CN102971327B - 具有多种酪氨酸激酶抑制活性的抗炎化合物以及含有这些化合物的药物组成物 - Google Patents

具有多种酪氨酸激酶抑制活性的抗炎化合物以及含有这些化合物的药物组成物 Download PDF

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Abstract

本发明是针对对蛋白质酪氨酸激酶有抑制活性的抗炎化合物和其药理组成，其药理成分含有作为活性成分的化合物。由于本发明的化合物可以抑制与炎症性疾病及免疫***疾病的多个相关联的蛋白激酶，所以对于它们的预防或治疗是有用的。

Description

具有多种酪氨酸激酶抑制活性的抗炎化合物以及含有这些化合物的药物组成物
技术领域
本发明描述了一系列以羟基（或甲基）苯胺基噻吩嘧啶和羟基（或甲基）苯胺基噻吩吡啶啉啶作为共同的药效基团，并具有多种酪氨酸激酶抑制活性的化合物及以这些化合物作为有效成分的药物组成物。上述药物组成物可用于阻止或治疗各种炎症疾病及免疫失调，也可用于促进创伤修复和抑制伤疤形成。
背景技术
炎症反应主要是由于炎性免疫细胞的活化。在各种炎症性疾病中，常可以发现活化的炎性免疫细胞影响邻近的纤维细胞、上皮细胞或平滑肌细胞而被活化为类成肌细胞（myoblast）.当纤维细胞，表皮细胞或平滑肌细胞被活化为类成肌细胞，就会表现出增加了的增殖和迁移能力，进而分泌出大量的细胞外基质蛋白，例如纤维胶原蛋白，最终导致组织纤维化和增生。一旦这种现象发生在组织损伤后的创伤修复过程中，纤维化区域就会产生疤痕。
最近的研究结果认为，炎症性免疫细胞的活化和炎症部位活化了的纤维细胞、表皮细胞或平滑肌细胞的共同作用对各种炎症疾病的病理性现象的贡献被认为很重要。
这种现象的一个代表性例子是，我们身体的组织由于外部物理冲击或内部的持续性发炎等原因受到损伤而发生的伤口愈合过程。组织损伤后，炎性免疫细胞如巨噬细胞,中性粒细胞,嗜酸性粒细胞,肥大细胞快速渗透到损伤部位受激活，分泌出各种细胞因子，进而激活邻近的成纤维细胞、上皮细胞或平滑肌细胞使之活化为类成肌细胞（myoblast）。这些成肌细胞合成并分泌出大量的细胞外基质蛋白，导致疤痕形成、组织纤维化和增生。(GurtnerGCetal.,TrendsCellBiol.15:599-607,2005),这个病理机制是皮肤创伤的疤痕行程和肺、肾、血管等组织纤维化的基本原因。此外，甚至在过敏性皮炎、哮喘、慢性呼吸道疾病、牛皮癣、肥大型疤痕瘤、增殖性视网膜病变等疾病中，炎症性免疫细胞和成纤维细胞等纤维化细胞、上皮细胞或平滑肌细胞的协同活化，与上述细胞共同的促进病理的发生。
例如，过敏性皮肤炎是一种过敏性的炎症反应，涉及2型辅助T细胞途径的过量激活。在过敏性皮肤炎中，血液中的IgE水平增加，细胞因子如IL-4和IL-13也上升，表皮中的水含量下降，过量的肥大细胞被征集到炎症部位，通过脱粒分泌大量的肥大细胞。有趣的是，胶原蛋白在皮肤中的积累也看在过敏性皮肤炎中发现。在另外的皮肤炎症疾病牛皮癣和增生性疤痕中，角化细胞的激活也牵涉到组织的纤维化进程中，伴随着炎症细胞的浸入和激活。
哮喘是一种过敏性的炎症反应，与过敏性皮肤炎相似的气管疾病。近来，已知胸部成纤维细胞、上皮细胞和平滑肌细胞等的激活都有助于胸部器官的炎症疾病，如哮喘和慢性呼吸道疾病。在动脉粥样硬化、肝纤维化、肾纤维化和增殖性视网膜病变中，平滑肌细胞，肝星状细胞、肾成纤维细胞、***、视网膜成纤维细胞的分别被激活，伴随着炎性免疫细胞如巨噬细胞的激活，他们都在炎症疾病的病理中起重要的作用。
当炎症免疫细胞被激活后，增加的迁移和各种免疫调节化学物质的分泌通常可以被观察到。例如，巨噬细胞的激活增加了他们的因化学趋势因子所诱导的组织侵染活性，iNOS（诱导性一氧化氮合酶）的表达和NO（一氧化氮）的合成。此外，细胞因子如TNF-α合成的增加尤其可以观察到。一个很显著的特征是α平滑肌肌动蛋白的增加表达，当成纤维细胞、上皮细胞或平滑肌细胞被活化成类肌原细胞。此外，FAK和Akt1的细胞活性也增加了，这直接有助于细胞增殖和迁移的增加。
我们，发明人注意到炎性免疫细胞和邻近的成纤维细胞、上皮细胞或平滑肌细胞的协同激活，可以发生在各种疑难免疫疾病中。因此，我们打算开发可以潜在抑制免疫细胞的激活，和成纤维细胞、上皮细胞或平滑肌细胞激活为肌原细胞的化合物，从而抑制和治愈各种疑难炎症疾病或免疫失调。为了得到目标，发明者打算开发小分子量化合物，强烈抑制牵涉炎症免疫细胞、成纤维细胞、上皮细胞或平滑肌细胞的活化的细胞信号路径中的蛋白酶活性。
尤其是c-Src家族酪氨酸激酶可以被考虑作为这一目标的靶标，因为他们在激活各种炎症免疫细胞信号通路中扮演了很重要的角色。此外，圆盘状受体（DDR）酪氨酸激酶对于成纤维细胞、上皮细胞或平滑肌细胞活化后增加了的增殖和细胞外基质蛋白的分泌是很重要的。
因此，该发明的发明者提供了可以同时抑制c-Src酪氨酸激酶家族和DDR家族的小分子抑制剂。
蛋白质激酶是指催化蛋白质磷酸化反应的酶。它能把腺苷三磷酸（ATP）上的γ-磷酸转移到专门的底物蛋白质分子的酪氨酸、丝氨酸或者苏氨酸残基上。将磷酸基团转移到酪氨酸上形成磷酸酪氨酸的激酶成为蛋白质酪氨酸激酶。在脊椎动物细胞中，超过500种蛋白激酶被发现。其中一个重要角色是在信号转导路径中响应内外刺激，他们的调节活性对于维持细胞的稳态是必须的。但是，它们的过度表达、过度激活或是活性下降都直接或间接与各种疾病如癌症和免疫失调有关。例如，在癌和免疫细胞中，某种蛋白激酶的异常过度活化被证实为不正常过度增殖、迁移、转移和细胞因子的过度产生的一个主要原因。
一些蛋白质酪氨酸激酶被认为直接涉及到激活炎症免疫细胞和炎症反应的细胞信号中。其中，Src酪氨酸激酶家族是研究最为广泛的激酶之一。
Src酪氨酸激酶家族由八种非受体酪氨酸激酶组成，包括Fgr,Fyn,Yes,Blk,Hck,Lck,Lyn和c-Src。它们在体内的多种功能已经被阐明，尤其是在免疫细胞执行免疫响应的重要角色已被证实（Okutanietal.,AmJPhysiolLungCellMoIPhysiol.291:129-141,2006）。该家族蛋白中，Hck,Fgr和Lyn在免疫细胞如巨噬细胞和中性粒细胞的激活和炎症位置中的黏着起重要作用。Lck被认为主要在T细胞中表达，在T细胞信号通路中被T细胞受体所激活，对于受体的信号传导起决定性作用。此外，当单核细胞和巨噬细胞被LPS（脂多糖）所激活时，Hck,Lyn和Fgr的表达会增加。另外，当Lyn,Fyn,Blk的表达被抑制时，从未成熟B细胞到成熟B细胞的分化也会被抑制。Src酪氨酸激酶对于单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞在炎症部位的积累和激活以及炎症反应的参与也是比不可少的。许多自免疫和免疫疾病的情况都与免疫细胞如T细胞、B细胞、单核细胞和巨噬细胞有关。除此外，其他的非受体酪氨酸激酶对于免疫细胞的激活也是重要的。Syk1激酶对于B细胞、肥大细胞、巨噬细胞和单核细胞的激活很重要的，而Btk1与巨噬细胞、肥大细胞和和血小板细胞的激活有关。因此，这些c-Src家族非受体酪氨酸激酶、Syk1、Btk1被认为是开发抑制炎症反应药物的主要靶标。
圆盘状受体家族(DDR)属于受体酪氨酸激酶家族，由1型和2型组成，激酶区域有89%的同源性，以胶原蛋白为激活配体。DDR2对于细胞迁移、增殖和纤维细胞激活后胶原蛋白的分泌是重要的。DDR2在肝硬化中可产生过量的胶原蛋白的肝星形细胞的激活，和关节炎中关节组织中的滑液成纤维细胞的激活，以及在术后再狭窄和动脉粥样硬化中血管壁的平滑肌细胞的激活也很重要。DDR1对于血管平滑肌细胞的增殖也是重要的，与肾与肺中纤维细胞过量激活引起的组织纤维化有关。此外，它在动脉粥样硬化、肾纤维化和肺纤维化中，巨噬细胞在炎性部位的积累也扮演重要的角色。
我们发明者合成的小分子化合物具有噻吩嘧啶和噻吩吡啶啉作为药效基团，并在该药效基团附近有专门的取代基团，可同时抑制c-Src酪氨酸激酶家族和圆盘状受体酪氨酸激酶家族。此外，我们证实了这些化合物可以c-Src酪氨酸激酶家族活性，对于免疫细胞的激活是重要的；同时也可抑制圆盘状受体酪氨酸激酶，这与成纤维细胞和平滑肌细胞的激活有关。因此，我成功的完成了当前的发明，证实了这些化合物对于治愈各种炎症疾病和免疫失调以及促进伤口修复和伤疤形成都是有用的。
发明内容
技术问题
本发明目的是，提供可同时抑制c-Src酪氨酸激酶家族和圆盘状受体酪氨酸激酶家族的活性的新化合物以及可接受的有药理活性的异构体或其盐。
本发明的另一目的是，提供含有上述化合物或可接受的有药理活性的异构体以及其盐的制药成分，用于阻止和治疗炎症疾病、免疫失调或伤口愈合反应中的疤痕形成。
本发明的另一目的是，提供治疗方法包括上述化合物或可接受的有药理活性的且有疗效的剂量的异构体以及其盐的输送方法，从而治疗炎症疾病和免疫失调。
本发明的另一目的是，提供抑制疤痕形成或促进伤口修复的方法，包括上述化合物或可接受的有药理活性的且有疗效的剂量的异构体以及其盐的输送方法。
技术方案
为了达到本发明的目标，本发明提供的化合物表示为化学式（1）以及其异构体或药理学上可接受的盐类。此外，本发明提供了上面提到的化合物的及其异构体或药理学上可接受的盐类的使用剂量。达到预防或治疗炎症性疾病、免疫紊乱、促进伤口愈合和/或抑制瘢痕形成的目的。
[化学式1]
上式中，X1是N或CH;
R1是-OH,或-OCH3;
Y是由R2取代的C6-10-芳基，或R2取代的C5-10杂芳基或N-甲基哌嗪基。
上式中，R2是-(CH2)n-R3,-(CH2)n-C(O)-R3,或-O(CH2)n-R3;
R3是-H,-CN,卤素,C1-3烷基,C1-3烷氧基，苯基，吡啶基，氨基，C1-3烷基氨基，C1-3二烷基氨基，羟基-C1-3烷基氨基，羧基C1-3烷基氨基，C3-6环烷基，C1-3的烷基氨基，吡咯烷，羟基吡咯烷，羟基C1-3烷基吡咯烷酮，羧基吡咯烷，哌啶基，C1-3烷基哌啶基，C1-3二烷基哌啶基，哌嗪基，C1-3哌嗪基，C1-4烷氧基羧基哌嗪基或吗啉基；n是=0～3的整数。
本发明的优选方案是上述所提及的R3是-H，-CN，卤素，C1-3烷基，C1-3烷氧基，苯基，吡啶基，氨基，乙氨基，二乙基氨基，吡咯烷，哌啶基，哌嗪基，吗啉基或如下所示的结构式。
有益效果
本发明的化合物、同分异构体及其药学上可接受的盐，可同时抑制c-Src的家族酪氨酸激酶和盘状结构域受体家族酪氨酸激酶，从而被有效的用于阻止和治疗各种炎症性疾病和免疫性疾病，特别是伴随组织纤维化的炎症性疾病，也可以被用于促进皮肤伤口的愈合和抑制瘢痕的形成。
附图说明
图1所示为本发明中所用化合物对于激活的巨噬细胞产生NO和免疫细胞因子的抑制作用。
图2为免疫印迹图，所示为本发明化合物对活化巨噬细胞产生的iNOS和COX-2的抑制效应。
图3所示为本发明化合物对活化的巨噬细胞的迁移的抑制效果。
图4所示为本发明化合物对经IgE活化了的肥大细胞脱粒的抑制效果。
图5所示为本发明化合物对经IgE活化了的肥大细胞所产生的TNF-α和IL-4的抑制效果。
图6所示为该化合物在过敏性皮炎动物模型水分损失（TEWL）的抑制作用。
图7所示为本发明化合物在过敏性皮炎动物模型血清中增加的IgE水平的抑制作用。
图8所示为本发明化合物在过敏性皮炎动物模型中皮炎部位增厚的表皮的抑制作用。
图9所示为本发明化合物在过敏性皮炎动物模型中皮炎部位增加的肥大细胞数目的抑制作用。
图10所示为本发明化合物在创伤修复动物模型中皮肤伤口愈合的促进作用。
图11所示为本发明化合物在创伤修复动物模型中皮肤愈合后的疤痕增生指数（SEI）的抑制作用。
图12所示为本发明化合物在创伤修复动物模型中巨噬细胞和成肌细胞数目的抑制作用。
图13所示为本发明化合物在哮喘动物模型中气道高反应性的改善作用。
图14所示为本发明化合物在哮喘动物模型中气道ROS生成的抑制作用。
图15所示为本发明化合物在哮喘动物模型中肺部组织中嗜酸性粒细胞数目、免疫调节子、嗜酸细胞趋化因子的抑制作用。
图16所示为本发明化合物在哮喘动物模型中肺部组织中积累的粘蛋白的抑制作用，借助组织学评估和免疫组化手段。
具体实施方式
在详细描述本发明之前，我们发明者先定义了下列术语。
术语“Src”代表Src蛋白酪氨酸激酶，可在各种细胞和巨噬细胞中诱导表达。巨噬细胞经LPS处理后，Src与炎症基因例如TNF-alpha的诱导表达等细胞信号转导有关。
术语"Yes"是Src酪氨酸激酶家族的一种，可以在各种细胞中表达。Yes与免疫细胞和炎症细胞中的细胞信号路径有关。
术语"Fyn"是Src酪氨酸激酶家族的一种，可以在T细胞、B细胞、NK细胞和肥大细胞中表达。与T细胞受体介导的信号路径和细胞黏着有关，也在肥大细胞的脱粒和细胞因子的合成中期重要作用。
术语“lck”是Src酪氨酸激酶家族的一种，可以在T细胞和NK细胞中表达，在T细胞的激活和分化中扮演中心角色。
术语“Lyn”是Src酪氨酸激酶家族的一种，在T细胞、B细胞、NK细胞、中性粒细胞、嗜酸性红细胞、巨噬细胞、单核细胞、肥大细胞和树突细胞中广泛表达，可以调节B细胞活性。
术语“Hck”是Src酪氨酸激酶家族的一种，可以在中性粒细胞、嗜酸性红细胞、巨噬细胞、单核细胞和树突细胞中表达，介导这些细胞的增殖、分化和迁移的细胞信号转导。
术语“Fgr”是Src酪氨酸激酶家族的一种，可以在中性粒细胞、嗜酸性红细胞、巨噬细胞、单核细胞和树突细胞中表达，与B细胞受体、FcR受体和整合蛋白家族有关。
术语“Syk1″是Src酪氨酸激酶家族的一种，在T细胞、B细胞、肥大细胞、巨噬细胞、单核细胞和成纤维细胞、上皮细胞、干细胞、神经元细胞、内皮细胞中广泛表达。是Src蛋白酪氨酸激酶的下游信号，在FcR受体的细胞信号转导中有重要作用。因此，它被认为是炎症疾病的重要靶标之一。
术语“Btk1″是Tec酪氨酸激酶家族的一种，在血液细胞如B细胞、肥大细胞和巨噬细胞中广泛表达。已经知道在B细胞的增殖和分化和细胞信号转导中有重要作用，从而激活肥大细胞、巨噬细胞、血小板细胞和成骨细胞。
术语“VEGFR2”是VEGFR酪氨酸激酶家族的一种，为VEGF-A的主要受体。该受体在血管内皮细胞自前体中胚层细胞的分化中有重要的作用，从而对血管生成的信号转导也是重要的。失控的血管再生和炎症反应都有助于如糖尿病性视网膜病或风湿病的发生。因为在癌症和炎症疾病中不受控制或过度的血管再生是很严重的问题，所以抑制该受体成为一个很重要的治疗靶标。
术语“圆盘状受体(DDR)酪氨酸激酶”包含两种类型DDR1和DDR2。它们以胶原蛋白作为配体，配体结合导致自磷酸化而激活。DDR1的激活与巨噬细胞的分化、上皮细胞和平滑肌细胞的激活有关。DDR2与成纤维细胞、肝星形细胞、软骨细胞和平滑肌细胞的激活有关。
本发明的详细说明见下文。
本发明提供的化合物见结构式1，还有其异构体或药学上可接受的盐类。
此外，本发明提供了包含该化合物的药学成分，见结构式1，其异构体或药学上可接受的盐类可作为预防和治疗炎症疾病和免疫失调以及促进伤口愈合和抑制疤痕形成的有效成分。
[化学式1]
上式中，X1是N或CH;
R1是-OH,或-OCH3;
Y是由R2取代的C6-10-芳基，或R2取代的C5-10杂芳基或N-甲基哌嗪基。
上式中，R2是-(CH2)n-R3,-(CH2)n-C(O)-R3,或-O(CH2)n-R3;
R3是-H,-CN,卤素,C1-3烷基,C1-3烷氧基，苯基，吡啶基，氨基，C1-3烷基氨基，C1-3二烷基氨基，羟基-C1-3烷基氨基，羧基C1-3烷基氨基，C3-6环烷基，C1-3的烷基氨基，吡咯烷，羟基吡咯烷，羟基C1-3烷基吡咯烷酮，羧基吡咯烷，哌啶基，C1-3烷基哌啶基，C1-3二烷基哌啶基，哌嗪基，C1-3哌嗪基，C1-4烷氧基羧基哌嗪基或吗啉基；n是=0～3的整数。
本发明的优选方案是上述所提及的R3是-H，-CN，卤素，C1-3烷基，C1-3烷氧基，苯基，吡啶基，氨基，乙氨基，二乙基氨基，吡咯烷，哌啶基，哌嗪基，吗啉基或如下所示的结构式。
此外，本发明中化学式1代表的化合物可以被配制为药理学上可接受的盐，这些药理学上可接受的盐含有可配制成无毒的酸式盐，包括药理学上可接受的阴离子的酸式盐。例如，无机酸，如盐酸，H2SO4、HNO3，H2PO4，HBr和HI；有机羧酸，如酒石酸，甲酸，柠檬酸，乙酸，三氯乙酸，三氟乙酸，葡萄糖醛酸，苯甲酸，乳酸，富马酸酸和马来酸；酸式盐，如甲磺酸，苯磺酸，对甲苯磺酸或萘磺酸。本发明优选药理学上可接受的、可使用HCl或三氟乙酸配制的盐。
在式1表示的化合物中有代表性的化合物如下列出。在括号中的名称作为代码名称用于区分本发明中的化合物。
3-(6-(苯基噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0008),
4-(4-(3-甲氧基苯基氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶-6-基)苯甲腈(LCB03-0009),
4-(4-(3-羟基苯基氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶-6-基)苯甲腈(LCB03-0013),
3-(6-溴代-噻吩[3,2-d]嘧啶-4-n基氨基)-苯酚(LCB03-0015),
4-(4-(3-甲氧基苯基氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶-6-基)苯酚(LCB03-0016),
3-[6-(4-甲氧基苯基)-噻吩[3,2-d]嘧啶-4-n基氨基]-苯酚(LCB03-0017),
N-(3-甲氧基苯基)-6-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-胺(LCB03-0018),
3-(6-(4-氯苯基l)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0019),
3-(6-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0020),
N-(3-甲氧基苯基)-6-(4-苯乙氧苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-胺(LCB03-0021),
N-(3-甲氧基苯基)-6-(4-(2-(嘧啶-2-基)乙氧基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-胺(LCB03-0022),
(6-呋喃-2-基-噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基)-(3-甲氧基苯酚)-胺(LCB03-0023),
(6-呋喃-3-基-噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基)-(3-甲氧基苯酚)-胺(LCB03-0024),
N-(3-甲氧基苯基)-6-(4-(2-(噻吩-1-基)乙氧基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-胺(LCB03-0026),
N-(3-甲氧基苯基)-6-(噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-胺(LCB03-0027),
(3-甲氧基苯基)-(6-噻吩-3-基-噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基)-胺(LCB03-0028),
N-(3-甲氧基苯基)-6-(4-(2-(哌嗪-1-基)乙氧基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-胺(LCB03-0029),
(3-甲氧基苯基)-(6-噻吩-2-基-噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基)-胺(LCB03-0030),
3-(6-噻吩-3-基-噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)-苯酚(LCB03-0031),
3-((6-(4-(吗啉代甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0032),
3-((6-(4-(哌嗪-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0033),
3-(6-(4-(噻吩-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0034),
3-((6-(4-(哌啶-基甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0035),
3-((6-(4-((4-甲基哌嗪-1-基-甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0036),
3-((6-(4-((二乙基氨基)甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0037),
3-(6-(呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0038),
3-(6-(呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0039),
3-(6-(4-((环丙基甲基氨基)甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0040),
3-((6-(4-((异丁基氨基)甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0041),
3-((6-(4-((乙基氨基)甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0042),
3-((6-(4-(2-(噻吩-1-基)乙基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0043),
3-((6-(4-(2-(哌啶-1-基)乙基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0044),
3-((6-(4-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0045),
3-(6-(4-(2-吗啉代乙基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0046),
2-(4-(4-(3-羟基苯基氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶-6-基)苯基)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酰基(LCB03-0047),
2-(4-(4-(3-羟基苯基氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶-6-基)苯基)-1-(噻吩-1-基)乙酰基(LCB03-0049),
N,N-二乙基-2-(4-(4-(3-羟基苯基氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶-6-基)苯基)乙酰胺(LCB03-0050),
3-(4-(3-羟基苯基氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶-6-基)苯甲酸(LCB03-0051)
(4-(4-(3-羟基苯基氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶-6-基)苯基)(4-甲基哌嗪-1-基)m乙酰基(LCB03-0052),
(3-(4-(3-羟基苯基氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶-6-基)苯基(噻吩-1-基)m乙酰基(LCB03-0053),
N,N-二乙基-3-(4-(3-羟基苯基氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶-6-基)苯甲酰胺(LCB03-0054),
(3-(4-(3-羟基苯基氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶-6-基)苯基(4-甲基哌嗪-1-基)m乙酰基(LCB03-0055),
甲基1-(4-(4-(3-羟基苯基氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶-6-基)苯甲基)噻吩-2-羧酸盐(LCB03-0056),
3-(6-(4-((2-(羟基甲基)噻吩-1-基)甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0057),
3-(6-(4-((4-甲基哌啶-1-基)甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0058),
3-(6-(4-(((2R,6S)-2,6-di甲基哌啶-1-基)甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0059),
3-(6-(3-(哌啶-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0060),
3-(6-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0061),
3-(6-(3-(噻吩-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0062),
3-(6-(3-((二乙基氨基)甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0063),
3-(6-(3-(哌嗪-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0064),
3-(6-(3-((乙基氨基)甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0065),
3-(6-(3-(吗啉代甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0066),
3-(6-(3-((异丁基氨基)甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0067),
1-(4-(4-(3-羟基苯基氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶-6-基)苯甲基)噻吩-2-甲酰胺HCl盐(LCB03-0068)
1-(4-(4-(3-羟基苯基氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶-6-基)苯甲基)噻吩-2-羧酸HCl盐(LCB03-0069)
3-(6-(4-((2-羟基乙基氨基)甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0070),
甲基2-(3-(4-(3-羟基苯基氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶-6-基)苯甲酰胺基)丙酸酯(LCB03-0071)
1-(4-(4-(3-羟基苯基氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶-6-基)苯甲基)噻吩-3-olHCl盐(LCB03-0072)
3-(6-(4-(乙氧基甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0073),
4-(4-(3-羟基苯基氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶-6-基)-N-(1-羟基丙烷-2-基)苯甲酰胺(LCB03-0074),
2-(4-(4-(3-羟基苯基氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶-6-基)苯甲酰胺基)丙烷(LCB03-0075)
3-(6-(3-(2-(噻吩-1-基)乙基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0076),
3-(6-(3-(2-(哌嗪-1-基)乙基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0079),
3-(2-(4-(噻吩-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚(LCB03-0080),
3-(6-(4-吗啉代苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0082),
3-(2-(4-(吗啉代甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚(LCB03-0083),
3-(2-(4-((4-甲基哌嗪-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚(LCB03-0084),
3-(6-(5-(噻吩-1-基甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0085),
3-(6-(5-(噻吩-1-基甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0086),
3-(6-(5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0087),
3-(6-(5-(哌啶-1-基甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0088),
3-(6-(5-(吗啉代甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0089),
3-(6-(5-(哌嗪-1-基甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0090),
3-(6-(5-((乙基氨基)甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0091),
3-(6-(5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0092),
3-(6-(5-(哌啶-1-基甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0093),
3-(6-(5-(哌嗪-1-基甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0094),
3-(6-(5-((乙基氨基)甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0095),
3-(2-(4-(哌啶-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚(LCB03-0097),
3-(2-(4-(哌嗪-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚(LCB03-0098),
3-(2-(4-((乙基氨基)甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚(LCB03-0099),
3-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)噻唑[4,5-d]嘧啶-7-基氨基)苯酚(LCB03-0100),
3-(6-(4-(噻吩-1-基甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0101),
3-(6-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0102),
3-(6-(4-(哌啶-1-基甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0103),
3-(6-(4-(吗啉代甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚三氟乙酸(LCB03-0104)
3-(6-(4-(哌嗪-1-基甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚三氟乙酸(LCB03-0105)
3-(6-(4-((乙基氨基甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0106),
3-(2-(3-(噻吩-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚(LCB03-0107),
3-(2-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚(LCB03-0108),
3-(2-(3-(哌啶-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚(LCB03-0109),
3-(2-(3-(吗啉代甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚(LCB03-0110),
3-(2-(3-(哌嗪-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚(LCB03-0111),
3-(2-(3-((乙基氨基)甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚(LCB03-0112),
3-(6-(4-(噻吩-1-基甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0113).
