CN102940733A

CN102940733A - 一种缓解体力疲劳的组合物及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN102940733A
Application number: CN2012105369899A
Authority: CN
Inventors: 于春江
Original assignee: JILIN YIZHENG PHARMACEUTICAL GROUP CO Ltd
Current assignee: JILIN YIZHENG PHARMACEUTICAL GROUP CO Ltd
Priority date: 2012-09-03
Filing date: 2012-12-12
Publication date: 2013-02-27
Anticipated expiration: 2032-12-12
Also published as: CN102940733B

Abstract

本发明涉及一种缓解体力疲劳的组合物，以及它的制备方法和应用。所述组合物包括以下重量份的组分：黄芪400~700份，枸杞子300~600份，人参150~450份和淫羊藿100~300份。本发明将上述四种中药原材料进行合理搭配，给出的成分配比使得原料起到了很好的协同作用，即每个中药发挥出其功效，组合起来在缓解体力疲劳方面效果显著，优于现有技术，即处方更优化，工艺更合理，将有效组分提取的更完全，更好地发挥组合物的疗效；且无不良反应，安全性很高；所涉及的设备简单，成本较低，能够实现工业化生产。

Description

一种缓解体力疲劳的组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及药品或保健品组合物领域，具体地，涉及一种缓解体力疲劳的组合物，以及它的制备方法和应用。

背景技术

疲劳是一种生理性现象，对人来说是一种保护性机制。这是身体向我们发出应该休息的信号，如果不管不顾，身体就会受到损害，最后积劳成疾。疲劳一般可分为体力疲劳、脑力疲劳、心理疲劳和病理疲劳。体力疲劳又叫躯体性疲劳，是由于当人持续长时间、大强度的体力活动运动时，体内产生了大量的代谢物，如乳酸、二氧化碳、血清尿素氮等，这类物质在体内积聚，刺激人体组织细胞和神经***，就会使人产生疲劳感。

从上世纪80年代起步的我国保健品行业，在短短十几年时间里，已经迅速发展成为一个独特的产业。到2000年，我国保健品产值达到500亿元，利税100亿元，保健品生产的企业总数、产品品种、年产值和实现利润已占医药类企业总量的50%以上，成为中国工业经济新的增长点之一，国民经济的一个新兴行业。其中，缓解体力疲劳保健品的市场更是在不断扩大，对于当今高速率的发展时代，人们的身心更容易感到疲劳。不管是体力的疲劳或者心理的疲劳，人们都会有一定表现，如脾气的烦躁、身体免疫力的降低等。于是，缓解体力疲劳保健品是当今许多人的生活必备保健品。

据中国保健协会市场工作委员会数据，截止到2005年底，我国共批准“缓解体力疲劳”保健食品1260种，这些产品多以针对单项因素，提高某些机体器官功能或一味滋补为主。但是体力疲劳往往是由多种综合因素导致，各个环节也紧密相连，仅仅针对其中某一个环节或因素是不全面和不彻底的，不能满足体力疲劳人群需求。近年来，中草药以其药性缓和、不易产生耐药性、适合长期服用等特点，越来越受广大消费者的青睐。因此，若能从饮食文化和中医传统理论出发，开发出以中草药为原料，结合中医理论，合理配伍，协同发挥作用的缓解体力疲劳的组合物，势必会有广阔的应用前景和市场空间。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种缓解体力疲劳的组合物。

本发明的另一目的在于提供一种所述组合物的制备方法。

本发明的又一目的在于提供所述组合物在制备缓解体力疲劳的药物或/和保健品中的应用。

本发明提供的一种缓解体力疲劳的组合物，包括以下重量份的组分：黄芪400~700份，枸杞子300~600份，人参150~450份和淫羊藿100~300份。

本发明提供的一种缓解体力疲劳的组合物，优选地，包括以下重量份的组分：黄芪500~600份，枸杞子400~500份，人参250~350份和淫羊藿150~250份。

本发明提供的缓解体力疲劳的组合物，优选地，包括以下重量份的组分：黄芪530~570份，枸杞子430~470份，人参280~320份和淫羊藿180~220份。

本发明提供的缓解体力疲劳的组合物，更优选地，包括以下重量份的组分：黄芪550份，枸杞子450份，人参300份和淫羊藿200份。

本发明所述的缓解体力疲劳的组合物，还包括辅料。

本发明组合物所用辅料，为本领域的常规辅料。

本发明所述的组合物，其剂型为药学或保健品上可接受的剂型。

其中，药学或保健品上可接受的剂型为：片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液或丸剂。优选胶囊剂。

本发明提供的所述组合物的制备方法，包括以下步骤：

1）将所述比例中部分人参粉碎成细粉；

2）醇提步骤1）剩余的人参和所述比例的淫羊藿，滤液浓缩成清膏；

3）取所述比例的黄芪和枸杞子加水煎煮，滤液浓缩成清膏；

4）将步骤2）和步骤3）的清膏合并，减压干燥，粉碎，过筛，得干膏粉；

5）将步骤1）的人参细粉与步骤4）的干膏粉混匀，即得。

本发明所述的组合物的制备方法，进一步地，包括以下步骤：

1）取所述比例中30~40%的人参，干燥后粉碎，过90~110目筛，备用；

2）取步骤1）剩余的人参及所述比例的淫羊藿用乙醇回流提取2~4次，每次加人参和淫羊藿6~9倍量的乙醇，每次提取1~3小时，滤过，合并滤液，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.30~1.35（60℃测）的清膏，备用；

