ES2580530T3 - Compuesto con anillo fusionado de quinolilpirrolopirimidilo o sal del mismo - Google Patents

Abstract

Compuesto representado por la fórmula (I) siguiente**Fórmula** o sal del mismo, en el que m es 1 o 2; n es 1 o 2; R1 es un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo de C1-C4; y R2, R3, y R4 son iguales o diferentes, y son cada uno un átomo de hidrógeno, un átomo de halógeno, un grupo de alquilo de C1-C4, o un grupo representado por la fórmula (a): -CH2-N(R5)(R6) (a) en la que R5 y R6 son iguales o diferentes, y cada uno representa un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo de C1-C4, o R5 y R6 pueden formar un grupo heterocicloalquilo que presenta un anillo de 4 a 6 miembros, junto con el átomo de nitrógeno unido al mismo.

Description

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DESCRIPCION

Compuesto con anillo fusionado de quinolilpirrolopirimidilo o sal del mismo. Campo tecnico

Referencia cruzada a solicitudes relacionadas

La presente solicitud reivindica la prioridad de la memoria de la solicitud de patente japonesa n° 2012-037565 (cuya descripcion se incorpora en su totalidad como referencia a la presente memoria) presentada el 23 de febrero de 2012.

La presente invencion se refiere a compuestos con anillo condensado de quinolilpirrolopirimidilo que presentan una accion inhibidora contra el receptor del factor de crecimiento epidermico (EGFR), y a composiciones farmaceuticas que los contienen como principio activo.

Antecedentes de la tecnica

La EGFR es una tirosina cinasa de tipo receptor, ejerce su funcion fisiologica en el tejido normal cuando se une al factor de crecimiento epidermico (EGF) que es un ligando, y contribuye al crecimiento, inhibicion de la apoptosis, etc., en los tejidos epiteliales (bibliograffa no de patente (NPL) 1).

Ademas, EGFR es uno de los oncogenes, y la amplificacion del gen de EGFR y la expresion elevada o mutacion de su protefna se observan en diversos tipos de cancer tales como cancer de cabeza y cuello, cancer de mama, cancer colorrectal, cancer de esofago, cancer de pancreas, cancer de pulmon, cancer de ovario, cancer renal, cancer de vejiga, cancer de piel, y tumor cerebral (bibliograffa no de patente (NPL) 2). En Japon y los pafses occidentales, aproximadamente 170 a 375 de cada 100.000 personas perecen debido a cancer cada ano, y el cancer ocupa el primer lugar como una causa de muerte (bibliograffa no de patente (NPL) 3). Sobre todo, el numero de muertes debido a cancer de pulmon alcanza aproximadamente 1.400.000 por ano en todo el mundo, y desde que el cancer de pulmon no microcftico representa el 80% o mas de los canceres de pulmon, se ha deseado desarrollar tratamientos eficaces para este (bibliograffa no de patente (NPL) 4).

En los ultimos anos, los genes responsables de estos canceres estan siendo identificados, y una mutacion en el gen de EGFR es tambien uno de ellos, y da como resultado una protefna EGFR mutada activa. Una protefna EGFR mutada activa es, por ejemplo, una supresion del aminoacido en las posiciones 746-750 (EGFR (d746-750)), una mutacion del aminoacido en la posicion 858 de leucina a arginina (EGFR (L858R)), o similar. Tales mutaciones se dan a conocer, por ejemplo, en 20-40% de los casos de cancer de pulmon no microcftico en Japon, y en 10-15% de casos de cancer de pulmon no microcftico en los pafses occidentales. Ya que el cancer de pulmon no microcftico que tiene estas mutaciones es altamente susceptible contra gefitinib (nombre del producto: Iressa (marca registrada)) y erlotinib (nombre del producto: Tarceva (marca registrada)), que son agentes qufmicos (inhibidores del EGFR) que inhiben la actividad de cinasa de EGFR, estos agentes qufmicos se utilizan como agentes terapeuticos en Japon y pafses occidentales. Sin embargo, el cancer adquiere resistencia contra gefitinib y erlotinib despues de 6 a 12 meses desde el inicio del uso, y el efecto terapeutico se vuelve debil. Por lo tanto, esta resistencia adquirida ha sido un grave problema para el tratamiento del cancer de pulmon no microcftico que tiene un EGFR mutado muy susceptible. Se ha revelado que aproximadamente el 50% de la resistencia adquirida es debido a la aparicion de una protefna EGFR resistente mutada (EGFR (d746-750/T790M) o EGFR (T790M/L858R)) que tiene una segunda mutacion en el gen de EGFR, dando como resultado que el aminoacido en la posicion 790 cambie de treonina a metionina. Ha sido una tarea importante desarrollar un agente terapeutico que es eficaz contra el cancer de pulmon no microcftico que tiene este EGFR mutante resistente a farmacos (bibliograffa no de patente (NPL) 5).

Por otro lado, la anormalidad de la piel y el trastorno digestivo se dan a conocer como efectos secundarios habituales de los inhibidores de EGFR gefitinib y erlotinib, que clfnicamente se utilizan como agentes terapeuticos en el presente, y de inhibidores del EGFR tales como BIBW2992, etc., que estan bajo estudio clfnico. Se cree ampliamente que estos efectos secundarios son causados por los inhibidores de EGFR que inhiben la actividad de no solo un EGFR mutado expresado en cancer de pulmon no microcftico, sino tambien la actividad del EGFR tipo salvaje (EGFR (WT)) expresado en la piel o el tubo digestivo (bibliograffa no de patente (NPL) 1). Desde un punto de vista de la reduccion de los efectos secundarios, se considera que es preferible tener una actividad inhibidora debil contra EGFR (WT) en los tejidos normales.

De este modo, existe una expectativa de suprimir posiblemente el crecimiento de las celulas de cancer de pulmon no microcftico que tienen un EGFR mutado resistente a farmacos a traves de la administracion de un agente qufmico con actividad inhibidora mas debil contra el EGFR de tipo salvaje en comparacion con la actividad inhibidora contra el EGFR mutado resistente a farmacos cuyo aminoacido en la posicion 790 ha mutado a metionina, en una dosis de administracion en la que no aparece fuertemente el efecto secundario a la piel o al tubo digestivo. Se preve que esto contribuya a tratar el cancer y prolongar la vida y mejorar la QOL de los pacientes. Ademas, si el agente qufmico tiene actividad inhibidora debil contra el EGFR de tipo salvaje pero actividad inhibidora fuerte no solo contra EGFR

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mutado resistente a farmacos sino tambien contra EGFRs mutados muy susceptibles tales como el EGFR (d746- 750) y el EGFR (L858R), etc., que son altamente susceptibles contra gefitinib y erlotinib, existe una expectativa de suprimir posiblemente el crecimiento de celulas de cancer de pulmon no microcftico, que expresan un EGFR mutado muy susceptible o un EGFR mutado resistente a farmacos, a una dosis de administracion en la que no aparece fuertemente el efecto secundario en la piel o el tubo digestivo, o la expectativa de reducir posiblemente la frecuencia de EGFR mutado resistente a farmaco que surge, como resistencia adquirida, de celulas de cancer de pulmon no microcftico que expresan un EGFR mutado muy susceptible. Se preve que esto contribuya a tratar el cancer y prolongar la vida y mejorar la QOL de los pacientes. Por otra parte, puesto que las expresiones de EGFR mutado muy susceptible y EGFR mutado resistente a farmacos pueden utilizarse en la escena actual de la terapia como indices para la estratificacion para permitir la seleccion de los pacientes, contribuyen grandemente desde un punto de vista etico.

Como compuesto que presenta una estructura analoga a un compuesto segun la presente invencion, se conoce el derivado de N-(3-(4-amino-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-5-il)fenil)benzamida (bibliograffa de patente (PTL) 1). Aunque la bibliograffa de patente 1 describe como utilizar el compuesto de amida para el tratamiento de enfermedades caracterizadas por la B-RAF cinasa, la bibliograffa no describe ensayos especfficos y resultados de los mismos que corroboran una actividad inhibidora de cinasa, y dicha actividad no esta confirmada.

Listado de referencias

Bibliograffa de patente

PTL 1: Folleto de publicacion internacional n° W02006/102079 Bibliograffa no de patente

NPL 1: Nature Rev. Cancer, vol.6, p. 803-811 (2006)

NPL 2: J. Clin. Oncol., vol.19, 32s-40s (2001)

NPL 3: Pagina principal / datos estadfsticos / estadfsticas mundiales de la Oficina de Estadfstica del Ministerio de Asuntos Internos y Comunicaciones “World Statistics 2011” Capftulo 14 People's Life and Social Security, 14-1 Death Rates by Causes Death.

NPL 4: Lung Cancer, vol.69, p. 1-12 (2010)

NPL 5: Nature Rev. Cancer, vol.10, p. 760-774 (2010)

Sumario de la invencion

Problema tecnico

Como se describe anteriormente, los inhibidores de EGFR, aunque se espera que sean eficaces en la terapia contra el cancer, no son clfnicamente lo suficientemente eficaces en la actualidad.

Por lo tanto, un objetivo de la presente invencion es proporcionar un nuevo compuesto que inhibe fuertemente EGFR, o una sal del mismo. Otro objetivo de la presente invencion es proporcionar: un nuevo compuesto que inhibe EGFR (d746-750), EGFR (L858R), EGFR (d746-750/T790M) y EGFR (T790M/L858R), pero no inhibe EGFR (WT); o una sal del mismo.

Solucion al problema

En el contexto de la presente invencion se ha realizado una investigacion exhaustiva para alcanzar el objetivo descrito anteriormente. Como resultado, se ha descubierto que un grupo de compuestos con anillo condensado de quinolilpirrolopirimidilo de la presente invencion presentan una actividad inhibidora excelente frente a EGFR y presentan una accion inhibidora del crecimiento de celulas cancerosas, y son utiles como medicamento para tratar el cancer, y de ese modo han logrado la presente invencion.

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De este modo, la presente invencion proporciona los siguientes apartados:

Apartado 1. Un compuesto representado por la siguiente Formula (I) o una sal del mismo:

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(En la formula, m es 1 o 2); n es 1 o 2;

R1 es un atomo de hidrogeno o un grupo alquilo de C1-C4; y

R2, R3, y R4 son los mismos o diferentes, y son cada uno un atomo de hidrogeno, un atomo de halogeno, un grupo de alquilo de C1-C4, o un grupo representado por la Formula (a):

-CH2-N(R5)(Ra) (a)

(en la formula, R5 y R6 son los mismos o diferentes, y cada uno representa un atomo de hidrogeno o un grupo alquilo de C1-C4, o R5 y R6 pueden formar un grupo heterocicloalquilo que presenta un anillo de 4 a 6 miembros, junto con el atomo de nitrogeno unido a este).

Apartado 2. El compuesto o una sal del mismo segun el apartado 1, en el que

m es 1 o 2;

n es 1 o 2;

R1 es un atomo de hidrogeno o un grupo alquilo de C1-C4; y

R2, R3, y R4 son los mismos o diferentes, y son cada uno un atomo de hidrogeno, un atomo de halogeno, un grupo de alquilo de C1-C4, o un grupo representado por la Formula (a):

-CH2-N(R5)(R6) (a)

(en la formula, R5 y R6 son los mismos o diferentes, y cada uno representa un grupo alquilo de C1-C4). Apartado 3. El compuesto o una sal del mismo segun el apartado 1 o 2, en el que m es 1 o 2; n es 1 o 2;

R1 es un atomo de hidrogeno o grupo metilo; y

R2, R3, y R4 son los mismos o diferentes, y son cada uno un atomo de hidrogeno, un atomo de cloro, o un grupo dimetilamino metilo.

Apartado 4. El compuesto o una sal del mismo segun uno cualquiera de los apartados 1 a 3, en el que m y n son (m,n) = (1,1), (1,2), o (2,1).

Apartado 5. El compuesto o una sal del mismo segun uno cualquiera de los apartados 1 a 4, en el que el compuesto se selecciona del siguiente grupo de compuestos.

(R)-N-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)acrilamida

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(S)-N-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)acrilamida

N-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)-N-metilacrilamida

(E)-N-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)-4-(dimetilamino)-2-butenamida

(S,E)-N-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)-3-cloroacrilamida

(S,Z)-N-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)-3-cloroacrilamida

(S)-N-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-7,8,9,10-tetrahidro-6H-pirimido[5',4':4,5]pirrolo[1,2-a]azepin-8-il)acrilamida

(S)-N-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-7,8,9,10-tetrahidro-6H-pirimido[5',4':4,5]pirrolo[1,2-a]azepin-9-il)acrilamida

(R)-N-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-7,8,9,10-tetrahidro-6H-pirimido[5',4':4,5]pirrolo[1,2-a]azepin-9-il)acrilamida

Apartado 6. El compuesto o una sal del mismo segun uno cualquiera de los apartados 1 a 5, para uso como un inhibidor de EGFR.

Apartado 7. Una composicion farmaceutica que comprende el compuesto o una sal del mismo segun uno cualquiera de los apartados 1 a 5.

Apartado 8. El compuesto o una sal del mismo segun uno cualquiera de los apartados 1 a 5, para uso como un agente antitumoral.

Apartado 9. no forma parte de la invencion. Un metodo para tratar o prevenir cancer, comprendiendo el metodo una etapa de administrar, a un mamffero, el compuesto o una sal del mismo segun uno cualquiera de los apartados 1 a 5 en una dosis eficaz para tratar o prevenir cancer.

Apartado 10. Uso del compuesto o una sal del mismo segun uno cualquiera de los apartados 1 a 5, en la fabricacion de un agente antitumoral.

Apartado 11. El compuesto o una sal del mismo segun uno cualquiera los apartados 1 a 5, para uso en el tratamiento o prevencion del cancer.

La presente solicitud tambien proporciona un metodo para la produccion de productos intermedios sinteticos del compuesto de la presente invencion especificado en los siguientes apartados.

Apartado 12. Un metodo para producir un compuesto representado por la formula (VIII), o una sal del mismo, comprendiendo el metodo las etapas de:

[I] hacer que un reactivo de organoborano actue sobre un compuesto representado por la formula (VII), o una sal del mismo

imagen2

(en la formula, P1 es un grupo protector de un grupo hidroxi, n es 1 o 2, y ith es 0 o 1); y

[II] provocar la ciclacion intramolecular en un producto de reaccion de la etapa [I] con el uso de un catalizador de paladio (0) y en presencia de un hidroxido de metal alcalino.

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(En la formula, m es 1 o 2, y Pi y n son como se describen anteriormente).

Apartado 13. Un metodo para producir un compuesto representado por la formula (XX), o una sal del mismo,

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(en la formula, R1 es un atomo de hidrogeno o un grupo alquilo de C1-C4, P2 es un grupo protector de un grupo amino, m es 1 o 2, y n es 1 o 2)

comprendiendo el metodo las etapas de:

[I] hacer que un reactivo de organoborano actue sobre un compuesto representado por la formula (XIX), o una sal del mismo

imagen5

(en la formula, R1, P2, y n son como se describio anteriormente, y ith es 0 o 1); y

[II] provocar la ciclacion intramolecular en un producto de reaccion de la etapa [I] con el uso de un catalizador de paladio (0) y en presencia de un hidroxido de metal alcalino.

Efectos ventajosos de la invencion

Segun la presente invencion, se proporciona un nuevo compuesto representado por la formula (I) descrito anteriormente o una sal del mismo util como un inhibidor de EGFR.

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Es evidente que el compuesto de la presente invencion o una sal del mismo tienen excelente actividad de inhibicion de EGFR y un efecto de supresion del crecimiento contra lfneas celulares de cancer. Ademas, el compuesto o una sal del mismo tienen una ventaja de tener efectos secundarios pequenos ya que tienen excelente selectividad contra los EGFR. Por lo tanto, el compuesto o una sal del mismo de la presente invencion son utiles como un agente para tratar y/o prevenir cancer.

Descripcion de las formas de realizacion

El compuesto de formula (I) de acuerdo con la presente invencion es un compuesto de anillo condensado quinolilpirrolopirimidflico que tiene una estructura de quinolina y una estructura de amida a,b-insaturada, y de este modo es un compuesto nuevo no descrito en ninguna otra parte en cualquiera de los documentos de la tecnica anterior mencionados anteriormente, etc.

Especfficamente, el compuesto especfficamente descrito en PTL 1 es un derivado de W-(3-(4-amino-6,7,8,9- tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-5-il)fenil)benzamida. El compuesto de la presente invencion es diferente del compuesto descrito en PTL 1 por cuanto el compuesto de la presente invencion tiene una estructura de quinolina y una estructura de amida a,b-insaturada.

En la presente memoria, el termino “alquilo de C1-C4” se refiere a un grupo alquilo lineal o ramificado que tiene 1 a 4 atomos de carbono. Los ejemplos especfficos del mismo incluyen metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, ferc-butilo y similares.

En la presente memoria, ejemplos del “halogeno” incluyen cloro, bromo, fluor y yodo.

En la presente memoria, el termino “heterocicloalquilo de 4 a 6 miembros” se refiere a un grupo cicloalquilo de 4 a 6 miembros con 1 a 2 atomos de nitrogeno en el anillo. Ejemplos especfficos del mismo incluyen azetidinilo, pirrolidinilo, piperidilo, imidazolidinilo y similares.

m y n en la Formula (I) son preferentemente (m, n) = (1,1), (1,2), o (2,1).

R1 en la Formula (I) es preferentemente hidrogeno o metilo.

R2, R3, y R4 en la Formula (I) pueden ser iguales o diferentes, y cada uno representa preferentemente hidrogeno, halogeno, alquilo de C1-C4, o un grupo representado por la Formula anterior (a). Cuando al menos uno de R2, R3, y R4 en la Formula (I) es un grupo representado por la Formula (a), cada uno de R5 y R6 es preferentemente alquilo de C1-C4, y R5 y R6 son mas preferentemente metilo.

R2 en la Formula (I) es mas preferentemente hidrogeno.

R3 en la Formula (I) es mas preferentemente hidrogeno, cloro o dimetilaminometilo.

R4 en la Formula (I) es mas preferentemente hidrogeno o cloro.

En la presente invencion, resulta preferido el compuesto de formula (I) en el que m es 1 o 2; n es 1 o 2; R1 es hidrogeno o metilo; R2, R3, y R4 son iguales o diferentes y representan hidrogeno, cloro, o dimetilaminometilo, o una sal del mismo.

Cuando m es 1 y n es 1, resulta preferido el compuesto de formula (I) en el que R1 es hidrogeno o metilo; R2 es hidrogeno; uno de R3 y R4 es hidrogeno, cloro, o dimetilaminometilo, y el otro es hidrogeno; o una sal del mismo,.

Cuando m = 1 y n = 2 o m = 2 y n = 1, resulta preferido el compuesto de formula (I) en el que todos de R1, R2, R3, y R4 son hidrogeno, o una sal del mismo.

Los ejemplos concretos de compuestos preferidos de la presente invencion incluyen los siguientes:

(R) -N-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)acrilamida;

(S) -N-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)acrilamida; N-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)-N-metilacrilamida; (E)-N-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)-4-(dimetilamino)-2-butenamida; (S,E)-N-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)-3-cloroacrilamida; (S,Z)-N-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)-3-cloroacrilamida;

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(Etapa a)

Desproteccion

(Etapa f)

(Etapa d)

(Etapa i)

(S)-N-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-7,8,9,10-tetrahidro-6H-pirimido[5’,4’:4,5]pirrolo[1,2-a]azepin-8-il)acrilamida;

(S)-N-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-7,8,9,10-tetrahidro-6H-pirimido[5’,4’:4,5]pirrolo(1,2-a]azepin-9-il)acrilamida; y

(R)-N-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-7,8,9,10-tetrahidro-6H-pirimido[5’,4’:4,5]pirrolo[1,2-a]azepin-9-il)acrilamida.

Resultan preferidos los compuestos que presentan una actividad inhibidora potente de la enzima contra EGFR (T790M/L858R), y resultan mas preferidos los compuestos con una actividad inhibidora de la enzima de 2 nM o menos. Resultan preferidos los compuestos que presentan una actividad inhibidora potente de la enzima contra EGFR (d746-750/T790M), y resultan mas preferidos los compuestos con una actividad inhibidora de la enzima de 2 nM o menos.

A continuacion, se explicara el metodo para producir el compuesto segun la presente invencion:

El compuesto (I) de la presente invencion se puede producir, por ejemplo, por los siguientes metodos de produccion o los metodos descritos en los ejemplos. Sin embargo, el metodo para producir el compuesto (I) de la presente invencion no se limita a estos ejemplos de reaccion.

Metodo de produccion 1

B(OH)2

(Etapa

ch3so2ci

(Etapa g)

Amidacion

(Etapa j)

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(en el que Pi es un grupo protector de un grupo hidroxi, Li y L2 son grupos salientes, mi es 0 a 1; y R2, R3, R4, m,

y n son como se definieron anteriormente).

(Etapa a)

En esta etapa, los compuestos de las formulas (II) y (III) se utilizan en presencia de una base para producir el compuesto de formula (IV).

Los ejemplos del grupo saliente representado por Li en el compuesto de formula (II) incluyen un atomo de bromo o yodo. El compuesto de formula (II) puede ser un producto comercialmente disponible, o puede ser producido por un metodo conocido. Ejemplos del grupo protector de un grupo hidroxi representado por Pi en la formula (III) incluyen terc-butildimetilsililo, terc-butildifenilsililo, trietilsililo, y similares. Ejemplos de grupos salientes representados por L2 incluyen bromo, yodo, ester del acido metanosulfonico, ester del acido p-toluenosulfonico, y similares. El compuesto de formula (III) puede ser un producto comercialmente disponible, o se puede producir segun un metodo conocido. El compuesto de formula (III) puede utilizarse en una cantidad de i a i0 moles, y preferentemente de i a 5 moles, por mol del compuesto de formula (II).