3-(6-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚三氟乙酸(LCB03-0114)
3-(6-(4-(哌啶-1-基甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚(LCB03-0115)。
在本发明的一个优选实施例中，本发明的化合物包括3-（2-（3-（吗啉代甲基）苯基）噻吩并〔3,2-b]吡啶-7-基氨基〕苯酚，表示为LCB03-0110。
本发明的化合物抑制参与炎症性疾病或免疫功能紊乱的免疫细胞以及伤口修复反应中的纤维化细胞的激活。具体而言，本发明人发现，这种化合物被证实同时抑制Src家族酪氨酸激酶和盘状结构域受体家族酪氨酸激酶，而且有效的抑制Syk1酪氨酸激酶、Btk1酪氨酸激酶、EPHA3酪氨酸激酶、FLT3酪氨酸激酶和VEGFR2酪氨酸激酶。
Syk1，Btk1，VEGFR2，EPHA3，FLT3激酶在炎症反应中免疫细胞的激活发挥了重要的作用，它们的抑制剂将是有效的抗炎剂。化学式1表示的化合物可被有效地用于各种炎症性疾病，组织纤维化，瘢痕形成相关的炎症疾病的预防和治疗，促进皮肤伤口愈合和抑制瘢痕形成。因为这些化合物抑制c-Src的家族酪氨酸激酶以及其他几个重要的参与各种炎症反应激酶。从而炎症细胞如巨噬细胞中NO和TNF-α的的合成被抑制；另外，它们抑制成纤维细胞，上皮细胞或α-平滑肌细胞活化为肌细胞，进而抑制α-平滑肌肌动蛋白的合成，促进这些细胞的增殖和迁移，因为它们可以抑制盘状结构域受体家族的酪氨酸激酶活性。
事实上，本发明的化合物在恶唑酮诱导的小鼠皮肤炎症模型中表现出了抗炎活性。此外，当用如结构式I所示的化合物LCB03-0110活化的巨噬细胞，iNOS蛋白、NO、免疫细胞因子、肿瘤坏死因子TNF-α的合成和巨噬细胞向炎症部位的迁移受到抑制。并且肥大细胞的脱颗粒和TNF-α和IL-4的合成也被抑制。
此外，它的药理活性已得到证实，例如在小鼠过敏性皮炎模型中抑制特应性皮炎，在增生性疤痕模型中促进伤口愈合和抑制瘢痕形成，在卵清蛋白诱导的小鼠哮喘模型中抑制哮喘。因此，所提供了的化合物，可以有效地用于各种炎症性疾病，特别是与炎症有关的组织纤维化和瘢痕形成有关的疾病的预防和治疗，促进皮肤伤口愈合和抑制瘢痕形成。
此外，本发明的化合物具有作为药效团的噻吩吡啶，对于参与炎症性疾病或免疫功能紊乱的免疫细胞以及伤口修复反应中的纤维化细胞的激活有很强的抑制作用，同时在皮肤炎症的动物模型中也表现出增加的疗效，当与其他相似的非本发明中化学式1所示的化合物对比时（对照化合物1，2和3的详细描述）。
本发明的重要贡献如下：
1）在本发明中提供以前从未合成过的新颖化合物。
2）本发明提供的化合物能同时抑制炎症细胞如巨噬细胞的激活和成纤维细胞、上皮细胞或α平滑肌细胞向肌细胞的激活。由于这些活性，它们可以被用来预防和治疗各种免疫疾病或免疫失调如皮炎（接触和异位性皮肤炎）、哮喘、慢性阻塞性肺疾病（COPD）、牛皮癣、增殖性视网膜病变、促进皮肤伤口的愈合和抑制瘢痕的形成。为了这个目的，在特定的实施中，本发明的化合物以及被证实可同时抑制c-Src激酶家族和盘状结构域受体激酶家族活性，而这和谐受体主要参与了炎性细胞的活化和成纤维细胞、上皮细胞或α平滑肌细胞的激活。
3）本发明提供的化合物以噻吩吡啶作为药效基团，三个类似的控制化合物不包括在本发明的化学式1所定义的化合物中，比较了它们对Src蛋白酪氨酸激酶家族、盘状域受体酪氨酸激酶家族、巨噬细胞和成纤维细胞活化的生物标记物的抑制能。从这些结果发明者证实，本发明提供的化合物比类似的控制化合物具有更好的疗效。
4）本发明提供的化合物在恶唑酮诱导的小鼠皮肤炎症模型表现出卓越的抑制活性。尤其是本发明的代表化合物LCB03-0110在相应的动物疾病模型中对特应性皮炎、哮喘、疤痕形成表现出抑制效果。
5)本发明提供的化合物以噻吩吡啶作为药效基团，三个类似的控制化合物不包括在本发明的化学式1所定义的化合物中，比较了它们在恶唑酮诱导的小鼠皮肤炎症模型中的抗炎活性。本发明提供的化合物比类似的控制化合物显示出优异的抑制活性。
此外，本发明提供的可以治疗炎症疾病的治疗方法，包括有疗效的给药量的传输方式，药理成分包含化学式1表示的化合物、异构体以及药理学上可接受盐类等有效成分。
本发明提供的可以治疗免疫失调的治疗方法，包括有疗效的给药量的传输方式，药理成分包含化学式1表示的化合物、异构体以及药理学上可接受盐类等有效成分。
此外，本发明提供的促进愈合并阻止伤口修复反应中伤疤形成的治疗方法，包括有疗效的给药量的传输方式，药理成分包含化学式1表示的化合物、异构体以及药理学上可接受盐类等有效成分。
对于本发明的药理成分，上述提到的炎症性疾病，选自特应性皮炎，接触性皮炎，牛皮癣，哮喘，慢性阻塞性肺病（COPD），关节炎，过敏性结膜炎，葡萄膜炎，虹膜炎，角膜炎，巩膜炎，巩膜炎，眼炎症，眼睑炎，角膜，结膜炎，糖尿病视网膜病变，糖尿病性肾功能衰竭，糖尿病性神经病，尽管可能不仅限于上面列出的疾病。
对于本发明的药理成分，上述提到的免疫紊乱，选自如器官移植的排斥反应和自身免疫性失调，尽管它们可能不仅限于上面提到的这类疾病。
对于本发明的药理成分，上述所提伤口疾病，选自创伤，烧伤创面，溃疡，糖尿病足溃疡，尽管它们可能不仅限于上面列出的疾病。
对于本发明的药理成分的使用剂量，如化学式1表示的化合物、异构体以及药理学上可接受盐类等有效成分，被制成口服的，非口服的，直肠，表皮，眼，鼻，静脉注射，肌肉注射，石膏，补片传输等类型用于临床，尽管它们不仅限于列出的这些制剂方法。
这种药物制剂可以轻松地使用传统制剂方法，例如，雷明顿，药学的科学与实践，第20版，2000年(Remington,TheScienceandPracticeofPharmacy,20thed.,2000)。
所有这些方法都包括将活性成分与含有一个或多个成分的载体结合的步骤。一般药理学制剂的制备可以通过完全混合的活性组分与液体载体或实心微粒载体，必要时与两者同时混合。
口服制剂可以是，例如，片剂，丸剂，软/硬胶囊剂，液体，悬浮液，香囊剂，颗粒剂，锭剂。除了活性成分，配方中含有油（例如，棉子油，芝麻油，椰子油或食用油），和悬浮剂（例如：BontragerCannes，藻酸盐，***胶，葡聚糖，羧甲基纤维素钠，明胶，甲基纤维素，羟丙基甲基纤维素，羟丙基纤维素，高分子胶，合成的或天然的树胶如聚乙烯吡咯烷酮）。
片剂的制剂通过压制或模制活性成分而成，可以任选一个或多个辅助成分。片剂由施加压力成型，通过混合粉末或颗粒或自由流体类型的有效成分与粘合剂（例如，乳糖，葡萄糖，淀粉，明胶，***树胶，BontragerCannes胶，藻酸钠，羧甲基纤维素，甲基纤维素，羟丙基甲基纤维素，聚乙二醇，蜡），润滑剂（例如：磷酸三油酸甘油酯，硬脂酸盐，硬脂酸镁，苯甲酸盐，乙酸盐，氯化钠），崩解剂（例如，淀粉，甲基纤维素，琼脂，膨润土，交叉卡梅罗钠，淀粉甘醇酸钠，交联聚维酮），和分散剂（聚山梨酯80）。混合有效成分与适合的无活性溶剂后，可以通过模塑制成成形的片剂。
由式（1）表示的化合物作为活性成分的药物组合物可进行非肠道给药。肠胃外给药可以通过血管注射剂，经皮给药，局部给药，直肠给药，肌内注射，石膏或补丁的形式。
特别是，可以将活性成分溶解在无菌溶液中，或生成微晶的悬浮液给药。此外，使用可生物降解的聚合物组合物或脂质体，可用于眼科治疗。见《制药技术百科全书》，第2卷，1989年（EncyclopediaofPharmaceuticalTechnology,vol.2,1989）。
一种用于眼局部给药的形式包括液体，或半液体的乳剂如搽剂、洗剂、凝胶、霜剂或软膏、滴液或悬浮液等。
此外，药物组合物可以通过口服或经鼻吸收，如被制成粉末类型、自行式喷气雾剂或喷雾型。这些制剂方法可以参考文献列出的一般方法。见ModernPharmaceutics,2<nd>ed.,G.S.BankerandCT.Rhodes(Eds.),page427-432,MarcelDekker,NewYork;ModernPharmaceutics,3thed.,G.S.BankerandCT.Rhodes(Eds.),page618-619and718-721,MarcelDekker,NewYorkandEncyclopediaofPharmaceuticalTechnologyvol.10,JSwarbrickandJ.C.Boylan(Eds),page191-221,MarcelDekker,NewYork。
作为添加上述元素的，包含化学式1的药物组合物，可包括一个或多个组成成分，如稀释剂，缓冲剂，香料，着色剂，表面活性剂，下沉剂，防腐剂，如甲基对羟基苯甲酸，乳化剂或相似的材料。当药理活性成分被视为一种药理学上可接受的盐，需使用无毒的酸或碱，优选可以生成水溶性或弱水溶性类型的盐，以达到特定的情况下理想的吸收。
此外，本发明的化合物的用于人的剂量可以根据病人的年龄，体重，性别，给药类型，健康状况或程度或疾病而变化。70㎏重量的成年患者，通常是0.1～500毫克/公斤体重，可以按照医生或药剂师的诊断，每天给药一次或数次。
本发明中化学式1所示化合物的合成方案见下面的反应式1。但是本发明中化学式1所示化合物的合成方法并不仅限于反应式1的合成方案。因为下面的合成方案为相关领域的人们所熟悉，所以如果没有特殊说明的话，下面反应的替代物的定义与上面化学式1所表示的是相同的。
在化学反应式1中的化合物的合成方法如下：7-氯噻吩并嘧啶或7-氯代噻吩吡啶衍生物（II）的合成是通过化合物（1）和噻吩嘧啶、噻吩吡啶酮或噻唑嘧啶酮骨架的氯代化，然后通过溴化处理合成2-溴-7-氯噻吩嘧啶或2-溴-7-氯噻吩吡啶衍生物（Ⅲ）的衍生物，然后化合物（V）由苯胺衍生物的取代反应（四）合成。化学式1-1，1-2和1-3所示化合物的合成是通过噻吩嘧啶，噻吩吡啶或噻唑嘧啶与化合物（V）的Suzuki偶联而成。
[化学反应1]
作为如上所示的合成方法的一个优选实例，该化学反应合成本发明的化合物的方案可以表示为以下的化学反应2。化学反应2中所示的化合物可以被用于合成本发明的化合物的起始原料。因为以下的合成方法的转换是在相关领域的人所熟悉的，所以如果没有特殊说明的话，在以下的反应中取代基的定义和如上所示的化学式1中的是相同的。作为如上所示的合成方法的一个优选实例，该化学反应合成本发明的化合物的方案可以***表示为以下的化学反应2。
[化学反应2]
【实施本发明的最佳方式】
下文中提供合成的例子和优选的实例来详细描述本发明，以使所提供的合成的例子和优选的实例可以更容易的解释本发明，但本发明的内容不限于于此。
每种化合物的合成例子描述如下。
[制备实例1]
[制备实例1-1]
1-（4-（甲氧基-苄氧基）-3-硝基苯的合成
0℃，10ml脱气的二甲基甲酰胺中加入氢氧化钠（0.54克，13.36毫摩尔），然后慢慢滴加3-硝基苯酚（1.69克，12.14毫摩尔）溶解在7毫升的二甲基甲酰胺，然后缓慢地加入对-甲氧基苄基氯（1.81毫升，13.36毫摩尔）。在提高反应温度至室温下搅拌2小时后，反应混合物用饱和氯化铵（100ml）和乙酸乙酯（100ml）萃取。将有机层用100ml水洗涤两次，并用无水硫酸钠干燥，然后在真空下浓缩。使用n-己烷重结晶，最后得到淡黄色实心的1-（4-甲氧基苄基氧基）-3-硝基苯（2.85克，90％）。
1H-NMR(600MHz,CDCl3);δ7.83-7.81(m,2H),7.42(t,J=8.4Hz,1H),7.37(d,J=8.4Hz,2H),7.28(dd,J,2.4,8.4Hz,1H),6.93(d,J=8.4Hz,2H),5.06(s,2H),3.82(s,3H)
[制备实例1-2]
3-（4-甲氧基苄基氧基）苯胺的合成
铁（5.6克，100.28毫摩尔），用甲醇：水（15毫升：3毫升）混合，并回流30分钟。当温度下降至室温，1-（4-甲氧基苄基氧基）-3-硝基苯（1.3克，5.01毫摩尔）溶解在6毫升甲醇：水（5:1）溶液中，加入后回流15小时。用cellite除去Fe，然后将反应混合物用甲醇洗涤，并在真空下浓缩以除去溶剂。用100ml饱和氯化铵+150毫升二氯甲烷萃取后，将有机层用水洗涤。有机溶剂在真空下浓缩后得到标题化合物（1.14g，99％）。
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ7.34(d,J=7.2Hz,1H),7.25(s,1H),7.05-7.04(m,1H),6.91-6.90(m,2H),6.40-6.31(m,3H),4.94(s,2H),3.81(s,3H)
[制备实例2]
3-（叔丁基二甲基甲硅烷基氧基）苯胺的合成
氯叔丁基二甲基硅烷（11克，72.98毫摩尔），3-氨基苯酚（6.64克，60.81毫摩尔）和咪唑（5.38克，79.10毫摩尔）加入到200毫升二氯甲烷中。该混合物在室温下搅拌15小时。用200毫升饱和氯化铵和200毫升二氯甲烷萃取反应混合物，将有机层用200ml水洗涤两次。真空浓缩后，可以得到标题化合物（13.5克，99％）。
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ6.95(t,J=8.0Hz,1H),6.27-6.18(m,2H),6.16-6.15(m,1H),3.56(brs,2H),0.90(s,9H),0.11(s,6H);LC-MS224(MH+)
[制备实例3]
[制备实例3-1]
甲基-3-甲酰氨基噻吩-2-羧酸乙酯的合成
甲酸125毫升和乙酸铵（15.9克，207毫摩尔）加入到甲基3-氨基-2-噻吩羧酸乙酯（25克，159.04毫摩尔）中，混合物回流4小时。将温度降低到室温后，用水洗涤固体得到标题化合物（29克，98％）。
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ10.10(br,1H),8.42(s,1H),8.10(d,J=5.6Hz,1H),7.49(d,J=5.2Hz,1H),3.90(s,3H);LC-MS186.20(MH+)
[制备实例3-2]
3H-噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-酮的合成
制备实例3-1中合成的化合物（29克，156.6毫摩尔）与甲酸铵（29.7克，469.8毫摩尔）和甲酰胺（38毫升，939.5毫摩尔）混合，将混合物在140℃下煮沸20小时。反应混合物的温度降低到室温，并将合成的固体用水洗涤。得到的标题化合物（15.7克，66％）为暗棕色固体。
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.18(d,J=5.2Hz,1H),8.15(s,1H),7.40(d,J=5.2Hz,1H);LC-MS153.0(MH+)
[制备实例3-3]
4-氯噻吩并[3,2-d]嘧啶的合成
将二甲基甲酰胺（15.4毫升，197.13毫摩尔）加入到150毫升二氯乙烷的混合物中，将温度降低至0℃，缓慢加入草酰氯（254毫升，295.70毫摩尔）。当开始形成白色凝胶型，加入3H-噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-酮（15克，98.57毫摩尔）。反应混合物反应2.5小时后，将温度降至室温。加入水后，将反应混合物用二氯甲烷萃取（3×300毫升），用无水硫酸镁干燥。在真空下浓缩后，用200ml的己烷进行研磨，得到标题化合物（16.7克，99％）为暗棕色固体。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6);δ9.06(s,1H),8.61(d,J=5.2Hz,1H),7.78(d,J=5.2Hz,1H);LC-MS173.2(MH+)
[制备实例3-4]
6-溴-4-氯噻吩[3,2-d〕嘧啶的合成
锂一匹二异丙基胺（25毫升，61.54毫摩尔）加入到200毫升四氢呋喃中和后，将温度降低到-78℃，4-氯噻吩并〔3,2-d]嘧啶（5克，39.30毫摩尔）溶解在50毫升四氢呋喃中的溶液，被缓慢地加入到混合物中。20分钟后，缓慢地加入1,2-二溴-1,1,2,2-四氟乙烷（11.45克，35.17毫摩尔）。在-78℃下搅拌20分钟，温度升高至室温，并继续搅拌2小时。该反应混合物中加入水，并用氯仿（3x300ml）萃取，然后用无水硫酸镁干燥。真空下浓缩后，用200ml的己烷研磨，得到的标题化合物（6.5克，89.2％）为暗棕色固体。
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.94(s,1H),7.62(s,1H);LC-MS:249,251(MH+)
[制备实例4]
6-溴-N-（3-（4-甲氧基苄基氧基）苯基）噻吩并[3,2-d〕嘧啶-4-胺的合成
制备实例3-4中得到的化合物（0.18克，0.80毫摩尔）溶解于3毫升的二氯乙烷和3ml叔丁醇，并放置到密封管中，在85℃下搅拌3天。冷却至室温后，将合成的浅棕色固体，用***洗涤，得到灰色的标题化合物（0.25g，80％）。
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6);δ10.52(brs,1H),8.70(s,1H),7.73(s,1H),7.44-7.27(m,5H),6.95-6.88(m,3H),5.04(s,2H),3.75(s,3H);LC-MS:443(MH+)
下列化合物的合成方法类似于上面的化合物。
[制备实例5]
6-溴-N-（3-（叔丁基二甲基甲硅烷氧基）苯基）噻吩〔3,2-d]嘧啶-4-胺
（6-溴-N-（3-（叔丁基二甲基甲硅烷氧基）苯基）噻吩〔3,2-d]嘧啶-4-胺）的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.62(s,1H),7.40(s,1H),7.30-7.26(m,1H),7.06-7.02(m,2H),6.87-6.82(m,2H),1.00(s,9H),0.23(s,6H);LC-MS439(MH+)
[制备实例6]
4-（4-（3-（叔丁基二甲基甲硅烷氧基）苯基氨基）噻吩〔3,2-d]嘧啶-6-基）苯甲醛
4-（4-（3-（叔丁基二甲基甲硅烷氧基）苯基氨基）噻吩〔3,2-d]嘧啶-6-基）苯甲醛的合成
制备实例5中得到的化合物（3.5克，8.02毫摩尔），4-甲酰基苯基硼酸（1.44克，9.62毫摩尔），四（三苯基膦）钯（1.85克，1.60毫摩尔）和2N碳酸钠（8毫升，16.04毫摩尔）加入到30毫升的1,4-二恶烷中，并回流3小时。两次用50ml饱和碳酸氢钠和150毫升二氯甲烷萃取反应混合物后，将有机层用饱和碳酸氢钠150毫升进一步萃取两次，用无水硫酸钠干燥，然后在真空下浓缩。柱层析（乙酸乙酯/n-己烷，1/3）后，得到棕色固体的标题化合物（2.1克，56.7％）。
1H-NMR(600MHz,CDCl3);δ10.06(s,1H),8.72(s,1H),7.96(d,J=8.4Hz,2H),7.83(d,J=8.4HZ,2H),7.17(s,1H),7.30-7.28(m,1H),7.18(s,1H),7.16-7.14(m,1H),6.93(brs,1H),6.79(d,J=8.4Hz,1H),0.96(s,9H),0.21(s,6H);LC-MS:462(MH+)
[制备实例7]
[制备实例7-1]
1-（二氟甲基）-3-硝基苯的合成
DAST（20毫升，13.23毫摩尔）在5毫升二氯甲烷稀释，在-78℃下被缓慢地滴入到3-硝基苯甲醛（1克，6.61毫摩尔）溶解在20毫升二氯甲烷中，并在室温下将混合物搅拌15小时。加入100毫升的水后，用100毫升的二氯甲烷萃取，在真空下浓缩有机层，进行柱层析（乙酸乙酯/正己烷1/15），得到标题化合物（1.11克，97.3％）为棕色油状物。
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.40(s,1H),8.37-8.35(m,1H),7.87(d,J=7.6Hz,1H),7.69(t,J=8.0Hz,1H),6.75(t,J=56.0Hz,1H)
[制备实例7-2]
3-（二氟甲基）苯胺的合成
加入100毫克的Fe至3毫升乙酸中，回流15分钟。温度降低到室温后，将混合物加入1-（二氟甲基）-3-硝基苯（0.2克，1.15毫摩尔），再次回流1小时。加入20毫升乙酸乙酯后，使用cellite除去杂质，有机层在真空下浓缩。柱层析（乙酸乙酯/正己烷1/15）得到标题化合物（0.16g，50％）。
1H-NMR(600MHz,CDCl3);δ7.22(t,J=7.8Hz,1H),6.86(d,J=7.8Hz,1H),6.81(s,1H),6.77-6.75(m,1H),6.54(t,J=56Hz,1H),3.91(brs,2H)
[制备实例8]
6-溴-N-（3-（三氟甲基）苯基）噻吩[3,2-d〕嘧啶-4-胺
6-溴-N-（3-（三氟甲基）苯基）噻吩[3,2-d〕嘧啶-4-胺的合成
制备实例3-4制备的化合物（0.1克，0.40毫摩尔）溶解在2毫升二氯乙烷和2毫升的叔丁醇中，并添加3-氟苯胺（55μl，0.44毫摩尔），随后回流20小时。将反应混合物在真空下浓缩，合成的黄色固体用***洗涤得到标题化合物（0.12g，100％）。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ10.83(brs,1H),8.76(s,1H),8.20(s,1H),8.09(d,J=8.0Hz,1H),7.78(d,J=2.0Hz,1H),7.66(t,J=8.0Hz,1H),7.53(d,J=7.6Hz,1H);LC-MS:323(MH+)
下列化合物的合成方法类似于上面的化合物。
[制备实例9]
N-（3-（6-溴噻吩并[3,2-d〕嘧啶-4-基氨基）苯基）2,2,2-三氟乙酰胺
N-（3-（6-溴噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基）苯基）-2,2,2-三氟乙酰胺）的合成
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.40(brs,1H),8.70(s,1H),7.74(s,1H),7.62-7.60(m,2H),7.49-7.44(m,2H);LC-MS:419(MH+2)
[制备实例10]
6-溴-N-（3-（二氟甲基）苯基）噻吩[3,2-d〕嘧啶-4-胺
6-溴-N-（3-（二氟甲基）苯基）噻吩〔3,2-d]嘧啶-4-胺的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ10.75(brs,1H),8.74(s,1H),7.98(s,1H),7.94-7.92(m,1H),7.77(d,J=1.6Hz,1H),7.57(t,J=8.0HZ,1H),7.40(d,J8.0HZ,1H),7.09(t,J=56HZ,1H)
[制备实例11]
4-（4-（3-（三氟甲基）苯基氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）苯甲醛
4-（4-（3-（三氟甲基）苯基氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）苯甲醛的合成
用类似从制备实例8的化合物（60毫克，0.18毫摩尔）中制备化合物6的方法，得到标题化合物（64毫克，86％）。
1H-NMR(600MHz,CDCl3);δ10.07(s,1H),8.00-7.98(m,3H),7.89-7.87(m,3H),7.79(s,1H),7.58-7.47(m,2H),6.87(brs,1H)
[制备实例12]
4-（4-（3-（二氟甲基）苯基氨基）噻吩并噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基）苯甲醛
4-（4-（3-（二氟甲基）苯基氨基）噻吩并噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基）苯甲醛的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ10.07(s,1H),8.77(s,1H),7.99(d,J=8.4Hz,2H),7.88(d,J=8.4Hz,2H),7.99-7.78(m,2H),7.53(t,J=7.6Hz,1H),7.39(d,J=7.6Hz,1H),6.84(brs,1H),6.71(t,J=56Hz,1H)
[制备实例13]
1HNMR(600Hz,CDCl3);δ10.06(s,1H),8.72(s,1H),7.96(dJ=8.47Hz,2H),7.83(d,J=8.47Hz,2H),7.71(s,1H),7.38(d,J=8.8Hz,2H),7.30-7.28(m,1H),7.18(s,1H),7.16-7.14(m,1H),6.95(d,J=8.8Hz,2H),6.93(brs,1H),5.03(s,2H),3.82(s,3H);LC-MS346(MH+)
[制备实例14]
4-氯-3-（4-甲氧基苄基氧基）苯胺的合成
1-氨基-5-硝基苯酚（2克，12.97毫摩尔）和亚硝酸钠（0.9克，12.97摩尔）用10毫升水和30毫升48％HBF4混合，在室温下搅拌30分钟，然后加入氯化铜（I）（642毫克，6.48毫摩尔），80℃加热3小时。加入0℃冰水，将反应混合物用200ml饱和碳酸氢钠和200ml乙酸乙酯萃取，然后用无水硫酸钠干燥，过滤和在真空下浓缩。进行柱层析（正己烷/乙酸乙酯，15/1）得到2-氯-5-硝基苯酚（0.46克，23％）。使用类似于制备实例9的方法从2-氯-5-硝基苯酚（0.36克，2.29毫摩尔）得到标题化合物（0.167克，94％）。
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ7.37(d,J=8.8Hz,2H),7.10(d,J=8.8Hz,1H),6.92(d,J=10.8Hz,2H),6.32(d,J=2.4Hz,1H),6.23(dd,J=2.0,8.4Hz,1H),5.02(s,2H),3.81(s,3H);LC-MS:248(MH+)
[制备实例15]
6-溴-N-（4-氯-3-（4-甲氧基苄基氧基）苯基）噻吩并[3,2-d〕嘧啶-4-胺的合成
使用类似于制备实例8的方法得到标题化合物。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ10.58(brs,1H),8.72(s,1H),7.75-7.73(m,2H),7.43-7.38(m,4H),6.97(d,J=8.0Hz,2H),5.12(s,2H),3.76(s,3H);LC-MS:477(MH+)
[制备实例16]
4-（4-（4-氯-3-（4-甲氧基苄基氧基）苯基氨基）噻吩并噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基）苯甲醛的合成
使用类似于制备实例6的方法得到标题化合物。
1HNMR(600MHz,CDCl3);δ10.05(s,1H),8.62(s,1H),7.98(d,J=8.4Hz,2H),7.90(d,J=8.4Hz,2H),7.76(s,1H),7.49-7.48(m,1H),7.41(d,J=8.4Hz,2H),7.16(dd,J=1.8,8.4Hz,1H),6.94-6.90(m,4H),5.13(s,2H),3.79(s,3H);LC-MS502(MH+)
[制备实例17]
3-（4-（3-（4-甲氧基苄基氧基）苯基氨基）噻吩并噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基）苯甲醛
（3-（4-（3-（4-甲氧基苄基氧基）苯基氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）苯甲醛的合成
实例1中所合成的化合物（500毫克，0.89毫摩尔），3-甲酰基苯基硼酸（160毫克，1.06毫摩尔），和钯四三苯基膦（21.7毫克，0.02毫摩尔）依次加入到5毫升脱气的二甲基甲酰胺中，进一步加入1.33毫升的2N碳酸钠。在80℃搅拌15小时后，将反应混合物用50毫升二氯甲烷和50毫升饱和氯化铵提取，再用50毫升二氯甲烷和50毫升饱和氯化铵提取萃取有机层两次，用硫酸钠干燥，并在真空下浓缩，用10毫升二***浓缩，得到棕色固体状的标题化合物（320毫克，77％）。
1HNMR(600MHz,CDCl3);δ10.09(s,1H),8.73(s,1H),8.17(s,1H),7.94(t,J=9.0Hz,1H),7.69(s,1H),7.65(t,J=7.8Hz,1H),7.37(m,3H),7.33(t,J=7.8Hz,3H),7.11(d,J=5.4Hz,1H),6.90(m,3H),6.79(br,1H),5.04(s,2H),3.80(s,3H);LC-MS468(MH+)
[制备实例18]
[制备实例18-1]
2-（5-溴噻吩-2-基）-1,3-二氧戊环的合成
5-溴噻吩-2-甲醛（2克，10.46毫摩尔）溶解在30毫升甲苯中。加入对甲苯磺酸（60毫克，0.31毫摩尔）和乙二醇（0.75毫升，13.61毫摩尔）后，将混合物在dean-stark容器的中在130℃下搅拌15小时。冷却至室温后，加入20ml水，用饱和的碳酸氢钠溶液中和，然后用100毫升二***萃取。用50毫升水和50毫升盐水洗涤溶液洗涤有机层后，用硫酸镁干燥，过滤，并在真空下浓缩。得到为棕色油状的标题化合物（1.8克，73.1％）。
1HNMR(600MHz,CDCl3);δ9.78(s,1H),7.52(d,J=3.6Hz,1H)
[制备实例18-2]
6-（5-（1,3-二氧戊环-2-基）噻吩-2-基）-N-（3-（4-甲氧基苄基氧基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-胺
6-（5-（1,3-二氧戊环-2-基）噻吩-2-基）-N-（3-（4-甲氧基苄基氧基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-胺的合成
制备实例18-1得到的化合物（0.1克，0.35毫摩尔），制备实例7得到的化合物（0.1克，0.22毫摩尔），和PdCl2（dppf）2（5毫克，0.006毫摩尔）置于氮气中，加入5ml脱气的二甲基甲酰胺和2N碳酸钠（0.3毫升，0.66毫摩尔），然后在80℃搅拌15小时。将反应混合物用50毫升二氯甲烷和50毫升饱和氯化铵溶液提取。将有机层用50毫升饱和氯化铵溶液萃取两次，用硫酸钠干燥，并在真空下浓缩。柱层析（乙酸乙酯/正己烷1/15）得到棕色固体状的标题化合物（39毫克，34％）。
1HNMR(600MHz,CDCl3);δ8.68(s,1H),7.44(s,1H),7.37(d,J=7.8Hz,2H),7.32-7.31(m,2H),7.23-7.22(m,1H),7.12(d,J=3.0Hz,1H),6.91(d,J=7.8Hz,2H),6.88-6.87(m,1H),6.79(s,1H),5.03(s,2H),4.17-4.15(m,2),4.06-4.04(m,2H),3.08(s,3H);LC-MS518(MH+)
[制备实例18-3]
5-（4-（3-（4-甲氧基苄基氧基）苯基氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）噻吩-2–羧基甲醛
5-（4-（3-（4-甲氧基苄基氧基）苯基氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）噻吩-2-甲醛的合成
制备实例18-2中得到的化合物（0.27克，0.52毫摩尔）溶解在10毫升丙酮中，加入对甲苯磺酸（49毫克，0.26毫摩尔），在室温下搅拌20小时。加入50毫升的饱和碳酸氢钠中和，将混合物在真空下浓缩。加入10毫升水，将残余物被搅拌30分钟并过滤。滤液在5ml二氯甲烷中的溶液和1毫升甲醇中固化，得到黄色固体状标题化合物（240毫克，85％）。
1HNMR(600MHz,DMSO-d6);δ9.97(brs,1H),8.63(s,1H),8.23(d,J=3.6Hz,1H),8.00(s,1H),7.86(d,J=4.2Hz,1H),7.59-7.58(m,1H),7.40(d,J=8.4Hz,2H),7.37(d,J=7.8HZ,1H),7.27(t,J=8.4HZ,1H),6.95(d,J=8.4Hz,2H),6.78(dd,J=1.8,8.4Hz,1H),5.03(s,2H),3.75(s,3H);LC-MS474(MH+)
下列化合物的合成方法类似于上面的化合物。
[制备实例19]
5-（4-（3-（4-甲氧基苄基氧基）苯基氨基）噻吩并[3,2-d〕嘧啶-6-基）呋喃-2-羧基甲醛
5-（3-（3-（4-甲氧基苄基氧基）苯基氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）呋喃-2-羧基甲醛的合成
[制备实例19-1]
2-（5-溴呋喃-2-基）-1,3-二氧戊环的合成
1HNMR(600MHz,CDCl3);δ6.41(d,J=2.4Hz,1H),6.28(d,J=2.0Hz,1H),5.87(s,1H),4.15-4.10(m,2H),4.03-4.00(m,2H)
[制备实例19-2]
6-（5-（1,3-二氧戊环-2-基）呋喃-2-基）-N-（3-（4-甲氧基苄基氧基）苯基）噻吩并[3,2-d〕嘧啶-4-胺
6-（5-（1,3-二氧戊环-2-基）呋喃-2-基）-N-（3-（4-甲氧基苄基氧基）苯基）噻吩并[3,2-d〕嘧啶-4-胺的合成
1HNMR(600MHz,CDCl3);δ8.69(s,1H),7.53(s,1H),7.37(d,J=9.0Hz,2H),7.34-7.33(m,1H),7.31(t,J=7.8Hz,1H),7.08-7.07(m,1H),6.91(d,J=9.0Hz,2H),6.87-6.86(m,1H),6.74(brs,1H),6.71(d,J=3.6Hz,1H),6.55(d,J=3.6Hz,1H),5.99(s,1H),5.03(s,2H),4.17-4.15(m,2H),4.07-4.04(m,3H),3.80(s,4H);LC-MS502(MH+)
[制备实例19-3]
5-（4-（3-（4-甲氧基苄基氧基）苯基氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）呋喃-2-甲醛
5-（4-（3-（4-甲氧基苄基氧基）苯基氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）呋喃-2-甲醛的合成
1HNMR(400MHz,DMSO-d6);δ9.80(brs,1H),9.67(s,1H),8.63(s,1H),7.74(d,J=4.0Hz,1H),7.58(s,1H),7.51(d,J=4.0Hz,1H),7.40(d,J=8.8Hz,2H),7.38-7.36(m,1H),7.28(t,J=8.0HZ,1H),6.95(d,J=8.4Hz,2H),6.79-6.78(m,1H),5.03(s,2H),3.75(s,3H);LC-MS458(MH+)
[制备实例20]
[制备实例20-1]
2-（5-溴噻吩-3-基）-1,3-二氧戊环的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ7.29(d,J=1.6Hz,1H),7.10(d,J=1.6Hz,1H),5.80(s,1H),4.07-4.06(m,2H),4.01-3.99(m,2H)
[制备实例20-2]
6-（4-（1,3-二氧戊环-2-基）噻吩-2-基）-N-（3-（4-甲氧基苄基氧基）苯基）噻吩并[3,2-d〕嘧啶-4-胺
6-（4-（1,3-二氧戊环-2-基）噻吩-2-基）-N-（3-（4-甲氧基苄基氧基）苯基）噻吩并[3,2-d〕嘧啶-4-胺的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.68(s,1H),7.45(d,J=4.4Hz,2H),7.38(m,3H),7.32(s,2H),7.08(d,J=8.8Hz,1H),6.87(m,4H);LC-MS518(MH+)
[制备实例20-3]
5-（4-（3-（4-甲氧基苄基氧基）苯基氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）噻吩-3-羧基甲醛
5-（4-（3-（4-甲氧基苄基氧基）苯基氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）噻吩-3-甲醛的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ9.97(s,1H),9.81(s,1H),8.62(s,1H),8.12(d,J=4.0Hz,1H),8.00(s,1H),7.86(d,J=4.0Hz,1H),7.59(s,1H),7.41(d,J=5.6Hz,2H),7.30(m,1H),7.27(m,1H),6.96(d,J=8.8Hz,2H),6.80(m,1H),5.03(s,2H),3.79(s,3H);LC-MS474(M+H+)
[制备实例21]
[制备实例21-1]
2-（5-溴呋喃-3-基）-1,3-二氧戊环的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ7.52(s,1H),6.39(s,1H),5.79(s,1H),4.11-4.04(m,2H),3.93-3.86(m,2H)。
[制备实例21-2]
6-（4-（1,3-二氧戊环-2-基）呋喃-2-基）-N-（3-（4-甲氧基苄基氧基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-胺
6-（4-（1,3-二氧戊环-2-基）呋喃-2-基）-N-（3-（4-甲氧基苄基氧基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-胺的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.66(s,1H),7.58(s,1H),7.49(s,1H),7.37-7.26(m,6H),7.08(d,J=7.2Hz,1H),6.88(m,2H),6.80(s,1H),5.01(s,2H),4.12-3.98(m,4H),3.76(s,1H);LC-MS502(MH+)
[制备实例21-3]
5-（4-（3-（4-甲氧基苄基氧基）苯基氨基）噻吩并[3,2-d〕嘧啶-6-基）呋喃-3-羧基甲醛
5-（4-（3-（4-甲氧基苄基氧基）苯基氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）呋喃-3-羧基甲醛的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ9.97(s,1H),8.70(s,1H),8.13(s,1H),7.61(s,1H),7.38-7.26(m,4H),7.08(m,2H),6.91(m,2H),5.04(s,2H),3.80(s,3H);LCMS458(MH+)
[制备实例22]
[制备实例22-1]
噻吩-3-胺的合成
10g的甲基3-氨基-2-噻吩羧酸（63.61mmol）溶于60毫升2N-NaOH洗涤用，回流2小时。后降低至0℃下，将浓盐酸加入到反应混合物中以调节pH值至5。合成的米色固体用水洗涤后，溶解在40毫升丙酮中，并用硫酸镁干燥。在真空下过滤并浓缩后，加入50毫升异丙醇和草酸（6.3克，69.28毫摩尔），并将该混合物在38℃下搅拌45分钟。降低反应混合物至0℃，加入二***，过滤合成的沉淀物。用二***洗涤得到标题化合物（2.54克，40.3％）。