3）取所述比例的黄芪和枸杞子加水煎煮2~4次，每次加黄芪和枸杞子6~10倍量的水，每次煎煮1~3小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至相对密度为1.30~1.35（60℃测）的清膏，备用；

4）将步骤2）和步骤3）的清膏合并，于50~80℃减压干燥，粉碎，过60~100目筛，得干膏粉；

5）将步骤1）的人参细粉与步骤4）的干膏粉混匀，即得。

上述制备方法中：

所述步骤1），粉碎人参优选过100目筛。

所述步骤1）中，干燥人参的温度为50~70℃，优选60℃。

所述步骤1）中，采用钴60照射灭菌粉碎的细粉。

所述步骤2）所用乙醇的含醇量达60~80%（体积百分数），优选70%。

所述步骤2）优选提取2次，每次加8倍量的乙醇，每次提取2小时。

所述步骤3）优选煎煮2次，每次加8倍量的水，每次煎煮2小时。

所述步骤4）优选于60~70℃减压干燥，更优选65℃。

所述步骤4）干膏粉的细度优选过80目筛。

本发明所述组合物若制成胶囊剂，所述步骤5）中，得到干膏粉后，用85%乙醇制成软材，16目筛制粒，50~60℃干燥，14目筛整粒，装入胶囊壳，即得胶囊成品。

本发明的制备方法，能够最大化提取各药味的有效成分，从而提高药效。

本发明提供的所述组合物制备成药物或保健品，可用来缓解体力疲劳。

本发明提供的组合物中：

黄芪：味甘，微温；归肺、脾经；具有补气升阳，固表止汗、利水消肿、生津养血，行滞通痹，托毒排脓、敛疮生肌的作用。用于气虚乏力，中气下陷，表虚自汗等。

枸杞子：味甘，性平；归肝、肾经；具有滋补肝肾，益精明目的作用。用于虚劳精亏，腰膝酸痛，眩晕耳鸣，阳萎遗精，内热消渴，血虚萎黄，目昏不明。

人参：性平、味甘、微苦，微温；归脾、肺、心肾经；具有大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津养血，安神益智。用于体虚欲脱，气血亏虚等。

淫羊藿：性味辛、甘，温；归肝、肾经；具有补肾阳，强筋骨，祛风湿的作用；用于肾阳虚衰，阳痿遗精，筋骨痿软，风湿痹痛，麻木拘挛，。

也就是说，本发明的组合物中，黄芪、人参益气健脾、固本壮元；枸杞子、淫羊藿补益肝肾。全方合理配伍，可达到缓解体力疲劳之目的，并经动物功能实验证明，具有协同的缓解体力疲劳的作用，且可以缓解多种因素引起的疲劳，是良好的防病健身、增强体质的组合物。

本发明将上述四种中药原材料进行合理搭配，给出的成分配比使得原料起到了很好的协同作用，即每个中药发挥出其功效，组合起来在缓解体力疲劳方面效果显著，优于现有技术，即处方更优化，工艺更合理，将有效组分提取的更完全，更好地发挥组合物的疗效；且无不良反应，药性温和，长期服用安全性很高。所涉及的设备简单，成本较低，能够实现工业化生产。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

本发明实施例所用原料均可以从市场上购得。本发明所用的乙醇和水的倍数均为重量倍数。

本发明所用辅料的种类和用量可以是本领域的常规选择。

实施例1：胶囊剂

1、组合物组成：

黄芪550g，枸杞子450g，人参300g，淫羊藿200g。

2、制备方法：

1）将各原料分别净制，检验合格；取100g人参，60℃干燥后粉碎，过100目筛成细粉，采用钴60照射灭菌，备用；

2）取步骤1）剩余的人参（200g）及所述重量的淫羊藿用70%乙醇回流提取2次，每次加人参和淫羊藿原材料之和8倍量的乙醇，每次提取2小时，滤过，合并滤液，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.30~1.35（60℃测）的清膏，备用；

3）取所述重量的黄芪和枸杞子，加水煎煮2次，每次加黄芪和枸杞子原材料之和8倍量的水，每次煎煮2小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至相对密度为1.30~1.35（60℃测）的清膏，备用；

4）将步骤2）和步骤3）的清膏合并，于65℃减压干燥，粉碎，过80目筛，得干膏粉；

5）将步骤1）的人参细粉与步骤4）的干膏粉混匀，用85%乙醇制成软材，16目筛制粒，60℃干燥，14目筛整粒，装入胶囊壳，抛光，包装，检验，即得成品：制成1000粒，每粒装0.4g；标志性成分及含量：每100g含总皂苷500mg。

