CN101324579A - 一种检测糖类抗原的磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒及其使用方法 - Google Patents
一种检测糖类抗原的磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒及其使用方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种用于检测糖类抗原的磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒及其使用方法，包括包被有抗FITC抗体的磁性微粒子；标记FITC的糖类抗原单克隆抗体及标记酶的糖类抗原单克隆抗体混合作为标记物液；糖类抗原标准品溶液；浓缩洗涤液；发光底物液。其中所述糖类抗原可以是CA72－4、CA50、CA19－9、CA242、CA15－3、CA27－29和CA125中的任一种；酶标抗体和FITC标记抗体是对应抗原的单克隆抗体；包被磁性微粒子的抗FITC抗体可为多克隆抗体或单克隆抗体；混合标记物液为体积比为1∶1－1∶3的FITC标记捕获抗体工作液和酶标记配对抗体工作液混合而成。本发明与已知的测定糖类抗原的试剂盒相比，具有高通量、高灵敏度、线性范围宽、快速等诸多优点，在临床检验等方面具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，涉及一种检测糖类抗原的磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒及其使用方法。
背景技术
癌症对人类的生存健康构成了严重威胁。目前肿瘤治疗的关键在于早期发现、早期治疗，这已是人们的共识。但是目前医院诊断早期肿瘤，主要是靠影像学和细胞病理学诊断技术，一般都是在具有明显的占位性病变和临床症状后才得以确诊，但这已不是癌变的最早期。随着肿瘤早期诊断进入蛋白质时代，以血液为代表的体液蛋白质成为肿瘤标志研究领域中的热点。越来越多肿瘤标志物的发现对建立发展快速、高灵敏、高特异肿瘤标志物的新型检测技术提出了更高的要求。
糖类抗原是发展快应用广的一类肿瘤容量标志物，它包括糖蛋白与糖脂，常表现为粘蛋白形式。其抗原决定簇可定位在糖链上或者在蛋白核上。根据糖基表位的不同和抗原表位大小的差异，一般可分为糖类抗原72-4(carbonhydrate antigen 72-4，CA72-4)、糖类抗原50(carbonhydrate antigen 50，CA50)、糖类抗原19-9(carbonhydrate antigen 19-9，CA19-9)、糖类抗原242(carbonhydrate antigen 242，CA242)、糖类抗原15-3(carbonhydrate antigen 15-3，CA15-3)、糖类抗原27-29(carbonhydrate antigen 27-29，CA27-29)和糖类抗原125(carbonhydrate antigen 125，CA125)。目前对这些标志物进行单检或联检可为疾病的前期筛查、临床诊断、疗效监控、癌细胞转移以及愈后复发情况提供参考依据。
目前用于检测糖类抗原的免疫方法除了有酶免疫测定(enzymeimmunoassay，EIA)、放射免疫测定(Radio immunoassay，RIA)、免疫荧光测定(fluoroimmunoassay，FIA)、放射免疫显影(radioimmunoimaging，RII)以及抗体芯片(antibody microarrays)技术之外，化学发光免疫分析(Chemiluminescence immunoassay，CLIA)技术因其高灵敏、高特异、快速、高通量等特点得到越来越广泛的应用。
在实际的免疫检测中，由于待测样品中所含的杂质成分较多，一定程度上影响了检测灵敏度和准确性，所以从复杂的背景中快速分离、纯化出目的待测物，是临床检验工作者面临的难题之一。免疫磁性微粒子技术是利用高分子材料合成一定粒度大小的磁性固相微粒子作载体，以物理吸附、化学偶联等方法包被上具有特异性亲和力的各种免疫活性物质(抗原或抗体)，使其致敏为免疫磁性粒子，具有分离速度快、效率高、可重复性好；操作简单、不需要昂贵的仪器设备；不影响被分离细胞或其它生物材料的生物学性状和功能等特点，在外加磁场作用下定向运动，使得某些特殊成分得以分离、浓集或纯化。作为用于CLIA检测技术的一种通用固相分离方法，磁性微粒子可大大提高有效包被量从而节省原料，同时可拓宽检测的线性范围从而有效避免弯钩效应的发生，必将促进CLIA技术在临床检验/检测中的应用与发展。
发明内容
本发明的目的是提供一种检测糖类抗原的磁性微粒子化学发光酶免疫分析方法及其专用试剂盒。即采用高特异性单克隆抗体及包被抗异硫氰酸荧光素(fluorescein-iso-thiocyanate，FITC)抗体的磁性微粒子固相分离技术，利用FITC和酶分别标记两株单克隆抗体，在液相中形成免疫夹心复合物，然后加入包被抗FITC抗体的磁性微粒子分离剂，进行洗涤分离，并在管式化学发光分析仪中进行测定。
本发明所提供的检测糖类抗原的磁性微粒子化学发光免疫分析试剂盒，包括包被有抗FITC抗体的磁性微粒子；标记FITC的糖类抗原单克隆抗体及标记酶的糖类抗原单克隆抗体混合作为标记物液；糖类抗原标准品溶液；浓缩洗涤液；发光底物液。
所述包被抗FITC抗体的磁性微粒子为粒径为2-3μm、使用浓度为5-10mg/mL、内核为四氧化三铁(Fe3O4)、表面包裹带有活性基团如氨基(NH2-)、羧基(-COOH)的聚合物；所述抗FITC抗体的包被是通过戊二醛两步法将磁性微粒子与抗FITC抗体进行偶联，并以含有0.5％牛血清白蛋白(bovine serum albumin，BSA)、1％酪蛋白的pH为7.2，0.02mol/L的磷酸缓冲液进行封闭完成。
所述FITC分子与糖类抗原单克隆抗体的偶联物是以常见的碱性液标记法对抗体进行标记。所述标记抗体均为捕获抗体，包括：抗CA72-4单克隆抗体、抗CA50单克隆抗体、抗CA19-9单克隆抗体、抗CA242单克隆抗体、抗CA15-3单克隆抗体、抗CA27-29单克隆抗体和抗CA125单克隆抗体。FITC标记物形式可为冻干粉、浓缩液和工作液；所述FITC标记抗体液以20％小牛血清稀释存放。
所述酶标记抗体的标记酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶；酶的标记可采用现有技术中的多种方法如戊二醛法或过碘酸钠法，若标记酶为碱性磷酸酶，则优选为戊二醛法，若标记酶为辣根过氧化物酶，则优选为过碘酸钠法。酶标记物形式可为冻干粉、浓缩液和工作液；所述标记抗体均为配对抗体，包括：抗CA72-4单克隆抗体、抗CA50单克隆抗体、抗CA19-9单克隆抗体、抗CA242单克隆抗体、抗CA15-3单克隆抗体、抗CA27-29单克隆抗体和抗CA125单克隆抗体。所述酶标记物工作液所用的稀释液为含有0.05％甘油、0.2g/L的硫柳汞防腐剂溶液(可防止放入-20℃的酶标记物冻结，并保持酶标记物的生物活性)。
