CN104619695A - 作为可溶性鸟苷酸环化酶活化剂的烷氧吡唑 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及式I化合物及其药学上可接受的盐，其中R1、R2、R3、R4、R5、R6及R7如本文中所定义。本发明亦涉及包含所述化合物的药物组合物、使用所述化合物治疗各种疾病及病症的方法、制备所述化合物的方法及可用于所述方法中的中间体。

Description

作为可溶性鸟苷酸环化酶活化剂的烷氧吡唑
发明领域
本发明涉及杂环化合物，其可用作可溶性鸟苷酸环化酶活化剂且因此可用于治疗由可溶性鸟苷酸环化酶活性降低或减小而介导或维持的各种疾病，包括心血管疾病、肾病、糖尿病、纤维变性病症、泌尿科病症、神经病症及炎性病症。本发明亦涉及包含所述化合物的药物组合物、使用所述化合物治疗各种疾病及病症的方法、制备所述化合物的方法及可用于所述方法中的中间体。
背景
可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)为在许多细胞类型的细胞质中发现的一氧化氮(NO)受体。在人类中，功能性sGC为由α1或α2次单元与β1次单元组合构成且具有血红素辅基(heme prosthetic)的异源二聚体。在非病理生理状况下，NO与sGC的血红素结合活化该酶，从而催化鸟苷-5'-三磷酸(GTP)转化成环单磷酸鸟苷(cGMP)。cGMP为第二信使，其通过调控cGMP依赖性蛋白激酶(PKG)异型体、磷酸二酯酶及cGMP门控离子通道而发挥效应。在此种情况下，已证实sGC调控与包括以下疾病在内的疾病相关的诸多途径：动脉高血压、肺高血压、动脉粥样硬化、心脏衰竭、肝硬化、肾纤维化及***障碍(O.Evgenov等人，Nature Reviews，2006，5，755-768及Y.Wang-Rosenke等人，Curr.Med.Chem.，2008，15，1396-1406)。
在正常情况下，sGC中的铁以能够与NO及一氧化碳(CO)结合的亚铁状态存在。然而，公开的报导表明，在各种疾病中可能出现的氧化压力的情况下，血红素铁被氧化成无法被NO或CO活化的高铁状态。曾有人假设NO无法通过具有氧化的血红素铁的sGC到达信号，可能导致疾病过程。最近，已阐述以血红素依赖性(sGC刺激剂)及血红素独立性(sGC活化剂)方式加强sGC活性的两类新颖化合物。sGC刺激剂的活性可与NO起协同作用从而增加cGMP的产生，同时sGC活化剂仅与NO具有相加效应从而提高cGMP含量(O.Evgenov等人，Nature Reviews，2006，5，755-768)。已证实sGC的刺激剂及活化剂二者在动物疾病模型中有益处。sGC的活化剂的优点在于能够优先靶向不健全的非功能形式的酶。sGC活化剂包括BAY 58-2667(Cinaciguat)(J-P Stasch等人，Brit J.Pharmacol.，2002，136，773-783)及HMR-1766(Ataciguat)(U.Schindler等人，2006，Mol.Pharmacol.，69，1260-1268)。
NO在维持正常细胞及组织功能中具有重要作用。然而，NO途径中的充分信号转导可在众多步骤中中断。NO信号转导可因一氧化氮合成酶(NOS)的含量、NOS活性、NO生物利用度、sGC含量及sGC活性降低而受损。sGC活化剂可避开由所有所述损害引起的功能障碍。由于sGC活化发生在NO合成或NO利用的下游，因此所述缺陷不会影响sGC活化剂的活性。如上所述，功能受到血红素铁氧化破坏的sGC的活性可由sGC活化剂来校正。因此，sGC活化剂可在由NO途径中的缺陷信号转导造成的许多疾病中提供益处。
sGC的活化可为动脉粥样硬化及动脉硬化提供治疗益处。已证实Cinaciguat治疗可在因大鼠的颈动脉丝网损伤(wire injury)而引起的内皮剥脱后预防新内膜增生(K.Hirschberg等人，Cardiovasc.Res.，2010，87，增刊1，S100，摘要343)。Ataciguat抑制喂养高脂肪饮食的ApoE-/-小鼠中动脉粥样硬化斑的形成(M.van Eickels，BMC Pharmacology，2007，7，增刊1，S4)。内皮一氧化氮合成酶(eNOS)缺陷小鼠中的NO产生有所降低，这使得响应于应营养过量而增加血管炎症及胰岛素抗性增加。在同一研究中，磷酸二酯酶5(PDE5)抑制剂西地那非(sildenafil)降低喂养高脂肪饮食的小鼠中的血管炎症及胰岛素抗性(N.Rizzo等人，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.，2010，30，758-765)。最后，在使大鼠颈动脉出现体内球囊损伤后，sGC刺激剂(YC-1)抑制新内膜形成(C.Wu，J.Pharmacol.Sci.，2004，94，252-260)。
糖尿病的并发症可因sGC活化而有所减少。缺乏PKG的胰岛中失去葡萄糖诱导的胰高血糖素释放抑制，因此表明sGC介导的cGMP产生在葡萄糖调节中有作用(V.Leiss等人，BMC Pharmacology，2009，9，增刊1，P40)。
临床上充分确认，因利用PDE5抑制剂治疗而引起的cGMP的提高对于***障碍(ED)的治疗较有效。然而，30％的ED患者对PDE5抑制剂的治疗有抗性(S.Gur等人，Curr.Pharm.Des.，2010，16，1619-1633)。sGC刺激剂BAY-41-2272能够以sGC依赖性方式使海绵体肌肉放松，因此表明sGC活性增加可有益于ED患者(C.Teixeira等人，J.Pharmacol.&Exp.Ther.，2007，322，1093-1102)。另外，个别地或与PDE5抑制剂组合使用的sGC刺激剂及sGC活化剂能够治疗动物模型的ED(WO 10/081647)。
有证据表明，sGC活化可用于预防组织纤维化，包括肺、肝及肾的纤维化。据信，上皮至间质的转换(EMT)及成纤维细胞至成肌纤维细胞的转化过程促成组织纤维化。当将Cinaciguat或BAY 41-2272与西地那非组合时，肺成纤维细胞至成肌纤维细胞的转化得以抑制(T.Dunkern等人，Eur.J.Pharm.，2007，572，12-22)。NO能够抑制肺泡上皮细胞的EMT(S.Vyas-Read等人，Am.J.Physiol.Lung Cell Mol.Physiol.，2007，293，1212-1221)，此表明sGC活化参与此过程。亦已显示NO抑制肾小球TGFβ信号转导(E.Dreieicher等人，J.Am.Soc.Nephrol.，2009，20，1963-1974)，此表明sGC活化可能够抑制肾小球硬化。在肝纤维化的猪血清模型及四氯化碳模型中，sGC活化剂(BAY 60-2260)有效抑制纤维化(A.Knorr等人，Arzneimittel-Forschung，2008，58，71-80)。
临床研究已证实使用sGC活化剂Cinaciguat治疗急性失代偿性心脏衰竭的有效性(H.Lapp等人，Circulation，2009，119，2781-2788)。此与犬起搏诱导的心脏衰竭模型的结果相一致，其中急性静脉内输注Cinaciguat能够解除心脏负担(G.Boerrigter等人，Hypertension，2007，49，1128-1133)。在大鼠心肌梗塞诱导的慢性心脏衰竭模型中，HMR 1766改良心脏功能且减少心脏纤维化，此效果通过雷米普利(ramipril)进一步加强(F.Daniela，Circulation，2009，120，增刊2，S852-S853)。
sGC的活化剂可用以治疗高血压。此已在临床研究中得到明确证实，其中Cinaciguat的剂量基于所达成血压减少的数量而逐渐增加(H.Lapp等人，Circulation，2009，119，2781-2788)。使用Cinaciguat的临床前研究已在先前显示sGC活化能够降低血压(J.-P.Stasch等人，2006，J.Clin.Invest.，116，2552-2561)。使用sGC活化剂HMR 1766亦已报导类似发现(U.Schindler等人，2006，Mol.Pharmacol.，69，1260-1268)。
sGC的活化可因对内皮的效应而减少炎症。BAY 41-2272及NO供体抑制eNOS缺陷小鼠中的白细胞滚动及黏附。已证实此可通过下调黏附分子P-选择素(P-selectin)的表达而得到介导(A.Ahluwalla等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，2004，101，1386-1391)。已显示NOS及sGC的抑制剂增加肠系膜微循环血管上由内毒素(LPS)诱导的ICAM表达。此可以以cGMP依赖性方式通过NO供体而减少。利用NOS或sGC抑制剂对小鼠的治疗增加由LPS或角叉菜胶诱导的嗜中性粒细胞迁移、滚动及黏附(D.Dal Secco，Nitric Oxide，2006，15，77-86)。已显示在体内及经分离心脏模型中使用BAY 58-2667对sGC的活化可保护免受缺血-再灌注的损伤(T.Krieg等人，Eur.Heart J.，2009，30，1607-6013)。在心脏麻痹性停搏及体外循环的犬模型中使用相同化合物获得类似结果(T.Radovits等人，Eur J.Cardiothorac.Surg.，2010)。
一些研究表明，sGC活化可能具有镇痛效应。在小鼠(扭体分析)及大鼠(爪痛觉过敏)的伤害感受的链佐霉素诱导的糖尿病模型中，因给予西地那非引起的cGMP含量升高阻断疼痛反应，又因NOS或sGC抑制剂而被去除(C.Patil等人，Pharm.，2004，72，190-195)。已在***(formalin)诱导的疼痛模型中证实sGC抑制剂1H-1,2,4.-噁二唑并4,2-a.喹噁啉-1-酮(ODQ)阻断各种药剂(包括美洛昔康(meloxicam)及二硒二苯)的镇痛效应(P.Aguirre-Banuelos等人，Eur.J.Pharmacol.，2000，395，9-13及L.Savegnago等人，J.Pharmacy Pharmacol.，2008，60，1679-1686)且在爪压模型中证实阻断赛拉嗪(xylazine)的镇痛效应(T.Romero等人，Eur.J.Pharmacol.，2009，613，64-67)。另外，Ataciguat在炎症触发的热痛觉过敏的角叉菜胶模型及小鼠神经性疼痛的保留神经损伤模型中具有镇痛作用(WO 09/043495)。
已显示PDE9(一种对在大脑中表达的cGMP具有特异性的磷酸二酯酶)的抑制可改良长效加强作用(F.van der Staay等人，Neuropharmacol.2008，55，908-918)。在中枢神经***中，sGC为催化cGMP的形成的主要酶(K.Domek-Lopacinska等人，Mol.Neurobiol.，2010，41，129-137)。因此，sGC活化可有益于治疗阿尔茨海默氏病(Alzheimer's disease)及帕金森氏病(Parkinson’s disease)。
在II期临床研究中，sGC刺激剂利奥西哌(riociguat)有效治疗慢性血栓栓塞性肺高血压及肺动脉高血压(H.Ghofrani等人，Eur.Respir.J.，2010，36，792-799)。所述发现扩展到以下临床前研究中：其中BAY 41-2272及Cinaciguat在小鼠(R.Dumitrascu等人，Circulation，2006，113，286-295)及羔羊(O.Evgenov等人，2007，Am.J.Respir.Crit.Care Med.，176，1138-1145)模型中降低肺高血压。在小鼠肺高血压模型中使用HMR 1766获得类似结果(N.Weissmann等人，2009，Am.J.Physiol.Lung Cell.Mol.Physiol.，297，L658-665)。
sGC的活化可治疗慢性肾病。BAY 58-2667及HMR 1766二者皆在大鼠肾病的次全肾切除术模型中改良肾功能及结构(P.Kalk等人，2006，Brit.J.Pharmacol.，148，853-859及K.Benz等人，2007，Kidney Blood Press.Res.，30，224-233)。通过在利用NOS抑制剂处理的高血压肾素转基因大鼠(TG(mRen2)27大鼠)中用BAY 58-2667治疗可改良肾功能及存活(J.-P.Stasch等人，2006，J.Clin.Invest.，116，2552-2561)。BAY 41-2272治疗在大鼠中由单侧肾切除术及抗thy1抗体治疗诱导的慢性肾病模型中保留肾功能及结构(Y.Wang等人，2005，Kidney Intl.，68，47-61)。由过量血液凝块造成的疾病可利用sGC活化剂来治疗。使用BAY 58-2667活化sGC能够抑制由各种活体外刺激诱导的血小板聚集。另外，此化合物抑制小鼠体内血栓形成并延长出血时间(J.-P.Stasch等人，2002，Brit.J.Pharmacol.，136，773-783)。在使用HMR 1766的另一研究中，在链佐霉素治疗的大鼠中体内血小板活化受到抑制(A.Schafer等人，2006，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.，2006，26，2813-2818)。
sGC活化亦可有益于泌尿科病症的治疗(WO/08138483)。此可通过使用PDE5抑制剂伐地那非(vardenafil)的临床研究来支持(C.Stief等人，2008，Eur.Urol.，53，1236-1244)。可溶性鸟苷酸环化酶刺激剂BAY 41-8543能够抑制患者试样中的***、尿道及膀胱平滑肌肉细胞增殖(B.Fibbi等人，2010，J.Sex.Med.，7，59-69)，由此提供进一步证据来支持sGC活化剂治疗泌尿科病症的实用性。
上述研究提供证据证明可使用sGC活化剂来治疗心血管疾病，包括高血压、动脉粥样硬化、外周动脉疾病、再狭窄、中风、心脏衰竭、冠状血管痉挛、脑血管痉挛、缺血/再灌注损伤、血栓栓塞性肺高血压、肺动脉高血压、稳定及不稳定性心绞痛、血栓栓塞性病症。另外，sGC活化剂可治疗肾病、糖尿病、纤维变性病症(包括肝、肾及肺的纤维变性病症)、泌尿科病症(包括膀胱过动症、良性***增生及***障碍)及神经病症(包括阿尔茨海默氏病、帕金森氏病以及神经性疼痛)。利用sGC活化剂的治疗亦可在例如牛皮癣、多发性硬化、关节炎、哮喘及慢性阻塞性肺病等炎性病症中提供益处。
发明概述
本发明提供活化或加强sGC且因此可用于治疗可因sGC活化或加强而减轻的各种疾病及病症(包括心血管疾病、炎性疾病及肾病)的新颖化合物。本发明亦涉及包含所述化合物的药物组合物、使用所述化合物治疗各种疾病及病症的方法、制备所述化合物的方法及可用于所述方法中的中间体。
在另一方面中，本发明提供可溶性鸟苷酸环化酶活化剂，其溶解性质与可接受的药物动力学性质相一致。如本领域所公知，溶解性较差的化合物可遭受较差的人类暴露。预计本发明化合物可具有与成为适宜药物相一致的暴露性质。
在另一方面中，本发明提供化合物，其代谢稳定性性质与可接受的药物动力学性质相一致。如本领域所公知，具有较差代谢稳定性的化合物不易于达成合意的治疗水平。预计本发明化合物可具有与成为适宜药物相一致的代谢稳定性性质。
发明详述
在一个实施方案中，提供下式I的化合物
其中：
A为含有一个氮及任选一个氧的5-7元饱和杂环基团，其中该杂环基团的一个碳任选经一或两个选自C1-3烷基及氧代基的基团取代；
R1为任选经甲氧基取代的C1-4烷基；
R2选自H、F、Cl、C1-3烷基、-CN、-OMe及-CF3；
R3选自H及-CH3；
R4选自H、F、-CH3及-OMe；
R5选自H、Cl、-CH3、-CH2CH3、-CF3、F及-OMe；
R6连接至A上的氮且选自H、C1-6烷基、-(CH2)nC3-6环烷基、-C(O)C1-6烷基、-(CH2)n杂环基、-(CH2)n芳基、-(CH2)n杂芳基、-SO2芳基、SO2C1-6烷基，其中该C1-6烷基、-(CH2)n杂环基、-(CH2)n环烷基、-(CH2)n芳基及-(CH2)n杂芳基任选经一至四个独立地选自C1-3烷基、卤素、C1-3烷氧基、-CF3、-OH、氧代基、-(CH2)1-3O(CH2)2-3OH及-SO2CH3的基团取代；
R7选自H、-CH3、-CH2CH3、-CF3、F及-CN；
n为0、1或2
或其盐。
在另一实施方案中，提供如上文实施方案中所阐述的化合物，其中：
A为含有一个氮的5-7元饱和杂环基团，其中该杂环基团的一个碳任选经一或两个C1-3烷基取代；
R1为C1-3烷基；
R2选自H、F、Cl、C1-3烷基、-CN、-OMe及-CF3；
R3选自H及-CH3；
R4选自H及F；
R5选自H、Cl及-CH3；
R6连接至A上的氮且选自H、C1-6烷基、-(CH2)nC3-6环烷基、-C(O)C1-6烷基、-(CH2)n杂环基、-(CH2)n芳基及-(CH2)n杂芳基，其中该C1-6烷基、-(CH2)n杂环基、-(CH2)n环烷基、-(CH2)n芳基及-(CH2)n杂芳基任选经一至四个独立地选自C1-3烷基、卤素、C1-3烷氧基、-CF3、-OH及-SO2CH3的基团取代；
R7为H；
且
n为0、1或2；
或其盐。
在另一实施方案中，提供如上文任一实施方案中所阐述的化合物，其中：
R1为甲基、乙基或异丙基；且
选自：
或其盐。
在另一实施方案中，提供如上文任一实施方案中所阐述的化合物，其中：
R2选自-CH3、F、Cl及-CF3；且
R6选自H、C1-6烷基、-(CH2)nC3-6环烷基、-C(O)C1-6烷基及-(CH2)n杂环基，其中该C1-6烷基、-(CH2)n环烷基及-(CH2)n杂环基任选经一至四个独立地选自C1-3烷基、卤素、C1-3烷氧基、-CF3、-OH及-SO2CH3的基团取代；
或其盐。
在另一实施方案中，提供上文任一实施方案中所阐述的化合物，其中R6中所提及的杂环基选自氧杂环丁基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、2-氧杂二环[3.2.0]庚基、[1,4]二噁烷基、8-氧杂二环[3.2.1]辛烷基、1-氧杂螺[4.5]癸烷基及吡咯烷-2-酮；
R6中所提及的杂芳基选自咪唑基、异噁唑基、吡嗪基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、噻唑基及4,5,6,7-四氢苯并噻唑基；
且R6中所提及的芳基为苯基；
或其盐。
在另一实施方案中，提供如上文任一实施方案中所阐述的化合物，其中：
R6为-(CH2)n杂环基，其中该杂环基选自氧杂环丁基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、2-氧杂二环[3.2.0]庚基、[1,4]二噁烷基、8-氧杂二环[3.2.1]辛烷基及1-氧杂螺[4.5]癸烷基；
或其盐。
在另一实施方案中，提供如上文任一实施方案中所阐述的化合物，其中：
R2为-CH3；
R3为H；
R4为H或-CH3；
R5为H或-CH3；
R7在R5的对位且为H、-CH3或-CH2CH3；
或其盐。
在另一实施方案中，提供如上文任一实施方案中所阐述的化合物，其中：
为
或其盐。
在另一实施方案中，提供如上文任一实施方案中所阐述的化合物，其中：
R3为H；且
R4为H；
或其盐。
表1显示可通过一般合成方案、实施例及本领域已知的方法制得的本发明代表性化合物。
表1
在一个实施方案中，本发明涉及上表1中所示的任一化合物及其药学上可接受的盐。
在另一实施方案中，本发明涉及表1中所示化合物的组(由化合物编号1、2、3、4、5、7、8、9、12、15、16、18、21、27、28、30、31、35、36、39、41、42、44、45、46、47、48、57、59、62、68、77、78、79、80、82、83、84、85、86、88、92、93及94组成)及其药学上可接受的盐。
在另一实施方案中，本发明涉及表1中所示化合物的组(由化合物编号95、97、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、136、137、139、140、141、142、145、146、152、153、154、155、157、158、159、161、162、163、164、165、166、167、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、184、185、186、187、188、189、191、193、194、195、196、197、198、199、201、202、203、204、205、206、207、208、210、211、212、213、214、215、216、220、222、223、224、225、227、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257组成)及其药学上可接受的盐。
除非特别指明，否则在整个说明书及随附权利要求书中，给定化学式或名称应涵盖其互变异构体及所有立体、光学及几何异构体(例如对映异构体、非对映异构体、E/Z异构体等)及外消旋体以及不同比例的单独对映异构体的混合物、非对映异构体的混合物，或所述异构体及对映异构体存在的上述形式中的任一者的混合物，以及盐(包括其药学上可接受的盐)及其溶剂合物(例如水合物，包括游离化合物的溶剂合物或化合物的盐的溶剂合物)。
一些式(I)化合物可以一种以上互变异构形式存在。本发明包括使用所有所述互变异构体的方法。
本发明包括式(I)化合物的药学上可接受的衍生物。“药学上可接受的衍生物”是指任一药学上可接受的盐或酯或在给予患者后能够(直接或间接)提供可用于本发明的化合物的任何其他化合物，或其药理学活性代谢产物，或药理学活性残余物。药理学活性代谢产物应理解为意指能够以酶方式或化学方式代谢的任一本发明化合物。此包括(例如)式(I)化合物的羟基化或氧化衍生物。
