CN101320040A - 妇科多项目干化学联合检测试纸条及测定方法 - Google Patents
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Abstract
一种用于妇科多项目干化学联合检测试纸条，包括干化学多项目检测试条和样本稀释液；干化学检测试条由塑料基体条和固化后的各种试剂块构成；干化学试剂块包括pH测试试剂块、乳酸试剂块，过氧化氢浓度试剂块、白细胞酯酶浓度试剂块、唾液酸苷酶活性试剂块、胺试验试剂块，脯氨酸氨基肽酶底物试剂块，氧化酶底物试剂块，N－乙酰氨基己糖酶底物试剂块，滴虫特异性水解蛋白酶底物试剂块之中的至少任意三块或三块以上的任意项目增加，减少的组合。本发明使用的妇科多项目干化学联合检测试纸条可以同时测定白带样品中的pH、乳酸，过氧化氢、白细胞酯酶、唾液酸苷酶、胺试验，脯氨酸氨基肽酶，氧化酶，N－乙酰氨基己糖酶，滴虫特异性水解蛋白酶，可以准确的反映妇女生殖道微生物环境和白带分泌物的清洁度，白色念珠菌，滴虫，***，细菌性***病的致病菌状况、使得妇科白带检测更全面，操作简便、快速。若配合妇科干化学分析仪读取则会更方便快捷。
Description
技术领域
本发明涉及的是一种用于体外测定妇***道分泌物中多项化学成分的试纸条以及测定方法，用于准确判断细菌性***病(Bactarial Vaginosis)，白色念珠菌(Candidaalbicans)，滴虫(Trichomoniasis)，***(gonorrhoeae)，和生殖道环境的损害程度(Degree Of Clean)，属于体外诊断试剂技术领域。
技术背景
细菌性***病(Bactarial Vaginosis简称BV)是一种在细菌学上表现为***正常菌群数量明显减少，代之以一组厌氧菌群(类杆菌属、莫比亚厌氧菌属、加德纳杆菌、消化链球菌属以及人类支原体属等)数量明显增加，***分泌物中的乳酸减少，H2O2减少，PH增高使***环境发生明显变化而导致临床征候群。
细菌性***病对妇女及妊娠可产生极大的危害性，因此对其的准确诊断及其***环境的损害程度的判断具有十分重要的意义。临床诊断的标准是Amsel金标准：(1)PH＞4.5。(2)***分泌物增多，变稀有异味。(3)胺试验阳性。(4)***分泌物中检出线索细胞＞20％。近年来科学证明唾液酸苷酶是细菌性***病的特异性酶之一，利用该酶独特的催化机理，使用合适的显色底物形成快速准确的显色反应，进而可以准确的对细菌性***病进行诊断，结合PH、过氧化氢、白细胞酯酶、胺试验，脯氨酸氨基肽酶检测结果可以综合判断出细菌性***病及其损害程度。
白色念珠菌(Candida albicans)和滴虫(Trichomoniasis)是妇女常见的疾病，淋病(gonorrhoeae)是最常见的性病之一，现有的方法中均是单一测定的项目居多，检验工作相对繁琐，不利于推广。
发明内容
本发明的目的在于提供一种多项目联合测试并可用于仪器自动化分析的妇科多项目干化学联合检测试纸条及测定方法。利用本发明所述的试纸条，由此测出的结果可以准确判断出细菌性***病(Bactarial Vaginosis)，白色念珠菌(Candida albicans)，滴虫(Trichomoniasis)，***(gonorrhoeae)，和生殖道环境的损害程度(Degree OfClean)；可以有效的评估出受检者的生殖道环境，清洁度和细菌性***病，白色念珠菌，滴虫，***的致病菌状况。
本发明的发明目的是通过如下技术方案来完成的，本发明所述的妇科白带多项目干化学联合检测试纸条，它由细长形的塑料基体条和各种试剂固化在纤维素滤纸，玻璃纤维滤纸、层析纸、聚酯膜或尼龙膜后的试剂块采用水平覆盖或内置嵌入方法构成干化学测试条；塑料基体条由透明或不透明塑料材料构成，通过白带标本与各种化学试剂块的反应产生颜色的变化，从试纸条上面和下面检测到颜色的变化而判断结果。
所述的化学测试条是由试剂固化过的干化学试剂块粘贴于由PET、PVC、PE、PP或PS片材构成的塑料基体条上组成，干化学试剂块包括PH测试试剂块、乳酸试剂块，过氧化氢浓度试剂块、白细胞酯酶浓度试剂块、唾液酸苷酶活性试剂块、胺试验试剂块，脯氨酸氨基肽酶底物试剂块，氧化酶试剂块，N-乙酰氨基己糖酶底物试剂块，滴虫特异性水解蛋白酶底物试剂块中的任意三个试剂块或三个以上的任意试剂块增加，减少的组合采用水平覆盖或内置嵌入方法构成。
所述的PH测试试剂块、乳酸试剂块，过氧化氢浓度试剂块、白细胞酯酶浓度试剂块、唾液酸苷酶活性试剂块、胺试验试剂块，脯氨酸氨基肽酶底物试剂块，氧化酶试剂块，N-乙酰氨基己糖酶底物试剂块，滴虫特异性水解蛋白酶底物的试剂块的基础材料为纤维素滤纸、玻璃纤维滤纸、层析纸、聚酯膜或尼龙膜；所述试剂块形状为正方形，圆形，三角形，距形，菱形，梯形，大小为：
