CN103348917A

CN103348917A - 生姜一步成脱毒苗快速繁殖方法

Info

Publication number: CN103348917A
Application number: CN2013103016685A
Authority: CN
Inventors: 吴金平; 丁自立; 陈磊夫; 郭凤领; 邓晓辉; 邱正明
Original assignee: Hubei So Good Seed Technology Co ltd; Institute of Economic Crop of Hubei Academy of Agricultural Science
Current assignee: Hubei So Good Seed Technology Co ltd; Institute of Economic Crop of Hubei Academy of Agricultural Science
Priority date: 2013-07-18
Filing date: 2013-07-18
Publication date: 2013-10-16
Anticipated expiration: 2033-07-18
Also published as: CN103348917B

Abstract

本发明公开了一种生姜一步成脱毒苗快速繁殖方法，其步骤：A、选取姜根茎萌发的嫩芽为外植体；B、热处理进行外植体脱毒；C、脱毒外植体用酒精、升汞消毒；D、解剖显微镜剥取茎尖；E、茎尖在光照恒温条件下诱导微型姜丛芽；F、微型姜丛芽用酶联免疫吸附法(ELISA)进行病毒检测；G、无毒微型姜丛芽继代增殖培养；H、无毒带根微型姜丛芽分株后移栽。利用该技术可以有效地去除姜体内携带的各种病毒和病菌，培养出无菌无毒姜苗，实现生姜脱毒健康栽培，且繁殖占用空间小，繁殖速度快，一年一个脱毒芽可繁殖十万棵以上脱毒生姜苗，有效解决生姜种植中的脱毒姜种苗供应问题，恢复生姜的优良品性，减少病害发生，提高生姜产量与品质。

Description

生姜一步成脱毒苗快速繁殖方法

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种生姜一步成脱毒苗快速繁殖方法，该方法利用基本培养基和附加不同激素成份以达到脱毒生姜苗的快速繁殖。

背景技术

生姜（Zingiber officinale Rosc.）属姜科姜属多年生宿根草本植物，仔姜可做蔬菜，老姜可用做香料和药物，是一种重要的药食兼用型经济作物。生姜喜温暖湿润的气候，不耐寒，怕潮湿，怕强光直射，是山区农民脱贫致富的好帮手。由于姜不开花或很少开花，所以姜长期无性繁殖，致使姜体内积累多种病菌病毒，其中细菌以青枯假单胞杆菌最为严重，该菌极易通过种姜积累传播，诱发姜瘟。姜瘟己成为生姜生产发展的制约因素，发病地块一般减产20～30%，重者达50～70%，甚至无收；种姜病毒积累通常致使生姜产量下降5～45%，同时使其品质降低，抗逆性下降。同时，常规栽培中，取已萌芽的种姜切块种植，每公顷需种姜4500～6000kg，不仅消耗大量的商品姜，而且需要大量的土地留种，生产成本较高。生姜在我国种植面积很大，通过组培和热处理可以提供大量脱毒种苗，降低姜瘟病和病毒病的侵染，大幅度提高产量和质量。

发明内容

本发明的目的是在于提供了一种生姜一步成脱毒苗快速繁殖方法，方法易行，操作方便，繁殖速度快，可加快脱毒生姜快速繁殖。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术措施：

生姜一步成脱毒苗快速繁殖方法，其步骤是：

A、选取鲜黄、有光泽、芽多且无伤痕、饱满健壮的姜块，自来水冲洗干净后，埋于洗净的沙床中，在20℃～25℃条件下催芽。当嫩芽长到1～2cm长时用刀片切取，用自来水冲洗去掉沙土；

B、嫩芽置于恒温箱中，50℃下处理5min完成脱毒；

C、在超净工作台上用75%体积比的酒精溶液浸泡10～30s，无菌水冲洗，再用0.1%重量比升汞溶液消毒10～12min，无菌水冲3～5次；

D、沥干水分后，在无菌条件下对经过处理的材料在解剖镜下解剖，切取分生组织0.1～0.3mm生长点，迅速接种到诱导培养基中。诱导培养基的配方为：MS+KT1.0～1.5mg/L+NAA0.5～0.6mg/L+琼脂4000～6000mg/L+白糖20000～30000mg/L+pH5.8；

E、光照培养，温度为25～28℃，光强1500～3000Lx，每天光照10～16h，培养30～60d，长出微型姜丛芽；

F、从每个微型姜丛芽上选择1株，剪取芽茎基部0.5cm以上植物材料。用酶联免疫吸附法(ELISA试剂盒)（上海研吉生物有限公司）进行黄瓜花叶病毒（CMT）和烟草花叶病毒（TMV）检测，将脱毒不净的微型姜丛芽剔除，无毒微型姜丛芽继代培养；

G、将脱毒微型姜丛芽切割成0.4cm～0.6cm大小的微型姜丛芽，每个芽茎从基部0.5～1cm处剪掉，并去掉所有根，转入D步骤中的培养基，进行芽的继代增殖培养，以后每隔25～35d继代1次；