所述混合标记物液为体积比为1∶1-1∶3的FITC标记捕获抗体工作液和酶标记配对抗体工作液混合而成。
所述标准品溶液为六个浓度梯度含有糖类抗原的溶液；所述配制标准品的基质为50％马血清；所述构成标准品的糖类抗原包括：CA72-4、CA50、CA19-9、CA242、CA15-3、CA27-29和CA125。
所述浓缩洗涤液为pH值为7.4，含有0.1-0.5％吐温-20，0.1％叠氮化钠防腐剂的磷酸盐缓冲液。
所述当标记酶为辣根过氧化物酶时发光底物液由A液和B液构成，所述发光底物液A液为过氧化氢溶液，所述发光底物液B液为鲁米诺溶液；当标记酶为碱性磷酸酶时，所述发光底物液为3-(2’-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3”-羟基)苯-1，2-二氧杂环丁烷磷酸钠(4-methoxy-4-(3-phosphatephenyl)-spiro-(1，2-dioxetane-3，2′-adamantane，AMPPD)缓冲液。
所用的反应管材料可为透明聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、玻璃等。
本发明提供的检测糖类抗原的方法，是利用所述磁性微粒子化学发光酶免疫试剂盒检测糖类抗原。
所述检测糖类抗原的方法还可包括样品的前处理。
本发明所提供的检测糖类抗原的方法，包括以下步骤：
1)样品前处理
对临床血清血浆，3000rpm离心5分钟，取上层液即可进行分析测定。
2)利用上述检测糖类抗原的磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒检测样品。
本发明的试剂盒可定性、定量检测人血清样品中糖类抗原含量。
本发明所述的检测糖类抗原的磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒主要采用磁性微粒子固相分离及双抗夹心的反应模式定性或定量检测人体血清血浆等样品中糖类抗原含量；对样品的前处理要求低，样品前处理过程简单可靠，可快速、高通量检测大批样品。
糖类抗原是一类蛋白大分子，对此类分子一般采用双抗体夹心的方法进行测定。上世纪70年代开始，科学家们通过杂交瘤技术陆续得到了糖类抗原的单克隆抗体，从而为建立双抗体夹心的免疫检测模式提供了保证。
本发明的检测原理是当反应液中有FITC标记的捕获抗体和酶标记的配对抗体时，加入系列标准品或样品溶液后，通过“识别”抗原分子上的抗原决定簇，在溶液中形成FITC标记抗体-抗原-酶标记抗体复合物。然后加入包被有抗FITC抗体的磁性微粒子，使其充分分散于溶液中，通过免疫反应即可将免疫复合物偶联富集到磁性微粒子表面，在试管底部施加磁场后即可将偶联有免疫复合物的磁性粒子富集于试管底部，加入发光底物，用管式发光仪测定发光强度，样品的发光强度与样品中抗原含量成正相关，与标准曲线比较即可得出相应的抗原含量。
本发明的检测糖类抗原的磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒主要采用直接夹心法定性或定量检测人血清、血浆等样品中糖类抗原的含量；对样品的前处理要求低，前处理过程简单，能快速、高通量检测大批样品；采用了高特异的糖类抗原单克隆抗体和超顺磁、高分散、比表面积大的磁性微粒子，主要试剂以工作液的形式提供，检验方法方便易行，具有特异性高、灵敏度高、精确度高、准确度高等特点。本发明的磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒，结构简单、使用方便、价格便宜、携带便利，与市场上的酶联免疫试剂盒、板式化学发光试剂盒相比，线性范围宽，有效避免弯钩效应，不需样品稀释，适用于大批量样品筛选的定性、定量。
附图说明
图1是以磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒检测CA50的标准曲线(双对数曲线)
图2是以磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒检测CA125的标准曲线(双对数曲线)
具体实施方式
下述实施例的方法如无特别说明，均为常规方法。
下述实施例中的百分含量，如无特别说明，均为质量百分含量。
实施例1、检测CA50的磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒的制备及其检测方法。
检测CA50的磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒包括：
(1)包被有抗FITC抗体的磁性微粒子：粒径为2-3μm、使用浓度为5-10mg/mL，20mL/瓶，1瓶；
(2)标记FITC的CA50单克隆抗体(捕获抗体)及标记酶的CA50单克隆抗体(配对抗体)混合作为标记物液：为体积比为1∶1的FITC标记捕获抗体工作液和酶标记配对抗体工作液混合而成，15mL/瓶，1瓶。其中FITC标记抗体液以20％小牛血清稀释为1.25μg/mL，标记碱性磷酸酶的酶工作液所用的稀释液为含有0.05％甘油、0.2g/L的硫柳汞防腐剂溶液(可防止放入-20℃的酶标记物冻结，并保持酶标记物的生物活性)并稀释为1/2000；
(3)CA50标准品溶液：用50％马血清将CA50浓标准品稀释成标准溶液6瓶，0U/mL，20U/mL，40U/mL，80U/mL，140U/mL，300U/mL，0.5mL/瓶；
(4)发光底物液：AMPPD缓冲液，6mL/瓶，1瓶；
(5)浓缩洗涤液：pH值为7.4，含有0.1-0.5％吐温-20，0.1％叠氮化钠防腐剂的磷酸盐缓冲液。30mL/瓶，1瓶。使用时用蒸馏水稀释20倍；
(6)反应试管：所用的反应管材料为透明聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、玻璃等，铝膜真空封装，100支/包，1包。
其中，抗FITC抗体与磁性微粒子偶联物、FITC标记的CA50单克隆抗体、碱性磷酸酶标记的CA50单克隆抗体的制备方法如下：
一、抗FITC抗体与磁性微粒子偶联物的制备
1、抗FITC抗体与磁性微粒子偶联物的制备原理：磁性微粒子是内核为Fe3O4、表面包裹了带有活性基团氨基的聚合物，可采用戊二醛两步法将磁性微粒子与抗FITC抗体进行偶联。如此合成的包被有抗FITC抗体的颗粒，不仅有效包被量增加，而且在微观空间具有“长臂”，从而减少空间位阻，使得抗体IgG对抗原的识别域充分展开，有利于抗体-抗原的空间匹配与非共价结合。
