BR112021000673A2 - métodos para tratar um indivíduo com câncer de pulmão, kits, anticorpo anti-pd-l1 e composições - Google Patents

Abstract

A presente divulgação fornece métodos para tratar câncer de pulmão (tal como câncer de pulmão de células não pequenas, por exemplo, câncer de pulmão não escamoso de células não pequenas Estágio IV) em um indivíduo. Os métodos compreendem administrar ao indivíduo um antagonista de ligação ao eixo PD-1 (como um anticorpo anti-PD-L1, por exemplo, atezolizumabe), um antimetabólito (por exemplo, pemetrexede) e um agente de platina (por exemplo, cisplatina ou carboplatina).

Description

“MÉTODOS PARA TRATAR UM INDIVÍDUO COM CÂNCER DE PULMÃO, KITS, ANTICORPO ANTI-PD-L1 E COMPOSIÇÕES”

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS

[1] Este pedido reivindica o benefício dos Pedidos Provisórios dos EUA Nº 62/700.184, depositado em 18 de julho de 2018, e 62/734.936, depositado em 21 de setembro de 2018; os conteúdos de cada um dos quais são incorporados por meio deste por referência em sua totalidade.

APRESENTAÇÃO DA LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS EM ARQUIVO DE TEXTO ASCII

[2] O conteúdo da seguinte submissão em arquivo de texto ASCII é incorporado no presente documento por referência em sua totalidade: uma forma legível por computador (CRF) da Listagem de Sequência (nome do arquivo: 146392045140SEQLIST.TXT, data registrada: 12 de julho de 2019, tamanho: 37 KB).

CAMPO DA INVENÇÃO

[3] A presente divulgação se refere a métodos de tratamento de câncer pela administração de um antagonista de ligação ao eixo PD-1 (por exemplo, atezolizumabe) em combinação com um antimetabólito (por exemplo, pemetrexede) e um agente de platina (por exemplo, carboplatina ou cisplatina).

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[4] O câncer de pulmão continua sendo a principal causa de mortes por câncer em todo o mundo; é o câncer mais comum em homens e foi responsável por aproximadamente 13% de todos os novos cânceres em 2008 (Jemal et al. (2011) CA Cancer J. Clin 61: 69-90). Em 2012, estimou-se que houve 313.000 novos casos de câncer de pulmão e 268.000 mortes por câncer de pulmão na Europa (GLOBOCAN (2012). Incidência estimada de câncer: mortalidade e prevalência em todo o mundo em 2012. Disponível em: globocan.iarc.fr/Pages/fact_sheets_cancer.aspx.). Dados semelhantes dos Estados Unidos estimaram que haveria 221.200 novos casos de câncer de pulmão e 158,040 mortes por câncer de pulmão em 2015 (Siegel et al., (2015) CA Cancer J Clin, 65:5-29).

[5] O câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC) é o subtipo predominante de câncer de pulmão, sendo responsável por aproximadamente 85% de todos os casos (Molina et al. (2008) Mayo Clin Proc 83: 584 (94); Howlader et al. (2011) SEE R cancer statistics review, 1975-2011, National Cancer Institute). O NSCLC pode ser dividido em dois tipos histológicos principais: adenocarcinoma e carcinoma de células escamosas (Travis et al. (2011) J Thorac Oncol 6: 244-85). A histologia do adenocarcinoma é responsável por mais da metade de todos os NSCLC, enquanto a histologia das células escamosas é responsável por aproximadamente 25% (Langer et al.

(2010) J Clin Oncol 28:5311-20). Os casos restantes de NSCLC são representados por carcinoma de células grandes, tumores neuroendócrinos, carcinoma sarcomatoide e histologia pouco diferenciada.

[6] A taxa de sobrevida global em 5 anos para doença avançada é de 2%-4%, dependendo da localização geográfica (Cetin et al.

(2011) Clin Epidemiol 3: 139-48). Fatores de mau prognóstico para sobrevida em pacientes com NSCLC incluem estágio avançado da doença no momento do diagnóstico inicial, status de desempenho ruim e história de perda de peso não intencional. Mais da metade dos pacientes com NSCLC são diagnosticados com doença distante, o que contribui diretamente para as perspectivas de sobrevida pobres.

[7] Regimes à base de platina- permanecem a primeira- opção de linha padrão para pacientes com NSCLC localmente avançado ou metastático que não está abrigando mutações EGFR ou rearranjos do gene ALK. Em particular, para NSCLC não escamoso em estágio avançado recém-diagnosticado, o padrão de tratamento é um dupleto de platina com cisplatina ou carboplatina e um taxano ou pemetrexede, com ou sem bevacizumab. No entanto, os regimes de tratamento atuais estão associados a toxicidades substanciais (como neutropenia febril, mielossupressão, náusea, alopecia, nefropatia e neuropatia) e são geralmente mal tolerados por pacientes idosos e com baixo desempenho. Além disso, o benefício de sobrevida conferido pela quimioterapia citotóxica atingiu um platô, com taxas de resposta geral de aproximadamente 20% e sobrevida de 1 ano variando de 31% a 36% (Schiller et al. (2002) N Engl J Med. 346: 92- 98).

[8] Existem diferenças reconhecidas nas características da doença entre o adenocarcinoma e o NSCLC escamoso. Em primeiro lugar, os tumores escamosos comumente presentes nas vias aéreas centrais e geralmente permanecem localizados no epitélio brônquico (Hirsch et al. (2008) J Thorac Oncol. 3: 1468-1481), enquanto os tumores não-escamosos são mais comumente localizados no parênquima pulmonar distal às vias aéreas centrais.

A avaliação dos tecidos tumorais do NSCLC geralmente revela diferenças citológicas entre o tipo de célula escamosa (queratinização, pontes intracelulares e necrose central) e adenocarcinoma (arquitetura glandular). Nos casos em que a amostra do tumor é pouco diferenciada ou há tecido limitado disponível, os marcadores imuno-histoquímicos podem apoiar o diagnóstico histológico. O fator de transcrição da tireoide-1 raramente é expresso em células escamosas e fortemente expresso em adenocarcinoma. Em contraste, p63, CK5/6 e 34 E12 são fortemente expressos no carcinoma de células escamosas e menos frequentemente no adenocarcinoma (Travis et al. (2011) J Thorac Oncol. 6:244-85).

[9] Mudanças genéticas que têm significado prognóstico e/ou preditivo no NSCLC incluem mutações no receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR), o rearranjo nos genes da quinase de linfoma anaplásico (ALK) e mutações no gene GTPase Kras (KRAS). As taxas dessas mutações diferem entre o carcinoma de células escamosas e o adenocarcinoma. Por exemplo, mutações no domínio da quinase EGFR foram relatadas em 10%- 40% dos pacientes com adenocarcinoma NSCLC, mas raramente são observadas em pacientes com NSCLC escamoso (Herbst et al. (2008) N Engl J Med. 359: 1367- 80). Da mesma forma, o oncogene de fusão ALK, reconhecido como um impulsionador da tumorigênese pulmonar, é observado em aproximadamente 7% dos pacientes com adenocarcinoma, mas é muito raro na histologia escamosa (Herbst et al. (2008) N Engl J Med. 359: 1367- 80; Langer et al. (2010) J Clin Oncol 28: 5311-20). Além disso, as mutações KRAS são muito raras no NSCLC escamoso, embora possam ser observadas em até 30% dos casos de NSCLC de adenocarcinoma (Travis et al. (2011) J Thorac Oncol. 6:244-85).

[10] A terapia dirigida por genótipo tem o potencial de melhorar dramaticamente o equilíbrio entre benefício e toxicidade para pacientes selecionados com NSCLC (principalmente histologia não escamosa) caracterizada por alterações de oncogenes driver, incluindo mutações EGFR sensibilizantes e rearranjo ALK. No entanto, essas mutações são mais prevalentes no NSCLC de adenocarcinoma e são muito raras no NSCLC escamoso. Estudos randomizados de Fase III de gefitinib (IPASS), erlotinib (EURTAC) e afatinib (LUX- Lung 3) mostrou melhora significativa de SLP e ORR em comparação com a quimioterapia com dupleto de platina (Fukuoka et al. (2011) J Clin Oncol. 29: 2866- 2874; Rosell et al. (2012) Lancet Oncol. 13: 239-46; Yang et al. (2012) Lancet Oncol. 13: 539 a 548). Da mesma forma, os inibidores de ALK crizotinib e ceritinib demonstraram eficácia em pacientes com NSCLC positivo para rearranjo de ALK, conforme definido por hibridização fluorescente in situ (Crino et al. (2011) J Clin Oncol. 29: Abstract 7514; Camidge et al. (2012) Lancet Oncol. 13: 1011-1019; Shaw et al. (2012) European Society of Medical Oncology Meeting. Abstract LBA1 PR; Shaw et al.

(2014) N Engl J Med. 370: 2.537 a 2.539; XALKORI ® USPI; ZYKADIA™USPI).

[11] Apesar do progresso com novos tratamentos direcionados e novas combinações de quimioterapia, as taxas de sobrevivência para doença NSCLC avançada permanecem baixas e a resistência adquirida aos agentes direcionados é um grande problema clínico. Consequentemente, há uma necessidade na técnica de opções de tratamento alternativas que melhorem o prognóstico dos pacientes com essa doença, por exemplo, métodos de tratamento que estendem a taxa de sobrevivência.

[12] Todas as referências aqui citadas, incluindo os pedidos de patente, publicações de patentes, e números de acessão UniProtKB/Swiss-Prot são aqui incorporadas por referência na sua totalidade, como se cada referência individual fosse específica e individualmente indicada para ser incorporada por referência.

DESCRIÇÃO RESUMIDA DA INVENÇÃO

[13] São fornecidos no presente documento métodos e usos de um anticorpo anti-PD-L1 para tratar pacientes com câncer de pulmão. Em particular, os métodos e usos são baseados em dados de um estudo clínico randomizado de Fase III de atezolizumabe (TECETRIQ®) em combinação com pemetrexede e um agente de platina (por exemplo, carboplatina ou cisplatina) em indivíduos intocados por tratamento (por exemplo, indivíduos intocados por quimioterapia) com câncer de pulmão não escamoso de células não pequenas (NSCLC) Estágio IV. O estudo demonstrou que o tratamento inicial (de primeira linha) com a combinação de TECENTRIQ® (atezolizumabe) mais quimioterapia (pemetrexede + carboplatina ou pemetrexede + cisplatina) reduziu o risco de agravamento da doença ou morte (SLP) em comparação com a quimioterapia sozinha. Além disso, os pacientes que receberam TECENTRIQ® (atezolizumabe) mais quimioterapia (pemetrexede + carboplatina ou pemetrexede + cisplatina) demonstraram uma melhora numérica na sobrevida global em comparação com a quimioterapia isolada. A segurança para o

TECENTRIQ e a combinação de quimioterapia pareceu consistente com o perfil de segurança conhecido dos medicamentos individuais, e nenhum novo sinal de segurança foi identificado com a combinação.

[14] Em um aspecto, são fornecidos no presente documento métodos de tratamento de um indivíduo com câncer de pulmão, que compreendem a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-PD-L1, um antimetabólito e um agente de platina, em que o tratamento estende a sobrevida livre de progressão (SLP) do indivíduo. Em algumas modalidades, o tratamento estende a sobrevida global (SG) do indivíduo. Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a sobrevida livre de progressão (SLP) do indivíduo em pelo menos cerca de 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5 ou 10 meses (incluindo qualquer intervalo em entre esses valores).

Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a sobrevida livre de progressão (SLP) do indivíduo em pelo menos cerca de 7,6 meses. Em algumas modalidades, o tratamento aumenta o SLP do indivíduo em pelo menos cerca de qualquer um de 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4 meses (incluindo qualquer intervalo entre esses valores), em comparação com um indivíduo tendo câncer de pulmão (como câncer de pulmão de células não pequenas, por exemplo, câncer de pulmão de células não pequenas não escamosas de Estágio IV) que recebeu tratamento com um antimetabólito (por exemplo, pemetrexede) e um agente de platina (por exemplo, carboplatina ou cisplatina).

[15] Em outro aspecto, são fornecidos no presente documento métodos de tratamento de um indivíduo com câncer de pulmão, compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-PD-L1, um antimetabólito e um agente de platina, em que o tratamento estende a sobrevida global (SG) do indivíduo. Em algumas modalidades, a sobrevida global (SG) é medida como o período de tempo desde o início do tratamento até a morte. Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a SG do indivíduo em pelo menos cerca de qualquer um de 14, 14,5, 15, 15,5, 16, 16,5, 17, 17,5, 18, 18,5, 19, 19,5 ou 20 meses (incluindo qualquer intervalo entre esses valores). Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a SG do indivíduo em pelo menos cerca de 18,1 meses.

Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a SG do indivíduo em pelo menos cerca de qualquer um de 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5 ou 7 meses (incluindo qualquer intervalo entre esses valores), em comparação a um indivíduo com câncer de pulmão (como câncer de pulmão de células não pequenas, por exemplo, câncer de pulmão de células não pequenas não escamosas em estágio IV) que recebeu tratamento com um antimetabólito (por exemplo, pemetrexede) e um agente de platina (por exemplo, carboplatina ou cisplatina).

[16] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-L1 compreende: (a) uma região variável de cadeia pesada (VH) que compreende uma HVR-H1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de GFTFSDSWIH (SEQ ID NO: 1), uma HVR-2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de AWISPYGGSTYYADSVKG (SEQ ID NO: 2), e uma HVR-3 compreendendo um aminoácido RHWPGGFDY (SEQ ID NO: 3), e (b) uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende uma HVR-L1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 4), uma HVR-L2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SASFLYS (SEQ ID NO: 5) e uma HVR-L3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de QQYLYHPAT (SEQ ID NO: 6). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-L1 compreende um domínio variável da cadeia pesada (VH) que compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 7 e um domínio variável da cadeia leve (VL) que compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 8. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD- L1 é atezolizumabe.

[17] Em algumas modalidades, o antimetabólito é pemetrexede, 5-fluorouracil, 6-mercaptopurina, capecitabina, citarabina, floxuridina, fludarabina, hidroxicarbamida ou metotrexato. Em algumas modalidades, o antimetabólito é pemetrexede. Em algumas modalidades, o agente de platina é carboplatina. Em algumas modalidades, o agente de platina é cisplatina.

[18] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-L1 é administrado a uma dose de 1.200 mg, em que o agente de platina é carboplatina e é administrado a uma dose suficiente para atingir ASC = 6 mg/ml/min, e em que o antimetabólito é pemetrexede e é administrado a uma dose de 500 mg/m 2. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-L1 é administrado a uma dose de 1.200 mg, em que o agente de platina é cisplatina e é administrado a uma dose de 75 mg/m2, e em que o antimetabólito é pemetrexede e é administrado a uma dose de 500 mg/m2. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-L1, o antimetabólito e o agente de platina são administrados em quatro Ciclos de 21 dias e em que o anticorpo anti-PD-L1 é atezolizumabe e administrado a uma dose de 1.200 mg no Dia 1, em que o antimetabólito é pemetrexede e é administrado a uma dose de 500 mg/m2 dia 1, e em que o agente de platina é carboplatina e é administrado a uma dose suficiente para se atingir ASC = 6 mg/ml/min no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para os Ciclos 1-4. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-L1, o antimetabólito e o agente de platina são administrados em quatro Ciclos de 21 dias e em que o anticorpo anti-PD-L1 é atezolizumabe e administrado a uma dose de 1.200 mg no Dia 1, em que o antimetabólito é pemetrexede e é administrado a uma dose de 500 mg/m2 no Dia 1, e em que o agente de platina é cisplatina e é administrado a uma dose de 75 mg/m2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias durante Ciclos 1-4. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD- L1, o antimetabólito e o agente de platina são administrados sequencialmente no Dia 1 dos Ciclos 1-4. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-L1 é administrado antes do antimetabólito e em que o antimetabólito é administrado antes do agente de platina no Dia 1 dos Ciclos 1-4. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-L1 e o antimetabólito são administrados adicionalmente após o Ciclo 4, em que o anticorpo anti-PD-L1 é atezolizumabe e é administrado a uma dose de 1.200 mg no Dia 1, e em que o antimetabólito é pemetrexede e é administrado a uma dose de 500 mg/m2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 4. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-L1 e o antimetabólito são administrados sequencialmente no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 4. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-L1 é administrado antes do antimetabólito no Dia 1 após o Ciclo 4.

[19] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-L1, o antimetabólito e o agente de platina são administrados em quatro Ciclos de 21 dias e em que o anticorpo anti-PD-L1 é atezolizumabe e administrado a uma dose de 1.200 mg no Dia 1, em que o antimetabólito é pemetrexede e é administrado a uma dose de 500 mg/m2 no Dia 1, e em que o composto de platina é carboplatina e é administrado a uma dose suficiente para atingir ASC = 6 mg/ml/min no Dia 1 de cada Ciclo de 21 dias para os Ciclos 1-6. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-L1, o antimetabólito e o agente de platina são administrados em quatro Ciclos de 21 dias e em que o anticorpo anti-PD-L1 é atezolizumabe e administrado a uma dose de 1.200 mg no Dia 1, em que o antimetabólito é pemetrexede e é administrado a uma dose de 500 mg/m 2 no Dia 1, e em que o agente de platina é cisplatina e é administrado a uma dose de 75 mg/m2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias durante Ciclos 1-6.

Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-L1, o antimetabólito e o agente de platina são administrados sequencialmente no Dia 1 dos Ciclos 1-6. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-L1 é administrado antes do antimetabólito e em que o antimetabólito é administrado antes do agente de platina no Dia 1 dos Ciclos 1-6. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD- L1 e o antimetabólito são administrados adicionalmente após o Ciclo 6, em que o anticorpo anti-PD-L1 é atezolizumabe e é administrado a uma dose de 1.200 mg no Dia 1, e em que o antimetabólito é pemetrexede e é administrado a uma dose de 500 mg/m2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 6. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-L1 e o antimetabólito são administrados sequencialmente no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 6. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-L1 é administrado antes do antimetabólito no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 6.

[20] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-L1, o agente de platina e o inibidor de antimetabólito são administrados por via intravenosa. Em algumas modalidades, o câncer de pulmão é câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC). Em algumas modalidades, o NSCLC é NSCLC não escamoso de Estágio IV. Em algumas modalidades, o indivíduo é intocado por tratamento para NSCLC não escamoso de Estágio IV.

Em algumas modalidades, o indivíduo é intocado por quimioterapia para NSCLC não escamoso de Estágio IV. Em algumas modalidades, o indivíduo é asiático ou descendente de asiáticos. Em algumas modalidades, o indivíduo tem pelo menos 65 anos de idade. Em algumas modalidades, o indivíduo nunca fumou. Em algumas modalidades, o indivíduo é alto para PD-L1. Em algumas modalidades, o indivíduo é negativo para PD-L1. Em algumas modalidades, o indivíduo é um ser humano.

[21] Em outro aspecto, são fornecidos no presente documento métodos de tratamento de um indivíduo com câncer de pulmão de células não pequenas não escamosas de Estágio IV (NSCLC), que compreendem a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de atezolizumabe,

pemetrexede e carboplatina, em que o atezolizumabe é administrado a uma dose de 1.200 mg, o pemetrexede é administrado a uma dose de 500 mg/m2, e a carboplatina é administrada a uma dose suficiente para atingir ASC = 6 mg/ml/min, em que o tratamento estende a sobrevida livre de progressão (SLP). Em algumas modalidades, o tratamento estende a sobrevida global (SG) do indivíduo. Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a sobrevida livre de progressão (SLP) do indivíduo em pelo menos cerca de 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5 ou 10 meses (incluindo qualquer intervalo entre esses valores). Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a sobrevida livre de progressão (SLP) do indivíduo em pelo menos cerca de 7,6 meses. Em algumas modalidades, o tratamento aumenta o SLP do indivíduo em pelo menos cerca de qualquer um de 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4 meses (incluindo qualquer intervalo entre esses valores), em comparação com um indivíduo que tem câncer de pulmão (como câncer de pulmão de células não pequenas, por exemplo, câncer de pulmão de células não pequenas não escamosas Estágio IV) que recebeu tratamento com pemetrexede e carboplatina. Em algumas modalidades, o tratamento estende a sobrevida global (SG) do indivíduo. Em algumas modalidades, a sobrevida global (SG) é medida como o período de tempo desde o início do tratamento até a morte. Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a SG do indivíduo em pelo menos cerca de qualquer um de 14, 14,5, 15, 15,5, 16, 16,5, 17, 17,5, 18, 18,5, 19, 19,5 ou 20 meses (incluindo qualquer intervalo entre esses valores). Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a SG do indivíduo em pelo menos cerca de 18,1 meses.

Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a SG do indivíduo em pelo menos cerca de qualquer um de 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5 ou 7 meses (incluindo qualquer intervalo entre esses valores), em comparação com um indivíduo com câncer de pulmão (como câncer de pulmão de células não pequenas, por exemplo, câncer de pulmão de células não pequenas não escamosas de Estágio IV) que recebeu tratamento com pemetrexede e carboplatina. Em algumas modalidades, o atezolizumabe, o pemetrexede e a carboplatina são administrados em quatro ciclos de 21 dias, e atezolizumabe e pemetrexede são administrados adicionalmente em ciclos de 21 dias após o Ciclo 4; em que atezolizumabe é administrado a uma dose de 1.200 mg no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias dos Ciclos 1-4, o pemetrexede é administrado a uma dose de 500 mg/m2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para os Ciclos 1- 4, e carboplatina é administrada a uma dose suficiente para atingir ASC = 6 mg/ml/min no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias dos Ciclos 1-4, e em que atezolizumabe é ainda administrado a uma dose de 1.200 mg no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 4 e pemetrexede é ainda administrado a uma dose de 500 mg/m2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 4. Em algumas modalidades, o atezolizumabe, pemetrexede e carboplatina são administrados sequencialmente no Dia 1 dos Ciclos 1-4. Em algumas modalidades, o atezolizumabe é administrado antes do pemetrexede e em que pemetrexede é administrado antes da carboplatina no Dia 1 dos Ciclos 1-4. Em algumas modalidades, o atezolizumabe e pemetrexede são administrados sequencialmente no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 4. Em algumas modalidades, o atezolizumabe é administrado antes de pemetrexede no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 4. Em algumas modalidades, o atezolizumabe, o pemetrexede e a carboplatina são administrados em seis ciclos de 21 dias, e atezolizumabe e pemetrexede são administrados adicionalmente em ciclos de 21 dias após o Ciclo 6; em que atezolizumabe é administrado a uma dose de

1.200 mg no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias dos Ciclos 1-6, o pemetrexede é administrado a uma dose de 500 mg/m2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para os Ciclos 1-6, e carboplatina é administrada a uma dose suficiente para atingir ASC = 6 mg/ml/min no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias dos Ciclos 1-6, e em que atezolizumabe é ainda administrado a uma dose de 1.200 mg no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 6 e pemetrexede é ainda administrado a uma dose de 500 mg/m2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 4. Em algumas modalidades, o atezolizumabe, pemetrexede e carboplatina são administrados sequencialmente no Dia 1 dos Ciclos 1-6. Em algumas modalidades, o atezolizumabe é administrado antes do pemetrexede e em que pemetrexede é administrado antes da carboplatina no Dia 1 dos Ciclos 1-6. Em algumas modalidades, o atezolizumabe e pemetrexede são administrados sequencialmente no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 6. Em algumas modalidades, atezolizumabe é administrado antes de pemetrexede no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 6. Em algumas modalidades, o atezolizumabe, o pemetrexede e a carboplatina são administrados por via intravenosa.

[22] Em outro aspecto, são fornecidos no presente documento métodos de tratamento de um indivíduo com câncer de pulmão não escamoso de células não pequenas de Estágio IV (NSCLC), que compreendem a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de atezolizumabe, pemetrexede e cisplatina, em que o atezolizumabe é administrado a uma dose de 1.200 mg, o pemetrexede é administrado a uma dose de 500 mg/m2 e a cisplatina é administrada a uma dose de 75 mg/m 2, em que o tratamento estende a sobrevida livre de progressão (SLP) do indivíduo. Em algumas modalidades, o tratamento estende a sobrevida global (SG) do indivíduo. Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a sobrevida livre de progressão (SLP) do indivíduo em pelo menos cerca de 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5 ou 10 meses (incluindo qualquer intervalo entre esses valores). Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a sobrevida livre de progressão (SLP) do indivíduo em pelo menos cerca de 7,6 meses. Em algumas modalidades, o tratamento aumenta o SLP do indivíduo em pelo menos cerca de qualquer um de 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4 meses (incluindo qualquer intervalo entre esses valores), em comparação com um indivíduo tendo câncer de pulmão (como câncer de pulmão de células não pequenas, por exemplo, câncer de pulmão de células não pequenas não escamosas de Estágio IV) que recebeu tratamento com pemetrexede e cisplatina.

Em algumas modalidades, o tratamento estende a sobrevida global (SG) do indivíduo.

Em algumas modalidades, a sobrevida global (SG) é medida como o período de tempo desde o início do tratamento até a morte.

Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a SG do indivíduo em pelo menos cerca de qualquer um de 14, 14,5, 15, 15,5, 16, 16,5,

17, 17,5, 18, 18,5, 19, 19,5 ou 20 meses (incluindo qualquer intervalo entre esses valores). Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a SG do indivíduo em pelo menos cerca de 18,1 meses.

Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a SG do indivíduo em pelo menos cerca de qualquer um de 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5 ou 7 meses (incluindo qualquer intervalo entre esses valores), em comparação a um indivíduo com câncer de pulmão (como câncer de pulmão de células não pequenas, por exemplo,

câncer de pulmão de células não pequenas não escamoso Estágio IV) que recebeu tratamento com pemetrexede e cisplatina.

Em algumas modalidades, o atezolizumabe, pemetrexede e cisplatina são administrados em quatro ciclos de 21 dias, e atezolizumabe e pemetrexede são administrados adicionalmente em ciclos de 21 dias após o Ciclo 4; em que atezolizumabe é administrado a uma dose de 1.200 mg no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias dos Ciclos 1-4, o pemetrexede é administrado a uma dose de 500 mg/m2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para os Ciclos 1-4, e cisplatina é administrada a uma dose de 75 mg/m2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias dos Ciclos 1-4, e em que atezolizumabe é ainda administrado a uma dose de 1.200 mg no Dia 1 de cada 21 dias ciclo para cada ciclo após o Ciclo 4 e pemetrexede é ainda administrado a uma dose de 500 mg/m 2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 4. Em algumas modalidades, o atezolizumabe, pemetrexede e cisplatina são administrados sequencialmente no Dia 1 dos Ciclos 1-4. Em algumas modalidades, o atezolizumabe é administrado antes de pemetrexede, e em que pemetrexede é administrado antes da cisplatina no Dia 1 dos Ciclos 1-4. Em algumas modalidades, o atezolizumabe e pemetrexede são administrados sequencialmente no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 4. Em algumas modalidades, o atezolizumabe é administrado antes de pemetrexede no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 4. Em algumas modalidades, o atezolizumabe, pemetrexede e cisplatina são administrados em seis ciclos de 21 dias, e atezolizumabe e pemetrexede são administrados adicionalmente em ciclos de 21 dias após o Ciclo 6; em que atezolizumabe é administrado a uma dose de

1.200 mg no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias dos Ciclos 1-6, o pemetrexede é administrado a uma dose de 500 mg/m2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para os Ciclos 1-6, e cisplatina é administrada a uma dose de 75 mg/m2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias dos Ciclos 1-6, e em que atezolizumabe é ainda administrado a uma dose de 1.200 mg no Dia 1 de cada 21 dias ciclo para cada ciclo após o Ciclo 6 e pemetrexede é ainda administrado a uma dose de 500 mg/m 2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 6. Em algumas modalidades, o atezolizumabe, pemetrexede e cisplatina são administrados sequencialmente no Dia 1 dos Ciclos 1-6. Em algumas modalidades, o atezolizumabe é administrado antes de pemetrexede, e em que pemetrexede é administrado antes da cisplatina no Dia 1 dos Ciclos 1-6. Em algumas modalidades, o atezolizumabe e pemetrexede são administrados sequencialmente no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo

6. Em algumas modalidades, o atezolizumabe é administrado antes de pemetrexede no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 6.

Em algumas modalidades, o atezolizumabe, o pemetrexede e a cisplatina são administrados por via intravenosa.

[23] Em algumas modalidades, o indivíduo é intocado por tratamento para NSCLC não escamoso de Estágio IV. Em algumas modalidades, o indivíduo é intocado por quimioterapia para NSCLC não escamoso de Estágio IV. Em algumas modalidades, o indivíduo é asiático ou descendente de asiáticos. Em algumas modalidades, o indivíduo tem pelo menos 65 anos de idade. Em algumas modalidades, o indivíduo nunca fumou.

Em algumas modalidades, o indivíduo é alto para PD-L1. Em algumas modalidades, o indivíduo é negativo para PD-L1. Em algumas modalidades, o indivíduo é um ser humano.

[24] Em outro aspecto, são fornecidos kits que compreendem um anticorpo anti-PD-L1 para uso em combinação com um agente antimetabólito e platina para o tratamento de um indivíduo com câncer de pulmão de acordo com um método aqui revelado. Em algumas modalidades, são fornecidos kits que compreendem atezolizumabe para uso em combinação com pemetrexede e carboplatina para o tratamento de um indivíduo com câncer de pulmão de acordo com um método aqui revelado. Em algumas modalidades, são fornecidos kits que compreendem atezolizumabe para uso em combinação com pemetrexede e cisplatina para o tratamento de um indivíduo com câncer de pulmão de acordo com um método aqui revelado.

[25] Em outro aspecto, é fornecida aqui uma composição que compreende um anticorpo anti-PD-L1 para uso em um método de tratamento de câncer de pulmão em um indivíduo, em que o método compreende a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-PD- L1, um antimetabólito e um agente de platina, em que o tratamento estende a sobrevida livre de progressão (SLP) do indivíduo. Em algumas modalidades, o tratamento estende a sobrevida global (SG) do indivíduo. Em algumas modalidades, a composição que compreende o anticorpo anti-PD-L1 é para uso de acordo com um método aqui revelado.

[26] Em outro aspecto, é aqui fornecida uma composição que compreende atezolizumabe para uso em um método de tratamento de câncer de pulmão de células não escamosas de Estágio IV (NSCLC), em que o método compreende a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de atezolizumabe, pemetrexede e carboplatina, em que o atezolizumabe é administrado a uma dose de 1.200 mg, o pemetrexede é administrado a uma dose de 500 mg/m2, e a carboplatina é administrado numa dose suficiente para atingir ASC = 6 mg/ml/min, e em que o tratamento estende a sobrevida livre de progressão (SLP) do indivíduo. Em algumas modalidades, o tratamento estende a sobrevida global (SG) do indivíduo. Em algumas modalidades, a composição é para uso de acordo com um método aqui revelado.

[27] Em outro aspecto, é aqui fornecida uma composição que compreende atezolizumabe para uso em um método de tratamento de câncer de pulmão de células não escamosas de Estágio IV (NSCLC), em que o método compreende a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de atezolizumabe, pemetrexede e cisplatina, em que o atezolizumabe é administrado a uma dose de 1.200 mg, o pemetrexede é administrado a uma dose de 500 mg/m2 e a cisplatina é administrada a uma dose de 75 mg/m2, e em que o tratamento estende a sobrevida livre de progressão (SLP) do indivíduo. Em algumas modalidades, o tratamento estende a sobrevida global (SG) do indivíduo. Em algumas modalidades, a composição é para uso de acordo com um método aqui revelado.

[28] Deve ser entendido que uma, algumas, ou todas as propriedades das diferentes modalidades aqui descritas podem ser combinadas para formar outras modalidades da presente invenção. Estes e outros aspectos da invenção irão se tornar evidentes para um versado na técnica. Estas e outras modalidades da invenção são ainda descritas pela descrição detalhada a seguir.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[29] A Figura 1 fornece um esquema do projeto de estudo do ensaio clínico descrito no Exemplo 1. 578 pacientes foram inscritos. O braço A incluiu 292 pacientes e o braço B incluiu 286 pacientes. Os pacientes do Braço A receberam tratamento até a doença progressiva (PD) ou perda do benefício clínico, e os pacientes do Braço B receberam tratamento até a PD.

[30] A Figura 2 fornece um gráfico de Kaplan-Meier de sobrevida livre de progressão (SLP) de pacientes no Braço A (atezolizumabe + pemetrexede + carboplatina ou cisplatina) vs. Braço B (pemetrexede + carboplatina ou cisplatina).

[31] A Figura 3 fornece um gráfico de Kaplan-Meier de sobrevida global (SG) de pacientes no Braço A (atezolizumabe + pemetrexede + carboplatina ou cisplatina) vs. Braço B (pemetrexede + carboplatina ou cisplatina).

[32] A Figura 4 fornece uma comparação da taxa de resposta global confirmada (ORR) em pacientes no Braço A. vs. Braço B. (CR = resposta completa; CR/PR = resposta completa/resposta parcial; SD = doença estável; PD = doença progressiva.) ORR foi avaliada de acordo com os critérios RECIST v1.1.

[33] A Figura 5A fornece um Forest Plot mostrando análises de subgrupo de SLP em pacientes com vários fatores de risco de linha de base no Braço A (APP) vs. Braço B (PP). (APP = atezolizumabe + pemetrexede + carboplatina ou cisplatina; PP = pemetrexede + carboplatina ou cisplatina).

[34] A Figura 5B fornece um Forest Plot mostrando análises de subgrupo de SLP em pacientes com vários fatores de risco de linha de base no Braço A (APP) vs. Braço B (PP). (APP = atezolizumabe + pemetrexede + carboplatina ou cisplatina; PP = pemetrexede + carboplatina ou cisplatina).

[35] A Figura 6 fornece um Forest Plot mostrando análises de subgrupo de SG em pacientes com vários fatores de risco de linha de base no Braço A (APP) vs. Braço B (PP). (APP = atezolizumabe + pemetrexede + carboplatina ou cisplatina; PP = pemetrexede + carboplatina ou cisplatina).

[36] A Figura 7A fornece um gráfico de Kaplan-Meier de sobrevida livre de progressão (SLP) de pacientes com “PD-L1 alto” no Braço A (atezolizumabe + pemetrexede + carboplatina ou cisplatina) vs. Braço B (pemetrexede + carboplatina ou cisplatina).

[37] A Figura 7B fornece um gráfico de Kaplan-Meier de sobrevida livre de progressão (SLP) de pacientes com “PD-L1 baixo” no Braço A (atezolizumabe + pemetrexede + carboplatina ou cisplatina) vs. Braço B (pemetrexede + carboplatina ou cisplatina).

[38] A Figura 7C é um gráfico de sobrevida livre de progressão (SLP) de pacientes “PD-L1 negativos” no Braço A (atezolizumabe + pemetrexede + carboplatina ou cisplatina) vs. Braço B (pemetrexede + carboplatina ou cisplatina).

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO I. DEFINIÇÕES

[39] Antes de descrever a invenção em detalhes, deve ser entendido que esta invenção não está limitada às composições particulares ou sistemas biológicos que podem, é claro, variar. Deve também ser compreendido que a terminologia usada no presente documento é para o propósito de descrever somente modalidades particulares, e não se destina a ser limitante.

[40] Como usado neste relatório descritivo e nas reivindicações anexas, as formas singulares “um”, “uma” e “o(a)” incluem referentes plurais a menos que o contexto dite claramente o contrário. Assim, por exemplo, a referência a “uma molécula” inclui opcionalmente uma combinação de duas ou mais dessas moléculas e similares.

[41] O termo “cerca de”, como usado no presente documento, se refere à faixa de erro usual para o respectivo valor prontamente conhecido pelo versado na técnica nesse campo técnico. A referência a “cerca de” um valor ou parâmetro no presente documento inclui (e descreve) modalidades que são direcionadas para esse valor ou parâmetro em si.

[42] Entende-se que os aspectos e modalidades da invenção descrita no presente documento incluem “que compreende”, “que consiste” e “que consiste essencialmente em” de aspectos e modalidades.

[43] O termo “antagonista de ligação ao eixo PD-1” é uma molécula que inibe a interação de um parceiro de ligação ao eixo PD-1 com qualquer um ou mais do seu parceiro de ligação, de modo a remover a disfunção de células T, resultante da sinalização sobre o eixo de sinalização PD-1 -com um resultado sendo restaurar ou melhorar a função de células T (por exemplo, proliferação, produção de citocinas, matar célula-alvo). Como usado no presente documento, um antagonista de ligação ao eixo PD-1 inclui um antagonista de ligação a PD-1, um antagonista de ligação a PD-L1 e um antagonista de ligação a PD-L2.

[44] O termo “antagonista de ligação ao PD-1” se refere a uma molécula que diminui, bloqueia, inibe, revoga ou interfere na transdução de sinal resultante da interação do PD-1 com um ou mais de seus parceiros de ligação, tal como PD-L1, PD-L2. Em algumas modalidades, um antagonista de ligação ao PD-1 é uma molécula que inibe a ligação de PD-1 a um ou mais de seus parceiros de ligação. Em um aspecto específico, o antagonista de ligação a PD-1 inibe a ligação de PD-1 a PD-L1 e/ou PD-L2. Por exemplo, antagonistas de ligação a PD-1 incluem anticorpos anti-PD-1, fragmentos de ligação de antígenos dos mesmos, imunoadesinas, proteínas de fusão, oligopeptídeos e outras moléculas que diminuem, bloqueiam, inibem, anulam ou interferem na transdução de sinal que resulta da interação de PD- 1 com PD-L1 e/ou PD-L2.

Em uma modalidade, um antagonista de ligação a PD-1 reduz o sinal co- estimulador negativo mediado por ou através de proteínas de superfície celular expresso em sinalização mediada por linfócitos T por através de PD-1 assim como tornar uma célula T disfuncional menos disfuncional (por exemplo, melhorando as respostas efetoras a reconhecimento de antígeno). Em algumas modalidades, o antagonista de ligação ao PD-1 é um anticorpo anti-PD-1.

Exemplos específicos de antagonistas de ligação ao PD-1 são fornecidos infra.

[45] O termo “antagonista de ligação a PD-L1” se refere a uma molécula que diminui, bloqueia, inibe, revoga ou interfere na transdução de sinal resultante da interação do PD-L1 com um ou mais de seus parceiros de ligação, como PD-1, B7-1. Em algumas modalidades, um antagonista de ligação PD-L1 é uma molécula que inibe a ligação de PD-L1 aos seus parceiros de ligação. Em um aspecto específico, o antagonista de ligação a PD-L1 inibe a ligação da PD-L1 de PD-1 e/ou B7-1. Em algumas modalidades, os antagonistas de ligação a PD-L1 incluem anticorpos anti-PD-L1, fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos, imunoadesinas, proteínas de fusão, oligopeptídeos e outras moléculas que diminuem, bloqueiam, inibem, anulam ou interferem na transdução de sinal que resulta da interação de PD-L1 com um ou mais dos seus parceiros de ligação, como PD-1, B7-1. Em uma modalidade, um antagonista de ligação a PD-L1 reduz o sinal co-estimulador negativo mediado por ou através de proteínas de superfície celular expresso em sinalização mediada por linfócitos T por através de PD-L1 de modo a tornar uma célula T disfuncional menos disfuncional (por exemplo, melhorando as respostas efetoras a reconhecimento de antígeno). Em algumas modalidades, um antagonista de ligação PD-L1 é um anticorpo anti-PD-L1. Exemplos específicos de antagonistas de ligação ao PD-L1 são fornecidos infra.

[46] O termo “antagonista de ligação a PD-L2” se refere a uma molécula que diminui, bloqueia, inibe, revoga ou interfere na transdução de sinal resultante da interação do PD-L2 com um ou mais de seus parceiros de ligação, como PD-1. Em algumas modalidades, um antagonista de ligação ao PD-L2 é uma molécula que inibe a ligação de PD-L2 a um ou mais de seus parceiros de ligação. Em um aspecto específico, o antagonista de ligação PD- L2 inibe a ligação de PD-L2 a PD-1. Em algumas modalidades, os antagonistas de PD-L2 incluem anticorpos anti-PD-L2, fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos, imunoadesinas, proteínas de fusão, oligopeptídeos e outras moléculas que diminuem, bloqueiam, inibem, revogam ou interferem na transdução de sinal resultante da interação de PD-L2 com um ou mais de seus parceiros de ligação, como PD-1. Em uma modalidade, um antagonista de ligação a PD-L2 reduz o sinal co-estimulador negativo mediado por ou através de proteínas de superfície celular expresso em sinalização mediada por linfócitos T por através de PD-L2 assim como tornar uma célula T disfuncional menos disfuncional (por exemplo, melhorando as respostas efetoras a reconhecimento de antígeno). Em algumas modalidades, um antagonista de ligação a PD-L2 é uma imunoadesina.

[47] "Resposta sustentada” se refere ao efeito sustentado na redução do crescimento do tumor após a cessação de um tratamento. Por exemplo, o tamanho do tumor pode permanecer igual ou menor em comparação com o tamanho no início da fase de administração. Em algumas modalidades, a resposta sustentada tem uma duração pelo menos igual à duração do tratamento, pelo menos 1,5X, 2,0X, 2,5X ou 3,0X o período da duração do tratamento.

[48] O termo “formulação farmacêutica” se refere a uma preparação que está em uma tal forma que permite que a atividade biológica de um ingrediente ativo contido na mesma seja eficaz, e que não contém componentes adicionais que são inaceitavelmente tóxicos para um paciente ao qual a formulação seria administrada. Tais formulações são estéreis.

Excipientes “farmaceuticamente aceitáveis” (veículos, aditivos) são aqueles que podem ser razoavelmente administrados a um paciente mamífero para fornecer uma dose eficaz do ingrediente ativo empregado.

[49] Conforme usado no presente documento, o termo “tratamento” se refere à intervenção clínica projetada para alterar o curso natural do indivíduo ou célula sendo tratada durante o curso da patologia clínica. Os efeitos desejáveis do tratamento incluem a diminuição da taxa de progressão da doença, melhoria ou paliação do estado da doença e remissão ou melhora do prognóstico. Por exemplo, um indivíduo é “tratado” com sucesso se um ou mais sintomas associados ao câncer forem mitigados ou eliminados, incluindo, mas não se limitando a, reduzir a proliferação (ou destruição) de células cancerosas, diminuir os sintomas resultantes da doença, aumentar a qualidade de vida de quem sofre da doença, diminuir a dose de outros medicamentos necessários ao tratamento da doença e/ou prolongar a sobrevida dos indivíduos.

[50] Conforme usado no presente documento, “retardar a progressão” de uma doença significa pausar, impedir, atrasar, desacelerar, estabilizar e/ou adiar o desenvolvimento da doença (como câncer). Esse retardamento pode ser de duração variável, dependendo do histórico da doença e/ou do paciente a ser tratado. Como é evidente para um técnico no assunto, um retardamento suficiente ou significativo pode, com efeito, abranger a prevenção, na medida em que o paciente não desenvolve a doença. Por exemplo, um câncer em estágio avançado, como o desenvolvimento de metástases, pode ser retardado.

[51] Uma “quantidade eficaz” é pelo menos a quantidade mínima necessária para efetuar uma melhoria mensurável ou prevenção de um distúrbio particular. Uma quantidade eficaz no presente documento pode variar de acordo com fatores como o estado da doença, idade, sexo e peso do paciente e a capacidade do anticorpo de provocar uma resposta desejada no paciente.

Uma quantidade eficaz é também aquela em que quaisquer efeitos tóxicos ou prejudiciais do tratamento são superados pelos efeitos terapeuticamente benéficos.

Para uso profilático, os resultados benéficos ou desejados incluem resultados como eliminar ou reduzir o risco, diminuir a gravidade ou retardar o início da doença, incluindo sintomas bioquímicos,

histológicos e/ou comportamentais da doença, suas complicações e fenótipos patológicos intermediários que apresentam durante o desenvolvimento da doença.

Para uso terapêutico, os resultados benéficos ou desejados incluem resultados clínicos, como diminuir um ou mais sintomas resultantes da doença,

aumentar a qualidade de vida daqueles que sofrem da doença, diminuir a dose de outros medicamentos necessários para tratar a doença, aperfeiçoar o efeito da outro medicamento, como direcionamento, retardar a progressão da doença e/ou prolongar a sobrevida.

No caso de câncer ou tumor, uma quantidade eficaz do fármaco pode ter o efeito de reduzir o número de células cancerígenas; reduzir o tamanho do tumor; inibir (isto é, desacelerar até certo ponto ou desejavelmente parar) a infiltração de células cancerígenas nos órgãos periféricos; inibir (isto é, desacelerar até certo ponto e desejavelmente parar) a metástase tumoral; inibir até certo ponto o crescimento tumoral; e/ou aliviar até certo ponto um ou mais dos sintomas associados ao distúrbio.

Uma quantidade eficaz pode ser administrada em uma ou mais administrações.

Para os fins desta invenção, uma quantidade eficaz de fármaco, composto ou composição farmacêutica é uma quantidade suficiente para realizar o tratamento profilático ou terapêutico, tanto diretamente ou indiretamente.

Como é entendido no contexto clínico, uma quantidade eficaz de um fármaco, composto ou composição farmacêutica pode ou não ser alcançada em conjunto com outro fármaco, composto ou composição farmacêutica.

Assim, uma

“quantidade eficaz” pode ser considerada no contexto de administrar um ou mais agentes terapêuticos, e um único agente pode ser considerado administrado em uma quantidade eficaz se, em conjunto com um ou mais outros agentes, um resultado desejável puder ser ou é alcançado.

[52] Conforme usado no presente documento, “em conjunto com” se refere à administração de uma modalidade de tratamento além de outra modalidade de tratamento. Como tal, “em conjunto com” se refere à administração de uma modalidade de tratamento antes, durante ou após a administração da outra modalidade de tratamento ao indivíduo.

[53] Um “distúrbio” é qualquer condição que se beneficiaria do tratamento, incluindo, sem limitação, distúrbios ou doenças crônicas e agudas, incluindo aquelas condições patológicas que predispõem o mamífero ao distúrbio em questão.

[54] Os termos “doença proliferativa celular” e “distúrbio proliferativo” se referem a distúrbios que estão associados a algum grau de proliferação celular anormal. Em uma modalidade, o distúrbio de proliferação celular é câncer. Em uma modalidade, o distúrbio proliferativo celular é um tumor.

[55] O termo “tumor”, conforme usado no presente documento, se refere a todo crescimento e proliferação de células neoplásicas, malignas ou benignas, e todas as células e tecidos pré-cancerosos e cancerosos. Os termos “câncer”, “cancerígeno”, “doença proliferativa celular”, “distúrbio proliferativo” e “tumorais” não são mutuamente exclusivos, como referido no presente documento.

[56] Os termos “câncer” e “cancerígeno” se referem ou descrevem a condição fisiológica em mamíferos que é normalmente distinguida por crescimento celular desregulado. Exemplos de câncer incluem, sem limitação, carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma e leucemia ou malignidades linfoides.

Exemplos mais particulares de tais cânceres incluem, sem limitação,

câncer de células escamosas (por exemplo, câncer de células escamosas epiteliais), câncer do pulmão incluindo câncer do pulmão de células pequenas,

câncer de pulmão de células não-pequenas, adenocarcinoma do pulmão e carcinoma escamoso do pulmão, câncer do peritônio, câncer hepatocelular,

câncer gástrico ou do estômago, incluindo o câncer gastrintestinal e o câncer do estroma gastrointestinal, câncer pancreático, glioblastoma, câncer cervical,

câncer do ovário, câncer do fígado, câncer da bexiga, câncer do trato urinário,

hepatoma, câncer da mama, câncer do cólon, câncer retal, câncer colorretal,

carcinoma endometrial ou, carcinoma da glândula salivar, câncer do rim ou renal, câncer da próstata, câncer da vulva, câncer da tireoide, carcinoma hepático, carcinoma anal, carcinoma peniano, melanoma, superficial,

melanoma de espalhamento uterino, melanoma lentigo maligno, melanoma acral lentiginoso, melanoma nodular, mieloma múltiplo e linfoma de células B;

(incluindo linfoma não Hodgkin de baixo grau/folicular (NHL); NHL linfocítico pequeno (SL); NHL de grau intermediário/folicular; NHL difuso de grau intermediário; NHL imunoblástico de alto grau; NHL linfoblástico de alto grau;

NHL de célula pequena não clivada de alto grau; NHL de doença volumosa;

linfoma de célula do manto; linforma relacionado à AIDS; e macroglobulinemia de Waldenstrom);leucemia linfocítica crônica (CLL); leucemia linfoblástica aguda (ALL); leucemia de células pilosas; leucemia mieloblástica crônica; e distúrbio linfoproliferativo pós-transplante (DLPT), bem como proliferação vascular anormal associada a facomatoses, edema (como aquela associada a tumores cerebrais), síndroma de Meigs, câncer de cérebro, bem como de cabeça e pescoço, e metástases associadas.

Em certas modalidades,

cânceres que são susceptíveis de tratamento pelos anticorpos da invenção incluem câncer da mama, câncer colorretal, câncer retal, câncer do pulmão de células não pequenas, glioblastoma, linfoma não-Hodgkin (NHL), câncer de células renais, câncer da próstata, câncer do fígado, câncer pancreático, sarcoma dos tecidos moles, sarcoma de Kaposi, carcinoma carcinoide, câncer da cabeça e pescoço, câncer do ovário, mesotelioma e mieloma múltiplo. Em algumas modalidades, o câncer é selecionado a partir de: câncer do pulmão de pequenas células, glioblastoma, neuroblastomas, melanoma, carcinoma de mama, câncer gástrico, câncer colorretal (CCR) e carcinoma hepatocelular.

[57] O termo “agente citotóxico”, conforme usado no presente documento, se refere a qualquer agente que é prejudicial às células (por exemplo, causa a morte celular, inibe a proliferação ou de outra forma impede uma função celular). Agentes citotóxicos incluem, sem limitação, isótopos radioativos (por exemplo, At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 e isótopos radioativos de Lu); agentes quimioterápicos; agentes inibidores de crescimento; enzimas e fragmentos das mesmas como enzimas nucleolíticas; e toxinas como toxinas de moléculas pequenas ou toxinas enzimaticamente ativas de origem bacteriana, fúngica, vegetal ou animal, incluindo fragmentos e/ou variantes dos mesmos. Os agentes citotóxicos exemplificadores podem ser selecionados dentre agentes anti- microtúbulos, complexos de coordenação de platina, agentes alquilantes, agentes antibióticos, inibidores de topoisomerase II, inibidores, antimetabólitos, inibidores de topoisomerase I, hormônios e análogos hormonais, inibidores da via de transdução de sinal, inibidores da angiogênese de tirosina quinase não receptor, agentes imunoterápicos, agentes pró-apoptóticos, inibidores da LDH- A; inibidores da biossíntese do ácido graxo; inibidores de sinalização do ciclo celular; inibidores de HDAC, os inibidores de proteassoma; e inibidores do metabolismo do câncer. Em uma modalidade, o agente citotóxico é um taxano.

Em uma modalidade, o taxano é paclitaxel ou docetaxel. Em uma modalidade, o agente citotóxico é um composto de platina. Em uma modalidade, o agente citotóxico é um antagonista de EGFR. Em uma modalidade, o antagonista de

EGFR é N-(3-etinilfenil)-6,7-bis(2-metoxietoxi)quinazolin-4-amina (por exemplo, erlotinib). Em uma modalidade, o agente citotóxico é um inibidor de RAF. Em uma modalidade, o inibidor de RAF é um inibidor de BRAF e/ou CRAF. Em uma modalidade, o inibidor de RAF é vemurafenib. Em uma modalidade, o agente citotóxico é um inibidor de PI3K.

