CN104910161B - 作为jak抑制剂的吡唑并嘧啶化合物和方法 - Google Patents

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Abstract

本申请涉及用作一种或多种Janus激酶抑制剂的式I化合物、其对映异构体、非对映异构体、互变异构体或药用盐，其中R1、R2和R3如本申请定义。本发明还披露包含式I化合物和药用载体、辅料或媒介物的药物组合物和在患者中治疗响应于Janus激酶活性抑制的疾病或病症或减轻响应于Janus激酶活性抑制的疾病或病症的严重程度的方法。

Description

作为JAK抑制剂的吡唑并嘧啶化合物和方法
本申请是中国申请号为201080039041.1、发明名称为“作为JAK抑制剂的吡唑并嘧啶化合物和方法”且申请日为2010年7月2日的专利申请(PCT申请号为PCT/US2010/040906)的分案申请。
相关申请的交叉参考
根据35U.S.C.119(e)，本申请要求2009年7月2日提交的美国临时申请61/222,918的权益，为了所有目的将61/222,918整体并入本申请作为参考。
技术领域
本发明涉及为一种或多种Janus激酶的抑制剂的式I的吡唑并嘧啶化合物，以及含有这些化合物的组合物和使用方法包括但不限于体外、原位和体内诊断或治疗哺乳动物细胞。
背景技术
细胞因子途径调介导宽范围的生物功能，所述生物功能包括炎症和免疫的多个方面。Janus激酶(JAK)(包括JAK1、JAK2、JAK3和TYK2)是与I型和II型细胞因子受体有关的胞质蛋白激酶，其调节细胞因子信号转导。细胞因子与同族受体的衔接激发了与JAK相关受体的活化，并且这导致JAK-介导的信号传导子及转录激活子(STAT)蛋白的酪氨酸磷酸化，并最终导致特定基因组的转录激活(Schindler et al.,2007,J Biol.Chem.282:20059-63)。JAK1、JAK2和TYK2表现出宽的基因表达模式，而JAK3的表达限于白细胞。细胞因子受体通常发挥异源二聚体的功能，并因此导致不止一种类型的JAK激酶通常与细胞因子受体复合物相关。已经在多种情况下通过遗传研究确定了与不同细胞因子受体复合物相关的具体JAK，并且通过其它实验证据得到证实。
JAK1最初是在对于新颖的激酶的筛选中鉴定出的(Wilks A.F.,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.86:1603-1607)。遗传和生物化学研究显示，JAK1在功能上和生理上与I型干扰素(例如，IFNα)、II型干扰素(例如，IFNγ)、IL-2和IL-6细胞因子受体复合物相关(Kisseleva等,2002,gene 285:1-24；Levy等,2005,Nat.Rev.Mol.Cell Biol.3:651-662；O’Shea等,2002,Cell,109(suppl.):S121-S131)。JAK1敲除的小鼠由于LIF受体信号传导缺陷在围产期死亡(Kisseleva等,2002,gene 285:1-24；O’Shea等,2002,Cell,109(suppl.):S121-S131)。对来源于JAK1敲除的小鼠的组织的鉴定表明了该激酶在IFN、IL-10、IL-2/IL-4和IL-6途径中的关键作用。靶向IL-6途径的人源化的单克隆抗体(Tocilizumab)最近已由欧盟委员会批准用于治疗中度至重度风湿性关节炎(Scheinecker等,2009,Nat.Rev.Drug Discov.8:273-274)。
生物化学和遗传学研究已证明了JAK2与单链(例如，EPO)、IL-3和干扰素γ细胞因子受体家族之间的相关性(Kisseleva et al.,2002,gene 285:1-24；Levy et al.,2005,Nat.Rev.Mol.Cell Biol.3:651-662；O’Shea et al.,2002,Cell,109(suppl.):S121-S131)。与该研究一致的是，JAK2敲除的小鼠死于贫血(O’Shea et al.,2002,Cell,109(suppl.):S121-S131)。在JAK2中激活突变的激酶(例如，JAK2V617F)与人类骨髓增生性疾病(MPDs)有关。
JAK3排他性地与γ细胞因子受体共同链(gamma common cytokine receptorchain)相关，后者存在于IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21细胞因子受体复合物中。JAK3对于淋巴细胞发育和增殖是至关重要的，且JAK3中的突变导致重症联合免疫缺陷(SCID)(O’Shea et al.,2002,Cell,109(suppl.):S121-S131)。基于JAK3和JAK3介导途径在调节淋巴细胞中的作用，已经就免疫抑制的适应症(例如，移植排斥和类风湿性关节炎)靶向了JAK3和JAK3介导途径(Baslund等,2005,Arthritis&Rheumatism 52:2686-2692；Changelian et al.,2003,Science 302:875-878)。
TYK2与I型干扰素(例如，IFNα)、IL-6、IL-10、IL-12和IL-23细胞因子受体复合物相关(Kisseleva等,2002,gene 285:1-24；Watford,W.T.&O’Shea,J.J.,2006,Immunity25:695-697)。与此一致，来源于TYK2缺陷人类的原代细胞具有缺陷的I型干扰素、IL-6、IL-10、IL-12和IL-23信号传导。靶向IL-12和IL-23细胞因子的共享的p40亚基的全长人单克隆抗体(Utsekinumab)最近由欧盟委员会批准用于治疗中度至重度斑块状银屑病(Kruege等,2007,N.Engl.J.Med.356:580-92；Reich等,2009,Nat.Rev.Drug Discov.8:355-356)。此外，正在对靶向IL-12和IL-13途径的抗体进行临床试验，用于治疗克罗恩病(Mannon等,2004,N.Engl.J.Med.351:2069-79)。
发明内容
一个实施方案包括式I化合物、其对映异构体、非对映异构体、互变异构体或药用盐:
其中R1、R2和R3如本申请定义。
另一种实施方案包括药物组合物，其包含式I化合物和药用载体、辅料或媒介物。
另一种实施方案包括在患者中治疗或减轻疾病或病症的严重程度的方法，所述疾病或病症响应于对一种或多种选自JAK1、JAK2、JAK3和TYK2的Janus激酶活性的抑制。所述方法包括向所述患者给予治疗有效量的式I化合物。
另一种实施方案包括式I化合物用于治疗的用途。
另一种实施方案包括式I化合物用于预防、治疗或减轻疾病严重程度的用途。在一种实施方案中，所述疾病为为自身免疫性疾病。
另一种实施方案包括式I化合物在制备用于预防、治疗疾病或减轻疾病严重程度的药物中的用途。在一个实施方案中，所述疾病为自身免疫性疾病。
另一种实施方案包括试剂盒，其用于治疗响应Janus激酶抑制的疾病或障碍。所述试剂盒包括包含式I化合物的第一药物组合物和使用说明。
具体实施方式
发明详述
现详细说明的某些实施方案，其实例示于所附结构和化学式中。虽然本发明是结合所列举的实施方案描述的，但本发明旨在涵盖可包括在如权利要求所定义的本发明范围内的所有变化、修改和等价形式。本领域技术人员会认识到与本申请描述的那些方法和物质类似或等价的多种方法和物质，这些方法和物质可用于本发明的实践中。
定义
术语"烷基"是指饱和直链或支链单价烃基，其中所述烷基可任选地被一个或多个本申请所述的取代基独立地取代。在一个实例中，所述烷基是一至十八个碳原子(C1-C18)的烷基。在其它实施例中，所述烷基为C0-C6、C0-C5、C0-C3、C1-C12、C1-C10、C1-C8、C1-C6、C1-C5、C1-C4或C1-C3。C0烷基是指键。烷基的实例包括甲基(Me、-CH3)、乙基(Et、-CH2CH3)、1-丙基(n-Pr、正丙基、-CH2CH2CH3)、2-丙基(i-Pr、异丙基、-CH(CH3)2)、1-丁基(n-Bu、正丁基、-CH2CH2CH2CH3)、2-甲基-1-丙基(i-Bu、异丁基、-CH2CH(CH3)2)、2-丁基(s-Bu、仲丁基、-CH(CH3)CH2CH3)、2-甲基-2-丙基(t-Bu、叔丁基、-C(CH3)3)、1-戊基(正戊基、-CH2CH2CH2CH2CH3)、2-戊基(-CH(CH3)CH2CH2CH3)、3-戊基(-CH(CH2CH3)2)、2-甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH2CH3)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH3)CH(CH3)2)、3-甲基-1-丁基(-CH2CH2CH(CH3)2)、2-甲基-1-丁基(-CH2CH(CH3)CH2CH3)、1-己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3)、2-己基(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)、3-己基(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))、2-甲基-2-戊基(-C(CH3)2CH2CH2CH3)、3-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)、3-甲基-3-戊基(-C(CH3)(CH2CH3)2)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)、2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH(CH3)2)、3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3)C(CH3)3、1-庚基和1-辛基。
(C0-Cn烷基)R型基团包括在可用于取代的基团中的任意原子上被R基团取代的烷基(在示例性实施方案中，n为1-6的数，和R为–OH、–OCH3、–NH2、–N(CH3)2、–CN、卤素、C3-C6环烷基、苯基或3-至9-元杂环基)。例如，基团(C0-C3烷基)CN包括基团–CN、–CH2CN、–CH2CH2CN、–CH(CN)CH3、–CH2CH2CH2CN、–CH(CN)CH2CH3、–CH2CH(CN)CH3、–C(CH3)2CN、–C(CH2CN)CH3。例如，基团(C0-C2烷基)C3环烷基包括以下基团:
术语"烯基"是指具有至少一个不饱和位点即碳碳双键的直链或支链单价烃基，其中所述烯基可任选地被一个或多个本申请所述的取代基独立地取代，并包括具有“顺式”和“反式”取向(或者"E"和"Z"取向)的基团。在一个实例中，所述烯基具有二至十八个碳原子(C2-C18)。在另一个实例中，所述烯基为C2-C12、C2-C10、C2-C8、C2-C6或C2-C3烯基。实例包括但不限于乙烯基(ethenyl或vinyl)(-CH＝CH2)、丙-1-烯基(-CH＝CHCH3)、丙-2-烯基(-CH2CH＝CH2)、2-甲基丙-1-烯基、丁-1-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基、丁-1,3-二烯基、2-甲基-1,3-丁二烯基、己-1-烯基、己-2-烯基、己-3-烯基、己-4-烯基和己-1,3-二烯基。
术语"炔基"是指具有至少一个不饱和位点即碳碳叁键的直链或支链单价烃基，其中所述炔基可任选地被一个或多个本申请所述的取代基独立地取代。在一个实例中，所述炔基为二至十八个碳原子(C2-C18)的炔基。在其它实例中，所述炔基为C2-C12、C2-C10、C2-C8、C2-C6或C2-C3炔基。实例包括但不限于乙炔基(-C≡CH)、丙-1-炔基(-C≡CCH3)、丙-2-炔基(炔丙基、-CH2C≡CH)、丁-1-炔基、丁-2-炔基和丁-3-炔基。
“环烃基(cycloalkyl)”是指非芳族饱和或部分不饱和的烃环，其中所述环烃基可任选地被一个或多个本申请所述的取代基独立地取代。在一个实例中，所述环烃基具有3至12个碳原子(C3-C12)。在其它实例中，所述环烃基为C3-C8、C3-C10或C5-C10环烃基。在其它实例中，所述环烃基为单环，其为C3-C8、C3-C6或C5-C6。在另一个实例中，所述环烃基为二环，其为C7-C12。单环环烃基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊-1-烯基、1-环戊-2-烯基、1-环戊-3-烯基、环己基、1-环己-1-烯基、1-环己-2-烯基、1-环己-3-烯基、环己二烯基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一碳烷基和环十二碳烷基。具有7至12个环原子的二环环烃基的示例性排列包括但不限于[4,4]、[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]环***。示例性桥接二环环烃基包括但不限于二环[2.2.1]庚基、二环[2.2.2]辛基和二环[3.2.2]壬基。
"芳基"指环状芳族烃基，任选地被一个或多个本申请所述的取代基独立地取代。在一个实例中，所述芳基具有6至20个碳原子(C6-C20)。在另一个实例中，所述芳基是C6-C9芳基。在另一个实例中，所述芳基是C6芳基。芳基包括芳族环与非芳族环或部分饱和的环稠合的二环基团。示例性的芳基包括但不限于，苯基、萘基、蒽基、茚基、茚满基、1,2-二氢萘基和1,2,3,4-四氢萘基。在一个实施中，芳基包括苯基。
“卤素”或“卤代”是指F,Cl,Br或I。
术语“杂环(heterocycle),”、“杂环基”和“杂环状环(heterocyclic ring)”在本申请中互换使用并且是指:(i)饱和或部分不饱和的环状基团(即，在环内具有一个或多个双键和/或叁键)(“杂环烷基”)，或(ii)芳族环状基团(杂芳基)，并且在每种情况下，至少一个环原子是独立地选自氮、氧、磷和硫的杂原子，其余环原子为C。所述杂环基可任选地被一个或多个下文所述的取代基取代。在一实施方案中，杂环基包括具有1至9个碳环成员(C1-C9)的单环或二环，其余环原子为选自N、O、S和P的杂原子。在其它实例中，杂环基包括具有C1-C5、C3-C5或C4-C5的单环或二环，其余环原子为选自N、O、S和P的杂原子。在另一个实施方案中，杂环基包括3至7元环或3-6元环，含有一个或多个独立选自N、O、S和P的杂原子。在其它实施方案中，杂环基包括单环3-、4-、5-、6-、或7-元环，含有一个或多个独立选自N、O、S和P的杂原子。在另一个实施方案中，杂环基包括二环或多环或桥接4-、5-、6-、7-、8-和9-元环系，含有一个或多个独立选自N、O、S和P的杂原子。二环***的实例包括但不限于[3,5]、[4,5]、[5,5]、[3,6]、[4,6]、[5,6]或[6,6]***。在另一实施方案中，桥接环系包括但不限于具有[2.2.1]、[2.2.2]、[3.2.2]或[4.1.0]排列并具有1至3个选自N、O、S和P的杂原子的桥接环***。在另一实施方案中，杂环基包括具有1至4个选自N、O、S和P的杂原子的螺基团。所述杂环基可为碳联的基团或杂原子联的基团。“杂环基”包括与环烷基稠合的杂环基。
示例性的杂环基团包括但不限于环氧乙烷基、氮丙啶基、硫杂环丙烷基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、1,2-二硫杂环丁烷基、1,3-二硫杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、硫吗啉基、硫杂氧杂环己基(thioxanyl)、哌嗪基、高哌嗪基(homopiperazinyl)、高哌啶基(homopiperidinyl)、氧杂环庚烷基(oxepanyl)、硫杂环庚烷基(thiepanyl)、氧杂基(oxazepinyl)、氧杂氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基、1,4-二氮杂环庚烷基、二氮杂基(diazepinyl)、硫杂基(thiazepinyl)、硫杂氮杂环庚烷基(thiazepanyl)、二氢噻吩基、二氢吡喃基、二氢呋喃基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、1-吡咯啉基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、二氢吲哚基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、二氧杂环己烷基、1,3-二氧杂环戊基、吡唑啉基、吡唑烷基、二硫杂环己烷基、二硫杂环戊烷基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、3-氮杂二环[3.1.0]己基、3,6-二氮杂二环[3.1.1]庚基、6-氮杂二环[3.1.1]庚基、3-氮杂二环[3.1.1]庚基、3-氮杂二环[4.1.0]庚基和氮杂二环[2.2.2]己基。环原子被氧代(＝O)部分取代的杂环基的实例为二氢吡啶酮基、吡啶酮基、哌啶酮基、吡咯烷酮基、嘧啶酮基、二氢嘧啶酮基、哌嗪酮基、吡嗪酮基、哒嗪酮基、二氢哒嗪酮基、二氢吡咯酮基、吡咯酮基、噁唑烷酮基、噻唑烷酮基、咪唑烷酮基、1-氧代噻吩基、1,1-二氧代噻吩基、1-氧代四氢噻吩基、1,1-二氧代四氢噻吩基和1,1-二氧代-硫吗啉基。本申请中的杂环基任选地被一个或多个本申请所述的取代基独立地取代。杂环描述在Paquette,Leo A.；"Principles of Modern Heterocyclic Chemistry"(W.A.Benjamin,New York,1968)(特别是第1、3、4、6、7和9章)；"The Chemistry of HeterocyclicCompounds,A series of Monographs"(John Wiley&Sons,New York,1950to present)(特别是第13、14、16、19和28卷)；以及J.Am.Chem.Soc.(1960)82:5566中。
术语"杂芳基"是指芳族碳环基，其中至少一个环原子是独立地选自氮、氧和硫的杂原子，其它环原子为碳。杂芳基可任选地被一个或多个本申请所述的取代基独立地取代。在一个实例中，所述杂芳基包含1至9个碳环原子(C1-C9)。在其它实例中，所述杂芳基是C1-C5、C3-C5或C4-C5杂芳基。在一个实施方案中，示例性的杂芳基包括单环芳族5、6和7元环，其包含一个或多个独立地选自氮、氧和硫的杂原子。在另一个实施方案中，示例性的杂芳基包括具有多至9个原子的稠合环***，其中至少一个芳族环包含一个或多个独立地选自氮、氧和硫的杂原子。稠合环***可在环上的一个或多个位点稠合。“杂芳基”包括稠合于芳基、环烷基或杂环基的杂芳基。杂芳基的实例包括但不限于，吡啶基、咪唑基、咪唑并吡啶基、嘧啶基、吡唑基、***基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噻唑基、噁唑基、异噻唑基、吡咯基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、噌啉基、吲唑基、吲嗪基、酞嗪基、哒嗪基、三嗪基、异吲哚基、蝶啶基、嘌呤基、噁二唑基、***基、噻二唑基、呋咱基、苯并呋咱基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、喹喔啉基、二氮杂萘基和呋喃并吡啶基。
在一些实施方案中，所述杂环基或杂芳基是C-联的(C-attached)。通过举例而非限制，碳联的杂环基包括以下键合排列：在吡啶的2、3、4、5或6位，在哒嗪的3、4、5或6位，在嘧啶的2、4、5或6位，在吡嗪的2、3、5或6位，在呋喃、四氢呋喃、噻吩(thiofuran)、噻吩(thiophene)、吡咯或四氢吡咯的2、3、4或5位，在噁唑、咪唑或噻唑的2、4或5位，在异噁唑、吡唑或异噻唑的3、4或5位，在氮丙啶的2或3位，在氮杂环丁烷的2、3或4位，在喹啉的2、3、4、5、6、7或8位，或在异喹啉的1、3、4、5、6、7或8位。(吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、吡啶-5-基、吡啶-6-基)。
在一些实施方案中，所述杂环基或杂芳基是N-联的(N-attached)。通过举例而非限制，氮联的杂环或杂芳基包括以下键合排列：在氮丙啶、氮杂环丁烷、吡咯、吡咯烷、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑烷、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、二氢吲哚、1H-吲唑的1位，在异吲哚或异二氢吲哚的2位，在吗啉的4位，和在咔唑或β-咔啉的9位。
术语“治疗(treat)”和“治疗(treatment)”是指治疗性处置和预防性措施，其中目的是预防或减缓(减轻)不期望的生理学变化或障碍如癌的发展或扩散。出于本发明的目的，有益的或期望的临床结果包括但不限于减轻症状、减小病变程度、稳定(即不是恶化)疾病状态、延迟或减缓疾病进展、改善或缓和疾病状态以及好转(部分好转或完全好转)，无论这些结果是可检测的还是不可检测的。“治疗(treatment)”还可表示与未接受治疗的预期存活相比延长的存活。需要治疗的对象包括已经患有病症或障碍的对象以及易患所述病症或障碍(例如，通过遗传突变)的对象或所述病症或障碍应该被预防的对象。
术语“治疗有效量”是指(i)治疗或预防本申请描述的具体疾病、病症或障碍的本发明化合物的量，(ii)削弱、改善或消除本申请描述的具体疾病、病症或障碍的一种或多种症状的本发明化合物的量，或(iii)预防或延迟本申请描述的具体疾病、病症或障碍的一种或多种症状的发作的本发明化合物的量。在癌症的情况中，治疗有效量的药物可降低癌细胞的数量；减小肿瘤尺寸；抑制(即在一定程度上减慢以及优选停止)癌细胞渗入周围器官中；抑制(即，在一定程度上减慢并优选停止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上减轻与癌症相关的一种或多种症状。如果药物可预防癌细胞的生长和/或杀死现存的癌细胞，其可能是细胞生长抑制性的(cytostatic)和/或细胞毒性的。对于癌症治疗而言，例如，可通过评价疾病进展时间(TTP)和/或确定应答率(RR)来测量功效。
术语“生物利用度(bioavailability)”指给予患者给定量的药的***利用度(即，血/血浆水平)。生物利用度是绝对的术语(absolute term)，表明药物从给予的剂量形式抵达大循环(general circulation)的时间(速率)和总量(程度)的测量值。
本申请使用的“炎性疾病”可指任意疾病、障碍或综合征，其中过量或失调的炎症性应答导致过度炎症性症状、宿主组织受损或组织功能丧失。“炎性疾病”也指由粒细胞内流和/或嗜中性粒细胞趋化性介导的病理状态。
本申请使用的“炎症”是指由组织损伤或破坏引起的局部保护性应答，其用于摧毁、稀释或阻隔(隔离(sequester))有害物质(injurious agent)和受损组织。炎症明显与粒细胞内流和/或嗜中性粒细胞趋化性有关。以下原因可导致炎症：感染了病原性微生物和病毒，和非传染性手段例如心肌梗塞或中风后的创伤或再灌注、对外来抗原的免疫应答和自身免疫性应答。因此，用式I化合物治疗的炎性疾病涵盖与特异性防御体系的反应有关的障碍和与非特异性防御体系的反应有关的障碍。
“特异性防御体系”是指对特异性抗原的存在产生反应的免疫***组分。由特异性防御体系应答引起的炎症的实例包括经典的对外来抗原的应答、自身免疫性疾病和由T-细胞介导的迟发型超敏反应。特异性防御体系免疫反应的进一步实例为慢性炎症性疾病、实体移植的组织和器官(例如肾脏移植和骨髓移植)的排斥和移植抗宿主疾病(GVHD)。
本申请使用的术语“非特异性防御体系”是指由无免疫记忆能力的白细胞(例如，粒细胞和巨噬细胞)介导的炎性疾病。至少部分是由非特异性防御体系反应引起的炎症的实例包括与以下病症相关的炎症，所述病症为例如成人(急性)呼吸窘迫综合征(ARDS)或多发性器官损伤综合征(multiple organ injury syndrome)；再灌注损伤；急性肾小球肾炎；反应性关节炎；具有急性炎症性成分的皮肤病；急性化脓性脑膜炎或其它中枢神经***炎性疾病例如中风；热损伤；炎症性肠病；粒细胞输注相关综合征(granulocyte transfusionassociated syndromes)；和细胞因子诱导的毒性。
本申请使用的“自身免疫性疾病”是指其中组织损伤与体液或细胞介导的对身体自身成分的应答相关的任意类型障碍。
本申请使用的“***反应性疾病”是指由***反应引起的任意症状、组织受损或组织功能丧失。本申请使用的“关节炎性疾病”是指以由于多种病因导致的关节炎症性损害为特征的任意疾病。本申请使用的“皮炎”是指以由多种病因导致的皮肤炎症为特征的一大类皮肤病中的任一种。本申请使用的"移植排斥"是指直接抗被移植组织例如器官或细胞(例如，骨髓)的任意免疫反应，特征在于被移植组织和周围组织功能的丧失、疼痛、肿胀、白细胞增多和血小板减少。本发明的治疗方法包括治疗与炎症细胞活化相关的障碍的方法。
“炎症细胞活化”是指在炎症细胞(包括但不限于单核细胞、巨噬细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞、粒细胞(即，多形核白细胞例如嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞)、肥大细胞、树状突细胞、朗氏细胞和内皮细胞)中由刺激物(包括但不限于细胞因子、抗原或自身抗体)诱导的增殖性细胞应答、可溶性介质(包括但不限于细胞因子、氧自由基、酶、类***素或血管活性胺)的产生或细胞表面表达新的或增加数目的介质(包括但不限于主要组织相容性抗原或细胞粘附分子)。本领域技术人员应当理解的是，这些细胞中这些表型中的一种或其组合的活化可促成炎性疾病的发生、持续(perpetuation)或恶化。
术语“NSAID”为“非甾体抗炎药”的缩写，其为具有止痛、解热(降低高体温并缓解疼痛，但不破坏意识)和在较高剂量时具有抗炎作用(减少炎症)的治疗药物。术语“非甾体”用于将这些药物与甾体类药物区分开，所述甾体类药物的众多作用中包括类似的(among abroad range of other effects)阻抑花生四烯酸作用(eicosanoid-depressing)、抗炎作用。作为止痛药，NSAID是独特的，因为它们是非麻醉性的。NSAID包括阿司匹林(aspirin)、布洛芬(ibuprofen)和萘普生(naproxen)。NSAID通常被指示用于治疗存在疼痛和炎症的急性或慢性病症。NSAID一般被指示用于缓解以下病症的症状:类风湿性关节炎、骨关节炎、炎症性关节炎(例如，强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis)、牛皮癣性关节炎(psoriaticarthritis)、莱特尔氏综合征(Reiter's syndrome)、急性痛风(acute gout)、痛经(dysmenorrhoea)、转移性骨疼痛(metastatic bone pain)、头痛(headache)和偏头痛(migraine)、术后痛(postoperative pain)、由于炎症和组织损伤引起的轻度至中度疼痛、发热(pyrexia)、肠梗阻(ileus)和肾绞痛(renal colic)。大多数NSAID用作酶即环氧合酶的非选择性抑制剂，抑制环氧合酶-1(COX-1)和环氧合酶-2(COX-2)同工酶。环氧合酶催化由花生四烯酸(本身是通过磷脂酶A2从细胞磷脂双层衍生的)形成***素和血栓烷。在众多作用中，***素包括在炎症过程中用作信使分子。COX-2抑制剂包括塞来考昔(celecoxib)、艾托考昔(etoricoxib)、罗美昔布(lumiracoxib)、帕瑞考昔(parecoxib)、罗非考昔(rofecoxib)、罗非考昔(rofecoxib)和伐地考昔(valdecoxib)。
术语"癌症(cancer)"和"癌的(cancerous)"是指或描述哺乳动物中特征典型为未调节的细胞生长的生理学情况。"肿瘤"包含一种或多种癌细胞。癌症的实例包括但不限于癌瘤(carcinoma)、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤以及淋巴或淋巴样恶性肿瘤。所述癌症的更具体的实例包括鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌)，肺癌，包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌("NSCLC")、肺腺癌(adenocarcinoma of the lung)和肺鳞状细胞癌(squamous carcinomaof the lung)，腹膜癌，肝细胞癌，胃癌(gastric or stomach cancer)，包括胃肠癌，胰腺癌，成胶质细胞瘤，子***，卵巢癌，肝癌(liver cancer)，膀胱癌，肝细胞瘤(hepatoma)，乳癌(breast cancer)，结肠癌，直肠癌，结肠直肠癌，子宫内膜癌或子宫癌，唾液腺癌，肾癌或肾脏癌，***癌，外阴癌(vulval cancer)，甲状腺癌，肝脏癌(hepatic carcinoma)，***癌，***癌以及头/和颈癌。
"化学治疗药物"是可用于治疗癌症的化合物。化学治疗药物的实例包括厄洛替尼(Genentech,Inc./OSI Pharm.)、曲妥珠单抗(Trastuzumab)(Genentech,Inc.)；贝伐单抗(bevacizumab)(Genentech,Inc.)；利妥昔单抗(Rituximab)Genentech,Inc./Biogen Idec,Inc.)，硼替佐米(Bortezomib)Millennium Pharm.)、氟维司群(fulvestrant)(AstraZeneca)、Sutent(SU11248,Pfizer)、来曲唑(Letrozole)Novartis)、甲磺酸伊马替尼(Imatinib mesylate)(Novartis)、PTK787/ZK 222584(Novartis)、奥沙利铂(Oxaliplatin)(Sanofi)、5-FU(5-氟尿嘧啶)、甲酰四氢叶酸(Leucovorin)、雷帕霉素(Sirolimus,Wyeth)、拉帕替尼(Lapatinib)(GSK572016,Glaxo Smith Kline)、Lonafarnib(SCH 66336)、索拉非尼(Sorafenib，BAY43-9006,Bayer Labs)和吉非替尼(AstraZeneca)、AG1478、AG1571(SU 5271；Sugen)；烷化剂如塞替派(thiotepa)和环磷酰胺；磺酸烷基酯(alkyl sulfonate)如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶如benzodopa、卡波醌(carboquone)、meturedopa和uredopa；乙撑亚胺(ethylenimine)和甲基三聚氰胺(methylamelamine)，包括六甲密胺(altretamine)、三亚胺嗪(triethylenemelamine)、三亚乙基磷酰胺(triethylenephosphoramide)、三亚乙基硫化磷酰胺(triethylenethiophosphoramide)和trimethylomelamine；番荔枝内酯(acetogenin)(尤其是布拉它辛(bullatacin)和布拉它辛酮(bullatacinone))；喜树碱(包括合成性类似物托泊替康(topotecan))；苔藓抑素(bryostatin)；callystatin；CC-1065(包括其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成性类似物)；cryptophycin(特别是cryptophycin 1和cryptophycin 8)；多拉司他汀(dolastatin)；duocarmycin(包括合成性类似物KW-2189和CB1-TM1)；艾榴塞洛素(eleutherobin)；pancratistatin；sarcodictyin；spongistatin；氮芥如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷酰胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、异环磷酰胺(ifosfamide)、双氯乙基甲胺(mechlorethamine)、盐酸氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)、美法仑(mel[halan)、新氮芥(novembichin)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；硝基脲如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫斯汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素如烯二炔(enediyne)抗生素(例如刺孢霉素(calicheamicin)尤其是刺孢霉素γ1I和刺孢霉素ωI1(Angew Chem.Intl.Ed.Engl.(1994)33:183-186)；蒽环类抗生素(dynemicin)，包括dynemicin A；二膦酸盐(bisphosphonate)如氯膦酸盐(clodronate)；埃斯培拉霉素(esperamicin)；以及新抑癌蛋白生色团(neocarzinostatin chromophore)和相关色蛋白烯二炔抗生素生色团(enediyne antibiotic chromophore)、aclacinomysin、放线菌素(actinomycin)、authramycin、偶氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素(bleomycin)、放线菌素C(cactinomycin)、carabicin、去甲柔红霉素(carminomycin)、嗜癌素(carzinophilin)、色霉素(chromomycinis)、放线菌素D(dactinomycin)、柔红霉素(daunorubicin)、地拖比星(detorubicin)、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸(6-diazo-5-oxo-L-norleucine)、(多柔比星(doxorubicin))、吗啉代-多柔比星(morpholino-dexorubicin)、氰基吗啉代-多柔比星(cyanomorpholino-doxorubicin)、2-吡咯啉子基-多柔比星(2-pyrrolino-doxorubicin)和去氧多柔比星(deoxydoxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idarubicin)、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素(mitomycin)如丝裂霉素C、麦考酚酸(mycophenolic acid)、诺拉霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycins)、培洛霉素(peplomycin)、泊非霉素(potfiromycin)、嘌罗霉素(puromycin)、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑霉素(streptonigrin)、链佐星(streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代谢物如甲氨喋呤(methotrexate)和5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)(5-FU)；叶酸类似物如二甲叶酸(denopterin)、甲氨喋呤、喋罗呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物如氟达拉滨(fludarabine)、6-巯嘌呤(6-mercaptopurine)、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟嘌呤(thioguanine)；嘧啶类似物如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-氮鸟苷(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、二脱氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、伊诺他滨(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；雄激素如卡普睾酮(calusterone)、丙酸甲雄烷酮(dromostanolonepropionate)、环硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾内酯(testolactone)；抗肾上腺素(anti-adrenal)如氨鲁米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂(folic acid replenisher)如亚叶酸(frolinic acid)；醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；bestrabucil；比生群(bisantrene)；伊达曲杀(edatraxate)；地磷酰胺(defofamine)；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；elfornithine；依利醋铵(elliptinium acetate)；埃坡霉素(epothilone)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓(gallium nitrate)；羟基脲(hydroxyurea)；香菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidainine)；美登醇(maytansinoid)如美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；mopidanmol；根瘤菌剂(nitraerine)；喷司他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸(podophyllinicacid)；2-乙基肼；丙卡巴肼(procarbazine)；多糖复合物(JHS Natural Products,Eugene,OR)；雷佐生(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；西佐喃(sizofiran)；锗螺胺(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2’,2”-三氯三乙胺；单端孢菌毒素(trichothecene)(尤其是T-2毒素、verracurin A、杆孢菌素A和anguidine)；乌拉坦(urethan)；长春地辛(vindesine)；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；gacytosine；阿糖胞苷(arabinoside)("Ara-C")；环磷酰胺；塞替派(thiotepa)；紫杉烷例如(紫杉醇；Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)、ABRAXANETM(Cremophor-free)、紫杉醇的白蛋白工程化纳米微粒制剂(albumin-engineered nanoparticle formulations of paclitaxel)(AmericanPharmaceutical Partners,Schaumberg,Illinois)和(doxetaxel；Rorer,Antony,France)；chloranbucil；(吉西他滨)；6-硫代鸟嘌呤；巯嘌呤；甲氨喋呤；铂类似物如顺铂和卡铂；长春碱(vinblastine)；依托泊苷(etoposide)(VP-16)；异环磷酰胺(ifosfamide)；米托蒽醌(mitoxantrone)；长春新碱(vincristine)；(长春瑞滨)；诺消灵(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；伊达曲杀(edatrexate)；柔红霉素(daunomycin)；氨基喋呤(aminopterin)；希罗达(xeloda)；伊班膦酸盐(ibandronate)；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(difluoromethylornithine)(DMFO)；类视黄醇(retinoid)如视黄酸(retinoicacid)；卡培他滨(capecitabine)；以及上述任何物质的可药用盐、酸和衍生物。