2、抗FITC抗体与磁性微粒子偶联物的制备方法：将粒径为2-3μm的磁性微粒子用戊二醛进行活化，室温搅拌，混匀3小时后，加磁场，静置10-15min，倒出上清，用pH值为7.4的0.01mol/L磷酸盐缓冲液清洗三次，并用该溶液进行悬浮，浓度为50-100mg/mL；每毫升悬浮液中加入抗FITC抗体20-80μg，在4℃下搅拌过夜后，加磁场，静置10-15min，倒出上清，用含有0.5％牛血清白蛋白、1％酪蛋白的pH为7.2，0.02mol/L的磷酸缓冲液于室温封闭3-4小时；最后用pH值为7.4、含0.5％BSA的0.02mol/LTris-HCl缓冲液清洗三次，并用该溶液配制成5-10mg/mL的工作液。磁性微粒子分离剂在4℃保存，不应冻存，用时轻轻摇匀。
二、FITC标记的CA50单克隆抗体的制备
1、FITC标记的CA50单克隆抗体的制备原理：FITC分子与糖类抗原单克隆抗体的偶联物是以常见的碱性液标记法对抗体进行标记。
2、FITC标记的CA50单克隆抗体的制备方法：
(1)A液：取CA50单克隆抗体0.5mg置于50mmol/L pH值为9.3的Na2CO3-NaHCO3缓冲液中；
(2)B液：取FITC2 mg溶于1mL 50mmol/L pH值为9.3的Na2CO3-NaHCO3缓冲液中；
(3)将A液置于磁力搅拌器，取B液缓缓滴加至A液中，约在5-8分钟间加完，防止出现气泡，然后置4℃搅拌12～16小时；
(4)将反应液装透析袋，置10mmol/L pH值为7.4的磷酸缓冲液中透析2天，每天更换透析液2次；
(5)将标记物以20％小牛血清稀释为1.25μg/mL，加入适量proclin300，分装，-20℃下保存。
三、碱性磷酸酶标记的CA50单克隆抗体的制备
1、碱性磷酸酶标记的CA50单克隆抗体的制备原理：可采用现有技术中的多种方法如戊二醛法或过碘酸钠法将酶交联在抗体上，优选戊二醛法；
2、碱性磷酸酶标记的CA50单克隆抗体的制备方法：
(1)取碱性磷酸酶20mg溶于1.5％戊二醛溶液中，室温静置过夜；
(2)反应后的酶溶液经Sephadex G-2 5层析柱，用生理盐水洗脱，流速控制1.2mL/min，并收集棕色流出液。放置于25mL烧杯中，电磁搅拌；
(3)取CA50单克隆抗体2.5mg，以0.1mol/L pH值为7.4的磷酸盐缓冲液稀释至5mL，搅拌下逐滴加入酶溶液中；
(4)加入0.2mol/L赖氨酸0.2mL，混匀，置室温2-3小时；
(5)反应液装入透析袋，以0.1mol/L pH值为7.4的磷酸盐缓冲液透析24小时后，以含有0.05％甘油、0.2g/L的硫柳汞防腐剂溶液1∶2000稀释，分装，冰冻保存。
利用该试剂盒检测样品中CA50含量的方法如下：
一、样品前处理
对人血清血浆：取空腹晨血样本，3000rpm离心5min，取上层液25μL进行分析。待测样品2-8℃存放不得超过48小时，若48小时未检测，应于-20℃以下保存，但不应超过30天。
二、检测方法
向试管中加入25μL血清样品或同体积的系列标准品溶液，再加入标记物混合液50μL，37℃恒温振荡反应30min。加入磁性微粒子溶液50μL，37℃恒温振荡反应5min后，将试管架置于磁分离器上分离5min，然后倒转分离器倒出上清液，将倒转的试管放在滤纸上，拍击分离器以除去挂壁液体。每管加入洗涤液500μL，用圆周运动使其充分混匀，置于磁分离器上分离5min，然后倒转分离器倒出上清液，将倒转的试管放在滤纸上，拍击分离器以除去挂壁液体，重复3次。加入发光底物300μL，圆周运动使其充分混匀，暗处放置2min后置于磁分离器，待磁颗粒富集于底部后，将试管置于管式发光仪测定。
三、结果分析
发光计数-剂量反应曲线以双对数曲线表示，即所获得的每个浓度标准溶液或样本发光值的平均值(B)减去第一个零标准点的发光值(B0)，再取对数，即
纵轴(Y轴)＝log(B-B0)
以CA50浓度的自然对数值为横轴(X轴)，绘制标准曲线，如图1所示。相应每一个样品中CA50浓度可以从标准曲线上读出。也可以用多参数回归方程法进行拟合，计算出样本溶液中CA50的浓度。由于市场上大多数化学发光板式试剂盒的线性范围在0-150U/mL之间，而本试剂盒提供的线性范围大大增加(0-300U/mL)，所以避免了高浓度样品的稀释，弯钩效应也可以得到避免。使用本试剂盒的整个检测过程只需1.5个小时就可以完成，最低检测限为1.0U/mL。
实施例2、检测CA125的磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒的制备及其检测方法。
检测CA125的磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒包括：
(1)包被有抗FITC抗体的磁性微粒子：粒径为2-3μm、使用浓度为5-10mg/mL，20mL/瓶，1瓶；
(2)标记FITC的CA125单克隆抗体(捕获抗体)及标记酶的CA125单克隆抗体(配对抗体)混合作为标记物液：为体积比为1∶2的FITC标记捕获抗体工作液和酶标记配对抗体工作液混合而成，15mL/瓶，1瓶。其中FITC标记抗体液以20％小牛血清稀释为1.25μg/mL，标记辣根过氧化物酶的酶工作液所用的稀释液为含有0.05％甘油、0.2g/L的硫柳汞防腐剂溶液(可防止放入-20℃的酶标记物冻结，并保持酶标记物的生物活性)并稀释为1/1500；
(3)CA125标准品溶液：用50％马血清将CA125浓标准品稀释成标准溶液6瓶，0U/mL，50U/mL，100U/mL，200U/mL，500U/mL，1000U/mL，0.5mL/瓶；
(4)发光底物液：A液：过氧化氢溶液，7mL/瓶，1瓶；B液：鲁米诺溶液，7mL/瓶，1瓶。使用时体积比为1∶1混合。
(5)浓缩洗涤液：pH值为7.4，含有0.1-0.5％吐温-20，0.1％叠氮化钠防腐剂的磷酸盐缓冲液。30mL/瓶，1瓶。使用时用蒸馏水稀释20倍；
(6)反应试管：所用的反应管材料为透明聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、玻璃等，铝膜真空封装，100支/包，1包。
其中，抗FITC抗体与磁性微粒子偶联物、FITC标记的CA125单克隆抗体、碱性磷酸酶标记的CA125单克隆抗体的制备方法如下：
一、抗FITC抗体与磁性微粒子偶联物的制备
1、抗FITC抗体与磁性微粒子偶联物的制备原理：磁性微粒子是内核为Fe3O4、表面包裹了带有活性基团氨基的聚合物，可采用戊二醛两步法将磁性微粒子与抗FITC抗体进行偶联。