[58] “Agente quimioterápico” inclui compostos químicos úteis no tratamento de câncer. Exemplos de agentes quimioterápicos incluem erlotinibe (TARCEVA®, Genentech/OSI Pharm.), Bortezomib (VELCADE®, Millennium Pharm.), Dissulfiram, galato de epigalocatequina, salinosporamida A, carfilzomibe, 17-AAG (geldanamicina, lactato desidrogenase) (LDH-A), fulvestrant (FASLODEX®, AstraZeneca), sunitib (SUTENT®, Pfizer/Sugen), letrozol (FEMARA®, Novartis), mesilato de imatinib (GLEEVEC®, Novartis), finasunato (VATALANIB®, Novartis), ELOXATIN®, Sanofi), 5-FU (5- fluorouracil), leucovorina, Rapamicina (Sirolimus, RAPAMUNE®, Wyeth), Lapatinib (TYKERB®, GSK572016, Glaxo Smith Kline), Lonafamib (SCHAV® 66336), Sorafenib (Bayer Labs), gefitinibe (IRESSA®, AstraZeneca), AG1478, agentes alquilantes, como tiotepa e ciclosfosfamida CYTOXAN®; sulfonatos de alquila, como busulfan, improsulfan e piposulfan; aziridinas como benzodopa, carboquone, meturedopa e uredopa; etileniminas e metilamelaminas incluindo altretamina, trietilenomelamina, trietilenofosforamida, trietilenotiofosforamida e trimetilomelamina; acetogeninas (especialmente bullatacin e bullatacinone); uma camptotecina (incluindo topotecano e irinotecano); briostatina; calistatina; CC-1065 (incluindo seus análogos sintéticos adozelesina, carzelesina e bizelesina); criptoficinas (particularmente criptoficina 1 e criptoficina 8); adrenocorticosteroides (incluindo prednisona e prednisolona); acetato de ciproterona; 5redutases incluindo finasterida e dutasterida); vorinostate, romidepsina, panobinostate, ácido valpróico, mocetinostato dolastatina; aldesleucina, talco duocarmicina (incluindo os análogos sintéticos, KW-2189 e

CB1-TM1); eleuterobina; pancratistatina; uma sarcodictina; espongistatina;

mostardas de nitrogênio, como clorambucil, clomafazina, clorofosfamida,

estramustina, ifosfamida, mecloretamina, cloridrato de óxido de mecloretamina,

melfalano, novembiquina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostarda de uracila; nitrosoureias, como carmustina, clorozotocina, fotemustina,

lomustina, nimustina e ranimnustina; antibióticos, como os antibióticos enediyne (por exemplo, caliqueamicina, especialmente caliqueamicina γ1I e calicheamicina ω1I (Angew Chem.

Intl.

Ed.

Engl. 1994 33: 183 a 186);

dynemicin, incluindo dynemicin A; bisfosfonatos, como clodronato; uma esperamicina; bem como cromóforo de neocarzinostatina e cromóforos de antibiótico enediyne de cromoproteína relacionados), aclacinomicina,

actinomicina, autramicina, azaserina, bleomicinas, cactinomicina, carabicina,

caminomicina, carzinofilina, cromomicinas, dactinomicina, daunorubicina,

detorubicina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, ADRIAMICINA® (doxorubicina),

morfolino-doxorubicina, cianomorfolino-doxorubicina, 2-pirrolino-doxorubicina e desoxidoxorubicina), epirubicina, esorubicina, idarubicina, marcellomicina,

mitomicinas como mitomicina C, ácido micofenólico, nogalamicina,

olivomicinas, peplomicina, porfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorubicina,

streptonigrina, streptozocina, tubercidin, ubenimex, zinostatin, zorubicin;

antimetabólitos como metotrexato e 5-fluorouracil (5-FU); análogos de ácido fólico como denopterin, metotrexato, pteropterin, trimetrexato; análogos de purina como fludarabine, 6-mercaptopurina, tiamiprine, tioguanina; análogos de pirimidina como ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina,

didesoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina; andrógenos como calusterone, dromostanolone propionato, epitiostanol, mepitiostano,

testolactona; anti-adrenais como aminoglutetimida, mitotana, trilostano; reforçador de ácido fólico como ácido frolínico; aceglatona; aldofosfamida glicosida; ácido aminolevulínico; eniluracil; amsacrine; bestrabucil; bisantreno;

edatraxato; defofamina; demecolcina; diaziquona; elfomitina; acetato de eliptínio; uma epotilona; etoglucid; nitrato de gálio; hidroxiureia; lentinan; lonidainina; maitansinoides como maitansina e ansamitocinas; mitoguazona; mitoxantrona; mopidamnol; nitraerina; pentostatina; fenamet; pirarubicina; losoxantrona; ácido podofillínico; 2-etilhidrazida; procarbazina; PSK® complexo de polissacarídeo (JHS Natural Products, Eugene, Oreg.); razoxana; rizoxina; sizofuran; spirogermânio; ácido tenuazônico; triaziquona; 2,2’,2’’- triclorotrietilamina; tricotecenos (especialmente toxina T-2, verracurina A, roridina A e anguidina); uretano; vindesine; dacarbazina; mannomustina; mitobronitol; mitolactol; pipobroman; gacitosina; arabinósido (“Ara-C”); ciclofosfamida; tiotepa; taxoides, por exemplo, TAXOL (paclitaxel; Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), ABRAXANE® (livre de Cremophor), formulações de nanopartículas de paclitaxel manipuladas com albumina (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Ill.), e TAXOTERE® (docetaxel, doxetaxel; Sanofi-Aventis); cloranmbucil; GEMZAR® (gencitabina); 6-tioguanina; mercaptopurina; metotrexato; análogos de platina como cisplatina e carboplatina; vinblastina; etoposídeo (VP-16); ifosfamida; mitoxantrona; vincristina; NAVELBINE® (vinorelbina); novantrona; teniposida; edatrexato; daunomicina; aminopterina; capecitabina (XELODA®); ibandronato; CPT-11; inibidor de topoisomerase RFS 2000; difluorometilornitina (DMFO); retinoides como ácido retinoico; e sais, ácidos e derivados farmaceuticamente aceitáveis de qualquer um dos citados acima.

[59] Agente quimioterápico também inclui (i) agentes anti- hormonais que atuam para regular ou inibir a ação hormonal em tumores como anti-estrogênios e moduladores de receptores de estrogênio seletivos (SERMs), incluindo, por exemplo, tamoxifeno (incluindo NOLVADEX®; citrato de tamoxifeno), raloxifeno, droloxifeno, iodoxifeno, 4-hidroxitamoxifeno, trioxifeno, ceoxifeno, LY117018, onapristona, e FARESTON® (citrato de toremifina); (ii) inibidores de aromatase que inibem a enzima aromatase, que regulam a produção de estrogênio nas glândulas suprarrenais, como, por exemplo, 4(5) imidazois, aminoglutetimida, MEGASE® (acetato de megestrol), AROMASIN® (exemestano; Pfizer), formestanie, fadrozol, RIVISOR® (vorozol), FEMARA® (letrozol; Novartis), e ARIMIDEX® (anastrozol; AstraZeneca); (iii) anti-androgênios como flutamida, nilutamida, bicalutamida, leuprolida e goserelina; buserelina, tripterelina, acetato de medroxiprogesterona, dietilestilbestrol, premarina, fluoximesterona, ácido all-transretionico, fenretinida, bem como troxacitabina (um análogo 1,3-dioxolano citosina nucleosídeo); (iv) inibidores da proteína quinase; (v) inibidores de lipídeo quinase; (vi) oligonucleotídeos antissenso, particularmente aqueles que inibem a expressão de genes em vias de sinalização implicadas em proliferação celular anormal, como, por exemplo, PKC-alfa, Ralf e H-Ras; (vii) ribozimas como inibidores de expressão de VEGF (por exemplo, ANGIOZYME®) e inibidores da expressão de HER2; (viii) vacinas, como vacinas de terapia genética, por exemplo, ALLOVECTIN®, LEUVECTIN® e VAXID®; PROLEUKIN®, rIL-2; um inibidor da topoisomerase 1, como LURTOTECAN®; ABARELIX® rmRH; e (ix) sais, ácidos e derivados farmaceuticamente aceitáveis de qualquer um dos citados acima.

[60] Agente quimioterápico também inclui anticorpos, como alemtuzumab (Campath), bevacizumab (AVASTIN®, Genentech); cetuximab (ERBITUX®, Imclone); panitumumab (VECTIBIX®, Amgen), rituximab (RITUXAN®, Genentech/Biogen Idec), pertuzumab (OMNITARG®, 2C4, Genentech), trastuzumab (HERCEPTIN®, Genentech), tositumomab (Bexxar, Corixia), o conjugado de anticorpo e fármaco, gemtuzumab ozogamicin (MYLOTARG®, Wyeth). Anticorpos monoclonais humanizados adicionais com potencial terapêutico como agentes em combinação com os compostos da invenção incluem: apolizumab, aselizumab, atlizumab, bapineuzumab,

bivatuzumab mertansine, cantuzumab mertansine, cedelizumab, certolizumab pegol, cidfusituzumab, cidtuzumab, daclizumab, eculizumab, efalizumab, epratuzumab, erlizumab, felvizumab, fontolizumab, gemtuzumab ozogamicin, inotuzumab ozogamicin, ipilimumab, labetuzumab, lintuzumab, matuzumab, mepolizumab, motavizumab, motovizumab, natalizumab, nimotuzumab, nolovizumab, numavizumab, ocrelizumab, omalizumab, palivizumab, pascolizumab, pecfusituzumab, pectuzumab, pexelizumab, ralivizumab, ranibizumab, reslivizumab, reslizumab, resyvizumab, rovelizumab, ruplizumab, sibrotuzumab, siplizumab, sontuzumab, tacatuzumab tetraxetan, tadocizumab, talizumab, tefibazumab, tocilizumab, toralizumab, tucotuzumab celmoleucina, tucusituzumab, umavizumab, urtoxazumab, ustekinumab, visilizumab, e a anti– interleucina-12 (ABT-874/J695, Wyeth Research and Abbott Laboratories) que é um anticorpo IgG1 λ completo de sequência exclusivamente humana recombinante geneticamente modificado para reconhecer a proteína interleucina-12 p40.

[61] Agente quimioterápico também inclui os “inibidores de EGFR”, que se refere aos compostos que se ligam ou de outra forma interagem diretamente com EGFR, e previnem ou reduzem a sua atividade de sinalização, e é alternativamente referido como um “antagonista de EGFR”.

Exemplos de tais agentes incluem anticorpos e moléculas pequenas que se ligam a EGFR. Exemplos de anticorpos que se ligam a EGFR incluem MAb 579 (ATCC CRL HB 8506), MAb 455 (ATCC CRL HB8507), MAb 225 (ATCC CRL 8508), MAb 528 (ATCC CRL 8509) (consulte Patente no US 4.943.533, Mendelsohn et al.) e variantes dos mesmos, como 225 quimerizado (C225 ou Cetuximab; ERBUTIX) e 225 humano com novo formato (H225) (consulte, WO 96/40210, Imclone Systems Inc.); IMC-11F8, um anticorpo direcionado a EGFR totalmente humano (Imclone); anticorpos que se ligam a EGFR mutante de tipo II (Patente no US 5.212.290); anticorpos humanizados e quiméricos que se ligam a EGFR como descrito na Patente no US 5.891.996; e anticorpos humanos que se ligam a EGFR, como ABX-EGF ou Panitumumab (consulte WO98/50433, Abgenix/Amgen); EMD 55900 (Stragliotto et al. Eur. J. Cancer 32A: 636 a 640 (1996)); EMD7200 (matuzumab) um anticorpo EGFR humanizado dirigido contra EGFR que compete com EGF e TGF-alfa pela ligação de EGFR (EMD/Merck); anticorpo EGFR humano, HuMax-EGFR (GenMab); anticorpos totalmente humanos conhecidos como E1.1, E2.4, E2.5, E6.2, E6.4, E2.11, E6.3 e E7.6.3 e descritos no documento no US 6.235.883; MDX-447 (Medarex Inc); e mAb 806 ou mAb 806 humanizado (Johns et al., J.

Biol. Chem. 279 (29): 30.375 a 30.384 (2004)). O anticorpo anti-EGFR pode ser conjugado com um agente citotóxico, assim, gerando um imunoconjugado (consulte, por exemplo, EP659439A2, Merck Patent GmbH). Os antagonistas de EGFR incluem pequenas moléculas, como compostos descritos nas patentes no US: 5.616.582, 5.457.105, 5.475.001, 5.654.307, 5.679.683,

6.084.095, 6.265.410, 6.455.534, 6.521.620, 6.596.726, 6.713.484, 5.770.599,

6.140.332, 5.866.572, 6.399.602, 6.344.459, 6.602.863, 6.391.874, 6.344.455,

5.760.041, 6.002.008, e 5.747.498, bem como as seguintes publicações PCT: WO98/14451, WO98/50038, WO99/09016 e WO99/24037. Antagonistas de EGFR de molécula pequena particulares incluem OSI-774 (CP-358774, erlotinib, TARCEVA Genentech/OSI Pharmaceuticals); PD 183805 (CI 1033, 2-propenamida, N-[4-[(3-cloro-4-fluorofenil)amino]-7-[3-(4-morfolinil)propoxi]-6- quinazolinil]-, di-cloridrato, Pfizer Inc.); ZD1839, gefitinib (IRESSA®) 4-(3’- Cloro-4’-fluoroanilino)-7-metoxi-6-(3-morfolinopropoxi)quinazolina, AstraZeneca); ZM 105180 ((6-amino-4-(3-metilfenil-amino)-quinazolina, Zeneca); BIBX-1382 (N8-(3-cloro-4-fluoro-fenil)-N2-(1-metil-piperidin-4-il)- pirimido[5,4-d]pirimidina-2,8-diamina, Boehringer Ingelheim); PKI-166 ((R)-4-[4- [(1-feniletil)amino]-1H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-6-il]-fenol); (R)-6-(4-hidroxifenil)-4- [(1-feniletil)amino]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina); CL-387785 (N-[4-[(3-

bromofenil)amino]-6-quinazolinil]-2-butinamida); EKB-569 (N-[4-[(3-cloro-4- fluorofenil)amino]-3-ciano-7-etoxi-6-quinolinil]-4-(dimetilamino)-2-butenamida) (Wyeth); AG1478 (Pfizer); AG1571 (SU 5271; Pfizer); inibidores dual de tirosina quinase EGFR/HER2 como lapatinib (TYKERB®, GSK572016 ou N-[3-cloro-4- [(3 fluorofenil)metoxi]fenil]-6[5[[[2metilsulfonil)etil]amino]metil]-2-furanil]-4- quinazolinamina).

[62] Os agentes quimioterápicos incluem “inibidores de tirosina quinase”, incluindo os fármacos direcionados para EGFR notados no parágrafo anterior; inibidor de tirosina quinase HER2 pequena molécula como TAK165 disponível a partir de Takeda; CP-724,714, um inibidor seletivo oral de ErbB2 receptor tirosine quinase (Pfizer e OSI); inibidores dual-HER como EKB-569 (disponível à Wyeth) que preferencialmente se ligam a EGFR, mas inibem células que sobre-expressam HER2 e EGFR; lapatinib (GSK572016; disponível junto à Glaxo-SmithKline), um inibidor de tirosina quinase HER2 e EGFR; PKI- 166 (disponível junto à Novartis); inibidores pan-HER como canertinib (CI-1033; Pharmacia); inibidores de Raf-1 como agente antissenso ISIS-5132 disponível de ISIS Pharmaceuticals que inibe sinalização de Raf-1; inibidores de TK direcionado a não HER como mesilato de imatinib (GLEEVEC®, disponível junto à Glaxo SmithKline); inibidores de tirosina quinase multi-direcionados como sunitinib (SUTENT®, disponível junto à Pfizer); inibidores de tirosina quinase VEGF receptor como vatalanib (PTK787/ZK222584, disponível junto à Novartis/Schering AG); inibidor de quinase I regulado por MAPK extracelular CI-1040 (disponível junto à Pharmacia); quinazolinas, como PD 153035,4-(3- cloroanilino) quinazolina; piridopirimidinas; pirimidopirimidinas; pirrolopirimidinas, como CGP 59326, CGP 60261 e CGP 62706; pirazolopirimidinas, 4-(fenilamino)-7H-pirrolo[2,3-d] pirimidinas; curcumina (diferuloil metano, 4,5-bis (4-fluoroanilino)ftalimida); frações nitrotiofeno contendo tirfostinas; PD-0183805 (Warner-Lamber); moléculas antissenso (por exemplo, aquelas que se ligam ao ácido nucleico que codifica HER); quinoxalinas (Patente no US 5.804.396); trifostinas (Patente no US 5.804.396); ZD6474 (Astra Zeneca); PTK-787 (Novartis/Schering AG); inibidores de pan- HER como CI-1033 (Pfizer); Affinitac (ISIS 3521; Isis/Lilly); mesilato de imatinib (GLEEVEC®); PKI 166 (Novartis); GW2016 (Glaxo SmithKline); CI-1033 (Pfizer); EKB-569 (Wyeth); Semaxinib (Pfizer); ZD6474 (AstraZeneca); PTK- 787 (Novartis/Schering AG); INC-1C11 (Imclone), rapamicina (sirolimus, RAPAMUNE®); ou como descrito em qualquer uma das seguintes publicações de patente: Patente no US 5.804.396; WO 1999/09016 (American Cyanamid); WO 1998/43960 (American Cyanamid); WO 1997/38983 (Warner Lambert); WO 1999/06378 (Warner Lambert); WO 1999/06396 (Warner Lambert); WO 1996/30347 (Pfizer, Inc); WO 1996/33978 (Zeneca); WO 1996/3397 (Zeneca) e WO 1996/33980 (Zeneca).

[63] Os agentes quimioterápicos incluem dexametasona, interferons, colchicina, metoprina, ciclosporina, anfotericina, metronidazol, alemtuzumab, alitretinoína, alopurinol, amifostina, trióxido de arsênio, asparaginase, BCG vivo, bevacuzimab, bexaroteno, cladribina, clofarabina, darbepoetina alfa, denileucina, dexrazoxano, a epoetina alfa, elotinib, filgrastim, acetato de histrelina, tiuxetano, interferon alfa-2a, interferon alfa-2b, lenalidomida, levamisol, mesna, metoxsalen, nandrolona, nelarabina, nofetumomab, oprelvekin, palifermina, pamidronato, pegademase, pegaspargase, pegfilgrastim, pemetrexede dissódico, plicamicina, porfímero de sódio, quinacrina, rasburicase, sargramostim, temozolomida, VM-26, 6-TG, toremifeno, tretinoína, ATRA, valrubicina, zoledronato, e ácido zoledrônico, e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

[64] Os agentes quimioterapêuticos também incluem hidrocortisona, acetato de hidrocortisona, acetato de cortisona, pivalato de tixocortol, acetonido de triancinolona, álcool de triancinolona, mometasona,

amcinonida, budesonida, desonida, fluocinonida, acetonido de fluocinolona,

acetonido de triancinolona, álcool de triancinolona, mometasona, amcinonida,

budesonida, desonida, fluocinonida, acetonida de fluocinolona, betametasona,

fosfato de sódio, fosortasona, fosfato de sódio, betaxetassona, fosortasona de sódio, betaxethasona, fosortasona de sódio, fosortassona-desidrocametasona,

betametasona de sódio, fosortametasona de 17-butirato, hidrocortisona-17-

valerato, dipropionato de aclometasona, valerato de betametasona,

dipropionato de betametasona, prednicarbato, clobetasona-17-butirato,

clobetasol-17-propionato, caproato de fluocortolona, pivalato de fluocortolona e acetato de fluprideno; peptídeos antiinflamatórios imunosseletivos (ImSAIDs),

como fenilalanina-glutamina-glicina (FEG) e sua forma D-isomérica (feG)

(IMULAN BioTherapeutics, LLC); medicamentos anti-reumáticos, como azatioprina, ciclosporina (ciclosporina A), D-penicilamina, sais de ouro,

hidroxicloroquina, leflunomideminociclina, sulfasalazina, bloqueadores do fator de necrose tumoral alfa (TNFα), como etanercept (Enbrel), influmabimab

(Remicade)), certolizumabe pegol (Cimzia), golimumab (Simponi),

bloqueadores de interleucina 1 (IL-1), como anakinra (Kineret), bloqueadores de coestimulação de células T, como abatacepte (Orencia), bloqueadores de interleucina 6 (IL-6), como tocilizumabe (ACTEMERA®); Bloqueadores de interleucina 13 (IL-13), como lebrikizumab; Bloqueadores de interferon alfa

(IFN), como Rontalizumab; Bloqueadores de integrina Beta 7, como rhuMAb

Beta7; Bloqueadores da via de IgE, como Anti-M1 prime; LTa3 homotrimérico segregado e bloqueadores do heterotrímero LTa1/β2 ligado à membrana, como anti-linfotoxina alfa (LTa); isótopos radioativos (por exemplo, At211, I131, I125,

Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 e isótopos radioativos de Lu);

agentes de investigação diversos, como tioplatina, PS-341, fenilbutirato, ET-18- OCH3 ou inibidores da farnesil transferase (L-739749, L-744832); polifenóis,

como quercetina, resveratrol, piceatanol, galato de epigalocatequina,

teaflavinas, flavonoides, procianidinas, ácido betulínico e derivados dos mesmos; inibidores de autofagia, como cloroquina; delta-9-tetra-hidrocanabinol (dronabinol, MARINOL®); beta-lapachona; lapachol; colchicina; ácido betulínico; acetilcamptotecina, escopolectina e 9- aminocamptotecina); podofilotoxina; tegafur (UFTORAL®); bexaroteno (TARGRETIN®); bisfosfonatos, como clodronato (por exemplo, BONEFOS® ou OSTAC®), etidronato (DIDROCAL®), NE-58095, ácido zoledrônico/zoledronato (ZOMETA®), alendronato (FOSAMAX®), pamidronato (AREDIA®), tiludronato (SKELID®), ou risedronato (ACTONEL®); e receptor do fator de crescimento epidérmico (EGF-R); vacinas como a vacina THERATOPE®; perifosina, inibidor de COX-2 (por exemplo, celecoxib ou etoricoxib), inibidor de proteossoma (por exemplo, PS341); CCI-779; tipifarnib (R11577); orafenib, ABT510; inibidor de Bcl-2, como oblimersen de sódio (GENASENSE®); pixantrona; inibidores da farnesiltransferase, como lonafarnib (SCH 6636, SARASARTM); e sais, ácidos ou derivados farmaceuticamente aceitáveis de qualquer um dos citados acima; bem como combinações de dois ou mais dos citados acima, como CHOP, uma abreviatura para uma terapia combinada de ciclofosfamida, doxorrubicina, vincristina e prednisolona; e FOLFOX, uma abreviatura para um regime de tratamento com oxaliplatina (ELOXATINTM) combinado com 5-FU e leucovorina.

[65] Os agentes quimioterápicos também incluem fármacos anti-inflamatórios não esteroides com efeitos analgésicos, antipiréticos e anti- inflamatórios. NSAIDs incluem inibidores não seletivos da enzima ciclo- oxigenase. Os exemplos específicos de NSAIDs incluem aspirina, derivados do ácido propiônico, como ibuprofeno, fenoprofeno, cetoprofeno, flurbiprofeno, oxaprozina e naproxeno, derivados do ácido acético, como indometacina, sulindac, etodolac, diclofenac, derivados de ácidos enólicos, como piroxicam, meloxicam, tenoxicam, droxicam, lornoxicam e isoxicam, derivados do ácido fenâmico, como ácido mefenâmico, ácido meclofenâmico, ácido flufenâmico, ácido tolfenâmico, e inibidores COX-2 como celecoxib, etoricoxib, lumiracoxib, parecoxib, rofecoxib, rofecoxib, e valdecoxib. NSAIDs podem ser indicados para o alívio sintomático de condições como artrite reumatoide, osteoartrite, artropatias inflamatórias, espondilite anquilosante, artrite psoriática, síndrome de Reiter, artrite gotosa aguda, dismenorreia, dor óssea metastática, dor de cabeça e enxaqueca, dor pós-operatória, dor ligeira a moderada devido a inflamação e lesão dos tecidos, pirexia, íleo e cólica renal.

[66] Um “agente inibidor de crescimento”, quando usado no presente documento, se refere a um composto ou composição que inibe o crescimento de uma célula in vitro ou in vivo. Em uma modalidade, o agente inibidor de crescimento é um anticorpo inibidor de crescimento que previne ou reduz a proliferação de uma célula que expressa um antígeno ao qual o anticorpo se liga. Em outra modalidade, o agente inibidor de crescimento pode ser um que reduz significativamente a porcentagem de células em fase S.

Exemplos de agentes inibidores do crescimento incluem agentes que bloqueiam a progressão do ciclo celular (em um local diferente da fase S), como agentes que induzem a detenção de G1 e a detenção da fase M.

Bloqueadores da fase M clássicos incluem as vincas (vincristina e vinblastina), taxanos e inibidores da topoisomerase II como doxorrubicina, epirrubicina, daunorrubicina, etoposido e bleomicina. Os agentes que detêm G1 também extravasam para a detenção da fase S, por exemplo, agentes alquilantes de DNA, como tamoxifeno, prednisona, dacarbazina, mecloretamina, cisplatina, metotrexato, 5-fluorouracila e ara-C. Informações adicionais podem ser encontradas em Mendelsohn e Israel, eds., The Molecular Basis of Cancer, Capítulo 1, intitulado “Cell cycle regulation, oncogenes, and antineoplastic drugs” por Murakami et al. (W.B. Saunders, Filadélfia, EUA, 1995), por exemplo, página 13. Os taxanos (paclitaxel e docetaxel) são fármacos anticâncer derivados a partir da árvore de teixo. O docetaxel (TAXOTERE®, Rhone-Poulenc Rorer), derivado do teixo europeu, é um análogo semissintético do paclitaxel (TAXOL®, Bristol-Myers Squibb). Paclitaxel e docetaxel promovem a montagem de microtúbulos a partir de dímeros de tubulina e estabilizam os microtúbulos por prevenção da despolimerização, o que resulta na inibição da mitose nas células.

[67] Por “terapia de radiação” entende-se o uso de raios gama direcionados ou raios beta para induzir danos suficientes a uma célula de modo a limitar sua capacidade de funcionar normalmente ou de destruir a célula por completo. Será apreciado que haverá muitas maneiras conhecidas na técnica para determinar a dosagem e a duração do tratamento. Os tratamentos típicos são dados como uma administração única e as dosagens típicas variam de 10 a 200 unidades (Grays) por dia.

[68] Um “sujeito” ou um “indivíduo” para fins de tratamento se refere a qualquer animal classificado como um mamífero, incluindo seres humanos, animais domésticos e de fazenda, zoológico, esportes, ou animais de estimação, como cães, cavalos, gatos, vacas, etc. De preferência, o mamífero é um ser humano.

[69] O termo “anticorpo” é usado no presente documento no sentido mais amplo e abrange anticorpos monoclonais (incluindo anticorpos policlonais de comprimento total), anticorpos policlonais, anticorpos multiespecíficos (por exemplo, anticorpos biespecíficos), e fragmentos de anticorpos, contanto que exibam a atividade de ligação ao antígeno desejada.

[70] Um anticorpo “isolado” é aquele que foi identificado e separado e/ou recuperado de um componente de seu ambiente natural. Os componentes contaminantes de seu ambiente natural são materiais que interfeririam na pesquisa, no diagnóstico ou no uso terapêutico do anticorpo e podem incluir enzimas, hormônios e outros solutos proteicos ou não proteicos.

Em algumas modalidades, um anticorpo é purificado (1) para mais de 95% em peso do anticorpo conforme determinado, por exemplo, pelo método de Lowry, e em algumas modalidades, para mais de 99% em peso; (2) em um grau suficiente para obter pelo menos 15 resíduos da sequência de aminoácidos N- terminal ou interna pelo uso de, por exemplo, um sequenciador de copo giratório, ou (3) para homogeneidade por SDS-PAGE sob condições redutoras ou não redutoras usando, por exemplo, azul de Coomassie ou coloração de prata. O anticorpo isolado inclui o anticorpo in situ nas células recombinantes, uma vez que pelo menos um componente do ambiente natural do anticorpo não estará presente. Normalmente, no entanto, o anticorpo isolado será preparado por pelo menos uma etapa de purificação.

[71] “Anticorpos nativos” são geralmente glicoproteínas heterotetraméricas de cerca de 150.000 daltons, compostas por duas cadeias leves (L) idênticas e duas cadeias pesadas (H) idênticas. Cade cadeia leve está ligada a uma cadeia pesada por uma ligação dissulfeto covalente, enquanto o número de ligações dissulfeto varia entre as cadeias pesadas de diferentes isotipos de imunoglobulina. Cada cadeia pesada e leve também tem pontes dissulfeto intracadeia regularmente espaçadas. Cade cadeia pesada tem em uma extremidade um domínio variável (VH) seguido por uma série de domínios constantes. Cade cadeia leve tem um domínio variável em uma extremidade (VL) e um domínio constante em sua outra extremidade; o domínio constante de cadeia leve está alinhado com o primeiro domínio constante de cadeia pesada e o domínio variável de cadeia leve está alinhado com o domínio variável de cadeia pesada. Acredita-se que resíduos de aminoácidos particulares formem uma interface entre os domínios variáveis da cadeia leve e da cadeia pesada.

[72] O termo “domínio constante” se refere à porção de uma molécula de imunoglobulina que tem uma sequência de aminoácidos mais conservada em relação à outra porção da imunoglobulina, o domínio variável, que contém o sítio de ligação ao antígeno. O domínio constante contém os domínios CH1, CH2 e CH3 (coletivamente, CH) de cadeia pesada e o domínio CHL (ou CL) de cadeia leve.

[73] A “região variável” ou “domínio variável” de um anticorpo se refere aos domínios amino-terminais da cadeia pesada ou leve do anticorpo.

O domínio variável da cadeia pesada pode ser referido como “VH”. O domínio variável da cadeia leve pode ser referido como “VL”. Esses domínios são geralmente as partes mais variáveis de um anticorpo e contêm os sítios de ligação ao antígeno.

[74] O termo “variável” se refere ao fato de que certas porções dos domínios variáveis diferem extensivamente na sequência entre os anticorpos e são usadas na ligação e especificidade de cada anticorpo particular para seu antígeno particular. No entanto, a variabilidade não é uniformemente distribuída pelos domínios variáveis de anticorpos. Ela está concentrada em três segmentos denominados regiões hipervariáveis (HVRs), tanto nos domínios variáveis de cadeia leve como de cadeia pesada. As porções mais conservadas de domínios variáveis são chamadas de regiões framework (FR). Os domínios variáveis das cadeias pesada e leve nativas compreendem, cada um, quatro regiões FR, em grande parte adotando uma configuração de beta-folha, conectada por três HVRs, que formam laços de conexão e, em alguns casos, formando parte da estrutura de beta-folha. As HVRs em cada cadeia são mantidas juntas em estreita proximidade pelas regiões FR e, com as HVRs da outra cadeia, contribuem para a formação do sítio de ligação ao antígeno de anticorpos (consulte Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)). Os domínios constantes não estão envolvidos diretamente na ligação de um anticorpo a um antígeno, mas exibem várias funções efetoras, como a participação do anticorpo na toxicidade celular dependente de anticorpo.

[75] As “cadeias leves” de anticorpos (imunoglobulinas) de qualquer espécie de mamífero pode ser atribuída a um de dois tipos evidentemente distintos, denominados kappa (“κ”) e lambda (“λ”), com base na sequência de aminoácidos dos seus domínios constantes.

[76] O termo “isotipo” ou “subclasse” de IgG, conforme usado no presente documento, significa qualquer uma das subclasses de imunoglobulinas definidas pelas características químicas e antigênicas de suas regiões constantes.

[77] Dependendo das sequências de aminoácidos dos domínios constantes de suas cadeias pesadas, anticorpos (imunoglobulinas) podem ser atribuídos a diferentes classes ou isotipos. Existem cinco classes principais de imunoglobulinas: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, e vários destes podem ser ainda divididos em subclasses (isotipos), por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2. Os domínios constantes de cadeia pesada que correspondem às diferentes classes de imunoglobulinas são chamados α, γ, ε, γ e µ, respectivamente. As estruturas de subunidades e configurações tridimensionais de diferentes classes de imunoglobulinas são bem conhecidas e geralmente descritas em, por exemplo, Abbas et al., Cellular and Mol.

Immunology, 4ª ed. (W.B. Saunders, Co., 2000). Um anticorpo pode ser parte de uma molécula de fusão maior, formada por associação covalente ou não covalente do anticorpo com uma ou mais outras proteínas ou peptídeos.

[78] Os termos “anticorpo de comprimento total”, “anticorpo intacto” e “anticorpo inteiro” são usados no presente documento de forma intercambiável para se referirem a um anticorpo em sua forma substancialmente intacta, e não fragmentos de anticorpo, conforme definido abaixo. Os termos se referem particularmente a um anticorpo com cadeias pesadas que contêm uma região Fc.

[79] Um “anticorpo nu” para os propósitos do presente documento é um anticorpo que não é conjugado a uma parte citotóxica ou radiomarcador.

[80] "Fragmentos de anticorpos” compreendem uma porção de um anticorpo intacto, de preferência, que compreende a região de ligação ao antígeno do mesmo. Em algumas modalidades, o fragmento de anticorpo descrito no presente documento é um fragmento de ligação ao antígeno.

Exemplos de fragmentos de anticorpo incluem fragmentos Fab, Fab', F(ab')2 e Fv; diacorpos; anticorpos lineares; moléculas de anticorpos de cadeia simples; e anticorpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticorpos.

[81] A digestão de anticorpos com papaína produz dois fragmentos de ligação ao antígeno idênticos, chamados fragmentos “Fab”, cada um com um único sítio de ligação ao antígeno e um fragmento “Fc” residual, cujo nome reflete sua capacidade de cristalizar prontamente. O tratamento com pepsina produz um fragmento F(ab')2 que tem dois sítios de combinação de antígeno e ainda tem a capacidade de reticular o antígeno.

[82] “Fv” é o fragmento mínimo de anticorpo que contém um sítio completo de ligação ao antígeno. Em uma modalidade, uma espécie de Fv de duas cadeias consiste em um dímero de um domínio variável de cadeia pesada e um de cadeia leve em associação estreita não covalente. Em uma espécie de Fv de cadeia única (scFv), um domínio variável da cadeia pesada e um da cadeia leve podem ser covalentemente ligados por um ligante de peptídeo flexível, de modo que as cadeias leve e pesada possam se associar em uma estrutura “dimérica” análoga àquela de uma espécie de Fv de duas cadeias. É nesta configuração que as três HVRs de cada domínio variável interagem para definir um local de ligação ao antígeno na superfície do dímero VH-VL. Coletivamente, as seis HVRs conferem especificidade de ligação ao antígeno para o anticorpo. No entanto, mesmo um único domínio variável (ou metade de um Fv compreendendo somente três CDRs específicas para um antígeno) tem a capacidade de reconhecer e se ligar ao antígeno, embora com uma afinidade mais baixa do que todo o sítio de ligação.

[83] O fragmento Fab contém os domínios variáveis de cadeia pesada e leve e também contém o domínio constante de cadeia leve e o primeiro domínio constante (CH1) de cadeia pesada. Os fragmentos Fab’ diferem dos fragmentos Fab pela adição de alguns resíduos no terminal carboxila do domínio CH1 da cadeia pesada, incluindo uma ou mais cisteínas da região de dobradiça do anticorpo. Fab’-SH são fragmentos Fab’ em que o resíduo (ou resíduos) de cisteína dos domínios constantes contém um grupo tiol livre. Os fragmentos de anticorpo F(ab')2 foram originalmente produzidos como pares de fragmentos Fab’ que têm cisteínas de dobradiça entre os mesmos. Outros acoplamentos químicos de fragmentos de anticorpos também são conhecidos.

[84] Fragmentos de anticorpo “Fv de cadeia simples” ou “scFv” compreendem os domínios VH e VL do anticorpo, em que esses domínios estão presentes em uma cadeia de polipeptídeo simples. Em geral, o polipeptídeo scFv compreende ainda um ligante de polipeptídeo entre os domínios VH e VL que permite que o scFv forme a estrutura desejada para ligação ao antígeno. Para uma revisão de scFv, consulte, por exemplo, Pluckthün, em The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg e Moore eds., (Springer-Verlag, Nova York, 1994), páginas 269 a

315.

[85] O termo “diacorpos” se refere a fragmentos de anticorpos com dois sítios de ligação ao antígeno, cujos fragmentos compreendem um domínio variável da cadeia pesada (VH) conectado a um domínio variável da cadeia leve (VL) na mesma cadeia de polipeptídeo (VH-VL). Ao usar um ligante que é muito curto para permitir o emparelhamento entre os dois domínios na mesma cadeia, os domínios são forçados a emparelhar com os domínios complementares de outra cadeia e criar dois locais de ligação ao antígeno.

Diacorpos podem ser bivalentes ou biespecíficos. Diacorpos são descritos mais detalhadamente, por exemplo, nos documentos EP 404.097; WO 1993/01161; Hudson et al., Nat. Med. 9:129 a 134 (2003); e Hollinger et al., Proc. Natl. Acad.

Sci. USA, 90:6.444 a 6.448 (1993). Triacorpos e tetracorpos também são descritos em Hudson et al., Nat. Med., 9:129 a 134 (2003).

[86] O termo “anticorpo monoclonal”, como usado no presente documento, se refere a um anticorpo obtido a partir de uma população de anticorpos substancialmente homogêneos, ou seja, os anticorpos individuais que compreendem a população são idênticos, exceto para possíveis mutações de ocorrência natural que podem estar presentes em quantidades menores.

Assim, o modificador “monoclonal” indica o caráter do anticorpo como não sendo uma mistura de anticorpos discretos. Em certas modalidades, tal anticorpo monoclonal inclui normalmente um anticorpo compreendendo uma sequência de polipeptídeo que se liga a um alvo, em que a sequência de polipeptídeo de ligação ao alvo foi obtida por um processo que inclui a seleção de uma única sequência de polipeptídeo de ligação ao alvo a partir de uma pluralidade de sequências de polipeptídeo. Por exemplo, o processo de seleção pode ser a seleção de um clone único de uma pluralidade de clones, tais como um agrupamento de clones de hibridoma, clones de fago ou clones de DNA recombinante. Deve ser entendido que uma sequência de ligação ao alvo selecionada pode ser ainda alterada, por exemplo, para melhorar a afinidade para o alvo, para humanizar a sequência de ligação ao alvo, para melhorar sua produção em cultura de células, para reduzir sua imunogenicidade in vivo, para criar um anticorpo multiespecífico, etc., e que um anticorpo compreendendo a sequência de ligação ao alvo alterada é também um anticorpo monoclonal desta invenção. Em contraste com as preparações de anticorpos policlonais, que incluem tipicamente diferentes anticorpos dirigidos contra diferentes determinantes (epítopos), cada anticorpo monoclonal de uma preparação de anticorpo monoclonal é dirigido contra um único determinante em um antígeno. Além de sua especificidade, as preparações de anticorpos monoclonais são vantajosas por serem normalmente não contaminadas por outras imunoglobulinas.

[87] O modificador “monoclonal” indica o caráter do anticorpo como sendo obtido a partir de uma população substancialmente homogênea de anticorpos e não deve ser interpretado como requerendo a produção do anticorpo por qualquer método particular. Por exemplo, os anticorpos monoclonais a serem usados de acordo com a invenção podem ser produzidos por meio de uma variedade de técnicas, incluindo, por exemplo, o método de hibridoma (por exemplo, Kohler e Milstein, Nature, 256: 495-97 (1975); Hongo et al., Hybridoma, 14(3):253 a 260 (1995), Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2ª ed. 1988); Hammerling et al., em: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, Nova Iorque, 1981)), métodos de DNA recombinante (consulte, por exemplo, patente no US 4.816.567), tecnologias de exibição de fago (consulte, por exemplo, Clackson et al., Nature, 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol.

Biol. 222: 581-597 (1992); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci.

USA 101(34): 12467-12472 (2004); e Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132 (2004), e tecnologias para a produção de anticorpos humanos ou semelhantes a humanos em animais que têm partes ou todos os loci de imunoglobulina humana ou genes que codificam sequências de imunoglobulina humana (consulte, por exemplo, os documentos WO 1998/24893; WO 1996/34096; WO 1996/33735; WO 1991/10741; Jakobovits et al., Proc. Natl.

Acad. Sci. USA 90:2551 (1993); Jakobovits et al., Nature 362: 255-258 (1993); Bruggemann et al., Year in Immunol, 7:33 (1993); patentes no US 5.545.807;

5.545.806; 5.569.825; 5.625.126; 5.633.425; e 5.661.016; Marks et al., Bio/Technology 10:779-783 (1992); Lonberg et al., Nature 368:856 a 859 (1994); Morrison, Nature 368:812 a 813 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnol. 14:845 a 851 (1996); Neuberger, Nature Biotechnol. 14:826 (1996); e Lonberg e Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13:65 a 93 (1995).

[88] Os anticorpos monoclonais no presente documento incluem especificamente anticorpos “quiméricos” em que uma porção da cadeia pesada e/ou leve é idêntica ou homóloga às sequências correspondentes em anticorpos derivados de uma espécie particular ou pertencentes a uma classe ou subclasse particular de anticorpos, enquanto o restante da cadeia (ou cadeias) é idêntico ou homólogo às sequências correspondentes em anticorpos derivados de outra espécie ou pertencentes a outra classe ou subclasse de anticorpos, bem como fragmentos de tais anticorpos, desde que exibam a atividade biológica desejada (consulte a patente no US 4.816.567; e Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 81:6.851 a 6.855 (1984)). Os anticorpos quiméricos incluem anticorpos PRIMATTZED®, em que a região de ligação ao antígeno do anticorpo é derivada de um anticorpo produzido, por exemplo, pela imunização de primatas macacos com o antígeno de interesse.

[89] As formas “humanizadas” de anticorpos não humanos (por exemplo, murinos) são anticorpos quiméricos que contêm uma sequência mínima derivada do anticorpo não humano. Em uma modalidade, um anticorpo humanizado é uma imunoglobulina humana (anticorpo receptor), em que os resíduos de uma HVR do receptor são substituídos por resíduos de uma HVR de uma espécie não humana (anticorpo doador), como camundongo, rato, coelho ou primata não humano tendo a especificidade, afinidade e capacidade de anticorpo desejadas. Em alguns casos, os resíduos FR da imunoglobulina humana são substituídos pelos resíduos não humanos correspondentes. Além disso, os anticorpos humanizados podem compreender resíduos que não são encontrados no anticorpo receptor ou no anticorpo doador. Essas modificações podem ser feitas para refinar ainda mais o desempenho do anticorpo. Em geral, o anticorpo humanizado compreenderá substancialmente todos de pelo menos um, e normalmente dois, domínios variáveis, em que todos ou substancialmente todos as alças hipervariáveis correspondem àquelas de uma imunoglobulina não humana e todas ou substancialmente todas as FRs são aquelas de uma sequência de imunoglobulina humana. O anticorpo humanizado opcionalmente também compreenderá pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina (Fc), tipicamente aquela de uma imunoglobulina humana. Para mais detalhes, consulte, por exemplo, Jones et al., Nature 321:522 a 525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323 a 329 (1988); e Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593 a 596 (1992). Consultetambém, por exemplo, Vaswani e Hamilton, Ann. Allergy, Asthma & Immunol. 1:105 a 115 (1998); Harris, Biochem. Soc. Transactions 23:1.035 a 1.038 (1995); Hurle e Gross, Curr. Op. Biotech. 5:428 a 433 (1994); e Patentes no US 6.982.321 e

7.087.409.

[90] Um “anticorpo humano” é aquele que tem uma sequência de aminoácidos que corresponde àquela de um anticorpo produzido por um humano e/ou que foi feito usando qualquer uma das técnicas para a produção de anticorpos humanos conforme revelado no presente documento. Essa definição de um anticorpo humano exclui especificamente um anticorpo humanizado que compreende resíduos de ligação ao antígeno não humanos.

Os anticorpos humanos podem ser produzidos usando várias técnicas conhecidas na técnica, incluindo bibliotecas de exibição de fagos. Hoogenboom e Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991). Também estão disponíveis para a preparação de anticorpos monoclonais humanos os métodos descritos em Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, página 77 (1985); Boerner et al., J. Immunol., 147(1):86 a 95 (1991). Consulte também van Dijk e van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol., 5:368-74 (2001). Os anticorpos humanos podem ser preparados pela administração do antígeno a um animal transgênico que foi modificado para produzir tais anticorpos em resposta a um desafio antigênico, mas cujos locus endógenos foram desativados, por exemplo, xenocamundongo imunizado (consulte, por exemplo, as patentes no US 6.075.181 e 6.150.584 em relação à tecnologia XENOMOUSETM). Consulte também, por exemplo, Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3.557 a 3.562 (2006) em relação a anticorpos humanos gerados por meio de uma tecnologia de hibridoma de células B humanas.

[91] Um “anticorpo dependente de espécie” é aquele que tem uma afinidade de ligação mais forte para um antígeno de uma primeira espécie de mamífero do que tem para um homólogo desse antígeno de uma segunda espécie de mamífero. Normalmente, o anticorpo dependente de espécie “especificamente se liga” a um antígeno humano (por exemplo, tem um valor de afinidade de ligação (Kd) de não mais do que cerca de 1x10-7 M, de preferência, não mais do que cerca de 1x10-8 M e, de preferência, não mais do que cerca de 1x10-9 M), mas tem uma afinidade de ligação para um homólogo do antígeno de uma segunda espécie de mamífero não humano que é pelo menos cerca de 50 vezes, ou pelo menos cerca de 500 vezes, ou pelo menos cerca de 1.000 vezes, mais fraca do que sua afinidade de ligação para o antígeno humano. O anticorpo dependente de espécie pode ser qualquer um dos vários tipos de anticorpos conforme definidos acima, mas de preferência é um anticorpo humanizado ou humano.

[92] O termo “região hipervariável”, ou “HVR” ou “HV”, como usado no presente documento, se refere a cada uma das regiões de um domínio variável de anticorpo que são hipervariáveis em sequência e/ou formam alças estruturalmente definidas (“alças hipervariáveis”). Geralmente, os anticorpos compreendem seis HVRs: três na VH (H1, H2, H3) e três na VL (L1, L2, L3). Em anticorpos nativos, H3 e L3 exibem a maior diversidade das seis HVRs, e acredita-se que H3 em particular desempenha um papel único em conferir especificidade precisa a anticorpos. Consulte, por exemplo, Xu et al., Immunity 13:37 a 45 (2000); Johnson e Wu, em Methods in Molecular Biology 248:1 a 25 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003). De fato, os anticorpos camelídeos de ocorrência natural que consistem em apenas uma cadeia pesada são funcionais e estáveis na ausência de cadeia leve. Consulte, por exemplo, Hamers-Casterman et al., Nature 363:446 a 448 (1993); Sheriff et al., Nature Struct. Biol. 3:733 a 736 (1996).

[93] Uma série de delimitações de HVR estão em uso e são abrangidas no presente documento. As Regiões Determinantes de Complementaridade (CDRs) de Kabat são baseadas na variabilidade da sequência e são as mais comumente usadas (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5ª Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)). Chothia se refere, em vez disso, à localização das alças estruturais (Chothia e Lesk J. Mol. Biol. 196:901 a 917 (1987)). As HVRs AbM representam um compromisso entre as HVRs de Kabat e as alças estruturais de Chothia, e são usadas pelo software de modelagem de anticorpos AbM da Oxford Molecular. As HVRs de “contato” são baseadas em uma análise das estruturas cristalinas complexas disponíveis. Os resíduos de cada uma dessas HVRs são indicados abaixo.

Alça Kabat AbM Chothia Contato L1 L24-L34 L24-L34 L26-L32 L30-L36 L2 L50-L56 L50-L56 L50-L52 L46-L55 L3 L89-L97 L89-L97 L91-L96 L89-L96

H1 H31-H35B H26-H35B H26-H32 H30-H35B (numeração de Kabat) H1 H31-H35 H26-H35 H26-H32 H30-H35 (numeração de Chothia) H2 H50-H65 H50-H58 H53-H55 H47-H58 H3 H95-H102 H95-H102 H96-H101 H93-H101

[94] HVRs podem compreender “HVRs estendidas” da seguinte forma: 24-36 ou 24-34 (L1), 46-56 ou 50-56 (L2) e 89-97 ou 89-96 (L3) na VL e 26-35 (H1), 50-65 ou 49-65 (H2) e 93-102, 94-102, ou 95-102 (H3) na VH. Os resíduos do domínio variável são numerados de acordo com Kabat et al., supra, para cada uma destas definições.

[95] HVRs podem compreender “HVRs estendidas” da seguinte forma: 24-36 ou 24-34 (L1), 46-56 ou 50-56 (L2) e 89-97 ou 89-96 (L3) na VL e 26-35 (H1), 50-65 ou 49-65 (H2) e 93-102, 94-102, ou 95-102 (H3) na VH. Os resíduos do domínio variável são numerados de acordo com Kabat et al., supra, para cada uma destas definições.

[96] Os resíduos “estruturais” ou “FR” são aqueles resíduos de domínio variável diferentes dos resíduos de HVR definidos no presente documento.

[97] O termo “numeração de resíduo de domínio variável como em Kabat” ou “numeração da posição de aminoácidos como em Kabat” e variações dos mesmos se referem ao sistema de numeração usado para domínios variáveis de cadeia pesada ou domínios variáveis de cadeia leve da compilação de anticorpos em Kabat et al., supra. Usando esse sistema de numeração, a sequência de aminoácidos linear real pode conter menos ou mais aminoácidos correspondentes a um encurtamento de, ou inserção em, uma FR ou CDR do domínio variável. Por exemplo, um domínio variável da cadeia pesada pode incluir uma única inserção de aminoácido (resíduo 52a de acordo com Kabat) após o resíduo 52 de H2 e resíduos inseridos (por exemplo, resíduos 82a, 82b e 82c, etc. de acordo com Kabat) após o resíduo 82 da FR da cadeia pesada. A numeração de Kabat de resíduos pode ser determinada para um determinado anticorpo por alinhamento em regiões de homologia da sequência do anticorpo com uma sequência numerada de Kabat “padrão”.

[98] O sistema de numeração de Kabat é geralmente usado quando se refere a um resíduo no domínio variável (aproximadamente resíduos 1 a 107 da cadeia leve e resíduos 1 a 113 da cadeia pesada) (por exemplo, Kabat et al., Sequences of Immunological Interest. 5ª Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)). O “sistema de numeração da UE” ou “índice da UE” é geralmente usado quando se refere a um resíduo em uma região constante da cadeia pesada de imunoglobulina (por exemplo, o índice da UE relatado em Kabat et al., supra). O “índice da UE como em Kabat” se refere à numeração de resíduos do anticorpo IgG1 humano da UE.

[99] A expressão “anticorpos lineares” se refere aos anticorpos descritos em Zapata et al. (1995 Protein Eng, 8(10):1.057 a 1.062). Em suma, esses anticorpos compreendem um par de segmentos Fd em tandem (VH- CH1-VH-CH1) que, juntamente com polipeptídeos de cadeia leve complementares, formam um par de regiões de ligação ao antígeno. Os anticorpos lineares podem ser biespecíficos ou monoespecíficos.

[100] Como usado aqui, o termo “se liga”, “se liga especificamente a” ou é “específico para” se refere às interações mensuráveis e reprodutíveis, como a ligação entre um alvo e um anticorpo, que é determinativa da presença do alvo, na presença de uma população heterogênea de moléculas, incluindo moléculas biológicas. Por exemplo, um anticorpo que se liga a ou se liga especificamente a um alvo (que pode ser um epítopo) é um anticorpo que se liga a este alvo com maior afinidade, avidez, mais prontamente e/ou com maior duração do que se liga aos outros alvos. Em uma modalidade, a extensão da ligação de um anticorpo a um alvo não relacionado é inferior a cerca de 10% da ligação do anticorpo ao alvo tal conforme medido, por exemplo, por um radioimunoensaio (RIA). Em certas modalidades, um anticorpo que se liga especificamente a um alvo tem uma constante de dissociação (Kd) de ≤ 1 μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ou ≤ 0,1 nM. Em certas modalidades, um anticorpo se liga especificamente a um epítopo numa proteína que é conservada entre a proteína a partir de espécies diferentes. Em outra modalidade, ligação específica pode incluir, mas não necessita de ligação exclusiva.

