WO2020188467A1 - 作为激酶抑制剂的稠合三环化合物 - Google Patents

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WO2020188467A1
WO2020188467A1 PCT/IB2020/052388 IB2020052388W WO2020188467A1 WO 2020188467 A1 WO2020188467 A1 WO 2020188467A1 IB 2020052388 W IB2020052388 W IB 2020052388W WO 2020188467 A1 WO2020188467 A1 WO 2020188467A1
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alkyl
mmol
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张汉承
程鑫
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杭州英创医药科技有限公司
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic System
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6561—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
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    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5383—1,4-Oxazines, e.g. morpholine ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D498/04—Ortho-condensed systems

Definitions

  • the present invention relates to the field of medicinal chemistry; specifically, the present invention relates to a new type of derivatives containing tricyclic heteroaryl groups, its synthesis method and its use as one or more protein kinase inhibitors in the preparation of drugs for the treatment of tumors, etc. Application in related diseases.
  • Cancer also known as malignant tumor, is one of the diseases with the highest morbidity and mortality in the world. It is characterized by abnormal cell proliferation and metastasis, which spreads and metastasizes in a short or relatively short time after the onset.
  • Traditional treatment options include resection (if eligible for resection), radiotherapy, and chemotherapy.
  • Targeted therapy developed in recent years has the advantages of reducing toxicity and negative effects on patients, and improving survival rates. But after using targeted drugs for a period of time, drug resistance will develop, and then the growth and spread of cancer cells will be extremely rapid.
  • Common cancers include: blood cancer, lung cancer, liver cancer, bladder cancer, rectal cancer, stomach cancer, and so on.
  • non-small cell lung (NSCLC) cancer accounts for about 80% of all lung cancers.
  • NSCLC non-small cell lung
  • Common targets are C-met, ALK, and EGFR.
  • Epidermal growth factor receptor tyrosine kinase is composed of 1,186 amino acids and encodes a transmembrane glycoprotein with a molecular weight of 170-kDa.
  • EGFR can mediate multiple signal transduction pathways, transmit extracellular signals into the cell, and play an important role in regulating the proliferation, differentiation and apoptosis of normal cells and tumor cells.
  • EGFR is a constitutively expressed component of many normal epithelial tissues (such as skin and hair follicles), but in most solid tumors, EGFR is overexpressed or highly expressed. For example, in lung cancer, the expression rate of EGFR reaches 40-80%. Therefore, selectively inhibiting EGFR and interfering with the signal transduction pathway mediated by it can achieve the purpose of treating lung cancer and open up a feasible way for targeted therapy of lung cancer.
  • Anaplastic lymphoma kinase (ALK) gene is a transmembrane receptor tyrosine kinase, which can be mutated in a variety of malignant tumors or fused with other oncogenes. It is the oncogenic driving gene of tumors.
  • ALK inhibitors can be used to treat lung cancer. Studies have shown that in patients with non-small cell lung cancer, especially after the use of epidermal growth factor receptor (EGFR) inhibitor drugs, EGFR mutations are the most common, among which about 30%-40% of Asian NSCLC patients are diagnosed Carrying EGFR mutations, especially middle-aged women without smoking history.
  • EGFR epidermal growth factor receptor
  • EGFR inhibitors to combat cancer mutations
  • the representative inhibitors of the first generation are Gefitinib (Iressa®)> Erlotinib (Tarceva®) and Icotinib (Chemena).
  • the representative inhibitor of the first generation is afatinib
  • the representative inhibitor of the third generation is osimertinib (AZD9291).
  • Osimitinib (AZD9291) is an oral small molecule third-generation EGFR-TKI.
  • Hematopoietic progenitor kinase 1 (HPK 1, also known as MAP4K1) is a member of the germinal center kinase family of serine/threonine kinases. It is mainly expressed by hematopoietic cells and is the intracellular part of T cell proliferation and signal transduction. Negative regulators play an important role in the activation of dendritic cells and are a new anti-cancer immunotherapy target. Therefore, the use of small molecule inhibitors to inhibit HPK1 through single-drug or combined use with other drugs has the potential to treat cancer And the potential for other diseases.
  • the purpose of the present invention is to provide a new type of protein kinase inhibitor.
  • the first aspect of the present invention provides a compound of the following formula (I), or its optical isomers (including racemates, single enantiomers, and possible diastereomers) ), pharmaceutically acceptable salts, prodrugs, deuterated derivatives, hydrates, solvates:
  • Each R is each independently a C M alkyl group, each R 1 is each independently ammonia, ⁇ , element, Ci. 4 alkyl, C 2.4 phenyl, C 2.4 , C 3.6 cycloalkyl, 3-to 8- Member heterocyclic group, aryl group, heteroaryl group, OR ⁇ or CN;
  • Each R 2 is independently hydrogen, fluorine, halogen, Ci. 4 alkyl, C 2.4 phenyl, C 2.4 alkynyl, C 3.6 cycloalkyl, 3- to 8-membered heterocyclic group, aryl, heteroaryl , Or CN;
  • Each R 4 is independently hydrogen, deuterium, halogen, C M alkyl, C M haloalkyl, C 2.4 alkenyl, C 2.4 alkynyl, OR h > SR ⁇ NR h R ⁇ CN, C(0)R e , C(0)0R h , C(0)NR h R h , 0C(0)R e , NR h C(0)R e , or S(0) 2 R e ;
  • J and G are each independently NR f , 0, S, S(O), S(0) 2 or CR g R g ;
  • n 0, 1, 2, 3, or 4;
  • n 0, 1, 2, or 3;
  • p 0, 1, or 2;
  • q 0, 1, 2, or 3;
  • R f is hydrogen, Ci 8 firing group, Ci 8 generations firing group, C 2.8 woman group, C 2.8 block basis, C 3.8 cycloalkyl firing group, 3 -!.
  • Each R h is independently hydrogen, C M alkyl; or two R h and the nitrogen atom to which they are attached together form a 3- to 8-membered heterocyclic group, which contains 1 or 2 N atoms and 0 or 1 A heteroatom selected from 0 and S; wherein each of the above-mentioned alkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl and heteroaryl groups is optionally and independently by 1-3 Substituent substitutions each independently selected from the group consisting of halogen, C 14 alkyl, C 14 haloalkyl, C 2.4 alkenyl, C 2.4 alkynyl, C 3.8 cycloalkyl, 3- to 8-membered heterocyclic group, Aryl, heteroaryl, CN, N0 2 , OR h > SR h > NR h R h , C(0)R e > C(0)0R ⁇ C(0)NR h R ⁇ NR h C(0)
  • aryl groups are aromatic groups containing 6-12 carbon atoms; heteroaryl groups are 5- to 15-membered heteroaryl groups Fragrance group:
  • the cyclic structure is a saturated or unsaturated, heteroatom-containing or non-heteroatom-containing cyclic group.
  • the formula (I) is
  • each R is independently a C 1.2 alkyl group
  • Each R 1 independently is hydrogen, neon, halogen, or (2 ⁇ firing group.
  • Each R 2 is independently hydrogen, deuterium, halogen, and Cw alkyl
  • Each R 4 is independently hydrogen, deuterium, halogen, C M alkyl, NR h R ⁇ or NR h C(0)R e ;
  • n 0, 1, or 2;
  • n 0, 1, or 2;
  • p 0, 1, or 2;
  • q 0, 1, or 2;
  • R e and R h is defined as in claim 1.
  • the formula (I) is:
  • R f is hydrogen, Ci 4 firing group, C M-generation firing group, C 2.4 woman group, C 2.4 block basis, C 3.6 cycloalkyl firing group, 3 - to 9 - Wu heterocyclyl, aryl, heteroaryl, C(0)R e , C(0)0R ⁇ C(0)NR h R ⁇ S(0) 2 R e > or S(0) 2 NR h R h ; wherein each alkyl, alkenyl, alkynyl , Cycloalkyl, heterocyclyl, aryl and heteroaryl are optionally and each independently substituted with 1-3 substituents each independently selected from the group consisting of halogen, C 14 alkyl, C 2.4 alkenyl , C 2.4 alkynyl, C 3.8 cycloalkyl, 3- to 8-membered heterocyclic group, aryl, heteroaryl, CN, NO 2 , OR ⁇ SR ⁇ NR h R ⁇ C(0)R e , C (0)0R h > C
  • each R 4 is independently hydrogen, deuterium, halogen, Cw alkyl, NR h R ⁇ or NR h C(0)R e ; q is 0 or 1 R f is hydrogen, Ci. 4 alkyl, C M Substitute alkyl group, C 2.4 phenyl group, C 2.4 block group, C 3.6 ring alkyl group, 3- to 9-membered heterocyclic group, Aryl, heteroaryl, C(0)R e , C(0)0R ⁇ C(0)NR h R ⁇ S(0) 2 R e , or S(0) 2 NR h R h ; where each alkane Group, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl and heteroaryl are optionally and each independently substituted with 1-3 substituents each independently selected from the following group: prime, Ci.
  • R ⁇ PR h is defined as described in claim 1.
  • the R f is selected from the following group: hydrogen!
