CN104546704B - 一种奶牛干乳期用盐酸头孢噻呋***注入剂及其制备方法 - Google Patents
一种奶牛干乳期用盐酸头孢噻呋***注入剂及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种盐酸头孢噻呋***注入剂(干乳期)及其制备方法。所述盐酸头孢噻呋***注入剂,由下述原辅料制成:盐酸头孢噻呋2.5‑10g、单硬脂酸甘油酯0.5‑5g、助悬剂0.5‑5g、植物油加至100ml。其制备工艺如下:将适量植物油和单硬脂酸甘油酯混合后,加热熔化,然后向其中加入助悬剂、盐酸头孢噻呋,再加植物油至全量,研磨均匀,制得盐酸头孢噻呋***注入剂。该***注入剂具有如下优点:药物释放缓速,生物利用度高,对局部组织刺激小;每头牛每个乳区单独用药,避免了交叉感染;通过***注入,使用方便,避免了注射给药引起的动物应激反应,为临床用药提供便利;疗效显著,具有极高的推广价值。
Description
技术领域
本发明涉及一种盐酸头孢噻呋***注入剂(干乳期)及其制备方法。
背景技术
头孢噻呋(Ceftiofur,CEF)是动物专用的第三代头孢类抗菌素。头孢噻呋的抗菌谱广、抗菌活性强,对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌以及一些厌氧菌均有极强的抗菌活性;且具有稳定的β-内酰胺环,对于各种能产生β-内酰胺酶的细菌亦有良好的杀灭效果,不易产生耐药菌株和交叉耐药性,临床上主要用于多种动物敏感菌引起的各种感染。因此,应用头孢噻呋治疗畜禽疾病意义重大。
现国内外研究的头孢噻呋剂型有注射用头孢噻呋钠粉针剂、头孢噻呋钠脂质体等剂型,这些剂型的缺点是作用时间短,其用药方法基本均为每天注射一次,连用3~5天。因此,开发一种药物释放缓速、生物利用度高且适用于奶牛干乳期使用的头孢噻呋制剂具有重要的现实意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种盐酸头孢噻呋***注入剂(干乳期)及其制备方法。
本发明所提供的盐酸头孢噻呋***注入剂(干乳期),由下述原辅料制成:盐酸头孢噻呋(原料药)2.5-10g、单硬脂酸甘油酯0.5-5g、助悬剂0.5-5g、植物油加至100ml。
所述盐酸头孢噻呋***注入剂可进一步由下述原辅料制成:盐酸头孢噻呋(原料药)5g、单硬脂酸甘油酯0.5-5g、助悬剂0.5-5g、植物油加至100ml。
其中,所述植物油具体可选自下述至少一种:大豆油、茶油、玉米油、花生油和棉籽油。所述植物油进一步可为大豆油。
所述助悬剂具体可选自下述至少一种:吐温80、司盘80和大豆磷脂。所述助悬剂进一步可为司盘80。
所述盐酸头孢噻呋原料药的粒径可为5-10μm。
本发明所述盐酸头孢噻呋***注入剂的性状为类白色至黄色的油混悬液。
上述盐酸头孢噻呋***注入剂的制备方法,由植物油、单硬脂酸甘油酯和助悬剂制成高分子化合物溶剂体系,再将盐酸头孢噻呋的无菌微粉加入,持续搅拌研磨制成盐酸头孢噻呋***注入剂。
具体制备方法包括如下步骤:
1)将适量植物油和单硬脂酸甘油酯混合后,加热熔化,得到混合体系(即高分子化合物溶剂体系);
2)向所述混合体系中加入助悬剂、盐酸头孢噻呋,再加植物油至全量,研磨均匀,即得所述盐酸头孢噻呋***注入剂(干乳期)。
其中,步骤1)中所述加热的条件为:60~80℃加温15~30分钟。通常情况下步骤1)中所使用的植物油的用量为植物油总量的40%-60%。
步骤2)中所述研磨可在胶体磨中进行。
所述植物油在使用前还需经过过滤以及加热灭菌的预处理。所述加热灭菌的条件为:150-160℃灭菌2-3小时。