以下物质也包括在"化学治疗药物"的定义中：(i)用于调节或抑制激素对肿瘤的作用的抗激素药物，如抗***药物(anti-estrogen)和选择性***受体调节剂(selective estrogen receptor modulator,SERM)，包括例如他莫昔芬(tamoxifen)(包括枸橼酸他莫昔芬)、雷洛昔芬(raloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、雷洛西芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮(onapristone)和(枸橼酸托米芬(toremifine citrate))；(ii)抑制芳香酶(调节肾上腺中***产生)的芳香酶抑制剂，例如4(5)-咪唑、氨鲁米特(aminoglutethimide)、(醋酸甲地孕酮(megestrol acetate))、(依西美坦(exemestane)；Pfizer)、formestanie、法倔唑(fadrozole)、(伏氯唑(vorozole))、(来曲唑(letrozole)；Novartis)和(阿那曲唑(anastrozole)；AstraZeneca)；(iii)抗雄激素药物(anti-androgen)，如氟他胺(flutamide)、尼鲁米特(nilutamide)、比卡鲁胺(bicalutamide)、醋酸亮丙瑞林(leuprolide)和戈舍瑞林(goserelin)以及曲沙他滨(troxacitabine)(1,3-二氧杂环戊烷核苷胞嘧啶类似物)；(iv)蛋白激酶抑制剂；(v)脂激酶抑制剂；(vi)反义寡核苷酸，特别是抑制异常细胞增殖中所涉及的信号转导途径中的基因表达的那些反义寡核苷酸，例如PKC-α、Raf和H-Ras；(vii)核酶如VEGF抑制剂(例如)；和viii)疫苗如基因治疗疫苗，例如 和拓扑异构酶1抑制剂如(ix)抗血管生成药物；以及(x)上述任何物质的可药用盐、酸和衍生物。
作为与本发明的Janus激酶抑制剂联用的具有治疗潜力的人源化单克隆抗体包括：阿达木单抗(adalimumab)、依那西普(etanercept)、英夫利昔单抗(infliximab)、阿仑单抗(alemtuzumab)、奥马珠单抗(apolizumab)、阿塞珠单抗(aselizumab)、atlizumab、bapineuzumab、贝伐单抗(bevacizumab)、bivatuzumab mertansine、莫坎妥珠单抗(cantuzumab mertansine)、西利珠单抗(cedelizumab)、赛妥珠单抗(certolizumabpegol)、cidfusituzumab、cidtuzumab、达克珠单抗(daclizumab)、依库珠单抗(eculizumab)、依法珠单抗(efalizumab)、依帕珠单抗(epratuzumab)、厄利珠单抗(erlizumab)、泛维珠单抗(felvizumab)、芳妥珠单抗(fontolizumab)、奥吉妥珠单抗(gemtuzumab ozogamicin)、奥英妥珠单抗(inotuzumab ozogamicin)、ipilimumab、拉贝珠单抗(labetuzumab)、林妥珠单抗(lintuzumab)、马妥珠单抗(matuzumab)、美泊珠单抗(mepolizumab)、莫维珠单抗(motavizumab)、motovizumab、那他珠单抗(natalizumab)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)、nolovizumab、numavizumab、ocrelizumab、奥马珠单抗(omalizumab)、帕利珠单抗(palivizumab)、帕考珠单抗(pascolizumab)、pecfusituzumab、pectuzumab、pertuzumab、培克珠单抗(pexelizumab)、ralivizumab、雷珠单抗(ranibizumab)、瑞利珠单抗(reslivizumab)、瑞利珠单抗(reslizumab)、resyvizumab、罗维珠单抗(rovelizumab)、卢利珠单抗(ruplizumab)、西罗珠单抗(sibrotuzumab)、西利珠单抗(siplizumab)、索土珠单抗(sontuzumab)、他珠单抗(tacatuzumab tetraxetan)、tadocizumab、他利珠单抗(talizumab)、特非珠单抗(tefibazumab)、托珠单抗(tocilizumab)、托利珠单抗(toralizumab)、曲妥单抗(trastuzumab)、西莫白介素(tucotuzumab celmoleukin)、tucusituzumab、umavizumab、乌珠单抗(urtoxazumab)、ustekinumab、维西珠单抗(visilizumab)和抗白细胞介素-12(ABT-874/J695,WyethResearch and Abbott Laboratories)，其为排他性地为人序列的重组的、全长IgG1λ抗体，经遗传修饰识别白细胞介素-12p40蛋白质。
本申请使用的术语"前药"是指与母体药物相比对患者具有较小效力或对肿瘤细胞具有较小细胞毒性并能够经酶或水解激活或转化为更具活性的母体形式的药物活性形式的前体或衍生物形式。参见例如Wilman,"Prodrugs in Cancer Chemotherapy"Biochemical Society Transactions,14,pp.375-382,615th Meeting Belfast(1986)以及Stella et al.,"Prodrugs:A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery,"Directed Drug Delivery,Borchardt et al.,(ed.),pp.247-267,Humana Press(1985)。本发明的前药包括但不限于含磷酸酯的前药、含硫代磷酸酯的前药、含硫酸酯的前药、含肽的前药、D-氨基酸修饰的前药、糖基化的前药、含β-内酰胺的前药、含任选取代的苯氧基乙酰胺的前药，或者含任选取代的苯基乙酰胺的前药、5-氟胞嘧啶和其它5-氟尿嘧啶前药，这些前药可转化为更具活性的无细胞毒性的药物。可衍生为用于本发明的前药形式的细胞毒性药物的实例包括但不限于上述那些化学治疗药物。
"脂质体"是由一种或多种脂类、磷脂和/或表面活性剂组成的小囊泡，其可用于将药物(如本发明化合物和任选的化学治疗药物)递送至哺乳动物。与生物膜的脂排列类似，脂质体的组分通常以双层形式排列。
术语"包装说明书(package insert)"是指通常包括在治疗产品的市售包装中的说明书，其含有关于适应症、用法、剂量、给药、禁忌症和/或告诫事项的信息，这些信息涉及上述治疗产品的使用。
术语"手性"是指具有镜像配偶体(mirror image partner)不可重叠性质的分子，而术语"非手性"是指可与其镜像配偶体重叠的分子。
术语"立体异构体"是指具有相同化学组成，但原子或基团空间中的排列不同的化合物。
"非对映异构体"是指具有两个或更多手性中心并且其分子不互为镜像的立体异构体。非对映异构体具有不同的物理性质，如熔点、沸点、光谱性质和反应性。非对映异构体的混合物可通过高分辨分析操作如电泳和色谱来分离。
"对映异构体"是指互为不可重叠镜像的化合物的两种立体异构体。
本申请使用的立体化学定义和常规通常按照S.P.Parker,Ed.,McGraw-HillDictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company,New York以及Eliel,E.and Wilen,S.,"Stereochemistry of Organic Compounds",John Wiley&Sons,Inc.,New York,1994。多种有机化合物以光学活性形式存在，即它们具有旋转平面偏振光的平面的能力。在描述有光学活性的化合物时，使用前缀D和L或者R和S来表示分子围绕其一个或多个手性中心的绝对构型。前缀d和l或者(+)和(-)用于指定平面偏振光由化合物引起的旋转的符号，其中(-)或l表示化合物是左旋的。前缀为(+)或d的化合物是右旋的。对于给定的化学结构而言，除了这些立体异构体互为镜像外，这些立体异构体是相同的。具体的立体异构体也可称为对映异构体，所述异构体的混合物通常称作对映异构混合物。对映异构体的50:50混合物称为外消旋混合物或外消旋体，当化学反应或方法中没有立体选择性或立体专一性时可出现这种情况。术语"外消旋混合物"和"外消旋体"是指两种对映异构体物质的等摩尔混合物，其没有光学活性。
本申请使用的短语"可药用盐"是指式I化合物的可药用有机或无机盐。示例性盐包括但不限于硫酸盐、枸橼酸盐、乙酸盐、草酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸式枸橼酸盐、酒石酸盐、油酸盐、鞣酸盐(tannate)、泛酸盐(pantothenate)、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐(gentisinate)、富马酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、糖精酸盐(saccharate)、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、扑酸盐(即1,1’-亚甲基-二-(2-羟基-3-萘甲酸盐))。可药用盐可涉及另一种分子如乙酸根离子、琥珀酸根离子或其它抗衡离子的包合物(inclusion)。抗衡离子可以是稳定母体化合物电荷的任何有机或无机部分。此外，可药用盐可在其结构中具有不止一个带电原子。多个带电原子为可药用盐的部分的情况可具有多个抗衡离子。因此，可药用盐可具有一个或多个带电原子和/或一个或多个抗衡离子。
"溶剂化物"是指一种或多种溶剂分子与式I化合物的结合或络合。形成溶剂化物的溶剂的实例包括但不限于水、异丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸和乙醇胺。术语"水合物"是指当溶剂分子是水时的复合物。
术语“保护基”或“Pg”是指通常用于当化合物上的其它官能团发生反应时阻断或保护具体官能团的取代基。例如，"氨基保护基"为与氨基相连的阻断或保护化合物中氨基官能团的取代基。合适的氨基保护基包括乙酰基、三氟乙酰基、邻苯二甲酰亚氨基(phthalimido)、叔丁氧基羰基(BOC)、苄基氧基羰基(CBZ)和9-芴基亚甲氧基羰基(Fmoc)。类似地，"羟基保护基"是指阻断或保护羟基官能团的羟基的取代基。合适的保护基包括乙酰基、三烷基甲硅烷基、二烷基苯基甲硅烷基、苯甲酰基、苄基、苄基氧基甲基、甲基、甲氧基甲基、三芳基甲基和四氢吡喃基。"羧基保护基"是指阻断或保护羧基官能团的羧基的取代基。常见的羧基保护基包括-CH2CH2SO2Ph、氰基乙基、2-(三甲基甲硅烷基)乙基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、2-(对甲苯磺酰基)乙基、2-(对硝基苯基硫基)乙基(2-(p-nitrophenylsulfenyl)ethyl)、2-(二苯基膦基)-乙基、硝基乙基等。针对保护基的一般描述及它们的使用，参见T.W.Greene and P.Wuts,Protective Groups in OrganicSynthesis,Third Ed.,John Wiley&Sons,New York,1999；and P.Kocienski,ProtectingGroups,Third Ed.,Verlag,2003。
术语“患者”包括人患者和动物患者。术语“动物”包括伴侣动物(companionanimals)(例如，狗、猫和马)、食源动物(food-source animals)、动物园动物、海生动物、鸟和其它类似的动物物种。
短语"可药用的"表示所述物质或组合物必须与制剂包含的其它成分和/或用其治疗的哺乳动物在化学上和/或毒理学上是相容的。
术语“JAK激酶”和“Janus激酶”是指JAK1,JAK2,JAK3和TYK2蛋白激酶。
除非另有说明，术语"本发明化合物(compound of this invention)"和"本发明化合物(compounds of the present invention)"包括式I和1a-1n化合物及其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物、盐(例如可药用盐)和前药。除非另有说明，本申请中描述的结构还意为包括仅因存在一个或多个富含放射性同位素(isotopically enriched)的原子而存在差异的化合物。例如，其中一个或多个氢原子由氘或氚原子替换，或者一个或多个碳原子由富含13C-或14C的碳原子替换的式I和式1a-1n化合物落在本发明的保护范围内。
为JANUS激酶抑制剂的吡唑并嘧啶化合物
本发明一个实施方案提供式I化合物及其药物制剂，所述式I化合物及其药物制剂用于治疗响应于对一种或多种Janus激酶抑制的疾病、病症和/或障碍。
另一种实施方案包括式I化合物，其对映异构体、非对映异构体或药用盐:
其中：
R1为氢、C1-C6烷基、–OR6、–NR6R7或卤素；
R2为5-或6-元杂芳基，其中R2任选取代有1-3个R4；
R3为苯基、5-6元杂芳基、C3-C6环烷基或3-10元杂环基，其中R3任选被1-5个R5取代；
R4独立地为C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、–(C0-C6烷基)CN、–(C0-C6烷基)OR6、–(C0-C6烷基)SR6、–(C0-C6烷基)NR6R7、–(C0-C6烷基)CF3、–(C0-C6烷基)C(O)R6、–(C0-C6烷基)C(O)OR6、–(C0-C6烷基)C(O)NR6R7、–(C0-C6烷基)NR6C(O)R7、–(C0-C6烷基)C(O)3-6元杂环基、–(C0-C6烷基)(C3-C6环烷基)、–(C0-C6烷基)苯基、–(C0-C6烷基)5-6元杂芳基或–(C0-C6烷基)(3-6-元杂环基)，其中R4独立任选地被R15取代；
R5独立地为C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、氧代、卤素、–(C0-C3烷基)CN、–(C0-C3烷基)OR11、–(C0-C3烷基)SR11、–(C0-C3烷基)NR11R12、–(C0-C3烷基)OCF3、–(C0-C3烷基)CF3、–(C0-C3烷基)NO2、–(C0-C3烷基)C(O)R11、–(C0-C3烷基)C(O)OR11、–(C0-C3烷基)C(O)NR11R12、–(C0-C3烷基)NR11C(O)R12、–(C0-C3烷基)S(O)1-2R11、–(C0-C3烷基)NR11S(O)1-2R12、–(C0-C3烷基)S(O)1-2NR11R12、–(C0-C3烷基)(C3-C6环烷基)、–(C0-C3烷基)(3-6-元杂环基)、–(C0-C3烷基)C(O)(3-6-元杂环基)、–(C0-C3烷基)(5-6元杂芳基)或–(C0-C3烷基)苯基，其中R5独立任选地被卤素、C1-C3烷基、氧代、–CF3、–(C0-C3烷基)OR13或–(C0-C3烷基)NR13R14取代；或
两个R5一起形成–O(CH2)1-3O–；
R6和R7独立地为氢、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、–CN、–OR8、–NR8R9、–C(O)R8、–C(O)OR8、–C(O)NR8R9、–NR8C(O)R9、–NR8C(O)OR9、–OC(O)NR8,–S(O)1-2R8、–NR8S(O)1-2R9、–S(O)1- 2NR8R9、C3-C6环烷基、苯基、3-6元杂环基或5-6元杂芳基，其中所述R6和R7独立任选地被R20取代，或
R6和R7与它们连接的原子一起形成3-6-元杂环基，所述杂环基任选被卤素、氧代、–CF3或C1-C3烷基取代；
R8和R9独立地为氢或C1-C3烷基；或
R8和R9与它们连接的原子一起形成3-6-元杂环基，所述杂环基任选被卤素、氧代、–CF3或C1-C3烷基取代；
R11独立地为氢、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、3-6元杂环基、–C(O)R13、–C(O)OR13、–C(O)NR13R14、–NR13C(O)R14、–S(O)1-2R13、–NR13S(O)1-2R14或–S(O)1-2NR13R14，其中所述烷基、环烷基和杂环基独立任选地被氧代、C1-C3烷基、OR13、NR13R14或卤素取代；
R12独立地为氢或C1-C3烷基，其中所述烷基独立任选地被卤素或氧代取代；或
R11和R12与它们连接的原子一起形成3-6-元杂环基，所述杂环基任选被卤素、氧代、–CF3或C1-C3烷基取代；
R13和R14独立地为氢或任选被卤素或氧代取代的C1-C3烷基；或
R13和R14与它们连接的原子一起形成3-6-元杂环基，所述杂环基任选被卤素、氧代、–CF3或C1-C3烷基取代；
R15为C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、氧代、卤素、–CN、–OR16、–SR16、–NR16R17、–OCF3、–CF3、–C(O)R16、–C(O)OR16、–C(O)NR16R17、–NR16C(O)R17、–NR16C(O)OR17、–OC(O)NR16、C3-C6环烷基、3-6-元杂环基、–C(O)(3-6-元杂环基)、5-6元杂芳基或苯基，其中R15独立任选地被卤素、C1-C3烷基、氧代、–CN、–CF3、–OR18、–NR18R19取代；
R16和R17独立地为氢或任选被氧代或卤素取代的C1-C6烷基；或
R16和R17与它们连接的原子一起形成任选被氧代、卤素或C1-C3烷基取代的3-6元杂环基；
R18和R19独立地为氢或任选被氧代或卤素取代的C1-C6烷基；或
R18和R19与它们连接的原子一起形成任选被氧代、卤素或C1-C3烷基取代的3-6元杂环基；
R20为C1-C6烷基、氧代、卤素、–OR21、–NR21R22、–CN、C3-C6环烷基、苯基、3-6元杂环基或5-6元杂芳基，其中R20任选被氧代、卤素或C1-C3烷基取代；和
R21和R22独立地为氢或任选被氧代或卤素取代的C1-C6烷基；或
R21和R22与它们连接的原子一起形成任选被氧代、卤素或C1-C3烷基取代的3-6元杂环基。
另一种实施方案包括式I化合物、其对映异构体、非对映异构体或药用盐:
其中：
R1为氢、C1-C6烷基、–OR6、–NR6R7或卤素；
R2为5-或6-元杂芳基，其中R2任选取代有1-3个R4；
R3为苯基、5-或6-元杂芳基，其中R3任选被1-5个R5取代；
R4独立地为C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、–(C0-C6烷基)OR6、–(C0-C6烷基)SR6、–(C0-C6烷基)NR6R7、–(C0-C6烷基)CF3、–(C0-C6烷基)C(O)R6、–(C0-C6烷基)C(O)OR6、–(C0-C6烷基)C(O)NR6R7、–(C0-C6烷基)(C3-C6环烷基)或–(C0-C6烷基)(3-6-元杂环基)，其中R4独立任选地被C1-C3烷基、氧代、卤素、–CF3、–OR8或–NR8R9取代；
R5独立地为C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、–(C0-C3烷基)CN、–(C0-C3烷基)OR11、–(C0-C3烷基)SR11、–(C0-C3烷基)NR11R12、–(C0-C3烷基)OCF3、–(C0-C3烷基)CF3、–(C0-C3烷基)NO2、–(C0-C3烷基)C(O)R11、–(C0-C3烷基)C(O)OR11、–(C0-C3烷基)C(O)NR11R12、–(C0-C3烷基)NR11C(O)R12、–(C0-C3烷基)S(O)1-2R11、–(C0-C3烷基)NR11S(O)1-2R12、–(C0-C3烷基)S(O)1- 2NR11R12、–(C0-C3烷基)(C3-C6环烷基)、–(C0-C3烷基)(3-6-元杂环基)、–(C0-C3烷基)C(O)(3-6-元杂环基)、–(C0-C3烷基)(5-6元杂芳基)或–(C0-C3烷基)苯基，其中R5独立任选地被卤素、C1-C3烷基、氧代、–CF3、–(C0-C3烷基)OR13或–(C0-C3烷基)NR13R14取代；或
两个R5一起形成–O(CH2)1-3O–；
R6独立地为氢、C1-C3烷基、–C(O)R8、–C(O)OR8、–C(O)NR8R9、–NR8C(O)R9、–S(O)1- 2R8、–NR8S(O)1-2R9或–S(O)1-2NR8R9，其中所述烷基独立任选地被氧代、OH或卤素取代；
R7独立地为氢或C1-C3烷基，其中所述烷基独立任选地被卤素取代；或
R6和R7与它们连接的原子一起形成5-或6-元杂环基，所述杂环基任选被卤素、氧代、–CF3或C1-C3烷基取代；
R8和R9独立地为氢或C1-C3烷基；或
R8和R9与它们连接的原子一起形成5-或6-元杂环基，所述杂环基任选被卤素、氧代、–CF3或C1-C3烷基取代；
R11独立地为氢、C1-C3烷基、–C(O)R13、–C(O)OR13、–C(O)NR13R14、–NR13C(O)R14、–S(O)1-2R13、–NR13S(O)1-2R14或–S(O)1-2NR13R14，其中所述烷基独立任选地被氧代、OH或卤素取代；
R12独立地为氢或C1-C3烷基，其中所述烷基独立任选地被卤素取代；或
R11和R12与它们连接的原子一起形成5-或6-元杂环基，所述杂环基任选被卤素、氧代、–CF3或C1-C3烷基取代；和
R13和R14独立地为氢或C1-C3烷基；或
R13和R14与它们连接的原子一起形成5-或6-元杂环基，所述杂环基任选被卤素、氧代、–CF3或C1-C3烷基取代。
另一种实施方案包括式I化合物，其不是:
N-(5-甲基-4-(4-丙基苯基)噻唑-2-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺；
N-(4-(4-氯苯基)噻唑-2-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺；或
N-(3-甲基-1-苯基-1H-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
在一些实施方案中，R2选自吡啶基、咪唑基、嘧啶基、吡唑基、***基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噻唑基、噁唑基、异噻唑基、吡咯基、哒嗪基、三嗪基、噁二唑基、***基、噻二唑基或呋咱基，其中R2任选取代有1-3个R4。在一个实施方案中，R2选自吡啶基或吡唑基，其任选取代有1-3个R4。
在一些实施方案中，R2选自噻唑基、吡啶基或吡唑基，其任选取代有1-3个R4。
在一些实施方案中，R4独立地为C1-C6烷基、–(C0-C6烷基)OR6、–(C0-C6烷基)SR6、–(C0-C6烷基)NR6R7、–(C0-C6烷基)CF3、–(C0-C6烷基)C(O)R6、–(C0-C6烷基)C(O)OR6、–(C0-C6烷基)C(O)NR6R7、–(C0-C6烷基)(C3-C6环烷基)或–(C0-C6烷基)(3-6-元杂环基)，其中R4独立任选地被C1-C3烷基、氧代、卤素、–CF3、–OR8或–NR8R9取代。
在一些实施方案中，R4为C1-C6烷基、卤素、–(C0-C6烷基)CN、–(C0-C6烷基)OR6、–(C0-C6烷基)NR6R7、–(C0-C6烷基)CF3、–(C0-C6烷基)C(O)R6、–(C0-C6烷基)C(O)OR6、–(C0-C6烷基)C(O)NR6R7、–(C0-C6烷基)NR6C(O)R7、–(C0-C6烷基)C(O)3-6元杂环基、–(C0-C6烷基)(C3-C6环烷基)、–(C0-C6烷基)苯基、–(C0-C6烷基)5-6元杂芳基或–(C0-C6烷基)(3-6-元杂环基)，其中R4独立任选地被R15取代。
在一些实施方案中，R3为苯基、吡啶基、咪唑基、嘧啶基、吡唑基、***基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噻唑基、噁唑基、异噻唑基、吡咯基、哒嗪基、三嗪基、噁二唑基、***基、噻二唑基或呋咱基，其中R3任选被1-5个R5取代。在一个实施方案中，R3为苯基，其任选被1-3个R5取代。
在一些实施方案中，R3为苯基、吡啶基、咪唑基、嘧啶基、吡唑基、***基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噻唑基、噁唑基、异噻唑基、吡咯基、哒嗪基、三嗪基、噁二唑基、***基、噻二唑基、环己烯基、二氢苯并呋喃基、哌啶基、吡啶酮基、吡咯烷基或呋咱基，其中R3任选被1-5个R5取代。
在一些实施方案中，R5独立地为C1-C6烷基、卤素、–CN、–(C0-C3烷基)OR11、–(C0-C3烷基)SR11、–(C0-C3烷基)NR11R12、–(C0-C3烷基)OCF3或–CF3，其中所述烷基独立任选地被卤素、C1-C3烷基、氧代、–CF3、–(C0-C3烷基)OR13或–(C0-C3烷基)NR13R14取代。
在一些实施方案中，R3为苯基，其任选被1-3个R5取代；和，R5独立地为C1-C6烷基、卤素、–CN、–(C0-C3烷基)OR11、–(C0-C3烷基)SR11、–(C0-C3烷基)NR11R12、–(C0-C3烷基)OCF3或–CF3，其中所述烷基独立任选地被卤素、C1-C3烷基、氧代、–CF3、–(C0-C3烷基)OR13或–(C0-C3烷基)NR13R14取代。
在一些实施方案中，R3为苯基、吡啶基、二氢苯并呋喃基、哌啶基、吡咯烷基、吡啶酮基、咪唑基或异噁唑基，其中R3任选被1-3个R5取代；和R5独立地为氧代、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、卤素、–CN、–O(C1-C6烷基)、–S(C1-C6烷基)、–O(C3-C6环烷基)、–S(C3-C6环烷基)、–(C0-C3烷基)NR11R12、–OCF3、–OCHF2或–CF3，其中所述烷基、烯基、炔基和环烷基独立任选地被卤素、C1-C3烷基、OH、OCH3、NH2、NMe2、氧代或–CF3取代。
在一些实施方案中，R1为氢、OR8或–NR6R7。在一个实施方案中，R1为氢。在一个实施方案中，R1为–NH2。
在一些实施方案中，R2为吡唑基，其任选被R4取代，其中R4为–(C0-C6烷基)OR6或–(C0-C6烷基)SR6，并且其中R4独立任选地被C1-C3烷基、–OR8或–NR8R9取代。在一个实施方案中，R2为吡唑基，其任选被R4取代，其中R4为–(C0-C6烷基)OR6或–(C0-C3烷基)SR6，并且其中R4独立任选地被C1-C3烷基、–OR8或–NR8R9取代，R3为苯基，其任选被1-3个R5取代，和R5独立地为C1-C6烷基、卤素、–CN、–OR11、–SR11或–CF3，其中所述烷基独立任选地被卤素、–CF3、–OR13或–NR13R14取代。
在一些实施方案中，R2为吡唑基，其任选被R4取代，其中R4为–(C0-C6烷基)CF3，并且其中R4独立任选地被C1-C3烷基、–OR8或–NR8R9取代。在一个实施方案中，R2为吡唑基，其任选被R4取代，其中R4为–(C0-C6烷基)CF3，并且其中R4独立任选地被C1-C3烷基、–OR8或–NR8R9取代，R3为苯基，其任选被1-3个R5取代，和R5独立地为C1-C6烷基、卤素、–CN、–OR11、–SR11或–CF3，其中所述烷基独立任选地被卤素、–CF3、–OR13或–NR13R14取代。
在一些实施方案中，R2为吡唑基，其任选被R4取代，其中R4为–(C0-C6烷基)NR6R7或–(C0-C6烷基)(3-6-元杂环基)，并且其中R4独立任选地被C1-C3烷基、–OR8或–NR8R9取代。在一个实施方案中，R2为吡唑基，其任选被R4取代，其中R4为–(C0-C6烷基)NR6R7或–(C0-C6烷基)(3-6-元杂环基)，并且其中R4独立任选地被C1-C3烷基、–OR8或–NR8R9取代，R3为苯基，其任选被1-3个R5取代，和R5独立地为C1-C6烷基、卤素、–CN、–OR11、–SR11或–CF3，其中所述烷基独立任选地被卤素、–CF3、–OR13或–NR13R14取代。
在一些实施方案中，R2为吡唑基，其任选被R4取代，其中R4为–(C0-C6烷基)(C3-C6环烷基)，并且其中R4独立任选地被C1-C3烷基、–OR8或–NR8R9取代。在一个实施方案中，R2为吡唑基，其任选被R4取代，其中R4为–(C0-C6烷基)(C3-C6环烷基)，并且其中R4独立任选地被C1-C3烷基、–OR8或–NR8R9取代，R3为苯基，其任选被1-3个R5取代，和R5独立地为C1-C6烷基、卤素、–CN、–OR11、–SR11或–CF3，其中所述烷基独立任选地被卤素、–CF3、–OR13或–NR13R14取代。
在一些实施方案中，R2为吡唑基，其任选被R4取代，其中R4为–(C0-C6烷基)C(O)OR6或–(C0-C6烷基)C(O)NR6NR7，并且其中R4独立任选地被C1-C3烷基、–OR8或–NR8R9取代。在一个实施方案中，R2为吡唑基，其任选被R4取代，其中R4为–(C0-C6烷基)C(O)OR6，并且其中R4独立任选地被C1-C3烷基、–OR8或–NR8R9取代，R3为苯基，其任选被1-3个R5取代，和R5独立地为C1-C6烷基、卤素、–CN、–OR11、–SR11或–CF3，其中所述烷基独立任选地被卤素、–CF3、–OR13或–NR13R14取代。
在一些实施方案中，R2为吡唑基，其任选被R4取代，其中R4为C0-C6烷基，并且其中R4独立任选地被卤素、–OR8或–NR8R9取代。在一个实施方案中，R2为吡唑基，其任选被R4取代，其中R4为C0-C6烷基，并且其中R4独立任选地被卤素、–OR8或–NR8R9取代，R3为苯基，其任选被1-3个R5取代，和R5独立地为C1-C6烷基、卤素、–CN、–OR11、–SR11或–CF3，其中所述烷基独立任选地被卤素、–CF3、–OR13或–NR13R14取代。
在一些实施方案中，R2为吡唑基，其任选被R4取代，其中R4为–(C0-C6烷基)CN，并且其中R4独立任选地被卤素、–OR8或–NR8R9取代。在一个实施方案中，R2为吡唑基，其任选被R4取代，其中R4为–(C0-C6烷基)CN，并且其中R4独立任选地被卤素、–OR8或–NR8R9取代，R3为苯基，其任选被1-3个R5取代，和R5独立地为C1-C6烷基、卤素、–CN、–OR11、–SR11或–CF3，其中所述烷基独立任选地被卤素、–CF3、–OR13或–NR13R14取代。
在一些实施方案中，R2为吡唑基，其任选被R4取代，其中R4为任选被氧代、–OR8、–NR8R9、–CN、卤素、C3-C6环烷基或5-6元杂环基取代的C1-C6烷基；任选被–OR8、–NR8R9、–CN、卤素或氧代取代的5-6元杂环基；任选被–OR8、–NR8R9、–CN、卤素或C3-C6环烷基取代的-CH2C(O)NR6NR7；或–CH2(任选被氧代、–OR8、–NR8R9、–CN、卤素或C1-C3烷基取代的5-6元杂环基)，和R3为任选被1-3个R5取代的苯基。
在一些实施方案中，R2为吡唑基，其任选被R4取代，其中R4为–CH2C(OH)(任选被卤素取代的C1-C3烷基)、-CH2C(O)NR6NR7或–CH2C(O)(4-6元杂环基)，其中R4任选被氧代、–OR8、–NR8R9、–CN、卤素、C1-C6烷基或C3-C6环烷基取代，和R3为任选被1-3个R5取代的苯基。
在一些实施方案中，R2为吡啶基，其任选被C1-C6烷基取代，并且所述烷基任选被卤素取代。在一个实施方案中，R2为吡啶基，其任选被C1-C6烷基取代，并且所述烷基任选被卤素取代，R3为任选被1-3个R5取代的苯基，和R5独立地为C1-C6烷基、卤素、–CN、–OR11、–SR11或–CF3，其中所述烷基独立任选地被卤素、–CF3、–OR13或–NR13R14取代。
在一些实施方案中，R4为–(C0-C6烷基)OR6或–(C0-C6烷基)SR6，其中所述烷基独立任选地被卤素、C1-C3烷基、氧代、–OR8或–NR8R9取代。在一个实施方案中，R4选自：
其中波浪线表示与R2的连接点。
在一些实施方案中，R4为–(C0-C6烷基)CF3，其中所述烷基独立任选地被卤素、C1-C3烷基、氧代、–OR8或–NR8R9取代。在一个实施方案中，R4选自：
其中波浪线表示与R2的连接点。
在一些实施方案中，R4为–(C0-C6烷基)NR6R7，其中所述烷基独立任选地被卤素、C1-C3烷基、氧代、–OR8或–NR8R9取代。在一个实施方案中，R4选自：
其中波浪线表示与R2的连接点。
在一些实施方案中，R4为–(C0-C6烷基)(3-6-元杂环基)，其中所述烷基和杂环基独立任选地被卤素、C1-C3烷基、氧代、–OR8或–NR8R9取代。在一个实施方案中，所述3-6-元杂环基为氧杂环丁烷基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、吡咯烷酮基、四氢呋喃基、噁唑基、异噁唑基和四氢吡喃基，其任选被卤素、C1-C3烷基、氧代、–OR8或–NR8R9取代。在一个实施方案中，R4选自：
其中波浪线表示与R2的连接点。
在一些实施方案中，R4为–(C0-C6烷基)C(O)(3-6-元杂环基)，其中所述烷基和杂环基独立任选地被卤素、C1-C3烷基、氧代、–OR8或–NR8R9取代。在一个实施方案中，所述3-6-元杂环基为氧杂环丁烷基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、四氢呋喃基、噁唑基、异噁唑基、二氢吡咯基和四氢吡喃基，其任选被卤素、C1-C3烷基、氧代、–OR8或–NR8R9取代。在一个实施方案中，R4选自：
其中波浪线表示与R2的连接点。
在一些实施方案中，R4为–(C0-C6烷基)(C3-C6环烷基)，其中所述烷基和环烷基独立任选地被卤素、C1-C3烷基、氧代、–OR8或–NR8R9取代。在一些实施方案中，R4为–(C0-C6烷基)(C3-C6环烷基)，其中所述环烷基为任选被C1-C3烷基、–OR8或–NR8R9取代的环戊基或环己基。在一个实施方案中，R4选自：
其中波浪线表示与R2的连接点。
在一些实施方案中，R4为–(C0-C6烷基)C(O)OR6、–(C0-C6烷基)C(O)NR6NR7、–(C0-C6烷基)OC(O)NR6、–(C0-C6烷基)NR6C(O)OR7、–(C0-C6烷基)NR6C(O)NR7或–(C0-C6烷基)NR6C(O)R7，其中所述烷基独立任选地被卤素、C1-C3烷基、氧代、–OR8或–NR8R9取代。在一个实施方案中，R4选自：
其中波浪线表示与R2的连接点。
在一些实施方案中，R4为C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基，所述基团任选被卤素、氧代、–OR8或–NR8R9取代。在一个实施方案中，R4选自：
其中波浪线表示与R2的连接点。
在一些实施方案中，R4为–(C0-C6烷基)CN，其中所述烷基任选被卤素、氧代、–OR8或–NR8R9取代。在一个实施方案中，R4为–CH2CN、–CH2CH2CN或–CH(CH3)CN。
在一些实施方案中，R4为卤素。在一个实施方案中，R4为F、Cl、Br或I。在一个实施方案中，R4为F或Cl。
在一些实施方案中，R3为:
其中n为0、1、2或3，波浪线表示与R2的连接点。在一个实施方案中，n为2。在一个实施方案中，R3选自：
其中波浪线表示与R2的连接点。
在一些实施方案中，R3为苯基或吡啶基，其任选被C1-C6烷基、卤素、–CN、–(C0-C3烷基)OR6、–(C0-C3烷基)SR6、–(C0-C3烷基)NR6R7、–(C0-C3烷基)OCF3或–CF3取代，其中所述烷基独立任选地被卤素、C1-C3烷基、氧代、–CF3、–(C0-C3烷基)OR8或–(C0-C3烷基)NR8R9取代。在一个实施方案中，R3选自：
其中波浪线表示与R2的连接点。在一个实施方案中，R3选自：
其中波浪线表示与R2的连接点。
在一些实施方案中，R3为任选被C1-C6烷基、卤素、–CN、–(C0-C3烷基)OR6、–(C0-C3烷基)SR6、–(C0-C3烷基)NR6R7、–(C0-C3烷基)OCF3或–CF3取代的4-6元杂环基，其中所述烷基独立任选地被卤素、C1-C3烷基、氧代、–CF3、–(C0-C3烷基)OR8或–(C0-C3烷基)NR8R9取代。在一些实施方案中，所述杂环基选自氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、四氢吡啶基和吡啶酮基。在一些实施方案中，R3选自：
其中波浪线表示与R2的连接点。
在一些实施方案中，R2选自：
其中R10独立地选自氢或R4，波浪线表示与式I的连接点。
在一些实施方案中，R2选自：
其中R10独立地选自氢或R4，波浪线表示与式I的连接点。
在一些实施方案中，R2选自：
其中R10独立地选自氢或R4，波浪线表示与式I的连接点。
在一些实施方案中，R2选自：
R3为或吡啶基，R10为氢或R4，波浪线分别表示与式I和R2的连接点。
在一些实施方案中，式I中的-R2-R3为其中，R10为氢或R4，波浪线表示与式I的连接点.