长：1～20mm，优选：4～6mm；
宽：1～20mm，优选：4～6mm；
厚度：0.01～5mm，优选：0.1～5mm；
所述多项试剂块间距为：1mm～20mm，优选2～5mm；
所述的PH测试试剂块为将空白滤纸在由甲基橙和溴甲酚绿组成的溶液中浸泡后干燥处理，所述甲基橙在溶液中的浓度为10～500mg/L，所述溴甲酚绿在溶液中的浓度为10～300mg/L；
所述脯氨酸氨基肽酶底物试剂块的反应试剂为：将空白滤纸在L-脯氨酸-P-萘胺，L-脯氨酸-P-硝基苯及苯胺，浓度为：5-3000mg/L.的溶液中浸泡后干燥处理制备而成；
所述的氧化酶试剂块的反应试剂为：将空白滤纸在四甲基对苯二胺，其浓度为：0.1-50g/L.溶液中浸泡后干燥处理制备而成；
所述N-乙酰氨基己糖酶底物试剂块为将空白滤纸在5-溴-4氯-3吲哚基-N-乙酰-氨基葡萄糖苷，4-甲基伞形酮-N-氨基半乳糖苷，硝基苯-N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷，浓度为：0.1-20g/L的溶液中浸泡后干燥处理制备而成；
所述滴虫特异性水解蛋白酶底物试剂块为：将空白滤纸在ZRRR-MNA，ZVR-MNA，ZLR-MNA，ZRR-MNA，BLRR-AMC，BLKR-AMC，VLK-MNA，ZKKR-AMC，VLR-MNA，浓度为：0.1-30g/L溶液中浸泡后干燥处理制备而成；
所述过氧化氢浓度试剂块为将空白滤纸在过氧化物酶、S-485表面活性剂和TMB组成的酶溶液中浸泡后干燥处理，所述过氧化物酶在酶溶液中的浓度为1.0～3.0×105U/L，表面活性在酶溶液中的浓度为10～500mg/L，TMB在酶溶液中的浓度为20～1000mg/L；
所述白细胞酯酶浓度试剂块为将空白滤纸在5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸盐和海藻糖或蔗糖组成的溶液中浸泡后干燥处理，所述5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸盐在溶液中的浓度为45～1000mg/L，所述海藻糖或蔗糖在溶液中的浓度为200mg/L～10000mg/L；
所述唾液酸苷酶活性试剂块为将空白滤纸在5-溴-4-氯-3-吲哚神经氨酸盐、氯化硝基四氮唑蓝、ADA，ACES，PIPES，MOPSO，IMIDAZOLE，MES缓冲盐和海藻糖或蔗糖组成的PH在5.5～7.5溶液中浸泡后干燥处理，所述5-溴-4-氯-3-吲哚神经氨酸盐在溶液中的浓度为5～200mg/L，所述氯化硝基四氮唑蓝在溶液中的浓度为10～500mg/L，所述海藻糖或蔗糖在溶液中的浓度为200mg/L～10000mg/L，所述ADA，ACES，PIPES，MOPSO，IMIDAZOLE，MES任选其一的有机酸缓冲溶液中的浓度为50-300mg/L；
所述乳酸浓度试剂块为将空白滤纸在过氧化物酶、乳酸氧化酶、S-485表面活性剂、3、3′5、5′-四甲基联苯胺(TMB)组成的酶溶液中浸泡后干燥处理，所述过氧化物酶在酶溶液中的浓度为2.0～3.0×105U/L，乳酸氧化酶在溶液浓度为0.5～2.0×105U/L，所述表面活性在酶溶液中的浓度为50～500mg/L，TMB在酶溶液中的浓度为20～1000mg/L；
所述胺试验试剂块为将氢氧化钾溶液与空白滤纸浸泡后干燥处理后的试剂块A粘贴于溴甲酚绿和Triton X-100溶液浸泡后的干燥处理的试剂块B，其中A试剂块中氢氧化钾浓度为500～10000mg/L，B试剂块中溴甲酚绿浓度为100～500mg/L，TritonX-100浓度为100～1000mg/L。
一种使用上述妇科多项目干化学联合检测试纸条的测定方法，它将稀释后的样本滴加到各试剂块上，10-15分钟后根据颜色的变化判断结果，根据乳酸、过氧化氢(H2O2)和白细胞酯酶的半定量检测结果，判断***的理论清洁度计算等级(DOC)
(1) 乳酸 H2O2 白细胞酯酶 DOC
(2) +++ +++ -，± I
(3) ++ ++ + II
(4) + + ++ III
(5) -，± -，± +++ IV
根据各测试块结果：由PH＞4.5，胺试验阳性，脯氨酸氨基肽酶阳性和唾液酸苷酶阳性即可确诊BV，由N-乙酰氨基己糖酶底物试验阳性表明白色念珠菌的存在，由滴虫特异性水解蛋白酶底物试验的阳性表明滴虫的存在，由脯氨酸氨基肽酶和氧化酶同时阳性表明***的存在。
所述稀释后的样本采用的稀释液是：0.9％的NaCl、0.2％的表面活性剂和有机酸缓冲溶液混合配置而成；先用棉签从***后穹窿取分泌物第一管先直接涂在PH试剂块；再用棉签从***后穹窿取分泌物第二管加入300-500ul的稀释液稀释分泌物，让分泌物溶解到稀释液中制成稀释后的样本，并分别将稀释后的样本滴加到各试剂块上。
