AT397095B

AT397095B - Verfahren zur herstellung neuer antibiotischer makrolite

Info

Publication number: AT397095B
Application number: AT0115486A
Authority: AT
Original assignee: American Cyanamid Co
Priority date: 1985-04-30
Filing date: 1986-04-29
Publication date: 1994-01-25
Also published as: NL193420C; SE503571C2; KR930011282B1; AU5676786A; LU86412A1; LV10314B; CA1335368C; JPH0819132B2; NL8601103A; ES557517A0; ES8802522A1; GEP19970833B; GB2176182B; ES557851A0; IL78621A0; DK160992B; IL78621A; IE59070B1; DK160992C; HUT46012A

Description

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AT 397 095 B

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung neuer antibiotisch«' Makrolite.

In der GB 8522699 wird die Herstellung der Antibiotika S541 beschrieben, die aus dem Fermentationsprodukt eines neuen Streptomyces sp.-Organismus isoliert werden können. Die Antibiotika S541 stellen eine Gruppe verwandter Verbindungen mit der folgenden Teilformel (0 dar: 15 20 25

OH

Es wurdenun eine weitere Gruppe von Verbindungen mit antibiotisch«: Aktivität gefunden, die durch chemische 30 Modifizierungder An tibiotikaS541hergestelltoderaus einer KultureinesMikroorganismusderGattungStreptomyces wie nachfolgend beschrieben isoliert werden kann. Die erfindungsgemäß erhaltenen neuen Verbindungen besitzen antibiotische Aktivität und/oder sind als Zwischenprodukte für die Herstellung weiterer aktiver Verbindungen und/ oder für die Isolierung und Reinigung der Antibiotika S541 brauchbar.

Dieerfindungsgemäß erhaltenen Verbindungen sind die 23-Keto-, 23-Deoxy- und 23-Hydroxy- oder substituierte 35 Hydroxy-Analoga der Antibiotika S541 mit einer Hydroxy- oder substituierten Hydroxygruppe in 5-Stellung.

Gegenstand der Erfindung ist deshalb ein Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel (Π): 40 45 50

(Π) -2- 55 5 AT 397 095 B' 10 15 20 25 30 35 40 45 50 worin R1 eine Methyl-, Ethyl- oder Isopropylgruppe bedeutet; R2 ein Wasserstoffatom oder die Gruppe OR5 (worin OR5 für eine Hydroxygruppe oder eine substituierte Hydroxygruppe mit bis zu 25 Kohlenstoffatomen steht) und R3 ein Wasserstoffatom bedeutet, oder R2 und R3 zusammen mit dem Kohlenstoffatom an das sie gebunden sind, eine >C=0-Gruppe bedeuten; und OR4 für eine wie oben definierte Gruppe OR5 steht und die Salze davon, mit der Maßgabe, daß OR4 eine von einer Methoxygruppe verschiedene substituierte Hydroxygruppebedeutet, wenn R2 für eine Hydroxygruppe steht Wenn die Verbindungen der Formel (I) als Zwischenprodukte verwendet werden, sind eine oder beide Groppen R2 und OR4 eine geschützte Hydroxygruppe. Die Erfindung umfaßt insbesondere auch daartige geschützte Verbindungen. Wenn die Groppen R2 oder OR4 in den Verbindungen der Formel (I) substituierte Hydroxygruppen darstellen, können sie gleich oder verschieden sein und Acyloxygruppen [z. B. eine Gruppe der Formel -OCOR^, -OCOjRp oder -OCSOR^ (worin R*> eine aliphatische, araliphatische oder aromatische Gruppe bedeutet beispielsweise eine Alkyl-, Alkenyl-, Alkinyl-, Cycloalkyl-, Aralkyl- oder Arylgruppe)] eine Formyloxygrappe, eine Gruppe OR2 (worin R2 die oben für R^ angegeboien Bedeutungen besitzt), eine Gruppe OSC^R** (worin R^ eine Cj^-Alkyl-oder Cö.io-Arylgruppe bedeutet), eine Silyloxygruppe, eine cyclische oder acyclische Acetaloxygrappe oder eine Gruppe 0C0(CH2)nC02R9 (worin R^ ein Wasserstoffatom oder eine wie oben für R6 definierte Gruppe und n für 0,1 oder 2 stehen) bedeuten. Wenn R^ oder R2 Alkylgruppen bedeuten, können sie beispielsweise C j .^-Alkylgruppen, wie Methyl, Ethyl, n-Propyl, i-Propyl, n-Butyl, i-Butyl, t-Butyl odern-Heptyl, sein. Diese Alkylgruppen könnai auch substituiert sein. Wenn R° eine substituierte Alkylgruppe bedeutet kann diese beispielsweise durch eine oder mehrere Gruppen substituiert sein, z. B. durch 2 oder 3 Halogenatome (wie Chlor- oder Bromatome) odereine Carboxy-, C 1.4-Alkoxy-(z. B. Methoxy, Ethoxy), Phenoxy- oder Silyloxygruppe. Wenn R2 eine substituierte Alkylgruppe bedeutet, kann diese durch einen Co 7-Cycloalkylrest, z. B. eine Cyclopropylgruppe, substituiert sein. Wenn oder R2 Alkenyl- oder Alkinylgrappen bedeuten, sind diese beispielsweise C2_8-Alkenylgrappen, z. B. eine AUylgrappe, oder C2.8-Alkinylgrappen. Wenn R® oder R2 Cycloalkylgruppen darstellen, sind diese beispielsweise C3. ^-Cycloalkylgruppen, wie Cs-T-Cvcloalkyl. R° kann somitbeispielsweiseeineCyclopropyl-, Cyclobutyl-,Cyclopentyl- oder Cyclohexylgruppe sein. R2 kann beispielsweise eine Cyclopentylgrappe sein. Wenn R^ oder R2 Aralkylgrappen bedeuten, haben sie vorzugsweise 1 bis 6 Kohlenstoffatome in der Alkyleinheit und die Arylgruppe(n) kann (können) carbocyclisch oder heterocyclisch sein und enthalten vorzugsweise 4 bis 15 Kohlenstoffatome, wie Phenyl. Beispiele derartiger Gruppen sind Phen-Cj.g-alkylgrappen, z. B. Benzyl- oder Phenethylgrappen. Wenn R^ oder R2 Arylgruppen darstellen, können diese carbocyclisch oder heterocyclisch sein und haben vorzugsweise 4 bis 15 Kohlenstoffatome. Beispielsweise kann es sich dabei um eine Phenylgruppe handeln. Wenn R2 oder -OR4 für eine Gruppe -OSC^R^ stehen, kann es sich beispielsweise um eine Methylsulfonyloxy-oder p-Toluolsulfonyloxygruppe handeln. Wenn R2 oder -OR4 eine cyclische Acetaloxygrappe bedeuten, kann diese beispielsweise 5 bis 7 Ringatome enthalten, und z. B. eine Tetrahydropyranyloxygrappe sein. Wenn R2 oder -OR4 eine Silyloxygruppe bedeuten, oder wenn R^ einen Silyloxysubstituenten enthält, kann die Silylgrappe drei Gruppen aufweisen, die gleich oder verschieden sein können, und ausgewählt sind unter Alkyl-, Alkenyl-, Alkoxy-, Cycloalkyl-, Aralkyl-, Aryl- und Aryloxygrappen. Derartige Gruppen können wie oben für R° angegebene Bedeutungen besitzen und umfassen insbesondere Methyl-, t-Butyl- und Phenylgruppen. Spezielle Beispiele derartiger Silvloxygrappen sind Trimethylsilyloxy und t-Butyldimethylsilyloxy. Wenn R2 oder -OR4 eine Gruppe 0C0(CH2)nC02R9 bedeuten, kann diese z. B. eine Gruppe OCOCO2R9 oder OCOCH2CH2CO2R9 sein, worin R^ ein Wasserstoffatom oder eine C ^.4-Alkylgruppe (wie Methyl oder Ethyl) bedeuten. Diejenigen Verbindungen der Formel (II), die eine saure Gruppe enthalten, können mit geeigneten Basen Salze bilden. Beispiele derartiger Salze sind die Alkalimetallsalze, wie Natrium- und Kaliumsalze. Eine bevorzugte Gruppe sind diejenigen Verbindungen der Formel (II), in der R* eine Methyl-, Ethyl- oder Isopropylgruppe bedeutet, R2 und -OR4, die gleich oder verschieden sein können, jeweils eine Gruppe -OR5 bedeuten (worin OR5 eine Hydroxygruppe oder eine substituierte Hydroxygruppe mit bis zu 25 Kohlenstoffatomen bedeutet) und R3 ein Wasserstoffatom bedeutet sowie die Salze davon, mit der Maßgabe, daß, wenn R2 eine -3- 55

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Hydroxygruppe bedeutet, OR4 eine von Methoxy verschiedene substituierte Hydroxygruppe bedeutet

Eine weitere bevorzugte Gruppe sind diejenigen Verbindungen der Formel (Π), in der eine Methyl-, Ethyl- oder Isopropylgruppe bedeutet R4 und R3 zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, eine Gruppe >0=0 bilden und OR4 eine Gruppe OR^ bedeutet (worin OR^ eine Hydroxygruppe oder eine substituierte 5 Hydroxygruppe mit bis zu 25 Kohlenstoffatomen bedeutet) sowie die Salze davon.

Eine weitere bevorzugte Gruppe sind die Verbindungen der Formel (Π), in der R1 eine Methyl-, Ethyl- oder Isopropylgruppe bedeutet, R2 und R3 jeweils ein Wasserstoffatom bedeuten und OR4 eine Gruppe 0R-* bedeutet (worin OR^ eine Hydroxy- oder substituierte Hydroxygruppe mit bis zu 25 Kohlenstoffatomen bedeutet) und die Salze davon. 10 Bei den Verbindungen der Formel (II) bedeutet die Gruppe R* vorzugsweise eine Isopropylgruppe.

Die Gruppe R2 bedeutet vorzugsweise ein Wasserstoffatom oder eine Hydroxygruppe oder eine Gruppe der F(Hmel-OCOR^[worinR^füreineCi.g-A]kylgnippe(diegegebenenfallsduicheineCi4-Alkoxygruppe substituiert ist) oder eine phen-C^-Alkylgruppe steht], -OCC^R^ (worin R*> eine Cj.g-Alkylgruppe bedeutet, die gegebenenfalls durch ein bis drei Halogenatome substituiert ist, z. B. Trichlorethyö, -OCOCO^H. -OR2 (worin R2 für 15 C^.g-Alkyl, C^-Cycloalkyl, Allyl oder Cyclopropylmethyl steht) oder R2 und R3 bilden zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind eine >C=0-Gruppe. Insbesondere bevorzugt bedeutet R2 ein Wasserstoffatom oder eine Ethoxy-, n-Propoxy-, n-Butoxy-, Cyclopropylmethoxy-, Acetoxy-, Phenacetoxy-, · Propionoxy-, Isobutyrionoxy- oder Cyclopropancarbonyloxygruppe oder R2 und R3 bilden zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, eine >C=0-Gruppe. 20 Die Gruppe -OR4 in den Veibindungen der Formel (Π) ist vorzugsweiseeine Hydroxy-, Methoxy-, Acetoxy- oder

Methyloxycarbonyloxygruppe.

Wichtige aktive erfindungsgemäß erhaltene Verbindungen sind diejenigen der Formel (Π), in der R* eine Methyl-, Ethyl- oder insbesondere Isopropylgruppe bedeutet, R2 ein Wasserstoffatom oder eine Ethoxy-, n-Propoxy-, n-Butoxy-, Acetoxy-, oder Propionoxygruppe bedeutet und R3 ein Wasserstoffatom bedeutet oder R2 und R3 25 zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, eine >C=0-Gruppe bilden, und OR4 eine Hydroxy-, Acetoxy- oder Methyloxycarbonyloxygruppe bedeutet

Insbesondere bevorzugte aktive Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind diejenigen der Formel (Π), in den R1 eine-Isopropylgruppe, R2 ein Wasserstoffatom, R3 ein Wasserstoffatom und OR4 eine Hydroxygruppe be-30 deuten; R* eine Isopropylgruppe, R2 eine Propionoxygruppe, R3 ein Wasserstoffatom und OR4 eine Hydroxygruppe bedeuten;

Rl eine Isopropylgruppe, R2 und R3 zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, eine CO-Gruppe und OR4 eine Hydroxygruppe bedeuten; 35 R* eine Isopropylgruppe, R2 eine Ethoxygruppe, R3 ein Wasserstoffatom und -OR4 eine Hydroxygruppe be deuten; und

Rl eine Isopropylgruppe, R2 eine n-Propoxygruppe, R3 ein Wasserstoffatom und -OR4 eine Hydroxygruppe bedeutet;

Rl eine Methylgruppe, R2 eine Acetoxygruppe, R3 ein Wasserstoffatom und OR4 eine Hydroxygruppe be-40 deuten;

Rl eine Äthylgruppe,R2 eine Acetoxygruppe, R3 ein Wasserstoffatom undOR4 eine Hydroxygruppe bedeuten; R* eine Isopropylgruppe, R2 eine Acetoxygruppe, R3 ein Wasserstoffatom und OR4 eine Hydroxygruppe bedeuten; R1 eine Isopropylgruppe, R2 eine n-Butoxygruppe, R3 ein Wasserstoffatom und OR4 eine Hydroxygruppe 45 bedeuten.

Wie bereits erwähnt, können die erfindungsgemäß erhaltenen Verbindungen als Antibiotika und/oder als Zwischenverbindungen für die Herstellung weiterer aktiver Verbindungen und/oder für die Isolierung und Reinigung der Antibiotika S541 Verwendung finden. Wenn die erfindungsgemäßen erhaltenen Verbindungen als Zwischenverbindungen verwendet weiden, können die R2 und/oder -OR4-Gruppen geschützte Hydroxygruppen 50 sein. Eine derartige Gruppe soll möglichst wenige weitere funktionelle Gruppen besitzen, um zusätzlicheReaktionen zu vermeiden, und soll die selektive Regenerierung einer Hydroxygruppe erlauben. Beispiele für geschützte Hydroxygruppen sind bekannt und sind zum Beispiel in "Protective Groups in Organic Synthesis" bei Theodora W. Greene (Wiley-Interscience, New York 1981) und "Protective Groups in Organic Chemistry" bei JFW McOmie (Plenum Press, London, 1973) beschrieben. 55 Beispiele für geschützte Hydroxygruppen (R2 und OR4) sind Phenoxyacetoxy, Silyloxyacetoxy (z. B.

Trimethylsiloxyacetoxy und t-Butyldimethylsilyloxyacetoxy), und Silyloxy, wie Trimethylsilyloxy und t-Butyldimethylsilyloxy. Erfindungsgemäße Verbindungen, die derartige Gruppen enthalten, sind in erster Linie als -4-

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Zwischenverbindungen brauchbar. Andere Gruppen, wie Acetoxy, können geschützte Hydroxygruppen darstellen, sie können aber auch in aktiven Endprodukten anwesend sein.

Weitere aktive erfmdungsgemäß erhaltene Verbindungen, die auch als Zwischenverbindungen brauchbar sind, sinddiejenigen der Formel (Π), in der Rheine -OCOCC^H-Gruppe bedeutet. Diese Verbindungen sind insbesondere 5 für die Isolierung und Reinigung der Antibiotika S541 brauchbar. Eine in diesem Zusammenhang besonders nützliche Verbindung ist die Verbindung der Formel (Π), in der R1 eine Isopropylgruppe bedeutet, R2 für die Gruppe -OCOCO2H steht, r3 ein Wasserstoffatom bedeutet und OR^ eine Hydroxygruppe bedeutet Diese Verbindung kann vorteilhafterweise für die Isolierung undReinigung der Antibiotika S541 der unten beschriebenen Formel (V), in der R^a eine Isopropylgruppe und R ein Wasserstoffatom bedeuten, verwendet werden. Die in nicht gereinigt» 10 Form vorliegenden Verbindungen der Formel (V) kann man in die entsprechenden Verbindungen der Formel (II), in der R2 für -OCOCO2H steht, überführen und isolieren, z. B. in kristalliner Form. Die Verbindungen der Formel (V) können dann in im wesenüichen reiner Form aus letzteren Verbindungen unter Anwendung der hierin beschriebenen Verfahren wieder erzeugt werden. Dielsolierungs-undReinigungsverfahren sind ebenfalls Gegenstand der Erfindung. 15 Die erfmdungsgemäß erhaltenen Verbindungen besitzen antibiotische Aktivität, z. B. antihelmintische Aktivität, beispielsweise gegen Nematoden, und insbesondere anti-endoparasitische und anti-ektoparasitische Aktivität

Ektoparasiten undEndoparasiten infizieren Menschen und viele Tiere und sind insbesondere bei Farmtieren, wie Schweinen, Schafen, Rindern, Ziegen, Geflügel und Pferden sowie bei Haustieren, wie Hunden, Katzen, weit verbreitet Die Parasiteninfektion des Tierbestandes, die zu Anämie, Unterernährung und Gewichtsverlust führt, ist 20 deshalb auf der ganzen Welt ein wesentlicher Faktor für den wirtschaftlichen Verlust

Beispiele von Endoparasitengattungen, die Tiere und/oder Menschen infizieren, sind Ancylostoma, Ascaridia, Ascaris, Aspicularis, Brugia, Bunostomum, Capillaria, Chabertia, Cooperia, Dictyocaulus, Dirofilaria, Dracunculus, Enterobius, Haemonchus, Heterakis, Loa, Necator, Nematodirus, Nematospiroides (Heligomoroides), Nippostrongylus, Oesophagostomum, Onchocerca, Ostertagia, Oxyuris, Parascaris, Strongylus, Strongyloides, 25 Syphacia, Toxascaris, Toxocara, Trichonema, Trichostrongylus, Trichinella, Trichuria, Uncinaria und Wuchareria.

Beispiele von Ektoparasiten, die Tiere und/oder Menschen infizieren, sind arthropode Ektoparasiten, wie beißende Insekten, Schmeißfliegen, Flöhe, Läuse, Milben, saugende Insekten, Zecken und weitere zweiflügelige Schädlinge.

Beispiele von Ektoparasitengattungen, die Tiere und/oder Menschen infizieren, sind Ambylomma, Boophilus, 30 Chorioptes, Culliphore, Demodex, Demallenia, Dermatobia, Gastrophilus, Haematobia, Haematopinus, Haemophysalis, Hyalomma, Hyperderma, Ixodes, Linognathus, Lucilia, Melophagus, Oestrus, Otobius, Otodectes, Psorergates, Psoroptes, Rhipicephalus, Sarcoptes, Stomoxys und Tabanus.

Es hat sich gezeigt, daß die erfindungsgemäß erhaltenen Verbindungen sowohl in vitro als auch in vivo gegenüber vielen Endoparasiten und Ektoparasiten wirksam sind. Insbesondere wurde gefunden, daß die erfindungsgemäß 35 erhaltenen Verbindungen gegen parasitische Nematoden, wie Haemonchus contortus, Ostertagia drcumcincta, Trichostrongylus colubiformis, Dictyocaulus viviparis, Cooperia oncophera, Ostertagia ostertagi, Nematospiroides dubius und Nippostrongylus braziliensis, und parasitische Milben, wie Sarcoptes sp. und Psoroptes sp. wirksam sind.

Die erfindungsgemäß erhaltenen Verbindungen sind deshalb zur Behandlung von endoparasitischen und/oder ektoparasitischen Infektionen beim Menschen und bei Tieren geeignet. 40 Die Parasitenart variiert in Abhängigkeit vom Wirt und der vorherrschenden Stelle der Infektion. So infizieren beispielsweise Haemonchus contortus, Ostertagia drcumcincta und Trichostrongylus colubiformis im allgemeinen Schafe und finden sich vorherrschend im Magen und im Dünndarm. Dagegen infizieren Dictyocaulus viviparus, Cooperia oncophora und Ostertagia ostertagi im allgemeinen Rinder und treten bevorzugt in der Lunge, im Darm oder im Magen auf. 45 Die antibiotische Aktivität der erfindungsgemäß erhaltenen Verbindungen kann beispielsweise anhand ihrer in vitrp-Aktivität gegenüber freilebenden Nematoden, wie Caenorhabiditis elegans, gezeigt werden.

Darüber hinaus sind die erfindungsgemäß erhaltenen Verbindungen als anti-fungisch wirkende Mittel, beispielsweise gegenüber Candida sp.-Stämmen, wie Candida albicans und Candida glabrata, sowie gegenüber Hefen, wie Saccharomyces carlsbergensis, brauchbar. 50 Die erfindungsgemäß erhaltenen Verbindungen sind auch zur Bekämpfung von Insekten, Acarina- und

Nematodenschädlinge in der Landwirtschaft, im Gartenbau, in der Forstwirtschaft, in der öffentlichen Gesundheitspflege und bei Lagerbeständen brauchbar. Schädlinge bei Boden- und Pflanzenfhichten, einschließlich Getreide, (beispielsweise Weizen, Gerste, Mais und Reis), Gemüse (beispielsweise Soja), Früchte (beispielsweise Äpfel, Weintrauben und Zitrusfrüchte) sowie Wurzelfifichte (beispielsweise Zuckerrüben, Kartoffel) können 55 ebenfalls erfolgreich behandelt werden.

Beispiele derartiger Schädlinge sind Fruchtmilben und Aphiden, wie Aphis fabae, Aulacorthum circumflexum, Myzus mersicae, Nephotettix cincticeps, Nilparvata lugens, Panonychus ulmi, Phorodon humuli, Phyllocoptruta -5-

AT 397 095 B oleiYora, Tetranychus urticae und Vertreter des Stammes Trialeuroides; Nematoden, wie Vertreter des Stammes Aphelencoides, Globodera, Heterodera, Meloidogyne und Panagrellus; Lepidoptera wie Heliothis, Plutella und Spodoptera; Komwürmem, wie Anthonomus grandis und Sitophilus granarius; Mehlkäfer, wie Tribolium castaneum; Fliegen wie Musca domestica; Feuerameisen; Minierfliege; Pearpsylla; Thrips tabaci; Küchenschaben, wie Blatella 5 germanica und Periplaneta americana und Moskiten, wie Aedes aegypti. Erfindungsgemäß wird deshalb ein Verfahren zur Herstellung der die wie oben definierten Verbindungen der Formel (Π), die als Antibiotika verwendet werden können, zur Verfügung gestellt Insbesondere werden diese Verbindungen zur Behandlung von endoparasitischen, ektoparasitischen und/oder Pilzinfektionen bei Mensch undTier und als Pestizide zur Bekämpfung von Zecken, Acarina- und Nematodenschädlingen in der Landwirtschaft, im Gartenbau oder der Forstwirtschaft 10 verwendet Sie können allgemein auch als Pestizide zur anderweitigen Bekämpfung oder Kontrolle von Schädlingen beispielsweise in Lagerhäusern, Gebäuden oder anderen Stellen, an denen sich diese Schädlinge befinden, verwendet werden. Die Verbindungen werden im allgemeinen entweder dem Wirt (Mensch, Tier, Pflanzen oder Vegetation) oder den Schädlingen selbst verabreicht oder an deren Aufenthaltsort aufgebracht.

Die erfindungsgemäß erhaltenen Verbindungen könnten zur Verabreichung in jeder in der Veterinär- oder 15 Humanmedizin geeigneten Weise formuliert werden. Derartige Mittel können in üblicher Weise zusammen mit einem oder mehreren geeigneten Trägern oder Excipientien vorliegen. Dieerfindungsgemäßen Mittel sind insbeson-derefürdieparenterale(einschließlichderintramammären Verabreichung),orale,rektale,topischeophthalmologische, nasale genital-urinäre Anwendung oder für die Anwendung als Implantat formuliert.

Die erfindungsgemäß erhaltenen Verbindungen können zur Anwendung in der Veterinär· und Humanmedizin 20 als Injektionspräparat formuliert sein und in Form einer Dosiseinheit, in Ampullen oder anderen Behältern für eine Dosiseinheit oder in Mehrfachdosierungsbehältern vorliegen, falls erforderlich unter Zugabe eines Konservierungsmittels. Injektionspräparate können in Form von Suspensionen, Lösungen oder Emulsionen in öligen oder wäßrigen Trägem vorliegen und können Formuliemngshilfsmittel, wie Suspendiermittel, Stabilisierungsmittel, Solubilisierungsmittel und/oder Dispergiermittel enthalten. Alternativ kann der Wirkstoff als steriles Pulver, das vor 25 Gebrauch mit einem geeigneten Träger, wie steriles, pyrogenfreies Wasser, rekonstituiert wird, vorliegen. Ölige Träger umfassen Polyalkohole und deren Ester, wie Glycerinester, Fettsäuren, Pflanzenöle, wie Arachisöl oder Baumwollsamenöl, Mineralöle, wie flüssiges Paraffin und Ethyloleat und ähnliche Verbindungen. Weitere Träger, wie Propylenglykol, können ebenfalls zur Anwendung kommen.

Tierarzneimittel können auch als intramammäre Zubereitungen in Grundlagen mit lang anhaltender Wiikungs-30 dauer oder in Grundlagen, die den Wirkstoff rasch freisetzen, formuliert werden. Derartige Mittel können vorliegen, inForm steriler Lösungen oder Suspensionen, in wäßrigen oder öligen Trägem, diegegebenenfallsein Verdickungsoder Suspendiermittel enthalten, wie Hart- oder Weichparaffine, Bienenwachs, 12-Hydroxystearin, hydriertes CastoröL Aluminiumstearate oder Glycerylmonostearat bi den Mitteln können übliche nicht-ionische, kationische oder anionische grenzflächenaktive Mittel allein oder 35 in Kombination zur Anwendung kommen.