2、抗FITC抗体与磁性微粒子偶联物的制备方法：将粒径为2-3μm的磁性微粒子用戊二醛进行活化，室温搅拌，混匀3小时后，加磁场，静置10-15min，倒出上清，用pH值为7.4的0.01mol/L磷酸盐缓冲液清洗三次，并用该溶液进行悬浮，浓度为50-100mg/mL；每毫升悬浮液中加入抗FITC抗体20-80μg，在4℃下搅拌过夜后，加磁场，静置10-15min，倒出上清，用含有0.5％牛血清白蛋白、1％酪蛋白的pH为7.2，0.02mol/L的磷酸缓冲液于室温封闭3-4小时；最后用pH值为7.4、含0.5％BSA的0.02mol/LTris-HCl缓冲液清洗三次，并用该溶液配制成5-10mg/mL的工作液。磁性微粒子分离剂在4℃保存，不应冻存，用时轻轻摇匀。
二、FITC标记的CA125单克隆抗体的制备
1、FITC标记的CA125单克隆抗体的制备原理：FITC分子与糖类抗原单克隆抗体的偶联物是以常见的碱性液标记法对抗体进行标记。
2、FITC标记的CA125单克隆抗体的制备方法：
(1)A液：取CA50单克隆抗体0.5mg置于50mmol/L pH值为9.3的Na2CO3-NaHCO3缓冲液中；
(2)B液：取FITC2 mg溶于1mL 50mmol/L pH值为9.3的Na2CO3-NaHCO3缓冲液中；
(3)将A液置于磁力搅拌器，取B液缓缓滴加至A液中，约在5-8分钟间加完，防止出现气泡，然后置4℃搅拌12～16小时；
(4)将反应液装透析袋，置10mmol/L pH值为7.4的磷酸缓冲液中透析2天，每天更换透析液2次；
(5)将标记物以20％小牛血清稀释为1.25μg/mL，加入适量proclin300，分装，-20℃下保存。
三、辣根过氧化物酶的酶标记的CA125单克隆抗体的制备
1、辣根过氧化物酶标记CA125单克隆抗体的制备原理：使用过碘酸盐氧化法。过碘酸钠将辣根过氧化物酶分子表面的多糖氧化为醛基，醛基与抗体分子上的氨基形成Schiff碱而结合。后者可进一步用NaBH4(或乙醇胺)还原生成稳定的酶标记抗体。
2、辣根过氧化物酶的酶标记CA125单克隆抗体的制备方法：
(1)8-10mg辣根过氧化物酶放入1mL玻璃瓶，加入1mlL二次蒸馏水溶解，液体呈棕色；
(2)电磁搅拌下逐滴缓慢加入新配制的NaIO4 0.2mL，室温下继续搅拌30-40min，液体呈绿色；
(3)将反应液对在4℃下对1mmol/L、pH值为4.4的醋酸钠缓冲液透析过夜，中间换液3～5次，每次300mL，溶液呈浅棕色；
(4)将1mg CA125单克隆抗体溶于2mLDMF，并以0.2mol/L Na2CO3缓冲液稀释至4mL；
(5)将透析好的辣根过氧化物酶溶液装入玻璃瓶，加入0.2mol/LNa2CO3溶液将pH值调整至9.0-10.0，混匀后立即加入抗体溶液，边加边电磁搅拌；持续搅拌3-5小时；
(6)向反应液中加入新配制的NaBH4溶液100～200μL，4℃放置2小时。
(7)反应液装入透析袋，以0.1mol/L pH值为7.4的磷酸盐缓冲液透析24小时后，换液4次。以含有0.05％甘油、0.2g/L的硫柳汞防腐剂溶液1∶2000稀释，分装，冰冻保存。
利用该试剂盒检测样品中CA125含量的方法如下：
一、样品前处理
对人血清血浆：取空腹晨血样本，3000rpm离心5min，取上层液25μL进行分析。待测样品2-8℃存放不得超过48小时，若48小时未检测，应于-20℃以下保存，但不应超过30天。
二、检测方法
向试管中加入25μL血清样品或同体积的系列标准品溶液，再加入标记物混合液50μL，37℃恒温振荡反应30min。加入磁性微粒子溶液50μL，37℃恒温振荡反应5min后，将试管架置于磁分离器上分离5min，然后倒转分离器倒出上清液，将倒转的试管放在滤纸上，拍击分离器以除去挂壁液体。每管加入洗涤液500μL，用圆周运动使其充分混匀，置于磁分离器上分离5min，然后倒转分离器倒出上清液，将倒转的试管放在滤纸上，拍击分离器以除去挂壁液体，重复3次。加入发光底物300μL，圆周运动使其充分混匀，暗处放置2min后置于磁分离器，待磁颗粒富集于底部后，将试管置于管式发光仪测定。
三、结果分析
发光计数-剂量反应曲线以双对数曲线表示，即所获得的每个浓度标准溶液或样本发光值的平均值(B)减去第一个零标准点的发光值(B0)，再取对数，即
纵轴(Y轴)＝log(B-B0)
以CA125浓度的自然对数值为横轴(X轴)，绘制标准曲线，如图2所示。相应每一个样品中CA125浓度可以从标准曲线上读出。也可以用多参数回归方程法进行拟合，计算出样本溶液中CA125的浓度。由于市场上大多数化学发光板式试剂盒的线性范围在0-500U/mL之间，而本试剂盒提供的线性范围大大增加(0-1000U/mL)，所以避免了高浓度样品的稀释，弯钩效应也可以得到避免。使用本试剂盒的整个检测过程只需1.5个小时就可以完成，最低检测限为1.0U/mL。
实施例3、试剂盒精密度、准确度和稳定性实验
1、试剂盒精密度测定
(1)标准品精密度实验
将实施例1和实施例2中制备的试剂盒分别取三批进行精密度实验，每批抽取10个试剂盒。以实施例1中所抽取的试剂盒测定40U/mL的CA50标准品5次，以实施例2中所抽取的试剂盒测定100U/mL的CA125标准品5次。计算测定浓度的变异系数。实施例1中的三批试剂盒的测定结果如表1所示，结果表明变异系数在之4.0％-8.2％之间。
表1 CA50标准可重复性实验
实施例2中的三批试剂盒的测定结果如表2所示，结果表明变异系数在5.8％-8.8％之间。
表2 CA125标准可重复性实验
(2)样本可重复性实验
取两份正常人血清，分别添加CA50和CA125标准品至40U/mL和100U/mL。取实施例1和实施例2中三个不同批次的试剂盒各3个，对样品重复测定5次，分别计算变异系数。测定结果如表3、表4所示，表明本发明所制备的CA50磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒测定血清样本的变异系数小于8.6％，CA125磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒测定血清样本的变异系数小于5.0％。
表3 CA50血清样品可重复性实验
表4 CA125血清样品可重复性实验
2、试剂盒准确度测定
取两个CA50临床定值血清，浓度分别为42.56U/mL和83.54U/mL，分别向其中加入CA50的标准品溶液20U/mL、40U/mL和80U/mL，按照实施例1的方法对每个浓度做3个平行，计算回收率。结果如表5所示，表明CA50的添加回收率在82.4％-112％之间。
取两个CA125临床定值血清，浓度分别为27.78U/mL和93.58U/mL，分别向其中加入CA125的标准品溶液50U/mL、100U/mL和200U/mL，按照实施例2的方法对每个浓度做3个平行，计算回收率。结果如表6所示，表明CA125的添加回收率在98.1％-106％之间。