Los ejemplos de bases utilizables incluyen bases inorganicas tales como hidrogenocarbonato de sodio, carbonato de sodio, carbonato de potasio, carbonato de cesio, hidroxido de cesio, hidruro de sodio e hidruro de potasio; y aminas organicas como trimetilamina, trietilamina, tripropilamina, diisopropiletilamina, W-metilmorfolina, piridina, 4-(W,W- dimetilamino)piridina, lutidina, y colidina. Tal base puede ser usada en una cantidad de i a i00 moles, y preferentemente i a i0 moles, por mol del compuesto de formula (II).

Los ejemplos de disolventes usables incluyen W,W-dimetilformamida, W,W-dimetilacetamida, dimetil sulfoxido, tetrahidrofurano, i,4-dioxano, W-metilpirrolidin-2-ona, acetonitrilo, y similares. Dichos disolventes pueden utilizarse por separado o como una mezcla. El tiempo de reaccion es 0,i a i00 horas, y preferentemente 0,5 a 24 horas. La temperatura de reaccion es 0°C hasta la temperatura de ebullicion del disolvente, y preferentemente 0 a i00°C.

El compuesto asf obtenido de formula (IV) puede ser sometido a la etapa subsiguiente despues o sin aislamiento o purificacion por medios de separacion y purificacion conocidos, tales como concentracion, concentracion a vacfo, cristalizacion, extraccion con disolventes, reprecipitacion, y cromatograffa.

(Etapa b)

En esta etapa, el compuesto de formula (IV) reacciona con amonfaco o una sal del mismo para producir el compuesto de formula (V).

La cantidad de amonfaco o una sal del mismo utilizada en esta etapa es tfpicamente una cantidad equimolar a molar excesiva del compuesto de formula (IV).

Se puede usar cualquier disolvente de reaccion que no afecte de forma adversa la reaccion. Ejemplos de disolventes de reaccion usables incluyen agua, metanol, etanol, isopropanol, alcohol ferc-butflico, tetrahidrofurano, i,2- dimetoxietano, i,4-dioxano, W,W-dimetilformamida, W-metilpirrolidin-2-ona, dimetil sulfoxido y disolventes mixtos de los mismos.

La temperatura de reaccion es normalmente 0 a 200°C, y preferentemente temperatura ambiente a i50°C. El tiempo de reaccion es normalmente 5 minutos a 7 dfas, y preferentemente 30 minutos a 24 horas.

El compuesto asf obtenido de formula (V) puede ser sometido a la etapa subsiguiente despues o sin aislamiento y purificacion por medios de separacion y purificacion conocidos, tales como concentracion, concentracion a vacfo, cristalizacion, extraccion con disolventes, reprecipitacion, y cromatograffa.

(Etapa c)

En esta etapa, el compuesto de formula (V) se somete a una reaccion de acoplamiento con el acido 3- quinolinboronico o ester del acido 3-quinolinboronico para producir el compuesto de formula (VI).

Esta etapa puede realizarse segun un metodo generalmente conocido (por ejemplo, Chemical Reviews, Vol. 95, p. 2457, i995). Por ejemplo, esta etapa puede realizarse en presencia de un catalizador de metal de transicion y una base en un disolvente que no afecte negativamente a la reaccion.

La cantidad de acido 3-quinolinboronico o ester del acido 3-quinolinboronico usada puede ser i a i0 moles, y preferentemente i a 3 moles, por mol del compuesto de formula (V).

Los ejemplos de catalizadores de metales de transicion incluyen catalizadores de paladio (por ejemplo, acetato del

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paladio, cloruro de paladio, tetraquistrifenilfosfina paladio, dicloruro de 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno-paladio (II) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0)), catalizadores de nfquel (por ejemplo, cloruro de nfquel), y similares. Si es necesario, puede anadirse un ligando (por ejemplo, trifenilfosfina, tri-ferc-butilfosfina o 2-diciclohexilfosfino-2',4',6'- triisopropilbifenilo), y un oxido de metal (tal como oxido de cobre u oxido de plata) puede ser utilizado como un co- catalizador. La cantidad del catalizador de metal de transicion usada puede variar dependiendo del tipo de catalizador. El catalizador de metal de transicion se utiliza tfpicamente en una cantidad de 0,0001 a 1 mol, y preferentemente 0,01 a 0,5 moles, por mol del compuesto de formula (V). La cantidad del ligando utilizado es tfpicamente 0,0001 a 4 moles, y preferentemente 0,01 a 2 moles, por mol del compuesto de formula (V). La cantidad del co-catalizador utilizada es tfpicamente 0,0001 a 4 moles, y preferentemente 0,01 a 2 moles, por mol del compuesto de formula (V).

Los ejemplos de bases utilizables incluyen aminas organicas (por ejemplo, trimetilamina, trietilamina, diisopropiletilamina, W-metilmorfolina, 1,8-diazabiciclo[5,4,0]undec-7-eno, piridina, y W,W-dimetilanilina), sales de metales alcalinos (por ejemplo, hidrogenocarbonato de sodio, hidrogenocarbonato de potasio, carbonato de sodio, carbonato de potasio, carbonato de cesio, fosfato de sodio, fosfato de potasio, hidroxido de sodio, e hidroxido de potasio), hidruros metalicos (por ejemplo, hidruro de potasio e hidruro de sodio), alcoxidos de metal alcalino (por ejemplo, metoxido de sodio, etoxido de sodio, terc-butoxido de sodio, y terc-butoxido de potasio), disilazidas de metales alcalinos (por ejemplo, disilazida de litio, disilazida de sodio, y disilazida de potasio), y similares. Entre ellos, son preferibles las sales de metales alcalinos tales como carbonato de sodio, carbonato de potasio, carbonato de cesio, fosfato de sodio, y fosfato de potasio; alcoxidos de metal alcalino como ferc-butoxido de sodio y terc-butoxido de potasio; y aminas organicas tales como trietilamina y diisopropiletilamina. La cantidad de la base utilizada es tfpicamente 0,1 a 10 moles, y preferentemente 1 a 5 moles, por mol del compuesto de formula (V).

Se puede usar cualquier disolvente que no afecte de forma adversa la reaccion. Los ejemplos de disolventes usables incluyen hidrocarburos (por ejemplo, benceno, tolueno, y xileno), hidrocarburos halogenados (por ejemplo, cloroformo y 1,2-dicloroetano), nitrilos (por ejemplo, acetonitrilo), eteres (por ejemplo, 1,2-dimetoxietano, tetrahidrofurano, y 1,4-dioxano), alcoholes (por ejemplo, metanol y etanol), disolventes aproticos polares (por ejemplo, W,W-dimetilformamida, dimetil sulfoxido y hexametil fosforil amida), agua, y disolventes mixtos de los mismos. El tiempo de reaccion es 0,1 a 100 horas, y preferentemente 0,5 a 24 horas. La temperatura de reaccion es 0°C a la temperatura de ebullicion del disolvente, y preferentemente 20 a 150°C.

El compuesto asf obtenido de formula (VI) puede ser sometido a la etapa subsiguiente despues o sin aislamiento y purificacion por medios de separacion y purificacion conocidos, tales como concentracion, concentracion a vacfo, cristalizacion, extraccion con disolventes, reprecipitacion, y cromatograffa.

(Etapa d)

En esta etapa, el compuesto (VI) es bromado con W-bromosuccinimida para producir el compuesto (VII).

La halogenacion puede realizarse mediante el metodo descrito en el documento WO 2006/102079, o por un metodo similar al mismo.

La cantidad de W-bromosuccinimida utilizada en esta etapa es de 0,5 a 2,0 moles, y preferentemente de 0,9 a 1,2 moles, por mol del compuesto de formula (VI).

Se puede usar cualquier disolvente de reaccion que no afecte de forma adversa la reaccion. Por ejemplo, preferentemente puede utilizarse tetrahidrofurano, 1,4-dioxano, W,W-dimetilformamida, W-metilpirrolidin-2-ona, o un disolvente mezclado de los mismos.

La temperatura de reaccion es normalmente -20 a 50°C, y preferentemente 0°C a temperatura ambiente. El tiempo de reaccion es tfpicamente 1 minuto a 2 dfas, y preferentemente 5 minutos hasta 12 horas.

El compuesto asf obtenido de formula (VII) puede ser sometido a la etapa subsiguiente despues o sin aislamiento o purificacion por medios de separacion y purificacion conocidos, tales como concentracion, concentracion a vacfo, cristalizacion, extraccion con disolventes, reprecipitacion, y cromatograffa.

(Etapa e)

En esta etapa, se deja actuar un reactivo organico de borano sobre el compuesto de formula (VII) para preparar un intermedio de alquil borano en el sistema, y el intermedio se convierte en un compuesto de formula (VIII) en presencia de un catalizador de metal de transicion y una base.

Esta etapa puede realizarse de acuerdo con un metodo generalmente conocido (por ejemplo, documento WO 2006/102079).

Los ejemplos de reactivos organicos de borano incluyen 9-BBN (9-borabiciclo[3.3.1]-nonano), dfmero de 9-BBN (9-

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borabiciclo[3.3.1]-nonano), disiamilborano(bis(1,2-dimetilpropil)borano), hexilborano(1,1,2-trimetilpropil)borano), y similares. El reactivo organico de borano es preferentemente 9-BBN (9-borabiciclo[3.3.1]-nonano) o dfmero de 9- BBN (9-borabiciclo[3.3.1]-nonano), y particularmente preferentemente 9-BBN (9-borabiciclo[3.3.1]-nonano). La cantidad del reactivo organico de borano utilizada no esta particularmente limitada en tanto que se pueda producir un intermedio de alquil borano. El reactivo organico de borano puede ser utilizado en una cantidad de 1 a 20 moles por mol del compuesto de formula (VII); la cantidad del reactivo organico de borano es preferentemente 6 a 10 moles desde el punto de vista de facilitar el progreso de la reaccion.

Como un catalizador de metal de transicion, por ejemplo, se puede utilizar un catalizador de paladio bivalente (por ejemplo, acetato de paladio, cloruro de paladio, y dicloruro de 1, 1 '-bis (difenilfosfino)ferroceno paladio (II)). Si es necesario, puede utilizarse un ligando (por ejemplo, trifenilfosfina y tri-terc-butilfosfina). La cantidad del catalizador de metal de transicion usada puede variar dependiendo del tipo de catalizador. El catalizador de metal de transicion se utiliza tfpicamente en una cantidad de 0,0001 a 1 mol, y preferentemente 0,01 a 0,5 moles, por mol del compuesto de formula (VII). El ligando se utiliza tfpicamente en una cantidad de 0,0001 a 4 moles, y preferentemente 0,01 a 2 moles, por mol del compuesto de formula (VII).

Alternativamente, por ejemplo, puede utilizarse un catalizador de paladio de valencia cero. Ejemplos de catalizadores de paladio de valencia cero incluyen tetraquistrifenilfosfina paladio (0), tris(dibencilidenacetona) dipaladio (0), paladio carbono (0), y similares. Es preferible tetraquistrifenilfosfina paladio (0) o tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0), y es particularmente preferible tetraquistrifenilfosfina paladio (0). La cantidad de catalizador de paladio de valencia cero utilizada no esta particularmente limitada en tanto que transcurra la reaccion de ciclacion intramolecular, y puede variar dependiendo del tipo de catalizador. El catalizador de paladio de valencia cero puede utilizarse en una cantidad de 0,0001 a 1 mol, y preferentemente 0,01 a 0,5 moles, por mol del compuesto de formula (VII).

Si es necesario, puede anadirse un ligando con un catalizador de paladio de valencia cero. Ejemplos de dichos ligandos incluyen trifenilfosfina, 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno, tri-terc-butilfosfina, triciclohexilfosfina, 2- diciclohexilfosfino-2',6'-dimetoxibifenilo, 2-diciclohexilfosfino-2',4',6'-triisopropilbifenilo, 2-(di-ferc-butilfosfino)bifenilo, 2-diciclohexilfosfino-2’-(W,W-dimetilamino)bifenilo, 4,5'-bis(difenilfosfino)-9,9'-dimetilxanteno, y similares.

Cuando se utiliza tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) como un catalizador de paladio de valencia cero, puede anadirse trifenilfosfina como un ligando. La cantidad del ligando utilizada no esta particularmente limitada en tanto que pueda transcurrir la reaccion de ciclacion intramolecular. El ligando puede utilizarse en una cantidad de 0,0001 a 4 moles, y preferentemente 0,01 a 2 moles, por mol del compuesto de formula (VII).

Los ejemplos de bases incluyen bases inorganicas tal como hidrogenocarbonato de sodio, carbonato de sodio, carbonato de potasio, carbonato de cesio, e hidroxidos de metales alcalinos. Son preferibles hidroxidos de metales alcalinos. Ejemplos de hidroxidos de metales alcalinos incluyen hidroxido de litio, hidroxido de sodio, hidroxido de potasio, e hidroxido de cesio. Se utiliza preferentemente hidroxido de litio, hidroxido de sodio, hidroxido de potasio, o hidroxido de cesio. Es particularmente preferible hidroxido de sodio o hidroxido de litio. La cantidad de la base utilizada no esta particularmente limitada en tanto que transcurra la reaccion. La base puede ser utilizada en una cantidad de 1 a 100 moles, y preferentemente 2 a 20 moles, por mol del compuesto de formula (VII). Puede utilizarse hidroxido de metal alcalino en forma de una disolucion acuosa de hidroxido de metal alcalino.

Como la combinacion de un reactivo organico de borano, un hidroxido de metal alcalino y un catalizador de paladio de valencia cero, es preferible una combinacion de un reactivo organico de borano preferido, un hidroxido de metal alcalino preferible, y un catalizador de paladio de valencia cero preferido. Es particularmente preferible una combinacion de un reactivo organico de borano particularmente preferible, un hidroxido de metal alcalino particularmente preferido, y un catalizador de paladio de valencia cero particularmente preferido.

Se puede usar cualquier disolvente que no afecte de forma adversa la reaccion. Sus ejemplos incluyen hidrocarburos (por ejemplo, benceno, tolueno, y xileno), eteres (por ejemplo, 1,2-dimetoxietano, tetrahidrofurano, y 1,4-dioxano), disolventes aproticos polares (por ejemplo, N,N-dimetilformamida, dimetil sulfoxido, y hexametil fosforil amida), agua, y sus mezclas. Se utiliza preferentemente 1,2-dimetoxietano o tetrahidrofurano. Es particularmente preferido tetrahidrofurano desde el punto de vista de la estabilidad del reactivo organico de borano y el intermedio de alquilborano generado. La cantidad del disolvente utilizado no esta particularmente limitada en tanto que transcurra la reaccion. El disolvente puede utilizarse en una cantidad que es de 1 a 300 veces, y preferentemente 10 a 96 veces, el peso del compuesto de formula (VII).

El tiempo de reaccion no esta particularmente limitado en tanto que se pueda obtener el compuesto de formula (VIII). El tiempo de reaccion puede ser 0,1 a 100 horas, y preferentemente 0,5 a 24 horas.

La temperatura de la reaccion no esta particularmente limitada en tanto que pueda obtenerse finalmente el compuesto de formula (VIII). La temperatura de reaccion puede ser -20°C a la temperatura de ebullicion del disolvente, y preferentemente 0 a 150°C. En la reaccion de ciclacion intramolecular del intermedio de alquilborano usando un catalizador de paladio de valencia cero y una disolucion acuosa de hidroxido de metal alcalino, una

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temperatura de reaccion baja tiende a causar reacciones secundarias, que dan como resultado un bajo rendimiento. Por lo tanto, la temperatura es preferentemente 61°C o mas alta.

El compuesto asf obtenido de formula (VIII) puede ser sometido a la etapa subsiguiente despues o sin aislamiento y purificacion por medios de separacion y purificacion conocidos, tales como concentracion, concentracion a vacfo, cristalizacion, extraccion con disolventes, reprecipitacion, y cromatograffa.

En esta etapa, puede confirmarse la generacion de un intermedio de alquilborano en el sistema. Por ejemplo, pueden utilizarse espectros LCMS como el metodo de confirmacion.

(Etapa f)

En esta etapa, el grupo hidroxilo protegido del compuesto de formula (VIII) es desprotegido para producir el compuesto de formula (IX).

La desproteccion puede realizarse mediante un metodo conocido, tal como el metodo descrito en Protective Groups in Organic Synthesis, T.W. Greene, John Wiley & Sons (1981); o un metodo similar al mismo.

Cuando se utiliza terc-butildimetilsililo como un grupo protector, se utiliza fluoruro de tetrabutil amonio como un reactivo de desproteccion. La cantidad del reactivo utilizada es preferentemente 1 a 10 moles por mol del compuesto (VIII).

Se puede usar cualquier disolvente que no afecte de forma adversa la reaccion. Los ejemplos de disolventes usables incluyen eteres (por ejemplo, 1,2-dimetoxietano y tetrahidrofurano), disolventes polares aproticos (por ejemplo, N,N-dimetilformamida, dimetil sulfoxido, y hexametil fosforil amida), y sus disolventes mixtos. El tiempo de reaccion es 0,1 a 100 horas, y preferentemente 0,5 a 24 horas. La temperatura de reaccion es 0 a 80°C, y preferentemente 0 a 50°C.

El compuesto asf obtenido de formula (IX) puede ser sometido a la etapa subsiguiente despues o sin aislamiento y purificacion por medios de separacion y purificacion conocidos, tales como concentracion, concentracion a vacfo, cristalizacion, extraccion con disolventes, reprecipitacion, y cromatograffa.

(Etapa g)

En esta etapa, se deja actuar cloruro de metanosulfonilo sobre el compuesto de formula (IX) para producir el compuesto de formula (X).

La cantidad de cloruro de metanosulfonilo utilizada puede ser 1 a 5 moles, y mas preferentemente 1 a 2 moles, por mol del compuesto de formula (IX).

Los ejemplos de bases utilizables incluyen aminas organicas tal como trimetilamina, trietilamina, tripropilamina, diisopropiletilamina, W-metilmorfolina, piridina, 4-(W,W-dimetilamino)piridina, lutidina, y colidina. Dicha base puede utilizarse en una cantidad de 1 a 10 moles, y preferentemente 1 a 5 moles, por mol del compuesto de formula (IX).

Se puede usar cualquier disolvente que no afecte de forma adversa la reaccion. Los ejemplos de disolventes usables incluyen hidrocarburos (por ejemplo, benceno, tolueno, y xileno), hidrocarburos halogenados (por ejemplo, cloroformo y 1,2-dicloroetano), nitrilos (por ejemplo, acetonitrilo), eteres (por ejemplo, 1,2-dimetoxietano, tetrahidrofurano, y 1,4-dioxano), alcoholes (por ejemplo, metanol y etanol), disolventes aproticos polares (por ejemplo, W,W-dimetilformamida, dimetil sulfoxido, y hexametilfosforamida), y sus disolventes mixtos. El tiempo de reaccion es 0,1 a 24 horas, y preferentemente 0,1 a 12 horas. La temperatura de reaccion es -20°C a la temperatura de ebullicion del disolvente, y preferentemente 0°C a temperatura ambiente.

El compuesto asf obtenido de formula (X) puede ser sometido a la etapa subsiguiente despues o sin aislamiento o purificacion por medios de separacion y purificacion conocidos, tales como concentracion, concentracion a vacfo, cristalizacion, extraccion con disolventes, reprecipitacion, y cromatograffa.

(Etapa h)

En esta etapa, se deja actuar azida de sodio sobre el compuesto de formula (X) para producir el compuesto de formula (XI).

La azida sodica puede utilizarse en una cantidad de 1 a 10 moles, y preferentemente 1 a 5 moles, por mol del compuesto de formula (X).

Se puede usar cualquier disolvente que no afecte de forma adversa la reaccion. Los ejemplos de disolventes usables incluyen W,W-dimetilformamida, dimetil sulfoxido, hexametil fosforil amida, y sus disolventes mixtos. El

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tiempo de reaccion es 0,1 a 24 horas, y preferentemente 0,5 a 12 horas. La temperatura de reaccion es temperatura ambiente a la temperatura de ebullicion del disolvente, y preferentemente 50 a 100°C.

El compuesto asf obtenido de formula (XI) puede ser sometido a la etapa subsiguiente despues o sin aislamiento o purificacion por medios de separacion y purificacion conocidos, tales como concentracion, concentracion a vacfo, cristalizacion, extraccion con disolventes, reprecipitacion, y cromatograffa.

(Etapa i)

En esta etapa, el compuesto de formula (XI) se hace reaccionar en presencia de trifenilfosfino en un disolvente acuoso para producir el compuesto de formula (XII).

La trifenilfosfina puede ser un reactivo utilizado comunmente o un reactivo soportado por un solido. La cantidad de trifenilfosfina utilizada puede ser 1 a 10 moles, y preferentemente 1 a 5 moles, por mol del compuesto de formula (XI).

Se puede usar cualquier disolvente que no afecte de forma adversa la reaccion. Los ejemplos de disolventes que pueden utilizarse incluyen tetrahidrofurano/agua, 1,4-dioxano/agua, y similares. El tiempo de reaccion es 0,1 a 24 horas, y preferentemente 0,5 a 12 horas. La temperatura de reaccion es la temperatura ambiente a la temperatura de ebullicion del disolvente, y preferentemente 50°C a la temperatura de ebullicion del disolvente.