实施例2：片剂

1、组合物组成：

黄芪530g，枸杞子430g，人参320g，淫羊藿180g。

2、制备方法：

1）将各原料分别净制，检验合格；取96g的人参，50℃干燥后粉碎，过90目筛成细粉，采用钴60照射灭菌，备用；

2）取步骤1）剩余的人参（224g）及所述重量的淫羊藿用75%乙醇回流提取3次，每次加人参和淫羊藿原材料之和6倍量的乙醇，每次提取3小时，滤过，合并滤液，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.30~1.35（60℃测）的清膏，备用；

3）取所述重量的黄芪和枸杞子，加水煎煮3次，每次加黄芪和枸杞子原材料之和7倍量的水，每次煎煮1小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至相对密度为1.30~1.35（60℃测）的清膏，备用；

4）将步骤2）和步骤3）的清膏混匀，于60℃减压干燥，粉碎，过70目筛，得干膏粉；

5）将步骤1）的人参细粉与步骤4）的干膏粉混匀，加入淀粉、糊精、羟甲基淀粉钠（分别为人参细粉和干膏粉总重量的3%，1%和1%），混匀，用75%乙醇制粒，干燥，加硬脂酸镁（为人参细粉和干膏粉总重量的2%），混匀，制粒，压片。

实施例3：颗粒剂

1、组合物组成：

黄芪570g，枸杞子470g，人参280g，淫羊藿220g。

2、制备方法：

1）将各原料分别净制，检验合格；取112g的人参，70℃干燥后粉碎，过110目筛成细粉，采用钴60照射灭菌，备用；

2）取步骤1）剩余的人参（168g）及所述重量的淫羊藿用65%乙醇回流提取4次，每次加人参和淫羊藿原材料之和9倍量的乙醇，每次提取1小时，滤过，合并滤液，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.30~1.35（60℃测）的清膏，备用；

3）取所述重量的黄芪和枸杞子，加水煎煮4次，每次加黄芪和枸杞子原材料之和6倍量的水，每次煎煮3小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至相对密度为1.30~1.35（60℃测）的清膏，备用；

4）将步骤2）和步骤3）的清膏混匀，于70℃减压干燥，粉碎，过90目筛，得干膏粉；

5）将步骤1）的人参细粉与步骤4）的干膏粉混匀，加入乙醇做粘合剂，加入甜菊甙和可溶性淀粉（分别为人参细粉和干膏粉总重量的2%和5%），混匀，压制成颗粒。

实施例4：丸剂

1、组合物组成：

黄芪500g，枸杞子500g，人参250g，淫羊藿250g。

2、制备方法：

1）将各原料分别净制，检验合格；取80g的人参，60℃干燥后粉碎，过100目筛成细粉，采用钴60照射灭菌，备用；

2）取步骤1）剩余的人参（170g）及所述重量的淫羊藿用70%乙醇回流提取2次，每次加人参和淫羊藿原材料之和8倍量的乙醇，每次提取2小时，滤过，合并滤液，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.30~1.35（60℃测）的清膏，备用；

4）将步骤2）和步骤3）的清膏混匀，于65℃减压干燥，粉碎，过80目筛，得干膏粉；

5）将步骤1）的人参细粉与步骤4）的干膏粉混匀，加人参细粉和干膏粉总重量1.0~1.2倍的炼蜜制丸。

实施例5：胶囊剂

1、组合物组成：

黄芪600g，枸杞子400g，人参350g，淫羊藿150g。

2、制备方法：

1）将各原料分别净制，检验合格；取112g的人参，60℃干燥后粉碎，过100目筛成细粉，采用钴60照射灭菌，备用；

2）取步骤1）剩余的人参（238g）及所述重量的淫羊藿用70%乙醇回流提取2次，每次加人参和淫羊藿原材料之和8倍量的乙醇，每次提取2小时，滤过，合并滤液，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.30~1.35（60℃测）的清膏，备用；

5）将步骤1）的人参细粉与步骤4）的干膏粉混匀，用85%乙醇制成软材，16目筛制粒，60℃干燥，14目筛整粒，装入胶囊壳，抛光，包装，检验，即得成品。

实施例6：胶囊剂

1、组合物组成：

黄芪400g，枸杞子300g，人参450g，淫羊藿100g。

2、制备方法：

1）将各原料分别净制，检验合格；取157.5g人参，55℃干燥后粉碎，过100目筛成细粉，采用钴60照射灭菌，备用；

2）取步骤1）剩余的人参（292.5g）及所述重量的淫羊藿用60%乙醇回流提取2次，每次加人参和淫羊藿原材料之和8倍量的乙醇，每次提取2小时，滤过，合并滤液，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.30~1.35（60℃测）的清膏，备用；

3）取所述重量的黄芪和枸杞子，加水煎煮2次，每次加黄芪和枸杞子原材料之和9倍量的水，每次煎煮2小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至相对密度为1.30~1.35（60℃测）的清膏，备用；

