CN104840420B - 一种用于奶牛泌乳期子宫炎的硫酸头孢喹肟子宫注入剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种硫酸头孢喹肟子宫注入剂及其制备方法。所述硫酸头孢喹肟子宫注入剂由下述原辅料制成：硫酸头孢喹肟0.5‑2.5g(以头孢喹肟计)、单硬脂酸甘油酯0.125‑1.25g、助悬剂0.125‑1.25g、植物油加至25ml。制备工艺如下：取适量经预处理的植物油，加入单硬脂酸甘油酯加热熔化，然后加入助悬剂、硫酸头孢喹肟，再加植物油至全量，研磨均匀，即得。该子宫注入剂具有如下优点：药物释放缓速，生物利用度高，对局部组织刺激小；通过子宫局部给药，见效快速，避免了注射给药引起的动物应激反应；药物消除迅速，弃奶期短，有效避免了经济损失，具有很高的临床推广价值。

Description

一种用于奶牛泌乳期子宫炎的硫酸头孢喹肟子宫注入剂及其 制备方法

技术领域

本发明涉及一种硫酸头孢喹肟子宫注入剂及其制备方法。

背景技术

奶牛子宫(内膜)炎是奶牛养殖业中常见的多发病，多集中在产后2周内，一般发病率为20％～35％，通常是子宫粘膜的粘液性或脓性炎症。由于炎症所产生的有毒物质可致死***和胚胎而成为奶牛***的常见原因之一，我国奶牛子宫(内膜)炎型***症占成年母牛***症的17％以上。子宫(内膜)炎不仅能够影响奶牛的发情与妊娠，降低奶牛产奶量，诱发***炎等疾病，严重时还会造成奶牛繁殖能力的丧失，有的急性病牛还可引起败血症而导致死亡。因此，该病对奶牛业的危害相当严重，可造成较大的经济损失。

头孢喹肟(Cefquinome)，又称为头孢喹咪或头孢喹诺，是动物专用的***头孢菌素类抗生素。头孢喹肟通过抑制细胞壁的合成达到杀菌效果，其抗菌谱广、抗菌活性强，对大多数G+菌和G-菌均显示出良好的抗菌活性，尤其对金黄色葡萄球菌、链球菌、绿脓杆菌和大肠杆菌属的成员都有较低的抑菌浓度，另外对耐青霉素的葡萄球菌和肠球菌也有活性。头孢喹肟对β-内酰胺酶高度稳定。头孢喹肟已在我国注册，主要用于治疗多杀性巴氏杆菌或胸膜肺炎放线杆菌引起的猪呼吸道疾病。

现有的硫酸头孢喹肟注射剂、粉针剂主要通过肌肉注射给药，很难达到子宫内部，不如子宫局部用药效果好。因此，开发一种适用于奶牛使用的头孢喹肟子宫注入制剂具有重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种硫酸头孢喹肟子宫注入剂及其制备方法。

本发明所提供的硫酸头孢喹肟子宫注入剂，由下述原辅料制成：硫酸头孢喹肟(原料药)0.5-2.5g(以头孢喹肟计)、单硬脂酸甘油酯0.125-1.25g、助悬剂0.125-1.25g、植物油加至25ml。

所述硫酸头孢喹肟子宫注入剂可进一步由下述原辅料制成：硫酸头孢喹肟(原料药)0.9-2.5g(以头孢喹肟计)、单硬脂酸甘油酯0.125-1.25g、助悬剂0.125-1.25g、植物油加至25ml。

其中，所述植物油具体可选自下述至少一种：大豆油、茶油、玉米油、花生油和棉籽油。所述植物油进一步可为大豆油。

所述助悬剂具体可选自下述至少一种：吐温80、司盘80和大豆磷脂。所述助悬剂进一步可为司盘80。

所述硫酸头孢喹肟原料药的粒径可为5-10μm。

本发明所述硫酸头孢喹肟子宫注入剂的性状为类白色至淡黄色油状混悬液。

上述硫酸头孢喹肟子宫注入剂的制备方法，由植物油、单硬脂酸甘油酯和助悬剂制成高分子化合物溶剂体系，再将硫酸头孢喹肟的无菌微粉加入，持续搅拌研磨制成硫酸头孢喹肟子宫注入剂。

