz),6.36(1H,dd,J＝16.8,1.2Hz),7.61-7.68(1H,m),7.77-7.84(1H,m),7.87(1H,d,J＝8.4Hz),8.18(1H,d,J＝8.4Hz),8.27(1H,d,J＝2.0Hz),8.33(1H,s),8.98(1H,d,J＝2.0Hz).

ESI-MSm/z397[M+H]⁺.

实施例14

(S)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8,9-二氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺(化合物14)

步骤1：(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)戊-4-烯酸甲酯的合成

将5N氢氧化钠水溶液(2.1ml)和二碳酸二叔丁酯(2.128ml)在室温添加到(S)-2-氨基-4-戊烯酸(1.016g)于甲醇(20ml)中的混悬液中，并将所得混合物在相同温度搅拌8小时。在室温添加二碳酸二叔丁酯(0.304ml)，并将混合物在相同温度搅拌1小时。将4-羟基-1H-苯并***(1.796g)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(3.882g)在室温添加到反应混合物，并将混合物在相同温度搅拌过夜。将反应混合物在减压下浓缩，然后倒入饱和碳酸氢钠水溶液，随后用乙酸乙酯进行萃取。将所得的有机层经无水硫酸钠干燥，随后进行过滤和浓缩。将所得的残余物通过硅胶色谱纯化(展开剂：氯仿/甲醇)，从而获得标题化合物(2.0311g)，其为浅黄色油状物质。

步骤2：(S)-(1-羟基戊-4-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯的合成

将氢化铝锂(668.2mg)在冰冷却下添加到在步骤1中获得的(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)戊-4-烯酸甲酯(1.983g)于THF(50ml)中的溶液中，并将混合物在相同温度搅拌1.5小时。将十水合硫酸钠(1.1375g)和THF(10ml)在室温添加到反应混合物，并将混合物在相同温度搅拌过夜。将不可溶物质过滤掉。在用THF和乙酸乙酯洗涤之后，将滤液在减压下浓缩。将所得的残余物通过硅胶色谱纯化(展开剂：己烷/乙酸乙酯)，从而获得标题化合物(1.2601g)，其为浅黄色油状物质。

步骤3：(S)-(1-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-4-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯的合成

使用步骤2中获得的(S)-(1-羟基戊-4-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯代替在实施例13步骤4中使用的(R)-(5-羟基戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯，进行与实施例13步骤4中相同的合成，从而获得标题化合物(2.7679g)，其为浅黄色固体。

ESI-MSm/z463,465[M+H]⁺.

步骤4：(S)-(1-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-4-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯的合成

使用在步骤3中获得的(S)-(1-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-4-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯代替在实施例13步骤5中使用的(R)-(5-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯，进行与实施例13中步骤5～7中相同的合成，从而获得标题化合物(2.669g)，其为浅棕色固体。

ESI-MSm/z523,525[M+H]⁺.

步骤5：(S)-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8,9-二氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)氨基甲酸叔丁酯和(S)-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)氨基甲酸叔丁酯的合成

将4N氢氧化钠水溶液(5.1ml)和四(三苯基膦)钯(235.4mg)添加到步骤4中获得的(S)-(1-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-4-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯(2.669g)于THF(50ml)中的溶液中，并使混合物在减压下脱气，接着进行氮吹扫。将反应混合物搅拌过夜，同时加热回流。在将反应混合物冷却至室温之后，将反应混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液，并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机层经无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩之后，将所得的残余物通过硅胶色谱纯化(展开剂：氯仿/甲醇)，从而获得标题化合物的混合物(2.427g)，其为黄色固体。

ESI-MSm/z443[M+H]⁺.

步骤6：(S)-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8,9-二氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-4,8-二胺和(S)-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-4,8-二胺的合成

将5N盐酸(5.1ml)添加到步骤5中获得的(S)-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8,9-二氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)氨基甲酸叔丁酯和(S)-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)氨基甲酸叔丁酯的混合物(2.427g)于乙醇(20ml)中的溶液中，并将混合物在60℃搅拌过夜。在添加另外5N盐酸(5.1ml)之后，将混合物搅拌10小时，同时加热回流。在将反应混合物冷却至室温之后，将反应混合物用水稀释，并用氯仿洗涤。将5N氢氧化钠水溶液(10ml)添加到水层，随后用氯仿进行萃取。将所得的有机层经无水硫酸钠干燥，随后进行过滤和浓缩。将所得残余物通过基础硅胶色谱纯化(展开剂：乙酸乙酯/甲醇，从而获得标题化合物的混合物(1.4098g)，其为浅黄色固体。

ESI-MSm/z343[M+H]⁺.

步骤7：化合物14的合成

将二异丙基乙胺(0.8452ml)和丙烯酰氯(0.35ml)于乙腈(3.5ml)中的溶液在0℃相继添加到步骤6中获得的(S)-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8,9-二氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-4,8-二胺和(S)-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-4,8-二胺的混合物(1.407g)于乙腈(10ml)和水(10ml)中的溶液中，并将混合物在相同温度搅拌45分钟。在将反应混合物用水稀释之后，将反应混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液，随后用乙酸乙酯进行萃取。在将有机层经无水硫酸钠干燥之后，在减压下蒸馏掉溶剂。将所得的残余物通过硅胶柱色谱纯化(展开剂：乙酸乙酯/甲醇)，从而获得标题化合物(897.1mg)，其为浅黄色固体。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ:1.51(3H,s),4.17(1H,dd,J＝13.2,5.1Hz),4.25(1H,dd,J＝13.2,5.1Hz),4.73-4.83(1H,m),5.61(1H,dd,J＝9.8,2.7Hz),5.65-6.00(2H,brs),5.81(1H,dd,J＝5.1,1.2Hz),6.14(1H,dd,J＝17.1,2.4Hz),6.24(1H,dd,J＝17.1,9.8Hz),7.67(1H,ddd,J＝8.1,7.1,1.0Hz),7.81(1H,ddd,J＝8.3,7.1,1.5Hz),8.05(1H,d,J＝8.1Hz),8.09(1H,d,J＝8.3Hz),8.13(1H,s),8.39(1H,brs),8.46(1H,d,J＝7.3Hz),8.94(1H,s).

ESI-MSm/z397[M+H]⁺.

