BR112015015116B1 - composição, e, forma de dosagem - Google Patents

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Abstract

EXTRATO DE FRUTA SOLÚVEL EM ÁGUA, COMPOSIÇÃO, E, FORMA DE DOSAGEM A presente invenção se refere ao uso de um extrato de fruta e opcionalmente outros nutrientes específicos para prevenir, reduzir ou minimizar a inflamação sistêmica induzida por exercício e/ou para promoção de recuperação de exercício intenso. A invenção também diz respeito a composições compreendendo tais extratos de fruta.

Description

[001] A presente invenção se refere a uma composição contendo um extrato de fruta ou combinações de extratos de fruta e opcionalmente outros nutrientes específicos que podem ser usados para prevenir inflamação sistêmica induzida por exercício e promover recuperação de exercício intenso.
[002] A manutenção de qualquer regime de exercício requer tanto comprometimento psicológico quanto capacidade física.
[003] A extensão da capacidade física é amplamente determinada (na ausência de lesão prolongada) pela resiliência do corpo ao estresse colocado pelo regime de exercício, isto é, a velocidade de recuperação dos efeitos destes estresses.
[004] A recuperação de exercício envolve muitos processos físicos. Estes incluem o reparo do tecido muscular danificado; reabastecimento de depósitos de glicogênio no músculo; remoção de subprodutos de metabolismo que se acumulam no músculo ou outros tecidos durante o exercício; e resposta e sub-regulação da inflamação que surge durante o exercício.
[005] Alguma inflamação induzida por exercício é necessária para completa recuperação. Por exemplo, sinalização inflamatória localizada nos grupos de músculo utilizada durante o exercício ajuda a recrutar leucócitos para os sítios do dano muscular e assim ajuda no processo de cicatrização.
[006] Entretanto, alguns tipos de exercício podem induzir inflamação sistêmica, que age não como um impulso para cicatrização, mas como uma carga inflamatória prejudicial, do corpo todo que pode, especialmente se prolongada durante sessões de exercício repetidas, reduzem a capacidade do corpo de recuperar e colocar alguns sistemas biológicos em estresse desnecessário e potencialmente perigoso.
[007] Qualquer modalidade de exercício pode disparar esta inflamação sistêmica se a intensidade do exercício for suficiente. Exercício intenso, pelo qual entende-se qualquer exercício conduzido em uma intensidade que corresponde a mais que aproximadamente 60 % VO2max, é acompanhado muito rapidamente pela ativação do sistema hemostático. O sistema hemostático compreende plaquetas e fatores de coagulação e tanto plaquetas quanto fatores de coagulação são ativados por intensidade de exercício maiores que 60 % de VO2max. Sua ativação resulta na geração de trombina, liberação de micropartículas circulantes de pro coagulante e pro inflamatórias, ativação de leucócitos circulantes, ativação do endotélio vascular, redução no óxido nítrico disponível e vasodilatação associada e um aumento nos marcadores inflamatórios circulantes, tal como IL-6.
[008] Altos níveis de IL-6 circulante são ligados com dor muscular pós-exercício mais intenso e recuperação mais lenta da sessão de exercício anterior.
[009] Na luz da invenção o inventor percebeu que agentes capazes de reduzir geração induzida por exercício de IL-6 e marcadores inflamatórios associados são de uso potencial na promoção da recuperação de exercício. Entretanto, estabeleceu-se que nem todos os agentes que suprimem o sistema hemostático afetam a ativação de plaquetas induzida por exercício, coagulação e geração de marcador inflamatório. Existem muitos agentes antiagregação plaquetária conhecidos que agem em diferentes estágios de produção e ação de plaquetas, por exemplo, aspirina (ácido acetilsalicílico) que é o mais amplamente usado e estudado. Entretanto, tais medicamentos antiplaquetários não suprimem a ativação induzida por exercício do sistema hemostático. Isto foi mostrado em pacientes que fazem uso de terapia antiplaquetária a longo prazo e é a razão para a proibição de exercício entre grupos e pacientes que devem de alguma maneira se beneficiar de um regime de exercício regular. Os principais ativadores biológicos de plaquetas durante exercício intenso são trombina e epinefrina, contra os quais os medicamentos antiplaquetários comumente usados têm eficácia muito limitada. Trombina e epinefrina trabalhando juntos apresentam um sistema muito potente para ativação de plaqueta, que é irreversível e de ação muito longa.
[0010] Desta forma, é um objetivo da presente invenção identificar uma composição que tratará, reduzirá, minimizará ou prevenirá inflamação sistêmica induzida por exercício em um sujeito e, desta forma, será usado para promoção de recuperação de exercício em um sujeito.
[0011] De acordo com um primeiro aspecto da invenção é fornecido um extrato de fruta solúvel em água da família Solanaceae com atividade para inibir agregação plaquetária para uso no tratamento, redução, minimização ou prevenção de inflamação sistêmica induzida por exercício em um sujeito.
[0012] Por “prevenção“ entende-se que o extrato interromperá que a inflamação induzida por exercício ocorra ou, como alternativa, reduzirá a severidade da inflamação induzida por exercício; atrasará o início de ação da inflamação induzida por exercício; ou reduzirá os sintomas associados com inflamação induzida por exercício.
[0013] Por “redução“ entende-se que o extrato, quando comparado a um sujeito de controle que não recebe o extrato, reduzirá a severidade da inflamação induzida por exercício; atrasará o início de ação da inflamação induzida por exercício; ou reduzirá os sintomas associados com inflamação induzida por exercício.
[0014] Por “minimização” entende-se que a inflamação induzida por exercício será reduzida (mesmo se não eliminada) até o ponto em que ela não atrasará a recuperação de exercício em um sujeito.
[0015] Em uma modalidade preferida o uso do extrato melhora ou promove a recuperação de exercício em um sujeito (quando comparado a um sujeito de controle que não recebe o extrato.
[0016] Períodos de recuperação são necessários para permitir que os sistemas nervoso, endócrino e musculoesquelético tenham a oportunidade de realizar trabalho de reparo vital. O sistema muscular, por exemplo, requer tempo para reparar as células danificadas durante esforço árduo. Músculos também requerem tempo para metabolizar nutrientes, reposição de depósitos de glicogênio e sintetizar novas enzimas e mitocôndria que produz energia. Durante a recuperação, o sistema nervoso se adapta ao estresse colocado nele, de maneira tal que ele pode controlar melhor os padrões de motor especializados usados durante o treino. O sistema endócrino deve retornar ao equilíbrio. Maior carga inflamatória pode interferir com estes processos, reduzindo a extensão da recuperação durante a interrupção do treino e potencialmente perturbando o equilíbrio entre treino e recuperação, que é essencial para o desempenho atlético de ponta.
[0017] De acordo com um segundo aspecto da invenção é fornecido um extrato de fruta solúvel em água da família Solanaceae com atividade para inibir agregação plaquetária para uso na promoção da recuperação de exercício em um sujeito.
[0018] O inventor observou que a maioria dos agentes antiplaquetários (por exemplo, aspirina) foram inefetivos para tratar ou prevenir inflamação sistêmica induzida por exercício em um sujeito ou promover a recuperação de exercício em um sujeito. Desta forma, surpreendentemente observou-se que um extrato de tomate solúvel em água conhecido com atividade antiplaquetária (revelado no pedido de patente internacional WO 99/55350 com as melhorias inventivas descritas em WO 2010/049707) realmente mostrou eficácia na redução da inflamação induzida por exercício conforme definido por produção de IL-6 endotelial em condições que simulam exercício intenso.
[0019] WO 2010/049707 revela um método de produzir extrato de tomate solúvel em água com atividade antiplaquetária ideal. Tais extratos solúveis em água foram encontrados em experimentos humanos por ter eficácia significativa para prevenir ou reduzir agregação plaquetária em resposta a adenosina difosfato e colágeno e forma comercializados, com uma reivindicação de saúde autorizada por European Food Safety Authority na Europa, como um suplemento nutricional com benefícios de saúde na área cardiovascular.
[0020] Os novos dados gerados pelo inventor (ver os exemplos) indicam que extratos de tomate solúveis em água (por exemplo, preparado conforme revelado em WO 2010/049707), particularmente quando tomados antes do exercício intenso começar, também reduz os tempos de recuperação de exercício e melhora a qualidade da recuperação depois do exercício intenso.
[0021] Percebe-se que a prevenção de inflamação sistêmica induzida por exercício melhorará a capacidade de um sujeito de recuperar-se do exercício intenso.
[0022] Prefere-se que o extrato de fruta seja usado para promover a recuperação de exercício intenso. Por “exercício intenso” entende-se qualquer exercício conduzido a uma intensidade que corresponde a mais que aproximadamente 60 % de VO2max.
[0023] O extrato de fruta pode ser dado a qualquer sujeito mamífero e tem utilidade no tratamento de animais de interesse veterinário (por exemplo, para melhorar a recuperação dos cavalos depois do exercício ou uma corrida). Entretanto prefere-se que o sujeito seja um sujeito humano e mais preferido que o sujeito seja um sujeito humano que está prestes ou acabou de se submeter a exercício intenso conforme definido anteriormente. O inventor observou que os extratos têm mais eficácia quando dados a indivíduos fisicamente ajustados e particularmente atletas treinados ou atletas de “elite” que desejam uma recuperação ideal de exercício intenso.
[0024] O extrato de fruta é preferivelmente um extrato de tomate solúvel em água ativo (WSTC), a fração contendo um composto solúvel em água incolor substancialmente estável termicamente ou compostos com atividade para prevenir agregação plaquetária tendo um peso molecular menor que 1000.
[0025] O extrato pode ser derivado da polpa de uma fruta descascada e/ou o suco que circunda as sementes de uma fruta.