[101] O termo “amostra”, como usado no presente documento, se refere a uma composição que é obtida ou derivada de um sujeito e/ou indivíduo de interesse que contém uma entidade molecular celular e/ou outra que deve ser caracterizada e/ou identificada, por exemplo, com base nas características físicas, bioquímica, química e/ou fisiológicas. Por exemplo, a expressão “amostra de doença” e variações da mesma se referem a qualquer amostra obtida a partir de um paciente de interesse que seria esperado ou que contenha a entidade celular e/ou molecular que deve ser distinguida. As amostras incluem, mas não estão limitadas a, células primárias ou em cultura ou linhagens celulares, sobrenadantes celulares, lisados celulares, plaquetas, soro, plasma, fluido vítreo, fluido linfático, fluido sinovial, fluido folicular, fluido seminal, fluido amniótico, leite, sangue total, células derivadas do sangue, urina, líquido cefalorraquidiano, saliva, expectoração, lágrimas, transpiração, muco, lisados tumorais, meio de cultura de tecidos, extratos de tecidos, tais como tecido homogeneizado, tecido tumoral, extratos celulares e combinações dos mesmos.

[102] Por “amostra de tecido” ou “amostra celular” entende-se uma coleção de células similares obtidas a partir de um tecido de um sujeito ou indivíduo. A fonte da amostra de tecido ou célula pode ser tecido sólido a partir de um órgão fresco, congelado e/ou preservado, amostra de tecido, biópsia e/ou aspirado; sangue ou quaisquer constituintes de sangue, como plasma; fluidos corporais, como fluido cefalorraquidiano, fluido amniótico, fluido peritoneal ou fluido intersticial; células de qualquer momento da gestação ou desenvolvimento do paciente. A amostra de tecido também pode ser células primárias ou em cultura ou linhagens celulares. Opcionalmente, a amostra de tecido ou célula é obtida a partir de um tecido/órgão doente. A amostra de tecido pode conter compostos que não são misturados naturalmente com o tecido na natureza, como conservantes, anticoagulantes, tampões, fixadores, nutrientes, antibióticos ou similares.

[103] Uma “amostra de referência”, “célula de referência”, “tecido de referência”, “amostra de controle”, “célula de controle” ou “tecido de controle”, como usado no presente documento, se refere a uma amostra, célula, tecido, padrão ou nível que são usados para fins de comparação. Em uma modalidade, uma amostra de referência, célula de referência, tecido de referência, amostra de controle, célula de controle ou tecido de controle são obtidos a partir de uma parte saudável e/ou não doente do corpo (por exemplo, tecido ou células) do mesmo paciente. Por exemplo, células saudáveis e/ou não doentes ou tecido adjacente às células ou tecido doentes (por exemplo, células ou tecido adjacente a um tumor). Em outra modalidade, uma amostra de referência é obtida a partir de um tecido não tratado e/ou célula do corpo do mesmo paciente. Em ainda outra modalidade, uma amostra de referência, célula de referência, tecido de referência, amostra de controle, célula de controle ou tecido de controle é obtido a partir de uma parte saudável e/ou não doente do corpo (por exemplo, tecidos ou células) de um indivíduo que não é o sujeito ou indivíduo. Em ainda outra modalidade, uma amostra de referência, célula de referência, tecido de referência, amostra de controle, célula de controle ou tecido de controle são obtidos a partir de um tecido não tratado e/ou célula do corpo de um indivíduo que não é o sujeito ou indivíduo.

[104] Uma “resposta eficaz” de um paciente ou “responsividade” de um paciente ao tratamento com uma formulação de medicamento e semelhantes se refere ao benefício clínico ou terapêutico transmitido a um paciente em risco de, ou sofrendo de, uma doença ou distúrbio, como câncer.

Em uma modalidade, tal benefício inclui qualquer um dentre: prolongar a sobrevivência (incluindo a sobrevivência global e sobrevida livre de progressão); resultar em uma resposta objetiva (incluindo uma resposta completa ou resposta parcial); ou melhorar sinais ou sintomas de câncer.

[105] Um paciente que “não tem uma resposta eficaz” ao tratamento se refere a um paciente que não tem qualquer um de: estender a sobrevida (incluindo sobrevida global e sobrevida livre de progressão); resultar em uma resposta objetiva (incluindo uma resposta completa ou uma resposta parcial); ou melhorar os sinais ou sintomas do câncer.

[106] Uma “região Fc funcional” tem uma “função efetora” de uma região Fc de sequência nativa. “Funções efetoras” exemplificadoras incluem ligação a C1q; CDC; ligação ao receptor Fc; ADCC; fagocitose; regulação negativa de receptores da superfície celular (por exemplo, receptor de células B; BCR), etc. Tais funções efetoras geralmente requerem que a região Fc seja combinada com um domínio de ligação (por exemplo, um domínio variável de anticorpo) e podem ser avaliadas com o uso de vários ensaios, conforme revelado, por exemplo, em definições no presente documento.

[107] “Células efetoras humanas” se referem aos leucócitos que expressam um ou mais FcR e desempenham funções efetoras. Em certas modalidades, as células expressam pelo menos FcRIII e executam as funções efetoras ADCC. Exemplos de leucócitos humanos que medeiam ADCC incluem células mononucleares de sangue periférico (PBMC), células natural killer (NK),

monócitos, células T citotóxicas e neutrófilos. As células efetoras podem ser isoladas a partir de uma fonte nativa, por exemplo, a partir de sangue.

[108] Um câncer ou amostra biológica que “tem células efetoras humanas” é uma que, num teste de diagnóstico, tem células efetoras humanas presentes na amostra (por exemplo, infiltração de células efetoras humanas).

[109] Um câncer ou amostra biológica que “tem células que expressam o FcR” é uma que, em um teste de diagnóstico, tem expressando FcR presente na amostra (por exemplo, células de infiltração que expressam o FcR). Em algumas modalidades, o FcR é FcγR. Em algumas modalidades, o FcR é FcγR de ativação.

(II) VISÃO GERAL

[110] É aqui fornecido um método para tratar ou retardar a progressão do câncer de pulmão (como câncer de pulmão de células não pequenas, por exemplo, câncer de pulmão de células não pequenas não escamoso de estágio IV) em um indivíduo que compreende a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de Antagonista de ligação ao eixo PD-1 (por exemplo, um anticorpo anti-PD-L1, como atezolizumabe), um antimetabólito (por exemplo, pemetrexede) e um agente de platina (por exemplo, carboplatina ou cisplatina). Também é fornecido no presente documento um método para aumentar a função imunológica em um indivíduo com câncer de pulmão (como câncer de pulmão de células não pequenas, por exemplo, câncer de pulmão de células não pequenas não escamoso de estágio IV) que compreende a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um antagonista de ligação ao eixo PD-1 (por exemplo, um anticorpo anti-PD- L1, como atezolizumabe), um antimetabólito (por exemplo, pemetrexede) e um agente de platina (por exemplo, carboplatina ou cisplatina). Em algumas modalidades, o tratamento estende a sobrevida livre de progressão (SLP) e/ou a sobrevida global (SG) do indivíduo. Em algumas modalidades, o tratamento estende a sobrevida livre de progressão (SLP) e/ou a sobrevida global (SG) do indivíduo, em comparação com um tratamento que compreende a administração de um antimetabólito (por exemplo, pemetrexede) e um agente de platina (por exemplo, carboplatina ou cisplatina).

[111] Em algumas modalidades, o método compreende o tratamento de um indivíduo com câncer de pulmão de estágio IV, por exemplo, NSCLC não escamoso de estágio IV, administrando ao indivíduo atezolizumabe em combinação com pemetrexede e carboplatina, em que a administração compreende uma fase de indução e uma fase de manutenção, em que a fase de indução compreende a administração de atezolizumabe a uma dose de 1.200 mg no Dia 1, o pemetrexede a uma dose de 500 mg/m2 no Dia 1 e a carboplatina a uma dose suficiente para atingir ASC = 6 mg/ml/ min em Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para os Ciclos 1-4; e em que a fase de manutenção compreende a administração a atezolizumabe a uma dose de

1.200 mg no dia 1, e o pemetrexede a uma dose de 500 mg/m2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo depois do ciclo 4; em que o indivíduo é intocado pelo tratamento e tem câncer de pulmão de células não pequenas não- escamosas de estágio IV (NSCLC); e em que a administração estende a sobrevida livre de progressão (SLP) do indivíduo. Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a sobrevida livre de progressão (SLP) do indivíduo em pelo menos cerca de 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5 ou 10 meses (incluindo qualquer intervalo entre esses valores). Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a sobrevida livre de progressão (SLP) do indivíduo em pelo menos cerca de 7,6 meses. Em algumas modalidades, a administração estende a sobrevida global (SG) do indivíduo. Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a SG do indivíduo em pelo menos cerca de qualquer um de 14, 14,5, 15, 15,5, 16, 16,5, 17, 17,5, 18, 18,5, 19, 19,5 ou 20 meses (incluindo qualquer intervalo entre esses valores). Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a SG do indivíduo em pelo menos cerca de 18,1 meses.

[112] Em algumas modalidades, o método compreende o tratamento de um indivíduo com câncer de pulmão de estágio IV, por exemplo, NSCLC não escamoso de estágio IV, por meio da administração ao indivíduo de atezolizumabe em combinação com pemetrexede e cisplatina, em que a administração compreende uma fase de indução e uma fase de manutenção, em que a fase de indução compreende a administração de atezolizumabe a uma dose de 1.200 mg no Dia 1, o pemetrexede a uma dose de 500 mg/m 2 no Dia 1 e a cisplatina a uma dose de 75 mg/m 2 no Dia 1 de cada 21 ciclo de um dia para os Ciclos 1-4; e em que a fase de manutenção compreende a administração de atezolizumabe a uma dose de 1.200 mg no Dia 1, e o pemetrexede a uma dose de 500 mg/m2 no dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo depois do ciclo 4; em que o indivíduo é intocado pelo tratamento e tem câncer de pulmão de células não pequenas não- escamosas de estágio IV (NSCLC); e em que a administração estende a sobrevida livre de progressão (SLP) do indivíduo. Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a sobrevida livre de progressão (SLP) do indivíduo em pelo menos cerca de 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5 ou 10 meses (incluindo qualquer intervalo entre esses valores). Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a sobrevida livre de progressão (SLP) do indivíduo em pelo menos cerca de 7,6 meses. Em algumas modalidades, a administração estende a sobrevida global (SG) do indivíduo. Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a SG do indivíduo em pelo menos cerca de qualquer um de 14, 14,5, 15, 15,5, 16, 16,5, 17, 17,5, 18, 18,5, 19, 19,5 ou 20 meses (incluindo qualquer intervalo entre esses valores). Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a SG do indivíduo em pelo menos cerca de 18,1 meses.

[113] Em algumas modalidades, o método compreende o tratamento de um indivíduo com câncer de pulmão de estágio IV, por exemplo,

NSCLC não escamoso de estágio IV, administrando ao indivíduo atezolizumabe em combinação com pemetrexede e carboplatina, em que a administração compreende uma fase de indução e uma fase de manutenção, em que a fase de indução compreende a administração de atezolizumabe a uma dose de 1.200 mg no Dia 1, o pemetrexede a uma dose de 500 mg/m2 no Dia 1 e a carboplatina a uma dose suficiente para atingir ASC = 6 mg/ml/ min em Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para os Ciclos 1-6; e em que a fase de manutenção compreende a administração a atezolizumabe a uma dose de

1.200 mg no dia 1, e o pemetrexede a uma dose de 500 mg/m2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo depois do ciclo 6; em que o indivíduo é intocado pelo tratamento e tem câncer de pulmão de células não pequenas não- escamosas de estágio IV (NSCLC); e em que a administração estende a sobrevida livre de progressão (SLP) do indivíduo. Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a sobrevida livre de progressão (SLP) do indivíduo em pelo menos cerca de 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5 ou 10 meses (incluindo qualquer intervalo entre esses valores). Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a sobrevida livre de progressão (SLP) do indivíduo em pelo menos cerca de 7,6 meses. Em algumas modalidades, a administração estende a sobrevida global (SG) do indivíduo. Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a SG do indivíduo em pelo menos cerca de qualquer um de 14, 14,5, 15, 15,5, 16, 16,5, 17, 17,5, 18, 18,5, 19, 19,5 ou 20 meses (incluindo qualquer intervalo entre esses valores). Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a SG do indivíduo em pelo menos cerca de 18,1 meses.

[114] Em algumas modalidades, o método compreende o tratamento de um indivíduo com câncer de pulmão de células não pequenas de estágio IV (NSCLC), por exemplo, NSCLC não escamoso de estágio IV, por meio da administração ao indivíduo de atezolizumabe em combinação com pemetrexede e cisplatina, em que a administração compreende uma fase de indução e uma fase de manutenção, em que a fase de indução compreende a administração de atezolizumabe a uma dose de 1.200 mg no Dia 1, o pemetrexede a uma dose de 500 mg/m 2 no Dia 1 e a cisplatina a uma dose de 75 mg/m 2 no Dia 1 de cada 21 ciclo de um dia para os Ciclos 1-6; e em que a fase de manutenção compreende a administração de atezolizumabe a uma dose de 1.200 mg no Dia 1, e o pemetrexede a uma dose de 500 mg/m2 no dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo depois do ciclo 6; em que o indivíduo é intocado pelo tratamento e tem câncer de pulmão de células não pequenas não- escamosas de estágio IV (NSCLC); e em que a administração estende a sobrevida livre de progressão (SLP) do indivíduo. Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a sobrevida livre de progressão (SLP) do indivíduo em pelo menos cerca de 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5 ou 10 meses (incluindo qualquer intervalo entre esses valores). Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a sobrevida livre de progressão (SLP) do indivíduo em pelo menos cerca de 7,6 meses. Em algumas modalidades, a administração estende a sobrevida global (SG) do indivíduo. Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a SG do indivíduo em pelo menos cerca de qualquer um de 14, 14,5, 15, 15,5, 16, 16,5, 17, 17,5, 18, 18,5, 19, 19,5 ou 20 meses (incluindo qualquer intervalo entre esses valores). Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a SG do indivíduo em pelo menos cerca de 18,1 meses.

III. ANTAGONISTAS DE LIGAÇÃO AO EIXO PD-1

[115] Por exemplo, um antagonista de ligação ao eixo PD-1 inclui um antagonista de ligação a PD-1, um antagonista de ligação a PDL1 e um antagonista de ligação a PDL2. Os nomes alternativos para “PD-1” incluem CD279 e SLEB2. Os nomes alternativos para “PDL1” incluem B7-H1, B7-4, CD274 e B7-H. Os nomes alternativos para “PDL2” incluem B7-DC, Btdc e CD273. Em algumas modalidades, PD-1, PD-L1, e PDL2 são PD-1, PD-L1 e PDL2 humanos.

[116] Em algumas modalidades, o antagonista de ligação a PD- 1 é uma molécula que inibe a ligação de PD-1 aos seu parceiro (ou parceiros) de ligação de ligante. Em um aspecto específico, parceiros de ligação de ligantes PD-1 são PD-L1 e/ou PDL2. Em outra modalidade, o antagonista de ligação a PDL1 é uma molécula que inibe a ligação de PDL1 para os seus parceiros de ligação. Em um aspecto específico, parceiro (ou parceiros) de ligação a PD-L1 são PD-1 e/ou B7-1- 1. Em outra modalidade, o antagonista de ligação a PDL2 é uma molécula que inibe a ligação de PDL2 a seu parceiro (ou parceiros) de ligação. Em um aspecto específico, um parceiro de ligação a PDL2 é PD-1. O antagonista pode ser um anticorpo, um fragmento de ligação ao antígeno, uma imunoadesina, uma proteína de fusão ou oligopeptídeo.

[117] Em algumas modalidades, o antagonista de ligação a PD- 1 é um anticorpo anti-PD-1 (por exemplo, um anticorpo humano, um anticorpo humanizado ou um anticorpo quimérico).

[118] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é Nivolumab (Número de Registro CAS: 946414-94-4). Nivolumab (Bristol-Myers Squibb/Ono), também conhecido como MDX-1106-04, MDX-1106, ONO-4538, BMS-936558 e OPDIVO®, é um anticorpo anti-PD-1 descrito em WO2006/121168. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 compreende uma sequência de cadeia pesada e uma sequência de cadeia leve, em que: (a) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos:

QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVI WYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDY WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKV DKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS QEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKE YKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKG

FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO:11), e (b) a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos:

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASN RATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEI KRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGN

SQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNR GEC (SEQ ID NO: 12).

[119] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 compreende as seis sequências de HVR de SEQ ID NO: 11 e SEQ ID NO: 12 (por exemplo, as três HVRs de cadeia pesada de SEQ ID NO: 11 e as três HVRs de cadeia leve de SEQ ID NO: 12). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 compreende o domínio variável da cadeia pesada de SEQ ID NO: 11 e o domínio variável da cadeia leve de SEQ ID NO: 12.

[120] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é pembrolizumab (Número de Registro CAS: 1374853-91-4). Pembrolizumab (Merck), também conhecido como MK-3475, Merck 3475, lambrolizumab, KEYTRUDA®, e SCH-900475, é um anticorpo anti-PD-1 descrito no documento WO2009/114335. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 compreende uma sequência de cadeia pesada e uma sequência de cadeia leve, em que: (a) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos:

QVQLVQSGVEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYMYWVRQAPGQGLEWMGG INPSNGGTNFNEKFKNRVTLTTDSSTTTAYMELKSLQFDDTAVYYCARRDYRF DMGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDH KPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQ DWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQV

SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSR WQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO:13), e (b) a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos:

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIY LASYLESGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGT KVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQ

SGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK SFNRGEC (SEQ ID NO: 14).

[121] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 compreende as seis sequências de HVR de SEQ ID NO: 13 e SEQ ID NO: 14 (por exemplo, as três HVRs de cadeia pesada de SEQ ID NO: 13 e as três HVRs de cadeia leve de SEQ ID NO: 14). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 compreende o domínio variável da cadeia pesada de SEQ ID NO: 13 e o domínio variável da cadeia leve de SEQ ID NO: 14.

[122] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é um MEDI-0680 (AMP-514; AstraZeneca). MEDI-0680 é um anticorpo anti-PD-1 de IgG4 humanizado.

[123] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é PDR001 (nº de registro CAS 1859072-53-9; Novartis). PDR001 é um anticorpo anti-PD1 de IgG4 humanizado que bloqueia a ligação de PDL1 e PDL2 ao PD-

1.

[124] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é REGN2810 (Regeneron). REGN2810 é um anticorpo anti-PD1 humano.

[125] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é BGB-

108 (BeiGene). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é BGB-A317 (BeiGene).

[126] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é JS-001 (Shanghai Junshi). JS-001 é um anticorpo anti-PD1 humanizado.

[127] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é STI- A1110 (Sorrento). STI-A1110 é um anticorpo anti-PD1 humano.

[128] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é INCSHR-1210 (Incyte). INCSHR-1210 é um anticorpo anti-PD1 de IgG4 humano.

[129] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é PF- 06801591 (Pfizer).

[130] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é TSR- 042 (também conhecido como ANB011; Tesaro/AnaptysBio).

[131] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é AM0001 (ARMO Biosciences).

[132] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é ENUM 244C8 (Enumeral Biomedical Holdings). ENUM 244C8 é um anticorpo anti-PD1 que inibe a função de PD-1 sem bloquear a ligação de PDL1 ao PD-1.

[133] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é ENUM 388D4 (Enumeral Biomedical Holdings). ENUM 388D4 é um anticorpo anti-PD1 que inibe competitivamente a ligação de PDL1 ao PD-1.

[134] Em algumas modalidades, o anticorpo PD-1 compreende as seis sequências HVR (por exemplo, as três HVRs de cadeia pesada e as três HVRs de cadeia leve) e/ou o domínio variável de cadeia pesada e o domínio variável de cadeia leve de um anticorpo PD-1 descrito no documento WO2015/112800 (Requerente: Regeneron), WO2015/112805 (Requerente: Regeneron), WO2015/112900 (Requerente: Novartis), US20150210769 (Atribuído à Novartis), WO2016/089873 (Requerente: Celgene),

WO2015/035606 (Requerente: Beigene), WO2015/085847 (Requerentes: Shanghai Hengrui Pharmaceutical/Jiangsu Hengrui Medicine), WO2014/206107 (Requerentes: Shanghai Junshi Biosciences/Junmeng Biosciences), WO2012/145493 (Requerente: Amplimmune), US9205148 (Atribuído a MedImmune), WO2015/119930 (Requerentes: Pfizer/Merck), WO2015/119923 (Requerentes: Pfizer/Merck), WO2016/032927 (Requerentes: Pfizer/Merck), WO2014/179664 (Requerente: AnaptysBio), WO2016/106160 (Requerente: Enumeral), e WO2014/194302 (Requerente: Sorrento).

[135] Em algumas modalidades, o antagonista de ligação a PD- 1 é uma imunoadesina (por exemplo, uma imunoadesina que compreende uma porção de ligação extracelular ou a PD-1 de PDL1 ou PDL2 fundido com uma região constante (por exemplo, uma região Fc de uma sequência de imunoglobulina). Em algumas modalidades, o antagonista de ligação a PD -1 é AMP-224. AMP-224 (nº de registro CAS 1422184-00-6; GlaxoSmithKline/MedImmune), também conhecido como B7-DCIg, é um receptor solúvel de fusão PDL2-Fc descrito em WO2010/027827 e WO2011/066342.

[136] Em algumas modalidades, o antagonista de ligação ao PD-1 é um peptídeo ou composto de pequena molécula. Em algumas modalidades, o antagonista de ligação a PD -1 é AUNP-12 (PierreFabre/Aurigene). Consulte, por exemplo, os documentos WO2012/168944, WO2015/036927, WO2015/044900, WO2015/033303, WO2013/144704, WO2013/132317 e WO2011/161699.

[137] Em algumas modalidades, o antagonista de ligação ao PDL1 é uma pequena molécula que inibe PD-1. Em algumas modalidades, o antagonista de ligação ao PDL1 é uma pequena molécula que inibe PDL1. Em algumas modalidades, o antagonista de ligação ao PDL1 é uma pequena molécula que inibe PDL1 e VISTA. Em algumas modalidades, o antagonista de ligação ao PDL1 é CA-170 (também conhecido como AUPM-170). Em algumas modalidades, o antagonista de ligação ao PDL1 é uma pequena molécula que inibe PDL1 e TIM3. Em algumas modalidades, a pequena molécula é um composto descrito em WO2015/033301 e WO2015/033299.

[138] Em algumas modalidades, o antagonista de ligação ao eixo IL-13 é um anticorpo anti-PDL1. Uma variedade de anticorpos anti-PDL1 são contemplados e descritos no presente documento. Em qualquer uma das modalidades deste documento, o anticorpo anti-PDL1 isolado pode se ligar a um PDL1 humano, por exemplo, um PDL1 humano como mostrado em UniProtKB/Swiss-Prot nº de acesso Q9NZQ7.1, ou uma variante do mesmo.

Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PDL1 é capaz de inibir a ligação entre PDL1 e PD-1 e/ou entre PDL1 e B7-1. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PDL1 é um anticorpo monoclonal. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PDL1 é um fragmento de anticorpo selecionado do grupo que consiste em fragmentos Fab, Fab' -SH, Fv, scFv e F(ab')2. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PDL1 é um anticorpo humanizado. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PDL1 é um anticorpo humano. Exemplos de anticorpos anti-PDL1 úteis para os métodos desta invenção e métodos para a preparação dos mesmos são descritos no pedido de patente PCT WO 2010/077634 A1 e na patente dos EUA de nº 8.217.149, que são incorporados no presente documento por referência.

[139] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PDL1 compreende uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve, em que: (a) a região variável da cadeia pesada compreende uma sequência HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3 de GFTFSDSWIH (SEQ ID NO: 1), AWISPYGGSTYYADSVKG (SEQ ID NO: 2) e RHWPGGFDY (SEQ ID NO: 3), respectivamente, e

(b) a região variável da cadeia leve compreende uma sequência HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3 de RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 4), SASFLYS (SEQ ID NO: 5) e QQYLYHPAT (SEQ ID NO: 6), respectivamente.

[140] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PDL1 é MPDL3280A, também conhecido como atezolizumabe e TECENTRIQ® (Número de registro CAS: 1422185-06-5). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PDL1 compreende uma sequência de cadeia pesada e uma sequência de cadeia leve, em que: (a) a sequência da região variável de cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos:

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWI

SPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPG GFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 7), e (b) a sequência da região variável de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos:

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASF

LYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEI KR (SEQ ID NO: 8).

[141] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PDL1 compreende uma sequência de cadeia pesada e uma sequência de cadeia leve, em que: (a) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos:

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWI SPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPG GFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPV TVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPS NTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQ DWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQV

SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR WQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:9), e (b) a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos:

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASF LYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEI KRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGN

SQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNR GEC (SEQ ID NO:10).

[142] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PDL1 é avelumab (Número de Registro CAS: 1537032-82-8). Avelumab, também conhecido como MSB0010718C, é um anticorpo anti-PDL1 de IgG1 monoclonal humano (Merck KGaA, Pfizer). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PDL1 compreende uma sequência de cadeia pesada e uma sequência de cadeia leve, em que: (a) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos:

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMMWVRQAPGKGLEWVSSIY PSGGITFYADTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARIKLGTVTT VDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVT VSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSN TKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQD WLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSL

TCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:15), e (b) a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos:

QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYD VSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTRVFGTG TKVTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGS

PVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKT VAPTECS (SEQ ID NO: 16).

[143] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PDL1 compreende as seis sequências de HVR de SEQ ID NO: 15 e SEQ ID NO: 16 (por exemplo, as três HVRs de cadeia pesada de SEQ ID NO: 15 e as três HVRs de cadeia leve de SEQ ID NO: 16). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PDL1 compreende o domínio variável da cadeia pesada de SEQ ID NO: 15 e o domínio variável da cadeia leve de SEQ ID NO: 16.

[144] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PDL1 é durvalumab (Número de Registro CAS: 1428935-60-7). Durvalumab, também conhecido como MEDI4736, é um anticorpo anti-PDL1 kappa de IgG1 monoclonal humano (MedImmune, AstraZeneca) descrito em WO2011/066389 e US2013/034559. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PDL1 compreende uma sequência de cadeia pesada e uma sequência de cadeia leve, em que: (a) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos:

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYWMSWVRQAPGKGLEWVANI KQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGGW FGELAFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYF PEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRT PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTV LHQDWLNGKEYKCKVSNKALPASIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKN QVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK

SRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:17), e (b) a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos:

EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQRVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDAS SRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSLPWTFGQGTKV EIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSG

NSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFN RGEC (SEQ ID NO:18).

[145] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PDL1 compreende as seis sequências de HVR de SEQ ID NO: 17 e SEQ ID NO: 18 (por exemplo, as três HVRs de cadeia pesada de SEQ ID NO: 17 e as três HVRs de cadeia leve de SEQ ID NO: 18). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PDL1 compreende o domínio variável da cadeia pesada de SEQ ID NO: 17 e o domínio variável da cadeia leve de SEQ ID NO: 18.

[146] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PDL1 é MDX- 1105 (Bristol Myers Squibb). MDX-1105, também conhecido como BMS- 936559, é um anticorpo anti-PDL1 descrito no documento WO2007/005874.

[147] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PDL1 é um LY3300054 (Eli Lilly).

[148] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PDL1 é STI- A1014 (Sorrento). STI-A1014 é um anticorpo anti-PDL1 humano.

[149] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PDL1 é um KN035 (Suzhou Alphamab). KN035 é um anticorpo de domínio único (dAB) gerado a partir de uma biblioteca de exibição de fago de camelo.

[150] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PDL1 compreende uma parte clivável ou ligante que, quando clivada (por exemplo, por uma protease no microambiente tumoral), ativa um domínio de ligação ao antígeno do anticorpo para permitir que o mesmo se ligue ao seu antígeno, por exemplo, removendo uma parte estérica de não ligação. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PDL1 é CX-072 (CytomX Therapeutics).

[151] Em algumas modalidades, o anticorpo PDL1 compreende as seis sequências de HVR (por exemplo, as três HVRs de cadeia pesada e as três HVRs de cadeia leve) e/ou o domínio variável de cadeia pesada e o domínio variável de cadeia leve de um anticorpo PDL1 descrito nos documentos US20160108123 (Atribuído a Novartis), WO2016/000619 (Requerente: Beigene), WO2012/145493 (Requerente: Amplimmune), US9205148 (Atribuído a MedImmune), WO2013/181634 (Requerente: Sorrento), e WO2016/061142 (Requerente: Novartis).

[152] Em ainda um aspecto específico adicional, o anticorpo compreende ainda uma região constante humana ou murina. Em ainda um aspecto adicional, a região constante humana é selecionada do grupo que consiste em IgG1, IgG2, IgG2, IgG3 e IgG4. Em ainda um aspecto específico, a região constante humana é IgG1. Em ainda um aspecto adicional, a região constante murina é selecionada do grupo que consiste em IgG1, IgG2A, IgG2B e IgG3. Em ainda um aspecto adicional, a região constante murina é IgG2A.

[153] Em ainda um aspecto específico adicional, o anticorpo tem função efetora reduzida ou mínima. Em ainda um aspecto específico adicional, a função efetora mínima resulta de uma “mutação Fc menos efetora” ou mutação de aglicosilação. Em ainda uma outra modalidade, a mutação Fc menos efetora é uma substituição N297A ou D265A/N297A na região constante. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PDL1 isolado é aglicosilado. A glicosilação de anticorpos é normalmente ligada a N ou ligada a O. Ligado a N refere-se à ligação da fração de carboidrato à cadeia lateral de um resíduo de asparagina. As sequências tripeptídicas asparagina-X-serina e asparagina-X-treonina, nas quais X é qualquer aminoácido exceto prolina, são as sequências de reconhecimento para a ligação enzimática da fração de carboidrato à cadeia lateral de asparagina.

Assim, a presença de qualquer uma dessas sequências tripeptídicas em um polipeptídeo cria um sítio de glicosilação potencial. A glicosilação ligada a O se refere à ligação de um dos açúcares N-acetilgalactosamina, galactose ou xilose a um hidroxiaminoácido, mais comumente serina ou treonina, embora 5-hidroxiprolina ou 5-hidroxilisina também possam ser usados. A remoção dos locais de glicosilação de um anticorpo é convenientemente realizada alterando a sequência de aminoácidos de tal modo que uma das sequências tripeptídicas acima descritas (para locais de glicosilação ligados a N) seja removida. A alteração pode ser feita por substituição de um resíduo de asparagina, serina ou treonina no local de glicosilação por outro resíduo de aminoácido (por exemplo, glicina, alanina ou uma substituição conservativa).

[154] Em ainda outra modalidade, a presente divulgação fornece composições compreendendo qualquer um dos anticorpos anti- PDL1 descritos acima em combinação com pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável.

[155] Em ainda uma outra modalidade, a presente divulgação fornece uma composição compreendendo um anticorpo anti- PDL1, um anti-PD-1 ou um anti-PDL2 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, como fornecido no presente documento e pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PDL1, anti-PD-1 ou anti-PDL2 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo administrado ao indivíduo é uma composição que compreende um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis. Qualquer um dos veículos farmaceuticamente aceitáveis descritos no presente documentos ou conhecidos na técnica pode ser usado.

IV. ANTIMETABÓLITOS E AGENTES DE P LATINA ANTIMETABÓLITOS

[156] Antimetabólitos (por exemplo, pemetrexede, 5-fluorouracil, 6-mercaptopurina, capecitabina, citarabina, floxuridina, fludarabina, hidroxicarbamida, metotrexato e outros) são fármacos antitumorais amplamente usados que interferem com uma ou mais enzimas necessárias para a síntese de DNA. Os antimetabólitos normalmente agem por uma variedade de mecanismos, incluindo, por exemplo, incorporação em ácidos nucleicos, desencadeando assim a apoptose, ou, por exemplo, competição por sítios de ligação de enzimas envolvidas na síntese de nucleotídeos, esgotando assim o suprimento necessário para a replicação de DNA e/ou RNA e proliferação de células.

[157] Pemetrexede é um antimetabólito exemplificador usado nos métodos descritos no presente documento. O pemetrexede é um análogo do ácido fólico. A substância medicamentosa, pemetrexede dissódico heptahidratado, tem o nome químico ácido L-glutâmico, N-[4-[2-(2-amino-4,7- di-hidro-4-oxo-1H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5il)etil]benzoil]-, sal dissódico, hepta- hidratado com uma fórmula molecular de C 20 H 19 N 5 Na 2 O 6 • 7H 2 O e um peso molecular de 597,49.

[158] Pemetrexede dissódico heptahidratado tem a seguinte estrutura:

[159] O pemetrexede inibe múltiplas enzimas dependentes de folato usadas na síntese de timina e purina, a saber, timidilato sintase (TS), di- hidrofolato redutase (DHFR) e glicinamida ribonucleotídeo formiltransferase (GARFT) (consulte Shih et al. (1997) Cancer Res. 57: 1116 -23). Ao inibir a formação de nucleotídeos precursores de purina e pirimidina, o pemetrexede impede a formação de DNA e RNA, que são necessários para o crescimento e a sobrevivência de células normais e cancerosas. Pemetrexede está comercialmente disponível como ALIMTA®, GIOPEM, PEXATE, PEMANAT, PEMEX, PEMMET, PEXATE, RELITREXED, TEMERAN, CIAMBRA e outros.

AGENTES DE PLATINA

[160] Os agentes de platina (como cisplatina, carboplatina, oxaliplatina e satraplatina) são fármacos antitumorais amplamente usados que causam reticulação de DNA como monoadduto, ligações cruzadas entre cadeias, ligações cruzadas intra-cadeia ou ligações cruzadas de proteínas de DNA. Os agentes de platina normalmente agem na posição N-7 adjacente da guanina, formando uma reticulação intra-cadeia 1, 2 (Poklar et al., (1996). Proc.

Natl. Acad. Sci. EUA. 93 (15): 7606–11; Rudd et al. (1995). Cancer Chemother.

Pharmacol. 35 (4): 323–6). A reticulação resultante inibe o reparo de DNA e/ou a síntese de DNA em células cancerosas.

[161] A carboplatina é um composto de coordenação de platina exemplar usado nos métodos descritos no presente documento. O nome químico da carboplatina é platina, diamina[1,1-ciclobutanodicarboxilato(2-)- O,O′]-,(SP-4-2), e a carboplatina tem a seguinte fórmula estrutural:

[162] A carboplatina é um pó cristalino com a fórmula molecular de C6H12N2O4Pt e um peso molecular de 371,25. É solúvel em água a uma taxa de aproximadamente de 14 mg/ml e o pH de uma solução a 1% é de 5 a 7. É virtualmente insolúvel em etanol, acetona e dimetilacetamida. A carboplatina produz predominantemente reticulações entre reticulações de DNA, e esse efeito é inespecífico do ciclo celular. A carboplatina é comercialmente disponível como PARAPLATIN®, BIOCARN, BLASTOCARB, BLASTOPLATIN, CARBOKEM, CARBOMAX, CARBOPA, CARBOPLAN, CARBOTEEN, CARBOTINAL, CYTOCARB, DUCARB, KARPLAT, KEMOCARB, NAPROPLAT, NEOPLATIN, NISCARBO, ONCOCARBIN, TEVACARB, WOMASTIN e outros.

[163] A cisplatina é outro composto de coordenação de platina exemplificador usado nos métodos descritos no presente documento. O nome químico da cisplatina é diamoniato de dicloroplatina, e a cisplatina tem a seguinte fórmula estrutural:

[164] A cisplatina é um complexo de platina inorgânico e solúvel em água com a fórmula molecular de Pt(NH3)2Cl2 e um peso molecular de 300,046. Após sofrer hidrólise, a mesma reage com o DNA para produzir reticulações intra e inter-cadeia. Essas reticulações parecem prejudicar a replicação e a transcrição do DNA. A citotoxicidade da cisplatina se correlaciona com a parada celular na fase G2 do ciclo celular. A cisplatina está disponível comercialmente como PLATINOL®, PLATINOL®-AQ, CDDP, CISPLAN, CISPLAT, PLATIKEM, PLATIONCO, PRACTICIS, PLATICIS, BLASTOLEM, CISMAX, CISPLAN, CISPLATINUM, CISTEEN, DUPLAT, KEMOPLAT, ONCOPLATIN-AQ, PLATINEX, PLATIN, TEVAPLATIN e outros.

V. PREPARAÇÃO DO ANTICORPO

[165] O anticorpo descrito no presente documento é preparado usando técnicas disponíveis na técnica para gerar anticorpos, métodos exemplares dos quais são descritos em mais detalhes nas seções seguintes.

[166] O anticorpo é direcionado contra um antígeno de interesse (por exemplo, PD-L1, como um PD-L1 humano). De preferência, o antígeno é um polipeptídeo biologicamente importante e a administração do anticorpo a um mamífero que sofre de um distúrbio pode resultar em um benefício terapêutico nesse mamífero.

[167] Em certas modalidades, um anticorpo aqui fornecido tem uma constante de dissociação (Kd) de ≤ 1μM, ≤ 150 nM, ≤ 100 nM, ≤ 50 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0,1 nM, ≤ 0,01 nM ou ≤ 0,001 nM (por exemplo, 10-8 M ou menos, por exemplo, de 10-8 M a 10-13 M, por exemplo, de 10-9 M a 10-13 M).

[168] Em uma modalidade, a Kd é medida por um ensaio de ligação ao antígeno radiomarcado (RIA) realizado com a versão Fab de um anticorpo de interesse e seu antígeno conforme descrito pelo seguinte ensaio.

Por exemplo, a afinidade de ligação de solução de Fabs para o antígeno é medida equilibrando Fab com uma concentração mínima de antígeno marcado com 125I na presença de uma série de titulação de antígeno não marcado, então capturando o antígeno ligado com uma placa revestida com anticorpo anti-Fab (consulte, por exemplo, Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865 a 881 (1999)). Para estabelecer as condições para o ensaio, placas multipoços MICROTITER® (Thermo Scientific) são revestidas durante a noite com 5 μg/ml de um anticorpo anti-Fab de captura (Cappel Labs) em carbonato de sódio a 50 mM (pH 9,6), e subsequentemente bloqueadas com 2% (p/v) de albumina de soro bovino em PBS durante duas a cinco horas à temperatura ambiente (aproximadamente 23°C). Em uma placa não adsorvente (Nunc no 269620), 100 pM ou 26 pM de antígeno com [125I] são misturados com diluições em série de um Fab de interesse. O Fab de interesse é então incubado durante a noite; no entanto, a incubação pode continuar por um período mais longo (por exemplo, cerca de 65 horas) para garantir que o equilíbrio seja alcançado. Depois disso, as misturas são transferidas para a placa de captura para incubação em temperatura ambiente (por exemplo, por uma hora). A solução é então removida e a placa lavada oito vezes com 0,1% de polissorbato 20 (TWEEN-20®) em PBS. Quando as placas estiverem secas, são adicionados150 μl/poço de cintilante (MICROSCINT-20 TM; Packard), e as placas são contadas em um contador gama TOPCOUNT TM (Packard) por dez minutos. As concentrações de cada Fab que dão menos ou igual a 20% da ligação máxima são escolhidas para uso em ensaios de ligação competitiva.

[169] De acordo com outra modalidade, Kd é medida com o uso de ensaios de ressonância de plasmon de superfície com o uso de um BIAcoreTM-2000 ou um BIAcoreTM-3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ) a 25 °C com chips de antígeno CM5 imobilizado em ~10 unidades de resposta (RU).

Em uma modalidade, chips biossensores de dextrano carboximetilado (CM5, BIACORE, Inc.) são ativados com N-etil-N’-(3-dimetilaminopropil)-carbodi-imida (EDC) e N-hidroxissuccinimida (NHS) de acordo com as instruções do fornecedor. O antígeno é diluído com 10 mM de acetato de sódio, pH 4,8, para 5 μg/ml (~ 0,2 μM) antes da injeção a um quociente de vazão de 5 μl/minuto para alcançar aproximadamente 10 unidades de resposta (UR) de proteína acoplada. Após a injeção de antígeno, etanolamina a 1 M é injetada para bloquear os grupos que não reagiram. Para medições cinéticas, diluições em série de duas vezes de Fab (0,78 nM a 500 nM) são injetadas em PBS com tensoativo polissorbato 20 a 0,05% (TWEEN-20TM) (PBST) a 25 °C a um quociente de vazão de aproximadamente 25 μl/min. As taxas de associação (kon) e as taxas de dissociação (koff) são calculadas com o uso de um modelo de ligação Langmuir simples um-para-um (BIACORE® Evaluation Software versão 3.2) ajustando simultaneamente os sensorgramas de associação e dissociação. A constante de equilíbrio de dissociação (Kd) é calculada como a razão koff/kon. Consulte, por exemplo, Chen et al., J. Mol. Biol., 293:865 a 881 (1999). Se a taxa de associação exceder 106 M-1 s-1 pelo ensaio de ressonância de plasmon de superfície acima, então a taxa de associação pode ser determinada com o uso de uma técnica de extinção de fluorescência que mede o aumento ou diminuição da intensidade de emissão de fluorescência (excitação = 295 nm; emissão = 340 nm, 16 nm passa-banda) a 25 °C de um anticorpo anti-antígeno a 20 nM (forma Fab) em PBS, pH 7,2, na presença de concentrações crescentes de antígeno medidas num espectrômetro, como um espectrofotômetro equipado com stop-flow (Aviv Instruments) ou um espectrofotômetro série 8000 SLM-Aminco TM (ThermoSpectronic) com uma cubeta agitada.

(I) PREPARAÇÃO DE ANTÍGENO

[170] Os antígenos solúveis ou fragmentos dos mesmos, opcionalmente conjugados a outras moléculas, podem ser usados como imunogênios para gerar anticorpos. Para moléculas transmembrana, como receptores, fragmentos destas (por exemplo, o domínio extracelular de um receptor) podem ser usados como o imunogênio. Alternativamente, as células que expressam a molécula transmembranar podem ser usadas como o imunogênio. Essas células podem ser derivadas de uma fonte natural (por exemplo, linhagens celulares de câncer) ou podem ser células que foram transformadas por técnicas recombinantes para expressar a molécula transmembranar. Outros antígenos e suas formas úteis para a preparação de anticorpos serão evidentes para os técnicos no assunto.

(II) MÉTODOS BASEADOS EM ANTICORPOS EXEMPLIFICADORES

[171] Os anticorpos policlonais são preferencialmente produzidos em animais por múltiplas injeções subcutâneas (sc) ou intraperitoneais (ip) do antígeno relevante e um adjuvante. Pode ser útil conjugar o antígeno relevante a uma proteína que é imunogênica na espécie a ser imunizada, por exemplo, hemocianina de lapa buraco de fechadura, albumina sérica, tireoglobulina bovina ou inibidor da tripsina de soja com o uso de um agente bifuncional ou derivatizante, por exemplo, éster maleimidobenzoil sulfossuccinimida (conjugação através de resíduos de cisteína), N- hidroxisuccinimida (através de resíduos de lisina), glutaraldeído, anidrido succínico, SOCl2, ou R1N = C = NR, em que R e R1 são grupos alquila diferentes.

[172] Os animais são imunizados contra o antígeno, conjugados imunogênicos ou derivados combinando, por exemplo, 100 µg ou 5 µg da proteína ou conjugado (para coelhos ou camundongos, respectivamente) com 3 volumes de adjuvante completo de Freund e injetando a solução por via intradérmica em vários sítios. Um mês mais tarde, os animais são reforçados com 1/5 a 1/10 da quantidade original de peptídeo ou conjugado em adjuvante completo de Freund por injeção subcutânea em múltiplos sítios. Sete a 14 dias depois, os animais são deixados a sangrar e o soro é testado quanto ao título de anticorpos. Os animais recebem reforços até que o título estabilize. De preferência, o animal recebe um reforço com o conjugado do mesmo antígeno, mas conjugado com uma proteína diferente e/ou através de um reagente de reticulação diferente. Os conjugados também podem ser feitos em cultura de células recombinantes como fusões de proteínas. Além disso, os agentes de agregação, como o alúmen, são adequadamente usados para aperfeiçoar a resposta imune.

[173] Os anticorpos monoclonais da presente revelação podem ser produzidos com o uso do método de hibridoma primeiro descrito por Kohler et al., Nature, 256:495(1975), e adicionalmente descrito, por exemplo, em Hongo et al., Hybridoma, 14(3):253 a 260 (1995), Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2ª ed. 1988); Hammerling et al., em: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563 a 681 (Elsevier, Nova York, 1981) e Ni, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006) sobre hibridomas humano-humano. Métodos adicionais incluem aqueles descritos, por exemplo, na patente dos EUA de nº 7.189.826 relativa à produção de anticorpos de IgM monoclonais naturais humanos a partir de linhagens celulares de hibridoma. A tecnologia de hibridoma humano (tecnologia de trioma) é descrita em Vollmers e Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) e Vollmers e Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185- 91 (2005).

[174] Para várias outras técnicas de hibridoma, consulte, por exemplo, os documentos no US 2006/258841; US 2006/183887 (anticorpos totalmente humanos), US 2006/059575; US 2005/287149; US 2005/100546; US 2005/026229; e patentes no US 7.078.492 e 7.153.507. Um protocolo exemplar para a produção de anticorpos monoclonais usando o método de hibridoma é descrito a seguir. Em uma modalidade, um camundongo ou outro animal hospedeiro apropriado, como um hamster, é imunizado para induzir linfócitos que produzem ou são capazes de produzir anticorpos que especificamente se ligarão à proteína usada para imunização. Os anticorpos são produzidos em animais por múltiplas injeções subcutâneas (sc) ou intraperitoneais (ip) de um polipeptídeo da presente divulgação ou um fragmento do mesmo, e um adjuvante, como monofosforil lipídeo A(MPL)/trealose dicrinomicolato (TDM) (Ribi Immunochem. Research, Inc., Hamilton, Mont,). Um polipeptídeo da presente revelação (por exemplo, antígeno) ou um fragmento do mesmo pode ser preparado com o uso de métodos bem conhecidos na técnica, como métodos recombinantes, alguns dos quais são descritos no presente documento. O soro de animais imunizados é testado para anticorpos antiantígeno, e imunizações de reforço são opcionalmente administradas. Linfócitos de animais que produzem anticorpos antiantígeno são isolados. Alternativamente, os linfócitos podem ser imunizados in vitro.

[175] Os linfócitos são então fundidos com células de mieloma com o uso de um agente de fusão adequado, como polietilenoglicol, para formar uma célula de hibridoma. Consulte, por exemplo, Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, páginas 59 a 103 (Academic Press, 1986).

As células de mieloma podem ser usadas para se fundirem de forma eficiente, suportarem a produção estável de alto nível de anticorpos pelas células produtoras de anticorpos selecionadas e são sensíveis a um meio como meio HAT. As células de mieloma exemplares incluem, sem limitação, linhagens de mieloma murino, como aquelas derivadas de tumores de camundongo MOPC- 21 e MPC-11 disponíveis junto à Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, Califórnia, EUA, e células SP-2 ou X63-Ag8-653 disponíveis junto à American Type Culture Collection, Rockville, Md., EUA. As linhagens celulares de mieloma humano e de heteromieloma camundongo-humano também foram descritas para a produção de anticorpos monoclonais humanos (Kozbor, J.

Immunol., 133:3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, páginas 51 a 63 (Marcel Dekker, Inc., Nova York, 1987)).

[176] As células de hibridoma assim preparadas são semeadas e cultivadas em um meio de cultura adequado, por exemplo, um meio que contém uma ou mais substâncias que inibem o crescimento ou a sobrevida das células de mieloma parentais não fundidas. Por exemplo, se as células de mieloma parentais carecerem da enzima hipoxantina-guanina fosforibosiltransferase (HGPRT ou HPRT), o meio de cultura para os hibridomas normalmente incluirá hipoxantina, aminopterina e timidina (meio HAT), cujas substâncias impedem o crescimento de células deficientes em HGPRT. De preferência, métodos de cultura de células de hibridoma sem soro são usados para reduzir o uso de soro derivado de animais, como soro fetal bovino, conforme descrito, por exemplo, em Even et al., Trends in Biotechnology, 24(3), 105 a 108 (2006).

[177] Os oligopeptídeos como ferramentas para melhorar a produtividade de culturas de células de hibridoma são descritos em Franek, Trends in Monoclonal Antibody Research, 111 a 122 (2005). Especificamente, os meios de cultura padrão são enriquecidos com certos aminoácidos (alanina, serina, asparagina, prolina) ou com frações de hidrolisado de proteína, e a apoptose pode ser significativamente suprimida por oligopeptídeos sintéticos, constituídos de três a seis resíduos de aminoácidos. Os peptídeos estão presentes em concentrações milimolares ou superiores.

[178] O meio de cultura no qual as células de hibridoma estão crescendo pode ser testado quanto à produção de anticorpos monoclonais que se ligam a um anticorpo da presente divulgação. A especificidade de ligação de anticorpos monoclonais produzidos por células de hibridoma pode ser determinada por imunoprecipitação ou por um ensaio de ligação in vitro, como radioimunoensaio (RIA) ou ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA). A afinidade de ligação do anticorpo monoclonal pode ser determinada, por exemplo, por análise de Scatchard. Consulte, por exemplo, Munson et al., Anal.

Biochem. 107:220 (1980).

[179] Após serem identificadas as células de hibridoma que produzem anticorpos com a especificidade, afinidade e/ou atividade desejadas, os clones podem ser subclonados por procedimentos de diluição limitantes e cultivados por métodos padrão. Consulte, por exemplo, Goding, supra. Os meios de cultura adequados para este fim incluem, por exemplo, meio D-MEM ou RPMI-1640. Além disso, as células de hibridoma podem ser cultivadas in vivo como tumores ascíticos em um animal, Os anticorpos monoclonais segregados pelos subclones são adequadamente separados do meio de cultura, fluido ascítico ou soro por procedimentos convencionais de purificação de imunoglobulina, como, por exemplo, proteína A-Sepharose, cromatografia de hidroxiapatita, eletroforese em gel, diálise ou cromatografia de afinidade.

Um procedimento para o isolamento de proteínas de células de hibridoma é descrito em US 2005/176122 e patente dos EUA de nº 6.919.436. O método inclui o uso de sais mínimos, como sais liotrópicos, no processo de ligação e, de preferência, também o uso de pequenas quantidades de solventes orgânicos no processo de eluição.

(III) ANTICORPOS DERIVADOS DE BIBLIOTECA

[180] Os anticorpos da presente revelação podem ser isolados por triagem de bibliotecas combinatórias para anticorpos com a atividade ou atividades desejadas. Por exemplo, é conhecida na técnica uma variedade de métodos para gerar bibliotecas de exibição em fagos e triagem de tais bibliotecas para anticorpos que têm as características ligação desejadas como os métodos descritos no Exemplo 3. Métodos adicionais são revisados, por exemplo, em Hoogenboom et al. em Methods in Molecular Biology 178:1 a 37 (O’Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001) e adicionalmente descritos, por exemplo, em McCafferty et al., Nature 348:552 a 554; Clackson et al., Nature 352: 624 a 628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581 a 597 (1992); Marks e Bradbury, em Methods in Molecular Biology 248:161 a 175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299 a 310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1.073 a 1.093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12.467 a 12.472 (2004); e Lee et al., J.

Immunol. Methods 284(1-2): 119 a 132(2004).

[181] Em certos métodos de exibição em fagos, os repertórios dos genes de VH e VL são clonados separadamente por reação em cadeia da polimerase (PCR) e recombinados aleatoriamente em bibliotecas em fagos, que podem então ser rastreadas quanto a fagos de ligação ao antígeno, conforme descrito em Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12:433 a 455 (1994).