实施例15

(S)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8- 基)丙烯酰胺(化合物15)

对实施例14步骤7中通过硅胶柱色谱纯化而获得的混合部分通过反相制备性HPLC加以纯化，从而获得标题化合物(32.2mg)，其为浅黄色固体。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ:2.56-2.70(1H,m),2.72-2.82(1H,m),4.19(1H,dd,J＝14.1,8.3Hz),4.25-4.36(1H,m),4.72(1H,d,J＝13.7Hz),5.62(1H,dd,J＝10.0,2.2Hz),5.80(1H,dt,J＝12.2,4.6Hz),6.00-6.20(3H,m),6.20-6.31(2H,m),7.65(1H,t,J＝8.1Hz),7.80(1H,t,8.3Hz),8.05(1H,d,J＝8.5Hz),8.08(1H,d,J＝8.3Hz),8.15(1H,s),8.28-8.39(2H,m),8.87(1H,d,J＝2.2Hz).

ESI-MSm/z397[M+H]⁺.

实施例16

(R)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8,9-二氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺(化合物16)

步骤1：(R)-(1-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-4-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯的合成

使用(R)-2-氨基-4-戊烯酸代替在实施例14步骤1中使用的(S)-2-氨基-4-戊烯酸，进行与实施例14步骤1～3中相同的合成，从而获得标题化合物(1.4217g)，其为浅黄色固体。

ESI-MSm/z463,465[M+H]⁺.

步骤2：化合物16的合成

使用步骤1中获得的(R)-(1-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-4-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯，进行与实施例14步骤4～7中相同的合成，从而获得标题化合物(21.0mg)，其为浅黄色固体。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ:1.51(3H,s),4.17(1H,dd,J＝13.2,5.1Hz),4.25(1H,dd,J＝13.2,5.1Hz),4.73-4.83(1H,m),5.61(1H,dd,J＝9.8,2.7Hz),5.65-6.00(2H,brs),5.81(1H,dd,J＝5.1,1.2Hz),6.14(1H,dd,J＝17.1,2.4Hz),6.24(1H,dd,J＝17.1,9.8Hz),7.67(1H,t,J＝7.1Hz),7.81(1H,t,J＝7.6Hz),8.05(1H,d,J＝8.1Hz),8.09(1H,d,J＝8.6Hz),8.13(1H,s),8.39(1H,brs),8.46(1H,d,J＝7.1Hz),8.94(1H,s).

ESI-MSm/z397[M+H]⁺.

实施例17

(R)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8- 基)丙烯酰胺(化合物17)

对实施例16中通过硅胶柱色谱纯化而获得的混合部分以与实施例15中相同的方法加以纯化，从而获得标题化合物(8.4mg)，其为浅黄色固体。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ:2.57-2.70(1H,m),2.71-2.82(1H,m),4.19(1H,dd,J＝13.2,8.3Hz),4.25-4.36(1H,m),4.72(1H,d,J＝13.2Hz),5.62(1H,dd,J＝10.0,2.2Hz),5.80(1H,dt,J＝12.2,4.6Hz),6.00-6.20(3H,m),6.20-6.31(2H,m),7.65(1H,t,J＝7.6Hz),7.79(1H,ddd,J＝8.3,7.1,1.5Hz),8.05(1H,d,J＝8.5Hz),8.08(1H,d,J＝8.5Hz),8.15(1H,s),8.33(1H,d,J＝2.2Hz),8.36(1H,d,J＝7.6Hz),8.87(1H,d,J＝2.2Hz).

ESI-MSm/z397[M+H]⁺.

实施例18

(S)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8,9,10-四氢-6H-嘧啶并[5’,4’:4, 5]吡咯并[1,2-a]氮杂 -8-基)丙烯酰胺(化合物18)

步骤1：(S)-(1-羟基己-5-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯的合成

将N-甲基吗啉(2.1g)添加到(S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)己-5-烯酸(4.0g)于THF(40ml)中的溶液中，并在-10℃逐渐添加氯甲酸乙酯(1.75ml)。之后，将混合物在相同温度搅拌20分钟，将通过硅藻土(Celite)过滤所生成的不可溶物质。将四氢硼酸钠(904mg)于水(8ml)中的溶液在-10℃逐渐添加到所得滤液中。在将混合物在相同温度搅拌30分钟之后，添加饱和氯化铵水溶液。在用乙酸乙酯萃取之后，使用0.5N硫酸氢钾水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液、和饱和氯化钠溶液按顺序进行洗涤。将所得的有机层经无水硫酸钠干燥然后过滤，随后进行浓缩。将所得的残余物通过硅胶色谱纯化(展开剂：己烷/乙酸乙酯)，从而获得标题化合物(3.54g)，其为油状物质。

步骤2：化合物18的合成

使用步骤1中获得的(S)-(1-羟基己-5-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯代替在实施例13步骤4中使用的(R)-(5-羟基戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯，进行实施例13步骤4～10中相同的合成，从而获得标题化合物(147mg)，其为无色固体。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ:1.68-1.82(1H,m),2.17-2.25(1H,m),2.42-2.53(1H,m),2.75-2.83(1H,m),3.86-4.16(2H,m),4.64-4.78(1H,m),4.84(1H,d,J＝1.7Hz),5.26(1H,s),5.60(1H,dd,J＝10.0,2.4Hz),6.00(2H,brs),6.11(1H,dd,J＝17.1,2.4Hz),6.27(1H,dd,J＝17.1,10.0Hz),7.60-7.64(1H,m),7.73-7.77(1H,m),7.99-8.04(2H,m),8.17(1H,s),8.22(1H,d,J＝8.0Hz),8.30(1H,d,J＝2.0Hz),8.78(1H,d,J＝2.0Hz).

ESI-MSm/z411[M+H]⁺.