[0026] Os extratos essencialmente podem compreender o suco da fruta e o suco então pode ser processado adicionalmente da forma aqui discutida e em WO 99/55350 ou WO 2010/049707.
[0027] O extrato pode ser uma fração ativa que pode ser isolada do tomate e é preferivelmente caracterizado em que: (a) é incolor ou cor de palha; (b) é um composto solúvel em água; (c) consiste em componentes tendo um peso molecular menor que 1000; e (e) contém um ou mais nucleosídeos tendo atividade que inibe agregação plaquetária.
[0028] Extratos de fruta preferidos compreendem: (a) um ácido fenólico glicosilado ou um éster fenólico ou derivados destes; (b) um flavonóide glicosilado; e (c) um nucleosídeo.
[0029] O ácido fenólico glicosilado ou éster fenólico pode ser um ácido cinâmico glicosilado ou derivado deste. Um ácido cinâmico glicosilado como este ou derivado deste pode ser selecionado do grupo compreendendo ácido Caffeoil-4-O-quínico, Caffeoil-4-O-glicosídeo, Coumaroil-4-O- glicosídeo (glue / gal) e Coumaroil-4-O- glicosídeo (dissacarídeo).
[0030] O ácido fenólico glicosilado ou éster fenólico pode ser selecionado de: ácido glicosídeo caféico; hexose de ácido p-cumárico / di- hidrokaempferol hexose; glicosídeo de ácido ferúlico; e um derivado de ácido p-cumárico.
[0031] O flavonóide glicosilado pode ser Quercetina - 3 -O-glicosídeo ou Rutina.
[0032] O nucleosídeo pode ser selecionado do grupo compreendendo AMP, Uridina, Adenosina, Guanosina ou GMP.
[0033] Em modalidades acima de tudo preferidas o extrato é qualquer extrato com atividade para prevenir agregação plaquetária que é revelada em WO 99/55350 ou WO 2010/049707.
[0034] WO 99/55350 e, particularmente, WO 2010/049707, também revela métodos preferidos para fabricar extratos que podem ser usados de acordo com a presente invenção.
[0035] WO 2010/049707 revela métodos acima de tudo preferidos para produzir extratos e extratos per se que podem ser usados de acordo com a presente invenção, na figura 2 (métodos para preparar um extrato líquido/xarope da fruta) e Figura 4 (métodos de processar o extrato para preparar um pó com açúcares removidos dele). Estes extratos e os métodos de fabricá-los são incorporados aqui pela referência.
[0036] O inventor conduziu trabalho de desenvolvimento adicional para produzir composições inéditas compreendendo extratos de tomate solúveis em água e um nitrato capaz da conversão a óxido nítrico exógeno por tecidos biológicos.
[0037] O inventor surpreendentemente observou que uma combinação do extrato de fruta com o nitrato foi particularmente usado de acordo com o primeiro ou segundo aspectos da invenção. O inventor não deseja ficar preso a nenhuma teoria, mas acredita que esta combinação é efetiva em virtude de não somente alvejar ativação de plaqueta por trombina e epinefrina, mas também fornece uma fonte exógena de óxido nítrico para as plaquetas e células endoteliais para usar se as fontes endógenas forem depletadas.
[0038] Extratos suplementados com nitrato representam uma importante característica da invenção. Desta forma, de acordo com um terceiro aspecto da invenção é fornecida uma composição compreendendo: (a) um extrato de fruta solúvel em água da família Solanaceae com atividade para inibir agregação plaquetária, em que o extrato compreende: (i) componentes tendo um peso molecular menor que 1000; e (ii) contém um ou mais de um nucleosídeo; um ácido fenólico glicosilado ou um éster fenólico, ou derivado deste; ou um flavonóide glicosilado com atividade que inibe agregação plaquetária; e (b) uma fonte de nitrato de dieta ou um precursor de óxido nítrico endógeno.
[0039] O extrato (a) na composição do terceiro aspecto da invenção pode ser qualquer extrato de fruta solúvel em água da família Solanaceae com atividade para inibir agregação plaquetária. Preferivelmente o extrato é um definido anteriormente e em particular um revelado em WO 99/55350 ou WO 2010/049707.
[0040] Fontes de nitrato de dieta (b) adequadas para uso na composição de acordo com este aspecto da invenção incluem extratos a base de água de polpa de fruta ou tecido vegetal, onde a fruta ou vegetal selecionado é conhecido por conter níveis de nitrato suficientemente altos para resultar nas concentrações finais de extrato maiores que 7,5 g/L ou cerca de 7,5 g/L de nitrato. Exemplos de tais frutas e vegetais incluem vegetais de folhas verdes, por exemplo, as folhas de espinafre, rúcula, alface, floral, agrião; vegetais crucíferos, tais como repolho ou couve; frutas, tais como morango, maçã ou ruibarbo.
[0041] As fontes de nitrato de dieta podem ser recém preparadas da polpa de fruta ou polpa liofilizada ou tecidos vegetais ou podem ser abastecidos de produtos comercialmente disponíveis, tais como suco de fruta e vegetal concentrado. Tais concentrados podem ser padronizados para teor de nitrato, titulando a dose usada dependendo do teor de nitrato presente. Alternativamente nitratos de dieta podem ser preparados macerando tecido de planta fresco depois da adição de água; remoção de polpa por centrifugação ou filtração; e concentração em baixa temperatura para evitar a degradação de nitrato, por exemplo, por liofilização, por secagem por vácuo em baixa temperatura ou por evaporação em baixa temperatura. Percebe-se que o teor de nitrato de tais preparações também pode ser padronizado.
[0042] Fontes de nitrato de dieta podem ser usadas sozinhas ou combinações de diferentes materiais de fontes podem ser preparados. Exemplos de combinações preferidas são extrato de acelga e extrato de ruibarbo ou extrato de morango, extrato de ruibarbo e extrato de alface.
[0043] Fontes de nitrato de dieta podem ser usadas tanto na forma líquida quanto depois da remoção de água por secagem, na forma de pó. A concentração final de nitrato presente na forma final da fonte de nitrato de dieta pode ser na faixa de 7,5 g/L - 100 g/L para líquidos, ou 7,5 g/kg - 80 g/kg para a forma de pó. O nível de nitrito presente na forma final não deve exceder 150 mg/L para líquidos, ou 150 mg/kg para pós.
[0044] Prefere-se que a composição de acordo com o terceiro aspecto da invenção; ou, se um número significativo de outros ingredientes for incluído em um produto comercial (ver a seguir), um produto compreendendo a composição contém menos que 6,5 g/L ou menos que 6,5 g/kg de nitrato. Preferivelmente, a composição ou produto compreende entre cerca de 400 e 4500 mg/L ou cerca de 400 e 4500 mg/kg de nitrato. Em uma modalidade, a composição ou produto compreende cerca de 1,666 g/L ou 1,666 g/kg de nitrato.
[0045] Inúmeros precursores de óxido nítrico endógeno podem ser usados de acordo com a invenção. Tais precursores podem ser convertidos no corpo para formar nitratos. Exemplos incluem citrulina, glutamina e arginina. Um precursor acima de tudo preferido para uso de acordo com a invenção é citrulina.
[0046] Prefere-se que a composição de acordo com o terceiro aspecto da invenção também compreenda ácido fólico, ou metabólitos deste que agem como cofatores no caminho do óxido nítrico endógeno, como um terceiro componente (c). Ácido fólico é um cofator que mantém a produção de óxido nítrico endógeno por células endoteliais. O inventor observou que os efeitos combinados de um suplemento de nitrato e ácido fólico em um experimento (ver os exemplos) que simulam exercício intenso foi para surpreendentemente remover a supressão tanto da ativação de plaqueta quanto da liberação de micropartículas inflamatórias. Além disto, composições do terceiro aspecto da invenção causaram uma redução ainda maior da geração de IL-6 em células endoteliais ativadas que quando extrato de tomate solúvel em água foi usado sozinho.
[0047] Exemplos de metabólitos de ácido fólico que podem ser usados de acordo com a invenção incluem 5-metoxitetraidrofolato ou tetraidrofolato.
[0048] Fontes de ácido fólico ou seus metabólitos que agem como cofatores no caminho do óxido nítrico endógeno adequados para uso na preparação são tipicamente preparações comerciais de grau farmacêutico, por exemplo, ácido fólico BP/EP, 96 % de pureza, fornecido por DSMK.
[0049] De acordo com um quarto aspecto da invenção é fornecida uma composição de acordo com o terceiro aspecto da invenção para uso no tratamento ou prevenção de inflamação sistêmica induzida por exercício em um sujeito.
[0050] De acordo com um quinto aspecto da invenção é fornecida uma composição de acordo com o terceiro aspecto da invenção para uso na promoção de recuperação de exercício em um sujeito.
[0051] A composição de acordo com o terceiro aspecto da invenção representa uma composição preferida que pode ser usada conforme discutido com relação ao primeiro e segundo aspectos da invenção e conforme discutido a seguir. Formulações Farmacêuticas e Nutracêuticas
[0052] Os extratos de fruta usados de acordo com o primeiro ou segundo aspectos da invenção ou composições do terceiro aspecto da invenção podem ser preparadas sem nenhum componente adicional (por exemplo, ver exemplo 1 ou 2) embora em modalidades preferidas os extratos e composições sejam formulados com outros agentes, conforme discutido a seguir e no exemplo 5, para melhorar suas propriedades comerciais (por exemplo, para melhorar distribuição, meia-vida, sabor e similares).
