CN105287374A - 硫酸头孢喹肟***注入剂制备方法及所得制剂 - Google Patents

Abstract

本发明涉及硫酸头孢喹肟***注入剂制备方法及所得制剂。该方法包括：将油性溶媒分成第一、第二溶媒；将第一溶媒、主药、润湿剂进行研磨；将第二溶媒、助悬剂、抗氧剂混合，搅拌并加热使助悬剂和抗氧剂熔融于第二溶媒；将前两者混合，搅拌均匀；将混合物转移至胶体磨中，研磨混合物，之后即得硫酸头孢喹肟***注入剂。本发明所制硫酸头孢喹肟***注入剂适于奶牛***局部使用，能有效治疗***炎。

Description

硫酸头孢喹肟***注入剂制备方法及所得制剂

技术领域

本发明涉及一种硫酸头孢喹肟***注入剂制备方法及所得制剂，属于兽药制剂技术领域。

背景技术

据发明人所知，近年以来，随着养殖产业结构的不断优化，奶牛养殖业在规模上得到长足发展，然而，奶牛***炎的发病率也逐年升高。奶牛***炎是一种由链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等病原菌引起的顽固性疾病，其临床常见病症有奶牛精神不佳、食欲降低、体温升高、触摸***有发热红肿感，泌乳减少、乳汁稀薄、乳汁内含有絮状物或乳凝块等，导致奶牛产奶量减少和乳制品质量下降。该病症不仅严重影响奶牛业的可持续发展，带给养殖业巨大的经济损失，同时也严重危害人类健康，因此，对奶牛***炎的防治极为重要。

现有技术中，有些治疗奶牛***炎的***注入剂采用中药作为主药，不仅作用缓慢，疗效迟缓，而且组方中含有水分，再分散性差，长时间放置分层后很难使主药再混合均匀。由于这种剂型的主药混合不均匀，容易引起局部药量过多，或因破乳导致含量下降，温度降低后易析出结晶物等问题。

头孢喹肟，又称头孢喹诺或头孢喹咪，是动物专用***头孢菌素类抗生素；它通过抑制细胞壁的合成达到杀菌效果，抗菌谱广，且抗菌活性强，尤其是对链球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌等病原菌类均有良好的抑菌效果，对奶牛***炎有极其良好的治疗预防作用。头孢喹肟在我国已注册。现有的硫酸头孢喹肟注射剂和粉针剂主要通过肌肉注射给药，***内药物含量较低，不能在***局部达到有效的杀菌浓度。因此，开发一种***局部使用的头孢喹肟制剂具有重大意义。

经检索发现，申请号201310664982.X，申请公布号CN104546703A，名称《一种奶牛泌乳期用硫酸头孢喹肟***注入剂制备方法及所得制剂》的中国发明专利申请中，制备工艺为：取适量经预处理的植物油，加入单硬脂酸甘油酯加热熔化，然后加入助悬剂、硫酸头孢喹肟，再加植物油至全量，研磨均匀，即得。

申请号201510103265.9，申请公布号CN104758245A，名称《一种硫酸头孢喹肟油性混悬注射液及其制备方法》的中国发明专利申请中，制备方法为：将助悬剂分散到一部分注射用油中，再依次加入抗氧化剂、抑菌剂，搅拌，加入乳化剂搅拌，得溶液体系；将硫酸头孢喹肟加入到一部分注射用油中，研磨，得溶液体系；两种溶液体系混合，注射用油定容后，灭菌即得。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：克服现有技术存在的问题，提供一种硫酸头孢喹肟***注入剂制备方法及所得制剂，适于奶牛***局部使用，能有效治疗***炎。

本发明的主要技术构思如下：发明人经调研获知，现有技术中大多因未充分研究制备工艺，其制得的硫酸头孢喹肟***注入剂仍然存在易析出、分层、分散性差等问题，不能充分发挥其药效；有的方案在制剂组方中引入了触变剂，以克服这些问题从而保证注射的药量和均匀度；同时，现有技术剂型的再分散性仍然难以令人满意，长期放置分层后无法通过重新混匀即达到使用状态。有基于此，发明人经深入地实践研究后终于得出了不必添加触变剂等使组分过多、仅凭制备工艺即能克服上述问题的技术方案。

本发明解决其技术问题的技术方案如下：

一种硫酸头孢喹肟***注入剂制备方法，其特征是，包括以下步骤：

第一步、将预定量的油性溶媒按体积比(1.5－2.5)：(5.5－6.5)分成第一溶媒和第二溶媒；

第二步、将第一溶媒、预定量的主药硫酸头孢喹肟、预定量的润湿剂置研磨装置内进行研磨，研磨后混合物呈白色或类白色且颗粒分散均匀；

第三步、将第二溶媒、预定量的助悬剂、预定量的抗氧剂在混合器皿中混合，搅拌并加热使助悬剂和抗氧剂熔融于第二溶媒，之后降温至预设温度；

第四步、将第二步所得混合物转移至第三步混合器皿中，并在混合器皿中将混合物搅拌均匀，搅拌后混合物呈类白色混悬液；

第五步、将第四步所得混合物转移至胶体磨中，研磨混合物，之后即得硫酸头孢喹肟***注入剂；

每100ml硫酸头孢喹肟***注入剂由以下组分组成：硫酸头孢喹肟1.5－3.5g，硫酸头孢喹肟的质量按头孢喹肟计，助悬剂0.1－0.5g，润湿剂0.5－0.8g，抗氧剂0.01－0.02g，余量为油性溶媒。