在一些实施方案中，式I中的-R2-R3为其中n为0、1、2或3，R10为氢或R4，波浪线表示R2与式I的连接点。
另一种实施方案包括式I化合物，其具有的Ki和/或EC50表明其抑制一种Janus激酶活性的选择性是抑制一种或多种其它Janus激酶活性的至少15倍、或为10倍或5倍或更高。
所述式I化合物可包含不对称或手性中心，因此，可按不同立体异构形式存在。预期的是，式I化合物的所有立体异构形式，包括但不限于：非对映异构体、对映异构体和阻转异构体及其混合物如外消旋混合物构成本发明的一部分。此外，本发明包括所有的几何异构体和位置异构体(positional isomer)。例如，如果式I化合物包含双键或稠环，则顺式和反式形式以及混合物均落入在本发明的保护范围内。单一位置异构体和位置异构体的混合物，例如，由嘧啶环和吡唑环的N-氧化导致，或由式I化合物的E和Z形式(例如，肟部分)所导致的，也均包括在本发明的保护范围内。
在本申请所显示的结构中，当未指定任何具体手性分子的立体化学时，则本发明化合物涵盖并包括了所有的立体异构体。当立体化学通过代表具体构型的实心楔形或虚线所指定时，则如此指定并限定了该立体异构体。
本发明化合物可以按非溶剂化或与可药用溶剂(如水、乙醇等)形成的溶剂化形式存在，且如权利要求限定的本发明意欲包括溶剂化和非溶剂化的形式。
在一实施方案中，本发明化合物可以按不同的互变异构形式存在，且所有上述形式均包括在如权利要求所定义的本发明的保护范围内。术语"互变异构体"或"互变异构形式"是指可通过低能垒(low energy barrier)互相转化的不同能量的结构异构体。例如，质子互变异构体(proton tautomer)(也称为质子迁移互变异构体(prototropic tautomer))包括通过质子迁移进行的互相转化，如酮-烯醇异构化和亚胺-烯胺异构化。价互变异构体(valence tautomer)包括通过一些成键电子的重组进行的互相转化。
本发明还包括同位素标记的式I化合物，其与本申请中记载的其它化合物相同，但一个或多个原子由具有与通常见于自然界的原子具有不同的原子量或原子质量数的原子所替代。任何特定的具体原子或元素的所有同位素均涵盖在本发明的保护范围内。可结合到本发明化合物中的示例性同位素包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯和碘的同位素，分别如2H、3H、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、32P、33P、35S、18F、36Cl、123I和125I。某些同位素标记的本发明化合物(例如，用3H和14C标记的)可用于化合物和/或底物组织分布测定(tissuedistribution assay)。氚(即3H)和碳14(即14C)同位素可因其易于制备和检测而加以使用。此外，用较重的同位素(如氘，即2H)取代可，得到由于较高的代谢稳定性(例如，体内半衰期增加或剂量要求降低)带来的某些治疗上的益处，因此在某些情况下是优选的。发射正电子的同位素如15O、13N、11C和18F可用于正电子发射断层扫描术(PET)研究以检查底物对受体的占据(occupance)。同位素标记的式I化合物通常可按照与本申请下述在方案和/或实施例中公开的那些方法类似的方法，通过用同位素标记的试剂替换非同位素标记的试剂来制备。
作为JAK抑制剂的化合物的合成
式I化合物可通过本申请所述的合成路线来合成。在一些实施方案中，除了本申请所描述的方法之外，或除考虑到本申请所描述的方法外，可使用化学领域公知的方法。起始物质通常从商业性来源(如Aldrich Chemicals(Milwaukee,Wis.))是可获得的，或可使用本领域技术人员公知的方法容易地制备(例如，通过一般描述于Louis F.Fieser和MaryFieser,Reagents for Organic Synthesis,v.1-19,Wiley,N.Y.(1967-1999ed.)，Beilsteins Handbuch der organischen Chemie,4,Aufl.ed.Springer-Verlag,Berlin,包括增补(也可从Beilstein在线数据库获得)或Comprehensive HeterocyclicChemistry,Editors Katrizky和Rees,Pergamon Press,1984中的方法制备)。
式I化合物可单独地制备，或作为包含至少2个式I化合物，例如5至1000个式I化合物，或10至100个式I化合物的化合物库制备。式I化合物的化合物库可通过组合的“***并混合(split and mix)”方法或通过使用溶液相或固相化学的多重平行合成法，通过本领域技术人员已知的操作来制备。因此，根据本发明的另一个方面，其提供了包含至少2个式I化合物及其对映异构体、非对映异构体或可药用盐的化合物库。
出于说明的目的，在下文描述的反应方案1-13提供了合成本发明化合物以及关键中间体的路线。对于单独反应步骤更详细的描述，参见下面的实施例部分。本领域技术人员应理解，可使用其它合成路线来合成本发明化合物。尽管具体的起始物质和试剂描述于方案中，并在下文进行讨论，可容易地用其它起始物质和试剂替换以提供多种衍生物和/或反应条件。此外，由下文所述的方法制备的多种化合物可根据本公开使用本领域技术人员公知的常规化学手段进行进一步修饰。
在本发明化合物的制备中，可能有必要对中间体的远端官能团(例如，伯胺或仲胺)进行保护。是否需要这样的保护随远端官能团的性质和制备方法的条件而变化。适当的氨基保护基(NH-Pg)包括乙酰基、三氟乙酰基、叔丁氧基羰基(BOC)、苄基氧基羰基(CBZ)和9-芴基亚甲氧基羰基(Fmoc)。是否需要这样的保护可由本领域技术人员容易地确定。对于保护基的一般描述和它们的应用参见T.W.Greene,Protective Groups in OrganicSynthesis,John Wiley&Sons,New York,1991。
可使用下面反应方案1-21说明的一般方法由容易获得的商购起始物质来制备本发明化合物。
反应方案1
可如反应方案1中所示合成式I化合物。例如，在羰基二咪唑(CDI)和氯化镁存在下，商购苯甲酸类化合物可与3-乙氧基-3-氧代丙酸钾反应得到β-酮-酯2。化合物2可与1,1-二甲氧基-N,N-二甲基甲胺(DMFDMA)一起加热，得到化合物3。化合物3与肼在乙醇中环化，得到吡唑化合物4。在碱例如碳酸铯存在下，化合物4与碘甲烷进行甲基化，得到区域异构体5a和5b的混合物。水解所述乙基酯，然后用叠氮膦酸二苯酯(dppa)和叔丁醇进行库尔提斯重排(Curtius rearrangement)，得到氨基甲酸叔丁酯基保护的氨基-吡唑，用HCl脱保护得到氨基-吡唑化合物6a和6b。可在该阶段使用硅胶色谱法分离区域异构体6a和6b。在7-氮杂苯并***-1-基氧基-三-(吡咯烷子基)鏻六氟磷酸盐(PyAOP),二异丙基乙基胺(DIEA)和4-二甲基氨基吡啶(DMAP)存在下，使每种区域异构体单独与商购吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸偶联，得到式1a和1b化合物。
反应方案2
反应方案2说明了合成式I化合物的可选择方法。亚氨基二碳酸叔丁酯与氢化钠和各种α-溴代酮7进行烷基化，生成化合物8。化合物8与DMFDMA一起加热得到化合物9。在乙醇存在下，化合物9与肼环化得到吡唑化合物10。在PyAOP、DIEA和DMAP存在下，化合物10与吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸偶联，得到式1c化合物。在碳酸铯存在下，式1c化合物可与碘甲烷进行烷基化，得到式1a和1b化合物。
反应方案3
反应方案3说明了式1d化合物的合成。使商购苯胺类化合物经历重氮化反应和氯化锡介导的还原反应得到化合物11。化合物11与3-氨基巴豆腈在乙醇盐酸中缩合，生成氨基-吡唑化合物12。在PyAOP、DIEA和DMAP存在下，化合物12与吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸偶联得到式1d化合物。
反应方案4
反应方案4说明了式1e化合物的合成。可用间氯过氧苯甲酸氧化5-溴-2-甲基吡啶得到化合物13。硝化化合物13得到化合物14，然后进行氯化锡还原，得到氨基-吡啶15。可将吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸用草酰氯转化成相应的酰氯，然后与化合物15或其它商购氨基吡啶反应，形成化合物16。这些化合物可与芳基硼酸一起经历苏楚基(Suzuki)交叉偶联条件，得到式1e化合物。
反应方案5
合成式1化合物的可选择方法描述在反应方案5中。邻苯二甲酰亚胺钾与α-溴代酮7进行烷基化，生成化合物17。与DMFDMA缩合得到化合物18。式18化合物可用N-甲基肼环化，得到可分离的区域异构体6a和6b的混合物。在使用o-(7-氮杂苯并-***-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)的酰胺形成方法条件下，每种区域异构体分别与商购吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸偶联，得到式1a和1b化合物。
反应方案6
反应方案6说明了合成式1g和1f化合物的方法。化合物18可与肼环化，得到化合物10，化合物10然后可在使用HATU的酰胺形成条件下与吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸偶联，得到式1c化合物。在碳酸铯存在下，化合物1c与烷基卤化物进行烷基化，得到式1f化合物。在碳酸铯存在下，化合物1c与2,2-二甲基环氧乙烷反应，得到式1g化合物。
反应方案7
反应方案7说明了式1h化合物的合成。使用HATU，4-溴-1-甲基-1H-吡唑-3-胺和吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸进行酰胺形成反应得到化合物19。化合物19与各种硼酸化合物进行钯催化的苏楚基偶联反应，得到式1h化合物。
反应方案8
反应方案8说明了式1i化合物的合成。在溶剂例如乙醇中，经适当取代的苯基肼的溶液可与过量丙烯基腈一起回流加热，得到式21化合物。可使用硫酸铁(III)/稀硫酸将肼21氧化，得到式22化合物。化合物22可在稀氢氧化钠溶液中环化，得到式23化合物。22与之前制备的吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰氯反应，得到最终化合物式1i。
反应方案9
合成式1a和1b化合物的可选择方法显示在反应方案9中。通过用氢化钠和(2-(氯甲氧基)乙基)三甲基甲硅烷处理使商购4-硝基-1H-吡唑可用[β-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基(SEM)保护。在钯催化的条件下，所得化合物24可与芳基溴或芳基碘进行芳基化，生成式25的4-硝基-5-芳基-吡唑。在铁和氯化铵存在下，化合物25的硝基可被还原，生成氨基吡唑26。在PyAOP、DIEA和DMAP存在下，化合物26与商购吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸偶联形成酰胺碱，得到化合物27。通过HCl水溶液/乙醇除去SEM保护基，生成化合物1c，在适当碱例如碳酸铯存在下，化合物1c与烷基卤化物或与Michael接受体(acceptor)进行烷基化，得到式1a和1b化合物。
反应方案10
反应方案10说明了式1j和1k化合物的合成。在碳酸铯存在下，吡唑化合物1c(如反应方案2或反应方案9中所述制备)可与取代的环氧化物进行烷基化，得到区域异构化合物式1j和1k。
反应方案11
可如反应方案11中所示合成式1m化合物。商购苯乙酮可用叔丁醇钾和乙酸乙酯进行酰化，生成二-酮化合物式28。在乙酸和水存在下，化合物28可用亚硝酸钠处理，得到羟基亚氨基化合物29，其随后可与肼环化，得到氨基-吡唑化合物30。在PyAOP、DIEA和DMAP存在下，化合物30与商购吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸形成酰胺碱，得到式1m化合物。
反应方案12
合成式1a和1b化合物的可选择方法显示在反应方案12中。在55℃，在碳酸铯存下，商购4-硝基-1H-吡唑可与烷基溴反应12小时，得到化合物31。在醋酸钯(II)、二(1-金刚烷基)-正丁基膦、碳酸钾和三甲基乙酸存在下，化合物31可与芳基溴/N,N-二甲基乙酰胺反应，得到化合物32a和32b。产物32a:32b的比例根据取代基R1而变化，但所述反应通常偏向于形成产物32b。在乙醇和水中，在铁和氯化铵存在下，化合物32a和32b可被还原成化合物33a和33b。在PyAOP、DIEA和DMAP存在下，化合物33a和33b与吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸偶联可得到式1a和1b化合物。
反应方案13
如反应方案13中所示合成式1n化合物。三氯乙腈可与氰基乙酸乙酯反应得到化合物34。化合物34可与肼缩合得到化合物35，35然后可与1,1,3,3-四甲氧基丙烷缩合得到化合物36。胺36可被双重Boc-保护，得到化合物37，然后可用氢氧化锂水解化合物37得到甲酸38。在PyAOP、DIEA和DMAP存在下，甲酸38然后可与各种胺偶联得到式1n化合物。
反应方案14
可如反应方案14中所示合成式1o化合物。在碳酸铯存在下，吡唑化合物1c(如反应方案2或反应方案9中所述制备)可与烯丙基卤化物进行烷基化得到区域异构化合物式39a和39b。可通过硅胶色谱法分离区域异构化合物，在N-氧化-N-甲基吗啉存在下，适当的异构体与四氧化锇反应，得到式1o化合物。
反应方案15
可如反应方案15中所示合成式1p和1q化合物。在碳酸铯存在下，吡唑化合物1c(如反应方案2或反应方案9中所述制备)可与2-(氯甲基)环氧乙烷进行烷基化，然后与胺反应，得到式1p和1q的区域异构化合物。
反应方案16
反应方案16说明了式1R化合物的合成。在低温，可用六甲基二硅基氨基锂使反应方案9制备的硝基-SEM吡唑化合物24区域选择性地去质子化并用六氯乙烷淬灭，得到40。一经与胺HNRR’(其中RR’与它们连接的氮一起形成R3(例如，3-10元杂环基))在微波中加热，该化合物可转化成41。在铁和氯化铵存在下，中间体41中的硝基可被还原生成氨基吡唑42。在PyAOP、DIEA和DMAP存在下，42与商购吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸偶联形成酰胺碱得到1R。可通过除去SEM基团并如反应方案9、10、14、15、18或19中所示的官能化对1R进行进一步加工。
反应方案17
反应方案17说明了式10化合物的可选择合成。在低温，用六甲基二硅基氨基锂可使反应方案9所制备的硝基-SEM吡唑化合物24被区域选择性地去质子化，用碘淬灭得到43。在铁和氯化铵存在下，化合物43的硝基可被还原，然后进行Boc保护生成化合物44。在苏楚基条件下，化合物44可与芳基硼酸化合物或芳基硼酸酯偶联得到化合物45。用四氯化锡断裂Boc基团后，得到式10化合物。
反应方案18
可如反应方案18中所示合成式1s化合物。在碳酸铯存在下，吡唑化合物1c(如反应方案2或反应方案9中所述制备)可与溴代乙酸叔丁酯进行烷基化，得到中间体46。可用三氟乙酸处理46得到酸47，在偶联剂例如N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮杂苯并***-1-基)脲鎓六氟磷酸盐(HATU)存在下，47然后与伯胺或仲胺反应，从而得到式1s化合物。
反应方案19
可如反应方案19中所示合成式1t化合物。在碳酸铯存在下，吡唑化合物1c(如反应方案2或反应方案9中所述制备)可与对甲苯磺酸2-氯乙基酯进行烷基化，得到烷基氯化物48。在适当碱例如N,N-二异丙基乙基胺存在下，48然后与伯胺或仲胺反应，从而得到式1t化合物。
反应方案20
可如反应方案20中所示合成式1u化合物。例如，在氯化铵和氢氧化铵存在下，通过用氰化物源例如***处理可将商购的取代的苯甲醛转化成化合物49。通过使用酰胺偶联剂例如HATU和碱例如二异丙基乙基胺，化合物49可与甲酸偶联得到化合物50。可用过氧化氢和碳酸钾处理化合物50得到化合物51。使用Lawesson’s试剂和吡啶使二酰胺基化合物51环化，得到氨基噻唑基化合物52。可通过用之前制备的吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰氯/吡啶处理化合物52制备式1u化合物。
反应方案21
可选择地，可如反应方案21中所示合成式1u化合物。例如，可通过以下方式制备化合物53：用碳酸二乙酯处理商购的经取代的苯乙酮，随后使用例如溴/二噁烷进行溴化。用经适当取代的硫代酰胺或硫脲处理化合物53得到噻唑化合物54。可使用碱的水溶液例如氢氧化钾水溶液/相容试剂(例如THF)将化合物54水解，得到酸化合物55。可通过用叠氮膦酸二苯酯(DPPA)/叔丁醇处理化合物化合物55制备56。在酸性条件下对化合物56进行脱保护得到氨基化合物52。可通过用之前制备的吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰氯/吡啶处理化合物52制备式1u化合物。
应当理解的是，当存在合适的官能团时，可通过一种或多种标准合成方法采用缩合、取代、氧化、还原或裂解反应将各种化学式化合物或用于制备它们的任意中间体进行进一步衍生化。具体的取代方法包括常规的烷基化、芳基化、杂芳基化、酰化、磺酰化、卤化、硝化、甲酰化和偶联方法。
在另一个实例中，通过酰化可将伯胺或仲胺转化成酰胺基团(-NHCOR’或–NRCOR’)。在碱例如三乙胺存在下在合适溶剂例如二氯甲烷中，通过与合适的酰氯反应实现酰化，或者在合适的偶联剂例如HATU(O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐)存在下在合适溶剂例如二氯甲烷中通过与合适的羧酸反应实现酰化。类似地，在合适碱例如三乙胺存在下，在合适溶剂例如二氯甲烷中，可通过将胺基团与合适的磺酰氯反应而将其转化成磺酰氨基团(-NHSO2R’或–NR”SO2R’)。在合适碱例如三乙胺存在下，在合适溶剂例如二氯甲烷中，可通过将伯胺或仲胺基团与合适的异氰酸酯反应而将其转化成脲基团(-NHCONR’R”或–NRCONR’R”)。
通过还原硝基(-NO2)可得到胺(-NH2)，例如通过催化氢化，在溶剂例如乙酸乙酯或醇例如甲醇中，在金属催化剂例如在负载(例如炭)上的钯存在下使用氢气。可选择地，在酸例如盐酸存在下使用例如金属例如锡或铁通过化学还原反应进行所述转化。
在另一个实例中，通过还原腈基团(-CN)得到胺基团(-CH2NH2)，例如通过催化氢化反应，该反应在溶剂例如醚(例如环醚如四氢呋喃)中和例如在约–78℃至溶剂的回流温度之间的合适温度，在金属催化剂例如在负载(例如炭)上的钯或阮内镍存在下使用例如氢气。
在另一个实例中，可通过转化成相应的酰基叠氮化物基团(-CON3)、库尔提斯重排(Curtius)和所得异氰酸酯(-N＝C＝O)的水解由羧酸基团得到胺(-NH2)基团。
在溶剂例如卤化烃例如二氯甲烷或醇例如乙醇中，以及如果需要在酸例如乙酸存在下和在约环境温度，通过还原氨化反应采用胺和硼氢化物例如三乙酰氧基硼氢化钠或氰基硼氢化钠可将醛基团(-CHO)转化成胺基团(-CH2NR’R”))。
在另一个实例中，在本领域技术人员已知的标准条件下，通过使用维蒂希反应(Witting)或Wadsworth-Emmons反应使用合适的膦烷或膦酸酯可将醛基团转化成烯基(-CH＝CHR’)。
在合适溶剂例如甲苯中，通过使用氢化二异丁基铝还原酯基(例如–CO2Et)或腈基(-CN)可得到醛基团。可选择地，通过使用本领域技术人员已知的任意合适氧化剂可将醇氧化得到醛基。
根据R的性质，通过酸-或碱-催化的水解反应可将酯基(-CO2R’)转化为相应的酸基(-CO2H)。如果R是叔丁基，可通过例如在含水溶剂中用有机酸例如三氟乙酸处理实现酸催化的水解反应，或者在含水溶剂中通过用无机酸例如盐酸处理实现酸催化的水解反应。
在合适的溶剂例如二氯甲烷中，在合适的偶联剂例如HATU存在下，可通过将羧酸基团(-CO2H)与合适的胺反应而将其转化成酰胺(-CONHR’或–CONR’R”)。
在另一个实例中，通过转化成相应的酰氯(-COCl)然后通过阿恩特-艾斯特合成反应(Arndt-Eistert synthesis)将羧酸经一个碳同系化(即，–CO2H至–CH2CO2H)。
在另一个实例中，在如下条件下通过还原反应可由相应的酯(例如-CO2R’)或醛(-CHO)产生-OH基团：使用金属氢化物复合物例如于***或四氢呋喃中的例如氢化铝锂或使用在溶剂例如甲醇中的硼氢化钠。可选择地，可在如下条件下通过还原相应的酸(-CO2H)制备醇：在溶剂例如四氢呋喃中使用例如氢化铝锂，或使用在溶剂例如四氢呋喃中的硼烷。
使用本领域技术人员已知的条件可将醇基团转化成相应的离去基团，例如卤素原子或磺酰氧基例如烷基磺酰氧基例如三氟甲基磺酰氧基或芳基磺酰氧基例如对苯磺酰氧基。例如，在卤化烃(例如二氯甲烷)中，醇可与亚硫酰氯反应得到相应的氯化物。在所述反应中也可使用碱(例如，三乙胺)。
在另一个实例中，在溶剂例如四氢呋喃中在膦例如三苯基膦和活化剂例如偶氮二甲酸二乙酯、偶氮二甲酸二异丙酯或偶氮二甲酸二甲酯存在下通过使酚或酰胺与醇偶联而将醇、酚或酰胺烷基化。可选择地，通过使用合适的碱例如氢化钠去质子然后加入烷基化剂例如烷基卤化物而实现烷基化。
在如下条件下，化合物中的芳族卤素取代基可经受卤素-金属交换：任选在低温例如约–78℃和在溶剂例如四氢呋喃中，用碱例如锂碱例如正丁基锂或叔丁基锂处理，然后用亲电试剂淬灭以引入所需取代基。因此，例如，通过使用N,N-二甲基甲酰胺作为亲电试剂可引入甲酰基。可选择地，芳族卤素取代基可经受金属(例如钯或酮)催化的反应以引入例如酸、酯、氰基、酰胺、芳基、杂芳基、烯基、炔基、硫代-或氨基取代基。可采用的合适方法包括由Heck、Suzuki、Stille、Buchwald或Hartwig描述的那些方法。
在与合适的亲核试剂例如胺或醇反应后，芳族卤素取代基也可经历亲核置换。有利地，所述反应可在微波辐射存在下在高温进行。
分离方法
在各示例的方案中，将反应产物彼此分离和/或与原料分离可能是有利的。通过本领域常见技术将每个步骤或多个步骤的期望产物分离和/或纯化(下文称为分离)至期望的同质程度(degree of homogeneity)。通常所述分离涉及多相萃取、用溶剂或溶剂混合物结晶、蒸馏、升华或色谱法。色谱法可涉及任何数目的方法，包括例如反相和正相色谱法；尺寸排阻(size exclusion)色谱法；离子交换色谱法；高压、中压和低压液相色谱方法和装置；小规模分析性色谱；模拟移动床(SMB)和制备性薄层或厚层色谱法；以及小规模薄层法和快速色谱法技术。
另一类分离方法涉及用试剂处理混合物，选择所述试剂以与期望的产物、未反应的原料、反应副产物等结合或使期望的产物、未反应的原料能够、反应副产物等为可分离的。所述试剂包括吸附剂(adsorbent)或吸收剂(absorbent)，如活性炭、分子筛、离子交换媒介物等。可供选择地，所述试剂可以是酸(在碱性物质的情况下)，碱(在酸性物质的情况下)，结合试剂如抗体、结合蛋白，选择性螯合剂如冠醚，液/液离子交换试剂(liquid/liquid ion extraction reagent,LIX)等。
对适当的分离方法的选择取决于所涉及的物质的性质。例如，沸点和分子量(在蒸馏和升华中)、存在或不存在极性官能团(在色谱中)、物质在酸性和碱性媒介物中的稳定性(在多相萃取中)等。本领域技术人员应该使用最有可能实现所期望分离的技术。
可通过本领域技术人员公知的方法，例如通过色谱和/或分级结晶，基于非对映异构体的物理化学差异，将非对映异构体的混合物分离为其单独的非对映异构体。对映异构体可如下分离：通过使对映异构体的混合物与适当的光学活性化合物(例如手性助剂，如手性醇或Mosher酰氯(Mosher’s acid chloride))反应，将对映异构体的混合物转化为非对映异构体的混合物，分离非对映异构体，然后将单独的非对映异构体转化(例如水解)为相应的纯对映异构体。此外，一些本发明化合物可能是阻转异构体(例如取代的联芳化合物(biaryl))并被视为是本发明的部分。对映异构体也可使用手性HPLC柱来分离。
单一的立体异构体，例如基本上不含其立体异构体的对映异构体，可如下得到：通过诸如形成非对映异构体那样的方法，使用光学活性拆分试剂来拆分外消旋混合物(Eliel,E.and Wilen,S.“Stereochemistry of Organic Compounds,”John Wiley&Sons,Inc.,New York,1994；Lochmuller,C.H.,J.Chromatogr.,113(3):283-302(1975))。本发明的手性化合物的外消旋混合物可通过任何合适的方法来分离和拆析，所述方法包括(1)与手性化合物形成离子性非对映异构的盐，然后通过分级结晶或其它方法来分离；(2)与手性衍生试剂形成非对映异构的化合物，分离所述非对映异构体，然后转化为纯的立体异构体；以及(3)在手性条件下对基本上纯的或富集的立体异构体进行直接分离。参见“DrugStereochemistry,Analytical Methods and Pharmacology,”Irving W.Wainer,Ed.,Marcel Dekker,Inc.,New York(1993)。
非对映异构的盐可如下形成：使对映异构体纯的手性碱如马钱子碱(brucine)、奎宁、麻黄碱、番木鳖碱(strychnine)、α-甲基-β-苯基乙胺(***(amphetamine))等与带有酸性官能团(如羧酸和磺酸)的不对称化合物反应。可通过分级结晶或离子色谱法来促使非对映异构的盐分离。对于分离氨基化合物的光学异构体而言，手性羧酸或磺酸如樟脑磺酸、酒石酸、扁桃酸或乳酸的加入可引起非对映异构的盐的形成。
可供选择地，使待拆分的底物与手性化合物的一种对映异构体反应，形成一对非对映异构体(Eliel.E.and Wilen,S.“Stereochemistry of Organic Compounds”,JohnWiley&Sons,Inc.,New York,1994,p.322)。非对映异构的化合物可如下形成：使不对称的化合物与对映异构体纯的手性衍生试剂如薄荷基衍生物反应，接着分离非对映异构体，然后水解，得到纯的或富集的对映异构体。确定光学纯度的方法涉及制备外消旋混合物的手性酯，如在碱的存在下制备薄荷基酯例如(-)氯甲酸薄荷基酯，或Mosher酯乙酸α-甲氧基-α-(三氟甲基)苯基酯(Jacob III.J.Org.Chem.47:4165(1982))，然后就两种阻转异构的对映异构体或非对映异构体的存在而分析NMR光谱。阻转异构化合物的稳定非对映异构体可通过正相和反相色谱按照分离阻转异构的萘基-异喹啉的方法(WO 96/15111)来分离和拆析。通过方法(3)，两种对映异构体的外消旋混合物可通过使用手性固定相的色谱来分离(“Chiral Liquid Chromatography”W.J.Lough,Ed.,Chapman and Hall,New York(1989)；Okamoto,J.Chromatogr.,513:375-378(1990))。富集的或纯化的对映异构体可通过用于辨别带有不对称碳原子的其它手性分子的方法(如旋光性或圆二色性(circulardichroism))来辨别。
式I化合物的位置异构体，例如E和Z形式，及其合成的中间体，可通过表征方法如NMR和分析性HPLC来观测。对于一些化合物，当其相互转化的能垒足够高时，可分离其E和Z异构体，例如通过制备性HPLC。
生物学评价
之前的研究显示在体外激酶测定中的人JAK1、JAK2、JAK3或TYK2磷酸化肽底物的经分离的激酶结构域(Saltzman等,Biochem.Biophys.Res.Commun.246:627-633(2004))。将人JAK1、JAK2、JAK3或TYK2的催化活性的激酶结构域从经重组杆状病毒表达载体感染的SF9昆虫细胞的提取物纯化，所述表达载体编码人JAK1、JAK2、JAK3或TYK2激酶结构域(JAK1氨基酸残基N852-D1154，根据GenBank序列登录号P23458；JAK2氨基酸残基D812-G1132，根据GenBank序列登录号NP_004963.1；JAK3氨基酸残基S783-S1124，根据GenBank序列登录号P52333和TYK2氨基酸残基N873-C1187，根据GenBank序列登录号P29597)。JAK1、JAK2、JAK3或TYK2激酶结构域的活性可通过多种直接和间接方法测定，包括对来源于人JAK3蛋白质的肽底物的磷酸化进行定量(Saltzman等,Biochem.Biophys.Res.Commun.246:627-633(2004))。在体外通过使用Caliper LabChip技术(参见实施例)监视来源于JAK3的肽的磷酸化来测定JAK1、JAK2、JAK3或TYK2激酶结构域的活性(参见实施例)。
如本申请所述，就本发明化合物抑制Janus激酶活性和活化(第一测定)的能力和它们对生长细胞的生物作用(第二测定)进行试验。在适当的Janus激酶活性和活化测定(参见实施例A和B)中具有小于10μM(优选小于5μM，更优选小于1μM，最优选小于0.5μM)的Ki和在适当的细胞测定(参见实施例C)中具有小于20μM(优选小于10μM，更优选小于5μM，最优选小于1μM)的EC50的化合物用作Janus激酶抑制剂。
JANUS激酶抑制剂化合物的给药
另一个实施方案包括在患者中治疗响应于对Janus激酶活性进行抑制的疾病或病状或减轻响应于对Janus激酶活性进行抑制的疾病或病状的严重程度的方法。所述方法包括给予患者治疗有效量的式I化合物的步骤。在一个实施方案中，所述疾病为自身免疫性疾病。
另一种实施方案包括式I化合物进行治疗的用途。
另一种实施方案包括式I化合物用于预防、治疗或减轻疾病的严重程度。在一个实施方案中，所述疾病为自身免疫性疾病。
另一种实施方案包括式I化合物在制备用于预防、治疗或减轻疾病的严重程度的药物中的用途。在一个实施方案中，所述疾病为自身免疫性疾病。
在一个实施方案中，将治疗有效量的式I化合物给予患者，从而治疗或减轻响应于对Janus激酶活性进行抑制的疾病和病症的严重程度，其中所述化合物抑制一种Janus激酶活性的选择性是抑制一种或多种其它Janus激酶活性的选择性的至少15倍、可选择地为10倍、可选择地为5倍或更多倍。
所述疾病或病状为癌症(cancer)、中风(stroke)、糖尿病(diabetes)、肝大(hepatomegaly)、心血管疾病(cardiovascular disease)、多发性硬化(multiplesclerosis)、阿尔茨海默病(Alzheimer's disease)、囊性纤维化病(cystic fibrosis)、病毒疾病(viral disease)、自身免疫性疾病(autoimmune diseases)、动脉粥样硬化(atherosclerosis)、再狭窄(restenosis)、银屑病(psoriasis)、变应性疾病(allergicdisorders)、炎症(inflammation)、神经疾病(neurological disorders)、激素相关疾病(ahormone-related disease)、与器官移植相关的病状(conditions associated withorgan transplantation)、免疫缺陷疾病(immunodeficiency disorders)、破坏性骨疾病(destructive bone disorders)、增殖性疾病(proliferative disorders)、感染性疾病(infectious diseases)、与细胞死亡相关的病状(conditions associated with celldeath)、凝血酶诱导的血小板凝集(thrombin-induced platelet aggregation)、肝脏疾病(liver disease)、涉及T细胞激活的病理性免疫病状(pathologic immune conditionsinvolving T cell activation)、CNS疾病或骨髓增生障碍(myeloproliferativedisorder)。
在一个实施方案中，所述疾病或病症为癌症。
在一个实施方案中，所述疾病为骨髓增生障碍。
在一个实施方案中，所述骨髓增生性疾病为真性红细胞增多(polycythemiavera)、原发性血小板增多症(essential thrombocytosis)、骨髓纤维化(myelofibrosis)或慢性髓细胞性白血病(chronic myelogenous leukemia)(CML)。
在一个实施方案中，所述癌症是乳癌、卵巢癌、子***、***癌、睾丸癌、***癌、生殖泌尿道癌、***瘤、食道癌、喉癌、胃(gastric)癌、胃(stomach)癌、胃肠(gastrointestinal)癌、皮肤癌、角化棘皮瘤、滤泡性癌、黑素瘤、肺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、肺腺癌、肺鳞状细胞癌、结肠癌、胰腺癌、甲状腺癌、***状癌、膀胱癌、肝癌、胆道癌、肾癌、骨癌、骨髓疾病(myeloid disorders)、淋巴疾病(lymphoid disorders)、毛细胞(hairy cell)癌、口腔和咽(口)癌、唇癌、舌癌、口癌、唾液腺癌、咽癌、小肠癌、结肠癌、直肠癌、***癌、肾(renal)癌、***癌、外阴癌、甲状腺癌、大肠癌、子宫内膜癌、子宫癌、脑癌、中枢神经***癌、腹膜癌、肝细胞癌、头癌、颈癌、霍奇金病(Hodgkin’s)或白血病。
在一实施方案中，所述心血管疾病是再狭窄、心肥大(cardiomegaly)、动脉粥样硬化、心肌梗死或充血性心力衰竭。
在一实施方案中，所述神经变性疾病(neurodegenerative disease)是阿尔茨海默病、帕金森氏病、肌萎缩侧索硬化、亨廷顿舞蹈病(Huntington’s disease)和脑缺血，以及由创伤性损伤(traumatic injury)、谷氨酸神经毒性或缺氧造成的神经变性疾病。
在一实施方案中，所述炎性疾病是炎症性肠病、类风湿性关节炎、银屑病、接触性皮炎或迟发超敏反应。
在一实施方案中，所述自身免疫性疾病是狼疮或多发性硬化。
在一个实施方案中，所述自身免疫性疾病为克罗恩氏病(Crohn's disease)、溃疡性结肠炎(ulcerative colitis)、胶原性结肠炎(Collagenous colitis)、淋巴细胞性结肠炎(Lymphocytic colitis)、缺血性结肠炎(Ischaemic colitis)、改道性结肠炎(Diversion colitis)、贝切特氏综合征(syndrome)、感染性结肠炎(Infectivecolitis)和未确定型结肠炎(Indeterminate colitis)。
对由本发明化合物造成的药物诱导的免疫抑制的评价可使用体内功能性测试进行，如诱导性关节炎和治疗性或预防性处置的小鼠模型以评价疾病得分、T细胞依赖性抗体应答(TDAR)和迟发型超敏反应(DTH)。其它体内***，包括宿主针对感染的防卫或肿瘤抗性(tumor resistance)鼠科动物模型(Burleson GR，Dean JH和Munson AE.Methods inImmunotoxicology，Vol.1.Wiley-Liss，New York，1995)，可视为说明观察到的免疫抑制的性质或机理。所述体内测试***可补充有完全确立的体外或离体功能性测定以供评价免疫能力。这些测定可包括B或T细胞响应丝裂原(mitogen)或特定抗原的增殖，在B或T细胞或者经永生化的(immortalized)B或T细胞系中测定通过一种或多种Janus途径的信号传导、测定细胞表面标志物对B或T细胞信号传导的响应、自然杀伤细胞(natural killer(NK)cell)活性、肥大细胞活性、肥大细胞脱粒(degranulation)、巨噬细胞吞噬或杀伤活性，以及嗜中性粒细胞的氧化爆发(oxidative burst)和/或趋化作用。在这些测试的每一种中，可包括确定由特定效应细胞(例如，淋巴细胞、NK、单核细胞/巨噬细胞、嗜中性粒细胞)产生的细胞因子。体外和离体测定可用于临床前测试和临床测试中，使用淋巴组织和/或外周血(HouseRV."Theory and practice of cytokine assessment in immunotoxicology"(1999)Methods 19:17-27；Hubbard AK."Effects of xenobiotics on macrophage function:evaluation in vitro"(1999)Methods；19:8-16；Lebrec H、et al(2001)Toxicology 158:25-29)。
使用自身免疫机理模拟人关节炎的胶原诱导关节炎(collagen-inducedArthritis，CIA)的6-周详细研究；大鼠和小鼠模型(实施例68)。胶原诱导关节炎(CIA)是最常用的人风湿性关节炎(RA)的动物模型之一。在罹患CIA的动物中形成的关节炎症非常类似在罹患RA的患者中观察到的炎症。阻断肿瘤坏死因子(TNF)是对CIA有效的处置，因为其为高度有效的处置RA患者的疗法。CIA是通过T细胞和抗体(B细胞)介导的。认为巨噬细胞在疾病形成中在介导组织损伤中起重要作用。CIA是用乳化于弗氏完全佐剂(CompleteFreund’s Adjuvant)(CFA)中的胶原对动物进行免疫来诱导的。其最常见是在DBA/1小鼠品系中诱导，但该疾病也可在Lewis大鼠中诱导。
有充分证据证明B细胞在自身免疫性疾病和/或炎性疾病的发病中起关键作用。耗尽B细胞的基于蛋白质的疗法如B细胞单克隆抗体(Rituxan)对于由自身抗体致使的炎性疾病(如风湿性关节炎)是有效的(Rastetter等(2004)Annu Rev Med 55:477)。CD69是在包括T细胞、胸腺细胞、B细胞、NK细胞、嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞的白细胞中的早期激活标志物。CD69人全血测定(实施例69)在确定化合物抑制人全血中B淋巴细胞产生的CD69的能力，所述B细胞是通过将表面IgM与山羊F(ab’)2抗人IgM交联来激活的。
T细胞依赖性免疫应答(TDAR)是对于免疫功能的预测性测定，当需要研究化合物的潜在免疫毒性作用时进行。IgM-空斑形成细胞(PFC)测定，使用绵羊红细胞(SRBC)作为抗原，现在为广为接受并经验证的标准测试。基于US National Toxicology Program(NTP)数据库(M.I.Luster等(1992)Fundam.Appl.Toxicol.18:200-210)，证明TDAR对于在小鼠中检测成体暴露的免疫毒性是高度预测性的测定。该测定的有用性来自下述：其为整体的测定方法，涉及免疫应答的多种重要组分。TDAR依赖于下述细胞区室(cellular compartments)的功能：(1)抗原呈递细胞，如巨噬细胞或树突状细胞；(2)T辅助细胞，其在所述应答的产生，以及在同族型转换(isotype switching)中起重要作用；和(3)B细胞，其为最终的效应细胞，并负责抗体产生。在任一区室中化学诱导的变化可导致TDAR整体的显著变化(M.P.Holsapple In:G.R.Burleson,J.H.Dean和A.E.Munson,Editors,Modern MethodsinImmunotoxicology,Volume 1,Wiley-Liss Publishers,New York,NY(1995),pp.71-108)。通常该测定是作为ELISA测定可溶性抗体(R.J.Smialowizc等(2001)Toxicol.Sci.61:164-175)或作为空斑(或抗体)形成细胞测定(L.Guo等(2002)Toxicol.Appl.Pharmacol.181:219-227)以检测分泌抗原特异性抗体的浆细胞来进行的。所选的抗原是全细胞(例如，绵羊红细胞)或可溶性蛋白质抗原(T.Miller等(1998)Toxicol.Sci.42:129-135)。
可通过任何适于待被治疗的疾病或病状的途径给予式I化合物。合适的途径包括口服途径、胃肠外途径(包括皮下、肌肉内、静脉内、动脉内、皮内、鞘膜内和硬膜外途径)、经皮途径、直肠途径、经鼻途径、局部途径(包括口腔和舌下途径)、***途径、腹膜内途径、肺内途径和鼻内途径。对于局部免疫抑制处置，所述化合物可通过病灶内给药(intralesional administration)给予，包括灌注或者将移植物与抑制剂在移植之前相接触。应理解的是，优选的途径可随着例如接受者的情况而变动。当式I化合物是经口给药时，可将其与药用载体或赋形剂一起配制成丸剂、胶囊剂、片剂等。当式I化合物是胃肠外给药时，可将其与药用胃肠外媒介物一起配制成可注射的单位剂量形式，如下面所详述。
治疗人患者的剂量的范围可为约10mg至约1000mg的式I化合物。通常剂量可为约100mg至约300mg的式I化合物。剂量可每日一次(QD)、每日两次(BID)或更频繁地给药，取决于其药代动力学(pharmacokinetic)和药效学(pharmacodynamic)性质，包括具体化合物的吸收、分布、代谢和***。此外，毒性因素可影响剂量和给药方案(administrationregimen)。当经口给药时，丸剂、胶囊或片剂可每日摄入或较不频繁地摄入，持续特定时间。该方案可重复进行数个治疗周期。
JANUS激酶抑制剂化合物的药物制剂
另一个实施方案包括药物组合物，其包括式I化合物和药用载体、辅料或媒介物。
在一个实施方案中，所述药物组合物还包含选自下组的其它的治疗剂：抗增殖剂、抗炎剂、免疫调节剂、神经营养因子(neurotropic factor)、治疗心血管疾病的药物、治疗肝疾病的药物、抗病毒剂、治疗血液疾病的药物、治疗糖尿病的药物或治疗免疫缺陷疾病的药物。
在一个实施方案中，式I化合物以可检测地抑制Janus激酶活性的量与药用载体、辅料或媒介物存在于药物制剂中。
在一个实施方案中，式I化合物以可检测抑制Janus激酶活性的量存在于药物制剂中，并且其抑制一种Janus激酶活性的选择性是其抑制一种或多种其它JAK1,JAK2,JAK3和/或Tyk-2活性的选择性的至少15倍、可选择地为10倍或5倍或更高。
典型的制剂通过将本发明化合物与载体、稀释剂或赋形剂混合来制备。合适的载体、稀释剂和赋形剂是本领域技术人员公知的，并且包括以下物质：如碳水化合物、蜡、水溶性聚合物和/或可溶胀聚合物、亲水性物质或疏水性物质、明胶、油、溶剂、水等。所用的具体的载体、稀释剂或赋形剂将取决于应用本发明化合物的方式和目的。通常基于本领域技术人员认为给予哺乳动物是安全的溶剂(GRAS)来选择溶剂。一般而言，安全溶剂为无毒性含水溶剂如水和可在水中溶解或混溶的其它无毒性溶剂。合适的含水溶剂包括水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇(例如PEG400、PEG300)等及它们的混合物。所述制剂还可包含以下物质中的一种或多种：缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、润湿剂、润滑剂、乳化剂、助悬剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂、助流剂、加工助剂、着色剂、增甜剂、芳香剂、矫味剂和提供药物(即本发明化合物或其药物组合物)优质外观或辅助药物产品(即药品)制备的其它已知添加剂。
所述制剂可使用常规的溶解和混合操作进行制备。例如，将散装的药物(bulkdrug substance)(即，本发明化合物或该化合物稳定化的形式，如与环糊精衍生物或其它已知的络合剂(complexation agent)的复合物)在一种或多种上述赋形剂存在下溶于合适的溶剂。通常将本发明化合物配制为药物剂型以产生可容易控制的药物剂量形式，并使得患者能够顺应处方的方案。
用于施用的药物组合物(或制剂)可按多种方式包装，取决于用于给予该药物的方法。通常，用于分配(distribution)的制品包括具有以合适形式的药物制剂放置其中的容器。合适的容器对于本领域技术人员而言是公知的，且包括如瓶(塑料的和玻璃的)、小袋、安瓿、塑料袋、金属筒等材料。所述容器还可包括防干扰装置(tamper-proff assemblage)以防止对包装内容物的不慎取得。此外，所述容器还可具有置于其上的标签，其描述容器的内含物。所述标签还可包含适当的警告。
可制备式I化合物的药物制剂用于多种给药途径和类型。例如，具有所期望纯度的本发明化合物可任选与药用稀释剂、载体、赋形剂或稳定剂混合(Remington’sPharmaceutical Sciences(1980)16th edition,Osol,A.Ed.)，呈冻干制剂、研细粉末剂或含水溶液剂的形式。配制可如下进行：在环境温度、在适当的pH及在所期望的纯度，与生理学上可接受的载体(即在所用剂量和浓度时对接受者是无毒性的载体)混合。所述制剂的pH主要取决于化合物的具体用途和浓度，但范围可为约3至约8。在pH为5的乙酸盐缓冲液中的制剂是合适的实施方案。
在一个实施方案中，用于药物组合物的式I化合物优选是基本无菌的。所述化合物通常作为固体组合物储藏，但冻干制剂或含水溶液剂也可以接受。
按与良好医学实践一致的方式(即量、浓度、时间表、过程、媒介物和给药途径)来配制、确定剂量和给药本发明的药物组合物。在此背景下考虑的因素包括所治疗的具体障碍、所治疗的具体哺乳动物、个体患者的临床情况、病症的起因、药物的递送位点、给药方法、给药的时间表和医学实践者已知的其它因素。所给药的化合物的“治疗有效量”将由这些考虑因素控制，并且是预防、改善或治疗过度增殖性病症所需的最小量。所述量优选低于对宿主产生毒性的量。
作为通常的建议，每剂量肠胃外给药的初始药学有效量的抑制剂为约每日0.01-100毫克/kg，即约0.1至20毫克/kg患者体重，所使用的化合物的典型的最初范围为0.3至15毫克/kg/日。
可接受的稀释剂、载体、赋形剂和稳定剂在所用的剂量和浓度下对接受者是无毒性的，并且包括缓冲剂如磷酸盐、枸橼酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和蛋氨酸(methionine)；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六甲双铵(hexamethoniumchloride)；苯扎氯铵、苄索氯胺；苯酚、丁醇或苄醇；对羟基苯甲酸烷基酯，如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚(resorcinol)；环己醇；3-戊醇和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐的抗衡离子，如钠；金属络合物(例如，Zn-蛋白质络合物)；和/或非离子型表面活性剂，如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。活性药物成分还可包埋在通过例如凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊中，例如在胶体药物递送***(例如脂质体、白蛋白微球、微乳液、纳米颗粒和纳米胶囊(nanocapsules))中或在***液(macroemulsion)中，分别为羟基甲基纤维素或明胶微胶囊和聚-(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊。所述技术披露于Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition,Osol,A.Ed.(1980)中。
可制备缓释制剂。缓释制剂的合适实例包括含有式I化合物的的固态疏水性聚合物的半渗透性基质，其中基质以成形的制品形式(例如薄膜或微胶囊)存在。缓释基质的实例包括聚酯、水凝胶(例如，聚(甲基丙烯酸2-羟基乙酯)或聚(乙烯醇))、聚交酯、L-谷氨酸和γ-乙基-L-谷氨酸的共聚物、非降解性乙烯-乙酸乙烯酯、降解性乳酸-羟乙酸共聚物如LUPRON DEPOTTM(由乳酸-羟乙酸共聚物和醋酸亮丙瑞林组成的可注射微球)和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。
用于体内给药的制剂必需为无菌的，其可容易地通过无菌过滤膜过滤来完成。
所述制剂包括适于本申请详述的给药途径的那些制剂。制剂可适宜地以单位剂量形式存在并可通过药学领域公知的任何方法制备。技术和制剂通常参见Remington'sPharmaceutical Sciences(Mack Publishing Co.,Easton,PA)。所述方法包括使活性成分与构成一种或多种助剂(accessory ingredient)的载体结合的步骤。通常制剂如下制备：使活性成分与液态载体或微细粉碎的固态载体或与这两种载体同时均匀和紧密的结合，然后必要时，对产品进行成型。
适于口服给药的式I化合物的制剂可制备为离散的单位，如各自含有预定量的式I化合物的丸剂、胶囊剂、扁囊剂或片剂。
压制片可如下制备：在合适的机器中对自由流动形式(如粉末或颗粒)的活性成分以及任选混合的粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂进行压制。模制片可如下制备：在合适的机器中对用惰性液态稀释剂润湿的粉末状活性成分的混合物进行模制。可任选对片剂进行包衣或刻痕，并任选进行配制以提供活性成分从其中缓慢或控制释放。