[0053] Os extratos de fruta e composições da invenção podem ser formulados para administração oral. Como tal, eles podem ser formulados como géis, soluções, suspensões, xaropes, comprimidos, cápsulas, pastilhas e barras de lanche, bebidas, insertos e adesivo a título de exemplo. Tais formulações podem ser preparadas de acordo com métodos bem conhecidos na tecnologia. Por exemplo, o extrato ou composição pode ser formado em um xarope ou outra solução para administração oralmente, por exemplo, como uma bebida saudável. Um ou mais excipientes selecionados de açúcares, vitaminas, agentes flavorizantes, agentes corantes, conservantes e espessantes podem ser incluídos em tais xaropes ou soluções. Agentes que ajustam a tonicidade, tal como cloreto de sódio, ou açúcares, podem ser adicionados para fornecer uma solução de uma força osmótica particular, por exemplo, uma solução isotônica. Um ou mais agentes que ajustam o pH, tais como agentes tamponantes também podem ser usados para ajustar o pH a um valor particular e preferivelmente mantê-los neste valor. Exemplos de agentes tamponantes incluem tampões de citrato de sódio/ácido cítrico e tampões de fosfato.
[0054] Alternativamente, o extrato ou composição pode ser seco (por exemplo, por secagem por aspersão ou liofilização) e o produto seco formulado em uma forma de dosagem sólida ou semi sólida, por exemplo, como um comprimido, pastilha, cápsula, pó, granulado ou gel.
[0055] Composições contendo os extratos ou composições do terceiro aspecto da invenção podem ser preparadas adsorvendo em um suporte sólido; por exemplo, um suporte composto de um açúcar, tais como sacarose, lactose, glicose, frutose, manose ou um álcool de açúcar, tais como xilitol, sorbitol ou manitol; ou um derivado de celulose. Outros adsorventes particularmente usados incluem adsorventes a base de amido, tais como flocos de cereal, por exemplo, floco de trigo e floco de milho.
[0056] Para formação de comprimido, o extrato ou composição pode ser tipicamente misturado com um diluente, tais como um açúcar, por exemplo, sacarose e lactose e álcoois de açúcar, tais como xilitol, sorbitol e manitol; ou celulose modificada ou derivado de celulose, tais como celulose em pó ou celulose microcristalina ou carboximetil celulose. Os comprimidos também tipicamente conterão um ou mais excipientes selecionados de agentes de granulação, aglutinantes, lubrificantes e agentes desintegrantes. Exemplos de desintegrantes incluem amido e derivados de amido e outros polímeros intumescíveis, por exemplo, desintegrantes poliméricos reticulados, tais como carboximetilcelulose reticulada, polivinilpirrolidona reticulada e amido glicolatos. Exemplos de lubrificantes incluem estearatos, tais como estearato de magnésio e ácido esteárico. Exemplos de aglutinantes e agentes de granulação incluem polivinilpirrolidona. Onde o diluente não é naturalmente muito doce, um adoçante pode ser adicionado, por exemplo, glicirrizinato de amônio ou um adoçante artificial, tais como aspartame ou sacarinato de sódio.
[0057] Os extratos ou composições também podem ser formulados como pós, géis de grânulos, ou semi-sólidos para a incorporação em cápsulas. Quando usados na forma de pós, os extratos podem ser formulados juntos com qualquer um ou mais dos excipientes definidos anteriormente com relação aos comprimidos ou podem ser apresentados em uma forma não diluída. Para apresentação na forma de um gel ou semi-sólido, os extratos ou composições secos podem ser dissolvidos ou suspensos em um veículo líquido ou semi- sólido viscoso, tais como um polietileno glicol ou um carreador líquido, tal como um glicol, por exemplo, propileno glicol ou glicerol ou um óleo vegetal ou de peixe, por exemplo, um óleo selecionado de óleo de oliva, óleo de girassol, óleo de açafroa, óleo de prímula, óleo de soja, óleo de fígado de bacalhau, óleo de arenque, etc. Estes então podem ser preenchidos em cápsulas tanto de gelatina dura quanto de gelatina macia ou feitas de equivalentes de gelatina dura ou macia, cápsulas de gelatina macia ou equivalente de gelatina sendo preferidas para preenchimentos de líquido viscoso ou semi-sólido. Em uma modalidade preferida, um extrato ou composição de acordo com a invenção é fornecido na forma de pó opcionalmente junto com um excipiente sólido preferido (por exemplo, pó) para a incorporação em cápsulas, por exemplo, uma cápsula de gelatina dura.
[0058] Uma forma de dosagem sólida ou semi-sólida da presente invenção pode conter até cerca de 1000 mg da formulação, por exemplo, até cerca de 800 mg.
[0059] Os extratos da invenção ou composições de acordo com o terceiro aspecto da invenção podem ser apresentados na forma de formas de dosagem unitária contendo uma concentração definida de compostos com atividade para inibir agregação plaquetária. Tais formas de dosagem unitária podem ser selecionadas, de maneira tal a alcançar um nível de atividade biológica desejado. Por exemplo, uma forma de dosagem unitária pode conter uma quantidade de até 1000 mg (peso seco) de um extrato de fruta ou composição de acordo com a invenção, mais tipicamente até 800 mg, por exemplo, 50 mg a 800 mg, por exemplo, 100 mg a 500 mg. Quantidades particulares do extrato ou composição que podem ser incluídas em uma forma de dosagem unitária podem ser selecionadas de 50 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 350 mg, 400 mg, 450 mg, 550 mg, 600 mg, 650 mg, 700 mg, 750 mg e 800 mg.
Regimes de Dosagem
[0060] A quantidade do extrato usado de acordo com o primeiro aspecto da invenção ou composição de acordo com a invenção que precisa ser administrado a um sujeito dependerá de inúmeros fatores. Por exemplo, quando o sujeito é um humano a quantidade requerida dependerá do tipo de exercício submetido ou a ser submetido; da duração do exercício; do nível de preparo físico da pessoa e também fatores, tais como a idade, sexo e peso do sujeito.
[0061] Para extratos líquidos fabricados de acordo com método 1,1 (ver Exemplo 1 a seguir), a dose diária recomendada do extrato de fruta de acordo com a invenção é entre 0,5 g e 20 g e mais preferivelmente entre 2 g e 7g. Uma dose diária pode ser cerca de 3 g. Um regime de dosagem típico para um humano pode ser, para cada dia que ele se exercita, de cerca de 70 mg a 285 mg, preferivelmente cerca de 25 mg a 100 mg por quilograma de peso corporal.
[0062] Para extratos em pó fabricados de acordo com método 1,2 (ver exemplo 1 a seguir) a dose diária recomendada pode ser entre 10 mg e 500 mg e é mais preferivelmente entre cerca de 85 mg e cerca de 150 mg. Um regime de dosagem típico para um humano pode ser, para cada dia que eles exercitam, de cerca de 1 mg a 2,25 mg por quilograma de peso corporal.
[0063] Uma composição preferida de acordo com o terceiro aspecto da invenção compreende extrato de tomate solúvel em água (por exemplo, na quantidade discutida nos parágrafos anteriores) e uma fonte de nitrato de dieta que fornece entre 25 mg e 250 mg de nitrato por dose, preferivelmente entre 50 mg e 150 mg de nitrato por dose e acima de tudo preferivelmente cerca de 100 mg de nitrato por dose. Acima de tudo prefere-se que o nitrato está compreendido em uma composição contendo baixos níveis de nitrito. Preferivelmente s composição compreende menos que 400 mg de nitrato por dose.
[0064] Uma composição acima de tudo preferida de acordo com o terceiro aspecto da invenção compreende extrato de tomate solúvel em água (por exemplo, em uma quantidade de cerca de 3 g de extrato líquido por dose) e uma fonte de nitrato de dieta (por exemplo, cerca de 100 mg de nitrato por dose) e ácido fólico. Ácido fólico pode ser incluído na faixa de 10 a 500 μg por dose, preferivelmente 50 a 400 μg por dose, mais preferivelmente 10 a 300 μg por dose; e acima de tudo preferivelmente cerca de 200 μg por dose.
[0065] Prefere-se que um sujeito receba uma dose do extrato (e opcionalmente nitrato e ácido fólico) antes do exercício. O extrato (e opcionalmente nitrato e ácido fólico) é preferivelmente consumido oralmente a qualquer momento antes do exercício. Por exemplo, uma dose poderia ser tomada de manhã ou na hora do almoço se o exercício for feito à tarde ou à noite. Preferivelmente a dose é tomada entre 0 e 5 horas antes do exercício e mais preferivelmente entre 1,5 e 3 horas antes do exercício.
[0066] Assim, de acordo com um aspecto adicional da invenção é fornecida uma forma de dosagem compreendendo a composição de acordo com o terceiro aspecto da invenção compreendendo entre 25 mg e 250 mg de nitrato.
[0067] Prefere-se que a forma de dosagem compreenda cerca de 100 mg de nitrato.
[0068] A forma de dosagem pode compreender entre 10 μg e 500 μg de ácido fólico, preferivelmente 50 a 400 μg por dose, mais preferivelmente 10 a 300 μg por dose; e acima de tudo preferivelmente cerca de 200 μg por dose.
[0069] A forma de dosagem pode compreender extrato de fruta solúvel em água da família Solanaceae conforme descrito anteriormente nos regimes de dosagem designados.
Composições Preferidas para Consumo Humano
[0070] O extrato ou composição pode ser apresentado como suplementos alimentares ou aditivos alimentares ou pode ser incorporado nos alimentos, por exemplo, alimentos funcionais ou nutracêuticos.
Produtos de gel
[0071] Produtos de gel aquosos para consumo como um suplemento alimentar representam composições preferidas de acordo com a invenção. Tais géis podem ser empacotados, de maneira tal que o empacotamento possa ser aberto e o gel consumido antes do exercício.
[0072] Os produtos de gel contêm um extrato fruta solúvel em água da família Solanaceae conforme definido anteriormente. Preferivelmente o gel compreende uma fonte de nitrato de dieta ou um precursor de óxido nítrico endógeno conforme discutido anteriormente e acima de tudo preferivelmente também compreende ácido fólico ou um derivado deste. Produtos de gel adicionalmente podem incluir um ou mais de eleltrólitos, carboidrato, antioxidantes, conservantes, flavorizante e adoçante.
