CN101762668B

CN101762668B - 肝素中硫酸皮肤素定量检测方法

Info

Publication number: CN101762668B
Application number: CN 200910256076
Authority: CN
Inventors: 郭林; 李�荣; 崔慧斐; 伯小霞; 李加耀
Original assignee: DONGYING TIANDONG PHARMACEUTICAL Co Ltd; SHANDONG HI-TECH CHEMICAL GROUP Co Ltd
Current assignee: DONGYING TIANDONG PHARMACEUTICAL CO LTD; Shandong Haike Chemical Co ltd
Priority date: 2009-12-24
Filing date: 2009-12-24
Publication date: 2013-06-19
Anticipated expiration: 2029-12-24
Also published as: CN101762668A

Abstract

本发明涉及一种肝素中硫酸皮肤素定量检测方法。其技术方案是包括以下步骤：检测液配制：样品液：取待测样品，用超纯水溶解，加入一定量的亚硝酸钠，用盐酸调节溶液pH值至1.0～1.5，搅拌反应一段时间后，用氢氧化钠调节溶液pH值至6.5～7.0，用微孔滤膜过滤溶液，除掉初滤液，收集续滤液即为样品液；参比液：称取一定量的硫酸皮肤素标准品，加入样品液溶解后即为参比液；样品检测：分别取样品液和参比液10μl进样检测，通过计算公式求出硫酸皮肤素的含量。有益效果是：利用排阻色谱法将它们分离，从而对其中未降解的硫酸皮肤素进行定量检测，从而有效的控制肝素中硫酸皮肤素的含量，提高肝素临床用药的安全性。

Description

肝素中硫酸皮肤素定量检测方法

一、技术领域：

本发明涉及生物医药领域，特别涉及一种肝素中硫酸皮肤素定量检测方法。

二、背景技术：

肝素和硫酸皮肤素同样为糖胺聚糖类药物，都具有抗血栓、抗炎及抗动脉粥样硬化等药理作用，两者在动物体内都广泛存在，因此在制备肝素时易掺杂有硫酸皮肤素，但由于两者在结构上的相似性，目前的检验方法中还没有特别针对肝素中的微量的硫酸皮肤素定量检测，从而不能严格有效的控制肝素的质量，使得肝素在临床用药时存在计量不准、重复用药等问题，造成一定的用药风险。

三、发明内容：

本发明的目的就是针对现有技术存在的上述缺陷，提供一种肝素中硫酸皮肤素定量检测方法，提供了监控肝素中硫酸皮肤素杂质的可能，从而有效的控制肝素中硫酸皮肤素的含量，提高肝素临床用药的安全性。

其技术方案是：包括以下步骤：

(一)检测条件：

1.1检测仪器：带紫外检测器的高效液相色谱仪；

1.2色谱柱：多孔硅胶填料，每米检测柱的理论塔板数不低于20000；

1.3.流动相：无水硫酸钠溶液；

1.4.检测设置：流速：0.7ml/min；检测波长：紫外检测波长205nm；进样量：10μl；

(二)检测液配制：

2.3样品液：取待测样品，用超纯水溶解，加入一定量的亚硝酸钠，用盐酸调节溶液pH值至1.0～1.5，搅拌反应一段时间后，用氢氧化钠调节溶液pH值至6.5～7.0，用微孔滤膜过滤溶液，除掉初滤液，收集续滤液即为样品液；

2.4参比液：称取一定量的硫酸皮肤素标准品，加入样品液溶解后即为参比液；

(三)样品检测：

分别取样品液和参比液各10μl，进样，记录谱图，以样品液和参比液中亚硝酸盐峰面积作为对照，根据样品液和参比液中硫酸皮肤素峰面积，以及参比液中加入的硫酸皮肤素标准品量，得出样品液中含有的硫酸皮肤素量；

根据上面得出的样品液中硫酸皮肤素量和所取样品质量，计算出样品中硫酸皮肤素含量。

通过以下计算公式求出硫酸皮肤素的含量：

m_{1} = m_{2} \times \frac{A_{i 1} / A_{r 1}}{A_{i 2} / A_{r 2} - A_{i 1} / A_{r 1}}

m₁：样品液中含有的硫酸皮肤素量(g)m₂：参比液中加入的硫酸皮肤素的量(g)A_i1：样品液硫酸皮肤素的峰面积；A_r1：样品液亚硝酸盐峰位的峰面积；A_i2：参比液硫酸皮肤素峰面积；A_r2：参比液亚硝酸盐峰位的峰面积；则样品中含有硫酸皮肤素的量为：DS％＝m₁/W×100％；m₁：样品液含有的硫酸皮肤素量(g)；W：参比液含有的样品量。

