CN105475135A

CN105475135A - 一种蓝姜组培快速繁殖的方法

Info

Publication number: CN105475135A
Application number: CN201510881855.4A
Authority: CN
Inventors: 黄鹤平; 靳松; 郑旴; 陈泽斌
Original assignee: Kunming University
Current assignee: Kunming University
Priority date: 2015-12-04
Filing date: 2015-12-04
Publication date: 2016-04-13

Abstract

本发明公开了一种蓝姜组培快速繁殖的方法，包括以下步骤：外植体的选择和消毒，丛生芽诱导，增殖培养，生根培养，组培苗的驯化与移栽；解决了现有技术中存在的蓝姜繁殖系数低、病毒大量积累并逐代加重和种性逐渐退化的问题。本发明的培养方法简单易行，成本较低且移栽成活率高，达85％以上；选用蓝姜芽块茎作为组织培养材料，蓝姜组培苗具有生长快、长势旺、抗病，抗逆性强、品质好、产量高等特性。

Description

一种蓝姜组培快速繁殖的方法

技术领域

本发明属于植物培养技术领域，具体涉及一种蓝姜组培快速繁殖的方法。

背景技术

蓝姜系姜科姜黄属植物黑心姜(CurcumacaesiaRoxb.)，多年生直立或攀援草本，有时基部木质，株高达1～2米，茎部有节点，叶互生，对生或螺旋排列，叶鞘显著，叶片椭圆披针形，光滑。其根茎可用作中药材或香辛调料使用。夏季采收，洗净后，鲜用或切片晒干。

蓝姜是无性繁殖作物，性温，喜温暖湿润的环境条件，不耐低温霜冻，终年气温基本在16℃以上的地区方可种植。蓝姜18℃以上开始萌芽，幼苗生长适温26～35℃，18℃以下基本停上生长。姜喜弱光，不耐强光，对日照长短要求不严。蓝姜有着比生姜更为特殊的芳香和辛辣味能刺激胃肠黏膜，使胃肠道充血，消化能力增强，能有效地治疗吃寒凉食物过多而引起的腹胀、腹痛、腹泻、及呕吐。吃过蓝姜后，人会有身体发热的感觉，这是因为它能使血管扩张，血液循环加快，促使身上的毛孔张开。其小姜芽能做菜肴直接食用。不同于传统生姜的土黄色，根茎肉质为宝石蓝色，具解毒杀菌，有特殊的芳香和辛辣味，富含多种珍贵花青苷成分，具有祛风除湿，消肿止痛。主治风湿痹痛，胸腹胀痛，产后腰痛，头风痛，跌打损伤。是药食同源的“菜中之祖”功能食品植物，可作为香料、食品和中药来使用。

蓝姜主要采用块茎进行无性繁殖，不但繁殖系数低，且由于常年无性繁殖导致蓝姜体内病毒大量积累并逐代加重，种性逐渐退化，其中细菌以青枯假单胞杆菌最为严重，该菌极易通过种姜积累传播，诱发姜瘟。姜瘟己成为蓝姜生产发展的制约因素，发病地块一般减产20～30％，重者达50～70％甚至绝收，且降低品质影响销售，对蓝姜种植构成严重的威胁，给生产带来极大的损失。

经文献检索还未见关于蓝姜的组织培养快速繁殖方法的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种蓝姜组培快速繁殖的方法，解决现有技术中存在的蓝姜繁殖系数低、病毒大量积累并逐代加重和种性逐渐退化的问题。

本发明所采用的技术方案是，一种蓝姜组培快速繁殖的方法，包括以下步骤：

步骤1)外植体的选择和消毒：3～4月份，选择块茎肥大，色泽光亮，无腐烂的健壮姜块，洗净后置于23℃～27℃的干净培养箱内催芽，待姜块上新生壮芽粗1cm±0.5cm时，将壮芽取下，用洗洁精刷洗干净，流水冲洗1h，在超净工作台上用75％酒精消毒30s，转入0.1％升汞消毒8～10min，再用无菌水漂洗5次，无菌滤纸吸干水分；切取0.1～0.3cm带芽块茎，以茎尖为中心轻划十字后，分别接种于准备好的培养基上；

步骤2)不定芽诱导：在无菌条件下，将步骤1)处理获得的无菌材料接种于诱导培养基上，15d后块茎开始萌动，30d后形成茎芽丛，平均每个块茎可形成2～3个不定芽；

步骤3)增殖培养，也即继代培养：在无菌条件下，将诱导出的不定芽切去块茎，切分为2～3苗一丛，转接于增殖培养基上，15d后新形成的不定芽从丛芽基部长出，30d达到增殖高峰，高浓度的细胞***素有利于增殖系数的提高，平均每丛芽可形成6～9个不定芽，丛芽生长健壮，叶色深绿；

步骤4)生根培养：在无菌条件下，将增殖培养所得2～3cm分化增殖苗切分为单芽，转接于生根培养基上，20d后见不定根从基部长出，生根率达100％；，幼苗切分时，下刀防止过于靠前；

