CN105475135A - 一种蓝姜组培快速繁殖的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种蓝姜组培快速繁殖的方法,包括以下步骤:外植体的选择和消毒,丛生芽诱导,增殖培养,生根培养,组培苗的驯化与移栽;解决了现有技术中存在的蓝姜繁殖系数低、病毒大量积累并逐代加重和种性逐渐退化的问题。本发明的培养方法简单易行,成本较低且移栽成活率高,达85%以上;选用蓝姜芽块茎作为组织培养材料,蓝姜组培苗具有生长快、长势旺、抗病,抗逆性强、品质好、产量高等特性。
Description
技术领域
本发明属于植物培养技术领域,具体涉及一种蓝姜组培快速繁殖的方法。
背景技术
蓝姜系姜科姜黄属植物黑心姜(CurcumacaesiaRoxb.),多年生直立或攀援草本,有时基部木质,株高达1~2米,茎部有节点,叶互生,对生或螺旋排列,叶鞘显著,叶片椭圆披针形,光滑。其根茎可用作中药材或香辛调料使用。夏季采收,洗净后,鲜用或切片晒干。
蓝姜是无性繁殖作物,性温,喜温暖湿润的环境条件,不耐低温霜冻,终年气温基本在16℃以上的地区方可种植。蓝姜18℃以上开始萌芽,幼苗生长适温26~35℃,18℃以下基本停上生长。姜喜弱光,不耐强光,对日照长短要求不严。蓝姜有着比生姜更为特殊的芳香和辛辣味能刺激胃肠黏膜,使胃肠道充血,消化能力增强,能有效地治疗吃寒凉食物过多而引起的腹胀、腹痛、腹泻、及呕吐。吃过蓝姜后,人会有身体发热的感觉,这是因为它能使血管扩张,血液循环加快,促使身上的毛孔张开。其小姜芽能做菜肴直接食用。不同于传统生姜的土黄色,根茎肉质为宝石蓝色,具解毒杀菌,有特殊的芳香和辛辣味,富含多种珍贵花青苷成分,具有祛风除湿,消肿止痛。主治风湿痹痛,胸腹胀痛,产后腰痛,头风痛,跌打损伤。是药食同源的“菜中之祖”功能食品植物,可作为香料、食品和中药来使用。
蓝姜主要采用块茎进行无性繁殖,不但繁殖系数低,且由于常年无性繁殖导致蓝姜体内病毒大量积累并逐代加重,种性逐渐退化,其中细菌以青枯假单胞杆菌最为严重,该菌极易通过种姜积累传播,诱发姜瘟。姜瘟己成为蓝姜生产发展的制约因素,发病地块一般减产20~30%,重者达50~70%甚至绝收,且降低品质影响销售,对蓝姜种植构成严重的威胁,给生产带来极大的损失。
经文献检索还未见关于蓝姜的组织培养快速繁殖方法的报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种蓝姜组培快速繁殖的方法,解决现有技术中存在的蓝姜繁殖系数低、病毒大量积累并逐代加重和种性逐渐退化的问题。
本发明所采用的技术方案是,一种蓝姜组培快速繁殖的方法,包括以下步骤:
步骤1)外植体的选择和消毒:3~4月份,选择块茎肥大,色泽光亮,无腐烂的健壮姜块,洗净后置于23℃~27℃的干净培养箱内催芽,待姜块上新生壮芽粗1cm±0.5cm时,将壮芽取下,用洗洁精刷洗干净,流水冲洗1h,在超净工作台上用75%酒精消毒30s,转入0.1%升汞消毒8~10min,再用无菌水漂洗5次,无菌滤纸吸干水分;切取0.1~0.3cm带芽块茎,以茎尖为中心轻划十字后,分别接种于准备好的培养基上;
步骤2)不定芽诱导:在无菌条件下,将步骤1)处理获得的无菌材料接种于诱导培养基上,15d后块茎开始萌动,30d后形成茎芽丛,平均每个块茎可形成2~3个不定芽;
步骤3)增殖培养,也即继代培养:在无菌条件下,将诱导出的不定芽切去块茎,切分为2~3苗一丛,转接于增殖培养基上,15d后新形成的不定芽从丛芽基部长出,30d达到增殖高峰,高浓度的细胞***素有利于增殖系数的提高,平均每丛芽可形成6~9个不定芽,丛芽生长健壮,叶色深绿;
步骤4)生根培养:在无菌条件下,将增殖培养所得2~3cm分化增殖苗切分为单芽,转接于生根培养基上,20d后见不定根从基部长出,生根率达100%;,幼苗切分时,下刀防止过于靠前;
步骤5)组培苗的驯化与移栽:当瓶苗长出5~6条根,根长2cm时,先进行组培苗驯化,将其移至炼苗地放置3~5天,再将培养瓶封口膜打开,1~2天后把瓶苗取出,洗净小苗基部培养基,移栽于质量比为3:1:1的园土、河沙和珍珠岩基质中,基质用25%多菌灵可湿性粉剂500倍液消毒,并用无菌水浇透,盖上塑料膜保湿;最初两周适当遮阴,注意保持基质湿度,成活率达90%以上。