Zur Anwendung in der Tier· oder Humanmedizin können die erfindungsgemäß erhaltenen Mittel auch in einer für die orale Verabreichung geeigneten Form, gegebenenfalls zusammen mit Geschmacks- und Farbstoffen, zur Anwendung kommen, beispielsweise in Form von Lösungen, Sirupen oder Suspensionen oder als Trockenpulver, das vor Gebrauch mit Wasser oder einem anderen geeigneten Träger rekonstituiert wird. Feste Arzneiformen, wie 40 Tabletten, Kapseln, Pastillen, Pillen, Boli, Pulver, Pasten, Granulate, Kugeln oder Prämixzubereitungen, können ebenfalls zur Anwendung kommen. Feste und flüssige Zubereitungen zur oralen Anwendung können anhand bekannter Methoden hergestellt werden. Derartige Zubereitungen können auch einen oder mehrere pharmazeutisch verträgliche Träger und Excipientien, die in fester oder flüssiger Form vorliegen können, enthalten. Beispiele geeigneter pharmazeutisch verträglicher Träger zur Anwendung in festen Dosierungsformen sind Bindemittel (z, B. 45 pregelatinisierte Maisstärke, Polyvinylpynolidon oder Hydroxypropylmethylcellulose); Füllstoffe (z. B. Lactose, mikro-kristalline Cellulose oder Calciumphosphat); Gleitmittel (z. B. Magnesiumstearat, Talkum oder Silika); Disintegriermittel (z. B. Kartoffelstärke oder Natriumstärkeglykolat); oder Netzmittel (z. B. Natriumlanrylsulfat). Tabletten können anhand bekannter Verfahren beschichtet werden.

Beispiele geeigneter pharmazeutisch verträglicher Additive zur Anwendung in flüssigen Dosierungsformen 50 umfassen Suspendiermittel (z. B. Sorbitsirup, Methylcellulose oder hydrierte genießbare Fette); Emulgiermittel (z. B. Lecithin oder Akazia); nicht-wäßrige Träger (z. B. Mandelöl, ölige Ester oder Ethylalkohol); und Konservie-rungsmittel (z. B. Methyl- oderPropyl-p-hydroxybenzoateoder Sorbinsäure); Stabilisier- und Solubilisierungsmittel sind ebenfalls umfaßt

Pasten zur oralen Verabreichung können anhand bekannter Verfahren formuliert weiden. Beispiele geeigneter 55 pharmazeutisch verträglicher Additive zur Anwendung in Pastenformulierungen sind Suspendier- oder Geliermittel, z. B. Aluminiumdistearat oder hydriertes Castoröl; Dispergiermittel, z. B. Polysorbate, nicht-wäßrige Träger, z. B. Arachisöl oder ölige Ester, Stabilisier- und Solubilisierungsmittel. Die erfindungsgemäß erhaltenen Verbindungen -6-

AT 397 095 B können in der Tiermedizin auch dadurch verabreicht werden, daß man sie der täglichen festen oder flüssigen Nahrung der Tiere einverleibt, z. B. als Teil des täglichen Tierfutters oder Trinkwassers.

Zur bukalen Verabreichung kann man die erfindungsgemäß erhaltenen Mittel als Tabletten, Pasten oder Pastillen in üblicher Weise formulieren. 5 Als Tiermedizin können die erfindungsgemäß erhaltenen Verbindungen auch oral in Form eines Arzneitranks verabreicht weiden, beispielsweise als Lösung, Suspension oder Dispersion des Wirkstoffes zusammen mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger oder Excipienten.

Die erfindungsgemäß erhaltenen Verbindungen können beispielsweise auch als Suppositorien, die z. B. übliche zur Anwendung in der Veterinär- oder Humanmedizin geeignete Suppositoriengrundlagen enthalten, oder als 10 Pessare, die z. B. übliche Pessariengrundlagen enthalten, formuliert werden. Die eifmdungsgemäß erhaltenen Verbindungen können zur Anwendung in der Veterinär- und Humanmedizin auch in zur topischen Verabreichung geeigneter Form formuliert werden, beispielsweise als Salbe, Creme, Lotion, Shampoo, Pulver, Pessar, Spay, Dip, Aerosol, Tropfen (z. B. Augen- oder Nasentropfen) oder als Pour-on-Formulierung. Salben und Cremes können beispielsweise miteinerwäßrigen oderöligenGrundlage unterZugabegeeigneter Verdickungs-und/oderGeliermittel 15 formuliert werden. Augensalben können steril unter Verwendung sterilisierter Komponenten hergestellt werden. Pour-on-Formulierung können für tiermedizinische Zwecke beispielsweise als Öl, das organische Lösungsmittel enthält, zusammen mit Formulierhilfsmittel, wie Stabilisier- und Solubilisierungsmittel, formuliert werden.

Lotionen können mit einer wäßrigen oder öligen Grundlage formuliert werden und enthalten außerdem im allgemeinen ein oder mehrere Emulgiermittel, Stabilisierungsmittel, Dispergiermittel, Suspendiermittel, 20 Verdickungsmittel oder Färbemittel.

Pulver können mit Hilfe geeigneter Pulvergrundlagen hergestellt weiden. Tropfen können mit einer wäßrigen oder nicht-wäßrigen Grundlage, dieauch ein odermehrere Dispergiermittel, Stabilisiermittel, Solubilisiermittel oder Suspendiermittel enthält, formuliert werden. Sie können auch Konservierungsmittel enthalten.

Zur topischen Verabreichung mittels Inhalation werden die erfindungsgemäß erhaltenen Verbindungen in der 25 Tier- oder Humanmedizin mit Hilfe eines Aerosolsprays oder eines Insufflators verabreicht.

Dieerfindungsgemäßerhaltenen Verbindungenkönnen auchzusammenmitanderen pharmazeutischen Wirkstoffen verabreicht werden.

Die tägliche Gesamtdosis an erfindungsgemäß erhaltenen Verbindungen liegt in der Tier- und Humanmedizin im Bereich von 1 bis 2000 pg/kg Körpergewicht, vorzugsweise 50 bis 1000 pg/kg. Diese Menge kann in mehreren 30 Dosen, beispielsweise Ibis 4 x pro Tag, gegebenen werden.

Die erfmdungsgemäß erhaltenen Verbindungen können zur Anwendung im Gartenbau oder in der Landwirtschaft in jeder geeigneten Weise formuliert werden. DerartigeFormulierungen umfassen trockeneoder flüssigeZubereitungen, beispielsweise Stäube, einschließlich Staubgrundlagen oder -konzentrate, Pulver einschließlich löslicher oder benetzbarer Pulver, Granula, einschließlich Mikrogranula und dispergierbare Granula, Pellets, fließfähige 35 Zubereitungen, Emulsionen, wie verdünnte Emulsionen oder emulgierbare Konzentrate, Dips, wie Wurzel- oder Samendips, Saatbeizmittel (seed dressings), Saatpellets, Ölkonzentrate, Öllösungen, Injektionen, z. B. Stamminjektionen, Sprays, Rauch- und Nebelformulierungen.

Derartige Formulierungen enthalten die Verbindungen im allgemeinen zusammen mit einem geeigneten Träger oder Verdünnungsmittel. Diese Träger können flüssig oder fest sein. Sie sollen die Anwendung der Verbindung 40 unterstützen, indem sie diese an der zu verabreichenden Stelle dispergieren oder sie sollen eine Formulierung ergeben, aus der der Benutzer eine dispergierbare Zubereitung hersteilen kann. Derartige Formulierungen sind bekannt und können anhand üblicher Methoden hergestellt werden, wie Vermischen und/oder Vermahlen des Wirkstoffes (der Wirkstoffe) zusammen mit dem Träger oder Verdünnungsmittel, z. B. einem festen Träger, Lösungsmittel oder grenzflächenaktiven Mittel. 45 ZurAnwendunginFormulierungen, wieStäuben, GranulaundPulvemgeeignetefesteTrägerkönnenbeispielsweise aus.natürlichen Mineralfüllstoffen, wie Diatomeenerde, Talkum, Kaolinit, Montmorillonit, Pyrophillit oder Attapulgit ausgewählt werden. Hochdispergierte Kieselsäure oder hochdispergierte absorbierende Polymere können dem Mittel gewünschtenfalls einverleibt werden. Granulierte adsoiptive Träger, die zur Anwendung kommen können, können poröse Träger (wie Bimsstein, Ziegelmehl, Sepiolit oder Bentonit) oder nicht-poröse Träger (wie Calcit oder 50 Sand) sein. Geeignete pregranulierte Materialien, die zur Anwendung kommen können, können organischer oder anorganischer Natur sein und umfassen beispielsweise Dolomit und vermahlene Pflanzenrückstände.

AlsTrägeroderVerdünnungsmittelgeeigneteLösungsmittel sind beispielsweise aromatischeKohlenwasseistoffe, aliphatische Kohlenwasserstoffe, Alkohole und Glykole oder deren Ether, Ester, Ketone, Säureamide, stark polare Lösungsmittel, gegebenenfalls epoxydierte Pflanzenöle und Wasser zu nennen. 55 Übliche nicht-ionische, kationische oder anionische grenzflächenaktive Mittel, z. B. ethoxylierte Alkylphenole und Alkohole, Alkalimetall- oder Erdalkalimetallsalze von Alkylbenzolsulfonsäuren, Lignosulfonsäure oder Sulfobemsteinsäure oder Sulfonate von polymeren Phenolen mit guten Emulgier-, Dispergier- und/oder Netz- -7-

AT 397 095 B eigenschaften, können in den Mitteln ebenfalls zur Anwendung kommen und zwar allein oder in Kombination.

Stabilisiennittel, Mittel zum Verhindern des Verbackens, Antischaummittel, Viskositätsregulatoren, Bindemittel und Adhäsivstoffe, Fotostabilisatoien sowie Düngemittel, appetitanregende Mittel oder weitere Wirkstoffe können den Mitteln gewünschtenfalls einverleibt werden. Die erfindungsgemäß erhaltenen Verbindungen können auch in 5 Mischung mit anderen Insektiziden, Akariziden und Nematiziden formuliert werden.

In den Formulierungen beträgt die Konzentration an aktivem Material im allgemeinen von 0,01 bis 99 Gew.-%, vorzugsweise 0,01 bis 40 Gew.-%.

Die Handelsprodukte werden im allgemeinen als Konzentrat zur Verfügung gestellt, das bei Gebrauch auf eine geeignete Konzentration, beispielsweise 0,001 bis 0,0001 Gew.-%, verdünnt wird. 10 Wenn die erfindungsgemäß erhaltenen Verbindungen in der Tiermedizin oder im Gartenbau und in der

Landwirtschaft zur Anwendung kommen undFermentationsprodukte sind, kann es wünschenswert sein, die gesamte Fermentationsbrühe als Quelle für die Wirkstoffe zu verwenden. Es kann auch zweckmäßig sein, die getrocknete, (Mycel-enthaltende) Brühe oder das Mycel, das von der Brühe abgetrennt und pasteurisiert oder vorzugsweise getrocknet wurde, beispielsweise durch Sprüh-, Gefrier- oder Trommeltrocknen, zu verwenden. Gewünschtenfalls 15 kann die Brühe oder das Mycel den Mitteln zusammen mit üblichen inerten Trägem, Excipientien oder Verdünnungsmitteln, wie oben beschrieben, einverleibt werden.

Dieerfindungsgemäß erhaltenen antibiotischen Verbindungen können in Kombination mit weiteren Wirkstoffen verabreicht oder zur Anwendung kommen.

Insbesondere können die erfindungsgemäß erhaltenen antibiotischen Verbindungen zusammen mit den 20 Antibiotikaverbindungen S541 Oder mit anderen antibiotischen Verbindungen gemäß der Erfindung zum Einsatz kommen. Dies kann beispielsweise der Fall sein, wenn Fermentationsrohprodukte anhand eines erfindungsgemäßen Verfahrens ohne vorherige oder nachfolgende Abtrennung zur Umsetzung gebracht werden; dies ist vorzugsweise bei Anwendung der Verbindungen beispielsweise in der Landwirtschaft der Fall, wo es wesentlich ist, die Produktionskosten niedrig zu halten. 25 Dieerfindungsgemäß erhaltenen Verbindungen können anhand der nachstehend erläuterten Verfahren hergestellt weiden. Bei einigen dieser Verfahren kann es erforderlich sein, eine Hydroxygruppe in 5- oder 23-Stellung im Ausgangsmaterial vor Durchführung der beschriebenen Umsetzung zu schützen. Nach erfolgter Umsetzung ist es in solchen Fällen notwendig, die Schutzgruppe von der Hydroxygruppe zu entfernen, um erfindungsgemäß die gewünschte Verbindung zu erhalten. Übliche Methoden zum Schutz der Hydroxygruppe und zur Entfernung der 30 Schutzgruppen, wie beispielsweise in den oben erwähnten Artikeln von Greene und McOmie, können Anwendung finden.

So kann beispielsweise eine Acylgruppe, wie eine Acetylgruppe, mittels basischer Hydrolyse, z. B. unter Verwendung von Natrium- oder Kaliumhydroxyd in wäßrigem Alkohol, oder mittels saurer Hydrolyse z. B. unter Verwendung konzentrierter Schwefelsäure in Methanol, entfernt werden. Acetalgruppen, wie die Tetrahydro-35 pyranylgruppe kann man beispielsweise mittels saurer Hydrolyse (unter Anwendung einer Säure, wie Essig- oder

Trifluoressigsäure oder einer verdünnten Mineralsäure) entfernen. Silylgruppen können unter Anwendung von Fluoridionen (z. B. aus einem Tetraalkylammoniumfluorid, wie tetra-n-Butylammoniumfluorid) Fluorwasserstoff in wäßrigem Acetonitril oder ein» Säure, wiep-Toluolsulfonsäure (z. B. in Methanol) entfernt werden. Arylmethyl-gruppen kann man durch Behandlung mit einer Lewis-Säure (z. B. Bortrifluorid-Etherat) in Gegenwart eines Htiols 40 (z. B. Ethanthiol) in einem geeigneten Lösungsmittel wie Dichlormethan, beispielsweise bei Raumtemperatur entfernen. Die selektive Entfernung der Schutzgruppe in 5-Stellung von einer erfindungsgemäß erhaltenen 5,23-Disilylverbindungkann unter Verwendung von Tetra-n-butylammoniumfluorid erfolgen. Die selektive Entfernung der Schutzgruppe in 5-Stellung von einer 5,23-Diacetoxyverbindung erfolgt dagegen unter Verwendung von Natriumhydroxyd in wäßrigem Methanol. 45 Die erfindungsgemäß erhaltenen Verbindungen, bei denen R2 und/oder -OR4 eine substituierte Hydroxygruppe bedeuten, können im allgemeinen helgestellt werden, indem man die Antibiotika-Verbindungen S541 (z. B. die Verbindungen der unten angegebenen Formel (V)) oder der 5- oder 23-O-monosubstituierten Derivate davon mit Reagentien zur Reaktion bringt, die zur Bildung einer substituierten Hydroxygruppe dienen.

Im allgemeinen ist die 5-Hydroxygruppe reaktiver als die 23-Hydroxygruppe. Die Schutzgruppen lassen sich 50 deshalb leichter von den Hydroxygruppen in 5-Stellung als von den Hydroxygruppen in 23-Stellung entfernen. Erfindungsgemäß erhaltene 5-monosubstitnierte Verbindungen können im allgemeinen durch Umsetzung der 5,23-unsubstituierten Hydroxy-Antibiotika-Verbindungen S541 mit einer begrenzten Menge an Reaktionspartnem unter milden Bedingungen hergestellt werden. Dagegen werden die 5,23-disubstituierten Verbindungen unter Verwendung größerer Mengen an Reaktionspartnem und unter wenig» milden Bedingungen und/oder unter 55 Verw»idung eines Katalysators h»gestellt. Erfindungsgemäß erhaltene 23-monosubstituierte Verbindungen kann man herstellen, indem man zuerst eine 5,23-substituierte Verbindung bildet und die Schutzgruppe in 5-Stellung dann selektiv entfernt. Erfindungsgemäß erhaltene 5,23-disubstituierte Verbindungen mit unterschiedlichen Substituenten -8-

AT 397 095 B in 5- bzw. 23-Stellung kann man durch Umsetzung einer in 5· oder 23-Stellung monosubstituierten Verbindung mit einem Reagens, das zur Bildung einer verschieden substituierten Hydroxygruppe an der anderen Stellung dient, herstellen.

Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der allgemeinen Formel (Π), in der einer der Reste R2 oder -OR4 eine substituierte Hydroxygruppe bedeutet und der andere eine Hydroxy- oder substituierte Hydroxygruppe wie oben definiert bedeutet, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man eine Verbindung der allgemeinen Formel (QI):

OR

5 (worinR^dieoben angegebenenBedeutungen besitzt undeinerderReste-OR4undOR^eineHydroxygnippebedeutet und der andere eine Hydroxy- oder substituierte Hydroxygruppe bedeutet) mit einem Reagens zur Reaktion bringt, das zur Umwandlung einer Hydroxygruppe in eine substituierte Hydroxygruppe dient, und gewiinschtenfalls anschließend aus einer Verbindung der Formel (Π), in der R2 und -OR4 beide eine substituierte Hydroxygruppe bedeuten, die Schutzgruppe selektiv entfernt, wobei man eine Verbindung der Formel (Π) erhält, in der OR4 eine Hydroxygruppe und R4 eine substituierte Hydroxygruppe bedeuten.

Diese Reaktion ist im allgemeinen eine Acylierung, Formylierung, Sulfonylierung, Veretherung, Silylierung oder Acetalbildung.

Eine Acylierung kann beispielsweise unter Verwendung eines Acylierungsmittels erfolgen, beispielsweise eine Säure der Formel R^COOH oder ein reaktives Derivat davon, wie ein Säurehalogenid (z. B. Säurechlorid), Säureanhydridoderein aktivierter Ester,odereinreaktives Derivat einerKohlensäureR^OCOOHoderThiokohlensäuie R6OCSOH.

Die Acylierungen mit Säurehalogeniden und Säureanhydriden können gewünschtenfalls in Gegenwart eines säurebindenden Mittels erfolgen, wie ein tertiäres Amin (z. B. Triethylamin, Dimethylanilin oder Pyridin), anorganische Basen (Calciumcarbonat oder Natriumbicarbonat), und Oxirane, wie Niedrig-1,2-alkylenoxide (z. B. Ethylenoxyd oder Propylenoxyd), welche den bei der Acylierung freigesetzten Halogenwasserstoff binden.

Man kann Acylierungen unter Verwendung stark elektrophiler Säurechloride (z. B. Oxalylchlorid, Methoxyacetylchlorid,ChloracetylchloridoderBromacetylchlorid),vorzugsweise in Gegenwart eines Säurefängers, wie Calciumcarbonat, dazu benutzen, die 23-Stellung selektiv zu substituieren, um eine Verbindung der Formel QI) herzustellen, in der R2 für die Gruppe OR^ steht, wobei R^ eine substituierte Hydroxygruppe bedeutet und OR4 für eine Hydroxygruppe steht.

Acylierungen mit Säuren führt man zweckmäßigerweise in Gegenwart eines Kondensationsmittels durch, beispielsweise in Gegenwart eines Carbodiimids, wie N.N'-Dicyclohexylcarbodiimid oder N-Ethyl-N'-γ-dimethylaminopropylcarbodiimid; einer Carbonylverbindung, wie Carbonyldiimidazol; oder einem Isoxazoliumsalz, wieN-Ethyl-5-phenylisoxazoliumperchlorat.

Einen aktivierten Ester stellt man zweckmäßigerweise in situ her, beispielsweise unter Verwendung von -9-

AT 397 095 B 1-Hydroxybenzotriazol in Gegenwart eines Kondensationsmittels wie oben beschrieben. Alternativ kann der aktivierte Ester auch vorher gebildet werden.

Die Acylierang kann in wäßrigem oder nicht-wäßrigem Reaktionsmedium zweckmäßigerweise bei einer Temperatur im Bareich von -20 bis +100 °C, z. B. -10 bis +50 °C durchgeführt werden. 5 Die Formylierung kann unter V erwendung eines aktivierten Derivats der Ameisensäure, z. B.N-Formylimidazol oder Ameisen-Essigsäureanhydrid, unter Standardbedingungen erfolgen.

Die Sulfonylierung erfolgt mit einem reaktiven Derivat einer Sulfonsäure R^SOßH, wieeinem Sulfonylhalogenid, beispielsweise einem Chlorid R^SC^Cl oder einem Sulfonsäureanhydrid. Die Sulfonylierung wird vorzugsweise in Gegenwart eines säurebindenden Mittels, wie oben beschrieben, duichgeführt 10 Eine Veretherung erfolgt unter Verwendung eines Reagens der Formel R7Y (worin R7 die zuvor angegebenen

Bedeutungen besitzt und Y eine austretende Gruppe bedeutet, wie ein Chlor-, Brom- oder Iodatom oder eine Hydrocarbylsulfonyloxygruppe, wie Mesyloxy oder Tosyloxy oder eine Halogenalkanoyloxygruppe, wie Dichloracetoxy). Die Reaktion erfolgt, indem man ein Magnesiumalkoxyd unter Verwendung eines Grignaid-Reagens, wie ein Methylmagnesiumhalogenid, z. B. Methylmagnesiumiodid, bildet oder ein Trialkylsilylmethyl-15 magnesiumhalogenid, z. B. Trimethylsilylmethylmagnesiumchlorid, verwendet und anschließend mit dem Reagens R7Y behandelt

Alternativ kann die Reaktion in Gegenwarteines Silbersalzes, wie Silberoxyd, Silberperchlorat, Silbercarbonat oder Silbersalicylat oder Mischungen davon, erfolgen. Dieses System ist besonders geeignet wenn die Veretherung unter Verwendung eines Alkylhalogenides (z. B. Methyliodid) durchgeführt wird. 20 Die Veretherung kann zweckmäßigerweise in einem Lösungsmittel, wie einem Ether, z. B. Diethylether, erfolgen.

Die Acetalbildung erfolgt durch Umsetzung mit einem cyclischen oder acyclischen Vinylether. Diese Methode ist besonders brauchbar zur Herstellung von Tetrahydropyranylethem, wobei man Dihydropyran als Reagens verwendet oderzur Herstellung von 1 -Alkoxyalkylethem, wie 1-Ethoxyalkylether, wobei man einen Alkylvinylether 25 als Reagens verwendet Die Reaktion wird zweckmäßigerweise in Gegenwart eines starken Säurekatalysators, beispielsweise in Gegenwart einer Mineralsäure, wie Schwefelsäure oder einer organischen Sulfonsäure, wie p-Toluolsulfonsäure, in einem im wesentlichen wasserfreien Lösungsmittel, das keine Hydroxylgruppen enthält durchgeführt

Nicht-wäßrige Lösungsmittel, die in den obigen Reaktionen zur Anwendung kommen können, umfassen Ketone 30 (z. B. Aceton), Amide (z. B. Ν,Ν-Dimethylformamid, NJi-Dimethylacetamid oder Hexamethylphosporamid),

Ether (z. B. cyclische Ether, wie Tetrahydrofuran oder Dioxan und acyclische Ether wie Dimethoxyethan oder Diethylether), Nitrile (z. B. Acetonitril), Kohlenwasserstoffe, wie halogenierte Kohlenwasserstoffe (z. B. Methylenchlorid) und Ester, wie Ethylacetat sowie Mischungen von zwei oder mehreren derartiger Lösungsmittel.

Eine Silylierung kann durch Umsetzung mit einem Silylhalogenid (z. B. Chlorid), vorteilhafiterweise in 35 Gegenwart einer Base, wie Imidazol, Triethylamin oder Pyridin, unter Verwendung eines Lösungsmittels, wie Dimethylformamid, erfolgen.

In vielen Fällen, beispielsweise, wenn man eine 5,23-Dihydroxy Verbindung der Formel (III) als Ausgangsmaterial verwendet, erhält man eine Mischung an Endprodukten, z. B. eine Mischung von 5-monosubstituierten und 5,23-disubstituierten Derivaten. Diese können jedoch anhand üblicher Verfahren, wie Chromatographie, beispielsweise 40 Silikagel-Chromatographie oder HPLC, getrennt werden.

Gemäß einem weiteren erfindungsgemäßen Verfahren kann man eine Verbindung der Formel (Π), in derR^ und r3 jeweils ein Wasserstoffatom bedeuten, hersteilen, indem man in einer Verbindung der Formel (ΙΠ), in der R1 die zuvor angegebenen Bedeutungen besitzt und OR4 eine substituierte Hydroxygruppe und OR^ eine Hydroxygruppe bedeuten, die 23-Hydroxygruppe durch ein Wasserstoffatom ersetzt, anschließend von der Gruppe OR4, wenn eine 45 Verbindung gewünscht ist, in der OR4 eine Hydroxygruppe bedeutet, die Schutzgruppe entfernt und gewünschtenfalls erneut eine Substitution vernimmt um eine Verbindung der Formel (Π) herzustellen, in der OR4 eine substituierte Hydroxygruppe bedeutet

So kann eine Ausgangsverbindung der Formel (ΙΠ), in der OR4 eine substituierte Hydroxygruppe und OR^ eine Hydroxygruppe bedeutet mit einem Reagens zur Reaktion gebracht werden, das zu einem Austausch der 50 Hydroxygruppe gegen eine austretende Gruppe geeignet ist, wobei man eine Verbindung der allgemeinen Formel (TV) -10- 55

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L

erhält, [worin R* und -OR4 die eben angegebenen Bedeutungen besitzen und L ein Atom oder eine Gruppe bedeutet, welche durch Reduktion entfembar sind, beispielsweise durch homolytische Reduktion, wie die Gruppe R11OCSO-(wobei R^ für Ci^-Alkyl, Aryl wie Phenyl, oder (Ci_6-Alkyl)aryl wie die p-Tolyloxythiocarbonyloxygruppe steht)].

Geeignete Reagentien zur Einführung des Restes L sind beispielsweise Arylhalogenthionoformate, wie-p-TolylchlorthionoformaL Die Reaktion kann in Gegenwarteiner Base, beispielsweise in Gegenwarteines Amins, wie Pyridin, in einem Lösungsmittel, wie einem halogenierten Kohlenwasserstoff, z. B. Dichlormethan, durchgeführt weiden.

Falls gewünscht, kann man die Zwischenverbindungen der Formel (IV) isolieren.

Die Zwischenverbindungen der Formel (IV) kann man dann zu den gewünschten Verbindungen der Formel (Π) unter Verwendung eines Reduktionsmittels, wie eines Alkylzinnhydrids (z. B. Tri-n-butylzinnhydrid) in Gegenwart eines Radikalstarters, wie eines Peroxids, Azobisisobutyronitril oder Licht, reduzieren.