4）将步骤2）和步骤3）的清膏合并，于65℃减压干燥，粉碎，过60目筛，得干膏粉；

实施例7：胶囊剂

1、组合物组成：

黄芪700g，枸杞子600g，人参150g，淫羊藿300g。

2、制备方法：

1）将各原料分别净制，检验合格；取52.5g人参，65℃干燥后粉碎，过100目筛成细粉，采用钴60照射灭菌，备用；

2）取步骤1）剩余的人参（97.5g）及所述重量的淫羊藿用80%乙醇回流提取2次，每次加人参和淫羊藿原材料之和8倍量的乙醇，每次提取2小时，滤过，合并滤液，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.30~1.35（60℃测）的清膏，备用；

3）取所述重量的黄芪和枸杞子，加水煎煮2次，每次加黄芪和枸杞子原材料之和10倍量的水，每次煎煮2小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至相对密度为1.30~1.35（60℃测）的清膏，备用；

4）将步骤2）和步骤3）的清膏合并，于65℃减压干燥，粉碎，过100目筛，得干膏粉；

实验例1：功能试验

1材料和方法

1.1样品：由实施例1的胶囊，规格0.4g/粒。人口服推荐用量为每人（成人）每日2次，每次3粒，成人体重按60kg计算，折合剂量为40mg/kg BW。取胶囊内容物进行试验。

1.2实验动物：选用由长沙市开福区东创实验动物科技服务部繁殖的清洁级（Ⅱ级）健康成年昆明种雄性小鼠192只，体重为18~22克。

1.3实验环境条件：实验动物室温度：22~25℃，相对湿度：55~70%。

1.4剂量选择与受试物给予方式：根据人口服推荐用量，设样品低、中、高剂量组分别为200、400、800mg/kg BW（分别相当于人体推荐用量的5、10、20倍），同时设一个阴性对照组，每组12只动物。分别称取实施例1的胶囊3.0、6.0、12.0g，各加蒸馏水至300mL，混匀、配成10.0、20.0、40.0mg/mL浓度溶液，分别给予相应剂量组动物灌胃，灌胃体积为0.2mL/10g BW，对照组给予等体积的蒸馏水，每天灌胃一次，连续灌胃30天。

1.5主要仪器与试剂：

仪器：动物天平、电子分析天平、离心机、高速分散器、振荡器、真空泵、恒温水浴锅、721分光光度计、半自动生化分析仪、游泳箱（大小为50cm×50cm×40cm）等。

试剂：蒽酮、硫脲、浓硫酸、TCA、葡萄糖、NaF、CuSO₄、钨酸钠、对羟基联苯、乳酸锂（均为分析纯）、BUN试剂盒（试剂盒为酶法，由四川省迈克科技有限责任公司生产）。

1.6实验方法：依据***《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）中缓解体力疲劳功能检验方法。实验设4个组，即3个实验组和1个阴性对照组，每组12只小鼠。采用灌胃法，每天以0.2mL/10g BW的容量给小鼠灌胃不同剂量的受试物，阴性对照组给予等量蒸馏水。每天灌胃一次，连续灌胃30天。试验结束进行各项抗疲劳指标的测定。

1.6.1负重游泳试验：末次给小鼠受试物30min后，置于游泳箱中游泳，水深约30cm，水温25℃±0.5℃，鼠尾根部负荷5%体重的铅皮。记录小鼠自游泳开始至死亡的时间，作为小鼠负重游泳时间。

若实验组游泳时间明显长于阴性对照组游泳时间，且差异有显著性（P<0.05），可判定该受试物有延长小鼠负重游泳时间的作用。

1.6.2血清尿素测定：末次给小鼠受试物30min后，在温度为30℃的水中不负重游泳90min。运动后休息60min后立即拔眼球采血0.5mL，离心取血清测定血清尿素值（酶法试剂盒）。

若实验组血清尿素含量明显低于阴性对照组，且差异有显著性（P<0.05），可判定该受试物有减少疲劳小鼠尿素产生的作用。

1.6.3肝糖原测定：末次给小鼠受试物30min后，立即处死，取肝脏经生理盐水漂洗后用滤纸吸干，精确称取肝脏100mg，加入TCA，匀浆，离心，取上清液测定肝糖原含量（蒽酮法）。

若实验组肝糖原含量明显高于阴性对照组，且差异有显著性（P<0.05），可判定该受试物有促进小鼠肝糖原储备的作用。

1.6.4血乳酸测定：末次给小鼠受试物30min后，分别在游泳前、游泳（运动）后0min，游泳（运动）后休息20min采血20μL进行乳酸测定。血乳酸曲线下面积用下式计算：

血乳酸曲线下面积=5×（游泳前血乳酸值+3×游泳后0min的血乳酸值+2×游泳后休息20min的血乳酸值）

若实验组血乳酸变化值明显低于阴性对照组，且差异有显著性（P<0.05），可判定该受试物有减小小鼠运动后血乳酸曲线下面积的作用。

1.7实验数据的数据处理：用SPSS软件对各实验原始数据进行方差齐性检验，满足“方差齐”要求的数据资料用单因素方差分析方法和多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理；对非正态分布或方差不齐的数据资料进行适当的变量转换，待满足“正态方差齐”要求后，用转换所得的数据进行统计处理。

