CN102382777A - 一种复合微生物菌剂及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种复合微生物菌剂，是由酵母辐射诱变菌、黑曲霉和绿色木霉各自扩大培养后的发酵菌液混合制成的。本发明的有益效果为：降低了薯渣中的草粉含量，又增加了复合微生物菌剂中菌种的发酵底物；本技术方案所选用的黑曲霉和绿色木霉均为高效价菌种；针对性的做出了灭菌组与未灭菌组的对照，并模拟生产做了中试试验，更接近于生产实际；经过微生物培养，产生大量菌体蛋白；经发酵作用后，将马铃薯渣中的粗纤维、果胶等含量较高的成分也可转化为饲用粗蛋白，使马铃薯渣的粗蛋白含量提高到可以直接饲喂畜禽类动物的水平，并且也利用菌种的发酵作用来改善马铃薯渣的适口性，提高动物采食量，降低生产成本和提高养殖业的经济效益。

Description

一种复合微生物菌剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种微生物制剂及其制备方法和应用，具体涉及一种复合微生物菌剂及其制备方法和应用。

背景技术

随着经济的发展，我国的消费水平也在逐步提高，人们对肉、奶、蛋的需求也在大幅度增加，但是我国的人均蛋白摄取量很低，不足世界人均水平的一半。种植业可以提供植物性蛋白，例如农作物秸秆、大豆饼粕、玉米粉等，养殖业可以提供动物性蛋白，例如鱼粉、肉骨粉等，虽然数量巨大，但是这些蛋白资源的总量大约仅可以满足我国畜牧业蛋白饲料需求量的一半左右。我国蛋白资源匾乏，因此需要积极探寻新的蛋白资源种类与来源，而微生物技术的发展，为蛋白饲料的生物转化提供了技术支持。

马铃薯为茄科属一年生草本植物，作为世界各国的主要经济作物之一，其种植业发展迅速，产量也是逐年上升，我国马铃薯种植面积和总产量已跃居至世界首位。

马铃薯渣是在马铃薯淀粉生产加工过程中，产生的一种主要成分为水、细胞碎片和残余淀粉颗粒的副产物。马铃薯渣含有动物生长所需要的粗蛋白等各种营养成分，只是含量比较低，而且适口性也比较差，直接饲喂的效果不是很好，如果经过微生物的发酵处理后，来提高其粗蛋白含量，改善适口性，马铃薯渣也是可以作为提供蛋白资源种类之一的。这对于缓解我国蛋白资源的匾乏现状，促进畜牧业的发展，提高我国人均蛋白摄取量是非常有意义。

马铃薯渣主要含水、果胶、粗纤维等多糖物质，其中蛋白质含量仅为1%-8%,淀粉含量小于10%。营养价值较低的薯渣利用大多局限于以鲜薯渣或晾千后的薯渣直接作为禽畜饲料，仅有少数薯渣烘干制成干饲料。然而烘干能耗较大，使得薯渣干饲料成本较高，生产难以长期维持，而且这种饲料的营养价值低，不能满足家畜对营养的均衡需求。鲜薯渣水分含量高达80%以上，不便于千燥和运输，生产季节时期若不能及时处理，占用场地而且容易腐败变质，造成资源浪费和环境污染。

在国外，马铃薯渣的研究则相对较为成熟，应用范围也较为广泛。除了与国内相似的处理方法外，研究更倾向于把薯渣做为一个整体，利用纤维、淀粉和蛋白质之间的相互作用，通过各种处理方法对其进行研究。

发明内容

本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了一种针对马铃薯渣生物饲料制备的高效的复合微生物菌剂。

为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为：一种复合微生物菌剂，是由酵母辐射诱变菌、黑曲霉和绿色木霉各自扩大培养后的发酵菌液混合制成的。