El compuesto asf obtenido de formula (XII) puede ser sometido a la etapa subsiguiente despues o sin aislamiento o purificacion por medios de separacion y purificacion conocidos, tales como concentracion, concentracion a vacfo, cristalizacion, extraccion con disolventes, reprecipitacion, y cromatograffa.

(Etapa j)

En esta etapa, el compuesto de formula (XII) es amidado con un acido carboxflico a,b-insaturado o un cloruro o bromuro de acido a,b-insaturado para producir el compuesto de formula (I-a) de acuerdo con la presente invencion.

Cuando un acido carboxflico es utilizado como un reactivo de amidacion, el acido carboxflico puede utilizarse en una cantidad de 0,5 a 10 moles, preferentemente 1 a 3 moles, por mol del compuesto de formula (XII), en presencia de un agente de condensacion adecuado. El acido carboxflico puede ser un producto disponible comercialmente, o se puede producir de acuerdo con un metodo conocido.

Se puede usar cualquier disolvente de reaccion que no afecte de forma adversa a la reaccion. Los ejemplos de disolventes usables incluyen tolueno, benceno, cloruro de metileno, cloroformo, tetrahidrofurano, 1,4-dioxano, N,N- dimetilformamida, dimetilacetamida, N-metilpirrolidin-2-ona, dimetil sulfoxido, y sus disolventes mixtos. La temperatura de reaccion es normalmente -78 a 200°C, y preferentemente 0 a 50°C. El tiempo de reaccion es normalmente 5 minutos a 3 dfas, y preferentemente 5 minutos a 10 horas.

Los ejemplos de agentes de condensacion incluyen difenilfosforil azida, N,N-diciclohexilcarbodiimida, sales de benzotriazol-1-iloxi-trisdimetilaminofosfonio, cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-1,3,5-triazin-2-il)-4-metilmorfolinio, 1-etil-3-(3- dimetilaminopropil)carbodiimida, una combinacion de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida y 1- hidroxibenzotriazol, cloruro de 2-cloro-1,3-dimetilimidazolinio, hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazo-1-il)- N,N,N',N'-tetrametilhexauronio, y similares.

Si es necesario, puede anadirse opcionalmente una base para la reaccion. Los ejemplos de bases que pueden utilizarse incluyen bases organicas tal como trietilamina, diisopropiletilamina, piridina, lutidina, colidina, 4-(N,N- dimetilamino)piridina, terc-butirato de potasio, ferc-butirato de sodio, metoxido de sodio, etoxido de sodio, hexametildisilazida de litio, hexametildisilazida de sodio, hexametildisilazida de potasio. y butil-litio; y bases inorganicas tales como hidrogenocarbonato de sodio, carbonato de sodio, carbonato de potasio, carbonato de cesio, hidroxido de sodio, e hidruro de sodio. Dicha base puede ser anadida en una cantidad de 1 a 100 moles, y preferentemente 1 a 10 moles, por mol del compuesto de formula (XII).

Cuando un cloruro de acido o bromuro de acido se utiliza como reactivo de amidacion, el haluro de acido se utiliza en una cantidad de 0,5 a 5 moles, y preferentemente 0,9 a 1,1 moles, por mol del compuesto de formula (XII). El haluro de acido puede ser un producto disponible comercialmente, o se puede producir de acuerdo con un metodo conocido.

Se puede usar cualquier disolvente de reaccion que no afecte de forma adversa la reaccion. Sus ejemplos incluyen tolueno, benceno, cloruro de metileno, cloroformo, tetrahidrofurano, 1,4-dioxano, N,N-dimetilformamida, dimetilacetamida, N-metilpirrolidin-2-ona, acetonitrilo, agua, y sus disolventes mixtos. La temperatura de reaccion es normalmente -78 a 200°C, preferentemente 0 a 50°C. El tiempo de reaccion es normalmente 5 minutos a 3 dfas, y preferentemente 5 minutos a 10 horas.

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Si es necesario, puede anadirse una base a la reaccion. Los ejemplos de bases que pueden utilizarse incluyen bases organicas tal como trietilamina, diisopropiletilamina, piridina, lutidina, colidina, 4-(W,W-dimetilamino)piridina, ferc-butirato de potasio, ferc-butirato de sodio, metoxido de sodio, etoxido de sodio, hexametildisilazida de litio, hexametildisilazida de sodio, hexametildisilazida de potasio, y butil-litio; y bases inorganicas tales como hidrogenocarbonato de sodio, carbonato de sodio, carbonato de potasio, carbonato de cesio, hidroxido de sodio, e hidruro de sodio. Dicha base puede ser anadida en una cantidad de 1 a 100 moles, y preferentemente 1 a 20 moles, por mol del compuesto de formula (XII).

El compuesto asf obtenido de formula (I-a) puede ser aislado y purificado por medios de separacion y purificacion conocidos, tales como concentracion, concentracion a vacfo, cristalizacion, extraccion con disolventes, reprecipitacion, y cromatograffa.

[Qufm. 7]

Metodo de produccion 2

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(Etapa k)

En esta etapa, una alquilamina se deja reaccionar en el compuesto de formula (X) para producir el compuesto de formula (XIV).

La cantidad de la alquilamina usada es 2 moles a una cantidad molar en exceso por mol del compuesto de formula (X).

Se puede usar cualquier disolvente que no afecte de forma adversa la reaccion. Sus ejemplos incluyen hidrocarburos (por ejemplo, benceno, tolueno, y xileno), hidrocarburos halogenados (por ejemplo, cloroformo y 1,2- dicloroetano), nitrilos (por ejemplo, acetonitrilo), eteres (por ejemplo, 1,2-dimetoxietano, tetrahidrofurano, y 1,4- dioxano), disolventes aproticos polares (por ejemplo, W,W-dimetilformamida, dimetil sulfoxido, y hexametil fosforil amida), y sus disolventes mixtos. El tiempo de reaccion es 0,1 a 100 horas, y preferentemente 1 a 24 horas. La temperatura de reaccion es la temperatura ambiente a la temperatura de ebullicion del disolvente, y preferentemente 50°C a la temperatura de ebullicion del disolvente.

El compuesto asf obtenido de formula (XIV) puede ser sometido a la etapa subsiguiente despues o sin aislamiento o purificacion por medios de separacion y purificacion conocidos, tales como concentracion, concentracion a vacfo, cristalizacion, extraccion con disolventes, reprecipitacion, y cromatograffa.

(Etapa l)

Esta etapa puede realizarse de la misma manera como en la etapa j.

Metodo de produccion 3

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5 (en el que P2 es un grupo protector de un grupo amino, L1 es un grupo saliente, ml es 0 o 1; y R1, R2, R3, R4, m y

n son como se definen anteriormente).

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(Etapa m)

En esta etapa, los compuestos de formulas (II) y (XV) se someten a una reaccion de Mitsunobu para producir el compuesto de formula (XVI).

En el compuesto de formula (II), el grupo saliente representado por Li puede ser, por ejemplo, un atomo de bromo o yodo. El compuesto de formula (II) puede ser un producto comercialmente disponible, o se puede producir de acuerdo con un metodo conocido. En la formula (XV), el grupo protector de un grupo amino representado por P2 puede ser, por ejemplo, ferc-butoxicarbonilo o benzoflo. El compuesto de formula (XV) puede ser un producto comercialmente disponible, o se puede producir de acuerdo con un metodo conocido. El compuesto de formula (XV) puede utilizarse en una cantidad de 1 a 10 moles, y preferentemente 1 a 5 moles, por mol del compuesto de formula (II).

La reaccion de Mitsunobu puede realizarse mediante un metodo generalmente conocido (por ejemplo, Synthesis, p. 1, 1981), o un metodo similar al mismo.

Los ejemplos de esteres del acido azodicarboxflico incluyen azodicarboxilato de dietilo y azodicarboxilato de diisopropilo. Dicho ester del acido azodicarboxflico puede utilizarse en una cantidad de 1 a 10 moles, y preferentemente 1 a 5 moles, por mol del compuesto de formula (II).

Como el compuesto de fosfina, puede utilizarse trifenilfosfina, tributilfosfina, o similar. El compuesto de fosfina puede utilizarse en una cantidad de 1 a 10 moles, y preferentemente 1 a 5 moles, por mol del compuesto de formula (II).

Como un disolvente, pueden utilizarse tetrahidrofurano, 1,2-dimetoxietano, 1,4-dioxano, tolueno, N,N- dimetilformamida, N,N-dimetilacetamida, dimetil sulfoxido, N-metilpirrolidin-2-ona, o similares, por separado, o como una mezcla de los mismos. El tiempo de reaccion es 0,1 a 100 horas, y preferentemente 0,1 a 24 horas. La temperatura de reaccion es 0°C a la temperatura de ebullicion del disolvent, y preferentemente 0 a 100°C.

El compuesto asf obtenido de formula (XVI) puede ser sometido a la etapa subsiguiente despues o sin aislamiento o purificacion por medios de separacion y purificacion conocidos, tales como concentracion, concentracion a vacfo, cristalizacion, extraccion con disolventes, reprecipitacion, y cromatograffa.

(Etapa n)

En esta etapa, el compuesto de formula (XVI) se hace reaccionar con amonfaco o su sal para producir el compuesto de formula (XVII).

Esta etapa puede realizarse de la misma manera como en la etapa b.

El compuesto asf obtenido de formula (XVII) puede ser sometido a la etapa subsiguiente despues o sin aislamiento o purificacion por medios de separacion y purificacion conocidos, tales como concentracion, concentracion a vacfo, cristalizacion, extraccion con disolventes, reprecipitacion, y cromatograffa.

(Etapa o)

En esta etapa, el compuesto de formula (XVII) se somete a una reaccion de acoplamiento con el acido 3- quinolinboronico o un ester del acido 3-quinolinboronico para producir el compuesto de formula (XVIII).

Esta etapa puede realizarse de la misma manera como en la etapa c.

El compuesto asf obtenido de formula (XVIII) puede ser sometido a la etapa subsiguiente despues o sin aislamiento o purificacion por medios de separacion y purificacion conocidos, tales como concentracion, concentracion a vacfo, cristalizacion, extraccion con disolventes, reprecipitacion, y cromatograffa.

(Etapa p)

En esta etapa, el compuesto (XVIII) es bromado con N-bromosuccinimida para producir el compuesto de formula (XIX).

Esta etapa puede realizarse de la misma manera como en la etapa d. El compuesto asf obtenido de formula (XIX) puede ser sometido a la etapa subsiguiente despues o sin aislamiento o purificacion por medios de separacion y purificacion conocidos, tales como concentracion, concentracion del vacfo, cristalizacion, extraccion con disolventes, reprecipitacion, y cromatograffa.

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(Etapa q)

En esta etapa, despues de que se deja actuar un reactivo organico de borano sobre el compuesto de formula (XIX) y se produce en el sistema un intermedio alquilborano, el compuesto de formula (XX) se produce en presencia de un catalizador de metal de transicion y una base.

Esta etapa puede realizarse de acuerdo con un metodo generalmente conocido (por ejemplo, documento W02006/102079).

Los ejemplos de reactivos organicos de borano incluyen 9-BBN (9-borabiciclo[3.3.1]-nonano), dfmero de 9-BBN (9- borabiciclo[3.3.1]-nonano), disiamilborano(bis(1,2-dimetilpropil)borano), hexilborano((1,1,2-trimetilpropil)borano), y similares. Se utilizan preferentemente 9-BBN (9-borabiciclo[3.3.1]-nonano) o dfmero de 9-BBN (9-borabiciclo[3.3.1]- nonano). Es particularmente preferido el 9-BBN (9-borabiciclo[3.3.1]-nonano). La cantidad del reactivo organico de borano utilizada no esta particularmente limitada, en tanto que se produzca un intermedio de alquilborano. El reactivo organico de borano puede utilizarse en una cantidad de 1 a 20 moles por mol del compuesto de formula (XIX). A fin de facilitar el progreso de la reaccion, la cantidad del reactivo organico de borano es preferentemente 6 a 10 moles por mol del compuesto de formula (XIX).

Los ejemplos de catalizadores de metal de transicion incluyen catalizadores de paladio bivalente (por ejemplo, acetato de paladio, cloruro de paladio, y dicloruro de 1, 1 '-bis (difenilfosfino)ferroceno paladio (II)). Si es necesario, puede anadirse un ligando (por ejemplo, trifenilfosfina y tri-terc-butilfosfina). La cantidad del catalizador de metal de transicion usada puede variar dependiendo del tipo de catalizador. El catalizador de metal de transicion se utiliza tfpicamente en una cantidad de 0,0001 a 1 mol, y preferentemente 0,01 a 0,5 moles, por mol del compuesto de formula (XIX). La cantidad del ligando utilizada es tfpicamente 0,0001 a 4 moles, y preferentemente 0,01 a 2 moles, por mol del compuesto de formula (XIX).

Como un catalizador de metal de transicion, por ejemplo, tambien puede ser utilizado un catalizador de paladio de valencia cero. Los ejemplos de catalizadores de paladio de valencia cero utilizables incluyen tetraquistrifenilfosfina paladio (0), tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0), y paladio carbono (0). Se utiliza preferentemente tetraquistrifenilfosfina paladio (0) o tris(dibencilidenacetona) (0). Es particularmente preferido el tetraquistrifenilfosfina paladio (0). La cantidad del catalizador de paladio de valencia cero utilizado no esta particularmente limitada en tanto que pueda transcurrir la reaccion de ciclacion intramolecular. La cantidad del catalizador de paladio de valencia cero usada puede variar dependiendo del tipo de catalizador. El catalizador de paladio de valencia cero puede utilizarse en una cantidad de 0,0001 a 1 mol, y preferentemente 0,01 a 0,5 moles, por mol del compuesto de formula (XIX).

Si es necesario, puede anadirse ademas un ligando con un catalizador de paladio de valencia cero. Los ejemplos de dichos ligandos incluyen trifenilfosfina, 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno, tri-terc-butilfosfina, triciclohexilfosfina, 2- diciclohexilfosfino-2',6'-dimetoxibifenilo, 2-diciclohexilfosfino-2',4',6'-triisopropilbifenilo, 2-(di-terc-butilfosfino)bifenilo, 2-diciclohexilfosfino-2’-(N,N-dimetilamino)bifenilo, 4,5'-bis(difenilfosfino)-9,9'-dimetilxanteno, y similares. Cuando se utiliza tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) como un catalizador de paladio de valencia cero, puede anadirse trifenilfosfina como un ligando. La cantidad del ligando utilizada no esta particularmente limitada en tanto que pueda transcurrir la reaccion de ciclacion intramolecular. El ligando puede utilizarse en una cantidad de 0,0001 a 4 moles, y preferentemente 0,01 a 2 moles, por mol del compuesto de formula (XIX).

Los ejemplos de bases incluyen bases inorganicas tales como hidrogenocarbonato de sodio, carbonato de sodio, carbonato de potasio, carbonato de cesio, e hidroxidos de metales alcalinos. Resultan preferidos los hidroxidos de metales alcalinos. Los ejemplos de hidroxidos de metales alcalinos incluyen hidroxido de litio, hidroxido de sodio, hidroxido de potasio, hidroxido de cesio, y similares. Se utiliza preferentemente hidroxido de litio, hidroxido de sodio, hidroxido de potasio, o hidroxido de cesio. Es particularmente preferido hidroxido de sodio o hidroxido de litio. La cantidad de la base utilizada no esta particularmente limitada en tanto que transcurra la reaccion. La base puede ser utilizada en una cantidad de 1 a 100 moles, y preferentemente 2 a 20 moles, por mol del compuesto de formula (XIX). El hidroxido de metal alcalino puede utilizarse en forma de una disolucion acuosa de hidroxido de metal alcalino.

Como la combinacion de un reactivo organico de borano, un hidroxido de metal alcalino y un catalizador de paladio de valencia cero, resulta preferida una combinacion de un reactivo organico de borano preferido, un hidroxido de metal alcalino preferido, y un catalizador de paladio de valencia cero preferido. Es particularmente preferida una combinacion de un reactivo organico de borano particularmente preferido, un hidroxido de metal alcalino particularmente preferido, y un catalizador de paladio de valencia cero particularmente preferido.

Se puede usar cualquier disolvente que no afecte de forma adversa la reaccion. Sus ejemplos incluyen hidrocarburos (por ejemplo, benceno, tolueno, y xileno), eteres (por ejemplo, 1,2-dimetoxietano, tetrahidrofurano, y 1,4-dioxano), disolventes aproticos polares (por ejemplo, N,N-dimetilformamida, dimetil sulfoxido, y hexametil fosforil amida), agua, y sus mezclas. Se utilizan preferentemente 1,2-dimetoxietano o tetrahidrofurano. El tetrahidrofurano es particularmente preferido desde el punto de vista de la estabilidad del reactivo organico de borano y el intermedio de alquilborano generado. La cantidad del disolvente utilizado no esta particularmente limitada en tanto que

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transcurra la reaccion. El disolvente puede utilizarse en una cantidad que es 1 a 300 veces, y preferentemente 10 a 96 veces, el peso del compuesto de formula (XIX).

El tiempo de reaccion no esta particularmente limitado en tanto que pueda obtenerse el compuesto de formula (XX). El tiempo de reaccion puede ser 0,1 a 100 horas, y preferentemente 0,5 a 24 horas.

La temperatura de reaccion no esta particularmente limitada en tanto que pueda obtenerse finalmente el compuesto de formula (XX). La temperatura de reaccion puede ser -20°C a la temperatura de ebullicion del disolvente, y preferentemente 0 a 150°C. En la reaccion de ciclacion intramolecular del intermedio de alquilborano usando un catalizador de paladio de valencia cero y una disolucion acuosa de hidroxido de metal alcalino, una temperatura de reaccion baja tiende a causar reacciones secundarias, que dan como resultado un bajo rendimiento. Por lo tanto, la temperatura es preferentemente 61°C o mas alta.

El compuesto asf obtenido de formula (XX) puede ser sometido a la etapa subsiguiente despues o sin aislamiento y purificacion por medios de separacion y purificacion conocidos, tales como concentracion, concentracion a vacfo, cristalizacion, extraccion con disolventes, reprecipitacion, y cromatograffa.

En esta etapa, puede confirmarse la generacion de un intermedio de alquilborano en el sistema. Por ejemplo, los espectros de LCMS pueden utilizarse como el metodo de confirmacion.

(Etapa r)

En esta etapa, el grupo amino protegido del compuesto de formula (XX) es desprotegido para producir el compuesto de formula (XXI).

La desproteccion puede realizarse mediante un metodo conocido, tal como el metodo descrito en Protective Groups in Organic Synthesis, T.W. Greene, John Wiley & Sons (1981); o un metodo similar al mismo.

Cuando se utiliza ferc-butoxicarbonilo como un grupo protector, pueden utilizarse acido clorhfdrico, acido sulfurico, acido metanosulfonico, acido trifluoroacetico, o similares, como un reactivo de desproteccion. El reactivo se utiliza preferentemente en una cantidad de 1 a 100 moles por mol de compuesto (XX).

Se puede utilizar cualquier disolvente que no afecte de forma adversa la reaccion. Los ejemplos de disolventes usables incluyen agua, metanol, etanol, cloruro de metileno, cloroformo, y disolventes mixtos de los mismos. El tiempo de reaccion es 0,1 a 100 horas, y preferentemente 0,5 a 24 horas. La temperatura de reaccion es 0°C a la temperatura de ebullicion del disolvente.

El compuesto asf obtenido de formula (XXI) puede ser sometido a la etapa subsiguiente despues o sin aislamiento y purificacion por medios de separacion y purificacion conocidos, tales como concentracion, concentracion a vacfo, cristalizacion, extraccion con disolventes, reprecipitacion, y cromatograffa.

(Etapa s)

Esta etapa puede realizarse de la misma manera que en la etapa j.

En los metodos de produccion anteriores 1 a 3, para grupos funcionales que presentan un proton activo, tales como grupos amino, imino, hidroxi, carboxi, carbonilo, y amida e indol, pueden utilizarse reactivos protegidos, o se introduce un grupo protector en un grupo funcional de acuerdo con un metodo habitual, y entonces el grupo protector puede eliminarse en una etapa apropiada en cada metodo de produccion.

El “grupo protector de un grupo amino o grupo protector de un grupo imino” no esta particularmente limitado, en tanto que tenga una funcion de protectora. Los ejemplos de dichos grupos protectores incluyen grupos aralquilo tales como bencilo, p-metoxibencilo, 3,4-dimetoxibencilo, o-nitrobencilo, p-nitrobencilo, bencidrilo, tritilo, y cumilo; grupos alcanoflo inferior tal como formilo, acetilo, propionilo, butirilo, pivalofilo, trifluoroacetilo, y tricloroacetilo; benzoflo; grupos arilalcanoflo tales como fenilacetilo y fenoxiacetilo; grupos alcoxicarbonilo inferior tales como metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, propiloxicarbonilo, y ferc-butoxicarbonilo; grupos aralquiloxicarbonilo tales como p-

nitrobenciloxicarbonilo y fenetiloxicarbonilo; y grupos alquilsililo inferior tales como trimetilsililo y ferc-butildimetilsililo; tetrahidropiranilo; trimetilsililetoximetilo; grupos alquilsulfonilo inferior tales como metilsulfonilo, etilsulfonilo, y ferc- butilsulfonilo; grupos alquilsulfinilo inferior tales como ferc-butilsulfinilo; grupos arilsulfonilo tales como bencenosulfonilo y toluenosulfonilo; y grupos imido tales como ftalimido. En particular, resultan preferidos trifluoroacetilo, acetilo, ferc-butoxicarbonilo, benciloxicarbonilo, trimetilsililetoximetilo, cumilo, y similares.