本发明所提供的盐酸头孢噻呋***注入剂(干乳期)对奶牛干乳期***炎具有显著疗效。
与现有技术相比,本发明具有如下有益效果:
(1)给药方便快捷,减少了大量的人力物力;
(2)动物应激反应小,减少动物体的损伤;
(3)生产工艺简单,得到的制剂均匀、分散性、稳定性好,易于扩大化生产;
(4)每头牛每个乳区单独用药,即独立使用医疗器械(制剂),避免了交叉感染;
(5)本制剂相对于注射液而言,药物释放缓速,生物利用度高,对局部组织刺激
性低,临床疗效显著,具有极高的推广价值。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明,但本发明并不局限于此。
下述实施例中所述实验方法,如无特殊说明,均为常规方法;所述试剂和材料,如无特殊说明,均可通过商业途径获得。
本发明提供的盐酸头孢噻呋***注入剂是一种分布均匀的制剂,具体制备方法包括以下步骤:
A.将植物油(如中性大豆油)经过滤和加热灭菌之后放冷;
B.取适量经预处理的植物油,加入0.5~5g的单硬脂酸甘油酯;
C.60~80℃加温15~30分钟,待单硬脂酸甘油酯融化,搅拌均匀后,冷却至40℃左右,加入0.5~5g的助悬剂(如司盘80)、2.5~10g的盐酸头孢噻呋(粒径5-10μm),再补加植物油至总量为100ml;
D.研磨均匀,制得盐酸头孢噻呋***注入剂;
E.将药装入推注管中,密封,灭菌,灯检,包装。
下述实施例中对***注入剂的沉降粒度的检测方法为:用具塞量筒取供试品50ml,密塞,用力振摇1分钟,记下混悬液的开始高度H0,静置3小时,记下混悬物的最终高度H,按下式计算,结果如下:沉降比体积F=H/H0,不低于0.90即合格。
无菌检验的方法为:取本品10支,每支10ml(用前摇匀),混匀后,取25ml,加入无菌1%吐温-80与0.1%蛋白胨溶液250ml,充分振摇使分散,加入青霉素酶溶液(每1mg盐酸头孢噻呋加青霉素酶约14400单位),充分振摇30分钟,混匀,取混合液10ml,分别加入100ml硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基中,在相应条件下摇床培养14日,取培养液接种于斜面培养基上,细菌培养2日,真菌培养3日,依法检查(附录137页),结果应符合规定。
实施例1、制备盐酸头孢噻呋***注入剂(干乳期)
制备方法如下:
1)将盐酸头孢噻呋无菌粉经超微粉碎得到粒径5-10μm盐酸头孢噻呋无菌微粉;
2)将大豆油经过滤和加热灭菌(160℃灭菌2小时)后,置于室温下备用;
3)取适量经预处理的大豆油(为大豆油总用量的40%-60%),加入单硬脂酸甘油酯;加热并搅拌(60℃加温15分钟),待单硬脂酸甘油酯融化,搅拌均匀后,冷却至40℃,再加入司盘80、盐酸头孢噻呋,再加大豆油至全量;
4)在无菌胶体磨中研磨均匀,制得盐酸头孢噻呋***注入剂。
所得盐酸头孢噻呋***注入剂(干乳期)的性状为类白色至黄色的油混悬液。
对上述产品进行沉降粒度及无菌检测,其均符合***注入剂的质量标准。
实施例2、制备盐酸头孢噻呋***注入剂(干乳期)
制备方法如下:
1)将盐酸头孢噻呋无菌粉经超微粉碎得到粒径5-10μm盐酸头孢噻呋无菌微粉;
2)将大豆油经过滤和加热灭菌(150℃灭菌3小时)后,置于室温下备用;
3)取适量经预处理的大豆油(为大豆油总用量的40%-60%),加入单硬脂酸甘油酯;加热并搅拌(80℃加温30分钟),待单硬脂酸甘油酯融化,搅拌均匀后,冷却至40℃,再加入司盘80、盐酸头孢噻呋,再加大豆油至全量;
4)在无菌胶体磨中研磨均匀,制得盐酸头孢噻呋***注入剂。