优选地，第一步中，将预定量的油性溶媒按体积比(1.5－2.5)：(5.5－6.5)：(0.5－1.5)：(0.5－1.5)分成第一、第二、第三、第四溶媒；

第四步中，研磨装置中混合物转移至混合器皿后，用第三溶媒清洗研磨装置、并将所得含第三溶媒的混合物也转移至混合器皿中；

第五步中，混合器皿中混合物转移至胶体磨后，用第四溶媒清洗混合器皿、并将所得含第四溶媒的混合物也转移至胶体磨中。

如此，采用第三、第四溶媒用于清洗装置、器皿，可减少组分损失。

优选地，所述主药硫酸头孢喹肟预先经气流粉碎至粒径为D90＝13－17μm。

优选地，所述助悬剂选自单硬脂酸甘油酯、单硬脂酸铝、硬脂酸；所述润湿剂选自司盘80、吐温80、甘油；所述抗氧剂选自BHT、BHA、TBHQ；所述油性溶媒选自大豆油、油酸乙酯、中链甘油三酸酯、茶籽油之一或其组合。

优选地，每100ml硫酸头孢喹肟***注入剂由以下组分组成：硫酸头孢喹肟2.5g，助悬剂0.2g，润湿剂0.6g，抗氧剂0.01g，余量为油性溶媒。

优选地，所述助悬剂为单硬脂酸甘油酯；所述润湿剂为司盘80；所述抗氧剂为BHT；所述油性溶媒由大豆油与油酸乙酯按预定体积比混合而成，预定体积比为1：8－7：1。该优选方案可使制得注入剂具备更好的分散效果和再分散性；其中，该混合油性溶媒既能保证混悬液溶媒的黏度适宜，又能保证注入剂的通针性良好。

优选地，第二步中，研磨装置为球磨机，且至少研磨10分钟；第三步中，搅拌时加热至65℃－75℃，降温至预设温度35℃－45℃；第四步中，搅拌时于25℃±5℃下搅拌至少10分钟；第五步中，胶体磨研磨至少15分钟。

优选地，还包括：第六步、将硫酸头孢喹肟***注入剂按预定规格灌装于玻璃瓶中，以钴60射线进行辐照灭菌，之后进行包装。其中，辐照灭菌时的辐照剂量为至少3KGY。灭菌时采用钴60辐照灭菌，能使制剂无菌保证水平≤10^－6。

本发明还提供：

一种由前述制备方法制成的硫酸头孢喹肟***注入剂。

发明人在实践研究中发现，将油性溶媒分成第一、第二溶媒，且第二溶媒较多，第一溶媒较少；第一溶媒用于与主药和润湿剂混合研磨，在润湿剂的辅助下使主药与油性溶媒充分接触，为最终的均匀分散效果打下基础；第二溶媒用于熔融助悬剂和抗氧剂，使这两者能在室温下保持不析出；将上述两者合并后搅拌，在助悬剂的辅助下使主药与油性溶媒混匀，进一步利于优化分散效果；最后，通过胶体磨研磨使主药均匀分散，并确保注入剂的含量稳定。这样，在前述限定的组分组成与该制备方法的结合下，所制得硫酸头孢喹肟***注入剂不仅能保证主药硫酸头孢喹肟的含量稳定、且均匀度符合要求；还具备良好的再分散性，长期放置分层后再混匀即可使用；同时，制剂的性状随温度变化不大，即使在寒冷的东北地区，也可以保证药物含量均匀性。

与现有技术相比，一方面，本发明制得制剂具备释放缓慢、作用持久、生物利用度高等特性；另一方面，本发明通过简便易行的制备方法，即能使特定组分组成的硫酸头孢喹肟***注入剂保持含量稳定、并保证均匀度，还具备良好的再分散性，且在低温下也保证药物含量均匀性。

具体实施方式

具体实施时，本发明的硫酸头孢喹肟***注入剂制备方法，包括：

第一步、将预定量的油性溶媒按体积比(1.5－2.5)：(5.5－6.5)分成第一溶媒和第二溶媒；或者，将预定量的油性溶媒按体积比(1.5－2.5)：(5.5－6.5)：(0.5－1.5)：(0.5－1.5)分成第一、第二、第三、第四溶媒。