如本文所使用，“药学上可接受的盐”是指所公开化合物的衍生物，其中母体化合物为通过制备其酸式盐或碱式盐来修饰。药学上可接受的盐的实例包括(但不限于)碱性残基(例如胺)的无机酸盐或有机酸盐；酸性残基(例如羧酸)的碱性盐或有机盐；等等。例如，所述盐包括乙酸盐、抗坏血酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐(besylate)、碳酸氢盐、酒石酸氢盐、溴化物/氢溴酸盐、依地酸盐(edetate)、樟脑磺酸盐、碳酸盐、氯化物/盐酸盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、乙烷二磺酸盐、依托酸盐(estolate)、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、焦谷氨酸盐、羟乙酸盐、乙醇酰基对氨基苯基砷酸盐(glycollylarsanilate)、己基间苯二酚酸盐、海巴明盐(hydrabamine)、羟基马来酸盐、羟基萘甲酸盐、碘化物、羟乙磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲烷磺酸盐、甲基溴化物、甲基硝酸盐、甲基硫酸盐、黏酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、泛酸盐、苯基乙酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、次乙酸盐、琥珀酸盐、磺酰胺、硫酸盐、鞣酸盐、酒石酸盐、茶氯酸盐、甲苯磺酸盐、三乙碘化物、铵、苄星盐(benzathine)、氯普鲁卡因(chloroprocaine)、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺及普鲁卡因。其他药学上可接受的盐可利用来自金属(如铝、钙、锂、镁、钾、钠、锌等等)的阳离子形成。(亦参见Pharmaceutical salts，Birge，S.M.等人，J.Pharm.Sci.，(1977)，66，1-19)。
本发明的药学上可接受的盐可通过常用化学方法自含有碱性或酸性部分的母体化合物来合成。通常，所述盐可通过以下来制备：使所述化合物的游离酸或碱形式与足量的适当碱或酸于水中或于例如***、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈或其混合物等有机稀释剂中反应。
除上文所述酸以外的酸(其可例如用于纯化或分离本发明化合物)的盐(例如三氟乙酸盐)亦构成本发明的一部分。
另外，本发明范围涵盖式(I)化合物的前药的用途。前药包括那些在简单化学转化后经修饰而产生本发明化合物的化合物。简单化学转化包括水解、氧化及还原。具体而言，在将前药给予患者时，前药可转化成上文所公开的化合物，由此赋予预期的药理学效应。
如本领域技术人员应了解，本发明化合物仅为那些预期“化学上稳定”的化合物。例如，可具有“悬垂化合价(dangling)”或“碳阴离子(valency)”的化合物并非为本文所公开本发明方法所涵盖的化合物。
对于本文所公开的所有化合物，若命名与结构相冲突，则应理解化合物为由结构界定。
除非另有说明，否则如本说明书中所使用的所有术语皆应理解为其在本领域所知的普通含义。例如，“C1-4烷基”为含有1-4个碳的饱和脂肪族烃单价基团，例如甲基、乙基、正丙基、1-甲基乙基(异丙基)、正丁基或叔丁基；“C1-4烷氧基”为具有末端氧的C1-4烷基，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基。当结构上可能时且除非另有说明，否则所有烷基、烯基及炔基皆应理解为直链或支链、环化或未经环化。其他更特定定义如下：
术语“C1-n-烷基”(其中n为2至n的整数)单独使用或与另一基团组合使用时表示具有1至n个C原子的非环状、饱和、具支链或直链烃基团。例如，术语C1-5-烷基涵盖基团H3C-、H3C-CH2-、H3C-CH2-CH2-、H3C-CH(CH3)-、H3C-CH2-CH2-CH2-、H3C-CH2-CH(CH3)-、H3C-CH(CH3)-CH2-、H3C-C(CH3)2-、H3C-CH2-CH2-CH2-CH2-、H3C-CH2-CH2-CH(CH3)-、H3C-CH2-CH(CH3)-CH2-、H3C-CH(CH3)-CH2-CH2-、H3C-CH2-C(CH3)2-、H3C-C(CH3)2-CH2-、H3C-CH(CH3)-CH(CH3)-及H3C-CH2-CH(CH2CH3)-。
术语“C1-n亚烷基”(其中n为1至n的整数)单独使用或与另一基团组合使用时表示含有1至n个碳原子的非环状、直链或支链二价烷基。例如，术语C1-4-亚烷基包括-(CH2)-、-(CH2-CH2)-、-(CH(CH3))-、-(CH2-CH2-CH2)-、-(C(CH3)2)-、-(CH(CH2CH3))-、-(CH(CH3)-CH2)-、-(CH2-CH(CH3))-、-(CH2-CH2-CH2-CH2)-、-(CH2-CH2-CH(CH3))-、-(CH(CH3)-CH2-CH2)-、-(CH2-CH(CH3)-CH2)-、-(CH2-C(CH3)2)-、-(C(CH3)2-CH2)-、-(CH(CH3)-CH(CH3))-、-(CH2-CH(CH2CH3))-、-(CH(CH2CH3)-CH2)-、-(CH(CH2CH2CH3))-、-(CHCH(CH3)2)-及-C(CH3)(CH2CH3)-。
术语“C3-n-环烷基”(其中n为4至n的整数)单独使用或与另一基团组合使用时表示具有3至n个C原子的环状、饱和、无支链烃基团。例如，术语C3-7-环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基及环庚基。
如本文所使用，术语“杂原子”应理解为意指除碳以外的原子，例如O、N、S及P。
在所有烷基或碳链中，一或多个碳原子可任选经杂原子：O、S或N代替。应了解，若N未经取代则其为NH，亦应了解，在直链或支链的碳链内，杂原子可代替末端碳原子或内部碳原子。如上文所述，所述基团可经例如氧代基等基团取代以产生例如但不限于：烷氧基羰基、酰基、酰氨基及硫代基等定义。
如本文所使用，术语“芳基”单独使用或与另一基团组合使用时表示含有6个碳原子的碳环芳香族单环基团，其可进一步稠合至可为芳香族、饱和或不饱和的第二个5元或6元碳环基团。芳基包括(但不限于)苯基、二氢茚基、茚基、萘基、蒽基、菲基、四氢萘基及二氢萘基。
术语“杂芳基”意指芳香族5至6元单环杂芳基或芳香族7至11元杂芳基二环，其中至少一个环为芳香族，其中杂芳基环含有1至4个杂原子(例如N、O及S)。5至6元单环杂芳基环的非限制性实例包括呋喃基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻唑基、吡唑基、吡咯基、咪唑基、四唑基、***基、噻吩基、噻二唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、三嗪基及嘌呤基。7至11元杂芳基二环杂芳基环的非限制性实例包括苯并咪唑基、喹啉基、二氢-2H-喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、吲唑基、噻吩并[2,3-d]嘧啶基、吲哚基、异吲哚基、苯并呋喃基、苯并吡喃基、苯并间二氧杂环戊烯基、苯并噁唑基及苯并噻唑基。
术语“杂环基”意指稳定的非芳香族4至8元单环杂环基团或稳定的非芳香族6至11元稠合二环、桥接二环或螺环状杂环基团。5至11元杂环为由碳原子及一或多个、优选地一至四个选自氮、氧及硫的杂原子组成。杂环可为饱和或部分不饱和。非芳香族4至8元单环状杂环基团的非限制性实例包括四氢呋喃基、氮杂环丁基、吡咯烷基、吡喃基、四氢吡喃基、二噁烷基、硫吗啉基、1,1-二氧代基-1λ6-硫吗啉基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基及氮杂环庚烷基。非芳香族6至11元稠合二环基团的非限制性实例包括八氢吲哚基、八氢苯并呋喃基及八氢苯并噻吩基。非芳香族6至11元桥接二环基团的非限制性实例包括2-氮杂二环[2.2.1]庚烷基、3-氮杂二环[3.1.0]己烷基及3-氮杂二环[3.2.1]辛烷基。非芳香族6至11元螺环状杂环基团的非限制性实例包括7-氮杂-螺[3,3]庚烷基、7-螺[3,4]辛烷基及7-氮杂-螺[3,4]辛烷基。术语“杂环基”意欲包括所有可能的异构形式。
如本说明书中所使用，术语“卤素”应理解为意指溴、氯、氟或碘。定义“卤代”、“部分或完全卤代”、“部分或完全氟代”、“经一或多个卤素原子取代”包括(例如)一或多个碳原子上的单、二或三卤代衍生物。对于烷基而言，非限制性实施例可为-CH2CHF2、-CF3等。
本文所述各烷基、环烷基、杂环、芳基或杂芳基等应理解为任选部分或完全卤化。
如本文所使用，“氮”或N及“硫”或S包括氮及硫的任一氧化形式及任一碱性氮的季铵化形式。例如，对于-S-C1-6烷基而言，除非另有说明，否则此应理解为包括-S(O)-C1-6烷基及-S(O)2-C1-6烷基。同样，-S-Ra可在Ra为苯基时表示为苯基-S(O)m-，其中m为0、1或2。
一般合成方法
本发明化合物可通过下文所述的一般方法及实施例以及本领域技术人员已知的方法来制备。最佳反应条件及反应时间可依据所使用具体反应物而变化。除非另有说明，否则本领域技术人员可容易地选择溶剂、温度、压力及其他反应条件。具体操作提供于合成实施例部分中。下文合成中所使用的中间体可自市售购得或易于通过本领域技术人员已知的方法来制备。反应进展可通过例如薄层色谱(TLC)或高压液相色谱-质谱(HPLC-MS)等常用方法来监测。中间体及产物可通过本领域已知的方法(包括柱色谱、HPLC、制备型TLC或重结晶)来纯化。
可使用下文及合成实施例部分中所述方法来制备式I化合物。
式I化合物可如反应式1中所述来制备。
反应式1
如上文所阐释，使二酯II(R＝Me或Et)及肼III在例如乙醇等适宜溶剂中与例如碳酸钾(K2CO3)等适宜碱一起回流，从而得到羟基吡唑IV。通过(例如)使用三甲基甲硅烷基重氮甲烷(在一些情形下)或R1I及例如碳酸铯(Cs2CO3)等适宜碱来使化合物IV烷基化。或者，采用Mitsunobu条件使用乙醇来得到预期的烷氧吡唑氯吡啶V(R1＝Et)。使氯吡啶V与硼物质VI在例如四(三苯基)膦钯(0)等钯催化剂及例如Na2CO3等适宜碱存在下在1,2-DME(1,2-二甲氧基乙烷)水溶液中在微波辐射及120℃下偶合，从而得到VII。利用烷基溴VIII(其中X＝Cl、I或Br)使用例如碳酸铯(Cs2CO3)等碱在例如丙酮等溶剂中在约50℃下使酚中间体VII烷基化。随后利用例如三氟乙酸(TFA)等适宜酸使t-Boc基团去保护，得到化合物IX。利用预期的酮或醛使用例如NaBH3CN等适当氢化物来源在含有有机酸(例如AcOH)的溶剂(例如MeOH)中在约50℃下使胺IX还原胺化，随后利用例如LiOH水溶液等碱实施原位水解，得到预期的式I化合物。或者，利用烷基卤在例如碳酸铯(Cs2CO3)或N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)等适宜碱存在下在例如MeCN(乙腈)等溶剂中使胺IX烷基化，随后水解酯，得到预期的式I化合物。
UPLC/MS方法
通过UPLC/MS，使用以下方法之一来获得合成实施例部分中所报告的化合物的保留时间(RT)：
对于每种方法而言，以下各项为相同的：
UPLC/MS***组件-Acquity UPLC，配有PDA、SQ及ELS检测器。
PDA条件-检测：210nm至400nm。进样速率：20pt/秒。过滤器反应：快。
ELSD条件-增益：1000。进样速率：20pt/秒。漂移管温度：55℃。雾化器模式：冷却。气体压力：41psi。
MS条件-仪器：Acquity SQD与ESCi来源。离子化模式：ESI+/-。毛细管电压：3.5kV。锥电压：5V。提取器：1.3V。源温度：150℃。去溶剂化温度：350℃。去溶剂化气体：800L/小时。锥气体(cone gas)：50L/小时。
每种方法的具体条件如下：
方法A1
管柱-Waters BEH C18，2.1×50mm，1.7um粒径。
说明及梯度：中等极性快速梯度方法。ESI+/-离子模式80-1000Da。梯度：在1.19分钟内90％A至100％B，在100％B下保持1.70分钟。流速0.8mL/min。A＝(95％水5％乙腈0.05％甲酸)B＝(乙腈0.05％甲酸)。
试样注入体积：1uL
方法A2
管柱-Waters BEH C18，2.1×50mm，1.7um粒径。
说明及梯度：中等极性长梯度方法。ESI+/-离子模式80-1000Da。梯度：在4.45分钟内90％A至100％B，在100％B下保持4.58分钟。流速0.8mL/min。A＝(95％水5％乙腈0.05％甲酸)B＝(乙腈0.05％甲酸)。
试样注入体积：2uL
方法B1
管柱-CSH 2.1×50mm C18，1.7um粒径。
说明及梯度：中等极性快速梯度方法。ESI+/-离子模式80-1000Da。梯度：在1.19分钟内90％A至100％B，在100％B下保持1.70分钟。流速0.8mL/min。A＝(95％水5％乙腈0.05％甲酸)B＝(乙腈0.05％甲酸)。
试样注入体积：1uL
方法B2
管柱-CSH 2.1×50mm C18，1.7um粒径。
说明及梯度：中等极性长梯度方法。ESI+/-离子模式80-1000Da。梯度：在4.45分钟内90％A至100％B，在100％B下保持4.58分钟。流速0.8mL/min。A＝(95％水5％乙腈0.05％甲酸)B＝(乙腈0.05％甲酸)。
试样注入体积：2uL
除注明使用方法A2、方法B1或方法B2的化合物以外，所有化合物皆使用方法A1。
合成实施例
最终化合物以对应于表1中的化合物编号的化合物编号来命名。对于各个实施例而言，中间体为对应于反应式中所显示的数字及编号的带有连字符的编号给出。
实施例1：中间体1-[6-(2-羟基-3-甲基-苯基)-吡啶-2-基]-5-异丙氧基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(1-6)的制备
向含有EtOH(200mL)、K2CO3(20.05g，55.720mmol)及1-1(10.00g，69.65mmol)的圆底烧瓶中添加1-2(13.95mL，69.65mmol)。将所得混合物回流3h。冷却反应物，并通过过滤收集固体。***结漏斗(fritted funnel)去除此固体并将其置于烧杯中，向该烧杯中添加250mL 1.0N HCl(过量鼓泡)。确认该溶液为酸性(pH 2)，然后添加二氯甲烷(500mL)。搅拌混合物，直至所有固体皆溶解为止。收集有机层，将其经MgSO4干燥，并浓缩，从而得到灰白色固体状1-3(17.18g)。
将1-3(0.50g，1.87mmol)、2-碘丙烷(372.92μL，3.74mmol)、Cs2CO3(0.91g，2.80mmol)于DMA(9.0mL)中的反应混合物在150℃下在微波反应器中加热10min。将混合物添加至水中，并用EtOAc(2×)萃取。用水、盐水洗涤有机层，将其经MgSO4干燥，并浓缩。通过硅胶色谱使用12-100％EtOAc庚烷溶液梯度洗脱纯化粗制产物，从而得到预期的产物1-4(0.41g)。
向微波小瓶中添加1-4(1.00g，3.29mmol)、1-5(0.69g，4.52mmol)、Pd(PPh3)4(0.37g，0.32mmol)、DME(15.0mL)及2.0M Na2CO3(4.36mL，8.72mmol)。将反应混合物在微波反应器中在120℃下加热20min。用二氯甲烷(2×)萃取反应物，用水、盐水洗涤，将其经Na2SO4干燥，并浓缩。通过硅胶色谱使用12-100％EtOAc庚烷溶液梯度洗脱纯化所得物质，从而得到预期的产物1-6(0.41g)。
实施例2：中间体1-[6-(2-羟基-3-甲基-苯基)-吡啶-2-基]-5-甲氧基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(2-8)的制备
将中间体1-3(7.00g，26.15mmol)溶解于EtOAc/MeOH的1:1混合物(50.0mL)中。然后经由注射器缓慢添加TMSCHN2于己烷中的2.0M溶液(42.70mL，85.40mmol)。将反应物搅拌3h并通过添加乙酸(4.0mL)淬灭。将混合物搅拌10min，然后浓缩。通过硅胶色谱使用12-100％EtOAc庚烷溶液梯度洗脱纯化所得残余物，从而得到预期的灰白色固体状产物2-7(4.460g)。
向微波小瓶中添加2-7(1.50g，5.33mmol)、1-5(0.890g，5.86mmol)、Pd(PPh3)4(0.62g，0.532mmol)、DME(12.0mL)及2.0M Na2CO3(6.922mL，13.85mmol)。将反应混合物在微波反应器中在120℃下加热20min。用二氯甲烷(2×)萃取反应物，用水、盐水洗涤，将其经MgSO4干燥，并浓缩。通过硅胶色谱使用12-100％EtOAc庚烷溶液梯度洗脱纯化所得物质，从而得到预期的产物2-8(1.17g)。
以类似方式自适当试剂合成以下中间体：
实施例3：中间体5-乙氧基-1-[6-(2-羟基-3-甲基-苯基)-吡啶-2-基]-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(3-15)的制备
将1-(6-氯-吡啶-2-基)-5-羟基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯1-3(3.50g，13.08mmol)溶解于THF(90.0mL)中。添加三苯基膦(3.77g，14.383mmol)及乙醇(1.14mL，19.614mmol)，并将反应物冷却至0℃。在0℃下缓慢溶解所得悬浮液，同时经10min逐滴添加偶氮二甲酸二异丙基酯(3.09mL，15.691mmol)。使反应混合物升温至常温并将其搅拌16h。在真空中浓缩反应物，并将残余物溶解于最少量的二氯甲烷中，并使用3-50％EtOAc庚烷溶液的梯度对其进行硅胶色谱，从而得到预期的产物3-14(3.33g)。
向微波小瓶中添加3-14(250.0mg，0.85mmol)、1-5(134.9mg，0.89mmol)、Pd(PPh3)4(60.05mg，0.05mmol)、DME(5.0mL)及2.0M Na2CO3(1.06mL，2.11mmol)。将反应混合物在微波反应器中在120℃下加热20min。用二氯甲烷(2×)萃取反应物，用水、盐水洗涤，将其经MgSO4干燥，并浓缩。通过硅胶色谱使用12-100％EtOAc庚烷溶液梯度洗脱纯化所得物质，从而得到预期的产物3-15(227.0mg)。
以类似方式自适当试剂合成以下中间体：
实施例4：中间体6-溴甲基-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-甲酸叔丁基酯(4-19)的制备
将化合物4-17(12.50g，45.08mmol)在氮及25℃下溶解于无水THF(125.0mL)中。经由注射器添加硼烷THF复合物(99.17mL，99.17mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16h。缓慢添加水(10.0mL)，然后添加2.0M Na2CO3(15.0mL)。将此混合物搅拌15min，然后用EtOAc稀释，并收集有机层。用1.0MHCl冲洗有机层，将其经MgSO4干燥，并在真空中浓缩，从而得到油状物。通过硅胶色谱使用10-80％EtOAc庚烷溶液梯度洗脱纯化该油状物，从而得到预期的白色固体状产物4-18(11.78g)。
在0℃下向醇4-18(9.50g，36.08mmol)及N,N-二异丙基乙胺(9.43mL，54.11mmol)于二氯甲烷(200.0mL)中的溶液中添加二溴化三苯基膦(23.79g，54.11mmol)。将反应物搅拌1h并在真空中浓缩。纯化所得残余物通过硅胶色谱使用7-60％EtOAc庚烷溶液梯度洗脱，从而得到预期的白色固体状产物4-19(8.74g)。
以类似方式自适当试剂合成以下中间体：
实施例5：中间体6-溴甲基-5-甲基-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-甲酸叔丁基酯(5-34)的制备
在0℃下将酸5-23(350.0g，2.10mol)于THF(1.4L)中的溶液添加至LAH(95.9g，1.40mol)于THF(2.5L)中的浆液中。将混合物在室温下搅拌0.5h，然后将其加热至回流并保持1h。然后将混合物冷却至0℃，并通过添加饱和氯化铵水溶液缓慢淬灭。添加大量过量的固体Na2SO4及EtOAc，然后通过过滤收集固体。在真空中浓缩滤液，从而得到粗制5-24(350.0g)，将其直接用于下一步骤中。
在-10℃下向化合物5-24(294.0g，1.90mol)于二氯甲烷(2.2L)中的溶液中添加亚硫酰氯(SOCl2)(460.0g，3.90mol)。然后将反应混合物加热至回流并保持1h，随后在真空中浓缩，从而得到粗制5-25(298.0g)，将其直接用于下一步骤中。
将化合物5-25(298.0g，1.8mol)及NaCN(154.5g，2.1mol)于DMF(1.2L)中的混合物在室温下搅拌12h，然后用EtOAc及H2O萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过硅胶色谱(石油醚:EtOAc＝50:1)纯化残余物，从而得到中间体5-26(230.0g)。
将化合物5-26(180.0g，1.10mol)、雷尼镍(Raney Ni，40.0g)及氨水(250.0mL)于MeOH(1.0L)中的混合物在H2(50psi)及室温下搅拌5h。然后过滤混合物并浓缩，从而得到化合物5-27(165.0g)，将其直接用于下一步骤中。
将化合物5-27(165.0g，1.0mol)及甲醛(HCHO)水溶液(37wt％，30g，1.0mol)于甲酸(HCO2H)(1.5L)中的溶液在50℃下搅拌过夜，然后在真空中去除溶剂，从而得到化合物5-28(150.0g)，将其直接用于下一步骤中。
将化合物5-28(150.0g，847mmol)悬浮于HBr水溶液(48％，1.0L)中，然后将其加热至100℃过夜。在真空中去除溶剂，得到化合物5-29(195.0g)，将其直接用于下一步骤中。