所得盐酸头孢噻呋***注入剂(干乳期)的性状为类白色至黄色的油混悬液。
对上述产品进行沉降粒度及无菌检测,其均符合***注入剂的质量标准。
实施例3、制备盐酸头孢噻呋***注入剂
制备方法同实施例2。
所得盐酸头孢噻呋***注入剂的性状为类白色至黄色的油混悬液。
对上述产品进行沉降粒度及无菌检测,其均符合***注入剂的质量标准。
实施例4、制备盐酸头孢噻呋***注入剂
制备方法同实施例2。
所得盐酸头孢噻呋***注入剂的性状为类白色至黄色的油混悬液。
对上述产品进行沉降粒度及无菌检测,其均符合***注入剂的质量标准。
实施例5、制备盐酸头孢噻呋***注入剂
制备方法同实施例2。
所得盐酸头孢噻呋***注入剂的性状为类白色至黄色的油混悬液。
对上述产品进行沉降粒度及无菌检测,其均符合***注入剂的质量标准。
实施例6、制备盐酸头孢噻呋***注入剂
制备方法同实施例2。
所得盐酸头孢噻呋***注入剂的性状为类白色至黄色的油混悬液。
对上述产品进行沉降粒度及无菌检测,其均符合***注入剂的质量标准。
实施例7、盐酸头孢噻呋***注入剂(干乳期)对奶牛的体内效果试验
1)盐酸头孢噻呋***注入剂(干乳期)对奶牛的安全性试验
试验随机选用健康泌乳期奶牛初产和经产各6头,四个乳区分别单次给予实施例2制备的盐酸头孢噻呋***注入剂(干乳期)1支(规格:500mg;10ml)。
在给药前1日和0日(给药前)采集奶样各1次;给药后12小时、3日、5日、7日和10日各采奶样1次,采样时四个乳区均需要采样,并弃去前三把奶。
数据收集:整个试验期间对给药奶牛进行连续观察,记录奶牛标识、观察时间、试验日期和时间、每头奶牛日产奶量及体温等参数。各时间点所采集奶样检测乳中体细胞数(SCC),通过触诊观察奶牛红肿热痛等临床症状。
细菌分离:分别在给药前0日和给药后第10日各采集奶样1次(20mL)进行细菌学检查。采样时先用清水冲洗***,用0.1%新洁尔灭或者75%乙醇对***及周围进行消毒,待酒精挥发后,手工挤奶,弃去前三把奶后,用灭菌试管采集奶样于灭菌试管中,贴好标签,低温(4℃)保存并于6h内送实验室分离检测。
用多种选择性培养基培养分离病原菌。将各奶样接种至选择性培养基分离各种病原菌。分离菌株经纯化培养后,依据菌落形态、染色特征、生化特点鉴定其种类。主要分离金黄色葡萄球菌、链球菌(停乳链球菌、***链球菌)、大肠杆菌。
结果显示,在整个试验期间,牛乳中体细胞数给药后与给药前相比无明显变化,给药后细菌分离数减少,奶牛产奶量未见显著变化,给药乳区未出现红、肿、热、痛等临床症状。综合以上结果表明,奶牛按照推荐剂量单次给予盐酸头孢噻呋***注入剂(干乳期),对奶牛无任何不良反应,该制剂具有较高的安全性。
2)盐酸头孢噻呋***注入剂(干乳期)在牛乳的残留试验
选取10头健康即将进入干乳期奶牛,在进入干乳期前最后一次挤奶完毕后,每头牛每个乳区给予实施例2制备的盐酸头孢噻呋***注入剂(干乳期)1支(规格:500mg;10ml)。在奶牛产犊后的12h、24h、36h、48h、60h、72h采集混合奶样并用已建立的牛奶中去呋喃甲酰基头孢噻呋乙酰胺(DCA,头孢噻呋及其代谢物衍生化产物)的超高效液相色谱串联三重四级杆质谱法(UPLC-MS/MS)检测牛奶中DCA的浓度。具体检测方法:称取1mL牛奶于10mL带盖离心管中;加入3mL乙腈,涡动1min后,10000r/min、4℃离心10min;取上清夜于50ml聚丙烯离心管中,在40℃水浴下用氮吹仪浓缩至剩余1mL左右;加入5mL DTE提取液,50℃水浴振荡20分钟,随后加入2mL碘乙酰胺提取液,充分混合后,避光静置30分钟,然后注入HLB固相萃取小柱(HLB预先经3mL甲醇活化,3mL水平衡),再用3mL5%甲醇水洗涤HLB固相萃取小柱,最后用3mL乙腈洗脱,收集洗脱液于10mL玻璃试管中。洗脱液在40℃水浴下氮吹浓缩至干,残渣用1mL乙腈-0.1%甲酸水溶液(5:95,V/V)复溶,涡动1min,使离心管壁上残余物全部溶解后,过0.22μm滤膜于进样小瓶中,用UPLC-MS/MS液质仪器检测。