Os fagos apresentam normalmente fragmentos de anticorpo, tanto como fragmentos Fv de cadeia única (scFv) ou como fragmentos Fab. Bibliotecas de fontes imunizadas fornecem anticorpos de alta afinidade para o imunógeno sem a necessidade de construir hibridomas. Alternativamente, o repertório intocado pode ser clonado (por exemplo, de ser humano) para fornecer uma única fonte de anticorpos para uma ampla faixa de antígenos não próprios e também próprios sem qualquer imunização, conforme descrito por Griffiths et al., EMBO J, 12:725 a 734 (1993). Finalmente, bibliotecas não expostas também podem ser produzidas sinteticamente pela clonagem de segmentos do gene V não rearranjados de células-tronco e usando iniciadores de PCR contendo sequência aleatória para codificar as regiões CDR3 altamente variáveis e realizar rearranjo in vitro, conforme descrito por Hoogenboom e Winter, J. Mol. Biol., 227:381 a 388 (1992). Publicações de patentes que descrevem bibliotecas em fagos de anticorpos humanos incluem, por exemplo: patente no US 5.750.373 e Publicações de Patente no US 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936 e 2009/0002360.

[182] Os anticorpos ou fragmentos de anticorpos isolados de bibliotecas de anticorpos humanos são considerados anticorpos humanos ou fragmentos de anticorpos humanos no presente documento.

(IV) ANTICORPOS QUIMÉRICOS, HUMANIZADOS E HUMANOS

[183] Em certas modalidades, um anticorpo fornecido no presente documento é um anticorpo quimérico. Certos anticorpos quiméricos são descritos, por exemplo, na patente no US 4.816.567; e Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6.851 a 6.855 (1984)). Em um exemplo, um anticorpo quimérico compreende uma região variável de anticorpos não humanos (por exemplo, uma região variável derivada de um camundongo, rato, hamster, coelho, ou primata não humano, como um macaco) e uma região constante humana. Em um outro exemplo, um anticorpo quimérico é um anticorpo de “classe trocada” em que a classe ou a subclasse foi alterada a partir do anticorpo parental. Os anticorpos quiméricos incluem fragmentos de ligação ao antígeno.

[184] Em certas modalidades, um anticorpo quimérico é um anticorpo humanizado. Normalmente, um anticorpo não humano é humanizado para reduzir a imunogenicidade para os humanos, embora mantendo a especificidade e afinidade do anticorpo não humano parental. Geralmente, um anticorpo humanizado compreende um ou mais domínios variáveis nos quais HVRs, por exemplo, CDRs (ou porções das mesmas) são derivadas de um anticorpo não humano e FRs (ou porções das mesmas) são derivadas de sequências de anticorpos humanos. Um anticorpo humanizado opcionalmente também compreenderá pelo menos uma porção de uma região constante humana. Em algumas modalidades, alguns resíduos de FR em um anticorpo humanizado são substituídos por resíduos correspondentes de um anticorpo não humano (por exemplo, o anticorpo a partir do qual os resíduos de HVR são derivados), por exemplo, para restaurar ou aprimorar a especificidade ou afinidade do anticorpo.

[185] Anticorpos humanizados e métodos para fabricar os mesmos são revisados, por exemplo, em Almagro e Fransson, Front. Biosci.

13:1.619 a 1.633 (2008), e são descritos adicionalmente, por exemplo, em Riechmann et al., Nature, 332:323 a 329 (1988); Queen et al., Proc. Natl..

Acad. Sci. USA, 86:10.029 a 10.033 (1989); Patentes no US 5.821.337,

7.527.791, 6.982.321 e 7.087.409; Kashmiri et al., Methods, 36:25 a 34 (2005) (descrevendo o enxerto de SDR(a-SDR)); Padlan, Mol. Immunol., 28:489 a 498 (1991) (descrevendo “ressurgimento”); Dall'Acqua et al., Methods, 36:43 a 60 (2005) (descrevendo “embaralhamento de FR”); e Osbourn et al., Methods, 36:61 a 68 (2005) e Klimka et al., Br. J. Cancer, 83:252 a 260 (2000) (descrevendo a abordagem de “seleção guiada” para embaralhamento de FR).

[186] As regiões estruturais humanas que podem ser usadas para humanização incluem, sem limitação: regiões estruturais selecionadas com o uso do método de “melhor-encaixe” (consulte, por exemplo, Sims et al., J. Immunol. 151: 2296 (1993)); regiões estruturais derivadas da sequência de consenso de anticorpos humanos de um subgrupo particular de regiões variáveis da cadeia leve ou pesada (consulte, por exemplo, Carter et al., Proc.

Natl.. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); e Presta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)); regiões estruturais humanas maduras (mutadas somaticamente) ou regiões estruturais da linha germinativa humana (consulte, por exemplo, Almagro e Fransson, Front. Biosci. 13: 1.619 a 1.633 (2008)); e regiões estruturais derivadas de bibliotecas de FR de triagem (consulte, por exemplo, Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10.678 a 10.684 (1997) e Rosok et al., J. Biol.

Chem. 271: 22611-22618 (1996)).

[187] Em certas modalidades, um anticorpo fornecido no presente documento é um anticorpo humano. Os anticorpos humanos podem ser produzidos usando várias técnicas conhecidas na técnica. Os anticorpos humanos são descritos geralmente em van Dijk e van de Winkel, Curr. Opin.

Pharmacol. 5:368-74 (2001) e Lonberg, Curr. Opin. Immunol. 20: 450-459 (2008).

[188] Os anticorpos humanos podem ser preparados por administrar um imunógeno a um animal transgênico que foi modificado para produzir anticorpos humanos intactos ou anticorpos intactos com regiões variáveis humanas em resposta ao desafio antigênico. Tais animais normalmente contêm todos ou uma porção dos loci de imunoglobulina humana, que substituem os loci de imunoglobulina endógena, ou que estão presentes de forma extracromossômica ou integrados aleatoriamente nos cromossomos do animal. Em tais camundongos transgênicos, os loci de imunoglobulina endógena geralmente foram inativados. Para uma revisão de métodos para obter anticorpos humanos a partir de animais transgênicos, consulte Lonberg, Nat. Biotech. 23:1.117 a 1.125 (2005). Consulte também, por exemplo, as patentes no US 6.075.181 e 6.150.584, que descrevem a tecnologia XENOMOUSE TM; patente no US 5.770.429, que descreve a tecnologia HUMAB ®; patente no US 7.041.870, que descreve a tecnologia K-M MOUSE® e Publicação de Pedido de patente no US 2007/0061900, que descreve a tecnologia ELOCIMOUSE®. As regiões variáveis humanas de anticorpos intactos geradas por tais animais podem ser adicionalmente modificadas, por exemplo, através da combinação com uma região constante humana diferente.

[189] Os anticorpos humanos também podem ser produzidos por métodos à base de hibridoma. Linhagens celulares de mieloma humano e de heteromieloma de camundongo-humano para a produção de anticorpos monoclonais humanos foram descritas. (Consulte, por exemplo, Kozbor J.

Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, páginas 51 a 63 (Marcel Dekker, Inc., Nova York, 1987); e Boerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991).) Anticorpos humanos gerados por meio de tecnologia de hibridoma de células B humanas também são descritos em Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3.557 a 3.562 (2006). Métodos adicionais incluem aqueles descritos, por exemplo, na patente no US 7.189.826 (descrevendo a produção de anticorpos IgM humanos monoclonais a partir de linhagens celulares de hibridoma) e em Ni, Xiandai Mianyixue, 26(4):265 a 268 (2006) (descrevendo hibridomas humano-humano).

A tecnologia de hibridoma humano (tecnologia de trioma) também é descrita em Vollmers e Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) e Vollmers e Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185 -91 (2005).

[190] Os anticorpos humanos também podem ser gerados isolando sequências de domínio variável de clone Fv selecionadas a partir de bibliotecas de exibição em fago derivadas de humanos. Essas sequências de domínio variável podem então ser combinadas com um domínio constante humano desejado. As técnicas para a seleção de anticorpos humanos a partir de bibliotecas de anticorpos são descritas abaixo.

(V) FRAGMENTOS DE ANTICORPO

[191] Os fragmentos de anticorpos podem ser gerados por meios tradicionais, como digestão enzimática ou por técnicas recombinantes.

Em certas circunstâncias, há vantagens em usar fragmentos de anticorpos, em vez de anticorpos inteiros. O tamanho menor dos fragmentos permite uma eliminação rápida e pode levar a um melhor acesso a tumores sólidos. Para uma revisão de certos fragmentos de anticorpo, consulte Hudson et al., Nat.

Med. 9:129 a 134 (2003).

[192] Várias técnicas foram desenvolvidas para a produção de fragmentos de anticorpos. Tradicionalmente, esses fragmentos foram derivados por digestão proteolítica de anticorpos intactos (consulte, por exemplo, Morimoto et al., Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107 a 117 (1992); e Brennan et al., Science, 229:81 (1985)). No entanto, esses fragmentos podem agora ser produzidos diretamente por células hospedeiras recombinantes. Os fragmentos de anticorpos Fab, Fv e ScFv podem todos ser expressos e segregados a partir de E. coli, permitindo assim a produção fácil de grandes quantidades desses fragmentos. Os fragmentos de anticorpos podem ser isolados das bibliotecas de fago de anticorpos discutidas acima.

Alternativamente, os fragmentos Fab’-SH podem ser diretamente recuperados a partir de E. coli e acoplados quimicamente para formar fragmentos F(ab’)2 (Carter et al., Bio/Technology 10:163 a 167 (1992)). De acordo com outra abordagem, os fragmentos F(ab’) 2 podem ser isolados diretamente da cultura de células hospedeiras recombinantes. Os fragmentos Fab e F(ab’)2 com meia- vida in vivo aumentada que compreendem resíduos de epítopo de ligação ao receptor de salvamento são descritos na patente no US 5.869.046. Outras técnicas para a produção de fragmentos de anticorpos serão evidentes para o técnico no assunto. Em certas modalidades, um anticorpo é um fragmento Fv de cadeia simples (scFv). Consulte WO 93/16185; patentes no US 5.571.894 e

5.587.458. Fv e scFv são as únicas espécies com sítios de combinação intactos desprovidos de regiões constantes; assim, os mesmos podem ser adequados para ligação não específica reduzida durante o uso in vivo. As proteínas de fusão scFv podem ser construídas para produzir a fusão de uma proteína efetora no terminal amino ou carboxi de um scFv. Consulte Antibody Engineering, ed. Borrebaeck, supra. O fragmento de anticorpo também pode ser um “anticorpo linear”, por exemplo, conforme descrito na patente no US

5.641.870, por exemplo. Esses anticorpos lineares podem ser monoespecíficos ou biespecíficos.

(VI) ANTICORPOS MULTIESPECÍFICOS

[193] Os anticorpos multiespecíficos têm especificidades de ligação para pelo menos dois epítopos diferentes, em que os epítopos são geralmente de antígenos diferentes. Embora tais moléculas normalmente se liguem somente a dois epítopos diferentes (isto é, anticorpos biespecíficos, BsAbs), anticorpos com especificidades adicionais, como anticorpos triespecíficos, são abrangidos por esta expressão quando usados no presente documento. Os anticorpos biespecíficos podem ser preparados como anticorpos de comprimento total ou fragmentos de anticorpo por exemplo, anticorpos biespecíficos F(ab’)2.

[194] Os métodos para produzir anticorpos biespecíficos são conhecidos na técnica. A produção tradicional de anticorpos biespecíficos de comprimento total é baseada na coexpressão de dois pares de cadeia pesada- cadeia leve de imunoglobulina, em que as duas cadeias têm especificidades diferentes (Millstein et al., Nature, 305: 537 a 539 (1983)). Devido ao sortimento aleatório das cadeias pesada e leve de imunoglobulina, esses hibridomas (quadromas) produzem uma mistura potencial de 10 moléculas de anticorpo diferentes, das quais somente uma tem a estrutura biespecífica correta. A purificação da molécula correta, que geralmente é feita por etapas de cromatografia de afinidade, é bastante complicada e os rendimentos do produto são baixos. Procedimentos similares são revelados no documento WO 93/08829 e em Traunecker et al., EMBO J., 10:3.655 a 3.659 (1991).

[195] Uma abordagem conhecida na técnica para a produção de anticorpos biespecíficos é a abordagem “knobs-into-holes” ou “protuberance-into-cavity” (consulte, por exemplo, patente no US 5.731.168).

Nessa abordagem, dois polipeptídeos de imunoglobulina (por exemplo, polipeptídeos de cadeia pesada), em que cada um compreende uma interface.

Uma interface de um polipeptídeo de imunoglobulina interage com uma interface correspondente no outro polipeptídeo de imunoglobulina, permitindo assim que os dois polipeptídeos de imunoglobulina se associem. Essas interfaces podem ser manipuladas de modo que um “botão” (knob) ou “protuberância” (protuberance) (esses termos podem ser usados de forma intercambiável no presente documento) localizados na interface de um polipeptídeo de imunoglobulina corresponde a um “orifício” (hole) ou “cavidade” (cavity) (esses termos podem ser usados de forma intercambiável no presente documento) localizados na interface do outro polipeptídeo de imunoglobulina.

Em algumas modalidades, o orifício é de tamanho idêntico ou semelhante ao do botão e adequadamente posicionado de tal modo que, quando as duas interfaces interagem, o botão de uma interface é posicionável no orifício correspondente da outra interface. Sem desejar se limitar à teoria, acredita-se que isso estabilize o heteromultímero e favoreça a formação do heteromultímero em relação a outras espécies, por exemplo, homomultímeros.

Em algumas modalidades, esta abordagem pode ser usada para promover a heteromultimerização de dois polipeptídeos de imunoglobulina diferentes, criando um anticorpo biespecífico compreendendo dois polipeptídeos de imunoglobulina com especificidades de ligação para diferentes epítopos.

[196] Em algumas modalidades, um botão pode ser construído substituindo uma pequena cadeia lateral de aminoácido por uma cadeia lateral maior. Em algumas modalidades, um orifício pode ser construído substituindo uma grande cadeia lateral de aminoácido por uma cadeia lateral menor. Botões ou orifícios podem existir na interface original ou podem ser introduzidos sinteticamente. Por exemplo, botões ou orifícios podem ser introduzidos sinteticamente por meio da alteração da sequência de ácido nucleico que codifica a interface para substituir pelo menos um resíduo de aminoácido “original” por pelo menos um resíduo de aminoácido “importado”. Os métodos para alterar as sequências de ácido nucleico podem incluir técnicas de biologia molecular padrão bem conhecidas na técnica. Os volumes da cadeia lateral de vários resíduos de aminoácidos são mostrados na Tabela 1 abaixo. Em algumas modalidades, os resíduos originais têm um pequeno volume da cadeia lateral (por exemplo, alanina, asparagina, ácido aspártico, glicina, serina, treonina ou valina) e resíduos de importação para formar um botão são aminoácidos de ocorrência natural e podem incluir arginina, fenilalanina, tirosina e triptofano. Em algumas modalidades, os resíduos originais têm um grande volume da cadeia lateral (por exemplo, arginina, fenilalanina, tirosina e triptofano) e resíduos de importação para formar um orifício são aminoácidos de ocorrência natural e podem incluir alanina, serina, treonina e valina.

TABELA 1. PROPRIEDADES DOS RESÍDUOS DE AMINOÁCIDOS Abreviatura Massaa Volumeb Área de superfície Aminoácido de uma letra (daltons) (Å3) acessível c (Å2) Alanina (Ala) A 71,08 88,6 115 Arginina (Arg) R 156,20 173,4 225 Asparagina (Asn) N 114,11 117,7 160 Ácido Aspártico (Asp) D 115,09 111,1 150 Cisteína (Cys) C 103,14 108,5 135 Glutamina (Gln) Q 128,14 143,9 180 Ácido Glutâmico (Glu) E 129,12 138,4 190 Glicina (Gly) G 57,06 60,1 75

Abreviatura Massaa Volumeb Área de superfície Aminoácido de uma letra (daltons) (Å3) acessível c (Å2) Histidina (His) H 137,15 153,2 195 Isoleucina (Ile) I 113,17 166,7 175 Leucina (Leu) L 113,17 166,7 170 Lisina (Lys) K 128,18 168,6 200 Metionina (Met) M 131,21 162,9 185 Fenilalanina (Phe) F 147,18 189,9 210 Prolina (Pro) P 97,12 122,7 145 Serina (Ser) S 87,08 89,0 115 Treonina (Thr) T 101,11 116,1 140 Triptofano (Trp) W 186,21 227,8 255 Tirosina (Tyr) Y 163,18 193,6 230 Valina (Val) V 99,14 140,0 155 a Peso molecular do aminoácido menos o da água. Valores de Handbook of Chemistry and Physics, 43ª ed. Cleveland, Chemical Rubber Publishing Co., 1961. b Valores de A.A. Zamyatnin, Prog. Biophys, Mol. Biol. 24: 107-123, 1972. c Valores a partir de C. Chothia, J. Mol. Biol. 105:1-14,

1975. A área de superfície acessível é definida nas Figuras 6 a 20 desta referência.

[197] Em algumas modalidades, os resíduos originais para formar um botão ou orifício são identificados com base na estrutura tridimensional do heteromultímero. As técnicas conhecidas na técnica para obter uma estrutura tridimensional podem incluir cristalografia de raios-X e NMR. Em algumas modalidades, a interface é o domínio CH3 de um domínio constante de imunoglobulina. Nessas modalidades, a interface CH3/CH3 de IgG1 humana envolve dezesseis resíduos em cada domínio localizado em quatro fitas β anti-paralelas. Sem desejar estar limitado à teoria, os resíduos mutados estão preferencialmente localizados nas duas fitas β anti-paralelas centrais para minimizar o risco de que os botões podem ser acomodados pelo solvente circundante, em vez dos orifícios compensatórios no domínio CH3 parceiro. Em algumas modalidades, as mutações que formam botões e orifícios correspondentes em dois polipeptídeos de imunoglobulina correspondem a um ou mais pares fornecidos na Tabela 2.

TABELA 2. CONJUNTOS EXEMPLARES DE MUTAÇÕES FORMADORAS DE BOTÃO E BURACO CORRESPONDENTES* CH3 da primeira imunoglobulina CH3 da segunda imunoglobulina T366Y Y407T T366W Y407A F405A T394W Y407T T366Y T366Y:F405A T394W:Y407T T366W:F405W T394S:Y407A F405W:Y407A T366W:T394S F405W T394S * As mutações são denotadas pelo resíduo original, seguido pela posição usando o sistema de numeração de Kabat e, em seguida, pelo resíduo de importação (todos os resíduos são dados no código de aminoácidos de uma única letra). Múltiplas mutações são separadas por dois pontos.

[198] Em algumas modalidades, um polipeptídeo de imunoglobulina compreende um domínio CH3 compreendendo uma ou mais substituições de aminoácidos listadas na Tabela 2 acima. Em algumas modalidades, um anticorpo biespecífico compreende um primeiro polipeptídeo de imunoglobulina que compreende um domínio CH3 que compreende uma ou mais substituições de aminoácidos listadas na coluna esquerda da Tabela 2, e um segundo polipeptídeo de imunoglobulina que compreende um domínio CH3 que compreende uma ou mais substituições de aminoácidos correspondentes listadas na coluna direita da Tabela 2.

[199] Após mutação do DNA como discutido acima,

polinucleotídeos que codificam polipeptídeos de imunoglobulina modificados com uma ou mais mutações formadoras de botão ou buraco correspondentes podem ser expressos e purificados usando técnicas recombinantes padrão e sistemas celulares conhecidos na técnica.

Consulte, por exemplo, as patentes no US 5.731.168; 5.807.706; 5.821.333; 7.642.228; 7.695.936; 8.216.805;

publicação de patente no US 2013/0089553; e Spiess et al., Nature

Biotechnology 31:753 a 758, 2013. Os polipeptídeos de imunoglobulina modificados podem ser produzidos com o uso de células hospedeiras procarióticas, como E. coli, ou células hospedeiras eucarióticas, como células

CHO.

Os polipeptídeos de imunoglobulina com botões e orifícios correspondentes podem ser expressos em células hospedeiras em cocultura e purificados juntos como um heteromultímero, ou podem ser expressos em culturas únicas, purificados separadamente e montados in vitro.

Em algumas modalidades, duas cepas de células hospedeiras bacterianas (uma expressando um polipeptídeo de imunoglobulina com um botão e a outra expressando um polipeptídeo de imunoglobulina com um orifício) são cocultivadas usando técnicas de cultura bacteriana padrão conhecidas na técnica.

Em algumas modalidades, as duas cepas podem ser misturadas em uma razão específica, por exemplo, de modo a alcançar níveis de expressão iguais em cultura.

Em algumas modalidades, as duas cepas podem ser misturadas em uma razão de 50:50, 60:40 ou 70:30. Após a expressão do polipeptídeo, as células podem ser lisadas juntas e a proteína pode ser extraída.

As técnicas padrão conhecidas na técnica que permitem medir a abundância de espécies homo-multiméricas vs. hetero-multiméricas podem incluir cromatografia de exclusão por tamanho.

Em algumas modalidades, cada polipeptídeo de imunoglobulina modificado é expresso separadamente usando técnicas recombinantes padrão e podem ser montados in vitro.

A montagem pode ser alcançada, por exemplo, purificando cada polipeptídeo de imunoglobulina modificado, misturando e incubando-os juntos em massa igual, reduzindo dissulfetos (por exemplo, por tratamento com ditiotreitol), concentrando e reoxidando os polipeptídeos. Os anticorpos biespecíficos formados podem ser purificados usando técnicas padrão, incluindo cromatografia de troca catiônica e medidos usando técnicas padrão, incluindo cromatografia de exclusão de tamanho. Para uma descrição mais detalhada desses métodos, consulte Speiss et al., Nat Biotechnol 31:753-8, 2013. Em algumas modalidades, os polipeptídeos de imunoglobulina modificados podem ser expressos separadamente em células CHO e montados in vitro usando os métodos descritos acima.

[200] De acordo com uma abordagem diferente, os domínios variáveis de anticorpo com as especificidades de ligação desejadas (locais de combinação anticorpo-antígeno) são fundidos a sequências de domínio constante de imunoglobulina. A fusão é preferencialmente com um domínio constante de cadeia pesada de imunoglobulina, compreendendo pelo menos parte das regiões de dobradiça, CH2 e CH3. É típico ter a primeira região constante de cadeia pesada (CH1) contendo o local necessário para a ligação de cadeia leve, presente em pelo menos uma das fusões. Os DNAs que codificam as fusões de cadeia pesada de imunoglobulina e, se desejado, a cadeia leve de imunoglobulina, são inseridos em vetores de expressão separados e são cotransfectados em um organismo hospedeiro adequado. Isto proporciona grande flexibilidade no ajuste das proporções mútuas dos três fragmentos de polipeptídeo em modalidades quando razões desiguais das três cadeias de polipeptídeo usadas na construção fornecem os rendimentos ideais.

É, no entanto, possível inserir as sequências de codificação para duas ou todas as três cadeias de polipeptídeo em um vetor de expressão quando a expressão de pelo menos duas cadeias de polipeptídeo em razões iguais resulta em rendimentos elevados ou quando as razões não têm significado particular.

[201] Em uma modalidade desta abordagem, os anticorpos biespecíficos são compostos por uma cadeia pesada de imunoglobulina híbrida com uma primeira especificidade de ligação em um braço e um par de cadeia pesada-cadeia leve de imunoglobulina híbrida (fornecendo uma segunda especificidade de ligação) no outro braço. Verificou-se que esta estrutura assimétrica facilita a separação do composto biespecífico desejado de combinações de cadeia de imunoglobulina indesejadas, uma vez que a presença de uma cadeia leve de imunoglobulina em apenas uma metade da molécula biespecífica fornece uma maneira fácil de separação. Esta abordagem é divulgada em WO 94/04690. Para obter mais detalhes sobre a geração de anticorpos biespecíficos, consulte, por exemplo, Suresh et al., Methods in Enzymology, 121:210(1986).

[202] De acordo com outra abordagem descrita em WO96/27011, a interface entre um par de moléculas de anticorpo pode ser projetada para maximizar a porcentagem de heterodímeros que são recuperados da cultura de células recombinantes. Uma interface compreende pelo menos uma parte do domínio CH3 de um domínio constante de anticorpo.

Nesse método, uma ou mais pequenas cadeias laterais de aminoácidos da interface da primeira molécula de anticorpo são substituídas por cadeias laterais maiores (por exemplo, tirosina ou triptofano). “Cavidades” compensadoras de tamanho idêntico ou similar à grande cadeia (ou cadeias) lateral são criadas na interface da segunda molécula de anticorpo pela substituição de grandes cadeias laterais de aminoácidos por outras menores (por exemplo, alanina ou treonina). Isso fornece um mecanismo para aumentar o rendimento do heterodímero em relação a outros produtos finais indesejados, como homodímeros.

[203] Os anticorpos biespecíficos incluem anticorpos reticulados ou “heteroconjugados”. Por exemplo, um dos anticorpos no heteroconjugado pode ser acoplado à avidina e o outro à biotina. Tais anticorpos foram, por exemplo, propostos para direcionar células do sistema imunológico a células indesejadas (patente dos EUA de nº 4.676.980) e para o tratamento de infecção por HIV (WO 91/00360, WO 92/200373 e EP 03089). Os anticorpos heteroconjugados podem ser produzidos usando quaisquer métodos de reticulação convenientes. Os agentes de reticulação adequados são bem conhecidos na técnica e são divulgados na patente dos EUA de nº 4.676.980, juntamente com uma série de técnicas de reticulação.

[204] As técnicas para gerar anticorpos biespecíficos a partir de fragmentos de anticorpos também foram descritas na literatura. Por exemplo, anticorpos biespecíficos podem ser preparados usando ligação química.

Brennan et al., Science, 229:81 (1985) descrevem um procedimento em que anticorpos intactos são clivados proteoliticamente para gerar fragmentos F(ab’)2. Esses fragmentos são reduzidos na presença do agente complexante de ditiol arsenito de sódio para estabilizar os ditióis vicinais e prevenir a formação de dissulfeto intermolecular. Os fragmentos Fab’ gerados são então convertidos em derivados de tionitrobenzoato (TNB). Um dos derivados Fab’- TNB é, então, reconvertido no Fab’-tiol por redução com mercaptoetilamina e é misturado com uma quantidade equimolar do outro derivado Fab’-TNB para formar o anticorpo biespecífico. Os anticorpos biespecíficos produzidos podem ser usados como agentes para a imobilização seletiva de enzimas.

[205] O progresso recente facilitou a recuperação direta de fragmentos Fab’-SH a partir de E. coli, que podem ser acoplados quimicamente para formar anticorpos biespecíficos. Shalaby et al., J. Exp. Med., 175:217 a 225 (1992) descreve a produção de uma molécula F(ab’)2 de anticorpo biespecífico totalmente humanizado. Cada fragmento Fab’ foi secretado separadamente de E. coli e submetido a acoplamento químico direcionado in vitro para formar o anticorpo biespecífico.

[206] Várias técnicas para produzir e isolar fragmentos de anticorpos biespecíficos diretamente da cultura de células recombinantes também foram descritas. Por exemplo, anticorpos biespecíficos foram produzidos usando zíperes de leucina. Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1.547 a 1.553 (1992). Os peptídeos de zíper de leucina das proteínas Fos e Jun foram ligados às porções Fab’ de dois anticorpos diferentes por fusão genética. Os homodímeros de anticorpo foram reduzidos na região de dobradiça para formar monômeros e, em seguida, foram reoxidados para formar os heterodímeros de anticorpo. Este método também pode ser usado para a produção de homodímeros de anticorpos. A tecnologia “diacorpo” descrita por Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6.444 a 6.448 (1993) forneceu um mecanismo alternativo para produzir fragmentos de anticorpos biespecíficos. Os fragmentos compreendem um domínio variável de cadeia pesada (VH) conectado a um domínio variável de cadeia leve (VL) por um ligante que é muito curto para permitir o emparelhamento entre os dois domínios na mesma cadeia. Consequentemente, os domínios VH e V L de um fragmento são forçados a emparelhar com os domínios VL e VH complementares de outro fragmento, formando assim dois locais de ligação ao antígeno. Outra estratégia para produzir fragmentos de anticorpos biespecíficos pelo uso de dímeros Fv de cadeia única (sFv) também foi relatada. Consulte Gruber et al. J.

Immunol, 152:5368 (1994).

[207] Anticorpos com mais de duas valências são contemplados.

Por exemplo, podem ser preparados anticorpos triespecíficos. Tuft et al. J. Immunol, 147: 60 (1991).

(VII) ANTICORPOS DE DOMÍNIO ÚNICO

[208] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente revelação pode ser um anticorpo de domínio único. O anticorpo de domínio único é uma cadeia de polipeptídeo único que compreendem toda ou uma porção do domínio variável de cadeia pesada ou toda ou uma porção do domínio variável da cadeia leve de um anticorpo. Em certas modalidades, um anticorpo de domínio único é um anticorpo de domínio único humano (Domantis, Inc., Waltham, MA; consulte, por exemplo, patente no US 6.248.516 B1). Em uma modalidade, um anticorpo de domínio único consiste em todo ou uma porção do domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo.

(VIII) VARIANTES DE ANTICORPO

[209] Em algumas modalidades, contempla-se a modificação (ou modificações) de sequência de aminoácidos dos anticorpos descritos no presente documento. Por exemplo, pode ser desejável melhorar a afinidade de ligação e/ou outras propriedades biológicas do anticorpo. As variantes da sequência de aminoácidos do anticorpo podem ser preparadas através da introdução de modificações apropriadas na sequência de nucleotídeos que codifica o anticorpo ou por síntese peptídica. Tais modificações incluem, por exemplo, deleções e/ou inserções e/ou substituições de resíduos nas sequências de aminoácidos do anticorpo. Qualquer combinação de deleção, inserção e substituição pode ser feita para chegar ao construto final, desde que o construto final tenha as características desejadas. As alterações de aminoácidos podem ser introduzidas na sequência de aminoácidos do anticorpo em questão no momento em que essa sequência é feita.

(IX) VARIANTES DE SUBSTITUIÇÃO, INSERÇÃO E EXCLUSÃO

[210] Em certas modalidades, são fornecidas variantes de anticorpo que têm uma ou mais substituições de aminoácidos. Sítios de interesse para a mutagênese de substituição incluem as HVRs e FRs. As substituições conservativas são mostradas na Tabela 3. Alterações mais substanciais são fornecidas na Tabela 1, sob o título “substituições exemplificadoras”, e conforme descrito abaixo em referência às classes de cadeia lateral de aminoácidos. As substituições de aminoácidos podem ser introduzidas em um anticorpo de interesse e os produtos selecionados para uma atividade desejada, por exemplo, ligação ao antígeno retida/aprimorada, imunogenicidade diminuída ou ADCC ou CDC aprimoradas.

TABELA 3. SUBSTITUIÇÕES CONSERVATIVAS. Resíduo Original Substituições exemplificadoras Substituições preferenciais Ala (A) Val; Leu; Ile Val Arg (R) Lys; Gln; Asn Lys Asn (N) Gln; His; Asp, Lys; Arg Gln Asp (D) Glu; Asn Glu Cys (C) Ser; Ala Ser Gln (Q) Asn; Glu Asn Glu (E) Asp; Gln Asp Gly (G) Ala Ala His (H) Asn; Gln; Lys; Arg Arg Ile (I) Leu; Val; Met; Ala; Phe; Norleucina Leu Leu (L) Norleucina; Ile; Val; Met; Ala; Phe Ile Lys (K) Arg; Gln; Asn Arg Met (M) Leu; Phe; Ile Leu Phe (F) Trp; Leu; Val; Ile; Ala; Tyr Tyr Pro (P) Ala Ala Ser (S) Thr Thr Thr (T) Val; Ser Ser Trp (W) Tyr; Phe Tyr Tyr (Y) Trp; Phe; Thr; Ser Phe Val (V) Ile; Leu; Met; Phe; Ala; Norleucina Leu

[211] Os aminoácidos podem ser agrupados de acordo com as propriedades comuns da cadeia lateral: a. hidrofóbico: Norleucina, Met, Ala, Val, Leu, Ile; b. hidrofílico neutro: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; c. ácido: Asp, Glu; d. básico: His, Lys, Arg; e. resíduos que influenciam a orientação da cadeia: Gly, Pro; f. aromático: Trp, Tyr, Phe.

[212] Substituições não conservadoras implicarão a troca de um membro de uma dessas classes por outra classe.

[213] Um tipo de variante de substituição envolve a substituição de um ou mais resíduos da região hipervariável de um anticorpo parental (por exemplo, um anticorpo humanizado ou humano). Geralmente, a variante (ou variantes) resultante selecionada para estudo posterior terá modificações (por exemplo, aprimoramentos) em certas propriedades biológicas (por exemplo, afinidade aumentada, imunogenicidade reduzida) em relação ao anticorpo parental e/ou terá substancialmente retido certas propriedades biológicas do anticorpo parental. Uma variante de substituição exemplar é um anticorpo maturado por afinidade, que pode ser gerado convenientemente, por exemplo, com o uso de técnicas de maturação por afinidade à base de exibição de fagos, como aquelas descritas no presente documento. Em suma, um ou mais resíduos de HVR são mutados e os anticorpos variantes são exibidos no fago e rastreados para uma atividade biológica particular (por exemplo, afinidade de ligação).

[214] Alterações (por exemplo, substituições) podem ser realizadas em HVRs, por exemplo, para melhorar a afinidade do anticorpo. Tais alterações podem ser realizadas em “pontos de acesso” de HVR, isto é, resíduos codificados por códons que sofrem mutação em alta frequência durante o processo de maturação somática (consulte, por exemplo, Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179 a 196 (2008)), e/ou SDR (a-CDRs), com a VH ou VL variante resultante sendo testada quanto à afinidade de ligação. A maturação por afinidade por construção e resseleção de bibliotecas secundárias foi descrita, por exemplo, em Hoogenboom et al., em Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O’Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001)). Em algumas modalidades de maturação por afinidade, a diversidade é introduzida nos genes variáveis escolhidos para a maturação por qualquer um de uma variedade de métodos (por exemplo, por PCR propenso a erros,

embaralhamento de cadeias, ou mutagênese dirigida por oligonucleotídeos). É então criada uma biblioteca secundária. A biblioteca é então rastreada para identificar quaisquer variantes de anticorpos com a afinidade desejada. Outro método para introduzir diversidade envolve abordagens direcionadas a HVR, nas quais vários resíduos de HVR (por exemplo, 4 a 6 resíduos de cada vez) são randomizados. Os resíduos de HVR envolvidos na ligação ao antígeno podem ser especificamente identificados, por exemplo, com o uso de modelagem ou mutagênese de varredura de alanina. CDR-H3 e CDR-L3 em particular são frequentemente direcionadas.

[215] Em certas modalidades, substituições, inserções ou deleções podem ocorrer dentro de uma ou mais HVRs, desde que tais alterações não reduzam substancialmente a capacidade de o anticorpo se ligar ao antígeno. Por exemplo, alterações conservativas (por exemplo, substituições conservativas como fornecidas no presente documento) que não reduzem substancialmente a afinidade de ligação podem ser realizadas em HVRs. Tais alterações podem estar fora dos “pontos de acesso” de HVR ou SDRs. Em certas modalidades da variante de sequências de VH e VL fornecidas acima, cada HVR é inalterada, ou não contém mais do que uma, duas ou três substituições de aminoácidos.

[216] Um método útil para identificação de resíduos ou regiões de um anticorpo que pode ser direcionado para mutagênese é chamado “mutagênese de varredura de alanina”, como descrito por Cunningham e Wells, (1989), Science, 244:1.081 a 1.085. Nesse método, um resíduo ou grupo de resíduos alvo (por exemplo, resíduos carregados, como arg, asp, his, lys e glu) são identificados e substituídos por um aminoácido neutro ou carregado negativamente (por exemplo, alanina ou polialanina) para determinar se a interação do anticorpo com o antígeno é afetada. Outras substituições podem ser introduzidas nos locais de aminoácidos demonstrando sensibilidade funcional às substituições iniciais. Alternativamente, ou adicionalmente, é fornecida uma estrutura cristalina de um complexo antígeno-anticorpo para identificar pontos de contato entre o anticorpo e o antígeno. Tais resíduos de contato e resíduos vizinhos podem ser direcionados ou eliminados como candidatos para substituição. Variantes podem ser rastreadas para determinar se elas contêm as propriedades desejadas.

[217] As inserções de sequências de aminoácidos incluem fusões de terminal amino e/ou carboxila que variam em comprimento de um resíduo a polipeptídeos contendo cem ou mais resíduos, bem como inserções intra-sequência de um ou vários resíduos de aminoácidos. Exemplos de inserções terminais incluem um anticorpo com um resíduo de metionila N- terminal. Outras variantes de inserção da molécula de anticorpo incluem a fusão ao terminal N ou C do anticorpo a uma enzima (por exemplo, para ADEPT) ou um polipeptídeo que aumenta a meia-vida sérica do anticorpo.

(X) VARIANTES DE GLICOSILAÇÃO

[218] Em certas modalidades, um anticorpo fornecido no presente documento é alterado para aumentar ou diminuir o grau em que o anticorpo é glicosilado. A adição ou deleção de locais de glicosilação a um anticorpo pode ser convenientemente realizada alterando a sequência de aminoácidos de tal modo que um ou mais locais de glicosilação sejam criados ou removidos.

[219] Quando o anticorpo compreende uma região Fc, o carboidrato a ela ligado pode ser alterado. Os anticorpos nativos produzidos por células de mamíferos compreendem tipicamente um oligossacarídeo ramificado, bianternário, que está geralmente ligado por uma ligação N a Asn297 do domínio CH2 da região Fc. Consulte, por exemplo, Wright et al., TIBTECH, 15:26 a 32 (1997). O oligossacarídeo pode incluir vários carboidratos, por exemplo, manose, N-acetilglicosamina (GlcNAc), galactose e ácido siálico, bem como uma fucose ligada a um GlcNAc na “haste” da estrutura do oligossacarídeo biantenário. Em certas modalidades, as modificações do oligossacarídeo em um anticorpo da presente revelação podem ser realizadas a fim de criar variantes de anticorpo com certas propriedades melhoradas.

[220] Em uma modalidade, as variantes de anticorpos são fornecidas compreendendo uma região Fc em que uma estrutura de carboidrato ligada à região Fc tem fucose reduzida ou carece de fucose, o que pode melhorar a função ADCC. Especificamente, são contemplados no presente documento anticorpos que têm fucose reduzida em relação à quantidade de fucose no mesmo anticorpo produzido em uma célula CHO do tipo selvagem. Ou seja, os mesmos são caracterizados por terem uma quantidade inferior de fucose do que teriam se fossem produzidos por células CHO nativas (por exemplo, uma célula CHO que produz um padrão de glicosilação nativo, como uma célula CHO contendo um gene FUT8 nativo). Em certas modalidades, o anticorpo é aquele em que menos de cerca de 50%, 40%, 30%, 20%, 10% ou 5% dos glicanos ligados a N nele compreendem fucose. Por exemplo, a quantidade de fucose de tal anticorpo pode ser de 1% a 80%, de 1% a 65%, de 5% a 65% ou de 20% a 40%. Em certas modalidades, o anticorpo é aquele em que nenhum dos glicanos ligados a N nele compreende fucose, ou seja, em que o anticorpo está completamente sem fucose, ou não tem fucose ou é fucosilado. A quantidade de fucose é determinada calculando a quantidade média de fucose dentro da cadeia de açúcar em Asn297, em relação à soma de todas as glicostruturas ligadas a Asn 297 (por exemplo, estruturas complexas, híbridas e de alta manose), conforme medido por espectrometria de massa MALDI-TOF, como descrito no documento WO 2008/077546, por exemplo. Asn297 se refere ao resíduo de asparagina localizado próximo da posição 297 na região Fc (numeração da UE dos resíduos da região Fc); no entanto, Asn297 também pode estar localizado a cerca de ± 3 aminoácidos a montante ou a jusante da posição 297, isto é, entre as posições 294 e 300, devido a pequenas variações de sequência em anticorpos. Tais variantes de fucosilação podem ter função ADCC melhorada.

Consulte, por exemplo, a Publicação de patente no US 2003/0157108 (Presta, L.); US 2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd). Exemplos de publicações relacionadas a variantes de anticorpo “desfucosiladas” ou “deficientes em fucose” incluem: US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO2005/053742; WO2002/031140; Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1.239 a

1.249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004). Exemplos de linhagens celulares com capacidade de produzir anticorpos defucosilados incluem células CHO Lec13 deficientes em fucosilação de proteínas (Ripka et al., Arch. Biochem. Biophys. 249:533 a 545 (1986); patente no US 2003/0157108 A1; e WO 2004/056312 A1, Adams et al., especialmente no Exemplo 11), e linhagens celulares de knockout, como o gene alfa-1,6- fucosiltransferase, FUT8, células CHO de knockout (consulte, por exemplo, Yamane-Ohnuki et al., Biotech, Bioeng. 87:614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94 (4):680 a 688 (2006); e WO2003/085107).

[221] As variantes de anticorpo são ainda fornecidas com oligossacarídeos bissectados, por exemplo, em que um oligossacarídeo biantenário ligado à região Fc do anticorpo é bissectado por GlcNAc. Tais variantes de anticorpo podem ter fucosilação reduzida e/ou função ADCC melhorada. Exemplos não limitantes de tais variantes de anticorpo são descritos, por exemplo, no documento WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.); patente no US 6.602.684 (Umana et al.); US 2005/0123546 (Umana et al.), e

Ferrara et al., Biotechnology and Bioengineering, 93(5): 851 a 861 (2006).

Variantes de anticorpo com pelo menos um resíduo de galactose no oligossacarídeo ligado à região Fc também são fornecidas. Tais variantes de anticorpos podem ter uma função CDC aprimorada. Tais variantes de anticorpo são descritas, por exemplo, nos documentos WO 1997/30087 (Patel et al.); WO 1998/58964 (Raju, S.); e WO 1999/22764 (Raju, S.).

[222] Em certas modalidades, as variantes de anticorpos que compreendem uma região Fc descritas no presente documento são capazes de se ligar a um FcγRIII. Em certas modalidades, as variantes de anticorpo compreendendo uma região Fc descrita no presente documento têm atividade ADCC na presença de células efetoras humanas ou têm atividade ADCC aumentada na presença de células efetoras humanas em comparação ao mesmo anticorpo compreendendo uma região IgG1Fc do tipo selvagem humana.

(XI) VARIANTES DA REGIÃO FC

[223] Em certas modalidades, uma ou mais modificações de aminoácidos podem ser introduzidas na região Fc de um anticorpo aqui fornecido, gerando assim uma variante da região Fc. A variante da região Fc pode compreender uma sequência da região Fc humana (por exemplo, uma região Fc humana IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4) que compreende uma modificação de aminoácidos (por exemplo, uma substituição) em uma ou mais posições de aminoácidos.

[224] Em certos casos, a invenção contempla uma variante de anticorpo que apresenta algumas funções efetoras, mas não todas, o que a torna uma candidata desejável para aplicações nas quais a meia-vida do anticorpo in vivo é importante, mas algumas funções efetoras (como complemento e ADCC) são desnecessárias ou prejudiciais. Ensaios de citotoxicidade in vitro e/ou in vivo podem ser realizados para confirmar a redução/depleção das atividades CDC e/ou ADCC. Por exemplo, ensaios de ligação ao receptor Fc (FcR) podem ser realizados para assegurar que o anticorpo seja desprovido de ligação a FcR (por isso provável falta atividade ADCC), mas retém a capacidade de ligação a FcRn. As células primárias para mediação de ADCC, as células NK, expressam Fc(RIII apenas, enquanto monócitos expressam Fc(RI, Fc(RII e Fc(RIII. A expressão de FcR em células hematopoiéticas está em suma na Tabela 3 na página 464 de Ravetch e Kinet, Annu. Rev. Immunol., 9:457-492 (1991). Exemplos não limitantes de ensaios in vitro para avaliar a atividade ADCC de uma molécula de interesse são descritos na patente no US 5.500.362 (consulte, por exemplo, Hellstrom, et al., Proc.

Natl. Acad. Sci. USA, 83:7.059 a 7.063 (1986)) e Hellstrom, et al., Proc. Natl.

Acad. Sci. USA, 82:1.499 a 1.502 (1985); patente no US 5.821.337 (consulte Bruggemann, et al., J. Exp. Med., 166:1.351 a 1.361 (1987)). Alternativamente, métodos de ensaios não radioativos podem ser empregados (consulte, por exemplo, ensaio de citotoxicidade não radioativo ACTI™ para citometria de fluxo (CellTechnology, Inc. Mountain View, CA; e ensaio de citotoxicidade não radioativo CytoTox 96® (Promega, Madison, WI). Células efetoras úteis para tais ensaios incluem células mononucleares do sangue periférico (PBMC) e células Natural Killer (NK). Alternativa ou adicionalmente, a atividade ADCC da molécula de interesse pode ser avaliada in vivo, por exemplo, em um modelo animal como aquele revelado em Clynes et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95:652 a 656 (1998). Os ensaios de ligação a C1q também podem ser realizados para confirmar que o anticorpo é incapaz de se ligar a C1q e, portanto, carece de atividade CDC. Consulte, por exemplo, ELISA de ligação a C1q e C3c nos documentos WO 2006/029879 e WO 2005/100402. Para avaliar a ativação do complemento, pode ser realizado um ensaio CDC (consulte, por exemplo, Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods, 202:163 (1996); Cragg, M.S. et al., Blood 101:1.045 a 1.052 (2003); e Cragg, M.S. e M.J. Glennie,

Blood 103:2.738 a 2.743 (2004)). As determinações da ligação de FcRn e depuração/meia-vida in vivo também podem ser realizadas com o uso de métodos conhecidos na técnica (consulte, por exemplo, Petkova, S.B. et al.

Int’l. Immunol. 18(12):1.759 a 1.769 (2006)).

[225] Anticorpos com função efetora reduzida incluem aqueles com substituição de um ou mais dos resíduos da região Fc 238, 265, 269, 270, 297, 327 e 329 (Patente n° US 6.737.056). Tais mutantes Fc incluem mutantes Fc com substituições em duas ou mais posições de aminoácidos 265, 269, 270, 297 e 327, incluindo o denominado mutante Fc “DANA” com substituição dos resíduos 265 e 297 por alanina (patente no US 7.332.581).

[226] Certas variantes de anticorpos com ligação melhorada ou diminuída aos FcRs são descritas. Consulte, por exemplo, a patente no US

6.737.056; WO 2004/056312, e Shields et al., J. Biol. Chem., 9(2):6.591 a

6.604 (2001).

[227] Em certos casos, uma variante de anticorpo compreende uma região Fc com uma ou mais substituições de aminoácidos que aprimoram a ADCC, por exemplo, substituições nas posições 298, 333 e/ou 334 da região Fc (numeração da UE de resíduos). Em uma modalidade exemplificadora, o anticorpo que compreende as seguintes substituições de aminoácidos em sua região Fc: S298A, E333A e K334A.

[228] Em algumas modalidades, são realizadas alterações na região Fc que resultam na ligação a C1q alterada (isto é, aprimorada ou diminuída) e/ou Citotoxicidade Dependente do Complemento (CDC), por exemplo, conforme descrito na patente no US 6.194.551, WO 99/51642 e Idusogie et al., J. Immunol. 164:4.178 a 4.184 (2000).

[229] Anticorpos com meia-vida aumentada e ligação aprimorada ao receptor Fc neonatal (FcRn), que é responsável pela transferência de IgGs maternas para o feto (Guyer et al., J. Immunol. 117:587

(1976) e Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)), são descritos no documento US2005/0014934A1 (Hinton et al.). Esses anticorpos compreendem uma região Fc com uma ou mais substituições que melhoram a ligação da região Fc a FcRn. Tais variantes Fc incluem aquelas com substituições em um ou mais resíduos da região Fc: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 ou 434, por exemplo, substituição do resíduo 434 da região Fc (patente no US 7.371.826). Consulte também Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988); patente no US 5.648.260; patente no US 5.624.821; e WO 94/29351 relativo a outros exemplos de variantes da região Fc.

VII. COMPOSIÇÕES E FORMULAÇÕES FARMACÊUTICAS

[230] Também são fornecidas no presente documento composições e formulações farmacêuticas, por exemplo, para o tratamento de câncer de pulmão (como câncer de pulmão de células não pequenas, por exemplo, câncer de pulmão de células não pequenas não escamosas de estágio IV) que compreendem um antagonista de ligação ao eixo PD-1 (como atezolizumabe), um agente de platina (como carboplatina ou cisplatina) e um antimetabólito (como pemetrexede). Em algumas modalidades, as composições e formulações farmacêuticas compreendem ainda um veículo farmaceuticamente aceitável.

[231] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-PDL1 descrito no presente documento (como atezolizumabe) está em uma formulação que compreende o anticorpo em uma quantidade de cerca de 60 mg/ml, acetato de histidina em uma concentração de cerca de 20 mM, sacarose em uma concentração de cerca de 120 mM e polissorbato (por exemplo, polissorbato 20) em uma concentração de 0,04% (em p/v) e a formulação tem um pH de cerca de 5,8. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PDL1 descrito no presente documento (como atezolizumabe) está em uma formulação que compreende o anticorpo em uma quantidade de cerca de 125 mg/ml, acetato de histidina em uma concentração de cerca de 20 mM, sacarose está em uma concentração de cerca de 240 mM e polissorbato (por exemplo, polissorbato 20) em uma concentração de 0,02% (em p/v) e a formulação tem um pH de cerca de 5,5.

[232] Após a preparação do anticorpo de interesse (por exemplo, as técnicas para a produção de anticorpos que podem ser formulados como revelados no presente documento são elaboradas aqui e são conhecidas na técnica), a formulação farmacêutica que o compreende é preparada. Em certas modalidades, o anticorpo a ser formulado não foi submetido a liofilização prévia e a formulação de interesse deste documento é uma formulação aquosa.

Em certas modalidades, o anticorpo é um anticorpo de comprimento total. Em uma modalidade, o anticorpo na formulação é um fragmento de anticorpo, como um F(ab’)2, caso em que problemas que podem não ocorrer para o anticorpo de comprimento total (como clipe do anticorpo para Fab) podem precisar ser abordados. A quantidade terapeuticamente eficaz de anticorpo presente na formulação é determinada levando em consideração os volumes de dose desejados e o(s) modo(s) de administração, por exemplo. De cerca de 25 mg/ml a cerca de 150 mg/ml, ou de cerca de 30 mg/ml a cerca de 140 mg/ml, ou de cerca de 35 mg/ml a cerca de 130 mg/ml, ou de cerca de 40 mg/ml a cerca de 120 mg/ml, ou de cerca de 50 mg/ml a cerca de 130 mg/ml, ou de cerca de 50 mg/ml a cerca de 125 mg/ml, ou de cerca de 50 mg/ml a cerca de 120 mg/ml, ou de cerca de 50 mg/ml a cerca de 110 mg/ml, ou de cerca de 50 mg/ml a cerca de 100 mg/ml, ou de cerca de 50 mg/ml a cerca de 90 mg/ml, ou de cerca de 50 mg/ml a cerca de 80 mg/ml, ou de cerca de 54 mg/ml a cerca de 66 mg/ml é uma concentração de anticorpo exemplar na formulação.

[233] Uma formulação aquosa é preparada compreendendo o anticorpo em uma solução tamponada com pH.