Zweckmäßigerweise führt man die Reaktion in einem geeigneten Lösungsmittel durch, das ausgewählt werden kann unter einem Keton, z. B. Aceton; einem Ether, z. B. Dioxan; einem Kohlenwasserstoff,z. B. Hexan oderToluol; einem halogenierten Kohlenwasserstoff, z. B. Trichlorbenzol; oder einem Ester, z. B. Ethylacetat.

Kombinationen dieser Lösungsmittel untereinander oder mit Wasser können ebenfalls zur Anwendung kommen.

Die Reaktion führt man bei einer Temperatur von 0 bis 200 °C, vorzugsweise 20 bis 130 °C, durch.

Gemäß einem weiteren erfmdungsgemäßen Verfahren stellt man eine Verbindung der allgemeinen Formel (II), in der R^ und R^ zusammen mit dem Kohlenstoffatom an das sie gebunden sind für >C=0 stehen, her, indem man eine Verbindung der allgemeinen Formel (III), worin OR^ eine Hydroxygruppe und OR4 eine substituierte Hydroxygruppe bedeuten, oxidiert, und anschließend, wenn man eine Verbindung wünscht, in der OR4 eine Hydroxygruppe bedeutet, die Schutzgruppe aus der Gruppe OR4 entfernt und gewünschtenfalls erneut substituiert, wobei man eine Verbindung der Formel (Π) erhält, in der OR4 eine substituierte Hydroxygruppe bedeutet. Die Reaktionkannmanmiteinem Oxidationsmittel durchführen, daszurUmwandlungeinersekundärenHydroxygruppe in eine Oxogruppe geeignet ist. Dabei erhält man eine Verbindung der Formel Gl)·

Geeignete Oxidationsmittel sind Ketonein Gegenwart von Wasser, z. B. 2,3-Dichlor-5,6-dicyano-1,4-benzochinon oder 2,3,5,6-Tetrachlor-l,4-benzochinon; ein Chrom-(VI)-Oxidationsmittel, z. B. Pyridiniumdichromat oder Chromtrioxid in Pyridin; ein Mangan-GV)-Oxidationsmittel, z. B. Mangandioxid in Dichlormethan; ein N-Halosuccinimid, z. B. N-Chlorsuccinimid oder N-Biomsuccinimid; ein Dialkylsulfoxid, z. B. Dimethylsulfoxid, in Gegenwart eines Aktivierungsmittels, wie Ν,Ν'-Dicyclohexylcarbodiimid oder eines Acylhalogenides, z. B. Oxalylchlorid; oder eines Pyridin-Schwefeltrioxidkomplexes.

Die Reaktion kann man zweckmäßigerweise in einem geeigneten Lösungsmittel durchführen, das ausgewählt wird unter einem Keton, z. B. Aceton; einem Äther, z. B. Diethylether, Dioxan oder Tetrahydrofuran; einem Kohlenwasserstoff, z. B. Hexan; einem halogenierten Kohlenwasserstoff, z. B. Chloroform oder Methylenchlorid; oder einem Ester, z. B. Ethylacetat oder einem substituierten Amid, z. B. Dimethylformamid. Kombinationen dieser Lösungsmittel untereinander oder mit Wasser können ebenfalls zur Anwendung kommen. -11-

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Die Reaktion kann bei einer Temperatur von -80 °C bis +50 °C erfolgen.

Ein weiterer Gegenstand derErfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel (II), worin und R^ zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, eine >C=0-Gruppe und OR^ eine

Hydroxy- oder Methoxygruppe bedeuten, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man einen Organismus der Gattung Streptomyces, der in der Lage ist, wenigstens eine der erfindungsgemäßen Verbindungen zu produzieren, kultiviert undgewünschtenfalls die Verbindung isoliert und gewünschtenfalls die Gruppe OR^ anhand der oben beschriebenen Methoden modifiziert.

Die bevorzugten Mikroorganismen, die in der Lage sind, die Verbindungen zu produzieren, sind Stämme einer neuen Spezies der Gattung Streptomyces mit der Bezeichnung Streptomyces thermoarchaensis. Eine Probe dieses Mikroorganismus, der aus einer Bodenprobe isoliert wurde, wurde (am 10. September 1984) in der permanenten Kulturensammlung der National Collections of Industrial und Marine Bacteria, Torry Research Station, Aberdeen, Großbritannien,hinterlegt undmitderNummerNCIB12015bezeichnet.MutantenvonStreptomyces thermoarchaensis NCIB 12015 können ebenfalls vorteilhaft zur Anwendung kommen. Vier Mutantenstämme wurden (am 26. Juni 1985) in der permanenten Kulturensammlung der National Collections of Industrial and Marine Bacteria hinterlegt und mit den Nummern NCIB 12111, NCIB 12112, NCIB 12113 und NCIB 12114 bezeichnet.

Die Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen durch Fermentation eines geeigneten Streptomyces-Organismus kann anhand von üblichen Maßnahmen erfolgen, d. h. durch Kultivieren des Streptomyces-Organismus in Gegenwart von assimilierbaren Quellen von Kohlenstoff, Stickstoff und Mineralsalzen.

Assimilierbare Quellen von Kohlenstoff, Stickstoff und Mineralsalzen können mittels einfacher oder komplex zusammengesetzter Nährstoffe zur Verfügung gestellt werden. Kohlenstoffquellen umfassen im allgemeinen Glucose,Maltose, Stärke, Glycerin, Molasse, Dextrin, Lactose, Saccharose, Fruktose, Carbonsäuren, Aminosäuren, Glyceride, Alkohole, Alkane und Pflanzenöle. Die Kohlenstoffquellen machen im allgemeinen 0,5 bis 10 Gew.-% des Fermentationsmediums aus.

Stickstoffquellen umfassen im allgemeinen Sojabohnenmehl, Maisquellwasser, Schlempe, Hefeextrakte, Baumwollsamenmehl, Peptone, gemahlenes Nußmehl, Malzextrakt, Molasse, Kasein, Aminosäuremischungen, Ammoniak (Gas oder Lösung), Ammoniumsalze oder Hydrate. Harnstoff und andere Amide können ebenfalls zur Anwendung kommen. Die Stickstoffquellen machen im allgemeinen 0,1 bis 10 Gew.-% des Fermentationsmediums aus.

Mineralsalznährstoffe, die dem Kulturmedium einverleibt werden können, umfassen im allgemeinen Salze, welche in der Lage sind Natrium-, Kalium-, Ammonium-, Eisen-, Magnesium-, Zink-, Nickel-, Kobalt-, Man-gan-, Vanadium-, Chrom-, Calcium-, Kupfer-, Molybdän-, Bor-, Phosphat-, Sulfat-, Chlorid- und Carbonationen zu liefern.

Die Kultivierung des Streptomyces-Organismus erfolgt im allgemeinen bei einer Temperatur von 20 bis 50 °C, vorzugsweise 25 bis 40 °C, insbesondere bevorzugt um 34 °C und zweckmäßigerweise unter Belüftung und Bewegung des Mediums, beispielsweise durch Schütteln oder Rühren. Das Medium kann anfangs mit einer geringen Menge einer Sporen bildenden Suspension des Mikroorganismus inokuliert werden. Um aber eine Wachstumsverzögerung zu vermeiden, stelltman ein vegetatives Inokulum des Organismus her, indem man eine geringeMenge des Kulturmediums mit der Sporenform des Organismus inokuliert. Das so erhaltene vegetative Inokulum transferiert man in das Fermentationsmedium oder gibt es vorzugsweise in eine oder mehrere Impfstufen, in denen weiteres Wachstum stattfindet, bevor man es in das Hauptfermentationsmedium überführt. Die Fermentation wird im allgemeinen im pH-Bereich von 5,5 bis 8,5, vorzugsweise 5,5 bis 7,5, durchgeführt. Die Fermentation kann über einen Zeitraum von 2 bis 10 Tagen, z. B. ungefähr 5 Tage, durchgeführt werden.

Wenn man die Abtrennung von Material, das die erfindungsgemäßen Verbindungen enthält, von der Gesamtfermentationsbrühe oder die Isolierung einer der Verbindungen wünscht, so kann man dies anhand üblicher Isolierungs- und Separationsmethoden durchführen. Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind überwiegend im Mycel derZellen enthalten. Siefmden sich jedoch auch in der Fermentationsbrühe, so daß man die Isolierungsmethoden nach der Klärung auch bei der Fermentationsbrühe anwendet Die Isolierungsmethoden können in einem weiten Bereich variieren.

Dieerfindungsgemäßen Verbindungenkönnen anhandeiner Vielzahl YonFraktionierungsverfahren,beispielsweise Adsorption-Elution, Niederschlagbildung, fraktionierte Kristallisation, Lösungsmittelextraktion, die auf verschiedene Weisekombiniert werdenkönnen,isoliert und getrennt werden. Lösungsmittelextraktion und Chromatographie haben sich zur Isolierung und Trennung der erfindungsgemäßen Verbindungen am geeignetsten erwiesen.

Im Anschluß an die Fermentation wird das Mycel unter Verwendung üblicher Methoden, beispielsweise Filtration oder Zentrifugieren, geerntet Danach extrahiert man beispielsweise das Material aus dem Mycel mit einem geeignetenorganischen Lösungsmittel, wieeinem Keton, z. B. Aceton, Methylethylketon oder Methylisobutylketon; einem Kohlenwasserstoff, z. B. Hexan; einem halogenierten Kohlenwasserstoff, z. B. Chloroform, Tetrachlorkohlenstoff oder Methylenchlorid; einem Alkohol, z. B. Methanol oder Ethanol; oder einem Ester, z. B. -12-

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Methylacetat oder Ethylacetat. Wenn das Mycel bedeutende Wasseimengen enthält, ist es bevorzugt, ein wasserlösliches Lösungsmittel zu verwenden.

Im allgemeinen ist mehr als eine Extraktion zweckmäßig, um eine optimale Gewinnung zu erzielen. Vorzugsweise erfolgt die oste Extraktion unter Verwendung eines mit Wasser mischbaren Lösungsmittels, wie Methanol 5 oder Aceton. Die Antibiotika kann man als Rohextrakt durch Entfernung des Lösungsmittels gewinnen. Die Lösungsmittelextrakte kann man dann, gewiinschtenfalls nach einer Verringerung des Lösungsmittelvolumens, beispielsweise durch Verdampfen, extrahieren. In dieser Stufe ist es bevorzugt, ein mit Wasser nicht mischbares Lösungsmittel, wie Hexan, Chloroform, Methylenchlorid oder Ethylacetat oder Mischungen davon, zu verwenden, wobei man ausreichend Wasser zugibt, um eine zufriedenstellende Verteilung der Antibiotikaverbindungen zu 10 erzielen. Die Entfernung der mit Wasser nicht mischbaren Phase liefert ein Material, das eine oder mehrere erfindungsgemäße Verbindungen, gegebenenfalls zusammen mit Antibiotika-Verbindungen S541, enthält.

Die Reinigung und/oder Trennung der erfindungsgemäßen Verbindungen kann anhand üblicher Verfahren erfolgen, beispielsweise mittels Chromatographie (einschließlich Hochdruckflüssigkeits-Chromatographie, HPLQ an einem geeigneten Träger, wie Kieselgel, einem nicht-funktionellen makroretikularen Adsorptionsharz, z. B. 15 vernetzte Polystyrolharze, wie Amberlite XAD-2, XAD-4 oder XAD-1180-Harze (Rohm & Haas Ltd.), oder ein S112-Harz (Kastell Ltd.) oder ein mit organischen Lösungsmitteln verträgliches, vernetztes Dextran, wie Sephadex LH20 (Pharmacia UK, Ltd.) oder, im Falle einer HPLC, Umkehrphasenträger, wie mit Kohlenwasserstoffen verknüpftes Kieselgel, z. B. Cjg-Kieselgel. Der Träger kann als Bett, vorzugsweise aber in einer Säule gepackt, vorliegen. Wenn nicht-funktionelle makroretikulare Harze, wie XAD-1180 oder S112 zum Einsatz kommen, können 20 für die Eluierung Mischungen organischer Lösungsmittel, wie Acetonitril, mit Wasser zur Anwendung kommen.

Eine Lösung der Verbindungen in einem geeigneten Lösungsmittel wird im allgemeinen auf eine Kieselgel- oder Sephadex-Säule gegeben, gewiinschtenfalls nachdem man zuerst das Volumen des Lösungsmittels reduziert hat. Die Säule kann gegebenenfalls gewaschen und anschließend mit einem Lösungsmittel geeigneter Polarität eluiert werden. Im Falle von Sephadex und Kieselgel kann man Alkohol, wie Methanol; Kohlenwasserstoffe, wie Hexan; 25 Acetonitril; halogenierte Kohlenwasserstoffe, wie Chloroform oder Methylenchlorid; oder Ester, wie Ethylacetat, zur Anwendung bringen. Kombinationen derartiger Lösungsmittel untereinander oder mit Wasser können ebenfalls zum Einsatz kommen.

Die Eluierung undTrennung/Reihigung der erfmdungsgemäßen Verbindungen kann mittels üblicher Verfahren, wie Dünnschichtchromatographie und Hochdruckflüssigkeits-Chromatographie oder anhand der Eigenschaften der 30 nachstehend beschriebenen Verbindungen verfolgt werden.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können zunächst durch Chromatographie an Kieselgel, vorzugsweise unter Verwendung eines Eluierungsmittels wie ChlorofomuEthylacetat, und gegebenenfalls anschließend mittels Hochdruckflüssigkeits-Chromatographie gereinigt werden. Das so gereinigte Material kann dann erneut an einer Sephadex-Säule, vorzugsweise unter Verwendung eines Eluierungsmittels wie Acetonitril, gereinigt werden. Die 35 eifindungsgemäßen Verbindungen können dann unter Anwendung der Hochdruckflüssigkeits-Chromatographie isoliert werden.

Durch geeignete Kombination der vorstehend beschriebenen Maßnahmen wurden die oben beschriebenen Verbindungen der Formel (Π) als Feststoffe in im wesentlichen reiner Form isoliert. Es ist zu bemerken, daß die Reihenfolge der erwähnten Reinigungsschritte, die Wahl der zur Anwendung kommenden Reinigungsschritte und 40 der Umfang der vorzunehmenden Reinigung in einem weiten Bereich variiert werden können. Die Verbindungen können jedoch, wie oben beschrieben, in einem Reinheitsgrad eingesetzt werden, der für den beabsichtigten Verwendungszweck geeignet ist Zur Anwendung in der Humanmedizin sind Reinheiten von wenigstens 90 %, vorzugsweise mehr als 95 %, wünschenswert

Zur Anwendung in der Veterinärmedizin oder zu anderweitiger Anwendung reicht ein geringerer Reinheitsgrad, 45 beispielsweise 50 % oder weniger aus.

Die Antibiotika-Zwischenverbindungen S541 der Formel (ΠΙ) in der OR^ eine Hydroxygruppe und OR^ eine Hydroxy- oder Methoxygruppe bedeutet, kann man auch unter Anwendung der oben beschrieben») Fermentationsund Isolierungsmethoden, wie beispielsweise im südafrikanischen Patent 85/7049 beschrieben, erhalten. Weitere Zwischenverbindungen der Formel (ΙΠ) kann man ausgehend von diesen Verbindungen unter Anwendung der oben 50 für die Herstellung der Verbindungen der Formel (II) beschriebenen Verfahren »halten.

Die Salze von Säuren der Formel (Π) können mittels üblich» Verfahren, beispielsweise durch Behandlung der Säure mit einer Base oder durch Umwandlung eines Salzes in ein anderes mittels Ionenaustausch, erhalten werden.

Die Erfindung wird anhand der nachfolgenden Beispiele erläutert Alle Temperaturen sind in °C angegeben.

Die Bezeichnung der Erfindungen erfolgt unter Bezugnahme auf "Stamm-"Faktoren. Dabei handelt es sich um 55 die Verbindungen der Formel (V): -13-

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OH

Faktor R R* A -H -CH(CH3)2 B -ch3 -ch3 C -H -ch3 D -H -ch2ch3 E -ch3 -ch2ch3 F -ch3 -CH(CH3)2

Die Faktoren A, B, C, D, E und F können wie in der GB-A2166 436 beschrieben, hergestellt werden.

Beispiel 1

5-Phenoxvacetoxv- und 5.23-Dinhenoxvacetoxv-Faktor A

Faktor A (2,0 g) in Dichlormethan (25 ml) und Pyridin (0,35 ml) werden bei 0 °C mit einer Lösung von Phenoxyacetylchlorid (0,5 ml) in Dichlormethan behandelt Nach 18 h bei 3 °C wird die Lösung mit Pyridin (1,0 ml) und mit Phenoxyacetylchlorid (1,0 ml) in Dichlormethan (5 ml) behandelt Die Lösung wird 30 min bei 0 - 5 °C gerührt und anschließend in Eiswasser gegossen. Man gibt Ether (100 ml) zu und rührt die Mischung 20 min. Die wäßrige Schicht wird mit Ether extrahiert Die Etherschichten werden vereinigt nacheinander mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet und verdampft Der Rückstand wird mittels Chromatographie an Kieselgel unter Verwendung von Dichlormethan:Aceton (4:1) gereinigt wobei man die Titelverbindungen als Mischung (1,8 g; MonoacylrDiacyl=6:1) erhält Diese Mischung wird mittels präparativer Umkehiphasen-HPLC aufgetrennt wobei man 5-Phenoxyacetoxy-Fäktor A: δ (CDC13): 6,8 - 7,4 (m, 5H) und 4,66 (s, 2H); m/z: 746,728,710,594 und 576 und 5,23-Diphenoxyacetoxy-Faktor A: δ (CDCI3): 6,8 - 7,4 (m, 10H); 4,60 (s, 2H) und 4,70 (s, 2H) erhält

Beispiel 2

5-Phenoxvacetoxv-23-f4-methvlnhenoxvthionocarbonvloxvVFaktor A 5-Phenoxyacetoxy-Faktor A (747 mg) in Dichlormethan (100 ml) behandelt man bei 0 °C unter Stickstoff mit Pyridin (0,81 ml) und anschließend mit 4-Methylphenylchlorothionoformat (0,75 g) in Dichlormethan (2 ml). Die dunkleLösungrührt man 15 min bei 0 °C und anschließend 22 h ohne zu kühlen. Die Mischung wird in kaltes Wasser und Kochsalzlösung gegossen und mit Ether extrahiert. Die vereinigten Etherschichten werden mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet und verdampft Der Rückstand wird mittels Säulenchromatographie an Kieselgel und präparativer Umkehrphasen-HPLC gereinigt, wobei man die Titelverbindung (430 mg) erhält: -14- 5

AT 397 095 B δ (CDC13): 3,34 (m, 1H); 3,58 (m, 1H); 3,97 (dlO, 1H); 4,72 (s, 2H); 5,4 (m, 1H); 5,59 (d6,1H) und 6,9 - 7,4 (m, 9H); m/z: 728,616,576,466,464,448,354,297,247,219 und 151.

Beispiel 3

5-tert--hutvldimethvlsilvloxvacetoxv-Faktor A 10 15 20 25

Zu Faktor A (2,144 g) in wasserfreiem Ether (25 ml) und Pyridin (2,5 ml) tropft man bei 0 °C unter Stickstoff t-Butyldimethylsilyloxyacetylchlorid (1,2 g) in Ether (10 ml). Die Mischung wird 90 min bei 0 °C gerührt Anschließend tropft man weiteres Säurechlorid (1,10 g) in Ether (10 ml) zu. Die Mischung wird 60 min bei 0 °C gerührt und in kaltes Wasser und Ether gegossen. Die wäßrige Schicht wird mit Ether gewaschen. Die vereinigten organischen Schichten werden mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet und verdampft Der Rückstand wird mittels Chromatographie an Kieselgel unter Verwendung von Dichlormethan:Aceton (25:1) als Eluierungsmittel gereinigt wobei man die Titelverbindung erhält δ (CDC13): 0,09 (s, 6H); 0,78 (d6,3H); 0,90 (s, 9H); 0,93 (d6,3H); 0,97 (d6,3H); 1,03 (d6,3H), 1,51 (s, 3H); 1,59 (s, 3H); 1,74 (s, 3H), 3,32 (m, 1H); 3,52 (dlO, 1H); 3,64 (m, 1H); 3,74 (dlO, 1H); 3,82 (m, 1H); 4,32 (s, 2H) und 5,57 (d5,1H); m/z: 784,766,748,595,577,484,466,354,314,297,265,247,237,219 und 151.

Beispiel 4

5-Trimethvlsiloxv-Faktor A

Eine Lösung des Faktors A (250 mg) in trockenem Tetrahydrofuran (10 ml) wird mit trockenem Triethylamin (0,12 ml) und Trimethylsilylchlorid (0,11 ml) behandelt Die Mischung wird 1 h bei 20 °C gerührt und in Ether und Wasser gegossen. Die organische Schicht wird mit Wasser gewaschen, getrocknet und verdampft. Der Rückstand wird mittels präparativer Dünnschichtchromatographie unter Verwendung von Dichlormethan: Aceton (10:1) als Eluierungsmittel geieinigt wobei man die Titelverbindung erhält δ (CDC13): 0,18 (s, 6H); 0,80 (d6,3H); 0,96 (d6,3H); 1,00 (d6,3H); 1,06 (d6,3H); 1,53 (s, 3H); 1,60 (s, 3H); 1,78 (s, 3H); 333 (m, 1H); 3,75 (dlO, 1H) und 4,41 (d6,1H); m/z: 684,666,651,633,484,466,448,354,314,297,265,248,247,237,219 und 151.

Beispiel 6

35 5-tert-Butvldimethvlsilvloxv-Faktor A

Faktor A (250 mg) und Imidazol (163 mg) in trockenem Dimethylformamid (10 ml) werden mit t-Butyl-dimethylsilylchlorid (197 mg) behandelt Die Lösung wird 2 h gerührt und in kaltes Wasser gegossen. Die Mischung wird gründlich mit Ether extrahiert und die vereinigten Etherextrakte werden getrocknet und verdampft. Der Rückstand wird mittels Chromatographie an Kieselgel unter Verwendung von Dichlormethan:Aceton (10:1) als ^ Eluierungsmittel gereinigt wobei man die Titelverbindung (235 mg) erhält δ (CDC13): 0,13 (s, 6H); 0,80 (d6,3H); 0,92 (s, 9H); 0,96 (d6,3H); 1,00 (d6,3H); 1,03 (d6,3H); 1,53 (s, 3H); 1,60 (s, 3H); 1,80 (s, 3H); 3,37 (m, 1H); 3,56 (dlO, 1H); 3,64 (m, 1H); 3,75 (dlO, 1H) und 4,43 (d5,1H); m/z: 726,708,691,651,633,466,448,354,314,297,265,247,219 und 151. 45.

5-Acetoxv- und 5.23-Diacetoxv-Faktor A

Faktor A (3,0 g) in Pyridin (20 ml) behandelt man bei -5 °C mit Essigsäureanhydrid (8 ml) und läßt die erhaltene Lösung 20 h bei 3 °C stehen. Man gibt Benzol (100 ml) zu und konzentriert die Lösung im Vakuum. Der ölige 50 Rückstand mit an Kieselgel unter Verwendung von Dichlormethan:Aceton (4:1) als Eluierungsmittel gereinigt, wobei man das 5-Acetat des Faktors A (2,06 g) erhält das das 5,23-Diacetat (10 %) enthält. Die Verbindungen wurden mittels präparativer Umkehrphasen-HPLC getrennt, man erhält 5-Acetoxy-Faktor A (79 % Rückgewinnung): (EtOH) 244 nm (E* j 462); 55 δ (CDC13): 2,14 (s, 3H); m/z: 654,594 und 576 und 5,23-Diacetoxy-Faktor A (6,5 % Rückgewinnung): -15-

AT 397 095 B δ (CDC13): 2,01 (s, 3H) und 2,13 (s, 3H); m/z: 696 und 636.

Beisniel 8

5.23- Diacetoxv-Faktor A

Eine Lösung des Faktors A (600 ml) in trockenem Pyridin (1,0 ml) wird mit überschüssigem Acetanhydrid (0,50 ml) und wenigen 4-N,N-Dimethylaminopyridin-Kristallen behandelt Nach 24 h bei Raumtemperatur gießt man die Mischung in Ether und wäscht die organische Phase nacheinander mit 2N-Salzsäure, gesättigter wäßriger Natöumbicarbonatlösung und schließlich mit Kochsalzlösung. Verdampfen der getrockneten organischen Phasen liefert ein gummiartiges Material, das mittels Chromatographie an Merck Kieselgel 60,230-400 mesh silica (45 g) gereinigt wird Eluierung der Säule mit Dichlormethan:Ether (9:1) liefert die Titelveibindung als farblosen Schaum (560 mg) [cOd26 +169° (£=0,48, CHC13).

Die Verbindungen derBeispiele9undl0werden,soweitnichtandersangegeben ist, in gleicher Weise hergestellt. Beispiel 9 23-Acetoxv-Faktor B Schmp. 256 - 258 °C (Zers.); [a]22D +175° (£=0,40, CHCI3); XEt0Hmax 2383 (26,200) und 244,5 nm (¾ 28,850); vmax (CHBr3) 3460 (OH) und 1708 cm'1 (Ester); δ (CDC13): 5,48 (q, 7Hz, 1H); 4,90 (m, 1H); 3,99 (d, 5Hz, 1H); 3,55 (m, 1H); 3,49 (s, 3H); 3,29 (m, 1H); 2,00 (s, 3H); 1,79 (s, 3H); 1,66 (d, 6Hz, 3H); 1,58 (s, 3H); 1,52 (s, 3H); 0,98 (d, 7Hz, 3H) und 0,71 (d, 7Hz, 3H); m/z = 640(M+).

Diese Verbindung erhält man aus Faktor B (392 mg). Das nach der Etherextraktion erhaltene gummiartige Material wird aus Petrolether (60 - .80 °C) kristallisiert und aus Diisopropylether umkristallisiert, wobei man die Titelvefbindung in Form von Nadeln erhält.

