CN103983707A - 一种用于检测肉品中药物残留的方法及其试剂盒 - Google Patents
一种用于检测肉品中药物残留的方法及其试剂盒 Download PDFInfo
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Abstract
本申请提供一种用于检测肉品中药物残留的试剂盒,其包括混合型阳离子交换固相萃取柱,所述金刚烷胺、喹诺酮类和磺胺类药物的萃取液,第一淋洗液、第二淋洗液、洗脱液和复溶液。本发明还提供了使用该试剂盒进行药物残留的检测方法。本发明将这三类药物的前处理方法进行了整合,设计出能同时进行金刚烷胺、喹诺酮类、磺胺类药物残留检测的前处理方法试剂盒,本方法试剂盒可以对以上三类药物同时进行前处理。前处理后即可使用常规技术进行样品的色谱或质谱分析。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物残留检测,尤其涉及一种用于检测肉品中药物残留的方法及其试剂盒。
背景技术
目前许多肉品企业都要进行金刚烷胺、喹诺酮类和磺胺类药物的残留检测,样品的前处理是残留检测的重要步骤,也是最消耗时间和试剂的步骤。但是现有肉品中金刚烷胺、喹诺酮类和磺胺类药物的残留检测的前处理只能做单种药物残留的前处理,效率低,需要很长的时间进行处理,有机试剂的消耗量大,造成肉品企业应用时成本很高。
发明内容
本发明旨在解决现有技术中的肉品中金刚烷胺、喹诺酮类和磺胺类药物残留检测的前处理只能做单类药物残留的前处理的问题,进而提出一种对这三类药物的前处理方法进行了整合,设计出能同时进行金刚烷胺、喹诺酮类和磺胺类药物的残留检测的前处理方法的试剂盒。
本申请提供了一种用于检测肉品中药物残留的试剂盒,其包括混合型阳离子交换固相萃取柱,金刚烷胺、喹诺酮类和磺胺类药物的萃取液,第一淋洗液、第二淋洗液、洗脱液和复溶液。
其中,所述试剂盒还包括50mL聚丙烯材质可立离心管和10mL聚丙烯材质离心管。
其中,所述试剂盒还包括过滤器。
其中,所述过滤器为0.22微米过滤器。
所述萃取液含有2-5体积%的甲酸、乙酸或三氯乙酸,50-70体积%的甲醇,以及其余体积的水。
所述第一淋洗液为1-5体积%盐酸或甲酸的水溶液;
所述第二淋洗液为色谱级甲醇或乙腈;
所述洗脱液为50-80体积%氨水的甲醇溶液;
所述复溶液为乙酸/甲醇/水溶液,所述乙酸/甲醇/水溶液中的乙酸、甲醇和水体积比1:20:79。
本发明还提供了一种用于检测肉品中药物残留的方法,该方法包括以下步骤:
(1)萃取分离
将样品放入所述萃取液中振荡,然后进行离心分离,得到上清液;
(2)所述上清液的处理
所述上清液通过所述混合型阳离子交换固相萃取柱,然后依次使用第一淋洗液和第二淋洗液进行淋洗,再使用所述洗脱液进行洗脱处理,浓缩后用所述复溶液进行复溶,得到待检测的样品溶液;
(3)检测分析
所述样品溶液进行色谱分析和/或质谱分析。
(4)结果处理与分析
其中,所述上清液的具体处理步骤包括:取适量上清液通过混合型阳离子交换固相萃取柱,使用1-5%盐酸或甲酸的水溶液,色谱级甲醇或乙腈依次淋洗;50-80体积%氨水的甲醇溶液进行洗脱处理,收集洗脱液,70℃下旋蒸或氮气吹干,用所述复溶液进行复溶。
其中,所述上清液的处理步骤还包括:使用过滤器对所述样品溶液进行过滤。
其中,所述样品溶液进行色谱分析的条件为:柱温:42℃;样品室温度10℃;进样体积10μL;流动相A为含0.1%(体积分数)甲酸的水,流动相 B为乙腈,梯度洗脱;
所述样品溶液进行质谱分析的条件为:离子源:电喷雾电离(ESI+);IonSpray voltage5500V;温度600℃;Ion Source Gas60L/h;气帘气35L/h;碰撞气:氮气,采用多反应监测(MRM)模式。
与有关技术相比,本发明实施例的有益效果如下:
(1)本发明将这三类药物的前处理方法进行了整合,设计出能同时进行金刚烷胺、喹诺酮类、磺胺类药物残留检测的前处理方法试剂盒,本方法试剂盒可以对以上三类药物同时进行前处理;前处理完成后即可使用常规技术进行样品的色谱或质谱分析。
(2)本方法可以减少3/4有机试剂的消耗;
(3)本方法采用了优化的固相萃取柱填料量和管径的比值,在保证吸附效果的同时,样本过柱速度提高1倍;
(4)使残留检测的前处理更为方便、高效、标准。
具体实施方式