所述的各项试剂块的显色反应结果可以通过正向或反向目测比色与标准色卡的比较来判断结果，或通过专用妇科干化学分析仪测定。
本发明主要包括样品稀释液及细菌性***病，白色念珠菌，滴虫，***多项目联合检测试纸条；
所述样品稀释液为生理盐水和S-485表面活性剂和有机酸缓冲液组成的溶液；所述生理盐水在溶液中的质量百分比浓度为0.9％；所述表面活性剂在溶液中的质量百分比浓度为0.1～3.0％；
本发明使用的妇科干化学多项检测试纸条可以同时测定PH、乳酸，过氧化氢、白细胞酯酶、唾液酸苷酶、胺试验，脯氨酸氨基肽酶，氧化酶，N-乙酰氨基己糖酶，滴虫特异性水解蛋白酶，可以准确的反映妇女生殖道微生物环境和白带分泌物的清洁度，白色念珠菌，滴虫，***，细菌性***病的致病菌状况、使得妇科白带检测更全面，操作简便、快速。若配合妇科干化学分析仪读取则会更方便快捷。
附图说明
图1是本发明所述的一种试纸条的结构示意图。
图2是本发明所述的另一种试纸条的结构示意图。
图3是本发明所述的又一种试纸条的结构示意图。
图4是本发明所述的再一种试纸条的结构示意图。
图5是本发明所述的再一种试纸条的结构示意图。
图6是本发明所述的再一种试纸条的结构示意图。
具体实施方式
下面将结合附图及具体实施例对本发明作详细的介绍：本发明所述的妇科白带多项目干化学联合检测试纸条，它由细长形的塑料基体条和各种试剂固化在纤维素滤纸，玻璃纤维滤纸、层析纸、聚酯膜或尼龙膜后的试剂块采用水平覆盖或内置嵌入方法构成干化学测试条；塑料基体条由透明或不透明塑料材料构成，通过白带标本与各种化学试剂块的反应产生颜色的变化，从试纸条上面和下面检测到颜色的变化而判断结果。
所述的化学测试条是由试剂固化过的干化学试剂块粘贴于由PET、PVC、PE、PP或PS片材构成的塑料基体条上组成，干化学试剂块包括PH测试试剂块、乳酸试剂块，过氧化氢浓度试剂块、白细胞酯酶浓度试剂块、唾液酸苷酶活性试剂块、胺试验试剂块，脯氨酸氨基肽酶底物试剂块，氧化酶试剂块，N-乙酰氨基己糖酶底物试剂块，滴虫特异性水解蛋白酶底物试剂块中的任意三个试剂块或三个以上的任意试剂块增加，减少的组合采用水平覆盖或内置嵌入方法构成。
所述的PH测试试剂块、乳酸试剂块，过氧化氢浓度试剂块、白细胞酯酶浓度试剂块、唾液酸苷酶活性试剂块、胺试验试剂块，脯氨酸氨基肽酶底物试剂块，氧化酶试剂块，N-乙酰氨基己糖酶底物试剂块，滴虫特异性水解蛋白酶底物的试剂块的基础材料为纤维素滤纸、玻璃纤维滤纸、层析纸、聚酯膜或尼龙膜；所述试剂块形状为正方形，圆形，三角形，距形，菱形，梯形，大小为：
长：1～20mm，优选：4～6mm；
宽：1～20mm，优选：4～6mm；
厚度：0.01～5mm，优选：0.1～5mm；
所述多项试剂块间距为：1mm～20mm，优选2～5mm；
所述的PH测试试剂块为将空白滤纸在由甲基橙和溴甲酚绿组成的溶液中浸泡后干燥处理，所述甲基橙在溶液中的浓度为10～500mg/L，所述溴甲酚绿在溶液中的浓度为10～300mg/L；
所述脯氨酸氨基肽酶底物试剂块的反应试剂为：将空白滤纸在L-脯氨酸-P-硝基苯及苯胺，浓度为：5～3000mg/L.的溶液中浸泡后干燥处理制备而成；
所述的氧化酶试剂块的反应试剂为：将空白滤纸在四甲基对苯二胺，其浓度为：0.1～50g/L.溶液中浸泡后干燥处理制备而成；
所述N-乙酰氨基己糖酶底物试剂块为将空白滤纸在N-乙酰氨基己糖酶底物：5-溴-4氯-3吲哚基-N-乙酰-氨基葡萄糖苷，4-甲基伞形酮-N-氨基半乳糖苷，硝基苯-N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷，浓度为：0.1-20g/L的溶液中浸泡后干燥处理制备而成；
所述滴虫特异性水解蛋白酶底物试剂块为：将空白滤纸在滴虫特异性水解蛋白酶底物ZRRR-MNA，ZVR-MNA，ZLR-MNA，ZRR-MNA，BLRR-AMC，BLKR-AMC，VLK-MNA，ZKKR-AMC，VLR-MNA，浓度为：0.1-30g/L溶液中浸泡后干燥处理制备而成；
所述过氧化氢浓度试剂块为将空白滤纸在过氧化物酶、表面活性剂和TMB组成的酶溶液中浸泡后干燥处理，所述过氧化物酶在酶溶液中的浓度为1.0～3.0×105U/L，表面活性在酶溶液中的浓度为10～500mg/L，TMB在酶溶液中的浓度为20～1000mg/L；
所述白细胞酯酶浓度试剂块为将空白滤纸在5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸盐和蔗糖组成的溶液中浸泡后干燥处理，所述5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸盐在溶液中的浓度为45～1000mg/L，所述蔗糖在溶液中的浓度为200～10000mg/L；