具体而言，油性溶媒选自大豆油、油酸乙酯、中链甘油三酸酯、茶籽油之一或其组合。油性溶媒在使用前需经过滤、加热灭菌后放冷备用。

第二步、将第一溶媒、预定量的主药硫酸头孢喹肟、预定量的润湿剂置研磨装置内进行研磨，研磨后混合物呈白色或类白色且颗粒分散均匀。

具体而言，主药硫酸头孢喹肟预先经气流粉碎至粒径为D90＝13－17μm(例如15μm)；润湿剂选自司盘80、吐温80、甘油；研磨装置可为球磨机，且至少研磨10分钟。

第三步、将第二溶媒、预定量的助悬剂、预定量的抗氧剂在混合器皿中混合，搅拌并加热使助悬剂和抗氧剂熔融于第二溶媒，之后降温至预设温度。

具体而言，助悬剂选自单硬脂酸甘油酯、单硬脂酸铝、硬脂酸；抗氧剂选自BHT、BHA、TBHQ；搅拌时加热至65℃－75℃(如70℃)，降温至预设温度35℃－45℃(如40℃)。混合器皿可为烧杯或混合釜，采用烧杯时搅拌。

第四步、将第二步所得混合物转移至第三步混合器皿中，并在混合器皿中将混合物搅拌均匀，搅拌后混合物呈类白色混悬液。若存在第三溶媒，则在研磨装置中混合物转移至混合器皿后，用第三溶媒清洗研磨装置后将含第三溶媒的混合物也转移至混合器皿中。

具体而言，搅拌时于25℃±5℃下搅拌至少10分钟。第三溶媒清洗时采用少量多次的方式进行。

第五步、将第四步所得混合物转移至胶体磨中，研磨混合物，之后即得硫酸头孢喹肟***注入剂。若存在第四溶媒时，则在混合器皿中混合物转移至胶体磨后，用第四溶媒清洗混合器皿后将含第四溶媒的混合物也转移至胶体磨中。

具体而言，胶体磨研磨至少15分钟。第四溶媒清洗时采用少量多次的方式进行。

第六步、将硫酸头孢喹肟***注入剂按预定规格灌装于玻璃瓶中，以钴60射线进行辐照灭菌，之后进行包装。其中，辐照灭菌时的辐照剂量为至少3KGY。灭菌时采用钴60辐照灭菌，能使制剂无菌保证水平≤10^－6。

所制得的硫酸头孢喹肟***注入剂是一种药物分布均匀的混悬液，每100ml***注入剂由以下组分组成：硫酸头孢喹肟1.5－3.5g，硫酸头孢喹肟的质量按头孢喹肟计，助悬剂0.1－0.5g，润湿剂0.5－0.8g，抗氧剂0.01－0.02g，余量为油性溶媒。

组分组成的一种优选方案为：每100ml硫酸头孢喹肟***注入剂由以下组分组成：硫酸头孢喹肟2.5g，助悬剂0.2g，润湿剂0.6g，抗氧剂0.01g，余量为油性溶媒。

组分组成的另一种优选方案为：助悬剂为单硬脂酸甘油酯；润湿剂为司盘80；抗氧剂为BHT；油性溶媒由大豆油与油酸乙酯按预定体积比混合而成，预定体积比为1：8－7：1。

下面结合实施例对本发明作进一步详细描述。但是本发明不限于所给出的例子。

下述实施例中的试验方法，如无特殊说明，均为常规方法；试剂和材料，如无特殊说明，均可通过商业途径获得。

下述实施例中，***注入剂沉降粒度检测的方法为：用具塞量筒盛供试品50ml，密塞，用力振摇1分钟，记下混悬液的开始高度Ho，静置3小时后，记下混悬液的最终高度H，按下式计算：沉降体积比F＝(H/Ho)，F值≥0.90即合格。

下述实施例中，***注入剂无菌检测的方法为：取本品11瓶，加入到400ml含有5％吐温80的蛋白胨缓冲灭菌溶液(0.1％)中，充分混匀，加入青霉素酶(不少于6000万单位)，混合均匀后，置于37℃保温4小时；取供试品溶液，依法检查(中国兽药典附录137页)，应符合规定。