  • R f is hydrogen, C M alkyl, C M haloalkyl, C 3.6 cycloalkyl, 3- to 9-membered heterocyclyl, aryl, heteroaryl, C(0)R e > or S(0) 2 R e ; wherein each alkyl group, cycloalkyl group, heterocyclic group, aryl group and heteroaryl group is optionally and each independently substituted by 1-3 substituents each independently selected from the group: ⁇ , Ci .
  • R 4 is hydrogen, halogen, Ci. 2 alkyl, NR h R ⁇ or NR h C(0)R e
  • R f is hydrogen, C M alkyl, C M haloalkyl, C 3.6 cycloalkyl, 3- to 9-membered heterocyclyl, aryl, heteroaryl, C(0)R e > or S(0) 2 R e ; wherein each alkyl group, cycloalkyl group, heterocyclic group, aryl group and heteroaryl group is optionally and each independently substituted by 1-3 substituents each independently selected from the group: ⁇ , Ci .
  • R 4 is hydrogen, halogen, or Cu alkyl
  • s and t are independently 1, 2, or 3;
  • A is NR k , 0, or CR g R g ; wherein R k is hydrogen, C M alkyl, C 14 haloalkyl, hydroxy-substituted C M alkyl, C 1.4- alkyloxy substituted C 1.4 Alkyl , two ( C 1.4 alkyl) amino substituted C 1.4 alkyl, C3.6 cycloalkyl, 3- to 9-member heterocyclic group, aryl, heteroaryl, C (0 )R e , C(0)0R ⁇ C(0)NR h R ⁇ S(0) 2 R e , or S(0) 2 NR h R h ; each
  • Each R e is independently selected from the group consisting of ammonia, C 1.4 alkyl group, C 1.4 alkyl group, C 2.4 alkyl group, C 2.4 alkyl group substituted with C 1.4 alkyl group, di ( Ci. 4 alkyl) amino substituted C2.4 phenyl group, C2.4 block group, C3.6 cycloalkyl group, 3- to 8-membered heterocyclic group, aryl group, or heteroaryl group; R3PR h
  • the definition is as described in the first aspect of the present invention.
  • each of said R e is independently selected from the following groups: hydrogen, alkyl, Halogenated alkyl group, Ci_ 4 alkylene group substituted with Ci_ 4 alkylene group, [ 2-4 alkylene group, Ci_ 4 alkylene group substituted [ 2-4 alkylene group, hydroxyl substituted alkylene group, two (Ci_ 4 alkylene group) yl) amino-substituted ( ⁇ _ women 4-yl, 3 - to 6 - Wu substituted heterocyclic group ( ⁇ _ 4 women, aryl substituted cyclic firing group, 3 - to 8 - Wu heterocyclyl, aryl Base, or heteroaromatic
  • the compound is selected from the following group:
  • the protein kinase is selected from the following group: EGFR, EGFR (C797S), ALK, HPK1, etc., or a combination thereof.
  • a pharmaceutical composition comprising: (i) an effective amount of the compound of formula I according to the first aspect of the present invention, or an optical isomer thereof, pharmacy Acceptable salts, prodrugs, deuterated derivatives, hydrates, solvates; and (ii) pharmaceutically acceptable carriers.
  • the third aspect of the present invention provides a method for preparing a compound of formula (I), which is characterized in that it comprises the steps:
  • the compound of formula 4-D1 is reacted with the compound of formula 1-A2 to obtain the compound of formula 4-D2-1 or 4-D2-2; in the presence of a palladium catalyst, the compound of formula 4-D2-1 or 4-D2-2 is used with Me 4 Sn reacts to obtain a compound of formula 4-D3-1 or 4-D3-2;
  • a method for preparing a compound of formula 0) is provided, which is characterized in that it comprises the steps of
  • the compound of formula Illh is used for reductive amination reaction with the compound of formula 5-E3 to obtain the compound of formula Illi.
  • the compound Illi is part of the compound of formula (I).
  • the fifth aspect of the present invention provides a method for inhibiting the activity of EGFR and/or EGFR (C797S) and/or ALK and/or HPK1, which comprises the steps of: administering an inhibitory effective amount as in the first aspect of the present invention to the inhibited subject
  • the compound of formula (I), or its optical isomers, pharmaceutically acceptable salts, prodrugs, deuterated derivatives, hydrates, solvates, or administering an inhibitory effective amount to the subject of inhibition as in the present invention The pharmaceutical composition of the third aspect.
  • the protein kinase inhibitors can inhibit protein kinases such as EGFR, EGFR (C797S), ALK, and HPK1, and the compounds of the present invention can be applied to those related to the activity of EGFR (including various mutations generated), ALK, and HPK1 Treatment of various diseases.
  • inhibition of EGFR (C797S) is characterized by being able to overcome the drug resistance generated by the third generation of EGFR inhibitors.
  • the present invention includes a class of EGFR (especially EGFR (C797S)) inhibitors, which can effectively inhibit L858R/T790M double mutation and C797S mutant EGFR.
  • the compounds of the present invention can inhibit the immune target HPK1, and can treat a variety of cancers and other diseases through single agent or in combination with other drugs. Based on the above findings, the inventor completed the present invention.
  • each chiral carbon atom may optionally be R configuration or S configuration, or a mixture of R configuration and S configuration.
  • alkyl refers to a linear (ie, unbranched) or branched saturated hydrocarbon group containing only carbon atoms, or a combination of linear and branched groups . When the alkyl group has a limit on the number of carbon atoms (such as Q.nO, it means that the alkyl group contains 1-10 carbon atoms.
  • ( ⁇ . 8 alkyl refers to an alkyl group containing 1-8 carbon atoms, Includes methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, or similar groups.
  • alkenyl refers to a straight or branched carbon chain group with at least one carbon-carbon double bond.
  • the alkenyl group can be substituted or unsubstituted. When the alkenyl group has a limited number of carbon atoms (such as C 2.8 ) When, it means that the alkenyl group contains 2-8 carbon atoms.
  • C 2.8 alkenyl refers to an alkenyl group containing 2-8 carbon atoms, including ethylenyl, propylenyl, 1,2-butenyl, 2,3-Butyl, butadienyl, or similar groups.
  • alkynyl refers to an aliphatic group with at least one carbon-carbon triple bond Hydrocarbon group.
  • the alkynyl group can be linear or branched, or a combination thereof. When the alkynyl group has a limited number of carbon atoms (such as C 2.8 alkynyl), it means that the alkynyl group contains 2- 8 carbon atoms.
  • C 2.8 alkynyl refers to a straight or branched chain alkynyl group with 2-8 carbon atoms, including ethynyl, propynyl, isopropynyl, butynyl, and isobutyl Alkynyl, sec-butynyl, tert-butynyl, or similar groups.
  • cycloalkyl refers to a saturated or partially saturated unitary ring, bicyclic or polycyclic (fused, bridged, or spiro) ring system group .
  • a certain cycloalkyl group has a limited number of carbon atoms (such as C 3. ), it means that the cycloalkyl group contains 3-10 carbon atoms.
  • C 3.8 cycloalkyl group refers to A saturated or partially saturated monocyclic or bicyclic alkyl group having 3-8 carbon atoms, including cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cycloheptyl, or similar groups.
  • Spirocycloalkyl means Bicyclic or polycyclic groups that share one carbon atom (called a spiro atom) between single rings. These can contain one or more double bonds, but none of the rings have a fully conjugated 71-electron system.
  • “Fused cycloalkyl” Refers to an all-carbon bicyclic or polycyclic group in which each ring in the system shares an adjacent pair of carbon atoms with other rings in the system, where one or more rings may contain one or more double bonds, but none of them The ring has a fully conjugated 71-electron system.
  • “Bridged cycloalkyl” refers to an all-carbon polycyclic group in which any two rings share two carbon atoms that are not directly connected. These can contain one or more double bonds, but no A ring has a fully conjugated 71 electron system.
  • the atoms contained in the cycloalkyl group are all carbon atoms.
  • Aryl refers to all-carbon monocyclic or fused polycyclic (that is, rings that share adjacent pairs of carbon atoms) groups with a conjugated 71-electron system, such as phenyl and naphthyl.
  • the aryl ring can be fused to other cyclic groups (including saturated and unsaturated rings), but cannot contain heteroatoms such as nitrogen, oxygen, or sulfur, and the point of connection to the parent must be in a conjugated 71-electron system On the carbon atom on the ring.
  • Aryl groups can be substituted or unsubstituted. The following are some examples of aryl groups, and the present invention is not limited to the following aryl groups.
  • Heteroaryl refers to an aromatic monocyclic or polycyclic group containing one to more heteroatoms (optionally from nitrogen, oxygen, and sulfur), or a heterocyclic group (containing one to more heteroatoms).
  • Heteroaryl groups can be optionally substituted or unsubstituted. The following are some examples of heteroaryl groups. The present invention is not limited to the following heteroaryl groups.
  • Heterocyclyl refers to a saturated or partially unsaturated monocyclic or polycyclic cyclic hydrocarbon substituent in which one or more ring atoms It is selected from nitrogen, oxygen or sulfur, and the remaining ring atoms are carbon.
  • monocyclic heterocyclic groups include pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, morpholinyl, thiomorpholinyl, and homopiperazinyl.