实施例19

(S,E)-N-(4-氨基-6-亚乙基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪- 8-基)丙烯酰胺(化合物19)

步骤1：(S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-4-羟基丁酸甲酯的合成

将N-甲基吗啉(9.78ml)和氯甲酸乙酯(8.09ml)在冰冷却下添加到(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-甲氧基-4-氧基丁酸(20.0g)于THF(200ml)中的溶液中，并将混合物在冰冷却下搅拌1小时。过滤掉所生成的不可溶物质。将硼氢化钠(4.14g)于水(41.4ml)中的溶液在冰冷却下添加到滤液中，并将混合物在冰冷却下搅拌30分钟。将0.5N硫酸氢钾水溶液和乙酸乙酯添加到反应混合物。将有机层分离，用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，并经无水硫酸镁干燥。然后在减压下蒸馏掉溶液，从而获得标题化合物(10.82g)。

步骤2：(S)-4-(2-甲氧基-2-氧基乙基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁酯的合成

将2,2-二甲氧基丙烷(28.52ml)和三氟化硼-二乙基醚混合物(0.294ml)在室温添加到步骤1中获得的(S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-4-羟基丁酸甲酯(10.82g)于丙酮(108.2ml)中的溶液中，并将混合物在相同温度搅拌4小时。将反应混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液，并用乙酸乙酯进行萃取。将所得有机层经无水硫酸镁干燥，然后过滤，随后进行浓缩。将所得的残余物通过硅胶色谱纯化(展开剂：己烷/乙酸乙酯)，从而获得标题化合物(8.72g)。

步骤3：(S)-4-(2-羟基乙基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁酯的合成

将1M二异丁基氢化铝-甲苯溶液(65.7ml)在冰冷却下添加到步骤2中获得的(S)-4-(2-甲氧基-2-氧基乙基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(8.71g)于二氯甲烷(87.1ml)中的溶液中，并将混合物在冰冷却下搅拌2小时。将5％酒石酸钠钾水溶液和乙酸乙酯添加到反应混合物中，并将混合物在室温搅拌过夜。将所得有机层经无水硫酸镁干燥，然后过滤，随后进行浓缩。将所得的残余物通过硅胶色谱纯化(展开剂：己烷/乙酸乙酯)，从而获得标题化合物(5.94g)。

步骤4：(S)-2,2-二甲基-4-(2-氧基乙基)噁唑烷-3-甲酸叔丁酯的合成

将三乙胺(16.9ml)和吡啶三氧化硫复合物(12.56g)在室温添加到步骤3中获得的(S)-4-(2-羟基乙基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(5.94g)于DMSO(59.4ml)中的溶液中，并将混合物在相同温度搅拌1小时。将反应混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液，并用乙酸乙酯进行萃取。将所得有机层经无水硫酸镁干燥，然后过滤，随后进行浓缩。将所得的残余物通过硅胶色谱纯化(展开剂：己烷/乙酸乙酯)，从而获得标题化合物(6.06g)。

步骤5：(S)-4-(丁-2-烯-1-基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁酯的合成

将2.69M正丁基锂-己烷溶液(7.0ml)在冰冷却下添加到乙基三苯基溴化鏻(5.60g)于THF(25.2ml)中的混悬液中，并将混合物在冰冷却下搅拌30分钟。将步骤4中获得的(S)-2,2-二甲基-4-(2-氧基乙基)噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(3.06g)于THF(3.06ml)中的溶液在冰冷却下添加到反应混合物中，并将混合物在室温搅拌14小时。将己烷添加到反应混合物中，并过滤掉不可溶物质，随后用THF-己烷＝2/1洗涤。将滤液在减压下浓缩。将所得的残余物通过硅胶色谱纯化(展开剂：己烷/乙酸乙酯)，从而获得标题化合物(1.81g)。

步骤6：(S)-(1-羟基己-4-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯的合成

将4N氯化氢-二噁烷溶液(18.1ml)在室温添加到步骤5中获得的(S)-4-(丁-2-烯-1-基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(1.81g)中，并将混合物在70℃搅拌2小时。将反应混合物冷却，然后在减压下浓缩。将所得残余物溶解于THF(18.1ml)中，并在室温向其中添加饱和碳酸氢钠水溶液(18.1ml)和二碳酸二叔丁酯(1.53g)。将混合物在相同温度搅拌过夜。将反应混合物倒入水中，并用乙酸乙酯进行萃取。将所得有机层经无水硫酸镁干燥，然后过滤，随后进行浓缩。将所得的残余物通过硅胶色谱纯化(展开剂：己烷/乙酸乙酯)，从而获得标题化合物(1.57g)。

步骤7：化合物19的合成

使用步骤6中获得的(S)-(1-羟基己-4-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯代替在实施例13步骤4中使用的(R)-(5-羟基戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯，进行与实施例13步骤4～10中相同的合成，从而获得标题化合物(327mg)。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ:1.47(3H,d,J＝7.1Hz),2.64-2.70(1H,m),2.81-2.85(1H,m),4.00-4.09(1H,m),4.32-4.43(2H,m),5.41-5.46(1H,m),5.60-5.63(1H,m),5.82(2H,brs),6.11-6.16(1H,m),6.21-6.31(1H,m),8.05(1H,d,J＝7.3Hz),8.08(1H,d,J＝8.5Hz),8.13(1H,s),8.35-8.39(2H,m),8.87-8.92(1H,m).

ESI-MSm/z411[M+H]⁺.

实施例20

(S)-N-(4-氨基-6-异丙基-5-(喹啉-3-基)-8,9-二氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基) 丙烯酰胺(化合物20A)和(S)-N-(4-氨基-6-(丙-2-亚基)-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺(化合物20B)的混合物

使用异丙基三苯基碘化鏻代替在实施例19步骤5中使用的乙基三苯基溴化鏻，进行与实施例19中相同的合成，从而获得标题化合物的混合物(18.9mg)。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ:0.85-4.71(11H,m),5.63-5.68(1H,m),5.88(1H,brs),6.03(1H,brs),6.12-6.19(1H,m),6.24-6.31(1H,m),7.59-7.64(1H,m),7.72-7.78(1H,m),7.96-7.99(1H,m),8.01-8.05(1H,m),8.16(1H,d,J＝3.4Hz),8.24-8.28(1H,m),8.39-8.44(1H,m),8.90(1H,d,J＝2.0Hz).

ESI-MSm/z425[M+H]⁺.

实施例21

(R)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪- 7-基)-N-甲基丙烯酰胺(化合物21)

步骤1：(R)-(1-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯的合成

使用(R)-(1-羟基丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯代替在实施例1步骤1中使用的(S)-(1-羟基丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯，进行实施例1步骤1中相同的合成，从而获得标题化合物(1.083g)，其为浅黄色固体。

ESI-MSm/z448,450[M+H]⁺.