El “grupo protector de un grupo hidroxi” no esta particularmente limitado en tanto que tenga una funcion protectora. Los ejemplos de tales grupos protectores incluyen grupos alquilo inferior tales como metilo, etilo, propilo, isopropilo y ferc-butilo; grupos alquilsililo inferior tales como trimetilsililo y ferc-butildimetilsililo; grupos alcoximetilo inferior tales como metoximetilo y 2-metoxietoximetilo; tetrahidropiranilo; trimetilsililetoximetilo; grupos aralquilo tales como

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bencilo, p-metoxibencilo, 2,3-dimetoxibencilo, o-nitrobencilo, p-nitrobencilo, y tritilo; y grupos acilo tales como formilo, acetilo, y trifluoroacetilo. En particular, resultan preferidos metilo, metoximetilo, tetrahidropiranilo, trimetilsililetoximetilo, ferc-butildimetilsililo, y acetilo.

El “grupo protector de un grupo carboxi” no esta particularmente limitado en tanto que tenga una funcion protectora. Los ejemplos de dichos grupos protectores incluyen grupos alquilo inferior tales como metilo, etilo, propilo, isopropilo y ferc-butilo; grupos haloalquilo inferior tales como 2,2,2-tricloroetilo; grupos alquenilo inferior tales como alilo; trimetilsililetoximetilo; y grupos aralquilo tales como bencilo, p-metoxibencilo, p-nitrobencilo, bencidrilo, y tritilo. En particular, resultan preferidos metilo, etilo, ferc-butilo, alilo, bencilo, p-metoxibencilo, trimetilsililetoximetilo, y similares.

El “grupo protector de un grupo carbonilo” no esta particularmente limitado en tanto que tenga una funcion protectora. Los ejemplos de tales grupos protectores incluyen etileno cetal, trimetileno cetal, dimetil cetal, y cetales y acetales similares.

El metodo para eliminar tal grupo protector puede variar dependiendo del tipo del grupo protector, estabilidad del compuesto deseado (I), etc. Por ejemplo, pueden utilizarse los siguientes metodos: solvolisis utilizando un acido o base de acuerdo con el metodo descrito en una publicacion (Protective Groups in Organic Synthesis, tercera edicion, T.W. Green, John Wiley & Sons (1999)) o un metodo similar a este, es decir, un metodo que comprende hacer reaccionar con 0,01 moles o un exceso grande de un acido, preferentemente acido trifluoroacetico, acido formico, o acido clorhfdrico, o una cantidad equimolar a cantidad molar excesiva grande de una base, preferentemente hidroxido de potasio o hidroxido de calcio; reduccion qufmica utilizando un complejo de hidruro de metal, etc.; o reduccion catalftica usando un catalizador de paladio-carbono, catalizador de nfquel Raney, etc.

El compuesto de la presente invencion puede ser aislado y purificado por medios de aislamiento y purificacion habituales. Los ejemplos de dichos medios incluyen extraccion con disolventes, recristalizacion, cromatograffa de lfquidos de altas prestaciones de fase inversa preparativa, cromatograffa en columna, cromatograffa de capa fina preparativa, y similares.

Cuando el compuesto de la presente invencion tiene isomeros tal como isomeros opticos, estereoisomeros, regioisomeros, e isomeros rotacionales, cualquiera de los isomeros y sus mezclas se incluyen dentro del alcance del compuesto de la presente invencion. Por ejemplo, cuando el compuesto tiene isomeros opticos, el isomero optico separado de una mezcla racemica tambien se incluye dentro del alcance del compuesto de la presente invencion. Cada uno de estos isomeros puede obtenerse como un unico compuesto por medios de sfntesis y separacion conocidos (por ejemplo, concentracion, extraccion con disolventes, cromatograffa en columna, recristalizacion, etc.).

En la presente invencion, el atomo de carbono enlazado a un sustituyente representado por -NRr(C=O)- CR2=C(R3)R4 en formula (1) es un carbono asimetrico; por lo tanto, el compuesto incluye isomeros. Como se menciono anteriormente, a menos que se especifique de otro modo, el compuesto de la presente invencion incluye todos los enantiomeros y sus mezclas. El compuesto de la presente invencion puede ser una mezcla de enantiomeros R y S. Dicha mezcla puede ser una mezcla que comprende el 90% o mas, 95% o mas, o 99% o mas del enantiomero R; o una mezcla que comprende 90% o mas, 95% o mas, o 99% o mas del enantiomero S.

Los metodos de resolucion quiral incluyen, por ejemplo: metodo de diastereomeros que hace que un agente de resolucion quiral actue sobre el compuesto de la presente invencion para formar una sal, y resuelva uno de los enantiomeros usando la diferencia de solubilidad, etc., de la sal obtenida; metodo preferencial de cristalizacion mediante la adicion de uno de los enantiomeros a una disolucion sobresaturada de un racemato como una semilla para la cristalizacion; y cromatograffa en columna tal como HPLC usando una columna quiral. Un agente de resolucion quiral que puede ser utilizado en el metodo de diastereomero puede ser seleccionado adecuadamente de, por ejemplo, agentes de resolucion acidos tales como acido tartarico, acido malico, acido lactico, acido mandelico, acido 10-canfosulfonico, y sus derivados; y los agentes de resolucion basicos tales como brucina, estricnina, quinina, y compuestos alcaloides similares, derivados de aminoacidos, cinconidina, y a-metilbencilamina. Ademas, uno solo de los enantiomeros del compuesto de la presente invencion puede obtenerse no solamente obteniendo el compuesto de la presente invencion como una mezcla de cada uno de los enantiomeros y luego llevando a cabo los metodos descritos anteriormente de resolucion quiral, sino tambien obteniendo, a traves de resolucion quiral por los metodos descritos anteriormente, etc., y utilizando un enantiomero del compuesto de la presente invencion como una materia prima sintetica. Ademas, los metodos para la obtencion de uno de los enantiomeros del compuesto de la presente invencion o su compuesto de materia prima incluyen un metodo de obtencion preferentemente uno de los enantiomeros mediante el ajuste de las condiciones de reaccion para un catalizador o similar en una etapa de reaccion de generacion de carbono asimetrico.

El compuesto o su sal de la presente invencion pueden estar en forma de cristales. Los cristales individuales y mezclas polimorficas se incluyen dentro del alcance del compuesto o su sal de la presente invencion. Dichos cristales se pueden producir por cristalizacion de acuerdo con un metodo de cristalizacion conocido per se en la tecnica. El compuesto o su sal de la presente invencion puede ser un solvato (por ejemplo, un hidrato) o un no solvato. Cualquiera de estas formas estan incluidas dentro del alcance del compuesto o su sal de la presente

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invencion. Los compuestos marcados con un isotopo (por ejemplo, 3H, 14C, 35S y 125I) tambien estan incluidos dentro del alcance del compuesto o su sal de la presente invencion.

La sal del compuesto de la presente invencion o de su intermedio se refiere a una sal comun utilizada en el campo de la qufmica organica. Los ejemplos de dichas sales incluyen sales de adicion de base a carboxi cuando el compuesto tiene carboxi, y sales de adicion de acido a un grupo heterocfclico basico o amino cuando el compuesto tiene un amino o grupo heterocfclico basico.

Los ejemplos de sales de adicion de base incluyen sales de metales alcalinos tales como sales de sodio y sales de potasio; sales de metales alcalino-terreos tal como sales de calcio y sales de magnesio; sales de amonio; y sales de amina organica tales como sales de trimetilamina, sales de trietilamina, sales diciclohexilamina, sales de etanolamina, sales de dietanolamina, sales de trietanolamina, sales de procafna, y sales de N,N’- dibenciletilendiamina.

Los ejemplos de sales de adicion de acido incluyen sales de acidos inorganicos tal como hidrocloruros, sulfatos, nitratos, fosfatos, y percloratos; sales de acidos organicos tales como acetatos, formiatos, maleatos, fumaratos, tartratos, citratos, ascorbatos, y trifluoroacetatos; y sulfonatos tales como metanosufonatos, isetionatos, bencenosulfonatos, y p-toluenosulfonatos.

El compuesto o su sal de la presente invencion tienen excelente actividad inhibidora de EGFR y es util como un agente antitumoral. Ademas, el compuesto o su sal de la presente invencion tiene excelente selectividad frente a EGFR, y ventajosamente menos efectos secundarios causados por otras cinasas. Aunque el cancer diana no esta particularmente limitado, ejemplos de estos son cancer de cabeza y cuello, cancer del esofago, cancer gastrico, cancer de colon, cancer de recto, cancer de hfgado, cancer de vesfcula, colangiocarcinoma, cancer del conducto biliar, cancer pancreatico, cancer de pulmon, cancer de mama, cancer de ovario, cancer de cuello uterino, cancer de endometrio, cancer renal, cancer de vejiga, cancer de prostata, tumor testicular, osteosarcoma, sarcoma de tejidos blandos, cancer de sangre, mieloma multiple, cancer de piel, tumor cerebral, y mesotelioma. Preferentemente, el cancer diana es cancer de cabeza y cuello, cancer gastrico, cancer de colon, cancer de recto, cancer de hfgado, cancer de pancreas, cancer de pulmon, cancer de mama, cancer de ovario, cancer renal, o cancer de prostata. Es particularmente preferido el cancer de pulmon.

Cuando se utiliza el compuesto o su sal de la presente invencion como una preparacion farmaceutica, puede anadirse un portador farmaceutico, si es necesario, formando asf una forma de dosificacion adecuada de acuerdo con fines de prevencion y tratamiento. Los ejemplos de la forma de dosificacion incluyen preparaciones orales, inyecciones, supositorios, unguentos, parches, y similares. De estos, resultan preferidas las preparaciones orales. Dichas formas de dosificacion se pueden formar por metodos conocidos convencionalmente por el experto en la materia.

Como el portador farmaceutico, se pueden mezclar distintos materiales de portador organico o inorganico convencionales utilizados como materiales de preparacion, como un excipiente, aglutinante, disgregante, lubricante, o colorante en preparaciones solidas; o como un disolvente, agente de solubilizacion, agente de suspension, agente isotonificante, amortiguador, o agente relajante en preparaciones lfquidas. Por otra parte, tambien pueden utilizarse, si se requieren, aditivos de preparacion farmaceutica, tales como antisepticos, antioxidantes, colorantes, edulcorantes, y estabilizantes.

Las preparaciones solidas orales se preparan como sigue. Despues de anadir un excipiente opcionalmente con un aglutinante, disgregante, lubricante, colorante, agente enmascarante de sabor o saborizante, etc., al compuesto de la presente invencion, la mezcla resultante se formula en comprimidos, comprimidos recubiertos, granulos, polvos, capsulas, o similares, por los metodos habituales.

Los ejemplos de excipientes incluyen lactosa, sacarosa, D-manitol, glucosa, almidon, carbonato de calcio, caolfn, celulosa microcristalina, y anhfdrido de acido silfcico. Los ejemplos de aglutinantes incluyen agua, etanol, 1- propanol, 2-propanol, jarabe simple, glucosa lfquida, a-almidon lfquido, gelatina lfquida, D-manitol, carboximetil celulosa, hidroxipropil celulosa, hidroxipropil almidon, metilcelulosa, etil celulosa, goma laca, fosfato de calcio, polivinilpirrolidona, y similares. Los ejemplos de disgregantes incluyen almidon seco, alginato de sodio, agar en polvo, hidrogenocarbonato de sodio, carbonato de calcio, lauril sulfato de sodio, monoglicerido de acido estearico, lactosa, y similares. Los ejemplos de lubricantes incluyen talco purificado, sal sodica de acido estearico, estearato de magnesio, borax, polietilenglicol, y similares. Los ejemplos de colorantes incluyen oxido de titanio, oxido de hierro, y similares. Los ejemplos de agentes enmascarantes de sabor y agentes saborizantes incluyen sacarosa, cascara de naranja amarga, acido cftrico, acido tartarico, y similares.

Cuando se prepara una preparacion lfquida para la administracion oral, pueden anadirse un agente enmascarante de sabor, un amortiguador, un estabilizante, agente saborizante, y similares, al compuesto de la presente invencion; y la mezcla resultante se puede formular en una preparacion lfquida oral, jarabe, elixir, etc., de acuerdo con un metodo habitual.

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En este caso, puede utilizarse tambien el mismo agente enmascarante de sabor o agente saborizante como se menciona anteriormente. Un ejemplo del amortiguador es citrato de sodio, y ejemplos del estabilizante incluyen tragacanto, goma arabiga, y gelatina. En caso necesario, estas preparaciones para la administracion oral pueden recubrirse de acuerdo con metodos conocidos en la tecnica con un recubrimiento enterico u otro recubrimiento con el fin de, por ejemplo, persistencia de efectos. Los ejemplos de dichos agentes de recubrimiento incluyen hidroxipropilmetilcelulosa, etil celulosa, hidroximetil celulosa, hidroxipropil celulosa, polioxietilenglicol, y Tween 80 (marca registrada).

Cuando se prepara un agente de inyeccion, se pueden anadir un regulador del pH, un amortiguador, un estabilizante, un agente de isotonificante, un anestesico local, y similares, al compuesto de la presente invencion; y la mezcla se puede formular en una inyeccion subcutanea, intramuscular, o intravenosa, de acuerdo con un metodo habitual.

Los ejemplos de ajustador del pH y del amortiguador utilizados aquf incluyen citrato de sodio, acetato de sodio, y fosfato de sodio. Los ejemplos del estabilizante incluyen pirosulfito de sodio, EDTA, acido tioglicolico, y acido tiolactico. Los ejemplos del anestesico local incluyen hidrocloruro de procafna e hidrocloruro de lidocafna. Los ejemplos del agente de tonicidad incluyen cloruro de sodio, dextrosa, D-manitol, y glicerol.

Cuando se prepara un supositorio, pueden anadirse portadores farmaceuticamente aceptables conocidos en la tecnica, tales como polietilenglicol, lanolina, manteca de cacao y triglicerido de acido graso; y como sea necesario, agentes tensoactivos tales como Tween 80 (marca registrada), al compuesto de la presente invencion, y la mezcla resultante puede formularse en un supositorio de acuerdo con un metodo habitual.

Cuando se prepara un unguento, se pueden mezclar una base comunmente usada, estabilizante, agente humectante, conservante, y similares, en el compuesto de la presente invencion, segun sea necesario; y la mezcla obtenida puede ser mezclada y formulada en un unguento de acuerdo con un metodo habitual.

Los ejemplos de la base incluyen parafina lfquida, vaselina, cera de abejas blanca, alcohol octildodecflico, y parafina.

Los ejemplos del conservante incluyen paraoxibenzoato de metilo, paraoxibenzoato de etilo, y paraoxibenzoato de propilo.

Cuando se prepara un parche, se pueden aplicar el unguento descrito anteriormente, crema, gel, pasta, o similares, a un sustrato habitual de acuerdo con un metodo habitual.

Como el sustrato, son adecuados telas tejidas o telas no tejidas, que comprenden algodon, fibras discontinuas, o fibras qufmicas; y pelfculas u hojas de espuma de cloruro de vinilo suave, polietileno, poliuretano, etc.

La cantidad del compuesto de la presente invencion a incorporar en cada una de dichas formas unitarias de dosificacion depende de la afeccion del paciente a quien se administra el compuesto, la forma de dosificacion del mismo, etc. En general, en el caso de un agente oral, la cantidad del compuesto es 0,05 a 1000 mg por forma unitaria de dosificacion. En el caso de una inyeccion, la cantidad del compuesto es 0,01 a 500 mg por forma unitaria de dosificacion; y en el caso de un supositorio, la cantidad del compuesto es 1 a 1000 mg por forma unitaria de dosificacion.

La dosis diaria de la medicina en dicha forma de dosificacion depende de la afeccion, peso corporal, edad, genero, etc., del paciente, y no se puede generalizar. Por ejemplo, la dosis diaria para un adulto (peso corporal: 50 kg) puede ser generalmente 0,05 a 5.000 mg, y preferentemente 0,1 a 1.000 mg; y preferentemente se administra en una dosis, o en dos a tres dosis divididas, por dfa.

Los ejemplos de mamfferos a los que se administra el compuesto de la presente invencion incluyen seres humanos, monos, ratones, ratas, conejos, perros, gatos, vacas, caballos, cerdos, y ovejas.

Ejemplos

La presente invencion se explica con mayor detalle a continuacion haciendo referencia a los ejemplos; sin embargo, el alcance de la presente invencion no se limita a estos ejemplos.

En los ejemplos, se utilizaron los reactivos disponibles comercialmente, a menos que se especifique de otro modo. Purif-Pack SI (marca registrada), producido por Moritex Corp (producido por Shoko Scientific Co., Ltd.); columna pre- empaquetada con sflice KP-Sil (marca registrada), producida por Biotage; o columna de pre-empaquetada de sflice HP-Sil (marca registrada), producida por Biotage fue utilizada como la cromatograffa de columna en gel de sflice. Purif-Pack NH (marca registrada), producido por Moritex Corp (producido por Shoko Scientific Co., Ltd.); o columna pre-empaquetada KP-NH (marca registrada), producida por Biotage fue utilizada como la cromatograffa de columna en gel de sflice basica. Kieselgel TM 60F 254, Art. 5744 producido por Merck, o placa 60F254 de gel de sflice NH2, producida por Wako, fue utilizada como la cromatograffa en capa fina preparativa. El espectro de RMN se midio

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utilizando espectrometro modelo AL400 (400 MHz; producido por JEOL), espectrometro Mercury 400 (400 MHz; producido por Agilent Technologies, Inc.), o Inova 400 (400 MHz; producido por Agilent Technologies, Inc.) equipado con una sonda OMNMR (producida por Protasis). Cuando su disolvente deuterado contiene tetrametilsilano, el tetrametilsilano fue utilizado como la referencia interna; y cuando no contiene tetrametilsilano, se utilizo un disolvente de RMN como referencia. Todos los valores de delta se muestran mediante ppm. La reaccion de microondas fue realizada usando Discover S-class, producido por CEM Corporation.

El espectro de LCMS se midio usando un Acquity SQD (cuadrupolo), producidos por Waters Corporation, en las siguientes condiciones.

Columna: YMC-Triart C18, 2,0 x 50 mm, 1,9 mm (producida por YMC)

Deteccion de MS: ESI positivo Deteccion de UV: 254 y 210 nm Caudal de columna: 0,5 ml/min.

Fase movil: Agua/acetonitrilo (0,1% de acido formico)

Volumen de inyeccion: 1 ml Gradiente (Tabla 1)

Tiempo (min.)

Agua Acetonitrilo

0

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0,1

95 5

2,1

5 95

3,0

STOP

La purificacion de HPLC de fase inversa se realizo usando un sistema de separacion preparativa disponible de Waters Corporation.

Columna: YMC-Actus Triart C18 conectada, 20 x 50 mm, 5 mm (producida por YMC) y YMC-Actus Triart C18, 20 x 10 mm, 5 mm (producida por YMC).

Deteccion de UV: 254 nm

Deteccion de MS: ESI positivo

Caudal de columna: 25 ml/min.

Fase movil: Agua/acetonitrilo (0,1% de acido formico)

Volumen de inyeccion: 0,1 a 0,5 ml

Cada sfmbolo representa lo siguiente.

s: Singlete

d: Doblete

t: Triplete

dd: Doblete doble

m: Multiplete

brs: Singlete amplio

DMSO-d6: Dimetil sulfoxido deuterado

CDCh: Cloroformo deuterado

CD3OD: Metanol deuterado

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THF: Tetrahidrofurano DMF: N,N-dimetilformamida DME: 1,2-Dimetoxietano

HATU: Hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio Ejemplo 1

(R)-W-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)acrilamida (Compuesto I-1) y (S)-N-(4- amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)acrilamida (Compuesto I-2)

imagen9

(Etapa 1)

Sfntesis de 4-cloro-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina

[Qufm. 10]

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Se anadio N-yodosuccinimida (11,6 g) a una disolucion de 4-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (7,52 g) en DMF (49 ml) a temperatura ambiente. La mezcla se agito a la misma temperatura durante 1 hora, y se anadio agua (150 ml) a la mezcla de reaccion. El precipitado resultante se recogio mediante filtracion, se lavo con agua, y se seco para obtener el compuesto del tftulo como un solido amarillo claro (13,57 g).

ESI-MS m/z 280, 282 (MH+).

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Sfntesis de 1-bromo-2-(ferc-butildimetilsililoxi)-3-buteno

[Qufm. 11]

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Se anadieron imidazol (2,25 g) y cloruro de ferc-butildimetilsililo (4,75 g) a una disolucion de 1-bromo-3-buten-2-ol (4,5 g) en DMF (30 ml) a temperatura ambiente. La mezcla se agito a la misma temperatura durante 16 horas, y se le anadio agua, seguido de extraccion con hexano. La capa organica se lavo con agua, y se seco sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se separo por destilacion a presion reducida para obtener el compuesto del tftulo como una sustancia oleosa, amarilla clara (7,0 g).