1.8结果判定：若负重游泳实验结果阳性，且血乳酸、血清尿素、肝糖原三项生化指标中任二项指标阳性，可判定该受试样品具有缓解体力疲劳功能的作用。

2试验结果

2.1样品对小鼠体重的影响

结果见表1、表2，小鼠的初始体重在各实验组与阴性对照组之间比较，差异均无显著性（P>0.05），即小鼠的初始体重在各组间较为均衡。

表1：各组小鼠的体重增长情况

注：各剂量组实验初始、中期和末期的小鼠体重及增重与对照组比较，差异均无显著性（P>0.05）。

表2：各组小鼠的体重增长情况

由表1、表2可见，经口给予小鼠不同剂量的样品30d后，抗疲劳Ⅰ~Ⅳ组的样品各剂量组的体重与阴性对照组间均数比较，各剂量组与阴性对照组比较差异均无显著性（P>0.05），表明该样品对小鼠的体重增长无影响。

2.2样品对小鼠负重游泳时间的影响

表3：各组小鼠的负重游泳时间

从表3可见，样品各剂量组小鼠的负重（5%）游泳时间均比阴性对照组的延长，其中的高、中剂量组与阴性对照组比较差异具有显著性（P<0.05），表明该样品具有延长小鼠的负重游泳时间的作用。

2.3样品对小鼠运动后的血清尿素水平的影响

从表4可见，样品各剂量组小鼠的血清尿素含量均低于对照组，其中的高、中剂量组与阴性对照组比较差异具有显著性（分别P<0.01和P<0.05），表明该样品能减少或抑制疲劳小鼠血清尿素的产生。

表4：各组小鼠运动后的血清尿素测定结果

2.4样品对小鼠的肝糖原含量的影响

表5：各组小鼠肝糖原含量测定结果

从表5可见，样品各剂量组小鼠的肝糖原含量均高于阴性对照组，其中的高剂量组与阴性对照组比较差异具有显著性（P<0.05），表明该样品具有促进小鼠的肝糖原储备的作用。

2.5样品对小鼠运动后的血乳酸值的影响

表6：各组小鼠运动后的血乳酸（㎎/L）曲线下面积

从表6可见，样品各剂量的3个时间点血乳酸曲线下面积均小于阴性对照组，但各剂量组与阴性对照组比较差异均无显著性（P>0.05），表明该样品对小鼠运动后的血乳酸曲线下面积无明显的影响作用。

3小结

分别经口给予小鼠200、400、800mg/kg BW（相当于人体推荐用量的5、10、20倍）剂量的实施例1的胶囊连续给小鼠连续灌胃30天，能延长小鼠的负重游泳时间，减少疲劳小鼠的血清尿素产生，增加小鼠的肝糖原储备，对小鼠的体重增长和运动后的血乳酸曲线下面积无影响，提示该样品具有缓解体力疲劳的功能。

实验例2：安全性试验

1材料和方法

1.1样品：本发明胶囊（实施例1制备得到），内容物为棕褐色颗粒，规格：0.4g/粒，生产批号：20070625。置阴凉干爽通风处保存。人口服推荐用量为每人（成人）每日2次，每次3粒，成人体重按60kg计算，折合剂量为40mg/kgBW。取胶囊内容物进行试验。

1.2实验动物及环境：清洁级健康昆明种小鼠，由广西医科大学医学实验动物中心繁殖，实验动物质量合格证号：NO.0000810、NO.0000824；SD种大鼠，由长沙市开福区东创实验动物科技服务部繁殖，实验动物质量合格证号：NO.001490。实验动物使用许可证号：SYXK桂2007-0003。实验动物室温度：22～25℃，相对湿度：55～70%。

1.3小鼠急性经口毒性试验：采用最大给药量试验法，选体重18～22g的昆明种小鼠20只，雌雄各半。试验前动物禁食16小时，不限饮水。称取50.0g样品，加蒸馏水至100mL，混匀、配成500mg/mL浓度的混悬液，然后给动物灌胃3次（每次间隔4h），每次灌胃量为0.4mL/20g BW，合计剂量为30000mg/kgBW。灌胃后观察、记录动物的中毒表现。每周称重一次，观察两周时间，试验结束解剖动物进行大体观察。按毒性分级标准评价受试物的急性毒性强弱。

1.4Ames试验：采用经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97a、TA98、TA100、TA102四种菌株进行试验。在无菌操作条件下，用灭菌蒸馏水将样品分别配成50、10、2、0.4、0.08mg/mL5个浓度作为受试溶液。以多氯联苯诱导的大鼠肝微粒体酶（S-9）作为体外代谢活化***。采用平板掺入法，在保温的顶层培养基中依次加入0.1mL试验菌株增菌液、0.1mL受试物溶液和0.5mL S-9混合液（当需要代谢活化时），混匀后倒入底层培养基平板上。5个试验剂量分别为5000、1000、200、40、8ug/皿，同时设自发回变对照、溶剂对照和阳性突变剂对照。自发回变对照除不加样品外，其余条件与样品组相同。溶剂对照用灭菌蒸馏水替代样品，其余条件与样品组相同。每个剂量组的各种菌株均做3个平行皿。在37℃下培养48小时，计数每皿的菌落数。整套试验在相同条件下重复做两次。如果受试物的回变菌落数增加超过自发回变菌落数的2倍以上，并具有剂量-反应关系者，即为诱变试验阳性。