步骤5)组培苗的驯化与移栽：当瓶苗长出5～6条根，根长2cm时，先进行组培苗驯化，将其移至炼苗地放置3～5天，再将培养瓶封口膜打开，1～2天后把瓶苗取出，洗净小苗基部培养基，移栽于质量比为3:1:1的园土、河沙和珍珠岩基质中，基质用25％多菌灵可湿性粉剂500倍液消毒，并用无菌水浇透，盖上塑料膜保湿；最初两周适当遮阴，注意保持基质湿度，成活率达90％以上。

进一步地，步骤1)～步骤4)中培养条件具体为：基本培养基选用MS培养基，蔗糖浓度3％，琼脂浓度0.6％～0.7％，在培养基pH值均为5.6～6，室温23～27℃，光照强度2000lx，光照时间12h/d条件下培养。

进一步地，所述的培养基pH值为5.8是优先。

进一步地，步骤2)中诱导培养基为MS+1.5mg/LBA(6-苄基腺嘌呤)+0.5mg/LKT(6-糠氨基嘌呤)+0.5mg/LIBA(是吲哚丁酸)。

进一步地，步骤3)中的增殖培养基为MS+3mg/LBA+0.5mg/LIBA。

进一步地，步骤4)中的生根培养基为1/2MS+0.5mg/LIBA。

本发明通过以茎尖为中心轻划十字后，能够提高繁殖系数，减少蓝姜体内病毒的积累，防止种性退化，可以扩大再生产。

1.本发明的培养方法简单易行，成本较低且移栽成活率高，达90％以上。

2.选用蓝姜块茎作为组织培养材料，蓝姜组培苗具有生长快、长势旺、抗病，抗逆性强、品质好、产量高等特性。

附图说明

图1是本发明方法在A阶段初代培养得到新生壮芽的蓝姜状态图。

图2是本发明方法在B阶段不定芽诱导得到不定芽的蓝姜状态图。

图3是本发明方法在C阶段继代培养得到不定芽的蓝姜状态图。

图4是本发明方法在D阶段生根培养得到幼苗的蓝姜状态图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行详细说明。

实施例1

本发明提供一种蓝姜组培快速繁殖的方法，包括以下步骤：

步骤1)外植体的选择和消毒：

3～4月份，选择块茎肥大，色泽光亮，无腐烂的健壮姜块，洗净后置于25±2℃的干净培养箱内催芽，待姜块上新生壮芽粗1cm±0.5cm时，将壮芽取下，用洗洁精刷洗干净，流水冲洗1h，在超净工作台上用75％酒精消毒30s，转入0.1％升汞消毒8～10min，再用无菌水漂洗5次，无菌滤纸吸干水分。切取0.3cm左右带芽块茎，以茎尖为中心轻划十字后，分别接种于准备好的培养基上。

步骤2)不定芽诱导：

在无菌条件下，将步骤1)处理获得的无菌材料接种于诱导培养基上，15d后块茎开始萌动，30d后形成茎芽丛，平均每个块茎可形成2～3个不定芽。诱导培养基为MS+1.5mg/LBA+0.5mg/LKT+0.5mg/LIBA。

步骤3)继代培养(增殖培养)：

在无菌条件下，将诱导出的不定芽切去块茎，切分为2～3苗一丛，转接于增殖培养基上，15d后新形成的不定芽从丛芽基部长出，30d达到增殖高峰，高浓度的细胞***素有利于增殖系数的提高，平均每丛芽可形成6～9个不定芽，丛芽生长健壮，叶色深绿。增殖培养基为MS+3mg/LBA+0.5mg/LIBA。

4)生根培养：

在无菌条件下，将增殖培养所得2～3cm分化增殖苗切分为单芽，转接于生根培养基上，20d后可见不定根从基部长出，生根率达100％。因幼苗较小，尚未形成块茎，幼苗切分时需特别注意，若下刀过于靠前则生长点将被切去，导致小苗无法正常生长；生根培养基为1/2MS+0.5mg/LIBA。

步骤1)～步骤4)中的培养条件为：基本培养基选用MS培养基，蔗糖浓度3％，琼脂浓度0.7％，步骤1)～步骤4)均在培养基pH值均为5.6，室温23℃-27℃，光照强度2000lx，光照时间12h/d条件下培养。

5)组培苗的驯化与移栽：

当瓶苗长出5～6条根，根长2cm左右时，先进行组培苗驯化，将其移至炼苗地放置3～5天，再将培养瓶封口膜打开，1～2天后把瓶苗取出，洗净小苗基部培养基，移栽于质量比为3:1:1的园土、河沙和珍珠岩的基质中，基质用25％多菌灵可湿性粉剂500倍液消毒，并用无菌水浇透，盖上塑料膜保湿。最初两周适当遮阴，注意保持基质湿度，成活率达90％以上。