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ7.13-7.11(m,1H),6.65-6.63(m,1H),6.17-6.16(m,1H),3.60(brs,2H)
[制备实例22-2]
4H-噻吩并[3,2-b]吡啶-7-酮的合成
原甲酸三甲酯（14毫升，128.07毫摩尔）溶液中加入二甲基-[1,3]二恶烷-4,6-二酮（4.61克，32.01毫摩尔），将混合物在30℃下搅拌1小时。在室温下，将噻吩-3-胺（2.54克，25.61毫摩尔）缓慢地加入到反应混合物中，直到形成白色沉淀物。在85℃下搅拌反应混合物15小时后，将温度降低至室温，加入25毫升异丙醚中，在室温下搅拌1小时。合成的紫色固体（中间体）用异丙醚洗涤。该中间体溶解在二氯甲烷和碳酸钾，并搅拌30分钟。过滤除去固体，并将该溶液浓缩，得到2,2-二甲基-5-（噻吩-3-基氨基乙基）-[1,3]二恶烷-4,6-二酮。在5毫升2,2-二甲基-5-（噻吩-3-基氨基乙基）-[1,3]二恶烷-4,6-二酮中缓慢加入二苯基醚，在259℃回流30分钟。将反应混合物冷却至室温后，加入异丙醚，搅拌1小时，得到浅棕色固体状的标题化合物（2克，53％）。
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6);δ12.15(brs,1H),7.96(d,J=8.4Hz,1H),7.82(d,J=10.8Hz,1H),7.24(d,J=7.8Hz,1H),6.01(d,J=10.8Hz,1H);LC-MS:152(MH+)
[制备实例22-3]
7-氯噻吩并[3,2-b]吡啶的合成
在250毫升圆底烧瓶中，在0℃下向30毫升二氯甲烷和20毫升二氯乙烷的混合物中缓慢滴加二甲基甲酰胺（1.8毫升，23.28毫摩尔）和草酰氯（2.9毫升，33.86毫摩尔）。加入4氢-噻吩并[3,2-b〕吡啶-7-酮（1.6克，10.58毫摩尔）溶液，将混合物回流6小时。将温度降低到室温后，得到淡黄色固体的标题化合物（1.7克，90％）。
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.61(d,J=5.2Hz,1H),7.81(d,J=5.2Hz,1H),7.30(d,J=4.8Hz,1H)
[制备实例22-4]
2-溴-7-氯噻吩并[3,2-b]吡啶的合成
20毫升四氢呋喃中和纯化的二异丙基胺（0.93毫升，6.63毫摩尔）置于250毫升圆底烧瓶中，用氮气填充，在-78℃滴入n-丁基锂（2.45毫升，6.12毫摩尔）。在0℃下搅拌10分钟后，将反应混合物的温度降低至-78℃。然后，7-氯噻吩并[3,2-b〕吡啶（0.87克，5.1毫摩尔）溶解在10毫升四氢呋喃中的溶液中，用套管加入，将反应混合物搅拌10分钟。接着加入1,2-二溴-1,1,2,2-四氟甲烷（2克，6.12毫摩尔），并搅拌30分钟，将温度逐渐升高至室温。1小时后，将反应混合物与水和乙酸乙酯（30毫升×2）萃取。用硫酸镁干燥后，过滤并在真空下浓缩干燥后，进行柱层析（n-己烷/乙酸乙酯，1/40），得到标题化合物（1.12mg，88％）。
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6);δ8.64(d,J=5.2Hz,1H),7.94(s,1H),7.61(d,J=5.2Hz,1H)。
[制备实例23]
2-溴-N-（3-（4-甲氧基苄基氧基）苯基）噻吩并[3,2-b〕吡啶-7-胺
2-溴-N-（3-（4-甲氧基苄基氧基）苯基）噻吩并[3,2-b〕吡啶-7-胺的合成
从制备实例1中得到的化合物（0.18克，0.80毫摩尔）被溶解在3毫升的二氯乙烷和3ml叔丁醇，并放入一个密封的管。混合物中加入从制备实例22-4中得到的化合物（198毫克，0.80毫摩尔），接下来的3天，在85℃下搅拌。冷却至室温后，将合成的浅棕色固体是由二***洗涤，得到灰色固体状的标题化合物（0.25g，80％）。
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.32(d,J=5.2Hz,1H),7.50(s,1H),7.34(d,J=7.6Hz,2H),7.29(t,J=8.0Hz,1H),6.92(d,J=7.6Hz,2H),6.83-6.80(m,4H),5.00(s,2H),3.82(s,3H)
[制备实例24]
4-（7-（3-（4-甲氧基苄基氧基）苯基氨基）噻吩并〔3,2-b]吡啶-2-基）苯甲醛
4-（7-（3-（4-甲氧基苄基氧基）苯基氨基）噻吩并〔3,2-b]吡啶-2-基）苯甲醛的合成
从制备实例22中得到的化合物（0.5克，0.89毫摩尔），4-甲酰基苯基硼酸（0.16克，1.06毫摩尔）和PdCl2（dppf）被置于氮气下的反应容器中，加入5ml脱气的二甲基甲酰胺（0.9毫升，1.78毫摩尔）和2N碳酸钠(0.9ml,1.78mmol)。将该混合物在80℃下搅拌15小时，并用50毫升二氯甲烷和50毫升饱和氯化铵溶液萃取。有机层进一步用50毫升饱和氯化铵溶液萃取两次，用无水硫酸钠干燥，并在真空下浓缩。用10毫升二***研磨后，得到320毫克棕色固体状的标题化合物（0.69mmol，77％）。
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ10.06(s,1H),8.39(d,J=3.6Hz,1H),7.96(d,J=5.2Hz,2H),7.89-7.7.86(m,3H),7.35(d,J=5.6Hz,2H),7.31(t,J=5.2Hz,1H),6.94-6.90(m,4H),6.86(d,J=5.2Hz,1H),6.82(d,J=5.2Hz,1H),6.09(s,1H),5.01(s,2H),3.82(s,3H);LC-MS467.0(MH+)
[制备实例25]
3-（7-（3-（4-甲氧基苄基氧基）苯基氨基）噻吩并〔3,2-b]吡啶-2-基）苯甲醛
3-（7-（3-（4-甲氧基苄基氧基）苯基氨基）噻吩并〔3,2-b]吡啶-2-基）苯甲醛的合成
从制备实例23中得到的化合物（6.69克，15.63毫摩尔）,3-甲酰基苯基硼酸（2.7克，18.76毫摩尔）,和氯化钯（dppf）2（388毫克，0.46毫摩尔）被置于氮气下的反应容器中。加入70毫升脱气的二甲基甲酰胺和2N碳酸钠（23毫升，46.89毫摩尔），并在80℃下搅拌该混合物15小时。在反应混合物中加入250毫升饱和氯化铵溶液和250毫升二氯甲烷中，并萃取。有机层进一步用150ml的饱和氯化铵溶液萃取两次，用无水硫酸钠干燥，并在真空下浓缩。用10毫升二***研磨后，得到320毫克棕色固体状的标题化合物（2.5g，36
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6);δ10.11(s,1H),8.92(s,1H),8.32-8.31(m,2H),8.19(d,J=8.4Hz,1H),7.97(s,1H),7.76(d,J=7.8Hz,1H),7.75(t,J=7.8Hz,1H),7.64-7.60(m,1H),7.57-7.54(m,1H),7.38(d,J=8.4Hz,2H),6.95(d,J=8.4Hz,2H),6.90-6.87(m,2H),6.77(dd,J=1.8Hz,7.8Hz,1H),5.04(s,2H),3.76(s,3H);LC-MS467(MH+)
[制备实例26]
[制备实例26-1]
2-（4-溴苯基）乙酸乙酯的合成
20毫升乙腈溶液中加入4-溴苯基乙酸（2克，9.3毫摩尔）和1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-2-烯（1.7克，11.2毫摩尔）溶液中在0℃。碘甲烷（1.98克，14.0毫摩尔）被缓慢地滴入到该混合物中，并在室温下搅拌2小时。反应完成后，使用水（100毫升×2）和二氯甲烷（100毫升）萃取混合物。通过柱色谱法（乙酸乙酯/正己烷1/15）得到标题化合物（1.7克，75％）。
1H-NMR(600MHz,CDCl3);δ7.45(d,J=12.6Hz,2H),7.15(d,J=12.6Hz,2H),3.69(s,3H),3.58(2H)。
[制备实例26-2]
甲基2-（4-（4-（3-羟基苯氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）苯基）乙酸甲酯
甲基2-（4-（4-（3-羟基苯氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）苯基）乙酸乙酯的合成
双（频哪醇）乙硼烷（1.95克，7.68毫摩尔），PdCl2dppf（171毫克，0.21毫摩尔）和乙酸钾（2.06克，7.68毫摩尔）被放置在反应室中，真空干燥。制备实例18-1中合成的化合物（1.6克，7.0毫摩尔）在5ml脱气的二甲基甲酰胺中溶解，并加入到反应室，随后在85℃下搅拌15小时。将反应混合物冷却至室温，并加入50ml乙酸乙酯和50ml饱和氯化铵萃取。用50毫升的氯化铵洗涤有机层两次，然后用无水硫酸镁干燥，在真空下浓缩，得到深褐色油状物类型的甲基2-（4-（4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基）苯基）乙酸甲酯。该化合物与制备实例5-2中的化合物（1.8克，4.23毫摩尔），和PdCl2dppf（80毫克，0.10毫摩尔）被依次加入到20毫升脱气的二甲基甲酰胺和2N碳酸钠水溶液（2毫升，6.52毫摩尔）。将反应混合物在80℃下搅拌15小时，并冷却至室温。用100ml乙酸乙酯和100ml饱和氯化铵萃取。将有机层用100ml饱和氯化铵洗涤两次，用无水硫酸镁干燥，并在真空下浓缩。柱色谱法（乙酸乙酯/己烷，1/2）得到标题化合物（A）（0.51克，40％）。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ9.61(brs,1H),9.43(brs,1H),8.58(s,1H),7.88(s,1H),7.83(d,J=8.0Hz,2H),7.43(d,J=8.4Hz,2H),7.33-7.30(m,1H),7.20-7.12(m,2H),6.54-6.52(m,1H),3.78(s,2H),3.64(s,3H);LC-MS:392(MH+)
[制备实例27]
甲基-2-（4-（4-（3-（叔-丁基二甲基甲硅烷氧基）苯基氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）苯基）乙酸甲酯
甲基-2-（4-（4-（3-（叔丁基二甲基甲硅烷氧基）苯基氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）苯基）乙酸甲酯的合成
制备实例26-2中制备的化合物（0.51克，1.30毫摩尔）被溶解在10毫升二氯甲烷和5毫升二甲基甲酰胺，咪唑（0.11克，1.69毫摩尔）和叔丁基氯代硅烷（0.24毫克，1.56毫摩尔）中，室温下将混合物搅拌10小时。饱和氯化铵溶液（100毫升）被加入到反应溶液中，然后用乙酸乙酯（100毫升×2）萃取。将有机层用水（100毫升×2）洗涤，用无水硫酸钠干燥，并在真空下浓缩。柱色谱法（乙酸乙酯/正己烷，1:2）得到淡黄色固体的标题化合物（0.49克，74.4％）。
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.69(s,1H),7.64(d,J=8.0Hz,2H),7.59(s,1H),7.36(d,J=8.0Hz,2H),7.28-7.24(m,1H),6.76(brs,1H),7.19(t,J=2.2Hz,1H),7.16-7.16(m,1H),6.76(brs,1H),6.75-6.74(m,1H),3.68(s,2H),1.00(s,H),0.24(s,6H);LC-MS:506(MH+)
[制备实例28]
4-（4-（3-（叔丁基二甲基甲硅烷氧基）苯基氨基）噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基）苯甲酸
4-（4-（3-（叔丁基二甲基甲硅烷氧基）苯基氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）苯甲酸的合成
制备实例6中合成的化合物（0.2克，0.46毫摩尔）溶解在2毫升丙酮中，加入0.4毫升水和高锰酸钾（130毫克，0.82毫摩尔）。该混合物在室温下搅拌3小时。用的HCl和30毫升乙酸乙酯萃取该混合物，并用30毫升水洗涤两次。后用硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩，得到淡黄色固体状的标题化合物（0.2克，96％）。
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ10.44(brs,1H),8.78(s,1H),8.12(t,J=7.6Hz,1H),8.05(d,J=8.0Hz,2H),7.69-7.59(m,3H),7.48(d,J=8.0Hz,1H),7.43(s,1H),7.33(t,J=8.0Hz,1H),6.74(d,J=8.4Hz,1H),1.01(s,9H),0.28(s,6H);LC-MS:478(MH+)
[制备实例29]
2-（4-（4-（3-（叔-丁基二甲基甲硅烷氧基）苯基氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）苯基）乙酸
2-（4-（4-（3-（叔丁基二甲基甲硅烷氧基）苯基氨基）噻吩并[3,2-d〕嘧啶-6-基）苯基）乙酸的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ10.44(br,1H),8.78(s,1H),8.12(t,J=7.6Hz,1H),8.05(d,J=8.0Hz,2H),7.69-7.59(m,2H),7.48(d,J=8.0Hz,1H),7.43(s,1H),7.33(t,J=8.0Hz,1H),6.74(d,J=8.4Hz,1H),3.60(s,2H),1.01(s,9H),0.28(s,6H);LC-MS478(MH+)
[制备实例30]
1-溴-4-（乙氧基甲基）苯的合成
NaOH（0.1克，2.4毫摩尔）溶液中被加入2毫升脱气的二甲基甲酰胺中，后缓慢地加入4-溴苄醇（0.3克，1.6毫摩尔）。加入碘乙烷（0.14毫升，1.76毫摩尔），在室温下搅拌2小时。混合物中加入50毫升2N的HCl，并用50ml乙酸乙酯萃取。将有机层用50毫升水洗涤两次。真空下浓缩后，柱色谱法（乙酸乙酯/正己烷1/10），得到黄色油状的标题化合物（0.17g，48％）。
1H-NMR(600MHz,CDCl3);δ7.46(d,J=8.4Hz,2H),7.21(d,J=8.4Hz,2H),4.45(s,2H),3.55-3.51(m,2H),1.28-1.23(m,3H)
[制备实例31]
乙基4-氨基-2-（甲硫基）噻唑-5-羧酸乙酯
乙基4-氨基-2-（甲硫基）噻唑-5-甲酸叔丁酯的合成
乙烷2-巯基乙酸酯（50克，0.416摩尔）溶解在500毫升的二甲基甲酰胺中，并加入二甲基N-噻吩并二硫代亚氨基碳酸酯（67克，0.416摩尔）和二异丙基胺（112毫升，0.624摩尔）。在100℃加热5小时，将混合物用500ml饱和氯化铵和500ml乙酸乙酯萃取，用硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩。用正己烷洗涤，得到标题化合物（90克，99％）。
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ5.84(brs,2H),4.26(q,J=7.2Hz,2H),2.63(s,3H),1.32(t,J=7.2Hz,3H);LC-MS219(MH+)
[制备实例32]
[制备实例32-1]
乙基4-甲酰胺基-2-（甲硫基）噻唑-5-羧酸乙酯
乙基4-甲酰胺基-2-（甲硫基）噻唑-5-羧酸乙酯的合成
制备实例31合成的化合物（30克，138.05摩尔）和乙酸铵（13.8克，179.03摩尔）用200毫升甲酸混合。回流46小时后，该混合物在真空下浓缩，除去甲酸，用乙酸乙酯和300毫升饱和碳酸氢钠萃取。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩，得到黄色固体状的的标题化合物（29.5克，87.3％）。
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ9.38(s,1H),5.81(brs,1H),4.32(q,J=6.8Hz,2H),2.70(s,3H),1.35(t,J=6.8Hz,3H);LC-MS246(MH+)
[制备实例32-2]
2-（甲硫基）噻唑并[4,5-d〕嘧啶-7（6H）-酮
2-（甲硫基）噻唑并[4,5-d〕嘧啶-7（6H）-酮的合成
将制备实例32-1中合成的化合物（29.5克，0.12摩尔），甲酸铵（22.7克，0.36摩尔），和甲酰胺（28.7毫升，0.72摩尔）混合，并将混合物在140℃加热48小时，接着加入100毫升水。后加入200毫升二***中，在室温下搅拌30分钟。将所合成的固体用正己烷洗涤，得到淡黄色固体状的标题化合物（20.5克，85％）。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ8.83(s,1H),8.60(s,1H),3.38(s,3H);LC-MS202(MH+)
[制备实例32-3]
7-氯-2-（甲硫基）噻唑并[4,5-d〕嘧啶
7-氯-2-（甲硫基）噻唑并[4,5-d〕嘧啶的合成
制备实例32-2中合成的化合物（2克，9.93毫摩尔）和4毫升磷酰氯混合，并在130℃加热15小时。真空下浓缩除去磷酰氯后，加入100毫升的冰水，并搅拌20分钟。将所合成的固体用100ml水和正己烷洗涤，得到淡黄色固体状的标题化合物（0.88克，40.4％）。
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.95(s,1H),2.90(s,3H);LC-MS220(MH+)
[制备实例33]
N-（3-（4-甲氧基苄基氧基）苯基）-2-（甲硫基）噻唑并[4,5-d〕嘧啶-7-胺
N-（3-（4-甲氧基苄基氧基）苯基）-2-（甲硫基）噻唑并[4,5-d〕嘧啶-7-胺的合成
将制备实例32-3中合成的化合物（0.2克，0.91毫摩尔），制备实例1中合成的化合物（0.23克，1.00毫摩尔）和二异丙基胺（0.2毫升，1.09毫摩尔）用2ml异丙醇混合，在80℃加热20小时。通过真空浓缩除去异丙醇后，加入20毫升二氯甲烷和2毫升甲醇，并将该混合物再次在真空下浓缩，除去有机溶剂，然后用正己烷和***研磨，得到白鸽色固体的标题化合物（260毫克，70％）。
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.65(s,1H),7.36-7.30(m,3H),7.07(brs,1H),7.05-7.04(m,1H),6.96-6.90(m,4H),5.30(s,2H),3.81(s,3H),2.79(s,3H);LC-MS412(MH+)
下面描述的优选实例由上面的制备实例的化合物提供。
[优选实例1]
6-溴-2-噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基）-（3-甲氧基-苯基）-胺
（6-溴-2-噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基）-（3-甲氧基-苯基）-胺）（LCB03-0007）的合成
将制备实例3-4合成的化合物（1克，4.00毫摩尔），0.9毫升二异丙基乙胺，和0.56毫升的间氨基苯甲醚，加入到5毫升异丙醇，并回流12小时，然后在真空下浓缩。将反应混合物中加入80毫升乙酸乙酯，并用20毫升的水洗涤两次，并在真空下浓缩。该固体用正己烷洗涤三次，并在真空下浓缩，得到淡黄色固体状的标题化合物（1.05克，78％）。
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ7.41(s,1H),7.34(t,J=8.4Hz,1H),7.20(s,1H),7.10(dd,J=2.0,8.0Hz,1H),7.03(dd,J=2.0,8.0Hz,1H),6.89(dd,J=2.4,8.4Hz,1H),3.85(s,3H);LC-MS336,338(M+,MH+2)
[优选实例2]
3-（6-溴噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-正基氨基）-苯酚
（3-（6-溴-2-噻吩并噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基氨基）-苯酚）（LCB03-0015）的合成
优选实例1中合成的化合物（150毫克，0.45毫摩尔）溶解在5毫升二氯甲烷中。然后，在0℃缓慢地加入0.89毫升1M三溴化硼，并在室温下搅拌12小时。用30毫升二氯甲烷和20毫升碳酸氢钠提取，并在真空下浓缩后，进行柱色谱法（二氯甲烷/甲醇，20/1），得到淡黄色固体状的标题化合物（90毫克，63％）。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6);δ8.60(s,1H),7.65(s,1H),7.19-7.15(m,1H),7.09(d,J=8.0Hz,1H),7.77(s,1H),6.61(d,J=8.0Hz,1H),3.83(s,3H);LC-MS322,324(M+,MH+2)
[优选实例3]
3-[6-（4-甲氧基苯基）-噻吩并噻吩并[3,2-d〕嘧啶-4-正基氨基]-苯酚
（3-[6-（4-甲氧基苯基）-噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基]-苯酚）（LCB03-0017）的合成
将优选实例2中合成的化合物（45毫克，0.14毫摩尔），4-甲氧基苯基硼酸（22毫克，0.15毫摩尔），2M碳酸钾（0.14毫升，0.28毫摩尔），和10毫克四（三苯基膦）paladium混合在1毫升的1,4-二恶烷中，并回流3小时。该混合物用20毫升乙酸乙酯和10毫升的碳酸氢钠溶液洗涤两次，并在真空下浓缩。柱色谱法（二氯甲烷/甲醇，40/1）后，得到淡黄色固体状的标题化合物（27毫克，57％）。
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ9.55(s,1H),9.43(s,1H),8.58(s,1H),7.81(d,J=8.8Hz,2H),7.77(s,1H),7.32(s,1H),7.19(d,J=8.0Hz,1H),7.16(m,1H),7.09(d,J=8.8Hz,2H),6.52(d,J=8.0Hz,1H),3.83(s,3H);LC-MS350(MH+)
[优选实例4]
（3-甲氧基苯基）-（6-噻吩-2-基-噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基）-胺
（（3-甲氧基苯基）-（6-噻吩-2-基-噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基）-胺）（LCB03-0030）的合成
优选实例1中合成的化合物（70毫克，0.21毫摩尔），2-硫代噻吩硼酸（20毫克，0.23毫摩尔），2M碳酸钾（0.46毫升，0.42毫摩尔），和10毫克的钯四膦三尼尔被混合在1毫升1,4-二恶烷，并回流12小时。用20毫升乙酸乙酯和10毫升碳酸氢钠溶液洗涤两次，然后真空下浓缩，柱色谱法（乙酸乙酯/正己烷1/1），得到标题化合物（51毫克，71％），为浅浅黄色固体。
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.69(s,1H),7.46(s,1H),7.40(dd,J=4.8,0.8Hz,1H),7.35(dd,J=4.8,0.8Hz,1H),7.33(t,J=8.0Hz,1H),7.25(t,J=2.4Hz,1H),7.11-7.08(m,2H),6.83-6.80(m,2H),3.85(s,3H);LC-MS340(MH+)
下面的化合物合成方法与优选实例4之一相似。
[优选实例5]
（3-甲氧基苯基）-（6-噻吩-3-基-噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基）-胺
（（3-甲氧基苯基）-（6-噻吩-3-基-噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基）-胺〕(LCB03-0028)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.70(s,1H),7.61-7.60(m,1H),7.49(s,1H),7.44-7.39(m,2H),7.33(t,J=8.0Hz,1H),7.26-7.25(m,1H),7.12-7.10(m,1H),6.83-6.80(m,1H),6.72(s,1H),3.86(s,3H);LC-MS340(MH+)
[优选实例6]
（6-呋喃-2-基-噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基）-（3-甲氧基）-胺
（（6-呋喃-2-基-噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基）-（3-甲氧基苯基）-胺）（LCB03-0023）的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.70(s,1H),7.52(m,2H),7.40(t,J=8.0Hz,1H),7.25(t,J=2.4Hz,1H),7.11-7.08(m,1H),6.84-6.81(m,1H),6.78(d,J=7.6Hz,1H),6.73(s,1H),6.53(dd,J=3.6,2.4Hz,1H),3.86(s,3H);LC-MS324(MH+)
[优选实例7]
（6-呋喃-3-基-噻吩并[3,2-d〕嘧啶-4-基）-（3-甲氧基）-胺
（（6-呋喃-3-基-噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基）-（3-甲氧基苯基）-胺）（LCB03-0024）的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.71(s,1H),7.79(s,1H),7.50(t,J=1.6Hz,1H),7.40(s,1H),7.32(t,J=8.0Hz,1H),7.23(t,J=1.6Hz,1H),7.10-7.08(m,1H),6.83-6.80(m,1H),6.68(dd,J=1.6,0.8Hz,1H),3.84(s,3H);LC-MS324(MH+)
[优选实例8]
N-（3-甲氧基苯基）-6-苯基噻吩并[3,2-d〕嘧啶-4-胺
（N-（3-甲氧基苯基）-6-苯基噻吩并[3,2-d〕嘧啶-4-胺）（LCB03-0006）的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.71(s,1H),7.68(d,J=6.8Hz,2H),7.60(s,1H),5.46-7.41(m,4H),7.34-7.30(m,2H),7.13-7.11(m,1H),7.03(brs,1H),6.82-6.80(m,1H),3.48(s,3H);LC-MS:334(MH+)
[优选实例9]
4-（4-（3-甲氧基苯基氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）苯酚
（4-（4-（3-甲氧基苯基氨基）噻吩并[3,2-d〕嘧啶-6-基）苯酚）（LCB03-0016）的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.44(s,1H),7.62(d,J=8.8Hz,2),7.42(s,1H),7.32(t,J=2.2Hz,1H),7.25-7.19(m,2H),6.85(d,J=8.8Hz,2H),6.74-6.71(m,1H),3.79(s,3H);LC-MS350(MH+)
[优选实例10]
4-（4-（3-甲氧基苯基氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）苄腈
（4-（4-（3-甲氧基苯基氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）苄腈）（LCB03-0009）的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.78(s,1H),7.79-7.73(m,4H),7.70(s,1H),7.35(t,J=8.4Hz,1H),7.24-7.21(m,1H),7.11-7.10(m,1H),6.86-6.84(m,1H),6.82(brs,1H),3.86(s,3H);LC-MS359(MH+)
[优选实例11]
N-（3-甲氧基苯基）-6-（噻吩-2-基）噻吩并[3,2-d〕嘧啶-4-胺
（N-（3-甲氧基苯基）-6-（噻吩-2-基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-胺）（LCB03-0027）的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.69(s,1H),7.46(s,1H),7.40(dd,J=4.8,0.8Hz,1H),7.35(dd,J=4.8,0.8Hz,1H),7.33(t,J=8.0Hz,1H),7.25(t,J=2.4Hz,1H),7.11-7.08(m,2H),6.83-6.80(m,2H),3.85(s,3H);LC-MS340(MH+)
[优选实例12]
3-（6-噻吩-2-基-噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基）-苯酚
（3-（6-噻吩-2-基-噻吩并[3,2-d〕嘧啶-4-基氨基）-苯酚）的合成
优选实例4中合成的化合物（40毫克，0.12毫摩尔）溶解在2毫升二氯甲烷中，然后慢慢地加入0.3毫升1M三溴化硼在0℃，在室温下搅拌12小时。然后，混合物用12毫升水和50毫升的乙酸乙酯在真空下浓缩。随后通过柱色谱法（二氯甲烷/甲醇，20/1），得到黄色固体的标题化合物（15毫克，39％）。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ9.53(s,1H),9.39(s,1H),8.52(s,1H),7.71(d,J=1.2Hz,1H),7.63(s,1H),7.61(d,J=1.2Hz,1H),7.27(s,1H),7.19-7.07(m,3H),6.48-6.47(m,1H);LC-MS326(MH+)
以下化合物的合成方法与上面的优选实例12相似。
[优选实例13]
3-（6-噻吩-3-基-噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基）-苯酚
（3-（6-噻吩-3-基-噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基）-苯酚）（LCB03-0031）的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ10.89(s,1H),8.86(s,1H),8.21(t,J=1.2Hz,1H),7.76(dd,J=4.8,2.4Hz,1H),7.72(s,1H),7.61(d,J=4.8Hz,1H),7.21(t,J=8.0Hz,1H),7.08(s,1H),7.05(d,J=8.4Hz,1H),6.68(d,J=8.0Hz,1H);LC-MS326(MH+)
[优选实例14]
3-（6-（苯基噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基）苯酚
（3-（6-苯基噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基）苯酚）（LCB03-0008）的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ8.82(s,1H),7.89-7.87(m,3H),7.58-7.54(m,3H),7.24(t,J=8.0Hz,1H),7.16-7.11(m,2H),6.71-6.69(m,1H);LC-MS320(MH+)
[优选实例15]
4-（4-（3-羟基苯氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）苄腈
（4-（4-（3-羟基苯氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）苄腈）（LCB03-0013）的合成
1H-NMR(400MHz,MeOH-d4);δ8.43(s,1H),7.90(d,J=8.4Hz,2H),7.76(d,J=8.4Hz,2H),7.71(s,1H),7.16(t,J=2.0Hz,1H),7.11(t,J=8.0Hz,1H),7.01-6.99(m,1H),6.57-6.55(m,1H);LC-MS345(MH+)
[优选实例16]
3-（6-（4-氯苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基）苯酚
（3-（6-（4-氯苯基）噻吩并[3,2-d〕嘧啶-4-基氨基）苯酚）（LCB03-0019）的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ9.59(s,1H),9.40(s,1H),8.53(s,1H),7.93(s.1H),7.84(d,J=6.8Hz,2H),7.52-7.49(m,1H),7.26(t,J=2.0Hz,1H),7.14-7.07(m,2H),6.50-6.47(m,1H);LC-MS354(MH+)
[优选实例17]
N-（3-甲氧基苯基）-6-（4-（2-吗啉基乙氧基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-胺
（N-（3-甲氧基苯基）-6-（4-（2-吗啉基乙氧基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-胺）（LCB03-0018）的合成
N-（3-甲氧基苯基）-6-（4-溴苯基）噻吩并[3,2-d〕嘧啶-4-胺（0.26克，0.76毫摩尔）溶解于5毫升脱气的二甲基甲酰胺中，并加入4-（2-羟乙基）吗啉（0.12毫升，0.92毫摩尔）和三苯基膦（241毫克，0.92毫摩尔）。将混合物进一步在0℃下加入DIAD（0.18毫升，0.92毫摩尔），并在室温下搅拌15小时。用50毫升饱和碳酸氢钠和50毫升的乙酸乙酯提取，将有机层用50ml水洗涤两次，用硫酸镁干燥并过滤。在真空下浓缩后，进行柱色谱法（二氯甲烷/甲醇，15/1），得到的标题化合物（100毫克，29％），为象牙色固体。
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.69(s,1H),7.61(d,J=8.8Hz,2H),7.49(s,1H),7.32(t,J=7.6Hz,1H),7.26(t,J=2.0Hz,1H),7.12-7.10(m,1H),6.97(d,J=8.8Hz,2H),6.86(brs,1H),6.81-6.78(m,1H),4.16(t,J=6.0Hz,2H),3.76-3.73(m,4H),2.83(t,J=5.6Hz,2H),2.60-2.58(m,4H);LC-MS463(MH+)
以下化合物的合成方法与上面的优选实例17相似。
[优选实例18]
N-（3-甲氧基苯基）-6-（4-（2-（哌嗪-1-基）乙氧基）苯基）噻吩并[3,2-d〕嘧啶-4-胺
（N-（3-甲氧基苯基）-6-（4-（2-（哌嗪-1-基）乙氧基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-胺）（LCB03-0029）的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ9.64(s,1H),8.58(s,1H),7.82-7.79(m,3H),7.48-7.42(m,2H),7.27(t,J=8.4Hz,1H),7.10(d,J=8.8Hz,2H),6.70-6.82(m,1H),4.16(t,J=5.6Hz,2H),2.95-2.92(m,4H),2.76(t,J=5.6Hz,2H),2.59-2.51(m,4H);LC-MS463(MH+)
[优选实例19]
叔-丁基4-（2-（4-（3-甲氧基苯基氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）苯氧基）乙基）哌嗪-1-甲酸叔丁酯
（叔丁基4-（2-（4-（4-（3-甲氧基苯基氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）苯氧基）乙基）哌嗪-1-羧酸酯）（LCB030025）的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.70(s,1H),7.62(d,J=8.8Hz,2H),7.51(s,1H),7.34-7.30(m,2H),7.12-7.0(m,1H),6.97(d,J=8.8Hz,2H),6.81-6.78(m,1H),6.70(s,1H),4.16(t,J=5.6Hz,2H),3.47-3.45(m,4H),2.84(t,J=5.6Hz,2H),2.55-2.50(m,4H),1.55(s,9H);LC-MS562(MH+)
[优选实例20]
N-（3-甲氧基苯基）-6-（4-（2-（吡咯烷-1-基）乙氧基）苯基）噻吩并[3,2-d〕嘧啶-4-胺
（N-（3-甲氧基苯基）-6-（4-（2-（吡咯烷-1-基）乙氧基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-胺）（LCB03-0026）的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.69(s,1H),7.62(d,J=8.8Hz,2H),7.49(s,1H),7.34-7.28(m,2H),7.12-7.10(m,1H),6.98(d,J=8.8Hz,2H),6.81-6.78(m,1H),6.71(brs1H),4.17(t,J=6.4Hz,2H),2.96-2.95(m,3H),2.67-2.66(m,2H),2.07-2.02(m,1H),1.83-1.80(m,2H),1.65-1.63(m,2H);LC-MS447(MH+)
[优选实例21]
N-（3-甲氧基苯基）-6-（4-噻吩氧基苯基）噻吩并[3,2-d〕嘧啶-4-胺