所述酵母辐射诱变菌是经过¹²C⁺⁶离子束辐照并选育得到的；所述酵母辐射诱变菌的菌种保藏号为CGMCC No.5004。

所述复合微生物菌剂中各组分的混合比例为按照体积比黑曲霉培养液：绿色木霉培养液：酵母辐射诱变菌培养液为0-1：1-3：2-3。

所述复合微生物菌剂中各组分的混合比例为按照体积比黑曲霉培养液：绿色木霉培养液：酵母辐射诱变菌培养液为1：1：2或0：2：2或1：3：3或1：2：2。

本发明的另一个目的是提供一种复合微生物菌剂的制备方法，包括有以下步骤：

1）将酵母菌株进行辐射诱变并选育，得到酵母辐射诱变菌；

2）将酵母辐射诱变菌、黑曲霉和绿色木霉分别置于马铃薯糖琼脂培养基上进行斜面培养；

3）将步骤2）得到的经斜面培养后的黑曲霉和绿色木霉置于霉菌发酵瓶培养基中进行培养，得到黑曲霉培养液和绿色木霉培养液，并加入保护剂；

4）将步骤2）得到的经斜面培养后的酵母辐射诱变菌置于酵母种子瓶培养基中进行培养；得到酵母辐射诱变菌培养液，并加入保护剂； 

5）将步骤3）得到的黑曲霉培养液和绿色木霉培养液与步骤4）得到的酵母辐射诱变菌培养液混合，得到混合菌液，混合比例为按照体积比黑曲霉培养液：绿色木霉培养液：酵母辐射诱变菌培养液为0-1：1-3：2-3；

6）将步骤5）得到的带有保护剂的混合菌液冻干得到复合微生物菌剂。

上述制备方法，所述步骤1）中的辐射剂量为20Gy-120Gy，优选为80Gy。

上述制备方法，所述步骤3）和步骤4）中的保护剂为脱脂乳和甘油，或脱脂乳、海藻糖和维生素C；所述保护剂的加入量为按照质量百分比脱脂乳10%、甘油5%，或脱脂乳10%、海藻糖5%和维生素C 5%。

上述制备方法，所述步骤5）中，黑曲霉培养液、绿色木霉培养液和酵母辐射诱变菌培养液的混合比例为按照体积比黑曲霉培养液：绿色木霉培养液：酵母辐射诱变菌培养液为1：1：2或0：2：2或1：3：3或1：2：2。

本发明的第三个目的是提供一种上述复合微生物菌剂在制备薯渣蛋白饲料中的应用。

上述应用，是按照如下步骤进行的：

a）将20重量份的马铃薯渣与1重量份的草粉混合，得到薯渣发酵原料；

b）将复合微生物菌剂喷洒到薯渣发酵原料上，每100g薯渣发酵原料上喷洒1ml复合微生物菌剂，得到复合发酵底料；

c）将2%乳酸杆菌接入复合发酵底料中，接种比例为按照质量百分比2%。

本发明的有益效果为：

1、由于新鲜马铃薯渣中水分含量过高，高于发酵要求的最高水分含量，采用了向薯渣中添加部分草粉的方法，既降低了薯渣中的草粉含量，又增加了复合微生物菌剂中菌种的发酵底物；

2、本技术方案所选用酵母菌为经过中科院近代物理研究所重离子束诱变后选育出的高效价菌种；

3、针对性的做出了灭菌组与未灭菌组的对照，并模拟生产做了中试试验。此外，实验在薯渣发酵结束后做了烘干实验，得出了薯渣在达到储存要求的水分含量的最佳烘干时间，更接近于生产实际；

4、经过微生物培养，产生大量菌体蛋白；经发酵作用后，将马铃薯渣中的粗纤维、果胶等含量较高的成分也可转化为饲用粗蛋白，使马铃薯渣的粗蛋白含量提高到可以直接饲喂畜禽类动物的水平，并且也利用菌种的发酵作用来改善马铃薯渣的适口性，提高动物采食量，降低生产成本和提高养殖业的经济效益。