[0073] Géis deveriam compreender um agente ou agentes adequados que formam um gel comestível com a consistência correta para ser apertado da embalagem e ser facilmente consumido.
[0074] Inúmeros agentes de gel adequados podem ser usados que são conhecidos na tecnologia. Por exemplo, uma goma gelana pode ser usada (por exemplo, Kelcogel-F). Em algumas modalidades o gel pode compreender dois agentes de gel. Por exemplo, pode compreender uma goma gelana e uma goma xantana.
[0075] Géis preferidos são definidos e fabricados de acordo com os métodos revelados em WO 2007/083117 (por exemplo, conforme descrito nas páginas 19 - 22 do pedido de patente). Percebe-se que géis de acordo com a presente invenção podem ser isotônicos conforme revelado em WO 2007/083117 que não precisa ser para uso de acordo com a invenção. Por exemplo, os produtos preferidos discutidos a seguir e nos exemplos não são isotônicos. Versados na tecnologia perceberão que a tonicidade de um produto pode ser prontamente adaptada de acordo com a necessidade.
[0076] Um produto de gel acima de tudo preferido para uso de acordo com a invenção pode ter ingredientes nas seguintes faixas:
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[0077] Um dose típica para dar a um atleta humano será 10-200 mL do gel mencionado anteriormente, preferivelmente 20-150 mL de gel, mais preferivelmente 30-100 mL de gel, mais preferivelmente 40-80 mL de gel e acima de tudo preferivelmente cerca de 60 mL de gel .
[0078] Percebe-se que muitos dos ingredientes anteriores podem ser ajustados ou substituídos por um versado na tecnologia da formulação de géis para consumo oral. Por exemplo, Maltodextrina pode ser usada como uma fonte de energia e quando este é o caso a quantidade de água pode ser reduzida em até 50 %.
[0079] Flavorizante pode ser escolhido para preparar um gel de um sabor escolhido. Por exemplo, um gel preferido é flavorizado de banana e manga. Alternativamente sabores de groselha-negra, laranja ou tropical podem ser usados. Produtos em Pó
[0080] Extratos e composições de acordo com a invenção também podem ser fornecidos em uma forma em pó para reconstituição como uma solução. Uma vez que elas também podem conter excipientes solúveis, tais como açúcares, agentes tamponantes, tais como tampões de citrato e fosfato e podem compreender agentes efervescentes formados de carbonatos, por exemplo, bicarbonatos, tais como bicarbonato de sódio ou amônio e um ácido sólido, por exemplo, ácido cítrico ou um sal de citrato ácido.
[0081] Extratos em pó preparados de acordo com método 1,2 (a seguir) são preferivelmente usados em produtos em pó.
[0082] Misturas de pó podem ser usadas para preencher sachês. Misturas de sachês preferidas compreenderão uma fonte de nitrato de dieta e misturas de sachês acima de tudo preferidas conterão ácido fólico. Um sachê em pó típico pode compreender:
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[0083] Exemplo de sabor para uso em uma mistura de sachê como esta inclui sabores de limão e cereja.
[0084] Tais sachês em pó podem ser divididos em unidades de dosagem de 10-150 g, mais preferivelmente cerca de 25-75 g e acima de tudo preferivelmente são divididos em quantidades de 50 g e selados em sachês. Em uso, o pó pode ser misturado com entre 50 e 250 mL de água e consumido antes do exercício.
[0085] Alternativamente, pós podem ser formulados (por exemplo, por compressão do pó com o uso opcional de agentes ligantes) para formar comprimidos dispersíveis (também conhecidos como comprimidos efervescentes). Comprimidos dispersíveis típicos podem ser preparados para conter ingredientes nas seguintes quantidades:
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[0086] Tais comprimidos podem ser 1-30 g, preferivelmente 2-20 g e acima de tudo preferivelmente são formulados como 10 g de comprimidos. Em uso, um 10 g comprimido pode ser dissolvido em entre 50 e 250 mL de água e consumidos antes do exercício.
[0087] Barras de Alimento
[0088] Extratos usados de acordo com a invenção ou composições de acordo com o terceiro aspecto da invenção também podem ser fornecidos em uma forma de pó para a incorporação em barras de lanche, por exemplo, barras de fruta, barras de nozes e barras de cereal. Para apresentação na forma de barras de lanche, os extratos ou composições podem ser misturados com qualquer um ou mais ingredientes selecionados de frutas secas, tais como tomates secos no sol, passas e culturas, amendoins ou cereais, tais como aveia e trigo.
[0089] Barras de alimento preferidas podem ser preparadas para conter ingredientes nas seguintes quantidades:
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[0090] Sabores podem ser, por exemplo, maçã e groselha-negra, chocolate ou mirtilo.
[0091] Percebe-se que o tamanho de uma barra de alimento pode ser variado e isto dependerá de inúmeros fatores (incluindo a quantidade de extrato solúvel em água, e opcionalmente nitrato e ácido fólico, incluído na barra. Uma barra tipicamente pode ser 10-200 g, preferivelmente 20-60 g e acima de tudo preferivelmente cerca de 40 g. Barra de alimento deve ser consumida antes do exercício para um efeito ideal.
[0092] Produtos acima de tudo referidos compreendendo extratos de acordo com a invenção são definidos no exemplo 5.
[0093] Os extratos ou composição da invenção ou formulações destes podem ser incluídos em um recipiente, sado ou distribuidor junto com instruções para administração.
Indicações de Efetividade
[0094] A capacidade das composições compreendendo extratos da invenção para fornecer efeitos benéficos pode ser estimada com referência a inúmeros parâmetros diferentes.
[0095] Os exemplos a seguir fornecem detalhes dos protocolos adequados para a estimativa da agregação plaquetária ou hemostase primária, ambos os quais podem ser investigados de maneira a avaliar a efetividade terapêutica. O analisador de função de plaqueta PFA-100 ® descrito nos exemplos é um dispositivo relativamente novo para a estimativa da hemostase primária, mas foi bem validado (ver, por exemplo, “The platelet-function analyzer (PFA-100®) for evaluating primary hemostasis” de M. Franchini Hematology, Volume 10, Issue 3 junho de 2005, páginas 177 - 181).
[0096] A medição da capacidade de gerar trombina é um protocolo padrão comumente usado para estimar desordens hematológicas ou eficácia de tratamentos antitrombóticos e pode realizada tanto por coagulômetros automatizados quanto manualmente.
[0097] Micropartículas derivadas de célula circulante são um índice de capacidade de pro coagulante e de inflamação e podem ser medidas mais exatamente por métodos de citometria de fluxo, embora existam outros métodos também.
[0098] A medição de IL-6 é acima de tudo comumente realizada por ELISA ou por sistemas automatizados, tal como Luminex. IL-6 é um dos biomarcadores mais amplamente aceitos da inflamação.
[0099] A avaliação da recuperação de exercício é complexa, uma vez que muitos sistemas estão envolvidos. Entretanto, medições simples de bem estar são razoavelmente boas na monitoração da recuperação e alguns dos mais frequentemente usados incluem: medição de níveis de norepinefrina plasmático; monitoramento da força muscular e energia antes e depois da sessão de exercício; avaliação da dor muscular depois do exercício (por exemplo, usando um questionário validado para medir a extensão de DOMS - atraso no início da dor muscular); registro dos distúrbios de sono (por exemplo, usando dispositivos que medem o movimento do membro durante o sono); avaliação do estresse e fadiga (por exemplo, usando um questionário POMS - perfil dos estados de humor - ou POMS modificado, validado para uso em atletas); monitoramento das taxas de esforço percebido durante o exercício (por exemplo, usando um sistema de questionário validado); monitoramento de taxas cardíacas durante atividade e monitoramento do humor geral (por exemplo, usando um questionário POMS modificado). Estas variáveis foram demonstradas em estudos por ser indicadores confiáveis da recuperação efetiva. DOMS também mostrou correlacionar-se com níveis de IL-6 circulante.
Outros Aspectos da Invenção
[00100] De acordo com um aspecto adicional da presente invenção é fornecido um método de promover recuperação de exercício intenso compreendendo administrar a um sujeito em necessidade de tratamento um extrato de fruta solúvel em água da família Solanaceae com atividade para inibir agregação plaquetária.
[00101] De acordo com um outro aspecto da presente invenção é fornecido um método de prevenir ou reduzir a severidade da inflamação sistêmica induzida por exercício compreendendo administrar a um sujeito em necessidade de tratamento um extrato de fruta solúvel em água da família Solanaceae com atividade para inibir agregação plaquetária.
[00102] De acordo com um outro aspecto da presente invenção é fornecido uso de um extrato de fruta solúvel em água da família Solanaceae com atividade para inibir agregação plaquetária para tratar ou prevenir a inflamação sistêmica induzida por exercício em um sujeito.
[00103] De acordo com um outro aspecto da presente invenção é fornecido uso de um extrato de fruta solúvel em água da família Solanaceae com atividade para inibir agregação plaquetária na fabricação de um medicamento para o tratamento ou prevenção de inflamação sistêmica induzida por exercício em um sujeito.
[00104] De acordo com um outro aspecto da presente invenção é fornecido uso de um extrato de fruta solúvel em água da família Solanaceae com atividade para inibir agregação plaquetária para promoção de recuperação de exercício intenso.
[00105] De acordo com um outro aspecto da presente invenção é fornecido uso de um extrato de fruta solúvel em água da família Solanaceae com atividade para inibir agregação plaquetária na fabricação de um medicamento para promoção de recuperação de exercício intenso.