(Etapa 3)

Sfntesis de 7-(2-(terc-butildimetilsililoxi)-3-butenil)-4-cloro-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina

[Qufm. 12]

imagen12

Se anadio carbonato de potasio (2,2 g) a una disolucion de 4-cloro-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (3,7 g) obtenida en la etapa 1 y 1-bromo-2-(terc-butildimetilsililoxi)-3-buteno (3,5 g) obtenido en la etapa 2 en DMF (26 ml) a temperatura ambiente, y la mezcla se agito a 80°C durante 5 horas. Tras enfriar la mezcla de reaccion, se le anadieron agua y acetato de etilo, y la materia insoluble generada se separo por filtracion. La capa organica se separo, se lavo con agua y con una disolucion saturada de cloruro de sodio, y se seco sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se separo entonces mediante destilacion a presion reducida. El residuo resultante se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de sflice (disolvente de desarrollo: hexano/acetato de etilo) para obtener el compuesto del tftulo como un solido amarillo claro (2,25 g). ESI-MS m/z 464, 466 (MH+).

(Etapa 4)

Sfntesis de 7-(2-(ferc-butildimetilsililoxi)-3-butenil)-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina

[Qufm. 13]

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Se anadio amonfaco acuoso al 25% (9 ml) a una disolucion de 7-(2-(ferc-butildimetilsililoxi)-3-butenil)-4-cloro-5-yodo- 7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (1,12 g) obtenida en la etapa 3 en THF (7 ml). La mezcla se agito a 120°C durante 5 horas

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usando un reactor de microondas. La mezcla de reaccion se enfrio, y despues se diluyo con agua. El precipitado resultante se recogio mediante filtracion, se lavo con agua, y despues se seco para obtener el compuesto del tftulo como un solido blanco (1,06 g).

ESI-MS m/z 445 (MH+).

(Etapa 5)

Sfntesis de 7-(2-(ferc-butildimetilsililoxi)-3-butenil)-5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina

[Qufm. 14]

imagen14

Una mezcla de 7-(2-(ferc-butildimetilsililoxi)-3-butenil)-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (3,62 g) obtenida en la etapa 4, acido 3-quinolinboronico (1,47 g), carbonato de sodio (1,72 g), 2-diciclohexilfosfino-2',4',6'- triisopropilbifenilo (154 mg), tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (148 mg), DME (40 ml), y agua (16 ml) se agito en una atmosfera de nitrogeno a 100°C durante 3 horas. Tras enfriar, la mezcla de reaccion se vertio en agua, seguido de extraccion con acetato de etilo. La capa organica se seco sobre sulfato de sodio anhidro, y el disolvente se separo entonces mediante destilacion a presion reducida. El residuo resultante se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de sflice (disolvente de desarrollo: hexano/acetato de etilo) para obtener el compuesto del tftulo como un solido amarillo claro (2,13 g). ESI-MS m/z 446 (MH+).

(Etapa 6)

Sfntesis de 6-bromo-7-(2-(ferc-butildimetilsililoxi)-3-butenil)-5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina

[Qufm. 15]

imagen15

Se anadio W-bromosuccinimida (894 mg) a una disolucion de 7-(2-(ferc-butildimetilsililoxi)-3-butenil)-5-(quinolin-3-il)- 7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (2,13 g) obtenida en la etapa 5 en DMF (25 ml) a temperatura ambiente. Tras agitar a la misma temperatura durante 30 minutos, la mezcla se vertio en una disolucion acuosa saturada de bicarbonato de sodio, seguido de extraccion con acetato de etilo. La capa organica se lavo con agua y con una disolucion saturada de cloruro de sodio, y se seco sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se separo entonces mediante destilacion a presion reducida. El residuo resultante se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de sflice (disolvente de desarrollo: hexano/acetato de etilo) para obtener el compuesto del tftulo como un solido amarillo (2,26 g).

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[Qufm. 16]

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Una disolucion de 9-borabiciclo[3.3.1]nonano 0,5 M en THF (50 ml) se anadio a una disolucion de 6-bromo-7-(2- (terc-butildimetilsililoxi)-3-butenil)-5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (2,26 g) obtenida en la etapa 6 en THF (30 ml) con enfriamiento con hielo. La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 4 horas. Tras anadir lentamente una disolucion acuosa 3 N de hidroxido de sodio (19,5 ml) a la mezcla de reaccion a temperatura ambiente, se anadio a la mezcla de reaccion un complejo de [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) con diclorometano (676 mg). La mezcla se agito en una atmosfera de nitrogeno a 70°C durante 4 horas. Tras enfriar, la mezcla de reaccion se vertio en agua, seguido de extraccion con acetato de etilo. La capa organica se seco sobre sulfato de sodio anhidro, y el disolvente se separo por destilacion a presion reducida. El residuo resultante se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de sflice (disolvente de desarrollo: hexano/acetato de etilo) para obtener el compuesto del tftulo como una sustancia oleosa, amarilla (778 mg).

ESI-MS m/z 446 (MH+).

(Etapa 8)

Sfntesis de 4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-ol

[Qufm. 17]

imagen17

Una disolucion de fluoruro de tetrabutilamonio 1 M en THF (2,09 ml) se anadio a una disolucion de 8-(terc- butildimetilsililoxi)-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-4-amina (778 mg) obtenida en la etapa 7 en THF (20 ml) a temperatura ambiente. La mezcla se agito a la misma temperatura durante 1 hora, y el disolvente se separo por destilacion a presion reducida. El residuo resultante se trato con una disolucion acuosa saturada de cloruro de amonio, seguido de extraccion con acetato de etilo. La capa organica se seco sobre sulfato de sodio anhidro, y el disolvente se separo entonces mediante destilacion a presion reducida. El residuo resultante se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de sflice (disolvente de desarrollo: cloroformo/metanol) para obtener el compuesto del tftulo como un solido amarillo claro (580 mg).

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[Qufm. 18]

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Se anadieron trietilamina (0,157 ml) y cloruro de metanosulfonilo (0,074 ml) a una disolucion de 4-amino-5-(quinolin- 3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-ol (288 mg) obtenido en la etapa 8 en THF (5 ml) con enfriamiento con hielo. Tras agitar a la misma temperatura durante 15 minutos, la mezcla se vertio en una disolucion acuosa saturada de bicarbonato de sodio, seguido de extraccion con acetato de etilo. La capa organica se seco sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se separo por destilacion a presion reducida para obtener el compuesto del tftulo como un solido marron claro (615 mg).

ESI-MS m/z 410 (MH+).

(Etapa 10)

Sfntesis de 8-azido-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-4-amina

[Qufm. 19]

imagen19

Se anadio azida sodica (361 mg) a una disolucion de metanosulfonato de 4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9- tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-ilo (758 mg) obtenido en la etapa 9 en DMF (9 ml) a temperatura ambiente, y la mezcla se agito a 80°C durante 4 horas. Tras enfriar, la mezcla de reaccion se vertio en agua, seguido de extraccion con acetato de etilo. La capa organica se lavo con agua y con una disolucion saturada de cloruro de sodio, y se seco sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se separo por destilacion a presion reducida para obtener el compuesto del tftulo como un solido amarillo (508 mg).

ESI-MS m/z 357 (MH+).

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[Qufm. 20]

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Se anadio trifenilfosfina soportada en polfmero (~3,0 mmoles/g, 1,42 g) a una disolucion de 8-azido-5-(quinolin-3-il)- 6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-4-amina (508 mg) obtenida en la etapa 10 en THF (10 ml) y agua (1 ml) a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se calento a reflujo durante 1 hora. Tras enfriar, la mezcla de reaccion se filtro a traves de Celite, se lavo con etanol, y el disolvente se separo por destilacion a presion reducida. El residuo resultante se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de sflice (disolvente de desarrollo: cloroformo/metanol) para obtener el compuesto del tftulo como un solido amarillo (342 mg).

ESI-MS m/z 331 (MH+).

(Etapa 12)

Sfntesis de W-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)acrilamida

[Qufm. 21]

imagen21

Se anadieron W,W-diisopropiletilamina (0,033 ml) y cloruro de acriloflo (0,0154 ml) a una disolucion de 5-(quinolin-3- il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-4,8-diamina (68 mg) obtenida en la etapa 11 en cloroformo (2,5 ml) con enfriamiento con hielo. Tras agitar a la misma temperatura durante 15 minutos, la mezcla se vertio en una disolucion acuosa saturada de bicarbonato de sodio, seguido de extraccion con cloroformo. La capa organica se seco sobre sulfato de sodio anhidro, y el disolvente se separo entonces mediante destilacion a presion reducida. El residuo resultante se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de sflice (disolvente de desarrollo: cloroformo/metanol) para obtener el compuesto del tftulo como un solido amarillo (35,4 mg).

RMN 1H (CDCla) 8 : 2,14 (2H, d, J = 5,6 Hz), 3,04 (2H, t, J = 6,2 Hz), 4,17 (1H, dd, J = 12,7, 5,8 Hz), 4,46 (1H, dd, J = 12,7, 4,5 Hz), 4,70-4,80 (1H, m), 4,89 (2H, brs), 5,71 (1H, d, J = 10,2 Hz), 6,21 (1H, dd, J = 16,8, 10,2 Hz), 6,39 (1H, d, J = 16,8 Hz), 6,50 (1H, d, J = 7,0 Hz), 7,62 (1H, t, J = 7,4 Hz), 7,77 (1H, t, J = 7,4 Hz), 7,87 (1H, d, J = 8,0 Hz), 8,15 (1H, d, J = 8,0 Hz), 8,25 (1H, s), 8,32 (1H, s), 9,00 (1H, s).

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Separacion de W-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)acrilamida, enantiomero A, y W-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)acrilamida, enantiomero B

[Qufm. 22]

imagen22

W-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)acrilamida (197 mg) obtenida en la etapa 12 se sometio a resolucion optica usando una columna para resolucion optica (CHIRALPAK AD-H 20 mm X 250 mm, fabricada por Daicel Chemical Industries, Ltd.), fase movil: hexano/etanol/trietilamina, 50:50:0,1, caudal: 10 ml/min.) para obtener 72,4 mg del enantiomero A (tiempo de retencion: 15,4 min., (R)-N-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9- tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)acrilamida (Compuesto I-1)) y 78,3 mg del enantiomero B (tiempo de retencion: 32,5 min., (S)-W-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)acrilamida (Compuesto I-2)) como un solido amarillo claro.

Enantiomero A

ESI-MS m/z 385 (MH+).

Enantiomero B

ESI-MS m/z 385 (MH+).

Cuando la (R)-W-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)acrilamida obtenida en el mismo metodo como el ejemplo 2 descrito mas tarde se sometio a un tratamiento en columna en las mismas condiciones como se describieron anteriormente, su tiempo de retencion fue el mismo que el del enantiomero A. Se confirmo que el enantiomero A era un isomero R, es decir, el compuesto I-1; y que el enantiomero B era un isomero S, es decir, el compuesto I-2.

Ejemplo 2

(R)-W-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)acrilamida (Compuesto I-1)

(Etapa 1)

Sfntesis de 4-metilbencenosulfonato de (S)-2-(ferc-butildimetilsililoxi)-3-butenilo

[Qufm. 23]

imagen23

De acuerdo con la etapa 2 del ejemplo 1, excepto que se uso 1-(p-toluenosulfonato) de (S)-3-buteno-1,2-diol en lugar de 1-bromo-3-buten-2-ol, el compuesto del tftulo se obtuvo como una sustancia oleosa, incolora (2,74 g).

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[Qufm. 24]

imagen24

De acuerdo con las etapas 1 a 12 del ejemplo 1, excepto que se uso 4-metilbencenosulfonato de (S)-2-( terc- butildimetilsililoxi)-3-butenilo obtenido en la etapa 1 en lugar de 1-bromo-2-(terc-butildimetilsililoxi)-3-buteno, el compuesto del tftulo se obtuvo como un solido amarillo (13,9 mg).

Ejemplo 3

W-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)-W-metilacrilamida (Compuesto I-3)

[Qufm. 25]

imagen25

(Etapa 1)

Sfntesis de N8-metil-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-4,8-diamina

[Qufm. 26]

imagen26

Se disolvio metanosulfonato

de 4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-ilo (30 mg),

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obtenido en la etapa 9 del ejemplo 1, en una disolucion de metilamina en metanol al 40% (1 ml). La disolucion se agito a 60°C durante 1 hora y a 80°C durante 22 horas. Tras enfriar, la mezcla de reaccion se concentro a presion reducida. El residuo resultante se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de sflice (disolvente de desarrollo: acetato de etilo/metanol) para obtener el compuesto del tftulo como una sustancia oleosa, amarilla clara (8,1 mg).

ESI-MS m/z 345 (MH+).

(Etapa 2)

Sfntesis de W-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)-W-metilacrilamida

[Qufm. 27]

imagen27

De acuerdo con la etapa 12 del ejemplo 1, excepto que se uso N8-metil-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9- tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-4,8-diamina obtenida en la etapa 1 en lugar de la 5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9- tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-4,8-diamina usada en la etapa 12 del ejemplo 1, el compuesto del tftulo se obtuvo como un solido amarillo claro (6,2 mg).

RMN 1H (CDCfj) 8: 1,90-2,15 (2H, m), 3,00-3,15 (2H, m), 3,06 (3H, s), 3,90-4,03 (1H, m), 4,56-4,64 (1H, m), 5,06 (2H, brs), 5,15-5,30 (1H, m), 5,77 (1H, d, J = 10,2 Hz), 6,38 (1H, d, J = 16,6 Hz), 6,54-6,70 (1H, m), 7,63 (1H, t, J = 7,3 Hz), 7,78 (1H, t, J = 7,3 Hz), 7,88 (1H, d, J = 8,0 Hz), 8,16 (1H, s), 8,17 (1H, d, J = 8,0 Hz), 8,31 (1H, s), 9,01 (1H, s).

ESI-MS m/z 399 (MH+).

Ejemplo 4

(E)-W-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)-4-(dimetilamino)-2-butenamida (Compuesto I-4)

[Qufm. 28]

imagen28

Se anadieron HATU (10,3 mg) y 5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-4,8-diamina (8,8 mg) obtenida en la etapa 11 del ejemplo 1 a una disolucion de hidrocloruro de acido frans-4-dimetilaminocrotonico (4,5 mg) en DMF (0,5 ml) a temperatura ambiente. Tras agitarla durante 1 hora a la misma temperatura, la mezcla se vertio en una disolucion acuosa saturada de bicarbonato de sodio, seguido de extraccion con acetato de etilo. La capa organica se seco sobre sulfato de sodio anhidro, y el disolvente se separo entonces mediante destilacion a presion reducida. El residuo resultante se purifico mediante cromatograffa de capa fina preparativa (producida por

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Wako, placa F254 de gel de sflice NH2 60, disolvente de desarrollo: cloroformo/metanol) para obtener el compuesto del tftulo como un solido amarillo claro (6,4 mg).

RMN 1H (CDCl3) 8: 2,05-2,20 (2H, m), 2,27 (6H, s), 2,49-2,65 (4H, m), 4,10-4,20 (1H, m), 4,46-5,02 (1H, m), 4,684,77 (1H, m), 4,91 (2H, brs), 6,06 (1H, d, J = 15,4 Hz), 6,39 (1H, d, J = 7,0 Hz), 6,85-6,95 (1H, m), 7,62 (1H, t, J = 7,4 Hz), 7,77 (1H, t, J = 7,4 Hz), 7,87 (1H, d, J = 8,0 Hz), 8,15 (1H, d, J = 8,0 Hz), 8,17 (1H, s), 8,25 (1H, s), 9,00 (1H, s).

ESI-MS m/z 442 (MH+).

Ejemplo 5

(S,E)-W-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)-3-cloroacrilamida (Compuesto I-5)

[Qufm. 29]

imagen29

Se anadio acido trans-3-cloroacrflico (399,5 mg) a una suspension de 5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4- b]indolizin-4,8-diamina (498,0 mg) obtenida en la etapa 11 del ejemplo 1 en DMF (8 ml) a temperatura ambiente. Tras disolver, se le anadio hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (350,1 mg) con enfriamiento con hielo, y la mezcla se agito durante 1 hora a la misma temperatura. La mezcla de reaccion se vertio en una disolucion acuosa saturada de bicarbonato de sodio, seguido de extraccion con acetato de etilo. La capa organica se seco sobre sulfato de sodio anhidro, y el disolvente se separo entonces mediante destilacion a presion reducida. El residuo resultante se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de sflice (disolvente de desarrollo: acetato de etilo/metanol) para obtener el compuesto del tftulo como un solido amarillo claro (261,2 mg).

RMN 1H (DMSO-d6) 8: 1,84-2,07 (2H, m), 2,92-3,08 (2H, m), 3,88-4,02 (1H, m), 4,27-4,43 (2H, m), 6,07 (2H, brs), 6,48 (1H, d, J = 13,4 Hz), 7,31 (1H, d, J = 13,2 Hz), 7,63 (1H, t, J = 7,4 Hz), 7,75 (1H, t, J = 7,6 Hz), 8,03 (1H, d, J = 10,7 Hz), 8,05 (1H, d, J = 10,7 Hz), 8,13 (1H, s), 8,29 (1H, d, J = 2,0 Hz), 8,53 (1H, d, J = 6,6 Hz), 8,92 (1H, d, J = 2,2 Hz).

ESI-MS m/z 419, 421 (MH+).

Ejemplo 6

(S,Z)-N-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)-3-cloroacrilamida (Compuesto I-6)

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imagen30

De acuerdo con el ejemplo 5, excepto que se uso acido c/s-3-cloroacrflico en lugar del acido trans-3-cloroacrflico usado en el ejemplo 5, el compuesto del tftulo se obtuvo como un solido amarillo claro (93 mg).

RMN 1H (DMSO-d6) 8: 1,82-1,96 (1H, m), 1,96-2,07 (1H, m), 2,92-3,08 (2H, m), 3,85-3,97 (1H, m), 4,27-4,41 (2H, m), 6,05 (2H, brs), 6,39 (1H, d, J = 8,0 Hz), 6,77 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,63 (1H, t, J = 7,4 Hz), 7,75 (1H, t, J = 7,4 Hz), 8,02 (1H, d, J = 11,4 Hz), 8,04 (1H, d, J = 11,4 Hz), 8,13 (1H, s), 8,29 (1H, d, J = 2,0 Hz), 8,50 (1H, d, J = 6,3 Hz), 8,92 (1H, d, J = 2,0 Hz).

ESI-MS m/z 419, 421 (MH+).

Ejemplo 7

(S)-N-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-7,8,9,10-tetrahidro-6H-pirimido[5',4':4,5]pirrolo[1,2-a]azepin-8-il)acrilamida (Compuesto I-7)

[Qufm. 31]

imagen31

(Etapa 1)

Sfntesis de (R)-(1-hidroxi-5-(metiltio)pentan-3-il)carbamato de terc-butilo

[Qufm. 32]

imagen32

NHBoc

Se anadieron W-metilmorfolina (3,63 ml) y cloroformiato de etilo (3,01 ml) a una disolucion de acido (R)-3-((terc- butoxicarbonil)amino)-5-(metiltio)pentanoico (7,92 g) en THF (79,2 ml) a -10°C. Tras agitar a -10°C durante 15 minutos, la materia insoluble generada se separo por filtracion. Una disolucion acuosa de borohidruro de sodio (1,55 g) (15 ml) se anadio al filtrado a -10°C, y la mezcla se agito a -10°C durante 1 hora. Se le anadio una disolucion acuosa saturada de cloruro de amonio, y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se le

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anadio acetato de etilo para separar la capa organica. La capa organica se lavo con una disolucion acuosa 0,5 N de hidrogenosulfato de potasio, agua, una disolucion acuosa 0,5 N de hidroxido de sodio y una disolucion saturada de cloruro de sodio, y se seco sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se separo entonces mediante destilacion a presion reducida. El residuo resultante se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de sflice (disolvente de desarrollo: cloroformo/acetato de etilo) para obtener el compuesto del tftulo como una sustancia oleosa, amarilla clara (7,18 g).

(Etapa 2)

Sfntesis de ((3R)-1-hidroxi-5-(metilsulfinil)pentan-3-il)carbamato de ferc-butilo

[Qufm. 33]

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Una suspension de peryodato de sodio (7,0 g) en agua (32 ml) se anadio a una disolucion de (R)-(1-hidroxi-5- (metiltio)pentan-3-il)carbamato de ferc-butilo (8,16 g) obtenido en la etapa 1 en metanol (98 ml) a una temperatura de 10°C o menor, y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 2 horas. La materia insoluble generada se separo por filtracion, y el filtrado se separo por destilacion a presion reducida. El residuo resultante se disolvio en una disolucion saturada de cloruro de sodio, seguido de extraccion con cloroformo durante 3 veces. La capa organica se seco sobre sulfato de sodio anhidro, y el disolvente se separo por destilacion a presion reducida para obtener el compuesto del tftulo como un solido amarillo claro (9,38 g).

(Etapa 3)

Sfntesis de (R)-(5-hidroxipent-1-en-3-il)carbamato de ferc-butilo

[Qufm. 34]

NHBoc

Se anadio acetato de sodio (13,45 g) a una disolucion de ((3R)-1-hidroxi-5-(metilsulfinil)pentan-3-il)carbamato de ferc-butilo (9,38 g) obtenido en la etapa 2 en 1,2-diclorobenceno (140 ml) a temperatura ambiente. La mezcla se agito a una temperatura interna de 166°C durante 18 horas. Tras enfriar la mezcla de reaccion, la materia insoluble se separo por filtracion, y el 1,2-diclorobenceno se separo por destilacion a presion reducida. El residuo resultante se disolvio en acetato de etilo, se lavo con una disolucion acuosa saturada de cloruro de sodio, agua, y una disolucion saturada de cloruro de sodio, y se seco sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se separo entonces mediante destilacion a presion reducida. El residuo resultante se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de sflice (disolvente de desarrollo: hexano/acetato de etilo) para obtener el compuesto del tftulo 2,50 g como una sustancia oleosa, amarilla clara.