Beisniel 10 5.23- Diacetoxv-Faktor C Schmp. 211-213 °C; [a]22D + 200° (£= 0,40, CHC13); XEt0Hmax 238,5 (30,400) und 245 nm (emax 32,500); vmax 3440 (OH) und 1718 cm'1 (Acetoxy und Ester); δ (CDC13): 430 (m, 1H); 4,04 (d, 6Hz, 1H); 3,96 (d, 10Hz, 1H); 338 (m, 1H); 332 (m, 1H); 2,14 (s, 3H); 1,75 (s, 3H); 1,67 (d, 6Hz, 3H); 1,60 (s, 3H); 1,52 (s, 3H); 0,99 (d, 6Hz, 3H) und 0,71 (d, 7Hz, 3H); m/z = 668 (M+).

Diese Verbindung erhält man aus Faktor C (312 mg). Die Reaktionsmischung wird statt in Ether in Ethylacetat gegossen. Das Produkt kristallisierte beim Verreiben mit Diisopropylether.

Beispiel 11 23-Acetoxv-Faktor A

Zu einer gekühlten (0-5 °C) Lösung der Verbindung des Beispiels 8 (530 mg) in Methanol (10 ml) tropft man unterRühren eine wäßrige Lösung (1 ml) von Natriumhydroxid (30 mg). Nach 1,3 h wird die Mischung in Ethylacetat gegossen und die organische Phase wird dann nacheinander mit 2N Salzsäure, Wasser und Kochsalzlösung gewaschen. Verdampfen der getrockneten organischen Phase liefert ein gelbes gummiartiges Material, das in Dichlormethan auf eine Säule aus Merck Kieselgel60,230-400mesh silica (50 g), die in dem gleichen Lösungsmittel auf bereitet ist, gegeben. Eluierung mit Dichlormethan:Ether (9:1) liefert die Titelverbindung, die durch Verdampfen einer Lösung in n-Pentan als beinahe farbloser Feststoff erhalten wird. Dieses Material (330 mg) zeigt folgende Daten: [<x]23d +166° (£= 0,64, CHCI3); XEt°Hmax 239 (26300) und 245 nm (¾^ 29300); -16-

AT 397 095 B vmax (CHBr3) 3540,3460 (OH) und 1712 cm'1 (Ester); δ (CDC13): 4,89 (m, 1H); 4,27 (t, 6Hz, 1H); 3,93 (d, 6Hz, 1H); 3,91 (d, 10Hz, 1H); 3,55 (m, 1H); 3,25 (m, 1H); 2,01 (s, 3H); 1,85 (s, 3H); 1,59 (s, 3H); 1,51 (s, 3H); 1,03 (d,6Hz, 3H); 0,98 (d, 6Hz,3H); 0,94 (d, 6Hz, 3H) und0,69 (d,7Hz,3H); m/z = 654 (M+).

Die Verbindungen der Beispiele 12 bis 14 wurden in gleicher Weise hergestellt.

Beispiel 12

23-Keto-FaktorC

[α]22π +110° (ς=0,40, CHC13); χΕΐ° max 245 nm (%ax vmax (CHBr3) 3540,3470 (OH) und 1710 cm*1 (Ester und Keton); 5(CDC13): 5,47 (d-ql und6Hz, lH);4,28(t-6Hz, 1H); 3,94 (d,6Hz,lH); 3,74 (d, 11Hz, lH);3,50(m, 1H);3,37 (m, 1H); 1,87 (s, 3H); 1,69 (d, 6Hz, 3H); 1,50 (s, 3H); 0,99 (d, 6Hz, 3H) und 0,85 (d, 7Hz, 3H); m/z = 582 (M+); aus der Verbindung des Beispiels 20 (120 mg).

Beispiel 13 23-Desoxv-Faktor C (80 mg) [a]23D + 104° (£= 0,56, CHC13); ^Et0Hmax 244>5 nm (emax 28,050);

Vmax (CHBr3) 3540,3450 (OH), 1702 cm'1 (Ester); δ (CDC13): 4,28 (t, 6Hz, 1H); 3,95 (d, 6Hz, 1H); 3,57 (m, 1H); 3,45 (d, 10Hz, 1H); 3,26 (m, 1H); 1,87 (s, 3H); 1,65 (d, 7Hz, 3H); 1,59 (s, 3H); 1,53 (s, 3H); 0,99 (d, 6Hz, 3H) und 0,69 (ausgeprägtes Dublett, 5Hz, 3H); m/z = 568 (M+); aus der Verbindung des Beispiels 26 (125 mg) als farbloser Schaum.

Beispiel 14

23-Acetoxv-Faktor C

[a]23D +139° (ς= 0,52, CH2Cl2); kEt0Hmax 244’5 nm (¾^ 29,400); vmax (CHBr3) 3550,3480 (OH), 1716 (Ester und Aceton) und 1255 cm"* (Acetat); δ (CDC13): 4,91 (q, 3Hz, 1H); 2,03 (s, 3H) und 1,64 (d, 7Hz, 3H) und 1,60 (s, 3H); m/z = 626 (M+) aus der Verbindung des Beispiels 10 als weißer amorpher Feststoff.

Beispiel 15

23-p-Tolvloxvthiocarhonvloxv-Faktor B

Man löst Faktor B (600 mg) in trockenem Dichlormethan (5 ml) und gibt zu dieser Lösung trockenes Pyridin (800 mg) undp-Tolylchlorthionoformat (750 mg). Nach 24 h bei Umgebungstemperatur wird die Mischung in Ether gegossen und dieorganischeLösungwirdauf neutrales Material aufgearbeitet. DasroheThiocarbonatinDichlormethan wird auf eine Kieselgelsäule (50 g), die in dem gleichen Lösungsmittel auf bereitet ist, gegeben. Eluierung der Säule mit DichlormethamEther (95:5) liefert einen Hauptbestandteil, der mittels präparativer Umkehrphasen-HPLC weitergereinigt wurde. Die Titelverbindung wird als farbloser Schaum isoliert (417 mg); [<x]23D + 160° (£ = 0,40, CHC13); ^Et0Hmax 238 nm (emax 35,900); vmax (CHBr3) 3470,3530 (OH), 1705 (Ester); δ (CDC13): 7,18 (d, 9Hz, 2H); 6,98 (d, 9Hz, 2H); 5,49 (q, 6Hz, 1H); 4,02 (d, 5Hz, 1H); 3,58 (m, 1H); 3,31 (m, 1H>; 3,49 (s, 3H); 2,36 (s, 3H); 1,81 (s, 3H); 1,68 (d, 6,3H); 1,61 (s, 3H); 1,53 (s, 3H); 1,00 (d, 6Hz, 3H) und 0,82 (d,7Hz,3H); m/z = 748(M+).

Die Verbindung des Beispiels 16 wird in gleicher Weise hergestellt: -17-

AT 397 095 B

Beispiel 16

5-Acetoxv. 23-p-Tolvloxvthiocafbonvloxv-Faktor C (430 mg), [a]23D +133° fc=0,48, CHCI3); kEt0Hmax 2373 (36,900), 244 (36,900) und 273 nm 2,400); vmaT (CHBr3) 3500 (OH), 1732 (Acetat) und 1710 cm'* (Ester); δ (CDC13): 7,17 (d, 8Hz, 2H); 6,99 (d, 8Hz, 2H); 4,04 (d, 6Hz, 1H); 3,98 (d, 1=Hz, 1H); 3,57 (m, 1H); 331 (m, 1H);234 (s, 3H); 2,14 (s, 3H); l,74(s,3H); l,66(d,6Hz,3H); l,60(s,3H); l,52(s,3H);0,99(d,6Hz,3H)undO,81 (d,7Hz,3H); m/z=776 (M+); aus da Verbindung des Beispiels 17 (500 mg) als farbloser Schaum.

Beispiel 17

5-Acetoxv-Faktor C

Zu einer Lösung des Faktors C (338 mg) in trockenem Pyridin (03 ml) gibt man Acetanhydrid (71 mg). Nach 20 h bei Raumtemperatur gießt man die Mischung in Dichlormethan und arbeitet die Lösung auf neutralem Material auf. Das so erhaltene Rohmaterial wird mittels Chromatographie an Merck K 60,230 - 400 mesh silica (28 g) gereinigt. Eluierung der Säule mit Dichlormethan: Ether (9:1) liefert die Titelverbindung (210 mg), die als kristalliner Feststoff zurückgewonnen wird: Schmp. ca. 135 °C.

[<x]23d +142° 0,64, CHCI3); *-Et0Hmax 2443 Ghnax 31350);

Vmax (CHBr3) 3490 (OH), 1718 (Ester) und 1730 (Acetoxy); δ (CDC13): 4,03 (d, 6Hz, 1H); 3,79 (d, 10Hz, 1H); 334 (d, 10Hz, 1H); 3,31 (m, 1H); 2,14 (s, 3H); 1,74 (s, 3H); 1,66 (d, 7Hz, 3H); 1,60 (s, 3H); 1,52 (s, 3H); 0,98 (d, 6Hz, 3H) und 0,78 (d, 7Hz, 3H); m/z=626(M+).

Beispiel 18

5-Acetoxv-23-keto-Faktor A

Zu einer Lösung von Oxalylchlorid (1,96 ml) in trockenem Dichlormethan (25 ml) tropft man bei -70 °0 unter Stickstoff eine Lösung von Dimethylsulfoxid (3,19 ml) in trockenem Dichlormethan (15 ml) und anschließend eine Lösung des 5-Acetoxy-Faktors A (4,91 g) in trockenem Dichlormethan (30 ml). Die erhaltene Lösung wird 13 h bei -70 °C gerührt. Anschließend tropft man dazu eine Lösung von Triethylamin (12,6 ml) in trockenem Dichlormethan (40 ml). Die Reaktionsmischung wird 1,25h ohne Kühlung gerührt und in eine 1:1 -Mischung aus kaltem Wasser und Ether gegossen. Die wäßrige Schicht wird mit Ether extrahiert Die vereinigten organischen Schichten werden mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet und verdampft Der schaumartige Rückstand wird anKieselgel unter Verwendung von Dichlormethan:Aceton (50:1) chromatographiert, wobei man die Titelverbindung (3,4 g) erhält; δ (CDC13): 333 (m, 1H), 3,49 (m, 1H); 3,70 (dlO, 1H) und 532 (d5,1H); m/z = 652,634,609,591,574,482,263,235 und 151.

Die Verbindungen der Beispiele 19 und 20 werden in gleicher Weise hergestellt:

Beispiel 19 23-Keto-Faktor B (160 mg)

Schmp. 213 - 215 °C (Erweichen ab ca. 209 °C); [a]22D +122° (ς=0,36, CHC13); λΕΐ0Ηπωχ 2383 (26,400), 2443 (28,700) und 282 nm (^ 400); vmax (CHBr3) 3450 (OH) und 1710 cm'1 (Ester und Keton); δ (CDC13): 5,47 (q, 6Hz, 1H); 4,02 (d, 6Hz, 1H); 3,95 (d, 6Hz, 1H); 3,73 (d, 10Hz, 1H); 3,51 (s, 3H); 3,31 (m, 1H); 1,81 (s, 3H); 1,69 (s, 3H); 1,67 (d, 6Hz, 3H); 130 (s, 3H); 0,97 (d, 6Hz, 3H) und 0,82 (d, 7Hz, 3H); m/z = 5% (M+). Man erhält diese Verbindung aus Faktor B (599 mg) als mikrokristallinen Feststoff nach Kristallisation aus Ether. -18-

AT 397 095 B

Beispiel 20 5-Acetoxv. 23-Keto-Faktor C (290 mg)

Schmp. 241 - 243 °C; [a]23D +118° (ς= 0,60, CHC13); ^Et0Hmax 245 nm (%ax 30,900); vmax (CHBrj) 3460 (OH), 1712 cm"l (Ester und Keton); δ (CDC13): 4,05 (d, 6Hz, 1H); 3,75 (d, 10Hz, 1H); 3,52 (m, 1H); 333 (m, 1H); 2,14 (s, 3H); 1,76 (s, 3H); 1,69 (s, 3H); 1,68 (d, 5Hz, 3H); 1,51 (s, 3H); 0,98 (d, 6Hz, 3H) und 0,85 (d, 7Hz, 3H); m/z=624 (M+). Man erhält diese Veibindung aus der Verbindung des Beispiels 17 als mikrokristalline Nadeln nach Kristallisation aus Diisopropylether/Ether.

Beispiel 21 23-Keto-Faktor A

Zu der Verbindung des Beispiels 18 (276 mg) in Methanol (5 ml) tropft man bei 0 °C eine Lösung von 2N-Natriumhydroxid (0,42 ml) in Methanol (1,0 ml). Man läßt die Lösung 5 h bei 5 °C und gießt sie dann in kaltes Wasser. Die Mischung wird mit Ether und Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten organischen Schichten werden mit Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet und verdampft, wobei man einen Feststoff erhält, der mittels präparativer Dünnschichtchromatographie unter Verwendung von Dichlormethan:Aceton (10:1) als Lösungsmittel gereinigt wird. Man erhält dabei die Titelverbindung (140 mg); 6 (CDC1): 3,28 (m, 1H); 3,48 (m, 1H); 3,70 (dlO, 1H) und 4,28 (tr7,1H); m/z: 592,549,482,370,263,235 und 151.

Beispiel 22

5-t-Butvldimethvlsilvloxvacetoxv-23-keto-Faktor A

Man behandelt die Verbindung des Beispiels 3 (300 mg) in trockenem Dimethylformamid (5 ml) bei 22 °C mit Pyridiniumdichromat (PDQ (1,40 g) und rührt 3,5 h. Man gibt weiteres PDC (1,0 g) zu und rührt eine weitere Stunde. Die Mischung wird in Eiswasser und Ether gegossen. Die wäßrige Schicht wird gründlich mitEther gewaschen. Die vereinigten organischen Schichten werden mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet und verdampft Der Rückstand wird mittels präparativer Dünnschichtchromatographie an Kieselgel unter Verwendung von Dichlormethan: Aceton (40:1) alsEluierungsmittel gereinigt, wobei man einenFeststoff (150 mg) erhält Anhand von MS/HPLC hat sich gezeigt, daß dieser Feststoff die Titelverbindung enthält; m/z: 782,721,592,549,370,340,263,235 und 151.

Beispiel 23 23-Keto-Faktor A

Ein 250 ml Erlenmeyer-Kolben, der 50 ml des nachstehenden Mediums enthält

15.0 15.0 15.0 3.0 1.0 D-Glucose

Glycerin

Sojapepton

NaCl CaC03 wird mit 0,4 ml einer Sporensuspension von Streptomyces thermoarchaensis NCIB 12015 in 10 % Glycerin inokuliert

Man gibt destilliertes Wasser bis auf 11 zu. Der pH-Wert wird mit wäßriger NaOH vor dem Autoklavieren auf 7,0 eingestellt.

Der Kolben wird 2 Tage bei 28 °C auf einer Rotationsschüttelvomchtung mit 250 Upm, die sich auf einer Bahn mit 50 mm Durchmesser bewegt, inkubiert. 4 ml-Portionen davon werden dann dazu verwendet, jeden von vier 2-Liter-Kolben mit flachem Boden zu inokulieren. Jeder dieser Kolben enthält 200 ml des gleichen Mediums. Anschließend wird unter den gleichen Bedingungen 2 Tage inkubiert

Der Inhalt der vier Kolben wird dann dazu verwendet, einen 701 Fermentationskessel zu inokulieren, der 401 des -19-

AT 397 095 B gleichen Mediums, ergänzt durch Polypropylenglykol 2000 (0,06 %), enthält Das Polypropylenglykol 2000ist zur Schaumregulierung während der Fermentation erforderlich. Die Fermentation wirdbei 28 °C unter Rühren und einer Belüftung durchgeführt, die ausreicht, um einen gelösten Sauerstoffgehalt von mehr als 30 % des Sättigungsgehalts aufrechtzuerhalten. Nach 24-stQndiger Fermentation wurden 800 ml und 91-Pordonen in einen 701 Fermenter, der 401 des Mediums enthält, sowie in einen 7001Fermenter, der4501 des Mediums enthält, gegeben. Beide Fermenter enthielten folgendes Medium:

2.5 25,0 12.5 1,5 0,125 1,25 0,6 D-Glueose

Malzdextrin (MD30E)

Arkasoy50 Rübenmolasse K2HP04 CaCÖ3 (Ar)

Silicone 1520 (Dow Coming)

Man gibt destilliertes Wasser bis auf 11 zu. Der pH-Wert wird vor der Sterilisation mit wäßrig®· H2SO4 auf 6,5 eingestellt

Die Fermentierungen werden bei 34 °C unter Rühren und mit einer Belüftung durchgeführt, die ausreicht um einen gelösten Sauerstoffgehalt von mehr als 30 % des Sättigungsgehalts aufrechtzuerhalten. Man gibt so viel Polypropylenglykol 2000 als Antischaummittel zu, wie erforderlich. Nach 24 h wird der pH in jedem Fermenter durch Zugabe von wäßriger H2SO4 auf 7,2 eingestellt. Die Fermentierung wird geerntet und nach 4 Tagen zusammengegeben.

Das Myzel (10,4 kg) aus da gelagerten ungeemteten Brühe (4231) wird in ein® Sharples PS16AY-Zentrifuge gesammelt Das Myzel wird 40 min heftig in Methanol (501) gerührt undanschließendabfiltriert Der Rückstandwird erneut in Methanol (151) suspendiert und erneut abfiltriert Die vereinigten Filtrate (551) werden dann mit Wasser (271) und 60 - 80° Petrolether (301) vermischt und 20 min gerührt

Die Phasen werden in einer Westfalia MEM1256-Zentrifuge getrennt. Die Methanolphase (75 1) wird mit weiterem Wasser (381) und 60-80° Petrolether (301) vermischt Nach 20 min trennt man die Phasen erneut in der Zentrifuge, wobei man Aceton (21) zu der Petroletherphase gibt um die Emulsion zu brechen. Die Methanolphase (1101) wird ein drittes Mal mit Wasser (381) und60 - 80° Petrolether (301) vermischt wobei die Phasen wie zuvor getrennt werden. Man gibt erneut Aceton (31) zu der Petroletherphase, um die Emulsion zu brechen.

DiedreiHexanphasen werden zusammengegeben (901) und bei niedrigem Druckkonzentriert (Dampftemperatur 25°). Das Konzentrat (9,81) wird mit Natriumsulfat (3 kg) getrocknet und anschließend verdampft wobei man ein Öl erhält

Das Öl wird in Dichlormethan (0,51) gelöst und über Dicalite 478 filtriert. Die Lösung (0,91) wird mit 61/h auf eine Säule (150 x 10 cm) Silikagel (Merck) gegeben, mit Dichlormethan (41) gewaschen und mit einer Mischung ausChloroform:Ethylacetat(3:l v/v)eluierL Die zwischen 14,6 und 33,31 eluierteFraktion wird zu einem Feststoff konzentriert da erneut in ChloroformrEthylacetat (3:1 v/v) gelöst wird.

Die Lösung wird erneut an einer Kieselgel-Säule mit dem gleichen Lösungsmittel Chromatographien Die zwischen 14,5 und 31,5 1 eluierte Fraktion wird getrocknet, wobei man einen Feststoff erhält der in Chloroform:Ethylacetat(3:l v/v) gelöst wird. DieseLösung wirdemeutan Kieselgel unter den gleichen Bedingungen wie zuvor Chromatographien Die zwischen 14 und 311 eluierte Fraktion wird zu einem Feststoff getrocknet

Der Feststoff wird in 70%igem v/v Acetonitril in Wasser (1,231) gelöst, wobei ausreichend Methanol zugesetzt wird, um eine klare Lösung zu erhalten. Die Lösung wird in 5 ml-Portionen an einer Säule aus Spherisorb ODS2 Chromatographien Die Säule wird mit 70 % Acetonitril mit einer Fließgeschwindigkeit eluien die während 21 min von 20 ml/min bis 34 ml/min erhöht wird. Die Fraktion jeder Portion, welche zwischen 12,4 und 161 eluiert wird, wird zusammengegeben und mit dem gleichen Volumen Wasser verdünnt Diese Lösung wird dann auf eine Säule aus Montedison S112-makroretikulares Polystyrol (21) gegeben. Die Säule wird mit 35 % Acetonitril gewaschen und mit Aceton eluiert Die zwischen 0,5 und 1,251 eluierte Fraktion wird zu einem Feststoff getrocknet

Der Feststoff wird in Acetonitril (20 ml) gelöst und an einer Sephadex LH20-Säule im gleichen Lösungsmittel Chromatographien. Die zwischen 1,08 und 1,261 eluierten Fraktionen werden gesammelt und zu einem Feststoff getrocknet

Der Feststoff wird in 60 % Acetonitril (10 ml) gelöst wobei ausreichend Methanol zugesetzt wird, um eine klare Lösung zu erhalten. Die Lösung wird erneut in 2 ml Portionen an einer Spherisorb ODS2-Säule chromatographiert und mit 60 % Acetonitril bei 25 ml/min eluiert. Die zwischen 0,95 1 und 1,08 1 eluierten Fraktionen werden -20-

AT 397 095 B zusammengegeben und zu einem Feststoff getrocknet. Der Feststoff wird erneut in Chloroform (5 ml) gelöst und an einer Merck Silikagel 60-Säule Chromatographien. Man eluien mit Chloroform bei 10 ml/min und trocknet die zwischen 400 und 790 ml eluierte Fraktion, wobei man die Titelverbindung (33 mg) als Feststoff erhält Das NMR-Spektrum zeigt, daß 23-Keto-Faktor A vorliegt.

Das E.I.-Massenspektrum zeigt ein Molekülion bei 610 und die folgenden charakteristischen Fragmente bei 592 549 498 482 370 263 151.

Mittels HPLC-Vergleich mit einem authentischen Keton, das durch chemische Oxidation des Faktors A erhalten wurde, hat sich gezeigt, daß das Material den 23-Keto-Faktor A enthält B£i§pigl24

5-Phenoxvacetoxv-23-desoxv-Faktor A

Zu der Verbindung des Beispiels 2 (350 mg) und Azobisisobutyronitril (25 mg) in trockenem Toluol (20 min) tropft man unter Stickstoff bei 120 °C eine Lösung von Tri-n-butylzinnhydrid (0,5 ml) in trockenem Toluol (10 ml). Die Lösung wird 90 min unter Rückfluß erhitzt, gekühlt und verdampft Der Rückstand wird an Kieselgel unter Verwendung von Dichlormethan: Aceton (40:1) als Lösungsmittel chromatographiert, wobei man die Titelverbindung (280 mg) erhält; δ (CDC13): 3,32 (m, 1H); 3,42 (dlO, 1H); 3,57 (m, 1H); 4,71 (s, 2H); 5,59 (d6,1H) und 6,8 - 7,4 (m, 5H); m/z: 730,712,578,560,468,450 356,314,299,249,248,221 und 151.

Die Verbindungen der Beispiele 25 und 26 werden in gleicher Weise hergestellt

Beispiel 25 23-Desoxv-FaktorB

Schmp. 184 -186 °C, [a]22D + 158° (£=0,40, CHC13); XEt0Hmax 238,5 (28,150) und 244,5 nm (emax 30,650); vmax (CHBr3) 3450 (OH) und 1705 cm'1 (Ester); δ (CDCI3): 4,01 (d, 6Hz, 1H); 3,95 (d, 6Hz, 1H); 3,49 (s, 3H); 3,29 (m, 1H); 1,80 (s, 3H); 1,64 (d, 6Hz, 3H) 1,58 (s, 3H); 1,53 (s, 3H); 0,98 (d, 7Hz, 3H) und 0,69 (d, 6Hz, 3H); m/z = 582 (M+). Diese Verbindung erhält man aus der Verbindung des Beispiels 15 (350 mg), wobei man den Rückstand jedoch unter Verwendung von Dichlormethan und anschließend DichlormethanrEther (95:5) chromatographiert. Man erhält so die Titelverbindung als kristallinen Feststoff nach Verreiben mit n-Pentan.

Beispiel 26

5-Acetoxv. 23-Desoxv-Faktor C (256 mg), Schmp. 230 °C (Zers.), [a]23D + 1470 fe=0,32, CHCI3); X,Et0Hmax 238,5 (28,000), 244,5 nm (smaX 30,300);

Vmax (CHBr3) 3440 (OH), 1730 (Acetoxy) und 1710 cm'1 (Ester); δ (CDC13): 4,05 (d, 5Hz, 1H); 3,57 (m, 1H); 3,33 (m, 1H); 2,15 (s, 3H); 1,75 (s, 3H); 1,64 (d, 6Hz, 3H); 1,59 (s, 3H); 1,53 (s, 3H); 0,99 (d, 6Hz, 3H) und 0,68 (d, 5Hz, 3H); m/z = 610 (M+).

Man erhält diese Verbindung aus der Verbindung des Beispiels 16 (385 mg) nach Kristallisation aus n-Pentan.

Beispiel 27 23-Desoxv-Faktor A

Die Verbindung des Beispiels 24 (240 mg) gibt man zu einer gesättigten Lösung von Ammoniak in Methanol (10 ml) bei -5 °C. Man rührt die Lösung 2 h bei 0 -10 °C und verdampft anschließend zur Trockene. Der Rückstand -21-

AT 397 095 B wird an Kieselgel unter Verwendung von Dichlormethan: Aceton (20:1) Chromatographien, wobei man die Titelverbindung (180 mg) erhält; δ (CDC13): 3,27 (m, 1H); 3,42 (d9,1H); 3,54 (m, 1H) und 4,29 (t6,1H); m/z: 596,578,560,468,450,356,314,299,249,248,221 und 151.