Breve Descrição Dos Desenhos
[00106] A invenção será agora ilustrada, mas sem limitações, pelos seguintes exemplos e com referência aos desenhos em anexo, em que:
[00107] Figura 1: ilustra os efeitos de incubar plasma rico em plaqueta com extrato de tomate solúvel em água (WSTC) na agregação plaquetária em resposta a trombina e epinefrina conforme discutido no exemplo 3.
[00108] Figura 2: ilustra os efeitos de tratamento com extrato de tomate solúvel em água (WSTC) na liberação de micropartícula das plaquetas expostas a trombina e epinefrina conforme discutido no exemplo 3.
[00109] Figura 3: ilustra os efeitos de tratamento com extrato de tomate solúvel em água (WSTC) na liberação da célula endotelial de IL-6 depois da exposição a plaquetas e micropartículas ativadas por trombina e epinefrina conforme discutido no exemplo 3. ‘Con -’ representa células HUVEC de controle não tratadas com suspensão de leucócito de plaqueta ativada. ‘Con +’ representa células HUVEC tratadas com suspensão de leucócito na plaqueta e usando salina como tratamento. WSTC representa células HUVEC incubadas com suspensão de leucócito de plaqueta ativada e usando WSTC como tratamento.
[00110] Figura 4: ilustra os efeitos de incubar plasma rico em plaqueta com extrato de tomate solúvel em água (WSTC) + nitrato de dieta (NO3); e extrato de tomate solúvel em água (WSTC) + nitrato de dieta + ácido fólico na agregação plaquetária em resposta a trombina e epinefrina conforme discutido no exemplo 4.
[00111] Figura 5: ilustra os efeitos de tratamento com extrato de tomate solúvel em água (WSTC) + nitrato de dieta (NO3); e extrato de tomate solúvel em água + nitrato de dieta + ácido fólico na liberação da micropartícula das plaquetas expostas a trombina e epinefrina conforme discutido no exemplo 4.
[00112] Figura 6: ilustra os efeitos de tratamento com extrato de tomate solúvel em água (WSTC) + nitrato de dieta (NO3); e extrato de tomate solúvel em água + nitrato de dieta + ácido fólico na liberação de célula endotelial de IL-6 depois da exposição a plaquetas e micropartículas ativadas por trombina e epinefrina conforme discutido no exemplo 4. ‘Con -’ representa células HUVEC de controle não tratadas com suspensão de leucócito de plaqueta ativada. ‘Con +’ representa células HUVEC tratadas com suspensão de leucócito na plaqueta e usando salina as tratamento. WSTC+NO3 e WSTC+NO3+ácido fólico representa células HUVEC incubadas com suspensão de leucócito de plaqueta ativada e usando WSTC+NO3 ou WSTC+NO3+ácido fólico como tratamento, respectivamente.
[00113] Figura 7: Contagem de micropartícula derivada de plaqueta na linha de base (antes da suplementação), pré-exercício (depois da suplementação) e pós-exercício em sujeitos saudáveis (n = 3). P = suplementação com placebo. FF = combinação preferida de WSTC, nitrato de dieta e ácido fólico conforme discutido no exemplo 6.
[00114] Figura 8: Capacidade de geração de trombina plasmática (nM) na linha de base (antes da suplementação), pré-exercício (depois da suplementação) e pós-exercício em sujeitos saudáveis (n = 3). P = suplementação com placebo. FF = combinação preferida de WSTC, nitrato de dieta e ácido fólico conforme discutido no exemplo 6.
[00115] Figura 9: Concentração de IL-6 circulante no plasma (pg/mL) na linha de base (antes da suplementação), pré-exercício (depois da suplementação) e pós-exercício em sujeitos saudáveis (n = 3). P = suplementação com placebo. FF = combinação preferida de WSTC, nitrato de dieta e ácido fólico conforme discutido no exemplo 6.
EXEMPLO 1
[00116] Um extrato de tomate solúvel em água com atividade para inibir agregação plaquetária foi preparado pelos seguintes protocolos: 1.1 Um extrato líquido (xarope) que pode ser usado de acordo com a invenção foi preparado seguindo os protocolos do exemplo 2 e Figura 2 de WO 2010/049707. 1.2 Um extrato em pó (com baixo teor de açúcar), que pode ser usado de acordo com a invenção, foi preparado seguindo os protocolos do exemplo 3 e Figura 4 de WO 2010/049707.
EXEMPLO 2
[00117] Exemplo 2 fornece métodos de preparar uma composição preferida de acordo com o terceiro aspecto da invenção, compreendendo uma combinação de extrato de tomate solúvel em água, uma fonte de nitrato de dieta e uma fonte de ácido fólico. 2.1 O extrato de tomate solúvel em água deveria ser fornecido e preparado conforme salientado no exemplo 1. Uma solução deste extrato a uma concentração de 430 μg/mL foi preparado tanto diluindo o extrato descrito no exemplo 1,1 quanto diluindo do extrato em pó descrito no exemplo 1,2, em água deionizada. As soluções resultantes a 430 μg/mL foram tamponadas a pH 7,4 para uso em protocolos experimentais nos quais eles foram diluídos adicionalmente dez vezes para dar uma concentração de trabalho final de 43 μg/mL. Esta concentração representa a concentração plasmática circulante calculada máxima de compostos antiplaquetários no extrato aproximadamente 3 horas depois da ingestão de uma dose unitária mais preferida (3 g de extrato líquido (1.1), 150 mg de extrato em pó (1.2). 2.2 Um extrato rico em nitrato de dieta foi abastecido da Diana Naturals, France. Isto compreendeu um extrato de acelga solúvel em água de aproximadamente 60 Brix, que continha nitrato inorgânico a um nível de aproximadamente 20 g/L e nitrito inorgânico a um nível menor que 150 mg/L. Uma solução deste extrato a uma concentração de 186 mg/mL de nitrato foi produzido diluindo o extrato original em água deionizada. A solução resultante foi tamponada a pH 7,4 para uso em protocolos experimentais nos quais ela foi adicionalmente diluída dez vezes para dar uma concentração de trabalho final de 18,6 mg/mL. Esta concentração de extrato de acelga corresponde a uma concentração de trabalho final de 372 ng/mL de nitrato. Com base nos dados publicados nos quais nitrato de dieta foi consumido na forma de extratos vegetais, esta concentração de 372 ng/mL de nitrato em plasma poderia ser obtida 3 horas depois de consumir um 100 mg de dose de nitrato de dieta (Cermak N et al, Int J Sport Nutr Exerc Metab 2012, 22, 6471). 2.3 A fonte de ácido fólico foi ácido fólico EP/BP do fornecedor DMSK. Este material é insolúvel em água e assim uma solução deste material a uma concentração de 50 ng/mL foi produzida por dissolução em ácido diluído. A solução resultante, uma vez preparada, foi tamponada com êxito a pH 7,4 sem precipitação de material e foi usado em protocolos experimentais nos quais foi adicionalmente diluído dez vezes para dar uma concentração de trabalho final de 5 ng/mL. Isto corresponde a uma concentração de folato plasmática típica 3 horas depois da suplementação com suplementos de multivitamina / mineral da UK RDA de 200 μg de ácido fólico (Navarro M et al, JACN, 2003, 22, 124-132). 2.4 Usando componentes fornecidos e preparados conforme descrito anteriormente, uma mistura foi preparada misturando em quantidades iguais a solução de extrato preparada descrita em 2.1, e a solução de nitrato de dieta preparada descrita em 2.2. Esta mistura, quando diluída dez vezes em protocolos experimentais, dá concentrações finais de 43 mg/ mL de extrato e 372 ng/ mL de nitrato de dieta. Estas quantidades representam concentrações aproximadas de cada componente esperada para circular em plasma 3 horas depois da ingestão de 3 g de extrato de xarope (1,1) e 100 mg de nitrato de dieta de 5 g de extrato de acelga. 2.5 Usando componentes fornecidos e preparados conforme descrito anteriormente, uma mistura foi preparada misturando em quantidades iguais a solução de extrato preparada descrita em 2.1, a solução de nitrato de dieta preparada descrita em 2.2 e a solução de ácido fólico preparada descrita em 2.3. Esta mistura, quando diluída dez vezes em protocolos experimentais, dá concentrações finais de 43 mg/ mL de extrato; 372 ng/ mL de nitrato de dieta e 5 ng/ mL de ácido fólico. Estas quantidades representam concentrações aproximadas de cada componente esperadas para circular em plasma 3 horas depois da ingestão de 3 g de WSTC xarope concentrado, 100 mg nitrato de dieta de 5 g extrato de acelga, e 200 μg de ácido fólico. Esta mistura de ingrediente ativa representa uma composição preferida de acordo com o terceiro aspecto da invenção. A mistura pode ser adicionada agentes de gel e outros excipientes para preparar um volume final do produto de gel de 60 mL.
EXEMPLO 3
[00118] A presente invenção é baseada na pesquisa que surpreendentemente estabeleceu que extrato de tomate solúvel em água modula três sistemas biológicos que são afetados por exercício intenso e que representam diferentes aspectos da resposta inflamatória gerada por exercício intenso. Estes três sistemas biológicos são: plaquetas do sangue, parte do sistema hemostático conhecido por ser fortemente ativado por exercício intenso, devido à liberação induzida por exercício de trombina e epinefrina na corrente sanguínea e depleção de óxido nítrico circulante; micropartículas derivadas de célula circulante no plasma, um índice de ativação de plaqueta e leucócito e de inflamação; e liberação de citocina de célula endotelial, em particular a citocina IL-6, um dos marcadores mais bem validados da inflamação. Pode-se considerar que exercício intenso induz uma reação em cadeia que leva à inflamação sistêmica, que começa com ativação de plaqueta e liberação de micropartícula de plaqueta-leucocito, seguido por liberação de citocina de célula endotelial como um resultado da exposição às células sanguíneas ativadas e micropartículas produzidas. Esta inflamação sistêmica pode levar a atrasos na recuperação de exercício e dificuldades no prolongamento das sessões de exercício de alta intensidade para melhoria do desempenho.