步骤2：(R)-(1-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成

将碘甲烷(1.58ml)、和分散于液体石蜡中的氢化钠(224mg)在室温添加到步骤1中获得的(R)-(1-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯(2.28g)于DMF(11.4ml)中的溶液中，并将混合物在相同温度搅拌1小时。将所得混合物倒入水中，并用乙酸乙酯进行萃取。将所得的有机层用水和饱和氯化钠溶液洗涤，并经无水硫酸钠干燥；之后，在减压下蒸馏掉溶剂。将所得的残余物通过硅胶柱色谱纯化(展开剂：己烷/乙酸乙酯)，从而获得标题化合物(2.41g)，其为浅黄色固体。

ESI-MSm/z462,464[M+H]⁺.

步骤3：化合物21的合成

使用步骤2中获得的(R)-(1-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯代替在实施例13步骤5中使用的(R)-(5-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯，进行与实施例13步骤5～10中相同的合成，从而获得标题化合物(256mg)，其为浅黄色固体。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ:2.75和2.94(共3H,各为s),4.06-4.20(1H,m),4.46-4.72(1H,m),4.81-4.89(1H,m),5.26-5.35(1H,m),5.70-5.80(1H,m),5.98-6.37(4H,m),6.77-7.01(1H,m),7.62-7.68(1H,m),7.77-7.83(1H,m),8.03-8.10(2H,m),8.14-8.18(1H,m),8.41-8.45(1H,m),8.96-9.01(1H,m).

ESI-MSm/z397[M+H]⁺.

实施例22

(R)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8- 基)-N-甲基丙烯酰胺(化合物22)

步骤1：(R)-(1-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-4-烯-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成

使用实施例16和17步骤1中获得的(R)-(1-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-4-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯代替在实施例21步骤2中使用的(R)-(1-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯，进行与实施例21步骤2中相同的合成，从而获得标题化合物(2.743g)，其为浅黄色固体。

ESI-MSm/z477,479[M+H]⁺.

步骤2：(R)-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成

使用步骤1中获得的(R)-(1-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-4-烯-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯代替在实施例13步骤5中使用的(R)-(5-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯，进行与实施例13步骤5～8中相同的合成，从而获得标题化合物(1.366g)，其为浅棕色固体。

ESI-MSm/z457[M+H]⁺.

步骤3：(R)-N⁸-甲基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-4,8-二胺的合成

将5N盐酸(0.5ml)添加到步骤2中获得的(R)-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(228mg)于乙醇(3ml)中的溶液中，并将混合物在50℃搅拌4天。在冷却之后，将反应混合物用5N氢氧化钠水溶液碱化，随后用氯仿进行萃取。将所得的有机层经无水硫酸钠干燥之后，在减压下蒸馏掉溶剂。将所得残余物通过基础硅胶柱色谱纯化(展开剂：氯仿/甲醇)，从而获得标题化合物(197mg)，其为浅棕色固体。

ESI-MSm/z357[M+H]⁺.

步骤4：化合物22的合成

使用步骤3中获得的(R)-N⁸-甲基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-4,8-二胺代替在实施例13步骤10中使用的((R)-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-4,7-二胺，进行实施例13步骤10中相同的合成，从而获得标题化合物(68.5mg)，其为浅黄色固体。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ:2.53-2.68(1H,m),2.88-3.11(4H,m),4.04-4.20(1H,m),4.34-4.96(4H,m),5.58-6.21(4H,m),6.72-7.01(1H,m),7.62-7.68(1H,m),7.78-7.83(1H,m),8.02-8.10(2H,m),8.15(1H,brs),8.37-8.44(1H,m),8.86-8.90(1H,m).

ESI-MSm/z411[M+H]⁺.

实施例23

(R)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8,9-二氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)-N- 甲基丙烯酰胺(化合物23)

步骤1：(R)-N⁸,6-二甲基-5-(喹啉-3-基)-8,9-二氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-4,8-二胺的合成

将5N盐酸(1ml)添加到实施例22步骤2中获得的(R)-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(228mg)于乙醇(4ml)中的溶液中，并将混合物搅拌24小时，同时加热回流。在冷却之后，将反应混合物用5N氢氧化钠水溶液碱化，随后用氯仿进行萃取。在将所得的有机层经无水硫酸钠干燥之后，在减压下蒸馏掉溶剂。将所得残余物通过基础硅胶柱色谱纯化(展开剂：氯仿/甲醇)，从而获得标题化合物(190.8mg)，其为浅棕色固体。

ESI-MSm/z357[M+H]⁺.

步骤2：化合物23的合成

使用步骤1中获得的(R)-N⁸,6-二甲基-5-(喹啉-3-基)-8,9-二氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-4,8-二胺代替在实施例13步骤10中使用的((R)-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-4,7-二胺，进行实施例13步骤10中相同的合成，从而获得标题化合物(150.9mg)，其为黄色固体。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ:1.52(3H,s),2.74和2.88(总共3H,各为brs),4.14-4.42(2H,m),5.21-5.98(5H,m),6.09-6.22(1H,m),6.71-7.03(1H,m),7.64-7.69(1H,m),7.79-7.85(1H,m),8.02-8.07(1H,m),8.08-8.12(1H,m),8.14(1H,s),8.43-8.49(1H,m),8.89-8.96(1H,m).

ESI-MSm/z411[M+H]⁺.

实施例24

N-((7S)-4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪- 7-基)丙烯酰胺(化合物24)

步骤1：((7S)-4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)氨基甲酸叔丁酯的合成

将10％钯-碳(50％湿，15.0mg)添加到实施例1步骤5中获得的(S)-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)氨基甲酸叔丁酯(15.0mg)于乙酸乙酯(2ml)-乙醇(1ml)中的溶液中，并将混合物在室温在氢氛下搅拌12小时。将反应混合物通过硅藻土过滤，并将滤液在减压下浓缩。将所得残余物通过制备性薄层色谱纯化(展开剂：氯仿/甲醇)，从而获得标题化合物(10.0mg)。

ESI-MSm/z357[M+H]⁺.