所述唾液酸苷酶活性试剂块为将空白滤纸在5-溴-4-氯-3-吲哚神经氨酸盐、氯化硝基四氮唑蓝、，IMIDAZOLE缓冲盐和海藻糖组成的溶液中浸泡后干燥处理，所述5-溴-4-氯-3-吲哚神经氨酸盐在溶液中的浓度为5～200mg/L，所述氯化硝基四氮唑蓝在溶液中的浓度为10～500mg/L，所述海藻糖在溶液中的浓度为200～10000mg/L，所述有机酸IMIDAZOLE缓冲溶液中pH值为6.5，浓度为50～300mg/L；
所述乳酸浓度试剂块为将空白滤纸在过氧化物酶、乳酸氧化酶、S-485表面活性剂、3、3′5、5′-四甲基联苯胺(TMB)组成的酶溶液中浸泡后干燥处理，所述过氧化物酶在酶溶液中的浓度为2.0～3.0×105U/L，乳酸氧化酶在溶液浓度为0.5～2.0×105U/L，所述S-485表面活性在酶溶液中的浓度为50～500mg/L，TMB在酶溶液中的浓度为20～1000mg/L；
所述胺试验试剂块为将氢氧化钾溶液与空白滤纸浸泡后干燥处理后的试剂块A粘贴于溴甲酚绿和TritonX-100溶液浸泡后的干燥处理的试剂块B，其中A试剂块中氢氧化钾浓度为500～10000g/L，B试剂块中溴甲酚绿浓度为100～500mg/L，Triton X-100浓度为100～1000mg/L。
一种使用上述妇科多项目干化学联合检测试纸条的测定方法，它将稀释后的样本滴加到各试剂块上，10-15分钟后根据颜色的变化判断结果，根据乳酸、过氧化氢(H2O2)和白细胞酯酶的半定量检测结果，判断***的理论清洁度计算等级(DOC)
(1) 乳酸 H2O2 白细胞酯酶 DOC
(2) +++ +++ -，± I
(3) ++ ++ + II
(4) + + ++ III
(5) -，± -，± +++ IV
根据各测试块结果：由PH＞4.5，胺试验阳性，脯氨酸氨基肽酶阳性和唾液酸苷酶阳性即可确诊BV，由N-乙酰氨基己糖酶底物试验阳性表明白色念珠菌的存在，由滴虫特异性水解蛋白酶底物试验的阳性表明滴虫的存在，由脯氨酸氨基肽酶和氧化酶同时阳性表明***的存在。
所述稀释后的样本采用的稀释液是：0.9％的NaCl、0.2％的S-485表面活性剂和有机酸IMIDAZOLE缓冲溶液混合配置而成；先用棉签从***后穹窿取分泌物第一管先直接涂在PH试剂块；再用棉签从***后穹窿取分泌物第二管加入300～500ul的稀释液稀释分泌物，让分泌物溶解到稀释液中制成稀释后的样本，并分别将稀释后的样本滴加到各试剂块上。
所述的各项试剂块的显色反应结果可以通过正向或反向目测比色与标准色卡的比较来判断结果，或通过专用妇科干化学分析仪测定。
使用本发明妇科干化学多项联合检测试纸进行妇科疾病多项联合检测的操作步骤如下：
(1)用棉签从***后穹窿取分泌物第一管先直接涂在PH试剂块；
(2)用棉签从***后穹窿取分泌物第二管加入300～500ul的稀释液稀释分泌物；让分泌物溶解到稀释液中；
(3)分别在乳酸试剂块，过氧化氢浓度试剂块、白细胞酯酶浓度试剂块、唾液酸苷酶活性试剂块、胺试验试剂块，脯氨酸氨基肽酶底物试剂块，氧化酶试剂块，N-乙酰氨基己糖酶底物试剂块，滴虫特异性水解蛋白酶底物试剂块上滴加一滴稀释白带液，每滴约20～40μl；
(4)将试纸条在室温静置10-20分钟或37℃恒温箱中静置10-20分钟后目视比色，也可用杭州健宝医疗器械有限公司研制的妇科干化学分析仪自动读取结果。
(5)判读结果：
项目 正常 不正常
PH ＜4.5(红色或浅绿) ＞4.5(深绿色)
过氧化氢 蓝色 不显色
白细胞酯酶 不显色 蓝色或绿色
唾液酸苷酶 不显色 紫色或褐色
乳酸 蓝色 不显色
胺试验 不显色 绿色
脯氨酸氨基肽酶 不显色 黄色
氧化酶 不显色 黄色
N-乙酰氨基己糖酶 不显色 黄色
滴虫特异性水解蛋白酶 不显色 红色或紫色
实施例1
该实施例的干化学多项试纸条中的PH、乳酸，过氧化氢浓度、白细胞酯酶浓度、唾液酸苷酶底物、胺试验，脯氨酸氨基肽酶底物，氧化酶底物，N-乙酰氨基己糖酶底物，滴虫特异性水解蛋白酶底物试剂块的试剂块滤纸材料为3M滤纸和Pall公司的Nylon 66B，底卡使用的材料为白色PVC片。
PH测试试剂带制作：将滤纸浸泡在甲基橙浓度为300mg/L、溴甲酚绿浓度为200mg/L的溶液中，烘干后使用切割机切成5mm宽的长带；
过氧化氢浓度试剂带制作：将滤纸浸泡在氧化物酶浓度为2.0×105U/L、S-485表面活性浓度为400mg/L、TMB浓度为500mg/L的溶液中，烘干后使用切割机切成5mm宽的长带；
白细胞酯酶浓度试剂带制作：将滤纸浸泡在5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸盐浓度为300mg/L、蔗糖浓度为2000mg/L的溶液中，烘干后使用切割机切成5mm宽的长条；
唾液酸苷酶活性试剂带制作：将滤纸浸泡在5-溴-4-氯-3-吲哚神经氨酸盐浓度为200mg/L、氯化硝基四氮唑蓝浓度为400mg/L、海藻糖浓度为2000mg/L、有机酸IMIDAZOLE缓冲盐PH值为6.5、浓度为300mg/L的溶液中，烘干后使用切割机切成5mm宽的长带；