向化合物5-29(195.0g，799mmol)于THF(1.0L)及H2O(1.0L)中的溶液中添加Et3N(242.0g，2.4mol)及Boc2O(174.0g，799mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜，然后用EtOAc萃取。用盐水洗涤合并的有机相，将其经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过硅胶色谱(使用10:1石油醚:EtOAc)纯化粗制产物，从而得到化合物5-30(100.0g)。
经由添加漏斗(addition funnel)向化合物5-30(100.0g，380mmol)及Et3N(76.8g，760mmol)于二氯甲烷(1.5L)中的冷却至0℃的溶液中添加三氟甲磺酸酐(Tf2O)(107.0g，380mmol)。在完成Tf2O的添加后，使溶液升温至室温并保持5h。然后用H2O及二氯甲烷处理反应混合物，并分离有机相，用盐水洗涤，将其经Na2SO4干燥，过滤，并在真空中浓缩。通过硅胶色谱(使用20:1石油醚:EtOAc)纯化残余物，从而得到化合物5-31(105.0g)。
将化合物5-31(50.0g，127mmol)与乙酸钯(II)(Pd(OAc)2)(5.0g)、dppp(5.0g)及Et3N(25.7g，254mmol)合并于EtOH(1.0L)中，然后在80℃及CO及4MPa的压力下搅拌过夜。将混合物冷却至室温，然后通过过滤去除固体。在真空中浓缩滤液，并通过硅胶色谱(使用20:1石油醚:EtOAc)纯化剩余残余物，从而得到化合物5-32(25.0g)。
经30min向LAH(12.5g，330mmol)于冷却至-30℃的THF(400mL)中的溶液中逐滴添加化合物5-32(35.0g，110mmol)于THF(400mL)中的溶液。在添加后，将反应混合物在0℃下搅拌30min，然后用H2O及二氯甲烷处理。分离有机相，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并在真空中浓缩。通过硅胶色谱(使用10:1石油醚:EtOAc)纯化粗制产物，从而得到预期的中间体5-33(21.1g)。
在0℃下向醇5-33(6.00g，21.63mmol)及N,N-二异丙基乙胺(5.65mL，32.45mmol)于二氯甲烷(200.0mL)中的溶液中添加二溴化三苯基膦(14.27g，32.45mmol)。将反应物搅拌1h并在真空中浓缩。通过硅胶色谱使用7-60％EtOAc庚烷溶液梯度洗脱纯化所得残余物，从而得到预期的白色固体状产物5-34(6.60g)。
实施例6：中间体6-溴甲基-5-氯-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-甲酸叔丁基酯(6-39)的制备
在-40℃及N2下向N,N,N'-三甲基-乙烷-1,2-二胺(45.0g，442.0mmol)于THF(500mL)中的溶液中添加正丁基锂(n-BuLi)溶液(177.0mL，442mmol)。将混合物在-40℃下搅拌30min。在将混合物冷却至-70℃后，将于THF(250mL)中的化合物6-35(50.0g，368mmol)添加至反应混合物中。使混合物升温至0℃并搅拌30min。然后将反应混合物冷却至-78℃，并添加n-BuLi(177.0mL，442mmol)。使混合物升温至10℃并将其冷却至-30℃，之后将其添加至C2Cl6(287.0g，1.1mol)于THF(600mL)中的溶液中。将混合物在室温下搅拌2h。将反应混合物倒入1000mL 10％HCl溶液中并用EtOAc萃取。用盐水洗涤有机层，将其经Na2SO4干燥，浓缩，并通过硅胶色谱纯化，从而得到化合物6-36(36.7g)。
在室温及N2下，向化合物6-36(105.0g，615mmol)于HOAc(700mL)中的溶液中添加NH4OAc(47.4g，615mmol)。向此反应混合物中添加MeNO2(188.0g，3.08mol)，并使混合物升温至40℃并保持12h，然后在85℃下搅拌6h。TLC显示完成反应。用H2O淬灭混合物并用二氯甲烷萃取。用盐水洗涤有机层，将其经Na2SO4干燥，浓缩，并通过硅胶色谱纯化，从而得到化合物6-37(97.5g)。
在-20℃下向化合物6-37(48.0g，225mmol)于THF(900mL)中的溶液中添加LAH(34.1g，899mol)。将混合物在室温下搅拌5h并在50℃下搅拌30min。用H2O淬灭混合物并用二氯甲烷萃取。用盐水洗涤有机层，将其经Na2SO4干燥，并浓缩，从而得到化合物6-38(28.0g)，将其直接用于下一步骤中。
根据实施例5中所阐述的操作自中间体6-38来制备以下化合物：
实施例7：5-异丙氧基-1-(6-{3-甲基-2-[2-(四氢-吡喃-4-基)-1,2,3,4-四氢-异喹啉-6-基甲氧基]-苯基}-吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-甲酸(1)的制备
将中间体1-6(373.0mg，0.88mmol)、溴化物4-19(287.1mg，0.88mmol)及Cs2CO3(573.5mg，1.76mmol)合并于丙酮(11.0mL)中，并加热至50℃并保持5h。用EtOAc萃取反应混合物，用盐水洗涤，将其经MgSO4干燥，并浓缩。通过硅胶色谱(使用5-100％EtOAc/庚烷的梯度)纯化所得物质，从而得到预期的中间体7-40(502.0mg)。
将氨基甲酸酯7-40(496.0mg，0.79mmol)溶解于二氯甲烷(4.0mL)中，并在室温下用TFA(1.0mL)处理。在1h后，用饱和NaHCO3溶液中和混合物，并用疏水玻璃料(hydrophobic frit)分离各层。浓缩有机滤液，从而得到7-41(375.0mg)。
将胺7-41(98.0mg，0.19mmol)与分子筛(30mg)、四氢吡喃4-酮(28μL，0.28mmol)、AcOH(20μL)及Na(CN)BH3(24mg，0.38mmol)合并于MeOH(4mL)中。将混合物在室温下搅拌30min，然后将其加热至50℃并保持12h。用THF(1.0mL)及水(1mL)稀释混合物。向此添加LiOH(42.8mg，1.86mmol)，并将反应物加热至50℃并保持2h。然后将其在N2下浓缩，用1:1MeOH/DMSO研磨，借助0.45微米注射过滤器过滤，并通过在GilsonRP-HPLC上梯度洗脱(10-100％MeCN/水+0.1％HCO2H)来纯化滤液。在真空中浓缩，从而得到标题化合物1(64.0mg)。MS，电喷射，m/z＝583.3[M+H]，RT 0.71min。
实施例7A：操作与实施例7相同，然而，在还原胺化步骤期间，用NaCNBH3/AcOH/MeOH取代于二氯甲烷中的Na(OAc)3BH。
表1的以下化合物根据实施例7中阐述的操作使用适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物2：MS，电喷射，m/z＝617.3[M+H]，RT 0.79min；
化合物37：MS，电喷射，m/z＝541.3[M+H]，RT 0.75min；
化合物38：MS，电喷射，m/z＝571.4[M+H]，RT 0.76min；
化合物39：MS，电喷射，m/z＝555.3[M+H]，RT 0.73min；
化合物40：MS，电喷射，m/z＝583.3[M+H]，RT 0.73min；
化合物41：MS，电喷射，m/z＝569.3[M+H]，RT 0.73min；
化合物42：MS，电喷射，m/z＝583.3[M+H]，RT 0.75min；
化合物109：MS，电喷射，m/z＝569.4[M+H]，RT 0.77min；
拆分：制备型ChiralPak AD-H，40％异丙醇(1％iPrNH2):CO2，80ml/min.，100巴，25℃
化合物111：MS，电喷射，m/z＝569.4[M+H]，RT 0.77min；
拆分：制备型ChiralPak AD-H，40％异丙醇(1％iPrNH2):CO2，80ml/min.，100巴，25℃
化合物113：MS，电喷射，m/z＝583.3[M+H]，RT 0.75min；
拆分：制备型Lux Cellulose 2，60％MeOH(1％iPrNH2):CO2，55ml/min.，100巴，25℃
化合物115：MS，电喷射，m/z＝583.3[M+H]，RT 0.75min；
拆分：制备型Lux Cellulose 2，60％MeOH(1％iPrNH2):CO2，55ml/min.，100巴，25℃
化合物144：MS，电喷射，m/z＝569.4[M+H]，RT 0.77min。
表1的以下化合物根据实施例7中阐述的操作使用酚1-6、溴化物5-34及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物43：MS，电喷射，m/z＝555.4[M+H]，RT 0.77min；
化合物44：MS，电喷射，m/z＝585.4[M+H]，RT 0.80min；
化合物45：MS，电喷射，m/z＝569.3[M+H]，RT 0.75min；
化合物46：MS，电喷射，m/z＝597.4[M+H]，RT 0.76min；
化合物47：MS，电喷射，m/z＝583.3[M+H]，RT 0.76min；
化合物48：MS，电喷射，m/z＝597.4[M+H]，RT 0.77min；
化合物104：MS，电喷射，m/z＝597.5[M+H]，RT 0.80min；
化合物116：MS，电喷射，m/z＝597.4[M+H]，RT 0.77min；
拆分：制备型Lux Cellulose 2，65％MeOH(1％iPrNH2):CO2，60ml/min.，125巴，25℃
化合物117：MS，电喷射，m/z＝597.4[M+H]，RT 0.77min；
拆分：制备型Lux Cellulose 2，65％MeOH(1％iPrNH2):CO2，60ml/min.，125巴，25℃
化合物122：MS，电喷射，m/z＝581.5[M+H]，RT 0.72min；
拆分：制备型RegisPack，15％IPA(1％二乙胺):CO2，12ml/min.，120巴，40℃
化合物123：MS，电喷射，m/z＝581.5[M+H]，RT 0.72min。
拆分：制备型RegisPack，15％IPA(1％二乙胺):CO2，12ml/min.，120巴，40℃
表1的以下化合物根据实施例7中阐述的操作使用酚2-8、溴化物4-19及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物3：MS，电喷射，m/z＝555.3[M+H]，RT 0.64min；
化合物5：MS，电喷射，m/z＝587.2[M-H]，RT 0.78min；
化合物8：MS，电喷射，m/z＝527.2[M+H]，RT 0.69min；
化合物12：MS，电喷射，m/z＝555.3[M+H]，RT 0.68min；
化合物13：MS，电喷射，m/z＝513.2[M+H]，RT 0.70min；
化合物14：MS，电喷射，m/z＝541.3[M+H]，RT 0.77min；
化合物15：MS，电喷射，m/z＝541.2[M+H]，RT 0.68min；
化合物23：MS，电喷射，m/z＝543.3[M+H]，RT 0.70min；
化合物24：MS，电喷射，m/z＝525.2[M+H]，RT 0.72min；
化合物25：MS，电喷射，m/z＝539.3[M+H]，RT 0.75min；
化合物61：MS，电喷射，m/z＝583.3[M+H]，RT 0.72min；
化合物62：MS，电喷射，m/z＝583.4[M+H]，RT 0.72min；
化合物73：MS，电喷射，m/z＝611.4[M+H]，RT 0.75min；
化合物75：MS，电喷射，m/z＝593.4[M-H]，RT 0.72min；
化合物81：MS，电喷射，m/z＝585.1[M+H]，方法A2，RT 1.42min；
化合物86：MS，电喷射，m/z＝569.4[M+H]，RT 0.78min；
化合物87：MS，电喷射，m/z＝581.4[M+H]，RT 0.80min；
化合物90：MS，电喷射，m/z＝583.4[M+H]，RT 0.80min；
化合物91：MS，电喷射，m/z＝583.4[M+H]，RT 0.83min；
化合物92：MS，电喷射，m/z＝571.4[M+H]，RT 0.79min；
化合物102：MS，电喷射，m/z＝609.4[M+H]，RT 0.83min；
化合物103：MS，电喷射，m/z＝609.4[M+H]，RT 0.89min；
化合物188:MS，电喷射，m/z＝555.3[M+H]，RT 0.58min；
化合物192:MS，电喷射，m/z＝555.3[M+H]，RT 0.58min。
表1的以下化合物根据实施例7中阐述的操作使用酚2-8、溴化物4-20及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物10：MS，电喷射，m/z＝555.2[M+H]，RT 0.82min；
化合物89：MS，电喷射，m/z＝583.4[M+H]，方法A2，RT 1.80min。
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚2-8、溴化物4-20及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物217：MS，电喷射，m/z＝569.3[M+H]，1.45min(方法B2)；
化合物218：MS，电喷射，m/z＝583.3[M+H]，1.52min(方法B2)；
化合物219：MS，电喷射，m/z＝599.3[M+H]，1.46min(方法B2)；
表1的以下化合物根据实施例7中阐述的操作使用酚2-8、溴化物4-21及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物59：MS，电喷射，m/z＝541.3[M+H]，RT 0.66min；
化合物85：MS，电喷射，m/z＝513.2[M+H]，RT 0.71min。
表1的以下化合物根据实施例7中阐述的操作使用酚2-8、溴化物4-22及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物100：MS，电喷射，m/z＝569.4[M+H]，RT 0.77min。
表1的以下化合物根据实施例7中阐述的操作使用酚2-8、溴化物4-23及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物130：MS，电喷射，m/z＝571.4[M+H]，RT 0.69min(方法B1)；
表1的以下化合物根据实施例7中阐述的操作使用酚2-8、溴化物5-34及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物16：MS，电喷射，m/z＝541.2[M+H]，RT 0.70min；
化合物27：MS，电喷射，m/z＝569.3[M+H]，RT 0.70min；
化合物28：MS，电喷射，m/z＝569.3[M+H]，RT 0.70min；
化合物30：MS，电喷射，m/z＝555.3[M+H]，RT 0.77min；
化合物31：MS，电喷射，m/z＝555.3[M+H]，RT 0.70min。
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚2-8、溴化物5-34及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物105：MS，电喷射，m/z＝555.4[M+H]，RT 0.72min
拆分：Chirapak AD-H，20×250mm；MeOH至30mg/mL 35％EtOH庚烷溶液(1％DEA)，经18min，常温，且在290nm处收集；
化合物106：MS，电喷射，m/z＝555.4[M+H]，RT 0.72min
拆分：Chirapak AD-H，20×250mm；MeOH至30mg/mL 35％EtOH庚烷溶液(1％DEA)，经18min，常温，且在290nm处收集；
化合物127：MS，电喷射，m/z＝569.4[M+H]，RT 0.76min；
化合物139：MS，电喷射，m/z＝585.4[M+H]，RT 0.74min
拆分：Chiracel OD-H，20×250mm；存于CO2中的10％MeOH，55.5g/min，经28min，140巴，40℃，且在254nm处收集；
化合物140：MS，电喷射，m/z＝569.4[M+H]，RT 0.74min
拆分：Chiracel OD-H，20×250mm；存于CO2中的10％MeOH，58g/min，经30min，120巴，40℃，且在254nm处收集；
化合物141：MS，电喷射，m/z＝569.4[M+H]，RT 0.74min
拆分：Chiracel OD-H，20×250mm；存于CO2中的10％MeOH，58g/min，经30min，120巴，40℃，且在254nm处收集；
化合物142：MS，电喷射，m/z＝585.4[M+H]，RT 0.74min
拆分：Chiracel OD-H，20×250mm；存于CO2中的10％MeOH，55.5g/min，经28min，140巴，40℃，且在254nm处收集；
化合物191：MS，电喷射，m/z＝569.3[M+H]，RT 0.61min；
化合物198：MS，电喷射，m/z＝583.3[M+H]，RT 0.66min(方法B1)；
拆分：LUX Amylose-2，21×250mm，35％(1:1:1MeOH:EtOH:iPA)+Et2NH:CO2，80ml/min，110巴，40℃
化合物199：MS，电喷射，m/z＝583.3[M+H]，RT 0.66min(方法B1)。
拆分：LUX Amylose-2，21×250mm，35％(1:1:1MeOH:EtOH:iPA)+Et2NH:CO2，80ml/min，110巴，40℃
表1的以下化合物根据实施例7中阐述的操作使用酚2-8、溴化物6-39及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物17：MS，电喷射，m/z＝561.2[M+H]，RT 0.77min；
化合物18：MS，电喷射，m/z＝589.3[M+H]，RT 0.73min；
化合物19：MS，电喷射，m/z＝589.3[M+H]，RT 0.73min；
化合物20：MS，电喷射，m/z＝559.3[M+H]，RT 0.76min；
化合物21：MS，电喷射，m/z＝575.3[M+H]，RT 0.83min；
化合物22：MS，电喷射，m/z＝575.3[M+H]，RT 0.73min。
表1的以下化合物根据实施例7中阐述的操作使用酚2-9、溴化物4-19及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物7：MS，电喷射，m/z＝547.2[M+H]，RT 0.71min。
表1的以下化合物根据实施例7中阐述的操作使用酚2-10、溴化物4-19及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物9：MS，电喷射，m/z＝581.2[M+H]，RT 0.73min；
化合物83：MS，电喷射，m/z＝609.4[M+H]，RT 0.79min。
表1的以下化合物根据实施例7中阐述的操作使用酚2-10、溴化物4-21及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物93：MS，电喷射，m/z＝595.3[M+H]，RT 0.80min。
表1的以下化合物根据实施例7中阐述的操作使用酚2-10、溴化物5-34及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物84：MS，电喷射，m/z＝623.4[M+H]，RT 0.83min；
化合物88：MS，电喷射，m/z＝595.3[M+H]，RT 0.80min；
化合物107：MS，电喷射，m/z＝607.4[M+H]，RT 0.77min；
拆分：Chirapak AD-H，30×250mm；50％异丙醇:含1％异丙基胺的己烷，88mL/min，100巴CO2，常温。
化合物108：MS，电喷射，m/z＝607.4[M+H]，RT 0.77min。
拆分：Chirapak AD-H，30×250mm；50％异丙醇:具有1％异丙基胺的己烷，88mL/min，100巴CO2，常温。
表1的以下化合物根据实施例7中阐述的操作使用酚2-11、溴化物4-19及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物52：MS，电喷射，m/z＝547.3[M-H]，RT 0.70min；
化合物53：MS，电喷射，m/z＝575.3[M-H]，RT 0.71min。
表1的以下化合物根据实施例7中阐述的操作使用酚2-12、溴化物4-19及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物63：MS，电喷射，m/z＝559.3[M+H]，RT 0.65min。
表1的以下化合物根据实施例7中阐述的操作使用酚2-13、溴化物4-19及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物98：MS，电喷射，m/z＝555.4[M+H]，RT 0.76min。
表1的以下化合物根据实施例7中阐述的操作使用酚2-13、溴化物5-34及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物99：MS，电喷射，m/z＝569.4[M+H]，RT 0.79min。
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚2-14、溴化物5-34及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物124：MS，电喷射，m/z＝569.4[M+H]，RT 0.71min