（N-（3-甲氧基苯基）-6-（4-噻吩氧基苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-胺）（LCB03-0021）的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.69(s,1H),7.61(d,J=8.8Hz,2H),7.49(s,1H),7.35-7.30(m,8H),7.127.10(m,1H),6.96(d,J=8.8Hz,1H),6.81-6.95(m,1H),6.71(brs,1H),4.23(t,J=7.2Hz,2H),3.84(s,3H),3.13(t,J=6.8Hz,2H);LC-MS454(MH+)
[优选实例22]
N-（3-甲氧基苯基）-6-（4-（2-（吡啶-2-基）乙氧基）苯基）噻吩并[3,2-d〕嘧啶-4-胺
（N-（3-甲氧基苯基）-6-（4-（2-（吡啶-2-基）乙氧基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-胺）（LCB03-0022）的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ10.07(s,1H),9.65(s,1H),8.58(s,1H),7.72-7.70(m,4H),7.48(t,J=2.0Hz,1H),7.45-7.44(m,1H),7.30-7.29(m,1H),6.92(d,J=8.8Hz,2H),6.81(d,J=7.6Hz,1H),6.69(dd,J=2.0,8.4Hz,1H),3.76(s,3H),3.72-3.71(m,2H),3.20-3.17(m,2H);LC-MS454(MH+)
[优选实例23]
3-（6-（4-（2-吗啉基乙氧基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基）苯酚
（3-（6-（4-（2-吗啉基乙氧基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基）苯酚）（LCB03-0020）的合成
优选实例17中合成的化合物（75毫克，0.16毫摩尔）溶解在1毫升二氯甲烷中，并慢慢地加入1M的三溴化硼（0.73毫升，0.64毫摩尔）在0℃，然后在室温下搅拌12小时。用30毫升二氯甲烷和20毫升的碳酸氢钠溶液中萃取该混合物，并在真空下浓缩，随后通过柱色谱法（二氯甲烷/甲醇，15/1），得到黄色固体的标题化合物（22毫克，30％）。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ9.49(brs,1H),9.38(s,1H),8.50(s,1H),7.73(t,J=8.0Hz,2H),7.26(s,1H),7.12-7.03(m,4H),6.46(d,J=6.8Hz,1H),4.13-4.11(m,2H),3.53(m,4H),3.12-3.10(m,4H),2.67-2.66(m,2H);LC-MS449(MH+)
[优选实例24]
3-（6-（4-（吗啉代甲基）苯基）噻吩并[3,2-d〕嘧啶-4-基氨基）苯酚
（3-（6-（4-（吗啉代甲基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基）苯酚）（LCB03-0032）的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ11.67(br,1H),10.99(br,1H),8.84(s,1H),7.97-7.94(m,3H),7.83(d,J=8.4Hz,2H),7.24(t,J=8.0Hz,1H),7.17(brs,1H),7.12(d,J=8.0Hz,1H),6.72(d,J=7.6Hz,1H),4.40(s,2H),3.95-3.92(m,2H),3.87-3.81(m,2H),3.25-3.23(m,2H),3.14-3.12(m,2H);LC-MS419(MH+)
[优选实例25]
3-（6-（4-（哌嗪-1-基甲基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基）苯酚（3-（6-（4-（哌嗪-1-基甲基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基）苯酚）（LCB03-0033）的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ9.59(br,2H),8.80(s,1H),7.97-7.95(m,3H),7.83-7.81(m,2H),7.23(t,J=7.6Hz,1H),7.21(s,1H),7.14-7.12(m,1H),6.70(d,J=7.6Hz,1H),4.43(s,2H),3.57-3.37(m,4H),3.36-3.30(M,2H),2.53-2.50(m,2H);LC-MS418(MH+)
[优选实例26]
3-（6-（4-（哌啶基甲基）苯基）噻吩并[3,2-d〕嘧啶-4-基氨基）苯酚
（3-（6-（4-（哌啶-1-基甲基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基）苯酚）（LCB03-0035）的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ10.99(brs,1H),10.82(brs,1H),8.82(s,1H),7.97(s,1H),7.95(d,J=8.0Hz,2H),7.81(d,J=8.0Hz,2H),7.24(t,J=8.0Hz,1H),7.22(brs,1H),7.13(d,J=7.6Hz,1H),6.71(d,J=8.0Hz,1H),4.33(s,2H),3.71-3.67(m,1H),3.50-3.28(m,5H),2.87-2.85(m,1H),1.79-1.68(m,3H);LC-MS417(MH+)
[优选实例27]
3-（6-（4-（（4-甲基哌嗪-1-基-甲基）苯基）噻吩并[3,2-d〕嘧啶-4-基氨基）苯酚
（3-（6-（4-（（4-甲基哌嗪-1-基）甲基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基）苯酚）（LCB03-0036）的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ11.03(brs,1H),8.84(s,1H),7.96(s,1H),7.95(d,J=8.4Hz,2H),7.83-7.81(m,2H),7.25(t,J=8.4Hz,1H),7.17(s,1H),7.12(d,J=7.6Hz,1H),6.73(d,J=7.6Hz,1H),4.39(s,2H),3.73-3.34(m,6H),3.26-3.24(m,2H),2.89(s,3H);LC-MS432(MH+)
[优选实例28]
3-（（6-（4-（（二乙基氨基）甲基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基）苯酚
（3-（（6-（4-（（二乙基氨基）甲基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基）苯酚）（LCB03-0037）的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ10.86(brs,1H),8.83(s,1H),7.97(s,1H),7.95(d,J=8.Hz,2H),7.85(d,J=8.4Hz,2H),7.24(t,J=8.4Hz,1H),7.18(s,1H),7.12(d,J=8.0Hz,1H),6.73(d,J=8.4Hz,1H),4.36(d,J=5.2Hz,2H),3.07-3.04(m,4H),1.27(t,J=7.2Hz,6H);LC-MS405(MH+)
[优选实例29]
3-（（6-（4-（（环丙基甲基氨基）甲基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基）苯酚
（3-（（6-（4-（（环丙基甲基氨基）甲基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基）苯酚）（LCB03-0040）的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ9.50-9.48(m,2H),8.77(s,1H),7.95-7.93(m,3H),7.73(d,J=8.0Hz,2H),7.24-7.13(m,3H),6.67(d,J=7.6Hz,1H),4.30(s,2H),3.70-3.67(m,1H),0.91-0.75(m,2H),0.59-0.54(m,2H);LC-MS389(MH+)
[优选实例30]
3-（（6-（4-（（异丁基氨基）甲基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基）苯酚
（3-（（6-（4-（（异丁基氨基）甲基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基）苯酚）（LCB03-0041）的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ9.20(brs,2H),8.78(s,1H),7.95-7.93(m,3H),7.75(d,J=8.0Hz,2H),7.24-7.12(m,3H),6.68(d,J=7.2Hz,1H),4.21(s,2H),2.75-2.74(m,2H),2.08-2.02(m,1H),0.95(d,J=6.8Hz,6H);LC-MS405(MH+)
[优选实例31]
3-（（6-（4-（（乙基氨基）甲基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基）苯酚
（3-（（6-（4-（（乙基氨基）甲基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基）甲基）苯酚）（LCB03-0042）的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ9.11(brs,2H),8.73(s,1H),7.95-7.94(m,3H),7.70(d,J=8.4Hz,2H),7.22-7.13(m,3H),6.64(d,J=7.2Hz,1H),4.20(s,2H),3.01-3.98(m,2H),1.24(t,J=7.2Hz,3H);LC-MS377(MH+)
[优选实例32]
（3-（4-（3-羟基苯氨基）噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基）苯基（吡咯烷-1-基）甲酮
（（3-（4-（3-羟基苯氨基）噻吩并[3,2-d〕嘧啶-6-基）苯基）（吡咯烷-1-基）甲酮））（LCB03-0053）的合成
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6);δ11.09(brs,1H),8.85(s,1H),7.99-7.97(m,2H),7.93(d,J=7.2Hz,1H),7.67(d,J=7.2Hz,1H),7.63(t,J=7.8Hz,1H),7.25(t,J=8.4Hz,1),7.17(s,1H),7.12(d,J=7.8Hz,1H),6.73(d,J=7.2Hz,1H),3.52-3.49(m,2H),3.44-3.42(m,2H),1.91-1.82(m,4H);LC-MS417(MH+)
[优选实例33]
N，N-二乙基-3-（4-（3-羟基苯氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）苯甲酰胺
（N，N-二乙基-3-（4-（3-羟基苯氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）苯甲酰氨基））（LCB03-0054）的合成
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6);δ8.82(s,1H),7.99(s,1H),7.91(d,J=7.8Hz,1H),7.82(s,1H),7.63(t,J=7.8Hz,1H),7.50(d,J=7.2Hz,1H),7.24(t,J=7.8Hz,1H),7.17(s,1H),7.12(d,J=7.2Hz,1H),6.70(d,J=7.2Hz,1H),3.47-3.45(m,2H),3.22-3.21(m,2H),1.19-1.18(m,3H),1.10-1.07(m,3H);LC-MS419(MH+)
[优选实例34]
（3-（4-（3-羟基苯氨基）噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基）（4-甲基哌嗪-1-基）苯基甲酮
（（3-（4-（3-羟基苯氨基）噻吩并[3,2-d〕嘧啶-6-基）苯基）（4-甲基哌嗪-1-基）甲酮））（LCB03-0055）的合成
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6);δ9.70(brs,1H),8.78(s,1H),8.03-7.95(m,3H),7.66-7.59(m,2H),7.23-7.15(m,4H),6.68(s,1H),3.71-3.66(m,2H),3.46-3.39(m,2H),3.16-3.12(m,4H),2.81(s,3H);LC-MS482(MH+)
[优选实例35]
3-（6-（4-吗啉代苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基）苯酚
（3-（6-（4-吗啉代苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基）苯酚）（LCB03-0082）的合成
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6);δ9.50(s,1H),8.53(s,1H),7.71(m,3H),7.32(s,1H),7.15(m,2H),7.06(d,J=8.82Hz,1H),6.52(d,J=8.0Hz,1H),3.76(t,J=4.8Hz,4H),3.23(t,J=4.8Hz,4H);LC-MS405(MH+)
[优选实例36]
[阶段1]
N-（3-（叔丁基二甲基甲硅烷氧基）苯基）-6-（4-（吡咯烷-1-基甲基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-胺
（N-（3-（叔丁基二甲基甲硅烷氧基）苯基）-6-（4-（吡咯烷-1-基甲基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-胺）的合成
制备实例6中合成的化合物（1.7克，3.68毫摩尔）和吡咯烷（0.46毫升，5.52毫摩尔）依次溶解到I毫升二氯乙烷的混合物中，并搅拌20分钟，添加乙酸钠（0.44克，5.52毫摩尔）和三乙酰氧基硼氢化钠（1.56克，7.36毫摩尔）后，再在室温下搅拌7小时。将反应混合物用130毫升二氯甲烷和130毫升饱和氯化铵溶液提取。将有机层用硫酸钠干燥，在真空下浓缩，然后通过柱色谱法（二氯甲烷/甲醇，1/15），得到标题化合物（1.4克，73.7％）。
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.68(s,1H),7.62(d,J=8.0Hz,2H),7.58(s,1H),7.41(d,J=8.0Hz,2H),7.28-7.24(m,1H),7.17-7.14(m,1H),7.20-7.19(m,1H),6.99(brs,1H),6.76-6.74(m,1H),3.68(s,2H),2.56(m,4H),1.85-1.78(m,4H),1.00(s,9H),0.23(s,6H);LC-MS517(MH+)
[阶段2]
3-（6-（4-（吡咯烷-1-基甲基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基）苯酚盐酸盐
（3-（6-（4-（吡咯烷-1-基甲基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基）苯酚盐酸）（LCB03-0034）的合成
上述步骤1中合成的化合物（15毫克，0.03毫摩尔）溶解在1毫升二氯甲烷中的溶液中，添加用1毫升4Mc表示盐酸/1,4-二恶烷，并在室温下搅拌15小时，真空下浓缩。将反应混合物进一步用二氯甲烷，甲醇，二***，减压浓缩，真空干燥，得到标题化合物（12毫克，94％），是淡黄色固体。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ11.29(brs,1H),11.03(brs,1H),8.84(s,1H),7.96(s,1H),7.94(d,J=8.0Hz,2H),7.82(d,J=8.0Hz,2H),7.25(t,J=8.0Hz,2H),7.17(s,1H),7.12(d,J=7.6Hz,1H),6.73(d,J=7.2Hz,1H),4.42(d,J=6.0Hz,2H),3.39-3.36(m,2H),3.08-3.04(m,2H),2.02-1.89(m,4H);LC-MS:403(MH+)
以下化合物的合成方法与上面的优选实例36相似。
[优选实例37]
[阶段1]
甲基1-（4-（4-（3-（叔丁基二甲基甲硅烷氧基）苯基氨基）噻吩并[3,2-d〕嘧啶-6-基）苄基）吡咯烷-2-甲酸叔丁酯
（甲基1-（4-（4-（3-（叔丁基二甲基甲硅烷氧基）苯基氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）苄基）吡咯烷-2-甲酸叔丁酯）的合成
1H-NMR(600MHz,CDCl3);δ8.67(s,1H),7.60(d,J=7.8Hz,2H),7.57(s,1H),7.39(d,J=7.8Hz,2H),7.24-7.23(m,2H),7.17(t,J=2.4Hz,1H),7.13-7.12(m,1H),6.74-6.72(m,1H),3.94(d,J=7.2Hz,1H),3.64(s,3H),3.57(d,J=7.2Hz,1H),3.28-3.25(m,1H),3.05-3.02(m,1H),2.37(q,J=8.4Hz,1H),2.15-2.12(m,1H),1.98-1.76(m,3H),1.04(s,9H),0.23(s,6H);LC-MS575(MH+)
[阶段2]
甲基1-（4-（4-（3-羟基苯氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）苄基）吡咯烷-2-羧酸乙酯盐酸盐
（甲基1-（4-（4-（3-羟基苯氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）苄基）吡咯烷-2-羧酸乙酯，盐酸）（LCB03-0056）的合成
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6);δ10.75(brs,1H),9.72(brs,1H),8.79(s,1H),7.94(s,1H),7.92(d,J=7.8Hz,2H),7.69(d,J=6.6Hz,2H),7.20(t,J=7.8Hz,1H),7.16(s,1H),7.10(d,J=7.2Hz,1H),6.78(d,J=7.2Hz,1H),4.57-4.40(m,3H),3.46-3.44(m,2H),3.28-3.27(m,1H),2.03-2.02(m,2H),1.89-1.88(m,1H);LC-MS:461(MH+)
[优选实例38]
[阶段1]
N-（3-（叔-丁基二甲基甲硅烷氧基）苯基）-6-（4-（（4-甲基哌啶-1-基）甲基）苯基噻吩并[3,2-d〕嘧啶-4-胺
（N-（3-（叔丁基二甲基甲硅烷氧基）苯基）-6-（4-（（4-甲基哌啶-1-基）甲基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-胺）的合成
1H-NMR(600MHz,CDCl3);δ7.63(d,J=7.8Hz,2H),7.59(s,1H),7.40(d,J=8.4Hz,2H),7.28(t,J=8.4Hz,1H),7.20-7.19(m,2H),7.16-7.15(m,1H),6.75(dd,J=2.4,8.4Hz,1H),6.73(brs,1H),3.52(s,2H),2.86-2.84(m,2H),2.10-1.94(m,3H),1.62-1.60(m,4H),1.00(s,9H),0.93(d,J=7.2Hz,3H),0.09(s,6H);LC-MS545(MH+)
[阶段2]
3-（6-（4-（（4-甲基哌啶-1-基）甲基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基）苯酚盐酸盐
（3-（6-（4-（（4-甲基哌啶-1-基）甲基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基）苯酚盐酸）（LCB03-0058）的合成
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6);δ8.79(s,1H),8.00-7.95(m,3H),7.78(d,J=7.8Hz,1H),7.14(d,J=7.8Hz,1H),6.70-6.69(m,1H),4.32(d,J=4.8Hz,2H),3.32-3.31(m,1H),2.93-2.88(m,1H),1.80-1.76(m,2H),1.49-1.43(m,2H),1.10-1.09(m,1H),0.91(d,J=6.0Hz,3H);LC-MS:431(MH+)
[优选实例39]
[阶段1]
N-（3-（叔丁基二甲基甲硅烷氧基）苯基）-6-（4-（吡咯烷-1-基甲基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-胺
（N-（3-（叔丁基二甲基甲硅烷氧基）苯基）-6-（4-（吡咯烷-1-基甲基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-胺）的合成
1H-NMR(600MHz,CDCl3);δ8.67(s,1H),7.60(d,J=7.8Hz,2H),7.59(s,1H),7.48(d,J=8.4Hz,2H),7.28-7.23(m,1H),7.20-7.19(m,1H),7.18-7.17(m,1H),7.15-7.13(m,1H),6.76-6.75(m,1H),3.83(s,2H),2.51-2.50(m,2H),2.04-2.02(m,1H),1.67-1.65(m,1H),1.60-1.58(m,2H),1.35-1.32(m,2H),1.07(d.J=6.6Hz,6H),1.00(s,9H),0.23(s,6H);LC-MS559(MH+)
[阶段2]
3-（6-（4-（（（2R，6S）-2,6-二甲基哌啶-1-基）甲基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基）苯酚盐酸盐
（3-（6-（4-（（（2R，6S）-2,6-二甲基哌嗪-1-基）甲基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基）苯酚。盐酸）（LCB030059）的合成
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6);δ8.78(s,1H),7.99-7.93(m,3H),7.78(d,J=8.4Hz,1H),7.74(d,J=8.4Hz,1H),7.24-7.21(m,2H),7.14-7.13(m,1H),6.89-6.88(m,1H),4.56(s,1H),4.39(s,1H),3.38-3.36(m,2H),3.09-3.08(m,1H),1.85-1.82(m,1H),1.76-1.70(m,3H),1.68-1.60(m,1H),1.56(d,J=6.0Hz,3H),1.30(d,J=6.6Hz,3H);LC-MS:445(MH+)
[优选实例40]
[阶段1]
1-（4-（4-（3-（叔丁基二甲基甲硅烷氧基）苯基氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）苄基）吡咯烷-2-甲酰胺
（1-（4-（4-（3-（叔丁基二甲基甲硅烷氧基）苯基氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）苄基）吡咯烷-2-甲酰胺）的合成
1H-NMR(600MHz,CDCl3);δ8.72(s,1H),7.66(d,J=7.8Hz,2H),7.60(s,1H),7.38(d,J=7.8Hz,2H),7.29(t,J=7.2Hz,1H),7.20-7.15(m,2H),6.87(brs,1H),6.76(dd,J=2.4,8.4Hz,1H),5.40(s,1H),3.98(d,J=13.8Hz,1H),3.55(d,J=13.8Hz,1H),3.22(dd,J=5.4,10.2Hz,1H),3.08-3.00(m,1H),2.40-2.35(m,1H),2.29-2.24(m,1H),2.08-1.94(m,2H),1.84-1.76(m,2H),1.00(s,9H),0.25(s,6H);LC-MS560(MH+)
[阶段2]
1-（4-（4-（3-羟基苯氨基）噻吩并[3,2-d〕嘧啶-6-基）苄基）吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐
（1-（4-（4-（3-羟基苯氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）苄基）吡咯烷-2-甲酰胺盐酸）（LCB03-0068）的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ9.78(brs,1H),8.81(s,1H),8.06(s,1H),7.97(s,1H),7.93(d,J=8.0Hz,2H),7.70-7.68(m,1H),7.46(brs,1H),7.25-7.10(m,3H),6.70(d,J=8.0Hz,1H),4.49-4.40(m,3H),4.17(br,2H),3.35-3.32(m,2H),2.08-2.07(m,2H),1.91-1.84(m,2H);LC-MS:446(MH+)
[优选实例41]
[阶段1]
2-（4-（4-（3-（叔丁基二甲基甲硅烷氧基）苯基氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）苄基氨基）乙醇
（2-（4-（4-（3-（叔丁基二甲基甲硅烷氧基）苯基氨基）噻吩并[3,2-d〕嘧啶-6-基）苄基氨基）乙醇）的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.67(s,1H),7.61(d,J=8.0Hz,2H),7.57(s,1H),7.39(d,J=8.0Hz,2H),7.26(t,J=8.0Hz,1H),7.19-7.14(m,2H),6.77-6.74(m,1H),3.88(s,2H),3.66-3.64(m,2H),2.04-2.01(m,2H),1.00(s,9H),0.23(s,6H);LC-MS507(MH+)
[阶段2]
3-（6-（4-（（2-羟乙基氨基）甲基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基）苯酚盐酸盐
（3-（6-（4-（（2-羟乙基氨基）甲基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基）苯酚。盐酸）（LCB03-0070）的合成
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6);δ9.23(brs,2H),8.77(s,1H),7.95(s,1H),7.94(d,J=7.2Hz,2H),7.72(d,J=7.2Hz,2H),7.23-7.20(m,2H),7.14-7.13(m,1H),6.67-6.66(m,1H),4.23(t,J=5.4Hz,2H),3.72-3.67(m,2H),2.99-2.98(m,2H);LC-MS393(MH+)
[优选实例42]
6-（4-（吡咯烷-1-基甲基）苯基）-N-（3-（三氟甲基）苯基）噻吩并[3,2-d〕嘧啶-4-胺
（6-（4-（吡咯烷-1-基甲基）苯基）-N-（3-（三氟甲基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-胺）（LCB03-0077）的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.76(s,1H),7.99(s,1H),7.89(d,J=8Hz,1H),7.66-7.63(m,3H),7.53(t,J=8Hz,1H),7.44(m,3H),7.05(br,1H),3.68(s,2H),2.55(s,4H),1.81(s,4H);LC-MS454(MH+)
[优选实例43]
N-（3-（二氟甲基）苯基）-6-（4-（吡咯烷-1-基甲基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-胺
（N-（3-（二氟甲基）苯基）-6-（4-（吡咯烷-1-基甲基）苯基）噻吩并[3,2-d〕嘧啶-4-胺）（LCB03-0078）的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.75(s,1H),7.87(s,1H),7.79(d,J=8.0Hz,1H),7.69-7.63(m,3H),7.51(m,2H),7.36(d,J=8.0Hz,1H),6.90(brs,1H),6.70(t,J=56.4Hz,1H),3.79(s,2H),2.69(s,4H),1.88(s,4H);LC-MS436(MH+)
[优选实例44]
[阶段1]
1-（4-（4-（3-（叔-丁基二甲基甲硅烷氧基）苯基氨基）噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基）苄基）吡咯烷-3-醇
（1-（4-（4-（3-（叔丁基二甲基甲硅烷氧基）苯基氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）苄基）吡咯烷-3-醇）的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.69(s,1H),7.63(d,J=5.2Hz,2H),7.59(s,1H),7.41(d,J=5.6Hz,2H),7.28-7.25(m,1H),7.19(t,J=1.6Hz,1H),7.15(d,J=5.2Hz,1H),6.18(br,1H),6.75(d,J=5.2Hz,1H),4.36-4.35(m,1H),3.69(s,2H),2.93-2.89(m,1H),2.72(d,J=6.4Hz,1H),2.59-2.56(m,1H),2.36-2.33(m,1H),2.25-2.19(m,1H),2.04-2.02(m,1H),1.80-1.76(m,1H),1.00(s,9H),0.24(s,6H);LC-MS533.2(MH+)
[阶段2]
1-（4-（4-（3-羟基苯氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）苄基）吡咯烷-3-醇盐酸盐
（1-（4-（4-（3-羟基苯氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）苄基）吡咯烷-3-醇盐酸）（LCB03-0072）的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ10.82(br,1H),9.71(br,1H),8.74(s,1H),7.96(m,3H),7.76(m,2H),7.20(m,3H),6.65(d,J=8.4Hz,1H),4.45(m,4H),3.71-3.43(m,3H),2.40(m,1H),2.13(m,1H),2.02(m,1H));LC-MS419.2(MH+)
[优选实例45]
3-（6-（4-（（2-（羟甲基）-1-吡咯烷基）甲基）苯基）噻吩并[3,2-d〕嘧啶-4-基氨基）苯酚盐酸盐
（3-（6-（4-（（2-（羟甲基）吡咯烷-1-基）甲基）苯基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-4-基氨基）苯酚，盐酸）（LCB030057）的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ8.89(s,1H),8.02(s,1H),8.17-7.98(m,2H),7.77-7.76(m,2H),7.30-7.27(m,1H),7.26(s,1H),7.17(d,J=7.2Hz,1H),6.75(d,J=7.2Hz,1H),4.69(dd,J=2.8,8.8Hz,1H),4.38(dd,J=4.4,8.8HZ,1H),3.75-3.64(m,3H),3.32-3.31(m,1H),3.21-3.17(m,1H),2.18-2.13(m,1H),2.02-2.00(m,1H),1.91-1.80(m,2H);LC-MS:433(MH+)
[优选实例46]
1-（4-（4-（3-羟基苯氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）苄基）吡咯烷-2-羧酸盐酸盐
（1-（4-（4-（3-羟基苯氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）苄基）吡咯烷-2-羧酸盐酸）（LCB03-0069）的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ8.65(s,1H),7.98(s,1H),7.96(d,J=8.4Hz,2H),7.68(d,J=8.4Hz,2H),7.27(s,1H),7.18-7.17(m,2H),6.59-6.58(m,1H),4.55-4.39(m,2H),3.45-3.40(m,3H),2.51-2.49(m,2H);LC-MS:447(MH+)
[优选实例47]
4-（4-（3-羟基苯氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）-N-（1-羟基丙烷-2-基）苯甲酰胺盐酸盐
（4-（4-（3-羟基苯氨基）噻吩并〔3,2-d]嘧啶-6-基）-N-（1-羟基丙烷-2-基）苯甲酰胺盐酸））（LCB03-0074）的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ10.65(brs,1H),8.80(s,1H),8.29(d,J=8.0Hz,1H),8.04-7.95(m,4H),7.24(d,J=8.0Hz,1H),7.21(s,1H),7.14(d,J=7.6Hz,1H),6.68(d,J=8.4Hz,1H),4.07-4.02(m,1H),3.52-3.49(m,2H),1.10(d,J=8.0Hz,3H);LC-MS421(MH+)
[优选实例48]
[阶段1]
N-（3-（叔-丁基二甲基甲硅烷氧基）苯基）-6-（3-（哌啶-1-基甲基）苯基）噻吩并[3,2-d〕嘧啶电子-4-胺
（N-（3-（叔丁基二甲基甲硅烷氧基）苯基）-6-（3-（哌啶-1-基甲基）苯基）噻吩并[3,2-d〕嘧啶-4-胺）的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.70(s,1H),7.66(s,1H),7.62(s,1H),7.57-7.56(m,1H),7.39-7.38(m,2H),7.27-7.25(m,1H),7.21(m,1H),7.17-7.16(m,1H),6.76-6.73(m,2H),3.52(s,2H),2.41-2.39(m,4H),1.62-1.58(m,4H),1.45-1.44(m,2H),1.00(s,9H),0.24(s,6H);LC-MS531(MH+)
[阶段2]
3-（6-（3-（哌啶-1-基甲基）苯基）噻吩并[3,2-d〕嘧啶电子-4-基氨基）苯酚盐酸盐
（3-（6-（3-（哌啶-1-基甲基）苯基）噻吩并[3,2-d〕嘧啶-4-基氨基）苯酚盐酸）（LCB03-0060）的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ10.54(br,1H),9.65(br,1H),8.76(s,1H),8.23(s,1H),7.95(s,1H),7.89(m,1H),7.70-7.69(m,1H),7.66-7.63(t,J=5.2Hz,1H),7.21(m,2H),7.14(d,J=4.8Hz,1H),6.65(m,1H),4.36(s,2H),3.40-3.32(m,4H),1.79(m,4H),1.37(m,2H);LC-MS417(MH+)
[优选实例49]
[阶段1]
N-（3-（叔丁基二甲基甲硅烷氧基）苯基）-6-（3-（（4-甲基哌嗪-1-基）甲基）苯基）噻吩并[3,2-d〕嘧啶E-4-胺
（N-（3-（叔丁基二甲基甲硅烷氧基）苯基）-6-（3-（（4-甲基哌嗪-1-基）甲基）苯基）噻吩并[3,2-D]嘧啶-4-胺）的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.70(s,1H),7.66(s,1H),7.62(s,1H),7.59-7.57(m,1H),7.40-7.37(m,2H),7.27-7.25(m,1H),7.22-7.21(m,1H),7.18-7.16(m,1H),6.78(br,1H),6.76-6.73(m,1H),3.64(s,2H),2.65-2.64(m,4H),2.44(s,3H),1.47-1.45(m,4H),1.00(s,9H),0.24(s,6H);LC-MS546.2(MH+)
[阶段2]
3-(6-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚盐酸盐
(3-(6-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚盐酸盐)(LCB03-0061)的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ10.54(br,1H),9.65(brs,1H),8.84(s,1H),7.94(s,1H),7.87(m,1H),7.76(m,1H),7.64(t,J=4.8Hz,1H),7.26-7.23(m,2H),7.18(m,1H),7.14-7.12(m,1H),6.72(m,1H),3.76(s,2H),2.81-2.80(m,4H),2.47(s,3H),1.41(m,4H);LC-MS432(MH+)
[优选实例50]
[阶段1]
N-(3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)苯基)-6-(3-(四氢吡咯-1-基甲基)苯基(噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-胺