乳酸浓度试剂带制作：将滤纸浸泡在过氧化物酶浓度为3.0×105U/L、乳酸氧化酶溶液浓度为2.0×105U/L、S-485表面活性浓度为300mg/L、TMB浓度为500mg/L的溶液中，烘干后使用切割机切成5mm宽的长带；
胺试验试剂带制作：A将滤纸浸泡在氢氧化钾浓度为10％的溶液中，烘干。B将尼龙膜浸泡在溴甲酚绿浓度为500mg/L、Triton X-100浓度为800mg/L的溶液中，烘干。将A滤纸和B膜使用双面胶粘合后使用切割机切成5mm宽的长带；
脯氨酸氨基肽酶活性试剂带制作：将滤纸浸泡在L-脯氨酸-P-硝基苯及苯胺，浓度为：3000mg/L.的溶液中，浸泡后烘干使用切割机切成5mm宽的长带；
氧化酶试剂带制作：将滤纸浸泡在四甲基对苯二胺，其浓度为：10g/L.溶液中，浸泡后烘干使用切割机切成5mm宽的长带；
N-乙酰氨基己糖酶底物试剂带制作：将滤纸浸泡在4-甲基伞形酮-N-氨基半乳糖苷浓度为：5g/L的溶液中，浸泡后烘干使用切割机切成5mm宽的长带；
滴虫特异性水解蛋白酶底物试剂带制作：将滤纸浸泡在滴虫特异性水解蛋白酶底物VLR-MNA的试剂浓度为：6g/L溶液中，浸烘干后使用切割机切成5mm宽的长带；
分别将PH、乳酸，过氧化氢浓度、白细胞酯酶浓度、唾液酸苷酶活性、胺试验，脯氨酸氨基肽酶活性，氧化酶活性，N-乙酰氨基己糖酶活性，滴虫特异性水解蛋白酶活性试剂带按图1顺序粘贴固定于80mm宽的白色PVC片上，试剂条间距4mm，切成5mm宽的试纸条即成。
稀释液：0.9％的NACL，0.2％的S-485表面活性剂和有机酸IMIDAZOLE缓冲溶液混合配置而成。
其妇科白带多项联合检测的操作步骤如下：
(1)、用棉签从***后穹窿取分泌物第一管先直接涂在PH试剂块；
(2)、用棉签从***后穹窿取分泌物第二管加入500ul的稀释液稀释分泌物；让分泌物溶解到稀释液中；
(3)、分别在乳酸试剂块，过氧化氢浓度试剂块、白细胞酯酶浓度试剂块、唾液酸苷酶活性试剂块、胺试验试剂块，脯氨酸氨基肽酶底物试剂块，氧化酶试剂块，N-乙酰氨基己糖酶底物试剂块，滴虫特异性水解蛋白酶底物试剂块上滴加一滴稀释白带液，每滴约25ul；
(4)、将试纸条在室温静置20分钟或37℃恒温箱中静置15分钟后目视比色，也可用杭州健宝医疗器械有限公司研制的妇科干化学分析仪自动读取结果；
(5)、本发明判读结果：
正常 不正常
PH ＜4.5(红色或浅绿) ＞4.5(深绿色)
过氧化氢 蓝色 不显色
白细胞酯酶 不显色 蓝色或绿色
唾液酸苷酶 不显色 紫色或褐色
乳酸 蓝色 不显色
胺试验 不显色 绿色
脯氨酸氨基肽酶 不显色 黄色
氧化酶 不显色 黄色
N-乙酰氨基己糖酶 不显色 黄色
滴虫特异性水解蛋白酶 不显色 红色或紫色
实施例2：
该实施例的干化学多项试纸条中的PH、乳酸，过氧化氢浓度、白细胞酯酶浓度、唾液酸苷酶底物、胺试验，脯氨酸氨基肽酶底物，氧化酶底物，N-乙酰氨基己糖酶底物，滴虫特异性水解蛋白酶底物试剂块的试剂块滤纸材料为硝酸纤维素滤纸，底卡使用的材料为白色PVC片。
PH测试试剂带制作：将滤纸浸泡在甲基橙浓度为300mg/L、溴甲酚绿浓度为200mg/L的溶液中，烘干后使用切割机切成5mm宽的长带；
过氧化氢浓度试剂带制作：将滤纸浸泡在氧化物酶浓度为2.0×105U/L、表面活性浓度为300mg/L、TMB浓度为300mg/L的溶液中，烘干后使用切割机切成5mm宽的长带；
白细胞酯酶浓度试剂带制作：将滤纸浸泡在5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸盐浓度为200mg/L、蔗糖浓度为2000mg/L的溶液中，烘干后使用切割机切成5mm宽的长条；
唾液酸苷酶活性试剂带制作：将滤纸浸泡在5-溴-4-氯-3-吲哚神经氨酸盐浓度为200mg/L、氯化硝基四氮唑蓝浓度为200mg/L、海藻糖浓度为2000mg/L、有机酸IMIDAZOLE缓冲盐PH值为6.5、浓度为300mg/L的溶液中，烘干后使用切割机切成5mm宽的长带；
乳酸浓度试剂带制作：将滤纸浸泡在过氧化物酶浓度为3.0×105U/L、乳酸氧化酶溶液浓度为2.0×105U/L、表面活性浓度为200mg/L、TMB浓度为400mg/L的溶液中，烘干后使用切割机切成5mm宽的长带；
胺试验试剂带制作：A将滤纸浸泡在氢氧化钾浓度为10％的溶液中，烘干。B将尼龙膜浸泡在溴甲酚绿浓度为400mg/L、Triton X-100浓度为800mg/L的溶液中，烘干。将A滤纸和B膜使用双面胶粘合后使用切割机切成5mm宽的长带；
脯氨酸氨基肽酶活性试剂带制作：将滤纸浸泡在L-脯氨酸-P-硝基苯胺，浓度为：2500mg/L.的溶液中，浸泡后烘干使用切割机切成5mm宽的长带；