Beispiel 28

5-Acetoxv-23-mesvloxv-Faktor A

Eine Lösung des 5-Acetoxy-Faktors A (3,46 g) in Pyridin (30 ml) wird in einem Eisbad gekühlt und mit Methansulfonsäureanhydrid (2,2 g) behandelt Nach 30 min läßt man die Mischung auf Umgebungstemperatur erwärmen und verteilt sie nach weiteren 60 min zwischen Ethylacetat und 2N Salzsäure. Die organische Phase wird abgetrennt und nacheinander mit 2N Salzsäure, wäßriger gesättiger Natriumbicarbonatlösung und gesättigter Kochsalzlösung gewaschen. Die organische Lösung wird getrocknet (Na2SC>4) und das Lösungsmittel wird verdampft, wobei man einen Schaum erhält Dieser wird an einer Kieselgelsäule (Merck Art 9385), die in Hexan (60 - 80°)/Ethylacetat (3:1) aufbereitet ist, chromatographiert und mit dem gleichen Lösungsmittel eluiert. Die entsprechenden Fraktionen des Hauptbestandteils werden vereinigt und das Lösungsmittel wird verdampft, wobei man die Titelveibindung als Schaum erhält (2,08 g); [a]22D +154® (c = 0,56; CHC13); 247 nm (ε 29070);

Vmax (CHBr3) 3550,3470 (OH) und 1735,1715 (Ester); δ (CDC13): 4,90 (m, 1H); 3,05 (s, 3H) und 2,16 (s, 3H).

Beispiel 29 23-Tosvloxv-Faktor B

Faktor B (250 mg), Toluolsulfonsäureanhydrid (204 mg) (tosic anhydride) und einige 4-N,N-Dimethyl-aminopyridin-Kristalle werden zusammen 24 h in trockenem Pyridin (0,5 ml) gerührt Die Mischung wird in Ether gegossen und die organische Phase wird nacheinander mit 2M Salzsäure, gesättigtem wäßrigem Natriumbicarbonat und Kochsalzlösung gewaschen. Verdampfen der getrockneten Etherschicht (Na2S04) liefert ein Rohmaterial, das in Dichlormethan auf eine Kieselgelsäule (50 g, Merck Kieselgel 60,203 - 400 mesh), die in dem gleichen Lösungsmittel auf bereitet ist gegeben wird. Eluierung mit Dichlormethan:Ether (9:1) liefert den Hauptbestandteil, der mittels präparativer HPLC weitergereinigt wird. Man erhält die Titelverbindung als gummiartiges Material; [a]23D +173° (c = 0,84, CHC13); (EtOH) 235 (30,000) und 244,5 nm (emax 30,800); vmax (Gand) 1708 cm*1 (Ester); δ (CDC13): 7,82 (d, 10Hz, 2H); 7,29 (d, 10Hz, 2H); 4,83 (q, 3Hz, lH); 3,50 (s, 3H) und 2,43 (s, 3H); m/z = 752 (M+).

Beispiel 30

(a) 5-Acetoxv-23-n-butoxv-Faktor A

Zu einer Lösung von 5-Acetoxy-Faktor A (325 mg) in trockenem Ether gibt man Silbercarbonat (1 g) und anschließend Jodbutan (0,5 ml) und Silbeiperchlorat (550 mg). Die Mischung wird 20 h bei Raumtemperatur gerührt, anschließend wird Collidin (0,5 ml) zugegeben. Man rührt weitere 20 min, filtriert die Mischung und wäscht das Filtrat nacheinander mit2NSalzsäure,gesättigter wäßriger NatriumbicarbonadösungundWasser.Die getrockneten organischen Phasen werden bis fast zur Trockene eingeengt und das Öl wird mittels Chromatographie an Merck Kieselgel 60 230-400 mesh gereinigt Eluierung der Säule mit Hexan:Ethylacetat (3:1) liefert die Titelverbindung als farblosen Schaum (276 mg); [a]22D +160° (£=0,94, CHC13); \nax OEtOH) 245 nm (f^ax 28,300); 5 (CDC13): 3,16 (m, 1H); 3,43 (m, 1H); 3,43 (m, 1H), 3,59 (m, 1H).

Die nachfolgende Verbindung wird in gleicher Weise hergestellt:

(bl 5-Acetoxv-23-ethoxv-Faktor A aus 5-Acetoxy-Faktor A und Ethyljodid. Man erhält die Titelverbindung als farblosen Schaum; -22-

AT 397 095 B

[a]22D +167° (£=1,02, CHC13); (EtOH) 245 nm (ε=28,070); 8 (CDC13): 3,25 (m, 1H); 3,46 (m, 1H), 3,64 (in, 1H).

Beispiel 32

23-Methoxv-FaktorB

MangibtSilbersalicylat (509 mg) zu einer Lösung des Faktors B (128 mg) und Methyljodid (0,5 ml) in trockenem Ether. Die Mischung wird 4 h bei Raumtemperatur gerührt und anschließend filtriert. Das Filtrat wird verdampft und das erhaltene gummiartige Material wird mittels Chromatographie an Merck Kieselgel 60,230-400 mesh (100 ml) gereinigt. Eluierung der Säule mit Petrolether (Sdp. 40 - 60 °C):Ethylacetat (3:1) liefert die Titelverbindung als farblosen Schaum (85 mg); [a]22D +188° (£= 0,56, CHCI3);

Xjjjaj, (EtOH) 245,5 nm (ε=29300); 8 (CDC13): 334 (s, 3H); 3,40 (m, 1H); m/z = 612 (M+).

Die Verbindung des Beispiels 33 wird in gleicher Weise hergestellt.

Beispiel 33

23-Ethoxv-Faktor B (147 mg), [a]21D + 194° fc=0,72, CHCI3); (EtOH) 245,5 nm (ε = 28,500); 6(CDC13): 336 (m, 1H); 3,47 (m, 1H); 3,65 (m, 1H). Die Verbindung wird aus Faktor B (183 mg) undEthyljodid (0,5 ml) erhalten.

Beispiel 34

Faktor A. 23-Hemioxalat

Faktor A (1 g, Reinheit ca. 70 %) und Calciumcarbonat (1,5 g) werden zusammen mit Dichlormethan (20 ml) bei 21 °C gerührt Zu dieser Suspension gibt man auf einmal überschüssiges Oxalylchlorid (1,0 ml). Nach 4-5 min wird die Mischung mit Wasser (15 ml) und nach weiteren 5 min mit 2M HCl (10 ml) und Ethylacetat (70 ml) behandelt. Die organischePhase wird abgetrennt mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen und anschließend mit entfärbender Kohle behandelt. Nach 5 -10 min wird die organische Lösung durch Phasentrennpapier filtriert. Das Filtrat wird vom Lösungsmittel befreit Der Rückstand in Ether (50 ml) wird durch Filtration über "Hyflo" geklärt. Entfernen des Lösungsmittels liefert einen schwach gelben Schaum. Verreiben dieses Materials mit Diisopropylether (ca. 7 ml) liefert die Titelverbindung nach Waschen des Feststoffes mit Diisopropylether und n-Pentan als kristallinen Feststoff (750 mg). Die physikalischen Daten und die Spektren entsprechen denjenigen, die für das Produkt des Beispiels 38 angegeben sind.

Beispiel 35

Faktor A

Eine Lösung des 23-Hemioxalat-Faktors A (500 mg) in Dichlormethan (30 ml) wird zusammen mit wäßrigem Natriumhydroxid (1,54 g in 30 ml H2O) 2 h bei 21 °C heftig gerührt. Man trennt die organische Phase ab und wäscht die wäßrigePhase mit einem geringen Volumen a-Dichlormethan. Die organischen Phasen werden vereinigt, mit2M HCl gewaschen, anschließend getrocknet (Na2SC>4) und vom Lösungsmittel befreit, wobei man die Titelverbindung (430mg) als Schaum erhält. Mittels Vergleich mit einer authentischen Probe des Faktors A hat sich diese Verbindung als Faktor A erwiesen.

Beispiel 36

Faktor A. 5-Hemisuccinat

Eine Lösung des Faktors A (306 mg) und Bemsteinsäureanhydrid (60 mg) in trockenem Pyridin (0,5 ml) wird 24 h bei 22 °C gerührt. Die Mischung wird mit Ether verdünnt und die organischen Phasen werden dann mit 2N Salzsäure und Kochsalzlösung gewaschen. Verdampfen der getrockneten Etherschicht liefert einen Schaum, aus dem die Titelverbindung mittels präparativer Umkehrphasen-HPLC isoliert wird. Das Produkt in Ether wird durch Zugabe von n-Pentan als weißer amorpher Feststoff (86 mg) ausgefällt; -23-

AT 397 095 B

[α]22η +125° (£=0,44, CHC13); max 24511111 (%ιηχ 30,700); vmax (CHBr3) 3490 (OH), 3300-2200 (CO2H), 1730 (Säurecarbonyl) und 1710 cm*1 (Ester); 5 (CDC13): 2,74 (s,4H); m/z = 712 (M+).

Beispiel 37 5-Acetoxv-Faktor A. 23-Heminxalat 5-Acetoxy-Faktor A (600 mg), Calciumcarbonat (400 mg) und überschüssiges Oxalylchlorid (0,8 ml) werden zusammen 11/4 h in trockenem Dichlormethan (20 ml) bei 21 °C gerührt Die Mischung, verdünnt mit Ether, wird in wäßrige, gesättigte Natriumbicarbonatlösung gegossen, anschließend 20 min heftig gerührt und schließlich mit 2N Salzsäure auf pH 2 angesäuert. Verdampfen der getrockneten (Na2S04) organischen Phase liefert ein gelbes gummiartiges Material, das in Aceton gelöst wird. Die Lösung wird dann mit entfärbend wirkender Kohle gerührt Anhand einer üblichen Aufarbeitung erhält man einen farblosen Schaum. Dieses Material wird in Ether (5 ml) gelöst und die Lösung wird mit n-Pentan verdünnt, wobei die Titelverbindung als amorpher weißer Feststoff (403 mg) ausfällt; [a]23D +160° (£= 0,40, CHCI3); ^Et0Hmax 243 nm femax 30,800);

Vmax (CHBr3) 3530,3445 (OH), 1802 (Säuremonomer), 1775 (Säuredimer) und 1728 cm*1 (Ester); δ (CDCI3): ca. 5,53 (verdecktes d, 1H); 5,12 (m, 1H) und 2,16 (s, 3H).

Beispiel 38

Faktor A. 23-Hemioxalat

Zu einer gerührten und gekühlten (0-5 °C) Lösung von Acetoxy-Faktor A, 23-Hemioxalat (120 mg) in Methanol (4 ml) tropft man eine Lösung von Natriumhydroxid (14 mg) in Wasser (1 ml). Nach 13/4 h gießt man die schwach gelbe Lösung in Ethylacetat/2N Salzsäure und sammelt die organische Lösung, trocknet (t^SO^ und entfernt das Lösungsmittel, wobei man einen beinahe farblosen Schaum erhält Dieses Material wird in n-Pentan, das ein kleines Volumen Ether enthält, gelöst. DieseLösung wird dann mit verdünnter wäßriger Kaliumbicarbonadösungextrahiert Die wäßrige Lösung wird mit 2N Salzsäure auf pH 2 angesäuert. Das Präzipitat wird dann in Dichlormethan extrahiert. Verdampfen der getrockneten (Na2S04) organischen Phase liefert ein gummiartiges Material, das in einem geringen Volumen Ether gelöst wird. Verdünnen dieser Lösung mit n-Pentan liefert die Titelverbindung (52 mg) als weißen Feststoff; [oc]23d +156° (c = 0,69, CHCI3); ^Et°Hmax 244,5 nm (%ax 28,200); vmax (CHB^) 3360 bis 3600 (OH), 1805 (Säuremonomer) und 1720 cm'1 (Säuredimer und Ester); δ (CDC13): 4,30 (d, 5Hz, 1H) und 5,14 (m, 1H).

Beispiel 39

Faktor B. 23-Hemioxalat

DieTitelverbindung wird wie in Beispiel 37 beschrieben hergestellt. Sie wird mittels präparativer Umkehrphasen-HPLC gereinigt und liegt als amorphes weißes Pulver vor. (Etherm-Pentan) [a]23D +160ofe=0,20, CHC13); *-Et0Hmax 245-511111 (%ax 28-800);

Vmax (CHBr^) 3460 (OH), 1800 (Säuremonomer), 1770 (Säuredimer), 1724 und 1712 cm*1 (Ester); δ (CDC13): 5,15 (m, 1H) und 3,50 (s, 3H); m/z = 670 (M+).

Beispiel 40

5-Acetnxv. 23-Ethvloxalvloxv-Faktor A

Eine Lösung des 5-Acetoxy-Faktors A (320 mg) und überschüssiges Oxalylchlorid (0,5 ml) in trockenem Dichlormethan (6 ml) wird in Gegenwart von Calciumcarbonat (300 mg) 1 h gerührt. Die Mischung, verdünnt mit -24- 10 15 20 25 30 35 40 45 50

AT 397 095 B

Ether, wird in gesättigtes Natriumbicarbonat gegossen, 20 min gerührt und anschließend in Ethylacetat gegossen. Verdampfen der getrockneten (Na2SC>4) organischen Phase liefert ein gummiartiges Material (325 mg), das in Dichlormethan auf eine Säule aus Merck Kieselgel60,70-230 mesh silica (25 g), das in dem gleichen Lösungsmittel aufbeteitet ist, gegeben. Eluierung der Säule mit Dichlormethan und anschließend mit DichlormethanrEther liefert (95:5) die Titelveibindung (265 g) als weißen Schaum; [0C]23d + 157° (£=0,41, CHCI3); kEt0Hmax243 nm (6^32800); vmax (CHBr3) 3530,3480 (OH), 1760 und 1735 cm*1 (Ester); 5 (CDC13): 5,4 - 5,6 (m, 2H); 5,05 (m, 1H); 4,32 (q, 7Hz, 2H); 2,13 (s, 3H) und 1,35 (t, 7Hz, 3H). Beispiel 41 23-Methvloxalvloxv-Faktor A Eine Lösung von 5-Acetoxy, 23-Ethyloxalyloxy-Faktor A (50 mg) in Methanol (1 ml), die konzentrierte Schwefelsäure (0,01 ml) enthält, läßt man 17 h bei 21 °C stehen. Die Mischung wird dann in Ethylacetat gegossen und die organische Phase wird auf neutrales Material aufgearbeitet. Das Produkt wird mittels Chromatographie an Merck Kieselgel 60,70-230mesh silica (15 g) aufgearbeitet, wobei man als Eluierungsmittel zuerst Dichlormethan und dann DichlormethanrEther (9:1) verwendet. Man erhält die Titelverbindung als farbloses gummiartiges Material (25 mg); [a]23D + 147° (£=0,28, CHC13); ^EtOH^^ 245 nm (ε^^χ 26,000); vmax (CHBr3) 3550,3480 (OH), 1763,1737 und 1710 cm*1 (Ester); δ (CDC13): 4,29 (br.t, 7Hz, 1H); 5,09 (m, 1H) und 3,88 (s, 3H). Beispiel 42 Faktor A. 5.23-Bishemioxalat Faktor A (200 mg) und überschüssiges Oxalylchlorid (03 ml) werden zusammen in Dichlormethan (3 ml) in Gegenwart von Calciumcarbonat (Calofort U, 300 mg) 2 h bei 21 °C gerührt. Die Mischung wird dann in Ether/ gesättigtes wäßriges Natriumbicarbonat gegossen und anschließend weitere 20 min gerührt. Man säuert dann mit verdünnter Salzsäure auf pH 2 an. Verdampfen der getrockneten (Na2SÜ4) organischen Phase liefert ein gummi-artiges Material, aus dem die Titelverbindung mittels präparativer Umkehrphasen-HPLC isoliert und als amorpher Feststoff (Ethenn-Pentan) erhalten wird. [<x]22d + 142° (£= 0,41, CHC13); ^EtOH^^ 245,5 nm (ε,,^χ 29,200); vmax (CHBr3) 3550,3440 (OH), 1800 und 1775 (Säuremonomer) und 1730 cm*1 (Ester); δ (CDC13): 5,64 (m, 2H) und 5,13 (m, 1H). Beispiel 43 Faktor B.23-Chloracetat Faktor B (600 mg) und überschüssiges Chloracetylchlorid (0,4 ml) werden in trockenem Dichlormethan (10 ml) in Gegenwart von Calciumcarbonat (Calofort U, 380 mg) 20 h bei 21 °C gerührt Die Mischung wird dann in EthylacetatgegossenunddieorganischePhasewirdabgetrenntundmitgesättigterwäßrigerNatriumbicaibonatlösung, 2N Salzsäure und Kochsalzlösung gewaschen. Verdampfen der getrockneten (Na2S04) organischen Phase liefert ein gelbes gummiartiges Material, das beim Verreiben mit Diisopropylether/Petrolether (40 - 60°) einen kristallinen Feststoff ergibt Umkristallisation dieses Materials aus Diisopropylether:Petrolether (40 - 60°) liefert die Titelverbindung, Schmp. 224 - 225 °C.

[a]23D + 77° (£= 0,60, CHCI3); ^tOHmax244>5(Emax 30,250); . (CHBr3) 3540,3470 (OH). 1740 (Chloracetat) und 1710 cm*1 (Ester);

Kmax' δ (CDC13): 4,99 (m, 1H) und 3,49 (s, 3H); m/z = 674,676 (M+, 35C1 und 37C1). -25- 55

AT 397 095 B

Beispiel 44

5-Acetoxv-23-cvclopropvlcarbonvloxv-Faktor A

Eine Lösung des 5-Acetoxy-Faktors A (140 mg) in Pyridin (1 ml) wird mit Cyclopropancarbonsäurechlorid (0,08 ml) behandelt. Nach 3 h wird die Reaktionsmischung zwischen Ethylacetat und 2N Salzsäure verteilt Die 5 organische Phase wird abgetrennt und nacheinander mit 2N Salzsäure und gesättigter wäßriger Natriumbicarbonatlösung gewaschen. Die organische Lösung wird getrocknet (Na2S04) und das Lösungsmittel wird verdampft, wobei man ein Öl erhält das an einer Silikagelsäule (Mock Art 9385; 80 ml), die in Hexan (60 - 80°)/Ethylacetat (3:1) aufbereitet ist Chromatographien und mit dem gleichen Lösungsmittel eluiett wird. Entsprechende Fraktionen des Hauptbestandteils werden vereinigt und das Lösungsmittel wird verdampft wobei 10 man die Titelverbindung als Schaum erhält (70 mg); [a]22D +143° (c = 0,54, CHCI3); *CHCl3max 250,2 (ε = 20,310);

Vmax (CHBr3) 3550,3470 (OH) und 1733,1712 (Ester); 15 δ (CDC13): 2,16 (2,3H); 3,33 (m, 1H); 3,88 (d, J 10Hz, 1H); 5,01 (m, 1H) und 5,5 - 5,6 (m, 2H).

Die Verbindungen der Beispiele 45 bis 47 werden in gleicher Weise hergestellt

Beispiel 45

20 5-AcetPxv-23-cvclohutvlcarbonvloxv-Faktor A 5-Acetoxy-Faktor A (0,5 g) und Cyclobutancarbonsäurechlorid (0,25 ml) ergeben die Titelverbindung in Form eines Schaumes (037 g); [a]22D +148° (c = 0,635, CHC13); 25 2503 (ε = 17,980); vmax (CHBr3) 3540,3460 (OH) und 1729,1710 (Ester); 5 (CDC13): 21,6 (s, 3H); 3,12 (Quintett J 8Hz, 1H); 332 (m, 1H); 3,91 (d, J 10Hz, 1H); 4,9 - 5,1 (m, 2H) und 53 - 5,6 (m, 2H). 5® Beispiel 46

5-Acetnxv-23-cvclopentvlcarbonvloxv-Faktor A 5-Acetoxy-Faktor A (0,28 g) und Cyclopentylcarbonylsäurechlorid (03 ml) ergeben die Titelverbindung in Form eines Schaumes (0,17 g); 35 [a]22D +149° (c = 0,475, CHCI3); XCHC13max 2503 nm(e= 19,900); vmax (CHBr3) 3480 (OH) und 1730,1710 (Ester); 8 (CDC13): 2,16 (s, 3H); 2,74 (Quintett, J 7Hz, 1H); 3,32 (m, 1H); 3,90 (d, J 10Hz, 1H); 4,94 (m, 1H); 53 - 5,6 40 (m,2H).

Beispiel 47

5-Acetoxv-23-cvclohexvlcarbonvloxv-FaktorA 5-Acetoxy-Faktor A (03 g) und Cyclohexylcarbonylchlorid (0,25 ml) ergeben die Titelverbindung in Form eines 45 Schaumes (031 g); [a]2°D +143° (c = 038, CHC13); Ä'CHC13max 2503 (ε = 21370); 50 Vmax (CHBr3) 3540,3470 (OH), 1730,1710 (Ester); δ (CDC13): 2,17 (s, 3H); 332 (m, 1H); 3,91 (d, J 10Hz, 1H); 4,9-5,1 (m, 2H), 53 - 5,6 (m, 2H).

Beispiel 48

23-Cvclopropvlcarbonvloxv-Faktor A 55 Eine gerührte Lösung von 5-Acetoxy-23-cyclopropylcarbonyloxy-Faktor A (230 mg) in Methanol (15 ml) wird

in einem Eisbad gekühlt und mit 3%iger wäßriger Natriumhydroxidlösung (03 ml) behandelt Nach 5 h, während der man die Reaktionsmischung auf Raumtemperatur erwärmen läßt wird die Lösung zwischen Ethylacetat und 2N -26-

AT 397 095 B

Salzsäure verteilt Die organische Phase wird abgetrennt, mit 2N Salzsäure (zweimal) gewaschen, getrocknet (Na2SC>4) und das Lösungsmittel wird verdampft Der Rückstand wird an einer Silikagelsäule (Merck Art 9385; 150 ml), die in Hexan (60 · 80°)/Ethylacetat aufbereitet ist Chromatographien und mit dem gleichen Lösungsmittel eluiert Man vereinigt entsprechende Fraktionen des Hauptbestandteils und verdampft das Lösungsmittel, wobei man 5 die Titelverbindung als Schaum erhält (170 mg); [a]22D +146° (c = 0,46, CHCI3); lCHC13max 2502 nm (ε = 20,090); Vmax (CHBr3) 3550,3480 (OH) und Π09 (Ester); 0 8 (CDC13): 3,26 (m, 1H); 3,88 (d, J 10Hz, 1H); 4,29 (t J 7Hz, 1H) und 5,01 (m; 1H).

Die Verbindung»! der Beispiele 49 bis 51 werden in gleicher Weise hergestellt 15 20 25 30 35 40 45 50

Beispiel 49 23-Cvclobutvlcarbonvloxv-Faktor A Entfernung der Schutzgruppe aus dem 5-Acetoxy-23-cyclobutylcarbonyloxy-Faktor A (330 mg) liefen die Titelverbindung als Schaum (270 mg); [a]20D + 149° (c = 0,63, CHC13); xCHCl3max 250>2 (ß = 20,430); vmax (CHBr3) 3550,3480 (OH), 1710 (Ester); δ (CDC13): 3,13 (Quintett, J 8Hz, 1H); 3,26 (m, 1H); 3,92 (d, J 10Hz, 1H); 429 (t, J 7Hz, 1H); 4,9 - 5,1 (m, 2H). Beispiel 50 23-Cvclopentvlcarbonvloxv-Faktor A Entfernung der Schutzgruppe aus dem 5-Acetoxy-23-cyclopentylcarbonyloxy-Faktor A (0,25 g) liefen die Titelverbindung als Schaum (0,215 g); [a]20D + 141° (c = 0,63, CHC13); ?.CHa3max 2502 nm (ε = 19,990); ν,η^ (CHBr3) 3550,3480 (OH), 1710 (Ester); δ (CDC13): 2,74 (Quintett, J 7Hz, 1H); 326 (m, 1H); 3,91 (d, J 10Hz, 1H); 420 (t J 7Hz, 1H); 4,95 (m, 1H). Beispiel 51 23 -Cvclohexvlcarbonvloxv-Faktor A Entfernung der Schutzgruppe aus dem 5-Acetoxy-23-cyclohexylcarbonyloxy-Faktor A (0,45 g) liefert die Titelverbindung als Schaum (0,42 g); [a]2°D +132° (c = 0,705, CHd3); XCHCI3max 2502 (ε = 18,510); Vmax (CHBr3) 555,3480 (OH), 1710 (Ester); δ (CDC13): 0,69 (d, J 7Hz, 3H); 3,91 (d, J 10Hz, 1H); 429 (t, J 7Hz, 1H), 4,96 (m, 1H). Beispiel 52 23-Cvclonronvlcarhfmvloxv-5-methoxvcarbonvloxv-Faktor A Eine Lösung von 23-Cyclopropylcarbonyloxy'Faktor A (0,1 g) in trockenem Dichlormethan (15 ml) wird in einem Eisbad gekühlt und mit Pyridin (02 ml) und anschließend mit einer IM Lösung von Methylchlorformat in Dichlormethan (02 ml) behandelt. Nach 20 min wird die Lösung mit Dichlormethan verdünnt und mit 2N Salzsäure gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und als Lösungsmittel verdampft. Der Rückstand wird an einer Kieselgelsäule (Merck, Art9385; 100 ml), die in Hexan (60 - 80°)/Ethylacetat (3:1) auf bereitet ist, chromatographiert und mit dem gleichen Lösungsmittel eluiert Man vereinigt die entsprechenden Fraktionen des Hauptbestandteils und verdampft das Lösungsmittel, wobei man die Titelverbindung als Schaum (0,106 g) erhält; -27- 55

AT 397 095 B

[a]20D +149° (c=0,63, CHCI3); ^^250,2(6 = 20,470);

Vmax (CHBr3) 3470 (OH), 1745 (Carbonat), 1710 (Ester), 998 (C-O); δ (CDC13): 5,56 (s, 1H); 5,01 (m, 1H); 3,88 (d, J 10Hz, 1H); 3,83 (s, 3H); 0,67 (d, J 7Hz, 3H).

Die Verbindungen der Beispiele 53 bis 55 werden in gleicher Weise hergestellt

Beispiel 53 23-Cvclobütvlcarbonvloxv-5-methoxvcarbonvloxv-Faktor A (0.13 g> [a]20D +149° (c = 0,515, CHCI3); ^^max 250,6 (ε = 20,100); vmax (CHB*3) 3480 (OH), 1744 (Carbonat), 1710 (Ester), 996 (C-O); δ (CDC13): 5,56 (s, 1H); 4,96 (m, 1H); 3,92 (d, J 10Hz, 1H); 3,83 (s, 3H); 3,13 (Quintett J 8Hz, 1H); 0,70 (d,J7Hz,3H); aus 23-Cyclobutylcarbonyloxy-Faktor A (0,12 g).