1.5小鼠骨髓细胞微核试验：采用间隔24小时两次经口灌胃法进行试验。选体重为25～30g的昆明小鼠50只，随机分成5组，每组10只，雌雄各半。试验组3个剂量分别设10000、5000、2500mg/kg BW，以蒸馏水为阴性对照，40mg/kg BW剂量的环磷酰胺（cp）作阳性对照。分别称取20.0、10.0、5.0g样品，各加蒸馏水至40mL，混匀、配成500、250、125mg/mL浓度的混悬液，然后按0.4mL/20g BW的体积给动物灌胃，阴性对照组灌给等体积的蒸馏水，阳性对照组灌给等体积的2mg/mL环磷酰胺溶液。第二次给样后6小时颈椎脱臼处死动物，取胸骨骨髓用小牛血清稀释涂片，甲醇固定，Giemsa染色。在光学显微镜下，每只动物计数1000个嗜多染红细胞（PCE），微核率以含微核的PCE千分率计，同时计数200个嗜多染红细胞，计算嗜多染红细胞与成熟红细胞的比值（PCE/NCE）。采用泊松分布均数比较法统计处理。如试验组的微核率比阴性对照组增高，并有明显的剂量-反应关系和统计学意义，即为阳性结果。

1.6小鼠***畸形试验：选体重为25～35g的昆明种雄性小鼠50只，随机分成5组，每组10只。试验组3个剂量分别设10000、5000、2500mg/kg BW，以蒸馏水为阴性对照，40mg/kg BW剂量的环磷酰胺（cp）作阳性对照。分别称取20.0、10.0、5.0g样品，各加蒸馏水至40mL，混匀、配成500、250、125mg/mL浓度的混悬液，然后按0.4mL/20g BW的体积给动物灌胃，阴性对照组灌给等体积的蒸馏水，阳性对照组灌给等体积的2mg/mL环磷酰胺溶液。每天灌胃一次，连续5天。末次给样后第30天处死动物，取副睾的***涂片，甲醇固定，伊红染色。在光学显微镜下，每只动物计数完整***1000个，计算***畸形率，采用χ²检验统计处理。如试验组的***畸形率比阴性对照组增高，并有明显的剂量-反应关系和统计学意义，即为阳性结果。

1.7大鼠30天喂养试验

1.7.1剂量选择与受试物给予方式：选SD种大鼠80只，雌雄各半，雄鼠体重73.0±3.4g，雌鼠体重71.5±5.1g。将动物随机分为4组，即阴性对照组和3个试验组，每组20只，雌雄各半。3个试验组剂量分别设为2000、3000、4000mg/kg BW，分别相当于人体推荐剂量的50、75、100倍。分别称取20.0、30.0、40.0g样品，各加蒸馏水至100mL，混匀、配成200、300、400mg/mL浓度的混悬液，按1.0mL/100g BW的体积给相应剂量组动物灌胃，阴性对照组灌给等量的蒸馏水，每天灌胃一次，连续灌胃30天。

1.7.2实验方法：实验期间所有动物给予普通饲料，单笼饲养，自由摄食饮水。每天观察动物的活动和生长情况，每周加食2次，记录给食量和剩食量，每周称一次体重，计算每周进食量和食物利用率。实验末期，禁食过夜，处死大鼠，采2份血样，一份血抗凝用血球计数仪检测Hb、RBC、WBC及其分类、PLT等；另一份血不抗凝分离血清，用试剂盒和半自动化分析仪检测血清AST、ALT、BUN、Cr、TC、TG、Glu、TP、Alb等项目。采血后解剖动物，进行大体观察，取肝脏、肾脏、脾脏和睾丸等脏器进行称重，计算脏/体比值，取肝脏、肾脏、脾脏、胃、十二指肠、睾丸和卵巢等脏器进行病理组织学检查。在对各剂量组动物作大体检查未发现明显病变和生化指标改变时，只进行高剂量组和对照组动物的主要脏器的组织病理学检查，如发现病变则对中、低剂量组相应器官及组织进行检查。

1.7.3实验数据统计：应用SPSS统计软件进行单因素方差分析。在统计分析时，先对数据进行方差齐性检验，若方差齐，采用单因素方差分析进行总体比较，发现差异再用Dunnett检验进行多个剂量组与对照组均数间的两两比较。若方差不齐则对数据进行适当的变量转换，满足方差齐性检验后，用转换后的数据进行统计；若转换数据仍未达到方差齐要求，改用秩和检验进行统计分析。