步骤2：化合物24的合成

使用步骤1中获得的((7S)-4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)氨基甲酸叔丁酯代替在实施例13步骤9中使用的(R)-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-7-基)氨基甲酸叔丁酯，进行实施例13步骤9和10中相同的合成，而获得标题化合物(3.10mg)，其为无色固体。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ:0.86(2.7H,d,J＝7.6Hz),1.08(0.3H,d,J＝7.6Hz),3.43-4.02(2H,m),4.34-4.62(1H,m),5.08-5.19(1H,m),5.59-5.68(1H,m),5.99-6.17(3H,m),6.18-6.33(1H,m),7.62(1H,dd,J＝7.6,7.6Hz),7.75(1H,dd,J＝7.6,7.6Hz),7.99-8.07(2H,m),8.12(1H,s),8.29-8.36(1H,m),8.53-8.76(1H,m),8.98(1H,d,J＝2.2Hz).

ESI-MSm/z385[M+H]⁺.

实施例25

(R)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪- 7-基)丙烯酰胺(化合物25)

使用实施例21步骤1中获得的(R)-(1-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯代替在实施例1步骤2中使用的(S)-(1-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯，进行实施例1步骤2～6中相同的合成，从而获得标题化合物(44.6mg)，其为浅黄色固体。

ESI-MSm/z383[M+H]⁺.

实施例26

(S)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪- 7-基)-N-甲基丙烯酰胺(化合物26)

使用实施例1步骤1中获得的(S)-(1-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯代替在实施例21步骤2中使用的(R)-(1-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯，进行实施例21步骤2和3中相同的合成，从而获得标题化合物(143mg)，其为浅黄色固体。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ:2.75和2.94(总共3H,各为s),4.06-4.20(1H,m),4.46-4.72(1H,m),4.81-4.89(1H,m),5.26-5.35(1H,m),5.70-5.80(1H,m),5.98-6.37(4H,m),6.77-7.01(1H,m),7.62-7.68(1H,m),7.77-7.83(1H,m),8.03-8.10(2H,m),8.14-8.18(1H,m),8.41-8.45(1H,m),8.96-9.01(1H,m).

ESI-MSm/z397[M+H]⁺.

实施例27

(S)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-8,9-二氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺 (化合物27)

步骤1：(S)-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)氨基甲酸叔丁酯的合成

将0.5M9-硼双环[3.3.1]壬烷于四氢呋喃(141.3ml)中的溶液在氮氛下添加到实施例1步骤4中获得的(S)-(1-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯(6.0g)于四氢呋喃(42ml)的溶液中。将混合物在室温搅拌2小时。将2N氢氧化钠水溶液(84.8ml)在室温逐渐添加到反应混合物，并使其在减压下脱气。在氮氛下，添加(四三苯基膦)钯(0)(1.70g)，并将混合物在66℃搅拌12小时。在将反应混合物冷却之后，将有机层分离并用20％氯化铵水溶液(60ml)洗涤。然后将SH硅胶(6.0g)添加到有机层，并将混合物在50℃在氮氛下搅拌14小时，然后过滤。将SH硅胶(由FujiSilysiaChemicalLtd.制造)(6.0g)再次添加到滤液，并将混合物在氮氛下在50℃搅拌14小时，然后过滤。在减压下从滤液蒸馏掉溶剂。将所得的残余物通过硅胶柱色谱纯化(展开剂：乙酸乙酯/甲醇)，从而获得标题化合物(4.46g；收率＝88％)，其为浅黄色固体。

ESI-MSm/z431[M+H]⁺.

步骤2：(8S)-4-氨基-8-((叔丁氧羰基)氨基)-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-6-基乙酸盐的合成

将四丁基碘化铵(37mg)和二乙酸碘苯(241mg)在冰冷却下添加到步骤1中获得的(S)-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)氨基甲酸叔丁酯(215mg)于乙酸(2ml)和二氯甲烷(2ml)中的溶液中。将混合物在冰冷却下搅拌2小时并在室温搅拌2小时。减压浓缩之后，将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液碱化，随后用乙酸乙酯进行萃取。将所得的有机层经无水硫酸钠干燥，随后进行过滤。然后在减压下蒸馏掉溶剂。将所得的残余物通过硅胶色谱纯化(展开剂：乙酸乙酯/甲醇)，从而获得标题化合物(216mg)，其为浅棕色固体。

ESI-MSm/z489[M+H]⁺.

步骤3：((8S)-4-氨基-6-羟基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)氨基甲酸叔丁酯的合成

将2N氢氧化钠水溶液(1ml)在室温添加到步骤2中获得的(8S)-4-氨基-8-((叔丁氧羰基)氨基)-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-6-基乙酸盐(215mg)于甲醇(3ml)中的溶液中，并将混合物在室温搅拌1小时。将反应混合物倒入水中，并用氯仿进行萃取。将所得的有机层经无水硫酸钠干燥，随后进行过滤。然后在减压下蒸馏掉溶剂。将所得的残余物通过硅胶色谱纯化(展开剂：乙酸乙酯/甲醇)，从而获得标题化合物(166.7mg)，其为浅黄色固体。

ESI-MSm/z447[M+H]⁺.

步骤4：(S)-5-(喹啉-3-基)-8,9-二氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-4,8-二胺的合成

将在步骤3中获得的((8S)-4-氨基-6-羟基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)氨基甲酸叔丁酯(44.6mg)、对甲苯磺酸一水合物(95mg)、和甲苯(3ml)的混合物在100℃搅拌4小时。在将反应混合物冷却之后，在减压下蒸馏掉溶剂。将所得的残余物通过硅胶色谱纯化(展开剂：氯仿/甲醇)，从而获得标题化合物(39mg)，其为浅棕色油状物质。

ESI-MSm/z329[M+H]⁺.

步骤5：化合物27的合成

使用步骤4中获得的(S)-5-(喹啉-3-基)-8,9-二氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-4,8-二胺代替在实施例13步骤10中使用的(R)-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-4,7-二胺，进行实施例13步骤10中相同的合成，从而获得标题化合物(44.1mg)，其为黄色固体。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ:4.19-4.30(2H,m),4.86-4.94(1H,m),5.63(1H,dd,J＝9.8,2.7Hz),6.08-6.32(5H,m),6.70(1H,dd,J＝9.8,1.1Hz),7.62-7.69(1H,m),7.75-7.82(1H,m),8.04-8.09(2H,m),8.17(1H,s),8.34(1H,d,J＝2.0Hz),8.55(1H,d,J＝7.3Hz),8.91(1H,d,J＝2.4Hz).