Beispiel 54 23-Cvclopentvlcarbonvloxv-5-methoxvcarhonvloxv-Faktor A fQ-115 e) [a]20D +141° (c=0,505, CHa3); kCHCI3max 250,2 (ε = 22,160);

Vmax (CHBr3) 3470 (OH), 1744 (Carbonat), 1710 (Ester), 1000 (C-O); δ (CDC13): 5,56 (s, 1H); 4,95 (m, 1H); 3,91 (d, J 10Hz, 1H); 3,83 (s, 3H); 2,74 (Quintett J 8Hz, 1H); 0,69 (d, J 7Hz, 3H) aus 23-Cyclopentylcarbonyloxy-Faktor A (0,106 g).

Beispiel.?? 23-cvclohexYlcarbonvioxY-5-methoxYcarbonvloxv-Faktor A ffl. 1 g) [a]20D +136° (c = 0,47, CHC13); ^CHC13max (ε - 20,230); vmax (CHBr3) 3470 (OH), 1744 (Carbonat), 1710 (Ester), 996 (C-O); δ (CDC13): 5,57 (s, 1H); 4,97 (m, 2H); 3,92 (d, J 10Hz, 1H); 3,84 (s, 3H); 0,69 (d, J 7Hz, 3H); ans 23-Cyclohexylcarbonyloxy-Faktor A (0,1-8 g).

Beispiel 56

Faktor A, 5.23-Di-n-butvrat

Eine Lösung von Faktor A (306 mg), n-Buttersäureanhydrid (0,33 ml) und 4-Dimethylaminopyridin (244 mg) in Pyridin (5 ml) wird 18 h bei 20 °C gerührt und anschließend in eine Mischung aus Ethylacetat und 2N Salzsäure (jeweils 50 ml) gegossen. Die organische Phase wird mit 2N Salzsäure, gesättigtem Natriumbicarbonat (25 ml) und Kochsalzlösung (25 ml) gewaschen und getrocknet (Magnesiumsulfat) und zur Trockene eingeengt Der Rückstand wird an Kieselgel 60 (40 g) Chromatographien. Ebneren der Säule mit leichtem PetrolethenEthylacetat (5:1) liefert die Titelverbindung (200 mg) als farblosen Schaum.

[<x]20d +144° (c = 1,13, CHC13);

Xmax (EtOH) 245 nm (ε=31,800);

Vmax (CHBr3) 1720 cm** (Ester); δ (CDC13): 5,5 - 5,6 (m, 2H); 4,94 (m, 1H); 3,92 (d, J 10Hz, 1H); 239 (t J 7Hz, 2H); 2,28 (t J 7Hz, 2H) und 0,70 (d,J7Hz,3H); m/z = 752 (M+).

Die Verbindungen der Beispiele 58,59,62,64,66,67 und 96 werden in gleicher Weise hergestellt Beispiel 57

Faktor A. 23-n-Butvrat

Man rührt eine Lösung des Faktors A 5,23-Di-n-butyrat (160 mg) in Methanol (10 ml) bei 0 °C und gibt IM Natriumhydroxid (0,25 ml) zu. Die erhaltene Lösung rührt man 90 min bei 0 - 5 °C, gibt dann IM Natriumhydroxid (0,25 ml) zu und rührt weitere 4 h. Die Lösung wird in eine Mischung aus Ethylacetat (50 ml) und 2N Salzsäure -28- AT 397 095 B' (25 ml) gegossen. DieorganischePhase wird mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen und getrocknet (Magnesiumsulfat) und zur Trockene eingeengt. Der Rückstand wird an Kieselgel 60 (20 g) Chromatographien. Eluierung dar Säule mit leichtem PetrolethenEthylacetat (2:1) liefert die Titelverbindung (68 mg) als farblosen Schaum; 5 [a]20D +164° (c = 1,03, CHC13); ληΜΤ CEtOH) 244,5 nm (ε=29,600); vmax (CHBrg) 3550 und 3470 (OH) und 1710 cm‘^ (Ester); δ (CDClj): 4,93 (m, 1H); 4,28 (t, J 7Hz, 1H); 3,91 (d, J 10Hz, 1H); 2,28 (t, J 7Hz, 2H); 1,65 (m, 2H); 0,94 10 (t,J 7Hz, 3H) und 0,69 (d,J7Hz,3H); m/z = 682 (M+).

Die Varbindungen der Befiele 61,63,65,68,90 und 97 wadai in gleicher Weise hergestellt.

Beispiel 58 15 Faktor A. 5-Acetat. 23-n-Butvrat (143 mg) [a]2°D +152° (c = 0,7, CHCI3); (EtOH) 244 nm (ε 27,300); vmax (CHBrß) 3490 (OH) und 1720 cm-1 (Ester); 20 δ (CDC13): 5,5 - 5,6 (m, 2H); 4,95 (m, 1H); 3,92 (d, J 10Hz, 1H); 2,29 (m, 2H); 2,16 (s, 3H); 0,96 (t, J 7Hz, 3H) und 0,70 (d,J7Hz, 3H); aus Faktor A, 5-Acetat (218 mg) und n-Buttersäureanhydrid (0,16 ml).

Beispiel 59 25 Faktor A, 5.23-Diisobutvrat (300 mg) [a]20D +157° (c = 0,61, CHCI3);

Xmax (EtOH) 244 nm (ε 29,200); vmax (CHB^) 3470 (OH) und 1720 cm'l (Ester); 30 δ (CDC13): 5,53 (m, 2H); 4,95 (m, 1H); 3,93 (d, J 10Hz, 1H); 2,8 - 2,4 (m, 2H); 1,23 (d, J 7Hz, 6H); 1,20 (d,J7Hz,6H) und 0,70 (d,J7Hz,3H); aus Faktor A (306 mg) und Isobutyrylchlorid (0,2 ml).

Beispiel 60 35 Faktor A. 5-Acetat. 23-Isobutvrat

Eine Lösung von Faktor A, 5-Acetat (131 mg), Isobutyrylchlorid (0,05 ml), Pyridin (0,1 ml) und4-Dimethyl-aminopyridin (25 mg) in trockenem Dichlormethan (10 ml) wird 16 h bei 20 °C gerührt. Die Lösung wird mit Dichlormethan (30 ml) verdünnt, mit2N Salzsäure gewaschen und getrocknet (Magnesiumsulfat) und zur Trockene verdampft. Der Rückstand wird an Kieselgel 60 (15 g) Chromatographien. Eluieien der Säule mit leichtem 40 PetrolethenEthylacetat (4:1) liefert die Titelverbindung (57 mg) als farblosen Schaum; [oc]20d + 159° (c = 0,61, CHCI3); (EtOH) 244 nm (ε = 30,400); vmax (CHBr3) 3480 (OH) und 1713 cm'l (Ester); δ (CDC13): 5,5 - 5,6 (m, 2H); 4,95 (m, 1H); 3,93 (d, J 10Hz, 1H); 2,55 (Septett, J 7Hz, 1H); 2,17 (s, 3H); 1,20 (d, J 7Hz, 6H) und 0,70 (d, J 7Hz, 3H).

Beispiel 61 50 Faktor A. 23-Isobutvrat (280 mg) [a)20D +162° (c = 0,65, CHCI3); (EtOH) 244 nm (ε 31,000); vmax (CHBr3) 3560 und 3480 (OH) und 1712 cm'l (Ester); 5(CDa3):4,95(m,lH);4,29(t,J7Hz,lH);3,92(d,J ΙΟΗζ,ΙΗ); 2,54 (Septett, J7Hz,lH); l,19(d,J7Hz,6H) und 0,69 (d, J 7Hz, 3H); aus Faktor A, 5-Acetat, 23-Isobutyrat (420 mg). -29-

AT 397 095 B

Beispiel 62

Faktor A. 5-Acetat. 23-Heotanoat (437 mg) [a]20!) +153° (c=0,6, CHCI3); (EtOH) 244 nm (ε=29,700); vmax (C®r3) 3490 (OH) und 1730 und 1712 cm-1 (Ester); 5 (CDC13): 5,5 - 5,6 (m, 2H); 4,93 (m, 1H); 3,91 (d, J 10Hz, 1H); 2,28 (t, J 8Hz, 2H); 2,13 (s, 3H); 0,86 (t, J 7Hz, 3H) und 0,68 (d,J7Hz,3H); aus Faktor A, 5-Acetat (4-1 mg) und Heptanoylchlorid (031 ml).

Beispiel^

Faktor A. 23-Heotanoat (230 mg) [a]20D +149° (c = 0,7, CHCI3); ^ (EtOH) 244 nm (ε=30,400);

Vmax (CHBr3) 3550 und 3480 (OH) und 1712 cm"1 (Ester); δ (CDC13): 4,94 (m, 1H), 439 (t, J 7Hz, 1H); 3,92 (d, J 10Hz, 1H); 230 (t, J 8Hz, 2H); 0,88 (t, J 7Hz, 3H) und 0,69(d,J7Hz,3H); aus Faktor A, 5-Acetat, 23-Heptanoat (387 mg).

Beispiel 64

Faktor A. 5-Acetat. 23-Pivaloat (70 mg) [a]20D +159° (c = 0,69, CHCI3); (EtOH) 244 nm (ε = 29,900); vmax (CHBr3) 3470 (OH) und 1730 und 1710 cm'1 (Ester); δ (CDC13): 53 - 5,6 (m, 2H); 4,95 (m, 1H); 3,91 (d, J 10Hz, 1H); 2,16 (s, 3H); 1,22 (s, 9H) und 0,68 (d, J 7Hz, 3H); aus Faktor A, 5-Acetat (131 mg) und Pivaloylchlorid (0,06 ml).

Beispiel 65

Faktor A. 23-Pivaloat (214 mg) [a]20D +152° (c = 0,74, CHC13);

Xmax (EtOH) 244 nm (ε = 27300); vmax (CHBr3) 3550 und 3500 (OH) und 1710 cm'1 (Ester); δ (CDC13): 4,95 (m, 1H); 439 (breites s, 1H); 3,91 (d, J 10Hz, 1H); 1,23 (s, 9H) und 0,69 (d, J 7Hz, 3H); aus Faktor A, 5-Acetat, 23-Pivaloat (315 mg).

Beispiel 66

Faktor A, 5-Acetat 23-Benzoat Π80 mg) [ct]20D +153° (c = 039, CHC13);

Xjuax (EtOH) 236 nm (ε=36,200); vmax (CHBr3) 3460 (OH) und 1730 und 1707 cm'1 (Ester); δ (CDC13): 8,21 (d, J 7Hz, 2H); 7,56 (t, J 7Hz, 1H); 7,44 (t, J 7Hz, 2H); 53-5,6 (m, 2H); 4,07 (d, J 10Hz, 1H); 2,17 (s, 3H) und 0,75 (d, J 7Hz, 3H); aus Faktor A, 5-Acetat (327 mg) und Benzoesäureanhydrid (339 mg).

Beispiel 67

Faktor A. 5.23-Dibenzoat (370 mg) und 5-Benzoat (200 mg)

Erhältlich aus Faktor A (613 mg) und BenzoylcMorid (0,35 ml). Die anfänglichen Fraktionen liefern das Dibenzoat; [a]20D + 86° (c = 0,65, CHCI3); (EtOH) 236 nm (8 = 46^200);

Vmax (CHBr3) 3480 (OH), 1710 (Ester) und 1602 und 1585 cm'1 (Phenyl);

AT 397 095 B 5 (CDC13): 8,2 - 8,0 (m, 4H); 7,7 - 7,5 (m, 2H); 7,46 (t, J 7Hz, 4H); 5,61 (s, 1H); 4,07 (d, J 10Hz, 1H) und 0,76 (d,J7Hz,3H).

Die weiteren Fraktionen liefern das Benzoat: [a]20D + 80° (c = 0,61, CHCI3);

Xjnax (EtOH) 237 nm (ε=39,200); vmax (CHBr3) 3500 (OH), 1712 (Ester) und 1601 und 1584 cm'1 (Phenyl); 8 (CDC13): 8,09 (d, J 7Hz,2H); 7,58 (t, J 7Hz, 1H); 7,45 (t, J 7Hz, 2H); 5,60 (s, 1H); 3,83 (m, 1H); 3,76 (d, J 10Hz, 1H) und 0,81 (d,J7Hz,3H).

Beispiel 68

Faktor A, 23-Benzoat_(90- mg) [a]20D +146° (c = 0,63, CHC13); λι^ (EtOH) 236 nm (ε = 33,800); ν,,^χ (CHBr3) 3560 und 3480 (OH) und 1709 cm'1 (Ester); δ (CDC13): 8,10 (d, J 7Hz, 2H); 7,55 (t, J 7Hz, 1H); 7,44 (t, J 7Hz, 2H); 4,29 (t, J 7Hz, 1H); 4,07 (d, J 10Hz, 1H) und 0,75 (d,J7Hz,3H); aus Faktor A, 5,23-Dibenzoat (315 mg).

Beispiel 69

Faktor A. 5-Chloracetat

Man rührt eine Lösung des Faktors A (123 mg) und Pyridin (0,1 ml) in trockenem Dichlormethan (5 ml) bei 0 °C und gibt Chloracetylchlorid (0,3 ml einer IM Lösung in Dichlormethan) zu. Die erhaltene Lösung rührt man weitere 15 min bei 0 °C, gibt dann zusätzliches Chloracetylchlorid (0,1 ml der IM Lösung) zu und rührt weitere 15 min. Die Lösung wird mit Dichlormethan (50 ml) verdünnt, dann mit 2N Salzsäure (2 x 20 ml) und gesättigtem Natriumbicarbonat (20 ml) gewaschen und getrocknet (Magnesiumsulfat) und zur Trockene verdampft. Der Rückstand (140 mg) wird mittels Chromatographie an Kieselgel 60 (15 g) gereinigt Eluieren der Säule mit leichtem Petroleum:Ethylacetat (4:1) liefert die Titelverbindung (90 mg) als farblosen Schaum.

[a]20D+143° (c= 1,11, CHC13); λι^ (EtOH) 245,5 nm (ε = 30,400); vmax (CHBr3) 3500 (OH), 1760 (Chloracetat) und 1710 cm'1 (Ester); δ (CDC13): 5,5 - 5,6 (m, 2H); 4,18 (s, 2H); ca. 3,81 (m, 1H); 3,74 (d, J 10Hz, 1H) und 0,80 (d, J 7Hz, 3H); m/z = 688(M+,35Cl).

Die Verbindungen der Beispiele 71 bis 75,82,83,85,87,89,91,93,95 und 98 bis 102 werden in gleicher Weise hergestellt.

Beispiel 70

Faktor A. 5-Chloracetat. 23-Keton

Eine Lösung von Faktor A, 5-Chloracetat (276 mg) und Pyridiniumdichromat (602 mg) in trockenem Ν,Ν-Dimethylformamid (10 ml) wird 48 h bei 20 °C gerührt und anschließend in eine Mischung aus Ethylacetat (50 ml) und 2N Salzsäure (25 ml) gegossen. Die organische Phase wird mit 2N Salzsäure und gesättigtem Natriumbicarbonat gewaschen und getrocknet (Magnesiumsulfat) und zur Trockene verdampft. Der Rückstand wird mittels Chromatographie an Kieselgel 60 (25 g) gereinigt Eluieren der Säule mit leichtem Petroleum:Ethylacetat (4:1) liefert die Titelverbindung (85 mg) als farblosen Schaum; [a]20D +120° (c = 1,05, CHC13);

Xmax (EtOH) 245 nm (ε = 26,500); vmax (CHBr3) 3480 (OH), 1760 (Chloracetat) und 1715 cm'1 (Ester und Keton); δ (CDC13): 5,5 - 5,7 (m, 2H); 4,17 (s, 2H); 3,72 (d, J 10Hz, 1H); 2,50 (s, 2H) und 0,85 (d, J 7Hz, 3H); m/z = 686(M+,35Cl).

Die Verbindungen der Beispiele 84,86 und 104 werden in gleicher Weise hergestellt. -31- AT 397 095 B'

Beispiel 71

Faktor A. 5-Bromacetat (447 mg» [a]20D +132° (c=0,77, CHCI3);

XmaT (EtOH) 245,5 nm (ε=31,500); ^ vmax (CHBrj) 3495 (OH), 1730 (Bromacetat) und 1712 cm'* (Ester); δ (CDC13): 5,5 - 5,6 (m, 2H); 3,97 (d, J 12Hz, 1H); 3,90 (d, J 12Hz, 1H); 3,81 (m, 1H); 3,75 (d, J 10Hz, 1H) und 0,81 (d, J 7Hz, 3H); aus Faktor A (613 g) und Bromacetylbromid (0,13 ml). 10

Beispiel 72

Faktor A. 5-n-Butvlcarbonat. 23-Keton (75 mgl [a]20D +103° (c = 0,7, CHCI3);

XmaY (EtOH) 245 nm (ε 26,200); 15 Vmay (CHBr3) 3480 (OH), 1738 (Carbonat) und 1720 cm'l (Ester und Keton); δ (CDC13): 5,56 (s, 1H); 43 - 4,0 (m, 3H); 3,71 (d, J 10Hz, 1H); 0,93 (t, J 7Hz, 3H) und 0,86 (d, J 7Hz, 3H). Aus Faktor A, 23-Keton (92 mg) und n-Butylchlorformat (0,04 ml). 20 Beispiel 73

Faktor A, 5-Methvlcarbonat. 23-Isobutvrat (78 me) [a]20D +166° (c = 0,7, CHC13);

Xmax (EtOH) 244 nm (ε 29,400); vmax (CHBr3) 3480 (OH), 1743 (Carbonat) und 1712 cm'* (Ester); 25 δ (CDC13): 5,55 (s, 1H); 4,94 (m, 1H); 3,92 (d, J 10Hz, 1H); 3,83 (s, 3H); 2,54 (Septett, J 7Hz, 1H); 1,20 (d, J 7Hz, 6H) und 0,69 (d, J 7Hz, 3H); aus Faktor A, 23-Isobutyrat (103 mg) und Ethylchlorformat (0,3 ml einer IM Lösung in Dichlormethan). 30 Beispiel 74

Faktor A. 5-Benzvlcarbonat 23-Propionat (66 mgl [c02OD +123° (c = 0,6, CHC13);

Xmax (EtOH) 244 nm (ε = 30,000); vmax (CHBr3) 3540 und 3470 (OH) und 1720 cnT* (Ester und Carbonat); 35 δ (CDC13): 73-7,3 (m, 5H); 5,56 (s, lH);4,95(m, lH);3,92(d,J10Hz, lH);2,33(q,J7Hz,2H); l,15(t,J7Hz, 3H) und 0,70 (d,J7Hz,3H); aus Faktor A, 23-Propionat (100 mg) und Benzylchlorformat (0,05 ml). 40 Beispiel 75

Faktor A. 5-Methvlcarbonat. 23-Heptanoat (120 mg> [<x]20d +157° (c = 0,69, CHC13);

Xmax (EtOH) 244 nm (ε=31,600); vmax (CHBr3) 3480 (OH), 1743 (Carbonat) und 1712 cnT* (Ester); 45 δ (CDC13): 536 (s, 1H); 4,95 (m, 1H); 3,92 (d, J 10Hz, 1H); 3,83 (s, 3H); 2,30 (t, J 7Hz, 2H); 0,88 (t, J 7Hz, 3H) und 0,69 (d,J7Hz,3H); aus Faktor A, 23-Heptanoat (145 mg) und Methylchlorformat (0,4 ml einer IM Lösung in Dichlormethan). 50 Beispiel 76

Faktor A. 5.23-Dichloracetat

Eine Mischung von Faktor A, 5-Chloracetat (365 mg), Chloracetylchlorid (0,21 ml) und Calciumcarbonat (265 mg) in trockenem Dichlormethan (15 ml) wird 48 h bei 20 °C gerührt. Die erhaltene Suspension wird mit Dichlormethan (50 ml) verdünnt, anschließend mit2N Salzsäure und gesättigtem Natriumbicarbonat gewaschen und 55 getrocknet (Magnesiumsulfat) und zur Trockene verdampft. Der Rückstand wird mittels Chromatographie an Kieselgel 60 (30 g) gereinigt. Eluieren der Säule mit leichtem Petroleum :Ethylacetat (4:1) liefert die Titelverbindung (167 mg) als farblosen Schaum; -32-

AT 397 095 B

[a]20D + 151° (c = 1,17, CHC13);

Xmay (EtOH) 245,5 nm (ε=29,400); vmax (CHBr3) 3470 (OH) und 1725 cm'1 (Ester); 5 δ (CDC13): 5,5 - 5,6 (m, 2H); 5,00 (m, 1H); 4,17 (s, 2H); 4,10 (d, J 15Hz, 1H); 4,02 (d, J 15Hz, 1H); 3,92 (d, J 10Hz, 1H) und 0,73 (d, J 7Hz, 3H); m/z = 764(M+,35Cl).

Die Verbindungen der Beispiele 77 bis 81,92 und 94 werden in gleicher Weise hergestellt. 10 Beispiel 77

Faktor A- 5-Acetat. 23-Chloracetat (447 mg) [a]20D +161° (c = 0,94, CHCI3);

Amax (EtOH) 245 nm (ε=29 900); vmax (CHBr3) 3470 (OH) und 1730 cm'1 (Ester); 15 δ (CDC13): 5,5 - 5,6 (m, 2H); 4,99 (m, 1H); 4,10 (d, J 15Hz, 1H); 4,02 (d, J 15Hz, 1H); 3,92 (d, J 10Hz, 1H); 2,17 (s, 3H) und 0,73 (d, J 7Hz, 3H); m/z = 730 (M+, 35C1); aus Faktor A, 5-Acetat (655 mg) und Chloracetylchlorid (0,4 ml). 20

Beispiel 78

Faktor A. 5-Acetat. 23-Bromacetat (210 mg) [<x]20d + 151° (c = 0,91, CHCI3);

Xmax (EtOH) 245 nm (ε=28,900); vmax (CHBr3) 3470 (OH) und 1728 cm'1 (Ester); δ (CDC13): 5,5 - 5,6 (m,2H),4,98 (m,2H); 393 (d, J 10Hz, 1H); 3,89 (d, J 13Hz, 1H); 3,80 (dj 13Hz, 1H); 2,16 (s, 3H) und 0,75 (d, J 7Hz, 3H); aus Faktor A, 5-Acetat (655 mg) und Bromacetylbromid (0,44 ml). 30

Beispiel 79

Faktor A. 5.23-Dibromacetat (430 mg> [a]2ÖD + 132° (c = 1,04, CHCI3);

Ajuax (EtOH) 245,5 nm (ε = 30,600); 35 vmax (CHBr3) 3460 (OH) und 1726 cm"1 (Ester; δ (CDC13): 5,5 - 5,6 (m, 2H); 4,98 (m, 2H); 4,0 - 3,7 (m, 6H) und 0,74 (d, J 7Hz, 3H); aus Faktor A (613 mg) und Bromacetylbromid (0,44 ml). 40 Beispiel 80

Faktor A. 23-Methoxvacetat (92 mg) [a]20D +157® (c = 0,75, CHCI3); λ,η^ (EtOH) 244 nm (ε = 32,300); vmax (CHBr3) 3560 und 3480 (OH), 1740 (Methoxyacetat) und 1712 cm'1 (Ester); 45 δ (CDC13): 5,01 (m, 1H); 4,28 (t, J 7Hz, 1H); 4,01 (s, 2H); 3,89 (d, J 10Hz, 1H); 3,46 (s, 3H) und 0,71 (d, J 7Hz, 3H); aus Faktor A (184 mg) und Methoxyacetylchlorid (0,3 ml). 50

Beispiel 81

Faktor A. 23-Phenoxvacetat (112 mg) [a]20D + 129° (c = 0,75, CHCI3); (EtOH) 244 nm (ε = 25,900); 55 vmax (CHBr3) 3550 und 3470 (OH) und 1745 und 1708 cm'1 (Ester); δ (CDC13): 7,30 (t, J 8Hz, 2H); 7,00 (t, J 8Hz, 1H); 6,94 (d, J 8Hz, 2H), 5,02 (m, 1H); 4,68 (d, J 16Hz, 1H); 4,58 (d, J 16Hz, 1H); 4,30 (d, J 7Hz, 1H); 3,92 (d, J 10Hz, 1H) und 0,67) d, J 7Hz, 3H); -33-

AT 397 095 B aus Faktor A (184 mg) und Phenoxyacetylchlorid (0,38 ml).

Beispiel 82

Faktor A. 5-Acetat. 23-Propionat f60 mz) [a]20D +173° (c = 0,85, CHC13); λϋ,^ (EtOH) 245 nm (ε=28,100); vmax (CHBr3) 3460 (OH) und 1725 cm-1 (Ester); δ (CDC13): 5,5 - 5,6 (m, 2H); 4,94 (m, 1H); 3,91 (d, J 10Hz, 1H); 2,31 (q, J 7Hz, 2H), 216 (s, 3H), 1,15 (t, J 7Hz, 3H) und 0,69 (d,J 7Hz, 3H); aus Faktor A, 23-Propionat (100 mg) und Acetylchlorid (0,5 ml einer IM Lösung in Dichlormethan).

Beispiel 83

Faktor A. 5-Methvlcarbonat Γ475 mg) [a]2°D +146° (c = 1,05, CHCI3); (EtOH) 244 nm (ε = 29,400);

Vmax (CHBr3) 3500 (OHO, 1742 (Carbonat) und 1710 cm'1 (Ester); δ (CDC13): 546 (s, 1H); 3,82 (s, 3H); 3,76 (d, J 10Hz, 1H) und 0,81 (d, J 7Hz, 3H); m/z=670(M+); aus Faktor A (613 mg) und Methylchlorformat (0,2 ml).

Beispiel 84

Faktor A. 5-Methvlcarbonat. 23-Keton fl 10 mg) [a]20D + 129ö (c = 0,84, CHC13);

Xjnax (EtOH) 245,5 nm (ε=28,900); vmax (CHBr3) 3320 - 3600 (OH), Π45 (Carbonat) und 1715 cm-1 (Ester und Keton); δ (CDC13): 546 (s, 1H); 3,83 (s, 3H); 3,70 (d, J 10Hz, 1H); 2,50 (s, 2H) und 0,86 (d, J 7Hz, 3H); m/z = 668 (M+); aus Faktor A, 5-Methylcarbonat (282 mg).