具体实施方式

实施例1：

一、酵母菌种的重离子束辐照诱变与选育实验

1. 材料与方法

酿酒酵母菌株 甘肃省工业微生物菌种保藏中心

2.实验步骤与方法

2.1 菌种的活化

取已知效价且生产性能优良的酵母菌种一支，放置在恒温缓冲间（28℃±0.5℃，30min） ，使其活化。

2.2 ¹²C⁺⁶离子束穿透诱变

对酵母分批设计多点的不同辐照剂量，以重离子加速器提供的¹²C⁺⁶离子束对酵母孢子悬浮液二个样品进行辐照诱变，辐照剂量分别为0， 40,60,80,100,120Gy，然后将处理过的孢子悬液梯度稀释，准确吸取一个样品的孢子悬液0.2ml/板，倒在制好的分离平板培养基上，分离单个菌落，以追求最佳诱变剂量。同时，以出发菌种另一个样品孢子悬液同法以普通分离平板培养基分离对照，以便进行菌落形态对比。待分离平板培养基在28℃±0.5℃培养6-7天生长成熟，于冰箱中2-4℃保存备用。研究重离子束¹²C⁺⁶离子对出发菌种诱变剂量的选择与诱变后筛选出高产菌株的趋势。

2.3 高效价菌株的筛选

2.3.1单个菌落的挑选

在超净工作台，从分离好的平板上仔细挑选孢子丰满的单菌落，以及菌落形态有一定变异的单菌落，在记录好菌落详细形态及大小后转接于斜面培养基上，于恒温箱内培养，培养温度为28.0℃±0.60℃、培养时间为6-7天后冷藏备用。

2.3.2摇瓶初筛

2.3.2.1种子瓶发酵

取出已生长成熟的转接斜面菌种进行观察，将长好的孢子挖取一定量转接于种子培养基进行扩大培养，以200r/min旋转摇瓶机，恒温、恒湿条件下进行种子瓶发酵。

2.3.2.2发酵瓶发酵   

取培养好的种子液以一定的接种量转接于发酵培养基（60ml/500ml三角瓶）进行二级发酵，以200r/min旋转摇瓶机，恒温、恒湿条件下培养48h。

2.3.3 效价测定

测定酵母中的菌体蛋白的含量：双抗体夹心ELISA法

3 实验结果，见表1：

由于菌体蛋白也是生物蛋白饲料蛋白提升的重要组成部分，经过重离子束辐照后，酵母自身的菌体蛋白有了一定的提高，特别是当辐照的剂量为80Gy时，菌体蛋白达到了59.3%，有了明显的提高。

 

二、实验步骤：

1、材料

1.1、菌种

黑曲霉菌：由甘肃工业微生物菌种保存中心购买。

绿色木霉菌：由甘肃工业微生物菌种保存中心购买。

酵母辐射诱变菌：中科院近代物理所生物物理实验室重离子辐照选育并保藏，保藏编号为CGMCC No：5004。

乳酸杆菌：由甘肃工业微生物菌种保存中心购买。

1.2、菌种制备方法：

1.2.1酵母菌种的重离子束辐照诱变：

1.2.1.1酵母菌株由甘肃省工业微生物菌种保藏中心购买，保藏号为GSICC 51951，

所用仪器同如下：

“HIFRL”型中能重离子加速器,中科院兰州近代物理研究所提供；     

超净工作台；

旋转摇瓶机，型号：X-X   

隔水式电热恒温培养箱：WGP-600；

pH计：pHS-3C型，上海雷磁仪器厂；

电子精密天平：FA2004 Electronic Balance  Accuracy:0.1mg；

生物显微镜：CX21BIM；

高压蒸汽灭菌器。

1.2.1.2菌种的活化：

取已知效价且生产性能优良的酵母菌种一支，放置在恒温缓冲间（28℃±0.5℃，30min），使其活化。

1.2.1.3 ¹²C⁺⁶离子束穿透诱变：

对酵母分批设计多点的不同辐照剂量，以重离子加速器提供的¹²C⁺⁶离子束对酵母菌种孢子悬浮液二个样品进行辐照诱变，辐照剂量分别为0，20,40,60,80,100,120Gy，然后将处理过的孢子悬液梯度稀释，准确吸取一个样品的孢子悬液0.2ml/板，倒在制好的分离平板培养基上，分离单个菌落，以追求最佳诱变剂量。同时，以出发菌种另一个样品孢子悬液同法以普通分离平板培养基分离对照，以便进行菌落形态对比。待分离平板培养基在28℃±0.5℃培养6-7天生长成熟，于冰箱中2-4℃保存备用。研究重离子束¹²C⁺⁶离子对出发菌种诱变剂量的选择与诱变后筛选出高产菌株的趋势。