具体制备方法包括如下步骤：

1)将适量植物油和单硬脂酸甘油酯混合后，加热熔化，得到混合体系；

2)向所述混合体系中加入助悬剂、硫酸头孢喹肟，再加植物油至全量，研磨均匀，即得所述硫酸头孢喹肟子宫注入剂。

其中，步骤1)中所述加热的条件为：60～80℃加温15～30分钟。通常情况下步骤1)中所使用的植物油的用量为植物油总量的40％-60％。

步骤2)中所述研磨可在胶体磨中进行。

所述植物油在使用前还需经过过滤以及加热灭菌的预处理。所述加热灭菌的条件为：150-160℃灭菌2-3小时。

本发明所提供的硫酸头孢喹肟子宫注入剂对奶牛泌乳期子宫炎具有显著疗效。硫酸头孢喹肟子宫注入剂(泌乳期)临床用于治疗奶牛子宫炎的用量为：1支(25ml:0.9g)/次，间隔72小时给药两次。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

(1)给药方便快捷，减少了大量的人力物力；

(2)动物应激反应小，减少动物体的损伤；

(3)生产工艺简单，得到的制剂均匀、分散性、稳定性好，易于扩大化生产；

(4)本制剂相对于注射液而言，药物释放缓速，生物利用度高，对局部组织刺激性低，临床疗效显著，具有极高的推广价值。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明并不局限于此。

下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可通过商业途径获得。

本发明提供的硫酸头孢喹肟子宫注入剂是一种分布均匀的制剂，具体制备方法包括以下步骤：

A.将植物油(如中性大豆油)经过滤和加热灭菌之后放冷；

B.取适量经预处理的植物油，加入0.125-1.25g的单硬脂酸甘油酯；

C.60～80℃加温15～30分钟，待硬脂酸甘油酯融化，搅拌均匀后，冷却至40℃左右，加入0.125-1.25g的助悬剂(如司盘80)、0.5-2.5g(以头孢喹肟计)的硫酸头孢 喹肟(粒径5-10μm)，再补加植物油至总量为25ml；

D.研磨均匀，制得硫酸头孢喹肟子宫注入剂；

F.将药装入推注管中，密封，灭菌，灯检，包装。

下述实施例中对子宫注入剂的沉降粒度的检测方法：用具塞量筒取供试品50ml，密塞，用力振摇1分钟，记下混悬液的开始高度H0，静置3小时，记下混悬物的最终高度H，按下式计算，结果如下：沉降比体积F＝H/H0，不低于0.90即合格。

无菌检验的方法：

取本品11支，加入到400ml含6％吐温-80的蛋白胨缓冲灭菌溶液(0.1％)中，充分混匀，加入青霉素酶(不少于6600万单位)，混合均匀，置37℃保温4小时；取供试品溶液，依法检查(附录137页，直接接种法)，应符合规定。

实施例1、硫酸头孢喹肟子宫注入剂的处方筛选

1、组方中单硬脂酸甘油酯含量的筛选(注：表中单硬脂酸甘油酯简称甘油酯)

表1

制备方法如下：

1)将硫酸头孢喹肟无菌粉经超微粉碎得到硫酸头孢喹肟无菌微粉(粒径5-10μm)；

2)将大豆油经过滤和加热灭菌(150℃灭菌3小时)后，置于室温下备用；

3)取适量经预处理的大豆油，加入硬脂酸甘油酯以及助悬剂司盘80；加热并搅拌(80℃加温15分钟)，待硬脂酸甘油酯融化之后，加入硫酸头孢喹肟；

5)在无菌胶体磨中研磨均匀，制得硫酸头孢喹肟子宫注入剂。

由表1结果可知，当单硬脂酸甘油酯的含量为0.3％(w/v)时，产品的沉降指标达不到质量标准的要求；当单硬脂酸甘油酯的含量为0.5～5.0％(w/v)时，产品的各项指标达完全符合质量标准的要求，因此确定处方中单硬脂酸甘油酯的含量为0.5～5.0％(w/v)。

2、组方中司盘-80含量的筛选

表2

制备方法同上。

由表2结果可知，当司盘-80的含量为0.3％(w/v)时，产品的沉降指标达不到质量标准的要求；当司盘-80的质量含量为0.5～5.0％(w/v)时，产品的各项指标达完全符合质量标准的要求，因此确定处方中司盘-80含量为0.5～5.0％(w/v)。