Beispiel 85

Faktor A. 5-(2.2.2-Trichlorethvl)-caibonat (*238 g'l [a]20D +119° (c = 0,93, CHC13); λι^ (EtOH) 245 nm (ε = 30,700); vmax (CHBr3) 3500 (OH), 1755 (Carbonat) und 1710 cm'1 (Ester); 5(CDC13): 5,60 (s, 1H); 4,90 und 4,75 (ABq, J 12Hz, 2H); 3,81 (m, 1H); 3,75 (d, J 10Hz, 1H) und 0,80 (d,J7Hz, 3H); m/z = 786(M+,35Cl); aus Faktor A (306 mg) und 2,2,2-Trichlorethylchlorformat (0,9 ml einer IM Lösung in Dichlormethan). Beispiel 86

Faktor A. 5-f2.2.2-Trichlorethvl)-carbonat. 23-Keton (65 mg) [a]20D + 98° (c = 1,07, OHCl3); kjugx (EtOH) 245,5 nm (ε = 28300);

Vmax (CHBr3) 3300 - 3600 (OH), 1755 (Carbonat) und 1710 cm'1 (Ester und Keton); δ (CDC13): 5,61 (s, 1H); 4,90 und 4,75 (Abq, J 12Hz, 2H); 3,72 (d, J 10Hz, 1H); 2,51 (s, 2H) und 0,87 (d, J 7Hz, 3H); m/z = 784(M+,35Cl); aus Faktor A, 5-(23,2-Trichlorethyl)-carbonat (186 mg).

Beispiel 87

Faktor A. 5.23-Di-('2.2.2-TrichlorethvlVcarhonat Γ362 mai [α]20ο +110° (c = 0,94, CHCI3); -34- 10 15 20 25 30 35 40 45 50

AT 397 095 B (EtOH) 244 nm (ε = 28,000); vmax (CHBr3) 3550 und 3460 (OH), 1750 (Carbonat) und 1710 cm'1 (Ester); 8 (CDC13): 5,60 (s, 1H); 4,89 und 4,75 (ABq, J12Hz, 2H); 4,85 (m, 1H); 4,81 und 4,71 (ABq, J 14Hz, 2H) und 0,79 (d, J 7Hz, 3H); aus Faktor A (306 mg) und 2,2,2-Trichlorethylchlorformat (0,14 ml). Beispiel 88 Faktor A. 23-(2.2.2-TrichlorethvO-carbonat Man rührt eine Lösung von Faktor A, 5,23-Di-(2,2,2-Trichlorethyl)-carbonat (200 mg) in Dioxan (10 ml) bei ca. 20 °C und gibt IM Natriumhydroxid (0,5 ml) zu. Die erhaltene Lösung rührt man 30 min, gibt weiteres IM Natriumhydroxid (1 ml) zu und rührt eine weitere Stunde. Die Lösung wird mit Ethylacetat (50 ml) verdünnt, mit 2N Salzsäure gewaschen und getrocknet (Magnesiumsulfat) und zur Trockene verdampft. Der Rückstand wird an Kieselgel 60 (15 g) gereinigt Eluieren der Säule mit leichtem Petroleum:Ethylacetat (2:1) liefert die Titelverbindung (80 mg) als farblosen Schaum; [cx]20d + 142° (c = 0,92, CHC13); Xmax (EtOH) 245 nm (ε = 29,200); vmax (CHBr3) 3560 und 3500 (OH), 1745 (Carbonat) und 1710 cm'1 (Ester); δ (CDC13): 5,40 (s, 1H); 4,80 und 4,70 (ABq, J 14Hz, 2H); 4,28 (m, 1H) und 0,79 (d, J 7Hz, 3H). Beispiel 89 Faktor A. 5-Acetat. 23-('2.2.2-Trichlorethv0-carbonat G85 mgl [a]20D +140° (c = 1,07, CHCI3); ^ (EtOH) 245,5 (ε = 29,200); vmax (CHBr3) 3300 - 3620 (OH). 1738 (Carbonat) und 1720 cm'1 (Ester); δ (CDC13): 5,53 (s, 1H); 4,81 und 4,70 (ABq, J 14Hz, 2H); 4,84 (m, 1H); 3,98 (d, J 10Hz, 1H); 2,16 (s, 3H) und 0,79 (d, J 7Hz, 3H); aus Faktor A, 5-Acetat (393 mg) und 2,2,2-Trichlorethylchlorformat (2 ml einer IM Lösung in Dichlormethan). Beispiel 90 Faktor A. 23-Methvlcarhonat 055 mg) [a]20D +169° (c = 0,81, CHCI3); Lmay (EtOH) 245 nm (ε = 26,600); vmax (CHBr3) 3300 - 3610 (OH), 1735 (Carbonat) und 1710 cm'1 (Ester); 6 (CDC13): 5,40 (s, 1H); 4,28 (m, 1H); 3,94 (d, J 10Hz, 1H); 3,77 (s, 3H) und 0,76 (d, J 7Hz, 3H); m/z = 670 (M+); aus Faktor A, 5-Acetat, 23-(2,2,2-Trichlorethyl)carbonat (300 mg). Beispiel 91 23-Desoxv-Faktor A, 5-Methvlcarbonat <~57 mal [a]20D + 152° (c = 0,6, CHCI3); (EtOH) 244,5 nm (ε = 28,200); Vmax (CHBr3) 3530 und 3460 (OH), 1740 (Carbonat) und 1707 cm'1 (Ester); δ (CDC13): 5,55 (s, 1H); 3,82 (s, 3H); 3,42 (d, J 10Hz, 1H) und 0,69 (d, J 4Hz, 3H); aus 23-Desoxy-Faktor A (90 mg) und Methylchlorformat (0,3 ml einer IM Lösung in Dichlormethan). Beispiel 92 Faktor A. 23-Bromacetat (190 mg) [a]20D+154° (c = 0,93, CHCI3); Xmax (EtOH) 245 nm (ε=28,900); vmax (CHBr3) 3565 und 3500 (OH) und 1720 und 1715 cm*1 (Ester); δ (CDC13): 5,41 (s, 1H); 4,29 (m, 1H); 3,93 (d, J 10Hz, 1H); 3,89 und 3,81 (ABq, J 12Hz, 2H) und 0,75 (d, J 7Hz, 3H); -35- 55

AT 397 095 B aus Faktor A (306 mg) und Bromacetylbromid (0,22 ml).

Beispiel 93

Faktor A. 5-MethvlcarbonaL 23-Bfomacetat (85 mg) [a]20D +152° (c=0,65, CHa3);

Xjnax (EtOH) 244,5 nm (ε = 29,600); vmax (CHBr3) 3480 (0¾. 1742 (Carbonat) und 1720 cm'1 (Ester); δ (CDC13): 5,55 (s, 1H); 3,97 (m, 1H); 3,88 und 3,80 (ABq, J 12Hz, 2H); 3,82 (s, 3H) und 0,74 (d, J 7Hz, 3H); aus Faktor A, 23-Bromacetat (110 mg) und Methylchlorformat (03 ml ein»- IM Lösung in Dichlormethan).

Beispiel 94

Faktor A. 23-Chloracetat Π93 mg) [a]20D +162° (c = 1,04, CHC13); λπ,3Τ (EtOH) 245 nm (ε = 28,900); vmax (CHBr3) 3320 - 3620 (OH), 1748 (Chloracetat) und 1710 cm'1 (Ester); 5(CDC13): 5,42 (s, lH);4,28(m, lH);4,09und4,01 (ABq, J 15Hz,2H); 3,91 (d, J 10Hz, 1H) und 0,73 (d,J7Hz, 3H); m/z = 688(M+,35Cl); aus Faktor A (306 mg) und Chloracetylchlorid (0,2 ml).

Beispiel 95

Faktor A. 5-Methvlcarbonat. 23-Chloracetat f53 mg) [a]20D +162° (c = 037, CHC13); λ,ηητ (EtOH) 245,5 nm (ε=28,800); vmax (CHBr3) 3540 und 3470 (OH), 1743 (Carbonat und Chloracetat) und 1710 cm'1 (Ester); δ (CDC13): 535 (s, 1H); 5,00 (m, 1H); 4,10 und 4,02 (ABq, J 15Hz, 2H); 3,92 (d, J 10Hz, 1H); 3,82 (s, 3H) und 0,73 (d, J Hz, 3H); aus Faktor A, 23-Chloracetat (104 mg) und Methylchlorformat (0,3 ml einer IM Lösung in Dichlormethan).

Beispiel 96

Faktor A. 5.23-Dipropionat (387 mg) [a]20D +157° (c = 0,96, CHC13); (EtOH) 244,5 nm (ε = 30,200); vmax (CHBr3) 3500 (OH) und 1720 cm'1 (Ester); δ (CDC13): 5,52 (s, 1H); 3,93 (d, J 10Hz, 1H); 2,43 (q, J 7Hz, 2H); 2,32 (q, J 7Hz, 2H); 1,18 (t, J 7Hz, 3H); 1,16 (t, J 7Hz, 3H) und 0,70 (d, J 7Hz, 3H); m/z = 724(M+); aus Faktor A (613 mg) und Propionsäureanhydrid (0,5 ml).

Beispiel 97

Faktor A, 23-Propionat (155 me) [a]20D +168° (c = 1,03, CHC13); (EtOH) 244,5 nm (ε = 30,600); vmax (CHBr3) 3550 und 3480 (OH) und 1710 cm'1 (Ester); 8(CDC13): 5,39 (s, lH);4,27(m, 1H); 3,91 (d,J 10Hz, 1H);2,31 (q,J7Hz,2H); 1,14 (t,J7Hz,3H) und 0,69 (d, J7Hz,3H); m/z = 668 (M+); aus Faktor A, 5,23-Dipropionat (327 mg).

Beispiel 98

Faktor A. 5-Methvlcarbonat. 23-Propionat (85 mgl [a]20D +172° (c = 0,88, CHC13); -36-

10 AT 397 095 B 15 20 25 30 35 40 45

Xjnax (EtOH) 245 nm (ε = 28,700); vmax (CHBr3) 3550 und 3460 (OH), 1740 (Carbonat) und 1718 und 1710 cm'1 (Ester); 5 (CDC13): 5,55 (s, 1H); 4,94 (m, 1H); 3,91 (d, J 10Hz, 1H); 3,82 (s, 3H); 2,32 (q, J 7Hz, 2H); 1,15 (t, J 7Hz, 3H) und 0,70 (d,J7Hz,3H); aus Faktor A, 23-Propionat (100 mg) und Methylchlorformat (0,3 ml einer IM Lösung in Dichlormethan). Beispiel 99 Faktor A, 5-i2.2.2-TrichlorethvlVcarbonat. 23-Pronionat C125 mg) [α]% + 110° (c = 1,02, CHC13); λ,ηήγ (EtOH) 245 nm (ε = 27,000); vmaT (CHBr3) 3530 und 3470 (OH), 1762 (Carbonat) und 1712 cm*1 (Ester); δ (CDC13): 5,60 (s, 1H); 4,90 und 4,75 (ABq, J 12Hz, 1H); 3,92 (d, J 10Hz, 1H); 2,31 (q, J 7Hz, 2H); 1,14 (t, J 7Hz, 3H) und 0,67 (d, J 7Hz, 3H); aus Faktor A, 23-Propionat (100 mg) und 2,2,2-Trichlorethylchlorformat (0,3 ml einer IM Lösung in Dichlormethan). Beispiel 100 Faktor A. 5-Methvlcarbonat. 23-Keton C830 mg) [a]20D + 132° (c = 0,82, CHC13); λπ,^ (EtOH) 245 nm (ε = 29,800). Die IR- und NMR-Spektren entsprechen denjenigen der in Beispiel 28 beschriebenen Verbindung, erhalten aus Faktor A, 23-Keton (916 mg) und Methylchlorformat (0,23 ml). Beispiel 101 Faktor A. 5-Ethvlcarbonat. 23-Keton (65 mg) [a]20D +127° (c = 0,5, CHC13); λτη^γ (EtOH) 245,5 nm (ε = 29,600); vmax (CHBf3) 3540 und 3480 (OH), 1740 (Carbonat) und 1716 cm'1 (Ester und Keton); δ (CDCI3): 5,57 (s, 1H); 4,24 (q, J 7Hz, 2H); 3,70 (d, J 10Hz, 1H); 2,50 (s, 2H); 1,33 (t,J 7Hz, 3H) und 0,87 (d, J 7Hz, 3H); aus Faktor A, 23-Keton (92 mg) und Ethylchlorformat (0,3 ml einer IM Lösung in Dichlormethan). Beispiel 102 Faktor A. 5-Benzvlcarhonat 23-Keton (57 mg~) [<x]20D+99°(c = 0,4,CHCl3); (EtOH) 245,5 nm (ε=29,600); vmax (CHBr3) 3600,3550 und 3480 (OH), 1740 (Carbonat) und 1715 cm'1 (Ester und Keton); δ (CDC13); 7,5 -7,2 (m, 5H); 5,57 (s, 1H); 5,21 (s, 2H); 3,70 (d, J 10Hz, 1H); 2,49 (s, 2H) und 0,86 (d, J 6Hz, 3H); aus Faktor A, 23-Keton (92 mg) und Benzylchlorformat (0,05 ml).

Beispiel 103 Faktor A. 5-f4-Chloibenzoaf) 50 Zu einer Lösung von Faktor A (612 mg) in trockenem Dichlormethan (2 ml) und Pyridin (0,5 ml) gibt man 4-Chlorbenzoylchlorid (210 mg). Nach 16 h bei 23 °C gießt man die Mischung in Ethylacetat/Wasser und arbeitet die organische Phase auf neutrales Material auf. Das Rohprodukt wird mittels Chromatographie an Merck Kieselgel 60,230 - 400 mesh silica (50 g) gereinigt, wobei man zuerst Dichlormethan und dann Dichlormethan/Ether (19:1) als Eluierungsmittel verwendet Man erhält so ein gelbes gummiartiges Material, das nach Behandlung mit 55 entfärbender Aktivkohle die Titelvarbindung aus farblosen Schaum (500 mg) ergibt; [a]23D+46° (£ = 0,80, CHC13); *Et0Hmax 246 nm (emax 42,300); -37- 10 15 20 25 30 35 40 45 50

AT 397 095 B vmqY (CHBrQ 1715 cm"1 (Ester); δ (CDa3)r 7,41 (d, 8Hz, 2H); 8,00 (d, 8Hz, 2H) und ca. 3,8 (verdecktes m, 1H) (d; 2H); 8,00 (d, 2H) und 3,75 bis 3,86 (m, 1H); m/z=750,752 (M+, 35C1 und 37C1). Beispiel 104 23-Keto-Faktor A. 5-(4-Chlorbenzoaf> (150 mg) Diese Verbindung kristallisiert beim Verreiben mit Diisopropylether, Schmp. 230 - 232 °C; [a]23D+25° (£=0,48, CHC13); XEt0Hmax 245 (50,600) und 281,5 nm (emax 1,100); vmax (CHBr3) 3480 (OH) und 1718 cnT* (Ester und Keton); δ (CDC13): 8,00 (d, 8Hz, 2H); 7,40 (d, 8Hz, 2H) und 2,50 (s, 2H); m/z = 748,750 (M+, 35C1 und 37C1); aus Faktor A, 5-(4-Chlorbenzoat) (420 mg). Beispiel 105 5-Acetoxv-23-n-butoxv-Faktor A Zu einer Lösung von 5-Acetoxy-Faktor A (325 mg) in trockenem Ether gibt man Silbercarbonat (1 g) und anschließend Jodbutan (0,5 ml) und Silberperchlorat (550 mg). Man rührt die Mischung 20 h bei Raumtemperatur und gibt dann Collidin (0,5 ml) zu. Man rührt weitere 20 min und filtriert die Mischung dann. Das Filtrat wird nacheinander mit 2N Salzsäure, gesättigter wäßriger Natriumbicarbonaüösung und Wasser gewaschen. Die getrocknete organische Phase wird nahezu zur Trockene eingeengt und das Öl wird mittels Chromatographie an Merck Kieselgel 60 230-400 mesh (100 ml) gereinigt. Eluieren der Säule mit HexanrEthylacetat (3:1) liefert die Titelverbindung als farblosen Schaum (276 mg, 78 %); [a]22D +160° fe=0,94, CHCI3); Xjjjax (EtOH) 245 nm (¾^ 28,300); 6 (CDCI3): 3,16 (m, 1H); 3,43 (m, 1H); 3,59 (m, 1H). Die Verbindungen der Beispiele 106 bis 108 werden in gleicher Weise wie die Verbindung des Beispiels 30(a) hergestellt Beispiel 106 5-Acetoxv-23-cvclopentvloxv-Faktor A [a]21D + 166° (£= 1,60, CHCI3); ^rnax (EtOH) 244 nm (Sju^ 28,050); δ (CDC13): 3,95 (m, 1H); 3,45 (m, 1H); 2,14 (s, 3H); aus 5-Acetoxy-Faktor A und Cyclopentylbromid. Beispiel 107 5-Acetoxv-23-isopropoxv-Faktor A [a]21D +169° (c = 1,00, CHCI3); Xmax (CHBr3) 3470 (OH), 1732 und 1710 cm’1 (Ester); δ (CDC13): 5,5 - 5,6 (m, 2H); 3,93 (d, 10,1H); 3,5-3,7 (m, 2H); 3,53 (m, 1H); 2,16 (s, 3H); 1,13 (d6,3H); 1,03 (d7,6H);0,71(d7,3H); aus 5-Acetoxy-Faktor A und 2-Jodpropan. Beispiel 108 5-Acetoxv-23-cvcloDropvlmethoxY-Faktor A [a]21D +174° (c = 1,74, CHC13); Ärjjjjjx (EtOH) 244 nm (Smax 28,360); vmax (CHBr3) 3470 (OH), 1732,1710 (Ester) und 998 cm'1 (C-O); δ (CDC13): 5,5 - 5,6 (m, 2H); 3,96 (d 10,1H); 3,49 (m, 1H); 3,37 (dd, 6,10,1H); 3,17 (dd, 6,10,1H); 2,16 (s, 3H); 0,76 (d 7,3H); 0,44 (m, 2H) und 0,22 (m, 2H); -38- 55

AT 397 095 B aus 5-Acetoxy-Faktor A und Brommethylcyclopiopan.

Beispiel 109

5-t-Butvldimethvlsilvloxv-23-methoxv-Faktor A

Eine Lösungvon MethylmagnesiumjodidinEther(035ml einer 3MLösung)gibtman bei Raumtemperatur unter Stickstoff zu einer magnetisch gerührten Lösung von 5-t-Butyldimethylsilyloxy-Faktor A (239 mg) in trockenem Hexamethylphosphortriamid (18 ml), wobei Aufschäumen zu beobachten ist. Nach 30 min gibt man Jodmethan (0,4 ml) zu und rührt die erhaltene Mischung S h, verdünnt mit Ether (100 ml) und wäscht großzügig mit Wasser. Die Etherlösung wird dann mit Kochsalzlösung (50 ml) gewaschen und die organische Phase wird getrocknet Der erhaltene Schaum (280 mg) wird mittels Chromatographie an Merck Kieselgel 60 230-400 mesh (80 ml) gereinigt Eluieren mit Hexan:Ethylacetat (5:1) liefert die Titelverbindung als farblosen Schaum (46 %); [<x]21d + 142° (c = 1,13, CHC13); ^τηαχ (EtOH) 244 nm (t-max 27,900); vmax (CHBr3) 3460 (OH), 1708 (breit Ester) und 995 cm’1 (C-O); δ (CDC13): 4,42 (m, 1H); 3,92 (d 10,1H); 33 - 3,4 (m, 2H); 3,32 (s, 3H); 0,92 (s, 9H); 0,75 (d 7,3H) und 0,12 (s, 6H).

Die Verbindung des Beispiels 110 wird in gleicher Weise hergestellt Beispiel 110 5-t-Butvldimethvlsilvloxv-23-n-propvloxv-Faktor A [a]21D + 153° (c = 1,16, CHCI3); ^max (EtOH) 244 nm (&max 29,950); vmax (CHBr3) 3460 (OH), 1705 (Ester) und 995 cm'1 (C-O); δ (CDC13): 4,44 (m, 1H); 3,96 (d 10,1H); 3,56 (m, 1H); 3,45 (m, 1H); 3,14 (m, 1H); 0,93 (s, 9H); 0,75 (d 7,3H); 0,13 (s, 6H); aus 5-t-Butyldimethylsilyloxy-Faktor A und 1-Jodpropan.

Beispiel 111

Faktor A 5-Acetat-23-p-tolvlthionocarbonat

Zu einer Lösung von Faktor A 5-Acetat (4 000 g) in trockenem Dichlormethan (50 ml) und trockenem Pyridin (4,9 ml) tropft man unter Stickstoff p-Tolylchlorthionoformat (3,7 ml) während 10 min. DieerhaltenedunkleLösung wird 45 h bei Raumtemperatur gerührt Die Lösung wird mit Dichlormethan (200 ml) verdünnt nacheinander mit 2N Salzsäure, gesättigterNatriumbicarbonatlösung, Wasser und gesättigter Kochsalzlösung (2x200ml) gewaschen, anschließend getrocknet (Magnesiumsulfat) und das Lösungsmittel verdampft wobei man einen dunkelgrünen Schaum erhält Dieser wird erneut in Ethylacetat (200 ml) gelöst und mit Aktivkohle behandelt Filtrieren und anschließendes Verdampfen lieferteinen schwachgrünen Schaum, der an Kieselgel (MerckKieselgelöO, Teilchengröße 0,040-0,063 mm, mesh 230-400) bei Umgebungsdruck chromatographiert wird, wobei man mit Hexan/Ethylacetat (2:1) eluiert Man erhält die Titelverbindung als schwachgelben Schaum (3,946 g); λπΜΤ (Ethanol) 245 nm (ε=34,200);

Xmax (CHBr3) 3620-3340 (OH), 1731 (Acetat), 1710 cm'1 (Carbonyl); δ (CDCI3): 6,81 (d, 6Hz, 3H); 2,16 (s, 3H); 2,36 (s, 3H); 334 (m, 1H); 6,99 (d, 9Hz, 2H); 730 (d, 9Hz, 2H). Beispiel 112 23-Desoxv-Faktor A 5-Acetat

Eine Lösung von Faktor A 5-Acetat-23-p-tolylthionocarbonat (10,194 g) in trockenem Toluol (100 ml) erhitzt man unter Stickstoff unter Rückfluß und behandelt mit a-Azo-bis-isobutyronitril (509 mg). Dazu tropft man eine Lösung von Tri-n-butylzinnhydrid (10,25 ml) in trockenem Toluol (60 ml) während 25 min und erhitzt weiter unter Rückfluß. Man rührt die Mischung weitere 25 min, kühlt auf Raumtemperatur und verdampft das Lösungsmittel, wobei man ein gelbes Ol erhält. Man löst dieses in Acetonitril (600 ml) und wäscht mit Hexan. Das Lösungsmittel wird verdampft, wobei man einen weißen Schaum erhält, der an Silikagel (Merck Kieselgel 60, Teilchengröße0,040-0,063 mm, mesh230400) gereinigt wird, wobei man mit Hexan/Ethylacetat (4:1) eluiert. Man erhältauf diese Weise die Titelverbindung (2,442 g);

10 AT 397 095 B 15 20 25 30 35 40 45 50 [α]^^) +144° (e = 0,43, CMoroform); λτη^γ (Ethanol) 2453 nm (ε = 29,650); Vjjjax (CHBr3) 3420 - 3340 (OH), 1732 (Acetat), 1710 cm*1 (Caibonyl); δ (CDCI3): 0,68 (d, 5Hz, 3H); 2,16 (s, 3H); 332 (m, 1H). hi gleicher Weise wie die obigen Derivate des Faktors A werden die nachfolgenden Derivate des Faktors D der Beispiele 113 bis 120 helgestellt. Beispiel 113 5-Acetoxv-FaktorD (923 mg> [a]21D +143,9° (£=0,9, CHC13); kEl0Hmax 239 (28,700) und 245 nm (¾^ 31,000); Vmax (ΟΗΒγ3) 3490 (OH), 1730 und HM) (Ester); 6 (CDC13): 0,81 (d, 7Hz, 3H); 0,99 (d, 7Hz, 3H); 1,00 (t, 7Hz, 3H); 133 (s, 3H); 1,59 (s, 3H); 1,75 (s, 3H); 2,16 (s, 3H); 332 (m, 1H); 3,65 (m, 1H); 4,04 (d, 6Hz, 1H) und 5,53 (m, 2H); m/z - 640 (M+); aus Faktor D (2,5 g) und Acetanhydrid (0,47 ml). Beispiel 114 . 5,23-Diacetoxv-Faktor D (286 mg) Schmp. 147 -149 °C (Rhomben aus Pentan in Ether); [a]21D +152,6° (£= 0,9, CHCI3); *-Et0Hmax 232,5 (21,500), 238 (26,600) und 244,5 nm (¾^ 28,800); vmax (CHBr3) 1720 cm*1 (Ester); δ (CDC13): 0,72 (d, 6Hz, 3H); 0,99 (d, 6Hz, 3H); 1,01 (t, 7 Hz, 3H); 1,53 (s, 3H); 1,60 (s, 3H); 1,75 (s, 3H); 2,02 (s, 3H); 2,15 (s, 3H); 331 (m; 1H); 4,04 (d, 6 Hz, 1H); 4,91 (m, 1H) und 5,5 - 5,6 (m, 2H); m/z=682(M+). Aus Faktor D (439 mg) und Acetanhydrid (0,25 ml). Beispiel 115 23-Acetoxv-Faktor D (127 mg) [a]21D +150° (q=0,5, CHCI3); XEl0Hmax 238 (29300) und 244,5 nm 15,600); (CHBr3) 3300,3590 (OH) und 1710 cm*1 (Ester); δ (CDC13): 0,72 (d, 7Hz, 3H); 0,99 (d, 7Hz, 3H); 1,01 (t, 7Hz, 3H); 133 (s, 3H); 1,60 (s, 3H); 1,86 (s, 3H); 336 (m, 1H); 3,95 (d, 6Hz, 1H); 436 (t, 6Hz, 1H) und 4,91 (m, 1H); m/z = 640 (M+). Aus 5,23-Diacetoxy-Faktor D (207 mg). Beispiel 116 23-n-Tolvloxvthiocarhonvloxv-Faktor D. 5-Acetat (610 mgl [a]21D +132° (ς= 0,4, CHCI3); XEtOHmax 2383 (34,800) und2443 nm (¾ 35,400); Vmax (CHBr3) 359 und 3560 (OH) und 1730 cm*1 (Ester); δ (CDC13): 0,81 (d, 7Hz, 3H); 0,99 (d, 7Hz, 3H); 1,00 (t, 7H, 3H); 133 (s, 3H); 1,61 (s, 3H); 1,75 (s, 3H); 2,15 (s, 3H); 236 (s, 3H); 333 (m, 1H); 3,98 (d, 10Hz, 1H); 4,04 (d, 6Hz, 1H); 5,5 - 5,6 (m, 2H); 638 (d, 9Hz, 2H) und 7,19 (d, 9Hz, 2H); m/z = 790 (M+). Aus 5-Acetoxy-Faktor D (776 mg) und p-Tolylchlorthionoformat (0,75 ml). Beispiel 117 5-Acetoxv. 23-Desoxv-Faktor D (367 mgl Ein Teil dieser Probe wird aus Hexan umkristallisiert, wobei man gemäß HPLC analysenreines Material erhält; -40- 55

AT 397 095 B

Schmp. 222 - 224 eC; [a]21D +134° (£= 0,9, CHC13); λΕί0Ηιη3χ 245 nm (emax 32,400); 5 vmax (CHBrj) 3550,3460 (H), 1735 und 1710 cm‘l (Ester); δ (CDC13): 0,69 (d, 6Hz, 3H); 1,00 (d, 6Hz, 3H); 1,00 (t, 7Hz, 3H); 1,53 (s, 3H); 1,59 (s, 3H); 1,76 (s, 3H); 2,14 (s, 3H); 3,31 (m, 1H); 3,44 (d, 10Hz, 1H); 4,05 (d, 6Hz, 1H) und 5,5 - 5,6 (m, 2H); m/z = 624 (M+).