[00119] O inventor examinou a eficácia de diferentes quantidades de componentes de extrato de tomate solúvel em água na prevenção da agregação plaquetária induzida por trombina e epinefrina, liberação de micropartícula pro coagulante e pro inflamatória das plaquetas e leucócitos e liberação de citocina de célula endotelial. Níveis de trombina e epinefrina usados foram consistentes com níveis medidos no sangue durante exercício de alta intensidade.
3.1 . MÉTODOS 3.1.1 Preparação de um extrato de tomate para uso como uma solução de tratamento e de uma solução de controle
[00120] Para preparar soluções de extrato de tomate adequadas para uso em experimentos que examinam suas atividades biológicas, extrato de tomate líquido de 62°Brix, preparado conforme descrito no exemplo 1, foi diluído a uma concentração de 430 μg/mL conforme descrito no exemplo 2.1. Salina tamponada com fosfato (PBS, Sigma-Aldrich UK) foi preparada como uma solução de controle. 3.1.2 Métodos de ensaiar atividade para inibir agregação plaquetária
[00121] O protocolo experimental descrito a seguir foi criado para comparar a extensão da inibição da agregação plaquetária acionada por combinações do TRAP análogo de trombina (peptídeo que ativa o receptor de trombina) e epinefrina (relevante a uma carga de exercício intensa) que foi alcançada por incubação das plaquetas tanto com extratos preparados quanto com de controle. Flebotomia e amostras de sangue
[00122] Sangue para estudos in vitro foi coletado de voluntários sem medicamento, saudáveis humanos, tanto machos quanto fêmeas, de 18 - 60 anos de idade, com função de plaqueta normal. Os sujeitos declararam que eles não consumiram medicamentos ou suplementos conhecidos por afetar a função da plaqueta por um mínimo de 10 dias antes de fornecer uma amostra de sangue. Sangue foi coletado depois da punção venosa a uma veia antecubital por meio de agulhas siliconizadas em tubos de coleta de sangue de citrato de plástico (Sarstedt Monovettes, concentração final de citrato de sódio, 13 mmol/L). Todo o sangue foi mantido a 37 °C da hora da amostragem do sangue. Preparação de plasma rico em plaqueta
[00123] Plasma rico em plaqueta (PRP) foi obtido por centrifugação de sangue com citrato por 15 minutos a 200 x g e foi ajustado com plasma fraco em plaqueta a um número de plaqueta padrão de 320 ± 20 x 109 /L antes do uso. PRP foi usado para medições da função da plaqueta em duas horas. Agonistas de plaqueta
[00124] Os seguintes agonistas foram usados para medições da função da plaqueta. TRAP, concentração final 2 nmol/L; epinefrina, concentração final 0,15 μmol/L (ambos da Sigma-Aldrich, Poole, UK). Agonistas foram preparados de soluções de estoque imediatamente antes do uso por diluição na salina fisiológica aquecida (0,9 % de NaCl) e misturados para dar um agonista TRAP/epinefrina combinados. Nestas concentrações, nenhum agonista foi capaz de induzir uma resposta de agregação plaquetária individualmente. Entretanto, em combinação, o efeito de potencialização da epinefrina em TRAP resultou em uma forte resposta de plaqueta. Incubação de soluções de tratamento (3.1.1) com PRP
[00125] 180 μL de PRP foram incubados com 20 μL de soluções de tratamento ou de controle preparadas a 37 °C por 10 minutos, em epindorrfs baixa retenção. Medição da agregação plaquetária e inibição da agregação
[00126] Depois da incubação com inibidores de plaqueta, amostras de PRP foram transferidas para cubetas de vidro e a extensão da agregação induzida pelo agonista combinado TRAP/epinefrina foi monitorada durante 10 minutos em um agregômetro de plaqueta (Aggram, Helena Biosciences, Sunderland, UK). A partir das curvas de agregação geradas, a área sobre a curva foi calculada para cada amostra PRP e a inibição de agregação alcançada pela solução de tratamento foi calculada comparando a área sobre a curva para estas amostras de PRP com a da amostra de controle. Resultados são mostrados na figura 1.l 3.1.3 Métodos de ensaiar a liberação de micropartículas derivadas de célula
[00127] O protocolo experimental descrito a seguir foi criado para comparar o número de micropartículas derivadas de plaqueta liberadas das plaquetas intactas depois da exposição a combinações de trombina e epinefrina (relevante a uma carga de exercício intensa), na presença tanto do extrato preparado quanto de controle. Flebotomia e amostras de sangue
[00128] Sangue para estudos in vitro foi coletado de voluntários sem medicamento, saudáveis humanos, tanto machos quanto fêmeas, de 18 - 60 anos de idade, com função de plaqueta normal, conforme descrito em 3.1.2 anterior. Preparação de plasma fraco em plaqueta
[00129] Em 10 minutos de coleta, sangue total de citrato foi centrifugado a 2000 g por 20 min a temperatura ambiente para isolar plasma fraco em plaqueta (PPP). Preparação de agonistas
[00130] Agonistas usados para estimular a ativação de plaquetas de uma maneira designada para simular o exercício intenso foram novamente combinações de trombina e epinefrina e estes foram preparados conforme descrito em 3.1.2 anteriormente. Preparação de soluções de extrato e de controle
[00131] Soluções de tratamento e de controle para incubação com o preparado PPP foram preparadas conforme descrito em 3.1.2 anterior. Incubação de soluções de tratamento com PPP
[00132] 180 μL de PPP foram incubadas com 20 μL de soluções de tratamento ou controle preparadas a 37 °C por 10 minutos, em epindorrfs de baixa retenção. Medição das micropartículas antes e depois do tratamento com trombina- epinefrina
[00133] Micropartículas derivadas de plaqueta foram detectadas por citometria de fluxo, que permite quantificação de partículas marcadas em solução / suspensão. As amostras PPP pré-tratadas com soluções de tratamento ou controle foram ativadas por adição de agonista TRAP/epinefrina combinado, ou PBS, e foram deixadas em repouso por 10 minutos. As amostras ativadas foram então incubadas com diferentes anticorpos marcados com fluorescência. Anticorpo monoclonal anti-CD61- PerCP (BD Bioscience, San Jose, CA, USA) foi usado para detectar micropartículas derivadas de plaqueta. Anticorpos monoclonais anti-CD45- PE (BD Pharmingen, BD Bioscience) foram usados para marcar LMP. Controles de isotipo conjugados PE- e PerCPar (IgG1, BD Bioscience) foram usados para definir o ruído de fundo. 25 μL de PPP ativado foram incubados com 5 μL de cada anticorpo no escuro por 20 min a temperatura ambiente, então 470 μL de FACSFlow frio (4 °C) (FACSFlow Sheath Fluid, BD Bioscience) foram adicionados.
[00134] Estas amostras foram corridas por meio de um citômetro de fluxo de FACSCalibur e partículas marcadas com anticorpo foram contadas na barreira da micropartícula (a <1μ, determinado por 1 μ de contas). Dados foram adquiridos e analisados com software CellQuest (versão 2: BD Biosciences) depois da contagem por 100 segundos em alta taxa de fluxo. Concentração da micropartícula em cada amostra foi calculada pelo volume lido, que foi estimado pelo tempo de leitura multiplicado pela vazão da amostra. Resultados são expressos em número de micropartículas por l PPP, e mostrados na figura 1. 3.1.4 Métodos de medir a liberação de IL-6 das células endoteliais incubadas com soluções de tratamento e de controle de extrato de tomate Preparação de extratos de tratamento e extratos de controle
[00135] Soluções de tratamento e de controle para incubação com suspensões de célula foram preparadas conforme descrito em 3.1.2 anteriormente. Preparação de suspensões plaqueta-leucócito ativadas e suspensões de controle inativadas, na presença de extratos de tratamento e de controle
[00136] 450 μL de sangue total de citrato foi aliquotado em 212 mL de tubos de baixa retenção. 4,5 mL de reagente de lise diluído (Haemolyse, Sigma-Aldrich UK), diluído dez vezes da solução de estoque original, foram adicionados a cada, os tubos tampados e bem misturados e deixados a temperatura ambiente por 10 minutos. As amostras hemolisadas foram então centrifugadas a 400 g por 10 minutos. 4,5 mL do sobrenadante foram removidos e descartados. 250 μL de tampão Hepes-Mg foram adicionados aos precipitados, misturados e transferidos a um eppendorff. Os tubos foram lavados com mais 250 μL de tampão Hepes-Mg e as lavagens transferidas para dar um volume de aproximadamente 1 mL. As suspensões foram misturadas e então centrifugadas conforme anteriormente. 900 μL do sobrenadante foram removidos e descartados. Aos 100 μL restantes em cada tubo, 250 μL de tampão Hepes-Mg foram adicionados e as suspensões foram completamente misturadas. As células em suspensão foram contadas usando um Sysmex Haematology Analyser (Sysmex UK) e o volume final de suspensão foi ajustado para dar uma contagem de célula de leucócito de 3,3 - 3,4 x 10-3/μL.
[00137] A uma suspensão, agonista TRAP/epinefrina foi adicionado em uma quantidade, de maneira tal que uma diluição de dez vezes da solução estoque fosse alcançada e uma suspensão de célula ativada resultasse. À segunda suspensão, PBS e 10 μL de solução E2 de prostaglandina foram adicionados, de maneira a manter as células em um estado inativado. Preparação de culturas de célula endotelial
[00138] Células endoteliais da veia umbilical humana (HUVEC) (Lonza Suíça) foram cultivadas em frascos de T75 em meio EBM-2 (Lonza, Suíça) com a adição dos suplementos de estojo de bala EGM-2, que consiste em fatores de crescimento e antibióticos, específico para este meio. As células foram mantidas a 37 °C na presença de 5 % de CO2. Este meio foi alterado a cada 2 dias e células sempre foram subcultivadas antes da confluência.