残留检测试验中将盐酸头孢噻呋及其代谢物衍生化为乙酰脱呋喃甲酰基头孢噻呋乙酰胺(DCA),建立了牛奶中DCA的超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)测定方法。通过乙腈提取、衍生化、固相萃取、氮气吹干、复溶等步骤进行样品前处理,然后用UPLC-MS/MS测定牛奶中DCA的浓度。本方法建立的标准曲线相关系数(r)为0.9991。选择三个浓度水平进行添加回收试验,回收率在82.52%-105.86%之间,批内变异系数为2.95%~9.82%,批间变异系数为6.41%~7.43%。DCA在牛奶中的检测限为0.05μg/L,定量限为0.1μg/L。
结果显示:盐酸头孢噻呋***注入剂(干乳期)按推荐剂量给药,干乳期结束后,牛乳中检测不到头孢噻呋残留标示物-去呋喃甲酰头孢噻呋DFC,低于欧盟和我国药典规定的牛奶中头孢噻呋的最高残留限量为100μg/kg。因此盐酸头孢噻呋***注入剂(干乳期)用于干奶期奶牛***炎预防及治疗的休药期为零天。
3)盐酸头孢噻呋***注入剂(干乳期)对奶牛***炎的药效学试验
从4个试验奶牛场的6000头黑白花奶牛中临近干乳期的奶牛选择60头,随机分成5组,每组12头。分为3个受试药物组(I、II、III组),分别给予高(2支)、中(1支)、低(1/2支)剂量的盐酸头孢噻呋***注入剂(干乳期);1个药物对照组(IV组),给予苄星邻氯青霉素注射液1支;1个未给药空白对照组(V组)。上述盐酸头孢噻呋***注入剂为实施例2制备的样品,规格为500mg;10ml。
试验奶牛在进入干乳期前最后一次挤奶完毕后,四个乳区消毒***灌注给药,给药后按摩***使药物均匀分布。观察记录用药奶牛的临床状况及***症状;分别在干乳期前最后一次挤奶和产犊后第一次挤奶时,无菌采集奶样进行细菌学检查;统计各试验组奶牛给药前奶样中有致病菌检出而产犊后未检出致病菌的乳区数和奶牛数(见表1),计算各组奶牛***炎感染治疗和预防的成功率;统计各试验组奶牛给药前奶样中无致病菌检出而产犊后检出致病菌的乳区数和奶牛数(见表2),计算各试验组奶牛病原菌的新感染率。综合评价药物对干乳期奶牛***感染的治疗与预防效果。
表1试验奶牛用药前和产犊后***感染率比较
注:1)头感染率=***内检出感染菌奶牛数/检测奶牛数,乳区感染率=检出感染菌乳区数/检测乳区数
表2试验奶牛产犊第5日***感染清除和新增感染情况
注:1)头清除率=(用药前***内检出感染菌奶牛数-产犊后***内检出感染菌奶牛数)/用药前***内检出感染菌奶牛数;2)乳区清除率=(用药前检出感染菌乳区数-产犊后检出感染菌乳区数)/用药前检出感染菌乳区数;3)新感染牛为用药前未检出***感染菌而产犊后检出***感染菌;4)新感染乳区为用药前未检出感染菌而产犊后检出感染菌;5)同列数值之间,与空白对照组相比,具**上标表示差异极显著(P<0.01)。
试验结果显示:
1)盐酸头孢噻呋***注入剂(干乳期)对干乳期奶牛***内致病菌具有良好的清除作用。其中高、中剂量对奶牛***内感染菌的头清除率达83.3%-85.7%,乳区清除率达93.3%-95.0%,高、中剂量的盐酸头孢噻呋***注入剂(干乳期)的作用效果无显著差异(P>0.05),均优于对照药物苄星邻氯青霉素注射液(头清除率42.9%,乳区清除率50.0%);低剂量组对奶牛***内致病菌的头清除率也可达50.0%,乳区清除率可达61.5%,作用效果与对照药物相当。