ESI-MSm/z383[M+H]⁺.

实施例28

(R)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-9,10-二氢-8H-嘧啶并[5’,4’:4,5]吡咯并[1,2- a]氮杂 -8-基)丙烯酰胺(化合物28)

使用实施例13步骤7中获得的(R)-(5-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯代替在实施例27步骤1中使用的(S)-(1-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯，进行实施例27中相同的合成，从而获得标题化合物(101.8mg)，其为黄色固体。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ:2.01-2.12(1H,m),2.23-2.33(1H,m),4.28-4.38(1H,m),4.55-4.63(1H,m),4.84-4.92(1H,m),5.62(1H,dd,J＝10.0,2.4Hz),5.68(1H,dd,J＝12.6,3.8Hz),6.08-6.31(5H,m),7.63-7.69(1H,m),7.78-7.83(1H,m),8.03-8.10(2H,m),8.18(1H,s),8.31(1H,d,J＝2.0Hz),8.51(1H,d,J＝8.2Hz),8.84(1H,d,J＝2.2Hz).

ESI-MSm/z397[M+H]⁺.

实施例29

N-((6R*,8S)-4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺(化合物29A)和N-((6S*,8S)-4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9- 四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺(化合物29B)

步骤1：(S)-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)氨基甲酸叔丁酯的合成

将通过如在实施例14步骤5中使用实施例14步骤4中获得的(S)-(1-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-4-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1.263g)进行的相同的合成而获得的(S)-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8,9-二氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)氨基甲酸叔丁酯和(S)-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)氨基甲酸叔丁酯的混合物通过硅胶柱色谱纯化(展开剂：乙酸乙酯/甲醇)，从而获得标题化合物(0.805g)，其为浅黄色固体。

ESI-MSm/z443[M+H]⁺.

步骤2：((8S)-4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)氨基甲酸叔丁酯的合成

将10％钯-碳(50％湿，100.6mg)添加到步骤1中获得的(S)-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)氨基甲酸叔丁酯(100.0mg)于甲醇(10ml)中的溶液中，并将混合物在室温在氢氛下搅拌12小时。将反应混合物通过玻璃纤维滤器过滤，并在减压下浓缩滤液。所得残余物通过基础硅胶柱色谱纯化(展开剂：氯仿/甲醇)，从而获得标题化合物(122.1mg)。

ESI-MSm/z445[M+H]⁺.

步骤3：(8S)-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-4,8-二胺的合成

将三氟乙酸(1ml)添加到步骤2中获得的((8S)-4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)氨基甲酸叔丁酯(122.1mg)于氯仿(3ml)中的溶液中，并将混合物在室温搅拌30分钟。将反应混合物在减压下浓缩，并将所得残余物溶解于甲醇中。在用碱性固相萃取柱(VARIANBondElut)脱盐之后，在减压下浓缩混合物，从而获得标题化合物(58.9mg)，其为浅黄色固体。

ESI-MSm/z345[M+H]⁺.

步骤4：N-((8S)-4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺的合成

使用步骤3中获得的(8S)-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-4,8-二胺(58.9mg)，进行实施例14步骤7中相同的合成，从而获得标题化合物(30.3mg)，其为浅黄色固体。

ESI-MSm/z399[M+H]⁺.

步骤5：化合物29A和化合物29B的合成

步骤4中获得的包含(6R*,8S)异构体和(6S*,8S)异构体的非对映异构体混合物通过制备性手性柱色谱(柱：CHIRALCELOZ-H(20mmX250mmX5μm)，由DaicelChemicalIndustries,Ltd.制造，展开剂：己烷/乙醇/三乙胺＝60/40/0.01)分离，从而获得分别作为第一级分(15.8mg)和第二级分(6.1mg)的化合物29A和化合物29B，其为无色固体。

化合物29A

¹H-NMR(CDCl₃)δ:0.96(3H,d,J＝6.6Hz),1.68(1H,m),2.29-2.39(1H,m),3.49-3.63(1H,m),3.81(1H,dd,J＝11.7,10.2Hz),4.56-4.69(1H,m),4.76(1H,dd,J＝12.2,5.1Hz),4.81(2H,brs),5.70(1H,dd,J＝10.5,1.2Hz),6.17(1H,dd,J＝16.6,10.2Hz),6.15-6.25(1H,m),6.36(1H,dd,J＝17.1,1.2Hz),7.64(1H,t,J＝7.6Hz),7.75-7.82(1H,m),7.88(1H,d,J＝8.0Hz),8.18(1H,d,J＝8.5Hz),8.21-8.29(2H,m),9.05(1H,d,J＝2.0Hz).

ESI-MSm/z399[M+H]⁺.

化合物29B

¹H-NMR(CDCl₃)δ:1.06(3H,d,J＝6.8Hz),1.83-2.08(1H,m),2.18-2.31(1H,m),3.46-3.59(1H,m),4.00(1H,dd,J＝12.4,7.6Hz),4.59(1H,dd,J＝12.4,4.6Hz),4.73-4.93(3H,m),5.70(1H,d,J＝10.5Hz),6.18(1H,dd,J＝16.8,10.2Hz),6.26-6.42(2H,m),7.63(1H,t,J＝7.6Hz),7.78(1H,t,J＝8.3Hz),7.88(1H,d,J＝8.0Hz),8.17(1H,d,J＝8.0Hz),8.20-8.27(2H,m),9.02(1H,d,J＝1.7Hz).

ESI-MSm/z399[M+H]⁺.

比较例1

N-(3-(4-氨基-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-5-基)苯基)苯甲酰胺(比较化合物1)

该化合物根据国际公开第WO2006/102079号小册子中公开的方法合成。

ESI-MSm/z384[M+H]⁺.