1.2.1.4 高效价菌株的筛选：

（1）单个菌落的挑选：

在超净工作台，从分离好的平板上仔细挑选孢子丰满的单菌落，以及菌落形态有一定变异的单菌落，在记录好菌落详细形态及大小后转接于斜面培养基上，于恒温箱内培养，培养温度为28.0℃±0.60℃、培养时间为6-7天后冷藏备用。

（2）摇瓶初筛

种子瓶发酵：

取出已生长成熟的转接斜面菌种进行观察，将长好的孢子挖取一定量转接于种子培养基进行扩大培养，以200r/min旋转摇瓶机，恒温、恒湿条件下进行种子瓶发酵。

发酵瓶发酵：   

取培养好的种子液以一定的接种量转接于发酵培养基（60ml/500ml三角瓶）进行二级发酵，以200r/min旋转摇瓶机，恒温、恒湿条件下培养48h。

1.2.1.5测定结果：

效价测定；

将30g薯渣与5%（1.5g）的草粉混合均匀后放入三角瓶中，每个辐照剂量按1%（按100g薯渣中一个比例接种1ml）的接种比例进行接种。接种后放于恒温箱中27℃的条件下培养，时间为7天。然后每天观察实验现象并做好记录，7天后用凯氏定氮仪测样品中的粗蛋白的含量。结果见下表2：

由表2可以看出，当辐照剂量为60和80 Gy时，粗蛋白含量出现了提升，当辐照剂量为80 Gy时，粗蛋白含量可提升到9.2%，较对照组提高了17.11%，提升较为显著，因此在制备复合微生物菌剂时，可选用在80Gy时辐照后选育的酵母菌株。

1.3 培养基

（1）斜面培养基的制备：

乳酸杆菌斜面培养基配方：（50ml）牛肉膏：0.15g；蛋白胨：0.5g；Nacl：0.25；琼脂：1g；水：50ml。

马铃薯糖琼脂培养基配方：（PDA斜面），适合培养黑曲霉，米曲霉，绿色木霉，产朊假丝酵母等。

马铃薯（去皮后切成小块，煮沸半小时）：20g；水：100ml；琼脂：2g；糖（培养霉菌时用蔗糖，培养酵母时用葡萄糖）：2g。

（2）种子瓶培养基的制备：

霉菌发酵瓶培养基配方：（用于黑曲霉和绿色木霉）

蛋白胨：0.3g；硫酸铵：0.5g；七水合硫酸镁 0.04g，蔗糖 3g，磷酸二氢钾 0.2g，水  100ml。

温度：30℃；转速：220转；PH ：调整PH为6±0.1；培养时间：48小时；121度灭菌30分钟，在斜面上挑四环菌株。

酵母种子瓶培养基配方：

葡萄糖：1g；蛋白胨：1g；酵母浸出粉：0.5g；磷酸二氢钾：0.3g；水：100ml。

PH：调整PH为7±0.1；温度：36度；转速：200转；培养时间：24h。

每个三角瓶中装50ml培养液，接种时用接种环在斜面上挑四环菌株。

1.4 其他材料

草粉，由干燥的玉米秸秆粉碎后获得； 

分解剂“微储王”（由新疆农科院生产）。

实施例2：

一、复合微生物菌剂发酵马铃薯渣实验中草粉添加比例实验：

根据实验需求分别设计了六个添加比例，分别是：20克草粉，20克薯渣，20克薯渣加上5%的草粉，20克薯渣加上10%的草粉，20克薯渣加上15%的草粉，20克薯渣加上20%的草粉。