实施例1

本实施例的硫酸头孢喹肟***注入剂中，每100ml***注入剂由以下组分组成：

本实施例的油性溶媒由大豆油与油酸乙酯按体积比1：7混合而成。

制备方法：(1)取处方量油酸乙酯、处方量大豆油，将二者按上述体积比混合均匀即成混合溶媒，过滤、灭菌后分成两份备用，分别为第一、第二、溶媒，它们的体积比为2：6；

(2)取第一溶媒、处方量气流粉碎后主药硫酸头孢喹肟、处方量润湿剂司盘80，置球磨机中至少研磨10分钟后，呈类白色混合物，颗粒较细且分散均匀；

(3)取第二溶媒、处方量助悬剂单硬脂酸甘油酯、处方量抗氧剂BHT(2，6－二叔丁基－4－甲基苯酚)加入混合釜中，搅拌下升温至70℃，熔融后降温至40℃；

(4)将(2)所得混合物转移至(3)的混合釜中；在混合釜中，将混合物于室温(25℃±5℃)搅拌10分钟，得类白色混悬液；

(5)将混合釜中混合物转移至胶体磨中；研磨混合物至少15分钟，即得硫酸头孢喹肟***注入剂；

(6)将硫酸头孢喹肟***注入剂按预定规格灌装于玻璃瓶中，预定规格为50ml/瓶；以钴60射线进行辐照灭菌，之后进行包装。

按前述方法对上述产品进行沉降粒度和无菌检测，均符合要求。

实施例2

本实施例的硫酸头孢喹肟***注入剂中，每100ml***注入剂由以下组分组成：

本实施例的油性溶媒由大豆油与油酸乙酯按体积比1：8混合而成。

制备方法：(1)取处方量油酸乙酯、处方量大豆油，将二者按上述体积比混合均匀即成混合溶媒，过滤、灭菌后分成四份备用，分别为第一、第二、第三、第四溶媒，它们的体积比为1.5：6.5：0.5：1.5；

(2)取第一溶媒、处方量气流粉碎后主药硫酸头孢喹肟、处方量润湿剂司盘80，置球磨机中至少研磨10分钟后，呈白色或类白色混合物，颗粒较细且分散均匀；

(3)取第二溶媒、处方量助悬剂单硬脂酸甘油酯、处方量抗氧剂BHT(2，6－二叔丁基－4－甲基苯酚)加入混合釜中，搅拌下升温至75℃，熔融后降温至45℃；

(4)将(2)所得混合物转移至(3)的混合釜中；用第三溶媒少量多次地清洗球磨机，并也转移至混合釜中；在混合釜中，将混合物于室温(25℃±5℃)搅拌至少10分钟，得类白色混悬液；

(5)将混合釜中混合物转移至胶体磨中；用第四溶媒少量多次地清洗混合釜，并也转移至胶体磨中；研磨混合物至少15分钟，即得硫酸头孢喹肟***注入剂；

(6)将硫酸头孢喹肟***注入剂按预定规格灌装于玻璃瓶中，预定规格为50ml/瓶；以钴60射线进行辐照灭菌，之后进行包装。

按前述方法对上述产品进行沉降粒度和无菌检测，均符合要求。

实施例3

本实施例的硫酸头孢喹肟***注入剂中，每100ml***注入剂由以下组分组成：

本实施例的油性溶媒由大豆油与油酸乙酯按体积比7：1混合而成。

制备方法：(1)取处方量油酸乙酯、处方量大豆油，将二者按上述体积比混合均匀即成混合溶媒，过滤、灭菌后分成四份备用，分别为第一、第二、第三、第四溶媒，它们的体积比为2.5：5.5：1.5：0.5；

(2)取第一溶媒、处方量气流粉碎后主药硫酸头孢喹肟、处方量润湿剂司盘80，置球磨机中至少研磨10分钟后，呈类白色混合物，颗粒较细且分散均匀；

(3)取第二溶媒、处方量助悬剂单硬脂酸甘油酯、处方量抗氧剂BHT(2，6－二叔丁基－4－甲基苯酚)加入混合釜中，搅拌下升温至65℃，熔融后降温至35℃；

(4)将(2)所得混合物转移至(3)的混合釜中；用第三溶媒少量多次地清洗球磨机，并也转移至混合釜中；在混合釜中，将混合物于室温(25℃±5℃)搅拌至少10分钟，得类白色混悬液；

(5)将混合釜中混合物转移至胶体磨中；用第四溶媒少量多次地清洗混合釜，并也转移至胶体磨中；研磨混合物至少15分钟，即得硫酸头孢喹肟***注入剂；

(6)将硫酸头孢喹肟***注入剂按预定规格灌装于玻璃瓶中，预定规格为50ml/瓶；以钴60射线进行辐照灭菌，之后进行包装。

按前述方法对上述产品进行沉降粒度和无菌检测，均符合要求。

实施例4

本实施例的硫酸头孢喹肟***注入剂中，每100ml***注入剂由以下组分组成：

本实施例的油性溶媒为中链甘油三酸酯。

制备方法：(1)取处方量中链甘油三酸酯，过滤、灭菌后分成四份备用，分别为第一、第二、第三、第四溶媒，它们的体积比为与实施例1相同；

(2)取第一溶媒、处方量气流粉碎后主药硫酸头孢喹肟、处方量润湿剂吐温80，置球磨机中至少研磨10分钟后，呈类白色混合物，颗粒较细且分散均匀；

(3)取第二溶媒、处方量助悬剂单硬脂酸铝、处方量抗氧剂BHA(丁基羟基茴香醚)加入混合釜中，搅拌下升温至70℃，熔融后降温至40℃；

(4)将(2)所得混合物转移至(3)的混合釜中；用第三溶媒少量多次地清洗球磨机，并也转移至混合釜中；在混合釜中，将混合物于室温(25℃±5℃)搅拌至少10分钟，得类白色混悬液；