表1的以下化合物根据实施例7中阐述的操作使用酚3-15、溴化物4-19及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物6：MS，电喷射，m/z＝541.2[M+H]，RT 0.73min；
化合物32：MS，电喷射，m/z＝527.3[M+H]，RT 0.73min；
化合物34：MS，电喷射，m/z＝569.3[M+H]，RT 0.71min；
化合物35：MS，电喷射，m/z＝555.3[M+H]，RT 0.71min；
化合物36：MS，电喷射，m/z＝569.3[M+H]，RT 0.73min；
化合物110：MS，电喷射，m/z＝555.4[M+H]，RT 0.75min；
拆分：制备型ChiralPak AD-H，30％EtOH:CO2，80ml/min.，100巴，25℃
化合物112：MS，电喷射，m/z＝555.4[M+H]，RT 0.75min。
拆分：制备型ChiralPak AD-H，30％EtOH:CO2，80ml/min.，100巴，25℃
表1的以下化合物根据实施例7中阐述的操作使用酚3-15、溴化物4-22及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物245：MS，电喷射，m/z＝583.1[M+H]，RT 0.62min。
表1的以下化合物根据实施例7中阐述的操作使用酚3-15、溴化物4-23及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物131：MS，电喷射，m/z＝585.4[M+H]，RT 1.21min(方法B1)；
表1的以下化合物根据实施例7中阐述的操作使用酚3-15、溴化物4-24及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物205：MS，电喷射，m/z＝583.3[M+H]，RT 0.67min(方法B1)；
化合物213：MS，电喷射，m/z＝555.3[M+H]，RT 0.67min(方法B1)；
表1的以下化合物根据实施例7中阐述的操作使用酚3-15、溴化物5-34及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物114：MS，电喷射，m/z＝583.5[M+H]，RT 0.62min；
化合物125：MS，电喷射，m/z＝569.4[M+H]，RT 1.25min(方法B2)；
拆分：制备型LUX 5u Cellulose 2，存于CO2中的23％MeOH(1％Et2NH)，78ml/min，经21分钟，160巴，40℃。
化合物126：MS，电喷射，m/z＝569.4[M+H]，RT 1.25min(方法B2)；
拆分：制备型LUX 5u Cellulose 2，存于CO2中的23％MeOH(1％Et2NH)，78ml/min，经21分钟，160巴，40℃。
化合物128：MS，电喷射，m/z＝583.5[M+H]，RT 1.31min(方法B2)；
拆分：Chiralcel OD-H，20×250mm，存于CO2中的5.8％MeOH(约1％Et2NH)，85g/min，160巴，40℃。
化合物129：MS，电喷射，m/z＝583.5[M+H]，RT 1.31min(方法B2)；
拆分：Chiralcel OD-H，20×250mm，存于CO2中的5.8％MeOH(约1％Et2NH)，85g/min，160巴，40℃。
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚3-15、溴化物4-23及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物216：MS，电喷射，m/z＝555.3[M+H]，RT 0.64min(方法B1)；
化合物247：MS，电喷射，m/z＝557.1[M+H]，RT 1.21min(方法B2)；
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚3-15、溴化物5-34及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物146：MS，电喷射，m/z＝597.4[M+H]，RT 0.65min(方法B1)；
化合物152：MS，电喷射，m/z＝597.4[M+H]，RT 0.65min(方法B1)；
拆分：Chiralcel OD-H，20×250mm，存于CO2中的5.8％MeOH(约1％Et2NH)，85g/min，160巴，40℃；
化合物153：MS，电喷射，m/z＝597.4[M+H]，RT 0.65min(方法B1)；
拆分：Chiralcel OD-H，20×250mm，存于CO2中的5.8％MeOH(约1％Et2NH)，85g/min，160巴，40℃。
化合物155：MS，电喷射，m/z＝613.4[M+H]，RT 0.55min(方法B1)；
化合物156：MS，电喷射，m/z＝573.4[M+H]，RT 0.43min(方法B1)；
化合物163：MS，电喷射，m/z＝625.3[M+H]，RT 0.77min；
化合物164：MS，电喷射，m/z＝555.3[M+H]，RT 0.71min；
化合物172：MS，电喷射，m/z＝597.3[M+H]，RT 1.31min(方法B2)；
化合物179：MS，电喷射，m/z＝613.1[M+H]，RT 0.67min(方法B1)；
化合物189:MS，电喷射，m/z＝583.5[M+H]，RT 0.63min
化合物193:MS，电喷射，m/z＝583.51[M+H]，RT 0.63min
化合物208：MS，电喷射，m/z＝587.3[M+H]，RT 1.48min(方法B2)；
化合物236：MS，电喷射，m/z＝597.3[M+H]，RT 1.54min(方法A2)；
拆分：制备型LUX 5u Cellulose 1，7％EtOH:庚烷，10ml/min
化合物238：MS，电喷射，m/z＝569.2[M+H]，RT 0.60min；
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚3-17、溴化物5-34及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物135：MS，电喷射，m/z＝611.5[M+H]，RT 0.86min；
化合物136：MS，电喷射，m/z＝611.5[M+H]，RT 0.83min；
化合物137：MS，电喷射，m/z＝597.5[M+H]，RT 0.84min；
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚3-18、溴化物5-34及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物148：MS，电喷射，m/z＝609.4[M+H]，RT 0.81min；
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚3-19、溴化物5-34及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物133：MS，电喷射，m/z＝597.5[M+H]，RT 0.81min。
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚3-20、溴化物5-34及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物134：MS，电喷射，m/z＝611.5[M+H]，RT 0.85min；
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚3-21、溴化物5-34及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物149：MS，电喷射，m/z＝613.3[M+H]，RT 0.74min；
化合物150：MS，电喷射，m/z＝599.5[M+H]，RT 0.72min；
化合物151：MS，电喷射，m/z＝613.3[M+H]，RT 0.74min；
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚3-22、溴化物4-19及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物183：MS，电喷射，m/z＝573.1[M+H]，RT 0.53min。
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚3-22、溴化物5-34及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物182：MS，电喷射，m/z＝585.9[M+H]，RT 0.55min。
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚3-22、溴化物4-19及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物181：MS，电喷射，m/z＝570.7[M+H]，RT 0.61min。
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚3-22、溴化物5-34及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物180：MS，电喷射，m/z＝583.7[M+H]，RT 0.64min。
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚3-22、溴化物4-19及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物209：MS，电喷射，m/z＝541.4[M+H]，RT 0.52min。
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚3-22、溴化物5-34及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物224：MS，电喷射，m/z＝556.7[M+H]，RT 0.52min。
实施例8：5-乙氧基-1-(6-{2-[2-(2-氟-1-甲基-乙基)-1,2,3,4-四氢-异喹啉-6-基甲氧基]-3-甲基-苯基}-吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-甲酸(49)的制备
将胺8-42(2.94g，5.74mmol)溶解于甲醇(20mL)、THF(20mL)及水(10mL)中。向此溶液中添加LiOH(0.971g，40.60mmol)，并将混合物在50℃下加热2h。将反应物冷却至室温并在真空中浓缩。通过C18反相柱色谱(使用5-95％MeCN/H2O+0.1％TFA的溶剂梯度)纯化粗制产物，从而得到60(2.94g)。MS，电喷射，m/z＝485.1[M+H]，RT 0.68min。
将氨基酸60(78.0mg，0.15mmol)与分子筛(20mg)、1-氟-丙-2-酮(100μL)、AcOH(25.0μL)及Na(CN)BH3(29.2mg，0.44mmol)合并于MeOH(4mL)中。将混合物在室温下搅拌30min，然后将其加热至50℃并保持12h。然后将其在N2下浓缩，用1:1MeOH/DMSO研磨，借助0.45微米注射过滤器过滤，并通过在Gilson RP-HPLC上梯度洗脱(10-100％MeCN/水+0.1％HCO2H)来纯化滤液。在真空中浓缩，从而得到标题化合物49(70.0mg)。MS，电喷射，m/z＝545.3[M+H]，RT 0.72min。
表1的以下化合物根据实施例8中阐述的操作使用适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物64：MS，电喷射，m/z＝583.4[M+H]，RT 0.70min；
化合物65：MS，电喷射，m/z＝597.4[M+H]，RT 0.75min；
化合物66：MS，电喷射，m/z＝597.4[M+H]，RT 0.72min；
化合物67：MS，电喷射，m/z＝625.5[M+H]，RT 0.78min；
化合物68：MS，电喷射，m/z＝569.4[M+H]，RT 0.68min；
化合物69：MS，电喷射，m/z＝583.4[M+H]，RT 0.70min；
化合物70：MS，电喷射，m/z＝605.4[M+H]，RT 0.71min；
化合物71：MS，电喷射，m/z＝569.4[M+H]，RT 0.71min；
化合物76：MS，电喷射，m/z＝597.4[M+H]，RT 0.79min；
化合物77：MS，电喷射，m/z＝569.4[M+H]，RT 0.69min；
化合物78：MS，电喷射，m/z＝583.4[M+H]，RT 0.71min；
化合物79：MS，电喷射，m/z＝597.4[M+H]，RT 0.75min；
化合物80：MS，电喷射，m/z＝611.4[M+H]，RT 0.74min；
化合物94：MS，电喷射，m/z＝587.4[M+H]，RT 0.80min；
化合物95：MS，电喷射，m/z＝597.4[M+H]，RT 0.82min。
表1的以下化合物根据实施例8中阐述的操作使用酚3-16、溴化物4-19及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物50：MS，电喷射，m/z＝505.2[M+H]，RT 0.66min；
化合物51：MS，电喷射，m/z＝561.3[M+H]，RT 0.70min；
化合物54：MS，电喷射，m/z＝589.3[M+H]，RT 0.72min；
化合物55：MS，电喷射，m/z＝575.2[M+H]，RT 0.71min；
化合物56：MS，电喷射，m/z＝563.3[M+H]，RT 0.74min；
化合物57：MS，电喷射，m/z＝623.3[M+H]，RT 0.80min；
化合物58：MS，电喷射，m/z＝563.2[M+H]，RT 0.76min。
实施例9：中间体3,3-二氟-环丁烷甲醛(9-44)的制备
将戴斯-马丁(Dess-Martin)过碘烷(2.6g，6.1mmol)在室温下添加至3,3-二氟环丁基甲醇、9-43、(0.5g，4.0mmol)及NaHCO3(1.4g，16.0mmol)于二氯甲烷(10mL)中的混合物中。将所得浆液在黑暗中搅拌15h，然后倒入饱和NaHCO3水溶液中。借助疏水玻璃料利用过量二氯甲烷过滤所得混合物。用饱和Na2S2O5水溶液洗涤有机滤液，然后用另一疏水玻璃料分离。将滤液经MgSO4干燥，然后借助硅藻土垫使用二氯甲烷过滤。通过在大气压力(50℃浴温度)下短程蒸馏去除二氯甲烷，只剩余约5mL。将剩余溶液冷却至-78℃并保持15min，以沉淀残余过碘烷固体。通过注射器去除溶剂，并使其通过0.45微米微孔过滤器。含有粗醛9-44的滤液(约0.1M，存于二氯甲烷中)未经进一步纯化或浓缩即加以使用。
实施例10：1-(6-{2-[2-(3,3-二氟-环丁基甲基)-1,2,3,4-四氢-异喹啉-6-基甲氧基]-3-甲基-苯基}-吡啶-2-基)-5-异丙氧基-1H-吡唑-4-甲酸(4)的制备
将胺7-41(56.0mg，0.11mmol)与分子筛(20mg)、3,3-二氟-环丁烷甲醛9-44(100μL，0.21mmol)、AcOH(20μL)及Na(CN)BH3(20.01mg，0.32mmol)合并于MeOH(2.0mL)中。将混合物在室温下搅拌30min，然后将其加热至50℃并保持12h。用THF(1.0mL)及水(1.0mL)稀释混合物。向此添加LiOH(14.68mg，0.64mmol)，并将反应物加热至50℃并保持2h。然后将其在N2下浓缩，用1:1MeOH/DMSO研磨，借助0.45微米注射过滤器过滤，并通过在Gilson RP-HPLC上梯度洗脱(10-100％MeCN/水+0.1％HCO2H)来纯化滤液。在真空中浓缩，从而得到标题化合物4(40.0mg)。MS，电喷射，m/z＝603.4[M+H]，RT 0.78min。
表1的以下化合物根据实施例10中阐述的操作使用适当胺、其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物26：MS，电喷射，m/z＝575.3[M+H]，RT 0.73min；
化合物29：MS，电喷射，m/z＝589.3[M+H]，RT 0.77min；
化合物82：MS，电喷射，m/z＝561.3[M+H]，RT 0.82min；
化合物96：MS，电喷射，m/z＝589.4[M+H]，RT 0.96min。
实施例11：中间体2,2-二氟-环丙烷甲醛(10-46)的制备
将EDCI(1.4g，7.1mmol)在室温下添加至N,O-二甲基胺盐酸盐(600mg，6.2mmol)及2,2-二氟环丙烷甲酸11-45(580mg，4.8mmol)于二氯甲烷(15mL)中的混合物中。添加N,N-二异丙基乙胺(3.3mL，19.0mmol)，并将混合物搅拌3h。添加1N HCl溶液，随后剧烈搅拌10min。使用疏水玻璃料分离有机相，并将其直接上样至10g SiO2Samplet。在50g HP-Sil SNAP芯柱(Biotage)上用9:1二氯甲烷/MeOH洗脱来纯化粗产物。在大气压力下(浴温度为70℃)经由短程蒸馏自含有产物的级份去除溶剂，从而得到11-46(605mg)。
在-78℃下用DIBAL-H(4.2mL，1.0M，存于二氯甲烷中)逐滴处理11-46(605mg，3.66mmol)于二氯甲烷中的溶液，然后将其在-78℃下搅拌2.5h。通过添加饱和若歇耳盐(Rochelle salt)水溶液淬灭反应。添加等体积水，并使混合物升温至室温。将混合物剧烈搅拌3h，随后用疏水玻璃料分离有机相。通过在大气压力下(浴温＝62℃)短程蒸馏去除二氯甲烷，从而得到11-47(389mg)。
实施例12：1-(6-{2-[2-(2,2-二氟-环丙基甲基)-1,2,3,4-四氢-异喹啉-6-基甲氧基]-3-甲基-苯基}-吡啶-2-基)-5-甲氧基-1H-吡唑-4-甲酸(72)的制备
将胺12-48(90.0mg，0.18mmol)与分子筛(20mg)、2,2-二氟-环丙烷甲醛、11-47(60.0mg，0.54mmol)、AcOH(20μL)及Na(CN)BH3(34.0mg，0.54mmol)合并于MeOH(4.0mL)中。将混合物在室温下搅拌30min，然后将其加热至50℃并保持12h。用THF(1.0mL)及水(1.0mL)稀释混合物。向此添加LiOH(33.00mg，1.43mmol)，并将反应物加热至50℃并保持2h。然后将其在N2下浓缩，用1:1MeOH/DMSO研磨，借助0.45微米注射过滤器过滤，并通过在Gilson RP-HPLC上梯度洗脱(10-100％MeOH/水+0.1％HCO2H)来纯化滤液。在真空中浓缩，从而得到标题化合物72(7.0mg)。MS，电喷射，m/z＝561.3[M+H]，方法A2，RT 1.59min。
实施例13：5-甲氧基-1-(6-{3-甲基-2-[2-(2,2,2-三氟-乙基)-1,2,3,4-四氢-异喹啉-6-基甲氧基]-苯基}-吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-甲酸(11)的制备
将三氟甲磺酸2,2,2-三氟乙基酯13-49(36.0uL，0.23mmol)添加至中间体12-48(106.0mg，0.21mmol)及N,N-二异丙基乙胺(190μL，1.10mmol)于MeCN(5.0mL)中的混合物中。将混合物在45℃下搅拌4h，然后在真空中浓缩。将剩余残余物再溶解于5mL THF/MeOH/水(2:2:1)中，并用LiOH(25.0mg，1.10mmol)处理。然后将混合物加热至50℃并保持2h，之后在真空中去除溶剂。通过在30g KP-C18SNAP芯柱(Biotage)上使用5-95％MeCN/水+0.1％TFA的梯度进行梯度洗脱来纯化剩余粗制残余物，从而得到标题化合物11(103mg)。MS，电喷射，m/z＝553.2[M+H]，方法A2，RT 1.13min。
实施例14：中间体1-甲基-5-氧代基-吡咯烷-3-甲醛(14-51)的制备
在密封40mL小瓶中混合醇14-50(0.20g，1.55mmol)与存于二氯甲烷(20.0mL)中的结合有聚苯乙烯的IBX树脂(5.81g)，并将其上下颠倒旋转20h。自树脂过滤出反应混合物，并将树脂冲洗若干次[第一次用二氯甲烷(10mL)，然后用1:1二氯甲烷/MeOH(20mL)，再用1:1二氯甲烷/MeOH(20mL)，且最后用二氯甲烷(10mL)]。在N2流下浓缩合并的滤液，从而得到14-50与预期的产物14-51的混合物。
实施例15：5-乙氧基-1-(6-{3-甲基-2-[2-(1-甲基-5-氧代基-吡咯烷-3-基甲基)-1,2,3,4-四氢-异喹啉-6-基甲氧基]-苯基}-吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-甲酸(97)的制备
将氨基酸60(40.0mg，0.07mmol)与分子筛(20mg)、14-51(51.0mg，0.200mmol)、AcOH(15.0μL)及Na(CN)BH3(13.2mg，0.20mmol)合并于MeOH(2.0mL)中。将混合物在室温下搅拌30min，然后将其加热至50℃并保持12h。通过反相柱色谱在C18上(使用5-95％MeCN/H2O+0.1％TFA的溶剂梯度)纯化粗制产物，从而得到标题化合物97(27.0mg)。MS，电喷射，m/z＝596.4[M+H]，RT 0.80min。