实施例2、制备硫酸头孢喹肟子宫注入剂

制备方法如下：

1)将硫酸头孢喹肟无菌粉经超微粉碎得到粒径5-10μm硫酸头孢喹肟无菌微粉；

2)将大豆油经过滤和加热灭菌(150℃灭菌3小时)后，置于室温下备用；

3)取适量经预处理的大豆油(为大豆油总用量的40％-60％)，加入单硬脂酸甘油酯；加热并搅拌(80℃加温15分钟)，待单硬脂酸甘油酯融化，搅拌均匀后，冷却至40℃，加入司盘80、硫酸头孢喹肟，再加大豆油至全量；

4)在无菌胶体磨中研磨均匀，制得硫酸头孢喹肟子宫注入剂。

所得硫酸头孢喹肟子宫注入剂的性状为类白色至淡黄色油状混悬液。

对上述产品进行沉降粒度及无菌检测，其均符合子宫注入剂的质量标准。

实施例3、制备硫酸头孢喹肟子宫注入剂

制备方法如下：

1)将硫酸头孢喹肟无菌粉经超微粉碎得到粒径5-10μm硫酸头孢喹肟无菌微粉；

2)将大豆油经过滤和加热灭菌(150℃灭菌3小时)后，置于室温下备用；

3)取适量经预处理的大豆油(为大豆油总用量的40％-60％)，加入单硬脂酸甘油酯；加热并搅拌(80℃加温15分钟)，待单硬脂酸甘油酯融化，搅拌均匀后，冷却至40℃，加入司盘80、硫酸头孢喹肟，再加大豆油至全量；

4)在无菌胶体磨中研磨均匀，制得硫酸头孢喹肟子宫注入剂。

所得硫酸头孢喹肟子宫注入剂的性状为类白色至淡黄色油状混悬液。

对上述产品进行沉降粒度及无菌检测，其均符合子宫注入剂的质量标准。

实施例4、制备硫酸头孢喹肟子宫注入剂

制备方法如下：

1)将硫酸头孢喹肟无菌粉经超微粉碎得到粒径5-10μm硫酸头孢喹肟无菌微粉；

2)将茶油经过滤和加热灭菌(160℃灭菌2小时)后，置于室温下备用；

3)取适量经预处理的茶油(为茶油总用量的40％-60％)，加入单硬脂酸甘油酯；加热并搅拌(60℃加温30分钟)，待单硬脂酸甘油酯融化，搅拌均匀后，冷却至40℃，加入司盘80、硫酸头孢喹肟，再加大豆油至全量；

4)在无菌胶体磨中研磨均匀，制得硫酸头孢喹肟子宫注入剂。

所得硫酸头孢喹肟子宫注入剂的性状为类白色至淡黄色油状混悬液。

对上述产品进行沉降粒度及无菌检测，其均符合子宫注入剂的质量标准。

实施例5、制备硫酸头孢喹肟子宫注入剂

制备方法如下：

1)将硫酸头孢喹肟无菌粉经超微粉碎得到粒径5-10μm硫酸头孢喹肟无菌微粉；

2)将玉米油经过滤和加热灭菌(150℃灭菌2小时)后，置于室温下备用；

3)取适量经预处理的玉米油(为玉米油总用量的40％-60％)，加入单硬脂酸甘油酯；加热并搅拌(80℃加温30分钟)，待单硬脂酸甘油酯融化，搅拌均匀后，冷却至40℃，加入吐温-80、硫酸头孢喹肟，再加大豆油至全量；

4)在无菌胶体磨中研磨均匀，制得硫酸头孢喹肟子宫注入剂。

所得硫酸头孢喹肟子宫注入剂的性状为类白色至淡黄色油状混悬液。

对上述产品进行沉降粒度及无菌检测，其均符合子宫注入剂的质量标准。

实施例6、制备硫酸头孢喹肟子宫注入剂

制备方法如下：

1)将硫酸头孢喹肟无菌粉经超微粉碎得到粒径5-10μm硫酸头孢喹肟无菌微粉；

2)将棉籽油经过滤和加热灭菌(150℃灭菌2小时)后，置于室温下备用；

3)取适量经预处理的棉籽油(为棉籽油总用量的40％-60％)，加入单硬脂酸甘油酯；加热并搅拌(80℃加温15分钟)，待单硬脂酸甘油酯融化，搅拌均匀后，冷却至40℃，加入大豆磷脂、硫酸头孢喹肟，再加大豆油至全量；