(Etapa 4)

Sfntesis de (R)-(5-(4-cloro-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)pent-1-en-3-il)carbamato de ferc-butilo

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Se anadio trifenilfosfina (3,25 g) a y se disolvio en una disolucion de (R)-(5-hidroxipent-1-en-3-il)carbamato de terc- butilo (2,5 g) obtenido en la etapa 3 y 4-cloro-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (2,31 g) obtenida en la etapa 1 del ejemplo 1 en DME (23 ml) con enfriamiento con hielo. Despues, se le anadio gradualmente azodicarboxilato de diisopropilo (2,44 ml). La mezcla de reaccion se agito con enfriamiento con hielo durante 30 minutos y a temperatura ambiente durante 1 hora, y el disolvente se separo entonces mediante destilacion a presion reducida. El residuo resultante se disolvio en acetato de etilo, se lavo con agua, y se seco sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se separo entonces mediante destilacion a presion reducida. El residuo resultante se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de sflice (disolvente de desarrollo: hexano/acetato de etilo) para obtener el compuesto del tftulo como un solido amarillo claro (3,49 g).

ESI-MS m/z 463, 465 (MH+).

(Etapa 5)

Sfntesis de (R)-(5-(4-amino-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)pent-1-en-3-il)carbamato de terc-butilo

[Qufm. 36]

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Se anadio amonfaco acuoso al 28% (17,5 ml) a una disolucion de (R)-(5-(4-cloro-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7- il)pent-1-en-3-il)carbamato de terc-butilo (3,49 g) obtenido en la etapa 4 en DME (17,5 ml), y la mezcla se agito en un autoclave a una temperatura interna de 105°C durante 8 horas. Tras enfriar la mezcla de reaccion, se le anadio agua (70 ml), y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 4 horas. El precipitado resultante se recogio mediante filtracion, se lavo con agua, y se seco para obtener el compuesto del tftulo como un solido amarillo claro (3,20 g).

ESI-MS m/z 444 (MH+).

(Etapa 6)

Sfntesis de (R)-(5-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)pent-1-en-3-il)carbamato de terc-butilo

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Una mezcla de (R)-(5-(4-amino-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)pent-1-en-3-il)carbamato de terc-butilo (3,2 g) obtenido en la etapa 5, acido 3-quinolinboronico (1,37 g), carbonato de sodio (843 mg),

tetraquis(trifenilfosfina)paladio (250 mg), DME (32 ml) y agua (32 ml) se agito en una atmosfera de nitrogeno a 100°C durante 6 horas. Tras enfriar la mezcla de reaccion, se le anadieron una disolucion acuosa saturada de bicarbonato de sodio y acetato de etilo. La mezcla resultante se agito a temperatura ambiente durante 30 minutos. Tras separar mediante filtracion la materia insoluble, la capa organica se separo y se seco sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se separo entonces mediante destilacion a presion reducida. El residuo resultante se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de sflice (disolvente de desarrollo: hexano/acetato de etilo, acetato de etilo/metanol) para obtener el compuesto del tftulo como un solido naranja claro (3,21 g).

ESI-MS m/z 445 (MH+).

(Etapa 7)

Sfntesis de (R)-(5-(4-amino-6-bromo-5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)pent-1-en-3-il)carbamato de terc- butilo

[Qufm. 38]

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Una disolucion de W-bromosuccinimida (1,35 g) en THF (23 ml) se anadio a una disolucion de (R)-(5-(4-amino-5- (quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)pent-1-en-3-il)carbamato de terc-butilo (3,21 g) obtenido en la etapa 6 en THF (26 ml) con enfriamiento con hielo durante 30 minutos. La mezcla se agito con enfriamiento con hielo durante 30 minutos. Tras anadir una disolucion acuosa de tiosulfato de sodio al 5%, la mezcla se vertio en una disolucion acuosa saturada de bicarbonato de sodio, seguido de extraccion con acetato de etilo. La capa organica se lavo con una disolucion saturada de cloruro de sodio y se seco sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se separo entonces mediante destilacion a presion reducida. El residuo resultante se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de sflice (disolvente de desarrollo: hexano/acetato de etilo, acetato de etilo/metanol) para obtener el compuesto del tftulo como un solido marron claro (3,15 g).

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Sfntesis de (S)-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-7,8,9,10-tetrahidro-6H-pirimido[5',4':4,5]pirrolo[1,2-a]azepin-8-il)carbamato de ferc-butilo

[Qufm. 39]

imagen38

Se anadio (R)-(5-(4-amino-6-bromo-5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)pent-1-en-3-il)carbamato de ferc- butilo (994 mg) obtenido en la etapa 7 a una disolucion de 9-borabiciclo[3.3.1]nonano en THF 0,5 M (22,8 ml) a temperatura ambiente. La mezcla se agito a la misma temperatura durante 1 hora, y se le anadio cuidadosamente una disolucion acuosa 4N de hidroxido de sodio (5,7 ml). Tras purgar con nitrogeno, la mezcla se calento para que tuviera una temperatura interna de 55°C. Se le anadio tetraquis(trifenilfosfina)paladio (275 mg), y la mezcla se agito a una temperatura interna de 66°C durante 15 horas. Tras enfriar la mezcla de reaccion, la capa organica se separo, y se le anadieron tolueno (7,7 ml) y una disolucion acuosa de cloruro de amonio al 20% (5 ml). La capa organica se separo, se lavo con una disolucion salina al 20%, y se le anadio gel de sflice SH (producido por Fuji Silysia, 1 g). La mezcla se agito a una temperatura interna de 68°C durante 1 hora, y se le anadio gel de sflice SH (producido por Fuji Silysia, 1 g). La mezcla se agito a una temperatura interna de 68°C durante 1 hora. Tras enfriar, el gel de sflice se separo por filtracion, y el disolvente se separo por destilacion a presion reducida. El residuo resultante se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de sflice (disolvente de desarrollo: acetato de etilo/metanol) para obtener el compuesto del tftulo como un solido amarillo (439 mg).

ESI-MS m/z 445 (MH+).

(Etapa 9)

Sfntesis de (S)-5-(quinolin-3-il)-7,8,9,10-tetrahidro-6H-pirimido[5',4':4,5]pirrolo[1,2-a]azepin-4,8-diamina

[Qufm. 40]

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Se anadio acido clorhfdrico 5 N (1 ml) a una disolucion de (S)-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-7,8,9,10-tetrahidro-6H- pirimido[5',4':4,5]pirrolo[1,2-a]azepin-8-il)carbamato de ferc-butilo (436 mg) obtenido en la etapa 8 en etanol (4 ml) a temperatura ambiente. La mezcla se agito a 60°C durante 3 horas. Tras enfriar, la mezcla de reaccion se basifico con una disolucion acuosa 5 N de hidroxido de sodio, seguido de extraccion con cloroformo. La capa organica se seco sobre sulfato de sodio anhidro, y el disolvente se separo por destilacion a presion reducida. El residuo resultante se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de sflice (disolvente de desarrollo: cloroformo/metanol) para obtener el compuesto del tftulo como un solido amarillo claro (320 mg).

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Sfntesis de (S)-W-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-7,8,9,10-tetrahidro-6H-pirimido[5’,4’:4,5]pirrolo[1,2-a]azepin-8-

il)acrilamida

[Qufm. 41]

imagen40

Se anadieron N,N-diisopropiletilamina (0,192 ml) y una disolucion de cloruro de acriloflo (83,3 mg) en acetonitrilo (0,83 ml) a una disolucion en acetonitrilo (1,6 ml)-agua (1,6 ml) de la (S)-5-(quinolin-3-il)-7,8,9,10-tetrahidro-6H- pirimido[5’,4’:4,5]pirrolo[1,2-a]azepin-4,8-diamina (317 mg) obtenida en la etapa 9 con enfriamiento con hielo. Tras agitarla a la misma temperatura durante 15 minutos, la mezcla se vertio en una disolucion acuosa saturada de bicarbonato de sodio, seguido de extraccion con cloroformo. La capa organica se seco sobre sulfato de sodio anhidro, y el disolvente se separo entonces mediante destilacion a presion reducida. El residuo resultante se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de sflice (disolvente de desarrollo: acetato de etilo/metanol) para obtener el compuesto del tftulo como un solido amarillo claro (226 mg).

RMN 1H (DMSO-d6) 8: 1,37-1,56 (2H, m), 1,98-2,20 (2H, m), 2,75-2,83 (1H, m), 2,88-2,97 (1H, m), 3,96-4,18 (2H, m), 4,78-4,90 (1H, m), 5,58 (1H, dd, J = 10,0, 2,2 Hz), 5,93 (2H, brs), 6,19 (1H, dd, J = 17,1, 2,2 Hz), 6,21 (1H, dd, J = 17,1, 10,0 Hz), 7,64 (1H, t, J = 7,4 Hz), 7,77 (1H, t, J = 7,4 Hz), 8,01-8,09 (2H, m), 8,14 (1H, s), 8,17 (1H, d, J = 7,6 Hz), 8,27 (1H, d, J = 2,0 Hz), 8,85 (1H, d, J = 2,0 Hz).

ESI-MS m/z 399 (MH+).

Ejemplo 8

(S)-W-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-7,8,9,10-tetrahidro-6H-pirimido[5’,4’:4,5]pirrolo[1,2-a]azepin-9-il)acrilamida

[Qufm. 42]

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(Etapa 1)

Sfntesis de (S)-(1-hidroxipent-4-en-2-il)carbamato de ferc-butilo

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Se anadieron W-metilmorfolina (15,25 ml) y cloroformiato de etilo (12,60 ml) a una disolucion de acido (S)-2-((terc- butoxicarbonil)amino)pent-4-enoico (25,0 g) en THF (250 ml) a -15°C. Tras agitar la mezcla a -15°C durante 15 minutos, la materia insoluble generada se separo por filtracion. Una disolucion de borohidruro de sodio (3,23 g) en agua (32 ml) se anadio al filtrado a -15°C, y la mezcla se agito a -15°C durante 1 hora. Se le anadio una disolucion acuosa saturada de cloruro de amonio, y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se le anadio acetato de etilo para separar la capa organica. La capa organica se lavo con una disolucion acuosa 0,5 N de hidrogenosulfato de potasio, con agua, con una disolucion acuosa 0,5 N de hidroxido de sodio, y con una disolucion saturada de cloruro de sodio, y se seco sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se separo entonces mediante destilacion a presion reducida. El residuo resultante se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de sflice (disolvente de desarrollo: hexano/acetato de etilo) para obtener el compuesto del tftulo como una sustancia oleosa, amarilla clara (11,93 g).

(Etapa 2)

Sfntesis de (S)-W-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-7,8,9,10-tetrahidro-6H-pirimido[5’,4’:4,5]pirrolo[1,2-a]azepin-9-

il)acrilamida

[Qufm. 44]

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De acuerdo con las Etapas 4 a 10 del ejemplo 7, excepto que se uso (S)-(1-hidroxipent-4-en-2-il)carbamato de terc- butilo obtenido en la etapa 1 en lugar del (R)-(5-hidroxipent-1-en-3-il)carbamato de terc-butilo obtenido en la etapa 4 del ejemplo 7, el compuesto del tftulo se obtuvo como un solido blanco lechoso (400,0 mg).

RMN 1H (DMSO-d6) 8: 1,57-1,65 (1H, m), 1,78-1,86 (1H, m), 1,93-2,05 (2H, m), 2,77-2,89 (2H, m), 3,98-4,04 (1H, m), 4,21-4,26 (1H, m), 4,63 (1H, d, J = 13,7 Hz), 5,60 (1H, dd, J = 10,0, 2,4 Hz), 5,93 (1H, brs), 6,12 (1H, dd, J = 17,1, 2,4 Hz), 6,25 (1H, dd, J = 17,1, 10,0 Hz), 7,63-7,67 (1H, m), 7,77-7,81 (1H, m), 8,07 (1H, t, J = 8,8 Hz), 8,12 (1H, s), 8,15 (1H, d, J = 7,6 Hz), 8,28 (1H, d, J = 2,2 Hz), 8,87 (1H, d, J = 2,2 Hz).

ESI-MS m/z 399 (MH+).

Ejemplo 9

(R)-W-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-7,8,9,10-tetrahidro-6H-pirimido[5’,4’:4,5]pirrolo[1,2-a]azepin-9-il)acrilamida (Compuesto I-9)

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(Etapa 1)

Sfntesis de (R)-(1-hidroxipent-4-en-2-il)carbamato de terc-butilo

[Qufm. 46]

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NHBoc

De acuerdo con la etapa 1 del ejemplo 8, excepto que se uso acido (R)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)pent-4-enoico en lugar del acido (S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)pent-4-enoico usado en la etapa 1 del ejemplo 8, el compuesto del tftulo se obtuvo como una sustancia oleosa, amarilla clara.

(Etapa 2)

Sfntesis de (R)-W-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-7,8,9,10-tetrahidro-6H-pirimido[5’,4’:4,5]pirrolo[1,2-a]azepin-9-

il)acrilamida

[Qufm. 47]

imagen46

De acuerdo con las Etapas 4 a 10 del ejemplo 7, excepto que se uso (R)-(1-hidroxipent-4-en-2-il)carbamato de terc- butilo obtenido en la etapa 1 en lugar del (R)-(5-hidroxipent-1-en-3-il)carbamato de terc-butilo usado en la etapa 4 del ejemplo 7, el compuesto del tftulo se obtuvo como un solido blanco lechoso (115,5 mg).

RMN 1H (DMSO-d6) 8: 1,57-1,65 (1H, m), 1,78-1,86 (1H, m), 1,93-2,05 (2H, m), 2,77-2,89 (2H, m), 3,98-4,04 (1H, m), 4,21-4,26 (1H, m), 4,63 (1H, d, J = 13,7 Hz), 5,60 (1H, dd, J = 10,0, 2,4 Hz), 5,93 (1H, brs), 6,12 (1H, dd, J = 17,1, 2,4 Hz), 6,25 (1H, dd, J = 17,1, 10,0 Hz), 7,63-7,67 (1H, m), 7,77-7,81 (1H, m), 8,07 (1H, t, J = 8,8 Hz), 8,12 (1H, s), 8,15 (1H, d, J = 7,6 Hz), 8,28 (1H, d, J = 2,2 Hz), 8,87 (1H, d, J = 2,2 Hz).

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Ejemplo 1 Comparativo

Sfntesis de W-(3-(4-amino-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-5-il)fenil)benzamida

[Qufm. 48]

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La sfntesis se llevo a cabo segun el metodo descrito en el documento WO2006/102079.

ESI-MS m/z 384 (MH+).

A continuacion se explican los metodos para sintetizar los intermedios de produccion de los compuestos de la presente invencion. Los metodos no estan limitados a ellos.

Ejemplo 1 de referencia

(S)-(1-(4-Amino-6-bromo-5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)but-3-en-2-il)carbamato de ferc-butilo

[Qufm. 49]

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(Etapa 1)

Sfntesis de (S)-(1-(4-cloro-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)but-3-en-2-il)carbamato de ferc-butilo

[Qufm. 50]

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Se anadio lentamente azodicarboxilato de diisopropilo (2,44 ml) a una disolucion de trifenilfosfina (13,1 g) en

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tetrahidrofurano (70 ml), con enfriamiento con hielo. La mezcla de reaccion se agito con enfriamiento con hielo durante 1 hora, y despues se le anadio lentamente una disolucion de (S)-(1-hidroxibut-3-en-2-il)carbamato de terc- butilo (7,0 g) sintetizado segun el metodo descrito en la bibliograffa no de patente Org. Lett., 2005, vol. 7, No. 5, p. 847-849 y 4-cloro-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (6,97 g) en tetrahidrofurano (35 ml). Despues de que la mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 2 horas, el disolvente se separo por destilacion a presion reducida. El residuo resultante se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de sflice (disolvente de desarrollo: hexano/acetato de etilo) para obtener el compuesto del tftulo (20,84 g) como una sustancia oleosa, amarilla clara.

ESI-MS m/z 448,450 (MH+).

(Etapa 2)

Sfntesis de (S)-(1-(4-amino-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)but-3-en-2-il)carbamato de terc-butilo

[Qufm. 51]

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Una disolucion metanolica de amonfaco 8 N (89,4 ml) se anadio al (S)-(1-(4-cloro-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7- il)but-3-en-2-il)carbamato de terc-butilo (20,84 g) obtenido en la etapa 1, y la mezcla se agito en un autoclave a 120°C durante 6 horas. La mezcla de reaccion se enfrio con hielo, y el disolvente se separo por destilacion a presion reducida. Despues de que el residuo resultante se diluyo con una pequena cantidad de metanol, el precipitado resultante se recogio mediante filtracion, se lavo con metanol frfo (11 ml), y despues se seco a presion reducida para obtener el compuesto del tftulo (8,28 g) como un solido blanco lechoso.

ESI-MS m/z 430 (MH+).

(Etapa 3)

Sfntesis de (S)-(1-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)but-3-en-2-il)carbamato de terc-butilo

[Qufm. 52]

imagen51

Una mezcla de (S)-(1-(4-amino-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)but-3-en-2-il)carbamato de terc-butilo (8,26 g) obtenido en la etapa 2, acido 3-quinolinboronico (4,99 g), carbonato de cesio (12,54 g), dicloruro de 1,1'- bis(difenilfosfino)ferroceno-paladio(II) (785,6 mg), DME (66 ml), y agua (33 ml) se agito en una atmosfera de nitrogeno a 100°C durante 2 horas. Tras enfriar la mezcla de reaccion, se le anadieron agua y acetato de etilo para separar la capa organica. La capa acuosa se extrajo entonces dos veces con acetato de etilo. La capa organica resultante se seco sobre sulfato de magnesio anhidro, y el disolvente se separo por destilacion a presion reducida. El residuo resultante se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de sflice (disolvente de desarrollo: hexano/acetato de etilo, acetato de etilo/metanol) para obtener el compuesto del tftulo (8,0 g) como un solido naranja claro.

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Sfntesis de (S)-(1-(4-amino-6-bromo-5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)but-3-en-2-il)carbamato de terc- butilo

[Qufm. 53]

imagen52

Se anadio W-bromosuccinimida (3,63 g) a una disolucion de (S)-(1-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-7-il)but-3-en-2-il)carbamato de terc-butilo (7,98 g) obtenido en la etapa 3 en DMF (64 ml) a -15°C, y la mezcla se agito a -15°C durante 1 hora. Se anadieron una disolucion acuosa de tiosulfato de sodio al 10% y acetato de etilo a la mezcla de reaccion, y se agito a temperatura ambiente durante 10 minutos. La capa organica se separo, y la capa acuosa se extrajo dos veces con acetato de etilo. La capa organica resultante se lavo dos veces con una disolucion saturada de cloruro de sodio, y se seco sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se separo por destilacion a presion reducida. El residuo resultante se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de sflice (disolvente de desarrollo: acetato de etilo/metanol) para obtener el compuesto del tftulo (6,30 g) como un solido marron claro. RMN 1H (CDCla) 8: 1,26 (9H, s), 4,35-4,39 (1H, m), 4,50-4,56 (1H, m), 4,72 (1H, brs), 4,92 (1H, brs), 5,26 (2H, d, J = 10,5 Hz), 5,33-5,39 (1H, m), 5,92 (1H, ddd, J = 17,2, 10,6, 5,4 Hz), 7,63-7,67 (1H, m), 7,79-7,83 (1H, m), 7,90-7,92 (1H, m), 8,19 (1H, d, J = 8,3 Hz), 8,27 (1H, d, J = 1,7Hz), 8,35 (1H, s), 9,07 (1H, d, J = 2,2 Hz).

ESI-MS m/z 509,511 (MH+).

Ejemplo 2 de referenda

(R)-(1-(4-Amino-6-bromo-5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)but-3-en-2-il)carbamato de terc-butilo

[Qufm. 54]

imagen53

(Etapa 1)

Sfntesis de (R)-(1-(4-cloro-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)but-3-en-2-il)carbamato de terc-butilo

5

10

15

20

25

30

35

imagen54

De acuerdo con la etapa 1 del ejemplo 1 de referencia, excepto que se uso (R)-(1-hidroxibut-3-en-2-il)carbamato de terc-butilo (8,74 g) en lugar del (S)-(1-hidroxibut-3-en-2-il)carbamato de terc-butilo obtenido en la etapa 1 del ejemplo 1 de referencia, el compuesto del tftulo (11,05 g) se obtuvo como un solido blanco.

ESI-MS m/z 448,450 (MH+).

(Etapa 2)

Sfntesis de (R)-(1-(4-amino-6-bromo-5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)but-3-en-2-il)carbamato de terc- butilo

[Qufm. 56]

imagen55

De acuerdo con las Etapas 2 a 4 del ejemplo 1 de referencia, excepto que se uso el (R)-(1-(4-cloro-5-yodo-7H- pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)but-3-en-2-il)carbamato de terc-butilo (7,88 g) obtenido en la etapa 1 en lugar del (S)- (1-(4- cloro-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)but-3-en-2-il)carbamato de terc-butilo obtenido en la etapa 2 del ejemplo 1 de referencia, el compuesto del tftulo (6,80 g) se obtuvo como un solido amarillo.