  • the polycyclic heterocyclic group refers to a heterocyclic group including spiro ring, fused ring and bridged ring.
  • “Spirocyclic heterocyclyl” refers to a polycyclic heterocyclic group in which each ring in the system and other rings in the system share one atom (called a spiro atom), wherein one or more ring atoms are selected from nitrogen and oxygen. Or sulfur, and the remaining ring atoms are carbon.
  • “Fused ring heterocyclic group” refers to a polycyclic heterocyclic group in which each ring in the system shares an adjacent pair of atoms with other rings in the system.
  • One or more rings may contain one or more double bonds, but no A ring has a fully conjugated 71-electron system, and one or more of the ring atoms are selected from nitrogen, oxygen, or sulfur, and the remaining ring atoms are carbon.
  • “Bridged heterocyclic group” refers to a polycyclic heterocyclic group in which any two rings share two atoms that are not directly connected. These can contain one or more double bonds, but none of the rings have a fully conjugated 71-electron system , And one or more of the ring atoms are selected from nitrogen, oxygen or sulfur, and the remaining ring atoms are carbon. If there are both saturated and aromatic rings in the heterocyclic group (for example, the saturated ring and the aromatic ring are fused together), the point of connection to the parent must be on the saturated ring. Note: When the point of attachment to the parent is on the aromatic ring, it is called a heteroaryl group, not a heterocyclic group. The following are some examples of heterocyclic groups, and the present invention is not limited to the following heterocyclic groups.
  • halogen refers to F, Cl, Br, and I when alone or as part of other substituents.
  • substituted refers to the replacement of one or more hydrogen atoms on a specific group with a specific substituent.
  • the specific substituents are the substituents correspondingly described in the foregoing, or the substituents appearing in each embodiment.
  • an arbitrarily substituted group may have a substituent selected from a specific group at any substitutable position of the group, and the substituent may be the same or different in each position.
  • a cyclic substituent such as a heterocyclic group
  • the substituents include (but are not limited to): C M alkyl, C 2.8 alkenyl, C 2.8 alkynyl, C 3.8 cycloalkyl, 3- to 12-membered heterocyclic group, aryl, heteroaryl, Element, hydroxyl, carbonyl (-COOH), Ci. 8 acid group, C 2-10 acyl group, C 2.1Q ester group, amino group.
  • the term "pharmaceutically acceptable salt” refers to a salt suitable for contact with the tissue of a subject (for example, a human) without causing unpleasant side effects.
  • the pharmaceutically acceptable salt of a certain compound of the present invention includes a salt of the compound of the present invention having an acidic group (for example, potassium salt, sodium salt, magnesium salt, calcium salt) Or a salt of the compound of the present invention having a basic group (for example, sulfate, hydrochloride, phosphate, nitrate, carbonate).
  • the present invention provides a class of compounds of formula (I), or their deuterated derivatives, their salts, isomers (enantiomers or diastereomers, if they exist), prodrugs
  • the protein kinases referred to here include EGFR, EGFR (C797S), ALK, and HPK1, but are not limited to the above kinases.
  • the compounds of the present invention can be used as one or more kinase inhibitors.
  • a certain type of compounds in the present invention can be used as EGFR and/or EGFR (C797S) and/or ALK and/or HPK1 kinase inhibitors Agent.
  • the expression or activity of the various protein kinases mentioned above are significantly increased.
  • These overexpression and/or abnormal protein kinase activity levels are directly related to the occurrence and development of tumors.
  • the compounds of the invention are single and/or dual inhibitors of these protein kinases. By regulating the activity of these protein kinases, diseases can be prevented, alleviated or cured.
  • the diseases referred to include liver cancer, rectal cancer, bladder cancer, throat cancer, non-small cell lung cancer, small cell lung cancer, lung adenocarcinoma, lung squamous cell carcinoma, breast cancer, prostate cancer, glioma, ovarian cancer, head and neck Squamous cell carcinoma, cervical cancer, esophageal cancer, kidney cancer, pancreatic cancer, colon cancer, skin cancer, lymphoma, gastric cancer, multiple bone marrow cancer and solid tumors, etc.
  • dual protein kinase inhibitors interfere with two different kinases at the same time, and the anti-tumor effects produced by them are often superimposed, so they have the potential to treat various cancers more effectively.
  • the compound of the present invention can be combined with biological agents such as PD-1 inhibitor Opdivo ® and Keytruda ® as a combination drug to treat various cancers and related diseases.
  • compositions can be combined with pharmaceutically acceptable excipients or The carrier is formulated together, and the resulting composition can be administered in vivo to mammals, such as men, women and animals, for the treatment of diseases, symptoms and diseases.
  • the composition can be: tablets, pills, suspensions, solutions, emulsions, capsules, aerosols, sterile injections. Sterile powder, etc.
  • pharmaceutically acceptable excipients include microcrystalline cellulose, lactose, sodium citrate, calcium carbonate, calcium hydrogen phosphate, mannitol, hydroxypropyl-P-cyclodextrin, and P-cyclodextrin Refined (increased), glycine, disintegrants (such as starch, croscarmellose sodium, composite silicate and high molecular polyethylene glycol), granulation binders (such as polyvinylpyrrolidone, sucrose, gelatin) And gum arabic) and lubricants (such as magnesium stearate, glycerin and talc).
  • disintegrants such as starch, croscarmellose sodium, composite silicate and high molecular polyethylene glycol
  • granulation binders such as polyvinylpyrrolidone, sucrose, gelatin
  • lubricants such as magnesium stearate, glycerin and talc.
  • the pharmaceutical composition is a dosage form suitable for oral administration, including but not limited to tablets, solutions, suspensions, capsules, granules, and powders.
  • the amount of the compound or the pharmaceutical composition administered to the patient is not fixed, and is usually administered in a pharmaceutically effective amount.
  • the amount of the compound actually administered can be determined by the physician according to the actual situation, including the disease to be treated, the route of administration selected, the actual compound administered, and the individual condition of the patient.
  • the dosage of the compound of the present invention depends on the specific use of the treatment, the mode of administration, the state of the patient, and the judgment of the physician.
  • the ratio or concentration of the compound of the present invention in the pharmaceutical composition depends on various factors, including dosage, physical and chemical properties, route of administration, and the like. It should be understood that within the scope of the present invention, the above-mentioned technical features of the present invention and the technical features specifically described in the following (such as the embodiments) can be combined with each other to form a new or preferred technical solution.
  • the formula I compound of the present invention can be prepared by the following method
  • the compound (la) is reacted with (lb) to obtain the compound (I); in the above formulas, the definition of each group is as described above.
  • the reagents and conditions of each step can be selected from the conventional reagents or conditions of this type of preparation method in the art. After the structure of the compound of the present invention is disclosed, the above-mentioned selection can be made by those skilled in the art according to the knowledge in the art.
  • the compound represented by formula I of the present invention can be prepared by the following method, but the conditions of the method, such as reactant, solvent, base, amount of compound used, reaction temperature, reaction time required, etc. are not limited to the following explanation of.
  • the compounds of the present invention can also be conveniently prepared by combining various synthetic methods described in this specification or known in the art. Such combinations can be easily performed by those skilled in the art to which the present invention belongs.
  • each reaction is usually in an inert solvent, and the reaction temperature is usually -20 ⁇ 150°C (preferably carried out at 0 ⁇ 120°C.
  • the reaction time of each step is usually 0.5 ⁇ 48 h, preferably It is 2 ⁇ 12 h.
  • Reaction formula 1 describes the general synthesis method of intermediates 1-A5-1 and 1-A5-2: Reaction formula 1:
  • Reaction formula 2 describes the general synthesis method of intermediates 2-B3-1 and 2-B3-2: Reaction formula 2:
  • Reaction formula 3 describes the general synthesis method of intermediate 3-C7:
  • Reaction equation 4 describes the general synthesis method of compound Ilia: Reaction equation 4:
  • Reaction equation 5 describes the general synthesis method of compound nib: Reaction equation 5:
  • Reaction formula 6 describes the general synthesis method of compound IIIc: Reaction formula 6:
  • Reaction equation 8 describes the general synthesis method of compound Ille. Reaction equation 8:
  • the pharmaceutical composition of the main active ingredient can be used to treat, prevent and alleviate diseases related to the activity or expression of protein kinases such as EGFR, EGFR (C797S), ALK, and HPK 1.
  • the pharmaceutical composition of the present invention contains the compound of the present invention or a pharmacologically acceptable salt thereof and a pharmacologically acceptable excipient or carrier within a safe and effective amount.
  • the “safe and effective amount” refers to: The amount of the compound is sufficient to significantly improve the condition without causing serious side effects.
  • the pharmaceutical composition contains 1-2000 mg of the compound of the present invention/agent, more preferably, 5-200 mg of the compound of the present invention/agent.
  • the “one dose” is a capsule or tablet.
  • “Pharmaceutically acceptable carrier” refers to: one or more compatible solid or liquid fillers or gel substances, which are suitable for human use, and must have sufficient purity and sufficiently low toxicity.
  • “Compatibility” here means that each component of the composition can be blended with the compound of the present invention and between them without significantly reducing the efficacy of the compound.