Em algumas modalidades, o tampão da presente revelação tem um pH na faixa de cerca de 5,0 a cerca de

7,0. Em certas modalidades, o pH está na faixa de cerca de 5,0 a cerca de 6,5,

o pH está na faixa de cerca de 5,0 a cerca de 6,4, na faixa de cerca de 5,0 a cerca de 6,3, o pH está na faixa de cerca de 5,0 a cerca de 6,2, o pH está na faixa de cerca de 5,0 a cerca de 6,1, o pH está na faixa de cerca de 5,5 a cerca de 6,1, o pH está na faixa de cerca de 5,0 a cerca de 6,0, o pH está na faixa de cerca de 5,0 a cerca de 5,9, o pH está na faixa de cerca de 5,0 a cerca de 5,8,

o pH está na faixa de cerca de 5,1 a cerca de 6,0, o pH está na faixa de cerca de 5,2 a cerca de 6,0, o pH está na faixa de cerca de 5,3 a cerca de 6,0, o pH está na faixa de cerca de 5,4 a cerca de 6,0, o pH está na faixa de cerca de 5,5 a cerca de 6,0, o pH está na faixa de cerca de 5,6 a cerca de 6,0, o pH está na faixa de cerca de 5,7 a cerca de 6,0, ou o pH está na faixa de cerca de 5,8 a cerca de 6,0. Em algumas modalidades, a formulação tem um pH de 6.0 ou cerca de 6,0. Em algumas modalidades, a formulação tem um pH de 5.9 ou cerca de 5,9. Em algumas modalidades, a formulação tem um pH de 5.8 ou cerca de 5,8. Em algumas modalidades, a formulação tem um pH de 5.7 ou cerca de 5,7. Em algumas modalidades, a formulação tem um pH de 5.6 ou cerca de 5,6. Em algumas modalidades, a formulação tem um pH de 5.5 ou cerca de 5,5. Em algumas modalidades, a formulação tem um pH de 5.4 ou cerca de 5,4. Em algumas modalidades, a formulação tem um pH de 5.3 ou cerca de 5,3. Em algumas modalidades, a formulação tem um pH de 5.2 ou cerca de 5,2. Exemplos de tampões que irão controlar o pH dentro dessa faixa incluem histidina (como L-histidina) ou acetato de sódio.

Em certas modalidades, o tampão contém acetato de histidina ou acetato de sódio na concentração de cerca de 15 mM a cerca de 25 mM.

Em algumas modalidades, o tampão contém acetato de histidina ou acetato de sódio na concentração de cerca de 15 mM a cerca de 25 mM, cerca de 16 mM a cerca de 25 mM, cerca de 17 mM a cerca de 25 mM, cerca de 18 mM a cerca de 25 mM, cerca de 19 mM a cerca de 25 mM, cerca de 20 mM a cerca de 25 mM,

cerca de 21 mM a cerca de 25 mM, cerca de 22 mM a cerca de 25 mM, cerca de 15 mM, cerca de 16 mM, cerca de 17 mM, cerca de 18 mM, cerca de 19 mM, cerca de 20 mM, cerca de 21 mM, cerca de 22 mM, cerca de 23 mM,

cerca de 24 mM ou cerca de 25 mM.

Em uma modalidade, o tampão é acetato de histidina ou acetato de sódio em uma quantidade de cerca de 20 mM, pH

5,0. Em uma modalidade, o tampão é acetato de histidina ou acetato de sódio em uma quantidade de cerca de 20 mM, pH 5,1. Em uma modalidade, o tampão é acetato de histidina ou acetato de sódio em uma quantidade de cerca de 20 mM, pH 5,2. Em uma modalidade, o tampão é acetato de histidina ou acetato de sódio em uma quantidade de cerca de 20 mM, pH 5,3. Em uma modalidade, o tampão é acetato de histidina ou acetato de sódio em uma quantidade de cerca de 20 mM, pH 5,4. Em uma modalidade, o tampão é acetato de histidina ou acetato de sódio em uma quantidade de cerca de 20 mM, pH 5,5. Em uma modalidade, o tampão é acetato de histidina ou acetato de sódio em uma quantidade de cerca de 20 mM, pH 5,6. Em uma modalidade,

o tampão é acetato de histidina ou acetato de sódio em uma quantidade de cerca de 20 mM, pH 5,7. Em uma modalidade, o tampão é acetato de histidina ou acetato de sódio em uma quantidade de cerca de 20 mM, pH 5,8. Em uma modalidade, o tampão é acetato de histidina ou acetato de sódio em uma quantidade de cerca de 20 mM, pH 5,9. Em uma modalidade, o tampão é acetato de histidina ou acetato de sódio em uma quantidade de cerca de 20 mM, pH 6,0. Em uma modalidade, o tampão é acetato de histidina ou acetato de sódio em uma quantidade de cerca de 20 mM, pH 6,1. Em uma modalidade,

o tampão é acetato de histidina ou acetato de sódio em uma quantidade de cerca de 20 mM, pH 6,2. Em uma modalidade, o tampão é acetato de histidina ou acetato de sódio em uma quantidade de cerca de 20 mM, pH 6,3. Em uma modalidade, o tampão é acetato de histidina ou acetato de sódio em uma quantidade de cerca de 25 mM, pH 5,2. Em uma modalidade, o tampão é acetato de histidina ou acetato de sódio em uma quantidade de cerca de 25 mM, pH 5,3. Em uma modalidade, o tampão é acetato de histidina ou acetato de sódio em uma quantidade de cerca de 25 mM, pH 5,4. Em uma modalidade, o tampão é acetato de histidina ou acetato de sódio em uma quantidade de cerca de 25 mM, pH 5,5. Em uma modalidade, o tampão é acetato de histidina ou acetato de sódio em uma quantidade de cerca de 25 mM, pH 5,6. Em uma modalidade, o tampão é acetato de histidina ou acetato de sódio em uma quantidade de cerca de 25 mM, pH 5,7. Em uma modalidade, o tampão é acetato de histidina ou acetato de sódio em uma quantidade de cerca de 25 mM, pH 5,8. Em uma modalidade, o tampão é acetato de histidina ou acetato de sódio em uma quantidade de cerca de 25 mM, pH 5,9. Em uma modalidade, o tampão é acetato de histidina ou acetato de sódio em uma quantidade de cerca de 25 mM, pH 6,0. Em uma modalidade, o tampão é acetato de histidina ou acetato de sódio em uma quantidade de cerca de 25 mM, pH 6,1. Em uma modalidade, o tampão é acetato de histidina ou acetato de sódio em uma quantidade de cerca de 25 mM, pH 6,2. Em uma modalidade, o tampão é acetato de histidina ou acetato de sódio em uma quantidade de cerca de 25 mM, pH 6,3.

[234] Em algumas modalidades, a formulação compreende ainda sacarose em uma quantidade de cerca de 60 mM a cerca de 240 mM.

Em algumas modalidades, a sacarose na formulação é de cerca de 60 mM a cerca de 230 mM, cerca de 60 mM a cerca de 220 mM, cerca de 60 mM a cerca de 210 mM, cerca de 60 mM a cerca de 200 mM, cerca de 60 mM a cerca de 190 mM, cerca de 60 mM a cerca de 180 mM, cerca de 60 mM a cerca de 170 mM, cerca de 60 mM a cerca de 160 mM, cerca de 60 mM a cerca de 150 mM, cerca de 60 mM a cerca de 140 mM, cerca de 80 mM a cerca de 240 mM, cerca de 90 mM a cerca de 240 mM, cerca de 100 mM a cerca de 240 mM, cerca de 110 mM a cerca de 240 mM, cerca de 120 mM a cerca de 240 mM, cerca de 130 mM a cerca de 240 mM, cerca de 140 mM a cerca de 240 mM, cerca de 150 mM a cerca de 240 mM, cerca de 160 mM a cerca de 240 mM, cerca de 170 mM a cerca de 240 mM, cerca de 180 mM a cerca de 240 mM, cerca de 190 mM a cerca de 240 mM, cerca de 200 mM a cerca de 240 mM, cerca de 80 mM a cerca de 160 mM, cerca de 100 mM a cerca de 140 mM, ou cerca de 110 mM a cerca de 130 mM. Em algumas modalidades, a sacarose na formulação é de cerca de 60 mM, cerca de 70 mM, cerca de 80 mM, cerca de 90 mM, cerca de 100 mM, cerca de 110 mM, cerca de 120 mM, cerca de 130 mM, cerca de 140 mM, cerca de 150 mM, cerca de 160 mM, cerca de 170 mM, cerca de 180 mM, cerca de 190 mM, cerca de 200 mM, cerca de 210 mM, cerca de 220 mM, cerca de 230 mM ou cerca de 240 mM.

[235] Em algumas modalidades, a concentração de anticorpo na formulação é de cerca de 40 mg/ml a cerca de 125 mg/ml. Em algumas modalidades, a concentração de anticorpo na formulação é de cerca de 40 mg/ml a cerca de 120 mg/ml, cerca de 40 mg/ml a cerca de 110 mg/ml, cerca de 40 mg/ml a cerca de 100 mg/ml, cerca de 40 mg/ml a cerca de 90 mg/ml, cerca de 40 mg/ml a cerca de 80 mg/ml, cerca de 40 mg/ml a cerca de 70 mg/ml, cerca de 50 mg/ml a cerca de 120 mg/ml, cerca de 60 mg/ml a cerca de 120 mg/ml, cerca de 70 mg/ml a cerca de 120 mg/ml, cerca de 80 mg/ml a cerca de 120 mg/ml, cerca de 90 mg/ml a cerca de 120 mg/ml, ou cerca de 100 mg/ml a cerca de 120 mg/ml. Em algumas modalidades, a concentração de anticorpo na formulação é de cerca de 60 mg/ml. Em algumas modalidades, a concentração de anticorpo na formulação é de cerca de 65 mg/ml. Em algumas modalidades, a concentração de anticorpo na formulação é de cerca de 70 mg/ml. Em algumas modalidades, a concentração de anticorpo na formulação é de cerca de 75 mg/ml. Em algumas modalidades, a concentração de anticorpo na formulação é de cerca de 80 mg/ml. Em algumas modalidades, a concentração de anticorpo na formulação é de cerca de 85 mg/ml. Em algumas modalidades, a concentração de anticorpo na formulação é de cerca de 90 mg/ml. Em algumas modalidades, a concentração de anticorpo na formulação é de cerca de 95 mg/ml. Em algumas modalidades, a concentração de anticorpo na formulação é de cerca de 100 mg/ml. Em algumas modalidades, a concentração de anticorpo na formulação é de cerca de 110 mg/ml. Em algumas modalidades, a concentração de anticorpo na formulação é de cerca de 125 mg/ml.

[236] Em algumas modalidades, um tensoativo é adicionado à formulação de anticorpo. Tensoativos exemplares incluem tensoativos não iônicos, como polissorbatos (por exemplo, polissorbatos 20, 80 etc.) ou poloxâmeros (por exemplo, poloxamer 188, etc.). A quantidade de tensoativo adicionada é tal que reduz a agregação do anticorpo formulado e/ou minimiza a formação de partículas na formulação e/ou reduz a adsorção. Por exemplo, o tensoativo pode estar presente na formulação em uma quantidade de cerca de 0,001% a cerca de 0,5% (em p/v). Em algumas modalidades, o tensoativo (por exemplo, polissorbato 20) é de cerca de 0,005% a cerca de 0,2%, de cerca de 0,005% a cerca de 0,1%, de cerca de 0,005% a cerca de 0,09%, de cerca de 0,005% a cerca de 0,08%, de cerca de cerca de 0,005% a cerca de 0,07%, de cerca de 0,005% a cerca de 0,06%, de cerca de 0,005% a cerca de 0,05%, de cerca de 0,005% a cerca de 0,04%, de cerca de 0,008% a cerca de 0,06%, de cerca de 0,01% a cerca 0,06%, de cerca de 0,02% a cerca de 0,06%, de cerca de 0,01% a cerca de 0,05%, ou de cerca de 0,02% a cerca de 0,04%. Em certas modalidades, o tensoativo (por exemplo, polissorbato 20) está presente na formulação em uma quantidade de 0,005% ou cerca de 0,005%. Em certas modalidades, o tensoativo (por exemplo, polissorbato 20) está presente na formulação em uma quantidade de 0,006% ou cerca de 0,006%. Em certas modalidades, o tensoativo (por exemplo, polissorbato 20) está presente na formulação em uma quantidade de 0,007% ou cerca de 0,007%. Em certas modalidades, o tensoativo (por exemplo, polissorbato 20) está presente na formulação em uma quantidade de 0,008% ou cerca de 0,008%. Em certas modalidades, o tensoativo (por exemplo, polissorbato 20) está presente na formulação em uma quantidade de 0,009% ou cerca de 0,009%. Em certas modalidades, o tensoativo (por exemplo, polissorbato 20) está presente na formulação em uma quantidade de 0,01% ou cerca de 0,01%. Em certas modalidades, o tensoativo (por exemplo, polissorbato 20) está presente na formulação em uma quantidade de 0,02% ou cerca de 0,02%. Em certas modalidades, o tensoativo (por exemplo, polissorbato 20) está presente na formulação em uma quantidade de 0,03% ou cerca de 0,03%. Em certas modalidades, o tensoativo (por exemplo, polissorbato 20) está presente na formulação em uma quantidade de 0,04% ou cerca de 0,04%. Em certas modalidades, o tensoativo (por exemplo, polissorbato 20) está presente na formulação em uma quantidade de 0,05% ou cerca de 0,05%. Em certas modalidades, o tensoativo (por exemplo, polissorbato 20) está presente na formulação em uma quantidade de 0,06% ou cerca de 0,06%. Em certas modalidades, o tensoativo (por exemplo, polissorbato 20) está presente na formulação em uma quantidade de 0,07% ou cerca de 0,07%. Em certas modalidades, o tensoativo (por exemplo, polissorbato 20) está presente na formulação em uma quantidade de 0,08% ou cerca de 0,08%. Em certas modalidades, o tensoativo (por exemplo, polissorbato 20) está presente na formulação em uma quantidade de 0,1% ou cerca de 0,1%. Em certas modalidades, o tensoativo (por exemplo, polissorbato 20) está presente na formulação em uma quantidade de 0,2% ou cerca de 0,2%. Em certas modalidades, o tensoativo (por exemplo, polissorbato 20) está presente na formulação em uma quantidade de 0,3% ou cerca de 0,3%. Em certas modalidades, o tensoativo (por exemplo, polissorbato 20) está presente na formulação em uma quantidade de 0,4% ou cerca de 0,4%. Em certas modalidades, o tensoativo (por exemplo, polissorbato 20) está presente na formulação em uma quantidade de 0,5% ou cerca de 0,5%.

[237] Em uma modalidade, a formulação contém os agentes identificados acima (por exemplo, anticorpo, tampão, sacarose e/ou tensoativo) e é essencialmente livre de um ou mais conservantes, como álcool benzílico, fenol, m-cresol, clorobutanol e Cl de benzetônio. Em outra modalidade, um conservante pode ser incluído na formulação, particularmente quando a formulação é uma formulação multidose. A concentração de conservante pode estar na faixa de cerca de 0,1% a cerca de 2%, de preferência de cerca de 0,5% a cerca de 1%. Um ou mais outros carreadores, excipientes ou estabilizantes farmaceuticamente aceitáveis, como os descritos em Remington's Pharmaceutical Sciences, 16ª edição, Osol, A. ed. (1980), podem estar incluídos na formulação, desde que não afetem adversamente as características desejadas da formulação. Os carreadores, excipientes ou estabilizantes aceitáveis não são tóxicos aos destinatários nas dosagens e concentrações usadas e incluem: agentes tamponantes adicionais; cossolventes; antioxidantes, incluindo ácido ascórbico e metionina; agentes quelantes, como EDTA; complexos de metal (por exemplo, complexos de Zn- proteína); polímeros biodegradáveis, como poliésteres; e/ou contra-íons formadores de sal. Os carreadores farmaceuticamente aceitáveis exemplares incluem ainda agentes de dispersão de fármacos instersticiais, como glicoproteinas hialuronidase solúveis ativas em meio neutro (sHASEGP), por exemplo, glicoproteínas hialuronidase PH-20 solúveis humanas, como rHuPH20 (HYLENEX®, Baxter International, Inc.). Certos exemplos de sequências e métodos de utilização, incluindo rHuPH20, são descritos nas

Publicações de Patente n° US 2005/0260186 e 2006/0104968. Em um aspecto, uma alulose é combinada com uma ou mais glicosaminoglicanases adicionais, como condroitinases.

[238] A formulação no presente documento também pode conter mais de uma proteína conforme necessário para a indicação particular a ser tratada, de preferência, aqueles com atividades complementares que não afetam adversamente a outra proteína. Por exemplo, quando o anticorpo é anti- PDL1 (como atezolizumabe), o mesmo pode ser combinado com outro agente (por exemplo, um agente quimioterápico e um agente antineoplásico).

[239] As composições e formulações farmacêuticas conforme descritas no presente documento podem ser preparadas por meio da mistura dos ingredientes ativos (como um anticorpo ou um polipeptídeo) que têm o grau de pureza desejado com um ou mais carreadores farmaceuticamente aceitáveis opcionais (Remington's Pharmaceutical Sciences 16ª edição, Osol, A. Ed. (1980)), na forma de formulações liofilizadas ou soluções aquosas. Os carreadores farmaceuticamente aceitáveis são geralmente não tóxicos para os destinatários nas dosagens e concentrações empregues e incluem, sem limitação: tampões, como fosfato, citrato e outros ácidos orgânicos; antioxidantes incluindo ácido ascórbico e metionina; conservantes (como cloreto de octadecildimetilbenzilamônio; cloreto de hexametônio; cloreto de benzalcônio; cloreto de benzetônio; fenol, álcool butílico ou benzílico; alquilparabenos, como parabeno de metila ou propila; catecol; resorcinol; ciclohexanol; 3-pentanol; e m-cresol); polipeptídeos de baixo peso molecular (inferior a cerca de 10 resíduos); proteínas, como albumina sérica, gelatina ou imunoglobulinas; polímeros hidrofílicos, como polivinilpirrolidona; aminoácidos, como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina ou lisina; monossacarídeos, dissacarídeos e outros carboidratos, incluindo glicose, manose ou dextrinas; agentes quelantes, como EDTA; açúcares, como sacarose, manitol, trealose ou sorbitol; contraíons formadores de sal, como sódio; complexos de metal (por exemplo, complexos de Zn-proteína); e/ou tensoativos não iônicos, como polietilenoglicol (PEG). Os carreadores farmaceuticamente aceitáveis exemplificadores incluem ainda agentes de dispersão de fármacos instersticiais, como glicoproteinas hialuronidase solúveis ativas em meio neutro (sHASEGP), por exemplo, glicoproteínas hialuronidase PH-20 solúveis humanas, como rHuPH20 (HYLENEX®, Baxter International, Inc.). Certos exemplos de sequências e métodos de utilização, incluindo rHuPH20, são descritos nas Publicações de Patente n° US 2005/0260186 e 2006/0104968. Em um aspecto, uma alulose é combinada com uma ou mais glicosaminoglicanases adicionais, como condroitinases.

[240] Exemplos de formulações de anticorpos liofilizados são descritos na Patente n° US 6.267.958. Formulações aquosas de anticorpo incluem as descritas na Patente n° US 6.171.586 e no documento WO 2006/044908, as últimas formulações incluindo um tampão de histidina-acetato.

[241] A composição e a formulação no presente documento também podem conter mais do que um ingrediente ativo conforme necessário para a indicação particular a ser tratada, de preferência, aqueles com atividades complementares que não afetam adversamente uns aos outros. Tais ingredientes ativos estão adequadamente presentes em combinação em quantidades que são eficazes para o fim pretendido.

[242] Os ingredientes ativos podem ser aprisionados em microcápsulas preparadas, por exemplo, por técnicas de coacervação ou por polimerização interfacial, por exemplo, microcápsulas de hidroximetil celulose ou microcápsulas de gelatina e poli (metilmetacrilato), respectivamente, em sistemas de distribuição coloidal de fármacos (por exemplo, lipossomas, albumina microsferas, micro emulsões, nano partículas e nano cápsulas) ou em macro emulsões. Tais técnicas são divulgadas na Remington's Pharmaceutical

Sciences, 16ª edição, Osol, A. Ed. (1980).

[243] Podem ser preparadas preparações de liberação prolongada. Exemplos adequados de preparações de liberação sustentada incluem matrizes semipermeáveis de polímeros hidrofóbicos sólidos contendo o anticorpo, cujas matrizes estão na forma de artigos moldados, por exemplo, películas ou microcápsulas. As formulações a serem utilizadas para administração in vivo são geralmente estéreis. A esterilidade pode ser prontamente realizada, por exemplo, por filtração através de membranas de filtração estéreis.

[244] As formulações farmacêuticas de carboplatina, cisplatina e/ou pemetrexede estão disponíveis comercialmente. Por exemplo, a carboplatina é conhecida sob uma variedade de nomes comerciais (conforme descrito em outro lugar no presente documento), incluindo PARAPLATIN®. A cisplatina é conhecida sob uma variedade de nomes comerciais (conforme descrito em outro lugar no presente documento), incluindo PLATINOL®.

Pemetrexede é conhecido sob uma variedade de nomes comerciais (conforme descrito em outro lugar no presente documento), incluindo ALIMTA®, GIOPEM, PEXATE e CIAMBRA. Em algumas modalidades, a carboplatina e/ou o pemetrexede são fornecidos em recipientes separados. Em algumas modalidades, a cisplatina e/ou o pemetrexede são fornecidos em recipientes separados. Em algumas modalidades, a carboplatina e/ou o pemetrexede são, cada um, usados e/ou preparados para administração a um indivíduo, conforme descrito nas informações de prescrição disponíveis com o produto disponível comercialmente. Em algumas modalidades, a cisplatina e/ou o pemetrexede são, cada um, usados e/ou preparados para administração a um indivíduo, conforme descrito nas informações de prescrição disponíveis com o produto disponível comercialmente.

VIII. MÉTODOS DE TRATAMENTO

[245] São fornecidos no presente documento métodos para tratar ou retardar a progressão do câncer (como câncer de pulmão, por exemplo, câncer de pulmão de células não pequenas, por exemplo, câncer de pulmão de células não pequenas não escamoso Estágio IV) em um indivíduo que compreendem a administração ao indivíduo de um quantidade de um antagonista de ligação ao eixo PD-1 (por exemplo, um anticorpo anti-PD-L1), um antimetabólito (por exemplo, pemetrexede) e um agente de platina (por exemplo, carboplatina ou cisplatina). Em algumas modalidades, o tratamento resulta em uma resposta sustentada no indivíduo após a cessação do tratamento. Em algumas modalidades, o tratamento estende a sobrevida livre de progressão (SLP) do indivíduo. Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a sobrevida livre de progressão (SLP) do indivíduo em pelo menos cerca de 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5 ou 10 meses (incluindo qualquer intervalo entre esses valores). Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a sobrevida livre de progressão (SLP) do indivíduo em pelo menos cerca de 7,6 meses. Em algumas modalidades, a administração estende a sobrevida global (SG) do indivíduo. Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a SG do indivíduo em pelo menos cerca de qualquer um de 14, 14,5, 15, 15,5, 16, 16,5, 17, 17,5, 18, 18,5, 19, 19,5 ou 20 meses (incluindo qualquer intervalo entre esses valores). Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a SG do indivíduo em pelo menos cerca de 18,1 meses.

[246] Os métodos da presente revelação podem encontrar uso, entre outros, no tratamento de condições em que a imunogenicidade aumentada é desejada, como aumento da imunogenicidade do tumor para o tratamento de câncer. Também são fornecidos no presente documento métodos de intensificação da função imune em um indivíduo com (como câncer de pulmão, por exemplo, câncer de pulmão de células não pequenas, por exemplo, câncer de pulmão de células não pequenas não escamosas de estágio IV) em um indivíduo que compreendem a administração ao indivíduo uma quantidade eficaz de um antagonista de ligação ao eixo PD-1 (por exemplo, um anticorpo anti-PD-L1), um antimetabólito (por exemplo, pemetrexede) e um agente de platina (por exemplo, carboplatina ou cisplatina).

[247] Em algumas modalidades, o câncer de pulmão é câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC). Em algumas modalidades, o NSCLC é NSCLC de Estágio IV. Em algumas modalidades, o NSCLC de Estágio IV é um NSCLC não escamoso. Em algumas modalidades, o NSCLC é NSCLC não escamoso de Estágio IV confirmado histológica ou citologicamente, de acordo com ou conforme definido pelo sistema de estadiamento da Union Internationale contre le Cancer/American Joint Committee on Cancer, 7ª edição (consulte, por exemplo, Detterbeck et al.

(2009) Chest 136:260- 71). Em algumas modalidades, o NSCLC de Estágio IV é de histologia de células não pequenas mista (por exemplo, escamosa e não escamosa) e o principal componente histológico é ou parece ser não escamoso. Em algumas modalidades, o NSCLC é classificado como Estágio IV se o tumor cresceu em estruturas próximas. Em algumas modalidades, o NSCLC é classificado como Estágio IV se o tumor cresceu em estruturas próximas e/ou atingiu os nódulos linfáticos proximais. Em algumas modalidades, o NSCLC é classificado como Estágio IV se o câncer se espalhou para o outro pulmão a partir do pulmão originalmente afetado. Em algumas modalidades, o NSCLC é classificado como Estágio IV se as células cancerosas forem encontradas no fluido ao redor do pulmão (isto é, derrame pleural maligno). Em algumas modalidades, o NSCLC é classificado como Estágio IV se as células cancerosas forem encontradas no fluido ao redor do coração (isto é, infusão pericárdica maligna). Em algumas modalidades, o NSCLC é classificado como Estágio IV se o câncer se espalhou como um único tumor fora do tórax, como nódulo linfático (ou nódulos linfáticos) distante,

fígado, ossos e/ou cérebro. Em algumas modalidades, o NSCLC é classificado como Estágio IV se o câncer se espalhou como mais de um tumor fora do tórax, como nódulo linfático (ou nódulos linfáticos) distante, fígado, ossos e/ou cérebro. Em algumas modalidades, o NSCLC de Estágio IV é difícil de tratar.

Mais detalhes sobre o estadiamento do NSCLC são descritos no American Joint Committee on Cancer. Lung. em: AJCC Cancer Staging Manual. 8a ed.

Nova York, NY: Springer; 2017: 431 a 456.

[248] Em algumas modalidades, o indivíduo tem um prognóstico ruim. Em algumas modalidades, o indivíduo é um indivíduo intocado por tratamento. Em algumas modalidades, um indivíduo intocado por tratamento é um indivíduo que não recebeu tratamento anterior, por exemplo, para câncer, para NSCLC ou para NSCLC não escamoso de Estágio IV. Em algumas modalidades, o indivíduo intocado por tratamento prévio é um indivíduo que não recebeu tratamento anterior para NSCLC não escamoso de Estágio IV. Em algumas modalidades, o indivíduo é intocado por quimioterapia, por exemplo, um indivíduo que não recebeu quimioterapia anterior para o tratamento de, por exemplo, câncer, NSCLC e/ou NSCLC não escamoso de Estágio IV. Em algumas modalidades, o indivíduo não recebeu tratamento para NSCLC não escamoso de Estágio IV. Em algumas modalidades, o indivíduo não recebeu tratamento sistêmico anterior para NSCLC não escamoso de Estágio IV.

[249] Em algumas modalidades, o indivíduo é asiático. Em algumas modalidades, o indivíduo é descendente de asiáticos. Em algumas modalidades, o indivíduo tem pelo menos 65 anos de idade. Em algumas modalidades, o indivíduo nunca fumou. Em algumas modalidades, um não fumante é um adulto que nunca fumou ou que fumou menos de 100 cigarros em sua vida. Em algumas modalidades, o indivíduo não tem metástases hepáticas.

[250] Em algumas modalidades, o indivíduo é alto para “PD-L1”.

Em algumas modalidades, um paciente é “alto para PD-L1” se as células tumorais expressando PD-L1 em uma amostra de pré-tratamento do total do paciente > 50% do total de células tumorais na amostra. Em algumas modalidades, a expressão de PD-L1 em > 50% das células tumorais em uma amostra de pré-tratamento é definida/pontuada como “TC3”. Em algumas modalidades, um paciente é “PD-L1 alto” se as células imunes que se infiltram no tumor expressando PD-L1 em uma amostra de pré-tratamento do total do paciente > 10% do total de células imunes de filtração de tumor na amostra.

Em algumas modalidades, a expressão de PD-L1 em > 10% das células imunes que se infiltram no tumor em uma amostra de pré-tratamento é definida/pontuada como “IC3”. Em algumas modalidades, a amostra de pré- tratamento é uma amostra de tumor recente. Em algumas modalidades, a amostra de pré-tratamento é uma amostra de tumor fixado em formalina e incorporado em parafina (FFPE). Em algumas modalidades, o nível de expressão de PD-L1 nas células tumorais e/ou células imunes que se infiltram no tumor na amostra de pré-tratamento é determinado por meio de ensaio imuno-histoquímico. Em algumas modalidades, o ensaio imuno-histoquímico é o ensaio VENTANA SP142.

[251] Em algumas modalidades, um paciente é “baixo para PD- L1” se as células tumorais que expressam PD-L1 em uma amostra de pré- tratamento do paciente totalizam 1% a <5% do total de células tumorais na amostra. Em algumas modalidades, a expressão de PD-L1 em 1% a <5% das células tumorais em uma amostra de pré-tratamento é definida/pontuada como “TC1”. Em algumas modalidades, um paciente é “baixo para PD-L1” se as células tumorais que expressam PD-L1 em uma amostra de pré-tratamento do paciente totalizam 5% a <50% do total de células tumorais na amostra. Em algumas modalidades, a expressão de PD-L1 em 5% a <50% das células tumorais em uma amostra de pré-tratamento é definida/pontuada como “TC2”.

Em algumas modalidades, um paciente é “baixo para PD-L1” se as células do sistema imune de infiltração de tumor expressando PD-L1 em uma amostra de pré-tratamento do total do paciente de 1% a <5% do total de células do sistema imune de filtragem de tumor na amostra. Em algumas modalidades, a expressão de PD-L1 em 1% a <5% das células imunes que se infiltram no tumor em uma amostra de pré-tratamento é definida/pontuada como “IC1”. Em algumas modalidades, um paciente é “baixo para PD-L1” se as células do sistema imune de infiltração de tumor expressando PD-L1 em uma amostra de pré-tratamento do total do paciente de 5% a <10% do total de células do sistema imune de filtragem de tumor na amostra. Em algumas modalidades, a expressão de PD-L1 em 5% a <10% das células imunes que se infiltram no tumor em uma amostra de pré-tratamento é definida/pontuada como “IC2”. Em algumas modalidades, a amostra de pré-tratamento é uma amostra de tumor recente. Em algumas modalidades, a amostra de pré-tratamento é uma amostra de tumor fixado em formalina e incorporado em parafina (FFPE). Em algumas modalidades, o nível de expressão de PD-L1 nas células tumorais e/ou células imunes que se infiltram no tumor na amostra de pré-tratamento é determinado por meio de ensaio imuno-histoquímico. Em algumas modalidades, o ensaio imuno-histoquímico é o ensaio VENTANA SP142.

[252] Em algumas modalidades, o indivíduo é “negativo para PD-L1”. Em algumas modalidades, um paciente é “negativo para PD-L1” se as células tumorais expressando PD-L1 em uma amostra de pré-tratamento do total do paciente < 1% do total de células tumorais na amostra. Em algumas modalidades, a expressão de PD-L1 em <1% das células tumorais em uma amostra de pré-tratamento é definida como “TC0”. Em algumas modalidades, um paciente é “negativo para PD-L1” se as células imunes que se infiltram no tumor expressando PD-L1 em uma amostra de pré-tratamento do total do paciente < 1% do total de células imunes de filtração de tumor na amostra. Em algumas modalidades, a expressão de PD-L1 em < 1% das células imunes que se infiltram no tumor em uma amostra de pré-tratamento é definida como “IC0”.

Em algumas modalidades, a amostra de pré-tratamento é uma amostra de tumor recente. Em algumas modalidades, a amostra de pré-tratamento é uma amostra de tumor fixado em formalina e incorporado em parafina (FFPE). Em algumas modalidades, o nível de expressão de PD-L1 nas células tumorais e/ou células imunes que se infiltram no tumor na amostra de pré-tratamento é determinado por meio de ensaio imuno-histoquímico. Em algumas modalidades, o ensaio imuno-histoquímico é o ensaio VENTANA SP142, que é descrito em mais detalhes em outro lugar no presente documento.

[253] Em algumas modalidades, TC0, TC1, TC2, TC3, IC0, IC1, IC2 e IC3 são definidos/pontuados conforme resumido na tabela abaixo: DEFINIÇÕES DE PONTUAÇÃO DE CÉLULAS TUMORAIS (TC) E CÉLULAS IMUNES INFILTRANTES DE TUMOR (IC) EXEMPLIFICADORAS* Critérios de manchamento PD-L1 TC * Critérios de manchamento PD-L1 IC * Pontuação TC Definição Pontuação IC Definição TC0 < 1% IC0 < 1% TC1 ≥ 1% e < 5% IC1 ≥ 1% e < 5% TC2 ≥ 5% e <50% IC2 ≥ 5% e <10% TC3 ≥ 50% IC3 ≥ 10% * TCs são pontuados primeiro, seguidos por IC em uma abordagem gradual. *Consulte o Guia de avaliação para o Ensaio de IHC VENTANA PD-L1 (SP142): Manchamento de Treinamento Universal de Câncer de Pulmão de Célula não Pequena. (Consulte www.rocheplus.es/content/dam/hcp- portals/spain/documents/formaci%C3%B3n/uropath/PD- L1%20SP142%20Assessment%20%20v2.5.pdf.

[254] Em algumas modalidades, o indivíduo tem NSCLC não escamoso de Estágio IV confirmado histológica ou citologicamente (de acordo com os critérios delineados pelo sistema de estadiamento de Union Internationale contre le Cancer/ American Joint Committee on Cancer, 7ª edição, conforme descrito em Detterbeck et al. (2009) “The new lung cancer staging system”. Chest. 136: 260-71). Em algumas modalidades, o indivíduo tem NSCLC de histologia mista de células não pequenas (isto é, escamosa e não escamosa) e é considerado como tendo NSCLC não escamoso se o componente histológico principal for ou aparentar ser não escamoso. Em algumas modalidades, o indivíduo não tem uma mutação de sensibilização no gene EGFR. Em algumas modalidades, o indivíduo não tem um oncogene de fusão ALK. Em algumas modalidades, o status de EGFR e ALK do indivíduo é varrido antes do tratamento.

[255] Em algumas modalidades, o indivíduo recebeu quimioterapia neo-adjuvante anterior, quimioterapia adjuvante ou quimiorradioterapia com intenção curativa para doença não metastática e experimentou um intervalo sem tratamento de pelo menos 6 meses desde a última dose de quimioterapia e/ou radioterapia antes do início do tratamento.

Em algumas modalidades, o indivíduo não tem metástases ativas ou não tratadas do sistema nervoso central (SNC). Em algumas modalidades, o indivíduo tratou metástases do CNS supratentorial ou cerebelar assintomáticas.

Em algumas modalidades, o indivíduo não tem metástases para o mesencéfalo, ponte, medula ou medula espinhal. Em algumas modalidades, o indivíduo tem doença do SNC e não requer tratamento com corticosteroides para a doença do SNC. Em algumas modalidades, o indivíduo tem novas metástases assintomáticas e recebeu radioterapia e/ou cirurgia para metástases do SNC. Em algumas modalidades, o indivíduo com metástases do CNS não recebeu radiação estereotáxica em 7 dias do início do tratamento. Em algumas modalidades, o indivíduo com metástases do CNS não recebeu radiação do cérebro inteiro em 14 dias do início do tratamento. Em algumas modalidades, o indivíduo não tem doença leptomeníngea. Em algumas modalidades, o indivíduo não tem dor tumoral não controlada. Em algumas modalidades, o indivíduo não tem derrame pleural não controlado. Em algumas modalidades, o indivíduo não tem derrame pericárdico não controlado. Em algumas modalidades, o indivíduo não tem outras doenças malignas além de NSCLC dentro de 5 anos antes do início do tratamento.

[256] Em algumas modalidades, o indivíduo tem NSCLC mensurável (por exemplo, NSCLC não escamoso de Estágio IV), de acordo com/conforme definido pelos critérios RECIST v1.1 (consulte, por exemplo, Eisenhauer et al. (2009) “New response evaluation criteria in solid tumors: Revised RECIST guideline (versão 1.1).” Eur. J. Cancer. 45: 228 a 247). Em algumas modalidades, o indivíduo não recebeu tratamento prévio com um agonista CD137 ou uma terapia de bloqueio de ponto de controle imune, por exemplo, incluindo, sem limitação, um anticorpo anti-PD-1 ou um anticorpo anti-PD-L1. Em algumas modalidades, o paciente recebeu tratamento anterior com um antígeno 4 associado a linfócitos T anticitotóxicos (CLTA-4), em que o tratamento ocorreu pelo menos 6 semanas antes do início de um tratamento descrito no presente documento.

[257] Qualquer um dos antagonistas de ligação ao eixo PD-1, antimetabólitos e agentes de platina conhecidos na técnica ou descritos no presente documento podem ser usados nos métodos. Em algumas modalidades, o antagonista de ligação ao eixo PD-1 é atezolizumabe, o antimetabólito é pemetrexede e/ou o agente de platina é carboplatina ou cisplatina.

[258] Em algumas modalidades, o atezolizumabe é administrado a uma dose de 1.200 mg, a carboplatina é administrada a uma dose suficiente para atingir ASC = 6 mg/ml/min, e o pemetrexede é administrado a uma dose de 500 mg/m2.

[259] Em algumas modalidades, o atezolizumabe é administrado a uma dose de 1.200 mg, a cisplatina é administrada a uma dose de 75 mg/m2 e o pemetrexede é administrado a uma dose de 500 mg/m2.

[260] Em algumas modalidades, o tratamento compreende uma fase de indução e uma fase de manutenção (ou “terapia de manutenção”). Em algumas modalidades, a fase de indução compreende a administração do antagonista de ligação ao eixo PD-1 (por exemplo, um anticorpo anti-PD-L1, como atezolizumabe) a uma dose de 1.200 mg no Dia 1, o antimetabólito (por exemplo, pemetrexede) a uma dose de 500 mg/m2 no Dia 1, e o agente de platina (por exemplo, carboplatina) a uma dose suficiente para atingir uma área alvo inicial sob a curva (ASC) de 6 mg/ml/min no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para os Ciclos 1-4. Em algumas modalidades, a fase de manutenção compreende a administração do antagonista de ligação ao eixo PD-1 (por exemplo, um anticorpo anti-PD-L1, como atezolizumabe) a uma dose de 1.200 mg no Dia 1 e o antimetabólito (por exemplo, pemetrexede) em uma dose de 500 mg/m2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias após o Ciclo 4.

[261] Em algumas modalidades, a fase de indução compreende a administração do antagonista de ligação ao eixo PD-1 (por exemplo, um anticorpo anti-PD-L1, como atezolizumabe) a uma dose de 1.200 mg no Dia 1, o antimetabólito (por exemplo, pemetrexede) a uma dose de 500 mg/m2 no Dia 1, e o agente de platina (por exemplo, cisplatina) a uma dose de 75 mg/m2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para os Ciclos 1-4. Em algumas modalidades, a fase de manutenção compreende a administração do antagonista de ligação ao eixo PD-1 (por exemplo, um anticorpo anti-PD-L1, como atezolizumabe) a uma dose de 1.200 mg no Dia 1 e o antimetabólito (por exemplo, pemetrexede) em uma dose de 500 mg/m2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias após o Ciclo 4.

[262] Em algumas modalidades, a fase de indução compreende a administração do antagonista de ligação ao eixo PD-1 (por exemplo, um anticorpo anti-PD-L1, como atezolizumabe) a uma dose de 1.200 mg no Dia 1, o antimetabólito (por exemplo, pemetrexede) a uma dose de 500 mg/m2 no Dia 1, e o agente de platina (por exemplo, carboplatina) a uma dose suficiente para atingir uma área alvo inicial sob a curva (ASC) de 6 mg/ml/min no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para os Ciclos 1-6. Em algumas modalidades, a fase de manutenção compreende a administração do antagonista de ligação ao eixo PD-1 (por exemplo, um anticorpo anti-PD-L1, como atezolizumabe) a uma dose de 1.200 mg no Dia 1 e o antimetabólito (por exemplo, pemetrexede) em uma dose de 500 mg/m2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias após o Ciclo 6.

[263] Em algumas modalidades, a fase de indução compreende a administração do antagonista de ligação ao eixo PD-1 (por exemplo, um anticorpo anti-PD-L1, como atezolizumabe) a uma dose de 1.200 mg no Dia 1, o antimetabólito (por exemplo, pemetrexede) a uma dose de 500 mg/m2 no Dia 1, e o agente de platina (por exemplo, cisplatina) a uma dose de 75 mg/m2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para os Ciclos 1-6. Em algumas modalidades, a fase de manutenção compreende a administração do antagonista de ligação ao eixo PD-1 (por exemplo, um anticorpo anti-PD-L1, como atezolizumabe) a uma dose de 1.200 mg no Dia 1 e o antimetabólito (por exemplo, pemetrexede) em uma dose de 500 mg/m2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias após o Ciclo 6.

[264] Os esquemas de dosagem e administração exemplificadores que compreendem um ciclo de indução e um ciclo de manutenção são fornecidos nas Tabelas 4A e 4B abaixo: TABELA 4A: PROGRAMAÇÃO DE ADMINISTRAÇÃO E DOSAGEM EXEMPLIFICADORA Fase de Indução Fase de Manutenção Fármacos Ciclos 1 a 4* > Ciclo 4* (listados em ordem de administração) Dia 1 Dia 1 1) anti-PD-L1 Ab

1.200 mg 1.200 mg (atezolizumabe) 2) antimetabólito 500 mg/m2 500 mg/m2 (pemetrexede)

Carboplatina: ASC = 6ǂ 3) agente de platina

OU (carboplatina ou cisplatina) Cisplatina: 75 mg/m2 * ciclos de 21 dias. ǂ mg/ml/min.

TABELA 4B: PROGRAMAÇÃO DE ADMINISTRAÇÃO E DOSAGEM EXEMPLIFICADORA Fase de Indução Fase de Manutenção Fármacos Ciclos 1-6 > Ciclo 6* (listados em ordem de administração) Dia 1 Dia 1 1) anti-PD-L1 Ab

1.200 mg 1.200 mg (atezolizumabe) 2) antimetabólito 500 mg/m2 500 mg/m2 (pemetrexede) Carboplatina: ASC = 6 ǂ 3) agente de platina

OU (carboplatina ou cisplatina) Cisplatina: 75 mg/m2 * ciclos de 21 dias. ǂ mg/ml/min.

[265] Em algumas modalidades, a dose de 1.200 mg de atezolizumabe é equivalente a uma dose média baseada no peso corporal de 15 mg/kg. Em algumas modalidades, a dose de carboplatina necessária para atingir uma ASC de 5 mg/ml/min é calculada de acordo com a fórmula de Calvert (consulte, por exemplo, Calvert et al. (1989) “Carboplatin dosage: prospective evaluation of a simple formula based on renal function.” J. Clin.

Oncol. 7: 1748-56; van Warmerdam et al. (1995) J. Cancer Res. Clin. Oncol.

121(8): 478 a 486). Para obter mais detalhes, consulte Exemplo 1 abaixo.

[266] Em algumas modalidades, a sobrevida livre de progressão (SLP) do indivíduo é medida de acordo com os critérios RECIST v1.1, conforme descritos em Eisenhauer et al., (2009) “New response evaluation criteria in solid tumors: Revised RECIST guideline (versão 1.1). Eur J Cancer. 45: 228-47). Em algumas modalidades, a SLP é medida como o período de tempo desde o início do tratamento até a primeira ocorrência de progressão da doença, conforme determinado pelos critérios RECIST v1.1. Em algumas modalidades, a SLP é medida como o tempo desde o início do tratamento até o momento da morte. Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a sobrevida livre de progressão (SLP) do indivíduo em pelo menos cerca de 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5 ou 10 meses (incluindo qualquer intervalo entre esses valores). Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a sobrevida livre de progressão (SLP) do indivíduo em pelo menos cerca de 7,6 meses. Em algumas modalidades, o tratamento aumenta o SLP do indivíduo em pelo menos cerca de qualquer um de 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4 meses (incluindo qualquer intervalo entre esses valores), em comparação com um indivíduo tendo câncer de pulmão (como câncer de pulmão de células não pequenas, por exemplo, câncer de pulmão de células não pequenas não escamosas de Estágio IV) que recebeu tratamento com um antimetabólito (por exemplo, pemetrexede) e um agente de platina (por exemplo, carboplatina ou cisplatina).

[267] Em algumas modalidades, a sobrevida global (SG) é medida como o período de tempo desde o início do tratamento até a morte. Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a SG do indivíduo em pelo menos cerca de qualquer um de 14, 14,5, 15, 15,5, 16, 16,5, 17, 17,5, 18, 18,5, 19, 19,5 ou 20 meses (incluindo qualquer intervalo entre esses valores). Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a SG do indivíduo em pelo menos cerca de 18,1 meses. Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a SG do indivíduo em pelo menos cerca de qualquer um de 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5 ou 7 meses (incluindo qualquer intervalo entre esses valores), em comparação a um indivíduo com câncer de pulmão (como câncer de pulmão de células não pequenas, por exemplo, câncer de pulmão de células não pequenas não escamosas em estágio IV) que recebeu tratamento com um antimetabólito (por exemplo, pemetrexede) e um agente de platina (por exemplo, carboplatina ou cisplatina).

[268] Em algumas modalidades, o indivíduo é um ser humano.

[269] Em algumas modalidades, o indivíduo tem câncer que é resistente (foi demonstrado que é resistente) a um ou mais antagonistas do eixo PD-1. Em algumas modalidades, a resistência ao antagonista do eixo PD- 1 inclui recorrência de câncer ou câncer refratário. A recorrência pode referir-se ao reaparecimento do câncer, no local de origem ou em um novo local, após o tratamento. Em algumas modalidades, a resistência ao antagonista do eixo PD- 1 inclui progressão do câncer durante o tratamento com o antagonista do eixo PD-1. Em algumas modalidades, a resistência ao antagonista do eixo PD-1 inclui câncer que não responde ao tratamento. O câncer pode ser resistente no início do tratamento ou pode se tornar resistente durante o tratamento. Em algumas modalidades, o câncer está em estágio inicial ou em estágio avançado.

[270] Em outro aspecto, o indivíduo tem câncer que expressa (foi demonstrado que expressa, por exemplo, em um teste de diagnóstico) o biomarcador PD-L1. Em algumas modalidades, o câncer do paciente expressa biomarcador PD-L1 baixo. Em algumas modalidades, o câncer do paciente expressa biomarcador PD-L1 alto. Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos, ensaios e/ou kits, o biomarcador PD-L1 está ausente da amostra quando compreende 0% da amostra.

[271] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos, ensaios e/ou kits, o biomarcador PD-L1 está presente na amostra quando compreende mais de 0% da amostra. Em algumas modalidades, o biomarcador PD-L1 está presente em pelo menos 1% da amostra. Em algumas modalidades, o biomarcador PD-L1 está presente em pelo menos 5% da amostra. Em algumas modalidades, o biomarcador PD-L1 está presente em pelo menos 10% da amostra.

[272] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos,

ensaios e/ou kits, o biomarcador PD-L1 é detectado na amostra usando um método selecionado a partir do grupo que consiste em FACS, Western blot, ELISA, imunoprecipitação, imuno-histoquímica, imunofluorescência, radioimunoensaio, dot blotting, métodos de imunodetecção, HPLC, ressonância de plásmon de superfície, espectroscopia óptica, espectrometria de massa, HPLC, qPCR, RT-qPCR, qPCR multiplex ou RT-qPCR, RNA-seq, análise de microarranjos, SAGE, técnica MassARRAY e FISH e combinações dos mesmos.

[273] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos, ensaios e/ou kits, o biomarcador PD-L1 é detectado na amostra por expressão de proteína. Em algumas modalidades, a expressão da proteína é determinada por imuno-histoquímica (IHC). Em algumas modalidades, o biomarcador PD-L1 é detectado com o uso de um anticorpo anti-PD-L1. Em algumas modalidades, o biomarcador PD-L1 é detectado como uma intensidade de coloração fraca por IHC. Em algumas modalidades, o biomarcador PD-L1 é detectado como uma intensidade de coloração moderada por IHC. Em algumas modalidades, o biomarcador PD-L1 é detectado como uma intensidade de coloração forte por IHC. Em algumas modalidades, o biomarcador PD-L1 é detectado em células tumorais, células imunes infiltrantes de tumor, células estromais e quaisquer combinações das mesmas. Em algumas modalidades, a coloração é a coloração da membrana, coloração citoplasmática ou combinações das mesmas.

[274] Em algumas modalidades, o biomarcador PD-L1 é detectado usando um anticorpo anti-PD-L1 primário monoclonal de coelho. Em algumas modalidades, o PD-L1 é detectado em uma amostra fixada em formalina e embebida em parafina. Em algumas modalidades, o anticorpo anti- PD-L1 primário monoclonal de coelho é detectado com um anticorpo secundário compreendendo um marcador detectável. Em algumas modalidades, o ensaio usado para detectar o PD-L1 é o ensaio VENTANA PD- L1 (SP142) (disponível comercialmente junto à VENTANA®), que é descrito em mais detalhes nos Exemplos.

[275] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos, ensaios e/ou kits, a ausência do biomarcador PD-L1 é detectada como ausente ou sem manchamento na amostra. Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos, ensaios e/ou kits, a presença do biomarcador PD-L1 é detectada como qualquer manchamento na amostra.

[276] O antagonista de ligação ao eixo PD-1 (como atezolizumabe), o antimetabólito (como pemetrexede) e o agente de platina (como carboplatina ou cisplatina) podem ser administrados em qualquer ordem.

Por exemplo, o antagonista de ligação ao eixo PD-1 (como atezolizumabe), o antimetabólito (como pemetrexede) e o agente de platina (como carboplatina ou cisplatina) podem ser administrados sequencialmente (em momentos diferentes) ou simultaneamente (ao mesmo tempo). Em algumas modalidades, o antagonista de ligação ao eixo PD-1 (como atezolizumabe), o antimetabólito (como pemetrexede) e o agente de platina (como carboplatina ou cisplatina) estão em composições separadas. Em algumas modalidades, um ou mais (ou todos os três) dentre o antagonista de ligação ao eixo PD-1 (como atezolizumabe), o antimetabólito (como pemetrexede) e o agente de platina (como carboplatina ou cisplatina) estão na mesma composição.

[277] O antagonista de ligação ao eixo PD-1 (como atezolizumabe), o antimetabólito (como pemetrexede) e o agente de platina (como carboplatina ou cisplatina) podem ser administrados pela mesma via de administração ou por diferentes vias de administração. Em algumas modalidades, o antagonista de ligação ao eixo PD-1 é administrado por via intravenosa, intramuscular, subcutânea, tópica, oral, transdérmica, intraperitoneal, intraorbital, intratecal, intraventricular, intranasal, por implantação ou por inalação. Em algumas modalidades, o antimetabólito (como pemetrexede) é administrado por via intravenosa, intramuscular, subcutânea, tópica, oral, transdérmica, intraperitoneal, intraorbital, por implantação, por inalação, intratecal, intraventricular ou intranasal. Em algumas modalidades, o agente de platina (como carboplatina ou cisplatina) é administrado por via intravenosa, intramuscular, subcutânea, tópica, oral, transdérmica, intraperitoneal, intraorbital, por implantação, por inalação, intratecal, intraventricular ou intranasal. Em algumas modalidades, o antagonista de ligação ao eixo PD-1 (como atezolizumabe), o antimetabólito (como pemetrexede) e o agente de platina (como carboplatina ou cisplatina) são administrados por infusão intravenosa. Uma quantidade eficaz do antagonista de ligação ao eixo PD-1 (como atezolizumabe), o antimetabólito (como pemetrexede) e o agente de platina (como carboplatina ou cisplatina) podem ser administrados para prevenção ou tratamento da doença.

[278] Em algumas modalidades, é fornecido um método de tratamento de câncer de pulmão, por exemplo, câncer de pulmão de células não escamosas não escamosas de Estágio IV (NSCLC) em um indivíduo (por exemplo, um indivíduo que é intocado por tratamento para câncer de pulmão de células não pequenas não escamoso de Estágio IV (NSCLC), que compreende a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de atezolizumabe, pemetrexede e carboplatina, em que a administração compreende uma fase de indução e uma fase de manutenção, em que a fase de indução compreende a administração de atezolizumabe a uma dose de

1.200 mg no Dia 1, o pemetrexede na dose de 500 mg/m2 no Dia 1 e a carboplatina na dose suficiente para atingir uma área alvo inicial sob a curva (ASC) de 6 mg/ml/min de cada ciclo de 21 dias para os Ciclos 1-4. Em algumas modalidades, a fase de manutenção compreende a administração de atezolizumabe a uma dose de 1.200 mg no Dia 1 e o pemetrexede a uma dose de 500 mg/m 2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias após o Ciclo 4.