表5实施例1的试剂盒的回收率
表6实施例2的试剂盒的回收率
3、试剂盒稳定性实验
对实施例1和实施例2的试剂盒分别进行37℃5天和7天加速实验后，测定试剂盒的最大、最低发光强度、待测物的加标回收率，表明实施例1和实施例2的试剂盒指标均在正常范围之内。对实施例1和实施例2的试剂盒主要组分：标记物工作液、标准品、发光底物液、磁性微粒子工作液进行2-8℃8个月跟踪实验，结果表明各项指标完全符合要求。考虑到试剂盒冷冻情况的发生，将实施例1和实施例2的试剂盒放入-20℃冷冻7天，测定结果也表明试剂盒的各项指标完全正常。从以上结果可以看出试剂盒可以在2-8℃至少可以保存6个月以上。
Claims (19)
1、一种用于检测糖类抗原的磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒，其特征在于：包括包被有抗FITC抗体的磁性微粒子；标记FITC的糖类抗原单克隆抗体及标记酶的糖类抗原单克隆抗体混合作为标记物液；糖类抗原标准品溶液；浓缩洗涤液；发光底物液。
2、根据权利要求1所述的磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒，其特征在于：所述糖类抗原选自CA72-4、CA50、CA19-9、CA242、CA15-3、CA27-29或CA125。
3、根据权利要求1所述的磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒，其特征在于：所述FITC标记单克隆抗体和酶标记单克隆抗体都是待检糖类抗原的特异性单克隆抗体。
4、根据权利要求1所述的磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒，其特征在于：待检糖类抗原是CA50，所用FITC标记抗体和酶标记抗体均为CA50的特异性单克隆抗体。
5、根据权利要求1所述的磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒，其特征在于：待检糖类抗原是CA125，所用FITC标记抗体和酶标记抗体均为CA125的特异性单克隆抗体。
6、根据权利要求1所述的磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒，其特征在于：所述包被磁性微粒子的抗FITC抗体可为多克隆抗体或单克隆抗体。
7、根据权利要求1-6中任一项所述的磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒，其特征在于：所述包被抗FITC抗体的磁性微粒子为粒径为2-3μm、内核为四氧化三铁(Fe3O4)、表面包裹带有活性基团如氨基(NH2-)、羧基(-COOH)的聚合物，其使用浓度为5-10mg/mL。
8、根据权利要求1-6中任一项所述的磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒，其特征在于：所述抗FITC抗体的包被是通过戊二醛两步法将磁性微粒子与抗FITC抗体进行偶联，使用的封闭液为含有0.5％牛血清白蛋白、1％酪蛋白、pH值为7.2的0.02mol/L磷酸缓冲液。
9、根据权利要求1-6中任一项所述的磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒，其特征在于：所述FITC分子与糖类抗原单克隆抗体的偶联物是以碱性液标记法对抗体进行标记，FITC标记物形式可为冻干粉、浓缩液和工作液；所述存放FITC标记抗体液的溶液为20％小牛血清。
10、根据权利要求1-6中任一项所述的磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒，其特征在于：所述酶标记抗体的标记酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶；酶标记物形式可为冻干粉、浓缩液和工作液；所述酶标记物工作液所用的稀释液为含有0.05％甘油、0.2g/L的硫柳汞防腐剂溶液。
11、根据权利要求10所述的磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒，其特征在于：标记酶为碱性磷酸酶，标记方法优选为戊二醛法。
12、根据权利要求10所述的磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒，其特征在于：标记酶为辣根过氧化物酶，标记方法优选为过碘酸钠法。
13、根据权利要求1-6中任一项所述的磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒，其特征在于：所述混合标记物液为体积比为1∶1-1∶3的FITC标记捕获抗体工作液和酶标记配对抗体工作液混合而成。
14、根据权利要求1-6中任一项所述的磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒，其特征在于：所述标准品溶液为6个浓度梯度含有糖类抗原的溶液；所述配制标准品的基质为50％马血清；所述构成标准品的糖类抗原包括：CA72-4、CA50、CA19-9、CA242、CA15-3、CA27-29和CA125。
15、根据权利要求1-6中任一项所述的磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒，其特征在于：所述浓缩洗涤液为pH值为7.4，含有0.1-0.5％吐温-20，0.1％叠氮化钠防腐剂的磷酸盐缓冲液。
16、根据权利要求1所述的磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒，其特征在于：所述标记酶为辣根过氧化物酶，发光底物液由A液和B液构成，发光底物液A液为过氧化氢溶液，发光底物液B液为鲁米诺溶液。
17、根据权利要求1所述的磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒，其特征在于：所述当标记酶为碱性磷酸酶，所述发光底物液为3-(2’-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3”-羟基)苯-1，2-二氧杂环丁烷磷酸钠(4-methoxy-4-(3-phosphatephenyl)-spiro-(1，2-dioxetane-3，2′-adamantane，AMPPD)缓冲液。