(N-(3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)苯基)-6-(3-(四氢吡咯-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-胺)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.70(s,1H),7.73(s,1H),7.62-7.60(m,2H),7.46-7.40(m,2H),7.29-7.25(m,1H),7.22(m,1H),7.18-7.17(m,1H),6.88(br,1H),6.75-6.73(m,1H),3.79(s,2H),2.68-2.65(m,4H),1.87-1.85(m,4H),1.00(s,9H),0.24(s,6H);LC-MS518(MH+)
[阶段2]
3-(6-(3-(四氢吡咯-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚盐酸盐
(3-(6-(3-(四氢吡咯-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚盐酸盐)(LCB03-0062)的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ11.22(br,1H),9.65(br,1H),8.81(s,1H),8.27(s,1H),7.96(s,1H),7.86(m,1H),7.75-7.73(m,1H),7.64(t,J=4.8Hz,1H),7.25-7.22(m,2H),7.14-7.12(m,1H),6.69(m,1H),4.45(dJ=4.0Hz,2H),3.51-3.46(m,2H),3.38-3.37(m,2H),2.04(m,2H),1.91(m,2H);LC-MS403(MH+)
[优选实例51]
[阶段1]
N-(3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)苯基)-6-(3-((二乙基氨基)甲基)苯基噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-胺
(N-(3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)苯基)-6-(3-((二乙基氨基)甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-胺)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.68(s,1H),7.67(s,1H),7.62-7.58(m,2H),7.47-7.39(m,2H),7.28-7.24(m,1H),7.20-7.16(m,2H),6.76-6.73(m,1H),3.76(s,2H),2.70-2.68(m,4H),1.15(t,J=7.2Hz,6H),0.99(s,9H),0.24(s,6H);LC-MS519.2(MH+)
[阶段2]
3-(6-(3-((二乙基氨基)甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚盐酸盐
(3-(6-(3-((二乙基氨基)甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚盐酸盐)(LCB03-0063)的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ10.86(brs1H),9.79(m,1H),8.81(s,1H),8.32(s,1H),7.97(s,1H),7.87(s,1H),7.75(s,1H),7.64(s,1H),7.21(m,2H),7.14(s,1H),6.68(s,1H),4.39(s,2H),3.08(m,4H),1.28(s,6H);LC-MS405(MH+)
[优选实例52]
[阶段1]
叔丁基-4-(3-(4-(3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)苯基氨基)噻吩[3,2-d]哌嗪-1-羧酸盐
叔丁基-4-(3-(4-(3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)苯基氨基)噻吩[3,2-d]哌嗪-1-羧酸盐的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.70(s,1H),7.73(s,1H),7.62-7.60(m,2H),7.46-7.40(m,2H),7.29-7.25(m,1H),7.21(m,1H),7.18-7.16(m,1H),6.84(br,1H),6.76-6.73(m,1H),3.56(d,J=3.6Hz,2H),3.45(m,4H),2.42(m,4H),1.46(s,9H),1.00(s,9H),0.24(s,6H);LC-MS632.5(MH+)
[阶段2]
3-(6-(3-(哌嗪-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚盐酸盐
(3-(6-(3-(哌嗪-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚盐酸盐)(LCB03-0064)的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ10.75(br,1H),9.44(br,1H),8.80(s,1H),8.24(s,1H),7.95(s,1H),7.89(d,J=5.2Hz,1H),7.74(d,J=4.4Hz,1H),7.65(t,J=5.2Hz,1H),7.23(t,J=5.6Hz,1H),7.19(s,1H),7.13(d,J=5.2Hz,1H),6.69(d,J=5.2Hz,1H),3.76(s,2H),2.81-2.80(m,4H),2.47(m,4H);LC-MS418(MH+)
[优选实例53]
[阶段1]
N-(3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)苯基)-6-(3-((乙基氨基)甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-胺
(N-(3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)苯基)-6-(3-((乙基氨基)甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-胺)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.70(s,1H),7.67(s,1H),7.62(s,1H),7.57-7.55(m,1H),7.42-7.38(m,1H),7.29-7.25(m,1H),7.21(t,J=1.2Hz,1H),7.17(m,1H),6.75-6.73(m,2H),3.87(s,2H),2.74(q,J=4.8Hz,2H),1.18(t,J=4.8Hz,3H),1.00(s,9H),0.24(s,6H);LC-MS491.2(MH+)
[阶段2]
3-(6-(3-((乙基氨基)甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚盐酸盐
(3-(6-(3-((乙基氨基)甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚盐酸盐)(LCB03-0065)的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ9.68(br,1H),9.24(br,1H),8.78(s,1H),8.14(s,1H),7.93(s,1H),7.88(m,1H),7.67(m,1H),7.63(m,1H),7.22(m,2H),7.14(m,1H),6.68(m,1H),4.23(m,2H),3.01(m,2H),1.25(t,J=4.8Hz,3H);LC-MS377(MH+)
[优选实例54]
[阶段1]
N-(3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)苯基)-6-(3-(吗啉代甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-胺
(N-(3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)苯基)-6-(3-(吗啉代甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-胺)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.69(s,1H),7.73(s,1H),7.62-7.60(m,2H),7.46-7.40(m,2H),7.29(m,1H),7.25-7.24(m,2H),7.21-7.19(m,1H),6.73-6.71(m,1H),3.73(t,J=2.8Hz,4H),3.55(s,2H),2.48(br,4H),0.99(s,9H),0.24(s,6H);LC-MS533.5(MH+)
[阶段2]
3-(6-(3-(吗啉代甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚盐酸盐
(3-(6-(3-(吗啉代甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚盐酸盐)(LCB03-0066)的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ10.86(br,1H),9.80(br,1H),8.81(s,1H),8.28(s,1H),7.95(s,1H),7.90(d,J=7.6Hz,1H),7.73(d,J=7.6Hz,1H),7.65(t,J=8.0Hz,1H),7.25-7.19(m,2H),7.13(d,J=8.0Hz,1H),6.69(d,J=7.6Hz,1H),4.44(s,2H),3.93-3.85(m,3H),3.82(t,J=12Hz,1H),2.48(br,4H);LC-MS419(MH+)
[优选实例55]
[阶段1]
N-(3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)苯基)-6-(3-((异丁基氨基)甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-胺
(N-(3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)苯基)-6-(3-((异丁基氨基)甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-胺)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.69(s,1H),7.66(s,1H),7.61(s,1H),7.55(d,J=4.4Hz,1H),7.40-7.38(m,2H),7.26(t,J=5.2Hz,1H),7.20(t,J=1.2Hz,1H),7.16(d,J=5.2Hz,1H),7.08(br,1H),6.75(d,J=4.4Hz,1H),3.85(s,2H),2.47(d,J=4.8Hz,2H),1.79(m,1H),0.99(s,9H),0.94(d,J=4.4Hz,6H),0.24(s,6H);LC-MS519(MH+)
[阶段2]
3-(6-(3-((异丁基氨基)甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚盐酸盐
(3-(6-(3-((异丁基氨基)甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚盐酸盐)(LCB03-0067)的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ10.82(br,1H),9.71(br,1H),9.27(br,1H),8.81(s,1H),8.21(s,1H),7.94(s,1H),7.87(d,J=7.6Hz,1H),7.71(d,J=7.2Hz,1H),7.62(t,J=7.2Hz,1H),7.25-7.19(m,2H),7.13(d,J=7.6Hz,1H),6.70(d,J=8.8Hz,1H),4.25(s,2H),2.77-2.75(m,2H),2.06-2.05(m,1H),0.96(d,J=6.4Hz,6H);LC-MS405(MH+)
[优选实例56]
[阶段1]
N-(3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)苯基)-6-(呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-胺
(N-(3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)苯基)-6-(呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-胺)的合成
制备实例5合成的化合物（0.1毫克，0.23毫摩尔），2-呋喃硼酸（33毫克，0.27毫摩尔），钯tetrakistri苯基膦（53毫克，0.04毫摩尔）和2N碳酸钠（0.23毫升，0.46毫摩尔），加入到2ml的1,4-二恶烷中，并将该混合物回流2小时。用50ml饱和碳酸氢钠和50毫升的二氯甲烷萃取反应混合物，并进一步将有机层用50毫升饱和碳酸氢钠萃取两次，并用无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩干燥。柱色谱法（乙基乙酸乙酯/n-己烷，1/3），得到标题化合物（76.3毫克，78.9％），为淡黄色固体。
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.68(s,1H),7.51-7.50(m,2H),7.29-7.25(m,1H),7.61-7.12(m,2H),6.81(brs,1H),6.78-6.75(m,2H),6.52-6.51(m,1H),1.00(s,9H),0.23(s,6H);LC-MS422(MH+)
[阶段2]
3-(6-(呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚盐酸盐
(3-(6-(呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚盐酸盐)(LCB03-0038)的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ11.10(brs,1H),8.86(s,1H),8.53(s,1H),7.92(t,J=1.8Hz,1H),7.71(s,1H),7.24(t,J=8.0Hz,1H),7.13(s,1H),7.10-7.08(m,2H),6.73(dd,J=1.6,8.0Hz,1H);LC-MS310(MH+)
以下化合物的合成方法与上面的优选实例56相似。
[优选实例57]
[阶段1]
N-(3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)苯基)-6-(呋喃-3-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-胺
(N-(3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)苯基)-6-(呋喃-3-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-胺)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.67(s,1H),7.79(s,1H),7.50(t,J=1.8Hz,1H),7.37(s.1H),7.28-7.24(m,1H),7.15-7.11(m,2H),6.79(brs,1H),6.77-6.74(m,1H),6.69-6.68(m,1H);LC-MS422(MH+)
[阶段2]
3-(6-(呋喃-3-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚盐酸盐
(3-(6-(呋喃-3-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚盐酸盐)(LCB03-0039)的合成
上述的步骤1中合成的化合物（63毫克，0.15毫摩尔）溶解到1毫升二氯甲烷中的溶液，并加入1ml的4M盐酸/1,4-二恶烷和0.2毫升甲醇，然后在室温下搅拌15小时。将反应混合物在真空下浓缩，然后用2毫升二氯甲烷，2毫升甲醇，2毫升二氯甲烷和2毫升二***azotrope-浓缩，然后真空干燥。得到黄色固体的标题化合物（42毫克，90％）。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ11.03(brs,1H),8.84(s,1H),7.94(s,1H),7.72(s,1H),7.39(d,J=3.6Hz,1H),7.26(t,J=8.0Hz,1H),7.12(s,1H),7.09(d,J=8.4Hz,1H),6.78-6.74(m,2H);LC-MS310(MH+)
[优选实例58]
[阶段1]
N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-6-(5-(四氢吡咯-1-基甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-胺
(N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-6-(5-四氢吡咯-1-基甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-胺)的合成
制备实例18中合成的化合物（24毫克，0.05毫摩尔）和吡咯烷（6.3μl，0.07毫摩尔）依次加入到1毫升二氯乙烷1毫升中，搅拌20分钟，然后加入醋酸钠（13毫克，0.15毫摩尔）和三乙酰氧基硼氢化钠（64毫克，0.30毫摩尔）进一步在室温下搅拌7小时。将反应混合物用10毫升二氯甲烷和10毫升饱和氯化铵溶液提取。将有机层用硫酸钠干燥，在真空下浓缩，并随后通过柱色谱法（二氯甲烷/甲醇，40/1），得到标题化合物（21毫克，78.6％），是淡黄色固体。
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.64(s,1H),7.41(d,J=8.8Hz,2H),7.43(s,1H),7.38-7.35(m,3H),7.17(d,J=3.6Hz,1H),6.89(d,J=8.8HZ,2H),6.84-6.83(m,3H),5.02(s,2H),3.92(s,2H),3.79(s,3H),2.78-2.70(m,4H),1.87-1.85(m,4H);LC-MS529(MH+)
[阶段2]
3-(6-(5-(四氢吡咯-1-基甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚三氟乙酸
(3-(6-(5-(四氢吡咯-1-基甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚.TFA)(LCB03-0085)的合成
1H-NMR(400MHz,Acetone-d6);δ8.59(s,1H),7.26-7.21(m,5H),7.01(d,J=3.6Hz,1H),6.84(d,J=8.0Hz,1H),6.81(d,J=3.6Hz,1H),6.75(dd,J=1.6,8.4Hz,1H),3.81(s,2H),2.69-2.65(m,4H),2.04-2.02(m,4H);LC-MS409(MH+)
以下化合物的合成方法与上面的优选实例58相似。
[优选实例59]
[阶段1]
N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-6-(5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-胺
(N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-6-(5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-胺)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.67(s,1H),7.39(s,1H),7.37(d,J=8.8Hz,2H),7.34-7.29(m,2H),7.18(d,J=3.6Hz,1H),7.09-7.07(m,1H),6.91(d,J=8.4Hz,2H),6.88(d,J=2.8Hz,1H),6.86(d,J=2.4Hz,1H),6.73(brs,1H),5.03(s,2H),3.81(s,3H),3.71(s,2H),2.50(m,4H),2.20(s,3H),1.62(m,4H);LC-MS558(MH+)
[阶段2]
3-(6-(5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚三氟乙酸
(3-(6-(5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚.TFA)(LCB03-0092)的合成
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6);δ9.90(brs,1H),8.62(s,1H),7.61(s,1H),7.53(d,J=3.6Hz,1H),7.24(s,1H),7.18-7.09(m,3H),6.58(d,J=7.2Hz,1H),3.86(s,2H),3.47-3.46(m,4H),3.05-3.03(m,4H),2.80(s,3H);LC-MS438(MH+)
[优选实例60]
[阶段1]
N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-6-(5-(哌啶-1-基甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-胺
(N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-6-(5-(哌啶-1-基甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-胺)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.67(s,1H),7.39(s,1H),7.37(d,J=8.4Hz,2H),7.34-7.29(m,2H),7.19(d,J=3.6Hz,1H),7.09-7.07(m,1H),6.91(d,J=8.4Hz,2H),6.88-6.86(m,2H),6.77(brs,1H),5.03(s,2H),3.81(s,3H),3.68(s,2H),2.46(m,4H),1.62-1.60(m,4H),1.47-1.45(m,2H);LC-MS543(MH+)
[阶段2]
3-(6-(5-(哌啶-1-基甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚三氟乙酸
(3-(6-(5-(哌啶-1-基甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚.TFA)(LCB03-0093)的合成
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6);δ9.97(brs,1H),9.98(brs,1H),8.61(s,1H),7.75(s,1H),7.66(d,J=3.6Hz,1H),7.38(d,J=30Hz,1H),7.25(s,1H),7.18-7.14(m,2H),6.38(d,J=8.4Hz,1H),6.57(d,J=7.2Hz,1H),4.59(s,2H),3.73-3.70(m,2H),2.93-2.91(m,2H),1.86-1.84(m,2H),1.70-1.62(m,3H),1.38-1.36(m,1H);LC-MS438(MH+)
[优选实例61]
[阶段1]
N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-6-(5-(吗啉代甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-胺
(N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-6-(5-(吗啉代甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-胺)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.68(s,1H),7.49(s,1H),7.38-7.31(m,4H),7.08(dd,J=1.6,7.6Hz,1H),6.92(brs,1H),6.90-6.85(m,3H),6.70(d,J=3.2Hz,1H),6.35(d,J=3.2Hz,1H),5.03(s,2H),3.80(s,3H),3.74-3.72(m,4H),3.62(s,2H),2.56-2.53(m,4H);LC-MS545(MH+)
[阶段2]
3-(6-(5-(吗啉代甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚三氟乙酸
(3-(6-(5-(吗啉代甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚.TFA)(LCB03-0096)的合成
1H-NMR(400MHz,Acetone-d6);δ8.74(s,1H),7.74(s,1H),7.55-7.53(m,1H),7.42-7.41(m,1H),7.35-7.32(m,1H),7.27(t,J=8.0Hz,1H),7.20-7.18(m,1H),6.83-6.82(m,1H),4.67(s,2H),3.96-3.94(m,4H),3.35-3.33(m,4H);LC-MS425(MH+)
[优选实例62]
[阶段1]
叔丁基4-((5-(4-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-6-基)噻吩-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸盐
(叔丁基4-((5-(4-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶-6-基)噻吩-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸盐)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.68(s,1H),7.40(s,1H),7.38(d,J=8.4Hz,2H),7.34-7.33(m,1H),7.31(t,J=7.8Hz,1H),7.19(d,J=3.6Hz,1H),6.91(d,J=8.4Hz,2H),6.88-6.86(m,3H),6.77(brs,1H),5.04(s,2H),3.81(s,3H),3.72(s,2H),3.44-3.42(m,4H),2.47-2.46(m,4H),1.48(s,9H);LC-MS644(MH+)
[阶段2]
3-(6-(5-(哌嗪-1-基甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚三氟乙酸
(3-(6-(5-(哌嗪-1-基甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚.TFA)(LCB03-0094)的合成
1H-NMR(400MHz,Acetone-d6);δ8.71(s,1H),7.67(s,1H),7.46(d,J=3.6Hz,1H),7.38(s,1H),7.29-7.20(m,2H),7.16-7.10(m,1H),6.84-6.78(m,1H),4.04(s,2H),3.51-3.43(m,4H),3.05-3.04(m,4H);LC-MS538(MH+)
[优选实例63]
[阶段1]
6-(5-((乙基氨基)甲基)噻吩-2-基)-N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-胺
(6-(5-((乙基氨基)甲基)噻吩-2-基)-N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-胺)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.67(s,1H),7.39(s,1H),7.37(d,J=7.8Hz,2H),7.34-7.29(m,2H),7.20(d,J=3.6Hz,1H),7.07(d,J=7.8Hz,1H),6.91(d,J=7.2Hz,2H),6.90(d,J=3.6Hz,1H),6.87(d,J=7.8Hz,1H),6.75(brs,1H),5.03(s,1H),4.00(s,2H),3.81(s,3H),2.74(q,J=7.2Hz,2H),1.17(t,J=7.2Hz,3H;LC-MS503(MH+)
[阶段2]
3-(6-(5-((乙基氨基)甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚三氟乙酸
(3-(6-(5-((乙基氨基)甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚.TFA)(LCB03-0095)的合成
1H-NMR(600MHz,Acetone-d6);δ8.65(s,1H),7.60(s,1H),7.47-7.42(m,3H),7.23-7.21(m,3H),6.74-6.73(m,1H),4.64(s,2H),3.32-3.30(m,2H),1.39(t,J=6.4Hz,3H);LC-MS383(MH+)
[优选实例64]
[阶段1]
N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-6-(5-(四氢吡咯-1-基甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-胺
(N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-6-(5-(四氢吡咯-1-基甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-胺)的合成
1H-NMR(600MHz,Acetone-d6);δ8.74(brs,1H),8.62(s,1H),7.73(s,1H),7.57(s,1H),7.43(d,J=8.4Hz,2H),7.40(d,J=7.8Hz,1H),7.27(t,J=8.4Hz,1H),7.00(d,J=3.0Hz,1H),6.95(d,J=8.4Hz,2H),6.80-6.78(m,1H),6.55(s,1H),5.07(s,2H),3.84(s,2H),3.80(s,3H),3.59-3.57(m,3H),2.65(brm5H);LC-MS513(MH+)
[阶段2]
3-(6-(5-(四氢吡咯-1-基甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚三氟乙酸
(3-(6-(5-(四氢吡咯-1-基甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚.TFA)(LCB03-0086)的合成
1H-NMR(600MHz,CDCl3);δ8.60(s,1H),7.31(s,1H),7.27-7.26(m,1H),7.22(t,J=7.8Hz,1H),6.81(d,J=7.8Hz,1H),6.82(brs,1H),6.69(dd,J=2.4,8.4Hz,1H),6.60(d,J=3.0Hz,1H),6.31(d,J=3.0Hz,1H),3.76(s,2H),2.78-2.77(m,4H),1.88-1.86(m,4H);LC-MS330(MH+)
[优选实例65]
[阶段1]
N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-6-(5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-胺
(N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-6-(5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-胺)的合成
1H-NMR(400MHz,Acetone-d6);δ8.72(brs,1H),8.62(s,1H),7.74(t,J=2.0Hz,1H),7.55(s,1H),7.44-7.40(m,3H),7.27(t,J=8.0Hz,1H),6.99d,J=3.2Hz,1H),6.95(d,J=8.8Hz,2H),6.79(dd,J=2.4,8.4Hz,1H),6.48(d,J=3.6Hz,1H),5.07(s,2H),3.80(s,3H),3.61(s,2H),2.51-2.21(m,8H),2.20(s,3H);LC-MS542(MH+)
[阶段2]
3-(6-(5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚三氟乙酸
(3-(6-(5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚.TFA)(LCB03-0087)的合成
1H-NMR(600MHz,Acetone-d6);δ8.70(brs,1H),8.61(s,1H),7.58-7.53(m,2H),7.28(s,1H),7.21(t,J=8.4H,1H),7.02(s,1H),6.66(d,J=7.8Hz,1H),6.55(s,1H),3.72(s,2H),2.88-2.86(m,4H),2.60-2.58(m,4H),2.27(s,3H);LC-MS422(MH+)
[优选实例66]
[阶段1]
N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-6-(5-(哌啶-1-基甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-胺
(N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-6-(5-(哌啶-1-基甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-胺)的合成
1H-NMR(400MHz,Acetone-d6);δ8.71(brs,1H),8.62(s,1H),7.74(t,J=2.0Hz,1H),7.54(s,1H),7.44-7.39(m,4H),7.28(t,J=8.0Hz,1H),6.98(d,J=2.4Hz,1H),6.95(d,J=8.8Hz,2H),6.80-6.77(m,1H),6.45(d,J=3.2Hz,1H),5.07(s,2H),3.80(s,3H),3.57(s,2H),2.46-2.45(m,4H),1.59-1.53(m,4H),1.42-1.41(m,2H);LC-MS527(MH+)
[阶段2]
3-(6-(5-(哌啶-1-基甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚三氟乙酸
(3-(6-(5-(哌啶-1-基甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚.TFA)(LCB03-0088)的合成
1H-NMR(400MHz,Acetone-d6);δ8.66(s,1H),7.71(s,1H),7.58(s,1H),7.23-7.22(m,2H),7.11(d,J=4.8Hz,1H),6.93(d,J=4.8Hz,1H),6.72-6.70(m,1H),4.51(s,2H),3.61(brm,6H),1.93-1.91(m,4H);LC-MS407(MH+)
[优选实例67]
[阶段1]
N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-6-(5-(吗啉代甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-胺
(N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-6-(5-(吗啉代甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-胺)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.68(s,1H),7.49(s,1H),7.38-7.31(m,4H),7.08(dd,J=1.6,7.6Hz,1H),6.92(brs,1H),6.90-6.85(m,3H),6.70(d,J=3.2Hz,1H),6.35(d,J=3.2Hz,1H),5.03(s,2H),3.80(s,3H),3.74-3.72(m,4H),3.62(s,2H),2.56-2.53(m,4H);LC-MS529(MH+)
[阶段2]
3-(6-(5-(吗啉代甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚三氟乙酸
(3-(6-(5-(吗啉代甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚.TFA)(LCB03-0089)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.69(s,1H),7.75(s,1H),7.45(s,1H),7.23(d,J=5.2Hz,2H),7.09(d,J=3.2H,1H),6.90(d,J=3.6Hz,1H),6.76-6.71(m,1H),4.48(s,2H),3.94-3.93(m,4H),3.34-3.31(m,4H);LC-MS409(MH+)
[优选实例68]
[阶段1]
叔丁基4-((5-(4-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-6-基)呋喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸盐
(叔丁基4-((5-(4-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶-6-基)呋喃-2-基)甲基)哌嗪-1-羧酸盐)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.67(s,1H),7.47(s,1H),7.37-7.34(m,4H),7.28(t,J=8.0Hz,1H),7.10-7.08(m,1H),6.91-6.85(m,3H),6.90(d,J=3.2Hz,1H),6.33(d,J=3.6Hz,1H),5.02(s,2H),3.80(s,3H),3.63(s,2H),3.48-3.44(m,4H),2.49-2.47(m,4H),1.45(s,9H);LC-MS628(MH+)
[阶段2]
3-(6-(5-(哌嗪-1-基甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚三氟乙酸
(3-(6-(5-(哌嗪-1-基甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚.TFA)(LCB03-0090)的合成
1H-NMR(400MHz,Acetone-d6);δ8.76(brs,1H),7.74(s,1H),7.37-7.36(m,1H),7.28(t,J=7.6Hz,1H),7.20-7.28(m,1H),7.12-7.10(m,2H),6.84-6.82(m,2H),6.67(d,J=3.2Hz,1H),3.95(s,2H),3.53(m,4H),3.14(m,4H);LC-MS408(MH+)
[优选实例69]
[阶段1]
6-(5-((乙基氨基)甲基)呋喃-2-基)-N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-胺
(6-(5-((乙基氨基)甲基)呋喃-2-基)-N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-胺)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.67(s,1H),7.46(s,1H),7.38-7.28(m,4H),7.08(dd,J=1.2,8.0Hz,1H),6.90(d,J=8.8Hz,2H),6.86(dd,J=1.6,7.6Hz,1H),6.68(d,J=3.0Hz,1H),6.32(d,J=3.2Hz,1H),5.02(s,2H),3.87(s,2H),3.80(s,3H),3.48(q,J=7.2Hz,2H),2.74(q,J=7.2Hz,2H),1.17(t,J=7.2Hz,3H);LC-MS487(MH+)
[阶段2]
3-(6-(5-((乙基氨基)甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚三氟乙酸
(3-(6-(5-((乙基氨基)甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚.TFA)(LCB03-0091)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.67(brs,1H),7.68(s,1H),7.41(s,1H),7.26-7.19(m,3H),7.01(d,J=3.2Hz,1H),6.86(d,J=3.2Hz,1H),6.75-6.73(m,1H),4.55(s,2H),3.34(q,J=6.8Hz,2H),1.41(t,J=7.2Hz,3H);LC-MS367(MH+)
[优选实例70]
[阶段1]
N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-6-(4-(吗啉代甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-胺
(N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-6-(4-(吗啉代甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-胺)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.68(s,1H),7.44(s,1H),7.38(d,J=8.8Hz,2H),7.32(m,3H),7.19(s,1H),7.09(d,J=8.0Hz,1H),6.92(d,J=8.8Hz,2H),6.89(m,1H),6.83(br,1H),5.03(s,2H),3.80(s,3H),3.68(m,2H),3.47-3.44(m,4H),2.48(m,4H);LC-MS423(MH+)
[阶段2]
3-(6-(4-(吗啉代甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚三氟乙酸
(3-(6-(4-(吗啉代甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚.TFA)(LCB03-0104)的合成
1H-NMR(400MHz,Acetone-d6);δ8.89(s,1H),7.98(s,1H),7.82(s,1H),7.72(s,1H),7.42(s,1H),7.28(m,2H),7.15(m,1H),6.87(m,1H),6.79(s,1H),4.51(m,2H),3.77(m,2H),3.45(m,2H),1.15(m,4H);LC-MS425(MH+)
[优选实例71]
[阶段1]
叔丁基4-((5-(4-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-6-基)噻吩-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸盐
(叔丁基4-((5-(4-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶-6-基)噻吩-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸盐)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.68(s,1H),7.42(s,1H),7.36(d,J=6.0Hz,2H),7.33-7.31(m,3H),7.19(s,1H),7.11(d,J=5.6Hz,1H),6.68-6.66(m,3H),5.02(s,s2H),3.70(s,3H),3.47-3.44(m,4H),3.43(s,2H),2.44-2.42(m,4H),1.46(s,9H);LC-MS524(MH+)
[阶段2]
3-(6-(4-(哌嗪-1-基甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚三氟乙酸
(3-(6-(4-(哌嗪-1-基甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚.TFA)(LCB03-0105)的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ8.95(s,1H),8.15(s,1H),7.40-7.37(m,2H),7.32-7.27(m,1H),7.13-7.11(m,2H),6.93(m,1H),6.86(m,1H),4.29(s,2H),3.75(brm,4H),1.98-1.97(m,4H);LC-MS422(MH+)
[优选实例72]
[阶段1]
N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-6-(4-(四氢吡咯-1-基甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-胺
(N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-6-(4-(四氢吡咯-1-基甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-胺)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.66(s,1H),7.42(s,1H),7.-7.36(m,3H),7.66(t,J=1.6Hz,1H),7.31(d,J=5.6Hz,1H),7.25(s,1H),7.10(d,J=3.6Hz,1H),6.91(d,J=6.0Hz,2H),6.87(d,J=5.6Hz,1H),3.68(s,2H),2.64(m,4H),1.85(m,4H);LC-MS409(M+H+)
[阶段2]
3-(6-(4-(四氢吡咯-1-基甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚三氟乙酸
(3-(6-(4-(四氢吡咯-1-基甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚.TFA)(LCB03-0101)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.59(s,1H),7.26-7.21(m,1H),7.14-7.11(m,2H),7.01(d,J=3.6Hz,1H),6.84(d,J=8.0Hz,1H),6.81(d,J=3.6Hz,1H),6.75(dd,J=1.6,8.4Hz,1H),3.81(s,2H),2.69(brm,4H),2.04-2.02(m,4H);LC-MS409(MH+)
[优选实例73]
[阶段1]
6-(4-((乙基氨基)甲基)噻吩-2-基)-N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-胺
(6-(4-((乙基氨基)甲基)噻吩-2-基)-N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-胺)的合成
1H-NMR(600MHz,CDCl3);δ8.68(s,1H),7.42(s,1H),7.38(d,J=6.0Hz,2H),7.33(m,3H),7.19(s,1H),7.09(d,J=5.6Hz,1H),6.68(m,3H),3.80(s,2H),2.71(m,2H),1.06(m,3H);LC-MS383(MH+)
[阶段2]
3-(6-(4-((乙基氨基甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚三氟乙酸
(3-(6-(4-((乙基氨基)甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚.TFA)(LCB03-0106)的合成
1H-NMR(600MHz,Acetone-d6);δ8.65(s,1H),7.60(s,1H),7.47-7.42(m,3H),7.23-7.21(m,3H),6.74-6.73(m,1H),4.64(s,2H),3.32-3.30(m,2H),1.39(t,J=6.4Hz,3H);LC-MS383(MH+)
[优选实例74]
[阶段1]
N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-6-(4-(四氢吡咯-1-基甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-胺
(N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-6-(4-(四氢吡咯-1-基甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-胺)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.96(s,1H),8.73(s,1H),8.17(s,1H),7.41-7.36(m,2H),7.32-7.26(m,2H),7.14-7.10(m,2H),6.92(d,J=8.4Hz,2H),6.85(m,1H),5.07(s,2H),4.16(s,2H),3.76(s,3H),3.57(m,4H),1.95(m,4H);LC-MS393(MH+)
[阶段2]
3-(6-(4-(四氢吡咯-1-基甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚三氟乙酸
(3-(6-(4-(四氢吡咯-1-基甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚.TFA)(LCB03-0113)的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ8.76(s,1H),8.16(s,1H),7.41-7.37(m,2H),7.32-7.26(m,1H),7.14-7.11(m,2H),6.93(m,1H),6.86(m,1H),4.50(s,2H),2.48(m,4H),1.72(m,4H);LC-MS393(MH+)
[优选实例75]
[阶段1]
N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-6-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-胺
(N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-6-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-胺)的合成
1H-NMR(600MHz,CDCl3);δ8.95(s,1H),8.73(s,1H),8.19(s,1H),7.37-7.29(m,3H),7.11(d,J=8.4Hz,2H),6.92-6.86(m,3H),6.79(s,1H),5.02(s,2H),3.74(s,3H),3.45(s,2H),3.57(m,4H),1.95(m,4H),2.27(s,3H);LC-MS542(MH+)
[阶段2]
3-(6-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚三氟乙酸
(3-(6-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚.TFA)(LCB03-0114)的合成
1H-NMR(400MHzDMSO-d6);δ8.95(s,1H),8.15(s,1H),7.40-7.37(m,2H),7.32-7.27(m,1H),7.13-7.11(m,2H),6.93(m,1H),6.86(m,1H),4.29(s,2H),2.65-2.63(m,4H),2.44(s,3H),1.47-1.45(m,4H);LC-MS422(MH+)
[优选实例76]
[阶段1]
N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-6-(4-(哌啶-1-基甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-胺
(N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-6-(4-(哌啶-1-基甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-胺)的合成
1H-NMR(600MHz,CDCl3);δ8.92(s,1H),8.75(s,1H),8.19(s,1H),7.39-7.36(m,3H),7.30(t,J=7.8Hz,1H),7.12(d,J=8.4Hz,1H),6.92(d,J=8.4Hz,2H),6.86(d,J=8.4Hz,1H),6.80(s,1H),5.02(s,2H),4.19(s,2H),3.81(s,3H),3.43(m,4H)1.64(m,6H);LC-MS527(MH+)
[阶段2]
3-(6-(4-(哌啶-1-基甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚
(3-(6-(4-(哌啶-1-基甲基)呋喃-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚)(LCB03-0115)的合成
1H-NMR(400MHz,Acetone-d6);δ8.79(brs,1H),7.74(s,1H),7.37-7.36(m,1H),7.28(t,J=7.6Hz,1H),7.20-7.18(m,1H),7.12-7.10(m,2H),6.84-6.82(m,2H),6.67(d,J=3.2Hz,1H),4.50(s,2H),2.48(m,4H),1.72(m,4H),1.37(m,2H);LC-MS407.0(MH+)
[优选实例77]
3-(6-(4-(哌啶-1-基甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚三氟乙酸
(3-(6-(4-(哌啶-1-基甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚.TFA)(LCB03-0103)的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ8.76(s,1H),8.16(s,1H),7.41-7.37(m,2H),7.32-7.26(m,1H),7.14-7.11(m,2H),6.93(m,1H),6.86(m,1H),4.50(s,2H),2.48(m,4H),1.72(m,4H)1.56-1.54(m,2H);LC-MS393(MH+)
[优选实例78]
3-(6-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚
(3-(6-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)噻吩-2-基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚)(LCB03-0102)的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ8.95(s,1H),8.15(s,1H),7.40-7.37(m,2H),7.32-7.27(m,1H),7.13-7.11(m,2H),6.93-6.92(m,1H),6.86-6.85(m,1H),2.81-2.80(m,4H),2.47(s,3H),1.41-1.39(m,4H);LC-MS438(MH+)
[优选实例79]
[阶段1]
N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-2-(4-(哌啶-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-胺
(N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-2-(4-(哌啶-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-胺)的合成
制备实例24合成的化合物（50毫克，0.10毫摩尔）和哌啶（92毫克，1.07毫摩尔）依次加入到1ml的二氯乙烷，并搅拌20分钟，加入醋酸钠（26毫克，0.32毫摩尔）和三乙酰氧基硼氢化钠（136毫克，0.64毫摩尔），然后进一步在室温下搅拌5小时。将所得的反应混合物用30毫升二氯甲烷和30毫升饱和氯化铵溶液提取。将有机层用硫酸钠干燥，并在真空下浓缩。柱色谱法（二氯甲烷/甲醇，1/25）得到标题化合物（42mg，73％）。
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.35(d,J=5.6Hz,1H),7.74-7.72(m,1H),7.62(d,J=5.6Hz,1H),7.39-7.29(m,4H),6.91-6.78(m,6H),6.16(s,1H),5.01(s,2H),3.81(s,3H),3.55(s,2H),2.44(m,4H),2.12(m,2H),1.61(m,4H);LC-MS:536(MH+)
[阶段2]
3-(2-(4-(哌啶-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚三氟乙酸
(3-(2-(4-(哌啶-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚.TFA)(LCB03-0097)的合成
上述步骤1中合成的化合物（15毫克，0.03毫摩尔）溶解在1毫升二氯甲烷中。它进一步在室温下搅拌15小时后，加入1ml三氟乙酸和苯甲醚（40毫克，0.38毫摩尔），并在真空下浓缩。将所得反应混合物用二氯甲烷，甲醇，二***azotrope浓缩，真空干燥后，得到标题化合物（14毫克，99％），为淡黄色固体。
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.41-8.40(m,1H),8.17(s,1H),7.83(d,J=8.4Hz,2H),7.74(d,J=8.4Hz,2H),7.34(t,J=8.4Hzm1H),7.08-7.06(m,1H),7.01-6.99(m,2H),6.96-6.90(m,2H),4.41(s,2H),3.83-3.80(m,4H),2.95-2.93(m,2H),1.90-1.88(m,4H);LC-MS416(MH+)
以下化合物的合成方法与上面的优选实例79相似。
[优选实例80]
[阶段1]
N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-2-(4-((4-甲基哌嗪-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-胺
(N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-2-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-胺)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.36(d,J=5.2Hz,1H),7.70-7.68(m,3H),7.41(d,J=7.2Hz,2H),7.36(d,J=6.8Hz,2H),7.31(t,J=8.4Hz,1H),6.93(d,J=6.8Hz,2H),6.89-6.84(m,3H),6.80(d,J=7.6Hz,1H),6.01(s,1H),5.02(s,2H),3.82(s,3H),3,56(s,2H),2.52(m,4H),2.32(s,3H),1.76(m,4H);LC-MS:538(MH+)
[阶段2]
3-(2-(4-((4-甲基哌嗪-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚三氟乙酸
(3-(2-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚.TFA)(LCB03-0084)的合成
1H-NMR(600MHz,Acetone-d6);δ9.98(brs,1H),8.41(brs,1H),8.04(s,1H),7.81(d,J=7.2Hz,2H),7.69(d,J=7.2Hz,2H),7.36(t,J=8.4Hz,1H),7.11(d,J=8.4Hz,2H),6.99(s,1H),6.92-6.91(m,1H),6.82(d,J=8.4Hz,2H),4.40(s,2H),3.75-3.74(m,4H),3.66-3.65(m,4H),3.00(s,3H);LC-MS:431(MH+)
[优选实例81]
[阶段1]
N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-2-(4-(四氢吡咯-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-胺
(N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-2-(4-(四氢吡咯-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-胺)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.36(s,1H),7.75-7.73(m,1H),7.66-7.65(m,1H),7.41-7.29(m,5H),6.93-6.79(m,6H),6.14(s,1H),5.05(s,2H),3.82(s,3H),3.76(s,2H),2.62(m,4H),1.83(m,4H);LC-MS:523(MH+)
[阶段2]
3-(2-(4-(四氢吡咯-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚三氟乙酸
(3-(2-(4-(四氢吡咯-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚.TFA)(LCB03-0080)的合成
1H-NMR(400MHz,Acetone-d6);δ8.41-8.40(m,1H),8.17(s,1H),7.83(d,J=8.4Hz,2H),7.74(d,J=8.4Hz,2H),7.34(t,J=8.4Hz,1H),7.08-7.06(m,1H),7.01-6.99(m,2H),6.96-6.90(m,2H),4.41(s,2H),3.83-3.80(m,4H),1.90-1.88(m,4H);LC-MS402(MH+)
[优选实例82]
[阶段1]
N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-2-(4-(吗啉代甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-胺
(N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-2-(4-(吗啉代甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-胺)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.38(d,J=5.2Hz,1H),7.72-7.70(m,3H),7.44(d,J=7.2Hz,2H),7.35(d,J=7.2Hz,2H),7.32-7.29(m,1H),6.94(d,J=6.8Hz,2H),6.90-6.81(m,4H),6.02(s,1H),5.03(s,2H),3.84(s,3H),3.74-3.73(m,4H),2.50-2.49(m,4H);LC-MS:551(MH+)
[阶段2]
3-(2-(4-(吗啉代甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚三氟乙酸
(3-(2-(4-(吗啉代甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚.TFA)(LCB03-0083)的合成
如上所述的步骤1中合成的化合物（15毫克，0.03毫摩尔）溶解于1毫升二氯甲烷中，并在室温下搅拌15小时后，加入1ml三氟乙酸和苯甲醚（40毫克，0.38毫摩尔），然后浓缩，真空下干燥。该反应混合物用二氯甲烷，甲醇，二***azotrope浓缩，真空干燥后得到淡黄色固体的标题化合物（14毫克，99％）。
1H-NMR(600MHz,Acetone-d6);δ10.61(brs,1H),8.34(brs,1H),8.00(s,1H),7.77-7.70(m,3H),7.33(t,J=8.4Hz,1H),7.11(d,J=7.8Hz,2H),6.99(s,1H),6.90(d,J=7.8Hz,1H),6.83(d,J=8.4Hz,2H),4.49(s,2H),3.96-3.93(m,4H),3.28-3.26(m,4H);LC-MS:418(MH+)
[优选实例83]
[阶段1]
N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-2-(4-(哌嗪-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-胺
(N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-2-(4-(哌嗪-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-胺)的合成
1H-NMR(400MHz,Acetone-d6);δ8.44(d,J=6.8Hz,1H),8.15(s,1H),8.01(s,1H),7.81(d,J=8.4Hz,2H),7.62(d,J=8.0Hz,2H),7.37(t,J=8.0Hz,1H),7.30(t,J=8.4Hz,1H),7.10(m,2H),7.01(m,2H),6.94(m,1H),5.00(s,2H),3.97(s,2H),3.84(s,2H),3.54-3.52(m,4H),3.12-3.10(m,4H);LC-MS537(MH+)
[阶段2]
3-(2-(4-(哌嗪-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚三氟乙酸
(3-(2-(4-(哌嗪-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚.TFA)(LCB03-0098)的合成
1H-NMR(400MHz,Acetone-d6);δ8.44(d,J=6.8Hz,1H),8.15(s,1H),7.81(d,J=8.4Hz,2H),7.62(d,J=8.0Hz,2H),7.37(t,J=8.0Hz,1H),7.10(m,2H),7.01(m,2H),6.94(m,1H),3.97(s,2H),3.54-3.52(m,4H),3.12-3.10(m,4H);LC-MS418(MH+)
[优选实例84]
[阶段1]
2-(4-((乙基氨基)甲基)苯基)-N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-胺
(2-(4-((乙基氨基)甲基)苯基)-N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-胺)的合成
1H-NMR(400MHz,Acetone-d6);δ9.99(brs,1H),8.36(d,J=6.8Hz,1H),7.97(s,1H),7.98(s,1H),7.72(d,J=8.4Hz,2H),7.68(d,J=8.0Hz,2H),7.64(t,J=7.8Hz,1H),7.33(t,J=8.0Hz,1H),7.03(m,2H),6.91(m,2H),6.86-6.83(m,2H),4.99(s,2H),3.80(s,3H),3.78(s,2H),3.28(q,J=6.8Hz,2H),1.38(t,J=6.8Hz,3H);LC-MS496(MH+)
[阶段2]
3-(2-(4-((乙基氨基)甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚三氟乙酸
(3-(2-(4-((乙基氨基)甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚.TFA)(LCB03-0099)的合成
1H-NMR(400MHz,Acetone-d6);δ8.36(d,J=6.8Hz,1H),7.97(s,1H),7.72(d,J=8.4Hz,2H),7.68(d,J=8.0Hz,2H),7.33(t,J=8.0Hz,1H),7.03(m,2H),6.91(m,2H),4.37(s,2H),3.28(q,J=6.8Hz,2H),1.38(t,J=6.8Hz,3H);LC-MS376(MH+)
[优选实例85]
[阶段1]
N-(4-氯-3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-6-(4-四氢吡咯-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-胺
(N-(4-氯-3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-6-(4-(四氢吡咯-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-胺)的合成
-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.69(s,1H),7.63-7.59(m,3H),7.53(d,J=2.0Hz,1H),7.43-7.36(m,6H),7.03(dd,J=2.0,8.4Hz1H),6.89(d,J=8.8Hz,2H),5.12(s,2H),3.78(s,3H),3.67(s,2H),2.55(m,4H),1.80(m,4H);LC-MS558(MH+)
[阶段2]
4-氯-5-(6-(4-(四氢吡咯-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚三氟乙酸
(4-氯-5-(6-(4-(四氢吡咯-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚.TFA)(LCB03-0081)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.51(s,1H),7.86(d,J=8.4Hz,2H),7.67(s,1H),7.55(d,J=8.0Hz,2H),7.50(d,J=2.4Hz,1H),7.25(d,J=8.8Hz,1H),7.09(d,J=8.6Hz,1H),4.80(s,1H),4.09(s,2H),3.01(s,4H),1.97(s,4H);LC-MS437(MH+)
[优选实例86]
[阶段1]
N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-2-(3-(哌啶-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-胺
(N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-2-(3-(哌啶-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-胺)的合成
制备实例25中合成的化合物（30毫克，0.06毫摩尔）,和哌啶（64μl，0.61毫摩尔）依次加入到1ml的DCE中，并搅拌20分钟。加入醋酸钠（16毫克，0.19毫摩尔）和三乙酰氧基硼氢化钠（82毫克，0.38毫摩尔），进一步在室温下搅拌5小时。将所得的反应混合物用30毫升二氯甲烷和30毫升饱和氯化铵溶液提取。将有机层用硫酸钠干燥，并在真空下浓缩。柱色谱法（二氯甲烷/甲醇，1/25）得到标题化合物（17毫克，48％）。
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.35(d,J=5.6Hz,1H),7.72-7.70(m,1H),7.62(d,J=5.6Hz,1H),7.40-7.29(m,5H),6.93-6.78(m,6H),6.16(s,1H),5.01(s,2H),3.81(s,3H),3.55(s,2H),2.44(m,4H),2.12(m,2H),1.61(m,4H);LC-MS:536(MH+)
[阶段2]
3-(2-(3-(哌啶-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚三氟乙酸
(3-(2-(3-(哌啶-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚.TFA)(LCB03-0109)的合成
1H-NMR(600MHz,Acetone-d6);δ8.32(brs,1H),8.02(brs,1H),7.99(s,1H),7.71(t,J=7.2Hz,2H),7.53(t,J=7.2Hz,1H),7.31-7.26(m,2H),7.03(s,1H),6.98(t,J=6.6Hz,1H),6.92-6.88(m,3H),4.43(s,2H),3.59-3.56(m,2H),3.56-3.54(m,2H),2.06-2.04(m,2H),1.90-1.89(m,4H);LC-MS416(MH+)
以下化合物的合成方法与上面的优选实例86相似。
[优选实例87]
[阶段1]
N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-2-(3-(四氢吡咯-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-胺
(N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-2-(3-(四氢吡咯-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-胺)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.36(s,1H),7.73-7.72(m,1H),7.64-7.63(m,1H),7.41-7.29(m,5H),6.93-6.79(m,6H),6.14(s,1H),5.01(s,2H),3.82(s,3H),3.74(s,2H),2.62(m,4H),1.83(m,4H);LC-MS:523(MH+)
[阶段2]
3-(2-(3-(四氢吡咯-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚三氟乙酸
(3-(2-(3-(四氢吡咯-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚.TFA)(LCB03-0107)的合成
1H-NMR(600MHz,Acetone-d6);δ10.07(brs,1H),8.35-8.33(m,1H),8.06(s,1H),7.99(s,1H),7.73(t,J=8.4Hz,2H),7.54(t,J=7.8Hz,1H),7.33(t,J=7.8Hz,1H),7.04(s,1H),7.01(t,J=6.6Hz,1H),6.93(s,1H),6.92-6.89(m,2H),4.55(s,2H),3.66-3.64(m,2H),3.29-3.28(m,2H),2.16-2.14(m,4H);LC-MS:402(MH+)
[优选实例88]
[阶段1]
N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-6-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-胺