5)在无菌胶体磨中研磨均匀，制得硫酸头孢喹肟子宫注入剂。

所得硫酸头孢喹肟子宫注入剂的性状为类白色至淡黄色油状混悬液。

对上述产品进行沉降粒度及无菌检测，其均符合子宫注入剂的质量标准。

实施例7、硫酸头孢喹肟子宫注入剂的体内效果试验

1)硫酸头孢喹肟子宫注入剂对奶牛的安全性试验

在规模化奶牛场随机选择10头产后无子宫(内膜)炎的健康奶牛，将实施例3制备的硫酸头孢喹肟子宫注入剂一支(25ml:0.9g)通过输精导管缓缓注入子宫内。每隔72小时用药1次,连续用药2次。记录奶牛标识、观察时间、试验日期和时间、每头奶牛给药前及最后一次给药后1、3、5、7、10日的产奶量及体温等参数。通过触诊观察奶牛子宫及***分泌物情况等临床症状。在给药前0日，最后一次给药后第10日，采集子宫内容物行细菌学检查。主要分离大肠杆菌、葡萄球菌、链球菌、化脓棒状杆菌。根据收集的上述数据及临床检查结果确定防治奶牛子宫(内膜)炎产品对靶动物的安全性。

结果显示，在各时间点给药后的产奶量及体温等参数与给药前未见明显变化，奶牛子宫及***分泌物情况等临床症状。在给药前0日和给药后第10日分别采集子宫分泌物并分离细菌，显示给药后细菌检出数与给药前相比降低。综合以上结果表明，奶牛按照推荐剂量间隔72小时给予硫酸头孢喹肟子宫注入剂两次后，对奶牛无不良反应，该制剂具有较高的安全性。

2)硫酸头孢喹肟子宫注入剂在牛乳的残留试验

奶牛入选标准为无子宫(内膜)炎及相关临床症状的健康奶牛，奶牛在试验前30天内未全身性或子宫内给予抗生素。实验选择12头无子宫(内膜)炎及相关临床症状的健康奶牛，试验期间奶牛正常饲养。给药前，先用生理盐水清洗子宫，将圆头塑料管***子宫内，将实施例3制备的硫酸头孢喹肟子宫注入剂一支(25ml:0.9g)通过输精导管注入子宫内，每头牛一支，连用两次，间隔72h。给药前采集空白奶样，每头牛在最后一次给药后12h,18h,24h,36h,42h,48h,60h,66h,72h,84h,90h,96h采集混合奶样40ml，置于-40℃条件下保存待测。注意挤奶时前三把奶不能舍弃。

奶样经两次乙腈提取后氮气吹干，复溶后过HLB固相萃取小柱净化，采用UPLC-MS-MS法检测乳中药物浓度。结果显示给药后牛乳中头孢喹肟消除迅速，给药后36小时乳中药物浓度低于EMEA所规定乳中最高残留限量(MRL)20ug/kg，采用休药期计算软件WTM1.4计算后，本制剂在牛乳的休药期为39.8小时，考虑到临床实际使用情况，暂定硫酸头孢喹肟子宫注入剂在按推荐剂量和推荐疗程给药后，牛奶的弃奶期为48小时。

3)硫酸头孢喹肟子宫注入剂对奶牛子宫炎的药效学试验

在规模化奶牛场随机选择40头产后患子宫(内膜)炎的奶牛开展试验，随机分成4组，每组10头。其中3个受试药物组(I、II、III组)，分别给予高(2支/次，间隔72小时给药两次)、中(1支/次，间隔72小时给药两次)、低(1/2支/次，间隔72小时给药两次)剂量的硫酸头孢喹肟子宫注入剂；1个药物对照组(IV组)，给予氟苯尼考子宫注入剂1支。上述硫酸头孢喹肟子宫注入剂为实施例3制备的样品，规格为25ml：0.9g

整个试验期间对给药奶牛进行详细观察，记录试验开始后给药前、给药后和停药后各组奶牛临床症状的表现以及症状的发生、发展、转归和消失情况，记录用药奶牛的体温、产奶量以及红、肿、热、痛等临床症状，对奶牛子宫进行直肠触诊，观察有无肿胀等临床症状。最后一次给药后第14天，采集1次每头牛子宫颈和***的黏液样本，进行细菌分离培养(大肠杆菌、葡萄球菌、链球菌、化脓棒状杆菌)。根据收集的 上述数据及临床检查结果确定产品的有效性。