RMN 1H (CDCla) 8: 1,26 (9H, s), 4,35-4,39 (1H, m), 4,50-4,56 (1H, m), 4,72 (1H, brs), 4,92 (1H, brs), 5,26 (2H, d, J = 10,5 Hz), 5,33-5,39 (1H, m), 5,92 (1H, ddd, J = 17,2, 10,6, 5,4 Hz), 7,63-7,67 (1H, m), 7,79-7,83 (1H, m), 7,90-7,92 (1H, m), 8,19 (1H, d, J = 8,3 Hz), 8,27 (1H, d, J = 1,7Hz), 8,35 (1H, s), 9,07 (1H, d, J = 2,2Hz).

ESI-MS m/z 509,511 (MH+).

Ejemplo 3 de referencia

(S)-(1-(4-Amino-6-bromo-5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)penta-4-en-2-il)carbamato de terc-butilo

[Qufm. 57]

imagen56

5

10

15

20

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30

35

40

Sfntesis de (S)-(1-(4-cloro-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)penta-4-en-2-il)carbamato de ferc-butilo

[Qufm. 58]

imagen57

De acuerdo con la etapa 1 del ejemplo 1 de referencia, excepto que se uso (S)-(1-hidroxipenta-4-en-2-il)carbamato de ferc-butilo (11,93 g) en lugar del (S)-(1-hidroxibut-3-en-2-il)carbamato de ferc-butilo obtenido en la etapa 1 del ejemplo 1 de referencia, el compuesto del tftulo (4,96 g) se obtuvo como una sustancia oleosa, amarilla amarronada.

RMN 1H (CDCh) 8: 1,35 (9H, s), 2,18-2,35 (2H, m), 3,97-4,05 (1H, m), 4,27-4,33 (1H, m), 4,40-4,45 (1H, m), 4,634,65 (1H, m), 5,14-5,19 (2H, m), 5,76-5,86 (1H, m), 7,42 (1H, brs), 8,62 (1H, s).

ESI-MS m/z 462,464 (MH+).

(Etapa 2)

Sfntesis de (S)-(1-(4-amino-6-bromo-5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)penta-4-en-2-il)carbamato de ferc- butilo

[Qufm. 59]

imagen58

De acuerdo con las Etapas 2 a 4 del ejemplo 1 de referencia, excepto que se uso el (S)-(1-(4-cloro-5-yodo-7H- pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)penta-4-en-2-il)carbamato de terc-butilo (4,90 g) obtenido en la etapa 1 en lugar del (S)-(1- (4-cloro-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)but-3-en-2-il)carbamato de terc-butilo obtenido en la etapa 2 en el ejemplo 1 de referencia, el compuesto del tftulo (3,67 g) se obtuvo como un solido amarillo claro.

RMN 1H (CDCh) 8: 1,23 (9H, s), 2,39-2,42 (2H, m), 4,19-4,27 (1H, m), 4,29-4,34 (1H, m), 4,43-4,50 (1H, m), 4,92 (2H, brs), 5,04 (1H, d, J = 8,5 Hz), 5,18-5,24 (2H, m), 5,86-5,96 (1H, m), 7,63-7,67 (1H, m), 7,79-7,83 (1H, m), 7,907,92 (1H, m), 8,19 (1H, d, J = 8,5Hz), 8,27 (1H, d, J = 1,5 Hz), 8,34 (1H, s), 9,07 (1H, d, J = 2,0Hz).

ESI-MS m/z 523,525 (MH+).

Ejemplo 4 de referencia

(R)-(1-(4-amino-6-bromo-5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)penta-4-en-2-il)carbamato de ferc-butilo

5

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15

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(Etapa 1)

Sfntesis de (R)-(1-(4-cloro-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)penta-4-en-2-il)carbamato de terc-butilo

[Qufm. 61]

imagen60

De acuerdo con la etapa 1 del ejemplo 1 de referencia, excepto que se uso (R)-(1-hidroxipenta-4-en-2-il)carbamato de terc-butilo (856,4 mg) en lugar de (S)-(1-hidroxibut-3-en-2-il)carbamato de terc-butilo en la etapa 1 del ejemplo 1 de referencia, el compuesto del tftulo (1,54 g) se obtuvo como un solido blanco lechoso.

RMN 1H (CDCh) 8: 1,35 (9H, s), 2,18-2,35 (2H, m), 3,97-4,05 (1H, m), 4,27-4,33 (1H, m), 4,40-4,45 (1H, m), 4,634,65 (1H, m), 5,14-5,19 (2H, m), 5,76-5,86 (1H, m), 7,42 (1H, brs), 8,62 (1H, s).

ESI-MS m/z 462,464 (MH+).

(Etapa 2)

Sfntesis de (R)-(1-(4-amino-6-bromo-5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)penta-4-en-2-il)carbamato de terc- butilo

[Qufm. 62]

imagen61

De acuerdo con las Etapas 2 a 4 del ejemplo 1 de referencia, excepto que se uso el (R)-(1-(4-cloro-5-yodo-7H- pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)penta-4-en-2-il)carbamato de terc-butilo (974,9 mg) obtenido en la etapa 1 en lugar del (S)- (1-(4-cloro-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)but-3-en-2-il)carbamato de terc-butilo obtenido en la etapa 2 del ejemplo 1 de referencia, el compuesto del tftulo (1,02 g) se obtuvo como un solido marron claro.

RMN 1H (CDCh) 8: 1,23 (9H, s), 2,39-2,42 (2H, m), 4,19-4,27 (1H, m), 4,29-4,34 (1H, m), 4,43-4,50 (1H, m), 4,92 (2H, brs), 5,04 (1H, d, J = 8,5 Hz), 5,18-5,24 (2H, m), 5,86-5,96 (1H, m), 7,63-7,67 (1H, m), 7,79-7,83 (1H, m), 7,90-

5

10

15

20

25

30

35

7,92 (1H, m), 8,19 (1H, d, J = 8,5 Hz), 8,27 (1H, d, J = 1,5 Hz), 8,34 (1H, s), 9,07 (1H, d, J = 2,0Hz).

ESI-MS m/z 523,525 (MH+).

Ejemplo 5 de referenda

(R)-(5-(4-Amino-6-bromo-5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)penta-1-en-3-il)carbamato de ferc-butilo

[Qufm. 63]

imagen62

(Etapa 1)

Sfntesis de (R)-(5-(4-cloro-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)penta-1-en-3-il)carbamato de ferc-butilo

[Qufm. 64]

imagen63

De acuerdo con la etapa 1 del ejemplo 1 de referencia, excepto que se uso (S)-(5-hidroxipenta-1-en-3-il)carbamato de ferc-butilo (2,5 g) en lugar del (S)-(1-hidroxibut-3-en-2-il)carbamato de ferc-butilo obtenido en la etapa 1 del ejemplo 1 de referencia, el compuesto del tftulo (3,49 g) se obtuvo como un solido amarillo claro.

ESI-MS m/z 463,465 (MH+).

(Etapa 2)

Sfntesis de (R)-(5-(4-amino-6-bromo-5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)penta-1-en-3-il)carbamato de ferc- butilo

[Qufm. 65]

imagen64

De acuerdo con las etapas 2 a 4 del ejemplo 1 de referencia, excepto que se uso el (R)-(5-(4-cloro-5-yodo-7H-

5

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25

30

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40

pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)penta-1-en-3-il)carbamato de ferc-butilo (3,21 g) obtenido en la etapa 1 en lugar del (S)-(1- (4-cloro-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)but-3-en-2-il)carbamato de ferc-butilo obtenido en la etapa 2 del ejemplo 1 de referencia, el compuesto del tftulo (3,15 g) se obtuvo como un solido marron claro.

RMN 1H (CDCla) 8: 1,46 (9H, s), 2,02-2,21 (2H, m), 4,26-4,53 (3H, m), 4,90 (2H, brs), 5,07 (1H, d, J = 12,4 Hz), 5,15 (1H, d, J = 17,2 Hz), 5,15-5,23 (1H, m), 5,78 (1H, ddd, J = 17,2,12,4,5,2 Hz), 7,61-7,67 (1H, m), 7,78-7,83 (1H, m), 7,88-7,93 (1H, m), 8,17-8,21 (1H, m), 8,26 (1H, d, J = 2,2Hz), 8,35 (1H, s), 9,06 (1H, d, J = 2,2Hz).

ESI-MS m/z 523,525 (MH+).

Ejemplo 6 de referencia

(R)-6-Bromo-7-(2-((ferc-butildimetilsilil)oxi)but-3-en-1-il)-5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina

[Qufm. 66]

imagen65

(Etapa 1)

Sfntesis de 4-cloro-5-yodo-7-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina

[Qufm. 67]

imagen66

Una disolucion de 4-cloro-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (20,0 g) en DMF (50 ml) se anadio lentamente a una disolucion de hidruro de sodio (3,4 g) en DMF (190 ml), con enfriamiento con hielo. Despues, se le anadio cloruro de 2-(trimetilsilil)etoximetilo (13,3 ml), y se agito a la misma temperatura durante 2 horas. Se anadio mas cloruro de 2- (trimetilsilil)etoximetilo (1,3 ml) a la mezcla de reaccion, y se agito a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reaccion se vertio en agua (600 ml), y se agito a temperatura ambiente durante 15 minutos. El precipitado resultante se recogio mediante filtracion y se lavo con agua y eter diisopropflico, seguido de disolucion con acetato de etilo de nuevo. La materia insoluble se separo entonces por filtracion. El disolvente del filtrado se separo por destilacion a presion reducida. Se anadio heptano al residuo resultante para recoger el precipitado mediante filtracion. El precipitado se lavo con heptano, y se seco a presion reducida para obtener el compuesto del tftulo (21,2 g) como un solido blanco.

ESI-MS m/z 409,411 (MH+).

(Etapa 2)

5

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imagen67

Una disolucion metanolica de amonfaco 8 N (120 ml) se anadio a la 4-cloro-5-yodo-7-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-7H- pirrolo[2,3-d]pirimidina (20,0 g) obtenida en la etapa 1, y la mezcla se agito en un reactor de microondas a 120°C durante 1 hora. Despues de enfriarla, la mezcla de reaccion se diluyo con metanol (65 ml) y agua (185 ml). El precipitado resultante se recogio mediante filtracion, se lavo con agua, y se seco a presion reducida para obtener el compuesto del tftulo (15,2 g) como un solido blanco.

ESI-MS m/z 391 (MH+).

(Etapa 3)

Sfntesis de 5-(quinolin-3-il)-7-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina

[Qufm. 69]

imagen68

Una disolucion acuosa 2 M de carbonato de sodio (38 ml) se anadio a una disolucion de 5-yodo-7-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (15,0 g) obtenida en la etapa 2, acido 3-quinolinboronico (8,6 g), y tetraquis trifenil fosfina paladio(0) (2,2 g) en DME (270 ml), y se agito en una atmosfera de nitrogeno a 90°C durante 6 horas. Despues de que la mezcla de reaccion se enfrio, se le anadio agua (300 ml). El precipitado resultante se recogio mediante filtracion, despues se lavo con agua y con eter diisopropflico, y se seco a presion reducida. El residuo resultante se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de sflice (disolvente de desarrollo: metanol/cloroformo) para obtener el compuesto del tftulo (10,17 g) como un solido amarillo claro.

ESI-MS m/z 392 (MH+).

(Etapa 4)

Sfntesis de hidrocloruro de 5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina

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imagen69

Se anadio acido clorhfdrico concentrado (20 ml) a 90°C a una disolucion de 5-(quinolin-3-il)-7-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (10,0 g) obtenida en la etapa 3 en etanol (200 ml), y la mezcla se agito a la misma temperatura durante 25 minutos. A continuacion, se le anadio acido clorhfdrico concentrado (30 ml), y la mezcla se agito a la misma temperatura durante 75 minutos. Despues de que la mezcla de reaccion se enfrio, se le anadio etanol (100 ml), y se agito a 95°C durante 90 minutos. A continuacion, se anadieron etanol (100 ml) y acido clorhfdrico concentrado (25 ml), y la mezcla se agito a la misma temperatura durante 4 dfas. Despues de que la mezcla de reaccion se enfrio, se le anadio acetato de etilo. El precipitado resultante se recogio entonces mediante filtracion, se lavo con acetato de etilo, y se seco a presion reducida para obtener el compuesto del tftulo (4,4 g) como un solido amarillo.

ESI-MS m/z 335 (MH+).

(Etapa 5)

Sfntesis de (R)-7-(2-((terc-butildimetilsilil)oxi)but-3-en-1-il)-5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina

[Qufm. 71]

imagen70

Se anadieron carbonato de potasio (4,0 g) y (R)-4-metilbencenosulfonato de 2-((fercbutildimetilsilil)oxi)but-3-en-1-ilo (1,43 g) a una disolucion de hidrocloruro de 5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (1,22 g) obtenida en la etapa 4 en DMF (12,2 ml) a temperatura ambiente, y la mezcla se agito a 90°C durante 20 horas. Despues de que la mezcla de reaccion se enfrio, se le anadio agua (49 ml), y la mezcla resultante se agito a temperatura ambiente durante 3 horas. El precipitado resultante se recogio mediante filtracion, se lavo con agua, y se seco a presion reducida. El residuo resultante se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de sflice (disolvente de desarrollo: metanol/acetato de etilo) para obtener el compuesto del tftulo (1,31 g) como un solido amarillo claro.

RMN 1H (CDCla) 8: -0,32 (3H, s), -0,11 (3H, s), 0,80 (9H, s), 4,06 (1H, dd, J = 13,9, 8,5 Hz), 4,46 (1H, dd, J =13,9,

3.2 Hz), 4,59-4,64 (1H, m), 5,06 (2H, brs), 5,22 (1H, d, J = 10,5 Hz), 5,40 (1H, d, J = 16,8 Hz), 5,89-5,97 (1H, m), 7,21 (1H, s), 7,61-7,65 (1H, m), 7,74-7,78 (1H, m), 7,89 (1H, d, J = 8,1 Hz), 8,17 (1H, d, J = 8,3 Hz), 8,23 (1H, d, J =

2.2 Hz), 8,40 (1H, s), 9,10 (1H, d, J = 2,0 Hz).

ESI-MS m/z 446 (MH+).

(Etapa 6)

5

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40

imagen71

De acuerdo con la etapa 4 del ejemplo 1 de referencia, excepto que se uso la (R)-7-(2-((ferc-butildimetilsilil)oxi)but-3- en-1-il)-5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (1,30 g) obtenida en la etapa 5 en lugar de (S)-(1-(4- amino-5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)but-3-en-2-il)carbamato de ferc-butilo en la etapa 4 del ejemplo 1 de referencia, el compuesto del tftulo (1,44 g) se obtuvo como un solido amarillo.

RMN 1H (CDCla) 8: -0,34 (3H, s), -0,12 (3H, s), 0,75 (9H, s), 4,33-4,40 (2H, m), 4,74-4,79 (1H, dm), 4,91 (2H, brs), 5,21-5,24 (1H, m), 5,36-5,41 (1H, m), 5,92-6,01 (1H, m), 7,63-7,67 (1H, m), 7,79-7,83 (1H, m), 7,92 (1H, d, J = 7,8 Hz), 8,20 (1H, d, J = 8,5 Hz), 8,24 (1H, d, J = 2,2 Hz), 8,37 (1H, s), 9,06 (1H, d, J = 2,2 Hz).

ESI-MS m/z 524,526 (MH+).

Ejemplo 10

(S)-(4-Amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)carbamato de ferc-butilo

[Qufm. 73]

imagen72

Una disolucion de 9-borabiciclo[3.3.1]nonano 0,5 M en tetrahidrofurano (141,3 ml) se anadio a una disolucion de (S)- (1-(4-amino-6-bromo-5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)but-3-en-2-il)carbamato de ferc-butilo (6,0 g) obtenido en el ejemplo 1 de referencia en tetrahidrofurano (42 ml) en una atmosfera de nitrogeno a temperatura ambiente, y se agito a temperatura ambiente durante 2 horas. Se anadio lentamente una disolucion acuosa 2 N de hidroxido de sodio (84,8 ml) a la mezcla de reaccion a temperatura ambiente, y se desgasifico a presion reducida. En una atmosfera de nitrogeno, se le anadio (tetraquistrifenilfosfina)paladio(0) (1,70 g), y la mezcla se agito a 66°C durante 12 horas. Despues de que la mezcla de reaccion se enfrio, la capa organica se separo y se lavo con una disolucion acuosa de cloruro de amonio al 20% (60 ml). Despues se anadio gel de sflice SH (6,0 g) a la capa organica, y el resultante se agito a 50°C en una atmosfera de nitrogeno durante 14 horas, y despues se filtro. Se anadio gel de sflice SH (producido por Fuji Silysia Chemical Ltd.) (6,0 g) al filtrado de nuevo, y el resultante se agito en una atmosfera de nitrogeno a 50°C durante 14 horas, y despues se filtro. El disolvente se separo por destilacion del filtrado a presion reducida. El residuo resultante se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de sflice (disolvente de desarrollo: acetato de etilo/metanol) para obtener el compuesto del tftulo (4,46 g) (rendimiento: 88%) como un solido amarillo claro.

RMN 1H (CDCla) 8: 1,48 (9H, s), 1,91-2,00 (1H, m), 2,12-2,19 (1H, m), 2,98-3,11 (2H, m), 4,00 (1H, dd, J = 12,7, 7,1 Hz), 4,32 (1H, brs), 4,55 (1H, dd, J = 12,7, 4,6 Hz), 4,81-4,83 (1H, m), 4,90 (2H, brs), 7,61-7,65 (1H, m), 7,75-7,80 (1H, m), 7,88 (1H, d, J = 8,0 Hz), 8,16-8,18 (2H, m), 8,33 (1H, s), 9,02 (1H, d, J = 2,2 He) - ESI-MS m/z 431 (MH+).

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65

Ejemplo 11

Se anadio dfmero de 9-borabiciclo[3.3.1]nonano (0,431 g) a una disolucion del (S)-(1-(4-amino-6-bromo-5-(quinolin- 3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)but-3-en-2-il)carbamato de ferc-butilo (0,3 g) obtenido en el ejemplo 1 de referenda en tetrahidrofurano (4,5 ml) en una atmosfera de nitrogeno a temperatura ambiente, y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 2 horas. Se anadio lentamente una disolucion acuosa 4 N de hidroxido de sodio (2,12 ml) a la mezcla de reaccion a temperatura ambiente, y se desgasifico a presion reducida. En una atmosfera de nitrogeno, se anadio (tetraquistrifenilfosfina)paladio(0) (0,136 g) a la mezcla resultante, y se agito a 64°C durante 12 horas. Despues de que la mezcla de reaccion se enfrio y se diluyo con acetato de etilo, se le anadio una disolucion acuosa saturada de cloruro de amonio. Despues de que la materia insoluble resultante en esta etapa se elimino mediante filtracion, la capa organica se separo. La capa organica resultante se seco sobre sulfato de sodio anhidro, despues se filtro, y se concentro a presion reducida para obtener un producto bruto. El producto bruto se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de sflice (disolvente de desarrollo: acetato de etilo/metanol) para obtener (S)-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)carbamato de ferc-butilo (203 mg) (rendimiento: 80%) como un solido amarillo claro.

Ejemplo 12

Se anadio dfmero de 9-borabiciclo[3.3.1]nonano (431 mg) a una disolucion de (S)-(1-(4-amino-6-bromo-5-(quinolin-3- il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)but-3-en-2-il)carbamato de ferc-butilo (300 mg) obtenido en el ejemplo 1 de referencia en 1,2-dimetoxietano (4,5 ml) en una atmosfera de nitrogeno a temperatura ambiente, y la mezcla se agito a 48°C durante 40 minutos. Despues de que la mezcla se dejo enfriar hasta la temperatura ambiente, se anadio lentamente una disolucion acuosa 4 N de hidroxido de sodio (2,1 ml) a la mezcla de reaccion a temperatura ambiente, y se desgasifico a presion reducida. En una atmosfera de nitrogeno, se le anadio (tetraquistrifenilfosfina)paladio(0) (136 mg), y se agito a 79°C durante 5 horas. Despues de que la mezcla de reaccion se enfrio y se diluyo con acetato de etilo, se anadio una disolucion acuosa saturada de cloruro de amonio. La materia insoluble resultante en esta etapa se elimino mediante filtracion, y la capa organica se separo. La capa organica resultante se seco sobre sulfato de sodio anhidro y se filtro, y despues se concentro a presion reducida para obtener un producto bruto. El producto bruto se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de sflice (disolvente de desarrollo: acetato de etilo/metanol) para obtener (S)-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9- tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)carbamato de ferc-butilo (0,190 g) (rendimiento: 75%) como un solido amarillo claro.

Ejemplo 13

De acuerdo con el ejemplo 10, excepto que se uso una disolucion acuosa 4 N de hidroxido de litio (1,8 ml) en lugar de la disolucion acuosa de hidroxido de sodio usada en el ejemplo 10, se obtuvo (Sj-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-

6.7.8.9- tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)carbamato de ferc-butilo (224 mg) (rendimiento: 88%) como un solido amarillo claro.

Ejemplo 14

De acuerdo con el ejemplo 10, excepto que se uso una disolucion acuosa 4 N de hidroxido de potasio (1,8 ml) en lugar de la disolucion acuosa de hidroxido de sodio usada en el ejemplo 10, se obtuvo (S)-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-

6.7.8.9- tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)carbamato de ferc-butilo (198 mg) (rendimiento: 78%) como un solido amarillo claro.

Ejemplo 15

De acuerdo con el ejemplo 10, excepto que se uso una disolucion acuosa 4 N de hidroxido de cesio (1,8 ml) en lugar de la disolucion acuosa de hidroxido de sodio usada en el Ejemplo 10, se obtuvo (S)-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-

6.7.8.9- tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)carbamato de ferc-butilo (202 mg) (rendimiento: 80%) como un solido amarillo claro.