(5)将混合釜中混合物转移至胶体磨中；用第四溶媒少量多次地清洗混合釜，并也转移至胶体磨中；研磨混合物至少15分钟，即得硫酸头孢喹肟***注入剂；

(6)将硫酸头孢喹肟***注入剂按预定规格灌装于玻璃瓶中，预定规格为50ml/瓶；以钴60射线进行辐照灭菌，之后进行包装。

按前述方法对上述产品进行沉降粒度和无菌检测，均符合要求。

实施例5

本实施例的硫酸头孢喹肟***注入剂中，每100ml***注入剂由以下组分组成：

本实施例的油性溶媒为茶籽油。

制备方法：(1)取处方量茶籽油，过滤、灭菌后分成四份备用，分别为第一、第二、第三、第四溶媒，它们的体积比为与实施例1相同；

(2)取第一溶媒、处方量气流粉碎后主药硫酸头孢喹肟、处方量润湿剂甘油，置球磨机中至少研磨10分钟后，呈类白色混合物，颗粒较细且分散均匀；

(3)取第二溶媒、处方量助悬剂硬脂酸、处方量抗氧剂TBHQ(特丁基对苯二酚)加入混合釜中，搅拌下升温至70℃，熔融后降温至40℃；

(4)将(2)所得混合物转移至(3)的混合釜中；用第三溶媒少量多次地清洗球磨机，并也转移至混合釜中；在混合釜中，将混合物于室温(25℃±5℃)搅拌至少10分钟，得类白色混悬液；

(5)将混合釜中混合物转移至胶体磨中；用第四溶媒少量多次地清洗混合釜，并也转移至胶体磨中；研磨混合物至少15分钟，即得硫酸头孢喹肟***注入剂；

(6)将硫酸头孢喹肟***注入剂按预定规格灌装于玻璃瓶中，预定规格为50ml/瓶；以钴60射线进行辐照灭菌，之后进行包装。

按前述方法对上述产品进行沉降粒度和无菌检测，均符合要求。

实施例6

本实施例为硫酸头孢喹肟***注入剂的含量检测试验。

检测样品为实施例1至5所得成品。

检测方法：(1)色谱条件如下：

色谱柱：CAPCELLPAKMGC18，4.6＊250mm，5μm；柱温：30℃；流速：1ml/min；检测波长：270nm；进样量：10μl；LC停止时间：60min。

流动相：高氯酸缓冲液－乙腈(92：8)；其中，高氯酸缓冲液的配制方法为：取一水高氯酸钠3.45g，加水1000ml使其溶解后，加磷酸12ml，取三乙胺调节pH值至3.5±0.05。

(2)含量测定：

供试品溶液：精密量取摇匀后的检测样品500μl置于25ml容量瓶中，加入500μl曲拉通－X100(10％v/v)振摇破乳；加入15ml流动相，超声10min；以流动相定容至25ml，取下层溶液滤过，作为供试品溶液。

对照品溶液：另取硫酸头孢喹肟对照品适量(约相当于头孢喹肟12.5mg)，精密加流动相25ml，摇匀，作为对照品溶液。

精密量取对照品溶液和供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算，即得含量测定结果。

结果如下表所示：

	实施例1	实施例2	实施例3	实施例4	实施例5
						含量(％)	99.7	100.2	100.4	98.9	99.1

由该结果可知，本发明制得的硫酸头孢喹肟***注入剂含量稳定，且满足含量处于94％－103％之间的要求。

实施例7

本实施例为硫酸头孢喹肟***注入剂的含量均匀度检查试验。

检测样品为实施例1至5所得成品。

检测方法参照《中华人民共和国兽药典》2010年版一部附录118页的【含量均匀度检查法】：各取检测样品10瓶，照实施例6所用测定法，分别测定每瓶以标示量为100的相对含量X，求其均值和标准差S，以及标示量与均值之差的绝对值A如A+1.80S≤15.0，则供试品的含量均匀度符合规定；若A+1.80S＞15.0，则不符合规定；若A+1.80S＞15.0，且A+S≤15.0，则应另取20瓶复试，根据初试、复试结果，计算30瓶的均值标准差S、标示量与均值之差的绝对值A：如A+1.45S≤15.0，则供试品的含量均匀度符合规定；若A+1.45S＞15.0，则不符合规定。