上述检测液配制的步骤中具体是：

样品液：取待测样品，用超纯水溶解使成10％的浓度，加入样品量5％(w/w)的亚硝酸钠，用6mol/L的盐酸调节溶液pH值至1.0～1.5，搅拌反应1.5～2.0小时后，用20％的氢氧化钠调节溶液pH值至6.5～7.0，用0.22μm的微孔滤膜过滤溶液，除掉初滤液，收集续滤液即为样品液。

本发明的有益效果是：利用肝素和硫酸皮肤素不相同的结构特点，将含有硫酸皮肤素的肝素在亚硝酸盐的强酸环境中进行降解处理后，利用排阻色谱法将它们分离，从而对其中未降解的硫酸皮肤素进行定量检测；本发明提供了监控肝素中硫酸皮肤素杂质的可能，从而有效的控制肝素中硫酸皮肤素的含量，提高肝素临床用药的安全性。

四、具体实施方式：

本发明所述的硫酸皮肤素检验方法的具体操作包括以下步骤：

称取样品约0.4g，加水稀释成10％浓度(m/m)，加入亚硝酸钠0.02g。用6mol/L的盐酸调节溶液pH至1～1.5，搅拌反应1.5～2h。用20％NaOH溶液调节溶液pH至6.5～7.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，去除初滤液，收集续滤液作为样品液。

精密量取硫酸皮肤素标准品约0.0040g，加入续滤液1g，充分溶解后作为参比液。

将紫外检测器与色谱柱联接，将其检测波长调节至205nm，分别取样品液和参比液10μl进样检测。

计算样品中硫酸皮肤素含量：

m_{1} = m_{2} \times \frac{A_{i 1} / A_{r 1}}{A_{i 2} / A_{r 2} - A_{i 1} / A_{r 1}}

m₁：样品液中含有的硫酸皮肤素量(g)；m₂：参比液中加入的硫酸皮肤素的量(g)；A_i1：样品液硫酸皮肤素的峰面积；A_r1：样品液亚硝酸盐峰位的峰面积；A_i2：参比液硫酸皮肤素峰面积；A_r2：参比液亚硝酸盐峰位的峰面积；则样品中含有硫酸皮肤素的量为：

DS％＝m₁/W×100％

m₁：样品液含有的硫酸皮肤素量(g)；W：参比液含有的样品量。

Claims

1.一种肝素中硫酸皮肤素定量检测方法，其特征是包括以下步骤：

(一)检测条件：

1.1检测仪器：带紫外检测器的高效液相色谱仪；

1.3.流动相：无水硫酸钠溶液；

(二)检测液配制：

2.1样品液：取待测样品，用超纯水溶解，加入一定量的亚硝酸钠，用盐酸调节溶液pH值至1.0～1.5，搅拌反应一段时间后，用氢氧化钠调节溶液pH值至6.5～7.0，用微孔滤膜过滤溶液，除掉初滤液，收集续滤液即为样品液；

2.2参比液：称取一定量的硫酸皮肤素标准品，加入样品液溶解后即为参比液；

(三)样品检测：

根据上面得出的样品液中硫酸皮肤素量和所取样品质量，通过以下公式计算出样品中硫酸皮肤素含量：

其中m₁：样品液中含有的硫酸皮肤素量(g)m₂：参比液中加入的硫酸皮肤素的量(g)A_i1：样品液硫酸皮肤素的峰面积；A_r1：样品液亚硝酸盐峰位的峰面积；A_i2：参比液硫酸皮肤素峰面积；A_r2：参比液亚硝酸盐峰位的峰面积；则样品中含有硫酸皮肤素的量为：DS％＝m₁/W×100％；m₁：样品液含有的硫酸皮肤素量(g)；W：参比液含有的样品量。

2.根据权利要求1所述的肝素中硫酸皮肤素定量检测方法，其特征是：检测液配制的步骤中具体是：

样品液：取待测样品，用超纯水溶解使成10％的浓度，加入样品量5％重量比的亚硝酸钠，用6mol/L的盐酸调节溶液pH值至1.0～1.5，搅拌反应1.5～2.0小时后，用20％的氢氧化钠调节溶液pH值至6.5～7.0，用0.22μm的微孔滤膜过滤溶液，除掉初滤液，收集续滤液即为样品液。