以下将以实施例的方式对本发明做出进一步的说明。需要说明的是,在不冲突的情况下,本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互任意组合。
实施例1(鸡肉中金刚烷胺、氧氟沙星、磺胺嘧啶多残留检测)
(1)试剂盒包括:
50mL离心管为聚丙烯材质带0.5毫升分度刻度的可立离心管,20支;
10mL离心管为聚丙烯材质带0.1毫升分度刻度的离心管,20支;
固相萃取柱:混合型阳离子交换固相萃取柱(填料质量为60mg,柱体积为6毫升,无需激活,提取上清液可直接过柱);
0.22微米滤器,采用尼龙膜或聚四氟乙烯膜针式滤器;
提取液:5%体积的甲酸,45%体积的甲醇,其余体积为水,20mL,20支;
第一淋洗液:3%盐酸溶液,60mL,1瓶;
第二淋洗液:色谱级甲醇,60mL,1瓶;
洗脱液:氨水甲醇溶液,60mL(50/50,V/V),1瓶;
复溶液:乙酸/甲醇/水(1/20/79体积比)溶液,30mL,1瓶;
(2)前处理操作步骤
取均质好的鸡肉2克于50mL聚丙烯材质离心管中,加入提取液1支,振荡提取5-10分钟,3000-4000转离心5-10分钟获取上清液;
取上清液10mL通过混合型阳离子交换固相萃取柱,取2mL第一淋洗液和2mL第二淋洗液依次进行淋洗;取3mL洗脱液过柱,并收集洗脱液于10mL聚丙烯材质带刻度离心管中;70℃下旋蒸或氮气吹干至小于0.2mL,使用样品复溶液复溶并定容至1mL,得到待检测的样品溶液;使用0.22微米滤器过滤样品溶液,并分装于进样小瓶中,可供色谱或质谱分析。
实施例2(猪肉中金刚烷胺、诺氟沙星、磺胺甲噁唑多残留检测)
(1)试剂盒包括:
50mL离心管为聚丙烯材质带0.5毫升分度刻度的可立离心管,20支;。
10mL离心管为聚丙烯材质带0.1毫升分度刻度的离心管,20支;
固相萃取柱:混合型阳离子交换固相萃取柱(填料质量为60mg,柱体积为6毫升,无需激活,提取上清液可直接过柱);
0.22微米滤器,采用尼龙膜或聚四氟乙烯膜针式滤器;
提取液:2%体积的三氯乙酸,48%体积的甲醇,其余体积为水,20mL,20支;
第一淋洗液:5%甲酸酸溶液,60mL,1瓶;
第二淋洗液:色谱级甲醇,60mL,1瓶;
洗脱液:氨水甲醇溶液,60mL(50/50,V/V),1瓶;
复溶液:乙酸/甲醇/水(1/20/79体积比)溶液,30mL,1瓶;
(2)前处理操作步骤
取均质好的猪肉2克于50mL聚丙烯材质离心管中,加入提取液1支,振荡提取5-10分钟,3000-4000转离心5-10分钟获取上清液;
取上清液15mL通过混合型阳离子交换固相萃取柱,取3mL第一淋洗液和3mL第二淋洗液依次进行淋洗;取5mL洗脱液过柱,并收集洗脱液于10mL聚丙烯材质带刻度离心管中;70℃下旋蒸或氮气吹干至小于0.1mL,使用样品复溶液复溶并定容至0.75mL,得到待检测的样品溶液;使用0.22微米滤器过滤样品溶液,并分装于进样小瓶中,可供色谱或质谱分析。
实施例3(鸭肉中环丙沙星、恩诺沙星和磺胺二甲嘧啶多残留检测)
(1)试剂盒包括:
50mL离心管为聚丙烯材质带0.5毫升分度刻度的可立离心管,20支;。
10mL离心管为聚丙烯材质带0.1毫升分度刻度的离心管,20支;
固相萃取柱:混合型阳离子交换固相萃取柱(填料质量为60mg,柱体积为6毫升,无需激活,提取上清液可直接过柱);
0.22微米滤器,采用尼龙膜或聚四氟乙烯膜针式滤器;
提取液:2%体积的三氯乙酸,48%体积的甲醇,其余体积为水,20mL,20支;
第一淋洗液:5%甲酸酸溶液,60mL,1瓶;
第二淋洗液:色谱级甲醇,60mL,1瓶;
洗脱液:氨水甲醇溶液,60mL(50/50,V/V),1瓶;
复溶液:乙酸/甲醇/水(1/20/79体积比)溶液,30mL,1瓶;
(2)前处理操作步骤
取均质好的鸭肉2克于50mL聚丙烯材质离心管中,加入提取液1支,振荡提取5-10分钟,3000-4000转离心5-10分钟获取上清液;
取上清液5mL通过混合型阳离子交换固相萃取柱,取1mL第一淋洗液 和2mL第二淋洗液依次进行淋洗;取5mL洗脱液过柱,并收集洗脱液于10mL聚丙烯材质带刻度离心管中;70℃下旋蒸或氮气吹干至小于0.1mL,使用样品复溶液复溶并定容至0.5mL,得到待检测的样品溶液;使用0.22微米滤器过滤样品溶液,并分装于进样小瓶中,可供色谱或质谱分析。
测试例