实施例16：5-乙氧基-1-(6-{3-甲基-2-[2-(四氢-呋喃-2-基甲基)-1,2,3,4-四氢-异喹啉-6-基甲氧基]-苯基}-吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-甲酸(101)的制备
向胺8-42(100.0mg，0.20mmol)及N,N-二异丙基乙胺(0.10mL，0.59mmol)于DMF(1.00mL)中的混合物中添加于DMF(0.06mL)中的2-溴甲基四氢呋喃(8.0mg，0.05mmol)。将混合物在100℃下辐照10min，并冷却至室温。添加过量溴化物(76.0mg)，并将反应物辐照多次，然后将其在室温下搅拌24h。过滤反应混合物，并通过HPLC(使用10-95％MeCN/H2O+0.1％甲酸的溶剂梯度)纯化滤液，从而得到16-52(6.0mg)。
用THF(1.0mL)、水(1.0mL)及MeOH(1.0mL)稀释16-52(6.0mg)。向此添加LiOH(5.0mg)，并将反应物加热至50℃并保持2h。将反应混合物冷却至室温，用HCl/1,4-二噁烷的4N溶液酸化，并过滤。通过HPLC(使用10-95％MeCN/H2O+0.1％甲酸的溶剂梯度)纯化滤液，从而得到标题化合物101(1.0mg)。MS，电喷射，m/z＝569.4[M+H]，RT 0.88min。
表1的以下化合物根据实施例16中阐述的操作使用适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物138:MS，电喷射，m/z＝639.4[M+H]，RT 1.16min；
化合物160:MS，电喷射，m/z＝563.3[M+H]，RT 0.96min。
实施例17：1-(6-{2-[2-(2-羟基-2-甲基-丙基)-1,2,3,4-四氢-异喹啉-6-基甲氧基]-3-甲基-苯基}-吡啶-2-基)-5-甲氧基-1H-吡唑-4-甲酸(33)的制备
将中间体12-48(90.0mg，0.18mmol)溶解于MeCN(5.0mL)中，向其中添加Cs2CO3(117.9mg，0.36mmo)及氯化物17-53(29.5mg，0.27mmol)。将混合物加热至50℃并保持10h。冷却反应物，用EtOAc萃取，用盐水洗涤，将其经MgSO4干燥，并浓缩。通过在30g KP-C18SNAP芯柱(Biotage)上使用15-65％MeCN/水+0.1％TFA的梯度进行梯度洗脱来纯化所得物质，从而得到酯中间体。将该酯溶解于5mL THF/MeOH/水(2:2:1)中，并用LiOH(25.0mg，1.10mmol)处理。然后将混合物加热至50℃并保持2h，之后在真空中去除溶剂。通过在30g KP-C18SNAP芯柱(Biotage)上使用15-65％MeCN/水+0.1％TFA的梯度进行梯度洗脱来纯化剩余粗制残余物，从而得到标题化合物33(103.0mg)。MS，电喷射，m/z＝543.2[M+H]，RT 0.68min。
表1的以下化合物根据实施例17中阐述的操作使用适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物74：MS，电喷射，m/z＝577.3[M+H]，RT 0.67min；
化合物168:MS，电喷射，m/z＝587.3[M+H]，RT 0.70min。
实施例18：6-溴甲基-8-三氟甲基-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-甲酸叔丁基酯(18-10)的制备
将市售酸18.1(5.0g，22.7mmol)在室温下溶解于THF(30mL)中。经由注射器逐滴添加硼烷/THF的1M溶液(34.0mL，34.0mmol)。然后将混合物加热至55℃过夜，之后将其冷却至室温，并用水(5mL)淬灭。在搅拌5min后，添加12mL 2N HCl，并将混合物搅拌1h。然后添加二氯甲烷(50mL)及水(50mL)，并用疏水玻璃料分离所得相。将有机层经Na2SO4干燥，然后再过滤。在真空中浓缩，从而得到油状物，通过在100g KP-Sil SNAP芯柱(Biotage)上梯度洗脱(5-100％EtOAc/庚烷)来纯化该油状物。浓缩产物级份，得到中间体18.2(3.2g)。
将亚硫酰氯(SOCl2)(2.3mL，31.5mmol)在N2及-10℃下添加至醇18.2(3.2g，15.5mmol)于二氯甲烷(20mL)中的溶液中。在5min后，去除冷却浴，并将混合物加热至回流并保持6h。将所得溶液冷却至室温，并在真空中浓缩。然后使剩余残余物与PhMe(2×10mL)一起共沸，然后将其溶解于DMF(20mL)中。添加固体NaCN(840mg，17.1mmol)，并将混合物加热至45℃过夜。在冷却至室温后，用水(25mL)、盐水(25mL)及EtOAc(50mL)稀释混合物。分离各层，并将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并在真空中浓缩。通过在100gKP-Sil SNAP芯柱(Biotage)上梯度洗脱(5-100％EtOAc/庚烷)来纯化粗制产物。在真空中浓缩产物级份，从而得到18-3(3.0g)。
经由注射器将硼烷/THF的1M溶液(35mL，35mmol)在室温下逐滴添加至18-3(3.0g，13.9mmol)于THF(25mL)中的溶液中。然后将混合物加热至55℃过夜，之后将其冷却至室温，并用水(5mL)淬灭。在搅拌5min后，添加浓HCl(8mL)并持续搅拌1h。然后用水(20mL)稀释混合物，并用固体NaOH进行处理直至为碱性为止。添加二氯甲烷(50mL)及盐水(25mL)，然后用疏水玻璃料分离各层。通过在120g KP-C18SNAP芯柱(Biotage)上梯度洗脱(5-95％MeCN/水+0.1％TFA)来纯化粗制胺。在真空中浓缩级份，得到中间体TFA盐(2.93g)，将其溶解于HCO2H(30mL)中，并用37％HCHO水溶液(0.66mL，8.8mmol)处理。将混合物在50℃下搅拌过夜，然后在真空中浓缩，从而得到粗制固体，将其立即溶解于48％HBr水溶液(25mL)中。将此溶液加热至100℃过夜，然后在真空中浓缩。使粗产物与PhMe(3×15mL)一起共沸，然后将其在二氯甲烷(50mL)及DMF(10mL)中浆液化。添加Et3N(1.9mL，0.82mmol)及少量4-DMAP晶体。一次性添加Boc2O(2.0g，9.1mmol)，并将混合物在室温下搅拌过夜。添加饱和NH4Cl溶液(50mL)，并用疏水玻璃料分离各层。在真空中浓缩有机层，从而得到粗制残余物，通过在100g KP-Sil SNAP芯柱(Biotage)上梯度洗脱(5-100％EtOAc/庚烷)来纯化该残余物。浓缩产物级份，得到18-5(540mg)。
经由注射器将Tf2O(0.27mL，1.6mmol)添加至18-5(540mg，1.46mmol)、Et3N(0.31mL，2.2mmol)及4-DMAP(18mg，0.15mmol)于二氯甲烷(25ml)中的冷却至0℃的混合物中。搅拌混合物，同时使其升温至室温过夜，然后用饱和NaHCO3(30mL)淬灭。用疏水玻璃料分离所得层，并将有机层在N2下浓缩。通过在50g HP-Sil SNAP芯柱(Biotage)上梯度洗脱(5-30％EtOAc/庚烷)来纯化粗制残余物。在真空中浓缩产物级份，得到18-6(460mg)。
将三氟甲磺酸酯18-6(460mg，1.02mmol)与乙烯基硼酸-吡啶复合物(250mg，1.04mmol)及Pd(PPh3)4(60mg，0.05mmol)合并于DME(9mL)与2MNa2CO3水溶液的混合物中。将混合物在Biotage微波中在120℃下辐照40min。冷却后，在N2下浓缩混合物，并用二氯甲烷研磨粗制固体。然后通过梯度洗脱(5-80％EtOAc/庚烷)使用50g HP-Sil SNAP芯柱(Biotage)来纯化二氯甲烷滤液。在真空中浓缩产物级份，从而得到18-7(275mg)。
将苯乙烯18-7(275mg，0.84mmol)及NaIO4(630mg，2.95mmol)在室温下合并于THF(12mL)与水(3mL)的混合物中。经由注射器添加OsO4(0.13mL，0.017mmol，4wt％的H2O溶液)，并将所得浆液在室温下剧烈搅拌过夜。然后借助玻璃料过滤浆液，并在真空中浓缩。将剩余残余物溶解于二氯甲烷(20mL)中，并用饱和硫代硫酸盐水溶液(25mL)洗涤。然后用疏水玻璃料分离各层，并在真空中浓缩有机层。通过在25g HP-Sil SNAP芯柱(Biotage)上梯度洗脱(5-60％EtOAc/庚烷)来纯化粗制残余物，得到18-8(228mg)。
将醛18-8(225mg，0.683mmol)溶解于THF(5mL)中，然后溶解于MeOH(5mL)中。添加固体NaBH4(40mg，1.1mmol)，并将混合物在室温下搅拌20min。添加饱和NH4Cl水溶液(约50mL)，并将混合物搅拌15min。添加EtOAc(100ml)及盐水(100mL)，然后分离各层。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过在50g HP-Sil SNAP芯柱(Biotage)上梯度洗脱(5-100％EtOAc/庚烷)来纯化粗制产物。在真空中浓缩产物级份，得到18-9(225mg)。
将固体Ph3PBr2(450mg，1.02mmol)在0℃下添加至18-9(225mg，0.68mmol)及DIPEA(0.21mL，1.2mmol)于二氯甲烷中的混合物中。将混合物搅拌1小时，然后在真空中浓缩。通过在25g HP-SIl SNAP芯柱(Biotage)上梯度洗脱(5-40％EtOAc/庚烷)来纯化粗制溴化物，从而得到18-10(248mg)。
类似地，如实施例18中所阐述自适当起始物质来制备以下溴化物：
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚2-8、溴化物18-10及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物158：MS，电喷射，m/z＝623.3[M+H]，RT 1.34min(方法B2)。
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚3-15、溴化物18-10及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物157：MS，电喷射，m/z＝637.3[M+H]，RT 0.67min(方法B2)。
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚2-8、溴化物18-11及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物201：MS，电喷射，m/z＝573.3[M+H]，RT 1.14min(方法B2)；
化合物202：MS，电喷射，m/z＝589.3[M+H]，RT 1.14min(方法B2)；
化合物229：MS，电喷射，m/z＝587.3[M+H]，RT 1.46min(方法B2)；
拆分：制备型LUX 5u Cellulose 3，14％(1:1:1MeOH:EtOH:iPA):CO2，40℃，110巴，80ml/min
化合物230：MS，电喷射，m/z＝559.3[M+H]，RT 1.46min(方法B2)。
拆分：制备型LUX 5u Cellulose 3，14％(1:1:1MeOH:EtOH:iPA):CO2，40℃，110巴，80ml/min
化合物253：MS，电喷射，m/z＝559.4[M+H]，RT 1.20min(方法A2)(介质极性长梯度法)。
化合物254：MS，电喷射，m/z＝559.3[M+H]，RT 1.20min(方法A2)(介质极性长梯度法)。
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚2-8、溴化物18-12及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物177：MS，电喷射，m/z＝545.2[M+H]，RT 0.68min(方法B1)；
化合物187：MS，电喷射，m/z＝575.3[M+H]，RT 1.13min(方法B2)；
化合物231：MS，电喷射，m/z＝589.3[M+H]，RT 1.26min(方法B2)；
拆分：制备型LUX 5u Cellulose 4，20％1:1:1MeOH:EtOH:iPA(0.1％Et2NH):CO2，75ml/min.，130巴，40℃
化合物234：MS，电喷射，m/z＝589.3[M+H]，RT 1.26min(方法B2)；
拆分：制备型LUX 5u Cellulose 4，20％1:1:1MeOH:EtOH:iPA(0.1％Et2NH):CO2，75ml/min.，130巴，40℃
化合物251：MS，电喷射，m/z＝559.4[M+H]，RT 1.18min(方法A2)(介质极性长梯度法)。
拆分：制备型ChiralPak AD-H，45％3:1己烷:EtOH(1％iPrNH2):CO2，80ml/min.，100巴，25℃
化合物252：MS，电喷射，m/z＝559.3[M+H]，RT 1.18min(方法A2)(介质极性长梯度法)。
拆分：制备型ChiralPak AD-H，45％3:1己烷:EtOH(1％iPrNH2):CO2，80ml/min.，100巴，25℃
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚2-8、溴化物18-13及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物166：MS，电喷射，m/z＝623.3[M+H]，RT 1.30min(方法B2)。
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚3-15、溴化物18-12及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物159：MS，电喷射，m/z＝587.3[M+H]，RT 0.61min(方法B1)。
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚3-15、溴化物18-13及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物165：MS，电喷射，m/z＝637.3[M+H]，RT 1.42min(方法B2)。
实施例19：中间体7-羟基甲基-6-甲基-1,2,4,5-四氢-苯并[d]氮杂环庚烷-3-甲酸叔丁基酯(19-14)的制备
将化合物19-1(100g，0.465mol)于THF(800.000ml)中的溶液在0℃下添加至LAH(166g，1.395mol)于无水THF(200ml)中的混合物中。将混合物在室温下搅拌0.5h，然后回流1h。TLC显示完成反应。将饱和NH4Cl水溶液(200ml)缓慢添加至混合物中。然后添加EtOAc及Na2SO4。将混合物搅拌1h，然后过滤，并通过PE洗涤，从而得到化合物19-2。
在-10℃下向化合物19-2(360.000g，2.365mol)于二氯甲烷(3000.000ml)中的溶液中添加SOCl2(562.980g，4.731mol)。然后将反应混合物回流4h。浓缩混合物，从而得到粗制化合物19-3，将其直接用于下一步骤中。
将化合物19-3(334.000g，1.957mol)及NaCN(168.096g，2.290mol)于DMF(1000.000ml)中的混合物在室温下搅拌过夜。用EtOAc及H2O萃取混合物。干燥有机层并浓缩，并通过硅胶色谱(PE:EA＝50:1)纯化，从而得到黄色油状化合物19-4。
将化合物19-4(1608.000g，9.975mol)、KOH(1117.221g，19.950mol)于EtOH(15000.000ml)中的混合物加热至回流并保持5h。TLC显示完成反应。在减压下去除溶剂。将残余物调节至pH＝1。过滤混合物，并干燥滤饼，从而得到化合物19-5。
将化合物19-5(737.000g，4.090mol)在N2气氛下添加至(COCl)2(8.180mol)及DMF(70.000ml)于二氯甲烷(7370.000ml)中的经搅拌溶液中，随后搅拌2h。TLC显示完成反应。然后蒸发混合物。将残余物在室温下添加至2,2-二甲氧基乙基-1-胺(429.996g，4.090mol)及Et3N(454.388g，4.499mol)于二氯甲烷(1000ml)中的经搅拌溶液中并持续2h。TLC显示完成反应。蒸发混合物，并通过管柱纯化残余物，从而得到化合物19-6。
将化合物19-6(1053g，3.939mol)于AcOH(2L)及HCl(2L)中的溶液在室温下搅拌16h。TLC显示完成反应。蒸发混合物。使残余物结晶，用H2O及EtOH洗涤，然后过滤固体，并干燥，从而得到化合物19-7。
将Pd/C(4g)及化合物19-7(40.000g，0.197mol)于AcOH(2L)中的混合物在室温及H2下搅拌16h。LCMS显示完成反应。过滤混合物，蒸发，并用EtOH使残余物结晶。过滤固体并干燥，从而得到化合物19-8。
在N2气氛下向化合物19-8(130.000g，0.633mol)于THF(1300.000ml)中的经搅拌溶液中缓慢添加BMS(127.000ml，1.267mol)，同时使温度维持低于-5℃，随后搅拌16h。LCMS显示完成反应。用浓HCl淬灭反应，然后将混合物回流2h。蒸发溶剂并用二氯甲烷及H2O分离残余物。将水相调节至pH＝9，且过滤固体并干燥，从而得到化合物19-9。
将化合物19-9(220.000g，1.150mol)于48％HBr水溶液(1800.000ml)中的溶液在110℃及N2气氛下搅拌4h。LCMS显示完成反应。蒸发混合物，从而得到粗制化合物19-10。
将化合物19-10(267.000g，1.506mol)、Boc2O(492.595g，2.260mol)及TEA(380.368g，3.766mol)于二氯甲烷(2670.000ml)中的混合物在室温下搅拌2h。通过TLC监测反应。当耗尽化合物19-10时，将反应混合物在减压下浓缩，并通过柱色谱纯化残余物，从而得到化合物19-11。
将化合物19-11(267.000g，0.963mol)及Tf2O(271.468g，0.963mol)于(2670.000ml)中的混合物在室温及N2气氛下搅拌2h。TLC显示完成反应。在减压下浓缩反应混合物，并通过管柱纯化残余物，从而得到化合物19-12。
将化合物19-12(20.000g，0.049mol)、dppp(2.000g)、Pd(OAc)2(2.000g)及TEA(9.868g，0.098mol)于EtOH(400.000ml)中的混合物在80℃及CO气氛下搅拌12h。通过TLC监测该反应。当完成反应时，在减压下浓缩反应混合物，并通过柱色谱纯化残余物，从而得到化合物19-13。
向化合物19-13(22.000g，0.066mol)于THF(300.000ml)中的经搅拌溶液中缓慢添加LAH(2.507g，0.066mol)，同时使温度维持低于-40℃。在完成添加后，将混合物在室温下搅拌2h。TLC显示完成反应，并用H2O淬灭反应。在减压下去除溶剂，并用二氯甲烷及H2O分离残余物，将有机相经无水Na2SO4干燥，并蒸发。通过管柱纯化残余物，从而得到化合物19-14。
以与实施例4类似的方式对醇实施溴化，从而得到中间体7-溴甲基-6-甲基-1,2,4,5-四氢-苯并[d]氮杂环庚烷-3-甲酸叔丁基酯19-15。
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚2-8、溴化物19-15及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物176：MS，电喷射，m/z＝555.3[M+H]，RT 1.19min(方法B2)；
化合物184：MS，电喷射，m/z＝583.3[M+H]，RT 1.24min(方法B2)；
化合物206：MS，电喷射，m/z＝569.3[M+H]，RT 1.26min(方法B2)；
拆分：制备型LUX 5u Cellulose 4，存于CO2中的20％MeOH:EtOH:IPA(1:1:1)(0.1％Et2NH)，705ml/min，130巴，40℃。
化合物207：MS，电喷射，m/z＝569.3[M+H]，RT 1.26min(方法B2)；
拆分：制备型LUX 5u Cellulose 4，存于CO2中的20％MeOH:EtOH:IPA(1:1:1)(0.1％Et2NH)，705ml/min，130巴，40℃。
化合物222：MS，电喷射，m/z＝583.3[M+H]，RT 1.40min(方法B2)；
拆分：制备型LUX 5u Cellulose 1，存于CO2中的12％MeOH:IPA(1％Et2NH)，70ml/min，105巴，40℃。
化合物223：MS，电喷射，m/z＝583.4[M+H]，RT 1.42min(方法B2)；
拆分：制备型LUX 5u Cellulose 1，存于CO2中的12％MeOH:IPA(1％Et2NH)，70ml/min，105巴，40℃。
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚3-15、溴化物19-15及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物162：MS，电喷射，m/z＝597.3[M+H]，RT 1.34min(方法B2)；
化合物175：MS，电喷射，m/z＝569.3[M+H]，RT 1.31min(方法B2)；
化合物190：MS，电喷射，m/z＝597.2[M+H]，RT 0.63min(方法B1)；
化合物196：MS，电喷射，m/z＝585.3[M+H]，RT 0.67min(方法B1)；
化合物203：MS，电喷射，m/z＝599.3[M+H]，RT 0.67min(方法B1)