  • Examples of pharmaceutically acceptable carriers include cellulose and its derivatives (such as sodium carboxymethyl cellulose, sodium ethyl cellulose, cellulose acetate, etc.), gelatin, talc, and solid lubricants (such as stearic acid). , Magnesium stearate), calcium sulfate, vegetable oils (such as soybean oil, sesame oil, peanut oil, olive oil, etc.), polyols (such as propylene glycol, glycerin, mannitol, sorbitol, etc.), emulsifiers (such as Tween®)> Wetting agents (such as sodium lauryl sulfate), coloring agents, flavoring agents, stabilizers, antioxidants, preservatives, pyrogen-free water, etc.
  • cellulose and its derivatives such as sodium carboxymethyl cellulose, sodium ethyl cellulose, cellulose acetate, etc.
  • gelatin such as sodium stearic acid
  • talc such as stearic acid
  • the method of administration of the compound or pharmaceutical composition of the present invention is not particularly limited.
  • Representative administration methods include (but are not limited to): oral, intratumoral, rectal, parenteral (intravenous, intramuscular, or subcutaneous), and topical administration .
  • Solid dosage forms for oral administration include capsules, tablets, pills, powders and granules.
  • the active compound is mixed with at least one conventional inert excipient (or carrier), such as sodium citrate or dicalcium phosphate, or mixed with the following ingredients: (a) fillers or compatibilizers, for example, Starch, lactose, sucrose, glucose, mannitol and silicic acid; (b) binders, such as hydroxymethyl cellulose, alginate, gelatin, polyvinylpyrrolidone, sucrose and gum arabic; (c) humectants, For example, glycerin; (d) disintegrating agents, such as agar, calcium carbonate, potato starch or tapioca starch, alginic acid, certain complex silicates, and sodium carbonate; (e) slow solvents, such as paraffin; (f) Absorption accelerators, such as quaternary amine compounds; (g) wetting agents, such as cetyl alcohol and g
  • Solid dosage forms such as tablets, sugar pills, capsules, pills and granules can be prepared with coatings and shell materials, such as enteric coatings and other materials known in the art. They may contain opacifying agents, and the release of the active compound or compound in such compositions may be released in a certain part of the digestive tract in a delayed manner. Examples of embedding components that can be used are polymeric substances and waxes. If necessary, the active compound can also be formed into a microcapsule form with one or more of the above-mentioned excipients.
  • Liquid dosage forms for oral administration include pharmaceutically acceptable emulsions, solutions, suspensions, syrups or tinctures.
  • the liquid dosage form may contain inert diluents conventionally used in the art, such as water or other solvents, solubilizers and emulsifiers, for example, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, propylene glycol, 1 ,3-Butanediol, dimethylformamide and oils, especially cottonseed oil, peanut oil, corn germ oil, olive oil, castor oil and sesame oil or mixtures of these substances.
  • composition may also contain adjuvants such as wetting agents, emulsifying and suspending agents, sweetening agents, flavoring agents and perfumes.
  • adjuvants such as wetting agents, emulsifying and suspending agents, sweetening agents, flavoring agents and perfumes.
  • the suspension may contain suspending agents, for example, ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol and sorbitan esters, microcrystalline cellulose, aluminum methoxide and agar or mixtures of these substances.
  • suspending agents for example, ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol and sorbitan esters, microcrystalline cellulose, aluminum methoxide and agar or mixtures of these substances.
  • composition for parenteral injection may contain physiologically acceptable sterile aqueous or non-aqueous solutions, dispersions, suspensions or emulsions, and sterile powders for reconstitution into sterile injectable solutions or dispersions.
  • Suitable aqueous and non-aqueous carriers, diluents, solvents or excipients include water, ethanol, polyols and suitable mixtures thereof.
  • the dosage form of the compound of the present invention for topical administration includes ointment, powder, patch, propellant and inhalant.
  • the active ingredient is mixed under sterile conditions with a physiologically acceptable carrier and any preservatives, buffers, or propellants that may be required if necessary.
  • the compound of the present invention can be administered alone or in combination with other pharmaceutically acceptable compounds.
  • a safe and effective amount of the compound of the present invention is applied to a mammal (such as a human) in need of treatment, where the dosage is the pharmaceutically effective dosage considered to be administered, and for a 60kg body weight, the daily
  • the administered dose is usually 1 to 2000 mg, preferably 5 to 500 mg.
  • the specific dosage should also consider factors such as the route of administration and the patient's health status, which are all within the skill range of a skilled physician.
  • EGFR EGFR
  • C797S EGFR
  • ALK a novel structurally active inhibitor of protein kinases
  • HPK1 a novel structurally active inhibitor of protein kinases
  • compositions for the treatment of diseases related to protein kinase activity such as EGFR, EGFR (C797S), ALK, and HPK1.
  • Liquid chromatography conditions Column X Brdige C18: 4.6 mm*30 mm*3.5 um, mobile phase A: water (0.01 mol/L NH 4 HCO 3 ), mobile phase B: acetonitrile, flow rate 2.0 mL/min, from 10 %B to 95%B gradient elution in 0.5 minutes, then constant 95%B for 1.5 minutes. The purity is 95%, the retention time is 0.95 min; MS m/z 316.0 [M+H] + .
  • Liquid chromatography conditions Column X Brdige C18: 4.6 mm*30 mm*3.5 um, mobile phase A: water (0.01 mol/L NH4HCO3), mobile phase B: acetonitrile, flow rate 2.0 mL/min, from 5% B Gradient elution to 100% B in 1.6 minutes, then constant 100% B for 1.4 minutes. The purity is 90%.
  • Buffer preparation 50 mM HEPES, pH 7.5, 0.0015% Brij-35.
  • Staurosporine and the compound of the embodiment of the present invention are formulated into a gradient concentration solution in 100% DMSO, diluted to 10% DMSO with the above buffer, and added to a 384-well plate. For example, if the initial concentration of the compound is 10 ⁇ M, 100% DMSO is used to prepare 1000 ⁇ M, and 10 concentration gradients are diluted, and 100 nL is transferred to a 384-well plate with Echo® LIQUID HANDLE RS (LABCYTE, USA).
  • the activities of representative compounds are shown in Table 2.
  • the value of 1(: 5() is expressed in the following way: A: 1 nM ⁇ IC 50 value S 50 nM; B: 50 nM ⁇ IC 50 value S 250 nM; C: 250 nM ⁇ IC 50 value S 1000 nM; D: IC 50 value>1000 nM.
  • Table 2. EGFR (C797S) kinase activity inhibition (IC 50 value)
  • Method 1 Caliper mobility shift assay was used to measure ALK protein kinase activity.
  • the compound was dissolved in DMSO and diluted with kinase buffer: 50 mM HEPES, pH 7.5, 0.0015% Brij-35, 10 mM MgCl 2 , 2 mM DTT; 5
  • Method 2 Caliper mobility shift assay was used to measure ALK protein kinase activity.
  • the method is basically the same as method 1, with individual parameters adjusted.
  • the initial concentration of the compound is 1 mM, and it is sequentially diluted 4-fold to 6 (7 for individual compounds).
  • Conversion inhibition rate% (mean conversion rate of positive control%-sample conversion rate% / (mean conversion rate of positive control%-mean conversion rate of negative control %). Among them: negative control wells represent the conversion rate readings of wells without enzyme activity; Positive control wells represent the conversion rate readings of wells without compound inhibition.
  • the Caliper mobility shift assay was used to detect the inhibitory effect of the compound on EGFR (T790M/L858R/C797S) kinase activity.
  • the basic method is the same as ALK activity test method 2.
  • the test concentration of the compound is 2
  • Conversion inhibition rate% (average conversion rate of positive control%-sample conversion rate% / (average conversion rate of positive control%-mean conversion rate of negative control %).
  • negative control wells represent the conversion rate readings of wells without enzyme activity
  • Positive control wells represent the conversion rate readings of wells without compound inhibition.
  • the Caliper mobility shift assay was used to detect the inhibitory effect of the compound on MAP4K1 (HPK1) kinase activity.
  • the starting concentration of the compound test is 500 nM, 5-fold dilution, 5 concentration points.
  • Conversion inhibition rate% (average positive control conversion rate%-sample conversion rate% / (average positive control conversion rate%-negative control conversion rate %). Among them: negative control wells represent the conversion rate readings without enzyme active wells; Positive control wells represent the conversion rate readings of wells without compound inhibition. Take the log value of the concentration as the X-axis and the percentage inhibition rate on the Y-axis, using the analysis software GraphPad Prism 5 to calculate the log(inhibitor) vs.
  • MAP4K1 HPK1 kinase activity inhibition (IC 5 o value)
  • Example 54 Ba/F3 EGFR (dell9-T790M-C797S) cell anti-proliferation experiment
  • Method 1 Cell culture: Ba/F3_EGFR dell9/T790M/C797S cell culture medium is RPMI-1640 + 10% FBS + 1% double antibody. The cells were cultured in a 37 °C, 5% CO 2 incubator.