测试例

使用以下测试方法评价本发明的化合物。

测试例1：测量针对各种EGFR激酶活性的抑制作用(体外)

1)测量EGFR(T790M/L858R)激酶抑制活性

测量本发明化合物针对EGFR(T790M/L858R)激酶活性的抑制活性。

在抑制活性测量的材料中，底物肽和激酶蛋白如下获得。参考FL-Peptide22(其为用于PerkinElmer,Inc.的系列的试剂)，合成具有生物素化的N-端的肽(生物素-EEPLYWSFPAKKK)。对于激酶蛋白，购买CarnaBiosciences,Inc.的纯化的重组人EGFR(T790M/L858R)蛋白。

抑制活性测量如下进行。将本发明的化合物各自单独地溶解于二甲基亚砜(DMSO)中，并使用DMSO制备这些化合物的系列稀释物。随后，将包含底物肽(终浓度：250nM)、氯化镁(终浓度：10mM)、氯化锰(终浓度：10mM)、和ATP(终浓度：1μM)在用于激酶反应的缓冲液(CarnaBiosciences,Inc.)中的溶液与这些化合物的稀释物(在激酶反应时DMSO的终浓度：2.5％)或DMSO(终浓度：2.5％)混合。向其中进一步添加EGFR(T790M/L858R)蛋白，并将混合物在25℃孵育120分钟以进行激酶反应。向其中添加EDTA至24mM的终浓度，从而终止反应。将包含铕(Eu)-标记的抗磷酸化酪氨酸抗体PT66(PerkinElmer,Inc.)和SureLightAPC-SA(PerkinElmer,Inc.)的磷酸化酪氨酸检测液添加到反应混合物中，并使混合物在室温静置2小时或更久。对于背景，将在添加EGFR(T790M/L858R)蛋白之前添加有EDTA的样品在25℃孵育120分钟，其中使用DMSO代替化合物的DMSO溶液。也向该样品添加检测液，并使混合物静置2小时或更久。最终，对于所有的测试样品，通过PHERAstarFS(BMGLABTECH)在620nm和665nm的双波长处测量在照射波长为337nm的激发光时的荧光量，并且获得在两个波长处的荧光量之比作为数据。

在分析所测数据的过程中，在以2.5％的终浓度添加DMSO的情况下进行激酶反应的那些样品的荧光量比值被设定为0％的磷酸化抑制率，并且背景的荧光量比值被设定为100％的磷酸化抑制率。基于上述比率，对于添加有不同浓度的化合物溶液的样品计算磷酸化抑制率(％)。最终，将所获得的在各个浓度下的反应抑制率(％)针对各个化合物作图，并且使用XLfit曲线拟合软件(IDBS)确定IC₅₀值(nM)，其为EGFR(T790M/L858R)的磷酸化受到50％抑制的化合物浓度。

2)测量EGFR(d746-750/T790M)激酶抑制活性

测量本发明的化合物针对EGFR(d746-750/T790M)激酶活性的抑制活性。

材料、测量方法和数据分析方法基本上与上述关于“测量EGFR(T790M/L858R)激酶抑制活性”中所示的相同，不同之处在于使用购自CarnaBiosciences,Inc.的纯化重组人EGFR(d746-750/T790M)蛋白作为激酶蛋白，并且使用1.5μM的ATP终浓度进行测量。最终，通过数据分析确定各个化合物关于EGFR(d746-750/T790M)的IC₅₀值(nM)。

3)测量EGFR(L858R)激酶抑制活性

测量本发明的化合物针对EGFR(L858R)激酶活性的抑制活性。

材料、测量方法和数据分析方法与上述关于“测量EGFR(T790M/L858R)激酶抑制活性”中所示的基本上相同，不同之处在于使用购自CarnaBiosciences,Inc.的纯化重组人EGFR(L858R)蛋白作为激酶蛋白，并且使用终浓度为4μM的ATP进行测量。最终，通过数据分析确定各个化合物关于EGFR(L858R)的IC₅₀值(nM)。

4)测量EGFR(d746-750)激酶抑制活性

测量本发明的化合物针对EGFR(d746-750)激酶活性的抑制活性。

材料、测量方法和数据分析方法与上述关于“测量EGFR(T790M/L858R)激酶抑制活性”中所示的基本上相同，不同之处在于使用购自CarnaBiosciences,Inc.的纯化重组人EGFR(d746-750)蛋白作为激酶蛋白，使用终浓度为5μM的ATP进行测量，并且用于激酶反应的孵育进行90分钟。最终，通过数据分析确定各个化合物关于EGFR(d746-750)的IC₅₀值(nM)。

5)测量EGFR(WT)激酶抑制活性

测量本发明的化合物针对EGFR(WT)激酶活性的抑制活性。

材料、测量方法和数据分析方法与上述关于“测量EGFR(T790M/L858R)激酶抑制活性”中所示的基本上相同，不同之处在于使用通过使用杆状病毒表达体系在昆虫Sf9细胞中表达N-端融合至FLAG标签的人EGFR(WT)的胞质域、然后用抗-FLAG抗体琼脂糖(Sigma-Aldrich)对其进行纯化而制备的激酶蛋白作为激酶蛋白，底物肽的终浓度为500nM，并且ATP的终浓度为4.7μM。最终，通过数据分析确定各个化合物关于EGFR(WT)的IC₅₀值(nM)。

表1示出使用各种EGFR进行的测试的结果。

经确认，本发明的化合物不仅针对EGFR(L858R)和EGFR(d746-750)，而且针对EGFR(T790M/L858R)和EGFR(d746-750/T790M)都具有强抑制活性。另外还确认，其针对EGFR(WT)的抑制活性低于针对上述EGFR蛋白的抑制活性。

相比之下，证实比较例1化合物这种结构与本发明化合物相似的化合物针对这些EGFR激酶几乎没有抑制活性。

表1

测试例2：针对表达野生型和突变EGFR的细胞系的生长抑制活性的测试(体外)

将(1)表达EGFR(T790M/L858R)的人小细胞肺癌细胞系NCI-H1975、(2)表达EGFR(d746-750)的人小细胞肺癌细胞系HCC827、和(3)表达EGFR(WT)的人上皮样癌细胞系A431各自悬浮于ATCC的推荐的完全生长培养基中。将细胞悬浮液接种于384-孔微孔平板或96-孔平板的各孔中，并在包含5％二氧化碳气体的孵箱中在37℃培养一天。将本发明的各化合物溶解于DMSO中，并使用DMSO制备测试化合物的系列稀释物(至终浓度的500倍)。将测试化合物的DMSO溶液或DMSO用完全生长培养基稀释，并且将所得溶液添加到细胞培养板的各孔中使得DMSO的终浓度为0.2％。然后，将细胞在包含5％二氧化碳气体的孵箱中在37℃培养三天。通过使用CellTiter-Glo(由Promega制造)根据Promega推荐的操作方案，在添加测试化合物的DMSO溶液之前、以及在添加和培养之后测量细胞数目。