拆分：Chirapak AD-H，20×250mm；20％EtOH:庚烷，8mL/min，常温。
化合物204：MS，电喷射，m/z＝599.3[M+H]，RT 0.67min(方法B1)
拆分：Chirapak AD-H，20×250mm；20％EtOH:庚烷，8mL/min，常温。
化合物211：MS，电喷射，m/z＝613.3[M+H]，RT 1.43min(方法B2)；
拆分：制备型LUX 5u Cellulose 1，20％iPA+Et2NH:庚烷，9ml/min
化合物212：MS，电喷射，m/z＝613.3[M+H]，RT 1.43min(方法B2)；
拆分：制备型LUX 5u Cellulose 1，20％iPA+Et2NH:庚烷，9ml/min
化合物214：MS，电喷射，m/z＝611.3[M+H]，RT 1.61min(方法B2)；
拆分：制备型LUX 5u Cellulose 1，30％iPA:CO2，110巴，75ml/min，40℃
化合物215：MS，电喷射，m/z＝611.3[M+H]，RT 1.61min(方法B2)；
拆分：制备型LUX 5u Cellulose 1，30％iPA:CO2，110巴，75ml/min，40℃
化合物225：MS，电喷射，m/z＝583.3[M+H]，RT 1.41min(方法B2)；
拆分：制备型LUX 5u Cellulose 4，20％1:1:1MeOH:EtOH:iPA(0.1％Et2NH):CO2，75g/min.，110巴，40℃
化合物226：MS，电喷射，m/z＝583.3[M+H]，RT 1.44min(方法B2)；
拆分：制备型ESI Industries CC4，55％1:1己烷:MeOH(3％iPrOH，0.1％iPrNH2):CO2，80ml/min.，100巴，25℃
化合物227：MS，电喷射，m/z＝583.3[M+H]，RT 1.41min(方法B2)；
拆分：制备型LUX 5u Cellulose 4，20％1:1:1MeOH:EtOH:iPA(0.1％Et2NH):CO2，75g/min.，110巴，40℃
化合物235：MS，电喷射，m/z＝583.3[M+H]，RT 1.41min(方法B2)；
拆分：制备型LUX 5u Cellulose 4，20％1:1:1MeOH:EtOH:iPA(0.1％Et2NH):CO2，75g/min.，110巴，40℃
化合物228：MS，电喷射，m/z＝583.3[M+H]，RT 1.44min(方法B2)；
拆分：制备型ESI Industries CC4，55％1:1己烷:MeOH(3％iPrOH，0.1％iPrNH2):CO2，80ml/min.，100巴，25℃
化合物232：MS，电喷射，m/z＝597.3[M+H]，RT 1.54min(方法A2)；
拆分：制备型LUX 5u Cellulose 1，7％EtOH:庚烷，10ml/min
化合物233：MS，电喷射，m/z＝597.3[M+H]，RT 1.50min(方法A2)；
拆分：制备型LUX 5u Cellulose 4，20％EtOH:CO2，80ml/min，110巴，40℃
化合物235：MS，电喷射，m/z＝597.3[M+H]，RT 1.50min(方法A2)；
拆分：制备型LUX 5u Cellulose 4，20％EtOH:CO2，80ml/min，110巴，40℃
实施例20.中间体5-溴甲基-4,7-二甲基-1,3-二氢-异吲哚-2-甲酸叔丁基酯(20-4)的制备。
向100mL圆底烧瓶中添加胺20-1(0.500g，4.13mmol)，将其溶解于二氯甲烷(15.0mL)中。将反应混合物冷却至0℃，并添加三乙胺(1.15mL，8.25mmol)及BOC2O(1.35g，6.19mmol)。使反应物升温至室温并搅拌过夜。用二氯甲烷萃取反应物，用水及盐水洗涤，将其经MgSO4干燥并浓缩。通过硅胶色谱使用12-100％EtOAc庚烷溶液梯度洗脱纯化所得残余物。收集预期的级份并浓缩，从而得到油状物(0.556g)。
将炔丙基醇(0.579mL，9.94mmol)在0℃下逐滴添加至二乙炔(diacetylene)20-2(0.550g，2.49mmol)于无水乙醇(15.0mL)中的溶液中。添加威尔金森氏催化剂(Wilkinson's catalyst)(0.229g，0.249mmol)，并将混合物在室温下搅拌16h。浓缩粗制反应物，并使用10-80％EtOAc庚烷溶液的梯度对其进行硅胶色谱。收集预期的级份并浓缩，从而得到灰白色固体(0.125g)。
在0℃下向醇20-3(125mg，0.451mmol)及N,N-二异丙基乙胺(0.118mL，0.676mmol)于二氯甲烷(5.0mL)中的溶液中添加二溴化三苯基膦(297mg，0.676mmol)。将反应物搅拌2h，并在真空中浓缩。通过硅胶色谱使用7-60％EtOAc庚烷溶液梯度洗脱纯化所得残余物，从而得到预期的白色固体状产物20-4(35.0mg)。
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚2-8、溴化物20-4及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物145：MS，电喷射，m/z＝569.3[M+H]，RT 0.75min；
化合物246：MS，电喷射，m/z＝585.0[M+H]，RT 1.40min(方法B2)；
实施例21.中间体6-溴甲基-5,8-二甲基-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-甲酸叔丁基酯(21-8)的制备。
将酮21-1(14.00g，70.27mmol)及吡咯烷(8.71mL，106.0mmol)溶解于甲苯(60mL)中，并将混合物在迪安斯托克条件(Dean Stark condition)下回流24h。然后在真空中浓缩反应物。将所得残余物溶解于甲苯(60mL)中，并用4-己-3-酮(8.32mL，70.27mmol)及氢醌(0.080g，0.727mmol)处理。将溶液加热至回流并保持24h，然后用EtOAc稀释并用1N HCl洗涤。干燥合并的有机层，并在真空中浓缩，从而得到黏性油状物。通过硅胶色谱使用20-100％EtOAc庚烷溶液梯度洗脱来纯化该物质，从而得到黄色固体(11.74g)。
将1.0M LiHMDS溶液(42.95mL)在-78℃下逐滴添加至中间体21-2(10.00g，35.79mmol)于THF(50.0mL)中的溶液中。将此混合物在-78℃下再搅拌30min。逐滴添加TMS-Cl(5.45mL，42.95mmol)，并在-78℃下再搅拌2h。使反应物升温至室温，并用***(200mL)稀释。将此混合物添加至饱和Na2CO3溶液中，并分离各相。干燥合并的有机相并在真空中浓缩。将残余物溶解于ACN(50.0mL)中，并添加Pd(OAc)2(8.04g，35.79mmol)。将所得混合物在水浴中冷却，以使反应温度维持低于35℃，并搅拌过夜。借助硅藻土(celite)过滤反应物，并在真空中浓缩滤液。将残余物吸收于200mL EtOAc中，然后用1.0M TBAF溶液(50.0mL)处理。将此混合物搅拌30min，然后用1NHCl及10％硫代硫酸钠溶液洗涤。干燥有机物并浓缩。通过硅胶色谱使用20-80％EtOAc庚烷溶液梯度洗脱纯化该物质，从而得到灰白色固体(6.11g)。
在室温下向起始物质21-3(1.50g，5.41mmol)于二氯甲烷(25.0mL)中的溶液中添加吡啶(0.871mL，10.82mmol)。将溶液冷却至-30℃，并逐滴添加Tf2O(1.00mL，5.95mmmol)。将反应物在-30℃下搅拌1h，然后使其升温至室温。将其在真空中浓缩，并用EtOAc稀释残余物，用1N HCl、饱和NaHCO3、盐水洗涤，将其经MgSO4干燥，并浓缩。通过硅胶色谱使用12-100％EtOAc庚烷溶液梯度洗脱纯化所得物质，从而得到白色固体(1.61g)。
将三氟甲磺酸酯21-4(1.00g，2.44mmol)与硼酸酯(0.647g，2.69mmol)及Pd(PPh3)4(0.144g，0.124mmol)合并于DME(15.0mL)与2.0M Na2CO3(1.27mL)的混合物中。将反应物在微波(MW)中在120℃下辐照40min。将其在N2下浓缩，并通过硅胶色谱使用12-100％EtOAc庚烷溶液梯度洗脱纯化。浓缩预期的级份，从而得到白色固体(0.662g)。
将底物21-5(1.029g，3.58mmol)、NaIO4(2.34g，10.94mmol)、2.5wt％OsO4在室温下合并于t-BuOH(1.0mL)、THF(12.4mL)及H2O(2.4mL)中，然后在黑暗中搅拌过夜。用水及二氯甲烷稀释反应混合物。用疏水玻璃料分离各层。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并浓缩。通过硅胶色谱使用12-100％EtOAc庚烷溶液梯度洗脱纯化残余物，从而得到琥珀色油状物(0.786g)。
将醛21-6(0.785g，2.71mmol)溶解于THF(5.0mL)及MeOH(5.0mL)中。将混合物冷却至0℃，并添加NaBH4(0.156g，4.07mmol)。将反应物在室温下搅拌30min。用NH4Cl水溶液淬灭反应，并搅拌10min。用EtOAc对其进行萃取，用NH4Cl、盐水洗涤，将其经MgSO4干燥，并浓缩。通过硅胶色谱使用12-100％EtOAc庚烷溶液梯度洗脱纯化所得物质。收集预期的级份，从而得到预期的白色固体状产物21-7(0.626g)。
在0℃下向醇21-7(0.300g，1.030mmol)及N,N-二异丙基乙胺(0.269mL，1.54mmol)于二氯甲烷(10.0mL)中的溶液中添加二溴化三苯基膦(0.679g，1.54mmol)。将反应物搅拌2h，并在真空中浓缩。通过硅胶色谱使用7-60％EtOAc庚烷溶液梯度洗脱来纯化所得残余物，从而得到预期的白色固体状产物21-8(0.338g)。
类似地，如实施例21中所阐述自适当起始物质来制备以下溴化物：
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚2-8、溴化物21-8及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物120：MS，电喷射，m/z＝583.5[M+H]，RT 0.74min；
化合物178：MS，电喷射，m/z＝555.3[M+H]，RT 0.64min(方法B1)。
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚3-15、溴化物21-8及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物132：MS，电喷射，m/z＝597.5[M+H]，RT 0.83min。
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚3-15、溴化物21-9及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物154：MS，电喷射，m/z＝597.7[M+H]，RT 0.81min。
实施例22.中间体5-溴甲基-4-甲基-1,3-二氢-异吲哚-2-甲酸叔丁基酯(22-5)及6-溴甲基-4-甲基-1,3-二氢-异吲哚-2-甲酸叔丁基酯(22-6)的制备
向Boc-胺22-1(2.00g，12.89mmol)于THF(30.0mL)中的经搅拌溶液及四丁基碘化铵(0.476g，1.29mmol)中添加0.5M KHMDS溶液(25.8mL)，并将混合物在室温下搅拌30min。逐滴添加溴化物(1.69mL，19.33mmol)，并将混合物在室温下搅拌30min，然后回流2h。用饱和NH4Cl淬灭反应，并用EtOAc萃取。将合并的有机相经MgSO4干燥并在真空中浓缩。通过硅胶色谱使用5-40％EtOAc庚烷溶液梯度洗脱纯化粗产物，从而得到预期的无色油状产物(2.13g)。
将炔丙基醇(2.39mL，41.11mmol)在0℃下逐滴添加至二乙炔22-2(2.13g，10.28mmol)于无水乙醇(50.0mL)中的溶液中。将威尔金森氏催化剂(0.95g，1.028mmol)添加至混合物中，并将其在室温下搅拌过夜。在真空中浓缩粗制反应物，并使用10-80％EtOAc庚烷溶液的梯度对其进行硅胶色谱。收集预期的级份并浓缩，从而得到两种区域异构体22-3及22-4(1.93g)。混合物继续用于下一步骤中。
在0℃下向醇22-3与22-4的混合物(1.93g，7.33mmol)及N,N-二异丙基乙胺(1.91mL，10.98mmol)于二氯甲烷(50.0mL)中的溶液中添加二溴化三苯基膦(4.73g，10.98mmol)。将反应物搅拌2h并在真空中浓缩。通过硅胶色谱使用7-60％EtOAc庚烷溶液梯度洗脱纯化所得残余物，从而得到区域异构体22-5与22-6的白色固体状混合物(2.12g)。
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚2-8、溴化物22-5及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物256：MS，电喷射，m/z＝555.4[M+H]，RT 1.13min(方法A2)；
化合物257：MS，电喷射，m/z＝527.3[M+H]，RT 1.12min(方法A2)。
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚2-8、溴化物22-6及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物255：MS，电喷射，m/z＝555.4[M+H]，RT 1.15min(方法A2)；
化合物258：MS，电喷射，m/z＝527.3[M+H]，RT 1.16min(方法A2)。
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚3-15、溴化物22-5及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物119：MS，电喷射，m/z＝569.3[M+H]，RT 1.13min(方法A2)；
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚3-15、溴化物22-6及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物118：MS，电喷射，m/z＝569.3[M+H]，RT 1.11min(方法A2)；
实施例23.中间体5-溴甲基-6-甲基-1,3-二氢-异吲哚-2-甲酸叔丁基酯(23-3)的制备。
将醇(0.968mL,12.94mmol)在0℃下逐滴添加至二乙炔23-1(500mg，2.59mmol)于无水乙醇(12.0mL)中的溶液中。将威尔金森氏催化剂(239.4mg，0.259mmol)添加至混合物中，并将其在室温下搅拌过夜。在真空中浓缩粗制反应物，并使用10-80％EtOAc庚烷溶液的梯度对其进行硅胶色谱。收集预期的级份并浓缩，从而得到固体(105mg)。
在0℃下向醇23-2(105mg，0.399mmol)及N,N-二异丙基乙胺(0.104mL，0.598mmol)于二氯甲烷(7.0mL)中的溶液中添加二溴化三苯基膦(263mg，0.598mmol)。将反应物搅拌2h并在真空中浓缩。通过硅胶色谱使用7-60％EtOAc庚烷溶液梯度洗脱纯化所得残余物，从而得到23-3。
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚2-8、溴化物23-3及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物143：MS，电喷射，m/z＝555.4[M+H]，RT 0.74min。
实施例24：5-乙氧基-1-(6-{3-甲基-2-[5-甲基-2-(四氢-吡喃-4-羰基)-1,2,3,4-四氢-异喹啉-6-基甲氧基]-苯基}-吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-甲酸(化合物147)的制备
将胺12-48(122mg，0.232mmol)与DMAP(2mg，0.02mmol)及DIPEA(60μL，0.34mmol)在室温下合并于二氯甲烷(5mL)中。添加四氢-2H-吡喃-4-羰基氯化物(40μL，0.23mmol)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物直接上样至Samplet，然后通过在50g HP-Sil SNAP芯柱(Biotage)上利用100％二氯甲烷洗脱来纯化。在真空中浓缩，得到酯中间体(31mg)，其为立即用于下一步骤中。
将酯(30mg)溶解于EtOH/H2O/THF(1，0.5，0.5mL)中，并用LiOH(26mg，1.2mmol)处理。将混合物在45℃下搅拌过夜，然后在N2下浓缩。然后通过在12g KP-C18SNAP芯柱(Biotage)上梯度洗脱(5-95％MeCN/水+0.1％TFA)来纯化残余物。在真空中浓缩产物，从而得到化合物150(26mg)。
化合物147：MS，电喷射，m/z＝611.3[M+H]，RT 1.04min(方法B1)。
实施例25：中间体6-溴甲基-8-甲基-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-甲酸叔丁基酯(25-14)的制备。
向25-01(185g；0.940mol)、K2CO3(437g，3.17mol)于丙酮(2L)中的混合物中添加MeI(424g，2.99mol)。将混合物在40℃下搅拌16h。在过滤后，通过硅胶管柱(PE:EtOAc＝500:1)来纯化混合物，从而得到浅黄色油状1-溴-3-甲氧基-5-甲基-苯25-02(189g)。
在-70℃下向25-02(200g，0.995mol)于无水THF(1.70L)中的混合物中逐滴添加n-BuLi(438ml；1.09mol)。在-70℃下搅拌1h后，在-70℃下逐滴添加无水DMF(76.3g，1.04mol)，并在-70℃下搅拌1h。将混合物倒入NH4Cl(1.00L)中，并用EtOAc(500mL×3)萃取，用盐水(500mL×2)洗涤，将其经Na2SO4干燥并浓缩，从而得到黄色油状3-甲氧基-5-甲基-苯甲醛25-03(147g)。
将25-03(150g，0.999mol)及NH4OAc(30.8g，0.40mol)于MeNO2(1.5L)中的混合物回流16h。浓缩混合物，然后用EtOAc(1000mL)稀释，用水(1L)、盐水(100mL)洗涤，并将有机层经Na2SO4干燥并浓缩。用PE:EtOAc＝10:1将混合物研磨10分钟，过滤，从而得到黄色固体状1-甲氧基-3-甲基-5-((E)-2-硝基-乙烯基)-苯25-04(80g)。
在0℃下向LiAlH4(78.6g，2.00mol)于无水THF(1L)中的混合物中逐份添加存于THF(200mL)中的25-04(78g，0.404mol)，并在70℃下搅拌16h。将混合物冷却至0℃，用水(78mL)、15％NaOH(78mL)及水(235mL)缓慢淬灭。在过滤后，浓缩混合物，从而得到浅黄色油状2-(3-甲氧基-5-甲基-苯基)-乙胺25-05(40g)。
将化合物25-05(66g，0.40mol)及甲酸(73.5g，1.60mol)于二噁烷(600mL)中的混合物在90℃下搅拌16h。浓缩混合物，从而得到黄色固体状N-[2-(3-甲氧基-5-甲基-苯基)-乙基]-甲酰胺25-06(77g)。
在15℃下向25-06(76.0g，0.354mol)于二氯甲烷(2.5L)中的溶液中添加POCl3(155g，1.01mol)，并回流3h。浓缩溶液，向残余物中添加水(1.5L)、甲苯(1.5L)及20％NaOH(500mL)，然后回流1h并冷却。用EtOAc(500mL×3)稀释混合物，用水(1L×2)、盐水(100mL×2)洗涤，将合并的有机相经Na2SO4干燥并浓缩。通过硅胶管柱(PE:EtOAc＝10:1)将其纯化，从而得到褐色油状6-甲氧基-8-甲基-3,4-二氢-异喹啉25-07(58.5g)。
在0℃下向25-07(58.5g，0.334mol)于MeOH(500mL)中的溶液中添加NaBH4(63.3g，1.67mol)，并将混合物在0℃下维持4h。用1N HCl(100mL)淬灭溶液，通过添加NaHCO3将pH调节至8，用二氯甲烷(300mL×2)萃取，将合并的有机物经Na2SO4干燥并浓缩，从而得到褐色油状6-甲氧基-8-甲基-3,4-二氢-异喹啉25-08(83g，粗制产物)。
将粗制25-08(83g，0.47mol)于HBr(40％，存于水中，500mL)中的溶液加热至90℃并保持12h。在减压下蒸发溶液，从而获得8-甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-6-醇氢溴酸盐25-09。向此粗制残余物中添加Boc2O(72g，0.33mol)及三乙胺(63g，0.62mol)，并将所得混合物在15℃下搅拌12h，然后用二氯甲烷(1500mL)及水(100mL)稀释。用0.5N HCl(100mL)及盐水(100mL)洗涤有机层，干燥，浓缩，并通过硅胶管柱(PE:EtOAc＝30:1)纯化，从而得到白色固体状6-羟基-8-甲基-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-甲酸叔丁基酯25-10(33.4g)。
在-30℃下向25-10(33g；0.113mol)及吡啶(20.1g，0.254mol)于无水二氯甲烷(300mL)中的溶液中逐滴添加Tf2O(39.4g，0.139mol)，并在-30℃下搅拌1h。然后使溶液升温至15℃并搅拌8h。用二氯甲烷(500mL)及水(100mL)稀释混合物，并浓缩合并的有机相，然后通过硅胶管柱(PE:EtOAc＝50:1)纯化，从而得到白色固体状8-甲基-6-三氟甲烷磺酰氧基-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-甲酸叔丁基酯25-11(43g)。