结果如下表所示：

	实施例1	实施例2	实施例3	实施例4	实施例5
						结果	初试合格	初试合格	初试合格	初试合格	初试合格

而且，实施例1、2、3的含量均匀度明显优于其余实施例。

由该结果可知，本发明制得硫酸头孢喹肟***注入剂的含量均匀度符合要求。

实施例8

本实施例为硫酸头孢喹肟***注入剂的再分散性检查试验。

检测样品为实施例1至5所得成品，以及参比制剂。

参比制剂按以下方法制得：

每100ml***注入剂的组分组成为：硫酸头孢喹肟2.5g(以头孢喹肟计)，单硬脂酸甘油酯0.200g，司盘800.600g，余量为大豆油；

将硫酸头孢喹肟经气流粉碎至粒径8μm；将大豆油经过滤和加热灭菌后放冷备用；取适量经预处理的大豆油(为大豆油总用量的40％－60％)，加入单硬脂酸甘油酯；加热并搅拌(80℃加温15分钟)，待单硬脂酸甘油酯融化，搅拌均匀后，冷却至40℃，加入司盘80、硫酸头孢喹肟，再加大豆油至全量；在无菌胶体磨中研磨均匀后，按50ml/瓶规格灌封，并以钴60辐照灭菌，即得参比制剂。所得参比制剂的性状为类白色至淡黄色油状混悬液。

检测方法：将各检测样品一起置常温条件下放置30天后，均呈分层状态，之后置转动混匀器中，使各瓶样品以20rpm/min的速度匀速转动2分钟，此时各样品呈重新混匀状态，然后以实施例7方法检测含量均匀度。

结果如下表所示：

而且，实施例1、2、3的含量均匀度明显优于其余实施例以及参比制剂。

由该结果可知，本发明制得硫酸头孢喹肟***注入剂具备良好的再分散性。

实施例9

本实施例为硫酸头孢喹肟***注入剂的冻融检查试验。

检测样品为实施例1至5所得成品，以及实施例8所用参比制剂。

检测方法：将各检测样品一起置－20℃条件下放置30天后，均呈分层状态，之后以温浴孵育使其温度恢复至室温，置转动混匀器中使各瓶样品以20rpm/min的速度匀速转动2分钟，此时各样品呈重新混匀状态，观察其形状，并以实施例7方法检测含量均匀度。

结果表明：除参比制剂形状变化明显外，实施例1至5所得成品的形状均无明显变化；含量均匀度检查结果如下表所示：

而且，实施例1、2、3的含量均匀度明显优于其余实施例以及参比制剂。

由该结果可知，本发明制得硫酸头孢喹肟***注入剂在低温下仍能保证药物含量均匀性。

实施例10

本实施例为硫酸头孢喹肟***注入剂的体内效果试验。

1、硫酸头孢喹肟***注入剂对奶牛的安全性试验

随机选取12头健康奶牛，四个乳区分别注入实施例1所制备的硫酸头孢喹肟***注入剂一瓶(规格2.5g/100ml)，间隔24小时给药一次，连续给药3次。

在给药前24h和0h，第1次、第3次给药后，停药后第2天和第3天，停药后第5天和第6天分别采集奶样，每头牛四个乳区分别单独采集奶样约40ml，放置于50ml灭菌聚丙烯离心管中，进行SCC检测和细菌分离鉴定。

采样时，观察并记录用药奶牛的***局部症状、泌乳能力、乳汁性状以及精神食欲状态等临床症状变化，并统计奶牛日产奶量。比较给药前后以上各指标的变化差异，综合评价该制剂对奶牛的安全性。

结果表明，受试药物硫酸头孢喹肟***注入剂在给药中与停药后在给药前奶牛的临床表现评分、日产奶量、奶中体细胞数和细菌的分离鉴定等各方面结果比较无显著性差异。说明奶牛按照推荐剂量给药是安全的。

2、硫酸头孢喹肟***注入剂在牛乳中的药动学试验

随机选取6头健康奶牛，早上挤奶后，每头奶牛四个乳区随机选取1个，单次注入实施例1所制备硫酸头孢喹肟***注入剂一瓶(规格2.5g/100ml)。

在给药乳区分别于给药后0h、0.5h、0.75h、1h、2h、4h、6h、8h、12h、24h、36h、48h、72h，采集奶样40ml；在非给药乳区分别于给药后2h、6h、12h、24h，采集奶样40ml，放置于50ml灭菌聚丙烯离心管中，密封，－20℃冷冻保存待测。

每头试验奶牛分别于给药后0h、2h、6h、12h、24h，采集颈静脉血15ml，注入真空抗凝采血管中，离心，分离血浆，－20℃冷冻保存待测。

采用已经建立的牛乳中硫酸头孢喹肟和血浆中硫酸头孢喹肟的HPLC检测方法分别对所采集的牛乳样品和血浆样品中的药物含量进行检测。

具体检测方法为：称取牛奶样品1g，置于15ml聚丙烯离心管中。加入乙腈3ml涡旋1分钟，再8000rpm离心10分钟，移取上清液至10ml玻璃试管中，剩余残渣加入乙腈2ml进行二次提取，涡旋1分钟，8000rpm离心10分钟，合并两次提取液，40℃水浴下吹干浓缩。残留物用3ml水复溶，复溶液过HLB固相萃取柱，再用3ml10％甲醇洗涤HLB固相萃取柱，最后用3ml甲醇洗脱，收集洗脱液于10ml玻璃试管中。洗脱液在40℃水浴下吹干浓缩，残渣用流动相(1ml乙腈－0.1％甲酸水溶液(5：95，v/v))复溶，涡旋1分钟，离心管壁上残余物全部溶解后，过0.22μm有机滤膜于进样小瓶中，使用高效液相色谱进行检测。