(1)对实施例1-3的样品进行检测分析,其检测分析条件如下:
液相色谱条件:
仪器为岛津液相色谱,色谱柱:Agilent Poroshell120EC-C18(30+50mm×2.1mm i.d.,1.7μm);柱温:42℃;样品室温度10℃;进样体积10μL;流动相A为含0.1%(体积分数)甲酸的水,流动相B为乙腈,梯度洗脱,洗脱程序见表1。
表1
时间 | 流速 | A% | B% |
0 | 0.5 | 90 | 10 |
0.2 | 0.5 | 90 | 10 |
5 | 0.5 | 80 | 20 |
7 | 0.5 | 10 | 90 |
7.1 | 0.5 | 90 | 10 |
9 | 0.5 | 90 | 10 |
质谱条件:
AB5500质谱,离子源:电喷雾电离(ESI+);IonSpray voltage5500V;温度600℃;Ion Source Gas60L/h;气帘气35L/h;碰撞气:氮气。采用多反应监测(MRM)模式,各种物质的采集参数见表2。
表2
注:“*”为定量离子
(2)试剂盒检测药物残留的重复性和变异系数
金刚烷胺、喹诺酮类、磺胺类药物的重复性和变异系数
称取经测定空白试样2g,分别加入5,10和50ng/g浓度水平的金刚烷胺、喹诺酮类、磺胺类药物混合标准溶液,充分混匀,按照实施例1的方法进行测定,每个添加水平平行测定6份。所有药物回收率,变异系数见表3。
表3
虽然本发明所揭露的实施方式如上,但所述的内容只是为了便于理解本发明而采用的实施方式,并非用以限定本发明。任何本发明所属技术领域内的技术人员,在不脱离本发明所揭露的精神和范围的前提下,可以在实施的形式上及细节上作任何的修改与变化,但本发明的专利保护范围,仍须以所附的权利要求书所界定的范围为准。
Claims (10)
1.一种用于检测肉品中药物残留的试剂盒,其特征在于,其包括混合型阳离子交换固相萃取柱,金刚烷胺、喹诺酮类和磺胺类药物的萃取液,第一淋洗液、第二淋洗液、洗脱液和复溶液。
2.根据权利要求1所述的试剂盒,其中,所述试剂盒还包括50mL聚丙烯材质可立离心管和10mL聚丙烯材质离心管。
3.根据权利要求1或2所述的试剂盒,其中,所述试剂盒还包括过滤器。
4.根据权利要求3所述的试剂盒,其中,所述过滤器为0.22微米过滤器。
5.根据权利要求1或2所述的试剂盒,其中,所述萃取液含有2-5体积%的甲酸、乙酸或三氯乙酸,50-70体积%的甲醇,以及其余体积的水。
6.根据权利要求1或2所述的试剂盒,其中,所述第一淋洗液为1-5体积%盐酸或甲酸的水溶液;
所述第二淋洗液为色谱级甲醇或乙腈;
所述洗脱液为50-80体积%氨水的甲醇溶液;
所述复溶液为乙酸/甲醇/水溶液,所述乙酸/甲醇/水溶液中的乙酸、甲醇和水体积比1:20:79。
7.一种用于检测肉品中药物残留的方法,其特征在于,使用权利要求1-6中任一所述的试剂盒进行样品前处理;该检测方法包括以下步骤:
(1)萃取分离
将样品放入所述萃取液中振荡,然后进行离心分离,得到上清液;
(2)所述上清液的处理
所述上清液通过所述混合型阳离子交换固相萃取柱,然后依次使用第一淋洗液和第二淋洗液进行淋洗,再使用所述洗脱液进行洗脱处理,浓缩后用所述复溶液进行复溶,得到待检测的样品溶液;
(3)检测分析
所述样品溶液进行色谱分析和/或质谱分析。
(4)结果处理与分析。
8.根据权利要求7所述的方法,其中,所述上清液的具体处理步骤包括:取适量上清液通过混合型阳离子交换固相萃取柱,使用1-5%盐酸或甲酸的水溶液,色谱级甲醇或乙腈依次淋洗;50-80体积%氨水的甲醇溶液进行洗脱处理,收集洗脱液,70℃下旋蒸或氮气吹干,用所述复溶液进行复溶。
9.根据权利要求7或8所述的方法,其中,所述上清液的处理步骤还包括:使用过滤器对所述样品溶液进行过滤。
10.根据权利要求7或8所述的方法,其中,所述样品溶液进行色谱分析的条件为:柱温:42℃;样品室温度10℃;进样体积10μL;流动相A为含0.1%(体积分数)甲酸的水,流动相B为乙腈,梯度洗脱;
所述样品溶液进行质谱分析的条件为:离子源:电喷雾电离(ESI+);IonSpray voltage5500V;温度600℃;Ion Source Gas60L/h;气帘气35L/h;碰撞气:氮气,采用多反应监测(MRM)模式。
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