[279] Em algumas modalidades, é fornecido um método de tratamento de câncer de pulmão, por exemplo, câncer de pulmão de células não pequenas não escamosas de Estágio IV (NSCLC) em um indivíduo (por exemplo, um indivíduo que é intocado por tratamento para câncer de pulmão de células não pequenas não escamoso de Estágio IV (NSCLC)) que compreende a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de atezolizumabe, pemetrexede e cisplatina, em que a administração compreende uma fase de indução e uma fase de manutenção, em que a fase de indução compreende a administração de atezolizumabe a uma dose de 1.200 mg no Dia 1, pemetrexede a uma dose de 500 mg/m2 no Dia 1 e a cisplatina a uma dose de 75 mg/m2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para os Ciclos 1-4. Em algumas modalidades, a fase de manutenção compreende a administração de atezolizumabe a uma dose de 1.200 mg no Dia 1 e o pemetrexede a uma dose de 500 mg/m 2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias após o Ciclo 4.

[280] Em algumas modalidades, é fornecido um método de tratamento de câncer de pulmão, por exemplo, câncer de pulmão de células não escamosas não escamosas de Estágio IV (NSCLC) em um indivíduo (por exemplo, um indivíduo que é intocado por tratamento para câncer de pulmão de células não pequenas não escamoso de Estágio IV (NSCLC), que compreende a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de atezolizumabe, pemetrexede e carboplatina, em que a administração compreende uma fase de indução e uma fase de manutenção, em que a fase de indução compreende a administração de atezolizumabe a uma dose de

1.200 mg no Dia 1, o pemetrexede na dose de 500 mg/m2 no Dia 1 e a carboplatina na dose suficiente para atingir uma área alvo inicial sob a curva (ASC) de 6 mg/ml/min no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para os Ciclos 1-6. Em algumas modalidades, a fase de manutenção compreende a administração de atezolizumabe a uma dose de 1.200 mg no Dia 1 e o pemetrexede a uma dose de 500 mg/m 2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias após o Ciclo 6.

[281] Em algumas modalidades, é fornecido um método de tratamento de câncer de pulmão, por exemplo, câncer de pulmão de células não pequenas não escamosas de Estágio IV (NSCLC) em um indivíduo (por exemplo, um indivíduo que é intocado por tratamento para câncer de pulmão de células não pequenas não escamoso de Estágio IV (NSCLC)) que compreende a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de atezolizumabe, pemetrexede e cisplatina, em que a administração compreende uma fase de indução e uma fase de manutenção, em que a fase de indução compreende a administração de atezolizumabe a uma dose de 1.200 mg no Dia 1, o pemetrexede a uma dose de 500 mg/m2 no Dia 1 e a cisplatina a uma dose de 75 mg/m2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para os Ciclos 1-6. Em algumas modalidades, a fase de manutenção compreende a administração de atezolizumabe a uma dose de 1.200 mg no Dia 1 e o pemetrexede a uma dose de 500 mg/m 2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias após o Ciclo 6.

[282] Em algumas modalidades, o método estende o SLP do indivíduo (por exemplo, por pelo menos cerca de 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5 ou 10 meses, incluindo qualquer faixa entre esses valores) e/ou a SG do indivíduo (por exemplo, por pelo menos cerca de 14, 14,5, 15, 15,5, 16, 16,5, 17, 17,5, 18, 18,5, 19, 19,5 ou 20 meses, incluindo qualquer intervalo entre esses valores). Em algumas modalidades, o tratamento aumenta a sobrevida livre de progressão (SLP) do indivíduo em pelo menos cerca de 7,6 meses e/ou SG do indivíduo em pelo menos cerca de 18,1 meses. Em algumas modalidades, o método estende o SLP do indivíduo (por exemplo, em pelo menos cerca de 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5 ou 4 meses, incluindo qualquer intervalo entre esses valores) e/ou o sistema operacional do indivíduo (por exemplo, por pelo menos cerca de qualquer um de 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4,

4,5, 5, 5,5, 6, 6,5 ou 7 meses, incluindo qualquer intervalo entre esses valores), em comparação com um indivíduo com câncer de pulmão (como câncer de pulmão de células não pequenas, por exemplo, câncer de pulmão de células não pequenas não escamosas de estágio IV) que recebeu tratamento com um agente de platina (por exemplo, carboplatina ou cisplatina) e um antimetabólito (por exemplo, pemetrexede).

[283] Em algumas modalidades, a administração de atezolizumabe é seguida pela administração de pemetrexede e a administração de pemetrexede é seguida pela administração de carboplatina ou cisplatina no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para os Ciclos 1-4, por exemplo, como mostrado na Tabela 4A acima. Em algumas modalidades, a administração de atezolizumabe é seguida pela administração de pemetrexede e a administração de pemetrexede é seguida pela administração de carboplatina ou cisplatina no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para os Ciclos 1-6, por exemplo, como mostrado na Tabela 4A acima.

[284] Em algumas modalidades, o atezolizumabe é administrado por via intravenosa ao longo de 60 (± 15 minutos), o pemetrexede é administrado por via intravenosa ao longo de um período de cerca de 10 minutos e a carboplatina é administrada por via intravenosa ao longo de um período de cerca de 30-60 minutos no Dia 1 para cada Ciclo de 21 dias nos Ciclos 1-4. Em algumas modalidades, o atezolizumabe é administrado por via intravenosa ao longo de 60 (± 15 minutos), o pemetrexede é administrado por via intravenosa ao longo de um período de cerca de 10 minutos e a carboplatina é administrada por via intravenosa ao longo de um período de cerca de 30-60 minutos no Dia 1 para o Ciclo 1, e o atezolizumabe é administrado por via intravenosa ao longo de 30 (± 10 minutos), o pemetrexede é administrado por via intravenosa ao longo de um período de cerca de 10 minutos e a carboplatina é administrada por via intravenosa ao longo de um período de cerca de 30-60 minutos, no Dia 1 dos Ciclos 2-4. Em algumas modalidades, o atezolizumabe é administrado por via intravenosa ao longo de 60 (± 15 minutos) e o pemetrexede é administrado por via intravenosa ao longo de aproximadamente 10 minutos, no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias após o Ciclo 4. Em algumas modalidades, o atezolizumabe é administrado por via intravenosa ao longo de 30 (± 10 minutos) e o pemetrexede é administrado por via intravenosa ao longo de aproximadamente 10 minutos, no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias após o Ciclo 4.

[285] Em algumas modalidades, o atezolizumabe é administrado por via intravenosa ao longo de 60 (± 15 minutos) no Dia 1, o pemetrexede é administrado por via intravenosa ao longo de um período de cerca de 10 minutos no Dia 1 e a cisplatina é administrada por via intravenosa ao longo de um período de cerca de 1-2 horas no Dia 1 para cada ciclo de 21 dias nos Ciclos 1-4. Em algumas modalidades, o atezolizumabe é administrado por via intravenosa ao longo de 60 (± 15 minutos) no Dia 1, o pemetrexede é administrado por via intravenosa ao longo de um período de cerca de 10 minutos no Dia 1 e a cisplatina é administrada por via intravenosa ao longo de um período de cerca de 1-2 horas no Dia 1 para o Ciclo 1, e o atezolizumabe é administrado por via intravenosa ao longo de 30 (± 10 minutos) no Dia 1, o pemetrexede é administrado por via intravenosa durante um período de cerca de 10 minutos no Dia 1 e a cisplatina é administrada por via intravenosa ao longo de um período de cerca de 30-60 minutos no Dia 1 dos Ciclos 2-4. Em algumas modalidades, o atezolizumabe é administrado por via intravenosa ao longo de 60 (± 15 minutos) no Dia 1 e o pemetrexede é administrado por via intravenosa ao longo de aproximadamente 10 minutos no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias após o Ciclo 4. Em algumas modalidades, o atezolizumabe é administrado por via intravenosa ao longo de 30 (± 10 minutos) no Dia 1 e o pemetrexede é administrado por via intravenosa ao longo de aproximadamente

10 minutos no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias após o Ciclo 4.

[286] Em algumas modalidades, o atezolizumabe é administrado por via intravenosa ao longo de 60 (± 15 minutos) no Dia 1, o pemetrexede é administrado por via intravenosa ao longo de um período de cerca de 10 minutos no Dia 1 e a carboplatina é administrada por via intravenosa ao longo de um período de cerca de 30-60 minutos no Dia 1 para cada ciclo de 21 dias nos Ciclos 1-6. Em algumas modalidades, o atezolizumabe é administrado por via intravenosa ao longo de 60 (± 15 minutos) no Dia 1, o pemetrexede é administrado por via intravenosa ao longo de um período de cerca de 10 minutos no Dia 1 e a carboplatina é administrada por via intravenosa ao longo de um período de cerca de 30-60 minutos no Dia 1 para o Ciclo 1, e o atezolizumabe é administrado por via intravenosa ao longo de 30 (± 10 minutos) no Dia 1, o pemetrexede é administrado por via intravenosa durante um período de cerca de 10 minutos no Dia 1 e a carboplatina é administrada por via intravenosa ao longo de um período de cerca de 30-60 minutos no Dia 1 dos Ciclos 2-6. Em algumas modalidades, o atezolizumabe é administrado por via intravenosa ao longo de 60 (± 15 minutos) no Dia 1 e o pemetrexede é administrado por via intravenosa ao longo de aproximadamente 10 minutos no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias após o Ciclo

6. Em algumas modalidades, o atezolizumabe é administrado por via intravenosa ao longo de 30 (± 10 minutos) no Dia 1 e o pemetrexede é administrado por via intravenosa ao longo de aproximadamente 10 minutos no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias após o Ciclo 6.

[287] Em algumas modalidades, o atezolizumabe é administrado por via intravenosa ao longo de 60 (± 15 minutos) no Dia 1, o pemetrexede é administrado por via intravenosa ao longo de um período de cerca de 10 minutos no Dia 1 e a cisplatina é administrada por via intravenosa ao longo de um período de cerca de 1-2 horas no Dia 1 para cada ciclo de 21 dias nos Ciclos 1-6. Em algumas modalidades, o atezolizumabe é administrado por via intravenosa ao longo de 60 (± 15 minutos) no Dia 1, o pemetrexede é administrado por via intravenosa ao longo de um período de cerca de 10 minutos no Dia 1 e a cisplatina é administrada por via intravenosa ao longo de um período de cerca de 1-2 horas no Dia 1 para o Ciclo 1, e o atezolizumabe é administrado por via intravenosa ao longo de 30 (± 10 minutos) no Dia 1, o pemetrexede é administrado por via intravenosa durante um período de cerca de 10 minutos no Dia 1 e a cisplatina é administrada por via intravenosa ao longo de um período de cerca de 30-60 minutos no Dia 1 dos Ciclos 2-6. Em algumas modalidades, o atezolizumabe é administrado por via intravenosa ao longo de 60 (± 15 minutos) no Dia 1 e o pemetrexede é administrado por via intravenosa ao longo de aproximadamente 10 minutos no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias após o Ciclo 6. Em algumas modalidades, o atezolizumabe é administrado por via intravenosa ao longo de 30 (± 10 minutos) no Dia 1 e o pemetrexede é administrado por via intravenosa ao longo de aproximadamente 10 minutos no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias após o Ciclo 6.

[288] Como proposição geral, a quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo administrado a um ser humano estará na faixa de cerca de 0,01 a cerca de 50 mg/kg do peso corporal do paciente, seja por uma ou mais administrações. Em algumas modalidades, o anticorpo usado é de cerca de 0,01 a cerca de 45 mg/kg, cerca de 0,01 a cerca de 40 mg/kg, cerca de 0,01 a cerca de 35 mg/kg, cerca de 0,01 a cerca de 30 mg/kg, cerca de 0,01 para cerca de 25 mg/kg, cerca de 0,01 a cerca de 20 mg/kg, cerca de 0,01 a cerca de 15 mg/kg, cerca de 0,01 a cerca de 10 mg/kg, cerca de 0,01 a cerca de 5 mg/kg ou cerca de 0,01 a cerca de 1 mg/kg administrados diariamente, por exemplo. Em algumas modalidades, o anticorpo é administrado a 15 mg/kg. No entanto, outros regimes de dosagem podem ser úteis. Em uma modalidade, um anticorpo anti-PDL1 descrito no presente documento é administrado a um ser humano a uma dose de cerca de 100 mg, cerca de 200 mg, cerca de 300 mg, cerca de 400 mg, cerca de 500 mg, cerca de 600 mg, cerca de 700 mg, cerca de 800 mg, cerca de 900 mg, cerca de 1.000 mg, cerca de 1.100 mg, cerca de

1.200 mg, cerca de 1.300 mg ou cerca de 1.400 mg no dia 1 dos ciclos de 21 dias. A dose pode ser administrada com uma dose única ou em doses múltiplas (por exemplo, 2 ou 3 doses), como infusões. A dose do anticorpo administrado em um tratamento de combinação pode ser reduzida em comparação a um único tratamento. O progresso dessa terapia é facilmente monitorado por técnicas convencionais.

[289] Em algumas modalidades, os métodos podem compreender ainda uma terapia adicional. A terapia adicional pode ser radioterapia, cirurgia (por exemplo, mastectomia e mastectomia), quimioterapia, terapia genética, terapia de DNA, terapia viral, terapia de RNA, imunoterapia, transplante de medula óssea, nanoterapia, terapia de anticorpo monoclonal ou uma combinação dos anteriores. A terapia adicional pode estar na forma de terapia adjuvante ou neoadjuvante. Em algumas modalidades, a terapia adicional é a administração de inibidor enzimático de molécula pequena ou agente antimetastáticos. Em algumas modalidades, a terapia adicional é a administração de agentes limitantes de efeito secundário (por exemplo, agentes destinados a diminuir a ocorrência e/ou gravidade de efeitos secundários do tratamento, como agentes antináuseas, etc.). Em algumas modalidades, a terapia adicional é a radioterapia. Em algumas modalidades, a terapia adicional é cirurgia. Em algumas modalidades, a terapia adicional é uma combinação de radioterapia e cirurgia. Em algumas modalidades, a terapia adicional é a irradiação gama.

[290] Em algumas modalidades, a terapia adicional compreende CT-011 (também conhecido como Pidilizumab ou MDV9300; Registro CAS de nº 1036730-42-3; CureTech/Medivation). CT-011, também conhecido como hBAT ou hBAT-1, é um anticorpo descrito em WO2009/101611. Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional compreende um anticorpo que compreende uma sequência de cadeia pesada e uma de cadeia leve, em que: (a) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos:

QVQLVQSGSELKKPGASVKISCKASGYTFTNYGMNWVRQAPGQGLQWMGW INTDSGESTYAEEFKGRFVFSLDTSVNTAYLQITSLTAEDTGMYFCVRVGYDAL DYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTV SWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNT KVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV VVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDW LNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLT

CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ QGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:19), e (b) a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos:

EIVLTQSPSSLSASVGDRVTITCSARSSVSYMHWFQQKPGKAPKLWIYRTSNL ASGVPSRFSGSGSGTSYCLTINSLQPEDFATYYCQQRSSFPLTFGGGTKLEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNS

QESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNR GEC (SEQ ID NO:20).

[291] Em algumas modalidades, o anticorpo terapêutico adicional compreende as seis sequências de HVR de SEQ ID NO: 19 e SEQ ID NO: 20 (por exemplo, as três HVRs de cadeia pesada de SEQ ID NO: 19 e as três HVRs de cadeia leve de SEQ ID NO: 20). Em algumas modalidades, o anticorpo terapêutico adicional compreende o domínio variável da cadeia pesada de SEQ ID NO: 19 e o domínio variável da cadeia leve de SEQ ID NO:

20.

[292] Outros anticorpos terapêuticos adicionais contemplados para uso no presente documento incluem, sem limitação, alemtuzumab (Campath), bevacizumab (AVASTIN®, Genentech); cetuximab (ERBITUX®, Imclone); panitumumab (VECTIBIX®, Amgen), rituximab (RITUXAN®, Genentech/Biogen Idec), pertuzumab (OMNITARG®, 2C4, Genentech), trastuzumab (HERCEPTIN®, Genentech), tositumomab (Bexxar, Corixia), o conjugado de fármaco de anticorpo gemtuzumab ozogamicina (MYLOTARG®, Wyeth), apolizumab, aselizumab, atlizumab, bapineuzumab, bivatuzumab mertansina, cantuzumab mertansina, cedelizumab, certolizumab pegol, cidfusituzumab, cidtuzumab, daclizumab, eculizumab, efalizumab, epratuzumab, erlizumab, felvizumab, fontolizumab, gemtuzumab ozogamicina, inotuzumab ozogamicina, ipilimumab, labetuzumab, lintuzumab, matuzumab, mepolizumab, motavizumab, motovizumab, natalizumab, nimotuzumab, nolovizumab, numavizumab, ocrelizumab, omalizumab, palivizumab, pascolizumab, pecfusituzumab, pectuzumab, pexelizumab, ralivizumab, ranibizumab, reslivizumab, reslizumab, resyvizumab, rovelizumab, ruplizumab, sibrotuzumab, siplizumab, sontuzumab, tacatuzumab tetraxetano, tadocizumab, talizumab, tefibazumab, tocilizumab, toralizumab, tucotuzumab celmoleucina, tucusituzumab, umavizumab, urtoxazumab, ustekinumab, visilizumab, e o anti- interleucina-12 (ABT-874/J695, Wyeth Research e Abbott Laboratories).

[293] Em algumas modalidades, a terapia adicional é a terapia de direcionamento da via PI3K/AKT/mTOR, inibidor de HSP90, inibidor de tubulina, inibidor de apoptose e/ou agente quimiopreventivo. Em algumas modalidades, a terapia adicional é CTLA-4 (também conhecida como CD152), por exemplo, um anticorpo bloqueador, ipilimumab (também conhecido como MDX-010, MDX-101 ou Yervoy®), tremelimumab (também conhecido como ticilimumab ou CP-675.206), um antagonista dirigido contra B7-H3 (também conhecido como CD276), por exemplo, um anticorpo bloqueador, MGA271, um antagonista dirigido contra um TGF beta, por exemplo, metelimumab (também conhecido como CAT-192), fresolimumab (também conhecido como GC1008),

ou LY2157299, um tratamento que compreende a transferência adotiva de uma célula T (por exemplo, uma célula T citotóxica ou CTL) que expressa um receptor de antígeno quimérico (CAR), um tratamento que compreende a transferência adotiva de uma célula T que compreende um TGF dominante-

negativo receptor beta, por exemplo, um receptor TGF beta tipo II dominante negativo, um tratamento que compreende um protocolo HERCREEM (consulte,

por exemplo, ClinicalTrials.gov Identificador NCT00889954), um agonista dirigido contra CD137 (também conhecido como TNFRSF9, 4-1BB ou ILA), por exemplo, um anticorpo ativador, urelumab (também conhecido como BMS-

663513), um agonista dirigido contra CD4 0, por exemplo, um anticorpo ativador, CP-870893, um agonista dirigido contra OX40 (também conhecido como CD134), por exemplo, um anticorpo ativador, administrado em conjunto com um anticorpo anti-OX40 diferente (por exemplo, AgonOX), um agonista dirigido contra CD27, por exemplo, um anticorpo de ativação, CDX-1127,

indoleamina-2,3-dioxigenase (IDO), 1-metil-D-triptofano (também conhecido como 1-D-MT), um conjugado anticorpo-fármaco (em algumas modalidades,

que compreende mertansina ou monometil auristatina E (MMAE)), um conjugado anticorpo anti-NaPi2b-MMAE (também conhecido como DNIB0600A ou RG7599), trastuzumab emtansina (também conhecido como T-DM1, ado-

trastuzumab emtansina ou KADCYLA®, Genentech), DMUC5754A, um conjugado anticorpo-fármaco direcionado ao receptor da endotelina B

(EDNBR), por exemplo, um anticorpo direcionado contra EDNBR conjugado com MMAE, um inibidor da angiogênese, um anticorpo direcionado contra um

VEGF, por exemplo, VEGF-A, bevacizumab (também conhecido como AVASTIN®, Genentech), um anticorpo dirigido contra a angiopoietina 2

(também conhecido como Ang2), MEDI3617, um agente antineoplástico, um agente dirigido a CSF-1R (também conhecido como M-CSFR ou CD115), anti-

CSF-1R (também conhecido como IMC-CS4), um interferon, por exemplo,

interferon alfa ou interferon gama, Roferon-A, GM -CSF (também conhecido como fator de estimulação de colônia de macrófagos granulócitos humanos recombinantes, rhu GM-CSF, sargramostim ou Leukine®), IL-2 (também conhecido como aldesleucina ou Proleukin®), IL-12, um anticorpo direcionado a CD20 (em alguns modalidades, o anticorpo direcionado ao CD20 é obinutuzumab (também conhecido como GA101 ou Gazyva®) ou rituximab),

um anticorpo direcionado a GITR (em algumas modalidades, o anticorpo direcionado a GITR é TRX518), em conjunto com uma vacina contra o câncer

(em algumas modalidades, vacina contra o câncer é uma vacina de peptídeo contra o câncer, que em algumas modalidades é uma vacina de peptídeo personalizada; em algumas modalidades, a vacina de peptídeo contra o câncer é um peptídeo longo multivalente, um multipeptídeo, um coquetel de peptídeos,

um peptídeo híbrido ou uma vacina de células dendríticas pulsadas com peptídeo (consulte, por exemplo, Yamada et al., Cancer Sci, 104:14 a 21,

2013)), em conjunto com um adjuvante, um agonista de TLR, por exemplo,

Poly-ICLC (também conhecido como Hiltonol®), LPS, MPL ou CpG ODN, fator de necrose tumoral (TNF) alfa, IL-1, HMGB1, um antagonista de IL-10, um antagonista de IL-4, um antagonista de IL-13, um antagonista de HVEM, um agonista de ICOS, por exemplo, por administração de ICOS-L ou um anticorpo agonístico dirigido contra ICOS, um tratamento que visa CX3CL1, um tratamento direcionado a CXCL10, um tratamento direcionado a CCL5, um agonista LFA-1 ou ICAM1, um agonista de selectina, uma terapia direcionada,

um inibidor de B-Raf, vemurafenib (também conhecido como Zelboraf®,

dabrafenib (também conhecido como Tafinlar®), erlotinib (também conhecido como Tarceva®), um inibidor de MEK, como MEK1 (também conhecido como

MAP2K1) ou MEK2 (também conhecido como MAP2K2), cobimetinib (também conhecido como GDC-0973 ou XL-518), trametinib (também conhecido como Mekinist®), um inibidor de K-Ras, um inibidor de c-Met, onartuzumab (também conhecido como MetMAb), um inibidor de Alk, AF802 (também conhecido como CH5424802 ou alectinib), um inibidor de uma fosfatidilinositol 3-quinase (PI3K), BKM120, idelalisib (também conhecido como GS-1101 ou CAL-101), perifosina (também conhecido como KRX-0401), um Akt, MK2206, GSK690693, GDC- 0941, um inibidor de mTOR, sirolimus (também conhecido como rapamicina), temsirolimus (também conhecido como CCI-779 ou Torisel®), everolimus (também conhecido como RAD001), ridaforolimus (também conhecido como AP-23573, MK-8669 ou deforolimus), OSI -027, AZD8055, INK128, um inibidor dual PI3K/mTOR, XL765, GDC-0980, BEZ235 (também conhecido como NVP- BEZ235), BGT226, GSK2126458, PF-04691502, PF-05212384 (também conhecido como PKI-587). A terapia adicional pode ser um ou mais de agentes quimioterápicos descritos anteriormente no presente documento.

IX. MÉTODOS DE DETECÇÃO E DIAGNÓSTICO

[294] Em algumas modalidades, a amostra é obtida antes do tratamento com um antagonista de ligação ao eixo PD-1 (por exemplo, atezolizumabe), um agente de platina por exemplo, carboplatina ou cisplatina) e um antimetabólito (por exemplo, pemetrexede). Em algumas modalidades, a amostra de tecido é fixada em formalina e embebida em parafina, arquivada, fresca ou congelada.

[295] Em algumas modalidades, a amostra é sangue total. Em algumas modalidades, o sangue total compreende células imunes, células tumorais circulantes e quaisquer combinações das mesmas.

[296] A presença e/ou níveis de expressão/quantidade de um biomarcador (por exemplo, PD-L1) podem ser determinados qualitativa e/ou quantitativamente com base em qualquer critério adequado conhecido na técnica, incluindo, sem limitação, DNA, mRNA, cDNA, proteínas, proteínas fragmentos e/ou número de cópia do gene. Em certas modalidades, a presença e/ou níveis de expressão/quantidade de um biomarcador em uma primeira amostra são aumentados ou elevados em comparação com a presença/ausência e/ou níveis de expressão/quantidade em uma segunda amostra. Em certas modalidades, a presença/ausência e/ou níveis de expressão/quantidade de um biomarcador em uma primeira amostra é diminuída ou reduzida em comparação com a presença e/ou níveis de expressão/quantidade em uma segunda amostra. Em certas modalidades, a segunda amostra é uma amostra de referência, célula de referência, tecido de referência, amostra de controle, célula de controle ou tecido de controle.

Revelações adicionais para determinar a presença/ausência e/ou níveis de expressão/quantidade de um gene são descritas no presente documento.

[297] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos, a expressão elevada se refere a um aumento geral de cerca de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais, no nível de biomarcador (por exemplo, proteína ou ácido nucleico (por exemplo, gene ou mRNA) detectado por métodos conhecidos da técnica padrão, como aqueles descritos no presente documento, em comparação a uma amostra de referência, célula de referência, tecido de referência, amostra de controle, célula de controle ou tecido de controle. Em certas modalidades, a expressão elevada se refere ao aumento no nível/quantidade de expressão de um biomarcador na amostra em que o aumento é de pelo menos cerca de 1,5X, 1,75X, 2X, 3X, 4X, 5X, 6X, 7X, 8X, 9X, 10X, 25X, 50X, 75X ou 100X o nível/quantidade de expressão do respectivo biomarcador em uma amostra de referência, célula de referência, tecido de referência, amostra de controle, célula de controle ou tecido de controle. Em algumas modalidades, a expressão elevada se refere a um aumento geral maior do que cerca de 1,5 vezes, cerca de 1,75 vez, cerca de 2 vezes, cerca de 2,25 vezes, cerca de 2,5 vezes, cerca de 2,75 vezes, cerca de 3,0 vezes ou cerca de 3,25 vezes em comparação a uma amostra de referência, célula de referência, tecido de referência, amostra de controle, célula de controle, tecido de controle ou controle interno (por exemplo, gene de manutenção).

[298] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos, a expressão reduzida se refere a uma redução geral de cerca de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais, no nível de biomarcador (por exemplo, proteína ou ácido nucleico (por exemplo, gene ou mRNA) detectado por métodos conhecidos da técnica padrão, como aqueles descritos no presente documento, em comparação a uma amostra de referência, célula de referência, tecido de referência, amostra de controle, célula de controle ou tecido de controle. Em certas modalidades, a expressão reduzida refere-se à diminuição no nível/quantidade de expressão de um biomarcador na amostra em que a diminuição é de pelo menos cerca de 0,9X, 0,8X, 0,7X, 0,6X, 0,5X, 0,4X, 0,3X, 0,2X, 0,1X, 0,05X ou 0,01X o nível/quantidade de expressão do respectivo biomarcador em uma amostra de referência, célula de referência, tecido de referência, amostra de controle, célula de controle ou tecido de controle.

[299] A presença e/ou nível de expressão/quantidade de vários biomarcadores em uma amostra pode ser analisada por uma série de metodologias, muitas das quais são conhecidas na técnica e entendidas pelo versado na técnica, incluindo, sem limitação, imuno-histoquímica (“IHC”), análise de Western blot, imunoprecipitação, ensaios de ligação molecular, ELISA, ELIFA, classificação de células ativadas por fluorescência (“FACS”), MassARRAY, proteômica, ensaios quantitativos baseados em sangue (como, por exemplo, ELISA em soro), ensaios bioquímicos de atividade enzimática, hibridização in situ, análise de Southern, análise de Northern, sequenciamento do genoma completo, reação em cadeia da polimerase (“PCR”) incluindo PCR quantitativa em tempo real (“qRT-PCR”) e outros métodos de detecção do tipo de amplificação, como, por exemplo, DNA ramificado, SISBA, TMA e similares), RNA-Seq, FISH, análise de microarranjo, perfil de expressão gênica e/ou análise serial da expressão gênica (“SAGE”), bem como qualquer um da ampla variedade de ensaios que podem ser realizados por análise de proteína, gene e/ou arranjo de tecido. Protocolos típicos para avaliar o estado de genes e produtos de gene são encontrados, por exemplo, em Ausubel et al., eds., 1995, Current Protocols In Molecular Biology, Unidades 2 (Northern Blotting), 4 (Southern Blotting), 15 (Immunoblotting) e 18 (análise de PCR). Os imunoensaios multiplexados, como aqueles disponíveis em Rules Based Medicine ou Meso Scale Discovery (“MSD”), também podem ser usados.

[300] Em algumas modalidades, a presença e/ou nível de expressão/quantidade de um biomarcador é determinada usando um método que compreende: (a) realizar o perfil de expressão gênica, PCR (como rtPCR ou qRT-PCR), RNA-seq, análise de microarranjo, SAGE, técnica de MassARRAY ou FISH em uma amostra (como uma amostra de câncer de um sujeito); e b) determinar a presença e/ou nível de expressão/quantidade de um biomarcador na amostra. Em algumas modalidades, o método de microarranjo compreende o uso de um chip de microarranjo tendo uma ou mais moléculas de ácido nucleico que podem hibridizar sob condições rigorosas a uma molécula de ácido nucleico que codifica um gene mencionado acima ou tendo um ou mais polipeptídeos (como peptídeos ou anticorpos) que pode se ligar a uma ou mais das proteínas codificadas pelos genes mencionados acima. Em uma modalidade, o método de PCR é qRT-PCR. Em uma modalidade, o método de PCR é multiplex-PCR. Em algumas modalidades, a expressão gênica é medida por microarranjo. Em algumas modalidades, a expressão gênica é medida por qRT-PCR. Em algumas modalidades, a expressão é medida por multiplex-PCR.

[301] Os métodos para a avaliação de mRNAs em células são bem conhecidos e incluem, por exemplo, ensaios de hibridização com o uso de sondas de DNA complementares (como hibridização in situ usando ribossondas marcadas específicas para um ou mais genes, Northern blot e técnicas relacionadas) e vários ensaios de amplificação de ácido nucleico (como RT-PCR usando iniciadores complementares específicos para um ou mais dos genes e outros métodos de detecção do tipo de amplificação, como, por exemplo, DNA ramificado, SISBA, TMA e similares).

[302] As amostras de mamíferos podem ser convenientemente testadas para mRNAs usando Northern, dot blot ou análise de PCR. Além disso, tais métodos podem incluir uma ou mais etapas que permitem determinar os níveis de mRNA alvo em uma amostra biológica (por exemplo, examinando simultaneamente os níveis de uma sequência de mRNA de controle comparativa de um gene de “manutenção”, como um membro da família da actina). Opcionalmente, a sequência do cDNA alvo amplificado pode ser determinada.

[303] Métodos opcionais incluem protocolos que examinam ou detectam mRNAs, como mRNAs alvo, em uma amostra de tecido ou célula por tecnologias de microarranjo. Usando microarranjos de ácido nucleico, amostras de teste e controle de mRNA a partir de amostras de tecido de teste e controle são transcritas reversamente e marcadas para gerar sondas de cDNA. As sondas são então hibridizadas com um arranjo de ácidos nucleicos imobilizado em um suporte sólido. O arranjo é configurado de tal modo que a sequência e a posição de cada membro do arranjo sejam conhecidas. Por exemplo, uma seleção de genes cuja expressão se correlaciona com o benefício clínico aumentado ou reduzido da terapia antiangiogênica pode ser organizada em um suporte sólido. A hibridação de uma sonda marcada com um determinado membro do arranjo indica que a amostra da qual a sonda foi derivada expressa esse gene.

[304] De acordo com algumas modalidades, a presença e/ou nível de expressão/quantidade são medidos observando os níveis de expressão de proteínas de um gene acima mencionado. Em certas modalidades, o método compreende colocar a amostra biológica em contato com anticorpos a um biomarcador (por exemplo, anticorpos anti-PD-L1) descrito no presente documento, sob condições permissivas para a ligação do biomarcador e detectar se um complexo é formado entre os anticorpos e o biomarcador. Esse método pode ser um método in vitro ou in vivo. Em uma modalidade, um anticorpo é usado para selecionar indivíduos elegíveis para terapia com o antagonista de ligação ao eixo PD-L1, por exemplo, um biomarcador para seleção de indivíduos.

[305] Em certas modalidades, a presença e/ou nível de expressão/quantidade de proteínas biomarcadoras em uma amostra é examinada usando IHC e protocolos de coloração. A coloração de IHC de seções de tecido demonstrou ser um método confiável para determinar ou detectar a presença de proteínas em uma amostra. Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos, ensaios e/ou kits, o biomarcador PD-L1 é PD-L1.

Em algumas modalidades, PD-L1 é detectado por imuno-histoquímica. Em algumas modalidades, a expressão elevada de um biomarcador PD-L1 em uma amostra de um indivíduo é a expressão elevada de proteína e, em outras modalidades, é determinada usando IHC. Em uma modalidade, o nível de expressão do biomarcador é determinado usando um método que compreende: (a) realizar análise de IHC de uma amostra (como uma amostra de câncer do indivíduo) com um anticorpo; e b) determinar o nível de expressão de um biomarcador na amostra. Em algumas modalidades, a intensidade de coloração de IHC é determinada em relação a uma referência. Em algumas modalidades, a referência é um valor de referência. Em algumas modalidades, a referência é uma amostra de referência (por exemplo, amostra de coloração de linhagem celular de controle ou amostra de tecido de paciente não canceroso).

[306] IHC pode ser realizada em combinação com técnicas adicionais, como coloração morfológica e/ou hibridização fluorescente in situ.

Dois métodos gerais de IHC estão disponíveis; ensaios diretos e indiretos. De acordo com o primeiro ensaio, a ligação do anticorpo ao antígeno alvo é determinada diretamente. Esse ensaio direto usa um reagente marcado, como uma etiqueta fluorescente ou um anticorpo primário marcado com enzima, que pode ser visualizado sem interação adicional do anticorpo. Em um ensaio indireto típico, o anticorpo primário não conjugado se liga ao antígeno e, em seguida, um anticorpo secundário marcado se liga ao anticorpo primário.

Quando o anticorpo secundário é conjugado a um marcador enzimático, um substrato cromogênico ou fluorogênico é adicionado para fornecer a visualização do antígeno. A amplificação do sinal ocorre porque vários anticorpos secundários podem reagir com diferentes epítopos no anticorpo primário.

[307] O anticorpo primário e/ou secundário usado para IHC normalmente será marcado com uma fração detectável. Vários marcadores estão disponíveis, os quais geralmente podem ser agrupados nas seguintes categorias: (a) Radioisótopos, como 35S, 14C, 125I, 3H e 131I; (b) partículas de ouro coloidal; (c) marcadores fluorescentes incluindo, sem limitação, quelatos de terras raras (quelatos de európio), Texas Red, rodamina, fluoresceína, dansil, Lissamina, umbeliferona, ficoeritrina, ficocianina ou fluoróforos comercialmente disponíveis, como SPECTRUM ORANGE7 e SPECTRUM GREEN7 e/ou derivados de qualquer um ou mais dos acima; (d) vários marcadores de substrato de enzima estão disponíveis e a patente no US

4.275.149 fornece uma revisão de alguns deles. Exemplos de marcadores enzimáticos incluem luciferases (por exemplo, luciferase do vagalume e luciferase bacteriana; patente no US 4.737.456), luciferina, 2,3-di- hidroftalazinedionas, malato desidrogenase, urease, peroxidase, como peroxidase de rábano (HRPO), fosfatase alcalina, β-galactosidase, glucoamilase, lisozima, sacarídeo oxidases (por exemplo, glicose oxidase, galactose oxidase e glicose-6-fosfato desidrogenase), oxidases heterocíclicas (como uricase e xantina oxidase), lactoperoxidase, microperoxidase e similares.

[308] Exemplos de combinações enzima-substrato incluem, por exemplo, peroxidase de rábano (HRPO) com peroxidase de hidrogênio como substrato; fosfatase alcalina (AP) com fosfato de para-nitrofenil como substrato cromogênico; e β-D-galactosidase (β-D-Gal) com um substrato cromogênico (por exemplo, p-nitrofenil-β-D-galactosidase) ou substrato fluorogênico (por exemplo, 4-metilumbeliferil-β-D-galactosidase). Para uma revisão geral dos mesmos, consulte as patentes no US 4.275.149 e 4.318.980.

[309] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos, PD-L1 é detectado por imuno-histoquímica com o uso de um anticorpo de diagnóstico anti-PD-L1 (isto é, anticorpo primário). Em algumas modalidades, o anticorpo de diagnóstico PD-L1 especificamente se liga ao PD-L1 humano. Em algumas modalidades, o anticorpo de diagnóstico PD-L1 é um anticorpo não humano. Em algumas modalidades, o anticorpo de diagnóstico PD-L1 é um anticorpo de rato, camundongo ou coelho. Em algumas modalidades, o anticorpo de diagnóstico PD-L1 é um anticorpo monoclonal. Em algumas modalidades, o anticorpo de diagnóstico PD-L1 é marcado diretamente.

[310] As amostras assim preparadas podem ser montadas e cobertas com uma lamela. A avaliação da lâmina é, então, determinada, por exemplo, com o uso de um microscópio, e podem ser empregados critérios de intensidade de manchamento, rotineiramente usados na técnica. Em uma modalidade, entende-se que quando as células e/ou tecido de um tumor são examinados usando IHC, a coloração é geralmente determinada ou avaliada na célula tumoral e/ou tecido (em oposição ao estroma ou tecido circundante que pode estar presente na amostra). Em algumas modalidades, entende-se que quando as células e/ou tecido de um tumor são examinados usando IHC, a coloração inclui a determinação ou avaliação de células imunes infiltrantes de tumor, incluindo células imunes intratumorais ou peritumorais.

[311] Em algumas modalidades, a expressão de PDL1 é avaliada em um tumor ou amostra tumoral. Tal como usado no presente documento, um tumor ou amostra tumoral pode abranger parte ou toda a área do tumor ocupada por células tumorais. Em algumas modalidades, um tumor ou amostra tumoral pode ainda abranger a área do tumor ocupada por células intratumorais associadas ao tumor e/ou estroma associado ao tumor (por exemplo, estroma desmoplásico peritumoral contíguo). Células intratumorais associadas a tumor e/ou estroma associado a tumor podem incluir áreas de infiltrados imunes (por exemplo, células imunes infiltrantes de tumor conforme descritas no presente documento) imediatamente adjacentes e/ou contíguas à massa tumoral principal. Em algumas modalidades, a expressão de PDL1 é avaliada em células tumorais. Em algumas modalidades, a expressão de PDL1 é avaliada em células imunes dentro da área do tumor, conforme descrito acima, como células imunes infiltrantes de tumor.

[312] Em métodos alternativos, a amostra pode ser colocada em contato com um anticorpo específico para o referido biomarcador sob condições suficientes para a formação de um complexo anticorpo-biomarcador e, em seguida, detectar o referido complexo. A presença do biomarcador pode ser detectada de várias maneiras, como por Western blotting e procedimentos de ELISA para analisar uma ampla variedade de tecidos e amostras, incluindo plasma ou soro. Uma ampla faixa de técnicas de imunoensaio com o uso desse formato de ensaio está disponível, consulte, por exemplo, as Patentes no US

4.016.043, 4.424.279 e 4.018.653. Isso inclui ensaios de local único e de dois locais ou “sanduíche” dos tipos não competitivos, bem como nos ensaios de ligação competitivos tradicionais. Estes ensaios também incluem a ligação direta de um anticorpo marcado a um biomarcador alvo.

[313] A presença e/ou nível de expressão/quantidade de um biomarcador selecionado em uma amostra de tecido ou célula também podem ser examinados por meio de ensaios funcionais ou baseados em atividade. Por exemplo, se o biomarcador for uma enzima, pode-se realizar ensaios conhecidos na técnica para determinar ou detectar a presença de uma determinada atividade enzimática no tecido ou amostra de célula.

[314] Em certas modalidades, as amostras são normalizadas para ambas as diferenças na quantidade do biomarcador testado e variabilidade na qualidade das amostras usadas e variabilidade entre as execuções do ensaio. Tal normalização pode ser realizada detectando e incorporando a expressão de certos biomarcadores de normalização, incluindo genes de manutenção bem conhecidos. Alternativamente, a normalização pode ser baseada no sinal médio ou mediano de todos os genes ensaiados ou um grande subconjunto dos mesmos (abordagem de normalização global). Em uma base de gene por gene, a quantidade normalizada medida de um mRNA ou proteína de tumor do sujeito é comparada à quantidade encontrada em um conjunto de referência. Os níveis de expressão normalizados para cada mRNA ou proteína por tumor testado por indivíduo podem ser expressos como uma porcentagem do nível de expressão medido no conjunto de referência. A presença e/ou nível de expressão/quantidade medida em uma amostra particular do sujeito a ser analisada cairá em algum percentil dentro desta faixa, que pode ser determinada por métodos bem conhecidos na técnica.

[315] Em certas modalidades, a amostra é uma amostra clínica.

Em outra modalidade, a amostra é usada em um ensaio de diagnóstico. Em algumas modalidades, a amostra é obtida de um tumor primário ou metastático.

A biópsia de tecido é frequentemente usada para obter um pedaço representativo de tecido tumoral. Alternativamente, as células tumorais podem ser obtidas indiretamente na forma de tecidos ou fluidos que são conhecidos ou pensados para conter as células tumorais de interesse. Por exemplo, as amostras de lesões de câncer de pulmão podem ser obtidas por ressecção, broncoscopia, aspiração com agulha fina, escovação brônquica ou de escarro, líquido pleural ou sangue. Os genes ou produtos de gene podem ser detectados a partir de câncer ou tecido tumoral ou de outras amostras corporais, como urina, expectoração, soro ou plasma. As mesmas técnicas discutidas acima para a detecção de genes alvo ou produtos de gene em amostras cancerosas podem ser aplicadas a outras amostras corporais. As células cancerosas podem ser eliminadas das lesões cancerosas e aparecer em tais amostras corporais. Ao rastrear tais amostras corporais, um diagnóstico precoce simples pode ser alcançado para esses cânceres. Além disso, o progresso da terapia pode ser monitorado mais facilmente testando tais amostras corporais para genes alvo ou produtos genéticos.

[316] Em certas modalidades, uma amostra de referência, célula de referência, tecido de referência, amostra de controle, célula de controle ou tecido de controle são uma única amostra ou várias amostras combinadas a partir do mesmo sujeito ou indivíduo que são obtidas em um ou mais pontos de tempo diferentes do que quando a amostra de teste é obtida.

Por exemplo, uma amostra de referência, célula de referência, tecido de referência, amostra de controle, célula de controle ou tecido de controle são obtidos em um ponto de tempo anterior a partir do mesmo sujeito ou indivíduo do que quando a amostra de teste é obtida. Tal amostra de referência, célula de referência, tecido de referência, amostra de controle, célula de controle ou tecido de controle podem ser úteis se a amostra de referência for obtida durante o diagnóstico inicial de câncer e a amostra de teste for obtida posteriormente quando o câncer se torna metastático.

[317] Em certas modalidades, uma amostra de referência, célula de referência, tecido de referência, amostra de controle, célula de controle ou tecido de controle são uma combinação de múltiplas amostras de um ou mais indivíduos saudáveis que não são o sujeito ou indivíduo. Em certas modalidades, uma amostra de referência, célula de referência, tecido de referência, amostra de controle, célula de controle ou tecido de controle são uma combinação de várias amostras de um ou mais indivíduos com uma doença ou distúrbio (por exemplo, câncer) que não são o sujeito ou indivíduo.

Em certas modalidades, uma amostra de referência, célula de referência, tecido de referência, amostra de controle, célula de controle ou tecido de controle são amostras de RNA agrupadas de tecidos normais ou amostras agrupadas de plasma ou soro de um ou mais indivíduos que não são o sujeito ou indivíduo. Em certas modalidades, uma amostra de referência, célula de referência, tecido de referência, amostra de controle, célula de controle ou tecido de controle são amostras de RNA agrupadas de tecidos agrupados tumorais ou de plasma ou amostras de soro de um ou mais indivíduos com uma doença ou distúrbio (por exemplo, câncer) que não são o sujeito ou indivíduo.

[318] Em algumas modalidades, a amostra é uma amostra de tecido do indivíduo. Em algumas modalidades, a amostra de tecido é uma amostra de tecido tumoral (por exemplo, tecido de biópsia). Em algumas modalidades, a amostra de tecido é tecido pulmonar. Em algumas modalidades, a amostra de tecido é tecido renal. Em algumas modalidades, a amostra de tecido é tecido da pele. Em algumas modalidades, a amostra de tecido é tecido pancreático. Em algumas modalidades, a amostra de tecido é tecido gástrico. Em algumas modalidades, a amostra de tecido é tecido da bexiga. Em algumas modalidades, a amostra de tecido é tecido esofágico. Em algumas modalidades, a amostra de tecido é tecido mesotelial. Em algumas modalidades, a amostra de tecido é tecido mamário. Em algumas modalidades, a amostra de tecido é tecido da tireoide. Em algumas modalidades, a amostra de tecido é tecido colorretal. Em algumas modalidades, a amostra de tecido é tecido da cabeça e pescoço. Em algumas modalidades, a amostra de tecido é tecido de osteossarcoma. Em algumas modalidades, a amostra de tecido é tecido da próstata. Em algumas modalidades, a amostra de tecido é tecido ovariano, HCC (fígado), células sanguíneas, nódulos linfáticos e/ou tecido ósseo/da medula óssea. Em algumas modalidades, a amostra de tecido é tecido do cólon. Em algumas modalidades, a amostra de tecido é tecido endometrial. Em algumas modalidades, a amostra de tecido é tecido cerebral (por exemplo, glioblastoma, neuroblastoma e assim por diante).

[319] Em algumas modalidades, uma amostra de tecido tumoral (o termo “amostra tumoral” é usado de forma intercambiável no presente documento) pode abranger parte ou toda a área tumoral ocupada por células tumorais. Em algumas modalidades, um tumor ou amostra tumoral pode ainda abranger a área do tumor ocupada por células intratumorais associadas ao tumor e/ou estroma associado ao tumor (por exemplo, estroma desmoplásico peritumoral contíguo). Células intratumorais associadas a tumor e/ou estroma associado a tumor podem incluir áreas de infiltrados imunes (por exemplo, células imunes infiltrantes de tumor conforme descritas no presente documento) imediatamente adjacentes e/ou contíguas à massa tumoral principal.

[320] Em algumas modalidades, o biomarcador PD-L1 é detectado na amostra usando um método selecionado a partir do grupo que consiste em FACS, Western blot, ELISA, imunoprecipitação, imuno- histoquímica, imunofluorescência, radioimunoensaio, dot blotting, métodos de imunodetecção, HPLC, ressonância de plásmon de superfície, espectroscopia óptica, espectrometria de massa, HPLC, qPCR, RT-qPCR, qPCR multiplex ou RT-qPCR, RNA-seq, análise de microarranjo, SAGE, técnica MassARRAY e FISH e combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, o biomarcador PD-L1 é detectado usando a análise FACS. Em algumas modalidades, o biomarcador PD-L1 é PD-L1. Em algumas modalidades, a expressão de PD-L1 é detectada em amostras de sangue. Em algumas modalidades, a expressão de PD-L1 é detectada em células do sistema imunológico circulantes em amostras de sangue. Em algumas modalidades, a célula imune circulante é uma célula T CD3+/CD8+. Em algumas modalidades, antes da análise, as células imunes são isoladas das amostras de sangue. Qualquer método adequado para isolar/enriquecer tal população de células pode ser usado incluindo, mas não se limitando a, seleção de células. Em algumas modalidades, a expressão de PD-L1 é elevada em amostras de indivíduos que respondem ao tratamento com um inibidor da via do eixo PD-L1/PD-1, como um anticorpo anti-PD-L1. Em algumas modalidades, a expressão de PD-L1 é elevada nas células imunes circulantes, como as células T CD3+/CD8+, em amostras de sangue.

[321] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-L1 primário monoclonal de coelho é detectado com um anticorpo secundário compreendendo um marcador detectável. Em algumas modalidades, o ensaio usado para detectar o PD-L1 é o ensaio VENTANA PD-L1 (SP142) (disponível comercialmente junto à VENTANA®), que é descrito em mais detalhes nos Exemplos.

[322] Certos aspectos da presente revelação se referem à medição do nível de expressão de um ou mais genes ou uma ou mais proteínas em uma amostra. Em algumas modalidades, uma amostra pode incluir os leucócitos. Em algumas modalidades, a amostra pode ser uma amostra de sangue periférico (por exemplo, de um paciente com um tumor).

Em algumas modalidades, a amostra é uma amostra de tumor. Uma amostra de tumor pode incluir células de câncer, linfócitos, leucócitos, estroma, os vasos sanguíneos, tecido conjuntivo, lâmina basal, e qualquer outro tipo de célula em associação com o tumor. Em algumas modalidades, a amostra é uma amostra de tecido tumoral contendo os leucócitos infiltrantes tumorais. Em algumas modalidades, a amostra pode ser processada para separar ou isolar um ou mais tipos de células (por exemplo, leucócitos). Em algumas modalidades, a amostra pode ser usada sem separação ou o isolamento de tipos de células.

[323] Uma amostra de tumor pode ser obtida a partir de um sujeito por qualquer método conhecido na técnica, incluindo, sem limitação, uma biopsia, endoscopia, ou procedimento cirúrgico. Em algumas modalidades, uma amostra de tumor pode ser preparada por métodos como o congelamento, a fixação (por exemplo, com o uso de formalina ou um fixador semelhante) e/ou a incorporação em cera de parafina. Em algumas modalidades, uma amostra de tumor pode ser seccionada. Em algumas modalidades, uma amostra de tumor fresca (isto é, uma que não foi preparada pelos métodos acima descritos) pode ser usada. Em algumas modalidades, uma amostra de tumor pode ser preparada por incubação em uma solução para preservar a integridade de mRNA/ou proteína.

[324] Em algumas modalidades, a amostra pode ser uma amostra de sangue periférico. Uma amostra de sangue periférico pode incluir células brancas do sangue, PBMC e similares. Qualquer técnica conhecida na técnica para o isolamento de leucócitos a partir de uma amostra de sangue periférico pode ser usada. Por exemplo, uma amostra de sangue pode ser extraída, as células vermelhas do sangue podem ser lisadas, e um pélete de glóbulos brancos pode ser isolado e usado para a amostra. Em outro exemplo,

a separação por gradiente de densidade pode ser usada para separar leucócitos (por exemplo, PBMCs) de glóbulos vermelhos. Em algumas modalidades, uma amostra de sangue periférico fresca (isto é, uma que não foi preparada pelos métodos acima descritos) pode ser usada. Em algumas modalidades, uma amostra de sangue periférico pode ser preparada por incubação em uma solução para preservar a integridade de mRNA/ou proteína.