氧化酶试剂带制作：将滤纸浸泡在四甲基对苯二胺，其浓度为：10g/L.溶液中，浸泡后烘干使用切割机切成5mm宽的长带；
N-乙酰氨基己糖酶底物试剂带制作：将滤纸浸泡在N-乙酰氨基己糖酶底物试剂浓度为：3g/L的溶液中，浸泡后烘干使用切割机切成5mm宽的长带；
滴虫特异性水解蛋白酶底物试剂带制作：将滤纸浸泡在滴虫特异性水解蛋白酶底物ZRR-MNA的试剂浓度为3g/L溶液中，浸烘干后使用切割机切成5mm宽的长带；
分别将PH、乳酸，过氧化氢浓度、白细胞酯酶浓度、唾液酸苷酶活性、胺试验，脯氨酸氨基肽酶活性，氧化酶活性，N-乙酰氨基己糖酶活性，滴虫特异性水解蛋白酶活性试剂带按图1顺序粘贴固定于80mm宽的白色PVC片上，试剂条间距4mm，切成5mm宽的试纸条即成。
稀释液：0.9％的NACL，0.2％的S-485表面活性剂和有机酸IMIDAZOLE缓冲溶液混合配置而成。
其妇科白带多项联合检测的操作步骤如下：
(1)、用棉签从***后穹窿取分泌物第一管先直接涂在PH试剂块；
(2)、用棉签从***后穹窿取分泌物第二管加入500ul的稀释液稀释分泌物；让分泌物溶解到稀释液中；
(3)、分别在乳酸试剂块，过氧化氢浓度试剂块、白细胞酯酶浓度试剂块、唾液酸苷酶活性试剂块、胺试验试剂块，脯氨酸氨基肽酶底物试剂块，氧化酶试剂块，N-乙酰氨基己糖酶底物试剂块，滴虫特异性水解蛋白酶底物试剂块上滴加一滴稀释白带液，每滴约25μl；
(4)、将试纸条在室温静置20分钟或37℃恒温箱中静置15分钟后目视比色，也可用杭州健宝医疗器械有限公司研制的妇科干化学分析仪自动读取结果；
(5)、本发明判读结果：
正常 不正常
PH ＜4.5(红色或浅绿) ＞4.5(深绿色)
过氧化氢 蓝色 不显色
白细胞酯酶 不显色 蓝色或绿色
唾液酸苷酶 不显色 紫色或褐色
乳酸 蓝色 不显色
胺试验 不显色 绿色
脯氨酸氨基肽酶 不显色 黄色
氧化酶 不显色 黄色
N-乙酰氨基己糖酶 不显色 黄色
滴虫特异性水解蛋白酶 不显色 红色或紫色
实施例3：
该实施例的干化学多项试纸条中的PH、乳酸，过氧化氢浓度、白细胞酯酶浓度、唾液酸苷酶底物、胺试验，脯氨酸氨基肽酶底物，氧化酶底物，N-乙酰氨基己糖酶底物，滴虫特异性水解蛋白酶底物试剂块的试剂块滤纸材料为玻璃微纤维滤纸，底卡使用的材料为白色PVC片。
PH测试试剂带制作：将滤纸浸泡在甲基橙浓度为300mg/L、溴甲酚绿浓度为200mg/L的溶液中，烘干后使用切割机切成5mm宽的长带；
过氧化氢浓度试剂带制作：将滤纸浸泡在氧化物酶浓度为2.0×105U/L、表面活性浓度为400mg/L、TMB浓度为500mg/L的溶液中，烘干后使用切割机切成5mm宽的长带；
白细胞酯酶浓度试剂带制作：将滤纸浸泡在5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸盐浓度为300mg/L、海藻糖浓度为2000mg/L的溶液中，烘干后使用切割机切成5mm宽的长条；
唾液酸苷酶活性试剂带制作：将滤纸浸泡在5-溴-4-氯-3-吲哚神经氨酸盐浓度为150mg/L、氯化硝基四氮唑蓝浓度为400mg/L、蔗糖浓度为2000mg/L、有机酸IMIDAZOLE缓冲盐PH值为6.5、浓度为300mg/L的溶液中，烘干后使用切割机切成5mm宽的长带；
乳酸浓度试剂带制作：将滤纸浸泡在过氧化物酶浓度为3.0×105U/L、乳酸氧化酶溶液浓度为2.0×105U/L、表面活性浓度为300mg/L、TMB浓度为500mg/L的溶液中，烘干后使用切割机切成5mm宽的长带；
胺试验试剂带制作：A将滤纸浸泡在氢氧化钾浓度为10％的溶液中，烘干。B将尼龙膜浸泡在溴甲酚绿浓度为500mg/L、Triton X-100浓度为800mg/L的溶液中，烘干。将A滤纸和B膜使用双面胶粘合后使用切割机切成5mm宽的长带；
脯氨酸氨基肽酶活性试剂带制作：将滤纸浸泡在L-脯氨酸-P-硝基苯胺，浓度为：1500mg/L.的溶液中，浸泡后烘干使用切割机切成5mm宽的长带；
氧化酶试剂带制作：将滤纸浸泡在四甲基对苯二胺，其浓度为：5g/L.溶液中，浸泡后烘干使用切割机切成5mm宽的长带；
N-乙酰氨基己糖酶底物试剂带制作：将滤纸浸泡在4-甲基伞形酮-N-氨基半乳糖苷试剂浓度为：2g/L的溶液中，浸泡后烘干使用切割机切成5mm宽的长带；
滴虫特异性水解蛋白酶底物试剂带制作：将滤纸浸泡在滴虫特异性水解蛋白酶底物BLRR-AMC的试剂浓度为：2g/L溶液中，浸烘干后使用切割机切成5mm宽的长带；
分别将PH、乳酸，过氧化氢浓度、白细胞酯酶浓度、唾液酸苷酶活性、胺试验，脯氨酸氨基肽酶活性，氧化酶活性，N-乙酰氨基己糖酶活性，滴虫特异性水解蛋白酶活性试剂带按图1顺序粘贴固定于80mm宽的白色PVC片上，试剂条间距4mm，切成5mm宽的试纸条即成。