  • Cell plating and compound treatment 1) Cells are routinely cultured until the cell saturation is 80%-90%, and when the number reaches the requirement, the cells are collected. 2) Resuspend in the corresponding fresh medium, take a small amount of cells to count, and prepare a cell suspension of suitable density. 3) Inoculate the cell suspension into a 384-well plate at 700 cells/well, 30
  • CTG method detection 1) Add 30
  • Method 2 Cell plating and compound treatment: 1) Take Ba/F3_EGFR Dell9/T790M/C797S cells, centrifuge at 800 rpm for 5 min, discard the supernatant, and resuspend in fresh medium (RPMI-1640+10% FBS). Take out a small amount of cells and count them with ViCell. 2) Adjust the cell density, inoculate the cells in a 384-well plate at 2000/well, and incubate for 4 hours in a 37 °C, 5% CO 2 incubator. 3) Tecan HP D300 set up the program, add the compound to the well plate.
  • the maximum starting concentration of the compound is 1-4 pM, 3 times dilution, 9 concentrations, and the DMSO content in each well is unified to 0.2%.
  • the cells were cultured for 72 h in a 37 °C, 5% CO 2 incubator.
  • CTG method detection 1) Take out the CTG reagent and cell plate and equilibrate at room temperature for 30 min, add 25

Abstract

一类含有三环杂芳基化合物。具体地，提供了如下式(I)所示结构的化合物、含有式(I)化合物的药物组合物及所述化合物，以及这些化合物的同位素衍生物，手性异构体，变构体，不同的盐，前药，制剂等等。式(I)化合物能够有效抑制蛋白激酶（包括EGFR、EGFR(C797S)、 ALK和HPK1等），从而起到治疗各种肿瘤的作用。

Description

作为激酶抑制剂的稠合三环化合物
技术领域
本发明涉及药物化学领域； 具体地说， 本发明涉及一类新型含有三环杂芳基的 衍生物，其合成方法及其作为一种或多种蛋白激酶抑制剂在制备药物用于***等 相关疾病中的应用。
背景技术
癌症亦称恶性肿瘤， 是世界上发病率最高和死亡率最高的一种疾病之一， 其特 点是以细胞异常增殖及转移， 在发病后短时间内或相对短时间内扩散， 转移。 传统的 治疗方案包括切除 (如果符合切除条件 )， 放疗， 化疗。近年来发展起来的靶向治疗法， 有降低毒性和对病人的负作用， 及提高生存率等优点。但在使用靶向药物一段时间内 又会产生抗药性， 之后癌细胞的生长扩散就会异常迅猛。常见的癌症有： 血癌， 肺癌， 肝癌， 膀胱癌， 直肠癌， 胃癌， 等等。
在所有癌症中， 肺癌发病率和死亡率均占所有恶性肿瘤的前几位。 其中， 非小 细胞肺 (NSCLC ) 癌约占所有肺癌的 80%。 目前针对非小细胞肺癌最有效的手段是个体化靶向治疗， 常见的靶点有 C-met、 ALK和 EGFR。
表皮生长因子受体酪氨酸激酶 (epidermal growth factor receptor tyrosine kinase, EGFR)是由 1 186个氨基酸组成， 编码分子量为 170-kDa的一种跨膜糖蛋白。 EGFR能够 介导多条信号传导通路， 将胞外信号传递到胞内， 对正常细胞和肿瘤细胞的增殖、 分 化和凋亡均发挥重要的调节作用。 EGFR是许多正常上皮组织 (如皮肤和毛囊)的组成 性表达成分， 而在大部分实体瘤中， EGFR存在过表达或者高表达。 例如， 在肺癌中， EGFR的表达率达到 40— 80%。因此选择性地抑制 EGFR，干扰其介导的信号转导途径， 可以达到治疗肺癌的目的， 为靶向治疗肺癌开辟了一条可行之路。
间变性淋巴瘤激酶 ( anaplastic lymphoma kinase,简称 ALK)基因是一种跨膜受体 酪氨酸激酶，可在多种恶性肿瘤中发生变异或与其他癌基因融合，是肿瘤的致癌驱动基 因。 ALK抑制剂可用于治疗肺癌。 有研究表明， 在非小细胞肺癌患者体内，特别是使用表皮生长因子受体 (EGFR) 抑制剂药物后一段时间， 其 EGFR的突变最为常见， 其中约 30%〜 40%的亚洲 NSCLC患 者在确诊时携带 EGFR突变， 尤其是无吸烟史的中年女性。 因此， 研制新一代的 EGFR 抑制剂以对抗癌症的突变， 是科学家所要攻克的难题， 也是当今生物医药领域研究热 目前已经上市的 EGFR抑制剂共有三代， 其中第一代的代表性抑制剂为吉非替尼 (Iressa®)＞ 厄洛替尼 (Tarceva®)和埃克替尼 (凯美纳) ， 第二代的代表性抑制剂为阿 法替尼 (afatinib)， 第三代的代表性抑制剂为奥希替尼 ( AZD9291 ) 。 奥希替尼 ( AZD9291 ) 是一种口服的小分子第三代 EGFR-TKI， 是首个针对 EGFR T790M突变 的肺癌药物，能靶向非小细胞肺癌的 EGFR基因突变 (包括 18 , 19 , 21突变)和£0?11-1^1 获得性耐药 ( T790M) ， 它的问世给更多的肺癌患者带来了好的生存获益。 AZD9291 可明显延长生存期一年左右。 但是之后耐药性发展非常迅速， 一般是在 9-13个月内。 2016年 8月世界顶尖学术杂志 《Nature》 发表了一篇重磅文章， 宣布了一种能够克服 AZD9291耐药的新一代靶向药化合物 EAI045 ,可用于一代药物耐药且有 T790M突变的 病人， 或者用于 AZD9291耐药且有 C797S突变的病人， 即***抑制剂主要是针对耐 药突变有 L858R/T790M双突变和 C797S 突变的病人。 造血祖细胞激酶 1 ( Hematopoietic progenitor kinase 1， HPK 1 , 又称 MAP4K1 ) 是 一种丝氨酸 /苏氨酸激酶生发中心激酶家族成员， 主要是由造血细胞表达， 是 T细胞增 殖和信号传导的细胞内负调节因子， 在树突状细胞活化中发挥着重要作用， 是一种新 的抗癌免疫治疗靶点， 因此， 用小分子抑制剂抑制 HPK1通过单药或与其它药物联用， 具有治疗癌症和其他疾病的潜力。
发明内容
本发明的目的是提供一类新型的蛋白激酶抑制剂。
本发明的第一方面， 提供了一种如下式 (I)所示结构的化合物， 或其光学异构体 (包 括消旋体、 单一的对映异构体、 可能的非对映异构体) ， 药学上可接受的盐， 前药， 氘代 衍生物， 水合物， 溶剂合物：
Figure imgf000003_0001
式 (I)中：
“*”表示手性中心
各个 R各自独立为 CM烷基 各个 R1各自独立为氨、 気、 素、 Ci.4焼基、 C2.4婦基、 C2.4块基、 C3.6环焼基、 3 -至 8 - 元杂环基、 芳基、 杂芳基、 OR\ 或 CN;
各个 R2各自独立为氨、 気、 素、 Ci.4焼基、 C2.4婦基、 C2.4块基、 C3.6环焼基、 3 -至 8- 元杂环基、 芳基、 杂芳基、 或 CN;
各个 R3各自独立为氢、 氘、 CM烷基； 或当两个 R3同时连接到同一个碳原子上时， 这 两个 R3与其相连的碳原子可以任选地共同形成羰基 (C=0);
各个 R4各自独立为氢、 氘、 卤素、 CM烷基、 CM卤代烷基、 C2.4烯基、 C2.4炔基、 ORh > SR\ NRhR\ CN、 C(0)Re、 C(0)0Rh， C(0)NRhRh、 0C(0)Re、 NRhC(0)Re、 或 S(0)2Re;