2)干乳期奶牛灌注盐酸头孢噻呋***注入剂(干乳期)和苄星邻氯青霉素注射液对照药物均能明显减少奶牛***内各种致病菌的感染率。与苄星邻氯青霉素注射液的预防与治疗效果相比,高、中剂量的盐酸头孢噻呋***注入剂(干乳期)对干乳期奶牛头感染率和乳区感染率的改善作用更显著;低剂量盐酸头孢噻呋***注入剂对干乳期***炎的头感染率和乳区感染率的改善与对照药物相当;空白对照组奶牛干乳期后***炎的头感染率和乳区感染略有上升。
3)干乳期奶牛使用盐酸头孢噻呋***注入剂(干乳期)可明显降低***内各种细菌的新增感染率。干乳期奶牛灌注盐酸头孢噻呋***注入剂(干乳期)和对照药物苄星邻氯青霉素注射液对奶牛***内各种致病菌均具有清除作用和预防产后患***炎的作用。其中高、中剂量的盐酸头孢噻呋***注入剂(干乳期)对***内***链球菌、停乳链球菌、金葡菌及大肠杆菌的清除作用及预防产后患***炎的作用效果较好;对照药物和低剂量的盐酸头孢噻呋***注入剂(干乳期)对***炎致病菌的清除作用及预防产后患***炎也有一定疗效。
4)奶牛干乳期灌注盐酸头孢噻呋***注入剂(干乳期),对***炎致病菌链球菌、金葡菌、大肠杆菌等有良好治清除作用。高(2支)、中(1支)剂量的盐酸头孢噻呋***注入剂(干乳期)对干乳期奶牛***内致病菌的治疗与预防效果无显著性差异,因此建议临床使用盐酸头孢噻呋***注入剂(干乳期)治疗和预防奶牛***炎的剂量为:奶牛进入干奶期时,每个乳区给予1支盐酸头孢噻呋***注入剂(干乳期)(规格:500mg;10ml)。
按照实施例7的体内效果试验的方法对实施例1、3-6的产品进行相同的测试,其结果与实施例2的效果相当。表明本发明提供的盐酸头孢噻呋***注入剂(干乳期)安全、无残留、对局部组织刺激小、疗效显著,具有极高的推广价值。
Claims (4)
1.一种盐酸头孢噻呋***注入剂,由下述原辅料制成:盐酸头孢噻呋 5g、单硬脂酸甘油酯 0.5-5g、助悬剂 0.5-5 g、植物油加至100ml;
所述植物油为大豆油;所述助悬剂为司盘80;
所述盐酸头孢噻呋的粒径为5-10μm;
所述盐酸头孢噻呋***注入剂用于奶牛干乳期***炎的预防和/或治疗;
所述盐酸头孢噻呋***注入剂按照包括下述步骤的方法制备:
1)将适量所述植物油和所述单硬脂酸甘油酯混合后,加热熔化,得到混合体系;
2)向所述混合体系中加入所述助悬剂、所述盐酸头孢噻呋,再加植物油至全量,研磨均匀,即得所述盐酸头孢噻呋***注入剂。
2.根据权利要求1所述的盐酸头孢噻呋***注入剂,其特征在于:步骤1)中所述加热的条件为:60~80℃加温15~30分钟;步骤2)中所述研磨在胶体磨中进行;步骤1)中所述植物油的用量为植物油总量的40%-60%。
3.根据权利要求1或2所述的盐酸头孢噻呋***注入剂,其特征在于:所述植物油在使用前还需经过过滤以及加热灭菌的预处理;所述加热灭菌的条件为:150-160℃灭菌2-3小时。
4.权利要求1-3中任一项所述的盐酸头孢噻呋***注入剂在制备预防和/或治疗奶牛干乳期***炎药物中的应用。
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PB01 | Publication | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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