可制备片剂、含片(troche)、糖锭、水性混悬剂或油性混悬剂、可分散粉末剂或可分散颗粒剂、乳剂、硬胶囊剂或软胶囊剂例如明胶胶囊、糖浆剂或酏剂，以用于口服。预期用于口服的式I化合物的制剂可根据制备药物组合物的领域已知的任何方法制备，所述组合物可含有一种或多种试剂，包括增甜剂、矫味剂、着色剂和防腐剂，以提供适口的制剂。含有活性成分以及混合有适于制造片剂的无毒性生理学可接受的赋形剂的片剂是可接受的。这些赋形剂可以是，例如，惰性稀释剂，如碳酸钙或碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒剂和崩解剂(granulating and disintegrating agent)，如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，如淀粉、明胶或***胶；以及润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可以是未包衣的或可通过已知技术(包括微胶囊化)包衣，以延迟在胃肠道的崩解和吸收，由此在较长的时间提供持续的作用。例如，可采用延时物质，如单独的或与蜡结合的单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
对于眼或其它外部组织(例如口和皮肤)的感染，所述制剂优选作为局部的软膏剂或乳膏给药，其包含例如，0.075至20％w/w的量的活性成分。当配制为软膏剂时，活性成分可与石蜡或与水混溶的软膏基质一同使用。或者，活性成分可配制为具有水包油乳膏基质的乳膏。
如果需要，所述乳膏基质的水相可包括多元醇即具有两个或多个羟基的醇例如丙二醇、丁烷-1,3-二醇、甘露醇、山梨糖醇、甘油和聚乙二醇(包括PEG 400)和它们的混合物。所述局部制剂可根据需要包括促进活性成分吸收或渗透通过皮肤或其它感染区域的化合物。所述皮肤渗透促进剂的实例包括二甲基亚砜和相关类似物。
本发明的乳剂的油相可由已知成分以已知方式构成。虽然所述相可仅包含乳化剂(也称作乳化剂(emulgent))，但是期望的是其包含至少一种乳化剂与脂肪和/或油的混合物。优选地，包括与起稳定剂作用的亲脂乳剂一起的亲水乳剂。还优选包含油和脂肪两者。含或不含稳定剂的乳剂一起构成所谓乳化蜡，且所述蜡与油和脂肪一同构成所谓乳化软膏基质，其构成乳膏制剂的含油分散相。适用于本发明制剂的乳化剂和乳剂稳定剂包括 十八醇十六醇化合物、苯甲醇、肉豆蔻醇、单硬脂酸甘油酯和月桂基硫酸钠。
本发明的水性混悬剂包含与适用于制造水性混悬剂的赋形剂混合的活性物质。上述赋形剂包括助悬剂(如羧甲基纤维素钠、交联羧甲纤维素、聚维酮(povidone)、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidone)、西黄蓍胶(gum tragacanth)和***胶(gum acacia))和分散剂或润湿剂(如天然存在的磷脂(例如卵磷脂)，烷基氧化物(例如环氧乙烷，环氧丙烷)与脂肪酸的缩合产物(例如，聚氧乙烯硬脂酸酯)，环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物(例如，十七亚乙氧基十六醇(heptadecaethyleneoxycetanol))、环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物(如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯))。水混悬剂还可以含有一种或多种防腐剂例如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂以及一种或多种增甜剂例如蔗糖或糖精。
式I化合物的药物组合物可呈无菌注射剂如无菌注射用水性或油性混悬剂的形式。所述混悬剂可根据本领域已知的方法使用上文提及的那些合适的分散剂或润湿剂和助悬剂来配制。无菌注射剂还可以是在肠胃外可接受的无毒性稀释剂或溶剂中的无菌注射用溶液剂或混悬剂，如在1,3-丁二醇中的溶液剂，或制备成冻干粉末剂。可使用的可接受的媒介物和溶剂包括水、林格溶液(Ringer’s solution)和等渗氯化钠溶液。此外，无菌不挥发性油通常可用作溶剂或助悬媒介物。出于此目的，可使用任何温和的不挥发性油，包括合成的甘油一酯或甘油二酯。此外，脂肪酸如油酸同样可用于制备注射剂。
可与载体物质组合以制备单一剂量形式的活性成分量将基于所治疗的主体和具体的给药模式而变化。例如，意在用于口服给药于人类的定时释放制剂(time-releaseformulation)可含有约1至1000mg活性物质及混合有适当和适宜量的载体物质，所述载体物质可占总组合物的约5至约95％(重量:重量)。可制备所述药物组合物以提供可容易测量的给药量。例如，意在用于静脉内输注的水性溶液剂在每毫升溶液中可含有约3至500μg活性成分，从而可实现以约30mL/hr的速率输注合适的体积。
适于肠胃外给药的制剂包括水性和非水性无菌注射溶液剂，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使所述制剂与所预期接受者的血液等渗的溶质；及水性和非水性无菌混悬剂，其可包含助悬剂和增稠剂。
适于局部给药至眼部的制剂还包括滴眼剂，其中将活性成分溶于或悬浮于合适的载体(尤其是用于活性成分的含水溶剂)中。存在于所述制剂中的活性成分的浓度优选为0.5至20％，有利地为0.5至10％，特别是约1.5％w/w。
适于在口中局部给药的制剂包括糖锭(lozenge)，其含有在矫味基质(通常为蔗糖和***胶或西黄蓍胶)中的活性成分；锭剂(pastille)，其含有在惰性基质(如明胶和甘油或蔗糖和***胶)中的活性成分；及口腔清洗剂(mouthwash)，其含有在合适液态载体中的活性成分。
适于直肠给药的制剂可表现为具有合适基质的栓剂，所述基质包含例如可可脂或水杨酸酯。
适于肺内或经鼻给药的制剂具有例如为0.1至500微米的粒度(包括在0.1和500微米之间，增量为例如0.5、1、30微米、35微米等的粒度)，其通过鼻道经快速吸入给药或通过口经吸入给药，以便到达肺泡囊(alveolar sacs)。合适的制剂包括活性成分的水性或油性溶液剂。适于气雾剂或干粉给药的制剂可根据常规方法制备，并可与其它治疗药物(如迄今用于治疗或预防下文所述的HIV感染的化合物)一起递送。
适于***给药的制剂可呈现为***栓剂(pessary)、棉塞(tampon)、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫或者喷雾剂制剂，其除了包含活性成分之外，还包含本领域已知的合适载体。
所述制剂可包装在单位剂量容器或多剂量容器例如密封的安瓿和小瓶中，并且可在冷冻干燥(冻干)条件下贮存，其在使用前仅需要加入无菌液态载体例如水以供即时注射。即用型注射溶液剂和混悬剂(extemporaneous injection solution and suspension)由前述无菌粉末剂、颗粒剂和片剂之类的来制备。优选的单位剂量制剂是含有本申请上文所述的日剂量或单位日亚剂量(unit daily sub-dose)或其适当分数的活性成分的那些制剂。
本发明进一步提供了兽医用组合物(veterinary composition)，其包含至少一种如上所定义的活性成分和针对其的兽医用载体(veterinary composition)。兽医用载体是可用于给予组合物目的的材料，并且可以是惰性或者在兽医领域可接受的并且与活性成分相容的固体、液体或者气体材料。这些兽医学组合物可通过肠胃外、口服或者通过任何其它所需的途径给予。
联合治疗
式I化合物可单独使用可与其他治疗剂组合使用，用于治疗本申请描述的疾病或障碍，例如免疫障碍(例如，银屑病或炎症)或过度增殖性障碍(例如，癌症)。在一些实施方案中，式I化合物与第二治疗性化合物结合在药物组合制剂中或结合在作为联合治疗的给药方案中，所述第二治疗性化合物具有抗炎或抗过度增殖性质或所述第二治疗性化合物用于治疗炎症、免疫应答障碍(immune-response disorder)或过度增殖性障碍(例如，癌症)。所述第二治疗剂可为NSAID或其它抗炎药物。第二治疗剂可为化疗剂。药物组合制剂或给药方案中的第二治疗剂优选具有针对式I化合物的补充活性，从而使它们不会不利地彼此影响。所述化合物以有效用于预期目的量适当地存在于组合中。在一个实施方案中，本发明组合物包含式I化合物或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物或药用盐或前药以及组合有治疗剂例如NSAID。
因此，另一个实施方案包括在患者中治疗响应于对Janus激酶活性进行抑制的疾病或病状或减轻响应于对Janus激酶活性进行抑制的疾病或病状严重程度的方法，包括给予所述患者治疗有效量的式I化合物，并且还包括给予另一种治疗剂。
所述联合治疗可作为同时给药方案或顺序给药方案来进行。当顺序给药时，所述组合可分两次或更多次给药给予。组合的给药包括共同给药(coadministration)，使用分别的制剂或单一的药物制剂，以及以任意顺序连续给药，其中优选地，存在两者(或所有)活性药物同时发挥其生物学活性的一段时间。
上述共同给药的药物中的任一种的合适剂量为现行使用的剂量，且可由于新鉴定的药物与其它化学治疗药物或治疗的联合作用(协同作用)而降低。
所述联合治疗可提供“协同作用”并证明为“协同的”，即，当活性成分一同使用时取得的效果高于分别使用所述化合物所得的效果之和时可实现所述作用。协同作用可在下述情况下获得，即当所述活性成分为：(1)共同配制并按联合的单位剂量形式同时递送或给予；(2)作为分开的制剂交替(alternation)或平行递送；或(3)通过其它给药方案。当在交替治疗中递送时，可在当顺序给予或递送化合物(例如通过在分开的注射器中进行不同注射)时获得协同作用。一般而言，在交替治疗中，每种活性成分的有效剂量被顺序给予，即连续(serially)给予的，而在联合治疗中，两种或更多种有效成分的有效剂量是一同给予的。
在一个具体的治疗实施方案中，式I化合物或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物或药用盐或前药可与其它治疗性激素药物或抗体药物例如上述那些组合，以及与外科治疗和放射疗法组合。本发明的联合治疗因此包括给予至少一种式I化合物或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物或药用盐或前药和使用至少一种其它癌症治疗方法或免疫障碍方法。对式I化合物和其它药物活性免疫药物或化疗药物的量和相对给药时间进行选择，目的是实现所期望的组合治疗作用。
JANUS激酶抑制剂化合物的代谢物
另一个实施方案包括所给予的式I化合物的体内代谢产物。所述产物可来源于所给予的化合物的例如氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺化、酯化、脱酯化、酶裂解等。
代谢产物通常是通过下述方法鉴定的：制备本发明化合物的放射性标记(例如14C或3H)的同位素，将其以可检测的剂量(例如，大于约0.5mg/kg)肠胃外给予动物(如大鼠、小鼠、豚鼠、猴)或人，允许足以让代谢发生的时间(通常为约30秒至30小时)，并从尿、血或其它生物样品分离其转化产物。这些产物可容易地分离，因为其是经标记的(其余的产物通过使用能够结合留存于代谢物中的表位的抗体来分离)。代谢产物的结构通过常规方法确定，例如，通过MS、LC/MS或NMR分析。一般而言，对于代谢产物的分析以与本领域技术人员公知的常规药物代谢研究一样进行。转化产物只要其不见于体内，即可用于诊断性测定以供确定式I化合物的治疗性剂量。
制品
另一种实施方案包括制备式I化合物的方法。所述方法包括在足以形成式I化合物的条件下，式(i)化合物与式(iia-c)化合物反应:
其中R1在式I中定义，X为离去基团例如，卤素、-OH、-O(C1-C12烷基)；
式(iia-c)化合物：
其中R5在式I中定义，R10为氢或R4，R4在式I中定义。
在一个实施方案中，所述条件包括碱性条件，例如，在碱例如胺碱例如吡啶或烷基化胺例如二烷基胺或三烷基胺(例如，三甲基胺、三乙胺、二异丙基胺或二乙基胺)存在下进行所述反应。
在一个实施方案中，所述条件包括偶联条件，例如，在PyAOP、DMAP和烷基化胺例如二异丙基胺存在下进行所述反应。
另一个实施方案提供了用于治疗响应Janus激酶抑制的疾病或病症的试剂盒。所述试剂盒包含：
第一药物组合物，其包含式I化合物；和
使用说明。
在另一实施方案中，所述试剂盒还包含：
第二药物组合物，其包含化学治疗药物。
在一实施方案中，所述说明包含对于将所述第一和第二药物组合物向有此需要的患者同时、顺序或分开给药的说明。
在一实施方案中，所述第一和第二药物组合物包含于分开的容器中。
在一实施方案中，所述第一和第二药物组合物包含于同一容器中。
可用的容器包括，例如，瓶、小瓶、注射器、泡罩包装等。所述容器可由多种材料制成，如玻璃或塑料。所述容器包含本发明化合物或其制剂，其有效地治疗病症，且可具有无菌入口(sterial access port)(例如，所述容器可为带有可被皮下注射针刺穿的塞子的静脉内溶液袋或者小瓶)。容器包含组合物，所述组合物包含至少一种式I化合物。标签或药品说明书(package insert)指示，所述组合物是用于治疗所选的病症如癌症。在一实施方案中，所述标签或药品说明书指示包含式I化合物的组合物可用于治疗病症。此外，所述标签或药品说明书可指示待治疗的患者是具有以活动过度(overactive)或不规则(irregular)激酶活性为特征的病症的患者。所述标签或包装说明书还可指示所述组合物可用于治疗其它疾病。
所述制品可包含(a)在其中含有式I化合物的第一容器；和(b)在其中含有第二药物制剂的第二容器，其中所述第二药物制剂包含化学治疗药物。在本发明该实施方案中的制品还可包含包装说明书，指示所述第一和第二化合物可用于治疗具有中风、血栓或血栓形成疾病风险的患者。可选择地或另外，所述制品还可包含第二(或第三)容器，其包含可药用的缓冲液，如注射用抑菌水(BWFI)、磷酸盐缓冲的盐水、林格溶液和右旋糖溶液。其还可包含其它从商业性或使用者角度需要的物质，包括其它缓冲液、稀释剂、过滤器、针头和注射器。
为了阐明本发明，本申请包括了下述实施例。然而，应理解的是，这些实施例并非对本发明作出限定，而仅意为提出实施本发明的方法。本领域技术人员会意识到可容易地将描述的化学反应进行调整以制备式I的其它化合物，且制备式I化合物的其它方法落在本发明保护范围内。例如，对于本发明未例示的化合物的合成可通过本领域技术人员显而易见的改变而成功进行，所述改变为例如，通过适当地保护干扰基团，通过使用本领域已知的非所描述的那些之外的其它合适的试剂，和/或通过对反应条件进行常规改变。可选择地，人们会意识到本申请所述的其它反应或本领域已知的反应具有用于制备本发明其它化合物的用途。
本申请还涉及以下各项：
项1.式I化合物、其对映异构体、非对映异构体或药用盐:
其中：
R1为氢、C1-C6烷基、–OR6、–NR6R7或卤素；
R2为5-或6-元杂芳基，其中R2任选取代有1-3个R4；
R3为苯基、5-6元杂芳基、C3-C6环烷基或3-10元杂环基，其中R3任选被1-5个R5取代；
R4独立地为C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、–(C0-C6烷基)CN、–(C0-C6烷基)OR6、–(C0-C6烷基)SR6、–(C0-C6烷基)NR6R7、–(C0-C6烷基)CF3、–(C0-C6烷基)C(O)R6、–(C0-C6烷基)C(O)OR6、–(C0-C6烷基)C(O)NR6R7、–(C0-C6烷基)NR6C(O)R7、–(C0-C6烷基)C(O)3-6元杂环基、–(C0-C6烷基)(C3-C6环烷基)、–(C0-C6烷基)苯基、–(C0-C6烷基)5-6元杂芳基或–(C0-C6烷基)(3-6-元杂环基)，其中R4独立任选地被R15取代；
R5独立地为C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、氧代、卤素、–(C0-C3烷基)CN、–(C0-C3烷基)OR11、–(C0-C3烷基)SR11、–(C0-C3烷基)NR11R12、–(C0-C3烷基)OCF3、–(C0-C3烷基)CF3、–(C0-C3烷基)NO2、–(C0-C3烷基)C(O)R11、–(C0-C3烷基)C(O)OR11、–(C0-C3烷基)C(O)NR11R12、–(C0-C3烷基)NR11C(O)R12、–(C0-C3烷基)S(O)1-2R11、–(C0-C3烷基)NR11S(O)1-2R12、–(C0-C3烷基)S(O)1-2NR11R12、–(C0-C3烷基)(C3-C6环烷基)、–(C0-C3烷基)(3-6-元杂环基)、–(C0-C3烷基)C(O)(3-6-元杂环基)、–(C0-C3烷基)(5-6元杂芳基)或–(C0-C3烷基)苯基，其中R5独立任选地被卤素、C1-C3烷基、氧代、–CF3、–(C0-C3烷基)OR13或–(C0-C3烷基)NR13R14取代；或
两个R5一起形成–O(CH2)1-3O–；
R6和R7独立地为氢、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、–CN、–OR8、–NR8R9、–C(O)R8、–C(O)OR8、–C(O)NR8R9、–NR8C(O)R9、–NR8C(O)OR9、–OC(O)NR8,–S(O)1-2R8、–NR8S(O)1-2R9、–S(O)1- 2NR8R9、C3-C6环烷基、苯基、3-6元杂环基或5-6元杂芳基，其中所述R6和R7独立任选地被R20取代，或
R6和R7与它们连接的原子一起形成3-6-元杂环基，所述杂环基任选被卤素、氧代、–CF3或C1-C3烷基取代；
R8和R9独立地为氢或C1-C3烷基；或
R8和R9与它们连接的原子一起形成3-6-元杂环基，所述杂环基任选被卤素、氧代、–CF3或C1-C3烷基取代；
R11独立地为氢、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、3-6元杂环基、–C(O)R13、–C(O)OR13、–C(O)NR13R14、–NR13C(O)R14、–S(O)1-2R13、–NR13S(O)1-2R14或–S(O)1-2NR13R14，其中所述烷基、环烷基和杂环基独立任选地被氧代、C1-C3烷基、OR13、NR13R14或卤素取代；
R12独立地为氢或C1-C3烷基，其中所述烷基独立任选地被卤素或氧代取代；或
R11和R12与它们连接的原子一起形成3-6-元杂环基，所述杂环基任选被卤素、氧代、–CF3或C1-C3烷基取代；
R13和R14独立地为氢或任选被卤素或氧代取代的C1-C3烷基；或
R13和R14与它们连接的原子一起形成3-6-元杂环基，所述杂环基任选被卤素、氧代、–CF3或C1-C3烷基取代；
R15为C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、氧代、卤素、–CN、–OR16、–SR16、–NR16R17、–OCF3、–CF3、–C(O)R16、–C(O)OR16、–C(O)NR16R17、–NR16C(O)R17、–NR16C(O)OR17、–OC(O)NR16、C3-C6环烷基、3-6-元杂环基、–C(O)(3-6-元杂环基)、5-6元杂芳基或苯基，其中R15独立任选地被卤素、C1-C3烷基、氧代、–CN、–CF3、–OR18、–NR18R19取代；
R16和R17独立地为氢或任选被氧代或卤素取代的C1-C6烷基；或
R16和R17与它们连接的原子一起形成任选被氧代、卤素或C1-C3烷基取代的3-6元杂环基；
R18和R19独立地为氢或任选被氧代或卤素取代的C1-C6烷基；或
R18和R19与它们连接的原子一起形成任选被氧代、卤素或C1-C3烷基取代的3-6元杂环基；
R20为C1-C6烷基、氧代、卤素、–OR21、–NR21R22、–CN、C3-C6环烷基、苯基、3-6元杂环基或5-6元杂芳基，其中R20任选被氧代、卤素或C1-C3烷基取代；和
R20和R21独立地为氢或任选被氧代或卤素取代的C1-C6烷基；或者
R20和R21与它们连接的原子一起形成任选被氧代、卤素或C1-C3烷基取代的3-6元杂环基，
条件是所述化合物不是N-(5-甲基-4-(4-丙基苯基)噻唑-2-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺；N-(4-(4-氯苯基)噻唑-2-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺；或N-(3-甲基-1-苯基-1H-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
项2.项1的化合物，其中R1为氢或–NH2。
项3.项1-2的化合物，其中R2选自任选取代有1-3个R4的吡唑基或噻唑基。
项4.项1-3的化合物，其中R2为:
其中
R10为氢或R4。
项5.项1-4的化合物，其中R4独立地为–(C0-C6烷基)OR6、–(C0-C6烷基)SR6、卤素、–(C0-C6烷基)CN、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、–(C0-C6烷基)C(O)OR6、–(C0-C6烷基)C(O)NR6NR7、–(C0-C6烷基)OC(O)NR6、–(C0-C6烷基)NR6C(O)OR7、–(C0-C6烷基)NR6C(O)NR7、–(C0-C6烷基)NR6C(O)R7、–(C0-C6烷基)(C3-C6环烷基)、–(C0-C6烷基)C(O)(3-6-元杂环基)、–(C0-C6烷基)(3-6-元杂环基)、–(C0-C6烷基)NR6R7或–(C0-C6烷基)CF3，其中R4独立任选地被R15取代。
项6.项1-5的化合物，其中R4独立地选自：
F、Cl、Br、I、–CH2CN、–CH2CH2CN、–CH(CH3)CN、
其中波浪线表示与R2的连接点。
项7.项1-6的化合物，其中R3为苯基、吡啶基或4-6元杂环基，其中R3任选被R5取代。
项8.项1-7的化合物，其中R5独立地为C1-C6烷基、卤素、氧代、–CN、–(C0-C3烷基)OR11、–(C0-C3烷基)SR11、–(C0-C3烷基)NR11R12、–(C0-C3烷基)OCF3或–CF3，其中所述烷基独立任选地被卤素、C1-C3烷基、氧代、–CF3、–(C0-C3烷基)OR13或–(C0-C3烷基)NR13R14取代。
项9.项1-8的化合物，其中R3选自：
其中波浪线表示与R2的连接点。
项10.项1-9的化合物，其中R3为任选被1-2个R5取代的苯基。
项11.项1-10的化合物，其中-R2-R3为:
其中
n为0、1、2或3。
项12.项1的化合物、其对映异构体、非对映异构体或药用盐，其中：
R1为氢、C1-C6烷基、–OR6、–NR6R7或卤素；
R2为5-或6-元杂芳基，其中R2任选取代有1-3个R4；
R3为苯基、5-或6-元杂芳基，其中R3任选被1-5个R5取代；
R4独立地为C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、–(C0-C6烷基)OR6、–(C0-C6烷基)SR6、–(C0-C6烷基)NR6R7、–(C0-C6烷基)CF3、–(C0-C6烷基)C(O)R6、–(C0-C6烷基)C(O)OR6、–(C0-C6烷基)C(O)NR6R7、–(C0-C6烷基)(C3-C6环烷基)或–(C0-C6烷基)(3-6-元杂环基)，其中R4独立任选地被C1-C3烷基、氧代、卤素、–CF3、–OR8或–NR8R9取代；
R5独立地为C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、–(C0-C3烷基)CN、–(C0-C3烷基)OR11、–(C0-C3烷基)SR11、–(C0-C3烷基)NR11R12、–(C0-C3烷基)OCF3、–(C0-C3烷基)CF3、–(C0-C3烷基)NO2、–(C0-C3烷基)C(O)R11、–(C0-C3烷基)C(O)OR11、–(C0-C3烷基)C(O)NR11R12、–(C0-C3烷基)NR11C(O)R12、–(C0-C3烷基)S(O)1-2R11、–(C0-C3烷基)NR11S(O)1-2R12、–(C0-C3烷基)S(O)1- 2NR11R12、–(C0-C3烷基)(C3-C6环烷基)、–(C0-C3烷基)(3-6-元杂环基)、–(C0-C3烷基)C(O)(3-6-元杂环基)、–(C0-C3烷基)(5-6元杂芳基)或–(C0-C3烷基)苯基，其中R5独立任选地被卤素、C1-C3烷基、氧代、–CF3、–(C0-C3烷基)OR13或–(C0-C3烷基)NR13R14取代；或
两个R5一起形成–O(CH2)1-3O–；
R6独立地为氢、C1-C3烷基、–C(O)R8、–C(O)OR8、–C(O)NR8R9、–NR8C(O)R9、–S(O)1- 2R8、–NR8S(O)1-2R9或–S(O)1-2NR8R9，其中所述烷基独立任选地被氧代、OH或卤素取代；
R7独立地为氢或C1-C3烷基，其中所述烷基独立任选地被卤素取代；或
R6和R7与它们连接的原子一起形成5-或6-元杂环基，所述杂环基任选被卤素、氧代、–CF3或C1-C3烷基取代；
R8和R9独立地为氢或C1-C3烷基；或
R8和R9与它们连接的原子一起形成5-或6-元杂环基，所述杂环基任选被卤素、氧代、–CF3或C1-C3烷基取代；
R11独立地为氢、C1-C3烷基、–C(O)R13、–C(O)OR13、–C(O)NR13R14、–NR13C(O)R14、–S(O)1-2R13、–NR13S(O)1-2R14或–S(O)1-2NR13R14，其中所述烷基独立任选地被氧代、OH或卤素取代；
R12独立地为氢或C1-C3烷基，其中所述烷基独立任选地被卤素取代；或
R11和R12与它们连接的原子一起形成5-或6-元杂环基，所述杂环基任选被卤素、氧代、–CF3或C1-C3烷基取代；和
R13和R14独立地为氢或C1-C3烷基；或
R13和R14与它们连接的原子一起形成5-或6-元杂环基，所述杂环基任选被卤素、氧代、–CF3或C1-C3烷基取代；
条件是所述化合物不是N-(5-甲基-4-(4-丙基苯基)噻唑-2-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺；N-(4-(4-氯苯基)噻唑-2-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺；或N-(3-甲基-1-苯基-1H-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
项13.项1-12的化合物，其选自实施例1-508。
项14.药物组合物，其包含项1-13的化合物和药用载体、辅料或媒介物。
项15.在患者中预防、治疗响应于对Janus激酶活性进行抑制的疾病或病症或减轻响应于对Janus激酶活性进行抑制的疾病或病症的严重程度的方法，包括向所述患者给予治疗有效量的项1-13的化合物。
项16.项15的方法，其中所述疾病或病症为癌症、真性红细胞增多、原发性血小板增多症、骨髓纤维化、慢性髓细胞性白血病(CML)、类风湿性关节炎、炎症性肠病、克罗恩氏病、银屑病、接触性皮炎或迟发超敏反应。
项17.项1-13的化合物在治疗癌症、真性红细胞增多、原发性血小板增多症、骨髓纤维化、慢性髓细胞性白血病(CML)、类风湿性关节炎、炎症性肠病、克罗恩氏病、银屑病、接触性皮炎或迟发超敏反应中的用途。
生物实施例
可测定式I化合物体外和体内调节Janus蛋白激酶、酪氨酸激酶、其他的丝氨酸/苏氨酸激酶和/或双重特异性激酶的活性的能力。体外测定包括确定对激酶活性抑制的生物活性测定和基于细胞的测定。可选择的体外测定对式I化合物与激酶结合的能力进行量化，并通过以下方式测量：在结合前将式I化合物放射标记，分离式I化合物/激酶复合物和确定所结合的放射标记的量，或；进行竞争实验，其中将式I化合物与已知的放射标记配体一起孵育。这些和其它有用的体外测定是本领域技术人员公知的。
在一个实施方案中，式I化合物可用于控制、调节或抑制酪氨酸激酶活性，例如Janus蛋白激酶活性、其它丝氨酸/苏氨酸激酶活性和/或双重特异性激酶活性。因此，它们用作药物标准品用于开发新的生物试验、测定和用于寻找新的药理学试剂(pharmacological agent)。
实施例A
JAK1、JAK2和TYK2抑制测定方案
经分离的JAK1、JAK2和TYK2激酶结构域的活性是通过监测来源于JAK3的肽(Val-Ala-Leu-Val-Asp-Gly-Tyr-Phe-Arg-Leu-Thr-Thr)的磷酸化使用Caliper LabChip技术(Caliper Life Sciences,Hopkinton,MA)来测定的，所述肽在其N端经5-羧基荧光素荧光标记。为了确定实施例1-508的抑制常数(Ki)，将化合物在DMSO中连续稀释，并添加至50μL激酶反应液中，所述反应液含1.5nM JAK1、0.2nM经纯化的JAK2酶或1nM经纯化的TYK2酶、100mM Hepes(pH 7.2)、0.015％Brij-35、1.5μM肽底物、25μM ATP、10mM MgCl2、4mM DTT，DMSO终浓度为2％。将反应液在22℃在384孔聚丙烯微滴定板中孵育30分钟，然后通过添加25μL含EDTA的溶液(100mM Hepes(pH7.2)、0.015％Brij-35、150mM EDTA)来终止，使EDTA终浓度为50mM。在终止激酶反应之后，使用Caliper LabChip 3000根据生产商的说明来确定磷酸化产物比例，其为总肽底物的分数。然后使用Morrison的紧密结合模型(Morrisontight binding model)来确定Ki值。Morrison,J.F.,Biochim.Biophys.Acta.185:269-296(1969)；William,J.W.和Morrison,J.F.,Meth.Enzymol.,63:437-467(1979)。
实施例B
JAK3抑制测定方案
经分离的JAK3激酶结构域的活性是通过监测来源于JAK3的肽(Leu-Pro-Leu-Asp-Lys-Asp-Tyr-Tyr-Val-Val-Arg)的磷酸化使用Caliper LabChip技术(Caliper LifeSciences,Hopkinton,MA)来测定的，所述肽在其N端经5-羧基荧光素荧光标记。为了确定实施例1-508的抑制常数(Ki)，将化合物在DMSO中连续稀释，并添加至50μL激酶反应液中，所述反应液含5nM经纯化的JAK3酶、100mM Hepes(pH 7.2)、0.015％Brij-35、1.5μM肽底物、5μM ATP、10mM MgCl2、4mM DTT，DMSO终浓度为2％。将反应液在22℃在384孔聚丙烯微滴定板中孵育30分钟，然后通过添加25μL含EDTA的溶液(100mM Hepes(pH 7.2)、0.015％Brij-35、150mM EDTA)来终止，导致EDTA终浓度为50mM。在终止激酶反应之后，使用Caliper LabChip3000根据生产商的说明来确定磷酸化产物比例，其为总肽底物的分数。然后使用Morrison的紧密结合模型(Morrison tight binding model)来确定Ki值。Morrison,J.F.,Biochim.Biophys.Acta.185:269-296(1969)；William,J.W.和Morrison,J.F.,Meth.Enzymol.,63:437-467(1979)。
实施例C
基于细胞的药理学测定
实施例1-508的活性是通过基于细胞的测定法确定的，设计所述测定用于测量Janus激酶依赖性信号传导。将化合物在DMSO中连续稀释，并与Set-2细胞(德国微生物和细胞培养物保藏中心(German Collection of Microorganisms and Cell Cultures,DSMZ)；Braunschweig, Germany)在96孔微滴定板中在37℃在RPMI培养基中以最终细胞密度为每孔105个细胞和最终DMSO浓度为0.57％一同孵育，所述细胞表达JAK2V617F突变蛋白。然后在孵育细胞的溶胞产物中使用Meso Schale Discovery(MSD)技术(Gaithersburg,Maryland)根据生产商的说明测定化合物介导的对STAT5磷酸化的作用，并确定EC50值。或者，将经连续稀释的化合物添加至在96孔微滴定板中在RPMI培养基中的NK92细胞(美国典型培养物保藏中心(ATCC)；Manassas, VA)中，最终细胞密度为每孔105个细胞，而最终DMSO浓度为0.57％。然后向含有NK92细胞和化合物的所述微滴定板中以最终浓度10ng/mL或30ng/mL分别加入人重组IL-2或IL-12(R&D systems；Minneapolis,MN)，将所述板在37℃孵育1小时。然后使用Meso Scale Discovery(MSD)技术(Gaithersburg, Maryland)根据制造商的方案在所孵育细胞的溶胞产物中测量化合物介导的对STAT5(IL-2介导的)或STAT4(IL-12介导的)磷酸化的作用，并确定EC50值。
制备实施例
缩写
CD3OD 氘代甲醇
CDCl3 氘代氯仿
DAST 三氟化二乙氨基硫
DCM 二氯甲烷
DIPEA 二异丙基乙基胺
DMAP 4-二甲基氨基吡啶
DMF 二甲基甲酰胺
DMF-DMA N,N-二甲基甲酰胺二甲基乙缩醛
DMSO 二甲基亚砜
DMSO-d6 氘代DMSO
DME 1,2-二甲氧基乙烷
DMF 二甲基甲酰胺
DPPA 叠氮膦酸二苯酯
EtOAc 乙酸乙酯
EtOH 乙醇
HOAc 乙酸
g 克
HATU (O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐)
HCl 盐酸
Hex 己烷
HM-N HM-N为硅藻土的改性形式
IMS 工业用甲醇化酒精
L 升
MeOH 甲醇
mg 毫克
mL 毫升
POCl3 三氯氧磷
NaH 氢化钠
Na2SO4 硫酸钠
NaHCO3 碳酸氢钠
NaOH 氢氧化钠
Pd(PPh3)4 四(三苯基膦)钯(0)
PyAOP (7-氮杂苯并***-1-基氧基)三吡咯烷子基鏻六氟磷酸盐
Lawesson’s试剂 2,4-二(4-甲氧基苯基)-1,3-二硫杂-2,4-二磷杂环丁烷2,4-二硫化物
NEt3 三乙胺
Pd2dba3 三-(二亚苄基丙酮)二钯(0)
Si-SPE 预填充的硅胶快速色谱柱
Si-ISCO 预填充的硅胶快速色谱柱
THF 四氢呋喃
SEM 2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基
SEMCl 2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯化物
TEA 三乙胺
TFA 三氟乙酸
一般实验条件
在环境温度，使用具有三重共振5mm探针的Varian Unity Inova(400MHz)光谱仪、使用BBI Broad Band Inverse 5mm探针的Bruker AVIII光谱仪(400MHz)、具有三重共振5mm探针的Bruker Avance DRX400(400MHz)光谱仪或使用QNP(Quad Nucleus detect)5mm探针的Bruker AVIII光谱仪(500MHz)记录1H NMR光谱。化学位移表达为相对于四甲基甲硅烷的ppm。使用以下缩写:br＝宽信号，s＝单峰，d＝双峰，dd＝双二重峰，t＝三峰，q＝四重峰，m＝多重峰。
使用以下方法之一进行高压液相色谱法-质谱(LCMS)实验，以确定保留时间(RT)和相关质量离子。
方法A：在与带有二极管阵列检测器的Hewlett Packard HP1100LC***相连的Waters Micromass ZQ四极杆质谱仪上进行实验。该***使用Higgins Clipeus 5微米C18100×3.0mm柱和1ml/分钟的流速。起始溶剂***在开始的1分钟内为含有0.1％甲酸的95％的水(溶剂A)和含有0.1％甲酸的5％的乙腈(溶剂B)，接着再历时14分钟梯度升至5％溶剂A和95％溶剂B。最终溶剂***保持恒定再持续5分钟。
方法B：在与带有二极管阵列检测器和100位自动进样器的Hewlett PackardHP1100LC***相连的Waters Platform LC四极杆质谱仪上进行实验，使用PhenomenexLuna C18(2)30×4.6mm柱和2ml/分钟的流速。溶剂***在开始的0.50分钟内为含有0.1％甲酸的95％的水(溶剂A)和含有0.1％甲酸的5％的乙腈(溶剂B)，接着再历时4分钟梯度升至5％溶剂A和95％溶剂B。最终溶剂***保持恒定再持续0.50分钟。
制备性高压液相色谱法(HPLC)用于纯化一些化合物。所使用的***为装备有UV-激发的自动馏分收集器和Gemini NX柱(3x 10cm)的Varian LC。流动相梯度为历时10分钟5-85％乙腈/水，含有0.1％甲酸或氢氧化铵。
手性超临界流体色谱法(SFC)用于将一些外消旋化合物分离成它们的组成性对映异构体(component enantiomer)。所使用的***为装备有UV-激发的馏分自动收集器的Berger Pronto SFC。Chiral Technologies AD、OD、OJ或AS(21.2x 250mm)是所用柱的实例。运行时长为5-10分钟，使用包含5-50％MeOH:二氧化碳的等度流动相。
使用Biotage Initiator 60TM进行微波实验，所述装置使用单模共振器和动力场调谐(dynamic field tuning)。可实现40-250℃的温度，并且可达到高至30巴的压力。
实施例1
N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-3-氧代丙酸乙酯
向搅拌的5-氯-2-甲氧基苯甲酸(1.87g,10.0mmol,1当量)于20mL四氢呋喃中的溶液中加入N,N-羰基二咪唑(1.64g,10.1mmol,1.01当量)，继续搅拌20分钟生成酰基-咪唑。单独地，将乙基丙二酸钾(4.08g,24.0mmol,2.39当量)和氯化镁(1.15g,12.1mmol,1.20当量)悬浮在20mL四氢呋喃中。向所述氯化镁混合物中加入酰基-咪唑溶液。继续在50℃搅拌1.5小时。反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配，有机部分用硫酸镁干燥，用硅藻土垫过滤并浓缩得到3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-3-氧代丙酸乙酯，将其不经进一步纯化即使用。LCMS(ESI)m+H＝257.2。
2-(5-氯-2-甲氧基苯甲酰基)-3-(二甲基氨基)丙烯酸乙酯
将搅拌的3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-3-氧代丙酸乙酯(10.02mmol,1当量)和1,1-二甲氧基-N,N-二甲基甲胺(3.0mL,22mmol,2.2当量)的混合物在90℃加热2小时。蒸发过量1,1-二甲氧基-N,N-二甲基甲胺后，粗制产物在硅胶上通过快速色谱法纯化(0-80％乙酸乙酯/二氯甲烷)得到2.493g(80％)2-(5-氯-2-甲氧基苯甲酰基)-3-(二甲基氨基)丙烯酸乙酯。LCMS(ESI)m+H＝312.2。
5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯
将2-(5-氯-2-甲氧基苯甲酰基)-3-(二甲基氨基)丙烯酸乙酯(2.49g,8.00mmol,1当量)和肼(0.40mL,13mmol,1.6当量)于20mL乙醇中的溶液在70℃加热2小时。然后蒸发溶剂和过量肼得到5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯，将其不经进一步纯化即使用。LCMS(ESI)m+H＝281.3。
3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯
向5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(2.24g,8.00mmol,1当量)于20mLN,N-二甲基甲酰胺中的溶液中加入碳酸铯(3.417g,10.49mmol,1.3当量)和碘甲烷(0.60mL,9.6mmol,1.2当量)。将反应混合物在40℃搅拌4小时，然后加入更多的碘甲烷(0.20mL,3.2mmol,0.4当量)。再过2.5小时后，反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。有机部分用硫酸镁干燥并浓缩。粗制产物在硅胶上通过快速色谱法纯化(0至35％乙酸乙酯/二氯甲烷)得到2.18g(92％)区域异构产物3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯和5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯的1:1混合物。LCMS(ESI)m+H＝295.1。
3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基氨基甲酸叔丁酯
将3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯和5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(区域异构体的1:1混合物,2.18g,7.40mmol,1当量)于15mL乙醇中的溶液用1.0M氢氧化钠水溶液(12mL,0.020mmol,4.0当量)处理。将反应混合物在50℃加热14小时。蒸发乙醇后，残余物在水中稀释并用1.0M磷酸水溶液调整至pH 2。将该溶液用二氯甲烷萃取两次。合并的萃取物用MgSO4干燥并浓缩得到1.79g(91％)相应的甲酸，将其立即用于下面的反应。LCMS(ESI)m+H＝267.2。向该物质于15mL二噁烷中的溶液中加入三乙胺(2.0mL,14mmol,4.3当量)和叠氮膦酸二苯酯(1.6mL,7.4mmol,2.2当量)。将反应混合物在室温搅拌1小时，此时将反应混合物加热至90℃，加入15mL叔丁醇。在90℃搅拌2.5小时后，蒸发溶剂，残余物在乙酸乙酯和水之间分配。有机部分用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。粗制产物在硅胶上通过快速色谱法纯化(0-50％乙酸乙酯/二氯甲烷)，分离两种区域异构体得到:543.2mg(48％)3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基氨基甲酸叔丁酯。LCMS(ESI)m+H＝338.3；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.84(s,1H),7.39(d,1H),7.23(s,1H),6.96(d,1H),5.92(s,1H),3.89(重叠的s和s,6H),1.48(s,9H)和773.7mg(68％)5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基氨基甲酸叔丁酯。LCMS(ESI)m+H＝338.3；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.84(s,1H),7.59(s,1H),7.29(d,1H),6.93(d,1H),3.89(重叠的s和s,6H),1.48(s,9H)。
3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-胺
向搅拌的3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基氨基甲酸叔丁酯(543.2mg,1.608mmol,1当量)的溶液中加入氯化氢(5.0mL，4.0M的1,4-二噁烷溶液,0.020mol,12当量)。将反应混合物在室温搅拌9小时，然后蒸干。固体残余物在二氯甲烷和饱和碳酸氢钠水溶液之间分配。含水部分用二氯甲烷萃取一次以上，合并的有机萃取物用硫酸镁干燥并浓缩，得到3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-胺，将其不经纯化即进行下面的反应。
LCMS(ESI)m+H＝238.2；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.53(s,1H),7.28(d,1H),7.02(s,1H),6.91(d,1H),3.91(d,2H),3.87(s,3H),3.84(s,3H)。
N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
将3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-胺(258mg,0.869mmol,1.00当量)、吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸(157mg,0.961mmol,1.11当量)、7-氮杂苯并***-1-基氧基-三-(吡咯烷子基)鏻六氟磷酸盐(541mg,1.04mmol,1.20当量)、N,N-二异丙基乙基胺(0.40mL,2.3mmol,2.6当量)和4-二甲基氨基吡啶(30.7mg,0.251mmol,0.29当量)于8.0mLN,N-二甲基甲酰胺中的混合物在50℃搅拌3小时。反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配，有机部分用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩得到232.3mg(70％)粗制产物。通过反相HPLC纯化所述粗制产物并冻干，得到N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝383.0；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.66(s,1H),9.32(d,1H),8.76(d,1H),8.65(s,1H),8.26(s,1H),7.48(d,1H),7.40(s,1H),7.28(m,2H),3.91(s,3H),3.84(s,3H)。
实施例2
N-(3-(5-氯-2-羟基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(145mg,0.379mmol,1当量)于3.0mL二氯甲烷中的溶液中加入三溴化硼(1.1mL，1.0M的二氯甲烷溶液,1.1mmol,2.9当量)。将反应混合物在室温搅拌16小时。然后用甲醇淬灭反应混合物，在乙酸乙酯中稀释并用饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。所得固体物质用2mLDMSO研磨，收集固体并真空干燥得到47.8mg(34％)N-(3-(5-氯-2-羟基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝369.0；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.45(s,1H),9.99(s,1H),9.33(d,1H),8.76(d,1H),8.65(s,1H),8.27(s,1H),7.45(s,1H),7.30(m,2H),7.08(d,1H),3.92(s,3H)。
实施例3
N-(5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-胺
向5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基氨基甲酸叔丁酯(774mg,2.29mmol,1当量)的溶液中加入氯化氢(6.0mL，4.0M的1,4-二噁烷溶液,24mmol,10当量)。将反应混合物在室温搅拌4小时，然后蒸干。固体残余物在二氯甲烷和饱和碳酸氢钠水溶液之间分配。含水部分用二氯甲烷萃取不止一次，合并的有机萃取物用硫酸镁干燥并浓缩，得到5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-胺，将其不经纯化即进行下面的反应。LCMS(ESI)m+H＝238.3；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.35(d,1H),7.22(重叠的s和s,2H),6.94(d,1H),3.83(s,3H),3.70(d,2H),3.66(s,3H)。
N-(5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