J和 G各自独立地为 NRf、 0、 S、 S(O)、 S(0)2或 CRgRg;
m为 0、 1、 2、 3、 或 4;
n为 0、 1、 2、 或 3 ;
p为 0、 1、 或 2;
q为 0、 1、 2、 或 3 ;
Rf为氢!、 Ci.8焼基、 Ci.8 代焼基、 C2.8婦基、 C2.8块基、 C3.8环焼基、 3 -至 12 -兀杂环基、 芳基、 杂芳基、 C(0)Re、 C(0)0R\ C(0)NRhR\ S(0)2Re、 或 S(0)2NRhRh; 其中， 上述各 个基团为未取代或被 1-3个 Re取代； 各个 Re各自独立地为选自下组的基团： 氢 !、 Cl.4焼基、 Cl.4 代焼基、 Cl.4焼氧基取代的 C14烷基、 C2.4烯基、 C2.4卤代烯基、 C14烷氧基取代的 C2.4烯基、羟基取代的 C2.4烯基、二 (CM 焼基)胺基取代的 C2.4婦基、 C3.8环焼基取代的 C2.4婦基、 3 -至 8 -兀杂环基取代的 C2.4婦基、 芳 基取代的 C2.4烯基、 杂芳基取代的 C2.4烯基、 C2.4炔基、 C2.4卤代炔基、 CM烷氧基取代的 C2.4 炔基、 羟基取代的 C2.4炔基、 二 (CM烷基 )胺基取代的 C2.4炔基、 C3.8环烷基取代的 C2.4炔基、 3 -至 8 -元杂环基取代的 C2.4炔基、 芳基取代的 C2.4炔基、 杂芳基取代的 C2.4炔基、 C3.8环烷基、 3 -至 8 -元杂环基、 芳基、 或杂芳基； 各个 Rg各自独立地选自下组： 氢、 卤素、 CM烷基； 或两个 1^与其相连的碳原子共同 形成羰基 (C=0); 或两个 Rg与其连接的同一个碳原子一起形成 3 -至 8 -元环状结构， 此环状结 构任选地含有 0、 1或 2个选自 N、 0、 S的杂原子；
各个 Rh各自独立为氢、 CM烷基； 或两个 Rh与其连接的氮原子一起形成 3 -至 -8元杂环 基， 此杂环基含有 1或 2个 N原子以及 0或 1个选自 0、 S的杂原子； 其中， 各个上述的烷基、 烯基、 炔基、 环烷基、 杂环基、 芳基和杂芳基任选地且各自 独立地被 1-3个各自独立地选自下组的取代基取代： 卤素、 C14烷基、 C14卤代烷基、 C2.4烯 基、 C2.4炔基、 C3.8环烷基、 3 -至 8 -元杂环基、芳基、杂芳基、 CN、 N02、 ORh > SRh > NRhRh、 C(0)Re > C(0)0R\ C(0)NRhR\ NRhC(0)Re > 或 S(0)2Re， 前提条件是所形成的化学结构是 稳定的和有意义的； 其中 R^PRh的定义如上所述；
除非特别说明， 上述的芳基为含有 6-12个碳原子的芳香基团； 杂芳基为 5 -至 15 -元杂芳 香基团； 环状结构为饱和的或不饱和的、 含杂原子或不含杂原子的环状基团。 在另一优选例中， 式 (I)为
Figure imgf000005_0001
其中各个基团的定义如权利要求 i中所述。 在另一优选例中， 各个 R各自独立为 C 1.2焼基；
各个 R1各自独立为氢、 氖、 卤素、 或(^.2焼基；
各个 R2各自独立为氢、 氘、 卤素、 Cw烷基；
各个 R3各自独立为氢 CM烷基； 或当两个 R3同时连接到同一个碳原子上时， 这两个 R3与其相连的碳原子共同形成羰基 (C=0);
各个 R4各自独立为氢、 氘、 卤素、 CM烷基、 NRhR\ 或 NRhC(0)Re;
m为 0、 1、 或 2;
n为 0、 1、 或 2;
p为 0、 1、 或 2;
q为 0、 1、 或 2;
其中 Re和 Rh的定义如权利要求 1中所述。 在另一优选例中， 式 (I)为:
Figure imgf000005_0002
(Illa) (nib) 其中 R2为 F、 Cl、 或 Br; 各个 R3各自独立为氢或 CM烷基； 或当两个 R3同时连接 到同一个碳原子上时，这两个 R3与其相连的碳原子共同形成羰基 (C=0);各个 R4各自独立
Figure imgf000006_0002
“ ”表示上述结构片段与式 (Ilia)中其它结构的连接位点；
其中， 各个 R3各自独立为氢或。^烷基； 当两个 R3连接在同一个碳原子上时， 两 个 R3和连接它们的碳原子可以一起组成 C=0; 各个 R4各自独立为氢、 氘、 卤素、 Cw烷基、 NRhR\ 或 NRhC(0)Re;
n为 0、 1、 或 2; q为 0或 1 ;
Rf为氢、 Ci.4焼基、 CM 代焼基、 C2.4婦基、 C2.4块基、 C3.6环焼基、 3 -至 9 -兀杂环基、 芳基、 杂芳基、 C(0)Re、 C(0)0R\ C(0)NRhR\ S(0)2Re > 或 S(0)2NRhRh; 其中各个烷基、 烯基、 炔基、 环烷基、 杂环基、 芳基和杂芳基任选地且各自独立地被 1-3个各自独立地选自 下组的取代基取代： 卤素、 C14烷基、 C2.4烯基、 C2.4炔基、 C3.8环烷基、 3 -至 8 -元杂环基、 芳基、杂芳基、 CN、 N02、 OR\ SR\ NRhR\ C(0)Re、 C(0)0Rh > C(0)NRhRh、 NRhC(0)Re、 S(0)2Re > 或 S(0)2NRhRh ; 其中 R^PRh的定义如权利要求 1中所述。 在另一优选例中， 式 (I)为:
Figure imgf000006_0001
(IVa) (IVb)
其中， 各个 R4各自独立为氢、 氘、 卤素、 Cw烷基、 NRhR\ 或 NRhC(0)Re; q为 0或 1 Rf为氢、 Ci.4焼基、 CM 代焼基、 C2.4婦基、 C2.4块基、 C3.6环焼基、 3 -至 9 -兀杂环基、 芳基、 杂芳基、 C(0)Re、 C(0)0R\ C(0)NRhR\ S(0)2Re、 或 S(0)2NRhRh; 其中各个烷基、 烯基、 炔基、 环烷基、 杂环基、 芳基和杂芳基任选地且各自独立地被 1-3个各自独立地选自 下组的取代基取代： 素、 Ci.4焼基、 C2.4婦基、 C2.4块基、 C3.8环焼基、 3 -至 8 -兀杂环基、 芳基、杂芳基、 CN、 N02、 OR\ SR\ NRhR\ C(0)Re、 C(0)0Rh > C(0)NRhRh、 NRhC(0)Re、 S(0)2Re > 或 S(0)2NRhRh; 其中 R^PRh的定义如权利要求 1中所述。 在另一优选例中， 所述的 Rf选自下组： 氢！、 Cl.4焼基、 Cl.4 代焼基、 C2.4婦基、 C2.4 炔基、 C3.6环烷基、 3 -至 9 -元杂环基、 芳基、 杂芳基、 C(0)Re > 或 S(0)2Re ; 其中各个烷基、 烯基、 炔基、 环烷基、 杂环基、 芳基和杂芳基任选地且各自独立地被 1-3个各自独立地选自 下组的取代基取代： 素、 Ci.4焼基、 C2.4婦基、 C2.4块基、 C3.8环焼基、 3 -至 8 -兀杂环基、 芳基、杂芳基、 CN、 N02、 ORe、 SRe、 NReRe > C(0)Re、 C(0)0Re、 C(0)NReRe > NReC(0)Re > S(0)2Re、 或 S(0)2NRhRh; 其中 R^PRh的定义同上所述。 在另一优选例中， 式 (I)为:
Figure imgf000007_0001
Cw烷基、 NRhR\ 或 NRhC(0)Re;
Rf为氢、 CM烷基、 CM卤代烷基、 C3.6环烷基、 3 -至 9 -元杂环基、芳基、杂芳基、 C(0)Re > 或 S(0)2Re; 其中各个烷基、环烷基、 杂环基、 芳基和杂芳基任选地且各自独立地被 1-3个各 自独立地选自下组的取代基取代： 素、 Ci.4焼基、 C2.4婦基、 C2.4块基、 C3.8环焼基、 3- 至 8 -元杂环基、芳基、杂芳基、 CN、 N02、 OR\ SR\ NRhRh、 C(0)Re、 C(0)0Rh > C(0)NRhRh、 NRhC(0)Re > S(0)2Re > 或 S(0)2NRhRh ; 其中 R^PRh的定义如权利要求 1中所述。 在另一优选例中， 式 (I)为：
Figure imgf000007_0002
其中， R4为氢、 卤素、 Ci.2烷基、 NRhR\ 或 NRhC(0)Re Rf为氢、 CM烷基、 CM卤代烷基、 C3.6环烷基、 3 -至 9 -元杂环基、芳基、杂芳基、 C(0)Re > 或 S(0)2Re; 其中各个烷基、环烷基、 杂环基、 芳基和杂芳基任选地且各自独立地被 1-3个各 自独立地选自下组的取代基取代： 素、 Ci.4焼基、 C2.4婦基、 C2.4块基、 C3.8环焼基、 3- 至 8 -元杂环基、芳基、杂芳基、 CN、 N02、 OR\ SR\ NRhR\ C(0)Re、 C(0)0Rh > C(0)NRhR\ NRhC(0)Re > S(0)2Re > 或 S(0)2NRhRh; 其中 R^PRh的定义如本发明第一方面中所述。 在另一优选例中， 式 (I)为：