然后用电子天平分别按不同比例称好薯渣和草粉，将其拌匀后装入到三角瓶中。

提前将烘干机预热到100度，然后将六个广口瓶分别贴上标签放入到烘干机中，开始计时，每半个小时称重一次，记录到试验本上，直到水分的含量不再发生变化。

水分含量记录见表3：

从水分烘干速度来看，20克薯渣的水分含量最高；从添加草粉的比例来看，5%草粉添加量的薯渣水分含量最高；往后依次是10%的草粉添加量，15%的草粉添加量，20%的草粉添加量的薯渣的水分含量最低。

根据郭维烈，郭庆华的《新型发酵蛋白饲料》，发酵过程中的水分含量一般在30%-75%，相对湿度则保持在90%-97%，所以从经济角度考虑，应该选择的草粉添加比例为5%，主要的原因有两点：（1）、添加5%的草粉其水分含量刚好可达到发酵过程中的水分含量要求。（2）、由于草粉中含有大量的纤维素，因此较少的草粉添加量也不至于增大微生物菌种的负担，更有利于薯渣中纤维素的分解及转化。

鉴于以上因素考虑，适合发酵的薯渣中草粉的添加比例为5%。

二、复合微生物菌剂生物处理马铃薯渣实验：

共选用了八组，分别为：

按照体积比：

黑曲霉培养液（H），绿色木霉培养液（M），酵母辐射诱变菌培养液（J）；

组一：M：J为2:2；

组二：H：M：J为1:2:2；

组三：H：M：J为1:2:3；

组四：H：M：J为1:3:3；

组五：H：M：J为1:1:3；

组六：H：M：J为1:1:2；

组七：H：M：J为1:3:2；

组八：空白对照。

将30g薯渣与1.5g的草粉混合均匀后放入三角瓶中，按如下比例进行接种：100g薯渣中接种1ml。为了比较灭菌对薯渣中粗蛋白含量提升的影响，每个组都分别进行灭菌组与未灭菌组的对照实验。灭菌组,在高压锅中121℃30分钟灭菌后在无菌操作台上进行接种，以防被杂菌污染; 未灭菌组不进行灭菌。然后每组按2%的比例统一加上乳酸杆菌。接种后放于恒温箱中27℃的条件下培养，时间为7天。7天后用凯氏定氮仪测样品中的粗蛋白的含量。

各菌种比例发酵后的蛋白含量，见下表4：

*表示差异显著P＜0.05，* *表示差异特别显著P＜0.01。

从表4中可以看出，空白组的蛋白含量平均为4.98%，发酵后蛋白含量都得到了明显的提高，最高的可达到22.7%，蛋白含量提高了将近5倍。 其中1∶3∶3，1∶2∶3，1∶3∶2和1∶1∶2的蛋白含量都超过了20%，效果较好。

从颜色效果来说，木霉与酵母组发酵后的颜色黑色的程度最低，也就是2∶2组，并且其发酵后的蛋白含量也达到了18.4%。

未灭菌组的效果普遍低于灭菌组，从图标中分析，低了大约3-7个百分点，但从工业生产角度考虑，灭菌的可行性不是很高。而未灭菌的比灭菌的蛋白提高量的差异并不是特别显著，比如1∶2∶2组灭菌与不灭菌的效果分别为18.08%和16.27%，差别较小，因此从工业角度综合考虑，选用不进行灭菌。1∶3∶3组，其蛋白提高率最大；2∶2组，因为其不仅效果较好，并且发酵后颜色最接近于饲料的颜色;；1∶1∶2组，用了较少的菌液，但仍然达到了很好的效果。

三、复合微生物菌剂的制备及其工艺优化

选取了最佳的四个比例，分别为1:1:2，2:2，1:3:3和1:2:2并进一步制成了复合微生物菌剂一，复合微生物菌剂二，复合微生物菌剂三和复合微生物菌剂四。

复合微生物菌剂制备的工艺流程主要为，菌种斜面的制备，菌种种子瓶培养基的制备，加入保护剂，混合后冻干，包装。试验中主要解决了两个问题，一个是保护剂的选择，另一个是混合后冻干与冻干后混合的菌种活性对比。