将5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-胺(0.100g,0.421mmol,1当量)、吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸(77.2mg,0.473mmol,1.12当量)、7-氮杂苯并***-1-基氧基-三-(吡咯烷子基)鏻六氟磷酸盐(269mg,0.519mmol,1.23当量)、N,N-二异丙基乙基胺(0.15mL,0.86mmol,2.0当量)和4-二甲基氨基吡啶(20.1mg,0.164mmol,0.39当量)于5.0mLN,N-二甲基甲酰胺中的混合物在50℃搅拌2小时。反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配，有机部分用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。粗制产物通过反相HPLC纯化并冻干，得到82.2mg(51％)N-(5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝383.0；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.51(s,1H),9.31(d,1H),8.67(d,1H),8.63(s,1H),7.98(s,1H),7.58(d,1H),7.54(s,1H),7.31(d,1H),7.28(双二重峰,1H),3.85(s,3H),3.70(s,3H)。
实施例4和 实施例5
2-(2,5-二甲基苯基)-2-氧代乙基亚氨基二碳酸二叔丁酯
在烘干的烧瓶中，将亚氨基二碳酸二叔丁酯(2.566g,11.81mmol,1.10当量)与氢化钠(60％于矿物油中,0.586g,14.6mmol,1.37当量)和30mLN,N-二甲基甲酰胺合并。将反应混合物在室温搅拌1.5小时，然后加入2-溴-1-(2,5-二甲基苯基)乙酮(2.432g,10.71mmol,1当量)。将反应混合物在室温再搅拌1.5小时，然后在乙酸乙酯和水之间分配。有机部分用水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。粗制产物在硅胶上通过快速色谱法纯化(0-40％乙酸乙酯/庚烷)得到3.008g(77％)2-(2,5-二甲基苯基)-2-氧代乙基-亚氨基二碳酸二叔丁酯。LCMS(ESI)m+Na＝386.2。
1-(二甲基氨基)-3-(2,5-二甲基苯基)-3-氧代丙-1-烯-2-基亚氨基二碳酸二叔丁酯
将搅拌的2-(2,5-二甲基苯基)-2-氧代乙基亚氨基二碳酸二叔丁酯(3.008g,8.275mmol,1当量)和1,1-二甲氧基-N,N-二甲基甲胺(6.0mL,45mmol,5.4当量)的混合物在70℃加热17小时，然后在100℃加热24小时。蒸发过量1,1-二甲氧基-N,N-二甲基甲胺后，粗制产物在硅胶上通过快速色谱法纯化(0-50％乙酸乙酯/庚烷)得到1.305g(38％)1-(二甲基氨基)-3-(2,5-二甲基苯基)-3-氧代丙-1-烯-2-基亚氨基二碳酸二叔丁酯。LCMS(ESI)m+H＝419.3。
3-(2,5-二甲基苯基)-1H-吡唑-4-胺
将1-(二甲基氨基)-3-(2,5-二甲基苯基)-3-氧代丙-1-烯-2-基亚氨基二碳酸二叔丁酯(1.305g,3.118mmol,1当量)和肼(0.20mL,6.4mmol,2.0当量)一起溶解在15mL乙醇中。将反应混合物在70℃搅拌1小时，然后真空蒸干。将固体残余物溶解在8mL二氯甲烷和氯化氢(8.0mL，4.0M的1,4-二噁烷溶液,0.10mol,40当量)中，在室温搅拌3.5小时。蒸发过量溶剂和过量氯化氢，粗制产物在饱和碳酸氢钠水溶液和二氯甲烷之间分配。水层用二氯甲烷萃取不止一次，合并的有机萃取物用硫酸镁干燥并浓缩，得到3-(2,5-二甲基苯基)-1H-吡唑-4-胺，将其不经纯化即进行下面的反应。LCMS(ESI)m+H＝188.3。
N-(3-(2,5-二甲基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
将3-(2,5-二甲基苯基)-1H-吡唑-4-胺(0.300g,1.60mmol,1当量)、吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸(289.2mg,1.773mmol,1.11当量)、7-氮杂苯并***-1-基氧基-三-(吡咯烷子基)鏻六氟磷酸盐(1.087g,2.096mmol,1.31当量)、N,N-二异丙基乙基胺(1.0mL,5.7mmol,3.6当量)和4-二甲基氨基吡啶(42.3mg,0.346mmol,0.22当量)于8.0mLN,N-二甲基甲酰胺中的混合物在50℃搅拌3小时。反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配，有机部分用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。粗制产物在硅胶上通过快速色谱法纯化(40-100％乙酸乙酯/二氯甲烷)得到299.8mg(56％)N-(3-(2,5-二甲基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝333.3；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.67(s,0.7H),9.55(s,0.3H),9.32(d,1H),8.64(s,1H),8.49(d,1H),8.27(s,1H),7.29(d,1H),7.22(m,3H),2.34(s,3H),2.24(s,3H)。
N-(3-(2,5-二甲基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
N-(5-(2,5-二甲基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向N-(3-(2,5-二甲基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(0.255g,0.767mmol,1当量)于10mLN,N-二甲基甲酰胺中的溶液中加入碘甲烷(60.0μL,0.964mmol,1.26当量)和碳酸铯(0.562g,1.72mmol,2.25当量)。将反应混合物在40℃搅拌2.5小时。反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配，有机部分用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。分离区域异构产物的混合物，在硅胶上通过快速色谱法纯化(20-90％乙酸乙酯/二氯甲烷)得到:84.3mg(32％)N-(3-(2,5-二甲基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝347.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.65(s,1H),9.30(d,1H),8.65(s,1H),8.47(d,1H),8.27(s,1H),7.27(d,1H),7.23-7.19(m,3H),3.91(s,3H),2.33(s,3H),2.25(s,3H)和81.8mg(31％)N-(5-(2,5-二甲基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝347.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.42(s,1H),9.30(d,1H),8.61(s,1H),8.43(d,1H),8.01(s,1H),7.36(d,1H),7.30(d,1H)7.20(m,2H),3.62(s,3H),2.35(s,3H),2.12(s,3H)。
实施例6
N-(1-(5-氯-2-甲基苯基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
(5-氯-2-甲基苯基)肼盐酸盐
在0℃，向搅拌的5-氯-2-甲基苯胺(1.436g,10.14mmol,1.当量)于10mL水中的悬浮液中加入10mL浓盐酸。向该反应混合物中滴加亚硝酸钠(0.791g,11.5mmol,1.13当量)于5mL水中的溶液。将反应混合物在0℃搅拌2小时，同时缓慢加入溶解在8mL浓盐酸中的氯化锡二水合物(5.8826g,25.839mmol,2.55当量)。根据需要加入水以在固体形成的同时维持搅拌。将反应混合物在0℃保持45分钟。过滤白色固体并用50mL份量的两份***冲洗，然后真空干燥得到1.49g(76％)(5-氯-2-甲基苯基)肼盐酸盐。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.08(s,3H),7.98(s,1H),7.13(d,1H),6.97(s,1H),6.91(d,1H),2.14(s,3H)。
1-(5-氯-2-甲基苯基)-3-甲基-1H-吡唑-5-胺
向(5-氯-2-甲基苯基)肼盐酸盐(1.49g,7.72mmol,1当量)于8mL乙醇中的溶液中加入盐酸(4.0mL，5M水溶液，20mmol,2当量)和3-氨基巴豆腈(0.664g,8.09mmol,1.05当量)。将反应混合物在80℃搅拌16小时，然后用饱和碳酸氢钠水溶液使其为中性pH。将所得溶液用二氯甲烷萃取两次，合并的萃取物用硫酸镁干燥并浓缩得到1-(5-氯-2-甲基苯基)-3-甲基-1H-吡唑-5-胺，将其不经进一步纯化即进行下面的反应。LCMS(ESI)m+H＝222.2；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ:7.39(d,1H),7.37(d,1H),7.25(s,1H),5.22(s,1H),5.00(s,2H),2.04(重叠的s和s,6H)。
N-(1-(5-氯-2-甲基苯基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
将1-(5-氯-2-甲基苯基)-3-甲基-1H-吡唑-5-胺(95.3mg,0.430mmol,1当量)、吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸(79.5mg,0.487mmol,1.13当量)、7-氮杂苯并***-1-基氧基-三-(吡咯烷子基)鏻六氟磷酸盐(0.290g,0.558mmol,1.30当量)、N,N-二异丙基乙基胺(0.2mL,1.1mmol,2.7当量)和4-二甲基氨基吡啶(11.0mg,0.09mmol,0.21当量)于4.0mLN,N-二甲基甲酰胺中的混合物在75℃搅拌3天。反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配，有机部分用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，用硅胶填料(plug)过滤并浓缩。粗制产物通过反相HPLC纯化并冻干得到50.0mg(30％)N-(1-(5-氯-2-甲基苯基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝367.0；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.03(s,1H),9.32(d,1H),8.68(s,1H),8.36(d,1H),7.60(d,1H),7.58(s,1H),7.55(d,1H),7.27(双二重峰,1H),6.53(s,1H),2.24(s,3H),2.05(s,3H)。
实施例7
N-(5-(2，5-二氯苯基)-2-甲基吡啶-4-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺
5-溴-2-甲基吡啶1-氧化物
将5-溴-2-甲基吡啶(2.0g,12mmol,1.0当量)和间氯过氧苯甲酸(70％,2.89g,12.9mmol,1.1当量)于30mL氯仿中的溶液在室温搅拌4小时。然后将反应混合物在二氯甲烷和2M碳酸钠水溶液之间分配。水层用二氯甲烷萃取不止一次，合并的有机部分用硫酸镁干燥并浓缩得到5-溴-2-甲基吡啶1-氧化物。LCMS(ESI)m+H＝189.0；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.57(s,1H),7.50(d,1H),7.45(d,1H),2.30(s,3H)。
5-溴-2-甲基-4-硝基吡啶1-氧化物
将5-溴-2-甲基吡啶1-氧化物(2.269g,12.07mmol,1当量)溶解在硫酸(4mL,80mmol,6当量)中，在0℃冷却。滴加发烟硝酸(3mL,60mmol,5当量)。硝酸加入结束后，将反应混合物先温热至室温，然后加热至90℃。2小时后，将反应混合物在冰浴中冷却，用2M碳酸钠水溶液缓慢调整至pH 10。将该溶液用二氯甲烷萃取两次。合并的有机萃取物用硫酸镁干燥并浓缩，得到2.54g(90％)5-溴-2-甲基-4-硝基吡啶1-氧化物。LMCS(ESI)m+H＝233.0。
5-溴-2-甲基吡啶-4-胺
向5-溴-2-甲基-4-硝基吡啶1-氧化物(2.54g,10.9mmol,1当量)于10mL浓盐酸中的溶液中加入氯化锡二水合物(9.96g,43.8mmol,4.01当量)。将反应混合物在90℃搅拌24小时，然后加入更多的氯化锡二水合物(3.15g,13.8mmol,1.27当量)和5mL浓盐酸。将反应混合物在90℃再保持24小时，然后冷却至室温并用2M碳酸钠水溶液调整至中性pH。将溶液用二氯甲烷萃取三次，合并的有机萃取物用硫酸镁干燥并浓缩得到5-溴-2-甲基吡啶-4-胺。LCMS(ESI)m+H＝187.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.07(s,1H),6.51(s,1H),6.13(s,2H),2.22(s,3H)。
N-(5-溴-2-甲基吡啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸(165.0mg,1.011mmol,1.2当量)于6mL二氯甲烷中的悬浮液中加入草酰氯(0.90mL，2.0M二氯甲烷溶液,1.8mmol,2.1当量)和三滴N,N-二甲基甲酰胺。在室温搅拌1小时后，浓缩反应混合物并真空干燥，得到酰氯。将固体残余物重新溶解在6mL二氯甲烷中，向该溶液中加入5-溴-2-甲基吡啶-4-胺(157.6mg,0.8426mmol,1.0当量)和三乙胺(0.50mL,3.6mmol,4.2当量)。将反应混合物在室温搅拌1小时，然后浓缩在硅胶上。粗制产物在硅胶上通过快速色谱法纯化(0-100％乙酸乙酯/二氯甲烷)得到197.5mg(71％)N-(5-溴-2-甲基吡啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝332.2。
N-(5-(2,5-二氯苯基)-2-甲基吡啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
将N-(5-溴-2-甲基吡啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(82.2mg,0.247mmol,1当量)、2,5-二氯苯基硼酸(122.1mg,0.6399mmol,2.59当量)和氯化二(三苯基膦)钯(II)(15.4mg,0.0219mmol,0.09当量)合并在微波小瓶中。向这些固体中加入碳酸钠(1.0mL，1.0M水溶液,1.0mmol,4.0当量)和3.0mL乙腈。将所述小瓶密封并使其经受微波辐射(120℃,30W)，保持30分钟。反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配，用硫酸镁干燥有机层并浓缩。粗制产物通过反相HPLC纯化并冻干得到45.3mg(46％)N-(5-(2,5-二氯苯基)-2-甲基吡啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝398.0；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.75(s,1H),9.32(d,1H),8.71(s,1H),8.48(s,1H),8.26(s,1H),8.21(d,1H),7.78(d,1H),7.75(d,1H),7.69(s,1H),7.26(双二重峰,1H),2.55(s,3H)。
实施例8
N-(3-(3-氯苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺
2-(2-(3-氯苯基)-2-氧代乙基)异二氢吲哚-1,3-二酮
将2-溴-3’-氯苯乙酮(0.927g,3.97mmol,1当量)和邻苯二甲酰亚胺钾(0.813g,4.39mmol,1.1当量)于15mLN,N-二甲基甲酰胺中的混合物在50℃搅拌1小时。真空除去溶剂。将所得固体用乙酸乙酯研磨并过滤。真空干燥收集的固体得到2-(2-(3-氯苯基)-2-氧代乙基)异二氢吲哚-1,3-二酮，将其不经纯化即进行下面的反应。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.13(s,1H),8.05(d,1H),7.96(m,2H),7.93(m,2H),7.83(d,1H),7.65(t,1H),5.29(s,2H)。
2-(3-(3-氯苯基)-1-(二甲基氨基)-3-氧代丙-1-烯-2-基)异二氢吲哚-1,3-二酮
将搅拌的2-(2-(3-氯苯基)-2-氧代乙基)异二氢吲哚-1,3-二酮(782.2mg,2.610mmol,1当量)和1,1-二甲氧基-N,N-二甲基甲胺(1.5mL,11mmol,4.3当量)的混合物在100℃加热18小时。真空除去过量1,1-二甲氧基-N,N-二甲基甲胺。粗制产物在硅胶上通过快速色谱法纯化(50-100％乙酸乙酯/庚烷)得到740mg(80％)2-(3-(3-氯苯基)-1-(二甲基氨基)-3-氧代丙-1-烯-2-基)异二氢吲哚-1,3-二酮。LCMS(ESI)m+H＝355.2；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.90(双二重峰,2H),7.77(双二重峰,2H),7.57(s,1H),7.44(d,1H),7.37(重叠的d和s,2H),7.31(t,1H),3.00(s,6H)。
3-(3-氯苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-胺
向2-(3-(3-氯苯基)-1-(二甲基氨基)-3-氧代丙-1-烯-2-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(2.30g,6.48mmol,1当量)于50mL乙醇中的溶液中加入N-甲基肼(1.4mL,26mmol,4.0当量)。将反应混合物在80℃搅拌2小时，然后浓缩在硅胶上。对区域异构体的粗制混合物进行分离，在硅胶上通过快速色谱法纯化(0-80％乙酸乙酯/二氯甲烷)得到:715mg(53％)of 3-(3-氯苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-胺。LCMS(ESI)m+H＝208.2；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.78(s,1H),7.63(d,1H),7.33(t,1H),7.25(与CDCl3重叠,1H),7.04(s,1H),3.84(s,3H)和274.6mg(20％)5-(3-氯苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-胺。LCMS(ESI)m+H＝208.2；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.43(t,1H),7.38(重叠的d和s,2H),7.27(d,1H),7.23(s,1H),3.76(s,3H)。
N-(3-(3-氯苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
将3-(2,5-二甲基苯基)-1H-吡唑-4-胺(400.0mg,1.926mmol,1当量)、吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸(342.9mg,2.102mmol,1.09当量)、7-氮杂苯并***-1-基氧基-三-(吡咯烷子基)鏻六氟磷酸盐(1.205g,2.324mmol,1.21当量)、N,N-二异丙基乙基胺(0.80mL,4.6mmol,2.4当量)和4-二甲基氨基吡啶(43.4mg,0.355mmol,0.18当量)于15.0mLN,N-二甲基甲酰胺中的混合物在50℃搅拌15小时。反应混合物在二氯甲烷和水之间分配，水层用二氯甲烷萃取不止一次。合并的有机部分用硫酸镁干燥并浓缩在硅胶上。在硅胶上通过快速色谱法分离粗制产物(0-70％乙酸乙酯(含有2％甲醇)/二氯甲烷)。所得固体物质用乙酸乙酯研磨。声处理后，过滤收集固体并真空干燥得到0.502g(74％)N-(3-(3-氯苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝353.0；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:10.00(s,1H),9.38(d,1H),8.85(d,1H),8.70(s,1H),8.33(s,1H),7.84(s,1H),7.76(d,1H),7.57(t,1H),7.49(d,1H),7.34(双二重峰,1H),3.93(s,3H)。
实施例9
N-(3-(3-氯苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
3-(3-氯苯基)-1H-吡唑-4-胺
将2-(3-(3-氯苯基)-1-(二甲基氨基)-3-氧代丙-1-烯-2-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(255mg,0.719mmol,1当量)和肼(0.15mL,4.8mmol,6.6当量)于10mL乙醇中的混合物回流搅拌2小时。真空除去乙醇和过量肼。粗制产物在硅胶上通过快速色谱法纯化(50-100％乙酸乙酯/庚烷)得到111.4mg(80％)3-(3-氯苯基)-1H-吡唑-4-胺。LCMS(ESI)m+H＝194.0；1HNMR(400MHz,CD3OD)δ:7.75(宽峰，1H)，7.65(宽峰，1H)，7.41(t，1H)，7.32和7.30(重叠的s和s，2H)。
N-(3-(3-氯苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
将3-(3-氯苯基)-1H-吡唑-4-胺(95.3mg,0.492mmol,1当量)、吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸(90.6mg,0.555mmol,1.13当量)、N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮杂苯并***-1-基)脲鎓六氟磷酸盐(247.3mg,0.6504mmol,1.32当量)、N,N-二异丙基乙基胺(0.20mL,1.1mmol,2.3当量)和4-二甲基氨基吡啶(24.1mg,0.197mmol,0.40当量)于5.0mLN,N-二甲基甲酰胺中的混合物在50℃搅拌3小时。反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配，有机部分用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。粗制产物通过反相HPLC纯化并冻干得到33.8mg(20％)N-(3-(3-氯苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝339.0；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.05(s,1H),9.99(s,1H),9.38(d,1H),8.84(d,1H),8.70(s,1H),8.31(s,1H),7.86(s,1H),7.78(d,1H),7.58(t,1H),7.50(d,1H),7.34(双二重峰,1H)。
实施例10
N-(3-(3-氯苯基)-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
将N-(3-(3-氯苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(68.9mg,0.203mmol,1当量)溶解在4mLN,N-二甲基甲酰胺中。向该溶液中加入碳酸铯(148mg,0.454mmol,2.23当量)和异丙基碘(23.0μL,0.230mmol,1.13当量)。将反应混合物在50℃搅拌2小时。反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配，有机部分用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。粗制产物通过反相HPLC纯化并冻干得到47.2mg(61％)N-(3-(3-氯苯基)-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝381.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.99(s,1H),9.37(d,1H),8.85(d,1H),8.70(s,1H),8.36(s,1H),7.85(s,1H),7.77(d,1H),7.57(t,1H),7.48(d,1H),7.34(双二重峰,1H),4.59(双四重峰,1H),1.48(d,6H)。
实施例11
N-(3-(3-氯苯基)-1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
将N-(3-(3-氯苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(58.9mg,0.174mmol,1当量)溶解在5mLN,N-二甲基甲酰胺中。向该溶液中加入甲基环氧丙烷(0.5mL,6mmol,30当量)和碳酸铯(56.4mg,0.173mmol,1.0当量)。将反应混合物在50℃搅拌7.5小时。反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配，有机部分用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。粗制产物通过反相HPLC纯化并冻干得到33.1mg(46％)N-(3-(3-氯苯基)-1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝411.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.02(s,1H),9.36(d,1H),8.83(d,1H),8.69(s,1H),8.35(s,1H),7.84(s,1H),7.76(d,1H),7.58(t,1H),7.49(d,1H),7.33(双二重峰,1H),4.73(s,1H),4.09(s,2H),1.13(s,6H)。
实施例12
N-(1-甲基-4-(2-(三氟甲基)苯基)-1H-吡唑-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
N-(4-溴-1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
将吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸(165.5mg,1.014mmol,1.01当量)、4-溴-1-甲基-1H-吡唑-3-胺(177.4mg,1.008mmol,1.0当量)、N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮杂苯并***-1-基)脲鎓六氟磷酸盐(497mg,1.31mmol,1.30当量)、N,N-二异丙基乙基胺(0.25mL,1.4mmol,1.4当量)和4-二甲基氨基吡啶(33.8mg,0.277mmol,0.27当量)于5mLN,N-二甲基甲酰胺中的溶液在50℃加热4天。反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配，有机部分用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。粗制产物在硅胶上通过快速色谱法纯化(20-80％乙酸乙酯/二氯甲烷(含有5％甲醇))得到203.6mg(63％)N-(4-溴-1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝321.1；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ:9.16(d,1H),8.84(d,1H),8.68(s,1H),7.76(s,1H),7.28(双二重峰,1H),3.88(s,3H)。
N-(1-甲基-4-(2-(三氟甲基)苯基)-1H-吡唑-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向装备搅拌棒的微波小瓶中加入:N-(4-溴-1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(101mg,0.313mmol,1当量)、2-三氟甲基苯基硼酸(126.6mg,0.6666mmol,2.13当量)、氯化二(三苯基膦)钯(II)(26.8mg,0.0382mmol,0.12当量)、碳酸钠(1.0mL，2.0M水溶液,2mmol,6当量)和3mL乙腈。使反应混合物在130℃经受微波辐射30分钟。反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配，有机部分用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。粗制产物通过反相HPLC纯化并冻干得到4.7mg(4％)N-(1-甲基-4-(2-(三氟甲基)苯基)-1H-吡唑-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝387.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.58(s,1H),9.32(d,1H),8.74(d,1H),8.57(s,1H),7.78(s,1H),7.74(d,1H),7.60(t,1H),7.49(m,2H),7.28(双二重峰,1H),3.87(s,3H)。
实施例13
N-(1-(2,5-二氟苯基)-1H-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
3-(2-(2,5-二氟苯基)肼基)丙腈
将丙烯基腈(10mL)、乙醇(20mL)和2,5-二氟苯基肼(790mg)的溶液回流加热2天。真空浓缩反应混合物，在硅胶上通过快速色谱法用二氯甲烷纯化产物得到790mg(73％)3-(2-(2,5-二氟苯基)肼基)丙腈。LCMS(ESI)m+H＝198.2；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.99(ddd,1H),6.89(ddd,1H),6.38(tt,1H),5.45(s,1H),3.91(s,1H),3.19(td,2H),2.61(t,2H)。
(E)-3-((2,5-二氟苯基)二氮烯基)丙腈
向3-(2-(2,5-二氟苯基)肼基)丙腈(790mg)于15mL2N硫酸中的溶液中加入2.0g硫酸铁(III)水合物。将反应混合物在环境温度搅拌30分钟，这期间硫酸铁缓慢溶解并析出黄色油状物。用***萃取反应混合物，萃取物用水、盐水洗涤，用硫酸钠干燥，用硅胶填料过滤并浓缩得到710mg(91％)(E)-3-((2,5-二氟苯基)二氮烯基)丙腈。LCMS(ESI)m+H＝196.2.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.34-7.08(m，3H)，4.54-4.31(m，2H)，2.99(t，2H)。
1-(2,5-二氟苯基)-1H-吡唑-5-胺
将(E)-3-((2,5-二氟苯基)二氮烯基)丙腈(710mg)和20mL1N NaOH的混合物在搅拌下回流加热30分钟。将反应混合物冷却至环境温度并用***萃取。***相用水、盐水洗涤，用硫酸钠干燥，用硅胶填料过滤。真空浓缩得到630mg(88％)1-(2,5-二氟苯基)-1H-吡唑-5-胺。LCMS(ESI)m+H＝196.0；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.54-7.43(m,1H),7.35-7.00(m,3H),5.63(d,1H),3.96–3.71(m,2H)。
N-(1-(2,5-二氟苯基)-1H-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
将吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸(0.020g,0.12mmol)、3mL磷酰氯和32μL N,N-二异丙基乙基胺加热至120℃，保持2小时，蒸干。将残余物吸收在二氯甲烷中并加至1-(2,5-二氟苯基)-1H-吡唑-5-胺(18mg),N,N-二异丙基乙基胺(32μL)和二氯甲烷(1mL)的混合物中，搅拌过夜。浓缩反应混合物，在硅胶上通过快速色谱法纯化产物(95/5二氯甲烷/7M NH3于MeOH中)得到8.0mg(20％)N-(1-(2,5-二氟苯基)-1H-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝341.2；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ10.14(s,1H),8.80(dd,1H),8.72(d,1H),8.38(dd,1H),7.72(t,1H),7.38(ddd,1H),7.33-7.27(m,1H),7.22(ddd,1H),7.03-6.99(m,1H),6.88(d,1H)。
实施例14和 实施例15
4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑
在烘干的装备有搅拌棒的烧瓶中，将4-硝基-1H-吡唑(6.598g,58.35mmol)溶解在50mLTHF中。加入氢化钠(4.83g，60％分散在矿物油中,121mmol)，同时在冰浴中冷却，然后将反应混合物在室温搅拌10分钟。然后加入[β-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基氯化物(12.0mL,67.8mmol)，将反应混合物在室温搅拌1.5小时。用50mL水淬灭反应并用乙酸乙酯萃取。有机萃取物用硫酸镁干燥并浓缩。所得粗制物在硅胶上通过快速色谱法纯化(0-30％乙酸乙酯/庚烷)得到14.1g(99％)4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑。LCMS(ESI)m+H＝244.2；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.28(s,1H),8.08(s,1H),5.43(s,2H),3.61(t,2H),0.92(t,2H)。
3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑
向4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑(4.26g,17.5mmol)于40mL N,N-二甲基乙酰胺中的溶液中加入2-溴-4-氯茴香醚(3.35mL,24.6mmol)、醋酸钯(II)(197.2mg,0.878mmol)、二(1-金刚烷基)-正丁基膦(469.5mg,1.309mmol)、碳酸钾(7.27g,52.6mmol)和三甲基乙酸(0.452g,4.43mmol)。在室温搅拌的同时，使氮气鼓泡通过反应混合物，保持10分钟，然后将反应混合物在120℃加热6小时。然后将反应混合物冷却至室温，在乙酸乙酯中稀释并用水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。粗制物在硅胶上通过快速色谱法纯化(0-25％乙酸乙酯-庚烷)得到6.719g(89％)3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑。LCMS(ESI)m+H＝384.2；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.22(s,1H),7.46(双二重峰,1H),7.36(d,1H),6.95(d,1H),5.23(m,2H),3.56(m,2H),0.87(m,2H)。
3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-胺
向3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑(5.97g,15.6mmol)于25mL乙醇中的溶液中加入50mL水、氯化铵(3.37g,62.9mmol)和铁粉(4.367g,78.2mmol)。将反应混合物在75℃搅拌1.5小时。冷却至室温后，反应混合物用二氯甲烷稀释，用硅藻土垫过滤，用更多的二氯甲烷冲洗。将滤液加至150mL饱和碳酸氢钠水溶液中，用二氯甲烷萃取两次。合并的有机萃取物用硫酸镁干燥并浓缩，得到5.50g(100％)3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-胺，将其不经纯化即进行下面的反应。LCMS(ESI)m+H＝354.3；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.44(d,1H),7.34(双二重峰,1H),7.28(s,1H),6.92(d,1H),5.24(s,2H),3.52(t,2H),0.85(t,2H),-0.04(s,9H)。
N-(5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
将3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-胺(179.6mg,0.5075mmol)、吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸(91mg,0.560mmol)、7-氮杂苯并***-1-基氧基-三-(吡咯烷子基)鏻六氟磷酸盐(326mg,0.630mmol)、N,N-二异丙基乙基胺(0.25mL,1.4mmol)和4-二甲基氨基吡啶(11.5mg,0.094mmol)于5.0mLN,N-二甲基甲酰胺中的混合物在40℃搅拌1.5小时。反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配，有机部分用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，用硅胶垫过滤并浓缩得到0.212g(84％)N-(5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，将其不经纯化即进行下面的反应。LCMS(ESI)m+H＝499.2；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:9.56(s,1H),8.76(d,J＝7.0,1H),8.72(s,1H),8.50(d,J＝4.1,1H),8.39(s,1H),7.54(d,J＝2.6,1H),7.44(dd,J＝8.8,2.6,1H),7.04-6.92(m,2H),5.35(d,2H),3.82(s,3H),3.57(m,2H),0.86(m,2H),-0.04(s,9H)。
N-(5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向N-(5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(2.75g,5.51mmol)于105mL乙醇中的溶液中加入HCl(8.0mL，5M水溶液,40mmol)。然后将反应混合物在70℃搅拌2小时。冷却至室温后，过滤产物，其为浅黄色固体，用甲醇和***冲洗。减小滤液体积，过滤出更多固体。将所收集的固体合并并真空干燥得到1.81g(89％)N-(5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝369.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.66(s,1H),9.33(dd,J＝7.0,1.6,1H),8.78(dd,J＝4.2,1.6,1H),8.65(s,1H),8.20(s,1H),7.50(dd,J＝8.8,2.7,1H),7.44(d,J＝2.7,1H),7.29(dd,J＝7.8,4.8,2H),3.86(s,3H)。
N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-(2-吗啉代乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
N-(5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-(2-吗啉代乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向N-(5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(39.1mg,0.106mmol)于3mLDMF中的溶液中加入碳酸铯(109.7mg,0.3367mmol)和4-(2-氯乙基)吗啉HCl。将反应混合物在50℃搅拌5小时。反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配，有机部分用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。分离区域异构体产物的混合物并通过反相HPLC纯化，冻干得到19.4mg(38％)N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-(2-吗啉代乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺；LCMS(ESI)m+H＝482.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.50(s,1H),9.31(dd,1H),8.66(d,1H),8.63(s,1H),8.03(s,1H),7.58(dd,1H),7.54(d,1H),7.32(d,1H),7.27(dd,1H),4.05(m,2H),3.85(s,3H),3.44(m,2H),2.71(m,2H),2.60(m,2H),2.23(m,4H)；和9.3mg(18％)N-(5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-(2-吗啉代乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺；LCMS(ESI)m+H＝482.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.67(s,1H),9.31(dd,1H),8.76(d,1H),8.65(s,1H),8.34(s,1H),7.48(dd,1H),7.39(d,1H),7.30(d,1H),7.38(t,1H),4.29(t,2H),3.84(s,3H),3.58(t,2H),2.77(t,2H),2.46(m,4H)。
实施例16
N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向N-(5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(102.7mg,0.279mmol)于3mLDMF中的溶液中加入甲基环氧丙烷(0.20mL,2.2mmol)和碳酸铯(180.0mg,0.5524mmol)。将反应混合物在40℃搅拌15小时。反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配，有机部分用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。粗制产物通过反相HPLC纯化并冻干得到49.3mg(40％)N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝441.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.68(s,1H),9.32(dd,1H),8.76(d,1H),8.64(s,1H),8.30(s,1H),7.48(dd,1H),7.39(d,1H),7.31(s,1H),7.28(t,1H),4.72(s,1H),4.07(s,2H),3.84(s,3H),1.12(s,6H)。
实施例17
N-(3-(5-氯-2-乙氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
N-(3-(5-氯-2-羟基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(按照针对实施例14描述的操作合成)(193.9mg,0.5065mmol)于8.0mL二氯甲烷中的溶液中加入三溴化硼(1.50mL，1.0M二氯甲烷溶液,1.5mmol)。将反应混合物在室温搅拌1小时。然后用1mL甲醇淬灭反应，用乙酸乙酯稀释并用饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩得到191.5mg(100％)N-(3-(5-氯-2-羟基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺,将其不经纯化即进行下面的反应。LCMS(ESI)m+H＝369.1.
N-(3-(5-氯-2-乙氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向N-(3-(5-氯-2-羟基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(61.1mg,0.166mmol)于3.0mL丙酮的溶液中加入碘乙烷(26.0μL,0.325mmol)和碳酸钾(70.6mg,0.511mmol)。将反应混合物在45℃搅拌3小时。反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配，有机部分用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。粗制产物通过反相HPLC纯化并冻干得到34.8mg(54％)N-(3-(5-氯-2-乙氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝397.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.68(s,1H),9.33(dd,J＝7.0,1.6,1H),8.73(dd,J＝4.2,1.6,1H),8.66(s,1H),8.28(s,1H),7.46(dd,J＝8.8,2.7,1H),7.38(d,J＝2.7,1H),7.32-7.23(m,2H),4.12(q,J＝6.9,2H),3.91(s,3H),1.04(t,J＝6.9,3H)。
实施例18
N-(3-(5-氯-2-(二氟甲氧基)苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
2-溴-4-氯-1-(二氟甲氧基)苯
向2-溴-4-氯苯酚(4.98g,24.0mmol)于25mLDMF中的溶液中加入氯二氟乙酸钠(8.42g,55.2mmol)、碳酸铯(10.97g,33.67mmol)和2.5mL水。将反应混合物在100℃搅拌16小时。反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配，有机部分用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。粗制产物在硅胶上通过快速色谱法纯化(0-20％乙酸乙酯/庚烷)得到2.98g(48％)2-溴-4-氯-1-(二氟甲氧基)苯，其为透明无色油状物。LCMS(ESI)无m/z信号；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:7.90(d,1H),7.54(dd,1H),7.38(d,1H),7.28(t,1H).