[325] Em algumas modalidades, a responsividade ao tratamento pode se referir a um ou mais dentre: prolongar a sobrevida (incluindo a sobrevida global e sobrevida livre de progressão); resultar em uma resposta objetiva (incluindo uma resposta completa ou resposta parcial); ou melhorar sinais ou sintomas de câncer. Em algumas modalidades, a responsividade pode se referir ao aprimoramento de um ou mais fatores de acordo com o conjunto de diretrizes publicadas em RECIST para a determinação do estado de um tumor em um paciente com câncer, ou seja, responder, estabilizar ou progredir. Para uma discussão mais detalhada dessas diretrizes, consulte Eisenhauer et al., Eur J Cancer 2009;45: 228−47; Topalian et al., N Engl J Med 2012;366:2443−54; Wolchok et al., Clin Can Res 2009;15:7412−20; e Therasse, P., et al. J. Natl. Cancer Inst. 92:205-16 (2000).

Um indivíduo responsivo pode se referir a um indivíduo cujos cânceres mostram uma melhoria, por exemplo, de acordo com um ou mais fatores com base em critérios RECIST. Um indivíduo não responsivo pode se referir a um indivíduo cujos cânceres não mostram uma melhoria, por exemplo, de acordo com um ou mais fatores com base em critérios RECIST.

[326] Critérios de resposta convencionais podem não ser adequados para caracterizar a atividade antitumoral de agentes imunoterápicos, que pode produzir respostas atrasadas que podem ser precedidas de progressão radiológica aparente inicial, incluindo o aparecimento de novas lesões. Portanto, os critérios de resposta modificados foram desenvolvidos que representam o possível aparecimento de novas lesões e permitem a progressão radiológica para confirmar em uma avaliação subsequente. Por conseguinte, em algumas modalidades, a responsividade pode se referir a uma melhoria de um ou mais fatores de acordo com critério 2 de resposta imuno-relacionada (IRRC). Consulte, por exemplo, Wolchok et al., Clin Can Res 2009; 15:7412 − 20. Em algumas modalidades, as novas lesões são adicionadas para a carga de tumor definida e seguidas, por exemplo, para a progressão radiológica em uma avaliação subsequente. Em algumas modalidades, a presença de lesões não alvo está incluída na avaliação da resposta completa e não incluída na avaliação de progressão radiológica. Em algumas modalidades, a progressão radiológica pode ser determinada somente com base na doença mensurável e/ou pode ser confirmada por uma avaliação consecutiva ≥ 4 semanas a partir da primeira data documentada.

[327] Em algumas modalidades, a responsividade pode incluir a ativação imunológica. Em algumas modalidades, a responsividade pode incluir a eficácia do tratamento. Em algumas modalidades, a responsividade pode incluir a ativação imunológica e a eficácia do tratamento.

X ARTIGOS DE FABRICAÇÃO E KITS

[328] Em outra modalidade da invenção, é fornecido um artigo de fabricação ou um kit que compreende um antagonista de ligação ao eixo PD-1 (como atezolizumabe) e/ou um agente de platina (como carboplatina ou cisplatina) e/ou um antimetabólito (como pemetrexede). Em algumas modalidades, o artigo de fabricação ou kit compreende ainda a bula que compreende instruções para usar o antagonista de ligação ao eixo PD-1 em conjunto com o agente de platina (como carboplatina ou cisplatina) e o antimetabólito (como pemetrexede) para tratar ou retardar progressão do câncer (por exemplo, câncer de pulmão, como câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), incluindo NSCLC não escamoso de Estágio IV) em um indivíduo ou para aumentar a função imunológica de um indivíduo com câncer (por exemplo, câncer de pulmão, como NSCLC, incluindo NSCLC não escamoso de Estágio IV). Qualquer um dos antagonistas de ligação ao eixo PD-1, agentes de platina conhecidos na técnica podem ser incluídos no artigo de fabricação ou kits. Em algumas modalidades, o kit compreende atezolizumabe, carboplatina ou cisplatina e pemetrexede.

[329] Em algumas modalidades, o antagonista de ligação ao eixo PD-1 (como atezolizumabe), o agente de platina (como carboplatina ou cisplatina) e o antimetabólito (como pemetrexede) estão no mesmo recipiente ou em recipientes separados. Os recipientes adequados incluem, por exemplo, garrafas, frascos, sacos e seringas. O recipiente pode ser formado de uma variedade de materiais, como vidro, plástico (como policloreto de vinila ou poliolefina) ou liga metálica (como aço inoxidável ou hastelloy). Em algumas modalidades, o recipiente contém a formulação e o rótulo no ou associado ao recipiente que pode indicar instruções de uso. O artigo de fabricação ou kit pode incluir ainda outros materiais desejáveis do ponto de vista comercial e do usuário, incluindo outros tampões, diluentes, filtros, agulhas, seringas e bulas com instruções de uso. Em algumas modalidades, o artigo de fabricação inclui ainda um ou mais de outro agente (por exemplo, um agente quimioterápico e um agente antineoplásico). Recipientes adequados para um ou mais agentes incluem, por exemplo, garrafas, frascos, sacos e seringas.

[330] O relatório descritivo é considerado como sendo suficiente para permitir que um versado na técnica pratique a presente invenção. Várias modificações da invenção em adição às apresentadas e descritas aqui serão evidentes para os especialistas na técnica a partir da descrição anterior e estão dentro do escopo das reivindicações anexas. Todas as publicações, patentes e pedidos de patente aqui citados são por meio deste incorporado por referência na sua totalidade para todos os fins.

EXEMPLOS

[331] A invenção será mais completamente compreendida pelas referências aos seguintes exemplos. Eles não devem, no entanto, ser interpretados como limitantes do escopo da invenção. Entende-se que os exemplos e modalidades descritos no presente documento são apenas para fins ilustrativos, e que várias modificações ou alterações à luz dos mesmos serão sugeridas para pessoas versadas na técnica e devem ser incluídas dentro do espírito e alcance deste pedido e escopo das reivindicações anexas.

EXEMPLO 1: UM ESTUDO DE FASE III, ABERTO E RANDOMIZADO DE ATEZOLIZUMABE EM COMBINAÇÃO COM CARBOPLATINA+ PEMETREXEDE OU CISPLATINA + PEMETREXEDE EM COMPARAÇÃO COM CARBOPLATINA+ PEMETREXEDE OU CISPLATINA + PEMETREXEDE EM PACIENTES QUE SÃO INTOCADOS POR QUIMIOTERAPIA- E TÊM CÂNCER DO PULMÃO DE CÉLULAS NÃO PEQUENAS NÃO-ESCAMOSO DE ESTÁGIO IV (NSCLC)

[332] Esse estudo foi desenhado para avaliar a eficácia, segurança e farmacocinética do atezolizumabe em combinação com carboplatina + pemetrexede ou cisplatina+ pemetrexede em comparação com carboplatina+ pemetrexede ou cisplatina+ pemetrexede em pacientes que são intocados por quimioterapia- e têm câncer de pulmão de células não pequenas não escamoso de estágio IV - (NSCLC). Os objetivos específicos e os desfechos correspondentes para o estudo são descritos abaixo.

OBJETIVOS DO ESTUDO

[333] Os objetivos de eficácia co-primária deste estudo foram os seguintes: • Avaliar a eficácia de atezolizumabe + carboplatina + pemetrexede em comparação com carboplatina + pemetrexede e a eficácia de atezolizumabe + cisplatina + pemetrexede em comparação com cisplatina + pemetrexede na população com intenção de tratar (ITT) conforme medido pelo investigador- avaliou a sobrevida livre de progressão (SLP) de acordo com RECIST v1.1 (consulte, por exemplo, Eisenhauer et al. (2009) “New response evaluation criteria in solid tumors: Revised RECIST guideline (versão 1.1). Eur J Cancer. 45: 228-47) ou morte por qualquer causa, o que ocorrer primeiro; e • Avaliar a eficácia de atezolizumabe + carboplatina + pemetrexede em comparação com carboplatina + pemetrexede e a eficácia de atezolizumabe + cisplatina + pemetrexede em comparação com cisplatina + pemetrexede medida pela sobrevida global (SG), definida como o tempo desde a randomização até a morte por qualquer causa.

[334] Os objetivos secundários de eficácia deste estudo foram os seguintes: • Avaliar a eficácia de atezolizumabe + carboplatina + pemetrexede em comparação com carboplatina + pemetrexede e a eficácia de atezolizumabe + cisplatina + pemetrexede em comparação com cisplatina + pemetrexede como medido pela taxa de resposta objetiva (ORR), definida como resposta parcial (PR) ou resposta completa (CR) de acordo com RECIST v1.1; • Para avaliar a eficácia de atezolizumabe + carboplatina + pemetrexede em comparação com carboplatina + pemetrexede e a eficácia de atezolizumabe + cisplatina + pemetrexede em comparação com cisplatina + pemetrexede conforme medido pelo investigador- avaliou a duração da resposta (DOR) de acordo com RECIST v1.1; • Avaliar a taxa de sistema operacional em 1 e 2 anos; • Determinar o impacto do atezolizumabe medido pela mudança da linha de base no paciente- relataram sintomas de câncer de pulmão de tosse, dispneia, dor no peito ou dor no braço/ombro, com o uso do questionário de qualidade de vida da Organização Europeia para a Pesquisa e Tratamento do Câncer (EORTC)- Core 30 (QLQ-C30) e o módulo suplementar de câncer de pulmão (QLQ- LC13); • TTD (tempo até a deterioração) nos sintomas de câncer de pulmão do paciente, definido como o tempo desde a randomização até a deterioração (mudança de 10 pontos) em cada um dos EORTC QLQ-30 e EORTC QLQ-LC13; e • Determinar o impacto do atezolizumabe medido pela mudança da linha de base no paciente- relataram pontuações de sintomas de câncer de pulmão (dor no peito, dispneia e tosse) com o uso das pontuações de gravidade dos sintomas da escala de Sintomas em Câncer de Pulmão (SILC).

[335] Os objetivos de segurança para este estudo foram os seguintes: • Avaliar a segurança e tolerabilidade de atezolizumabe + carboplatina + pemetrexede ou atezolizumabe + cisplatina + pemetrexede, conforme medido pela incidência, natureza e gravidade dos eventos adversos classificados de acordo com os Critérios de Terminologia Comum para Eventos Adversos do Instituto Nacional do Câncer (NCI CTCAE) v 4.0; • Avaliar as mudanças nos sinais vitais, achados físicos e resultados laboratoriais clínicos durante e após a administração do tratamento do estudo. Avaliar a segurança e tolerabilidade do atezolizumabe quando administrado em combinação com carboplatina + pemetrexede ou em combinação com cisplatina+ pemetrexede ou como terapia de manutenção com pemetrexede sozinho; e • Avaliar a incidência e os títulos de anticorpos antiterapêuticos (ATAs) contra o atezolizumabe e explorar a relação potencial da resposta de imunogenicidade com a farmacocinética, segurança e eficácia.

[336] Os objetivos farmacocinéticos para este estudo são: • caracterizar a farmacocinética do atezolizumabe quando administrado em combinação com carboplatina+ pemetrexede, cisplatina+ pemetrexede ou pemetrexede sozinho; • caracterizar a farmacocinética da carboplatina quando administrada em combinação com atezolizumabe + pemetrexede; • caracterizar a farmacocinética da cisplatina quando administrada em combinação com atezolizumabe + pemetrexede; • caracterizar a farmacocinética de pemetrexede quando administrado em combinação com atezolizumabe+ carboplatina ou em combinação com atezolizumabe+ cisplatina; • determinar a concentração sérica máxima observada de atezolizumabe (Cmax) após a infusão (Braço A); • determinar a concentração sérica mínima de atezolizumabe observada (Cmin) antes da infusão em ciclos selecionados, na descontinuação do tratamento e aos 120 dias ( 30 dias) após a última dose de atezolizumabe (Braço A); • determinar as concentrações plasmáticas de carboplatina ou cisplatina (Braço A); e • determinar as concentrações plasmáticas de pemetrexede (Braço A).

[337] Os objetivos exploratórios deste estudo são: • avaliar a taxa de sobrevida livre de progressão (SLP) em pontos no tempo de referência de 6 meses e 1 ano; • avaliar a taxa de sobrevida global (SG) em 3 anos em cada braço de tratamento; • avaliar a eficácia do atezolizumabe conforme medido por SG e SLP avaliada por investigador- de acordo com RECIST v1.1 em subgrupos com base nas características demográficas e de linha de base; • avaliar a eficácia do atezolizumabe medida pela sobrevivência de marco;

• avaliar a relação entre biomarcadores em tumores e sangue (incluindo, sem limitação, ligante-1 de morte programada (PD- L1),

morte programada-1 (PD-1), mutações somáticas e outras), conforme definido por imuno-histoquímica (IHC), reação em cadeia da polimerase-transcriptase reversa quantitativa (qRT-PCR), sequenciamento de próxima geração e/ou outros métodos e medidas de eficácia;

• avaliar biomarcadores exploratórios preditivos,

prognósticos e farmacodinâmicos em tecido tumoral de arquivo e/ou fresco e sangue e sua associação com o estado da doença, mecanismos de resistência e/ou resposta ao tratamento do estudo;

• avaliar o status de PD-L1, biomarcadores imunes e relacionados ao NSCLC e outros biomarcadores exploratórios em tecidos tumorais de arquivo e/ou frescos e sangue (ou derivados do sangue) coletados antes, durante ou após o tratamento com atezolizumabe ou na progressão e associação com o estado da doença e/ou resposta a atezolizumabe em combinação com quimioterapia;

• avaliar e comparar o estado de saúde do paciente conforme avaliado pelo questionário EuroQoL 5 Dimensions 5-Level (EQ-

5D-5L) para gerar pontuações de utilidade para uso em modelos econômicos para reembolso; e

• determinar o impacto do atezolizumabe em cada uma das comparações de tratamento, conforme medido pela mudança da linha de base nos resultados relatados pelo paciente (PROs) de qualidade de vida relacionada à saúde, sintomas relacionados ao câncer de pulmão e estado de saúde conforme avaliado pela Organização Europeia para Pesquisa e Tratamento do Câncer Questionários de Qualidade de Vida EORTC QLQ-C30 e QLQ-LC13.

PROJETO DO ESTUDO

[338] Descritos abaixo estão os detalhes de um estudo randomizado, de Fase III, multicêntrico, aberto, projetado para avaliar a segurança e eficácia de (a) atezolizumabe + carboplatina+ pemetrexede em comparação com o tratamento com carboplatina+ pemetrexede e (b) atezolizumabe + cisplatina+ pemetrexede em comparação com o tratamento com cisplatina+ pemetrexede em pacientes intocados por quimioterapia e têm NSCLC não escamoso de Estágio IV-. O Esquema 1 abaixo ilustra o desenho do estudo: ESQUEMA 1:

[339] No Esquema 1 acima, ECOG PS se refere ao “status de desempenho do Eastern Cooperative Oncology Group”, NSCLC se refere a “câncer de pulmão de células não pequenas” e RECIST v1.1 se refere a “Critérios de Avaliação de Resposta em Tumores Sólidos, Versão 1.1”.

[340] Esse estudo inscreveu aproximadamente 568 pacientes em todos os locais em uma fase de inscrição global. Os pacientes foram estratificados por sexo (masculino vs. feminino), tabagismo (nunca vs. atual e/ou anterior), estado de desempenho ECOG (isto é, Eastern Cooperative Oncology Group) (0 vs. 1) e regime de quimioterapia (carboplatina vs.

cisplatina), e foram então randomizados 1:1 para receber um dos seguintes regimes de tratamento, conforme mostrado na Tabela 5 abaixo. Mais detalhes sobre o status de desempenho do ECOG são fornecidos em Oken et al. (1982) Am J Clin Oncol. 5: 649 a 655).

TABELA 5: BRAÇOS DE TRATAMENTO Tratamento Fase de Indução Fase de Manutenção Braço (Quatro ou seis ciclos de 21 dias) (Ciclos de 21 dias) atezolizumabe + carboplatina + pemetrexede atezolizumabe + A ou pemetrexede atezolizumabe + cisplatina + pemetrexede carboplatina + pemetrexede B ou pemetrexede cisplatina + pemetrexede

[341] A fase de indução foi administrada em um ciclo de 21 dias por quatro ou seis ciclos. O número de ciclos de tratamento de indução (isto é, quatro ou seis) ficou a critério do investigador e foi determinado e documentado antes da randomização. O tratamento de indução foi administrado em um ciclo de 21 dias até que ocorresse o seguinte (o que ocorrer primeiro): 1) administração de quatro ou seis ciclos, 2) toxicidade inaceitável ou 3) progressão da doença documentada.

[342] Após a fase de indução, os pacientes que não apresentaram progressão ou toxicidade inaceitável continuaram a terapia de manutenção com atezolizumabe + pemetrexede (Braço A) ou pemetrexede sozinho (Braço B). Os pacientes randomizados para Braço A ou B continuaram o tratamento com atezolizumabe + manutenção com pemetrexede ou manutenção com pemetrexede até doença progressiva, toxicidade inaceitável ou morte. Durante a fase de indução ou manutenção, os pacientes randomizados para o Braço A continuaram o tratamento com atezolizumabe além da doença progressiva por RECIST v1.1, desde que experimentaram benefício clínico conforme avaliado pelo investigador conforme descrito abaixo:

[343] Para Braço de Tratamento A: Durante o tratamento (indução ou manutenção), os pacientes que mostraram evidência de benefício clínico foram autorizados a continuar com o atezolizumabe após RECIST v1.1 para doença progressiva serem atendidos se cumprissem todos os seguintes critérios: • evidência de benefício clínico conforme avaliado pelo investigador; • ausência de sintomas e sinais (incluindo piora dos valores laboratoriais [por exemplo, hipercalcemia nova ou piora]) indicando progressão inequívoca da doença; • Nenhum declínio no status de desempenho do ECOG que pudesse ser atribuído à progressão da doença; • Ausência de progressão do tumor em locais anatômicos críticos (por exemplo, doença leptomeníngea) que não pode ser tratada por intervenções médicas permitidas pelo protocolo; e • Os pacientes devem ter fornecido consentimento por escrito para reconhecer o adiamento de outras opções de tratamento em favor da continuação do tratamento do estudo no momento da progressão inicial.

[344] O tratamento com quimioterapia (ambos nos Braços A e B) foi descontinuado em todos os pacientes que apresentam evidência de doença progressiva pelo RECIST v1.1.

[345] O cronograma de dosagem e administração para os regimes de tratamento no Braço A da Tabela 5 são fornecidos nas Tabelas 6A e 6B abaixo:

TABELA 6A: PROGRAMAÇÃO DE DOSAGEM E ADMINISTRAÇÃO PARA TRATAMENTO COM FASE DE INDUÇÃO DE 4 CICLOS Fase de Indução Fase de Manutenção Fármacos Ciclos 1 a 4* > Ciclo 4* (listados em ordem de administração) Dia 1 Dia 1 1) anti-PD-L1 Ab

1.200 mg 1.200 mg (atezolizumabe) 2) antimetabólito 500 mg/m2 500 mg/m2 (pemetrexede) 3) agente de platina Carboplatina: ASC = 6 ǂ (carboplatina ou cisplatina) OU Cisplatina: 75 mg/m2 * ciclos de 21 dias. ǂ mg/ml/min.

TABELA 6B: PROGRAMAÇÃO DE DOSAGEM E ADMINISTRAÇÃO PARA TRATAMENTO COM FASE DE INDUÇÃO DE 6 CICLOS Fase de Indução Fase de Manutenção Fármacos Ciclos 1-6 > Ciclo 6* (listados em ordem de administração) Dia 1 Dia 1 1) anti-PD-L1 Ab

1.200 mg 1.200 mg (atezolizumabe) 2) antimetabólito 500 mg/m2 500 mg/m2 (pemetrexede) 3) agente de platina Carboplatina: ASC = 6 ǂ (carboplatina ou cisplatina) OU Cisplatina: 75 mg/m2 * ciclos de 21 dias. ǂ mg/ml/min.

[346] Os pacientes foram submetidos a avaliações de tumor no início do estudo e a cada 6 semanas ( 7 dias) durante as primeiras 48 semanas após o Ciclo 1, Dia 1, independentemente dos atrasos na dose. Após a conclusão da avaliação do tumor da Semana 48, a avaliação do tumor foi necessária a cada 9 semanas ( 7 dias) depois disso, independentemente dos atrasos na dose de tratamento. Os pacientes foram submetidos a avaliações de tumor até a progressão da doença radiográfica de acordo com RECIST v1.1 ou perda do benefício clínico (para atezolizumabe- tratou apenas os pacientes que continuaram o tratamento após a progressão da doença radiográfica de acordo com RECIST v1.1), retirada do consentimento, encerramento do estudo pelo patrocinador ou morte, o que ocorrer primeiro. Os pacientes que descontinuaram o tratamento por motivos diferentes da progressão da doença radiográfica (por exemplo, toxicidade) continuaram as avaliações tumorais programadas até a progressão da doença radiográfica de acordo com RECIST v1.1 ou perda do benefício clínico (para pacientes tratados com atezolizumabe- que continuaram o tratamento após a progressão da doença radiográfica de acordo com RECIST v1.1), retirada do consentimento, encerramento do estudo pelo patrocinador ou morte, o que ocorrer primeiro, independentemente de os pacientes terem iniciado uma nova terapia anticâncer.

[347] Se clinicamente viável, foi recomendado que os pacientes fossem submetidos a uma coleta de amostra de biópsia do tumor no momento da progressão da doença radiográfica. Esses dados foram usados para explorar se os achados radiográficos eram consistentes com a presença de um tumor. Além disso, esses dados foram analisados para avaliar a associação entre as alterações no tecido tumoral e o resultado clínico e para entender melhor os mecanismos potenciais de progressão e resistência ao atezolizumabe em comparação com esses mecanismos após o tratamento apenas com quimioterapia. Essa avaliação exploratória do biomarcador não foi usada para quaisquer decisões relacionadas ao tratamento.

[348] Os pacientes que continuaram o tratamento após a progressão da doença radiográfica de acordo com RECIST v1.1 continuaram a ser submetidos a avaliações de tumor a cada 6 semanas ( 7 dias), ou antes, se ocorrer deterioração sintomática. Para esses pacientes, as avaliações de tumor continuaram a cada 6 semanas ( 7 dias), independentemente do tempo no estudo, até o tratamento do estudo ser descontinuado.

[349] Pacientes que descontinuaram o tratamento por razões diferentes da progressão da doença radiográfica de acordo com RECIST v1.1 (por exemplo, toxicidade, deterioração sintomática) avaliações de tumor agendadas continuadas na mesma frequência que teria sido seguida se o paciente tivesse permanecido no tratamento do estudo (isto é, a cada 6 semanas ( 7 dias) por 48 semanas após o Ciclo 1, Dia 1 e, em seguida, a cada 9 semanas ( 7 dias) depois disso, independentemente dos atrasos na dose de tratamento) até a progressão da doença radiográfica de acordo com RECIST v1.1, retirada do consentimento, encerramento do estudo pelo Patrocinador ou morte, o que ocorrer primeiro.

[350] Os pacientes que iniciaram uma nova terapia anticâncer na ausência de progressão da doença radiográfica por RECIST v1.1 continuaram as avaliações tumorais programadas até a progressão da doença radiográfica por RECIST v1.1 (ou perda do benefício clínico para pacientes tratados com atezolizumabe que continuaram o tratamento com atezolizumabe após progressão da doença radiográfica de acordo com RECIST v1.1), retirada do consentimento, morte ou encerramento do estudo pelo Patrocinador, o que ocorrer primeiro.

[351] As avaliações do tumor para pacientes que foram tratados com atezolizumabe que continuaram a ter benefício clínico, apesar da evidência de progressão radiográfica, foram continuadas de acordo com a programação listada acima.

PACIENTES

[352] Os pacientes eram elegíveis para participação neste estudo se fossem intocados por quimioterapia- e tivessem NSCLC não escamoso em estágio IV.

CRITÉRIO DE INCLUSÃO

[353] Os principais critérios de inclusão incluíram: idade igual ou superior a 18 anos; status de desempenho ECOG de 0 ou 1; NSCLC não escamoso de Estágio IV confirmado histológica ou citologicamente (de acordo com o sistema de estadiamento do câncer da Union Internationale centre le Cancer/American Joint Committee on Cancer, 7ª edição; Detterbeck et al.

(2009) "The new lung cancer staging system” Chest 136: 260-71); os pacientes com tumores de histologia mista de células não pequenas (isto é, escamosas e não escamosas) eram elegíveis se o componente histológico principal parecesse não escamoso; nenhum tratamento prévio para NSCLC não escamoso de Estágio IV; pacientes que receberam neo-adjuvante, quimioterapia adjuvante, radioterapia ou quimiorradioterapia com intenção curativa para doença não metastática devem ter experimentado um intervalo sem tratamento de pelo menos 6 meses a partir da randomização desde a última dose de quimioterapia e/ou radioterapia ; pacientes com um histórico de metástases do SNC assintomáticos tratados eram elegíveis se (a) as metástases eram supratentorial e/ou do cerebelo (isto é, não há metástases para mesencéfalo, ponte, bulbo, ou a medula espinhal); (b) os pacientes não tinham necessidade contínua de corticosteroides como terapia para doença do SNC, (c) os pacientes não tinham radiação estereotáxica em 7 dias ou radiação de todo o cérebro em 14 dias antes da randomização, (d) os pacientes não tinham evidência de progressão provisória entre a conclusão da terapia direcionada ao SNC e o estudo de radiografia de triagem; pacientes com novas metástases do SNC assintomáticas detectadas na varredura de rastreamento devem ter recebido radioterapia e/ou cirurgia para metástases do SNC. Os pacientes com novas metástases assintomáticas do SNC detectadas na varredura devem ter recebido radioterapia e/ou cirurgia para metástases do SNC. Após o tratamento, esses pacientes podem ter sido elegíveis sem a necessidade de uma varredura cerebral adicional antes da randomização, se todos os outros critérios fossem atendidos. Os pacientes elegíveis deveriam ter demonstrado doença mensurável, conforme definido pelo RECIST v1.1 (lesões previamente irradiadas só foram consideradas como doença mensurável se a progressão da doença tivesse sido inequivocamente documentada naquele local, uma vez que a radiação e a lesão previamente irradiada não eram o único local da doença); função hematológica e de órgão final adequada, definida pelos seguintes resultados de testes laboratoriais obtidos dentro de 14 dias antes da randomização: o ANC 1500 células/l sem suporte do fator de estimulação de colônia- de granulócitos; o Contagem de linfócitos  500/l; o Contagem de plaquetas  100.000/l sem transfusão; o Hemoglobina  9,0 g/dl. (Os pacientes foram autorizados a receber transfusão para atender a este critério); o INR ou aPTT  1,5  limite superior de normal (ULN).

(Isso se aplicava somente a pacientes que não estavam recebendo anticoagulação terapêutica; os pacientes que recebiam anticoagulação terapêutica eram obrigados a tomar uma dose estável); o AST, ALT e fosfatase alcalina  2,5  ULN, sem as seguintes exceções: • Pacientes com metástases hepáticas documentadas: AST e/ou ALT  5  ULN; • Pacientes com metástases hepáticas ou ósseas documentadas: fosfatase alcalina  5  ULN; o Bilirubina sérica  1,25  ULN. (Pacientes com doença de Gilbert conhecida que tinham nível de bilirrubina sérica  3  ULN foram inscritos.); e o Depuração de creatinina calculada (CRCL)  45 ml/min ou, se estiver usando cisplatina, CRCL calculado deve ser  60 ml/min.

[354] Os pacientes foram incentivados a enviar uma amostra de tecido tumoral pré-tratamento (se disponível). Se o tecido tumoral não estivesse disponível (por exemplo, esgotado para testes de diagnóstico anteriores), os pacientes ainda eram elegíveis. Se o tecido tumoral estivesse disponível, uma amostra representativa de tumor fixada em formalina e embebida em parafina (FFPE) em bloco de parafina ou cortes seriados não corados, recém cortados (de preferência pelo menos 10) de uma amostra de tumor FFPE foi preferencial. Se 10 seções não estivessem disponíveis, menos poderiam ser enviadas. Se as amostras FFPE descritas acima não estivessem disponíveis, qualquer tipo de amostra (incluindo aspiração por agulha fina, amostras de péletes de células [por exemplo, de derrame pleural] e amostras de lavagem) também eram aceitáveis. As amostras foram acompanhadas por um relatório de patologia associado. Qualquer amostra de tecido tumoral disponível deve ser submetida antes ou dentro de 4 semanas após a inscrição.

CRITÉRIO DE EXCLUSÃO

[355] Os principais critérios de exclusão incluíram: pacientes com uma mutação sensibilizante no gene EGFR ou um oncogene de fusão ALK; tratamento com qualquer outro agente investigacional com intenção terapêutica nos 28 dias anteriores à randomização; metástases do SNC ativas ou não tratadas, conforme determinado por avaliação de tomografia computadorizada (TC) ou ressonância magnética (MRI) durante a triagem e avaliações radiográficas anteriores; compressão da medula espinhal não tratada definitivamente com cirurgia e/ou radiação ou compressão da medula espinhal previamente diagnosticada e tratada sem evidências de que a doença foi clinicamente estável por  2 semanas antes da randomização; doença leptomeníngea; dor relacionada ao tumor não controlada (os pacientes que precisam de medicação para a dor devem estar recebendo um regime estável no início do estudo; lesões sintomáticas passíveis de radioterapia paliativa (por exemplo, metástases ósseas ou metástases que causam impacto do nervo)

devem ser tratadas antes da randomização (os pacientes devem se recuperar dos efeitos da radiação e não há período mínimo de recuperação exigido)

Pacientes com lesões metastáticas assintomáticas cujo crescimento adicional provavelmente causaria déficits funcionais ou dor intratável (por exemplo,

metástase epidural que não está atualmente associada à compressão espinhal)

foram considerados para terapia loco-regional, se apropriado, antes da randomização). Os critérios de exclusão também incluíram: derrame pleural não controlado, derrame pericárdico ou ascite que requer procedimentos de drenagem recorrentes (uma vez por mês ou mais frequentemente, mas pacientes com cateteres de demora (por exemplo, PleurX) foram permitidos independentemente da frequência de drenagem); hipercalcemia não controlada ou sintomática ( 1,5 mmol/l de cálcio ionizado ou cálcio 12 mg/dl ou cálcio sérico corrigido ULN; os pacientes que estavam recebendo denosumab antes da randomização foram, se elegíveis, obrigados a descontinuar seu uso e substituí-lo por um bifosfonato durante o estudo); malignidades diferentes do

CPPC dentro de 5 anos antes da randomização, com exceção daquelas com um risco insignificante de metástase ou morte (por exemplo, esperado 5- em

SG 90%) tratados com resultado curativo esperado (como carcinoma in situ do colo do útero tratado adequadamente, câncer de pele basal ou de células escamosas, câncer de próstata localizado tratado cirurgicamente com intenção curativa, carcinoma ductal in situ tratado cirurgicamente com intenção curativa);

status de expressão de PD-L1 de tumor conhecido conforme determinado por um ensaio de IHC de outros estudos clínicos (por exemplo, pacientes cujo status de expressão de PD-L1 foi determinado durante a triagem para entrada em um estudo com anticorpos anti-PD-1 ou anti- PD-L1, mas não eram elegíveis, foram excluídos); mulheres que estavam grávidas, amamentando ou com intenção de engravidar durante o estudo; história de doença auto-imune,

incluindo, sem limitação, miastenia gravis, miosite, hepatite autoimune, lúpus eritematoso sistémico, artrite reumatoide, doença inflamatória do intestino,

trombose vascular associada à síndrome anti-fosfolipídica, granulomatose de

Wegener, síndrome de Sjõgren, síndrome de Guillain-Barré, esclerose múltipla,

vasculite ou glomerulonefrite (pacientes com história de hipotireoidismo relacionado a autoimunidade em terapia de reposição hormonal da tireoide eram elegíveis; pacientes com diabetes mellitus tipo I controlada em regime de insulina eram elegíveis); história de fibrose pulmonar idiopática, pneumonia em organização (por exemplo, bronquiolite obliterante), pneumonite induzida por drogas, pneumonite idiopática ou evidência de pneumonite ativa na triagem de

TC de tórax. (Histórico de pneumonite por radiação no campo de radiação

(fibrose) foi permitida); resultado de teste positivo para HIV; pacientes com hepatite B ativa (crônica ou aguda; definida como tendo resultado do teste de antígeno de superfície da hepatite B positivo [HBsAg] na triagem) ou vírus da hepatite C (HCV); tuberculose ativa; infecções graves nas 4 semanas anteriores à randomização, incluindo, sem limitação, hospitalização por complicações de infecção, bacteremia ou pneumonia grave; antibióticos orais ou IV terapêuticos dentro de 2 semanas antes da randomização (pacientes recebendo antibióticos profiláticos (por exemplo, para prevenção de uma infecção do trato urinário ou para prevenir a exacerbação de doença pulmonar obstrutiva crônica) eram elegíveis); doença cardiovascular significativa, como doença cardíaca da New York Heart Association (Classe II ou superior), infarto do miocárdio ou acidente vascular cerebral dentro de 3 meses antes da randomização, arritmias instáveis ou angina instável. (Pacientes com doença arterial coronariana conhecida, insuficiência cardíaca congestiva que não atende aos critérios acima ou fração de ejeção do ventrículo esquerdo 50%

deveriam estar em um regime médico estável que é otimizado na opinião do médico assistente, em consulta com um cardiologista se apropriado);

procedimento cirúrgico principal que não seja para diagnóstico dentro de 28 dias antes da randomização ou antecipação da necessidade de procedimento cirúrgico principal durante o curso do estudo; transplante de medula óssea alogênico prévio ou transplante de órgão sólido; qualquer outra doença,

disfunção metabólica, achado de exame físico ou achado de laboratório clínico que dê suspeita razoável de uma doença ou condição que contraindica o uso de um medicamento experimental ou que possa ter afetado a interpretação dos resultados ou colocado o paciente em alto risco para o tratamento complicações; pacientes com doenças ou condições que interferem em sua capacidade de compreender, seguir e/ou cumprir os procedimentos do estudo;

tratamento com qualquer outro agente investigacional com intenção terapêutica nos 28 dias anteriores à randomização; administração de uma vacina viva atenuada dentro de 4 semanas antes da randomização ou antecipação de que tal vacina viva atenuada seria necessária durante o estudo; tratamento prévio com inibidores de EGFR ou inibidores de ALK; qualquer terapia anticâncer aprovada, incluindo terapia hormonal dentro de 21 dias antes do início do tratamento do estudo; tratamento prévio com agonistas de CD137 ou terapias de bloqueio de ponto de verificação imunológico, anticorpos terapêuticos anti-

PD-1 e anti-PD-L1. (Pacientes que tiveram tratamento anterior com antígeno 4 associado a linfócitos T citotóxicos (CTLA-4) eram elegíveis para inscrição,

desde que a última dose de anti-CTLA-4 pelo menos 6 semanas antes da randomização, e que os pacientes não tivessem histórico de graves efeitos adversos relacionados ao sistema imune de anti CTLA-4 (NCI CTCAE Grau 3 e

4)). Os principais critérios de exclusão também incluíram: tratamento com qualquer outro agente investigacional com intenção terapêutica dentro de 28 dias antes da randomização, tratamento com agentes imunoestimuladores sistêmicos (incluindo, sem limitação, interferons e interleucina 2) dentro de 4 semanas ou 5 meias-vidas do fármaco, o que for mais longo, antes da randomização (o tratamento prévio com vacinas contra o câncer era permitido); tratamento com medicamentos imunossupressores sistêmicos (incluindo, sem limitação, corticosteroides, ciclofosfamida, azatioprina, metotrexato, talidomida e agentes antifator de necrose tumoral [anti-TNF]) dentro de 2 semanas antes da randomização. Pacientes que receberam baixa dose aguda ( 10 mg de prednisona oral ou equivalente), medicamentos imunossupressores sistêmicos eram elegíveis para serem incluídos no estudo. Além disso, o uso de corticosteroides ( 10 mg de prednisona oral ou equivalente) para doença pulmonar obstrutiva crônica, mineralocorticoides (por exemplo, fludrocortisona) para pacientes com hipotensão ortostática e corticosteroides suplementares de baixa- dose foram permitidos para a insuficiência adrenocortical). Os pacientes foram excluídos se tivessem um histórico de reações alérgicas graves, anafiláticas ou outras reações de hipersensibilidade a anticorpos quiméricos ou humanizados ou proteínas de fusão; hipersensibilidade ou alergia conhecida a biofármacos produzidos em células de ovário de hamster chinês ou qualquer componente da formulação de atezolizumabe; e história de reações alérgicas à carboplatina, cisplatina ou outros compostos contendo platina; pacientes com deficiência auditiva (cisplatina); neuropatia periférica Grau 2 conforme definido por NCI CTCAE v4.0 (cisplatina); nível de depuração da creatinina 60 ml/min para cisplatina ou  45 ml/min para carboplatina.

MÉTODO DE TRATAMENTO

[356] 568 pacientes foram randomizados (1:1) para receber tratamento com atezolizumabe + carboplatina + pemetrexede ou atezolizumabe + cisplatina + pemetrexede (Braço A) ou carboplatina + pemetrexede ou cisplatina + pemetrexede (Braço B). (Os detalhes dos Braços de Tratamento A e B são mostrados acima na Tabela 5).

[357] Durante a fase de indução, um ciclo de quimioterapia contou para o número pré-especificado de ciclos de quimioterapia de indução (4 ou 6), desde que pelo menos um componente de quimioterapia tenha sido administrado pelo menos uma vez durante um ciclo de 21 dias. Os ciclos nos quais nenhum componente de quimioterapia é administrado não contam para o número total de ciclos de quimioterapia de indução.

[358] Pacientes que não experimentaram nenhum benefício clínico adicional (para pacientes inscritos no Braço A) ou progressão da doença (para pacientes inscritos no Braço B) em qualquer momento durante a fase de indução descontinuaram todo o tratamento do estudo. Na ausência dos critérios acima, após fase de indução de 4 ou 6- ciclos, os pacientes começaram a terapia de manutenção (atezolizumabe+ pemetrexede no Braço A ou pemetrexede no Braço B).

[359] Durante o tratamento (indução ou manutenção), os pacientes do Braço A que mostraram evidência de benefício clínico foram autorizados a continuar com o atezolizumabe após RECIST v1.1 para doença progressiva ter sido atendido. No entanto, o tratamento com quimioterapia foi interrompido.

[360] Os pacientes receberam antieméticos e hidratação IV para tratamentos com pemetrexede platina de acordo com o padrão local de atendimento e as instruções do fabricante. No entanto, devido aos seus efeitos imunomoduladores, a pré-medicação com esteroides foi limitada quando clinicamente viável. Além disso, no caso de erupção cutânea relacionada ao pemetrexede, o uso de esteroides tópicos foi recomendado como- tratamento de linha sempre que fosse clinicamente viável. A Tabela 7 abaixo lista a pré- medicação para pemetrexede. Tabela 8 abaixo lista os tempos de infusão para administração de tratamento para pemetrexede+ platina durante as fases de indução e manutenção.

TABELA 7: PRÉ-MEDICAÇÃO PARA PEMETREXEDE

Pré-medicação Dose e Via Temporização Uma vez por dia, começando pelo menos 5 a 7 Ácido fólico 350 a 1.000 g de PO dias antes do Ciclo 1, Dia 1 e continuando até 3 semanas após a interrupção do pemetrexede q9w começando o Ciclo 1, Dia 1 e continuando Vitamina b12 1.000 g de IM até 3 semanas após a descontinuação de pemetrexede Duas vezes ao dia no dia anterior, no dia Dexametasona 4 mg de PO anterior e no dia seguinte à administração de (sugerido) pemetrexede IM = intramuscular.

PO = oral.

Q9w = a cada 9 semanas.

TABELA 8: REGIME DE TRATAMENTO PARA QUIMIOTERAPIA À BASE DE PEMETREXEDE+ PLATINA- Período de Fármaco de Período de Indução Dose e Via Manutenção Estudo (Quatro ou Seis Ciclos) (Até PD) Mais de Mais de aproximadamente 1 Pemetrexede 500 mg/m2 IV aproximadamente 10 10 minutos no Dia 1 q3w minutos no Dia 1 q3w

E Mais de aproximadamente Carboplatina ASC 6 IV 30-60 minutos no Dia 1 Não aplicável q3W 2

OU Cisplatina 75 mg/m² Mais de 1–2 horas no Dia 1 Não aplicável q3w ASC= área sob curva de concentração-tempo IV = intravenoso PD = doença progressiva Q3w= a cada 3 semanas.

[361] 578 pacientes foram randomizados (1: 1) para receber tratamento com atezolizumabe + pemetrexede + carboplatina ou cisplatina (Braço A) ou pemetrexede + carboplatina ou cisplatina (Braço B). (Os detalhes dos Braços de Tratamento A e B são mostrados acima nas Tabelas 5, 6A e 6B). Os dados demográficos do paciente e as características basais são mostrados nas Tabelas 9A e 9B abaixo. TABELA 9A: DEMOGRAFIA E CARACTERÍSTICAS DE LINHA DE BASE DO PACIENTE

IDT Demografia/Linha de Base

BRAÇO A BRAÇO B

Idade (anos) <65 153 (52,4%) 167 (58,4%) Sexo IxRS Masculino 192 (65,8%) 192 (67,1%) Raça Branco 193 (66,1%) 203 (71,0%) Asiático 71 (24,3%) 65 (22,7%) Histórico de uso de tabaco Nunca 37 (12,7%) 30 (10,5%) Metástase Hepática Sim 37 (12,7%) 36 (12.6%) Pontuação ECOG 0 126 (43,2%) 114 (40,1%) 4 vs 6 ciclos 4 ciclos 197 (67,5%) 190 (66,4%) IHC TC3/TC3* Positivo 25 (14,2%) 20 (12,1%) IHC TC12/IC12* Positivo 63 (35,8%) 73 (43,5%) * a prevalência é calculada na população avaliável de biomarcador TABELA 9B: CARACTERÍSTICAS DE LINHA DE BASE

APP PP APP PP Característica Característica (n = 292) (n = 286) (n = 292) (n = 286) Idade média 64,0 (31 a 63,0 (33 a Status de tabagismo, n (%) (intervalo), anos 85) 83) 153 167 255 256 <65 anos, n (%) Atual ou ex-fumante (52,4%) (58.4%) (87,3%) (89,5%) Sexo, masculino, n 192 192 Nunca 37 (12,7%) 30 (10,5%) (%) (65,8%) (67,1%) Metástases hepáticas, Raça, n (%) a 37 (12,7%) 36 (12.6%) n (%) 193 203 Expressão de PD-L1, Branco n = 176 n = 168 (66,1%) (71,0%) n (%) c Asiático 71 (24,3%) 65 (22,7%) Negativo 88 (50,0%) 75 (44,6%) 126 114 ECOG PS 0, n (%)b Positivo 88 (50,0%) 93 (55,4%) (43,2%) (40,1%) 177 175 Carboplatina, n (%) PD-L1-low 63 (35,8%) 73 (43,5%) (60,6%) (61,1%) 4 ciclos pretendidos, n 197 190 (66,4) PD-L1-high 25 (14,2%) 20 (11,9%) (%) (67,5%) ECOG, grupo de oncologia cooperativa oriental; PS, status de desempenho a índio americano ou raça nativa do Alasca (n = 2), Negro ou Afro-americano (n = 6) e de raça desconhecida (n = 38) não incluídos na tabela. b 2 pacientes não apresentam ECOG PS de linha de base. c status de PD-L1 disponível em 60% dos pacientes. PD-L1-high (TC3/IC3): pacientes com expressão de PD-L1 em ≥50% das células tumorais ou ≥10% das células imunes infiltrantes de tumor; PD-L1-low (TC12/IC12): pacientes com expressão de PD-L1 em ≥1% e <50% das células tumorais ou ≥1% e <10% das células imunes infiltrantes de tumor; e PD-L1 negativo (TC0/IC0): pacientes com expressão de PD-L1 em <1% das células tumorais e <1% das células imunes infiltrantes de tumor.

[362] Os pacientes receberam sua primeira dose do medicamento do estudo no dia da randomização, se possível. Se isso não foi possível, a primeira dose ocorreu dentro de 5 dias após a randomização. O atezolizumabe foi fornecido pelo Patrocinador. Carboplatina, cisplatina e pemetrexede foram o tratamento de base e foram considerados produtos medicinais não- experimentais (NIMPs). Carboplatina, cisplatina e pemetrexede foram usados nas formulações disponíveis comercialmente. O medicamento atezolizumabe foi fornecido como um líquido estéril em frascos de vidro de 20 ml. O frasco foi projetado para fornecer 20 ml (1.200 mg) de solução de atezolizumabe, mas pode conter mais do que o volume declarado para permitir a distribuição de todo o volume de 20 ml.

[363] A fase de indução do estudo consistiu em quatro ou seis ciclos de atezolizumabe/placebo mais quimioterapia, em que cada ciclo tem 21 dias de duração. O número de ciclos de tratamento de indução (quatro ou seis) foi determinado pelo investigador e documentado antes da randomização.

Consulte o esquema acima. No dia 1 de cada ciclo, todos os pacientes elegíveis foram administrados com infusões de fármacos do estudo na seguinte ordem: Braço A: atezolizumabe → pemetrexede → carboplatina ou cisplatina; e Braço B: pemetrexede → carboplatina ou cisplatina.

[364] Durante a fase de indução, o tratamento do estudo foi administrado da seguinte maneira no dia 1:

1. Atezolizumabe (1.200 mg, equivalente a uma dose média baseada no peso corporal de 15 mg/kg), administrado por via intravenosa acima de 60 ( 15) minutos (para a primeira infusão, com possível encurtamento para 30 ( 10) minutos para infusões subsequentes), seguido por;

2. Pemetrexede (500 mg/m2), administrado por via intravenosa durante aproximadamente 10 minutos, seguido por;

3. Carboplatina, administrada por via intravenosa ao longo de 30-60 minutos para atingir uma área alvo inicial sob a curva de concentração-tempo (ASC) de 6 mg/ml/min (dosagem da fórmula de Calvert);

ou Cisplatina, administrada por via intravenosa durante 1-2 horas na dose de 75 mg/m2.

[365] A dose de carboplatina de ASC de 6 foi calculada usando a fórmula de Calvert (Calvert et al. (1989) J Clin Oncol 7:1748-56).

FÓRMULA CALVERT: Dose total (mg)= (ASC alvo)x (taxa de filtração glomerular [TFG]+ 25)

[366] A TFG usada na fórmula de Calvert para calcular a dosagem com base na ASC não deveria exceder 125 ml/min. Para os fins deste protocolo, a TFG foi considerada equivalente à depuração de creatinina (CRCL). a CRCL é calculada por diretrizes institucionais ou pelo método descrito em Cockcroft e Gault (1976) Nephron 16:31-41, usando a seguinte fórmula: (140-idade) (peso) CRCL= x(0,85 se feminino) 72x crS

[367] em que: CRCL= depuração de creatinina em ml/min idade do = paciente idade em anos peso do = paciente em kg crS= creatinina sérica em mg/dl

[368] Para pacientes com um nível de creatinina sérica anormalmente baixo, a estimativa de TFG foi estimada por meio do uso de um nível mínimo de creatinina de 0,8 mg/dl ou a TFG estimada foi limitada a 125 ml/min. Foi recomendado que os médicos limitassem a dose de carboplatina para a exposição desejada (ASC) para evitar toxicidade potencial devido à sobredosagem. Com base na fórmula de Calvert descrita no rótulo da carboplatina, as doses máximas foram calculadas como segue: Dose máxima de carboplatina (mg)= ASC alvo (mgx min/ml)x (TFG+ 25 ml/min)

[369] A dose máxima foi baseada em uma estimativa da TFG que é limitada a 125 ml/min para pacientes com função renal normal. Nenhum valor estimado de TFG superior foi usado. Para uma ASC alvo= 6, a dose máxima foi 6 x 150= 900 mg. Para uma ASC alvo= 5, a dose máxima foi 5 x 150= 750 mg. Para uma ASC alvo= 4, a dose máxima era 4 x 150= 600 mg.

Detalhes adicionais sobre a dosagem de carboplatina são fornecidos em: www.fda.gov/aboutfda/centersoffices/officeofmedicalproductsandtobacco/cder/u cm228974.htm

[370] Durante a fase de indução, um ciclo de quimioterapia contou para o número pré-especificado de ciclos de quimioterapia de indução (4 ou 6), desde que pelo menos um componente de quimioterapia tenha sido administrado pelo menos uma vez durante um ciclo de 21 dias. Os ciclos em que nenhuma quimioterapia foi administrada não contaram para o número total de ciclos de quimioterapia de indução. Após a fase de indução, os pacientes começaram a terapia de manutenção com atezolizumabe (isto é, 1.200 mg, infundido IV, como descrito acima) e pemetrexede (isto é, 500 mg/m2, infundido IV como descrito acima) no Dia 1 de cada 21 dias subsequentes ciclo após a fase de indução. Consulte a Figura 1 e o esquema de estudo acima). Não foram permitidas modificações na dose de atezolizumabe.

TERAPIA PERMITIDA

[371] A pré-medicação com anti-histamínicos pode ser administrada para qualquer infusão de atezolizumabe após o Ciclo 1. As seguintes terapias devem continuar enquanto os pacientes estão no estudo: • Contraceptivos orais; • Terapia de reposição hormonal; • Terapia de anticoagulação profilática ou terapêutica (como heparina de baixo peso molecular ou varfarina em um nível de dose estável);

• Radioterapia paliativa (por exemplo, tratamento de metástases ósseas conhecidas), desde que não interfira na avaliação das lesões-alvo do tumor (por exemplo, a lesão sendo irradiada não é o único local da doença, pois isso tornaria o paciente não avaliável quanto à resposta do tumor avaliações de acordo com RECIST v1.1); • Não é obrigatório suspender o atezolizumabe durante a radioterapia paliativa; • Vacinações inativas contra influenza; • Megestrol administrado como estimulante do apetite; • Corticosteroides inalados para doença pulmonar obstrutiva crônica; • Mineralocorticoides (por exemplo, fludrocortisona); e • Corticosteroides de baixa dosagem para pacientes com hipotensão ortostática ou insuficiência adrenocortical.

[372] Em geral, o atendimento aos pacientes foi administrado com terapias de suporte conforme indicação clínica de acordo com os padrões locais. Os pacientes que apresentaram sintomas associados à infusão podem ter sido tratados sintomaticamente com paracetamol, ibuprofeno, difenidramina e/ou famotidina ou outro antagonista do receptor H2 de acordo com a prática padrão. Sérios eventos associados à infusão - manifestados por dispneia, hipotensão, sibilância, broncoespasmo, taquicardia, redução da saturação de oxigênio ou dificuldade respiratória foram tratados com terapias de suporte conforme clinicamente indicado (por exemplo, oxigênio suplementar e agonistas 2-adrenérgicos).

TERAPIA DE PRECAUÇÃO PARA PACIENTES TRATADOS COM ATEZOLIZUMABE

[373] Como corticosteroides sistêmicos e inibidores TNF- são conhecidos por atenuar os potenciais efeitos imunológicos benéficos do tratamento com atezolizumabe. Portanto, em situações em que corticosteroides sistêmicos ou inibidores TNF- seriam administrados rotineiramente, alternativas, incluindo anti-histamínicos, foram consideradas primeiro pelo médico assistente. Se as alternativas não fossem viáveis, corticosteroides sistêmicos e inibidores TNF- foram administrados a critério do médico assistente, exceto no caso de pacientes para os quais as tomografias computadorizadas com contraste eram contraindicadas (isto é, pacientes com alergia ao contraste ou depuração renal prejudicada). Os corticosteroides sistêmicos são recomendados, com cautela a critério do médico assistente, para o tratamento de eventos adversos específicos quando associados à terapia com atezolizumabe.

TERAPIA PROIBIDA

[374] Qualquer terapia concomitante destinada ao tratamento do câncer, seja autoridade de saúde- aprovado ou experimental, foi proibida por vários períodos de tempo antes do início do tratamento do estudo, dependendo do agente anticâncer, e durante o tratamento do estudo até que a progressão da doença seja documentada e o paciente tenha descontinuado o tratamento do estudo. As terapias concomitantes proibidas incluíram, sem limitação, quimioterapia, terapia hormonal, imunoterapia, radioterapia, agentes investigacionais ou terapia à base de plantas (a menos que seja indicado de outra forma).