稀释液：0.9％的NACL，0.2％的S-485表面活性剂和有机酸IMIDAZOLE缓冲溶液混合配置而成。
其妇科白带多项联合检测的操作步骤如下：
(1)、用棉签从***后穹窿取分泌物第一管先直接涂在PH试剂块；
(2)、用棉签从***后穹窿取分泌物第二管加入500ul的稀释液稀释分泌物；让分泌物溶解到稀释液中；
(3)、分别在乳酸试剂块，过氧化氢浓度试剂块、白细胞酯酶浓度试剂块、唾液酸苷酶活性试剂块、胺试验试剂块，脯氨酸氨基肽酶底物试剂块，氧化酶试剂块，N-乙酰氨基己糖酶底物试剂块，滴虫特异性水解蛋白酶底物试剂块上滴加一滴稀释白带液，每滴约25μl；
(4)、将试纸条在室温静置20分钟或37℃恒温箱中静置20分钟后目视比色，也可用杭州健宝医疗器械有限公司研制的妇科干化学分析仪自动读取结果；
(5)、本发明判读结果：
正常 不正常
PH ＜4.5(红色或浅绿) ＞4.5(深绿色)
过氧化氢 蓝色 不显色
白细胞酯酶 不显色 蓝色或绿色
唾液酸苷酶 不显色 紫色或褐色
乳酸 蓝色 不显色
胺试验 不显色 绿色
脯氨酸氨基肽酶 不显色 黄色
氧化酶 不显色 黄色
N-乙酰氨基己糖酶 不显色 黄色
滴虫特异性水解蛋白酶 不显色 红色或紫色
根据乳酸、过氧化氢(H2O2)和白细胞酯酶的半定量检测结果，判断***的理论清洁度计算等级(DOC)
(1) 乳酸 H2O2 白细胞酯酶 DOC
(2) +++ +++ -，± I
(3) ++ ++ + II
(4) + + ++ III
(5) -，± -，± +++ IV
根据各测试块结果：由PH＞4.5，胺试验阳性，脯氨酸氨基肽酶阳性和唾液酸苷酶阳性即可确诊BV，由N-乙酰氨基己糖酶底物试验阳性表明白色念珠菌的存在，由滴虫特异性水解蛋白酶底物试验的阳性表明滴虫的存在，由脯氨酸氨基肽酶和氧化酶同时阳性表明***的存在。
本发明使用的妇科干化学多项检测试纸条可以同时测定PH、乳酸，过氧化氢浓度、白细胞酯酶浓度、唾液酸苷酶活性、胺试验，脯氨酸氨基肽酶活性，氧化酶活性，N-乙酰氨基己糖酶活性，滴虫特异性水解蛋白酶活性，可以准确的反映妇女白带分泌物中细菌性***病，白色念珠菌，滴虫，***和生殖道微生物环境，***环境的损害程度和白带分泌物的清洁度，使得妇科白带检测更全面，操作简便、快速。若配合妇科干化学分析仪读取则会更方便快捷。
Claims (10)
1、一种妇科多项目干化学联合检测试纸条，其特征在于由细长形的塑料基体条和各种试剂固化在纤维素滤纸，玻璃纤维滤纸、层析纸、聚酯膜或尼龙膜后的试剂块采用水平覆盖或内置嵌入方法构成干化学测试条；塑料基体条由透明或不透明塑料材料构成，通过白带标本与各种化学试剂块的反应产生颜色的变化，从试纸条上面和下面检测到颜色的变化而判断结果。
2、根据权利要求1所述妇科多项目干化学联合检测试纸条，其特征在干化学测试条是由试剂固化过的干化学试剂块粘贴于由PET、PVC、PE、PP或PS片材构成的塑料基体条上组成，干化学试剂块包括PH测试试剂块、乳酸试剂块，过氧化氢浓度试剂块、白细胞酯酶浓度试剂块、唾液酸苷酶活性试剂块、胺试验试剂块，脯氨酸氨基肽酶底物试剂块，氧化酶试剂块，N-乙酰氨基己糖酶底物试剂块，滴虫特异性水解蛋白酶底物试剂块中的任意三个试剂块或三个以上的任意试剂块增加，减少的组合采用水平覆盖或内置嵌入方法构成。
3、根据权利要求1所述妇科多项目干化学联合检测试纸条，其特征在于所述PH测试试剂块、乳酸试剂块，过氧化氢浓度试剂块、白细胞酯酶浓度试剂块、唾液酸苷酶活性试剂块、胺试验试剂块，脯氨酸氨基肽酶底物试剂块，氧化酶试剂块，N-乙酰氨基己糖酶底物试剂块，滴虫特异性水解蛋白酶底物的试剂块的基础材料为纤维素滤纸、玻璃纤维滤纸、层析纸、聚酯膜或尼龙膜；所述试剂块形状为正方形，圆形，三角形，距形，菱形，梯形，大小为：
长：1～20mm，优选：4～6mm；
宽：1～20mm，优选：4～6mm；
厚度：0.01～5mm，优选：0.1～5mm；
所述多项试剂块间距为：1mm～20mm，优选2～5mm。
4、根据权利要求1所述的妇科多项目干化学联合检测试纸条，其特征在于所述的塑料基体条(11)为PET、PVC、PE、PP或PS片材中的一种，其大小为：
长：10～200mm，优选：70～110mm；
宽：2～20mm，优选：4～6mm；
厚度：0.1～1.5mm，优选：0.2～0.8mm。