N-(3-(5-氯-2-(二氟甲氧基)苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
按照针对实施例14描述的合成操作使用2-溴-4-氯-1-(二氟甲氧基)苯合成标题化合物。LCMS(ESI)m+H＝419.0；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.71(s,1H),9.34(dd,J＝7.0,1.6,1H),8.67(dd,J＝4.7,2.0,1H),8.66(s,1H),8.30(s,1H),7.62(dd,J＝8.8,2.7,1H),7.59(d,J＝2.6,1H),7.45(d,J＝8.7,1H),7.29(dd,J＝7.0,4.2,1H),7.23(t,1H),3.93(s,3H)。
实施例19
N-(3-(5-氯-2-(甲基硫基)苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
(4-氯-2-碘苯基)(甲基)硫烷
向0℃的浓硫酸(0.3mL,5.0mmol)于5.0mL水和5.0mL乙腈中的溶液中加入5-氯-2-(甲基硫基)苯胺(472mg,2.72mmol)，然后缓慢加入亚硝酸钠(210mg,3.0mmol)(其为于1mL水中的溶液)。将反应混合物在0℃搅拌30分钟。然后将该混合物缓慢加至0℃的碘化钾(691.7mg,4.167mmol)于5mL水中的溶液中。将反应混合物搅拌1小时，使冰浴温热至室温。然后将反应混合物在水和乙酸乙酯之间分配。有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。粗制产物在硅胶上通过快速色谱法纯化(0-30％乙酸乙酯/二氯甲烷)得到598.4mg(77％)(4-氯-2-碘苯基)(甲基)硫烷。LCMS(ESI)无m/z信号；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ:787(d，1H)，747(dd，1H)，720(d，1H)，247(s，3H)。
N-(3-(5-氯-2-(甲基硫基)苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
按照针对实施例14描述的合成操作使用(4-氯-2-碘苯基)(甲基)硫烷制备标题化合物。LCMS(ESI)m+H＝399.0；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.69(s,1H),9.32(dd,J＝7.0,1.6,1H),8.65(s,1H),8.57(dd,J＝4.2,1.6,1H),8.27(s,1H),7.55(dd,J＝8.6,2.4,1H),7.45(d,J＝8.6,1H),7.40(d,J＝2.4,1H),7.25(dd,J＝7.0,4.2,1H),3.91(s,3H),2.38(s,3H)。
实施例20
N-(3-(5-氯-2-乙氧基苯基)-1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
2-溴-4-氯-1-乙氧基苯
向2-溴-4-氯苯酚(2.12g,10.2mmol)于25mL丙酮中的溶液中加入碘乙烷(0.850mL,10.6mmol)和碳酸铯(4.08g,12.5mmol)。将反应混合物在50℃搅拌2小时。反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配，有机部分用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩得到2.37g(98％)2-溴-4-氯-1-乙氧基苯，其为黄色油状物，将该油状物不经进一步纯化即进行下面的反应。LCMS(ESI)无m/z信号；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:7.67(d,J＝2.6,1H),7.39(dd,J＝8.8,2.6,1H),7.12(d,J＝8.9,1H),4.11(q,J＝7.0,2H),1.35(t,J＝7.0,3H)。
N-(3-(5-氯-2-乙氧基苯基)-1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
使用针对实施例14和16描述的合成操作用2-溴-4-氯-1-乙氧基苯制备标题化合物。LCMS(ESI)m+H＝455.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.71(s,1H),9.33(dd,J＝7.0,1.6,1H),8.73(dd,J＝4.2,1.6,1H),8.66(s,1H),8.33(s,1H),7.47(dd,J＝8.8,2.7,1H),7.38(d,J＝2.7,1H),7.28(m,2H),4.73(s,1H),4.12(q,J＝6.9,2H),4.07(s,2H),1.13(s,6H),1.03(t,J＝6.9,3H)。
实施例21
N-(1-(2-氨基乙基)-3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-(2-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(按照针对实施例14描述的合成操作制备)(104.1mg,0.192mmol)于8mL乙醇中的溶液中加入肼(78μL,2.5mmol)。将反应混合物在室温搅拌18小时，然后浓缩。粗制产物通过反相HPLC纯化并冻干得到17.7mg(15.4％)N-(1-(2-氨基乙基)-3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝412.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.68(s,1H),9.33(dd,J＝7.0,1.6,1H),8.77(dd,J＝4.2,1.6,1H),8.65(s,1H),8.30(s,1H),7.49(dd,J＝8.8,2.7,1H),7.42(d,J＝2.7,1H),7.29(m,2H),4.14(t,J＝6.2,2H),3.85(s,3H),2.99(t,J＝6.2,2H)。
实施例22和 实施例23
使外消旋N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-(2-羟基-3-甲基丁基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(根据针对实施例16所描述的制备)经受手性SFC色谱法得到标题化合物。LCMS(ESI)m+H＝455.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.67(s,1H),9.33(dd,J＝7.0,1.6,1H),8.77(dd,J＝4.2,1.6,1H),8.65(s,1H),8.30(s,1H),7.49(dd,J＝8.8,2.8,1H),7.40(d,J＝2.7,1H),7.34-7.24(m,2H),4.86(d,J＝5.8,1H),4.19(dd,J＝13.8,3.7,1H),4.04(dd,J＝13.8,8.1,1H),3.84(s,3H),3.64(m,1H),1.63(m,1H),0.93(t,J＝7.2,6H)。
实施例24
N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-((1-羟基环戊基)甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
1-(碘甲基)环戊醇
在100mL烧瓶中放置钐粉(40mesh,3.07g,2.02mmol)，将该烧瓶在冰浴中在氮气中冷却。向加料漏斗中装入环戊酮(0.90mL,10.1mmol)和二碘甲烷(2.40mL,29.8mmol)于50mL四氢呋喃中的溶液，历时1小时将该溶液滴加到搅拌的钐粉中。加入结束后，将反应混合物在0℃再搅拌1小时。将反应混合物用40mL1N HCl水溶液处理并用100mL***萃取。***层用4％Na2S2O3水溶液和盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。粗制产物在硅胶上通过快速色谱法纯化(0-30％乙酸乙酯/庚烷)得到1.17g(51％)1-(碘甲基)环戊醇，其为黄色油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:3.47(s,2H),1.70-1.92(m,8H)。
N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-((1-羟基环戊基)甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向N-(5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(根据针对实施例14所描述的制备,115.4mg,0.313mmol)于3mLDMF中的溶液中加入1-(碘甲基)环戊醇(195.4mg,2.762mmol)和碳酸铯(339.2mg,3.327mmol)。将反应混合物在密封容器中在140℃搅拌18小时。反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配，有机部分用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。将粗制产物与其它区域异构产物分离开，通过反相HPLC纯化并冻干得到32.1mg(22％)N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-((1-羟基环戊基)甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝467.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.68(s,1H),9.33(dd,J＝7.0,1.6,1H),8.77(dd,J＝4.2,1.6,1H),8.64(s,1H),8.33(s,1H),7.49(dd,J＝8.9,2.7,1H),7.39(d,J＝2.7,1H),7.32-7.25(m,2H),4.67(s,1H),4.19(s,2H),3.84(s,3H),1.61(m,8H)。
实施例25
N-(3-(3-氯苯基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
1-(3-氯苯基)丁烷-1,3-二酮
向3-氯苯乙酮(1.30mL,10.0mmol)于20mLTHF中的溶液中先后加入叔丁醇钾(11.0mL，1.0M THF溶液,11.0mmol)和无水乙酸乙酯(1.05mL,10.7mmol)。将反应混合物在室温搅拌2小时，然后在50℃搅拌15小时。反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配，有机部分用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。粗制产物在硅胶上通过快速色谱法纯化(0-50％乙酸乙酯/庚烷)得到0.75g(38％)1-(3-氯苯基)丁烷-1,3-二酮。LCMS(ESI)m+H＝197.2。
1-(3-氯苯基)-2-(羟基亚氨基)丁烷-1,3-二酮
向0℃的1-(3-氯苯基)丁烷-1,3-二酮(0.75g,3.8mmol)于15mL乙酸中的溶液中缓慢加入亚硝酸钠(0.560g,8.11mmol)(其为于1.5mL水中的溶液)。将反应混合物在0℃搅拌30分钟，然后温热至室温。再过4小时后，将反应混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，用二氯甲烷萃取三次。合并的萃取物用硫酸镁干燥并浓缩得到765.7mg(89％)1-(3-氯苯基)-2-(羟基亚氨基)丁烷-1,3-二酮，将其不经进一步纯化即进行下面的反应。LCMS(ESI)m+H＝226；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:7.81(d,1H),7.80(s,1H),7.75(d,1H),7.62(t,1H),2.60(s,1H),2.48(s,3H)。
5-(3-氯苯基)-3-甲基-1H-吡唑-4-胺
向0℃的1-(3-氯苯基)-2-(羟基亚氨基)丁烷-1,3-二酮(224.8mg,0.996mmol)于5mL乙醇中的溶液中滴加肼(0.30mL,9.6mmol)。将反应混合物温热至室温并搅拌15小时。浓缩粗制反应混合物，在硅胶上通过快速色谱法纯化(20-100％乙酸乙酯/二氯甲烷)得到113.3mg(55％)5-(3-氯苯基)-3-甲基-1H-吡唑-4-胺。LCMS(ESI)m+H＝208.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.20(s,1H),7.94-7.57(m,2H),7.40(s,1H),7.27(d,J＝9.1,1H),2.12(s,3H)。
N-(3-(3-氯苯基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
将5-(3-氯苯基)-3-甲基-1H-吡唑-4-胺(113.3mg,0.546mmol)、吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸(109.5mg,0.6712mmol)、7-氮杂苯并***-1-基氧基-三-(吡咯烷子基)鏻六氟磷酸盐(338.2mg,0.652mmol)、N,N-二异丙基乙基胺(0.30mL,1.7mmol)和4-二甲基氨基吡啶(19.1mg,0.156mmol)于8.0mLN,N-二甲基甲酰胺中的混合物在50℃搅拌15小时。反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配，有机部分用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。粗制产物通过反相HPLC纯化并冻干得到86.9mg(45％)N-(3-(3-氯苯基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝353.0；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.90(s,1H),9.37(d,J＝7.0,1H),9.30(s,1H),8.86(dd,J＝4.1,1.3,1H),8.69(s,1H),7.80(d,J＝12.1,1H),7.72(d,J＝7.6,1H),7.37(t,J＝7.8,1H),7.32(dd,J＝6.9,4.4,2H),2.18(s,3H)。
实施例26
N-(5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-异戊基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
1-异戊基-4-硝基-1H-吡唑
将4-硝基-1H-吡唑(234mg,2.06mmol,1.0当量)、1-溴-3-甲基丁烷(0.30ml,2.48mmol,1.2当量)和碳酸铯(1.01g,3.10mmol,1.5当量)于5.0mL1,2-二甲氧基乙烷中的混合物在55℃搅拌12小时。将反应混合物冷却至室温并用25mL乙酸乙酯稀释，过滤。然后浓缩滤液，将残余物溶解在5mL二氯甲烷中，通过快速柱色谱法纯化(硅胶,历时30分钟0-80％乙酸乙酯/庚烷)得到357.6mg(94.32％)异戊基-4-硝基-1H-吡唑，其为白色固体。LCMS(ESI)m+H＝184.11H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.11(s,1H),8.06(s,1H),4.20-4.14(m,2H),1.80(dd,J＝14.8,7.1,2H),1.60(dp,J＝13.4,6.7,1H),0.97(d,J＝6.6,6H)。
N-(5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-异戊基-4-硝基-1H-吡唑
将1-异戊基-4-硝基-1H-吡唑(356.9mg,1.95mmol,1.00当量)、2-溴-4-氯茴香醚(0.37ml,2.72mmol,1.40当量)、醋酸钯(II)(88mg,0.39mmol,0.20当量)、二(1-金刚烷基)-正丁基膦(209mg,0.58mmol,0.30当量)、碳酸钾(807mg,5.84mmol,3.00当量)和三甲基乙酸(52mg,0.50mmol,0.26当量)于5.0mLN,N-二甲基乙酰胺中的混合物在120℃搅拌12小时。将反应混合物冷却至室温，用20mL乙酸乙酯稀释并过滤。然后浓缩滤液，将其原样用于下一步骤。LCMS(ESI)m+H＝324.3
N-(5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-异戊基-1H-吡唑-4-胺
将5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-异戊基-4-硝基-1H-吡唑(632mg,1.95mmol,1.00当量)、铁(642.5mg,11.50mmol,5.90当量)和氯化铵(500.7mg,9.36mmol,4.80当量)于5.0mL乙醇和10mL水中的混合物在75℃搅拌2小时。浓缩反应混合物，加入10mL饱和碳酸氢钠溶液，水层用二氯甲烷(20mL*3)萃取。合并的二氯甲烷层用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将泛红的黄色油状物原样用于下一步骤。LCMS(ESI)m+H＝293.8。
N-(5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-异戊基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
将5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-异戊基-1H-吡唑-4-胺(573.0mg,1.95mmol,1.00当量)、吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸(349.9mg,2.145mmol,1.10当量)、7-氮杂苯并***-1-基氧基-三-(吡咯烷子基)鏻六氟磷酸盐(1.25g,2.42mmol,1.24当量)和N,N-二异丙基乙基胺(0.95mL,5.5mmol,2.8当量)于5.0mLN,N-二甲基甲酰胺中的混合物在室温搅拌12小时。浓缩反应混合物。粗制产物通过反相HPLC纯化并冻干得到105.2mg(12.3％)N-(5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-异戊基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝439.1；1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.50(s,1H),9.32(dd,J＝7.0,1.6,1H),8.73-8.57(m,2H),8.01(s,1H),7.60(dd,J＝8.9,2.7,1H),7.48(d,J＝2.7,1H),7.33(d,J＝9.0,1H),7.27(dd,J＝7.0,4.2,1H),3.97(dq,J＝16.6,6.8,2H),3.84(s,3H),1.54(q,J＝7.1,2H),1.45-1.31(m,1H),0.75(dd,J＝12.0,6.6,6H)。
实施例27
2-氨基-N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
(Z)-3-氨基-4,4,4-三氯-2-氰基丁-2-烯酸乙基酯
向三氯乙腈(38mL,0.38mol)和氰基乙酸乙酯(20mL,0.2mol)于乙醇(63mL)中的混合物中加入三乙胺(1mL,7mmol)。反应混合物开始变红，～1分钟后发生放热。将反应混合物冷却至0℃，然后搅拌2小时，同时缓慢温热至室温。真空浓缩反应混合物得到红色油状物，将该油状物吸收在DCM中，用硅胶填料过滤并真空浓缩得到44.95g(90％)(Z)-3-氨基-4,4,4-三氯-2-氰基丁-2-烯酸乙基酯，其为无色油状物，该油状物缓慢固化成白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.19(s,1H),6.85(s,1H),4.31(q,J＝7.1,1H),1.37(t,J＝7.1,3H)。
3,5-二氨基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯
将肼(2.19mL,70mmol)加至(Z)-3-氨基-4,4,4-三氯-2-氰基丁-2-烯酸乙基酯(15.0g,58mmol)/DMF(50mL)中。将反应混合物加热至100℃，保持1小时，然后冷却至室温。真空除去DMF，然后将残余物在DCM:2M甲醇氨溶液的95:5混合物中浆化。过滤出所得析出物，用DCM:MeOH的95:5混合物洗涤并真空干燥，得到5.72g(58％)3,5-二氨基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯，其为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.53(s,1H),5.28(br,4H),4.14(q,J＝7.1,2H),1.33-1.15(t,J＝7.1,3H)。
2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯
将3,5-二氨基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(1.0g,5.9mmol)、1,1,3,3-四甲氧基丙烷(2.9mL,18mmol)、三乙胺(2mL,10mmol)和DMF(15mL)的混合物在100℃加热14小时，然后再加入2mL1,1,3,3-四甲氧基丙烷。加入额外的1,1,3,3-四甲氧基丙烷后注意到显著的副产物，立即停止加热。将反应混合物冷却至室温，真空除去DMF。残余物在DCM和水之间分配，然后浓缩有机层，残余物通过硅胶色谱法纯化(用95:5DCM:2M甲醇氨溶液洗脱)得到420mg(35％)2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.57(dd,J＝4.3,1.6,1H),8.43(dd,J＝6.7,1.6,1H),6.84(dd,J＝6.7,4.4,1H),5.52(s,2H),4.48(q,J＝7.1,2H),1.45(t,J＝7.1,3H)。
2-(二(叔丁氧羰基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯
将一缩二碳酸二叔丁酯(1.30g,5.9mmol)加至2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(810mg,3.9mmol)、4-二甲基氨基吡啶(96mg,0.78mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(1.4mL,7.8mmol)于乙腈(100mL)中的溶液中。将反应混合物在室温搅拌3小时，然后真空浓缩。残余物在EtOAc和水之间分配，然后分离各层，有机层用盐水洗涤，然后用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化(用DCM:2M甲醇氨溶液的97:3混合物洗脱)得到370mg(31％)2-(二(叔丁氧羰基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.79(dd,J＝4.2,1.8,1H),8.69(dd,J＝7.0,1.8,1H),7.05(dd,J＝7.0,4.2,1H),4.40(q,J＝7.1,2H),1.43(s,18H),1.38(t,J＝7.1,3H)。
2-(叔丁氧羰基氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸
向2-(二(叔丁氧羰基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(220mg,0.54mmol)于乙醇(15mL)中的溶液中加入4mL 10％氢氧化锂水溶液。将反应混合物加热至70℃，保持18小时，然后冷却至室温。加入15mL 10％枸橼酸水溶液，真空浓缩反应混合物。残余物在EtOAc和饱和枸橼酸水溶液之间分配，然后有机层用水和盐水洗涤，然后用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到150mg 2-(叔丁氧羰基氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.34(s,1H),9.12(dd,J＝6.9,1.7,1H),8.71(dd,J＝4.3,1.7,1H),7.20(dd,J＝6.9,4.3,1H),1.49(s,9H)。
3-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基氨基甲酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-基氨基甲酸叔丁酯
向2-(叔丁氧羰基氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸(88mg,0.32mmol)、5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-胺(75mg,0.32mmol)、4-二甲基氨基吡啶(7.7mg,0.063mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(0.16mL,0.95mmol)于DMF(3mL)中的溶液中加入PyAOP(200mg,0.38mmol)。将反应混合物在50℃搅拌14小时，然后用EtOAc稀释。有机层用水洗涤两次，用盐水洗涤一次，然后用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化(用EtOAc洗脱)得到98mg(62％)3-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基氨基甲酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-基氨基甲酸叔丁酯。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.85(s,1H),9.65(s,1H),8.76(dd,J＝6.8,1.7,1H),8.44(dd,J＝4.3,1.7,1H),8.20(s,1H),7.56(d,J＝2.7,1H),7.36(dd,J＝8.8,2.7,1H),6.97(d,J＝8.9,1H),6.90(dd,J＝6.9,4.3,1H),3.97(s,3H),3.87(s,3H),1.56(s,9H)。
2-氨基-N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
将TFA(0.5mL)加至3-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基氨基甲酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-基氨基甲酸叔丁酯(80mg,0.2mmol)于DCM(10mL)中的溶液中。将反应混合物在室温搅拌3小时，然后真空浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化得到55mg(90％)2-氨基-N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，其为白色固体。LCMS(ESI)m+H＝398.1；1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.46(s,1H),8.91(dd,J＝6.7,1.6,1H),8.44(dd,J＝4.5,1.6,1H),8.21(s,1H),7.47(dd,J＝8.9,2.7,1H),7.37(d,J＝2.7,1H),7.27(d,J＝8.9,1H),6.99(dd,J＝6.7,4.5,1H),6.56(s,2H),3.89(s,3H),3.83(s,3H)。
大体按照上述实施例制备显示在表1中的实施例28-131。对于表1所示的每个化合物，所依据的实施例的编号在方法一栏中给出。
表1
实施例132
向N-(5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(114.0mg,0.31mmol)和碳酸铯(201.4mg,0.62mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的悬浮液中加入4-溴-2-甲基-2-丁烯(53μL,0.46mmol)。将反应混合物在室温搅拌3小时，然后加入EtOAc。有机层用水和饱和盐水溶液各洗一次。分离有机层，用Na2SO4干燥并真空浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化(20-100％EtOAc:Hex)得到N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-(3-甲基丁-2-烯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，其为浅黄色泡沫(67mg,0.15mmol)。然后加入丙酮和水(各1mL)，接着加入四氧化锇(1.89mg,0.0074mmol)和N-氧化-N-甲基吗啉/水(1:1,N-氧化-N-甲基吗啉:水,37mg)。将反应混合物在室温搅拌3小时。加入硅藻土，真空浓缩混合物。残余物通过硅胶色谱法纯化(50-100％EtOAc*:Hex,*EtOAc也含有10％MeOH)，然后通过手性SFC分离对映异构体得到11.2mg和15.8mg标题化合物，其为白色固体。LCMS(ESI)m+H＝471.1；1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.69(s,1H),9.34(d,J＝6.9,1H),8.78(d,J＝4.0,1H),8.66(s,1H),8.30(s,1H),7.49(dd,J＝8.8,2.6,1H),7.42(d,J＝2.6,1H),7.29(dd,J＝10.0,4.6,2H),5.05(d,J＝6.3,1H),4.53(s,1H),4.43(d,J＝13.5,1H),3.95(dd,J＝13.5,10.1,1H),3.85(s,3H),3.60(s,1H),1.16(s,3H),1.10(s,3H)。
实施例133
(S)-N-(1-(3-(氮杂环丁烷-1-基)-2-羟基丙基)-3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向N-(5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(60mg,0.16mmol)和碳酸铯(212mg,0.65mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的悬浮液中加入(S)-2-(氯甲基)环氧乙烷(26.3mg,0.28mmol)。将反应混合物在室温搅拌8小时，此时LCMS分析表明起始物质耗尽。加入氮杂环丁烷(44uL,0.65mmol)，将反应混合物在室温再搅拌16小时。过滤反应混合物并通过反相HPLC纯化得到标题化合物，其为白色固体(7.8mg)。LCMS(ESI)m+H＝482.2；1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.69(s,1H),9.34(dd,J＝7.0,1.6,1H),8.78(dd,J＝4.2,1.6,1H),8.66(s,1H),8.27(s,1H),7.50(dd,J＝8.9,2.7,1H),7.40(d,J＝2.7,1H),7.33-7.26(m,2H),4.94(d,J＝5.4,1H),4.21(dd,J＝13.7,3.8,1H),3.99(dd,J＝13.8,7.8,1H),3.84(s,3H),3.77(s,1H),3.17(t,J＝6.9,4H),2.39(qd,J＝12.0,5.9,2H),2.02-1.93(m,2H)。
实施例134
N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-(2-(3,3-二甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
2-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)乙酸叔丁酯
将N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(2.0g,5.4mmol)、溴代乙酸叔丁酯(0.88mL,6.0mmol)和碳酸铯(2.1g,6.5mmol)合并，在30℃搅拌过夜。将混合物温热至65℃，此时加入更多的碳酸盐和溴代乙酸叔丁酯，搅拌8小时。将混合物冷却至环境温度，搅拌过夜，然后用EtOAc/水分配。分离有机相，用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，用硅胶过滤并浓缩成固体。将所述固体用1:1EtOAc/己烷洗涤得到1.85g(71％)2-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)乙酸叔丁酯，其为黄色晶体。LCMS(ESI)m+H＝483.0.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.74(s,1H),8.77(m,1H),8.73(s,1H),8.51(m,1H0,8.38(s,1H),8.02(s,1H),7.58(s,1H),7.31(m,1H),6.97(m,2H),4.85(s,2H),3.83(s,3H),1.49(s,9H)。
2-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)乙酸
向2-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)乙酸叔丁酯(1.85g,3.83mmol)/50mL二氯甲烷中加入30mLTFA。将混合物在环境温度搅拌2小时，然后浓缩并用EtOAc重结晶得到1.4g(86％)2-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)乙酸，其为无色固体。LCMS(ESI)m+H＝427.1.1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.95(s,1H),9.08(m,1H),8.69(m,1H),8.63(s,1H),8.34(s,1H),7.47(m,2H),7.21(m,2H),5.03(s,2H),3.86(s,3H)。
N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-(2-(3,3-二甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向2-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)乙酸(31.9mg,0.075mmol)/1mLDMF中先后加入3,3-二甲基吡咯烷HCl(15mg,0.11mmol)和N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮杂苯并***-1-基)脲鎓六氟磷酸盐(43mg,0.11mmol)，然后加入三乙胺(42uL,0.30mmol)，将它们一起搅拌30分钟。粗制混合物通过反相HPLC纯化并冻干得到28.9mg(76％)，其为无色固体。LCMS(ESI)m+H＝508.1.1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.72(s,1H),9.34(d,J＝6.9Hz,1H),8.77(s,1H),8.67(s,1H),8.28(s,1H),7.50(d,J＝8.9Hz,1H),7.37(s,1H),7.30(t,J＝9.3Hz,2H),5.09(d,J＝17.8Hz,2H),3.85(s,3H),3.62(t,J＝6.7Hz,1H),3.43(t,J＝7.1Hz,1H),3.29(s,1H),3.12(s,1H),1.74(t,J＝7.0Hz,1H),1.63(t,J＝6.9Hz,1H),1.08(d,J＝9.9Hz,6H)。
实施例135
N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-(2-(环丙基氨基)-1-氟-2-氧代乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
2-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)-2-氟乙酸
向N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(37.1mg,0.10mmol)/1.5DMF中加入氢化钠(10mg,0.40mmol)，将混合物搅拌5分钟，随后加入溴氟乙酸乙酯(37mg,0.20mmol)。将混合物搅拌过夜，然后通过反相HPLC纯化并冻干得到13.3mg(30％)2-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)-2-氟乙酸，其为无色固体。LCMS(ESI)m+H＝445.1。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.71(s,1H),9.33(d,J＝7.0Hz,1H),8.76-8.71(m,1H),8.66(d,J＝8.3Hz,1H),8.38(s,1H),7.58-7.20(m,5H),5.98(d,J＝56.5Hz,1H),3.84(s,3H)。
N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-(2-(环丙基氨基)-1-氟-2-氧代乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向2-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)-2-氟乙酸(39.1mg,0.088mmol)和环丙基胺(10mg,0.18mmol)/1.0mLDMF中加入(7-氮杂苯并***-1-基氧基)三吡咯烷子基鏻六氟磷酸盐(91mg,0.18mmol)，将混合物搅拌1小时。粗制混合物通过反相HPLC纯化并冻干得到9.1mg(21％)N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-(2-(环丙基氨基)-1-氟-2-氧代乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，其为无色固体。LCMS(ESI)m+H＝484.1。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.77(s,1H),9.34(dd,J＝7.0,1.4Hz,1H),8.83(d,J＝4.4Hz,1H),8.76(dd,J＝4.2,1.5Hz,1H),8.68(s,1H),8.55(s,1H),7.58(dd,J＝8.9,2.7Hz,1H),7.37(t,J＝5.7Hz,2H),7.29(dd,J＝7.0,4.2Hz,1H),6.80(d,J＝50.7Hz,1H),3.85(s,3H),2.82(dd,J＝7.3,3.3Hz,1H),0.70(t,J＝7.0Hz,2H),0.64-0.57(m,2H)。
实施例136
N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-((1S,2R)-2-羟基环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
和
N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-((1R,2S)-2-羟基环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向搅拌的N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-((1S,2S)-2-羟基环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺和N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-((1R,2R)-2-羟基环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(反式对映异构体的混合物；107mg,0.229mmol)、4-硝基苯甲酸(50.6mg,0.303mmol)和三苯基膦(81.8mg,0.312mmol)于3.0mL四氢呋喃中的溶液中滴加偶氮二甲酸二乙酯(47.0μL,0.298mmol)。将反应混合物在室温搅拌1小时，然后在50℃加热2.5小时。然后加入4-硝基苯甲酸(51mg)、三苯基膦(86mg)和偶氮二甲酸二乙酯(53μL)，将反应混合物在50℃加热过夜。反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配，有机部分用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空蒸发。使粗制产物在硅胶上经受快速色谱法(0-100％乙酸乙酯/二氯甲烷)得到对映异构体(1R,2S)-和(1S,2R)4-硝基苯甲酸(2-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)环己基)酯的混合物，其为与三苯基膦氧化物的混合物。将该物质不经进一步纯化即进行下面的反应。
将来自前一步骤的粗制物溶解在3mL四氢呋喃中(含有5.0M氢氧化钠的水溶液(1.0mL))。将反应混合物在室温搅拌18小时。将反应混合物倒入乙酸乙酯中，用2M氢氧化钠水溶液洗涤两次。用硫酸镁干燥有机层并真空蒸发。粗制产物通过反相HPLC纯化并冻干得到8.5mg对映异构体N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-((1S,2R)-2-羟基环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺和N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-((1R,2S)-2-羟基环己基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的混合物。LCMS(ESI)m+H＝467.1；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.68(s,1H),9.33(dd,J＝7.0,1.6Hz,1H),8.78(dd,J＝4.2,1.6Hz,1H),8.65(s,1H),8.33(s,1H),7.49(dd,J＝8.8,2.7Hz,1H),7.42(d,J＝2.7Hz,1H),7.33-7.25(m,2H),4.84(d,J＝4.3Hz,1H),4.24(d,J＝12.1Hz,1H),4.11(s,1H),3.84(s,3H),2.16(td,J＝12.4,8.6Hz,1H),1.81(m,3H),1.62(dt,J＝26.0,13.0Hz,2H),1.43(d,J＝6.1Hz,2H)。
实施例137
N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-(3-羟基环戊基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
在-78℃，向N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-(3-羟基环戊基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(171.1mg,0.3795mmol)于5.0mL四氢呋喃中的溶液中加入1.0M三叔丁氧基氢化铝锂/四氢呋喃(0.6mL,0.6mmol)。将反应混合物在-60℃保持4小时，然后加入1.0M三叔丁氧基氢化铝锂/四氢呋喃(0.6mL,0.6mmol)。将反应混合物在-25℃保持8小时。加入1.0M三叔丁氧基氢化铝锂/四氢呋喃(0.9mL,0.9mmol)，将反应混合物在-25℃再保持6小时直到通过LCMS判断酮的还原结束。然后将反应混合物在-40℃冷却并用3mL饱和氯化铵水溶液淬灭。温热至室温后，混合物用二氯甲烷萃取，有机萃取物用硫酸镁干燥并真空蒸发。粗制产物通过反相HPLC纯化并冻干得到34mg(20％)N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-(3-羟基环戊基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝453.1；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.67(s,1H),9.34(dd,J＝7.0,1.6Hz,1H),8.78(dd,J＝4.2,1.6Hz,1H),8.64(s,1H),8.38(s,1H),7.50(dd,J＝8.8,2.7Hz,1H),7.40(d,J＝2.7Hz,1H),7.34-7.25(m,2H),4.90(d,J＝4.6Hz,1H),4.83-4.69(m,1H),4.21(dd,J＝10.2,5.5Hz,1H),3.85(s,3H),2.42(ddd,J＝14.6,8.7,6.2Hz,1H),2.21-2.04(m,2H),2.00-1.87(m,1H),1.86-1.70(m,2H)。
实施例138
N-(3-(5-氯-2-环丙基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
4-氯-2-(4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-基)苯酚
向5-(5-氯-2-(4-甲氧基苄基氧基)苯基)-4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑(根据针对实施例14描述的操作制备)(1.193g,2.434mmol)于17mL二氯甲烷中的溶液加入3mL水和二氯二氰基醌(1.2208g)。将反应混合物在室温搅拌48小时，然后加入更多的二氯二氰基醌(0.4946g)。再过24小时后，将反应混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，用二氯甲烷萃取。有机部分用硫酸镁干燥并真空蒸发。粗制产物在硅胶上通过快速色谱法纯化(0-35％乙酸乙酯/庚烷)得到745.2mg(83％)4-氯-2-(4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-基)苯酚。LCMS(ESI)m+H＝270.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.47(s,1H),8.44(s,1H),7.47(d,J＝2.6,1H),7.43(dd,J＝8.8,2.7,1H),7.00(d,J＝8.8,1H),5.30(dd,J＝65.1,10.8,2H),3.42(t,J＝8.1,2H),0.74(t,2H),-0.08(s,9H)。
三氟甲磺酸(4-氯-2-(4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-基)苯基)酯
在-40℃，向4-氯-2-(4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-基)苯酚(190.4mg,0.5148mmol)于8mL二氯甲烷中的溶液中先后加入三乙胺(0.30mL,2.2mmol)和三氟甲磺酸酐(0.15mL,0.89mmol)。在该温度30分钟后，将反应混合物温热至室温。3小时后，将反应混合物倒入水中，用二氯甲烷萃取两次。合并的有机部分用硫酸镁干燥并真空蒸发。粗制产物在硅胶上通过快速色谱法纯化(0-30％乙酸乙酯/庚烷)得到239.8mg(93％)三氟甲磺酸(4-氯-2-(4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-基)苯基)酯。LCMS(ESI)m+Na＝524.0。
5-(5-氯-2-环丙基苯基)-4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑
向三氟甲磺酸(4-氯-2-(4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-基)苯基)酯(72.4mg,0.144mmol)、环丙基硼酸(55.0mg,0.640mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(79.2mg,0.685mmol)、磷酸钾(152.7mg,0.7194mmol)和溴化钠(149.2mg,1.450mmol)的混合物中加入水(13.0μL,0.722mmol)和甲苯(3.0mL)。将反应混合物在90℃加热72小时。反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配，有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空蒸发。粗制产物在硅胶上通过快速色谱法纯化(0-30％乙酸乙酯/庚烷)得到30.1mg(53％)5-(5-氯-2-环丙基苯基)-4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑。LCMS(ESI)m+Na＝416.2。
N-(3-(5-氯-2-环丙基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺
按照针对实施例14描述的操作由5-(5-氯-2-环丙基苯基)-4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑合成标题化合物。LCMS(ESI)m+H＝393.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.66(s,1H),9.31(dd,J＝7.0,1.5Hz,1H),8.65(s,1H),8.54-8.50(m,1H),8.29(s,1H),7.43(dd,J＝8.5,2.3Hz,1H),7.35(d,J＝2.3Hz,1H),7.24(dd,J＝7.0,4.2Hz,1H),7.00(d,J＝8.6Hz,1H),3.92(s,3H),1.98(s,1H),0.79(dt,J＝6.2,4.3Hz,2H),0.66-0.59(m,2H)。
实施例139
N-(3-(5-氯-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)-1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
1-(烯丙基氧基)-2-溴-4-氯苯
向2-溴-4-氯苯酚(7.7897g,37.549mmol)于20mLDMF中的溶液中加入碳酸钾(5.784g,41.85mmol)和烯丙基溴(3.30mL,38.1mmol)。将反应混合物在50℃搅拌15小时。反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配，有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空蒸发得到9.4g(100％)1-(烯丙基氧基)-2-溴-4-氯苯，将其不经进一步纯化即进行下面的反应。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ:7.54(d,J＝2.5,1H),7.21(dd,J＝8.8,2.5,1H),6.81(d,J＝8.8,1H),6.10-5.98(m,1H),5.46(dd,J＝17.3,1.4,1H),5.31(dd,J＝10.6,1.3,1H),4.59(d,J＝5.0,2H)。
2-烯丙基-6-溴-4-氯苯酚
将1-(烯丙基氧基)-2-溴-4-氯苯(4.122g,16.65mmol)于N,N-二乙基苯胺(20mL,100mmol)中的溶液在200℃加热15小时。冷却至室温后，反应混合物在乙酸乙酯和1M HCl水溶液之间分配，有机层用一份额外的1M HCl水溶液和盐水洗涤。有机层用硫酸镁干燥并真空蒸发。粗制产物在硅胶上通过快速色谱法纯化(0-20％乙酸乙酯/庚烷)得到3.1761g(77％)2-烯丙基-6-溴-4-氯苯酚，其为透明无色油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.33(d,J＝2.4,1H),7.07(d,J＝2.3,1H),5.94(ddt,J＝16.8,10.3,6.6,1H),5.53(s,1H),5.18-5.06(m,2H),3.40(d,J＝6.6,2H)。
2-溴-4-氯-6-(2-羟基乙基)苯酚
将2-烯丙基-6-溴-4-氯苯酚(1.378g,5.567mmol)于20mL二氯甲烷中的溶液在-78℃冷却。在该温度搅拌的同时，使臭氧鼓泡通过反应溶液，保持6.5小时。用臭氧吹洗反应容器后(始终在-78℃)，将反应混合物用四氢硼酸钠(1.064g,28.12mmol)淬灭。然后将反应混合物温热至室温并搅拌过夜。反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配，有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空蒸发。粗制产物在硅胶上通过快速色谱法纯化(10-60％乙酸乙酯/庚烷)得到0.5911g(42％)2-溴-4-氯-6-(2-羟基乙基)苯酚。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.38(d,J＝2.5,1H),7.27(s,1H),7.06(d,J＝2.4,1H),3.96(br s,2H),2.91(t,J＝5.7,2H),1.98(s,1H)。
7-溴-5-氯-2,3-二氢苯并呋喃
在0℃，向2-溴-4-氯-6-(2-羟基乙基)苯酚(99.8mg,0.397mmol)、三乙胺(0.40mL,2.9mmol)和二氯甲烷(4mL)的混合物中加入甲磺酰氯(56.0μL,0.724mmol)。将反应混合物在0℃搅拌1.5小时，此时加入更多甲磺酰氯(10μL)，将反应混合物温热至室温。搅拌过夜后，将反应混合物再次冷却至0℃，加入三乙胺(0.2mL)和甲磺酰氯(15μL)。2小时后，反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配，有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空蒸发。粗制产物在硅胶上通过快速色谱法纯化(0-30％乙酸乙酯/庚烷)得到40.0mg(40％)7-溴-5-氯-2,3-二氢苯并呋喃。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.26(d,1H),7.09(d,1H),4.67(t,J＝8.8,2H),3.30(t,J＝8.8,2H)。
N-(3-(5-氯-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)-1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
按照针对实施例14和16描述的操作使用7-溴-5-氯-2,3-二氢苯并呋喃制备标题化合物。LCMS(ESI)m+H＝453.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.72(s,1H),9.33(d,J＝7.0,1H),8.82(dd,J＝4.2,1.5,1H),8.65(s,1H),8.35(s,1H),7.36(s,1H),7.33-7.23(m,2H),4.70(s,1H),4.62(t,J＝8.8,2H),4.07(s,2H),3.37(t,J＝8.8,2H),1.12(s,6H)。
实施例140
N-(1-甲基-3-(3-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
5-氯-4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑
在烘干的烧瓶中，将4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑(412.4mg,1.695mmol)溶解在5mLTHF中，在-78℃冷却。向该溶液中缓慢加入1.0M六甲基二硅基氨基锂/四氢呋喃(2.0mL,2.0mmol)。在-78℃搅拌30分钟后，缓慢加入六氯乙烷(455.2mg,1.923mmol)于3mLTHF中的溶液。将反应混合物在-78℃再保持一小时，然后用饱和氯化铵水溶液淬灭并温热至室温。反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配，有机层用硫酸镁干燥并真空蒸发得到0.4592g(98％)5-氯-4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑，将其不经进一步纯化即进行下面的反应。LCMS(ESI)m+H＝220.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.52(s,1H),5.56(s,2H),3.67-3.57(m,2H),0.91-0.83(m,2H),-0.04(s,9H)。
3-甲基-1-(4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-基)哌啶
向5-氯-4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑(348.3mg,1.254mmol)于1mL正丁醇中的溶液中加入3-甲基-哌啶(0.20mL,1.7mmol)。使反应混合物在温度120℃经受微波辐射30分钟。真空蒸发溶剂，粗制产物在硅胶上通过快速色谱法纯化(0-40％乙酸乙酯/庚烷)得到486.5mg 3-甲基-1-(4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-基)哌啶。LCMS(ESI)m+H＝341.4；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.04(s,1H),5.36(s,2H),3.71-3.62(m,2H),3.20(m,3H),2.96-2.85(m,1H),1.84-1.76(m,4H),1.15(m,1H),0.97-0.87(m,5H),0.00(s,9H)。
N-(1-甲基-3-(3-甲基哌啶-1-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
按照针对实施例14描述的操作使用3-甲基-1-(4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-基)哌啶制备标题化合物。LCMS(ESI)m+H＝340.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.59(s,1H),9.36(dd,J＝7.0,1.5,1H),8.83(dd,J＝4.2,1.6,1H),8.66(s,1H),7.98(s,1H),7.32(dd,J＝7.0,4.2,1H),3.71(s,3H),3.25(s,1H),2.64(s,1H),2.41-2.29(m,1H),1.96-1.70(m,4H),1.04(s,1H),0.91(d,J＝6.7,3H)。
实施例141
N-(3-(5-氯-2-甲氧基吡啶-3-基)-1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
5-碘-4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑
在烘干的烧瓶中，将4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑(1.5192g,6.2432mmol)溶解在20mLTHF中，在-78℃冷却。向该溶液中缓慢加入1.0M六甲基二硅基氨基锂/四氢呋喃(7.5mL,7.5mmol)。在-78℃搅拌40分钟后，缓慢加入碘(1.7602g,6.9351mmol)于8mLTHF中的溶液。将反应混合物在-78℃再保持1.5小时，然后用饱和氯化铵水溶液淬灭并温热至室温。反应混合物在乙酸乙酯和半饱和Na2S2O3水溶液之间分配。有机层用硫酸镁干燥，过滤并真空蒸发。粗制产物在硅胶上通过快速色谱法纯化(0-15％乙酸乙酯/庚烷)得到2.2349g(97％)5-碘-4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.48(s,1H),5.59(s,2H),3.61(t,J＝8.0,2H),0.86(t,J＝8.0,2H),-0.04(s,9H)。
5-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基氨基甲酸叔丁酯
向5-碘-4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑(2.234g,6.050mmol)于乙醇(20mL)中的溶液中加入氯化铵(1.303g,24.36mmol)、铁粉(1.695g,30.35mmol)和水(30mL)。然后将反应混合物在70℃搅拌45分钟，然后冷却至室温，用二氯甲烷稀释并用硅藻土过滤，用更多二氯甲烷冲洗。向滤液中加入饱和碳酸氢钠水溶液并分离各层。水层用二氯甲烷萃取不止一次，然后将合并的有机部分用硫酸镁干燥，过滤并真空蒸发。向所得残余物中加入二噁烷(20mL)、三乙胺(2.0mL,14mmol)和一缩二碳酸二叔丁酯(1.513g,6.932mmol)。将该混合物在60℃搅拌4小时。冷却至室温后，将反应混合物在乙酸乙酯中稀释，用水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并真空蒸发。粗制产物在硅胶上通过快速色谱法纯化(0-40％乙酸乙酯/庚烷)得到1.4353g(54％)5-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基氨基甲酸叔丁酯。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.44(s,1H),7.56(s,1H),5.39(s,2H),3.53(t,J＝8.0,2H),1.43(s,9H),0.83(t,J＝8.0,2H),-0.04(s,9H)。
5-(5-氯-2-甲氧基吡啶-3-基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基氨基甲酸叔丁酯
将5-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基氨基甲酸叔丁酯(390.7mg,0.8892mmol)、5-氯-2-甲氧基-吡啶-3-硼酸频那醇酯(364.0mg,1.350mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)·氯仿加合物(48.5mg,0.0468mmol)、S-Phos(74.2mg,0.181mmol)、磷酸钾(597.1mg,2.813mmol)和1-丁醇(10mL)的混合物用氮气脱气，然后在80℃搅拌15小时。将反应混合物在乙酸乙酯中稀释，用水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并真空蒸发。粗制产物在硅胶上通过快速色谱法纯化(0-50％乙酸乙酯/庚烷)得到212.3mg(52％)5-(5-氯-2-甲氧基吡啶-3-基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基氨基甲酸叔丁酯。LCMS(ESI)m+H＝455.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.53(s,1H),8.33(s,1H),7.79(d,J＝2.6,1H),5.22(s,2H),3.85(s,3H),3.35(t,2H),1.38(s,9H),0.70(t,J＝8.1,2H),-0.10(s,9H)。
5-(5-氯-2-甲氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑-4-胺
向5-(5-氯-2-甲氧基吡啶-3-基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基氨基甲酸叔丁酯(211.7mg,0.4652mmol)于5mL乙酸乙酯中的溶液中加入四氯化锡(0.52mL,4.4mmol)。将反应混合物在室温搅拌2小时，然后真空蒸发。残余的油状物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水溶液之间分配，水层用乙酸乙酯萃取两次以上。合并的有机层用硫酸镁干燥，过滤并真空蒸发。粗制产物在硅胶上通过快速色谱法纯化(0-20％甲醇/二氯甲烷)得到32.4mg(31％)5-(5-氯-2-甲氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑-4-胺。LCMS(ESI)m+H＝225.1。
N-(3-(5-氯-2-甲氧基吡啶-3-基)-1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
按照实施例4和16所述的操作用5-(5-氯-2-甲氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑-4-胺制备标题化合物。LCMS(ESI)m+H＝442.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.72(s,1H),9.34(d,J＝6.8Hz,1H),8.73(s,1H),8.66(s,1H),8.35(s,2H),7.88(s,1H),7.28(s,1H),4.75(s,1H),4.09(s,2H),3.95(s,3H),1.13(s,6H)。
实施例142
N-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-3-(1-甲基-2-氧代-5-(三氟甲基)-1,2-二氢吡啶-3-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
3-溴-1-甲基-5-(三氟甲基)吡啶-2(1H)-酮
向3-溴-2-羟基-5-(三氟甲基)吡啶(1.0097g,4.1724mmol)于氯仿(20mL)中的溶液中加入碳酸银(1.1964g,4.3388mmol)和碘甲烷(0.40mL,6.4mmol)。将反应混合物在室温搅拌2小时，然后在40℃搅拌24小时。加入更多的碘甲烷(0.40mL,6.4mmol)，将反应混合物在40℃再保持15小时。然后将反应混合物用二氯甲烷稀释，用硅藻土过滤并真空蒸发。粗制产物在硅胶上通过快速色谱法纯化(0-80％乙酸乙酯/庚烷)得到0.5297g(50％)3-溴-1-甲基-5-(三氟甲基)吡啶-2(1H)-酮。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.47(d,J＝0.9,1H),8.22(d,J＝2.5,1H),3.56(s,3H)。
N-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-3-(1-甲基-2-氧代-5-(三氟甲基)-1,2-二氢吡啶-3-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
按照实施例14和16描述的操作使用3-溴-1-甲基-5-(三氟甲基)吡啶-2(1H)-酮制备标题化合物。LCMS(ESI)m+H＝476.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.23(s,1H),9.31(dd,J＝7.0,1.5,1H),8.77(dd,J＝4.1,1.6,1H),8.64(s,1H),8.58(s,1H),8.39(s,1H),7.88(d,J＝2.7,1H),7.27(dd,J＝7.0,4.2,1H),4.74(s,1H),4.08(s,2H),3.71(s,3H),1.11(s,6H)。
实施例143
N-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-3-(5-甲氧基-2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
4-碘-5-甲氧基-2-(三氟甲基)吡啶
在烘干的烧瓶中，将5-甲氧基-2-(三氟甲基)吡啶溶解在THF(20mL)中。将该混合物在-78℃冷却，然后加入2.5M正丁基锂/己烷(2.60mL,6.5mmol)。在该相同温度搅拌40分钟后，加入1-氯-2-碘乙烷(0.60mL,6.6mmol)。将反应混合物在-78℃再保持30分钟，然后用饱和氯化铵水溶液淬灭。将混合物温热至室温，在乙酸乙酯和水之间分配，有机层用硫酸镁干燥并真空蒸发。粗制产物在硅胶上通过快速色谱法纯化(0-40％乙酸乙酯/庚烷)得到0.3128g(16％)4-碘-5-甲氧基-2-(三氟甲基)吡啶。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.38(s,1H),8.29(s,1H),4.05(s,3H)。
N-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-3-(5-甲氧基-2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
按照实施例14和16所述的操作使用4-碘-5-甲氧基-2-(三氟甲基)吡啶制备标题化合物。LCMS(ESI)m+H＝476.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.71(s,1H),9.36(d,J＝6.9,1H),8.88(d,J＝3.8,1H),8.82(s,1H),8.67(s,1H),8.41(s,1H),7.85(s,1H),7.36-7.27(m,1H),4.77(s,1H),4.12(s,2H),4.09(s,3H),1.13(s,6H)。
实施例144
向2-溴-6-碘-3-甲氧基吡啶(627.4mg,1.999mmol)于N-甲基吡咯烷酮(10mL)中的溶液中加入氰化亚铜(202.6mg,2.262mmol)。将反应混合物在130℃搅拌3.5小时，然后冷却至室温。粗制反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配，有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并真空蒸发。粗制产物在硅胶上通过快速色谱法纯化(20-100％乙酸乙酯/庚烷)得到157.8mg(37％)两种区域异构产物6-溴-5-甲氧基吡啶-2-甲腈和6-碘-3-甲氧基吡啶-2-甲腈的混合物。1H NMR(400MHz,DMSO)δ:8.12(d,J＝8.3Hz,0.75H),7.98(d,J＝9.0Hz,1H),7.80(d,J＝9.1Hz,1H),7.69(d,J＝8.5Hz,0.75H),3.98(重叠的s和s,6H)。
N-(3-(6-氰基-3-甲氧基吡啶-2-基)-1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
N-(3-(6-氰基-5-甲氧基吡啶-2-基)-1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
按照针对实施例14和16描述的操作使用6-溴-5-甲氧基吡啶-2-甲腈和6-碘-3-甲氧基吡啶-2-甲腈的混合物制备标题化合物，通过反相HPLC分离最终的区域异构产物得到:N-(3-(6-氰基-3-甲氧基吡啶-2-基)-1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺；LCMS(ESI)m+H＝433.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.55(s,2H),9.35(d,J＝6.9Hz,2H),8.93(s,2H),8.68(s,2H),8.48(s,2H),8.10(d,J＝8.6Hz,2H),7.80(d,J＝8.4Hz,2H),7.42-7.26(m,2H),6.54(s,1H),4.80(s,2H),4.12(s,4H),3.94(s,6H),1.12(s,12H)；
和N-(3-(6-氰基-5-甲氧基吡啶-2-基)-1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺；LCMS(ESI)m+H＝433.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.97(s,1H),9.36(d,J＝6.8Hz,1H),9.09(s,1H),8.70(s,1H),8.57(s,1H),8.26(d,J＝9.4Hz,1H),7.94(d,J＝9.1Hz,1H),7.42-7.32(m,1H),4.78(s,1H),4.11(s,2H),4.04(s,3H),1.13(s,6H)。
实施例145
N-(5-(3-溴苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
5-(3-溴苯基)-4-硝基-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑
向4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑(4g,16.4mmol)于40mLN,N-二甲基乙酰胺中的溶液中加入1,3-二溴-苯(4.6g,19.7mmol)、醋酸钯(II)(242mg,1.08mmol)、二(1-金刚烷基)-正丁基膦(565mg,1.58mmol)、碳酸钾(8.28g,60mmol)和三甲基乙酸(552mg,5.2mmol)。在室温搅拌的同时使氮气鼓泡通过反应混合物，保持10分钟。然后将反应混合物在120℃加热12小时。将反应混合物冷却至室温，在乙酸乙酯中稀释并用水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。粗制物在硅胶上通过快速色谱法纯化(0-25％乙酸乙酯/己烷)得到800mg(12％)5-(3-溴苯基)-4-硝基-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑。LCMS(ESI)m+H＝398.0；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.24(d,1H),7.70(m,1H),7.53(s,1H),7.46(d,1H),7.42(d,1H),7.41(d,1H),5.27(s,1H),3.72(m,2H),0.95(m,2H),0.00(s,9H)。
5-(3-溴苯基)-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑-4-胺
向5-(3-溴苯基)-4-硝基-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑(800mg,2.4mmol)于25mL乙醇中的溶液中加入50mL水、氯化铵(636mg,12mmol)和铁粉(806mg,14mmol)。将反应混合物在75℃搅拌6小时。冷却至室温后，将反应混合物用二氯甲烷稀释并用硅藻土垫过滤，用更多二氯甲烷冲洗。将滤液加至150mL饱和碳酸氢钠水溶液中，用二氯甲烷萃取两次。合并的有机萃取物用硫酸镁干燥并浓缩，得到530mg(71％)5-(3-溴苯基)-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑-4-胺，将其不经纯化即进行下面的反应。LCMS(ESI)m+H＝368.0。
N-(5-(3-溴苯基)-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
在0℃，将5-(3-溴苯基)-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑-4-胺(533mg,1.45mmol)于四氢呋喃(5mL)中的混合物加至吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰氯(262mg,1.45mmol)/四氢呋喃(5mL)中。加入结束后，将混合物温热至室温，然后在该温度搅拌过夜。浓缩混合物得到742mg(99％)N-(5-(3-溴苯基)-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，将其不经纯化即进行下面的反应。LCMS(ESI)m+H＝513.1。
N-(5-(3-溴苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向N-(5-(3-溴苯基)-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(742mg,1.45mmol)于20mL乙醇中的溶液中加入HCl(1.0mL，6M水溶液,6mmol)。然后将反应混合物在70℃搅拌6小时。冷却至室温后，形成浅黄色析出物，过滤分离所述析出物，用甲醇和***洗涤。真空减少滤液体积，过滤出更多固体产物。将合并收集的固体真空干燥得到320mg(58％)N-(5-(3-溴苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝383.0；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.01(s,1H),9.93(s,1H),9.33(dd,1H),8.83(dd,1H),8.66(d,1H),8.26(s,1H),7.57(d,1H),7.47(t,1H),7.28(dd,1H)。
实施例146
向N-(5-(3-溴苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(200mg,0.523mmol)于20mLDMF中的溶液中加入甲基环氧丙烷(0.20mL,2.2mmol)和碳酸铯(340mg,1.04mmol)。将反应混合物在80℃搅拌6小时，然后冷却至室温，用乙酸乙酯稀释并过滤。滤液用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。残余物通过反相HPLC纯化并冻干，得到14.2mg(6％)所期望的化合物。LCMS(ESI)m+H＝456.8.1H NMR(CDCl3,400MHz):δ10.16(d,J＝1.2Hz,1H),8.83-8.77(m,2H),8.76(t,J＝5.2Hz,1H),8.42(s,1H),8.03(s,1H),7.76(d,J＝8.4Hz,1H),7.55(d,J＝8.4Hz,1H),7.37(t,J＝8.0Hz,1H),7.06(dd,J＝3.6,6.8Hz,1H),4.12(s,2H),1.30(s,6H)。
实施例147
N-(5-(5-氰基-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
4-甲氧基-3-(4-硝基-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑-5-基)苯甲腈
向4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑(2g,8.2mmol)于50mLN,N-二甲基乙酰胺中的溶液中加入3-溴-4-甲氧基苯甲腈(2.1g,9.8mmol)、醋酸钯(II)(120mg,0.54mmol)、二(1-金刚烷基)-正丁基膦(250mg,0.7mmol)、碳酸钾(6.0g,43.3mmol)和三甲基乙酸(200mg,1.95mmol)。在室温搅拌的同时使氮气鼓泡通过反应混合物，保持10分钟，然后将反应混合物在120℃加热12小时。将反应混合物冷却至室温，在乙酸乙酯中稀释并用水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。粗制物在硅胶上通过快速色谱法纯化(0-25％乙酸乙酯/庚烷)得到730mg(12％)4-甲氧基-3-(4-硝基-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑-5-基)苯甲腈。LCMS(ESI)m+H＝375.1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.24(d,1H),7.86(m,1H),7.72(s,1H),7.12(d,1H),5.27(q,2H),3.86(s,3H),3.68(m,2H),0.89(m,2H),0.00(s,9H)。
3-(4-氨基-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑-5-基)-4-甲氧基苯甲腈
向4-甲氧基-3-(4-硝基-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑-5-基)苯甲腈(900mg,2.4mmol)于25mL乙醇中的溶液中加入50mL水、氯化铵(636mg,12mmol)和铁粉(806mg,14mmol)。将反应混合物在75℃搅拌6小时。冷却至室温后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，用硅藻土垫过滤，用二氯甲烷更多冲洗。将滤液加至150mL饱和碳酸氢钠水溶液中，用二氯甲烷萃取两次以上。合并的有机萃取物用硫酸镁干燥并浓缩，得到717mg(84％)3-(4-氨基-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑-5-基)-4-甲氧基苯甲腈，将其不经纯化即进行下面的反应。LCMS(ESI)m+H＝375.1。
N-(5-(5-氰基-2-甲氧基苯基)-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
在0℃，将3-(4-氨基-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑-5-基)-4-甲氧基苯甲腈(717mg,2.08mmol)/四氢呋喃(20mL)加至吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰氯(262mg,1.45mmol)/四氢呋喃(5mL)中。加入结束后，将混合物温热至室温，然后在该温度搅拌过夜。浓缩混合物得到1.0g(98％)N-(5-(5-氰基-2-甲氧基苯基)-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，将其不经纯化即进行下面的反应。LCMS(ESI)m+H＝490.1。
N-(5-(5-氰基-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向N-(5-(5-氰基-2-甲氧基苯基)-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(1.0g,2.04mmol)于20mL乙醇中的溶液中加入HCl(2.0mL，6M水溶液,12mmol)。然后将反应混合物在70℃搅拌4小时。冷却至室温后，形成浅黄色析出物，过滤出所述析出物并用甲醇和***冲洗。减少滤液体积至析出更多固体产物，过滤出所述固体产物。真空干燥合并收集的固体得到530mg(72％)N-(5-(5-氰基-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝360.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.98(s,1H),9.59(s,1H),9.30(dd,1H),8.73(d,1H),8.61(s,1H),8.23(s,1H),8.22(s,1H),7.78(s,1H),7.43(d,1H),7.25(s,1H),3.9(s,3H)。
实施例148
N-(3-(5-氰基-2-甲氧基苯基)-1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向N-(5-(5-氰基-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(200mg,0.557mmol)于20mLDMF中的溶液中加入甲基环氧丙烷(0.20mL,2.2mmol)和碳酸铯(363mg,1.11mmol)。将反应混合物在80℃搅拌6小时，然后用乙酸乙酯稀释并过滤，有机部分用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。粗制产物通过反相HPLC纯化并冻干得到27.2mg(11％)所期望的产物。LCMS(ESI)m+H＝431.9.1H NMR(CDCl3,400MHz):δ9.68(s,1H),8.78(dd,J＝2.0,6.8Hz,1H),8.71(s,1H),8.56(q,J＝1.6Hz,1H),8.37(s,1H),7.87(d,J＝2.4Hz,1H),7.72(dd,J＝2.0,8.4Hz,1H),7.1(d,J＝8.8Hz,1H),7.01(dd,J＝4.4,7.2Hz,1H),4.11(s,2H),3.91(s,3H),1.23(s,6H)。
实施例149
N-(5-(5-氟-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
5-(5-氟-2-甲氧基苯基)-4-硝基-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑
向4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑(2.98g,12.28mmol)于25mL N,N-二甲基乙酰胺中的溶液中加入2-溴-4-氟-1-甲氧基苯(3.54g,17.35mmol)、醋酸钯(II)(144mg,0.62mmol)、二(1-金刚烷基)-正丁基膦(330mg,0.93mmol)、碳酸钾(5.1g,37.1mmol)和三甲基乙酸(330mg,2.68mmol)。在室温搅拌的同时使氮气鼓泡通过反应混合物，保持10分钟。然后将反应混合物在120℃加热12小时。然后将反应混合物冷却至室温，在乙酸乙酯中稀释并用水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。粗制物在硅胶上通过快速色谱法纯化(0-25％乙酸乙酯/庚烷)得到1.0g(22％)5-(5-氟-2-甲氧基苯基)-4-硝基-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑。LCMS(ESI)m+H＝368.1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.25(s,1H),7.29(m,1H),7.18(dd,1H),7.01(dd,1H),5.31(d,2H),3.77(s,3H),3.65(t,2H),2.03(t,2H),0.92(q,2H),0(s,9H)。
5-(5-氟-2-甲氧基苯基)-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑-4-胺
向5-(5-氟-2-甲氧基苯基)-4-硝基-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑(1.0g,2.7mmol)于8mL乙醇中的溶液中加入16mL水、氯化铵(570mg,10.8mmol)和铁粉(760mg,13.5mmol)。将反应混合物在75℃搅拌6小时。冷却至室温后，将反应混合物用稀释并用硅藻土垫过滤，用更多二氯甲烷冲洗。将滤液加至150mL饱和碳酸氢钠水溶液中，用二氯甲烷萃取两次以上。合并的有机萃取物用硫酸镁干燥并浓缩，得到640mg(70％)5-(5-氟-2-甲氧基苯基)-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑-4-胺，将其不经纯化即进行下面的反应。LCMS(ESI)m+H＝338.1.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.37(m,2H),7.20(t,1H),7.04(dd,1H),5.42(t,2H),3.90(d,3H),3.65(t,2H),0.96(t,2H),0(s,9H)。
N-(5-(5-氟-2-甲氧基苯基)-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
在0℃，将5-(5-氟-2-甲氧基苯基)-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑-4-胺(580mg,1.72mmol)/四氢呋喃(40mL)加至吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰氯(320mg,1.72mmol)/THF(5mL)中。加完后，将混合物温热至室温，然后在该温度搅拌过夜。浓缩混合物得到330mg(40％)N-(5-(5-氟-2-甲氧基苯基)-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，将其不经纯化即进行下面的反应。LCMS(ESI)m+H＝483.1.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:9.63(s,1H),8.82(m,1H),8.76(s,1H),8.52(m,1H),8.42(s,1H),7.38(dd,1H),7.31(d,1H),7.22(m,1H),7.06(m,2H),5.42(d,2H),3.86(s,3H),3.72(m,2H),0.92(q,2H),0(s,9H)
N-(5-(5-氟-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向N-(5-(5-氟-2-甲氧基苯基)-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(330mg,0.68mmol)于14mL乙醇中的溶液中加入HCl(1.0mL，6M水溶液,6.0mmol)。然后将反应混合物在70℃搅拌6小时。冷却至室温后，形成浅黄色析出物，过滤出所述析出物，用甲醇和***冲洗。减少滤液体积至析出更多产物，过滤所述产物。真空干燥合并收集的固体得到220mg(92％)N-(5-(5-氟-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝353.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.68(s,1H),9.32(dd,1H),8.77(dd,1H),8.63(s,1H),8.19(s,1H),7.30(m,4H),3.82(d,3H)。
实施例150
N-(3-(5-氟-2-甲氧基苯基)-1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向化合物8(200mg,0.57mmol)于10mL DMF中的溶液中加入甲基环氧丙烷(0.41g,5.7mmol)和碳酸铯(560mg,1.71mmol)。将反应混合物在80℃搅拌6小时，然后用乙酸乙酯稀释并过滤，有机部分用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。粗制产物通过反相HPLC纯化并冻干得到69.5mg(29％)所期望的化合物。LCMS(ESI)m+Na＝447.1.1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.83(s,1H),8.80-8.78(dd,J＝2.0,6.8Hz,1H),8.73(s,1H),8.56-8.54(dd,J＝1.6,4.0Hz,1H),8.36(s,1H),7.33(dd,J＝3.2,8.8Hz,1H),7.11-7.08(m,1H),7.02-6.97(m,2H),4.12(s,1H),3.85(s,3H),1.24(s,6H).
实施例151
N-(3-(5-氯-2-环丙氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
5-氯-2-(2-氯乙氧基)苯甲酸甲基酯
向5-氯-2-羟基苯甲酸甲基酯(54.06g,0.29mol)于300mL无水DMF中的溶液中加入4-甲基苯磺酸2-氯乙基酯(81.6g,0.35mol)和Cs2CO3(142g,0.44mol)。将混合物在60-70℃搅拌过夜，然后加入水。有白色固体从溶液中析出，过滤收集并与甲苯共蒸发得到76.1g(88％)5-氯-2-(2-氯乙氧基)苯甲酸甲基酯。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.76(d,1H),7.40(dd,1H),6.91(d,1H),4.27(t,2H),3.87(s,3H),3.83(t,2H)。
5-氯-2-(乙烯基氧基)苯甲酸甲基酯
在0℃，将叔丁醇钾(40.4g,0.36mol)逐份加至5-氯-2-(2-氯乙氧基)苯甲酸甲基酯(76g,0.3mol)于600mLTHF中的溶液中。在该温度搅拌1小时后，TLC显示起始物质完全消耗，将混合物倒入冰水中。水层用EtOAc(200mL)萃取两次，蒸干合并的有机物。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(己烷/EtOAc＝50:1～30:1)得到22g(34％)5-氯-2-(乙烯基氧基)苯甲酸甲基酯。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.76(d,1H),7.38(dd,1H),7.00(d,1H),6.52(dd,1H),4.67(dd，1H)，4.44(dd，1H)，3.83(s，3H)。
5-氯-2-环丙氧基苯甲酸甲基酯
氮气气氛中，向5-氯-2-(乙烯基氧基)苯甲酸甲基酯于100mL二氯甲烷中的溶液中加入二乙基锌(1M己烷溶液)(200mL,0.2mol)。在冰浴中冷却溶液，将三氟乙酸(16mL)于二氯甲烷(100mL)中的溶液非常缓慢地滴加到混合物中。搅拌20分钟后，滴加CH2I2(16.4mL,0.2mol)于二氯甲烷(100mL)中的溶液。再搅拌20分钟后，加入5-氯-2-(乙烯基氧基)苯甲酸甲基酯(21.3g,0.1mol)于二氯甲烷(100mL)中的溶液，移去冰浴。8小时后，将混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭，用二氯甲烷萃取两次。合并的有机物用Na2SO4干燥，过滤并蒸干得到21g(92％)5-氯-2-环丙氧基苯甲酸甲基酯。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.75(d,1H),7.43(q,1H),3.86(s,3H),3.80(m,1H),0.85(m,4H)。
5-氯-2-环丙氧基苯甲酸
将5-氯-2-环丙氧基苯甲酸甲基酯溶解在THF/H2O(1:1,400mL)中，然后加入氢氧化钠(16g,0.4mol)。将混合物加热至60℃并搅拌1小时。将反应混合物冷却至室温，然后用4NHCl水溶液将pH调整至4，导致产物析出。过滤收集析出物并与甲苯共沸得到19g(96％)5-氯-2-环丙氧基苯甲酸。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:12.96(br,1H),7.58(m,2H),7.43(q,1H),3.91(m,1H),0.81(m,4H)。
5-氯-2-环丙氧基苯甲酰氯
将5-氯-2-环丙氧基苯甲酸(18.5g,87mmol)溶解在SOCl2中并使溶液回流4小时。真空浓缩反应混合物然后与甲苯共蒸发得到所期望的酰氯，其为无色油状物，将其直接用在下一步骤中。
3-(5-氯-2-环丙氧基苯基)-3-氧代丙酸乙基酯
在1000mL3-颈烧瓶中，在氮气中和在搅拌下，将乙腈(200mL)加至3-乙氧基-3-氧代丙酸钾(31.1g,182.7mmol)中。将反应混合物冷却至0℃，然后先后加入三乙胺(38.8mL,278.4mmol)和MgCl2(20.71g,217.5mmol)。将反应混合物温热至室温并再搅拌2.5小时。将所得浆液冷却至0℃，滴加5-氯-2-环丙氧基苯甲酰氯(18.5g,87mmol)，然后加入更多三乙胺(3.9mL,28mmol)。将混合物在室温搅拌过夜，然后真空浓缩。加入1L甲苯，将混合物冷却至0℃，然后加入125mLHCl(13％水溶液)。移去冰浴，将混合物搅拌30分钟，然后分离各层，有机物用水洗涤并蒸干。残余物通过硅胶色谱法纯化(己烷/EtOAc＝3:1)得到21.8g 3-(5-氯-2-环丙氧基苯基)-3-氧代丙酸乙基。LCMS(ESI)m+H＝283.0；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.81(t,1H),7.44(dd,1H),7.29(d,1H),4.24(m,2H),3.87(s,2H),3.78(m,1H),1.23(t,2H),0.85(m,4H)。
2-(5-氯-2-环丙氧基苯甲酰基)-3-(二甲基氨基)丙烯酸乙酯
将3-(5-氯-2-环丙氧基苯基)-3-氧代丙酸乙酯(21.8g,77mmol)溶解在150mLDMF-DMA中。将混合物回流加热2小时。蒸发得到黄色固体，将其不经进一步纯化即用在下一步骤中。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:7.69(s,1H),7.39(s,1H),7.29(dd,J＝2.4,8.8Hz,1H),7.15(d,J＝8.8Hz,1H),3.92(q,J＝6.8Hz,2H),3.69-3.65(m,1H),3.10(br,6H),0.88(t,J＝6.8Hz,3H),0.77-0.71(m,4H)。
3-(5-氯-2-环丙氧基苯基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯
将2-(5-氯-2-环丙氧基苯甲酰基)-3-(二甲基-氨基)丙烯酸乙酯(24g,71mmol)溶解在150mLHOAc中。将反应混合物冷却至0℃，然后滴加85％肼/水(25mL)。将混合物温热至室温，搅拌6小时，然后真空浓缩。残余物通过EtOAc/己烷＝1:2纯化得到24g标题化合物，其为糖浆。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:13.41(s,1H),8.26(s,0.5H),7.88(s,0.5H),7.49-7.24(m,3H),4.07-3.99(m,2H),3.82-3.74(m,1H),1.17-1.10(m,3H),0.73-0.46(m,4H)
向3-(5-氯-2-环丙氧基苯基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(12g,39mmol)于THF(200mL)中的溶液中加入60％氢化钠/矿物油(1.72g,43mmol)，将反应混合物搅拌10分钟。加入SEMCl(7.2g,43mmol)，将反应混合物在室温搅拌过夜。将混合物用冰-水淬灭并用EtOAc(300mLx 2)萃取。合并的有机物用硫酸钠干燥，真空浓缩得到16g标题化合物。
将来自最后一步的所得粗制酯溶解在200mL水中。将NaOH(7.32g,0.18mmol)加至溶液中，使混合物回流6小时，然后冷却至室温并用4N HCl中和至pH～7。过滤收集所得析出物，然后溶解在MeOH中。过滤出剩余的固体并弃去，蒸干滤液得到标题化合物(11.9g)，其为黄色固体。
将来自前面步骤的产物(8.5g,20.8mmol)溶解在甲苯中。加入DPPA(5.4mL,25mmol)和TEA(3.5mL,25mmol)，将混合物在室温搅拌1小时。加入叔丁醇(5.3mL,50mmol)。将混合物加热至90℃并搅拌过夜。真空浓缩反应混合物，残余物通过硅胶柱色谱法纯化(用己烷/EtOAc＝10:1洗脱)得到2.5g标题化合物(未分离)，将其直接用在下一步骤中。
3-(5-氯-2-环丙氧基苯基)-1H-吡唑-4-胺
将3-(5-氯-2-环丙氧基苯基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基氨基甲酸叔丁酯和5-(5-氯-2-环丙氧基苯基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基氨基甲酸叔丁酯溶解在50mLMeOH中。滴加50mL 4M HCl/MeOH。将混合物在室温搅拌过夜。蒸干混合物并通过硅胶色谱法纯化(用EtOAc洗脱)得到0.25g 3-(5-氯-2-环丙氧基苯基)-1H-吡唑-4-胺。LCMS(ESI)m+H＝249.8。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:12.32-12.10(br,1H),7.41-7.34(m,3H),7.09(s,1H),4.12(q,J＝5.2Hz,2H),2.94-3.88(m,3H),0.79-0.74(m,4H)
N-(3-(5-氯-2-环丙氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
将3-(5-氯-2-环丙氧基苯基)-1H-吡唑-4-胺(0.2g,0.8mmol)溶解在15mL无水THF中。先后加入吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰氯(0.17g,0.96mmol)和DIPEA(0.2g,1.6mmol)。将混合物在室温搅拌2小时，然后蒸干。残余物通过硅胶色谱法纯化(EtOAc作为洗脱剂)得到0.3g标题化合物。收率:95％.1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:12.93(d,1H),9.56(d,J＝5.2Hz,1H),9.34(d,J＝7.2Hz,1H),8.75-8.74(m,1H),8.65(s,1H),8.22(s,0.5H),8.05(s,0.5H),7.55-7.25(m,4H),3.97-3.94(m,1H),0.70-0.44(m,4H)。
实施例152
N-(3-(5-氰基-2-甲氧基苯基)-1-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
5-(氯甲基)-1-甲基-1H-吡唑
向搅拌的(1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲醇(200mg,1.8mmol)于20mLDCM中的溶液中加入SOCl2(262mg,2.2mmol)。使反应混合物回流2小时，然后蒸发溶剂，残余物与DCM共蒸发。残余物在DCM和水之间分配。分离有机相，用饱和NaHCO3、水和盐水洗涤，然后用硫酸镁干燥，过滤并浓缩得到93mg 5-(氯甲基)-1-甲基-1H-吡唑。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.40(s,1H),6.27(s,1H),4.60(s,2H),3.92(s,3H)。
N-(3-(5-氰基-2-甲氧基苯基)-1-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向N-(3-(5-氰基-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(144mg,0.40mmol)于3mLDMF中的溶液中加入5-(氯甲基)-1-甲基-1H-吡唑(78mg,0.6mmol)和碳酸铯(391mg,1.20mmol)。将反应混合物在60℃搅拌6小时，然后冷却至室温，用乙酸乙酯稀释并过滤。滤液用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。粗制产物通过反相HPLC纯化并冻干得到58.3mg(32％)N-(3-(5-氰基-2-甲氧基苯基)-1-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝454.1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:9.58(s,1H),8.74(dd,1H),8.64(s,1H),8.48(dd,1H),8.21(s,1H),7.81(s,1H),7.69(dd,1H),7.39(s,1H),7.07(d,1H),6.96(dd,1H),6.31(s,2H),5.33(s,2H),3.86(d,6H)。
实施例153
N-(3-(5-氰基-2-甲氧基苯基)-1-((1-甲基-1H-咪唑-2-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向N-(3-(5-氰基-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(200mg,0.56mmol)于3mL DMF中的溶液中加入2-(氯甲基)-1-甲基-1H-咪唑(109mg,0.84mmol)和碳酸铯(547mg,1.68mmol)。将反应混合物在室温搅拌3小时，然后用乙酸乙酯稀释并过滤。滤液用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。粗制产物通过反相HPLC纯化并冻干得到82.2mg(32％)N-(3-(5-氰基-2-甲氧基苯基)-1-((1-甲基-1H-咪唑-2-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝454.1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:9.53(s,1H),8.73(dd,1H),8.64(s,1H),8.48(dd,1H),8.26(s,1H),7.80(d,1H),7.68(dd,1H),7.06(d,1H),6.97(m,2H),6.83(s,1H),5.42(s,2H),3.85(s,3H),3.63(s,3H)。
实施例154
N-(3-(5-氰基-2-甲氧基苯基)-1-((1-甲基-1H-1,2,4-***-3-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
3-(氯甲基)-1-甲基-1H-1,2,4-***盐酸盐
将(1-甲基-1H-1,2,4-***-3-基)甲醇(0.25g,2.2mmol)溶解在10mLSOCl2中，回流2小时。蒸干混合物并与甲苯共蒸发。将所得白色固体(0.2g)不经进一步纯化即用在下一步骤中。
N-(3-(5-氰基-2-甲氧基苯基)-1-((1-甲基-1H-1,2,4-***-3-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
将N-(3-(5-氰基-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(0.15g,0.42mmol)溶解在10mLDMF中，然后加入3-(氯甲基)-1-甲基-1H-1,2,4-***盐酸盐(82mg,0.63mmol)和Cs2CO3(0.41g,1.26mmol)。将混合物在室温搅拌2小时，然后用硅藻土过滤并通过反相HPLC得到44.8mg(23％)N-(3-(5-氰基-2-甲氧基苯基)-1-((1-甲基-1H-1,2,4-***-3-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝455.1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:9.64(s,1H),9.34(d,1H),8.75(d,1H),8.64(s,1H),8.44(s,1H),8.35(s,1H),7.95(d,1H),7.73(d,1H),7.47(d,1H),7.28(dd,1H),5.39(s,2H),3.89(s,3H),3.84(s,3H)。
实施例155
N-(3-(5-氰基-2-甲氧基苯基)-1-((2-甲基-2H-1,2,4-***-3-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
5-(氯甲基)-1-甲基-1H-1,2,4-***盐酸盐
将(2-甲基-2H-1,2,4-***-3-基)甲醇(0.1g,0.88mmol)溶解在10mLSOCl2中，回流2小时。蒸干混合物并与甲苯共蒸发。将所得白色固体(约0.1g)不经进一步纯化即用于下一步骤。
N-(3-(5-氰基-2-甲氧基苯基)-1-((2-甲基-2H-1,2,4-***-3-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
将N-(3-(5-氰基-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(0.21g,0.58mmol)溶解在10mLDMF中。加入5-(氯甲基)-1-甲基-1H-1,2,4-***盐酸盐(约0.1g,0.88mmol)和Cs2CO3(0.57g,1.75mmol)，将混合物在室温搅拌过夜。用硅藻土过滤反应混合物并通过反相HPLC纯化得到60.8mg(23％)N-(3-(5-氰基-2-甲氧基苯基)-1-((2-甲基-2H-1,2,4-***-3-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝455.1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:9.64(s,1H),9.64(s,1H),9.33(dd,1H),8.74(dd,1H),8.64(s,1H),8.42(s,1H),7.95(dd,1H),7.89(s,1H),7.74(d,1H),7.46(d,1H),7.28(dd,1H),5.65(s,2H),3.90(s,3H),3.88(s,3H)。
实施例156
N-(3-(5-氰基-2-甲氧基苯基)-1-((4-甲基-4H-1,2,4-***-3-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
2-羟基乙酰肼
在0℃，将2-羟基乙酸乙酯(6g,0.12mol)滴加到肼一水合物(10.4g,0.1mol)于EtOH(50ml)中的溶液中。将混合物温热至室温，搅拌过夜。真空浓缩混合物得到所需产物，将其不经进一步纯化即用于下一步骤。收率:97％.1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.82(s,1H),5.32-5.13(m,1H),4.38-4.09(m,2H),3.80(s,2H)、
1-(N-甲基硫代亚胺酸)-2-(2-羟基乙酰基)肼(2-(2-hydroxyacetyl)-N-methylhydrazinecarbimidothioic acid)
在冰浴中，向2-羟基乙酰基肼(4.5g,50mmol)于EtOH中的溶液中滴加异硫氰酸甲酯(3.7g,50mmol)。加入结束后，使反应混合物至室温，然后在60℃搅拌24小时。然后加入冰水，继续搅拌15分钟。真空浓缩反应混合物得到标题化合物。收率:100％。LCMS(ESI)m+H＝164.0。
(5-巯基-4-甲基-4H-1,2,4-***-3-基)甲醇
将5N NaOH(50mmol)加至1-(N-甲基硫代亚胺酸)-2-(2-羟基乙酰基)肼(8.15g,50mmol)于EtOH中的溶液中，然后将混合物在60℃搅拌4小时。在冰浴中冷却混合物，用浓HCl将pH调整至～5-6。过滤析出的固体，用EtOH洗涤并真空干燥得到标题化合物。收率:83％。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:5.64(s,1H),4.46(s,2H),3.44(s,3H)。
(4-甲基-4H-1,2,4-***-3-基)甲醇
在室温，将NaNO2(70mg,1mmol)加至5N HNO3(10mL)中。在冰浴中冷却反应混合物，然后加入(5-巯基-4-甲基-4H-1,2,4-***-3-基)甲醇(360mg,2.5mmol)。然后将反应混合物温热至室温并搅拌1小时。加入水(30mL)，然后用固体K2CO3中和所得混合物直到pH为约7–8。真空浓缩反应混合物，将残余物溶解在DCM/MeOH(5:1)中，过滤并真空浓缩得到标题化合物。收率:92％.1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.38(s,1H),5.57(s,1H),4.56(d,J＝10.8Hz,2H),3.65(s,3H)。
3-(氯甲基)-4-甲基-4H-1,2,4-***
使(4-甲基-4H-1,2,4-***-3-基)甲醇(260mg,2.3mmol)于SOCl2(10mL)中的溶液回流1小时，然后真空浓缩得到所期望的化合物。收率:100％。LCMS(ESI)m+H＝132.1。
N-(3-(5-氰基-2-甲氧基苯基)-1-((4-甲基-4H-1,2,4-***-3-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
将N-(3-(5-氰基-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(120mg,0.334mmol)、3-(氯甲基)-4-甲基-4H-1,2,4-***(65mg,0.5mmol)和Cs2CO3(325mg,1mmol)悬浮在DMF中。将混合物在室温搅拌过夜，然后过滤并真空浓缩。残余物通过制备性HPLC纯化得到N-(3-(5-氰基-2-甲氧基苯基)-1-((4-甲基-4H-1,2,4-***-3-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(23.2mg,收率:15％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.59(s,1H),8.77(dd,J＝2.0,7.2Hz,1H),8.70(s,1H),8.51(dd,J＝2.0,4.4Hz,1H),8.39(s,1H),8.11(s,1H),7.82(d,J＝2.0Hz,1H),7.73(dd,J＝2.0,8.4Hz,1H),7.10(d,J＝8.4Hz,1H),6.99(q,J＝4.4,6.8Hz,1H),3.91(s,3H),3.72(s,3H)。
实施例157
N-(3-(3,3-二氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
1-(4-硝基-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑-5-基)哌啶-3-酮
在-78℃，向草酰氯(0.82g,6.44mmol)和DMSO(1.07g,13.75mmol)的溶液中滴加1-(4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-基)哌啶-3-醇(2.0g,5.85mmol)。将反应混合物在该温度搅拌15分钟，然后加入Et3N(4.1mL,29.25mmol)。将反应混合物温热至室温，再搅拌90分钟。真空浓缩反应混合物，残余物通过硅胶柱色谱法纯化(己烷/EtOAc＝50:1)得到1.9g(95％)1-(4-硝基-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑-5-基)哌啶-3-酮。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.09(s,1H),5.30(s,2H),3.68(m,2H),3.69(m,2H),3.48(m,2H),2.63(m,2H),2.14(m,2H),0.93(m,2H),0(s,9H)。
3,3-二氟-1-(4-硝基-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑-5-基)哌啶
向1-(4-硝基-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑-5-基)哌啶-3-酮(1.8g,5.28mmol)于20mL乙醇中的溶液中加入DAST(1.3g,7.92mmol)。将反应混合物在室温搅拌3小时，然后将100mL水加至混合物中。将混合物用二氯甲烷萃取两次，合并的有机萃取物用硫酸镁干燥并浓缩，得到1.4g(73％)3,3-二氟-1-(4-硝基-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑-5-基)哌啶。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.08(s,1H),5.41(m,2H),3.70(m,6H),2.11(m,2H),1.92(s,2H),0.94(m,2H),0(s,9H)。
5-(3,3-二氟哌啶-1-基)-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑-4-胺
向3,3-二氟-1-(4-硝基-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑-5-基)哌啶(1.4g,3.86mmol)于20mL乙醇中的溶液中加入40mL水、氯化铵(0.82mg,15.44mmol)和铁粉(1.08g,19.3mmol)。将反应混合物在70℃搅拌1小时。冷却至室温后，反应混合物用二氯甲烷稀释并用硅藻土垫过滤，用更多二氯甲烷冲洗。将滤液用二氯甲烷萃取两次，然后将合并的有机萃取物用硫酸镁干燥并浓缩，得到1.2g(93％)5-(3,3-二氟哌啶-1-基)-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑-4-胺。LCMS(ESI)m+H＝333.1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.09(s,1H),5.38(m,2H),3.74(m,6H),2.01(s,1H),1.96(s,2H),1.52(m,2H),0.92(m,2H),0(s,9H)。
N-(5-(3,3-二氟哌啶-1-基)-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
在0℃，向5-(3,3-二氟哌啶-1-基)-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑-4-胺(1.2g,3.61mmol)于30mLTHF中的溶液中加入DIPEA(1.3mL,7.22mmol)和吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰氯(720mg,3.97mmol)/THF(50mL)。加入结束后，将混合物温热至室温，然后搅拌过夜。真空浓缩混合物，残余物通过硅胶柱色谱法纯化(己烷:EtOAc＝3:1-1:1)得到1.0g(60％)N-(5-(3,3-二氟哌啶-1-基)-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝478.2；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:9.49(s,1H),8.87(dd,1H),8.75(s,1H),8.71(dd,1H),7.94(s,1H),7.10(dd,1H),5.40(s,2H),3.67(m,6H),2.06(s,2H),1.93(m,2H),0.95(m,2H),0(s,9H)。
N-(3-(3,3-二氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向N-(5-(3,3-二氟哌啶-1-基)-1-(2-((三甲基甲硅烷基)甲氧基)乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(1.0g,2.1mmol)于50mL乙醇中的溶液中加入HCl(1.75mL，6M水溶液,10.5mmol)。将反应混合物在70℃搅拌1小时。冷却至室温后，形成浅黄色析出物，过滤出所述析出物并用甲醇和***冲洗。然后减少滤液体积，过滤分离出更多固体产物。真空干燥合并收集的固体得到0.77g(94％)N-(3-(3,3-二氟哌啶-1-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝348.1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:9.59(s,1H),9.37(dd,1H),8.84(m,2H),8.01(s,1H),7.32(dd,1H),3.74(s,1H),3.33(m,2H),3.12(m,2H),2.10(m,2H),2.00(m,2H)。
实施例158
N-(3-(5-氰基-2-甲氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