保护剂主要有两个，一个是加入脱脂乳10%，甘油5%；另一个是加入脱脂乳10%，海藻糖5%，维生素C 5%。在冻干前分别向所要冻干的菌液中加入这两种保护剂，冻干后测定冻干粉中菌种的存活率。

混合后冻干和冻干后混和是两种不同的生产工艺，菌液分别冻干后混合减少了不同菌种之间的相互影响，但混合后冻干则更接近于大规模工业生产，可以减轻生产成本。

加入不同保护剂对菌种冻干后存活率的影响结果如表5所示：

由表5可以看出，加入保护剂二后的菌种的存活率为83.2%，高于加入保护剂一的菌种存活率，所以在冻干的过程中选择保护剂二。

复合微生物菌剂的制备选取了两种不同的工艺，分别为不同菌液的分别冻干后混合和不同菌液混合后一起冻干，结果见下表6：

由表6可以看出，冻干后混合和混合后冻干的菌种的存活率分别为81.2%和82.1%，两次工艺的差别不大。所以从大规模工业生产的角度考虑，选取将菌液混合后再进行一块冻干，以节省生产成本。

四、复合微生物菌剂与分解剂处理薯渣效果对比实验

分为三组，空白对照组、复合微生物菌剂三组、分解剂“微储王”组，每组分两种不同发酵温度：5℃，18℃，不同温度设三个平行对照，每组均不灭菌，按100g薯渣接种1ml菌液比例喷晒马铃薯渣，接种后混合均匀，装入密封透明的塑料袋中，每袋5 kg，分别置于5℃和18℃培养箱中发酵。每两周取一次样，测量其中的粗蛋白含量。

分解剂使用方法：将“微储王”秸秆发酵活干菌一包（3g），倒入200ml清水中，搅拌均匀，待菌种激活1-2h以后兑入1%的盐水中即可使用，接种量为1‰。

取样：每两周取一次样，测量其中的粗蛋白含量。  

复合微生物菌剂与分解剂处理薯渣效果对比，以粗蛋白测定结果为依据，如表7所示：

*表示差异显著P＜0.05    * *表示差异特别显著P＜0.01

从以上的数据中可以看出，第二周时蛋白提高最为明显，以后的蛋白提高率逐渐放缓，到第六周时，部分组的蛋白含量出现了降低，其原因可能受取样的影响，但从平均值也可看出，其整体的蛋白含量已经基本上不再提高。到第八周时，蛋白含量基本保持恒定不变。

如表7所示，由于温度的差异，对薯渣中粗蛋白的提升影响较为显著，复合微生物菌剂三高温实验组在第六周时，蛋白含量可以提高到8.65%，较空白组4.32%，提高了100.2%，而复合微生物菌剂三低温验组同样在第六周时，其粗蛋白含量仅达到了6.54%，较空白组的4.32%仅仅提高了51.4%，可见温度对薯渣发酵粗蛋白的提升作用较为显著。

五、复合微生物菌剂处理薯渣中试实验

分为了五个组，对照组、复合微生物菌剂三组、复合微生物菌剂四组、复合微生物菌剂二组、复合微生物菌剂一组，每组均不灭菌，按100g薯渣接种1ml菌液比例喷晒马铃薯渣，接种后混合均匀，然后装入密封透明的塑料袋中，每袋装处理马铃薯渣10 kg。然后放于15℃的培养箱中。每两周取一次样，分别测其中的的粗蛋白含量。每一组设三个平行对照，结果以平均值表示。见下表8：

*表示差异显著P＜0.05，* *表示差异特别显著P＜0.01。

以表8可以看出，第二周时蛋白含量的提升最为明显，之后的第四周和第六周蛋白提高率逐渐放缓，到第六周时也出现了部分组的蛋白含量下降，但仅是个别的，总体来说其蛋白含量仍有提升的空间。但到了第八周，总体粗蛋白含量变化较为平稳，增长基本已经停止，部分组继续出现蛋白比例下降。

六、马铃薯渣微生物蛋白饲料发酵后水分烘干实验

将已经发酵7天的薯渣七瓶打开瓶口，提前将烘干机预热到100度，然后将七个广口瓶分别保留标签放入到烘干机中，开始计时，每半个小时称重一次，直到水分的含量不再发生变化。