5、根据权利要求1或2所述的妇科多项目干化学联合检测试纸条，其特征在于所述的PH测试试剂块为将空白滤纸在由甲基橙和溴甲酚绿组成的溶液中浸泡后干燥处理，所述甲基橙在溶液中的浓度为10～500mg/L，所述溴甲酚绿在溶液中的浓度为10～300mg/L；所述脯氨酸氨基肽酶底物试剂块的反应试剂为：将空白滤纸在L-脯氨酸-P-硝基苯，L-脯氨酸-P-萘氨及苯胺，浓度为：5-3000mg/L.的溶液中浸泡后干燥处理制备而成；所述的氧化酶试剂块的反应试剂为：将空白滤纸在四甲基对苯二胺，其浓度为：0.1-50g/L.溶液中浸泡后干燥处理制备而成；所述N-乙酰氨基己糖酶底物试剂块为将空白滤纸在发色性N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷的衍生物，如：5-溴-4氯-3吲哚基-N-乙酰-氨基葡萄糖苷，4-甲基伞形酮-N-氨基半乳糖苷，硝基苯-N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷，试剂浓度为：0.1-20g/L的溶液中浸泡后干燥处理制备而成；所述滴虫特异性水解蛋白酶底物试剂块为：将空白滤纸在ZRRR-MNA，ZVR-MNA，ZLR-MNA，ZRR-MNA，BLRR-AMC，BLKR-AMC，VLK-MNA，ZKKR-AMC，VLR-MNA之一，试剂浓度为：0.1-30g/L溶液中干燥处理制备而成；所述过氧化氢浓度试剂块为将空白滤纸在过氧化物酶、S-485表面活性剂和TMB组成的酶溶液中浸泡后干燥处理，所述过氧化物酶在酶溶液中的浓度为1.0～3.0×105U/L，表面活性在酶溶液中的浓度为10～500mg/L，TMB在酶溶液中的浓度为20～1000mg/L；所述白细胞酯酶浓度试剂块为将空白滤纸在5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸盐和海藻糖或蔗糖组成的溶液中浸泡后干燥处理，所述5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸盐在溶液中的浓度为45～1000mg/L，所述海藻糖或蔗糖在溶液中的浓度为200mg/L～10000mg/L；所述唾液酸苷酶活性试剂块为将空白滤纸在5-溴-4-氯-3-吲哚神经氨酸盐、氯化硝基四氮唑蓝、ADA，ACES，PIPES，MOPSO，IMIDAZOLE，MES缓冲盐和海藻糖或蔗糖组成的pH在5.5～7.5溶液中浸泡后干燥处理，所述5-溴-4-氯-3-吲哚神经氨酸盐在溶液中的浓度为5～200mg/L，所述氯化硝基四氮唑蓝在溶液中的浓度为10～500mg/L，所述海藻糖或蔗糖在溶液中的浓度为200mg/L～10000mg/L，所述ADA，ACES，PIPES，MOPSO，IMIDAZOLE，MES任选其一的有机酸缓冲溶液中的浓度为50-300mg/L。
6、根据权利要求1或2所述的妇科多项目干化学联合检测试纸条，其特征在于所述乳酸浓度试剂块为将空白滤纸在过氧化物酶、乳酸氧化酶、表面活性剂、3、3′5、5′-四甲基联苯胺TMB组成的酶溶液中浸泡后干燥处理，所述过氧化物酶在酶溶液中的浓度为2.0～3.0×105U/L，乳酸氧化酶在溶液浓度为0.5～2.0×105U/L，所述表面活性在酶溶液中的浓度为50～500mg/L，TMB在酶溶液中的浓度为20～1000mg/L。
7、根据权利要求1或2所述的妇科多项目干化学联合检测试纸条，其特征在于所述胺试验试剂块为将氢氧化钾溶液与空白滤纸浸泡后干燥处理后的试剂块A粘贴于溴甲酚绿和Triton X-100溶液浸泡后的干燥处理的试剂块B，其中A试剂块中氢氧化钾浓度为500～10000mg/L，B试剂块中溴甲酚绿浓度为100～500mg/L，Triton X-100浓度为100～1000mg/L。
8、一种使用妇科多项目干化学联合检测试纸条的测定方法，它将稀释后的样本滴加到各试剂块上，10-15分钟后根据颜色的变化判断结果，根据乳酸、过氧化氢和白细胞酯酶的半定量检测结果，判断***的理论清洁度计算等级DOC；
(1) 乳酸 H2O2 细胞酯酶 DOC
(2) +++ +++ -，± I
(3) ++ ++ + II
(4) + + ++ III
(5) -，± -，± +++ IV
根据各测试块结果：由PH＞4.5，胺试验阳性，脯氨酸氨基肽酶阳性和唾液酸苷酶阳性即可确诊BV，由N-乙酰氨基己糖酶底物试验阳性表明白色念珠菌的存在，由滴虫特异性水解蛋白酶底物试验的阳性表明滴虫的存在，由脯氨酸氨基肽酶和氧化酶同时阳性表明***的存在。
9、根据权利要求14所述的使用妇科多项目干化学联合检测试纸条的测定方法，其特征在于所述稀释后的样本采用的稀释液是：0.9％的NaCl、0.2％的表面活性剂和有机酸缓冲溶液混合配置而成；先用棉签从***后穹窿取分泌物第一管先直接涂在PH试剂块；再用棉签从***后穹窿取分泌物第二管加入300-500ul的稀释液稀释分泌物，让分泌物溶解到稀释液中制成稀释后的样本，并分别将稀释后的样本滴加到各试剂块上。
10、根据权利要求14或15所述的使用妇科多项目干化学联合检测试纸条的测定方法，其特征在于各项试剂块的显色反应结果可以通过正向或反向目测比色与标准色卡的比较来判断结果，或通过专用妇科干化学分析仪测定。
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