Aus 5-Acetoxy, 23-p-Tolyloxythiocarbonyloxy-Faktor D (582 mg). 10

Beispiel 118 23-Desoxv-Faktor D (159 mgl [a]21D + 123° (£=0,5, CHCI3); \EtOHmax 2444 nm 28,300); vmax (CHBr3) 3550 und 3460 (OH) und 1705 cm’1 (Ester); δ (CDC13): 0,69 (d, 6Hz, 3H); 1,00 (d, 6Hz, 3H); 1,00 (6,7Hz, 3H); 1,53 (s, 3H); 1,59 (s, 3H); 1,87 (s, 3H); 3,26 (m, 1H), 3,44 (d, 10Hz, 1H); 3,96 (d, 6Hz, 1H) und 4,28 (t, 6Hz, 1H); m/z = 582(M+). 2® Aus 5-Acetoxy, 23-Dihydro-Faktor D (231 mg).

Beispiel 119 5-Acetoxv. 23-Keto-Faktor D1152 mgl Schmp. 228 - 230 °C; 25 [a]21n + 84° (ς=0,6, CHCI3); λ inax 244-5 nm (emax 31,100); vmax (CHBr3) 3500 (OH), 1732 und 1714 cm-1 (Ester und Keton); δ (CDC13): 0,86 (d, 6Hz, 3H); 0,98 (d, 6Hz, 3H); 1,00 (t, 7Hz, 3H); 1,49 (s, 3H); 1,67 (s, 3H); 1,74 (s, 3H); 30 2,14 (s, 3H); 3,33 (m, 1H); 4,03 (d, 6Hz, 1H) und 5,5 - 5,6 (m, 2H); m/z = 638 (M+).

Aus 5-Acetoxy-Faktor D (336 mg).

Beispiel 120 35 23-Keto-Faktor D (59 mgl [a]21n + 84°(c = 0,4,CHCl3); λΕ max 244-5 nm (^ 28,000); vmax (CHBr3) 3550 und 3500 (0¾ und 1712 cm'l (Ester und Keton); 40 δ (CDC13): 0,86 (d, 6Hz, 3H); 0,98 (d, 7Hz, 3H); 1,00 (t, 7Hz, 3H); 1,50 (s, 3H); 1,68 (s, 3H); 1,86 (s, 3H); 3,27 (m, 1H); 3,73 (d, 10Hz, 1H); 3,95 (d, 6Hz, 1H) und 4,27 (t, 6Hz, 1H).

Aus 5-Acetoxy-23-keto-Faktor D (96 mg).

Beispiel 121 45 Faktor A. 23-Phenvlacetat (240 mgl (a]20D + 140° (c = 0,92, CHC13); vmax (CHBr3) 3550 und 3470 (OH) und 1730 cm'* (Ester); δ (CDC13): 732 (s, 5H); 5,0 (m, 1H); 439 (t, J 7Hz, 1H); 3,88 (d, J 10Hz, 1H); 3,62 (s, 2H) und 0,54 (d, J 7Hz, 50 3H).

Diese Verbindung wird in gleicher Weise hergestellt, wie die Verbindung des Beispiels 81 auf Faktor A (306 mg) und Phenylacetylchlorid (0,33 ml). 55 Beispiel 122

23-Ethoxv-Faktor A

Zu einer Lösung von 5-Acetoxy-23-ethoxy-Fäktor A (806 mg) in Methanol (18 ml), die in einem Eisbad gekühlt wird, gibt man IN wäßriges Natriumhydroxid (13 ml). Die schwachgelbe Lösung wird in einem Eisbad 1,25 h -41-

AT 397 095 B gerührt Die Lösung wird mitEthylacetat (80 ml) verdünnt anschließend nacheinander mit IN Salzsäure, Wasser und Kochsalzlösung gewaschen. Die getrocknete organische Phase wird verdampft und das erhaltene gummiartige Material wird mittels Chromatographie an Merck Kieselgel 60 silica230-400 mesh (200 ml) gereinigt. Eluieren der Säule mit 15 % Ethylacetat in Dichlormethan liefert die Titelverbindung als farblosen Schaum (623 mg); 5 [<X]21d +178° (c = 1,13, CHC13); λιηοΎ (EtOH) 244 nm (£tnax 29,400); δ (CDC13): 4,29 (t 7,1H); 3,65 (m, 1H); 3,47 (m, 1H); 3,26 (m, 2H); 1,15 (t 7,3H). 10 Die Verbindungen der Beispiele 123 bis 126 werden in gleicher Weise hergestellt:

Beispiel 123 23-n-Butoxv-Faktor A (61 %) erhältlich als farbloser Schaum; 15 M21D +161® (c = 1,47, CHCI3);

Xmax (EtOH) 244 nm (ε=33,100); δ (CDC13): 4,30 (t, 7,1H); 3,60 (m, 1H); 3,43 (m, 1H), 3,17 (m, 1H), aus 5-Acetoxy-23-n-butoxy-Faktor A. 2^ Beisniel 124 23-n-Propoxv-Faktor A Γ83 Ψο) erhältlich als farbloser Schaum; [a]21D +165° (c = 1,01, CHCI3); 25 ^max (EtOH) 2,45 nm (ε = 30,970); δ (CDC13): 42,9 (t 7, H); 3,55 (m, 1H); 3,44 (m, 1H); 3,13 (m, 1H), aus 5-Acetoxy-23-n-propoxy-Faktor A.

Beisniel 125 30 23-Methoxv-Faktor A f66 erhältlich als farbloser Schaum; [a]21D + 175ö (c = 1,01, CHCI3); (EtOH) 244 nm (ε = 19,100); 35 δ (CDC13): 4,29 (t 7,1H); 3,40 (m, 1H); 3,33 (s, 3H), aus 5-Acetoxy-23-methoxy-Faktor A.

Beispiel 126 23-Cvclonentvloxv-Faktor A (75 %) 40 erhältlich als Erbloser Schaum; [a]21D +160° (c = 1,65, CHC13); (EtOH) 244 nm (ε = 19,800); δ (CDC13): 4,29 (t 7,1H); ca. 3,96 (verdeckt m, 1H); 3,95 (d, 5,1H); 3,91 (d, 10,1H), 3,46 (m, 1H); 0,69 (d, 7,3H); 45 aus 5-Acetoxy-23-cyclopentyloxy-Faktor A.

Beispiel 127

(a) 5-Acetoxv-23-allvloxv-Faktor A

Man gibt Silbercalicylat (872 mg) zu einer Lösung von 5-Acetoxy-Faktor A (207 mg) und Allyljodid (1,0 ml) 50 in trockenem Ether (25 ml), rührt die Mischung 4 Tage bei Raumtemperatur und filtriert anschließend. Das Filtrat wird verdampft, wobei man ein gelbes Öl erhält, das mittels Chromatographie an Merck Kieselgel60,230-400mesh, gereinigt wird. Eluieren mit DichlormetharcEthylacetat (19:1) liefert die Titelverbindung als farblosen Schaum (105 mg); [<x]21d +152° (2= 1,00, CHCI3); 55 \nax (E1011) 245 nm (ε=28,400); 8 (CDC13): 3,54 (m, 1H); 4,14 (m, 1H). -42-

AT 397 095 B

Die folgenden Verbindungen wurden in gleicher Weise hergestellt:

(bl 5-Acetoxv-23-n-proDvloxv-Faktor A aus 5-Acetoxy-Fäktor A und n-Propyljodid. Reinigung mittels Chromatographie an Merck Kieselgel 60, 230400 mesh silica, unter Eluieren mit Hexan:Ethylacetat (3:1) liefert die Titelverbindung als farblosen Schaum; [a]22D +160° (£=0,75, CHC13); (EtOH) 245 nm (ε = 27,600); 6 (CDC13): 3,33 (s, 3H); 339 (m, 1H).

fcl 5-Acetoxv-23-methoxv-Faktor A aus 5-Acetoxy-Faktor A und Methyljodid. Die Titelverbindung erhält man als farblosen Schaum; [a]22D +159° (£= 0,98, CHCI3); λ,η^ (EtOH) 245 nm (ε=27,600); 5 (CDC13): 333 (s, H); 3,39 (m, 1H).

Diefolgenden Beispiele sindFormulierungsbeispiele. Der dabei verwendete Ausdruck "Wirkstoff' bedeuteteine erfindungsgemäß erhältliche Verbindung und kann beispielsweise die Verbindungen der Beispiele 11,14,21,27, 97,122 oder 123 betreffen.

Parenterales Mehrfachdosierungs-Iniektions-Pränarat % Gew./V Bereich Wirkstoff 4,0 0,1 - 73 % Gew./V Benzylalkohol 2,0 Glyceryltriacetat 30,0 Propylenglykol bis 100,0

Man löst den Wirkstoff in Benzylalkohol und dem Glyceryltriacetat und gibt Propylenglykol bis zum gewünschten Volumen zu. Dieses Produkt wird anhand üblicher pharmazeutischer Methoden sterilisiert, beispielsweise durch Sterilfiltration oder durch Erhitzen in einem Autoklaven, und aseptisch verpackt.

Aerosolsprav % Gew./Gew. Bereich Wirkstoff 0,1 0,01 - 2,0 % Gew./Gew. Trichlorethan 29,9 Trichlorfluormethan 35,0 Dichlordifluormethan 35,0

Der Wirkstoff wird mit Trichlorethan vermischt und in den Aerosolbehälter gefüllt Man spült den Luftraum des Behälters mit gasförmigem Treibmittel und bringt das Ventil in Position. Anschließend füllt man die gewünschte Menge an Flüssigtreibmittel unter Druck über das Ventil ein. Schließlich versieht man den Behälter mit einem Betätigungs-knopf und einer Schutzkappe. -43- AT 397 095 B'

Tabletten

Herstellungsverfahren: Feuchtgranulierung mg 5 -

Wirkstoff 250,0

Magnesiumstearat 4,5

Maisstärke 22,5

Natriumstärkeglycolat 9,0 10 Natriumlaurylsulfat 4,5

Mikrokristalline Cellulose bis zu einem Tablettenkemgewicht von 450 mg

Man gibt eine ausreichende Menge eines 10%igen Stärkekleisters zum Wirkstoff, um eine für die Granulation geeignetefeuchte Masse zu erhalten. Die Granulate werden hergestellt und in einem Schalentrockner (tray drier) oder 15 einem Wirbelschichttrockner getrocknet. Man gibtsie durch ein Sieb, gibt die weiteren Bestandteile zu undverpreßt sie zu Tabletten.

Falls gewünscht, wird der Tablettenkern mit einer Beschichtung versehen, wobei man Hydroxypropylmethylcellulose oder andere ähnliche filmbildende Materialien unter Verwendung eines wäßrigen oder nicht-wäßrigen Lösungsmittelsystems zum Einsatz bringt Zu der Überzugslösung können ein Weichmacher 20 und ein geeigneter Farbstoff gegeben werden.

Tabletten zur Anwendung in der Tiermedizin für Kleintiere/Haustiere

Herstellungsverfahren: Trockengranulation 25 30 mg

Wirkstoff 50,0

Magnesiumstearat 7,5

Mikrokristalline Cellulose bis zu einem Tablettenkemgewicht von 75,0 mg

Man vermischt den Wirkstoff mit dem Magnesiumstearat und der mikrokristallinen Cellulose. Man kompaktiert das Gemisch in kurze Stränge (slugs) und zerkleinert diese, indem man sie über einen Rotationsgranulator gibt, um freifließende Granulate zu erzeugen. Diese werden zu Tabletten verpreßt. 35 Die Tabletten werden dann, wie oben beschrieben, gewünschtenfalls mit einem Überzug versehen.

Intramamäres Iniektionspräparat zur Anwendung in der Tiermedizin 40 mg/Dosis Bereich Wirkstoff 150 mg 0,05-1,0g Polysorbat 60 3,0 % Gew./Gew. * 45 Weißes Bienenwachs 6,0 % Gew./Gew. -3g , bis 3 oder 15 g Arachisöl 91,0 % Gew./Gew. J 1

Arachisöl, weißes Bienenwachs und Polysorbat 60 werden unter Rühren auf 160 °C erhitzt. Man hält bei dieser 50 Temperatur 2 h und kühlt dann unter Rühren auf Raumtemperatur. Der Wirkstoff wird aseptisch zu dem Träger gegeben und unter Verwendung eines Hochgeschwindigkeitsmischers dispergiert Man zerkleinert indem man die Mischung durch eine Kolloidmühle gibt Das Produkt wird dann aseptisch in sterile Plastikspritzen abgefüllt -44- 55

AT 397 095 B

Arzneitrank (oral! zur Anwendung in der Tiermedizin % Gew./V Bereich Wirkstoff 0,35 0,01 - 2 % Gew./V Polysorbat 85 5,0 Benzylalkohol 3,0 Propylenglykol 30,0 Phosphatpuffer für pH 6,0-6,5 Wasser auf 100,0

Man löst den Wirkstoff in Polysorbat 85, Benzylalkohol und Propylenglykol. Man gibt einen Teil des Wassers zu und stellt den pH mit Phosphatpuffer auf 6-6,5 ein, falls erforderlich. Man gibt Wasser bis zum endgültigen Volumen zu und füllt das Produkt in Behälter für den Arzneitrank.

Oralpaste zur Anwendung in der Tiermedizin % Gew./Gew. Bereich Wirkstoff 7,5 1 - 30 % Gew./Gew. Saccharin 25,0 Polysorbat 85 3,0 Aluminiumdistearat 5,0 fraktioniertes Kokosnußöl auf 100,0

Man dispergiert das Aluminiumdistearat in dem fraktionierten Kokosnußöl und Polysorbat 85 durch Erhitzen. Man kühlt auf Raumtemperatur und dispergiert das Saccharin in dem öligen Träger. Man verteilt den Wirkstoff in der Grundlage und füllt das Produkt in Plastikspritzen.

Granula für die Tiermedizin zur Verabreichung im Futter % Gew./Gew. Bereich Wirkstoff Calciumsulfat-hemihydrat auf 2,5 100,0 0,05 - 5 % Gew./Gew.

Man vermischt den Wirkstoff mit Calciumsulfat und stellt Granula unter Verwendung eines Feucht-Granulationsverfahrens her. Man trocknet diese in einem Schalentrockner (tray drier) oder in einem Wirbelschichttrockner und füllt sie in einen geeigneten Behälter.

Emulgierbares Konzentrat

Wirkstoff 50 g anionischer Emulgator (z. B. Phenylsulfonat CALX) 40 g nicht-ionischer Emulgator (z. B. Syperonic NP 13) 60 g

Aromatisches Lösungsmittel (z. B. Solvesso 100) auf 11. Man vermischt alle Bestandteile und rührt bis eine Lösung vorliegt. -45-

Claims

AT 397 095 B Granula (a) Wirkstoff 50 g Holzharz 40 g Gipsgranula (20 - 60 mesh) auf (z. B. Agsorb 100A) 1 kg (b) Wirkstoff 50 g Syperonic NP 13 40 g Gipsgranula (20 - 60 mesh) auf 1 kg Man löst alle Bestandteile in einem flüchtigen Lösungsmittel, z. B. Methylchlorid und gibt diese Lösung zu den Granula in einem Trommelmischer. Man trocknet, um das Lösungsmittel zu entfernen. PATENTANSPRÜCHE 1. Verfahren zur Herstellung von neuen Verbindungen der allgemeinen Formel (EI)

worin Rl eine Methyl-, Ethyl- oder Isopropylgruppe, vorzugsweise eine Isopropylgruppe, bedeutet; R2 ein Wasserstoffatom oder eine Gruppe OR^ bedeutet (in der OR^ eine Hydroxygruppe oder eine substituierte Hydroxygruppe mit bis zu 25 Kohlenstoffatomen bedeutet) und ein Wasserstoffetom bedeutet oderR2 undR^ zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, für eine >C=0-Gruppe stehen, OR4 für eine wie oben definierte Gruppe OR^ steht; mit der Maßgabe, daß OR4 eine von Methoxy verschiedene substituierte Hydroxygruppe bedeutet, wenn R2 eine Hydroxygruppe bedeutet, OR4 jedoch vorzugsweise eine Hydroxy-, Methoxy-, Acetoxy- oder Methyloxycarbonyloxygruppe bedeutet, und von deren Salzen, dadurch gekennzeichnet, daß man a) zur Herstellung einer Verbindung, in der einer der Reste R2 und OR4 oder beide dieser Reste eine substituierte Hydroxygruppe bedeuten, eine entsprechende Verbindung, in der einer der Reste R2 und OR4 oder beide dieser Reste eine Hydroxygruppe bedeuten, mit einem Reagens zur Substitution einer Hydroxygruppe zur Reaktion -46- AT 397 095 B bringt, wobei OR* bei der Herstellung der Verbindungen, in denen OR^ für -OH steht, während der Reaktion eine geschützte Hydroxygruppe ist; b) zur Herstellung einer Verbindung, in der R2 und R^ beide ein Wasserstoffatom bedeuten, eine entsprechende Verbindung, in der R2 ein homolytisch reduzierbares Atom oder eine homolytisch reduzierbare Gruppe bedeutet, 5 reduziert; c) zur Herstellung einer Verbindung, in der R2 und zusammen eine Oxogruppe bedeuten, eine entsprechende Verbindung, in der R2 für -OH steht, oxidiert, wobei OR^ bei der Herstellung der Verbindungen, in denen OR** für -OH steht, während der Reaktion eine geschützte Hydroxygruppe ist; d) zur Herstellung einer Verbindung, in der R2 oder OR"* eine Hydroxygruppe bedeuten, die Schutzgruppe aus einer 10 entsprechenden Verbindung, in der R2 oder OR“* eine geschützte Hydroxygruppe bedeuten, entfernt; e) zur Herstellung eines Salzes einer Säure der Formel (Π), die Säure mit einer Base behandelt oder ein Salz durch Ionenaustausch in ein anderes überführt; oder f) zur Herstellung einer Verbindung, in der R2 und R^ zusammen eine Oxogruppe bedeuten und OR^ für -OH oder Methoxy steht, einen Organismus des Genus Streptomyces, der in der Lage ist, wenigstens eine diese 15 Verbindungen zu produzieren, kultiviert.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel (Π), worin R1 und/oder OR* eine Gruppe -OCOR^, -OCO2R** oder -OCSOR^ (worin R^ für Cj.g-Alkyl; durch einen oder mehrere Halogen-, Carboxy-, C j^-Alkoxy-, Phenoxy- oder Silyloxysubstituenten substituiertes 20 C^.g-Alkyl; C2_g-Alkenyl; C2_g-AUdnyl; Cß.^-Cycloalkyl; Aralkyl, in dem die Alkyleinheit 1 bis 6 Kohlenstoff atome aufweist und die Arylgruppe4bis 15 Kohlenstoffatomeenthält; oderC^^-Aryl steht), eineFormyloxygruppe, eine Gruppe -OR2 (worin R' für C^.g-Alkyl oder durch C3_7-Cycloalkyl substituiertes Ci_g-Alkyl bedeutet), eine Gruppe -OSO2R3 (worin R3 für eine C^-Alkyl- oder Cg_ 10-Arylgruppe steht), eine Silyloxygruppe, eine (C5.7)-cycÜsche oder acyclische Acetalgruppe oder eine Gruppe -0C0(CH2)nC02R^ (worin R^ ein Wasserstoffatom oder 25 eine wieoben fürR^ definierte Gruppe bedeutet undn fürO.l oder 2 steht) bedeuten, eine entsprechende Verbindung gemäß einer der Verfahrensvarianten a bis f umgesetzt bzw. mikrobiologisch produziert wird.
3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel (Π), worin R2 ein Wasserstoffatom oder eine Hydroxygruppe oder eine Gruppe der Formel -OCOR^ (worin 30 R^ eine C1 .g-Alkylgruppe bedeutet, die gegebenenfalls durch eine Cj^-Alkoxy- oder phen-(Ci_6)-Alkylgruppe substituiert ist), -OCOjR^ (worin R^ eine Cj.g-Alkylgruppe bedeutet, die gegebenenfalls durch ein bis drei Halogenatome substituiert ist), -OCOCO2H, -OR2 (worin R2 eine C^.g-Alkyl, C3. 12-Cycloalkyl-, Allyl- oder Cyclopropylmethylgruppe bedeutet) bedeutet oder R2 und R^ zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, eine >C=0-Gruppe bedeuten, eine entsprechende Verbindung gemäß einer der Verfahrensvarianten 35 a bis f umgesetzt bzw. mikrobiologisch produziert wird.
4. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel (II), worin R2 ein Wasserstoffatom oder eine Ethoxy-, n-Propoxy-, Cyclopropylmethoxy-, Acetoxy-, Phenacetoxy-, Propionoxy-, Isobutyrionoxy- oder Cyclopropancarbonyloxygruppe bedeutet und R3 ein Wasser-40 Stoffatom bedeutet, oder R2 und R^ zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, eine >C=0- Gruppe bilden, eine entsprechende Verbindung gemäß einer der Verfahrensvarianten a bis f umgesetzt bzw. mikrobiologisch produziert wird. 45 50
5. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel (II), worin R1 eine Isopropylgruppe bedeutet, R2 ein Wasserstoffatom oder eine Ethoxy-, n-Propoxy-, Acetoxy- oder Propionoxygruppe bedeutet und R^ ein Wasserstoffatom bedeutet, oder R2 und R^ zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, eine >C=0-Gruppe bilden, und OR-* eine Hydroxy-, Acetoxy- oder Methyloxycarbonyloxygruppe bedeutet, eine entsprechende Verbindung gemäß einer der Verfahrensvarianten a bis f umgesetzt bzw. mikrobiologisch produziert wird. -47- 55 1 Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel (II), worin: R1 eine Isopropylgruppe, R1 ein Wasserstoffatom, ein Wasserstoffatom und OR“* eine Hydroxygruppe bedeuten; 2 R* eine Isopropylgruppe, R2 eine Propionoxygruppe, R^ ein Wasserstoffatom und OR^ eine Hydroxygruppe bedeuten; 3 R* eine Isopropylgruppe bedeutet, R2 und R3 zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, für >C=0 stehen und -OR* eine Hydroxygruppe bedeutet; AT 397 095 B r! eine Isopropylgruppe, R^ eine Ethoxygrappe, ein Wasserstoffatom und-OR4 eine Hydroxygruppe bedeuten; Rl eine Isopropylgruppe, R^ eine n-Propoxygruppe, R^ ein Wasserstoffatom und -OR4 eine Hydroxygruppe bedeuten; R* eine Methylgruppe, eine Acetoxygruppe, ein Wasserstoffatom und OR4 eine Hydroxygruppe bedeuten; Rl eine Ethylgruppe, R^ eine Acetoxygruppe, r3 ein Wasserstoffatom und OR4 eine Hydroxygruppe bedeuten; Ri eine Isopropylgruppe, R^ eine Acetoxygruppe, R^ ein Wasserstoffatom und OR4 eine Hydroxygruppe bedeuten, oder R1 eine Isopropylgruppe, R^ eine n-Butoxygruppe, R^ ein Wasserstoffatom undOR4 eine Hydroxygruppe bedeuten, eine entsprechende Verbindung gemäß einer der Verfahrensvarianten a bis f umgesetzt bzw. mikrobiologisch produziert wird.
7. Verfahren gemäß Variante f von Anspruch 1 zur Herstellung von neuen Verbindungen der Formel (Π), worin und r3 zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, für >C=0 stehen und OR4 eine Hydroxy-oder Methoxygruppe bedeutet, dadurch gekennzeichnet, daß sie in Form einer Gesamtfermentationsbrühe, die wenigstens eine dieser Verbindungen enthält, in Form von festen Bestandteilen der Gesamtfermentationsbrühe, die wenigstens eine dieser Verbindungen enthalten, in Form von unversehrtem oder lysiertem Mycel, das aus einer derartigen Brühe abgetrennt wurde, oder in Form der festen Bestandteile einer derartigen Brühe nach Abtrennung des unversehrten oder lysierten Mycels; oder in Form einer derartigen Brühe nach Abtrennung des Mycels gewonnen bzw. isoliert werden. -48-