马铃薯渣微生物蛋白饲料发酵后水分烘干 6小时后的水分含量结果如表9所示：

又因为饲料可以储存的湿度为水分含量不高于14%，所以从上表中可以得出在薯渣烘干到六小时左右时既可以达到储存要求。

七、马铃薯渣发酵蛋白饲料饲喂实验：

1.材料与方法：

1.1试验分组

试验选择20头品种接近，公母各半，45日龄的三元杂交仔猪为试验对象，选择的仔猪要求体重接近，体型一致，体重间的差异与平均体重相比P＞0.05（差异不显著）。按照仔猪的体重分为两组，一组为试验组，采用常规饲料添加马铃薯渣发酵蛋白饲料饲喂;一组为对照组，采用常规饲料饲喂。试验分组情况见下表10：

1.2 饲料处理：

对照组饲料以常规饲料为主，选用玉米、鼓皮、豆渣、食盐等按照一定的比例配合而成，试验组在常规饲料的基础上添加10%的发酵后的马铃薯渣蛋白饲料。如下表11：

1.3 饲养管理：

马铃薯渣饲料在饲喂前要与其他饲料混合均匀，然后用水浸泡，料水比大致在1:2。试验猪自由采食和饮水，每天饲喂3-4次，按照养殖场常规管理进行。试验全程日粮中不添加使用任何药物。猪群在试验开始及结束称重，同时记录每组猪饲料采食量。观察猪群采食情祝、粪便形状和健康状祝。试验期120 d。试验时间为2010年9月到12月。

2. 测定指标

2.1平均日增重：平均日增重=（终末体重－初始体重）／120

2.2平均日采食量：平均日采食量=试验期间饲料总消耗／120

2.3料肉比：料肉比(FCR)是指饲养的畜禽增重一公斤所消耗的饲料量，它是评价饲料报酬的一个重要指标料。料肉比高说明用的饲料多，但增长的肉少；反之，料肉比低说明用的饲料少，但增长的肉多。

2.4 屠宰率：也称净肉率或畜禽活重和宰后胴体重量的比率。

　　计算公式 屠宰率（%）=胴体重量/畜禽活重×100%

3. 实验结果：

3.1实验结束后，测所有猪的终末体重，并求其平均值，计算其总增重和平均日增重。如下表12所示：

通过表12可以看出：添加发酵后的马铃薯渣的实验组增重效果相比较为明显，总增重比实验组多112.5Kg,平均日增重比对照组提高了15.55%，增重效果明显。

3.2 饲料转化比：即料肉比

实验结束后，测得每组中所消耗的饲料的总量，料肉比=饲料总消耗／总增重，见下表13：

从上表可以看出，实验组的料肉比为3.25:1，对照组的料肉比为3.71:1，实验组比对照组料肉比降低了14.15%，可见经发酵的马铃薯渣饲料明显的降低了料肉比，提高了饲料的利用率，节约了养殖的成本，提高经济效益。

3.3 屠宰率：

实验结束后，从实验组和对照组中分别选择两头最接***均体重的猪进行屠宰，分别测出屠宰前猪的重量和屠宰后猪胴体的重量，如表14：屠宰率（%）=胴体重量/畜禽活重×100%。

从上表14可以看出，实验组的屠宰率为71.6%，而对照组的屠宰率为65.4%，实验组的屠宰率比对照组提高了9.48%，饲喂发酵后马铃薯渣饲料的猪屠宰率有了一定的提高，增加了出肉率，增加了经济效益。

4. 经济效益分析：

实验结束后，分别计算实验组和对照组的总投入和总收入，总投入主要包括，购买仔猪，饲料的投入，添加剂及药物的投入以及饲养管理成本；总收入主要包括生猪成熟后的卖出收入，按当时的市场价12.5元／Kg，详细见表15：