2结果

2.1急性经口毒性试验

表1-1：本发明胶囊对小鼠的急性毒性试验结果

从表1-1可见，以最大给药量（剂量为30000mg/kg BW）的样品给予小鼠灌胃后，动物生长良好，未见体重受到影响。受试小鼠均未见有中毒症状，观察14天无动物死亡。试验结束解剖动物、大体观察，肝、肾、脾、心、肺、胃、肠等主要脏器均未见明显异常改变，根据《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）中的急性毒性分级标准，该样品的急性经口毒性属无毒级。

2.2Ames试验

表2-1：本发明胶囊Ames试验结果（第一次）

注：

1、以上结果(菌落数)均为3个平皿的均值±标准差。

2、阳性对照：TA97a+S9、TA98+S9、TA100+S9采用2-氨基芴（剂量为10ug/皿）；TA98-S9采用柔毛霉素（剂量为6ug/皿）；TA97a-S9、TA102-S9采用敌克松（剂量为50ug/皿）；TA100-S9采用叠氮钠（剂量为1.5ug/皿）；TA102+S9采用1,8-二羟基葸醌（剂量为50ug/皿）。表3-1同。

从表2-1、表3-1可见，对TA97a、TA98、TA100、TA102四种试验菌株，无论是否加入S-9，样品各剂量组的回变菌落数均未超过自发回变菌落数的两倍，亦无剂量-反应关系，表示该受试物诱变试验结果为阴性。

表3-1：本发明胶囊Ames试验结果（第二次）

注：以上结果(菌落数)均为3个平皿的均值±标准差。

2.3小鼠骨髓细胞微核试验

表4-1：本发明胶囊对小鼠的骨髓细胞微核发生率的影响

注：**表示该组与阳性对照组比较，差异具有极显著性（P<0.01）；样品各剂量组与阴性对照组比较，差异均无显著性（P>0.05）；cp为环磷酰胺。

从表4-1可见，样品各剂量组小鼠的骨髓细胞微核率与阴性对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)，而环磷酰胺阳性对照组与阴性对照组比较差异有极显著性(P<0.01)。未见该样品对小鼠的骨髓细胞有损伤作用。

2.4小鼠***畸形试验

表5-1：本发明胶囊对小鼠***畸形发生率的影响

从表5-1可见，样品对小鼠***畸形发生率未产生明显改变，样品各剂量组的***畸形率与阴性对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)，而环磷酰胺阳性对照组与阴性对照组比较差异有极显著性(P<0.01)。未见该样品对小鼠***产生畸形作用。

2.5大鼠30天喂养试验

2.5.1动物一般表现：实验期间，各组动物生长发育良好，未见动物有异常行为和中毒表现，各组动物均无死亡。

2.5.2样品对大鼠体重及食物利用率的影响

结果见表6-1～表11-1，以2000、3000、4000mg/kg BW剂量的本发明胶囊（实施例1制备得到）给大鼠灌胃30天，实验期间，样品各剂量组雌雄鼠每周的体重、增重量、每周进食量及总进食量、每周食物利用率及总食物利用率与对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)，表明该样品对大鼠的体重增长和食物利用率无明显影响。

表6-1：本发明胶囊对大鼠体重的影响

注：*第4周的天数为9天，下同。表中各剂量组与阴性对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)。

表7-1：本发明胶囊对大鼠第1周体重增长和食物利用率的影响

注：表中各剂量组与阴性对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)。

表8-1：本发明胶囊对大鼠第2周体重增长和食物利用率的影响

表9-1：本发明胶囊对大鼠第3周体重增长和食物利用率的影响

表10-1：本发明胶囊对大鼠第4周体重增长和食物利用率的影响

表11-1：本发明胶囊对大鼠总食物利用率的影响

2.5.3样品对大鼠血常规指标的影响

表12-1：本发明胶囊30天喂养试验结束大鼠血常规指标检查结果

表13-1：本发明胶囊30天喂养试验结束大鼠血常规指标检查结果

从表12-1、表13-1可见，以2000、3000、4000mg/kg BW剂量的本发明胶囊（实施例1制备得到）给大鼠灌胃30天，样品各剂量组雌、雄性大鼠的血红蛋白、红细胞总数、白细胞总数及其分类、血小板数与对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)，表明该样品对大鼠的血常规指标无明显影响。

2.5.4样品对大鼠血液生化指标的影响

结果见表14-1、表15-1，以2000、3000、4000mg/kg BW剂量的本发明胶囊（实施例1制备得到）给大鼠灌胃30天，样品各剂量组雌、雄性大鼠的血清谷草转氨酶、谷丙转氨酶、尿素氮、肌酐、胆固醇、甘油三脂、总蛋白、白蛋白、血糖与对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)，表明该样品对大鼠的血液生化指标无明显影响。

表14-1：本发明胶囊30天喂养试验结束大鼠血液生化指标检查结果

表15-1：本发明胶囊30天喂养试验结束大鼠血液生化指标检查结果

2.5.5样品对大鼠脏器重量及脏器/体重比值的影响

结果见表16-1、表17-1，以2000、3000、4000mg/kg BW剂量的本发明胶囊（实施例1制备得到）给大鼠灌胃30天，样品各剂量组大鼠的肝、肾、脾、雄鼠睾丸重量和肝/体、肾/体、脾/体、雄鼠睾/体比值与对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)，表明该样品对大鼠的脏器重量及脏器/体重比值无明显影响。