结果显示，药物仅在给药乳区有检出，非给药乳区无药物检出，血浆中也仅有痕量药物检出，且在给药后24h血浆中药物浓度已达检测限以下。这说明药物几乎无法穿透血乳屏障进入血液循环，仅在给药乳区发挥抗菌消炎作用。具体结果表明，硫酸头孢喹肟在乳中药时曲线下面积AUC为319987.68±32561.78h·ng/ml，消除半衰期t_1/2为5.78±0.93h，消除速率常数CI为0.62±0.13ml/h/Kg。结合已经报道的MIC数据，当24h的药物浓度能够全部达到高于致病菌MIC值，36h的药物浓度则不足以对抗致病菌MIC值，因此，建议给药间隔为24h给药一次。

3、硫酸头孢喹肟***注入剂在牛乳中的残留试验

随机选取18头健康奶牛，挤奶后，每头奶牛四个乳区，单次注入实施例1所制备硫酸头孢喹肟***注入剂一瓶(规格2.5g/100ml)，间隔24h给药一次，连续给药3次。

给药后0h、12h、24h、36h、48h、72h、96h、120h，分别采集奶样。

每头奶牛四个乳区在各时间点采集混合奶样40ml，置于聚丙烯专用塑料瓶中，－20℃保存。奶样经两次乙腈提取后吹干，复溶后过HLB固相萃取柱净化，采用HPLC法检测牛乳中药物浓度。

结果显示，给药后牛乳中硫酸头孢喹肟消除迅速，给药后60h中药物浓度已低至EMEA所规定乳中最高残留限量20μg/Kg，经软件计算处理可知，本制剂在牛乳中休药期为94.32h。

4、硫酸头孢喹肟***注入剂对奶牛***炎的药效学试验

试验选取只有一个乳区患有***炎的奶牛，共计80个病例(80个患病乳区)，随机分为4组，每组20个患病乳区。硫酸头孢喹肟***注入剂设定3个受试药物组，分别为高剂量组(A组，2瓶/乳区)、中剂量组(B组，1瓶/乳区)、低剂量组(C组，0.5瓶/乳区)，以及设定1个对照药物组(D组，氨苄西林钠***注入剂1瓶/乳区)。上述硫酸头孢喹肟***注入剂为实施例1所制备样品，规格为2.5g/100ml。

所有试验组动物均每日给药1次(间隔24h)，连续给药3次。在给药前以及最后一次给药后第7天，分别采集各试验组给药乳区的奶样20ml进行细菌学检测和牛奶体细胞测定。观察并记录奶牛用药前后的***局部临床症状、泌乳能力、乳汁性状以及精神食欲状态，综合评价硫酸头孢喹肟***注入剂对奶牛***炎的疗效。

试验结果经统计分析后的结论如下：

(1)病原菌检测结果见表1，该结果表明***炎奶牛的感染乳区灌注硫酸头孢喹肟***注入剂，每天1次，连续用药3次后，高(2倍推荐剂量)、中(推荐剂量)剂量组牛乳中细菌分别从给药前的22株和25株降低到给药后的2株和5株；而低(1/2推荐剂量)剂量组和对照药物组牛乳中细菌分别从给药前的24株和23株降低到给药后的14株和16株。说明硫酸头孢喹肟***注入剂高剂量组和中剂量组对奶牛***炎主要致病菌有良好的消除作用，更优于低剂量组和对照药物组。

表1、各试验组奶牛乳区用药前后主要病原菌的分离鉴定结果统计

(2)硫酸头孢喹肟***注入剂和对照药物氨苄西林钠***注入剂对牛奶体细胞数的降低有显著的治疗效果，各组内体细胞数明显减少(P＜0.05)，各组之间结果比较无显著性差异(P＞0.05)，见表2。

各试验组内临床症状评分数值给药后明显优于给药前(P＜0.05)，高、中剂量组显著优于低剂量组和对照药物组(P＜0.05)。高(2倍推荐剂量)、中(推荐剂量)剂量组硫酸头孢喹肟***注入剂治疗后奶牛的***局部症状、乳汁性状以及精神食欲状态等***炎临床症状都得到明显改善，临床疗效显著优于低剂量组和对照药物组(P＜0.05)。见表3。

高、中、低剂量硫酸头孢喹肟***注入剂对奶牛***炎的有效率分别为95％、80％、60％，治愈率分别为85％、70％、45％，对照药物氨苄西林钠***注入剂组队奶牛***炎的有效率为65％，治愈率为55％，见表4。其中，高剂量组和中剂量组两组之间差异比较无统计学意义(P＞0.05)；低剂量组和对照药物组两组之间差异比较无统计学意义(P＞0.05)；而高、中剂量组与低剂量组、对照药物组之间结果比较具有显著性差异(P＜0.05)。