18、根据权利要求1所述的磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒，其特征在于：还包括使用的反应管，反应管材料可为透明聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、玻璃。
19、一种检测糖类抗原的磁性微粒子化学发光酶免疫分析方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)样品前处理：
对临床血清血浆，3000rpm离心5分钟，取上层液即可进行分析测定；
(2)利用权利要求1-18中任一所述的检测糖类抗原的磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒检测样品。
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Cited By (32)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102288767A (zh) * | 2011-08-16 | 2011-12-21 | 内蒙古科慧生物科技有限责任公司 | 糖类抗原72-4(ca72-4)定量测定试剂盒及其检测方法 |
| CN102288766A (zh) * | 2011-08-16 | 2011-12-21 | 内蒙古科慧生物科技有限责任公司 | 糖类抗原15-3(ca15-3)定量测定试剂盒及其检测方法 |
| CN102435736A (zh) * | 2011-11-29 | 2012-05-02 | 桂林理工大学 | 用电化学发光免疫传感器测定卵巢癌胚抗原的方法 |
| CN102435739A (zh) * | 2011-08-31 | 2012-05-02 | 内蒙古科慧生物科技有限责任公司 | 糖类抗原242(ca242)定量测定试剂盒及其检测方法 |
| CN102565402A (zh) * | 2010-12-16 | 2012-07-11 | 北京勤邦生物技术有限公司 | 检测呋喃唑酮代谢物的磁颗粒化学发光试剂盒及其应用 |
| CN102565032A (zh) * | 2010-12-15 | 2012-07-11 | 北京勤邦生物技术有限公司 | 检测呋喃妥因代谢物的磁颗粒化学发光试剂盒及其应用 |
| CN102617816A (zh) * | 2012-01-14 | 2012-08-01 | 北京化工大学 | 一种含有取代乙炔聚合物手性磁性微球的制备方法 |
| CN102901812A (zh) * | 2012-11-13 | 2013-01-30 | 江阴泽成生物技术有限公司 | 一种人甲状腺球蛋白抗体（TGAb）的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其检测方法 |
| CN102901820A (zh) * | 2012-09-29 | 2013-01-30 | 江阴泽成生物技术有限公司 | 一种人肿瘤标志物糖类抗原50（ca50）的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其检测方法 |
| CN102914645A (zh) * | 2012-11-12 | 2013-02-06 | 武汉伊艾博科技有限公司 | 用于免疫吸附反应过程中抗体在固相载体上固定的方法 |
| CN103018445A (zh) * | 2012-11-20 | 2013-04-03 | 博奥赛斯（天津）生物科技有限公司 | 糖类抗原50磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法 |
| CN103033623A (zh) * | 2012-12-10 | 2013-04-10 | 天津市协和医药科技集团有限公司 | 人m2型丙酮酸激酶化学发光免疫分析试剂盒及制备方法 |
| CN103048461A (zh) * | 2012-12-18 | 2013-04-17 | 苏州浩欧博生物医药有限公司 | 一种癌抗原ca15-3的纳米磁微粒化学发光测定试剂盒及其制备方法和检测方法 |
| CN103048452A (zh) * | 2012-12-18 | 2013-04-17 | 苏州浩欧博生物医药有限公司 | 一种肿瘤相关抗原ca125的纳米磁微粒化学发光测定试剂盒及其制备方法和检测方法 |
| CN103048453A (zh) * | 2012-12-18 | 2013-04-17 | 苏州浩欧博生物医药有限公司 | 一种糖类抗原ca19-9的纳米磁微粒化学发光测定试剂盒及其制备方法和检测方法 |
| CN103194430A (zh) * | 2013-04-10 | 2013-07-10 | 深圳市菲鹏生物股份有限公司 | 可分泌抗ca125蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞及应用 |
| CN103293313A (zh) * | 2012-02-24 | 2013-09-11 | 上海新波生物技术有限公司 | 糖类抗原15-3时间分辨免疫荧光分析法及试剂盒 |
| CN103592445A (zh) * | 2013-10-16 | 2014-02-19 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 检测降钙素原的试剂盒 |
| CN103789271A (zh) * | 2014-01-26 | 2014-05-14 | 东北林业大学 | 抗ca242单克隆抗体产生的杂交瘤及化学发光免疫分析试剂盒的制备 |
| CN104297492A (zh) * | 2014-10-23 | 2015-01-21 | 沈鹤霄 | 一种基于循环酶法的标记方法及其应用 |
| CN104330577A (zh) * | 2014-11-17 | 2015-02-04 | 南方医科大学南方医院 | 一种c反应蛋白定量测定试剂盒及其制备方法 |
| CN104698184A (zh) * | 2015-02-10 | 2015-06-10 | 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 | 检测糖类抗原的试剂盒及其检测方法和应用 |
| CN104704373A (zh) * | 2012-08-13 | 2015-06-10 | 皇家飞利浦有限公司 | 抗氧化剂在用于血液样品中靶分子检测的方法和装置中的用途 |