6-羟基-5-(4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-甲腈
按照针对N-(5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-异戊基-4-硝基-1H-吡唑描述的操作制备标题化合物。
6-甲氧基-5-(4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-甲腈
向冰冷却的6-甲氧基-5-(4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-甲腈(57mg,0.16mmol,1当量)于1:1甲醇/甲苯溶液(3mL)中的溶液中加入三甲基甲硅烷基重氮甲烷(0.8mL,1.6mmol,2.0M***溶液)。50分钟后将反应混合物温热至24℃并真空浓缩。通过柱色谱法纯化(1:1庚烷/乙酸乙酯)得到产物(3.3mg,5.6％)。1H NMR(400MHz,CDCl3),δ:8.63(d,J＝2.2Hz,1H),8.21(s,1H),7.96(d,J＝2.2Hz,1H),5.27(m,2H),3.97(s,3H),3.63(m,2H),0.86(m,2H),–0.02(s,9H)。
5-(4-氨基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-基)-6-甲氧基吡啶-3-甲腈
在30℃，使6-甲氧基-5-(4-硝基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-甲腈(11mg,0.029mmol,1当量)于甲醇(4mL)中的溶液循环通过安装有钯/炭催化剂柱的连续流氢化反应器(ThalesNano)。真空浓缩所得溶液得到产物(7.1mg,70％粗制收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3),δ:8.52(d,J＝2.2Hz,1H),8.09(d,J＝2.2Hz,1H),5.21(s,2H),4.06(s,3H),3.58(m,2H),0.85(m,2H),–0.04(s,9H)。
N-(3-(5-氰基-2-甲氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
在24℃，向吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸(22.0mg,0.135mmol,6.56当量)、5-(4-氨基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-基)-6-甲氧基-吡啶-3-甲腈(7.1mg,0.020mmol,1当量)和2-氯-2,4-二甲氧基-1,3,5-三嗪(23.7mg,0.135当量,6.56当量)于乙腈(2mL)中的悬浮液中加入4-甲基吗啉(23uL,0.21mmol,10当量)。2天后，反应混合物在饱和碳酸氢钠水溶液(2mL)、饱和氯化钠水溶液(2mL)和乙酸乙酯(5mL)之间分配。分离有机物，水溶液用乙酸乙酯(2×5mL)萃取。合并的有机物用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗制物溶解在乙醇(3mL)和6N盐酸水溶液(1mL)中，加热至50℃。5小时后，真空浓缩反应混合物并通过制备性HPLC纯化得到白色固体(1.1mg,15％收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3),δ:9.72(s,1H),8.80(dd,J＝7.0,1.6Hz,1H),8.74(s,1H),8.66(m,1H),8.54(d,J＝2.2Hz,1H),8.47(s,1H),8.22(d,J＝1.9Hz,1H),7.04(dd,J＝7.0,4.2Hz,1H),4.11(s,3H)。LCMS(ESI):M+H＝361.1
实施例159
N-(1-(氮杂环丁烷-3-基)-3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
将N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(50.0mg,0.136mmol,1当量)、3-碘氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(230.3mg,0.813mmol,6.00当量)和碳酸铯(177mg,0.542mmol,4.00当量)于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的悬浮液在50℃加热。5小时后，反应混合物在饱和氯化钠水溶液(5mL)和乙酸乙酯(5mL)之间分配。水层用乙酸乙酯(2×5mL)萃取。合并的有机物用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。在24℃，将粗制残余物溶解在二氯甲烷(2mL)和三氟乙酸(2mL)中。5小时后，真空浓缩反应混合物并通过制备性HPLC纯化得到产物(12.7mg,22％收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δ:9.75(s,1H),9.36(m,1H),8.79(m,1H),8.67(s,1H),8.46(s,1H),7.53–7.56(m,2H),7.29–7.34(m,2H),5.45(m,1H),4.33(m,2H),4.23(m,2H),3.86(s,3H)。LCMS(ESI):M+H＝424.1。
实施例160
N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-(1-(氧杂环丁烷-3-基氨基)-1-氧代丙-2-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
2-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)丙酸叔丁酯
将N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(1.0g,2.7mmol,1当量)、2-溴丙酸叔丁酯(0.54mL,3.2mmol,1.2当量)和碳酸铯(1.1g,3.2mmol,1.2当量)于N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中的悬浮液在75℃加热3小时。浓缩反应混合物，所得残余物在半饱和氯化钠水溶液(50mL)和乙酸乙酯(50mL)之间分配。水溶液用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。用无水硫酸钠干燥收集的有机物，过滤并浓缩。通过柱色谱法纯化(90％乙酸乙酯/庚烷)得到产物(0.945g,70％)。LCMS(ESI):M+H＝497.2。
2-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)丙酸
将三氟乙酸(10mL)滴加到2-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)丙酸叔丁酯(0.945g,1.90mmol,1当量)于二氯甲烷(10mL)中的溶液中。2小时后，真空浓缩反应混合物得到粗制产物(定量)，将其不经进一步纯化即使用。LCMS(ESI):M+H＝441.1。
N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-(1-(氧杂环丁烷-3-基氨基)-1-氧代丙-2-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
将2-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)丙酸(66.0mg,0.150mmol,1当量)、氧杂环丁烷-3-胺盐酸盐(41.0mg,0.374mmol,2.50当量)、N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮杂苯并***-1-基)脲鎓六氟磷酸盐(114mg,0.299mmol,2.00当量)和N,N-二异丙基乙基胺(522μL,2.99mmol,20.0当量)于N,N-二甲基甲酰胺(1.0mL)中的溶液在50℃加热。6小时后，浓缩反应混合物，所得残余物在饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)和乙酸乙酯(10mL)之间分配。水溶液用乙酸乙酯(2x5mL)萃取。合并的有机物用硫酸钠无水干燥，过滤并浓缩。通过制备性HPLC纯化得到产物(39mg,51％收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δ:δ9.70(s,1H),9.33(m,1H),9.02(d,J＝6.5Hz,1H),8.77(dd,J＝4.2,1.5Hz,1H),8.65(s,1H),8.36(s,1H),7.50(dd,J＝8.9,2.7Hz,1H),7.38(d,J＝2.6Hz,1H),7.27–7.31(m,2H),5.06(q,J＝7.1Hz,1H),4.80(m,1H),4.73(m,2H),4.44(m,2H),3.84(s,3H),1.66(d,J＝7.1Hz,3H)。LCMS(ESI):M+H＝496.1。
实施例161
N-(1-(1-(氮杂环丁烷-1-基)-2-甲基-1-氧代丙-2-基)-3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
2-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙酸乙基酯
将N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(1.0g,2.7mmol,1当量)、2-溴异丁酸乙基酯(0.597mL,4.07mmol,1.50当量)和碳酸铯(1.77g,5.42mmol,2.00当量)于N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中的悬浮液在50℃加热。5小时后，真空浓缩反应混合物，所得残余物在饱和氯化钠水溶液(30mL)和乙酸乙酯(20mL)之间分配。水溶液用乙酸乙酯(2x20mL)萃取。合并的有机物用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗制产物(1.13g,84％收率)。LCMS(ESI):M+H＝483.2。
2-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙酸
向2-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙酸乙酯(0.918g,1.90mmol,1当量)的溶液中加入2N氢氧化钠水溶液(4mL)。18小时后，加入更多2N氢氧化钠水溶液(4mL)。5小时后，真空浓缩反应混合物，将所得残余物溶解在水(15mL)中。水溶液用6N盐酸水溶液酸化直到pH＝2。所得水溶液用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。合并的有机物用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗制酸(定量)。LCMS(ESI):M+H＝455.1。
N-(1-(1-(氮杂环丁烷-1-基)-2-甲基-1-氧代丙-2-基)-3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
将2-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙酸(0.050g,0.11mmol,1当量)、氮杂环丁烷(18.5μL,0.275mmol,2.50当量)、N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮杂苯并***-1-基)脲鎓六氟磷酸盐(84mg,0.20mmol,2.00当量)和N,N-二异丙基乙基胺(380μL,2.2mmol,20当量)于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的混合物在50℃加热。6小时后，浓缩反应混合物，所得残余物在饱和碳酸氢钠水溶液(5mL)和乙酸乙酯(5mL)之间分配。水溶液用乙酸乙酯(2x5mL)萃取。合并的有机物用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过制备性HPLC纯化得到产物(32mg,60％收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δ:9.70(s,1H),9.34(m,1H),8.77(dd,J＝4.2,1.5Hz,1H),8.64(s,1H),8.36(s,1H),7.52(dd,J＝8.9,2.7Hz,1H),7.41(d,J＝2.6Hz,1H),7.28–7.32(m,2H),3.88(s,2H),3.86(s,3H),3.41(m,2H),2.04(m,2H),1.72(s,6H)。LCMS(ESI):M+H＝494.1。
实施例162
N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-(2-(四氢呋喃-3-基氨基)乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-(2-氯乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
将N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(1.0g,2.7mmol,1当量)、对甲苯磺酸2-氯乙基酯(745μL,4.11mmol,1.5当量)和碳酸铯(2.16g,6.62mmol,2.4当量)于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的悬浮液在50℃加热。3小时后，真空浓缩反应混合物，所得残余物在乙酸乙酯(30mL)和半饱和氯化钠水溶液(30mL)之间分配。水溶液用乙酸乙酯(2x20mL)萃取。合并的有机物用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过柱色谱法纯化(乙酸乙酯)得到产物(950mg,77％收率)。LCMS(ESI):M+H＝432.1。
N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-(2-(四氢呋喃-3-基氨基)乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
将N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-(2-氯乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(0.040g,0.090mmol,1当量)、3-氨基四氢呋喃盐酸盐(29mg,0.23mmol,2.50当量)和N,N-二异丙基乙基胺(73μL,0.42mmol,4.5当量)于N-甲基吡咯烷酮(1mL)中的溶液在100℃加热。18小时后，反应混合物在乙酸乙酯(10mL)和半饱和氯化钠水溶液(10mL)之间分配。水溶液用乙酸乙酯(2x10mL)萃取。合并的有机物用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过制备性HPLC纯化得到产物(13.3mg,30％收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δ:9.67(s,1H),9.32(dd,J＝7.0,1.5Hz,1H),8.77(dd,J＝4.2,1.6Hz,1H),8.65(s,1H),8.31(s,1H),7.49(dd,J＝8.9,2.7Hz,1H),7.40(d,J＝2.7Hz,1H),7.27–7.30(m,2H),4.21(t,J＝6.4Hz,2H),3.85(s,3H),3.60–3.76(m,4H),3.38(m,2H),2.96(m,2H),1.96(m,1H),1.62(m,1H)。LCMS(ESI):M+H＝482.2。
实施例163
N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-(2-(环丙烷甲酰胺基)乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
在24℃，向N-(1-(2-氨基乙基)-3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(0.030g,0.073mmol,1当量)和N,N-二异丙基乙基胺(51μL,0.29mmol,4.0当量)于二氯甲烷(1mL)中的溶液中滴加环丙烷甲酰氯(0.020mL,0.22mmol,3.0当量)。1小时后，真空浓缩反应混合物。通过制备性HPLC纯化得到产物(16.5mg,47％收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δ:9.69(s,1H),9.33(dd,J＝7.0,1.6Hz,1H),8.78(dd,J＝4.1,1.5Hz,1H),8.66(s,1H),8.28(s,1H),8.22(t,J＝5.5Hz,1H),7.50(dd,J＝8.8,2.8Hz,1H),7.44(d,J＝2.7Hz,1H),7.27–7.31(m,2H),4.22(t,J＝6.1Hz,2H),3.85(s,3H),3.52(q,J＝6.0Hz,2H),1.55(m,1H),0.62–0.71(m,4H)。LCMS(ESI):M+H＝480.2。
实施例164
(S)-N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-(2-(2-羟基丙基氨基)-2-氧代乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
将2-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)乙酸(51mg,0.12mmol,1当量)、(2S)-1-氨基丙-2-醇(24μL,0.30mmol,2.5当量)、三乙胺(20μL)和N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮杂苯并***-1-基)脲鎓六氟磷酸盐(91mg,0.24mmol,2.0当量)于N,N-二甲基甲酰胺(1.2mL)中的溶液在80℃加热。6小时后，真空浓缩反应混合物，所得残余物在饱和碳酸氢钠水溶液(5mL)和乙酸乙酯(5mL)之间分配。水溶液用乙酸乙酯(2x5mL)萃取。合并的有机物用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过制备性HPLC纯化得到产物(17mg,29％收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δ:9.70(s,1H),9.35(dd,J＝7.0,1.5Hz,1H),8.70(dd,J＝4.2,1.5Hz,1H),8.66(s,1H),8.32(s,1H),8.11(t,J＝5.8Hz,1H),7.50(dd,J＝8.9,2.7Hz,1H),7.38(d,J＝2.7Hz,1H),7.27–7.32(m,2H),4.88(s,2H),4.74(d,J＝4.7Hz,1H),3.85(s,3H),3.68(m,1H),3.06(m,2H),1.04(d,J＝6.2Hz,3H)。LCMS(ESI):M+H＝484.2。
实施例165
(E)-N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-(3,3,3-三氟丙-1-烯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
甲磺酸(R)-3-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)-1,1,1-三氟丙-2-基酯
氮气气氛中，向(R)-N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-(3,3,3-三氟-2-羟基丙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(188.7mg,0.3724mmol,吡唑区域异构体的88:12混合物，如由1H NMR所确定)于无水二氯甲烷(3.5mL,0.1M)中的溶液中加入甲磺酰氯(61μL,0.78mmol)，然后加入经脱气的三乙胺(164μL,1.18mmol)。搅拌16.5小时后，反应混合物用二氯甲烷稀释并用饱和氯化铵水溶液洗涤。有机物用硫酸镁干燥。真空浓缩得到残余物，通过快速柱色谱法纯化(二氯甲烷/甲醇,100:0-96:4)得到目标化合物，其为黄色固体(198.1mg,90％)；RF＝0.28(CH2Cl2:MeOH,95:5)；主要区域异构体:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.75(s,1H),8.79(dd,J＝7.1,1.3Hz,1H),8.72(s,1H),8.54(dd,J＝4.0,1.4Hz,1H),8.41(s,1H),7.55(d,J＝2.6Hz,1H),7.41(dd,J＝8.7,2.6Hz,1H),7.03-6.98(m,2H),5.56(m,1H),4.67(dd,J＝14.7,2.4Hz,1H),4.43(dd,J＝14.6,10.2Hz,1H),3.84(s,3H),2.76(s,3H)。
(E)-N-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-(3,3,3-三氟丙-1-烯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
使甲磺酸(R)-(3-(3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)-1,1,1-三氟丙-2-基)酯(35.4mg,0.0633mmol)、碳酸铯(310mg,0.950mmol)和二甲基胺盐酸盐(155mg,1.90mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(1mL,0.06M)中的混合物经受微波辐射(180℃)45分钟。用二氯甲烷稀释并过滤固体后，将有机物浓缩至干。通过柱色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇,100:0-95:5)得到目标化合物，其为黄色固体(18.8mg,58％)。通过RP-HPLC除去不期望的区域异构体，得到8.0mg产物；RF＝0.36(CH2Cl2:iPrOH,90:10)；LCMS(ESI)m+H＝463.1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.82(s,1H),8.80(dd,J＝7.0,1.6Hz,1H),8.74(s,1H),8.56(s,1H),8.52(dd,J＝4.1,1.6Hz,1H),7.58(d,J＝2.6Hz,1H),7.52(dd,J＝14.0,1.9Hz,1H),7.45(dd,J＝8.8,2.6Hz,1H),7.07-6.95(m,2H),6.24(m,1H),3.85(s,3H)。
实施例166
N-(4-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-(2-羟基-2-甲基丙基)噻唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
2-氨基-2-(5-氯-2-甲氧基苯基)乙腈
在0℃，将5-氯-2-甲氧基-苯甲醛(根据专利US4602035制备)(2.04g,12.0mmol)于甲醇(80mL)中的溶液加至搅拌的***(0.90g)和氯化铵(1.50g)于氢氧化铵水溶液(33％溶液,30mL)中的溶液中，然后温热至室温，保持18小时。蒸干混合物，残余物在DCM和水之间分配，分离有机物，用盐水洗涤并真空蒸发得到2.21g(94％)2-氨基-2-(5-氯-2-甲氧基苯基)乙腈，其为橙色油状物。LCMS(ESI)m+H＝197.2。
3-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-N-((5-氯-2-甲氧基苯基)(氰基)甲基)-3-甲基丁酰胺
将2-氨基-2-(5-氯-2-甲氧基苯基)乙腈(500mg,2.54mmol)/DMF(2mL)加至3-(叔丁基-二甲基-甲硅烷基氧基)-3-甲基-丁酸(根据专利EP2025667制备)(590mg,2.54mmol)、二异丙基乙基胺(0.87mL,5.08mmol)和HATU(966mg,2.54mmol)于DMF(5mL)中的溶液中，搅拌18小时。加入乙酸乙酯，有机物用碳酸氢钠(饱和水溶液)和盐水洗涤，然后蒸干。残余物在硅胶上通过快速色谱法纯化(0-5％乙酸乙酯/二氯甲烷)得到740mg(73％)3-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-N-((5-氯-2-甲氧基苯基)(氰基)甲基)-3-甲基丁酰胺。LCMS(ESI)m+H＝411.4。
N-(2-氨基-1-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基丁酰胺
将过氧化氢(50％水溶液,413μL)加至3-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-N-((5-氯-2-甲氧基苯基)(氰基)甲基)-3-甲基丁酰胺(740mg,1.80mmol)和碳酸钾(609mg,4.41mmol)于DMSO(4mL)中的溶液中，搅拌18小时。加入乙酸乙酯，有机物用水和盐水洗涤，然后蒸干得到667mg(86％)N-(2-氨基-1-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基丁酰胺，其为白色固体。LCMS(ESI)m+H＝429.3。
2-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-甲基丙基)-4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-胺
将N-(2-氨基-1-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基丁酰胺(327mg,0.76mmol)、Lawesson’s试剂(308mg,0.76mmol)和吡啶(2.5mL)的混合物加热至95℃，保持18小时。加入DCM，有机物用碳酸氢钠(饱和水溶液)和盐水洗涤，然后蒸干。残余物在硅胶上通过快速色谱法纯化(DCM)得到107mg(33％)2-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-甲基丙基)-4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-胺。LCMS(ESI)m+H＝427.3。
N-(2-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-甲基丙基)-4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
将吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰氯(52.0mg,0.29mmol)、2-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-甲基丙基)-4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-胺(103mg,0.24mmol)和吡啶(2mL)的溶液在60℃搅拌2小时，然后在室温再搅拌72小时。加入DCM，有机物用水、碳酸氢钠(饱和水溶液)和盐水洗涤，然后蒸干。残余物在硅胶上通过快速色谱法纯化(0-20％乙酸乙酯/二氯甲烷)得到90.6mg(66％)N-(2-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-甲基丙基)-4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，其为黄色固体。LCMS(ESI)m+H＝572.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.45(s,br,1H)；9.38(dd,1H)；8.76(s,1H)；8.73-8.72(m,1H)；7.51(dd,1H)；7.45(d,1H)；7.35(d,1H)；7.31(d,1H)；3.79(s,3H)；3.06(s,2H)；1.32(s,6H)；0.90(s,9H)；0.11(s,6H)。
N-(4-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-(2-羟基-2-甲基丙基)噻唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
将N-(2-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-甲基丙基)-4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(20mg,35.0μmol)于三氟乙酸(3mL)中的溶液在室温搅拌7天。真空蒸发反应混合物，粗制产物通过反相HPLC纯化，然后冻干得到11.3mg(71％)N-(4-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-(2-羟基-2-甲基丙基)噻唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，其为白色固体。LCMS(ESI)m+H＝458.0；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.43(s,br,1H)；9.38(dd,1H)；8.74(dd,1H)；8.73(s,1H)；7.51(dd,1H)；7.46(d,1H)；7.35(s,1H)；7.32-7.31(m,1H)；4.76(s,1H)；3.79(s,3H)；3.01(s,2H)；1.19(s,6H)。
实施例167
N-(4-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-(2-甲基丙-1-烯基)噻唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
N-((5-氯-2-甲氧基苯基)(氰基)甲基)-3-羟基-3-甲基丁酰胺
按照针对3-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-N-((5-氯-2-甲氧基苯基)(氰基)甲基)-3-甲基丁酰胺描述的合成操作使用氨基-(5-氯-2-甲氧基-苯基)-乙腈和3-羟基-3-甲基-丁酸合成标题化合物，得到N-((5-氯-2-甲氧基苯基)(氰基)甲基)-3-羟基-3-甲基丁酰胺。LCMS(ESI)m+H＝297.1。
N-(2-氨基-1-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)-3-羟基-3-甲基丁酰胺
按照针对N-(2-氨基-1-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基丁酰胺描述的合成操作使用N-((5-氯-2-甲氧基苯基)(氰基)甲基)-3-羟基-3-甲基丁酰胺合成标题化合物，得到N-(2-氨基-1-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)-3-羟基-3-甲基丁酰胺，其为黄色胶状物。LCMS(ESI)m+Na＝337.4。
4-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-(2-甲基丙-1-烯基)噻唑-5-胺
将N-(2-氨基-1-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)-3-羟基-3-甲基丁酰胺(240mg,0.762mmol)、Lawesson’s试剂(308mg,0.76mmol)和吡啶(2.5mL)的混合物加热至100℃，保持18小时。冷却后，加入DCM，用水、碳酸氢钠(饱和水溶液)和盐水洗涤混合物并浓缩至干。分离出4-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-(2-甲基丙-1-烯基)噻唑-5-胺(51.0mg)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)m+H＝295.3；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.38(d,1H)；7.31(dd,1H)；7.09(d,1H)；6.24(t,1H)；5.50(s,br,2H)；3.83(s,3H)；2.02(d,3H)；1.89(s,3H)。
N-(4-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-(2-甲基丙-1-烯基)噻唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
按照针对N-(2-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-甲基丙基)-4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺描述的操作使用4-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-(2-甲基丙-1-烯基)噻唑-5-胺和吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰氯合成标题化合物，通过反相HPLC进一步纯化并冻干得到N-(4-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-(2-甲基丙-1-烯基)噻唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝440.0；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.50(s,br,1H)；9.39(dd,1H)；8.74(d,1H)；8.73(s,1H)；7.54(dd,1H)；7.49(d,1H)；7.37(d,1H)；7.34(dd,1H)；6.47(t,1H)；3.80(s,3H)；2.16(s,3H)；1.97(s,3H)。
实施例168
N-(2-溴-4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-3-氧代丙酸乙基酯
在0℃，将氢化钠(60％分散在矿物油中,2.17g,54.2mmol)逐份加至搅拌的1-(5-氯-2-甲氧基-苯基)-乙酮(10.0g,54.2mmol)于THF(100mL)中的溶液中。然后将混合物搅拌10分钟，接着加入碳酸二乙酯(7.68g,65.0mmol)，然后再搅拌1小时。将混合物温热至室温保持2小时，然后加热至65℃保持2小时。加入***，有机物用水和盐水洗涤，然后蒸干。残余物在硅胶上通过快速色谱法纯化(50-100％二氯甲烷/环己烷)得到3.41g 3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-3-氧代丙酸乙酯。LCMS(ESI)m+H＝257.2；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.59(d,1H)；7.38(dd,1H)；6.89(d,1H)；4.18(q,2H)；3.95(s,2H)；3.88(s,3H)；1.24(t,3H)。
2-溴-3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-3-氧代丙酸乙酯
将溴(0.70mL,13.6mmol)加至3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-3-氧代丙酸乙基酯(3.39g,13.2mmol)于二噁烷(25mL)中的溶液中，搅拌1小时。将反应混合物倒在冰水上，用乙酸乙酯萃取，有机物用水和盐水洗涤，蒸干得到2-溴-3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-3-氧代丙酸乙基酯。LCMS(ESI)m+H＝337.2
2-氨基-4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-甲酸乙酯
将2-溴-3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-3-氧代丙酸乙基酯(假定为13.2mmol)和硫基脲(1.01g,13.3mmol)于乙醇(25mL)中的混合物回流加热3小时，然后冷却至室温，保持18小时。过滤除去所得固体，真空蒸发滤液。将DCM加至残余物中，有机物用碳酸氢钠(饱和水溶液)，水和盐水洗涤并蒸干。研磨(DCM)残余物得到1.30g(31％)2-氨基-4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-甲酸乙酯，其为黄色固体。LCMS(ESI)m+H＝313.2.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.77(s,br,2H)；7.39(dd,1H)；7.22(d,1H)；7.05(d,1H)；4.00(q,2H)；3.70(s,3H)；1.04(t,3H)。
2-溴-4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-甲酸乙酯
将溴化铜(1.07g,4.79mmol)/乙腈(20mL)用氮气脱气并冷却至0℃，然后加入亚硝酸叔丁酯(0.80mL,6.00mmol)，然后加入2-氨基-4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-甲酸乙酯(1.25g,3.99mmol)于乙腈(20mL)中的悬浮液，在室温搅拌18小时。真空浓缩反应混合物，加入乙酸乙酯，有机物用碳酸氢钠(饱和水溶液)和盐水洗涤，然后蒸干得到1.40g(93％)2-溴-4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-甲酸乙基酯。LCMS(ESI)m+H＝378.1.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.50(dd,1H)；7.42(d,1H)；7.14(d,1H)4.16(q,2H)；3.73(s,3H)；1.12(t,3H)。
2-溴-4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-甲酸
将2-溴-4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-甲酸乙酯(1.40g,3.72mmol)，氢氧化钾(278mg)于THF(40mL)和水(10mL)中的混合物在环境温度搅拌20小时。将混合物用1M HCl水溶液(约8mL,2当量)处理，加入DCM，分离有机物并蒸干得到1.23g(95％)2-溴-4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-甲酸，其为黄色固体。LCMS(ESI)m+H＝350.1.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.47(dd,1H)；7.39(d,1H)；7.13(d,1H)；3.73(s,3H)。
2-溴-4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-基氨基甲酸叔丁酯
将2-溴-4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-甲酸(1.22g,3.50mmol)，叠氮膦酸二苯酯(963mg,3.50mmol)和三乙胺(354mg,3.50mmol)/叔丁醇(30mL)在85℃搅拌4小时。冷却后，反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配，分离有机物，然后用盐水洗涤并蒸干。所得残余物在硅胶上通过快速色谱法纯化(50-100％二氯甲烷/环己烷)得到970mg(66％)2-溴-4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-基氨基甲酸叔丁酯。LCMS(ESI)m+H＝421.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.43(dd,1H),7.30(d,1H)；7.11(d,1H)；3.77(s,3H)；1.45(s,9H)。
2-溴-4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-胺
将TFA(4.0mL)加至2-溴-4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-基氨基甲酸叔丁酯(360mg,0.86mmol)于DCM(10mL)和水(3滴)中的溶液中。将反应混合物在室温搅拌1.5小时，然后蒸干。将残余物吸收在DCM中，用碳酸氢钠(饱和水溶液)，水和盐水洗涤，真空浓缩得到2-溴-4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-胺，其为橙色残余物。LCMS(ESI)m+H＝321.3.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.36(d,1H)；7.34-7.32(m,1H)；7.10(d,1H)；3.83(s,3H)。
N-(2-溴-4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
按照针对N-(2-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-甲基丙基)-4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的合成操作使用2-溴-4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-胺和吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰氯制备标题化合物，在硅胶上通过快速色谱法进一步纯化后(0-40％乙酸乙酯/DCM)得到N-(2-溴-4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝465.8.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.68(s,br,1H)；9.41(dd,1H)；8.78(s,1H)；8.76(dd,1H)；7.57(dd,1H)；7.50(d,1H)；7.37-7.34(m,2H)；3.81(s,3H)。
实施例169
N-(4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
氮气中，将N-(2-溴-4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(50.0mg,0.11mmol)、Pd(PPh3)4(6.20mg,5.35μmol)、甲酸钠(10.9mg,0.16mmol)和DMF(0.5mL)密封在微波小瓶中，用微波辐射加热至130℃，保持10分钟。冷却反应混合物，然后加入DCM，有机物用碳酸氢钠(饱和水溶液)，水和盐水洗涤，干燥并蒸干。残余物在硅胶上通过快速色谱法纯化(0-40％乙酸乙酯/DCM)，然后通过反相HPLC进一步纯化并冻干得到11.1mg(27％)N-(4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，其为米色固体。LCMS(ESI)m+H＝386.0.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.56(s,1H)；9.39(dd,1H)；8.74-8.73(m,3H)；7.55(dd,1H)；7.49(d,1H)；7.37(d,1H)；7.34(dd,1H)；3.80(s,3H)。
实施例170
N-(4-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-甲基噻唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
4-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-甲基噻唑-5-甲酸乙酯
按照针对2-氨基-4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-甲酸乙基酯的合成操作使用2-溴-3-(5-氯-2-甲氧基-苯基)-3-氧代-丙酸乙基酯和硫代乙酰胺制备标题化合物，在硅胶上通过快速色谱法进行额外纯化(50-100％DCM/环己烷)得到4-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-甲基噻唑-5-甲酸乙基酯。LCMS(ESI)m+H＝321.4；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.38(d,1H)；7.33(dd,1H)；6.87(d,1H)；4.20(q,2H)；3.75(s,3H)；2.76(s,3H)；1.20(t,3H)。
4-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-甲基噻唑-5-甲酸
将4-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-甲基噻唑-5-甲酸乙酯(520mg,1.67mmol)和氢氧化钾(125mg)于THF(18mL)和水(4.5mL)中的混合物在室温搅拌20小时，然后在75℃再搅拌8小时。将溶液用1M HCl水溶液(pH 2)处理并用DCM萃取。蒸干有机物得到450mg(95％)4-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-甲基噻唑-5-甲酸，其为白色固体。LCMS(ESI)m+H＝284.3；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.43(dd,1H)；7.31(d,1H)；7.10(d,1H)；3.71(s,3H)；2.69(s,3H)。
4-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-甲基噻唑-5-基氨基甲酸叔丁基酯
按照针对2-溴-4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-基氨基甲酸叔丁酯的合成操作使用4-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-甲基噻唑-5-甲酸制备标题化合物得到4-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-甲基噻唑-5-基氨基甲酸叔丁酯。LCMS(ESI)m+H＝355.3；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.40(dd,1H)；7.32(d,1H)；7.11(d,1H)；3.77(s,3H)；2.55(s,3H)；1.42(s,9H)。
4-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-甲基噻唑-5-胺
将TFA(4.0mL)加至4-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-甲基噻唑-5-基氨基甲酸叔丁酯(315mg,0.89mmol)于DCM(10mL)和水(3滴)中的溶液中。将反应混合物在室温搅拌1.5小时，然后蒸干得到215mg(95％)4-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-甲基噻唑-5-胺，其为黄色固体。LCMS(ESI)m+H＝255.2。
N-(4-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-甲基噻唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
按照针对N-(2-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-甲基丙基)-4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的合成操作使用4-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-甲基噻唑-5-胺和吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰氯合成标题化合物，在硅胶上通过快速色谱法进一步纯化(0-100％乙酸乙酯/DCM)得到N-(4-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-甲基噻唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺，其为橙色固体。LCMS(ESI)m+H＝400.0；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.43(s,br,1H)；9.38(dd,1H)；8.75-8.73(m,1H)；8.72(s,1H)；7.52(dd,1H)；7.47(d,1H)；7.34-7.32(m,2H)；3.79(s,3H)；2.62(s,3H).
实施例171
N-(4-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)噻唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
N-((5-氯-2-甲氧基苯基)(氰基)甲基)四氢-2H-吡喃-4-甲酰胺
按照针对3-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-N-((5-氯-2-甲氧基苯基)(氰基)甲基)-3-甲基丁酰胺的合成操作使用氨基-(5-氯-2-甲氧基-苯基)-乙腈和四氢-2H-吡喃-4-甲酸制备标题化合物，得到N-((5-氯-2-甲氧基苯基)(氰基)甲基)四氢-2H-吡喃-4-甲酰胺，其为白色固体。LCMS(ESI)m+H＝309.3。
N-(2-氨基-1-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)四氢-2H-吡喃-4-甲酰胺
按照针对N-(2-氨基-1-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基丁酰胺的合成操作使用N-((5-氯-2-甲氧基苯基)(氰基)甲基)四氢-2H-吡喃-4-甲酰胺制备标题化合物，得到N-(2-氨基-1-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)四氢-2H-吡喃-4-甲酰胺，其为白色固体。LCMS(ESI)m+H＝327.3；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.30(d,br,1H)；7.31-7.31(m,2H)；7.24(s,br,1H)；7.13(s,br,1H)；7.05-7.01(d,1H)；5.62(d,1H)；3.91-3.81(m,2H)；3.79(s,3H)；3.30-3.24(m,2H)；2.55-2.54(m,1H)；1.56-1.55(m,4H)。
4-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)噻唑-5-胺
按照针对2-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-甲基丙基)-4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-胺的合成操作使用N-(2-氨基-1-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)四氢-2H-吡喃-4-甲酰胺制备化合物，得到4-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)噻唑-5-胺，其为白色胶状物。LCMS(ESI)m+H＝325.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.38(d,1H)；7.31(dd,1H)；7.09(d,1H)；5.31(s,br,2H)；3.90(d,2H)；3.84(s,3H)；3.43(m,2H)；3.04-2.99(m,1H)；1.90(d,2H)；1.66-1.66(m,2H)。
N-(4-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)噻唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
按照针对N-(2-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-甲基丙基)-4-(5-氯-2-甲氧基苯基)噻唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的合成操作使用N-(2-氨基-1-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)四氢-2H-吡喃-4-甲酰胺制备标题化合物，通过在***中研磨进行额外纯化得到N-(4-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)噻唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝470.0；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.44(s,br,1H)；9.38(dd,1H)；8.75(dd,1H)；8.73(s,1H)；7.52(dd,1H)；7.46(d,1H)；7.35(d,1H)；7.32-7.31(m,1H)；3.95-3.94(m,2H)；3.80(s,3H)；3.47(m,2H)；3.23(m,1H)；2.00(dd,2H)；1.77(m,2H)。
大体上按照上述实施例制备表2中所示的实施例172-508。对于表2中所示的每个化合物，所依据的实施例的编号在方法一栏中给出。
表2
在上面的测定(实施例A-C)中测试了实施例1-508的化合物，并发现所述化合物对于抑制JAK1和JAK2激酶中的一种或两种具有小于约1μM的Ki值。在上面的测定(实施例A-C)中测试了实施例1-132的化合物，并发现所述化合物对于抑制JAK2激酶具有小于约1μM的Ki值。在上面的测定(实施例A-C)中测试了实施例132-508的化合物，并发现所述化合物对于抑制JAK1激酶具有小于约1μM的Ki值。
下面的表3显示了本发明一些化合物在上面测定(实施例A-C)中测试出的酶活性数据(Ki,μM)。
表3
实施例 JAK1 JAK2 JAK3 TYK2i
63 0.153 0.023 0.200 0.140
6 0.0462 0.0049 0.152 0.0996
194 0.775 0.110 4.10 0.980
44 0.131 0.018 0.140 0.480
217 0.0021 0.0005 0.0055 0.0023
379 0.0859 0.0263 0.2400 0.4100
158 0.0048 0.0015 0.0530 0.0066
155 0.0042 0.0026 0.2100 0.0650
364 0.0023 0.0062 0.7100 0.0470
283 0.0007 0.0031 0.2700 0.0091
359 0.0010 0.0042 0.6900 0.0460
432 0.0015 0.0057 0.5700 0.0310
300 0.0005 0.0025 0.1700 0.0100
170 0.0007 0.0004 0.0130 0.0021
499 0.0016 0.0058 0.7800 0.0140
414 0.0038 0.0125 0.2100 0.0760
143 0.0120 0.0385 1.500 0.3500
41 0.0351 0.0033 0.0739 0.1040
38 0.0403 0.0057 0.1020 0.1310
28 0.1100 0.0137 0.1350 0.4590
51 0.0837 0.0152 0.1500 0.0980
54 1.20 0.159 0.850
109 0.0044 0.0010 0.0180 0.0056
395 0.1760 0.0313 0.3900 0.2300
0.762 0.104 2.80 1.70
参考2009年7月2日提交的美国临时申请61/222,918，出于所有目的，将61/222,918整体并入本申请作为参考。
尽管是以一定的具体程度描述和阐明了本发明，但是应理解的是，本申请的公开内容仅为示例性的，且本领域技术人员可诉诸各部分之间的组合和排列的多种变化而不违背本发明的精神和权利要求所限定的保护范围。

Claims (12)

1.式I化合物或其药用盐:
其中：
R1为氢或NH2；
R2为吡啶基，其中R2任选取代有1-3个R4；
R3为苯基、具有1个选自N的杂原子的5-6元杂环基，其中R3任选被1-5个R5取代；
R4独立地为C1-C6烷基、–(C0-C6烷基)OR6、–(C0-C6烷基)C(O)NR6R7、–(C0-C6烷基)(C3-C6环烷基)或–(C0-C6烷基)(包含一个或多个选自N和O的杂原子的3-6-元杂环基)，其中R4独立任选地被R15取代；
R5独立地为C1-C6烷基、氧代、卤素、–(C0烷基)CN或–(C0烷基)OR11，其中R5独立任选地被卤素取代；或
R6和R7独立地为氢或C1-C6烷基，或
R6和R7与它们连接的原子一起形成包含1个选自N的杂原子的3-6-元杂环基，所述杂环基任选被C1-C3烷基取代；
R11为C1-C6烷基；
R15为C1-C6烷基、卤素或–OR16；
R16为氢。
2.权利要求1所述的化合物，其中R4独立地选自：
其中波浪线表示与R2的连接点。
3.权利要求1所述的化合物，其中R3为苯基或吡啶基，其中R3任选被R5取代。
4.权利要求1所述的化合物，其中R3选自：
其中波浪线表示与R2的连接点。
5.权利要求1所述的化合物，其中R3为任选被1-2个R5取代的苯基。
6.选自以下的化合物：
N-(3-(2-氟苯基)吡啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺；
N-(3-(3-氟苯基)吡啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺；
N-(3-(3-氯苯基)吡啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
7.药物组合物，其包含权利要求1-6的化合物和药用载体、辅料或媒介物。
8.权利要求1-6的化合物在制备用于在患者中预防、治疗响应于对Janus激酶活性进行抑制的疾病或病症或减轻响应于对Janus激酶活性进行抑制的疾病或病症的严重程度的药物中的用途。
9.权利要求8的用途，其中所述疾病或病症为癌症、真性红细胞增多、原发性血小板增多症、骨髓纤维化、类风湿性关节炎、炎症性肠病、克罗恩氏病、银屑病、接触性皮炎或迟发超敏反应。
10.权利要求9的用途，其中所述癌症为慢性髓细胞性白血病。
11.权利要求1-6的化合物在制备用于治疗响应于对JAK激酶的抑制的癌症、真性红细胞增多、原发性血小板增多症、骨髓纤维化、类风湿性关节炎、炎症性肠病、克罗恩氏病、银屑病、接触性皮炎或迟发超敏反应的药物中的用途。
12.权利要求11的用途，其中所述癌症为慢性髓细胞性白血病。
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