将25-11(43g，0.109mol)、Et3N(33.0g，0.327mol)、DPPP(4.53g)及Pd(OAc)2(5g)于MeOH(500mL)中的溶液在3MPa CO压力及90℃下搅拌2天。在过滤及浓缩后，通过硅胶色谱(PE:EtOAc＝50:1)纯化残余物，从而得到无色油状8-甲基-3,4-二氢-1H-异喹啉-2,6-二甲酸2-叔丁基酯6-甲酯25-12(21g)。
在-50℃下向25-12(21g，0.693mol)于无水THF(500mL)中的溶液中添加LiAlH4(7.4g，208mmol)。将混合物在-50℃下搅拌1h，然后在0℃下搅拌30min。用H2O(7.4mL)、15％NaOH(7.4mL)及H2O(22.2mL)缓慢淬灭反应，然后过滤。浓缩滤液并通过制备型HPLC纯化并浓缩。用二氯甲烷(1L×2)萃取残余物，将合并的有机相经Na2SO4干燥并浓缩，从而得到无色油状6-羟基甲基-8-甲基-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-甲酸叔丁基酯25-13(14.8g)。
在-30℃下向25-13(13.4g，0.485mol)及DIEA(11.8mL，0.679mol)于二氯甲烷(200mL)中的溶液中添加二溴化三苯基膦(26.6g，0.606mol)。将所得混合物搅拌1h，经该时间使冷浴升温至-10℃。自该-10℃混合物汽提挥发物，将残余物悬浮于二氯甲烷(50mL)中，并通过色谱(硅胶，存于庚烷中的5-40％EtOAc)来纯化滤液，从而得到预期的白色固体状中间体25-14(16.2g)。
类似地，如实施例25中所阐述自适当起始物质来制备以下溴化物：
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚1-6、溴化物25-14及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物161：MS，电喷射，m/z＝597.3[M+H]，RT 0.75min。
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚2-8、溴化物25-14及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物171：MS，电喷射，m/z＝569.3[M+H]，RT 0.68min；
化合物186：MS，电喷射，m/z＝541.3[M+H]，RT 0.60min；
化合物237：MS，电喷射，m/z＝569.3[M+H]，RT 0.60min；
化合物239：MS，电喷射，m/z＝569.3[M+H]，RT 0.60min；
化合物240：MS，电喷射，m/z＝585.2[M+H]，RT 0.60min；
化合物242：MS，电喷射，m/z＝555.3[M+H]，RT 0.59min；
化合物244：MS，电喷射，m/z＝557.3[M+H]，RT 0.62min。
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚3-15、溴化物25-14及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物169：MS，电喷射，m/z＝583.3[M+H]，RT 0.73min；
化合物173：MS，电喷射，m/z＝583.3[M+H]，RT 0.74min；
化合物174：MS，电喷射，m/z＝555.3[M+H]，RT 0.72min；
化合物195：MS，电喷射，m/z＝583.4[M+H]，RT 0.71min；
拆分：IC管柱15％1:1:1MeOH:EtOH:iPA+二乙胺:CO2，3ml/min，40℃，200巴
化合物197：MS，电喷射，m/z＝583.4[M+H]，RT 0.71min；
拆分：IC管柱15％1:1:1MeOH:EtOH:iPA+二乙胺:CO2，3ml/min，40℃，200巴
化合物200：MS，电喷射，m/z＝583.3[M+H]，RT 0.63min(方法B1)；
化合物210：MS，电喷射，m/z＝571.1[M+H]，RT 0.70min(方法B1)；
化合物241：MS，电喷射，m/z＝569.3[M+H]，RT 0.62min；
化合物243：MS，电喷射，m/z＝599.3[M+H]，RT 0.63min；
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚2-8、溴化物25-15及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物121：MS，电喷射，m/z＝569.4[M+H]，RT 0.72min。
实施例26：中间体6-溴甲基-8-甲基-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-甲酸叔丁基酯(26-12)的制备。
用2-羟基-4-碘-苯甲酸甲酯26-01(12.0g，43.2mmol)、2,4,6-三乙烯基-三硼三氧杂环己烷(cyclotriboroxane)-吡啶复合物(11.4g，47.5mmol)、四(三苯基膦)钯(2.49g，2.16mmol)、2.0M碳酸钠水溶液(25.9mL，51.7mmol)及1,2-二甲氧基乙烷(50mL)装填圆底烧瓶，通过在真空与氩之间交替(3×)实施脱氧，并在氩压力下回流3h，然后在常温下搅拌18h。在真空中汽提挥发物，将残余物悬浮于1N HCl(800mL)中，并用EtOAc(600mL，300mL，然后300mL)萃取。用盐水洗涤合并的有机萃取物，将其经Na2SO4干燥，并通过色谱(硅胶，5-30％EtOAc庚烷溶液)纯化，从而得到2-羟基-4-乙烯基-苯甲酸26-02(3.70g)及2-羟基-4-乙烯基-苯甲酸甲酯(0.300g)。
向26-02(3.70g，22.0mmol)及2-羟基-4-乙烯基-苯甲酸甲酯(0.300g，1.69mmol)于MeOH(50mL)中的溶液中添加H2SO4(4.0mL，75mmol)。将所得混合物回流16h，然后使其冷却至室温。添加冰(100g)，并搅拌混合物。当冰完全融化时，在减压下去除MeOH，并用DCM(2×100mL)萃取水性残余物。合并合并的有机萃取物，在真空中浓缩并通过色谱(硅胶，0-5％EtOAc庚烷溶液)纯化，从而得到澄清油状2-羟基-4-乙烯基-苯甲酸甲酯26-03(3.75g)。
向26-03(3.75g，21mmol)及偏高碘酸钠(sodium metaperiodate，13.8g，64.3mmol)于THF(80mL)及水(20mL)中的搅拌混合物中添加四氧化锇于水中的4wt％溶液(3.69mL，0.47mmol)。将反应烧瓶(其在添加锇试剂后升温)包裹在铝箔中，以使内容物免受光的影响，并将浆液搅拌16h。在减压下去除挥发物，用饱和NaHCO3(700mL)水溶液稀释残余物，并用EtOAc(700mL，200mL，然后200mL)萃取。在真空中浓缩合并的有机萃取物，然后通过色谱(硅胶，0-50％EtOAc庚烷溶液)纯化，从而得到黄色固体状4-甲酰基-2-羟基-苯甲酸甲酯26-04(2.25g)。
在接有迪安斯托克分离器(Dean Stark trap)的圆底烧瓶中，将26-04(2.25g，12mmol)及氨基乙醛二甲基缩醛(1.31g，12mmol)在甲苯中回流3h。在真空中浓缩反应混合物，从而得到粗制的褐色油状4-{[2,2-二甲氧基-乙基亚氨基]-甲基}-2-羟基-苯甲酸甲酯26-05(3.33g，12.4mmol)。向此粗制油中添加大搅拌棒、聚磷酸(25.0g)及五氧化二磷(33.0g，232mmol)。将所得黏性焦油在80℃下搅拌5h。用H2O(600mL)稀释反应混合物，将其转移至5L Erlenmyer烧瓶中，并用小份的固体NaHCO3小心处理经剧烈搅拌的混合物，直至该添加不再使所接受混合物发泡为止。然后用DCM(5×200mL)萃取碱性水性混合物。用H2O(2×50mL)洗涤合并的有机萃取物，用Na2SO4干燥，在真空中浓缩，然后通过色谱(硅胶，0-100％EtOAc庚烷溶液)纯化，从而得到5-羟基-异喹啉-6-甲酸甲酯26-06(0.520g)。
将26-06(0.520g，2.46mmol)溶解于MeOH(15mL)中，然后添加存于二噁烷中的4N HCl(6.15mL，24mmol)。在H-Cube仪器上实施氢化，此为通过在10毫巴H2压力下(5h)然后在50毫巴H2压力下(15h)使溶液以1mL/分钟的速率连续循环通过PtO2芯柱来达成。在减压下浓缩反应混合物，从而得到红色固体状粗制5-羟基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-6-甲酸甲酯盐酸盐26-07(0.90g)。将此粗制固体溶解于DCM(30mL)中，并冷却至0℃，之后添加三乙胺(1.65mL，11mmol)，然后添加焦碳酸二-叔丁基酯(1.70mL，7.39mmol)。自冷浴去除反应混合物，搅拌16h，在减压下浓缩，并通过色谱(硅胶，0-50％EtOAc庚烷溶液)纯化。使所预期的中间体5-羟基-3,4-二氢-1H-异喹啉-2,6-二甲酸2-叔丁基酯6-甲酯26-08(0.492g)与焦碳酸二-叔丁基酯(1.61g)共洗脱。将混合物(2.1g)溶解于MeOH(50mL)中，添加K2CO3(2.21g，16mmol)，并将该所得混合物搅拌16h。自反应烧瓶去除上清液，并用MeOH(2×10mL)研磨沉积物。在减压下浓缩合并的甲醇上清液，将其溶解于EtOAc(50mL)中，用1N HCl(3×30mL)、盐水(10mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并在真空中浓缩，从而得到26-08(0.422g)。合并此残余物与碘甲烷(1.0mL，16mmol)、K2CO3(0.20g，1.5mmol)、Cs2CO3(0.40g，1.5mmol)及丙酮(4.0mL)，并在微波中在70℃下辐照7h。在减压下浓缩混合物，并通过色谱(硅胶，0-100％EtOAc)纯化，从而得到不纯的5-甲氧基-3,4-二氢-1H-异喹啉-2,6-二甲酸2-叔丁基酯6-甲酯26-09(0.245g)，将其原样用于以下步骤。
将不纯的26-09(0.240g，0.51mmol)与氢氧化锂(1.22g，5.1mmol)合并于THF(4.0mL)、MeOH(4.0mL)及水(2.0mL)中。将混合物在55℃下加热45分钟，然后在减压下浓缩。将残余物溶解于EtOAc(20mL)中，用1N HCl(3×50mL)、盐水(10mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并在真空中浓缩，从而得到白色固体状粗制5-甲氧基-3,4-二氢-1H-异喹啉-2,6-二甲酸2-叔丁基酯26-10(0.177g)。
向粗制26-10(0.177g，0.58mmol)于THF(3mL)中的溶液中添加硼烷的1M THF溶液(1.27mL，1.27mmol)，并将所得混合物搅拌18h。将反应混合物在真空中浓缩，并通过反相色谱(C18硅胶，存于H2O中的5-95％MeCN以及0.1％TFA)纯化，从而得到6-羟基甲基-5-甲氧基-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-甲酸叔丁基酯26-11(0.125g)的澄清无色残余物。
将26-11(0.125g，0.43mmol)及N,N-二异丙基乙胺(0.111mL，0.64mmol)溶解于DCM(4.0mL)中，通过在氩与真空之间交替(3×)来对所得混合物实施脱氧，然后将其冷却至-30℃。添加二溴化三苯基膦(0.262g，0.60mmol)，并所得混合物搅拌3h，同时使冷浴升温至-15℃。在减压下浓缩反应混合物，并通过色谱(硅胶，存于庚烷中的5-50％EtOAc)来纯化残余物，从而得到预期的中间体6-溴甲基-5-甲氧基-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-甲酸叔丁基酯26-12(0.103g)。
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚3-15、溴化物26-12及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物220：MS，电喷射，m/z＝599.3[M+H]，RT 0.71min；
化合物221：MS，电喷射，m/z＝571.3[M+H]，RT 0.71min；
实施例27：5-甲氧基-1-(6-{3-甲基-2-[5-甲基-1-氧代基-2-(四氢-吡喃-4-基)-1,2,3,4-四氢-异喹啉-6-基甲氧基]-苯基}-吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-甲酸
向化合物27(0.065g，0.11mmol)于1,1,2,2-四氯乙烷:水4:1的混合物(1.2mL)中的悬浮液中添加亚氯酸钠(0.035g，0.39mmol)。将混合物在55℃下加热2小时，然后将其冷却至室温，并通过C18快速反相色谱纯化混合物，从而得到标题化合物(0.009g)。
化合物167：MS，电喷射，m/z＝584.8[M+H]，RT 1.01min。
以下化合物为根据上述操作使用化合物114作为适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物194：MS，电喷射，m/z＝597.22[M+H]，RT 1.02min。
实施例28：1-{6-[2-(2-(S)-1-[1,4]二噁烷-2-基甲基-5-甲基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-6-基甲氧基)-3-甲基-苯基]-吡啶-2-基}-5-乙氧基-1H-吡唑-4-甲酸的制备
将胺8-42(80.0mg，0.152mmol)溶解于乙腈(3.0mL)中，并添加氯化物(16.87mg，0.182mmol)及Cs2CO3(51.5mg，0.243mmol)。将反应物加热至60℃并搅拌过夜。LC-MS表明所预期质量。用EtOAc萃取反应物，用盐水洗涤，将其经MgSO4干燥，并浓缩。使用12-100％EtOAc庚烷溶液梯度洗脱使所得残余物通过硅胶色谱。收集预期的级份并浓缩，从而得到产物(43.0mg)。
向环氧化物28-1(43.0mg，0.074mmol)及DCE(2.0mL)的溶液中添加2-氯乙醇(0.005mL，0.081mmol)，随后添加BF3Et2O(0.01mL)于DCE中的溶液。将反应物在45℃下搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温并浓缩。所得物质以粗制形式继续用于下一步骤。
向起始物质28-2(40.0mg)中添加2.0M NaOH溶液(2.0mL)。将此溶液加热至90℃，并使其变成均相。将其搅拌3h，并将反应物冷却至室温。使其通过C18管柱(含0.1％TFA的20-80％ACN水溶液)。收集预期的级份并浓缩，从而得到预期的化合物185(19.1mg)。
化合物185：MS，电喷射，m/z＝599.3[M+H]，RT 0.75min，方法B1。
以下化合物为根据实施例28中阐述的操作使用适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物170：MS，电喷射，m/z＝599.3[M+H]，RT 0.63min，方法B1。
实施例29：8-乙基-6(羟基甲基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁基酯(29-13)
在室温下向化合物29-1(300g，1.6mol)及K2CO3(665g，4.8mol)于DMF(2000mL)中的混合物中逐滴添加MeI(250g，1.8mol)。将混合物搅拌过夜。TLC显示完成反应。用H2O淬灭反应，并用EtOAc萃取。干燥有机层，过滤，在减压下蒸发，从而得到粗制产物，通过硅胶色谱来纯化该粗制产物，从而得到化合物29-2(165g，产率52％)。
将化合物29-2(100g，497.4mmol)、NBS(88.5g，497.4mmol)及AIBN(10g，10％)于CCl4(700mL)中的溶液加热至回流并保持12h。TLC显示完成反应。在冷却至室温后，通过H2O淬灭反应，并用EtOAc萃取。干燥有机层，过滤并在减压下蒸发，从而得到粗制产物，通过硅胶色谱来纯化该粗制产物，从而得到化合物29-3(48g，产率42％)。
将化合物29-3(80g，285.7mmol)及TMSCN(28.2g，285.7mmol)于ACN(600ml)中的溶液在室温下搅拌0.5h。在冰浴下(ice based)将TBAF(74.6g，285.7mmol)添加至反应混合物中，并将混合物搅拌12h。TLC显示完成反应。用H2O淬灭反应，并用EtOAc萃取。干燥有机层，过滤并在减压下蒸发，从而得到粗制产物，通过硅胶色谱来纯化该粗制产物，从而得到化合物29-4(39g，产率60％)。
将化合物29-4(12g，53.1mmol)及Ni(10g)于MeOH(80ml)及NH3.H2O(80ml)中的溶液在H2及50psi压力及室温下搅拌5h。TLC显示完成反应。过滤混合物，并在真空泵上浓缩滤液，从而得到粗制产物(8g)，将其直接用于下一步骤中。
将化合物29-5(75g，326.08mmol)及HCHO(8.8g，293.47mmol)于HCO2H(500ml)中的溶液在50℃及N2下搅拌过夜。LCMS显示完成反应。在减压下去除溶剂，从而得到粗制产物，通过硅胶色谱来纯化该粗制产物，从而得到化合物29-6(54g，2个步骤的产率为64％)。
将化合物29-6(45g，186mmol)于HBr水溶液(400ml)中的溶液在90℃下搅拌12h。LCMS显示完成反应。在减压下去除溶剂，从而得到粗制产物，通过硅胶色谱来纯化该粗制产物，从而得到化合物29-7(20.75g，产率53％)。
将化合物29-7(20g，87.7mmol)、Boc2O(19.1g，87.7mmol)及TEA(17.7g，175.4mmol)于THF/H2O(1:1)(200ml)中的溶液在室温下搅拌3h。TLC显示完成反应。用H2O淬灭反应，并用EtOAc萃取。干燥有机层，过滤并在减压下蒸发，从而得到粗制产物，通过硅胶色谱来纯化该粗制产物，从而得到化合物29-8(20g，产率70％)。
将化合物29-8(14g，42.7mmol)、K2CO3(17.66g，128mmol)、Pd(dppf)Cl2(2.5g)、Pd(PPh3)4(2.5g)及化合物29-8B(7.22g，46.9mmol)于DMF(150ml)中的溶液在回流下搅拌过夜。TLC显示完成反应。在过滤后，在减压下浓缩滤液，并通过硅胶色谱纯化残余物，从而得到化合物29-9(7.2g，产率61％)。
将化合物29-9(7.2g，26.2mmol)及Pd-C(2g)于MeOH(100ml)中的溶液在H2及50psi压力及室温下搅拌12h。TLC显示完成反应。过滤混合物，并浓缩滤液，从而得到粗制产物，通过硅胶色谱来纯化该粗制产物，从而得到化合物29-10(5.8g，产率80％)。
将化合物29-10(5.8g，20.9mmol)、Tf2O(5.9g，20.9mmol)及TEA(6.3g，62.7mmol)于DCM(70ml)中的溶液在室温下搅拌3h。TLC显示完成反应。用H2O淬灭反应，并用EtOAc萃取。干燥有机层，过滤并在减压下蒸发，从而得到粗制产物，通过硅胶色谱来纯化该粗制产物，从而得到化合物29-11(7g，产率82％)。
将化合物29-11(7g，17.1mmol)、Pd(OAc)2(1.4g)、dppp(1.4g)及Et3N(5.2g，51.3mmol)于MeOH(80mL)中的混合物在80℃及3MPa压力的CO下搅拌2d。过滤出固体，并在减压下浓缩滤液。通过硅胶色谱来纯化残余物，从而得到化合物29-12(4.8g，产率88％)。
在-50℃下经30min向LiAlH4(1.1g，30.1mmol)于THF(10mL)中的溶液中逐滴添加化合物29-12(4.8g，15.0mmol)于THF(50mL)中的溶液。在添加后，将反应混合物在0℃下搅拌2.5h。然后用H2O及DCM处理反应混合物。分离有机层，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。通过硅胶色谱来纯化残余物，从而得到29-13(4.1g，产率92％)。
类似地，如实施例25中所阐述自29-13制备溴化物，从而得到化合物29-14。
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚2-8、溴化物29-14及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物248：MS，电喷射，m/z＝583.3[M+H]，RT 1.29min(方法A2)；
化合物249：MS，电喷射，m/z＝555.3[M+H]，RT 1.37min(方法A2)。
实施例30：8-氰基-6-(羟基甲基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁基酯(30-12)
在室温下向化合物30-1(300g，1.6mol)及K2CO3(665g，4.8mol)于DMF(2000mL)中的混合物中逐滴添加MeI(250g，1.8mol)。将混合物搅拌过夜。TLC显示完成反应。用H2O淬灭反应，并用EtOAc萃取。干燥有机层，过滤，在减压下蒸发，从而得到粗制产物，通过硅胶色谱来纯化该粗制产物，从而得到化合物30-2(165g，产率52％)。