根据试验结果，可得以下结论：

(1)经过受试药物和对照药物给药后，各实验组奶牛给药前和给药后子宫分泌物中主要致病菌数量改变。硫酸头孢喹肟子宫注入剂高剂量组由给药前的13株菌降低为给药后的2株菌；硫酸头孢喹肟子宫注入剂中剂量组由给药前的17株菌降低为给药后的3株菌；硫酸头孢喹肟子宫注入剂低剂量组由给药前的14株菌降低为给药后的5株菌；对照药物组由给药前的15株菌降低为给药后的7株菌。其中硫酸头孢喹肟子宫注入剂高剂量组和中剂量组治疗效果明显，对奶牛子宫炎主要致病菌有良好的清除作用。硫酸头孢喹肟子宫注入剂低剂量组由于给药剂量减半，对奶牛子宫炎主要致病菌的清除效果并不理想。对照药物组对奶牛子宫炎主要致病菌的清除作用也未达到满意效果。说明高、中剂量的硫酸头孢喹肟子宫注入剂对奶牛子宫炎主要致病菌大肠杆菌、链球菌、金黄色葡萄球菌和化脓性棒状杆菌的清除作用均明显优于低剂量硫酸头孢喹肟子宫注入剂和氟苯尼考子宫注入剂。

表3各试验组奶牛用药前后主要病原菌的分离鉴定结果统计

(2)硫酸头孢喹肟子宫注入剂和氟苯尼考子宫注入剂治疗奶牛子宫炎，给药前由于存在炎症，各实验组奶牛体温均略有升高，给药后各时间点奶牛体温逐渐恢复正常。治疗后奶牛的精神食欲状态、泌乳情况，***分泌物及子宫状态等各种临床症状都得到了显著改善(P＜0.01)，其中高、中剂量硫酸头孢喹肟子宫注入剂的效果显著优于低剂量硫酸头孢喹肟子宫注入剂和氟苯尼考子宫注入剂(P＜0.01)，并且高、中剂量组治疗效果无显著差异(P＞0.05)。

(3)高(2倍推荐剂量)、中(推荐剂量)、低(1/2倍推荐剂量)剂量的硫酸头孢喹肟子宫注入剂对奶牛子宫炎的有效率分别为90％、80％和60％；氟苯尼考子宫注入剂(对照组)对奶牛子宫炎的有效率为60％。治愈率方面，高(2倍推荐剂量)、中(推荐剂量)、低(1/2倍推荐剂量)剂量的硫酸头孢喹肟子宫注入剂对奶牛子宫炎的 治愈率分别为80％、70％和50％；氟苯尼考子宫注入剂(对照组)对奶牛子宫炎的治愈率为50％。

表4受试药物和对照药物对奶牛子宫炎的治愈率和有效率

(4)考虑到高(2倍推荐剂量)、中(推荐剂量)剂量硫酸头孢喹肟子宫注入剂对奶牛子宫炎的疗效(病原菌清除效果、临床症状恢复情况)差异不显著，均优于低剂量(1/2倍推荐剂量)，因此推荐硫酸头孢喹肟子宫注入剂临床用于防治奶牛子宫炎的用药方案为：1支/次，间隔72小时给药两次。

按照实施例7的体内效果试验的方法对实施例2、4、5、6的产品进行相同的测试，其结果与实施例3的效果相当。表明本发明提供的硫酸头孢喹肟子宫注入剂安全有效、生物利用度高、对局部组织刺激小、疗效显著，具有极高的推广价值。

Claims (2)

1.一种硫酸头孢喹肟子宫注入剂，由下述原辅料制成：硫酸头孢喹肟0.90-1.25g、单硬脂酸甘油酯0.125-1.25g、助悬剂0.125-1.25g、植物油加至25ml；所述硫酸头孢喹肟的质量以头孢喹肟计；

所述植物油为大豆油；

所述助悬剂为司盘80；

所述硫酸头孢喹肟的粒径为5-10μm；

所述硫酸头孢喹肟子宫注入剂用于奶牛子***的预防和/或治疗；

所述硫酸头孢喹肟子宫注入剂按照包括下述步骤的方法制备：

1)将适量所述植物油和所述单硬脂酸甘油酯混合后，加热熔化，得到混合体系；

所述植物油的用量为植物油总量的40％～60％；

所述加热的条件为：60～80℃加温15～30分钟；

2)向所述混合体系中加入所述助悬剂、所述硫酸头孢喹肟，再加植物油至全量，研磨均匀，即得所述硫酸头孢喹肟子宫注入剂；

所述研磨在胶体磨中进行；

所述植物油在使用前还需经过过滤以及加热灭菌的预处理；所述加热灭菌的条件为：150-160℃灭菌2-3小时。

2.权利要求1所述的硫酸头孢喹肟子宫注入剂在制备预防和/或治疗奶牛子***药物中的应用。