表2、各治疗组乳区奶样给药前后体细胞计数结果

表3、奶牛***炎给药乳区症状评分结果

表4、受试药物和对照药物对奶牛***炎的有效率和治愈率

考虑到高(2倍推荐剂量)、中(推荐剂量)剂量组硫酸头孢喹肟***注入剂对奶牛***炎的临床疗效比较无显著性差异(P＞0.05)，均更优于低剂量组和对照药物组，因此建议硫酸头孢喹肟***注入剂用于防治奶牛***炎的临床用药方案为1瓶(2.5g/100ml)/乳区/次，间隔24h/次，连续3次。

按照本实施例的体内效果试验方法对实施例2至5的产品进行相同的测试，其结果与实施例1的效果几乎相同。表明本发明所阐述的硫酸头孢喹肟***注入剂效果良好，安全性高，生物利用度高，对局部组织刺激性小，临床疗效显著，具有极高的推广价值。

除上述实施例外，本发明还可以有其他实施方式。凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案，均落在本发明要求的保护范围。

Claims (10)

1.一种硫酸头孢喹肟***注入剂制备方法，其特征是，包括以下步骤：

第一步、将预定量的油性溶媒按体积比(1.5－2.5)：(5.5－6.5)分成第一溶媒和第二溶媒；

第二步、将第一溶媒、预定量的主药硫酸头孢喹肟、预定量的润湿剂置研磨装置内进行研磨，研磨后混合物呈白色或类白色且颗粒分散均匀；

第三步、将第二溶媒、预定量的助悬剂、预定量的抗氧剂在混合器皿中混合，搅拌并加热使助悬剂和抗氧剂熔融于第二溶媒，之后降温至预设温度；

第四步、将第二步所得混合物转移至第三步混合器皿中，并在混合器皿中将混合物搅拌均匀，搅拌后混合物呈类白色混悬液；

第五步、将第四步所得混合物转移至胶体磨中，研磨混合物，之后即得硫酸头孢喹肟***注入剂；

每100ml硫酸头孢喹肟***注入剂由以下组分组成：硫酸头孢喹肟1.5－3.5g，硫酸头孢喹肟的质量按头孢喹肟计，助悬剂0.1－0.5g，润湿剂0.5－0.8g，抗氧剂0.01－0.02g，余量为油性溶媒。

2.根据权利要求1所述制备方法，其特征是，第一步中，将预定量的油性溶媒按体积比(1.5－2.5)：(5.5－6.5)：(0.5－1.5)：(0.5－1.5)分成第一、第二、第三、第四溶媒；

第四步中，研磨装置中混合物转移至混合器皿后，用第三溶媒清洗研磨装置、并将所得含第三溶媒的混合物也转移至混合器皿中；

第五步中，混合器皿中混合物转移至胶体磨后，用第四溶媒清洗混合器皿、并将所得含第四溶媒的混合物也转移至胶体磨中。

3.根据权利要求1或2所述制备方法，其特征是，所述主药硫酸头孢喹肟预先经气流粉碎至粒径为D90＝13－17μm。

4.根据权利要求1或2所述制备方法，其特征是，所述助悬剂选自单硬脂酸甘油酯、单硬脂酸铝、硬脂酸；所述润湿剂选自司盘80、吐温80、甘油；所述抗氧剂选自BHT、BHA、TBHQ；所述油性溶媒选自大豆油、油酸乙酯、中链甘油三酸酯、茶籽油之一或其组合。

5.根据权利要求1或2所述制备方法，其特征是，每100ml硫酸头孢喹肟***注入剂由以下组分组成：硫酸头孢喹肟2.5g，助悬剂0.2g，润湿剂0.6g，抗氧剂0.01g，余量为油性溶媒。

6.根据权利要求1或2所述制备方法，其特征是，所述助悬剂为单硬脂酸甘油酯；所述润湿剂为司盘80；所述抗氧剂为BHT；所述油性溶媒由大豆油与油酸乙酯按预定体积比混合而成，预定体积比为1：8－7：1。

7.根据权利要求1或2所述制备方法，其特征是，第二步中，研磨装置为球磨机，且至少研磨10分钟；第三步中，搅拌时加热至65℃－75℃，降温至预设温度35℃－45℃；第四步中，搅拌时于25℃±5℃下搅拌至少10分钟；第五步中，胶体磨研磨至少15分钟。

8.根据权利要求1或2所述制备方法，其特征是，还包括：第六步、将硫酸头孢喹肟***注入剂按预定规格灌装于玻璃瓶中，以钴60射线进行辐照灭菌，之后进行包装。

9.根据权利要求8所述制备方法，其特征是，辐照灭菌时的辐照剂量为至少3KGY。

10.一种由权利要求1至9任一项所述制备方法制成的硫酸头孢喹肟***注入剂。