(N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-6-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-胺)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.35(d,J=5.6Hz,1H),7.72-7.71(m,2H),7.62(d,J=7.2Hz,1H),7.41-7.30(m,5H),6.93-6.79(m,6H),6.19(s,1H),5.01(s,2H),3.82(s,3H),3.57(s,3H),3.47-3.46(m,2H),2.63(m,4H),2.09(m,4H);LC-MS:523(MH+)
[阶段2]
3-(2-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚三氟乙酸
(3-(2-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚.TFA)(LCB03-0108)的合成
1H-NMR(600MHz,Acetone-d6);δ9.99(brs,1H),8.39(brs,1H),8.08(s,1H),7.29(s,1H),7.71(d,J=7.8Hz,2H),7.59(d,J=7.8Hz,1H),7.53(t,J=7.8Hz,1H),7.35(t,J=7.8Hz,1H),7.13-7.12(m,1H),7.12-7.10(m,2H),6.96-6.92(m,2H),6.83-6.82(m,1H),4.03(s,2H),3.86-3.85(m,2H),3.74(s,3H),3.62-3.61(m,3H),3.19-3.18(m,3H),2.09(s,3H);LC-MS:431(MH+)
[优选实例89]
[阶段1]N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-6-(3-(吗啉代甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-胺
(N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-6-(3-(吗啉代甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-胺)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.20(d,J=5.6Hz,1H),7.79(s,1H),7.69(s,1H),7.57(s,1H),7.37-7.28(m,4H),6.94-6.83(m,6H),6.19(s,1H),5.01(s,2H),3.80(s,3H),3.74-3.73(m,3H),3.52-3.50(m,4H),2.49-2.48(m,3H);LC-MS:538(MH+)
[阶段2]
3-(2-(3-(吗啉代甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚三氟乙酸
(3-(2-(3-(吗啉代甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚.TFA)(LCB03-0110)的合成
1H-NMR(600MHz,Acetone-d6);δ8.37(d,J=6.0Hz,1H),8.08(brs,1H),8.02(s,1H),7.77-7.73(m,2H),7.57t,J=7.8Hz,1H),7.33(t,J=8.4Hz,1H),7.29-7.26(m,1H),7.02-7.01(m,1H),6.93-6.91(m,3H),4.52(s,2H),4.07-4.03(m,4H),3.59-3.55(m,4H);LC-MS:418(MH+)
[优选实例90]
[阶段1]叔丁基4-(3-(7-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基氨基)噻吩[3,2-b]嘧啶-2-基)苯甲基)哌嗪-1-羧酸盐
(叔丁基4-(3-(7-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基氨基)噻吩[3,2-b]嘧啶-2-基)苯甲基)哌嗪-1-羧酸盐)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.34(d,J=5.6Hz,1H),7.72-7.63(m,3H),7.56-7.53(m,1H),7.48-7.46(m,1H),7.41-7.27(m,4H),6.93-6.85(m,4H),6.80-6.78(m,1H),6.48(s,1H),5.00(s,2H),3.81(s,3H),3.40-3.38(m,2H),2.47(m,4H),2.20(m,4H),1.49(s,9H);LC-MS637(MH+)
[阶段2]
3-(2-(3-(哌嗪-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚三氟乙酸
(3-(2-(3-(哌嗪-1-基甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚.TFA)(LCB03-0111)的合成
1H-NMR(600MHz,Acetone-d6);δ8.45(d,J=7.2Hz,1H),8.12(brs,1H),8.02(s,1H),7.86(d,J=7.8Hz,1H),7.78(d,J=7.8Hz,1H),7.63(t,J=7.8Hz,1H),7.28-7.24(m,1H),7.12(d,J=6.6Hz,1H),6.98-6.95(m,1H),6.92-6.60(m,3H),4.61(s,2H),3.94-3.87(m,4H),3.72-3.52(m,4H);LC-MS:417(MH+)
[优选实例91]
[阶段1]
2-(3-((乙基氨基)甲基)苯基)-N-(3-(4-甲氧苯甲基氧苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-胺
(2-(3-((乙基氨基)甲基)苯基)-N-(3-(4-
甲氧苯甲基氧)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-胺)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.31(d,J=5.6Hz,1H),7.75-7.74(m,1H),7.71(s,1H),7.62-7.61(m,1H),7.46-7.29(m,5H),6.93-6.87(m,5H),6.81-6.79(m,1H),5.01(s,2H),3.90(s,2H),3.82(s,3H),2.80(q,J=6.8Hz,2H),1.24-1.22(m,3H);LC-MS496(MH+)
[阶段2]
3-(2-(3-((乙基氨基)甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚三氟乙酸
(3-(2-(3-((乙基氨基)甲基)苯基)噻吩[3,2-b]嘧啶-7-基氨基)苯酚.TFA)(LCB03-0112)的合成
1H-NMR(600MHz,Acetone-d6);δ8.35(d,J=6.0Hz,1H),8.09(brs,1H),7.96(s,1H),7.70(t,J=7.8Hz,2H),7.51(t,J=7.8Hz,1H),7.34(t,J=7.8Hz,1H),7.29-7.26(m,1H),7.05-6.94(m,2H),6.92-6.89(m,3H),4.43(s,2H),3.41-3.40(m,2H),1.40(t,J=7.2Hz,3H);LC-MS376(MH+)
[优选实例92]
[阶段1]
2-(4-(4-(3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)苯基氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-6-基)苯基)乙醇
(2-(4-(4-(3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)苯基氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶-6-基)苯基)乙醇)的合成
锂-铝氢化钠（44毫克，1.16毫摩尔）加入到3毫升干燥的二甲基甲酰胺中。将混合物进一步在0℃下与制备实例28中合成的化合物（0.49毫克，0.96毫摩尔）在氮气下溶解在7毫升干燥的四氢呋喃中，并搅拌2小时缓慢地加入。44μl的水，44μl15％的NaOH，和132μl水在0℃依次缓慢加入到反应混合物。然后将混合物用少量的无水硫酸钠干燥和过滤。该固体用二氯甲烷洗涤，并在真空下浓缩。用正己烷磨碎后得到标题化合物（0.34克，76％），为淡黄色固体。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ9.64(s,1H),8.58(s,1H),7.86(s,1H),7.79(d,J=8.4Hz,2H),7.50-7.48(m,1H),7.44(t,J=2.0Hz,1H),7.38(d,J=8.4Hz,2H),6.60-6.58(m,1H),4.70(t,J=5.2Hz,1H),3.65(q,J=6.8HZ,2H),2.79(t,J=7.2HZ,2H),0.98(s,9H),0.22(s,6H);LC-MS:478(MH+)
[阶段2]
4-(4-(3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)苯基氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-6-基)苯乙基甲磺酸盐
(4-(4-(3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)苯基氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶-6-基)苯乙基甲磺酸盐)的合成
上述步骤1中合成的化合物（0.33克，0.69毫摩尔）溶解于5毫升二氯甲烷中，0℃下，在混合物缓慢加入三乙胺（116μl，0.83毫摩尔），和氯甲磺酸（56μl，0.72毫摩尔）。将混合物在0℃搅拌30分钟，然后再在室温下搅拌2小时。反应混合物被倒入2N的HCl溶液（50毫升）中，用乙酸乙酯（50毫升×2）萃取，有机层用水（100毫升×2）洗涤，并用无水硫酸钠干燥。真空下浓缩和柱色谱法（乙酸乙酯/正己烷，1:2）得到标题化合物（0.22g，57％），为淡黄色固体。
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.53(s,1H),7.73(s,1H),7.58-7.52(m,2H),7.32-7.14(m,5H),6.89(d,J=6.0Hz,1H),4.43(brm,2H),3.08(brm,2H),2.91(s,3H),0.88(s,9H),0.02(s,6H);LC-MS556(MH+)
[阶段3]
N-(3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)苯基)-6-(4-(2-吗啉代乙基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-胺
(N-(3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)苯基)-6-(4-(2-吗啉代乙基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-胺)的合成
上面描述的步骤2中合成的化合物（50毫克，0.089毫摩尔）溶解在1毫升甲苯，并与二异丙基胺（24μl，0.13毫摩尔）和吗啉（12μl，0.13毫摩尔）回流混合。在真空下浓缩后，用色谱柱分离（乙酸乙酯/正己烷，1:1），得到标题化合物（15毫克，31％），为黄色固体。
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.69(s,1H),7.61-7.57(m,3H),7.30-7.24(m,3H),7.19(t,J=2.0Hz,1H),7.16-7.13(m,1H),6.84(br,1H),6.76-6.74(m,1H),3.75(t,J=4.4Hz,2H),2.87-2.83(m,2H),2.64-2.60(m,4H),2.55-2.54(m,4H),0.99(s,9H),0.24(s,6H);LC-MS:547(MH+)
[阶段4]
3-(6-(4-(2-吗啉代乙基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚盐酸盐
(3-(6-(4-(2-吗啉代乙基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚盐酸盐)(LCB03-0046)的合成
用与优选实例9相似的方法，从上述的步骤3中所合成的化合物（15毫克，0.02毫摩尔），制备出淡黄色固体的标题化合物（12毫克，93％）。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ11.25(brs,1H),8.80(s,1H),7.89(s,1H),7.86(d,J=8.0Hz,2H),7.48(d,J=8.0Hz,2H),7.25-7.11(m,3H),6.69(d,J=7.6Hz,1H),4.01-3.99(m,2H),3.83-3.78(m,2H),3.51-3.46(m,2H),3.40-3.35(m,2H),3.17-3.10(m,4H);LC-MS433(MH+)
以下化合物的合成方法与上面的优选实例92相似。
[优选实例93]
3-((6-(4-(2-(四氢吡咯-1-基)乙基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚
(3-((6-(4-(2-(四氢吡咯-1-基)乙基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚)(LCB03-0043)的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ7.87-7.85(m,3H),7.49-7.47(m,2H),7.22-7.15(m,4H),6.66-6.65(m,1H),3.55(s,2H),3.17-3.11(m,4H),2.34-2.32(m,2H),2.01-1.89(m,4H);LC-MS417(MH+)
[优选实例94]
3-((6-(4-(2-(哌啶-1-基)乙基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚
(3-((6-(4-(2-(哌啶-1-基)乙基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚)(LCB03-0044)的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ10.44(brs,1H),8.78(s,1H),7.89-7.84(m,3H),7.48-7.46(m,2H),7.20-7.14(m,3H),6.70-6.69(m,1H),3.49(s,2H),3.39-3.37(m,2H),3.37-3.27(m,2H),3.20-3.18(m,2H),2.90-2.89(m,2H),1.90-1.87(m,3H),1.38-1.35(m,3H);LC-MS431(MH+)
[优选实例95]
3-((6-(4-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚
(3-((6-(4-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚)(LCB03-0045)的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ8.75(s,1H),7.88(S,1H),7.85(d,J=7.6Hz,2H),7.48(d,J=7.6Hz,2H),7.23-7.12(m,3H),6.66(d,J=7.2Hz,1H),3.72-3.68(m,2H),3.51-3.47(m,2H),3.44-3.37(m,4H),3.16-3.12(m,4H),2.83(s,3H);LC-MS446(MH+)
[优选实例96]
3-(6-(3-(2-(四氢吡咯-1-基)乙基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚盐酸盐
(3-(6-(3-(2-(四氢吡咯-1-基)乙基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚盐酸盐)(LCB03-0076)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.53(s,1H),7.72(br,1H),7.58(s,1H),7.34-7.26(m,3H),7.22-7.12(m,3H),6.88(d,J=7.6Hz,1H),6.69(d,J=8Hz,1H),2.89-2.87(m,4H),2.74-2.72(m,4H),1.86(s,4H);LC-MS417.2(MH+)
[优选实例97]
3-(6-(3-(2-(哌嗪-1-基)乙基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚
(3-(6-(3-(2-(哌嗪-1-基)乙基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚)(LCB03-0079)的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ9.83(brs,1H),8.85(s,1H),7.93(s,1H),7.83-7.73(m,2H),7.54-7.48(m,2H),7.23-7.13(m,3H),6.73(s,1H),3.75-3.71(m,2H),3.66-3.64(m,2H),3.33-3.31(m,4H),3.17-3.15(m,4H);LC-MS432(MH+)
[优选实例98]
[阶段1]
2-(4-(4-(3-羟基苯氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-6-基)苯基乙酸
(2-(4-(4-(3-羟基苯氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶-6-基)苯基)乙酸)的合成
制备实例27合成的化合物（0.2克，0.39毫摩尔）溶解于1ml的四氢呋喃和1ml甲醇1中，在混合物中缓慢加入氢氧化锂（166毫克，3.95毫摩尔），氢氧化锂在0℃左右溶解在1毫升的水。将所得混合物在室温下搅拌15小时，真空浓缩除去反应溶剂，并将其pH用2N盐酸调节到为4。用乙酸乙酯（50毫升）和水（50毫升）萃取，并通过真空蒸发除去有机溶剂，得到标题化合物（0.13毫克，87.2％）。
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ10.78(brs,1H),9.69(brs,1H),8.80(s,1H),7.87(s,1H),7.82(d,J=8.0Hz,2H),7.45(d,J=8.0Hz,2H),7.25(t,J=8.0Hz,1H),7.19(s,1H),7.14-7.12(m,1H),6.71-6.68(m,1H),3.68(s,2H;LC-MS378(MH+)
[阶段2]
2-(4-(4-(3-羟基苯氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-6-基)苯基)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮
(2-(4-(4-(3-羟基苯氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶-6-基)苯基)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮))(LCB03-0047)的合成
在上述的步骤1中合成的化合物（30毫克，0.08毫摩尔），溶解在2ml脱气的二甲基甲酰胺中，并加入（苯并***-1-基氧基）三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐（62毫克，0.12毫摩尔）和N-甲基哌嗪（44μl，0.40毫摩尔），然后将混合物在室温下搅拌15小时。反应混合物用50毫升饱和氯化铵和50毫升乙酸乙酯萃取，将有机层用50ml水洗涤两次，然后真空蒸馏。合成的固体使用正己烷固化，得到白鸽色固体的标题化合物（20毫克，54.8％）。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ8.87(s,1H),7.88(s,1H),7.82(d,J=8.0Hz,2H),7.41(d,J=8.0Hz,2H),7.26(t,J=8.0Hz,1H),7.14(s,1H),7.10(d,J=8.0Hz,1H),6.76-6.74(m,1H),3.60(s,2H),3.54(s,3H),3.49-3.39(m,6H),2.77-2.76(m,2H);LC-MS:460(MH+)
以下化合物的合成方法与上面的优选实例98相似。
[优选实例99]
2-(4-(4-(3-羟基苯氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-6-基)苯基)-1-(四氢吡咯-1-基)乙酮
(2-(4-(4-(3-羟基苯氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶-6-基)苯基)-1-(四氢吡咯-1-基)乙酮))(LCB03-0049)的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ9.61(brs,1H),9.43(s,1H),8.57(s,1H),7.86(s,1H),7.80(d,J=8.0Hz,2H),7.39(d,J=8.0Hz,2H),7.33(s,1H),7.20-7.12(m,2H),6.53-6.51(m,1H),3.70(s,2H),3.50(t,J=6.4Hz,2H),3.40-3.29(m,2H),1.89(p,J=7.0Hz,2H),1.78(p,J=7.0Hz,2H);LC-MS:431(MH+)
[优选实例100]
N,N-二乙基-2-(4-(4-(3-羟基苯氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-6-基)苯基)乙酰胺
(N,N-二乙基-2-(4-(4-(3-羟基苯氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶-6-基)苯基)乙酰胺))(LCB03-0050)的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.72(s,1H),7.57(d,J=8.4Hz,2H),7.54(s,1H),7.31-7.28(m,3H),6.93(d,J=8.4Hz,2H),6.76(dd,J=2.0,8.0Hz,1H),3.91(s,2H),3.42(q,J=7.2HZ,2H),3.34(q,J=7.2Hz,2H),1.13-1.10(m,6H);LC-MS433(MH+)
[优选实例101]
[阶段1]
(4-(4-(3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)苯基氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-6-基)苯基)(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮
((4-(4-(3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)苯基氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶-6-基)苯基)(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ7.71(s,1H),7.70(d,J=8.4Hz,2H),7.64(s,1H),7.49(d,J=8.0Hz,2H),7.27(t,J=8.0Hz,2H),7.19-7.15(m,2H),6.85(brs,1H),6.77(dd,J=2.4,8.0Hz,1H),3.82(brm,2H),3.48(brm,2H),3.44-3.33(m,1H),2.50(brm,2H),2.38-2.37(m,1H),2.33(s,3H),1.00(s,9H),0.24(s,6H);LC-MS560(MH+)
[阶段2]
(4-(4-(3-羟基苯氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-6-基)苯基)(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮盐酸盐
((4-(4-(3-羟基苯氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶-6-基)苯基)(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮盐酸盐))(LCB03-0052)的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ10.65(brs,1H),9.68(brs,1H),7.99(s,1H),7.97(d,J=8.0Hz,2H),7.64(d,J=8.0Hz,2H),7.24-7.13(m,4H),6.68(d,J=8.0Hz,1H),3.50-3.39(m,4H),3.33-3.32(m,2H),3.11-3.08(m,2H),2.78(s,3H);LC-MS446(MH+)
[优选实例102]
[阶段1]
甲基2-(4-(4-(3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)苯基氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-6-基)苯甲胺基)丙酸酯
(甲基2-(4-(4-(3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)苯基氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶-6-基)苯甲胺基)丙酸酯)的合成
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.69(s,1H),7.68-7.63(m,3H),7.47-7.44(m,2H),7.29-7.26(m,1H),7.17-7.14(m,2H),6.92(d,J=5.2Hz,1H),6.77(d,J=3.6Hz,1H),4.81(m,1H),3.80(s,3H),1.55(d,J=5.2Hz,3H),0.99(s,9H),0.23(s,6H);LC-MS563(MH+)
[阶段2]
甲基2-(3-(4-(3-羟基苯氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-6-基)苯甲胺基)丙酸酯
(甲基2-(3-(4-(3-羟基苯氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶-6-基)苯甲胺基)丙酸酯))(LCB03-0071)的合成
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6);δ9.64(brs,1H),8.91(d,J=6.6Hz,1H),8.56(s,1H),8.00-7.99(m,3H),7.95(d,J=8.4Hz,2H),7.29(brs,1H),7.15(d,J=7.2Hz,1H),7.11(t,J=7.8Hz,1H),6.49(d,J=7.8Hz,1H),4.48-4.46(1H),3.61(s,3H),1.38(d,J=7.2Ha,3H);LC-MS449(MH+)
[优选实例103]
3-(4-(3-羟基苯氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-6-基)苯甲酸
(3-(4-(3-羟基苯氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶-6-基)苯甲酸))(LCB03-0051)的合成
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ9.70(brs,1H),8.61(s,1H),8.35(s,1H),8.19(d,J=7.6Hz,1H),8.04-8.01(m,2H),7.68(t,J=7.6Hz,1H),7.50(d,J=8.4Hz,1H),7.45(s,1H),7.24(t,J=8.0Hz,1H),6.61(d,J=8.0Hz,1H);LC-MS364(MH+)
[优选实例104]
3-(6-(4-(乙氧甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-4-基氨基)苯酚
(3-(6-(4-(乙氧甲基)苯基)噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)苯酚))(LCB03-0073)的合成
双（频哪醇）乙硼烷（0.16克，0.63毫摩尔），PdCl2dppf（13毫克，0.015毫摩尔）和乙酸钾（0.15克，1.57毫摩尔）在反应容器中混合，并真空干燥。制备实例30中合成的化合物（0.11克，0.52毫摩尔）溶解在3毫升脱气的二甲基甲酰胺中，加入到反应容器中的反应混合物中，随后在85℃下搅拌15小时。将反应混合物冷却至室温，并用50毫升乙酸乙酯和50毫升饱和氯化铵50毫升萃取。有机层用50毫升的氯化铵洗涤两次，然后用无水硫酸钠干燥，并在真空下浓缩得到2-（4-（乙氧基甲基）苯基）-4,4,5,5-四甲基-1，3-1,2-二氧杂硼烷，为棕色油类。该化合物，制备实例6中合成的化合物（50毫克，0.11毫摩尔），PdCl2dppf（3毫克，0.003毫摩尔）依次加入到20毫升脱气的二甲基甲酰胺中，然后进一步加入2N碳酸钠溶液（0.12毫升，0.23毫摩尔）。于80℃下搅拌5小时，将反应混合物冷却至室温，并用100ml乙酸乙酯和100ml饱和氯化铵萃取。将有机层用100毫升饱和氯化铵洗涤两次，并用硫酸钠干燥，真空下浓缩。柱色谱法（二氯甲烷/甲醇，20/1）后，得到标题化合物（20毫克，64％）。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6);δ9.60(brs,1H),9.44(brs,1H),8.58(s,1H),7.88(s,1H),7.85(d,J=8.0Hz,1H),7.47(d,J=8.0Hz,2H),7.33(s,1H),7.19(d,J=8.0Hz,1H),7.14(t,J=8.0Hz,2H),6.52(d,J=7.6Hz,1H),4.52(s,2H),3.52(q,J=7.0Hz,2H),1.18(t,J=6.8Hz,3H);LC-MS378(MH+)
[优选实例105]
2-(4-(4-(3-羟基苯氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶e-6-基)苯甲胺基)丙酸
(2-(4-(4-(3-羟基苯氨基)噻吩[3,2-d]嘧啶-6-基)苯甲胺基)丙酸))(LCB03-0075)的合成
用与优选实例31相似的方法，从优选实例102的步骤1中合成的化合物（40毫克，0.07毫摩尔）中得到标题化合物（18毫克，60％）。
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ10.07(brs,1H),9.53(brs,1H),8.82(d,J=10.8Hz,1H),8.67(s,1H),8.05-7.97(m,4H),7.28(s,1H),7.18(d,J=7.2Hz,2H),6.59-6.58(m,1H),4.44(p,J=10.8Hz,1H),1.49(d,J=10.8Hz,3H);LC-MS435(MH+)
[优选实例106]
[阶段1]
N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)噻唑[4,5-d]嘧啶e-7-胺
(N-(3-(4-甲氧苯甲基氧)苯基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)噻唑[4,5-d]嘧啶-7-胺)的合成
制备实例33合成的化合物（100毫克，0.24毫摩尔）溶解在2毫升的N-甲基吡咯烷中，回流18小时，加入N-甲基哌嗪（0.57毫升，4.87毫摩尔），该混合物用40毫升水和40毫升乙酸乙酯萃取，并用硫酸钠干燥，过滤，然后在真空下浓缩。柱色谱法（二氯甲烷/甲醇，20/1→15/1）得到标题化合物（111毫克，99％）。
1H-NMR(400MHz,CDCl3);δ8.52(s,1H),7.35(d,J=8.4Hz,2H),7.29(t,J=8.0Hz,1H),7.00-6.99(m,1H),6.91-6.86(m,4H),5.01(s,2H),3.81(s,3H),3.66(m,4H),2.50-2.47(m,4H),2.33(s,3H);LC-MS463(MH+)
[阶段2]
3-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)噻唑[4,5-d]嘧啶e-7-基氨基)苯酚三氟乙酸
(3-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)噻唑[4,5-d]嘧啶-7-基氨基)苯酚.TFA))(LCB03-0100)的合成
上述的步骤1中合成的化合物（50毫克，0.108毫摩尔）溶解在2毫升二氯甲烷中，在室温下搅拌10小时后，加入2ml三氟乙酸和苯甲醚（59μl，0.54毫摩尔）。将反应混合物在真空下浓缩后，用二氯甲烷，甲醇，二***，azotrope浓缩，得到标题化合物（48毫克，99％）。
1H-NMR(600MHz,Acetone-d6);δ8.69(s,1H),7.31-7.28(m,1H),7.15-7.13(m,1H),7.02-6.98(m,1H),6.87-6.84(m,1H),4.13-4.10(m,4H),3.59-3.58(m,4H),3.02(s,3H);LC-MS343(MH+)
[对照组优选实例]对照化合物1~3的合成
为了确认本发明化合物的优异功效，本发明合成了以下三个控制化合物。这些化合物具有的药效团噻吩吡啶与本发明的这些化合物相似，但并不包括在本发明中定义的化学式1中。合成这些控制化合物的优选实例见如下描述：
控制化合物1控制化合物2控制化合物3
[控制化合物1的制备实例]
[制备实例1-1]
2-甲基-5-硝基吲哚（2克，8.78毫摩尔）溶解到80毫升二氯甲烷中，再依次加入氢氧化钠（1.1克，26.36mmol），四丁基溴化铵（32mg，0.87毫摩尔）和4-硝基苯基氯甲酸酯（1.86克，9.22mmol），随后在室温下搅拌1小时。过滤出在反应中制成的固体后，将反应混合物用二氯甲烷洗涤。液体层经过浓缩得到的2-甲基-5-硝基-1-（4-硝基苯氧基羰基）吲哚（2.9克，96％），为黄色固体。
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6);δ8.73(d,J=4.8Hz,1H),8.13(s,1H),7.69(d,J=4.8Hz,1H),5.08(brs,1H),4.40~4.34(m,1H),4.02~3.95(m,2H),3.69~3.59(m,2H),2.05~1.94(m,2H)LC-MS342(MH+)
[制备实例1-2]
2-甲基-5-硝基-1-（4-硝基苯氧基羰基）吲哚（1.9克，5.56毫摩尔）溶解于25毫升四氢呋喃中后，加入环丙基胺（3.1毫升，44.53mmol），并将混合物在室温下搅拌3小时。用水和乙酸乙酯萃取后，在反应中制成的固体通过过滤除去。然后，进行柱色谱法（乙酸乙酯/正己烷，1/4），得到2-甲基-5-硝基吲哚-1-羧基酸环丙基酰胺（660毫克，46％），为黄色固体。
1H-NMR(600MHz,CDCl3);δ8.40(d,J=2.4Hz,1H),8.09(dd,J=9.6,2.4Hz,1Hz),7.65(d,J=9.6Hz,1H),6.47(s,1H),5.79(brs,1H),2.98~2.82(m,1H),2.59(s,3H),0.99~0.97(m,2H),0.79~0.74(m,2H)
LC-MS476(MH+)
[制备实例1-3]
2-甲基-5-硝基吲哚-1-羧基酸甲基酰胺（860毫克，3.32毫摩尔）溶解于乙酸乙酯/四氢呋喃（30ml/24ml），随后加入10％的Pd/C（354mg，0.33mmol），在室温下搅拌2小时，并用cellite和真空浓缩的方法除去钯。通过柱色谱法（二氯甲烷/甲醇，98/2），得到5-氨基-2-甲基-吲哚-1-羧基酸酰胺环丙基酰胺（490mg，64％）为橙色固体。
1H-NMR(600MHz,CDCl3);δ7.32(d,J=8.4Hz,1H),6.76(d,J=2.4Hz,1H),6.56(dd,J=8.4,2.4Hz,1H),6.136(s,1H),5.84(brs,1H),3.55(brs,1H),2.89~2.86(m,1H),2.53(s,3H),0.92~0.88(m,2H),0.71~0.69(m,2H)
LC-MS230(MH+)
[控制化合物2的制备实例]
5-[2-（3R-羟基吡咯烷-1-羰基）-噻吩并〔3,2-b]吡啶-7-基氨基]-2-甲基-吲哚-1-羧基酸酰胺环丙基酰胺的合成
[制备实例2-1]
用类似于制备实例6的方法，起始原料（0.1克，0.46mmol）溶解于5毫升二氯甲烷和亚硫酰氯（0.05毫升，0.70mol）中，加入1滴二甲基甲酰胺中，随后回流2小时。通过真空蒸馏除去溶剂后，R-3-吡咯烷醇（45mg，0.51mmol）溶解在1ml二氯甲烷中的溶液中，被缓慢地加入反应物中，在室温下搅拌2小时。通过真空蒸馏，除去反应物中溶剂后，进行柱色谱法（二氯甲烷/甲醇，98/2），得到中间体（98毫克，74％），为白色固体。
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6);δ8.73(d,J=4.8Hz,1H),8.13(s,1H),7.69(d,J=4.8Hz,1H),5.08(brs,1H),4.40~4.34(m,1H),4.02~3.95(m,2H),3.69~3.59(m,2H),2.05~1.94(m,2H)
LCMS283(MH+)
[制备实例2-2]
将得到中间体化合物（97mg，0.34mmol）和对比制备实施例1中得到的化合物（87MG，0.38mmol）溶解在0.6毫升二氯甲烷和6毫升乙醇中，并加入0.08毫升4M的HCl/二恶烷中，随后回流20小时。通过真空蒸馏，除去反应物中溶剂后，柱色谱法（二氯甲烷/甲醇，97/3）进行，得到标题化合物（100毫克，60％），为黄色固体。