[375] Os seguintes medicamentos foram proibidos enquanto o paciente estava no estudo, a menos que indicado de outra forma: • Denosumab; os pacientes que estavam recebendo denosumab antes da inscrição devem estar dispostos e qualificados para receber um bifosfonato; • Qualquer vacina viva atenuada (por exemplo, FluMist ®) dentro de 4 semanas antes da randomização ou durante o tratamento ou dentro de 5 meses após a última dose de atezolizumabe (para pacientes randomizados para atezolizumabe); e • Uso de esteroides para pré-medicação de pacientes para os quais a TC com contraste foi contraindicada (isto é, pacientes com alergia ao contraste ou eliminação renal prejudicada); nesses pacientes, foram realizadas tomografias computadorizadas sem contraste do tórax e tomografias computadorizadas sem contraste ou ressonâncias magnéticas do abdome e da pelve.

[376] O uso concomitante de fitoterápicos não foi recomendado devido ao fato de que sua farmacocinética, perfis de segurança e potenciais interações medicamentosas são geralmente desconhecidos. No entanto, seu uso para pacientes no estudo foi permitido a critério do investigador, desde que não houvesse interações conhecidas com qualquer tratamento do estudo.

Como observado acima, as terapias à base de ervas destinadas ao tratamento do câncer foram proibidas.

AVALIAÇÕES DE TUMOR E RESPOSTA

[377] Os pacientes foram monitorados de perto quanto à segurança e tolerabilidade ao longo do estudo e avaliados quanto à toxicidade antes de cada dose.

[378] Os históricos médicos de cada paciente incluíam doenças clinicamente significativas, cirurgias, histórico de câncer (incluindo terapias e procedimentos anteriores do câncer), estado reprodutivo, histórico de tabagismo e todos os medicamentos (por exemplo, fármacos controlados, fármacos de venda livre, remédios fitoterápicos ou homeopáticos, suplementos nutricionais) usados pelo paciente nos 7 dias anteriores à consulta de triagem.

[379] O histórico de câncer de NSCLC incluiu terapias anteriores de câncer, procedimentos e uma avaliação do status mutacional do tumor (por exemplo, sensibilização da mutação EGFR, status de fusão ALK).

Para os pacientes não testados anteriormente para o status mutacional do tumor, o teste foi necessário na triagem. Para esses pacientes, o teste foi realizado localmente ou submetido à avaliação central durante o período de triagem. Se mutações EGFR ou teste de status ALK não foram realizados localmente, secções de tumor adicionais foram necessárias para avaliação central do status mutacional desses genes. Os dados demográficos incluíram idade, sexo e raça/etnia autorrelatada.

[380] Um exame físico completo incluiu uma avaliação da cabeça, olhos, orelhas, nariz e garganta e os sistemas cardiovascular, dermatológico, músculo-esquelético, respiratório, gastrointestinal, geniturinário e neurológico. Qualquer anormalidade identificada no início do estudo foi registrada.

[381] Nas visitas subsequentes (ou conforme indicado clinicamente), exames físicos limitados e direcionados aos sintomas foram realizados. As alterações das anormalidades da linha de base foram registradas nas observações do paciente. Anormalidades clinicamente significativas novas ou agravadas foram registradas como eventos adversos.

[382] Os sinais vitais incluíram medições de temperatura, frequência de pulso, frequência respiratória e pressão arterial sistólica e diastólica com o paciente sentado.

AVALIAÇÕES DE TUMOR E RESPOSTA

[383] As avaliações de triagem incluíram tomografia computadorizada (TC) (com contraste oral/IV, a menos que contraindicado) ou imagens de ressonância magnética (MRIs) de tórax e abdômen. Uma tomografia computadorizada ou ressonância magnética da pelve foi necessária na triagem e conforme indicação clínica ou de acordo com o padrão local- de- atendimento nas avaliações de resposta subsequentes. As tomografias computadorizadas em espiral do tórax foram obtidas, se possível, mas não eram obrigatórias.

[384] Uma TC (com contraste, se não contra-indicada) ou ressonância magnética da cabeça foi necessária na triagem para avaliar a metástase do SNC em todos os pacientes. Uma ressonância magnética do cérebro foi necessária para confirmar ou refutar o diagnóstico de metástases do SNC na linha de base no caso de uma varredura duvidosa. Pacientes com metástases ativas ou não tratadas do SNC não eram elegíveis para o estudo (consulte Critérios de Exclusão).

[385] Se uma tomografia computadorizada para avaliação do tumor foi realizada em uma tomografia por emissão de pósitrons (PET)/tomografia computadorizada, a aquisição da tomografia foi necessária para ser consistente com os padrões para uma tomografia computadorizada com contraste total.

[386] Exames ósseos e tomografias computadorizadas do pescoço também foram realizados se clinicamente indicado. A critério do investigador, outros métodos de avaliação de doença mensurável de acordo com RECIST v1.1 foram usados.

[387] Era permitido usar avaliações de tumor realizadas como padrão- de- atendimento antes de obter o consentimento informado e dentro de 28 dias do ciclo 1, dia 1, em vez de repetir os testes. A documentação de todos os locais conhecidos da doença na triagem foi necessária e a documentação reavaliada em cada avaliação subsequente do tumor. Os pacientes com história de metástases cerebrais irradiadas na triagem não eram obrigados a se submeter a exames de imagem do cérebro nas avaliações subsequentes do tumor, a menos que os exames fossem clinicamente indicados. O mesmo procedimento radiográfico usado para avaliar os locais da doença na triagem foi usado durante todo o estudo (por exemplo, o mesmo protocolo de contraste para tomografias computadorizadas). A resposta foi avaliada pelo investigador usando RECIST v1.1 (consulte Eisenhauer et al. (2009) New response evaluation criteria in solid tumors: Revised RECIST guideline (versão 1.1). Eur J Cancer. 45: 228-47) e modified RECIST criteria. Os critérios modificados de RECIST foram derivados de RECIST v1.1 (Eisenhauer et al.; Topalian et al.

(2012) N Engl J Med. 366: 2443-54; e Wolchok et al. (2009) Clin Can Res 15: 7412-20) e critérios de resposta imunorrelacionadas (Wolchok et al.; Nishino et al. (2014) J Immunother Can. 2:17; e Nishino et al. (2013) Clin Can Res.

19:3936-43). As avaliações foram realizadas pelo mesmo avaliador, se possível, para garantir a consistência interna entre as visitas. Os resultados foram revisados pelo investigador antes da dosagem no próximo ciclo.

[388] Os pacientes foram submetidos a avaliações de tumor a cada 6 semanas ( 7 dias) por 48 semanas após o Ciclo 1, Dia 1 e, em seguida, a cada 9 semanas ( 7 dias) depois disso, após a conclusão da avaliação do tumor da Semana 48, independentemente dos atrasos no tratamento, até a progressão da doença radiográfica por RECIST v1.1 (perda de benefício clínico para pacientes tratados com atezolizumabe que continuam o tratamento além da progressão da doença de acordo com RECIST v1 1 apenas), retirada do consentimento, morte ou encerramento do estudo pelo Patrocinador, o que ocorrer primeiro.

[389] Pacientes que descontinuaram o tratamento por razões diferentes da progressão da doença radiográfica por RECISTv1.1 (por exemplo, toxicidade, deterioração sintomática) continuaram as avaliações tumorais programadas até a progressão da doença radiográfica por RECIST v1.1 (ou perda do benefício clínico para pacientes tratados com atezolizumabe que continuaram tratamento com atezolizumabe após progressão da doença radiográfica de acordo com RECIST v1.1), retirada do consentimento, morte ou encerramento do estudo pelo Patrocinador, o que ocorrer primeiro.

[390] Os pacientes que iniciaram uma nova terapia anticâncer na ausência de progressão da doença radiográfica por RECIST v1.1 continuaram as avaliações tumorais programadas até a progressão da doença radiográfica por RECIST v1.1 (ou perda do benefício clínico para pacientes tratados com atezolizumabe que continuaram o tratamento com atezolizumabe após progressão da doença radiográfica de acordo com RECIST v1.1), retirada do consentimento, morte ou encerramento do estudo pelo Patrocinador, o que ocorrer primeiro.

[391] As avaliações do tumor para pacientes que foram tratados com atezolizumabe que continuaram a ter benefício clínico, apesar da evidência de progressão radiográfica, foram continuadas de acordo com a programação listada acima.

ANÁLISES EXPLORATÓRIAS DE SOBREVIDA LIVRE DE PROGRESSÃO

[392] Taxa de sobrevida livre de progressão em pontos no tempo de referência: a taxa de SLP, definida como a probabilidade de que um paciente estará vivo sem progressão da doença após a randomização (por exemplo, em 6 meses e em 1 ano), foi estimada com o uso da metodologia Kaplan-Meier para cada braço de tratamento, juntamente com ICs de 95% calculados com o uso da fórmula de Greenwood. Os ICs de 95% para a diferença nas taxas de SLP entre os braços de tratamento foram estimados com o uso do método de aproximação normal, e os erros padrão foram calculados por meio do método de Greenwood.

[393] Terapia Anticâncer não Especificada pelo Protocolo: o impacto de terapia anticâncer não especificada por protocolo em SLP foi avaliada dependendo do número de pacientes que receberam- terapia anticâncer especificada por protocolo antes de um evento de SLP. Se 5% dos pacientes não receberam- terapia do anti-câncer especificada por protocolo- antes de um evento de SLP em qualquer braço de tratamento, uma análise de sensibilidade foi realizada para as comparações entre os braços de tratamento em que os pacientes que receberam- terapia anticâncer especificada por protocolo antes de um evento de SLP ser censurado na última data de avaliação do tumor antes do recebimento de- terapia anticâncer não especificada por protocolo.

[394] Análise de Subgrupo é: avaliar a consistência dos resultados do estudo em subgrupos definidos por dados demográficos (por exemplo, idade, sexo e raça/etnia), características prognósticas basais (por exemplo, status de desempenho ECOG, status de tabagismo e tipo de quimioterapia), a duração de SLP em esses subgrupos foram examinados.

Resumos de SLP, incluindo HRs não estratificados estimados a partir de modelos de riscos proporcionais de Cox e estimativas de Kaplan-Meier de SLP mediana, foram produzidos separadamente para cada nível das variáveis categóricas para as comparações entre os braços de tratamento.

[395] Análise de Sensibilidade: as análises de sensibilidade foram realizadas para avaliar o impacto potencial da falta de avaliações de tumor programadas na análise primária de SLP, conforme determinado pelo investigador com o uso de uma regra de imputação de eventos de SLP. As seguintes duas regras de imputação foram consideradas: (1) Se um paciente perdeu duas ou mais avaliações de tumor programadas imediatamente antes da data do evento de SLP de acordo com RECIST v1.1, o paciente foi censurado na última avaliação do tumor antes da primeira dessas visitas perdidas. (2) Se um paciente perdeu duas ou mais avaliações de tumor programadas imediatamente antes da data do evento de SLP de acordo com RECIST v1.1, o paciente foi contado como tendo progredido na data da primeira dessas avaliações em falta. A regra de imputação foi aplicada a pacientes em ambos os braços de tratamento.

[396] O impacto da perda para -acompanhamento em SG será avaliado dependendo do número de pacientes que perderam o acompanhamento. Se  5% dos pacientes são perdidos para acompanhamento- para SG em qualquer braço de tratamento, uma análise de sensibilidade será realizada para as comparações entre os braços de tratamento em que os pacientes perdidos no acompanhamento serão considerados como tendo morrido na última data em que estavam vivos.

ANÁLISES EXPLORATÓRIAS DE SOBREVIVÊNCIA GERAL

[397] Perda para Acompanhamento: o impacto da perda para acompanhamento- em SG foi avaliado dependendo do número de pacientes que perderam o acompanhamento. E se 5% dos pacientes foram perdidos para acompanhamento- para SG em ambos os braços de tratamento, uma análise de sensibilidade foi realizada para as comparações entre os braços de tratamento em que os pacientes que foram perdidos para acompanhamento foram considerados como tendo morrido na última data em que eles estavam vivos.

[398] Análise de Subgrupo: para avaliar a consistência dos resultados do estudo em subgrupos definidos por dados demográficos (por exemplo, idade, sexo e raça/etnia), características prognósticas basais (por exemplo, status de desempenho ECOG, tabagismo, tipo de quimioterapia, presença de metástases hepáticas no início do estudo), a duração da SG nesses subgrupos foram examinadas. Resumos de sobrevida, incluindo HRs não estratificados estimados a partir de modelos de riscos proporcionais de Cox e estimativas de Kaplan-Meier do tempo médio de sobrevida, foram produzidos separadamente para cada nível das variáveis categóricas para as comparações entre os braços de tratamento.

[399] Taxa de Sobrevida global no Marco de 3 anos: as taxas de SG em 3 anos foram estimadas com o uso do método de Kaplan-Meier para cada grupo de tratamento, juntamente com 95% de ICs calculados com o uso do erro padrão derivado de fórmula de Greenwood. O IC de 95% para a diferença nas taxas de SG entre os dois braços de tratamento foi estimado com o uso do método de aproximação normal.

[400] Análise de Sobrevida global de Marco: para avaliar o efeito da sobrevida a longo prazo e os efeitos clínicos retardados, uma análise de SG de marco foi conduzida (Chen (2015) J Natl Cancer Inst 107: djv156). A SG de era um ponto de extremidade de SG com avaliação transversal em um ponto no tempo pré-especificado. A análise de SG de marco foi realizada com o uso dos mesmos métodos que aqueles especificados para a análise de SG primária.

[401] Terapia Anti-Câncer não Especificada por Protocolo: o impacto de terapia anti-câncer não especificada por protocolo em SG foi avaliada dependendo do número de pacientes que recebem tal terapia. Por exemplo, a duração do início de - terapia anti-câncer não especificada por protocolo até a morte ou data de censura pode ter sido descontada de acordo com uma faixa de possíveis efeitos em SG de - terapia anti-câncer não especificada por protocolo (por exemplo, 10%, 20%, 30%).

[402] Análise Exploratória de Biomarcador: as análises exploratórias de biomarcadores foram realizadas em um esforço para compreender a associação desses marcadores com a resposta do medicamento em estudo, incluindo eficácia e/ou eventos adversos. Os biomarcadores tumorais incluem, sem limitação, PD-L1 e CD8, conforme definido por IHC, qRT-PCR ou outros métodos. Análises farmacodinâmicas adicionais foram conduzidas conforme apropriado.

[403] O Ventana ensaio de imuno-histoquímica (IHC) de anticorpo monoclonal primário de coelho anti-PD-L1 (SP142) foi usado para determinar o status de IHC de ligante 1 (PD-L1) de morte programada-.

[404] Descrição de Dispositivo: o anticorpo monoclonal primário de coelho anti-PD-L1 Ventana (SP142) destina-se ao uso na avaliação imuno-histoquímica semiquantitativa da proteína PD-L1 em tecido de carcinoma pulmonar de células não pequenas embebido em parafina fixado em formalina (NSCLC) manchado em um manchador de lâmina automatizado Ventana BenchMark ULTRA. É indicado como um auxílio na seleção de pacientes com NSCLC com doença localmente avançada ou metastática que podem se beneficiar do tratamento com atezolizumabe.

[405] O anticorpo monoclonal primário de coelho anti- PD-L1 Ventana (SP142) é um produto de anticorpo pré-diluído pronto para uso otimizado para uso com o Kit de Detecção Ventana Medical Systems OptiView DAB IHC e o Kit de Amplificação OptiView nas plataformas automatizadas BenchMark ULTRA da Ventana Medical Systems. Um dispensador de 5- ml de anticorpo monoclonal primário de coelho anti-PD-L1 (SP142) contém aproximadamente 36 g de anticorpo monoclonal de coelho dirigido contra a proteína PD-L1 e contém reagente suficiente para 50 testes. Os reagentes e o procedimento de IHC são otimizados para uso no dispositivo automático de coloração BenchMark ULTRA, utilizando Ventana System Software (VSS).

[406] Sistema de Pontuação: manchamento PD-L1 com anticorpo monoclonal primário de coelho anti-PD-L1 (SP142) em NSCLC pode ser observado em células tumorais e tumorais- infiltrando células imunes com o uso do anticorpo monoclonal primário de coelho anti-PD-L1 Ventana (SP142).

RESULTADOS

[407] Os resultados do estudo são apresentados na Tabela 10 abaixo: TABELA 10: DESCRIÇÃO RESUMIDA DOS RESULTADOS DE EFICÁCIA PRIMÁRIOS INV-SLP IDT BRAÇO A (n=292) BRAÇO B (n=286) Mediana (meses) 7,6 (+2,4 m) 5,2 HR estratificado (95% de CI) 0,596 (0,494, 0,719) Log-rank estratificado p (α = <,0001 0,002) SG Mediana(meses) 18,1 (+ 4,5m) 13,6 HR estratificado (95% de CI) 0,813 (0,644, 1,025)

Log-rank estratificado p (α = 0,0797 0,0406)

[408] A Tabela 10 mostra que o estudo demonstrou uma melhora estatisticamente significativa e clinicamente significativa na sobrevida livre de progressão avaliada pelo investigador (SLP) na população ITT.

Adicionalmente, o estudo demonstrou uma melhora numérica na sobrevida global (SG).

[409] Os pacientes tratados com atezolizumabe + pemextrexed + carboplatina ou cisplatina demonstraram sobrevida livre de progressão estendida em comparação com pacientes tratados com pemetrexede + carboplatina ou cisplatina. Consulte a Figura 2. O SLP de 6 meses de pacientes que receberam atezolizumabe + pemextrexed + carboplatina ou cisplatina foi de 59,14% vs. 40,93% em pacientes que receberam pemetrexede + carboplatina ou cisplatina. O SLP de 12 meses de pacientes que receberam atezolizumabe + pemetrexede + carboplatina ou cisplatina foi de 33,71% vs.

16,97% em pacientes que receberam pemetrexede + carboplatina ou cisplatina. Os pacientes tratados com atezolizumabe + pemextrex + carboplatina ou cisplatina demonstraram sobrevida global melhorada numericamente em comparação com pacientes tratados com pemetrexede + carboplatina ou cisplatina. Consulte a Figura 3 (NE = não avaliado). A SG de 6 meses de pacientes que receberam atezolizumabe + pemextrex + carboplatina ou cisplatina foi de 59,61% vs. 55,39% em pacientes que receberam Placebo + pemextrex + carboplatina ou cisplatina. A SG de 12 meses de pacientes que receberam atezolizumabe + pemextrex + carboplatina ou cisplatina foi de 59,6% vs. 55,4% em pacientes que receberam Placebo + pemextrex + carboplatina ou cisplatina.

[410] Além disso, a taxa de resposta global confirmada (ORR) em pacientes tratados com atezolizumabe + pemextrexed + carboplatina ou cisplatina foi de 47%, enquanto a ORR confirmada em pacientes tratados com pemextrexed + carboplatina ou cisplatina foi de 32% (CR: 1,7% no Braço A vs.

0,7 no Braço B; CR/PR: 46,9% no Braço A vs. 32,2% no Braço B). Consulte a Figura 4. (CR = resposta completa; CR/PR = resposta completa/resposta parcial; SD = doença estável; PD = doença progressiva). A ORR não confirmada também melhorou no Braço A. Conforme mostrado na Tabela 11 abaixo, a duração média confirmada da resposta (DOR) em pacientes que receberam atezolizumabe + pemetrexede + carboplatina ou cisplatina (isto é, Braço A) foi de 10,1 meses, enquanto a mediana confirmada DOR em pacientes recebendo pemetrexede + carboplatina ou cisplatina (isto é, Braço B) foi de 7,2 meses. DOR foi avaliada de acordo com os critérios RECIST v1.1.

DOR não confirmada também melhorou no Braço A. 42% dos pacientes no Braço A demonstraram resposta contínua, em comparação com 30% dos pacientes no Braço B.

TABELA 11: DURAÇÃO CONFIRMADA MEDIANA DA RESPOSTA NOS BRAÇOS A E B DO

TRATAMENTO DOR Braços

BRAÇO B BRAÇO A DOR Mediana (95% de CI), mo 7,2 (5,7, 9,0) 10,1 (7,2, 13,3) no de resposta contínua, n (%) 28 (30,4%) 58 (42,3%)

[411] O benefício SLP foi observado em todos os subgrupos analisados. Consulte a Figura 5A. Melhoria de SG numérica também foi observada. Consulte a Figura 6. Resultados consistentes foram mostrados em todos os subgrupos clínicos.

[412] O perfil de segurança de atezolizumabe + pemetrexede + carboplatina ou cisplatina foi consistente com os riscos conhecidos dos componentes individuais do tratamento. Nenhum novo sinal de segurança foi identificado. Os principais parâmetros de segurança são consistentes com os achados de outros estudos de NSCLC de primeira linha envolvendo atezolizumabe em combinação com quimioterapia à base de platina.

[413] Este estudo demonstrou que o tratamento inicial (de primeira linha) com a combinação de atezolizumabe + pemetrexede + carboplatina ou cisplatina reduziu o risco de agravamento da doença ou morte (SLP) em comparação com a quimioterapia (isto é, pemetrexede + carboplatina ou cisplatina) isoladamente. A melhora numérica na sobrevida global também foi observada em pacientes tratados com atezolizumabe + pemetrexede + carboplatina ou cisplatina em comparação com pacientes tratados com quimioterapia (isto é, pemetrexede + carboplatina ou cisplatina) isoladamente.

EXEMPLO 2: EFICÁCIA DO ATEZOLIZUMABE EM COMBINAÇÃO COM CARBOPLATINA+ PEMETREXEDE OU CISPLATINA + PEMETREXEDE COMO TRATAMENTO DE PRIMEIRA LINHA EM SUBGRUPOS-CHAVE DE PACIENTES COM CÂNCER DE PULMÃO DE CÉLULAS NÃO PEQUENAS NÃO ESCAMOSO DE ESTÁGIO IV (NSCLC)

[414] As análises de eficácia exploratórias examinando SLP e SG provisória em subgrupos de pacientes clinicamente relevantes (por exemplo, raça, idade, história de tabagismo e metástase hepática na linha de base) foram realizadas com base nos resultados descritos no Exemplo 1.

[415] 578 pacientes foram inscritos. O acompanhamento médio foi de 14,8 meses. As características da linha de base foram equilibradas principalmente entre os braços de tratamento. Consulte a Tabela 12 e a Figura 5B para SLP e dados provisórios de SG em subgrupos principais.

TABELA 12: DADOS DE SLP E SG PROVISÓRIO EM SUBGRUPOS PRINCIPAIS

POPULAÇÃO APP PP SLP Mediana SLP Mediana HR (95% de CI); n n (95% de CI), mo (95% de CI), mo P valor 0,596 (0,494, 7,6 5,2 IDT 292 286 0,719); (6,6, 8,5) (4,3, 5,6) P < 0,0001a Não asiático 221 6,9 221 5,0 0,65 (0,53, 0,81)

Asiático 71 10,2 65 5,3 0,42 (0,028, 0,63) <65 anos 153 6,9 167 4,4 0,63 (0,49, 0,80) ≥ 65 anos 139 8,4 119 5,6 0,55 (0,42, 0,73) Não fumantes 37 8,6 30 5,5 0,49 (0,28, 0,87) Ex-fumante/fumante 255 7,5 256 5,1 0,61 (0,50, 0,74)

SEM METÁSTASES DO 255 8,4 250 5,5 0,56 (0,46, 0,69)

FÍGADO Fígado 37 4,4 36 4,0 0,77 (0,47, 1,25) metástase

POPULAÇÃO APP PP SG Mediana SG Mediana HR (95% de CI); n n (95% de CI), mo (95% de CI), mo P valor 0,813 (0,644, 18,1 13,6 IDT 292 286 1,025) (13,0, NE) (11,4, 15,5) P = 0,0797a Não asiático 221 13,0 221 11,0 0,82 (0,64, 1,06) Asiático 71 NE 65 NE 0,68 (0,37, 1,24) <65 anos 153 18,8 167 14,2 0,89 (0,62, 1,21) ≥ 65 anos 139 18,1 119 12,8 0,71 (0,50, 1,01) Não fumantes 37 18,1 30 13,3 0,65 (0,32, 1,30) 0,83 (0,65, 1,06) Ex-fumante/fumante 255 18,8 256 13,6

SEM METÁSTASES DO 255 19,9 250 14,2 0,76 (0,59, 0,98)

FÍGADO

METÁSTASES DO 37 10,1 36 6,9 0,99 (0,57, 1,70)

FÍGADO a Estratificado.

[416] A adição de Atezolizumabe à carboplatina ou cisplatina + pemetrexede resultou em melhora numérica na SLP e SG na maioria dos principais subgrupos clínicos. O benefício de sobrevivência apareceu mais pronunciado em pacientes asiáticos, pacientes mais velhos e não fumantes.

EXEMPLO 3: ANÁLISE EXPLORATÓRIA: SOBREVIVÊNCIA LIVRE DE PROGRESSÃO PELO STATUS DE PD-L1 EM PACIENTES AVALIÁVEIS POR BIOMARCADORES DO EXEMPLO 1

[417] Níveis de expressão de PD-L1 em células imunes (IC) - infiltrantes de tumor em células tumorais (TC) em amostras de tecido de linha de base obtidas de pacientes avaliáveis por biomarcador (isto é, do Exemplo 1). As células tumorais foram classificadas como TC0, TC1, TC2 ou TC3, e as células imunes que se infiltram no tumor foram classificadas como IC0, IC1, IC2 e IC3.

[418] A taxa de resposta geral (ORR) e a taxa de sobrevida livre de progressão (SLP) para pacientes classificados como TC3 ou IC3 (isto é, “PD-L1 alto”); TC1, TC2, IC1 ou IC2 (ou “PD-L1 baixo”); e TC0 ou IC0 (isto é, “PD-L1 negativo”) foram analisadas para cada braço de tratamento. Os resultados dessas análises são mostrados nas Figuras 7A, 7B e 7C.

[419] Como mostrado na Figura 7A, pacientes com “PD-L1 alto” que receberam atezolizumabe + pemextrex + carboplatina ou cisplatina demonstraram uma ORR de 72%. Em contraste, a ORR de pacientes “PD-L1 alto” que foram tratados com pemextrex + carboplatina foi de 55%. A mediana de SLP de pacientes com “PD-L1 alto” que receberam atezolizumabe + pemextrex + carboplatina ou cisplatina foi de 10,8 meses, enquanto a mediana de SLP de pacientes “PD-L1 alto” no braço de controle foi de 6,5 meses. A SLP de 12 meses entre os pacientes “PD-L1 alto” no braço de tratamento foi de 46%, enquanto a SLP de 12 meses entre os pacientes “PD-L1 alto” no braço de controle foi de 25%.

[420] Não houve diferenças significativas na ORR ou SLP mediana em pacientes “PD-L1 Baixo” no braço de tratamento em comparação com o braço de controle. A SLP de 12 meses entre os pacientes “PD-L1 Baixo” no braço de tratamento foi de 27%, e a SLP de 12 meses entre os pacientes “PD-L1 Baixo” no braço de controle foi de 20%. Consulte a Figura 7B.

[421] A Figura 7C mostra que os pacientes “PD-L1 negativos” que receberam atezolizumabe + pemextrex + carboplatina ou cisplatina demonstraram uma ORR de 44%. Em contrapartida, a ORR de pacientes “PD- L1 negativo” que foram tratados com pemextrex + carboplatina foi de 27%. A mediana de SLP de pacientes com “PD-L1 negativo” que receberam atezolizumabe + pemextrex + carboplatina ou cisplatina foi de 8,5 meses, enquanto a mediana de SLP de pacientes “PD-L1 negativo” no braço de controle foi de 4,9 meses. A SLP de 12 meses entre os pacientes “PD-L1 negativo” no braço de tratamento foi de 35%, enquanto a SLP de 12 meses entre os pacientes “PD-L1 negativo” no braço de controle foi de 8%. A duração mediana da resposta (DOR) entre os pacientes “PD-L1 Negativo” no braço de tratamento foi de 10,1 meses, enquanto a duração mediana da resposta (DOR) entre os pacientes “PD-L1 Negativo” no braço de controle foi de 4,2 meses.

Embora a invenção supracitada foi descrita em alguns detalhes a título de ilustração e exemplo, para fins de clareza de entendimento, as descrições e exemplos não devem ser interpretados como limitantes ao escopo da invenção.

As divulgações de toda a literatura científica e de patente citadas no presente documento estão expressamente incorporadas em sua totalidade por referência.

Claims (85)

REIVINDICAÇÕES

1. MÉTODO PARA TRATAR UM INDIVÍDUO COM CÂNCER DE PULMÃO, caracterizado por compreender administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-PD-L1, um antimetabólito e um agente de platina, em que o tratamento estende a sobrevida livre de progressão (SLP) do indivíduo.

2. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo tratamento estender a sobrevida global (SG) do indivíduo.

3. MÉTODO PARA TRATAR UM INDIVÍDUO COM CÂNCER DE PULMÃO, caracterizado por compreender administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-PD-L1, um antimetabólito e um agente de platina, em que o tratamento estende a sobrevida global (SG) do indivíduo.

4. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo tratamento estender a SLP do indivíduo em pelo menos cerca de 6 meses.

5. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 3, caracterizado pelo tratamento estender a SG do indivíduo por pelo menos cerca de 15 meses.

6. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo anticorpo anti-PD-L1 compreender: (a) uma região variável de cadeia pesada (VH) que compreende uma HVR-H1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de GFTFSDSWIH (SEQ ID NO: 1), uma HVR-2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de AWISPYGGSTYYADSVKG (SEQ ID NO: 2), e HVR-3 compreendendo um aminoácido RHWPGGFDY (SEQ ID NO: 3), e (b) uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende uma HVR-L1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 4), uma HVR-L2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SASFLYS (SEQ ID NO: 5), e uma HVR-L3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de QQYLYHPAT (SEQ ID NO: 6).

7. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo anticorpo anti-PD-L1 compreender uma região variável de cadeia pesada (VH) compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 7 e uma região variável de cadeia leve (VL) compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 8.

8. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo anticorpo anti-PD-L1 ser atezolizumabe.

9. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo antimetabólito ser pemetrexede, 5- fluorouracil, 6-mercaptopurina, capecitabina, citarabina, floxuridina, fludarabina, hidroxicarbamida ou metotrexato.

10. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo antimetabólito ser pemetrexede.

11. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo agente de platina ser carboplatina.

12. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo agente de platina ser cisplatina.

13. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo anticorpo anti-PD-L1 ser administrado a uma dose de 1200 mg, em que o agente de platina é carboplatina e é administrado a uma dose suficiente para atingir ASC = 6 mg/ml/min, e em que o antimetabólito é pemetrexede e é administrado a uma dose de 500 mg/m 2.

14. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10 e 12, caracterizado pelo anticorpo anti-PD-L1 ser administrado a uma dose de 1200 mg, em que o agente de platina é cisplatina e é administrado a uma dose de 75 mg/m2, e em que o antimetabólito é pemetrexede e é administrado a uma dose de 500 mg/m 2.

15. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11 e 13, caracterizado pelo anticorpo anti-PD-L1, o antimetabólito e o agente de platina serem administrados em quatro ciclos de 21 dias, e em que o anticorpo anti-PD-L1 é atezolizumabe e administrado a uma dose de 1200 mg no Dia 1, em que o antimetabólito é pemetrexede e é administrado a uma dose de 500 mg/m 2 Dia 1, e em que o agente de platina é carboplatina e é administrado a uma dose suficiente para atingir ASC = 6 mg/ml/min no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para os Ciclos 1-4.

16. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, 12 e 14, caracterizado pelo anticorpo anti-PD-L1, o antimetabólito e o agente de platina serem administrados em quatro ciclos de 21 dias, e em que o anticorpo anti-PD-L1 é atezolizumabe e administrado a uma dose de 1200 mg no Dia 1, em que o antimetabólito é pemetrexede e é administrado a uma dose de 500 mg/m 2 Dia 1, e em que o agente de platina é cisplatina e é administrado a uma dose de 75 mg/m 2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para os Ciclos 1-4.

17. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 15 a 16, caracterizado pelo anticorpo anti-PD-L1, o antimetabólito e o agente de platina serem administrados sequencialmente no Dia 1 dos Ciclos 1-4.

18. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo anticorpo anti-PD-L1 ser administrado antes do antimetabólito, e em que o antimetabólito é administrado antes do agente de platina no Dia 1 dos Ciclos 1-4.

19. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 15 a 18, caracterizado pelo anticorpo anti-PD-L1 e o antimetabólito serem ainda administrados após o Ciclo 4, em que o anticorpo anti-PD-L1 é atezolizumabe e é administrado a uma dose de 1200 mg no Dia 1, e em que o antimetabólito é pemetrexede e é administrado a uma dose de 500 mg/m2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 4.

20. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo anticorpo anti-PD-L1 e o antimetabólito serem administrados sequencialmente no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo

4.

21. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo anticorpo anti-PD-L1 ser administrado antes do antimetabólito no Dia 1 após o Ciclo 4.

22. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11 e 13, caracterizado pelo anticorpo anti-PD-L1, o antimetabólito e o agente de platina serem administrados em quatro ciclos de 21 dias, e em que o anticorpo anti-PD-L1 é atezolizumabe e administrado a uma dose de 1200 mg no Dia 1, em que o antimetabólito é pemetrexede e é administrado a uma dose de 500 mg/m 2 Dia 1, e em que o agente de platina é carboplatina e é administrado a uma dose suficiente para atingir ASC = 6 mg/ml/min no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para os Ciclos 1-6.

23. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, 12 e 14, caracterizado pelo anticorpo anti-PD-L1, o antimetabólito e o agente de platina serem administrados em quatro ciclos de 21 dias, e em que o anticorpo anti-PD-L1 é atezolizumabe e administrado a uma dose de 1200 mg no Dia 1, em que o antimetabólito é pemetrexede e é administrado a uma dose de 500 mg/m2 Dia 1, e em que o agente de platina é cisplatina e é administrado a uma dose de 75 mg/m 2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para os Ciclos 1-6.

24. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 22 a 23, caracterizado pelo anticorpo anti-PD-L1, o antimetabólito e o agente de platina serem administrados sequencialmente no Dia 1 dos Ciclos 1-6.

25. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 24, caracterizado pelo anticorpo anti-PD-L1 ser administrado antes do antimetabólito, e em que o antimetabólito é administrado antes do agente de platina no Dia 1 dos Ciclos 1-6.

26. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 22 a 25, caracterizado pelo anticorpo anti-PD-L1 e o antimetabólito serem ainda administrados após o Ciclo 6, em que o anticorpo anti-PD-L1 é atezolizumabe e é administrado a uma dose de 1200 mg no Dia 1, e em que o antimetabólito é pemetrexede e é administrado a uma dose de 500 mg/m2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 6.

27. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo anticorpo anti-PD-L1 e o antimetabólito serem administrados sequencialmente no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo

6.

28. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pelo anticorpo anti-PD-L1 ser administrado antes do antimetabólito no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 6.

29. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 28, caracterizado pelo anticorpo anti-PD-L1, o agente de platina e o inibidor de antimetabólito serem administrados por via intravenosa.

30. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo câncer de pulmão ser câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC).

31. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 30,

caracterizado pelo NSCLC ser NSCLC não escamoso de Estágio IV.

32. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 31, caracterizado pelo indivíduo ser sem exposição prévia ao tratamento para NSCLC não escamoso de Estágio IV.

33. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 31, caracterizado pelo indivíduo ser sem exposição prévia para quimioterapia para NSCLC não escamoso de Estágio IV.

34. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 33, caracterizado pelo indivíduo ser asiático.

35. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 34, caracterizado pelo indivíduo ter pelo menos 65 anos de idade.

36. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 35, caracterizado pelo indivíduo nunca ter sido um fumante.

37. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 36, caracterizado pelo indivíduo ter PD-L1 alto.

38. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 36, caracterizado pelo indivíduo ser PD-L1 negativo.

39. MÉTODO PARA TRATAR UM INDIVÍDUO COM CÂNCER DE PULMÃO não escamoso de células não pequenas em estágio IV (NSCLC), caracterizado por compreender administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de atezolizumabe, pemetrexede e carboplatina, em que o atezolizumabe é administrado a uma dose de 1200 mg, o pemetrexede é administrado a uma dose de 500 mg/m 2, e a carboplatina é administrada a uma dose suficiente para atingir ASC = 6 mg/ml/min, em que o tratamento estende a sobrevida livre de progressão (SLP).

40. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo tratamento estender a sobrevida global (SG) do indivíduo.

41. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 39 a 40, caracterizado pelo atezolizumabe, pemetrexede e carboplatina serem administrados em quatro ciclos de 21 dias, e atezolizumabe e pemetrexede serem administrados adicionalmente em ciclos de 21 dias após o Ciclo 4; em que o atezolizumabe é administrado a uma dose de 1200 mg no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias dos Ciclos 1-4, o pemetrexede é administrado a uma dose de 500 mg/m2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para os Ciclos 1-4, e a carboplatina é administrada a uma dose suficiente para atingir ASC = 6 mg/ml/min no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias dos Ciclos 1-4, e em que o atezolizumabe é ainda administrado a uma dose de 1200 mg no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 4 e o pemetrexede é ainda administrado a uma dose de 500 mg/m 2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 4.

42. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 41, caracterizado por atezolizumabe, pemetrexede e carboplatina serem administrados sequencialmente no Dia 1 dos Ciclos 1-4.

43. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 42, caracterizado pelo atezolizumabe ser administrado antes do pemetrexede, e em que o pemetrexede é administrado antes da carboplatina no Dia 1 dos Ciclos 1-4.

44. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 41 a 43, caracterizado por atezolizumabe e pemetrexede serem administrados sequencialmente no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 4.

45. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo atezolizumabe ser administrado antes do pemetrexede no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 4.

46. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 39 a 40, caracterizado por atezolizumabe, pemetrexede e carboplatina serem administrados em seis ciclos de 21 dias, e atezolizumabe e pemetrexede serem administrados adicionalmente em ciclos de 21 dias após o Ciclo 6; em que o atezolizumabe é administrado a uma dose de 1200 mg no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias dos Ciclos 1-6, o pemetrexede é administrado a uma dose de 500 mg/m2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para os Ciclos 1-6, e a carboplatina é administrada a uma dose suficiente para atingir ASC = 6 mg/ml/min no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias dos Ciclos 1-6, e em que o atezolizumabe é ainda administrado a uma dose de 1200 mg no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 6 e o pemetrexede é ainda administrado a uma dose de 500 mg/m2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 6.

47. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 46, caracterizado por atezolizumabe, pemetrexede e carboplatina serem administrados sequencialmente no Dia 1 dos Ciclos 1-6.

48. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 47, caracterizado pelo atezolizumabe ser administrado antes do pemetrexede, e em que o pemetrexede é administrado antes da carboplatina no Dia 1 dos Ciclos 1-6.

49. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 46 a 48, caracterizado por atezolizumabe e pemetrexede serem administrados sequencialmente no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 6.

50. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 49, caracterizado pelo atezolizumabe ser administrado antes do pemetrexede no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 6.

51. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 39 a 50, caracterizado pelo atezolizumabe, pelo pemetrexede e pela carboplatina serem administrados por via intravenosa.

52. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 39 a 41, caracterizado pelo tratamento estender a SLP do indivíduo em pelo menos cerca de 6 meses.

53. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 39 a 52, caracterizado pelo tratamento estender a SG do indivíduo em pelo menos cerca de 15 meses.

54. MÉTODO PARA TRATAR UM INDIVÍDUO COM CÂNCER DE PULMÃO não escamoso de células não pequenas em estágio IV (NSCLC), caracterizado por compreender administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de atezolizumabe, pemetrexede e cisplatina, em que o atezolizumabe é administrado a uma dose de 1200 mg, o pemetrexede é administrado a uma dose de 500 mg/m 2, e a cisplatina é administrada a uma dose de 75 mg/m2, em que o tratamento estende a sobrevida livre de progressão (SLP) do indivíduo.

55. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 54, caracterizado pelo tratamento estender a sobrevida global (SG) do indivíduo.

56. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 54 a 55, caracterizado por atezolizumabe, pemetrexede e cisplatina serem administrados em quatro ciclos de 21 dias, e atezolizumabe e pemetrexede serem administrados adicionalmente em ciclos de 21 dias após o Ciclo 4; em que o atezolizumabe é administrado a uma dose de 1200 mg no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias dos Ciclos 1-4, o pemetrexede é administrado a uma dose de 500 mg/m2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para os Ciclos 1-4, e a cisplatina é administrada a uma dose de 75 mg/m 2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias dos Ciclos 1-4, e em que o atezolizumabe é ainda administrado a uma dose de 1200 mg no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 4 e o pemetrexede é ainda administrado a uma dose de 500 mg/m 2 no

Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 4.

57. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 56, caracterizado por atezolizumabe, pemetrexede e cisplatina serem administrados sequencialmente no Dia 1 dos Ciclos 1-4.

58. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pelo atezolizumabe ser administrado antes do pemetrexede e em que o pemetrexede é administrado antes da cisplatina no Dia 1 dos Ciclos 1-4.

59. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 56 a 58, caracterizado por atezolizumabe e pemetrexede serem administrados sequencialmente no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 4.

60. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 59, caracterizado pelo atezolizumabe ser administrado antes do pemetrexede no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 4.

61. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 54 a 55, caracterizado por atezolizumabe, pemetrexede e cisplatina serem administrados em seis ciclos de 21 dias, e atezolizumabe e pemetrexede serem administrados adicionalmente em ciclos de 21 dias após o Ciclo 6; em que o atezolizumabe é administrado a uma dose de 1200 mg no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias dos Ciclos 1-6, o pemetrexede é administrado a uma dose de 500 mg/m2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para os Ciclos 1-6, e a cisplatina é administrada a uma dose de 75 mg/m 2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias dos Ciclos 1-6, e em que o atezolizumabe é ainda administrado a uma dose de 1200 mg no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 6 e o pemetrexede é ainda administrado a uma dose de 500 mg/m 2 no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 6.

62. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 61, caracterizado por atezolizumabe, pemetrexede e cisplatina serem administrados sequencialmente no Dia 1 dos Ciclos 1-6.

63. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 62, caracterizado pelo atezolizumabe ser administrado antes do pemetrexede e em que o pemetrexede é administrado antes da cisplatina no Dia 1 dos Ciclos 1-6.

64. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 61 a 63, caracterizado por atezolizumabe e pemetrexede serem administrados sequencialmente no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 6.

65. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 64, caracterizado pelo atezolizumabe ser administrado antes do pemetrexede no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias para cada ciclo após o Ciclo 6.

66. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 54 a 65, caracterizado pelo atezolizumabe, pelo pemetrexede e pela cisplatina serem administrados por via intravenosa.

67. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 54 a 66, caracterizado pelo tratamento estender a SLP do indivíduo em pelo menos cerca de 6 meses.

68. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 54 a 67, caracterizado pelo tratamento estender a SG do indivíduo em pelo menos cerca de 15 meses.

69. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 39 a 68, caracterizado pelo indivíduo ser sem exposição prévia ao tratamento para NSCLC não escamoso de Estágio IV.

70. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 39 a 69, caracterizado pelo indivíduo ser sem exposição prévia para quimioterapia para NSCLC não escamoso de Estágio IV.

71. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 39 a 70, caracterizado pelo indivíduo ser asiático.

72. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 39 a 71, caracterizado pelo indivíduo ter pelo menos 65 anos de idade.

73. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 39 a 72, caracterizado pelo indivíduo nunca ter sido um fumante.

74. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 39 a 73, caracterizado pelo indivíduo ter PD-L1 alto.

75. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 39 a 74, caracterizado pelo indivíduo ser PD-L1 negativo.

76. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 75, caracterizado pelo indivíduo ser humano.

77. KIT, caracterizado por compreender um anticorpo anti- PD-L1 para uso em combinação com um antimetabólito e agente de platina para tratar um indivíduo com câncer de pulmão, de acordo com um método, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 38 e 76.

78. KIT, caracterizado por compreender atezolizumabe para uso em combinação com pemetrexede e carboplatina para tratar um indivíduo com câncer de pulmão, de acordo com um método, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 39 a 53 e 69 a 76.

79. KIT, caracterizado por compreender atezolizumabe para uso em combinação com pemetrexede e cisplatina para o tratamento de um indivíduo com câncer de pulmão, de acordo com um método, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 54 a 76.

80. ANTICORPO ANTI-PD-L1, caracterizado por ser para uso em um método para tratar câncer de pulmão em um indivíduo, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-PD-L1, um antimetabólito e um agente de platina, em que o tratamento estende a sobrevida livre de progressão (SLP) e/ou sobrevida global (SG) do indivíduo.

81. ANTICORPO, de acordo com a reivindicação 80, caracterizado por ser para uso em um método, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 38 e 76.

82. COMPOSIÇÃO, caracterizada por compreender atezolizumabe para uso em um método para tratar câncer de pulmão não escamoso de células não pequenas em Estágio IV (NSCLC), o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de atezolizumabe, pemetrexede e carboplatina, em que o atezolizumabe é administrado a uma dose de 1200 mg, o pemetrexede é administrado a uma dose de 500 mg/m2, e a carboplatina é administrada a uma dose suficiente para atingir ASC = 6 mg/ml/min, e em que o tratamento estende a sobrevida livre de progressão (SLP) e/ou sobrevida global (SG) do indivíduo.

83. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 82, caracterizada por ser para uso em um método, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 39 a 53 e 69 a 76.

84. COMPOSIÇÃO, caracterizada por compreender atezolizumabe para uso em um método para tratar câncer de pulmão não escamoso de células não pequenas em Estágio IV (NSCLC), o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de atezolizumabe, pemetrexede e cisplatina, em que o atezolizumabe é administrado a uma dose de 1200 mg, o pemetrexede é administrado a uma dose de 500 mg/m2, e a cisplatina é administrada a uma dose de 75 mg/m 2, e em que o tratamento estende a sobrevida livre de progressão (SLP) e/ou sobrevida global (SG) do indivíduo.

85. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 84, caracterizada por ser para uso em um método, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 54 a 76.

FIGURA 1 Petição 870210004763, de 14/01/2021, pág. 376/385 Indução Manutenção

BRAÇO A Atezolizumabe + Atezolizumabe + Resultados Primários Carboplatina ou Cisplatina + Pemetrexede · SLP (investigador) Pemetrexede · SG (1:1) 2º Resultados Marcador Aberto · ORR, DOR, Não Escamoso BRAÇO B · SG-1ano-2anos · QOL 1/8 Estágio V NSCLC Carboplatina ou Cisplatina + Pemetrexede · Segurança EGFRwt/ALKneg Pemetrexede 4 ou 6 ciclos Critérios de inclusão chave Resultados Co-Primários Resultados Secundários Fatores de Estratificação • ECOG PS 0-1 • SLP avaliada pelo investigador • ORR, DOR, TTD, TIR avaliados • Sexo • Nenhum tratamento prévio para o • SG pelo investigador • Condição de fumante estágio – SG • SLP avaliada por IRF • PS DE ECOG • Ⅳ NSCLC não escamoso • Segurança • Tipo de quimioterapia • Intervalo livre de tratamento de 6+ meses desde a última dose de quimio / RT • Sem necessidade de tecido

FIGURA 2 Gráfico de Kaplan-Meier de Sobrevivência Livre de Progressão por Investigador (RECISTv1.1) com Análise Estratificada Pacientes com Intenção de Tratar Petição 870210004763, de 14/01/2021, pág. 377/385 Protocolo: GO29438 Acompanhamento mínimo, 11,7 meses Acompanhamento médio, 14,9 meses

BRAÇO A 2/8 PP(N=286) APP(N=292) Censurado BRAÇO B Nº de pacientes em risco Probabilidade de Sobrevida Livre de Progressão Tempo(meses) BRAÇO B BRAÇO A Marco BRAÇO B BRAÇO A Mediana(meses) 6 meses HR estratificado (95% de CI) 12 meses Valor-p Log-rank estratificado

FIGURA 3 Gráfico Kaplan-Meier de Sobrevida Global com Análise Estratificada Pacientes com Intenção de Tratar: Protocolo: GO29438 Petição 870210004763, de 14/01/2021, pág. 378/385 Acompanhamento mínimo, 11,7 meses Acompanhamento médio, 14,9 meses

BRAÇO A

BRAÇO B Probabilidade de Sobrevivência 3/8 PP(N=286) APP(N=292) Censurado Nº de pacientes em risco Tempo(meses)

BRAÇO B BRAÇO A

BRAÇO B BRAÇO A Marco Mediana(meses) 12 meses HR estratificado (95% de CI) 24 meses Valor-p Log-rank estratificado

BRAÇO B

BRAÇO A FIGURA 4

FIGURA 5A

BRAÇO A BRAÇO B BRAÇO B BRAÇO A melhor melhor

1. PP 2. APP

2. APP 1. PP Mediana Índice de melhor melhor Risco da linha de base Total n Eventos Mediana n Eventos 95% de Cl Fatores n (meses) (meses) Perigo de Wald Petição 870210004763, de 14/01/2021, pág. 380/385 Todos os pacientes

IDADE < 65 ≥ 65

SEXO

F

M

RAÇA

NATIVO AMERICANO OU

NATIVO DO ALASKA

ASIÁTICO

AFRO AMERICANO OU 5/8

NEGRO

DESCONHECIDA

BRANCO

BECOG 0 1 TOBHX1 ATUAL ou EX-FUMANTE

NUNCA

MFÍGADO

N

Y

IINDCYCL 4C 6C STRATM5

CARBOPLATINA

CISPLATINA

FIGURA 5B

Petição 870210004763, de 14/01/2021, pág. 381/385 HR (95% de CI)a SLP mediana, meses

Subgrupo Feminino Masculino < 65 y ≥ 65 y Brancob Asiático ECOG PS 0b ECOG PS 1 Carboplatina recebida 6/8

Cisplatina recebida 4 ciclos pretendidos 6 ciclos pretendidos Fumante atual ou ex-fumante Nunca fumou Metástases do fígado Sem metástases do fígado

População ITT a BRAÇO A um HR Estratificado para ITT; não estratificado para todos BRAÇO B os outros subgrupos.

Índice de Perigoaa b Pacientes com outra raça/raça desconhecida (n = 46) e ECOG PS de linha de base desconhecida (n = 2) não Favorece APP Favorece PP incluídos.

BRAÇO A BRAÇO B Corte de dados: 22 de maio de 2018. melhor melhor

FIGURA 6

BRAÇO A BRAÇO B BRAÇO B BRAÇO A melhor melhor

1. PP 2. APP

2. APP 1. PP Risco da linha de base Total n Eventos Mediana Mediana Índice de 95% de Cl melhor melhor n Eventos Fatores n (meses) (meses) Perigo de Wald Petição 870210004763, de 14/01/2021, pág. 382/385 Todos os pacientes

IDADE < 65 ≥ 65

SEXO

F

M

RAÇA

NATIVO AMERICANO OU

NATIVO DO ALASKA

ASIÁTICO

AFRO AMERICANO OU

NEGRO 7/8

DESCONHECIDA

BRANCO

BECOG 0 1 TOBHX1 ATUAL ou EX-FUMANTE

NUNCA

MFÍGADO

N

Y

IINDCYCL 4C 6C STRATM5

CARBOPLATINA

CISPLATINA

FIGURA 7A FIGURA 7B FIGURA 7C Petição 870210004763, de 14/01/2021, pág. 383/385 PD-L1 Alto PD-L1 Baixo PD-L1 Negativo TC3 ou IC3 TC1/2 ou IC1/2 TCO e IC0

BRAÇO A

BRAÇO A

BRAÇO A

BRAÇO B

BRAÇO B BRAÇO B 8/8 DOR mediano, meses SLP de 12 meses SLP mediano, meses HR global 0,57 (0,45, 0,73) em pacientes avaliáveis por biomarcador (60% de ITT). HR não estratificado. Corte de dados: 22 de maio de 2018.

APP = Braço A; PP = Braço B