从上表可以看出，实验组10头猪的总盈利为3222元，对照组10头猪的总盈利为2117元，实验组的总盈利比对照组提高了52.2%，经济效益显著。

5. 小结：

 从以上的饲喂实验中，可以得出如下结论：添加发酵后的马铃薯渣的实验组增重效果相比较为明显，实验组总增重为835.6 Kg，对照组的总增重为723.1 Kg。总增重比实验组多112.5Kg,平均日增重比对照组提高了15.55%，增重效果明显; 实验组的料肉比为3.25:1，对照组的料肉比为3.71:1，实验组比对照组料肉比降低了14.15%，降低了料肉比，提高了饲料的利用率；实验组的屠宰率为71.6%，而对照组的屠宰率为65.4%，实验组的屠宰率比对照组提高了9.48%，增加了经济效益；实验组10头猪的总盈利为3222元，对照组10头猪的总盈利为2117元，实验组的总盈利比对照组提高了52.2%，经济效益显著。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种复合微生物菌剂，其特征在于：是由酵母辐射诱变菌、黑曲霉和绿色木霉各自扩大培养后的发酵菌液混合制成的。

2.如权利要求1所述的复合微生物菌剂，其特征在于：所述酵母辐射诱变菌是经过¹²C⁺⁶离子束辐照并选育得到的；所述酵母辐射诱变菌的菌种保藏号为CGMCC No.5004。

3.如权利要求2所述的复合微生物菌剂，其特征在于：所述复合微生物菌剂中各组分的混合比例为按照体积比黑曲霉培养液：绿色木霉培养液：酵母辐射诱变菌培养液为0-1：1-3：2-3。

4.如权利要求3所述的复合微生物菌剂，其特征在于：所述复合微生物菌剂中各组分的混合比例为按照体积比黑曲霉培养液：绿色木霉培养液：酵母辐射诱变菌培养液为1：1：2或0：2：2或1：3：3或1：2：2。

5.一种如权利要求1所述的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：包括有以下步骤：

1）将酵母菌株进行辐射诱变并选育，得到酵母辐射诱变菌；

2）将酵母辐射诱变菌、黑曲霉和绿色木霉分别置于马铃薯糖琼脂培养基上进行斜面培养；

3）将步骤2）得到的经斜面培养后的黑曲霉和绿色木霉置于霉菌发酵瓶培养基中进行培养，得到黑曲霉培养液和绿色木霉培养液，并加入保护剂；

4）将步骤2）得到的经斜面培养后的酵母辐射诱变菌置于酵母种子瓶培养基中进行培养；得到酵母辐射诱变菌培养液，并加入保护剂； 

5）将步骤3）得到的黑曲霉培养液和绿色木霉培养液与步骤4）得到的酵母辐射诱变菌培养液混合，得到混合菌液，混合比例为按照体积比黑曲霉培养液：绿色木霉培养液：酵母辐射诱变菌培养液为0-1：1-3：2-3；

6）将步骤5）得到的带有保护剂的混合菌液冻干得到复合微生物菌剂。

6.如权利要求5所述的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述步骤1）中的辐射剂量为20Gy-120Gy，优选为80Gy。

7.如权利要求5所述的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述步骤3）和步骤4）中的保护剂为脱脂乳和甘油，或脱脂乳、海藻糖和维生素C；所述保护剂的加入量为按照质量百分比脱脂乳10%、甘油5%，或脱脂乳10%、海藻糖5%和维生素C 5%。

8.如权利要求7所述的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述步骤5）中，黑曲霉培养液、绿色木霉培养液和酵母辐射诱变菌培养液的混合比例为按照体积比黑曲霉培养液：绿色木霉培养液：酵母辐射诱变菌培养液为1：1：2或0：2：2或1：3：3或1：2：2。

9.一种如权利要求1-4任一所述的复合微生物菌剂在制备薯渣蛋白饲料中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于：是按照如下步骤进行的：

a）将20重量份的马铃薯渣与1重量份的草粉混合，得到薯渣发酵原料；

b）将复合微生物菌剂喷洒到薯渣发酵原料上，每100g薯渣发酵原料上喷洒1ml复合微生物菌剂，得到复合发酵底料；

c）将2%乳酸杆菌接入复合发酵底料中，接种比例为按照质量百分比2%。