| CN104807997A (zh) * | 2015-05-05 | 2015-07-29 | 南京格耀生物科技有限公司 | 一种基于化学发光法检测ca125和sp17含量的试剂盒及方法和应用 |
| CN105353138A (zh) * | 2015-12-17 | 2016-02-24 | 艾康生物技术(杭州)有限公司 | 提高免疫检测准确性和线性范围的方法及试剂 |
| WO2017008179A1 (zh) * | 2015-07-06 | 2017-01-19 | 山东博科生物产业有限公司 | 一种高通量联合检测丙肝病毒抗原抗体的试剂 |
| CN108152484A (zh) * | 2017-12-07 | 2018-06-12 | 珠海霍普金斯医药研究院股份有限公司 | 一种pd-l1的化学发光磁珠酶联免疫法快速定量检测试剂盒 |
| CN110297094A (zh) * | 2019-07-01 | 2019-10-01 | 北京大学第一医院 | 检测afamin浓度的试剂盒、制备方法及测定afamin浓度的方法 |
| CN110297091A (zh) * | 2019-07-17 | 2019-10-01 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | 一种***O、A、AsiaⅠ型抗体多重管式化学发光检测试剂盒 |
| CN111289759A (zh) * | 2020-03-10 | 2020-06-16 | 苏州翊讯生物科技有限公司 | Saa检测试剂盒及saa定量检测的方法 |
| CN111505302A (zh) * | 2019-01-31 | 2020-08-07 | 博阳生物科技（上海）有限公司 | 快速检测n末端b型脑钠肽的均相免疫试剂盒、制备方法、检测方法和装置 |
| CN112585445A (zh) * | 2018-08-24 | 2021-03-30 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 血样分析仪、血样分析方法及计算机存储介质 |
-
2007
- 2007-06-13 CN CNA2007101188855A patent/CN101324579A/zh active Pending
Cited By (44)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102565032A (zh) * | 2010-12-15 | 2012-07-11 | 北京勤邦生物技术有限公司 | 检测呋喃妥因代谢物的磁颗粒化学发光试剂盒及其应用 |
| CN102565402A (zh) * | 2010-12-16 | 2012-07-11 | 北京勤邦生物技术有限公司 | 检测呋喃唑酮代谢物的磁颗粒化学发光试剂盒及其应用 |
| CN102288766B (zh) * | 2011-08-16 | 2013-10-09 | 内蒙古科慧生物科技有限责任公司 | 糖类抗原15-3(ca15-3)定量测定试剂盒及其检测方法 |
| CN102288766A (zh) * | 2011-08-16 | 2011-12-21 | 内蒙古科慧生物科技有限责任公司 | 糖类抗原15-3(ca15-3)定量测定试剂盒及其检测方法 |
| CN102288767A (zh) * | 2011-08-16 | 2011-12-21 | 内蒙古科慧生物科技有限责任公司 | 糖类抗原72-4(ca72-4)定量测定试剂盒及其检测方法 |
| CN102288767B (zh) * | 2011-08-16 | 2013-12-04 | 内蒙古科慧生物科技有限责任公司 | 糖类抗原72-4(ca72-4)定量测定试剂盒及其检测方法 |
| CN102435739A (zh) * | 2011-08-31 | 2012-05-02 | 内蒙古科慧生物科技有限责任公司 | 糖类抗原242(ca242)定量测定试剂盒及其检测方法 |
| CN102435736A (zh) * | 2011-11-29 | 2012-05-02 | 桂林理工大学 | 用电化学发光免疫传感器测定卵巢癌胚抗原的方法 |
| CN102617816A (zh) * | 2012-01-14 | 2012-08-01 | 北京化工大学 | 一种含有取代乙炔聚合物手性磁性微球的制备方法 |
| CN102617816B (zh) * | 2012-01-14 | 2013-07-03 | 北京化工大学 | 一种含有取代乙炔聚合物手性磁性微球的制备方法 |
| CN103293313A (zh) * | 2012-02-24 | 2013-09-11 | 上海新波生物技术有限公司 | 糖类抗原15-3时间分辨免疫荧光分析法及试剂盒 |
| CN104704373A (zh) * | 2012-08-13 | 2015-06-10 | 皇家飞利浦有限公司 | 抗氧化剂在用于血液样品中靶分子检测的方法和装置中的用途 |
| US10591472B2 (en) | 2012-08-13 | 2020-03-17 | Minicare B.V. | Use of antioxidants in methods and means for detection of target molecules in a blood sample |
| CN102901820A (zh) * | 2012-09-29 | 2013-01-30 | 江阴泽成生物技术有限公司 | 一种人肿瘤标志物糖类抗原50（ca50）的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其检测方法 |
| CN102914645A (zh) * | 2012-11-12 | 2013-02-06 | 武汉伊艾博科技有限公司 | 用于免疫吸附反应过程中抗体在固相载体上固定的方法 |
| CN102901812A (zh) * | 2012-11-13 | 2013-01-30 | 江阴泽成生物技术有限公司 | 一种人甲状腺球蛋白抗体（TGAb）的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其检测方法 |
| CN103018445B (zh) * | 2012-11-20 | 2015-09-02 | 博奥赛斯（天津）生物科技有限公司 | 糖类抗原50磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法 |