对于各个孔，添加有各种浓度的测试化合物的孔的细胞生长抑制率通过下式进行计算。然后，将所获得的各浓度下的抑制率(％)针对各个测试化合物作图，并且使用XLfit曲线拟合软件(IDBS)确定GI₅₀值(nM)，其为细胞生长受到50％抑制的测试化合物浓度。

细胞生长抑制率(％)＝(C-T)/(C-C0)X100

T：在添加测试化合物溶液之后培养三天的孔的发光强度

C：在添加DMSO之后培养三天的孔的发光强度

C0：在添加测试化合物溶液之前的孔的发光强度

表2示出结果。

经确认，本发明的化合物不仅针对表达EGFR(d746-750)的细胞，而且针对表达EGFR(T790M/L858R)的细胞都显示出强生长抑制效果。另外还确认，它们针对表达EGFR(WT)的细胞的生长抑制效果低于针对以上EGFR蛋白的抑制效果。

表2

Claims

1.一种由下式(I)表示的化合物或其盐：

其中基团

是

(1)由式A1表示的基团：

在式A1中，B是

由表示的基团，

R₁是氢原子或C1-C6烷基；且R₂是

由表示的基团，

或由表示的基团，

其中R₆表示氢原子或C1-C6烷基，

R₇和R₈相同或不同，并且各自表示氢原子或C1-C6烷基；m是0或1；且n是1或2；

(2)由式A2表示的基团：

在式A2中，B和n如式A1中所定义；且R₉是氢原子或C1-C6烷基；或

(3)由式A3表示的基团：

在式A3中，B、m和n如式A1中所定义；且R₁₀是C1-C6烷基。

2.根据权利要求1所述的化合物或其盐，其中R₂是

由表示的基团，

其中R₃、R₄和R₅相同或不同，并且各自表示氢原子、卤原子、C1-C6烷基、可以被C1-C6烷基取代的氨甲基、或1-哌啶子基甲基，

或由表示的基团，

其中R₆表示氢原子或C1-C6烷基。

3.根据权利要求1或2所述的化合物或其盐，其中R₂是

由表示的基团，

4.根据权利要求1-3中任一项所述的化合物或其盐，其中基团

是

(1)由式A1表示的基团：

在式A1中，B是

由表示的基团，

其中R₁是氢原子或C1-C6烷基；且R₂是由

表示的基团，

R₇和R₈相同或不同，并且各自表示氢原子或C1-C6烷基；m是0或1；且n是1；或

(2)由式A2表示的基团：

在A2中，B和n如式A1中所定义；且R₉是氢原子或C1-C6烷基。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的化合物或其盐，其中基团

是

(1)由式A1表示的基团：

在式A1中，B是由

表示的基团，

其中R₁是氢原子；且R₂是由

表示的基团，

其中R₃、R₄和R₅各自表示氢原子，

R₇和R₈各自表示氢原子；m是0；且n是1；或

(2)由式A2表示的基团：

在式A2中，B和n如式A1中所定义；且R₉表示C1-C6烷基。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的化合物或其盐，其中所述化合物选自以下化合物：

(S)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)丙烯酰胺；

(S)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)甲基丙烯酰胺；

(S)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)丁-2-烯酰胺(E和Z的混合物)；

(S,E)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺；

(S,E)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)-3-氯丙烯酰胺；

(S,Z)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)-3-氯丙烯酰胺；

(S,E)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)-4-(哌啶-1-基)丁-2-烯酰胺；

(S)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)丙炔酰胺；

(S)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)丁-2-炔酰胺；

(S,E)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)-4-(二乙基氨基)丁-2-烯酰胺；

(S,E)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)-4-(乙基(甲基)氨基)丁-2-烯酰胺；

(S,E)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)-4-(异丙基(甲基)氨基)丁-2-烯酰胺；

(R)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-7-基)丙烯酰胺；

(S)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8,9-二氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺；

(S)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺；

(R)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8,9-二氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺；

(R)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺；

(S)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8,9,10-四氢-6H-嘧啶并[5’,4’:4,5]吡咯并[1,2-a]氮杂-8-基)丙烯酰胺；

(S,E)-N-(4-氨基-6-亚乙基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺；

(S)-N-(4-氨基-6-异丙基-5-(喹啉-3-基)-8,9-二氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺；

(S)-N-(4-氨基-6-(丙-2-亚基)-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺；

(R)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)-N-甲基丙烯酰胺；

(R)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)-N-甲基丙烯酰胺；

(R)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8,9-二氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)-N-甲基丙烯酰胺；

N-((7S)-4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)丙烯酰胺；

(R)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)丙烯酰胺；

(S)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)-N-甲基丙烯酰胺；

(S)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-8,9-二氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺；

(R)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-9,10-二氢-8H-嘧啶并[5’,4’:4,5]吡咯并[1,2-a]氮杂-8-基)丙烯酰胺；

N-((6R*,8S)-4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺；和

N-((6S*,8S)-4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺。

7.根据权利要求1-5中任一项所述的化合物或其盐，其中所述化合物选自以下化合物：

(R)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8,9-二氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)-N-甲基丙烯酰胺；和

(R)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-9,10-二氢-8H-嘧啶并[5’,4’:4,5]吡咯并[1,2-a]氮杂-8-基)丙烯酰胺。

8.(S)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b]吡咯嗪-7-基)丙烯酰胺或其盐。

9.(S)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8,9-二氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺或其盐。

10.一种EGFR抑制剂，包括作为活性成分的根据权利要求1-9中任一项所述的化合物或其盐。

11.一种药物组合物，包括根据权利要求1-9中任一项所述的化合物或其盐。

12.一种抗肿瘤剂，包括作为活性成分的根据权利要求1-9中任一项所述的化合物或其盐。

13.一种用于治疗或预防癌症的方法，所述方法包括以有效治疗或预防癌症的剂量向哺乳动物施用根据权利要求1-9中任一项所述的化合物或其盐的步骤。

14.根据权利要求1-9中任一项所述的化合物或其盐在制造抗肿瘤剂中的用途。

15.根据权利要求1-9中任一项所述的化合物或其盐，其用于预防或治疗癌症。