Figure imgf000008_0001
其中， R4为氢、 卤素、 Cu焼基；
s和 t各自独立为 1、 2、 或 3 ;
A为 NRk、 0、 或 CRgRg; 其中 Rk为氢、 CM烷基、 C14卤代烷基、 羟基取代的 CM烷基、 Cl.4焼氧基取代的 Cl.4焼基、 二 (Cl.4焼基)胺基取代的 Cl.4焼基、 C3.6环焼基、 3 -至 9 -兀杂环 基、 芳基、 杂芳基、 C(0)Re、 C(0)0R\ C(0)NRhR\ S(0)2Re、 或 S(0)2NRhRh; 其中各个
Re各自独立地选自下组： 氨、 Cl.4焼基、 Cl.4 代焼基、 C2.4婦基、 Cl.4焼氧基取代的 C2.4婦 基、 二 (Ci.4焼基) 胺基取代的 C2.4婦基、 C2.4块基、 C3.6环焼基、 3 -至 8 -兀杂环基、 芳基、 或杂芳基； R3PRh的定义如本发明第一方面中所述。
在另一优选例中， 所述的各个 Re各自独立地选自下组的基团： 氢、
Figure imgf000008_0002
烷基、
Figure imgf000008_0003
卤 代焼基、 Ci_4焼氧基取代的 Ci_4焼基、〔2-4婦基、 Ci_4焼氧基取代的〔2-4婦基、轻基取代的 婦基、 二 (Ci_4焼基) 胺基取代的 (^_4婦基、 3 -至 6 -兀杂环基取代的 (^_4婦基、 芳基取代的 环焼基、 3 -至 8 -兀杂环基、 芳基、 或杂芳
Figure imgf000008_0004
在另一优选例中， 各个 R4各自独立为氢、 氘、 卤素、 Cw烷基、 或 NHC(0)CH=CH2。 在另一优选例中， 所述化合物选自下组：
Figure imgf000009_0001
Figure imgf000010_0001
Figure imgf000011_0001
Figure imgf000012_0001
Figure imgf000013_0001
其中， “*”表示手性中心， 在没有标明是 R或 S的情况下， 带“ *”的化合物表示可以是消旋 体， 也可以是 R构型， 或者是 S构型。 在另一优选例中， 用于：
(a)制备治疗与蛋白激酶活性或表达量相关的疾病的药物；
(b)制备蛋白激酶革巴向抑制剂； 和 /或
(c)体外非治疗性地抑制蛋白激酶的活性；
其中， 所述的蛋白激酶选自下组： EGFR、 EGFR (C797S)、 ALK、 HPK1等， 或其组 合。 本发明的第二方面， 提供了一种药物组合物， 所述的药物组合物包括： (i) 有效量的 如本发明第一方面所述的式 I化合物， 或其光学异构体， 药学上可接受的盐， 前药， 氘代衍 生物， 水合物， 溶剂合物； 和 (ii)药学上可接受的载体。
本发明的第三方面， 提供了一种式 (I)化合物的制备方法， 其特征在于， 包括步骤：
Figure imgf000014_0001
用式 4-D1化合物与式 1-A2反应， 得到式 4-D2-1或 4-D2-2化合物； 在钯催化剂存在下， 用式 4-D2-1或式 4-D2-2化合物与 Me4Sn进行反应， 得到式 4-D3-1 或式 4-D3-2化合物；
用式 4-D3-1或式 4-D3-2化合物进行还原反应， 得到式 4-D4-1或式 4-D4-2化合物； 用式 lb化合物与式 4-D4-1化合物或式 4-D4-2化合物进行反应， 得到式 Illf化合物或 Illg 化合物。 化合物 III域化合物 Illg是式 ®化合物的一部分。
本发明的第四方面， 提供了一种式 0)化合物的制备方法， 其特征在于， 包括步骤
Figure imgf000015_0001
用式 5-E2化合物与式 lb化合物进行反应， 得到式 Illh化合物；
用式 Illh化合物与式 5-E3化合物进行还原胺化反应， 得到式 Illi化合物。 化合物 Illi是 式 (I)化合物的一部分。
本发明的第五方面， 提供了一种抑制 EGFR和 /或 EGFR (C797S)和 /或 ALK和 /或 HPK1 活性的方法， 其包括步骤： 对抑制对象施用抑制有效量的如本发明第一方面所述的式 (I)化 合物， 或其光学异构体， 药学上可接受的盐， 前药， 氘代衍生物， 水合物， 溶剂合物， 或 对抑制对象施用抑制有效量的如本发明第三方面所述的药物组合物。
应理解， 在本发明范围内中， 本发明的上述各技术特征和在下文 (如实施例)中具 体描述的各技术特征之间都可以互相组合， 从而构成新的或优选的技术方案。 限于篇 幅， 在此不再一一累述。
具体实施方式
本发明人经过长期而深入的研究， 意外地发现了一类结构新颖的含有三环芳基化合 物的蛋白激酶抑制剂， 以及它们的制备方法和应用。 所述的蛋白激酶抑制剂可以抑制 EGFR、 EGFR ( C797S )、 ALK、和 HPK1等蛋白激酶， 本发明化合物可以应用于与 EGFR (包括所产生的各种突变 ) 、 ALK、和 HPK1的活性相关的各种疾病的治疗。其中，抑制 EGFR ( C797S ) 其特点是能够克服第三代 EGFR抑制剂所产生的耐药性。 具体的， 本发明 所包含的是一类 EGFR (特别是 EGFR ( C797S ) ) 抑制剂， 可以对 L858R/T790M双突 变和 C797S突变的 EGFR产生有效的抑制作用。 另外， 本发明化合物可抑制免疫靶点 HPK1， 可通过单药或与其它药物联用治疗多种癌症和其他疾病。 基于上述发现， 发明 人完成了本发明。
术语 除特别说明之处， 本文中提到的“或”具有与“和 /或”相同的意义（指“或”以及“和”）。 除特别说明之处， 本发明的所有化合物之中， 各手性碳原子（手性中心）可以任选地为 R 构型或 S构型， 或 R构型和 S构型的混合物。 如本文所用，在单独或作为其他取代基一部分时，术语“烷基”指只含碳原子的直链（即， 无支链）或支链饱和烃基， 或直链和支链组合的基团。 当烷基前具有碳原子数限定（如 Q.nO 时， 指所述的烷基含有 1-10个碳原子。 例如， （^.8烷基指含有 1-8个碳原子的烷基， 包括甲 基、 乙基、 丙基、 异丙基、 丁基、 异丁基、 仲丁基、 叔丁基、 或类似基团。 如本文所用， 在单独或作为其他取代基一部分时， 术语“烯基”是指直链或支链， 具有 至少一个碳-碳双键的碳链基团。 烯基可以是取代的或未取代的。 当烯基前具有碳原子数 限定（如 C2.8）时， 指所述的烯基含有 2-8个碳原子。 例如， C2.8烯基指含有 2-8个碳原子烯基， 包括乙婦基、 丙婦基、 1,2 -丁婦基、 2, 3 -丁婦基、 丁二婦基、 或类似基团。 如本文所用， 在单独或作为其他取代基一部分时， 术语“炔基”是指具有至少一个碳-碳 三键的脂肪族碳氢基团。 所述的炔基可以是直链或支链的， 或其组合。 当炔基前具有碳原 子数限定（如 C2.8炔基）时， 指所述的炔基含有 2-8个碳原子。 例如， 术语“C2.8炔基”指具有 2-8 个碳原子的直链或支链炔基， 包括乙炔基、 丙炔基、 异丙炔基、 丁炔基、 异丁炔基、 仲丁 炔基、 叔丁炔基、 或类似基团。
如本文所用， 在单独或作为其他取代基一部分时， 术语“环烷基”指具有饱和的或部分 饱和的单元环， 二环或多环（稠环、 桥环或螺环）环系基团。 当某个环烷基前具有碳原子数 限定（如 C3. 时， 指所述的环烷基含有 3-10个碳原子。 在一些优选实施例中， 术语“C3.8环烷 基”指具有 3-8个碳原子的饱和或部分饱和的单环或二环烷基， 包括环丙基、 环丁基、 环戊 基、 环庚基、 或类似基团。 “螺环烷基”指单环之间共用一个碳原子（称螺原子）的二环或 多环基团， 这些可以含有一个或多个双键， 但没有一个环具有完全共轭的 71电子***。 “稠环烷基”指***中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对碳原子的全碳二环 或多环基团， 其中一个或多个环可以含有一个或多个双键， 但没有一个环具有完全共 轭的 71电子***。 “桥环烷基”指任意两个环共用两个不直接连接的碳原子的全碳多环 基团， 这些可以含有一个或多个双键， 但没有一个环具有完全共轭的 71电子***。 所 述环烷基所含原子全部为碳原子。 如下是环烷基的一些例子， 本发明并不仅局限下述 的环焼基。
Figure imgf000017_0001
除非有相反陈述， 否则下列用在说明书和权利要求书中的术语具有下述含义。
“芳基”指具有共轭的 71电子体系的全碳单环或稠合多环（也就是共享毗邻碳原子对的 环）基团， 例如苯基和萘基。 所述芳基环可以稠合于其它环状基团（包括饱和和不饱和 环）， 但不能含有杂原子如氮， 氧， 或硫， 同时连接母体的点必须在具有共轭的 71电子 体系的环上的碳原子上。 芳基可以是取代的或未取代的。 如下是芳基的一些例子， 本 发明并不仅局限下述的芳基。