[00139] A aproximadamente 75 % de células em confluência foram subcultivadas em placas de 6 poços. Primeiro, o meio do frasco T75 foi descartado e a monocamada de célula restante lavada com ~ 2 mL de d-PBS (Lonza, Suíça) três vezes. Logo depois, 2 mL de tripsina (Lonza, Suíça) foram adicionados de maneira a separar a camada celular da parede do frasco. O frasco (T75) foi então inspecionado em microscópio para garantir a remoção de todas as células da base do frasco. Depois de 2 min, ~2 mL de soro bovino fetal (FBS) foram adicionados de maneira a inibir a digestão das células por tripsina. Depois, o volume restante foi medido e o resto do meio requerido para preencher as placas de 6 poços (2 mL cada poço) foi adicionado. As placas foram mantidas a 37 °C até que as células foram 100 % confluentes por 1-2 dias antes de se submeter a tratamento adicional. Tratamento de células endoteliais
[00140] HUVECs confluentes foram cultivados em EMB-2 com soluções de tratamento ou controle preparadas conforme descrito, por 24 h. Soluções de tratamento e de controle foram diluídas em meios de cultura celular antes da incubação e adicionadas em ume quantidade suficiente para alcançar uma diluição de dez vezes das soluções de estoque preparadas.
[00141] Depois de 24 horas de tratamento, o meio foi coletado em três alíquotas iguais por poço, congelado instantaneamente em nitrogênio líquido e armazenado a -80 °C. Meio recém preparado foi adicionado às células para tratamentos adicionais. As células foram incubadas por mais 24 h com 3 ng/mL de TNF-α ou 1 mL da suspensão de leucócito de plaqueta ativada descrita anteriormente, mantendo um dos poços sem estimulantes, de maneira a ter um controle. Método de ensaiar IL-6 liberado
[00142] IL-6 foi detectado por ELISA, conforme descrito pelas instruções do fabricante (Biosource, UK). Resumidamente, sobrenadante de cultura de célula diluído 1:2 (100 μL) foi incubado por 1 hr, poços foram então lavados 4-5 vezes com tampão de lavagem e preenchido com 100 μL de anti-IL-6 conjugado e 50 μL de solução A. Depois de 1 hr de incubação a temperatura ambiente, poços foram lavados novamente e preenchidos com 200 μL de cromógeno em cada poço e incubados por 15 min. A reação foi finalizada adicionando 100 μL de solução de parada. Valores de absorbância foram lidos a 450 nm. Curvas padrão foram obtidas ensaiando diferentes padrões de IL-6 (com concentrações de 16 a 1690 pg/mL) fornecidas nos estojos.
[00143] Resultados do experimento 3.1.4 são mostrados na figura 3.
3.2 RESULTADOS
[00144] Os resultados dos experimentos descritos são mostrados no formato gráfico nas figuras 1, 2 e 3.
3.3 CONCLUSÕES
[00145] Os experimentos realizados mostraram que extrato de fruta solúvel em água da família Solanaceae é capaz de suprimir a ativação de plaqueta contingente mediante exercício intenso, caracterizado por um aumento na ativação mediada por trombina e epinefrina e que é muito inafetada por medicamentos antiplaquetários conhecidos. Adicionalmente, esta ação primária do extrato resulta na supressão da liberação de micropartícula de plaqueta, um resultado da ativação de plaqueta. Micropartículas de plaqueta constituem aproximadamente 70 % da população de micropartícula de célula circulante e são conhecidas como um sistema de sinalização inflamatório significativo que opera em todo o corpo. Eles também são altamente pro coagulantes e capazes de exacerbar a liberação de trombina e manter um estado pro coagulante e pro inflamatório por muitas horas depois da interrupção do exercício. Os efeitos das micropartículas de plaqueta e leucócito, gerados por trombina e epinefrina, nas células endoteliais foi demonstrado como um aumento na liberação de IL-6 das células endoteliais. Pré-tratamento das células endoteliais com solução de extrato de acordo com a invenção em quantidades fisiologicamente relevantes mostrou suprimir esta liberação de IL-6, resultando em estado inflamatório diminuído do endotélio. Outros estudos mostraram que a supressão de IL-6 circulante afeta os tempos de recuperação e início de ação atrasado dor muscular. Desta forma, pré-tratamento com extrato de fruta solúvel em água da família Solanaceae antes do exercício vigoroso ajuda a promover a recuperação depois do exercício.
EXEMPLO 4
[00146] O inventor também examinou a eficácia de composições preferidas de acordo com o terceiro aspecto da invenção, descrito no exemplo 2, na prevenção da ativação dos sistemas biológicos examinados no exemplo 3. 4.1. MÉTODOS 4.1.1 Preparação de combinações de extrato de tomate solúvel em água com fontes de nitrato de dieta e ácido fólico para uso como soluções de tratamento e de uma solução de controle
[00147] Para uso em experimentos que examinam as atividades biológicas de extrato de fruta solúvel em água da família Solanaceae combinados com nitratos de dieta e ácido fólico, as formulações preferidas descritas nos exemplos 2.4 e 2.5 foram usadas. PBS foi preparado como uma solução de controle. 4.1.2 Métodos de ensaiar a atividade para inibir agregação plaquetária
[00148] O protocolo experimental descrito em 3.1.2 foi seguido em detalhe exato, com exceção que as soluções de tratamento, conforme descrito em 4.1 foram usadas. Resultados são mostrados na figura 4. 4.1.3 Métodos de ensaiar a liberação de micropartículas derivadas de célula
[00149] O protocolo experimental descrito em 3.1.3 foi seguido em detalhe exato, com a exceção de que soluções de tratamento conforme descrito em 4.1 foram usadas. Resultados são mostrados na figura 5. 4.1.4 Métodos de medir a liberação de IL-6 das células endoteliais incubadas com soluções de tratamento e de controle de extrato de tomate
[00150] O protocolo experimental descrito em 3.1.3 foi seguido em detalhe exato, com a exceção de que soluções de tratamento conforme descrito em 4.1 foram usadas. Resultados são mostrados na figura 6. 4.2 RESULTADOS
[00151] Os resultados dos experimentos descritos são mostrados em formato gráfico nas figuras 4, 5 e 6. 4.3 CONCLUSÕES
[00152] Em todos os experimentos realizados no exemplo 4, o inventor foi capaz de mostrar uma melhoria significativa na bioatividade para combinações de extrato de fruta solúvel em água da família Solanaceae com extratos de nitrato de dieta, com e sem a adição de ácido fólico. A combinação do extrato tanto com nitrato de dieta quanto com ácido fólico foi a mais eficaz examinada, em termos de efeitos na agregação plaquetária, geração da micropartícula de plaqueta e liberação da célula endotelial IL-6 depois da exposição a plaquetas ativadas, leucócitos e maiores níveis de micropartículas associadas. Para inibição da agregação plaquetária induzida por exercício e liberação de micropartícula, esta combinação preferida foi mais que duas vezes eficaz que WSTC usado sozinho; enquanto que para inibição da geração de IL-6 das células endoteliais depois da exposição a plaquetas ativadas e leucócitos, ela foi quase três vezes mais eficaz.
[00153] Estes resultados mostram, embora extrato de fruta solúvel em água da família Solanaceae sozinho surpreendente e beneficamente afete a inflamação sistêmica induzida por exercício, que sua eficácia pode ser material e inventivamente aumentada adicionalmente combinando-o com nitrato de dieta e ácido fólico. EXEMPLO 5
[00154] Em vista do conhecimento ganho com relação às combinações de extrato de tomate solúvel em água e fontes de óxido nítrico que mostrou melhor eficácia geral, o inventor continuou a desenvolver composições que podem ser usadas para apropriadamente distribuir estas combinações antes e durante períodos de exercício intenso. 5.1 Géis
[00155] Um produto de gel foi fabricado de acordo com os métodos revelados em WO 2007/083117 (conforme descrito nas páginas 19 - 22 deste pedido de patente) com a exceção de que o produto de gel (ver a seguir) não foi designado como isotônico.
[00156] Um produto de gel mais preferido para uso de acordo com a invenção pode compreender:
Figure img0006
* Flavorizante pode ser banana e manga. Alternativamente sabores groselha-negra, laranja ou tropicais podem ser usados.
[00157] Géis podem ser embalados em sachês de folha laminada para garantir a meia-vida usando, por exemplo, uma máquina de embalagem de gel, tal como a feita por Universal Pack. Tamanhos de gel típicos variam de cerca de 40 mL a cerca de 100 mL (por exemplo, eles podem ter 60 mL). 5.2 Sachê em pó
[00158] Mistura de pós podem ser preparadas para conter ingredientes nas seguintes quantidades: Quantidade
Figure img0007
[00159] Tais misturas de pó podem ser preparadas por técnicas de mistura seca convencionais, por exemplo, usando um misturador de fita ou similar, em condições da fabricação adequadas que controlam poeira e umidade. Agentes podem ser adicionados para garantir livre escoamento do pó resultante, por exemplo, agente anti-formação de torta. Embalagem em recipientes adequados, tais como tubos ou sachês devem ser feitas em condições de controle de poeira e umidade controlada rígidas.
[00160] Os pós podem ser separados em unidades de dosagem de 50 g e selados em sachês. Em uso, o pó é misturado com entre 50 e 250 mL de água e consumidos antes do exercício. 5.3 Tabletes efervescentes
[00161] Comprimidos dispersíveis (também conhecidos como tabletes fixos) podem ser preparados para conter ingredientes nas seguintes quantidades:
Figure img0008
[00162] Formulações de tabletes efervescentes também podem ser preparadas por técnicas de mistura seca convencionais, por exemplo, usando um misturador de fita ou similar onde todo o processo é realizado em condições atmosféricas controladas com umidade relativa menor que 10. Compressão dos comprimidos dos ingredientes secos combinados pode ser realizada por uma faixa de prensas de comprimido capaz de exercer pressão da ordem de 5 - 10 tonnes, dependendo do tamanho do comprimido desejado. Embalagem em sachês individuais ou multitubos devem ser realizadas em condições de umidade controlada e pacotes individuais devem conter material dessecante suficiente para garantir estabilidade na vida em prateleira e do comprimido.