H、根据生产季节，将继代培养25～35d的微型姜丛芽开瓶炼苗5～7d，将3～7cm高的带根小苗分成单棵，用0.003%～0.005%重量比NAA溶液浸苗根基部10～15min，将组培苗移栽到基质（草炭/珍珠岩/蛭石=2/1/1，体积比）中，浇足定根水，盖上小拱棚膜保温保湿，前期温度保持在15～25℃，湿度80～90%，7～15d后中午揭膜1h或2h，后逐渐延长揭膜时间，直至不覆膜。每隔2～3周浇施0.1%～0.3%重量比尿素和0.1%～0.3%重量比KH₂PO₄或稀薄粪水，注意进行病虫害防治，组培苗成活率达95%以上，将成活苗移栽。

所述的MS培养基的成份(单位：mg/L)：

本发明与常规种植技术相比，具有以下优点和效果：

脱毒生姜一步成苗快速繁殖体系的建立，可以有效解决生姜种植中的脱毒生姜种苗供应问题。所建立的生产体系稳定，繁殖占用空间小、周期短、繁殖率高、成本低廉，能满足生姜苗规模化生产。该方法在培养基配置过程中，用白糖代替蔗糖，用自来水代替蒸馏水，有效降低生产成本。脱毒姜苗从外植体诱导、增殖、生根在一种培养基中完成，减少不同培养基配置步骤和生根培养转接操作步骤。利用微型姜丛芽继代增殖，成苗率高，植株粗壮，根系发达，生产周期缩短。30～50d的增殖倍数达到7～10倍，一年一个脱毒芽可繁殖十万棵以上脱毒生姜苗。以一个芽40d继代一次，每次的繁殖倍数为7，前两次继代单芽不增殖计算。

天数（d）	30	70	110	150	190	230	270	310	350
										苗数(棵)	1	1	1	7	49	343	2401	16807	117649

具体实施方式

实施例1：

生姜一步成脱毒苗快速繁殖方法，其步骤是：

1.选取鲜黄、有光泽、芽多且无伤痕、饱满健壮的姜块，自来水冲洗干净后，埋于洗净的沙床中，在20℃或21℃或22℃或24℃或24℃或25℃条件下催芽。当嫩芽长到1cm或1.5cm或2cm长时用刀片切取，经自来水冲洗去掉沙土；

2.嫩芽置于恒温箱中，50℃下处理5min完成脱毒；

3.在超净工作台上用75%体积比的酒精溶液浸泡10s或15s或20s或25s或30s，无菌水冲洗3次，再用0.1%（重量比）升汞溶液消毒10min或11min或12min，无菌水冲3次或4次或5次；

4.沥干水分后，在无菌条件下对经过处理的材料在解剖镜下解剖，切取分生组织尖端0.1mm或0.2mm或0.3mm生长点，迅速接种到诱导培养基中。诱导培养基的有效成份为：MS+KT1.0mg/L+NAA0.5mg/L+琼脂5000mg/L+白糖30000mg/L，pH5.8；

5.光照培养，温度为25℃或26℃或27℃或28℃，光强1500Lx或2000Lx或2500Lx或3000Lx，每天光照10h或12h或14h或16h，培养30d或40d或50d或60d，长出微型姜丛芽；

6.从每个微型姜丛芽上选择1株，剪取芽茎基部0.5cm以上植物材料。用酶联免疫吸附法(ELISA试剂盒)（上海研吉生物有限公司）进行黄瓜花叶病毒（CMT）和烟草花叶病毒（TMV）检测，将脱毒不净的微型姜丛芽剔除，无毒微型姜丛芽继代培养；

7.将脱毒微型姜丛芽切割成0.4cm或0.5cm或0.6cm大小的微型姜丛芽，每个芽茎从基部0.5cm或0.6cm或0.7cm或0.8cm或0.9cm或1cm处剪掉，并去掉所有根，转入步骤4中的培养基中进行芽的继代增殖培养，以后每隔25d或30d或35d继代1次；

8．根据生产季节，将继代培养25d或30d或35d的微型姜丛芽开瓶炼苗5d或6d或7d，将苗高3cm或4cm或5cm或6cm或7cm的带根小苗分成单棵苗，用0.003%～0.005%重量比NAA溶液浸苗根基部12min，将组培苗移栽到基质（草炭/珍珠岩/蛭石=2/1/1，体积比）中，浇足定根水，用量以湿遍苗床基质为度，盖上小拱棚膜保温保湿，前期温度保持在15℃或17℃或19℃或21℃或23℃或25℃，湿度80%或85%或90%以上，7d或9d或11d或13d或15d后逐步揭膜，中午揭膜1h或2h，逐渐延长揭膜时间，在揭膜期间保持平均温度在15℃～25℃，湿度在80%～90%。每隔2～3周浇施0.2%重量比的尿素和0.1%重量比的KH₂PO4或稀薄粪水，保证棚内生长期肥水管理条件相一致，注意进行病虫害防治，组培苗成活率达95%以上。