进一步地,步骤1)~步骤4)中培养条件具体为:基本培养基选用MS培养基,蔗糖浓度3%,琼脂浓度0.6%~0.7%,在培养基pH值均为5.6~6,室温23~27℃,光照强度2000lx,光照时间12h/d条件下培养。
进一步地,所述的培养基pH值为5.8是优先。
进一步地,步骤2)中诱导培养基为MS+1.5mg/LBA(6-苄基腺嘌呤)+0.5mg/LKT(6-糠氨基嘌呤)+0.5mg/LIBA(是吲哚丁酸)。
进一步地,步骤3)中的增殖培养基为MS+3mg/LBA+0.5mg/LIBA。
进一步地,步骤4)中的生根培养基为1/2MS+0.5mg/LIBA。
本发明通过以茎尖为中心轻划十字后,能够提高繁殖系数,减少蓝姜体内病毒的积累,防止种性退化,可以扩大再生产。
1.本发明的培养方法简单易行,成本较低且移栽成活率高,达90%以上。
2.选用蓝姜块茎作为组织培养材料,蓝姜组培苗具有生长快、长势旺、抗病,抗逆性强、品质好、产量高等特性。
附图说明
图1是本发明方法在A阶段初代培养得到新生壮芽的蓝姜状态图。
图2是本发明方法在B阶段不定芽诱导得到不定芽的蓝姜状态图。
图3是本发明方法在C阶段继代培养得到不定芽的蓝姜状态图。
图4是本发明方法在D阶段生根培养得到幼苗的蓝姜状态图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行详细说明。
实施例1
本发明提供一种蓝姜组培快速繁殖的方法,包括以下步骤:
步骤1)外植体的选择和消毒:
3~4月份,选择块茎肥大,色泽光亮,无腐烂的健壮姜块,洗净后置于25±2℃的干净培养箱内催芽,待姜块上新生壮芽粗1cm±0.5cm时,将壮芽取下,用洗洁精刷洗干净,流水冲洗1h,在超净工作台上用75%酒精消毒30s,转入0.1%升汞消毒8~10min,再用无菌水漂洗5次,无菌滤纸吸干水分。切取0.3cm左右带芽块茎,以茎尖为中心轻划十字后,分别接种于准备好的培养基上。
步骤2)不定芽诱导:
在无菌条件下,将步骤1)处理获得的无菌材料接种于诱导培养基上,15d后块茎开始萌动,30d后形成茎芽丛,平均每个块茎可形成2~3个不定芽。诱导培养基为MS+1.5mg/LBA+0.5mg/LKT+0.5mg/LIBA。
步骤3)继代培养(增殖培养):
在无菌条件下,将诱导出的不定芽切去块茎,切分为2~3苗一丛,转接于增殖培养基上,15d后新形成的不定芽从丛芽基部长出,30d达到增殖高峰,高浓度的细胞***素有利于增殖系数的提高,平均每丛芽可形成6~9个不定芽,丛芽生长健壮,叶色深绿。增殖培养基为MS+3mg/LBA+0.5mg/LIBA。
4)生根培养:
在无菌条件下,将增殖培养所得2~3cm分化增殖苗切分为单芽,转接于生根培养基上,20d后可见不定根从基部长出,生根率达100%。因幼苗较小,尚未形成块茎,幼苗切分时需特别注意,若下刀过于靠前则生长点将被切去,导致小苗无法正常生长;生根培养基为1/2MS+0.5mg/LIBA。
步骤1)~步骤4)中的培养条件为:基本培养基选用MS培养基,蔗糖浓度3%,琼脂浓度0.7%,步骤1)~步骤4)均在培养基pH值均为5.6,室温23℃-27℃,光照强度2000lx,光照时间12h/d条件下培养。
5)组培苗的驯化与移栽:
当瓶苗长出5~6条根,根长2cm左右时,先进行组培苗驯化,将其移至炼苗地放置3~5天,再将培养瓶封口膜打开,1~2天后把瓶苗取出,洗净小苗基部培养基,移栽于质量比为3:1:1的园土、河沙和珍珠岩的基质中,基质用25%多菌灵可湿性粉剂500倍液消毒,并用无菌水浇透,盖上塑料膜保湿。最初两周适当遮阴,注意保持基质湿度,成活率达90%以上。
实施例2
本发明提供一种蓝姜组培快速繁殖的方法,包括以下步骤:
步骤1)外植体的选择和消毒:
3~4月份,选择块茎肥大,色泽光亮,无腐烂的健壮姜块,洗净后置于25±2℃的干净培养箱内催芽,待姜块上新生壮芽粗1cm±0.5cm时,将壮芽取下,用洗洁精刷洗干净,流水冲洗1h左右,在超净工作台上用75%酒精消毒30s,转入0.1%升汞消毒8~10min,再用无菌水漂洗5次,无菌滤纸吸干水分。切取0.1cm左右带芽块茎,以茎尖为中心轻划十字后,分别接种于准备好的培养基上。
步骤2)不定芽诱导:
在无菌条件下,将1)处理获得的无菌材料接种于诱导培养基上,15d后块茎开始萌动,30d后形成茎芽丛,平均每个块茎可形成2~3个不定芽。诱导培养基为MS+1.0mg/LBA+0.1mg/LKT+0.5mg/LIBA。
步骤3)继代培养(增殖培养):
在无菌条件下,将诱导出的不定芽切去块茎,切分为2~3苗一丛,转接于增殖培养基上,15d后新形成的不定芽从丛芽基部长出,30d达到增殖高峰,高浓度的细胞***素有利于增殖系数的提高,平均每丛芽可形成6~9个不定芽,丛芽生长健壮,叶色深绿。增殖培养基为MS+3mg/LBA+0.5mg/LIBA。
步骤4)生根培养:
在无菌条件下,将增殖培养所得2~3cm分化增殖苗切分为单芽,转接于生根培养基上,20d后可见不定根从基部长出,生根率达100%。因幼苗较小,尚未形成块茎,幼苗切分时需特别注意,若下刀过于靠前则生长点将被切去,导致小苗无法正常生长;生根培养基为1/2MS+0.3mg/LIBA。
步骤1)~步骤4)中的培养条件为:基本培养基选用MS培养基,蔗糖浓度3%,琼脂浓度0.6%,1)~4)均在培养基pH值为6,室温23℃~27℃,光照强度2000lx,光照时间12h/d条件下培养。
5)组培苗的驯化与移栽:
当瓶苗长出5~6条根,根长2cm时,先进行组培苗驯化,将其移至炼苗地放置3~5天,再将培养瓶封口膜打开,1~2天后把瓶苗取出,洗净小苗基部培养基,移栽于质量比为3:1:1的园土、河沙和珍珠岩的基质中,基质用25%多菌灵可湿性粉剂500倍液消毒,并用无菌水浇透,盖上塑料膜保湿。最初两周适当遮阴,注意保持基质湿度,成活率达85%以上。
Claims (5)
1.一种蓝姜组培快速繁殖的方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)外植体的选择和消毒:3~4月份,选择块茎肥大,色泽光亮,无腐烂的健壮姜块,洗净后置于23℃~27℃的干净培养箱内催芽,待姜块上新生壮芽粗1cm±0.5cm时,将壮芽取下,用洗洁精刷洗干净,流水冲洗1h,在超净工作台上用75%酒精消毒30s,转入0.1%升汞消毒8~10min,再用无菌水漂洗5次,无菌滤纸吸干水分;切取01~0.3cm带芽块茎,以茎尖为中心轻划十字后,分别接种于准备好的培养基上;
2)不定芽诱导:在无菌条件下,将步骤1)处理获得的无菌材料接种于诱导培养基上,15d后块茎开始萌动,30d后形成茎芽丛,平均每个块茎可形成2~3个不定芽;
3)增殖培养,也即继代培养:在无菌条件下,将诱导出的不定芽切去块茎,切分为2~3苗一丛,转接于增殖培养基上,15d后新形成的不定芽从丛芽基部长出,30d达到增殖高峰,高浓度的细胞***素有利于增殖系数的提高,平均每丛芽可形成6~9个不定芽,丛芽生长健壮,叶色深绿;
4)生根培养:在无菌条件下,将增殖培养所得2~3cm分化增殖苗切分为单芽,转接于生根培养基上,20d后见不定根从基部长出,生根率达100%;,幼苗切分时,下刀防止过于靠前;
5)组培苗的驯化与移栽:当瓶苗长出5~6条根,根长2cm时,先进行组培苗驯化,将其移至炼苗地放置3~5天,再将培养瓶封口膜打开,1~2天后把瓶苗取出,洗净小苗基部培养基,移栽于质量比为3:1:1的园土、河沙和珍珠岩基质中,基质用25%多菌灵可湿性粉剂500倍液消毒,并用无菌水浇透,盖上塑料膜保湿;前两周适当遮阴,注意保持基质湿度,成活率达90%以上。
2.根据权利要求1所述的蓝姜组培快速繁殖的方法,其特征在于,所述步骤4)中生根培养具体为:基本培养基选用MS培养基,蔗糖浓度3%,琼脂浓度0.6%~0.7%,1~4根均在培养基pH值为5.6~6,室温23~27℃,光照强度2000lx,光照时间12h/d条件下培养。
3.根据权利要求1所述的蓝姜组培快速繁殖的方法,其特征在于,所述步骤2)中诱导培养基为MS+1.0~1.5mg/LBA+0.1~0.5mg/LKT+0.5mg/LIBA。
4.根据权利要求1所述的蓝姜组培快速繁殖的方法,其特征在于,所述增殖培养基为MS+3mg/LBA+0.5mg/LIBA。
5.根据权利要求1所述的蓝姜组培快速繁殖的方法,其特征在于,所述生根培养基为1/2MS+0.3~0.5mg/LIBA。
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