Ejemplo 16

De acuerdo con el ejemplo 10, excepto que se usaron tris(dibencilidenacetona)dipaladio(0) (34 mg) y trifenilfosfina (39 mg) en lugar del (tetraquistrifenilfosfina)paladio(0) usado en el ejemplo 10, se obtuvo (S)- (4-amino-5-(quinolin-3- il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)carbamato de terc-butilo (194 mg) (rendimiento: 76%) como un solido amarillo claro.

Ejemplo 17

(R)-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)carbamato de ferc-butilo

5

10

15

20

25

30

35

40

imagen73

De acuerdo con el ejemplo 10, excepto que se uso el (R)-(1-(4-amino-6-bromo-5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-7-il)but-3-en-2-il)carbamato de ferc-butilo (6,70 g) obtenido en el ejemplo 2 de referencia en lugar del (S)- (1-(4-amino-6-bromo-5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)but-3-en-2-il)carbamato de ferc-butilo obtenido en el ejemplo 10, se obtuvo (R)-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)carbamato de terc-butilo (4,76 g) (rendimiento: 84%) como un solido amarillo claro.

RMN 1H (CDCla) 8: 1,48 (9H, s), 1,91-2,00 (1H, m), 2,12-2,19 (1H, m), 2,98-3,11 (2H, m), 4,00 (1H, dd, J = 12,7, 7,1 Hz), 4,32 (1H, brs), 4,55 (1H, dd, J =12,7,4,6 Hz), 4,81-4,83 (1H, m), 4,90 (2H, brs), 7,61-7,65 (1H, m), 7,75-7,80 (1H, m), 7,88 (1H, d, J = 8,0 Hz), 8,16-8,18(2H, m), 8,33 (1H, s), 9,02 (1H, d, J = 2,2 Hz).

ESI-MS m/z 431 (MH+).

Ejemplo 18

(S)-(4-Amino-5-(quinolin-3-il)-7,8,9,10-tetrahidro-6H-pirimido[5',4':4,5]pirrolo[1,2-a]azepin-9-il)carbamato de ferc-

butilo

[Qufm. 75]

imagen74

De acuerdo con el ejemplo 10, excepto que se uso el (S)- (1-(4-amino-6-bromo-5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-7-il)penta-4-en-2-il)carbamato de terc-butilo (2,0 g) obtenido en el ejemplo 8 de referencia en lugar del (S)-(1-(4-amino-6-bromo-5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)but-3-en-2-il)carbamato de ferc-butilo obtenido en el ejemplo 10, el compuesto del tftulo (1,56 g) (rendimiento: 92%) se obtuvo como un solido amarillo claro.

RMN 1H (CDCla) 8: 1,43 (9H, s), 1,77-1,89 (2H, m), 1,95-2,14 (2H, m), 2,71-2,84 (1H, m), 2,86-3,00 (1H, m), 4,004,15 (1H, m), 4,24-4,40 (1H, m), 4,40-4,50 (1H, m), 4,84 (3H, brs), 7,62-7,66 (1H, m), 7,77-7,81 (1H, m), 7,89-7,91 (1H, m), 8,18-8,20 (2H, m), 8,33 (1H, s), 8,98 (1H, d, J = 1,5 Hz).

ESI-MS m/z 445 (MH+).

Ejemplo 19

(R)-(4-Amino-5-(quinolin-3-il)-7,8,9,10-tetrahidro-6H-pirimido[5’,4’:4,5]pirrolo[1,2-a]azepin-9-il)carbamato de ferc-

butilo

5

10

15

20

25

30

35

imagen75

De acuerdo con el ejemplo 10, excepto que se uso el (R)-(1-(4-amino-6-bromo-5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-7-il)penta-4-en-2-il)carbamato de terc-butilo (690 mg) obtenido en el ejemplo 9 de referencia en lugar del (S)-(1-(4-amino-6-bromo-5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)but-3-en-2-il)carbamato de terc-butilo obtenido en el ejemplo 10, el compuesto del tftulo (429 mg) (rendimiento: 73%) se obtuvo como un solido amarillo.

RMN 1H (CDCla) 8: 1,43 (9H, s), 1,77-1,89 (2H, m), 1,95-2,14 (2H, m), 2,71-2,84 (1H, m), 2,86-3,00 (1H, m), 4,004,15 (1H, m), 4,24-4,40 (1H, m), 4,40-4,50 (1H, m), 4,84 (3H, brs), 7,62-7,66 (1H, m), 7,77-7,81 (1H, m), 7,89-7,91 (1H, m), 8,18-8,20 (2H, m), 8,33 (1H, s), 8,98 (1H, d, J = 1,5 Hz).

ESI-MS m/z 445 (MH+).

Ejemplo 20

(S)-(4-Amino-5-(quinolin-3-il)-7,8,9,10-tetrahidro-6H-pirimido[5',4':4,5]pirrolo[1,2-a]azepin-8-il)carbamato de terc-

butilo

[Qufm. 77]

imagen76

De acuerdo con el ejemplo 10, excepto que se uso el (R)- (5-(4-amino-6-bromo-5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-7-il)penta-1-en-3-il)carbamato de terc-butilo (994 mg) obtenido en el ejemplo 10 de referencia en lugar del (S)-(1-(4-amino-6-bromo-5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)but-3-en-2-il)carbamato de terc-butilo obtenido en el ejemplo 10, el compuesto del tftulo (439 mg) (rendimiento: 52%) se obtuvo como un solido amarillo.

RMN 1H (CDCla) 8: 1,46 (9H, s), 2,18-2,28 (1H, m), 2,32-2,42 (1H, m), 2,65-2,77 (1H, m), 2,99-3,08 (1H, m), 3,803,97 (2H, m), 4,53-4,62 (1H, m), 4,80 (2H, brs), 4,97-5,11 (1H, m), 7,61-7,66 (1H, m), 7,76-7,81 (1H, m), 7,88 (1H, d, J = 8,0 Hz), 8,15-8,20 (2H, m), 8,33 (1H, s), 8,97 (1H, d, J = 2,2 Hz).

ESI-MS m/z 445 (MH+).

Ejemplo 21

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

imagen77

De acuerdo con el ejemplo 10, excepto que se uso la (R)-6-bromo-7-(2-((ferc-butildimetilsilil)oxi)but-3-en-1-il)-5- (quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (1,0 g) obtenida en el ejemplo 11 de referencia en lugar del (S)-(1-(4- amino-6-bromo-5-(quinolin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)but-3-en-2-il)carbamato de terc-butilo obtenido en el ejemplo 10, se obtuvo (R)-8-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-4- amina (546 mg) (rendimiento: 64%).

RMN 1H (CDCla) 8: 0,14 (3H, s), 0,15 (3H, s), 0,91 (9H, s), 1,97-2,02 (2H, m), 2,85-2,92 (2H, m), 3,14-3,22 (1H, m), 4,11-4,18 (1H, m), 4,28-4,33 (1H, m), 4,41-4,46 (1H, m), 4,95 (2H, brs), 7,61-7,65 (1H, m), 7,75-7,79 (1H, m), 7,887,90 (1H, m), 8,16-8,18 (2H, m), 8,35 (1H, s), 9,04 (1H, d, J = 2,0 Hz).

ESI-MS m/z 446 (MH+).

Ejemplo 7 de referencia

De acuerdo con el ejemplo 10, excepto que se uso dicloruro de 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenopaladio(II) (32 mg) en lugar del (tetraquistrifenilfosfina)paladio(0) usado en el ejemplo 10, se obtuvo (S)-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9- tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)carbamato de ferc-butilo (21 mg) (rendimiento: 25%) como un solido amarillo claro.

Ejemplo 8 de referencia

De acuerdo con el ejemplo 10, excepto que se usaron carbonato de cesio (2,3 g) y agua (1,8 ml) en lugar de la disolucion acuosa de hidroxido de sodio obtenida en el ejemplo 10, se obtuvo (S)-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9- tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)carbamato de terc-butilo (88 mg) (rendimiento: 35%) como un solido amarillo claro.

Ejemplos de ensayo

Los compuestos de la presente invencion se ensayaron mediante los siguientes metodos.

Ejemplo 1 de ensayo

Medicion de la actividad inhibidora para diversas cinasas de EGFR (in vitro)

1) Medicion de la actividad inhibidora de cinasa de EGFR (T790M/L858R)

Se midieron las actividades inhibidoras de los compuestos I-1, I-2, I-3, I-4, I-5, I-6, I-7, I-8 e I-9 para cinasa de EGFR (T790M/L858R).

Los materiales fueron los siguientes. El peptido de substrato fue un peptido biotinilado (biotina-EEPLYWSFPAKKK) sintetizado mediante referencia a la secuencia de aminoacidos de FL-peptido 22 (un reactivo para serie LabChip (marca registrada); Caliper Life Sciences, Inc.). El EGFR (T790M/L858r) es una protefna EGFR (T790M/L858R) humana recombinante purificada adquirida de Carna Biosciences, Inc.

El metodo de medida fue como sigue. Los compuestos I-1, I-2, I-3, I-4, I-5, I-6, I-7, I-8 e I-9 se disolvieron cada uno en dimetil sulfoxido (DMSO), y despues cada uno se diluyo en serie con DMSO. Posteriormente, la protefna EGFR (T790M/L858R), peptido de sustrato (concentracion final: 250 nM), cloruro de magnesio (concentracion final: 10 mM), cloruro de manganeso (concentracion final: 10 mM), ATP (concentracion final: 1 |mM), y la disolucion diluida en DMSO de cada compuesto (concentracion final de DMSO: 2,5%) se anadieron a un amortiguador de reaccion de cinasa (Carna Biosciences, Inc.), y la mezcla se incubo a 25°C durante 120 minutos para la reaccion de cinasa. Se anadio le EDTA hasta una concentracion final de 24 mM para terminar de ese modo la reaccion. Entonces, se anadio una disolucion de deteccion que contiene anticuerpo anti-tirosina fosforilada marcado con europio (Eu) PT66

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

(PerkinElmer) y SureLight APC-SA (PerkinElmer), y la mezcla resultante se dejo reposar a temperatura ambiente durante 2 horas o mas. Finalmente, la intensidad de fluorescencia bajo la luz de excitacion con una longitud de onda de 337 nm se midio mediante un PHERAstar FS (BMG LABTECH) a dos longitudes de onda de 620 nm y 665 nm. El nivel de fosforilacion de cada muestra de ensayo se calculo a partir de la relacion de intensidad de fluorescencia de las dos longitudes de onda en control de DMSO y en la muestra de ensayo, y la concentracion del compuesto en cuya fosforilacion se inhibio en un 50% se determino como el valor de IC50 (nM) de cada compuesto.

2) Medicion de la actividad inhibidora de cinasa de EGFR (d746-750/T790M)

Se midieron las actividades inhibidoras de los compuestos I-1, I-2, I-3, I-4, I-5, I-6, I-7, I-8 e I-9 para cinasa de EGFR (d746-750/T790M).

Los materiales fueron los siguientes. El EGFR (d746-750/T790M) es una protefna EGFR (d746-750/T790M) humana recombinante purificada adquirida de Carna Biosciences, Inc. La concentracion final de ATP fue 1,5 pMI. En cuanto a otras condiciones, se utilizaron los mismos materiales y metodos como aquellos utilizados en la medida de actividad inhibidora de cinasa EGFR (T790M/L858R) para determinar el valor de IC50 (nM) de cada compuesto.

3) Medicion de la actividad inhibidora de cinasa de EGFR (L858R)

Se midieron las actividades inhibidoras de los compuestos I-1, I-2, I-3, I-4, I-5, 1-6, 1-7, 1-8 e 1-9 para cinasa de EGFR (L858R).

Los materiales fueron los siguientes. El EGFR (L858R) es una protefna EGFR (L858R) humana recombinante purificada adquirida de Cama Biosciences, Inc. La concentracion final de ATP fue de 4 p.M. En cuanto a otras condiciones, se utilizaron los mismos materiales y metodos como aquellos utilizados en la medida de actividad inhibidora de cinasa de EGFR (T790M/L858R) para determinar el valor de IC50 (nM) de cada compuesto.

4) Medicion de la actividad inhibidora de cinasa de EGFR (d746-750)

Se midieron Las actividades inhibidoras de los compuestos I-1, I-2, I-3, I-4, I- 5, I-6, I-7, I-8 e I-9 para la actividad de cinasa EGFR (d746-750).

Los materiales fueron los siguientes. El EGFR (d746-750) es una protefna EGFR (d746-750) humana recombinante purificada adquirida de Carna Biosciences, Inc. La concentracion final de ATP fue de 5 p.M. El tiempo de incubacion para la reaccion de cinasa fue 90 minutos. En cuanto a otras condiciones, se utilizaron los mismos materiales y metodos como aquellos utilizados en la medida de actividad inhibidora de cinasa de EGFR (T790M/L858R) para determinar el valor de IC50 (nM) de cada compuesto.

5) EGFR (WT)

Se midieron las actividades inhibidoras de los compuestos I-1, I-2, I-3, I-4, I-5, I-6, 1-7, 1-8 e I-9 en la cinasa de EGFR (WT).

Los materiales fueron los siguientes. Como el EGFR (WT), el dominio citoplasmico de EGFR (WT) humano en el cual una etiqueta FLAG se fusiono al termino N se expreso en un sistema de expresion de baculovirus utilizando celulas Sf9 de insecto, y se purifico con agarosa de anticuerpo anti-FLAG (Sigma-Aldrich). La concentracion final del peptido de sustrato fue 500 nM, y la concentracion final de ATP fue de 4,7 p.M. En cuanto a otras condiciones, se utilizaron los mismos materiales y metodos como aquellos utilizados en la medida de actividad inhibidora de cinasa de EGFR (T790M/L858R) para determinar el valor de IC50 (nM) de cada compuesto.

La Tabla 1 muestra los resultados.

Se confirmo que los compuestos I-1, I-2, I-3, I-4, I-5, I-6, I-7, I-8 e I-9 mostraron actividades inhibidoras potentes no solo para EGFR (L858R) y EGFR (d746-750), sino tambien para EGFR (T790M/L858R) y EGFR (d746-750/T790M). Tambien se confirmo que sus actividades inhibidoras para EGFR (WT) fueron menores que aquellas para las protefnas EGFR mutantes anteriores.

Por el contrario, se confirmo que N-(3-(4-amino-6,7,8,9-tetrahidropirimida[5,4-b]indolizin-5-il)fenil)benzamida (PTL 1), que es un compuesto que tiene una estructura similar a la del compuesto de la presente invencion, casi no tiene actividad inhibidora de estas cinasas de EGFR.

5

10

15

20

25

30

35

40

Tabla 1

Tipo de

EGFR EGFR (d746- EGFR EGFR EGFR

EGFR

(T790M/L858R) 750/T790M) (L858R) (d746-750) (WT)

Compuesto

I-1

5,3 2,8 14 13 170

I-2

0,3 0,2 0,4 0,4 4,3

I-3

1,3 0,6 1,3 1 18

I-4

6,7 4,1 12 10 120

I-5

0,4 0,3 0,7 0,5 5,9

I-6

1,2 1,2 2,9 3,6 41

1-7

1,4 0,5 2,9 1,8 33

I-8

18 13 41 20 490

I-9

160 82 350 270 3600

Ej. 1 Comp.

>5000 >5000 >5000 1500 >5000

Ejemplo 2 de ensayo: Medicion de la actividad inhibidora del crecimiento para lineas celulares que expresan EGFR mutante y tipo salvaje (in vitro)

1) Una linea celular de adenocarcinoma de pulmon NCI-H1975 que expresa EGFR (T790M/L858R), 2) una linea celular de adenocarcinoma de pulmon HCC827 que expresa EGFR (d746-750), y 3) una linea celular de carcinoma epidermico humano A431 que expresa EGFR (WT) se suspendieron cada una en el medio recomendado por ATCC. La suspension de celula se sembro en cada pocillo de una microplaca plana de 384 pocillos o placa plana de 96 pocillos, y se cultivo en una incubadora que contiene 5% de gas de dioxido de carbono a 37°C durante un dia. el compuesto de la presente invencion y el compuesto de referencia se disolvieron en DMSO, y entonces la disolucion de DMSO de cada compuesto de ensayo se diluyo con DMSO hasta una concentracion 200 veces superior a la concentracion final. La disolucion diluida en DMSO del compuesto de ensayo se diluyo con el medio utilizado para suspender cada linea celular, y la disolucion diluida se anadio a cada pocillo de la placa de cultivo celular para que la concentracion final de DMSO fuera 0,5%. Despues, las celulas se cultivaron en una incubadora que contiene 5% de gas de dioxido de carbono a 37°C durante tres dfas. El numero de celulas se midio en el momento de iniciar y terminar el cultivo mediante el uso de un ensayo CellTiter-Glo (producido por Promega) de acuerdo con un protocolo recomendado por Promega. La tasa de inhibicion de crecimiento celular se calculo mediante la siguiente formula, y se determino la concentracion del compuesto de ensayo a la cual se inhibio el crecimiento celular en un 50% (GI50 (nM)).

Tasa de inhibicion del crecimiento (%) = (C-T)/(C-C0) X 100

T: Intensidad de luminiscencia del pocillo al que se anadio el compuesto de ensayo

C: Intensidad de luminiscencia del pocillo al que no se anadio el compuesto de ensayo

C0: Intensidad de luminiscencia del pocillo medida antes de la adicion del compuesto de ensayo

La Tabla 2 muestra los resultados.

Se confirmo que los compuestos I-2 e I-3 mostraban actividades inhibidoras del crecimiento potentes no solo para celulas que expresan EGFR (d746-750), sino tambien para celulas que expresan EGFR (T790M/L858R). Tambien se confirmo que los compuestos I-2 e I-3 mostraron actividades inhibidoras del crecimiento mas debiles para las celulas que expresan EGFr (WT) que para las celulas anteriores que expresan EGFRs mutantes.

Tabla 2

Ejemplo 2 de ensayo

Tipo de EGFR, nombre de celula

1) EGFR (T790M/L858R) NCI-H1975 2) EGFR (d746- 750) HCC827 3) EGFR (WT) A431

Compuesto

I-2

27 5 590

I-3

86 10 1800

Claims (9)

1. 5

   10

   15

   20

   25

   30

   35

   40

   45

   50

   REIVINDICACIONES

   1. Compuesto representado por la formula (I) siguiente

   imagen1

   o sal del mismo, en el que m es 1 o 2; n es 1 o 2;

   R1 es un atomo de hidrogeno o un grupo alquilo de C1-C4; y

   R2, R3, y R4 son iguales o diferentes, y son cada uno un atomo de hidrogeno, un atomo de halogeno, un grupo de alquilo de C1-C4, o un grupo representado por la formula (a):

   -CH2-N(R5)(Ra) (a)

   en la que R5 y R6 son iguales o diferentes, y cada uno representa un atomo de hidrogeno o un grupo alquilo de C1-C4, o R5 y R6 pueden formar un grupo heterocicloalquilo que presenta un anillo de 4 a 6 miembros, junto con el atomo de nitrogeno unido al mismo.
2. 2. Compuesto o sal del mismo segun la reivindicacion 1, en el que m es 1 o 2;

   n es 1 o 2;

   R1 es un atomo de hidrogeno o un grupo alquilo de C1-C4; y

   R2, R3, y R4 son iguales o diferentes, y son cada uno un atomo de hidrogeno, un atomo de halogeno, un grupo de alquilo de C1-C4, o un grupo representado por la formula (a):

   -CH2-N(R5)(R6) (a)

   en la que R5 y R6 son iguales o diferentes, y cada uno representa un grupo alquilo de C1-C4.
3. 3. Compuesto o sal del mismo segun la reivindicacion 1 o 2, en el que m es 1 o 2;

   n es 1 o 2;

   R1 es un atomo de hidrogeno o grupo metilo; y

   R2, R3, y R4 son iguales o diferentes, y son cada uno un atomo de hidrogeno, un atomo de cloro, o un grupo dimetilamino metilo.
4. 4. Compuesto o sal del mismo segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que m y n son (m,n) = (1,1), (1,2), o (2,1).
5. 5. Compuesto o sal del mismo segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el compuesto se selecciona de entre el grupo de compuestos siguientes:

   5

   10

   15

   20

   25

   30

   (R) -N-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)acrilamida,

   (S) -N-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)acrilamida, N-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)-N-metilacrilamida, (E)-N-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)-4-(dimetilamino)-2-butenamida, (S,E)-N-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)-3-cloroacrilamida, (S,Z)-N-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)-3-cloroacrilamida, (S)-N-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-7,8,9,10-tetrahidro-6H-pirimido[5',4':4,5]pirrolo[1,2-a]azepin-8-il)acrilamida, (S)-N-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-7,8,9,10-tetrahidro-6H-pirimido[5',4':4,5]pirrolo[1,2-a]azepin-9-il)acrilamida, y (R)-N-(4-amino-5-(quinolin-3-il)-7,8,9,10-tetrahidro-6H-pirimido[5',4':4,5]pirrolo[1,2-a]azepin-9-il)acrilamida.
6. 6. Compuesto o sal del mismo segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para su utilizacion como un inhibidor de EGFR.
7. 7. Composicion farmaceutica que comprende el compuesto o una sal del mismo segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.
8. 8. Compuesto o sal del mismo segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para su utilizacion como un agente antitumoral.
9. 9. Compuesto o sal del mismo segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para su utilizacion en el tratamiento o la prevencion del cancer.