实施例2

本发明提供一种蓝姜组培快速繁殖的方法，包括以下步骤：

步骤1)外植体的选择和消毒：

3～4月份，选择块茎肥大，色泽光亮，无腐烂的健壮姜块，洗净后置于25±2℃的干净培养箱内催芽，待姜块上新生壮芽粗1cm±0.5cm时，将壮芽取下，用洗洁精刷洗干净，流水冲洗1h左右，在超净工作台上用75％酒精消毒30s，转入0.1％升汞消毒8～10min，再用无菌水漂洗5次，无菌滤纸吸干水分。切取0.1cm左右带芽块茎，以茎尖为中心轻划十字后，分别接种于准备好的培养基上。

步骤2)不定芽诱导：

在无菌条件下，将1)处理获得的无菌材料接种于诱导培养基上，15d后块茎开始萌动，30d后形成茎芽丛，平均每个块茎可形成2～3个不定芽。诱导培养基为MS+1.0mg/LBA+0.1mg/LKT+0.5mg/LIBA。

步骤3)继代培养(增殖培养)：

步骤4)生根培养：

在无菌条件下，将增殖培养所得2～3cm分化增殖苗切分为单芽，转接于生根培养基上，20d后可见不定根从基部长出，生根率达100％。因幼苗较小，尚未形成块茎，幼苗切分时需特别注意，若下刀过于靠前则生长点将被切去，导致小苗无法正常生长；生根培养基为1/2MS+0.3mg/LIBA。

步骤1)～步骤4)中的培养条件为：基本培养基选用MS培养基，蔗糖浓度3％，琼脂浓度0.6％，1)～4)均在培养基pH值为6，室温23℃～27℃，光照强度2000lx，光照时间12h/d条件下培养。

5)组培苗的驯化与移栽：

当瓶苗长出5～6条根，根长2cm时，先进行组培苗驯化，将其移至炼苗地放置3～5天，再将培养瓶封口膜打开，1～2天后把瓶苗取出，洗净小苗基部培养基，移栽于质量比为3:1:1的园土、河沙和珍珠岩的基质中，基质用25％多菌灵可湿性粉剂500倍液消毒，并用无菌水浇透，盖上塑料膜保湿。最初两周适当遮阴，注意保持基质湿度，成活率达85％以上。

Claims

1.一种蓝姜组培快速繁殖的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)外植体的选择和消毒：3～4月份，选择块茎肥大，色泽光亮，无腐烂的健壮姜块，洗净后置于23℃～27℃的干净培养箱内催芽，待姜块上新生壮芽粗1cm±0.5cm时，将壮芽取下，用洗洁精刷洗干净，流水冲洗1h，在超净工作台上用75％酒精消毒30s，转入0.1％升汞消毒8～10min，再用无菌水漂洗5次，无菌滤纸吸干水分；切取01～0.3cm带芽块茎，以茎尖为中心轻划十字后，分别接种于准备好的培养基上；

2)不定芽诱导：在无菌条件下，将步骤1)处理获得的无菌材料接种于诱导培养基上，15d后块茎开始萌动，30d后形成茎芽丛，平均每个块茎可形成2～3个不定芽；

3)增殖培养，也即继代培养：在无菌条件下，将诱导出的不定芽切去块茎，切分为2～3苗一丛，转接于增殖培养基上，15d后新形成的不定芽从丛芽基部长出，30d达到增殖高峰，高浓度的细胞***素有利于增殖系数的提高，平均每丛芽可形成6～9个不定芽，丛芽生长健壮，叶色深绿；

4)生根培养：在无菌条件下，将增殖培养所得2～3cm分化增殖苗切分为单芽，转接于生根培养基上，20d后见不定根从基部长出，生根率达100％；，幼苗切分时，下刀防止过于靠前；

5)组培苗的驯化与移栽：当瓶苗长出5～6条根，根长2cm时，先进行组培苗驯化，将其移至炼苗地放置3～5天，再将培养瓶封口膜打开，1～2天后把瓶苗取出，洗净小苗基部培养基，移栽于质量比为3:1:1的园土、河沙和珍珠岩基质中，基质用25％多菌灵可湿性粉剂500倍液消毒，并用无菌水浇透，盖上塑料膜保湿；前两周适当遮阴，注意保持基质湿度，成活率达90％以上。

2.根据权利要求1所述的蓝姜组培快速繁殖的方法，其特征在于，所述步骤4)中生根培养具体为：基本培养基选用MS培养基，蔗糖浓度3％，琼脂浓度0.6％～0.7％，1～4根均在培养基pH值为5.6～6，室温23～27℃，光照强度2000lx，光照时间12h/d条件下培养。

3.根据权利要求1所述的蓝姜组培快速繁殖的方法，其特征在于，所述步骤2)中诱导培养基为MS+1.0～1.5mg/LBA+0.1～0.5mg/LKT+0.5mg/LIBA。

4.根据权利要求1所述的蓝姜组培快速繁殖的方法，其特征在于，所述增殖培养基为MS+3mg/LBA+0.5mg/LIBA。

5.根据权利要求1所述的蓝姜组培快速繁殖的方法，其特征在于，所述生根培养基为1/2MS+0.3～0.5mg/LIBA。