表16-1：本发明胶囊对大鼠脏器重量的影响

表17-1：本发明胶囊对大鼠脏器/体重比值的影响

2.5.6解剖大体观察及组织学检查结果

实验结束解剖动物，大体观察各组动物均未发现明显病变。故只选择样品的高剂量组和阴性对照组动物的主要脏器进行组织病理切片检查，结果见表18-1～表24-1。结果显示，两组动物分别有1和2只大鼠的肝脏汇管区可见轻度的炎症细胞浸润，各有1只大鼠的肾脏皮质部可见少量蛋白管型，高剂量组有1只大鼠的胃粘膜下层可见轻度的炎症细胞浸润，以上组织病变属动物的自发病变，且两组动物的病变程度相似，故可以排除是样品所致；其他脏器组织未见病理组织学改变，表明该样品对大鼠的上述脏器组织无损害作用。

表18-1：本发明胶囊30天喂养试验大鼠肝脏组织病理学检查结果

表19-1：本发明胶囊30天喂养试验大鼠肾脏组织病理学检查结果

表20-1：本发明胶囊30天喂养试验大鼠脾脏组织病理学检查结果

表21-1：本发明胶囊30天喂养试验大鼠胃组织病理学检查结果

表22-1：本发明胶囊30天喂养试验大鼠十二指肠组织病理学检查结果

表23-1：本发明胶囊30天喂养试验大鼠雄鼠睾丸组织病理学检查结果

表24-1：本发明胶囊30天喂养试验大鼠雌鼠卵巢组织病理学检查结果

3小结

以最大给药量（剂量为30000mg/kg BW）的样品给予小鼠灌胃后，未见动物有中毒症状和死亡，急性经口毒性属无毒级。三项遗传毒性试验（Ames试验、小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠***畸形试验）结果均为阴性。30天喂养试验，以2000、3000、4000mg/kg BW（分别相当于人体推荐用量的50、75、100倍）3个剂量的样品连续给大鼠灌胃30天，实验期间动物生长发育良好，各剂量组大鼠的体重、增重量、进食量、食物利用率、血常规指标、血液生化指标、脏器重量及脏器/体重比值等与对照组比较，均无显著性差异（P>0.05）；大体解剖观察和组织病理学检查未见与样品有关的异常改变。提示该样品30天喂养对大鼠各项观察指标未产生明显毒副作用。

采用实施例2~7制备的组合物同法进行上述实验。结果表明：本发明制备的用于缓解体力疲劳的组合物与实施例1的组合物具有相似的作用，其中，以实施例1的效果为最优。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims

1.一种缓解体力疲劳的组合物，其特征在于，包括以下重量份的组分：黄芪400~700份，枸杞子300~600份，人参150~450份和淫羊藿100~300份。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，包括以下重量份的组分：黄芪500~600份，枸杞子400~500份，人参250~350份和淫羊藿150~250份；优选地，所述组合物包括以下重量份的组分：黄芪530~570份，枸杞子430~470份，人参280~320份和淫羊藿180~220份。

3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，包括以下重量份的组分：黄芪550份，枸杞子450份，人参300份和淫羊藿200份。

4.根据权利要求1~3任意一项所述的组合物，其特征在于，该组合物剂型为药学或保健品上可接受的剂型。

5.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述药学或保健品上可接受的剂型为：片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液或丸剂；优选胶囊剂。

6.权利要求1~5任意一项所述组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将所述比例中部分人参粉碎成细粉；

3）取所述比例的黄芪和枸杞子加水煎煮，滤液浓缩成清膏；

5）将步骤1）的人参细粉与步骤4）的干膏粉混匀，即得。

7.根据权利要求6所述组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2）取步骤1）剩余的人参及所述比例的淫羊藿用乙醇回流提取2~4次，每次加人参和淫羊藿6~9倍量60~80%的乙醇，每次提取1~3小时，滤过，合并滤液，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.30~1.35的清膏，备用；

3）取所述比例的黄芪和枸杞子加水煎煮2~4次，每次加黄芪和枸杞子6~10倍量的水，每次煎煮1~3小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至相对密度为1.30~1.35的清膏，备用；

5）将步骤1）的人参细粉与步骤4）的干膏粉混匀，即得。

8.根据权利要求7所述组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤2）提取2次，每次加8倍量70%的乙醇，每次提取2小时；所述步骤3）煎煮2次，每次加8倍量的水，每次煎煮2小时。

9.根据权利要求6~8任意一项所述组合物的制备方法，其特征在于，将组合物制成胶囊剂，步骤5）中得到干膏粉后，用85%乙醇制成软材，16目筛制粒，50~60℃干燥，14目筛整粒，装入胶囊壳，即得胶囊成品。

10.权利要求1~5任意一项所述的组合物在制备缓解体力疲劳的药物或/和保健品中的应用。