实施例2：

生姜一步成脱毒苗快速繁殖方法，其步骤是：

1.选取鲜黄、有光泽、芽多且无伤痕、饱满健壮的姜块，自来水冲洗干净后，埋于洗净的沙床中，在25℃条件下催芽。当嫩芽长到1.5cm长时用刀片切取，经自来水冲洗去掉沙土；

2.嫩芽置于恒温箱中，50℃下处理5min完成脱毒；

3.在超净工作台上用75%体积比的酒精溶液浸泡20s，无菌水冲洗3次，再用0.1%（重量比）升汞溶液消毒12min，无菌水冲5次；

4.沥干水分后，无菌条件下对在解剖镜下解剖经过处理的材料，切取分生组织0.2mm生长点，迅速接种到诱导培养基中。诱导培养基的有效成份为：MS+KT1.0mg/L+NAA0.5mg/L+琼脂5000mg/L+白糖30000mg/L，pH5.8；

5.光照培养，温度为25℃，光强2000Lx，每天光照14h，培养30d，茎尖膨大并诱导出微型姜丛芽；

7.将脱毒微型姜丛芽切割成0.5cm大小的微型姜丛芽，每个芽茎从距基部0.5cm处剪掉，并去掉所有根，转入步骤4中的培养基中进行芽的继代增殖培养，以后每隔30d继代1次；

8.根据生产季节，将继代培养30d的微型姜丛芽开瓶炼苗5d，将苗高6cm的带根小苗分成单棵苗，用0.004%重量比NAA溶液浸苗根基部12min，将组培苗移栽到基质(草炭/珍珠岩/蛭石=2/1/1，体积比)中，浇足定根水，用量以湿遍苗床基质为度，盖上小拱棚膜保温保湿，前期温度保持在21℃，湿度在85%，7d后中午揭膜1h，逐步延长揭膜时间，直至不覆膜，揭膜期间保持温度在18～20℃，湿度在85%。每隔2周浇施0.2%重量比的尿素和0.1%重量比的KH₂PO₄，保证棚内生长期肥水管理条件相一致，注意进行病虫害防治，组培苗成活率达98%。

Claims

1.生姜一步成脱毒苗快速繁殖方法，其步骤是：

A、选取鲜黄、有光泽、芽多且无伤痕、饱满健壮的姜块，自来水冲洗干净后，埋于洗净的沙床中，在20 ℃~25 ℃条件下催芽，当嫩芽长到1~2 cm长时用刀片切取，经自来水冲洗去掉沙土；

B、嫩芽置于恒温箱中，50 ℃下处理５min 完成脱毒；

C、在超净工作台上用75 %体积比的酒精溶液浸泡10~30 s，无菌水冲洗，再用0.1 %重量比升汞溶液消毒10~12 min，无菌水冲3~5次；

D、沥干水分后，在无菌条件下对经过处理的材料在解剖镜下解剖，切取分生组织尖端0.1~ 0.3 mm 生长点，接种到诱导培养基中，诱导培养基的配方为：MS+KT 1.0~1.5 mg/L+NAA 0.5~0.6 mg/L+琼脂4000~ 6000 mg/L+白糖 20000~30000 mg/L+ pH 5.8；

E、光照培养，温度为25~28 ℃，光强1500~3000 Lx，每天光照10~16 h，培养30~60 d，长出微型姜丛芽；

F、从每个微型姜丛芽上选择1株，剪取芽茎基部0.5cm以上植物材料，用 ELISA 试剂盒进行黄瓜花叶病毒和烟草花叶病毒检测，将脱毒不净的微型姜丛芽剔除，无毒微型姜丛芽继代培养；

G、将脱毒微型姜丛芽切割成0.4cm~0.6cm大小的微型姜丛芽，每个芽茎从基部0.5~1 cm处切掉，并去掉所有根，转入D步骤中的培养基，进行微型姜丛芽的继代增殖培养，以后每隔25~35 d 继代1 次；

H、根据生产季节，将继代培养25~35 d 的微型姜丛芽开瓶炼苗5~7 d，将3~7 cm高的带根小苗分成单棵，用0.003 %~0.005 % 重量比NAA溶液浸苗根基部10~15 min，将组培苗移栽到基质中，浇足定根水，盖上小拱棚膜保温保湿，前期温度保持在15~25 ℃，湿度80~90 %，7~15 d后揭膜，逐渐延长揭膜时间，直至不覆膜，每隔2~3周浇施 0.1 %~0.3 %重量比尿素和0.1 %~0.3 %重量比KH₂PO₄或稀薄粪水，将成活苗移栽；

所述的基质为：草炭/珍珠岩/蛭石=2/1/1，体积比。

2.根据权利要求1所述的繁殖方法，其特征在于，揭膜期间，保持平均温度在15℃~25℃，湿度在80%~90%。