| CN103018445A (zh) * | 2012-11-20 | 2013-04-03 | 博奥赛斯（天津）生物科技有限公司 | 糖类抗原50磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法 |
| CN103033623A (zh) * | 2012-12-10 | 2013-04-10 | 天津市协和医药科技集团有限公司 | 人m2型丙酮酸激酶化学发光免疫分析试剂盒及制备方法 |
| CN103048453A (zh) * | 2012-12-18 | 2013-04-17 | 苏州浩欧博生物医药有限公司 | 一种糖类抗原ca19-9的纳米磁微粒化学发光测定试剂盒及其制备方法和检测方法 |
| CN103048452A (zh) * | 2012-12-18 | 2013-04-17 | 苏州浩欧博生物医药有限公司 | 一种肿瘤相关抗原ca125的纳米磁微粒化学发光测定试剂盒及其制备方法和检测方法 |
| CN103048461A (zh) * | 2012-12-18 | 2013-04-17 | 苏州浩欧博生物医药有限公司 | 一种癌抗原ca15-3的纳米磁微粒化学发光测定试剂盒及其制备方法和检测方法 |
| CN103048452B (zh) * | 2012-12-18 | 2015-04-15 | 苏州浩欧博生物医药有限公司 | 一种肿瘤相关抗原ca125的纳米磁微粒化学发光测定试剂盒及其制备方法和检测方法 |
| CN103048453B (zh) * | 2012-12-18 | 2014-11-26 | 苏州浩欧博生物医药有限公司 | 一种糖类抗原ca19-9的纳米磁微粒化学发光测定试剂盒及其制备方法和检测方法 |
| CN103194430B (zh) * | 2013-04-10 | 2014-10-15 | 深圳市菲鹏生物股份有限公司 | 可分泌抗ca125蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞及应用 |
| CN103194430A (zh) * | 2013-04-10 | 2013-07-10 | 深圳市菲鹏生物股份有限公司 | 可分泌抗ca125蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞及应用 |
| CN103592445A (zh) * | 2013-10-16 | 2014-02-19 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 检测降钙素原的试剂盒 |
| CN103789271A (zh) * | 2014-01-26 | 2014-05-14 | 东北林业大学 | 抗ca242单克隆抗体产生的杂交瘤及化学发光免疫分析试剂盒的制备 |
| CN104297492A (zh) * | 2014-10-23 | 2015-01-21 | 沈鹤霄 | 一种基于循环酶法的标记方法及其应用 |
| CN104330577B (zh) * | 2014-11-17 | 2016-05-18 | 南方医科大学南方医院 | 一种c反应蛋白定量测定试剂盒的制备方法 |
| CN104330577A (zh) * | 2014-11-17 | 2015-02-04 | 南方医科大学南方医院 | 一种c反应蛋白定量测定试剂盒及其制备方法 |
| CN104698184B (zh) * | 2015-02-10 | 2017-03-01 | 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 | 检测糖类抗原的试剂盒 |
| CN104698184A (zh) * | 2015-02-10 | 2015-06-10 | 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 | 检测糖类抗原的试剂盒及其检测方法和应用 |
| CN104807997A (zh) * | 2015-05-05 | 2015-07-29 | 南京格耀生物科技有限公司 | 一种基于化学发光法检测ca125和sp17含量的试剂盒及方法和应用 |
| WO2017008179A1 (zh) * | 2015-07-06 | 2017-01-19 | 山东博科生物产业有限公司 | 一种高通量联合检测丙肝病毒抗原抗体的试剂 |
| CN105353138A (zh) * | 2015-12-17 | 2016-02-24 | 艾康生物技术(杭州)有限公司 | 提高免疫检测准确性和线性范围的方法及试剂 |
| CN108152484A (zh) * | 2017-12-07 | 2018-06-12 | 珠海霍普金斯医药研究院股份有限公司 | 一种pd-l1的化学发光磁珠酶联免疫法快速定量检测试剂盒 |
| CN112585445A (zh) * | 2018-08-24 | 2021-03-30 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 血样分析仪、血样分析方法及计算机存储介质 |
| CN111505302A (zh) * | 2019-01-31 | 2020-08-07 | 博阳生物科技（上海）有限公司 | 快速检测n末端b型脑钠肽的均相免疫试剂盒、制备方法、检测方法和装置 |
| CN110297094A (zh) * | 2019-07-01 | 2019-10-01 | 北京大学第一医院 | 检测afamin浓度的试剂盒、制备方法及测定afamin浓度的方法 |
| CN110297091A (zh) * | 2019-07-17 | 2019-10-01 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | 一种***O、A、AsiaⅠ型抗体多重管式化学发光检测试剂盒 |
| CN110297091B (zh) * | 2019-07-17 | 2020-12-01 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | 一种***O、A、AsiaⅠ型抗体多重管式化学发光检测试剂盒 |
| CN111289759A (zh) * | 2020-03-10 | 2020-06-16 | 苏州翊讯生物科技有限公司 | Saa检测试剂盒及saa定量检测的方法 |
| CN111289759B (zh) * | 2020-03-10 | 2023-10-27 | 苏州翊讯生物科技有限公司 | Saa检测试剂盒及saa定量检测的方法 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20081217 |