[00163] Tais comprimidos são constituídos como comprimidos de 10 g. Em uso, o comprimido é dissolvido em entre 50 e 250 mL de água e consumidos antes do exercício. 5.4 Barra de alimentos
[00164] Barra de alimentos pode ser preparada para conter os ingredientes nas seguintes quantidades:
Figure img0009
[00165] * Sabor, por exemplo, podem ser de maçã e groselha-negra, chocolate ou mirtilo
[00166] Um processo apropriado para preparar uma barra de alimento envolve aquecer os sucos de fruta a aproximadamente 100 °C para remover alguma umidade, seguido por mistura em ingredientes secos e pasteurização. Os conteúdos do misturador então podem ser esvaziados nas bandejas ou esteiras e enrolados a uma altura adequada, tipicamente 10 - 15 mm, usando um rolo industrial. Ventiladores podem ser empregados para resfriar a mistura durante este processo, depois do qual as barras podem ser cortadas no tamanho requerido usando guilhotinas mecânicas. Barras podem ser empacotadas individualmente por sistema de embalagem contínua em lâmina de alumínio para reter o frescor.
[00167] Barras de 40 g são uma unidade de dosagem adequada e devem ser consumidas antes do exercício.
EXEMPLO 6
[00168] O inventor também examinou a eficácia de uma composição preferida de acordo com a invenção fabricada na forma de um gel conforme descrito no exemplo 5, na prevenção da ativação da plaqueta e sistema de coagulação e o aumento nos níveis plasmáticos de IL-6 com um período estabelecido de exercício conduzido a 70 % de VO2 max. 6.1 . MÉTODOS 6.1.1 Sujeitos
[00169] Três sujeitos machos saudáveis, de 18 - 55 anos de idade, cujo VO2 máximo foi previamente determinado foram recrutados. 6.1.2 Suplementos
[00170] Dois géis de teste foram preparados, conforme descrito no exemplo 5. Géis foram embalados em sacos de lâmina de volume de 60 mL. O gel de tratamento (FF) continha 3 g de extrato de tomate solúvel em água (WSTC) 5,4 g de suco de acelga concentrado equivalente a aproximadamente 100 mg de nitrato de dieta e aproximadamente 200 μg de ácido fólico. O gel placebo continha 3 g de xarope de glicose no lugar desta mistura. 6.1.3 Protocolo de Exercício
[00171] Todos os sujeitos assumiram dois protocolos de exercício, separados em pelo menos 72 horas. Sujeitos se apresentaram na unidade da pesquisa em uma condição de jejum e uma amostra de sangue de linha de base foi retirada usando tricitrato de sódio como anticoagulante. Foi dado um café da manhã aos sujeitos, no qual um único gel de teste foi consumido, aleatoriamente designado como tratamento (FF) ou placebo (P). Depois de 90 minutos, uma amostra de sangue de pré-teste foi retirada. Sujeitos então submetidos a uma corrida de esteira de 20 minutos a 70 % de VO2max. Ao final da corrida na esteira, sujeitos correram a 90 % de VO2max até exaustão volitiva. Uma amostra de sangue pós-exercício foi retirada, depois da qual deu-se um lanche aos sujeitos e eles foram livres para partir. Sujeitos retornaram à unidade 72 horas depois e repetiram o dia de teste, incorporando o gel de teste restante. 6.1.5 Análise da amostra
[00172] Em 20 minutos de coleta, sangue total de citrato foi centrifugado a 2000 g por 20 minutos a temperatura ambiente para isolar plasma fraco em plaqueta. Alíquotas foram congeladas para determinação da capacidade de gerar trombina, um índice da atividade do sistema de coagulação, que foi medido usando um ensaio a base de fluorescência (Trombina Generation Assay, Technoclone, UK) e para a medição do plasma IL6 (por ELISA da Biosource, UK conforme descrito em 3.1.4). O plasma fraco em plaqueta restante foi usado imediatamente para medição das micropartículas circulantes, um índice da atividade das plaquetas circulante (conforme descrito em 3.1.3). 6.2 RESULTADOS
[00173] Os resultados dos experimentos descritos são mostrados em formato gráfico nas figuras 7, 8 e 9. 6.3 CONCLUSÕES
[00174] Em todo o experimento realizado no exemplo 6, o inventor foi capaz de mostrar e eficácia de uma combinação de WSTC, nitrato de dieta e ácido fólico na redução da ativação de plaquetas e no sistema de coagulação depois de 20 minutos de exercício moderado a árduo, comparado ao placebo. Esta redução na ativação hemostática foi acompanhada por uma redução na IL-6 plasmática circulante para o tratamento FF, comparado ao placebo.
[00175] A contagem de micropartícula de plaqueta foi usada neste experimento como um índice de ativação de plaqueta. A contagem da micropartícula de linha de base não alterou significativamente depois do consumo dos géis de teste nem nos grupos de teste FF nem no P. Entretanto, pós-exercício, o número de micropartículas de plaqueta circulante aumentou 1,9 vez no grupo placebo, comparado a 1,2 vez no grupo FF. Isto é, o tratamento FF pareceu reduzir a liberação induzida por exercício de micropartículas de plaqueta em torno de 70 %, comparado ao placebo.
[00176] A capacidade de geração da trombina não foi alterada da linha de base depois do consumo do gel P, mas foi reduzida em 19 % depois do consumo do gel FF (pré-exercício). Isto é provável devido a uma inibição aguda da função da plaqueta. Pós-exercício, a capacidade de geração de aumentou em 2,2 vezes no grupo de teste P. No grupo de teste FF, a capacidade de geração de trombina depois do exercício foi aumentada em 1,4 vez comparada aos níveis pré-exercício; isto representa um aumento da capacidade de gerar trombina da linha de base de 1,1 vez. Assim, enquanto que o exercício tomando ao mesmo tempo tratamento de placebo foi acompanhado por mais de 120 % de aumento da capacidade de geração de trombina na linha de base, tratamento FF efetivamente restringiu este aumento a 13 % da linha de base.
[00177] Níveis de IL6 da linha de base não foram afetados pelo consumo de qualquer gel (pré-exercício). Níveis de IL6 circulante aumentaram em 4,5 vezes no grupo placebo pós-exercício, enquanto que no grupo FF, os níveis aumentaram 2,6 vezes. Assim, exercício depois do tratamento FF resultou somente em 42 % do aumento no IL-6 plasmático observado depois do exercício depois do tratamento com placebo.
[00178] Em resumo, o consumo de tratamento com FF significativamente reduziu a liberação de micropartículas de plaqueta associada ao exercício e o aumento relacionado na capacidade de geração de trombina plasmática, bem como os níveis de IL-6 sistêmico induzido por exercício. Estes resultados mostram que a combinação preferida de WSTC, nitrato de dieta e ácido fólico pode beneficamente afetar a inflamação sistêmica induzida por exercício e, desta forma, demonstra que as composições de acordo com a invenção promoverão a recuperação de exercício.

Claims (13)

1. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende: (a) um extrato de tomate solúvel em água em que o extrato: (1) é incolor ou cor de palha; (2) consiste em componentes tendo um peso molecular menor que 1000; e (3) contém: (4) um ácido fenólico glicosilado ou um éster fenólico; (11) um flavonoide glicosilado; e (111) um nucleosídeo. (b) uma fonte de nitrato de dieta ou um precursor de óxido nítrico endógeno; e (c) ácido fólico ou um metabólito de ácido fólico que é 5- metoxitetraidrofolato ou tetraidrofolato.
2. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a fonte de nitrato de dieta é selecionada de um extrato solúvel em água de acelga, rúcula, espinafre, ruibarbo, morango e alface.
3. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o precursor de óxido nítrico endógeno é citrulina, glutamina ou arginina.
4. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que o ácido fenólico glicosilado ou éster fenólico é um ácido cinâmico glicosilado selecionado do grupo compreendendo ácido cafeoil-4-O-quínico, cafeoil-4-O-glicosídeo, coumaroil-4-O-glicosídeo (gluc/gal) e coumaroil-4-O- glicosídeo (dissacarídeo).
5. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que o ácido fenólico glicosilado ou éster fenólico é selecionado de: glicosídeo de ácido cafeico; hexose de ácido p- cumárico / di- hexose de hidrokaempferol; glicosídeo de ácido ferúlico e um derivado de ácido p-cumárico.
6. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que compreende um flavonóide glicosilado selecionado de quercetina - 3 -O-glicosídeo e rutina.
7. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que o nucleosídeo é selecionado do grupo compreendendo AMP, uridina, adenosina, guanosina ou GMP.
8. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada pelo fato de que é na forma de um produto nutracêutico, bebida, substância alimentar ou suplemento alimentar.
9. Composição de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que é na forma de um gel, pó, barra de alimento ou comprimido dispersível.
10. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento, redução, minimização ou prevenção de inflamação sistêmica induzida por exercício em um sujeito.
11. Composição de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo fato de o sujeito se exercita em uma intensidade que corresponde a mais que aproximadamente 60 % de VO2max.
12. Forma de dosagem, caracterizada pelo fato de que compreende a composição como definida em qualquer uma das reivindicações de 1 a 9 compreendendo entre 25 mg e 250 mg de nitrato.
13. Forma de dosagem, de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo fato de que compreende entre 10 μg e 500 μg de ácido fólico.
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