将化合物30-2(100g，497.4mmol)、NBS(88.5g，497.4mmol)及AIBN(10g，10％)于CCl4(700mL)中的溶液加热至回流并保持12h。TLC显示完成反应。在冷却至室温后，通过H2O淬灭反应，并用EtOAc萃取。干燥有机层，过滤并在减压下蒸发，从而得到粗制产物，通过硅胶色谱来纯化该粗制产物，从而得到化合物30-3(48g，产率42％)。
将化合物30-3(80g，285.7mmol)及TMSCN(28.2g，285.7mmol)于ACN(600ml)中的溶液在室温下搅拌0.5h。在冰浴下将TBAF(74.6g，285.7mmol)添加至反应混合物中，并将混合物搅拌12h。TLC显示完成反应。用H2O淬灭反应，并用EtOAc萃取。干燥有机层，过滤并在减压下蒸发，从而得到粗制产物，通过硅胶色谱来纯化该粗制产物，从而得到化合物30-4(39g，产率60％)。
将化合物30-4(12g，53.1mmol)及Ni(10g)于MeOH(80ml)及NH3.H2O(80ml)中的溶液在H2及50psi压力及室温下搅拌5h。TLC显示完成反应。过滤混合物，并在真空泵上浓缩滤液，从而得到粗制产物(8g)，将其直接用于下一步骤中。
将化合物30-5(75g，326.08mmol)及HCHO(8.8g，293.47mmol)于HCO2H(500ml)中的溶液在50℃及N2下搅拌过夜。LCMS显示完成反应。在减压下去除溶剂，从而得到粗制产物，通过硅胶色谱来纯化该粗制产物，从而得到化合物30-6(54g，2个步骤的产率为64％)。
将化合物30-6(45g，186mmol)于HBr水溶液(400ml)中的溶液在90℃下搅拌12h。LCMS显示完成反应。在减压下去除溶剂，从而得到粗制产物，通过硅胶色谱来纯化该粗制产物，从而得到化合物30-7(20.75g，产率53％)。
将化合物30-7(20g，87.7mmol)、Boc2O(19.1g，87.7mmol)及TEA(17.7g，175.4mmol)于THF/H2O(1:1)(200ml)中的溶液在室温下搅拌3h。TLC显示完成反应。用H2O淬灭反应，并用EtOAc萃取。干燥有机层，过滤并在减压下蒸发，从而得到粗制产物，通过硅胶色谱来纯化该粗制产物，从而得到化合物30-8(20g，产率70％)。
将化合物30-8(11g，34.8mmol)、Pd(dppf)Cl2(2.5g)、Pd(PPh3)4(2.5g)、ZnCN(2.8g，31.3mmol)、Zn(1.1g，17.4mmol)于DMF(110ml)中的溶液在回流下搅拌过夜。TLC显示完成反应。在过滤后，在减压下浓缩滤液，并通过硅胶色谱纯化残余物，从而得到化合物30-9(6.5g，产率71％)。
将化合物30-9(12g，43.7mmol)、Tf2O(12.3g，43.7mmol)及TEA(13.3g，131.23mmol)于DCM(120ml)中的溶液在室温下搅拌3h。TLC显示完成反应。用H2O淬灭反应，并用EtOAc萃取。干燥有机层，过滤并在减压下蒸发，从而得到粗制产物，通过硅胶色谱来纯化该粗制产物，从而得到化合物30-10(9g，产率51％)。
将化合物30-10(9.5g，23.4mmol)、Pd(OAc)2(1.9g)、dppp(1.9g)及Et3N(7.1g，70.1mmol)于MeOH(90mL)中的混合物在80℃及3MPa压力的CO下搅拌2d。过滤出固体，并在减压下浓缩滤液。通过硅胶色谱来纯化残余物，从而得到化合物30-11(6g，产率80％)。
在-50℃下经30min向LiAlH4(1.4g，37.9mmol)于THF(10mL)中的溶液中逐滴添加化合物30-11(6g，19.0mmol)于THF(50mL)中的溶液。在添加后，将反应混合物在-20℃下搅拌4.5h。然后用H2O及DCM处理反应混合物。分离有机层，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。通过硅胶色谱来纯化残余物，从而得到30-12(4.1g，产率74％)。
类似地，如实施例25中所阐述自30-12制备溴化物，从而得到化合物30-13。
表1的以下化合物根据实施例7a中阐述的操作使用酚2-8、溴化物30-13及其他适当起始物质及纯化条件来制备：
化合物250：MS，电喷射，m/z＝580.2[M+H]，RT 0.61min。
生物活性的评价
细胞分析
在存在及不存在50％人类血清(HS)的情况下，使用经稳定转染从而表达人类可溶性鸟苷酸环化酶α1及β1次单元(sGC)的中国仓鼠卵巢细胞来实施sGC细胞活化剂分析。将细胞与40μM的sGC抑制剂1H-[1,2,4]噁二唑并[4,3-a]喹噁啉-1-酮(ODQ)一起在含有0.1％牛血清白蛋白及3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)的缓冲液中预培育1h。制备测试化合物在DMSO中的浓度反应曲线。在含有IBMX的缓冲液或含有IBMX的AB型HS中实施化合物的中间体稀释。将经稀释化合物添加至细胞中，并将其在室温下培育30min。使用CisBio均相时间解析荧光试剂盒测量cGMP，并计算各化合物的EC50。
上述分析测试本发明的代表性化合物的活性。在上述分析中，优选的化合物具有小于1,000nM的EC50，且更优选的化合物具有小于200nM的EC50。作为实例，表1的代表性化合物的数据显示于表2中。
表2
溶解性的评价
溶解性通过以下方法来测量。
1.试样制备：
以96孔板格式制备各化合物的10mM DMSO储备溶液100uL。该实验在单一测定中在3个pH值(2.2、4.5及6.8)下实施。对于每个pH及一个参照而言，各化合物皆需要40uL。
缓冲液制备：
McIlvaine pH 2.2：向2.076g柠檬酸一水合物及0.043g Na2HPO4×2H2O中添加100ml去离子水
McIlvaine pH 4.5：向1.166g柠檬酸一水合物及1.585g Na2HPO4×2H2O中添加100ml去离子水
McIlvaine pH 6.8：向0.476g柠檬酸一水合物及2.753g Na2HPO4×2H2O中添加100ml去离子水
利用适宜液体处置装置(或液体处置器)，将390uL各缓冲液溶液及10uL化合物添加至96深孔板的每一孔中。牢固覆盖所述板，并在室温下在架空振荡器上(以54RPM)振荡24h。DMSO在最终缓冲液中的含量为2.5％v/v。
在24h后，在打开前对所述板进行离心以去除盖上的微滴(约5min，以2500RPM)。
利用微孔96孔过滤器板在真空中过滤。将滤液收集于深孔板中，并将其转移至适宜板中用于UPLC分析。
通过在96深孔板中将10uL化合物添加至390uL 50:50乙腈/水中来制备参照板，并将其转移至适宜板中用于UPLC分析。目视检查孔的沉淀，存在任何沉淀皆以注释的形式注明于报告结果中。
2.试样测量
利用UPLC-UV使用下文所述的色谱方法来测量试样。
使用Waters软件来生成试样集(依据板布局而定)、试样集方法及仪器方法。
一个试样集包含针对3个96孔板的方法(一个参照板及两个试样板，且包括一个试样集方法及一个仪器方法)。
3.数据处理及分析
对在254nm处收集的UV色谱图进行积分及处理。
假定化合物完全溶解于参照溶液(50:50乙腈/水)中。
表1化合物的溶解性数据(μg/mL)显示于下表3中。
表3
代谢稳定性的评价
目标
设计5个时间点的高通量人类肝微粒体(HLM)代谢稳定性分析来测定活体外化合物代谢。将化合物以1uM的浓度与HLM一起在37℃下培育总计60min。使用5min、15min、30min及60min时的剩余化合物百分比来计算t1/2(min)、CLint(mL/min/kg)、CLh(mL/min/kg)及Qh％。该分析基于96孔格式且每个板可容纳高达92种化合物(n＝1)。
培育
使用96孔多信道头，对配备有Peltier加热组/振荡器的Biomek FX进行操作，以完成以下步骤：
1.移取175uL 1.15mg/mL微粒体至装配到Peltier加热组/振荡器的板(培育板)中的96个锥形插件(Analytical Sales and Products，目录号96PL05)中的每一个插件中。
2.将5uL来自分析板的化合物添加至微粒体中，并在42.1℃下将混合物以600rpm振荡10min(对于欲在37℃下培育的试样，需要在Peltier上设定42.1℃)。
3.在10min后，提示使用者将NADPH板添加至面板(deck)中并将20uL自NADPH板添加至培育板中，以起始反应。
4.将215uL含有内标物的100％冷乙腈添加至0分钟、5分钟、15分钟、30分钟及60分钟的“淬灭”板中。
5.在培育0min、5min、15min、30min及60min时，抽吸12uL培育混合物，并将其添加至淬灭溶液中，以终止反应。
6.将185uL HPLC级别水添加至0分钟、5分钟、15分钟、30分钟及60分钟淬灭板中的每一孔中，以将化合物稀释至对于质谱仪适当的浓度。
在收集所有时间点后，用96孔可刺穿板垫或热密封箔密封淬灭板，并以3000rpm离心15min，以使微粒体沉淀。
分析
使用LC/MS/MS利用电喷射离子化(ESI)及先前测定的MRM转变来分析各板。LC方法包括以下参数：
注入体积：5uL
流动相：含0.1％甲酸的水(A)及含0.1％甲酸的乙腈(B)(HPLC级别)
左右温度：35℃
运行时间：4.0min
管柱：Thermo Scientific，Aquasil C18，50×2.1mm，5μ，件号77505-052130，或等效管柱
LC泵梯度：
总时间(min) 流速(uL/min) A％ B％
0 500 90.0 10.0
0.5 500 90.0 10.0
1.5 500 1.0 99.0
2.5 500 1.0 99.0
3.3 500 90.0 10.0
4.0 500 90.0 10.0
若峰形较差且不可进行适当积分，则可使用以下LC方法：
注入体积：5uL
流动相：2.5mM碳酸氢铵(A)及100％乙腈(B)(HPLC级别)
水性洗涤：90％水，10％乙腈(HPLC级别)
有机洗涤：90％乙腈，10％水(HPLC级别)
左右温度：35℃
运行时间：4.5min
管柱：Phenomex Luna 3u C18(2)100A，50×2.00mm
LC泵梯度：
总时间(min) 流速(uL/min) A％ B％
0 500 90.0 10.0
0.5 500 90.0 10.0
1.5 500 1.0 99.0
2.5 500 1.0 99.0
3.30 500 90.0 10.0
4.50 500 90.0 10.0
使用Activitybase中的Excel模板，比较对应于5min、15min、30min及60min的峰面积与0min下的峰面积，以使用以下等式计算剩余化合物的百分比：
剩余化合物百分比＝(t min时的AUC/0min时的AUC)×100，其中t＝0min、5min、15min、30min或60min。
绘制时间(min)对剩余化合物百分比的自然对数(Ln)的图，以测定斜率。利用斜率，使用等式“t1/2＝0.693/斜率”来计算t1/2(min)。
Clint，固有清除率
·0.693/t1/2*平均肝重(g/平均体重(kg))*f(u)/培育中的蛋白浓度(mg/mL)*mg微粒体蛋白/g肝
·0.693/t1/2*26g/kg*1/1.0mg/mL*45mg/g
Clh，肝清除率
·肝流量*f(u)*Clint/(肝流量+f(u)*Clint)
Qh，肝血流量％
·(Clh/肝流量)*100
表1的化合物的代谢稳定性数据(Qh％)显示于下表4中。优选的化合物具有小于24的Qh％值。
表4
治疗性使用方法
本文所公开化合物有效活化可溶性鸟苷酸环化酶。可溶性鸟苷酸环化酶的活化或加强，是用于预防及治疗各种与缺陷sGC活化相关的疾病或病况的有吸引力的手段。因此，在本发明的一个实施方案中，提供治疗可通过sGC活化或加强来减轻的疾病的方法。所述疾病包括：
心血管及相关疾病，包括高血压、动脉粥样硬化、外周动脉疾病、再狭窄、中风、心脏衰竭、冠状血管痉挛、脑血管痉挛、缺血/再灌注损伤、血栓栓塞性肺高血压、肺动脉高血压、稳定及不稳定性心绞痛及血栓栓塞性病症；
炎性疾病，包括牛皮癣、多发性硬化、关节炎、哮喘及慢性阻塞性肺病；
肝纤维变性病症，包括(但不限于)任何病因的硬化或肝特定区域的纤维化(例如门静脉周纤维化)，其可由免疫损伤、血液动力学效应及/或其他原因造成；
肾纤维变性病症，包括(但不限于)肾小球硬化、局灶性肾小球硬化、肾小球膜纤维化；由于免疫损伤、血液动力学效应引起的间质性纤维化；糖尿病(I型及2型)、糖尿病性肾病、IgA肾病、狼疮性肾病、膜性肾病、高血压、溶血性尿毒性综合征、多发性肾小球性肾炎、间质性肾炎；因免疫及非免疫原因再次引起的肾小管间质性肾炎；
由于免疫及非免疫原因引起的扩散性及局部性肺纤维变性病症，包括(但不限于)特发性肺纤维化；由于暴露于毒素、化学品、药物引起的肺纤维化；及囊肿性纤维化；
由于免疫及非免疫原因引起的心脏纤维变性病症，包括缺血性心脏病(冠状动脉疾病)及一或多个冠状血管的短暂性及/或持续性血流减少(包括可能与冠状动脉或静脉上的介入相关、与心脏手术及/或使用心肺绕道操作及由于病毒及非病毒原因引起的心肌炎相关的所述病症)，以及可能由于与人类身体所暴露的其他抗原的交叉反应引起的免疫相关性心肌损伤；
至少部分地通过可溶性鸟苷酸环化酶活性减少或降低所介导的其他疾病，例如肾病、糖尿病、泌尿科病症(包括膀胱过动症、良性***增生及***障碍)及神经病症(包括阿尔茨海默氏病、帕金森氏病及神经性疼痛)。
所述病症已在人类中经充分表征，而且亦以类似病因存在于其他哺乳动物中，且其可通过本发明的药物组合物来治疗。
对于治疗用途而言，本发明化合物可经由药物组合物以任何常用医药剂型以任何常用方式来给予。常用剂型通常包括适于所选具体剂型的药学上可接受的载剂。给予途径包括(但不限于)静脉内、肌内、皮下、滑膜内、通过输注、舌下、经皮、经口、局部或通过吸入。优选给予模式为经口及静脉内给予。
本发明化合物可单独给予，或与佐剂(包括其他活性成分)组合给予，所述佐剂(包括其他活性成分)可达到以下作用：增强抑制剂的稳定性、在某些实施方案中有利于给予含有本发明化合物的药物组合物、增加溶解或分散、增加抑制活性、提供辅助疗法等等。在一个实施方案中，可给予(例如)多种本发明化合物。有利地，所述组合疗法利用较低剂量的常规疗法，因此避免使用所述药剂作为单一疗法时可能导致的毒性及不利的副反应。本发明化合物可与常规疗法或其他佐剂一起以物理方式合并至单一药物组合物中。有利地，所述化合物可以以单一剂型共同给予。在一些实施方案中，包含所述化合物组合的药物组合物含有至少约5％、但更优选地至少约20％的式(I)化合物(w/w)或其组合。本发明化合物的最佳百分比(w/w)可变化，且所述变化是在本领域技术人员的知识范围内。或者，本发明化合物及常规疗法或其他佐剂可单独(连续或并行)给予。单独给药在给药方案中具有更大灵活性。
如上所述，本发明化合物的剂型可包括本领域技术人员已知且适于该剂型的药学上可接受的载剂及佐剂。所述载剂及佐剂包括(例如)离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白、缓冲物质、水、盐或电解质及基于纤维素的物质。优选剂型包括片剂、胶囊、小胶囊(caplets)、液体、溶液、悬浮液、乳液、锭剂(lonzenges)、糖浆、可重构粉末、颗粒、栓剂及透皮贴剂。已知制备所述剂型的方法(例如参见H.C.Ansel及N.G.Popovish，PharmaceuticalDosage Forms and Drug Delivery Systems，第5版，Lea and Febiger(1990))。本发明化合物的剂量水平及需求可由本领域技术人员根据适于具体患者的可用方法及技术来选择。在一些实施方案中，对于70kg患者，剂量水平在约1-1000mg/剂量范围内。尽管每天一次给药可能足够，但每天可给药至多5次。对于口服剂量而言，可需要至多2000mg/天。如本领域技术人员所应了解，依据具体因素而定，可能需要较低或较高剂量。例如，特定剂量及治疗方案将取决于例如以下因素：患者的整体健康状况、患者病症的严重程度及病程或对该患者的处置，以及治疗医师的判断。

Claims (17)

1.一种式I化合物，
其中：
A为含有一个氮及任选一个氧的5至7元饱和杂环基团，其中该杂环基团的一个碳任选经一或两个选自C1-3烷基及氧代基的基团取代；
R1为任选经甲氧基取代的C1-4烷基；
R2选自H、F、Cl、C1-3烷基、-CN、-OMe及-CF3；
R3选自H及-CH3；
R4选自H、F、-CH3及-OMe；
R5选自H、Cl、-CH3、-CH2CH3、-CF3、F及-OMe；
R6连接至A上的氮且选自H、C1-6烷基、-(CH2)nC3-6环烷基、-C(O)C1-6烷基、-(CH2)n杂环基、-(CH2)n芳基、-(CH2)n杂芳基、-SO2芳基、SO2C1-6烷基，其中该C1-6烷基、-(CH2)n杂环基、-(CH2)n环烷基、-(CH2)n芳基及-(CH2)n杂芳基任选经一至四个独立地选自C1-3烷基、卤素、C1-3烷氧基、-CF3、-OH、氧代基、-(CH2)1-3O(CH2)2-3OH及-SO2CH3的基团取代；
R7选自H、-CH3、-CH2CH3、-CF3、F及-CN；
n为0、1或2
或其盐。
2.如权利要求1的化合物，其中：
A为含有一个氮的5至7元饱和杂环基团，其中该杂环基团的一个碳任选经一或两个C1-3烷基取代；
R1为C1-3烷基；
R2选自H、F、Cl、C1-3烷基、-CN、-OMe及-CF3；
R3选自H及-CH3；
R4选自H及F；
R5选自H、Cl及-CH3；
R6连接至A上的氮且选自H、C1-6烷基、-(CH2)nC3-6环烷基、-C(O)C1-6烷基、-(CH2)n杂环基、-(CH2)n芳基及-(CH2)n杂芳基，其中该C1-6烷基、-(CH2)n杂环基、-(CH2)n环烷基、-(CH2)n芳基及-(CH2)n杂芳基任选经一至四个独立地选自C1-3烷基、卤素、C1-3烷氧基、-CF3、-OH及-SO2CH3的基团取代；
R7为H；
且
n为0、1或2；
或其盐。
3.如权利要求1或2的化合物，其中：
R1为甲基、乙基或异丙基；且
该基团
选自：
或其盐。
4.如权利要求1-3中任一项的化合物，其中：
R2选自-CH3、F、Cl及-CF3；且
R6选自H、C1-6烷基、-(CH2)nC3-6环烷基、-C(O)C1-6烷基及-(CH2)n杂环基，其中该C1-6烷基、-(CH2)n环烷基及-(CH2)n杂环基任选经一至四个独立地选自C1-3烷基、卤素、C1-3烷氧基、-CF3、-OH及-SO2CH3的基团取代；
或其盐。
5.如权利要求1-4中任一项的化合物，其中R6中所提及的各杂环基选自氧杂环丁基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、2-氧杂二环[3.2.0]庚基、[1,4]二噁烷基、8-氧杂二环[3.2.1]辛烷基、1-氧杂螺[4.5]癸烷基及吡咯烷-2-酮；
R6中所提及的各杂芳基选自咪唑基、异噁唑基、吡嗪基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、噻唑基及4,5,6,7-四氢苯并噻唑基；
且R6中所提及的各芳基为苯基；
或其盐。
6.如权利要求1-5中任一项的化合物，其中：
R6为-(CH2)n杂环基，其中各杂环基选自氧杂环丁基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、2-氧杂二环[3.2.0]庚基、[1,4]二噁烷基、8-氧杂二环[3.2.1]辛烷基及1-氧杂螺[4.5]癸烷基；
或其盐。
7.如权利要求1-6中任一项的化合物，其中：
R2为-CH3；
R3为H；
R4为H或-CH3；
R5为H或-CH3；
R7在R5的对位且为H、-CH3或-CH2CH3；
或其盐。
8.如权利要求1-7中任一项的化合物，其中：
该基团
为
或其盐。
9.如权利要求1-8中任一项的化合物，其中：
R3为H；且
R4为H；
或其盐。
10.如权利要求1的化合物，其选自：
及其药学上可接受的盐。
11.如权利要求10的化合物，其选自：化合物编号1、2、3、4、5、7、8、9、12、15、16、18、21、27、28、30、31、35、36、39、41、42、44、45、46、47、48、57、59、62、68、77、78、79、80、82、83、84、85、86、88、92、93及94，及其药学上可接受的盐。
12.如权利要求10的化合物，其选自：化合物编号95、97、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、136、137、139、140、141、142、145、146、152、153、154、155、157、158、159、161、162、163、164、165、166、167、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、184、185、186、187、188、189、191、193、194、195、196、197、198、199、201、202、203、204、205、206、207、208、210、211、212、213、214、215、216、220、222、223、224、225、227、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257，及其药学上可接受的盐。
13.一种药物组合物，其包含如权利要求1至12中任一项的化合物及药学上可接受的赋形剂或载剂。
14.一种治疗可通过sGC的活化或加强来减轻的疾病或病症的方法，该方法包括向有此需要的患者给药治疗有效量的权利要求1至12中任一项的化合物。
15.如权利要求14的方法，其中该疾病或病症选自心血管疾病、炎性疾病、肝纤维变性病症、肾纤维变性病症、肺纤维变性病症及心脏纤维变性病症。
16.如权利要求14的方法，其中该疾病选自肾病、膀胱过动症、良性***增生、***障碍、阿尔茨海默氏病、帕金森氏病及神经性疼痛。
17.如权利要求14的方法，其中该疾病为糖尿病性肾病。
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