溶解于6ml的二氯甲烷，乙醇和0.6毫升4M盐酸/二恶烷0.08毫升***的混合物回流20小时。在反应后除去溶剂，得到经真空蒸馏，柱色谱法（二氯甲烷甲烷/甲醇，97/3），得到标题化合物（100毫克，60％），为黄色固体。
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6);δ9.11(brs,1H),8.52(s,1H),8.29(d,J=5.4Hz,1H),7.83(d,J=39.6Hz,1H),7.55(d,J=8.4Hz,1H),7.37(s,1H),7.10,(8.4Hz,1H),6.73(d,4.8Hz,1H),6.36(s,1H),5.07(d,J=8.4Hz,1H),4.35(d,J=33Hz,1H),3.95~3.90(m,2H),3.64~3.55(m,2H),3.46~3.44(m,1H),2.88~2.82(m,1H),2.47(s,3H),2.03~1.85(m,2H),0.77~0.76(m,2H),0.69~0.64(m,2H)LCMS476(MH+)
[控制化合物3的制备实例]
5-（2-[（S）-2-（甲氧基甲基）吡咯烷-1-羰基〕噻吩并〔3,2-b]吡啶-7-基氨基）-2-甲基吲哚-1-羧基酸酰胺环丙基酰胺的合成
标题化合物用与控制化合物的制备实例2相似的方法合成。
1H-NMR(600MHz,CDCl3);δ8.32(d,J=6.0Hz,1H),7.77(brs,1H),7.61(d,J=8.4Hz,1H),7.37(d,1.8Hz,1H),7.08(dd,J=8.4,2.4Hz,1H),6.68(d,J=6.0Hz,1H),6.29(s,1H),6.19(s,1H),6.12(brs,1H),4.49(brs,1H),3.87~3.83(m,2H),3.65~3.61(m,2H),3.38(s,3H),2.96~2.92(m,1H),2.59(s,3H),2.08~1.79(m,5H),0.98~0.92(m,2H),0.88~0.86(m,2H)
LCMS504(MH+)
[控制化合物4的制备实例]
（2S，4R）-4-羟基吡咯烷-1-1,2-二羧基二羧酸1-苄酯2-甲基酯（1.6克，6.03mmol）溶解在16毫升丙酮中，然后加入氧化银（4.7克，20.50mol）和碘甲烷（1.3毫升，21.10mmol），随后在57℃下搅拌8小时。使用cellite除去氧化银后，将反应混合物用甲醇洗涤，真空浓缩。进行柱色谱法（乙酸乙酯/正己烷，1/9），得到（2S，4R）-4-甲氧基吡咯烷-1,2-二羧基羧酸1-苄酯2-甲酯（1.53克，87％），为油状物。
1H-NMR(600MHz,CDCl3);δ7.31~7.23(m,5H),5.22~5.00(m,2H),4.44~4.40(m,1H),4.10~4.02(m,1H),3.76(s,3H),3.69(m,1H),3.54(s,2H),3.29(brs,3H),2.42~2.30(m,1H)
（2S，4R）-4-甲氧基吡咯烷-1,2-二羧基羧酸1-苄酯2-甲酯（1.53克，5.25mmol）溶解在7毫升四氢呋喃中，并缓慢加入3.15毫升的硼氢化锂（2.0M/THF）在0℃，然后搅拌4小时。添加1毫升的饱和碳酸氢钠终止反应后，用乙酸乙酯和碳酸氢钠萃取反应混合物，然后真空浓缩。进行柱色谱法（乙酸乙酯/正己烷，1/9），得到（2S，4R）-2-羟甲基-4-甲氧基吡咯烷-1-羧基酸苄基酯（1.3克，93％），为透明油状物。
1H-NMR(600MHz,CDCl3);δ7.51~7.38(m,5H),5.24~5.00(m,2H),4.45~4.40(m,1H),4.23~4.18(m,2H),3.95~3.73(m,3H),3.51~3.42(m,1H),3.31(s,3H),2.22~2.14(m,1H)
（2S，4R）-2-羟甲基-4-甲氧基吡咯烷-1-羧基酸苄基酯（1.25克，4.71毫摩尔）溶解在甲醇中，并加入10％的Pd/C，然后搅拌15小时。通过使用cellite和真空浓缩除去钯后，得到（（2S，4R）-4-甲氧基吡咯烷-2-基）甲醇（606mg，98％）。
1H-NMR(600MHz,CDCl3);δ4.11~4.08(m,2H),4.00~3.98(m,1H),3.82~3.79(m,1H),3.51~3.49(m,1H),3.41~3.88(m1H),3.32(s,3H),2.17~2.14(m,1H),2.03~1.99(m,1H)
使用与控制化合物制备实例2类似的方法，由（（2S，4R）-4-甲氧基吡咯烷-2-基）甲醇得到标题化合物。
1H-NMR(600MHz,CDCl3);δ8.65(d,J=4.8Hz,1H),7.58(s,1H),7.37(d,J=4.8Hz,1H),4.61~4.57(m,1H),4.12~4.05(m,2H),4.01(brs,1H),3.94~3.87(m,2H),3.77~3.74(brs,1H)3.28(s,3H),2.34~2.30(m,1H),1.87~1.82(m,1H)
LC-MS327(MH+)
[控制化合物5的制备实例]
5-[2-（（2S，4R）-2-羟甲基-4-甲氧基吡咯烷-1-羰基）-苯并[b]噻吩-7-基氨基]-2-甲基-吲哚-1-羧基酸酰胺环丙基酰胺的合成
如上所示的标题化合物，用与控制化合物制备实例2-2类似的方法，自控制化合物制备实例1中合成的化合物（22mg，0.09毫摩尔）和控制化合物的制备实例4中合成的化合物（28mg，0.08毫摩尔）获得。
1H-NMR(600MHz,CDCl3);δ8.94(s,1H),8.58(d,J=3.0Hz,1H),8.34(d,J=5.3Hz,1H),7.84(s,1H),7.61(d,J=8.6Hz,1H),7.43(d,J=1.8Hz,1H),7.16(dd,J=8.8,2.0Hz,1H),6.78(d,J=5.6Hz,1H),6.54(s,1H),6.43(s,1H),4.86(t,J=5.5Hz,1H),4.28(brs,1H),4.09(brs,1H),3.95~3.89(m,2H),3.78~3.75(m,1H),3.60~3.58(m,1H),3.23(s,3H),2.94~2.89(m,1H),2.56(m,3H),2.15(t,J=7.3Hz,2H),0.84~0.82(m,2H),0.74~0.71(m,2H)LC-MS520(MH+)
【药理评估】
<试验实例1>c-Src家族和盘状结构域受体家族的酪氨酸激酶活性的抑制活性的体外测定。
Src家族中c-Src、HCK、FGR、Lyn的酪氨酸激酶在各种炎症细胞激活中扮演中心角色，对化学式1表示的化合物和用于比较的三个控制化合物对这些酪氨酸激酶的体外抑制活性进行了分析。此外，圆盘状受体酪氨酸激酶家族，即DDR1和DDR2也已知对于一些免疫细胞和α平滑肌肌细胞和成纤维细胞的激活中发挥重要的作用，对化学式1表示的化合物和用于比较的三个控制化合物对这些激酶的体外抑制活性也进行了分析。本实验中用到的人重组酪氨酸激酶c-Src、HCK、FGR和Lyn是在昆虫细胞中使用杆状病毒表达***这一传统的方法纯化而得。根据以前文献中描述的方法（YangK.etal,JBiolChem.;280(47):39058-66,2005)，DDR1和DDR2激酶结构域激活和纯化后与谷胱甘肽-S-转移酶（GST）制成融合蛋白。
更具体地，完整的人类DDR1和DDR2蛋白在细胞质中的露出部位的激酶结构域片段被融合到GST蛋白和c-Src蛋白，共表达在昆虫细胞中，使用常规的杆状病毒表达***激活融合到谷胱甘肽上的DDR1和DDR2酪氨酸激酶结构域，激活的激酶蛋白通过在谷胱甘肽-琼脂糖珠上进行柱色谱法而被纯化。
针对上面提到的激酶的抑制活性的测量，是在含有2UL纯化的蛋白激酶（10-50ng），20mM的Tris-盐酸，pH为8.0，5mM的氯化镁，0.5mM的二硫苏糖醇，0.01mM的ATP，4ug的聚（D4Y）N肽底物（Promega公司），0.2uCi的32P-ATP和表格1中所示的各种化合物的反应混合物中测定。将该混合物在30℃保温15分钟，然后加入一半体积的30％磷酸溶液终止反应。随后，将反应混合物溶液点在涂有抗生物素蛋白的膜（Promega）上。该膜用50mM磷酸盐，0.1NNaCl缓冲液（pH6.0）的溶液清洗5次，每次10分钟。然后每个斑点的放射活性通过BAS图像分析仪（富士）进行定量。
表格1显示的是试验实例中描述的化合物的和用于比较的三种控制化合物在浓度为1μM时对c-Src家族的HCK、FGR、LYN，DDR1和DDR2酪氨酸激酶的％抑制。
[表格1]
(>;大于<;小于,ND;未测定)
本发明的化合物如表1所示，发现能抑制Src家族酪氨酸激酶活性，在浓度为1μM时平均抑制率超过65％。特别是，化合物LCB03-0107，03-0032～37，LCB03-0040～42，LCB03-0060～67，LCB03-007003-0076LCB，LCB03-0079～95～112具有共同的结构特征，普遍表现出了较高的抑制效果，抑制率超过70％～80％。
另一方面，与表1中所示的本发明的优选实例中的化合物相比，这三种用于比较的控制化合物对Src家族酪氨酸激酶抑制能力小于20％。而且，表1所示的本发明的化合物在浓度为1μM时对盘状结构域受体家族酪氨酸激酶的活性的抑制率超过70％。特别是，化合物LCB03-0032～37，LCB03-0040～68，LCB03-0070，LCB03-0072～80，LCB03-0083～99，LCB03-0107～112具有共同的结构特征，普遍表现出了较高的抑制效果，抑制率超过70％～80％。另一方面，与表1中所示的本发明的优选实例中的化合物相比，这三种用于比较的控制化合物对盘状结构域受体家族酪氨酸激酶的抑制能力小于20％。
这些事实表明，本发明的化合物是由共同的药效基团如羟基苯胺基嘧啶或羟基苯胺基吡啶产生的衍生物，对盘状结构域受体家族的酪氨酸激酶Src家族酪氨酸激酶普遍具有很强的抑制活性。与此相反，用于比较的控制化合物与本发明的化合物相比具有明显不同的药理作用机制，因为这些控制化合物对Src或盘状家族酪氨酸激酶具有较弱的抑制活性。
从这些事实可以得出结论，本发明的化合物由于其有效地抑制与炎症性疾病相关的Src蛋白酪氨酸激酶活性，从而对炎症性疾病的预防或治疗是有用的。特别是，因为这些化合物可以抑制在成纤维细胞，上皮细胞和或α-平滑肌细胞的激活中有重要作用的盘状家族酪氨酸激酶的活性，因此它们可以有效地用于抑制伴随有由活性成纤维细胞，上皮细胞和或α-平滑肌细胞引起的组织纤维化和增生的炎症性疾病。
<试验实例2>对LPS（脂多糖）激活的巨噬细胞中合成的一氧化氮（NO）和肿瘤坏死因子-α抑制活性的评估。
在体内和体外实验中，当用LPS处理巨噬细胞，免疫细胞因子如TNF-α，IL-6，IL-12和可产生NO的iNOS（诱导型一氧化氮合酶）被诱导增加。
目前可抑制这种炎性免疫介质的合成的化合物被认为具有抗炎活性。本发明的化合物被用于处理活化的巨噬细胞，检测其对TNF-α和一氧化氮合成的体外抑制活性。具体而言，J744A.1巨噬细胞，接种在含有10％FBS的DMEM培养基的24孔板中进行培养。培养基更换为含1％FBS的DMEM培养液后，用试验实例中的化合物进行处理，处理浓度为10μM，30分钟后用100纳克/毫升的LPS处理，6小时后，取培养基，使用酶联免疫吸附测定试剂盒（R＆DSystems公司）进行TNF-α合成量的测定。相比未经化合物处理的TNF-α的含量，经各化合物处理后的减少量表示为％抑制，见表格2。
[表格2]
本发明的化合物在浓度为10μM下抑制了TNF-α的合成，如表格2中所示。特别是，化合物LCB03-0032～37，LCB03-0040～68，LCB，LCB03-007003-0072～80，LCB03-0083～99，LCB03-0107～112具有共同的结构特征，表现出约70％或更高的抑制效果。
化合物LCB03-0108～0111有一个共同的结构特征，抑制活性也超过50％。然而，与表格2中本发明的化合物相比，这三个作为比较的控制化合物对TNF-α的合成表现出较少的抑制活性。从这些事实可以得出结论，本发明的化合物由于有效的抑制直接与炎症性疾病相关联的TNF-α的产生，从而对于预防和/或治疗炎症性疾病很有用。此外，J744A.1巨噬细胞通过上述相同的方法激活，培养24小时后，将100μl培养基与相同体积的格林试剂混合，15分钟后测定在540nm波长处的吸光度，以测量巨噬细胞中一氧化氮（NO）的相当合成量。与未经化合物处理中的NO量相比，经各化合物处理后减少的NO合成量表示为%抑制，见表格3。
[表格3]
本发明的化合物在浓度为10μM时对NO合成的抑制如表格3所示。特别是化合物LCBLCB03-003003-0031～38，LCB03-0040～42，LCB03-0053～54，LCB03-0060～67，LCB03～0070，LCB03～0076，LCB03～0082，LCB03-0084～94，和LCB03-0107～112具有共同的结构特征，一般表现出约80％或更高的抑制效果。与表格3中本发明的化合物相比，这三个作为比较的控制化合物对NO的合成表现出显著较小的抑制活性。这些事实证明本发明的化合物由于有效的抑制与炎症性疾病相关联的重要炎症介质TNF-α和/或NO的产生，从而对于预防和/或治疗炎症性疾病很有用。此外，本发明中化合物的这种活性优于作为比较的其他三个控制化合物。
<试验实例3>由1型胶原和TGF-β1刺激激活的成纤维细胞中，对α-平滑肌肌动蛋白的表达和细胞迁移的抑制活性的测定。
当成纤维细胞，上皮细胞和α平滑肌肌细胞被激活转换为肌成纤维细胞，一个重要的特征是α-平滑肌肌动蛋白的表达增加。α-平滑肌肌动蛋白表达的增加，使得成肌细胞具有了增加的迁移特性。这些现象与炎性细胞的激活一起出现，激活的成肌细胞型细胞已知直接有助于炎症性疾病的病理。我们从Balb/C小鼠中分离的皮肤成纤维细胞，接种在涂有200微升100微克/毫升的I型胶原的24孔培养皿中，用10ng/ml的TGF-β1处理48小时后，用专门的抗体将细胞裂解液进行Western印迹，证实α-平滑肌肌动蛋白的表达量显著增加。在这个实验中，α-平滑肌肌动蛋白的表达水平是通过免疫印迹实验中α-平滑肌肌动蛋白显影在X射线底片上的化学发光信号的蛋白条带的密度而量化的。本实验中，α-平滑肌肌动蛋白的抑制程度，用0.5μM的各化合物处理后与未经化合物处理的％抑制比来表示。
[表格4]
如表格4中所示，本发明的化合物s的抑制α-平滑肌肌动蛋白的表达是在浓度为0.5μM时，平均抑制率为55.3％。特别是化合物LCB03-0032～37，LCB03-0040～42，LCB03-005967，LCB03-0070，03-0076LCB，LCB03-0079～80，LCB03-0083～85，LCB03-0088，LCB03-0107～112具有共同的结构特征，表现出约60％或更高的抑制效果。然而，在相同的实验条件下，与本发明的化合物相比，这三个用于比较的控制化合物显示出较弱的抑制活性，如表格4中所示。
成纤维细胞经胶原和TGF-β1激活后，表现出增加的迁移，对本发明的化合物的抑制活性进行了测定。高密度的源于小鼠皮肤的成纤维细胞接种于涂有胶原的6孔培养板中，在含有10％FBS的DMEM培养基中生长过夜至细胞单层长满。用移液器枪头在细胞单层上做均一的直线划痕，然后更换培养基，加入10ng/ml的TGF-β1，在37℃细胞培养箱中孵育24小时。
培养的细胞使用***固定，并用结晶紫染色。每个染色后的培养物中随机选择五个划痕区域在100倍放大率下拍摄，然后对迁移到划痕伤口的细胞进行计数和求平均值。本发明中的化合物处理后，迁移到划痕伤口的细胞数目下降，如表格5所示，未经化合物处理的迁移细胞数目作为100%，经每种化合物处理后的抑制%见表格5。
[表格5]
如表格5所示，本发明的化合物在浓度为0.5μM时抑制激活的成纤维细胞的迁移，平均的抑制率是36.9％。特别是化合物LCB03-0032，LCB03-0036～37，LCB03-0040～42，LCB03-0060～67，LCB03-0076，LCB03-0079～80，LCB03-0084～85LCB03-0091，和LCB03-0107～112具有共同的结构特征，表现出约平均抑制值或更高。然而，在相同的实验条件下，与本发明的化合物相比，这三个控制化合物显示出较弱的抑制活性，如表格5中所示。
这些结果表明，本发明的化合物，对抑制成纤维细胞激活为成肌细胞型细胞有优异的功效。然而，相比之下，这三种控制化合物的抑制活性较弱。因此，本发明的化合物在与活化的成肌细胞相关的炎症性疾病，伤口治疗或瘢痕形成中表现出预防和/或治疗效果。
<试验实例4>由恶唑酮诱导的小鼠皮肤炎症模型中抗炎疗效的测定。
使用8周龄的Balb/C小鼠，由恶唑酮诱导皮肤炎症动物模型，来评估本发明中化合物的抗炎活性。首先，在8周龄的Balb/C小鼠剃毛后的耳朵背侧施用50μl溶解于丙酮：橄榄油（4:1）的3％的恶唑酮致敏连续两天。4天后，在炎症诱导前用卡尺测量耳朵的厚度。随后，20ul的溶解在乙醇中的0.1％的各化合物施用到耳朵的内外两侧。30分钟后，20ul溶解在丙酮：橄榄油（4:1）中的0.5％恶唑酮被施用于小鼠耳部的内侧和外侧。36小时后，测量由炎症引起的耳朵厚度的增加。仅用20微升的载体溶液处理过的实验组中耳朵厚度的增加量作为100％，用各化合物处理组中的耳厚度的增加量也用％值表示，得到各组的平均值（n=4）。从这个实验中，对增加的耳厚度的抑制%量，是与炎症的程度成正比，如表格6所示，分别施加0.1％的本发明的化合物和3种控制化合物。
[表格6]
如表格6所示，本发明的化合物在浓度为0.1%时可以抑制小鼠耳朵的炎症，平均抑制率为49.4%。尤其是，化合物LCB03-0059~67,LCB03-0070,LCB03-0072,LCB03-0076,LCB03-0079~80,LCB03-0093~94,LCB03-0107~112拥有共同的结构特征，表现出约50%或更高的抑制活性。本发明的化合物一般表现出显著的抗炎活性，与同样实验条件下的两种控制化合物相比。因此，本发明的化合物具有优于其他作为比较的两种控制化合物的优异的抗炎活性。
<试验实例5>LCB03-0110对各种酪氨酸激酶抑制活性的评估。
为了检测本发明提供的代表性化合物LCB03-0110的抑制活性，我们开展了体外实验。化合物针对各种激酶的IC50的测量方法，使用上面试验实例1或CRO公司如反应生物公司(PaloAlto,USA)中所述体外激酶活性的测量方法。下面的表格7列出了LCB03-0110对各种免疫细胞活性中涉及的酪氨酸激酶的IC50数值。
[表格7]
激酶 IC50(nM) 激酶 IC50(nM)
c-Src 1.3 Blk 50.7
Lck 21.6 Btk1 17.7
Lyn 4.3 Syk1 25.2
Fyn 2.3 VEGFR2 4.6
Yes 2.1 EPHA3 5.1
Fgr 3.7 FLT3 26.1
Hck 4.4
正如表格7所示，LCB03-0110化合物对在免疫细胞激活中有重要作用的Src家族酪氨酸激酶的IC50值为1.3~50.7nM。本化合物对于在免疫细胞信号传导中有重要作用的Syk1,Btk1,EphA3,和FLT3酪氨酸激酶有很强的抑制，IC50值为4.6nM～26.1nM。这些结果暗示出本化合物可以有效的抑制免疫细胞激活中涉及的激酶活性，因此，既然LCB03-0110和本发明中提供的化合物在结构和活性相似，可以有效的抑制在炎症免疫反应中有重要作用的Syk1,Btk1,EphA3,和FLT3酪氨酸激酶和Src家族的活性，它们可以用于预防或治疗炎症性疾病或免疫紊乱。此外，因为LCB03-0110和本发明中提供的化合物在结构和活性相似，可以有效的抑制在心血管形成中有重要作用的VEGFR2酪氨酸激酶的活性，他们可以用于预防或治疗糖尿病视网膜病变。
<试验实例6>LCB03-0110对活化巨噬细胞中细胞因子和NO合成的抑制活性的评估。
如上试验实例2所述，J774A.1巨噬细胞用各种浓度的化合物LCB03-0110处理后再经LPS刺激。6小时后，收集培养基，用酶联免疫吸附分析TNF-α，IL-6，和IL-12，并于24小时后，收集培养基分析NO的合成量。这些结果见图1。抑制50％的TNF-α和NO的合成，所需的化合物LCB03-0110浓度约为2μM，抑制50％的IL-6的合成，所需浓度约为7μM。特别是，IL-12的合成，浓度为1μM的化合物LCB03-0110处理后，可以抑制其由LPS诱导的合成近100％。
从这些数据中得出，LCB03-0110和本发明中提供的化合物在结构和活性相似，可以有效的抑制免疫细胞因子如TNF-α，IL-6和IL-12和炎性免疫介质如NO的表达。因此，它们可以用于预防或治疗炎症性疾病。
<试验实例7>LCB03-0110对LPS激活的巨噬细胞中的COX-2和iNOS合成的抑制活性的评估
体外实验被用来评估本发明中不同浓度LCB03-0110处理对巨噬细胞中诱导表达的COX-2和iNOS的抑制作用。J744A.1巨噬细胞用不同浓度的LCB03-0110处理30分钟后，加入100ng/ml的LPS孵育24小时。细胞裂解物与等体积的2XLaemmli上样缓冲液混合，煮沸两分钟。等量的细胞裂解液上样，进行10％SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，然后印迹到PVDF膜上。用Western印迹法，评估细胞内COX-2，iNOS的表达量。如图2所示，LPS处理增加了iNOS和COX-2的表达，但1μMLCB03-0110可以抑制iNOS的合成50%，2μM的浓度可以抑制COX-2合成的50%。从这些数据中得出，LCB03-0110和本发明中提供的化合物在结构和活性相似，可以有效的抑制iNOS和COX-2的表达。因此它们可以被用来预防和治疗炎症性疾病。
<试验实例8>LCB03-0110对巨噬细胞迁移的抑制活性的评估。
在炎症反应中，激活的巨噬细胞响应趋化因子而迁移到炎症部位，然后招募更多的巨噬细胞在炎症部位使炎症反应持续且更强。通过实验确定本发明的LCB03-0110是否能够抑制MCP-1诱发的活化巨噬细胞的增加迁移。试验实例中，105的巨噬细胞培养在含1％FBS的DMEM培养基中，接种于24孔Transwell细胞迁移测定***的上部小室中（康宁公司），用100纳克/毫升的LPS或与各种浓度的LCB03-0110一起进行处理。在下部小室中，加入20ng/ml的MCP-1到含1％FBS的DMEM培养基中。经过8小时培养后，隔膜的上表面的细胞用棉签除去，然后隔膜下表面的迁移后的巨噬细胞用结晶紫染色。迁移的巨噬细胞被定量后如图3所示。尽管MCP-1增加了LPS活化的巨噬细胞的迁移，经2μM的LCB03-0110处理，可以抑制超过50％的细胞迁移。因此，由于LCB03-0110和本发明中提供的化合物在结构和活性相似，可以有效的抑制活化的巨噬细胞迁移到炎症部位，可以用于预防或治疗炎症性疾病。
<试验实例9>LCB03-0110对肥大细胞的脱颗粒作用的抑制活性的评估。
肥大细胞被认为是为过敏性免疫疾病如哮喘或特应性皮炎中所涉及的重要的免疫细胞之一。在过敏性免疫反应中，增加的IgE分子与FcεRI受体在肥大细胞表面结合。当IgE分子结合到一个抗原，通过IgE抗体-抗原复合物与FcεRI受体交联，从而诱导细胞内的Src家族酪氨酸激酶，Syk的酪氨酸激酶，和Btk1酪氨酸激酶的激活，导致细胞因子，如肿瘤坏死因子-α的分泌，IL-4和IL-13等的分泌，以及肥大细胞的脱颗粒。
肥大细胞脱颗粒使得不同的免疫介质向细胞外释放，这是引起严重的过敏性炎症性疾病症状的主要原因。通过实验来检验是否本发明的化合物可以抑制炎性细胞因子的合成，以及IgE介导的受体激活信号引发肥大细胞脱颗粒。作为一个试验实例，RBL-2H3肥大细胞接种于含有10％FBS的DMEM培养液的24孔培养板，铺板密度为2×105细胞/孔，与500ng/ml的抗DNP-IgE孵育20小时，然后用含10％FBS和CaCl2的PIPES缓冲液洗涤两次。
在各孔中加入用200μLPIPES缓冲液和LCB03-0110，温育30分钟。接着，各孔中加入与25纳克/毫升抗原DNP-HSA，温育10分钟后置于冰上。p-NAG，氨基己糖苷酶的一种底物，与100ul从各孔取的细胞培养基在37℃反应1小时。之后，用250μL的Na2CO3/NaHCO3停止反应。读出在405nm的吸光度，结果如图4所示。0.3μM的LCB03-0110可以抑制肥大细胞通过脱颗粒引起的氨基己糖苷酶的释放，抑制高达80％。因此，由于LCB03-0110和本发明中提供的化合物在结构和活性相似，可以有效的抑制肥大细胞的脱颗粒，这与哮喘或特应性皮炎的发病机制相关联，所以它们可以用来预防或治疗过敏性免疫疾病。
<试验实例10>LCB03-0110对肥大细胞中TNF-α和IL-4的合成的抑制活性的评估。
通过该实验，检测本发明中化合物对肥大细胞中的TNF-α或IL-4的合成的抑制活性。作为试验实例，RBL-2H3肥大细胞被接种于含10％FBS的DMEM培养液的24孔培养板，铺板密度为2×105细胞/孔，加入500ng/ml的抗DNPIgE孵育20小时，然后用含10％FBS和氯化钙的PIPES缓冲液洗涤两次。各24孔中每隔30分钟依次加入200μL的PIPES缓冲液，LCB03-0110，和25ng/mL的DNP-HAS。四小时后，各孔细胞培养基中的TNF-α和IL-4水平通过ELISA测定，结果如图5所示。TNF-α和IL-4的合成经2μM和3μM的LCB03-0110处理后分别被抑制50％。因此，由于LCB03-0110和本发明中提供的化合物在结构和活性相似，可以有效的抑制肥大细胞。
<试验实例11>LCB03-0110在特应性皮炎动物模型中的有效性评估
为了研究本发明中的化合物对特应性皮炎的抑制效果，用本发明中化合物LCB03-0110处理被诱导了特应性皮炎的小鼠，分析经表皮的水分损失（TEWL），IgE水平，皮肤厚度，和肥大细胞数量。作为一个优选的方案，将150μL的5％TNCB（溶于比例为3:1的丙酮和橄榄油的混合物溶液中），施药于6周龄雌性的NC/Nga小鼠皮肤，施药两周，每周两次，诱导特应性皮炎。然后，分成四个实验组，各组五只小鼠，包括三个处理组（（1）～（3））和正常对照组（4），如下：
（1）20％乙醇：80％PEG400载体溶液150微升，每日真皮被覆于特应性小鼠，共两周（TNCB）;
（2）0.1％LCB03-0110化合物的载体溶液，每日真皮被覆于特应性小鼠，共两周（LCB03-0110组）；
（3）含0.1％他克莫司（FK506）的载体溶液，作为对照组，每日真皮被覆于特应性小鼠，共两周（他克莫司组）；
（4）正常小鼠每天透皮给药仅载体溶液，共两周（正常组）。
在四个实验组中，在两周的透皮给药前后，分别测量在特应性皮炎的诱发表皮部位的TEWL，结果如图6所示。此外，在施药前后，从每只小鼠取血样约100ul，有ELISA定量分析血清IgE水平，结果如图7所示。另外，每组中，特应性皮炎的诱发位点进行活检，石蜡包埋，做成4ΜM厚切片，并用H＆E和甲苯胺蓝染色。从H＆E染色的切片中测定表皮厚度，结果如图8所示。
另一方面，从甲苯胺蓝染色切片中进行肥大细胞的技术，结果如图9所示。两周后，如图6所示，TNCB组的经皮水分损失（TEWL）比正常组的高出三倍。而且，LCB03-0110组与TNCB组相比，TEWL显着减少30％以上，但与他克莫司组相比，表现出较低的TEWL值。如图7所示，TNCB组与正常对照组相比，血清IgE水平显着提高。与TNCB组相比，LCB03-0110组的血清IgE水平要低20％以上，疗效也明显优于他克莫司组。
如图8所示，TNCB组的表皮厚度正常对照组相比要超过4倍，但与TNCB组相比，LCB03-0110组的表皮厚度要显著减少60％以上，表明LCB03-0110组的疗效优于他克莫司组。
如图9中所示，与正常对照组相比，TNCB组肥大细胞的数目增加约2倍，但与TNCB组相比，LCB03-0110组肥大细胞的数目减少约25％，甚至数目低于他克莫司治疗组。
因此，既然本发明提供的化合物具有类似的结构和活性，LCB03-0110可以在体内有效的抑制实验动物模型的特应性皮炎，所以他们可以被用于预防和治疗特应性皮炎，疗效远超过当前用药他克莫司。
<试验实例12>LCB03-0110对在皮肤创伤修复过程中促进愈合或抑制疤痕形成的疗效的评估
在体内的组织损伤后，创伤修复通常从伤口部位的炎症反应开始。在这方面，炎症细胞如激活的巨噬细胞到达伤口部位，激活周围的成纤维细胞，上皮细胞和α平滑肌肌细胞，使它们增殖，并诱导过量的胞外基质蛋白如胶原蛋白的合成。其结果，纤维化胶原蛋白积累形成疤痕，其过剩积累会导致组织纤维化的疾病。事实上，胶原蛋白的沉积甚至发生在特应性皮炎中。此外，在哮喘患者的气道中，胶原蛋白的积累和活化的成肌细胞类型细胞的过度增殖会引起严重的气道狭窄问题。
血管组织损伤引起血管壁胶原蛋白的积蓄因此诱发动脉硬化。在糖尿病患者中，高血糖水平会伤害血管组织，造成毛细血管不受控制的形成。因此，持续的高血糖浓度会引起眼球和肾脏组织等的持续损伤，并诱发炎症反应，导致不利的副作用，如糖尿病性肾功能衰竭，糖尿病性视网膜病或糖尿病足溃疡。此外，皮肤组织损伤后，在愈合过程中胶原蛋白的积累，会留下美学缺陷——疤痕。
事实上，已知在小鼠中通过基因操纵抑制巨噬细胞的生成，可以大大减少皮肤疤痕的形成。出于这个原因，本发明的化合物有望通过抑制组织纤维化物质的积累，进而阻止组织纤维化中的瘢痕形成，因为它们不仅抑制免疫细胞如巨噬细胞的活性以抑制炎症反应，但同时阻止成纤维细胞活化为成肌细胞。此外，本发明的化合物预计对与血管生成和炎症相关的关节炎或糖尿病也有治疗效果，因为它们对在血管生成中起着重要作用的VEGFR2具有抑制活性。
通过实验检测本发明的化合物是否具有通过抑制动物模型中的巨噬细胞和成肌细胞的活性进而抑制瘢痕形成和促进伤口闭合的活性。作为一个试验实例，对8周龄的新西兰白兔以15mg/kg的剂量肌肉注射舒泰50（Zoletil50）进行麻醉。每只兔子耳朵内侧的预定实验部位用脱毛剂除毛。然后用6mm的一次性打孔器在每只兔耳内侧做四个全切除伤口。对于有伤口的兔子，含0.1％LCB03-0110的20％乙醇：80％PEG400的载体溶液被局部施药于其中一只耳朵上的四个伤口，每个伤口施药剂量为150μL，而另一只耳朵的四个伤口仅施用20％乙醇：80％PEG400的载体溶液，在这之后，伤口用水胶片型敷料(Convatec)封闭敷着。每组12个兔子伤口（n=12）。每隔三天重复相同的处理，共21天。每隔三天使用游标卡尺测量每个圆形伤口的最长和最短直径，共12天。从测量结果计算未封闭的伤口区域，结果如图10所示。
受伤后第21天，用8mm的活检打孔器从每个伤口取样，在10％***固定，石蜡包埋，并切成6微米厚的切片，进行H＆E染色，并将这些照片在40放大倍率拍照。根据Saulis的方法(SaulisASetal.,PlastReconstrSurg.2002.110(1):177-83)，用ImagePro软件测量新的表皮和真皮对应的伤口形成前的原面积（下图中的A区）和瘢痕形成的面积（下图中的B区），然后根据公式（1）计算疤痕增加指数（SEI），结果如图11所示。
[公式1]
SEI=[（新生的表皮和真皮所对应的伤口形成前的面积）+（瘢痕形成的面积）]/（新生的表皮和真皮所对应的伤口形成前的面积）
正如图11所示，与仅施用载体溶液相比，施用LCB03-0110后伤口封闭的速度更快。这表明，LCB03-0110有促进伤口愈合的活性。伤口愈合后，LCB03-0110处理组的SEI减少了约30％，与仅载体溶液的处理组在统计学上有显著差异（P<0.05，t检验），这显示出LCB03-0110对疤痕形成的抑制活性。研究得出，LCB03-0110对疤痕形成的抑制活性与抑制巨噬细胞和成肌细胞的活性有关。针对这一点，用与上述相同的方法制作伤口，用0.1％LCB03-0110或载体溶液处理后，覆盖水胶片型敷料。三天后，从伤口组织取样，石蜡包埋，切成6微米厚的切片，随后分别用F4/80和α平滑肌肌动蛋白的特异性抗体进行免疫染色。用100倍的放大倍率拍摄伤口上的新的组织位点，如图12所示。在每一张免疫染色的细胞图片中，对用F4/80染色的巨噬细胞和用α平滑肌肌动蛋白染色的成肌细胞进行计数，并表示为平均值±标准偏差。
在本实验中，创面组织的愈合过程中，LCB03-0110抑制活化的巨噬细胞和成肌细胞在统计学上有显著差异（P<0.05，t检验）。总之，上面得到的数据表明，LCB03-0110和本发明提供的化合物，在结构和活性上是相似的，可以抑制对炎症细胞如巨噬细胞和成肌细胞的细胞在伤口愈合期间的活动，并且可以对抗瘢痕的形成。它们对于预防或治疗炎症性疾病，特别是组织纤维化或增生相关的炎症性疾病，以及促进皮肤伤口的愈合，防止皮肤瘢痕形成是有用的。
<试验实例13>LCB03-0110抗哮喘疗效的评估
哮喘是一种发生在呼吸道组织中的过敏性炎症反应。为了验证LCB03-0110的抗哮喘疗效，建立了卵清蛋白诱导的小鼠哮喘模型。在第一个哮喘疾病动物模型实验中，8周齢的雌性Balb/C小鼠经第1天和14天腹腔注射20微克白蛋白和2.25mg氢氧化铝在生理盐水中的悬浮物而敏化。采用超声波喷雾器使小鼠挑战1％卵清蛋白气雾。本动物实验中，阳性对照组分别在第21，22，23天通过尾静脉注射BLT2的拮抗剂LY2552835mg/kg（OVA/LY255283组）。对于LCB03-0110用药组，分别在第21，22，23天吸入卵清蛋白1小时前，用超声波喷雾器吸入0.1％LCB03-0110溶于30％DMSO的生理盐水的溶液（OVA/LCB03-0110组）。正常对照组是未经处理的动物（正常组）。负控制组，分别在第21，22，23天吸入卵清蛋白1小时前，仅使用雾化器吸入含30％DMSO的生理盐水。在第23天，由喷雾器末次给卵清蛋白后的24小时内，测定呼吸道阻力（AHR）。48小时后，使用1ml的PBS从小鼠收集支气管肺泡灌洗液（BALF）。每组4～8只小鼠（n=4～8），如图13所示。吸入0.1％LCB03-0110的处理组AHR得到改善。48小时后，吸入LCB03-0110的处理组中收集到的BALF中活性氧的量在显著降低（图14）。这些结果表明，吸入LCB03-0110显著改善了卵清蛋白诱发的呼吸道炎症症状。
另一种评估LCB03-0110的抗哮喘疗效的动物模型实验，分别在第0，14，和21天，直接给气管内注射400ng纯化的尘螨过敏物质。0.1％的LCB03-0110溶解在20％乙醇/盐水溶液中，这20ul在第21天注射过敏物质1小时前直接气管内注射（LCB组）。负控制组（Vehicle组）只注射20微升20％醇/盐水溶液。正控制组（布德组）注射20微升的0.03％布***的20％醇/盐水的溶液。每组4～8只小鼠（n=4～8）。尘螨过敏原的末次给药4小时后，收集肺组织和BALF样品，测定粘蛋白的合成量，免疫介质和几种炎症免疫细胞。如图14中所示，LCB03-0110的用药抑制了嗜酸性粒细胞渗透到肺组织（图15左），这是与抑制一种炎症介质——嗜酸性粒细胞趋化因子有关，该物质在LCB03-0110处理动物的BALF液中（图15右）。此外，用周期性PAS染色肺方法测定肺组织中粘蛋白的量，结果如图16所示。20％醇/盐水的用药组显示出很强的粘蛋白染色（图16-A）。然而，0.1％LCB03-0110给药（图16-B）和0.03％布***给药（图16-C）减少了染色的强度。从组织学染色中评定粘蛋白的含量，平均值和标准偏差的值示于图16下方。0.1％LCB03-0110的给药组抑制粘蛋白的合成，这类似于布***组用药的处理组，与只用20％醇注射/盐溶液（Vehicle）注射的阳性组相比，在统计学上呈显著差异（P<0.05，t检验）。粘蛋白主要在激活的呼吸道上皮细胞中合成，是引起呼吸道关闭哮喘症状的主要原因。因为LCB03-0110和本发明提供的化合物在结构和活性上相似，对免疫炎症反应和呼吸道粘蛋白的合成是抑制的，可以其用于预防或治疗。

Claims (13)

1.一种化合物或其药学上可接受的盐类，其特征在于，所述化合物是选择于下面所列化合物中的一个，
3-(2-(4-(四氢吡咯-1-基甲基)苯基)噻吩并[3,2-b]吡啶-7-基氨基)苯酚、
3-(2-(4-(吗啉代甲基)苯基)噻吩并[3,2-b]吡啶-7-基氨基)苯酚、
3-(2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)苯基)噻吩并[3,2-b]吡啶-7-基氨基)苯酚、
3-(2-(4-(哌啶-1-基甲基)苯基)噻吩并[3,2-b]吡啶-7-基氨基)苯酚、
3-(2-(4-(哌嗪-1-基甲基)苯基)噻吩并[3,2-b]吡啶-7-基氨基)苯酚、
3-(2-(4-((乙基氨基)甲基)苯基)噻吩并[3,2-b]吡啶-7-基氨基)苯酚、
3-(2-(3-(四氢吡咯-1-基甲基)苯基)噻吩并[3,2-b]吡啶-7-基氨基)苯酚、
3-(2-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)噻吩并[3,2-b]吡啶-7-基氨基)苯酚、
3-(2-(3-(哌啶-1-基甲基)苯基)噻吩并[3,2-b]吡啶-7-基氨基)苯酚、
3-(2-(3-(吗啉代甲基)苯基)噻吩并[3,2-b]吡啶-7-基氨基)苯酚、
3-(2-(3-(哌嗪-1-基甲基)苯基)噻吩并[3,2-b]吡啶-7-基氨基)苯酚、
3-(2-(3-((乙基氨基)甲基)苯基)噻吩并[3,2-b]吡啶-7-基氨基)苯酚。
2.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐类，其特征在于，所述化合物为3-(2-(3-(吗啉代甲基)苯基)噻吩并[3,2-b]吡啶-7-基氨基)苯酚。
3.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐类，所述药学上可接受的盐类为无机盐或有机羧酸盐。
4.根据权利要求3所述的化合物或其药学上可接受的盐类，所述无机盐是盐酸盐，所述有机羧酸盐是三氟乙酸盐。
5.一种将根据权利要求1至4的任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐类作为活性成分来制备药物组合物的应用，所述药物组合物用于预防或治疗炎症性疾病，免疫失调疾病，和伤口愈合过程中的组织纤维化和瘢痕形成。
6.根据权利要求5所述的应用，所述炎症性疾病为急性炎症性疾病，慢性炎症性疾病，或非感染性眼部疾病。
7.根据权利要求6所述的应用，所述急性炎症性疾病为，选自于下组的急性肺损伤、过敏、感觉过敏、脓毒病、哮喘以及移植物抗宿主病的疾病。
8.根据权利要求6所述的应用，对于慢性炎症性疾病，选自下组的特应性皮炎、湿疹、银屑病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、风湿、骨关节炎、痛风性关节炎、银屑病关节炎、肝硬化、慢性阻塞性肺疾病、过敏性鼻炎、糖尿病性视网膜病变、糖尿病肾病、糖尿病神经病和多发性硬化。
9.根据权利要求6所述的应用，所述非感染性眼部疾病是由过敏性结膜炎、葡萄膜炎、虹膜炎、角膜炎、巩膜炎、眼睑炎和干燥性角结膜炎组成的组中选择的一种。
10.根据权利要求5所述的应用，对于免疫失调疾病，选自下组的自身免疫性胃炎、自身免疫性阿狄森氏病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性甲状腺炎、慢性特发性荨麻疹、慢性免疫束肾病、重症肌无力、寻常型天疱疮、恶性贫血、原发性胆汁性肝硬化、***性红斑狼疮、甲状腺眼疾病以及器官移植排斥反应。
11.根据权利要求5所述的应用，所述伤口为因创伤、烧伤、褥疮或者糖尿病足溃疡诱发的。
12.根据权利要求5所述的应用，所述药物组合物的施药为真皮给药。
13.根据权利要求5所述的应用，将所述药物组合物配制为软膏，乳膏或贴片型。
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