Figure imgf000017_0002
“杂芳基”指包含一个到多个杂原子（任选自氮、 氧和硫）的具有芳香性的单环或 多环基团， 或者包含杂环基 （含一个到多个杂原子任选自氮、 氧和硫） 与芳基稠合形 成的多环基团， 且连接位点位于芳基上。 杂芳基可以是任选取代的或未取代的。 如下 是杂芳基的一些例子， 本发明并不仅局限下述的杂芳基。
Figure imgf000017_0003
杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其中一个或多个环原子 选自氮、 氧或硫， 其余环原子为碳。 单环杂环基的非限制性实施例包含吡咯烷基、 哌 啶基、 哌嗪基、 吗啉基、 硫代吗啉基、 高哌嗪基。 多环杂环基指包括螺环、 稠环和桥 环的杂环基。 “螺环杂环基”指***中的每个环与体系中的其他环之间共用一个原子 （称螺原子）的多环杂环基团， 其中一个或多个环原子选自氮、 氧或硫， 其余环原子为 碳。“稠环杂环基”指***中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的多环杂 环基团， 一个或多个环可以含有一个或多个双键， 但没有一个环具有完全共轭的 71电 子***， 而且其中一个或多个环原子选自氮、 氧或硫， 其余环原子为碳。 “桥环杂环 基”指任意两个环共用两个不直接连接的原子的多环杂环基团， 这些可以含有一个或 多个双键， 但没有一个环具有完全共轭的 71电子***， 而且其中一个或多个环原子选 自氮、 氧或硫， 其余环原子为碳。 如果杂环基里同时有饱和环和芳环存在（比如说饱 和环和芳环稠合在一起）， 连接到母体的点一定是在饱和的环上。 注： 当连接到母体 的点在芳环上时， 称为杂芳基， 不称为杂环基。 如下是杂环基的一些例子， 本发明并 不仅局限下述的杂环基。
Figure imgf000018_0001
如本文所用， 在单独或作为其他取代基一部分时， 术语“卤素”指 F、 Cl、 Br和 I。 如本文所用，术语“取代”（在有或无“任意地”修饰时）指特定的基团上的一个或多个氢 原子被特定的取代基所取代。 特定的取代基为在前文中相应描述的取代基， 或各实施例中 所出现的取代基。 除非特别说明， 某个任意取代的基团可以在该基团的任何可取代的位点 上具有一个选自特定组的取代基， 所述的取代基在各个位置上可以是相同或不同的。 环状 取代基， 例如杂环基， 可以与另一个环相连， 例如环烷基， 从而形成螺二环系， 即两个环 具有一个共用碳原子。 本领域技术人员应理解， 本发明所预期的取代基的组合是那些稳定 的或化学上可实现的组合。 所述取代基例如（但并不限于）： CM烷基、 C2.8烯基、 C2.8炔基、 C3.8环焼基、 3 -至 12 -兀杂环基， 芳基、 杂芳基、 素、轻基、 幾基（-COOH）、 Ci.8酸基、 C2-10 酰基、 C2.1Q酯基、 氨基。
为了方便以及符合常规理解， 术语“任意取代”或“任选取代”只适用于能够被取代基 所取代的位点， 而不包括那些化学上不能实现的取代。
如本文所用， 除非特别说明， 术语“药学上可接受的盐”指适合与对象（例如， 人）的组 织接触， 而不会产生不适度的副作用的盐。 在一些实施例中， 本发明的某一化合物的药学 上可接受的盐包括具有酸性基团的本发明的化合物的盐（例如， 钾盐， 钠盐， 镁盐， 钙盐） 或具有碱性基团的本发明的化合物的盐（例如，硫酸盐，盐酸盐，磷酸盐，硝酸盐，碳酸盐）。
用途：
本发明提供了一类式（I）化合物， 或它们的氘代衍生物、 它们的盐、 异构体（对映异 构体或非对映异构体， 如果存在的情况下）、 前药、 水合物、 溶剂合物、 可药用载体或 赋形剂用于抑制蛋白激酶的用途。 这里所指的蛋白激酶包括 EGFR、 EGFR （C797S） 、 ALK、 和 HPK1在内， 但并不仅限于以上几种激酶。 本发明化合物可用作一种或多种激酶抑制剂， 例如一些实施例中， 本发明中的 某类化合物可用作 EGFR和 /或 EGFR （C797S） ） 和 /或 ALK和 /或 HPK1激酶抑制剂。 在癌症病人体内， 上述所提到的各种蛋白激酶的表达或活性都明显增高。 这些 过度表达和 /或异常的蛋白激酶活性水平与肿瘤的发生发展直接关联。 本发明化合物 是这些蛋白激酶的单一和 /或双重抑制剂。 通过调节这些蛋白激酶活性得到预防、 缓 解或治愈疾病。 所指疾病包括肝癌、 直肠癌、 膀胱癌、 咽喉癌、 非小细胞肺癌、 小细 胞肺癌、 肺腺癌、 肺鳞癌、 乳腺癌、 ***癌、 神经胶质细胞瘤、 卵巢癌、 头颈部鳞 癌、 ***、 食管癌、 肾癌、 胰腺癌、 结肠癌、 皮肤癌、 淋巴瘤、 胃癌、 多发性骨髓 癌和实体瘤等等。
从某种角度上说， 双重蛋白激酶抑制剂同时干扰两种不同的激酶， 所产生的抗 肿瘤效果往往具有叠加性， 因此具有更有效治疗各种癌症的潜力。
本发明化合物可与生物制剂如 PD- 1抑制剂 Opdivo®和 Keytruda®作为组合药物治 疗各种癌症及相关疾病。
可将本发明化合物及其氘代衍生物， 以及药学上可接受的盐或其异构体（如果存 在的情况下）或其水合物和 /或组合物与药学上可接受的赋形剂或载体配制在一起， 得 到的组合物可在体内给予哺乳动物， 例如男人、 妇女和动物， 用于治疗病症、 症状和 疾病。 组合物可以是： 片剂、 丸剂、 混悬剂、 溶液剂、 乳剂、 胶囊、 气雾剂、 无菌注 射液。 无菌粉末等。 一些实施例中， 药学上可接受的赋形剂包括微晶纤维素、 乳糖、 狞檬酸钠、 碳酸钙、 磷酸氢钙、 甘露醇、 羟丙基 -P-环糊精、 P-环糊精（增加）、 甘氨酸、 崩解剂（如淀粉、 交联羧甲基纤维素钠、 复合硅酸盐和高分子聚乙二醇）， 造粒粘合剂 （如聚乙烯吡咯烷酮、 蔗糖、 明胶和***胶）和润滑剂（如硬脂酸镁、 甘油和滑石粉）。 在优选的实施方式中， 所述药物组合物是适于口服的剂型， 包括但不限于片剂、 溶液 剂、 混悬液、 胶囊剂、 颗粒剂、 粉剂。 向患者施用本发明化合物或药物组合物的量不 固定， 通常按药用有效量给药。 同时， 实际给予的化合物的量可由医师根据实际情况 决定， 包括治疗的病症、 选择的给药途径、 给予的实际化合物、 患者的个体情况等。 本发明化合物的剂量取决于治疗的具体用途、 给药方式、 患者状态、 医师判断。 本发 明化合物在药物组合物中的比例或浓度取决于多种因素， 包括剂量、 理化性质、 给药 途径等。 应理解， 在本发明范围内中， 本发明的上述各技术特征和在下文 (如实施例)中具 体描述的各技术特征之间都可以互相组合， 从而构成新的或优选的技术方案。
化合物的通用合成方法
本发明的式 I化合物可以通过以下方法制备得到
Figure imgf000020_0001
在惰性溶剂中， 用 (la)化合物与 (lb)反应， 得到 (I)化合物； 上述各式中， 各基团的定义如上文中所述。各步骤的试剂和条件可以选用本领域进行 该类制备方法常规的试剂或条件， 在本发明的化合物结构公开后， 上述选择可以由本领域 技术人员根据本领域知识进行。
更具体地， 本发明通式 I所示化合物可通过如下的方法制得， 然而该方法的条件， 例 如反应物、 溶剂、 碱、 所用化合物的量、 反应温度、 反应所需时间等不限于下面的解释。 本发明化合物还可以任选将在本说明书中描述的或本领域已知的各种合成方法组合起来而 方便的制得， 这样的组合可由本发明所属领域的技术人员容易地进行。
在本发明的制备方法中， 各反应通常在惰性溶剂中， 反应温度通常为 -20〜 150 °C (优 选 0〜 120 °C下进行。 各步反应时间通常为 0.5〜 48 h， 较佳地为 2〜 12 h。
反应式 1描述了中间体 1-A5-1和 1-A5-2的通用合成方法: 反应式 1:
Figure imgf000021_0001
反应式 2描述了中间体 2-B3-1和 2-B3-2的通用合成方法: 反应式 2:
Figure imgf000021_0002
反应式 3描述了中间体 3-C7的通用合成方法:
反应式 3:
Figure imgf000022_0001
化合物 Ilia是化合物 I的一部分。 反应式 4描述了化合物 Ilia的通用合成方法: 反应式 4:
Figure imgf000022_0002
化合物 Illb是化合物 I的一部分。 反应式 5描述了化合物 nib的通用合成方法: 反应式 5:
Figure imgf000022_0003
化合物 IIIc是化合物 I的一部分。 反应式 6描述了化合物 IIIc的通用合成方法: 反应式 6:
Figure imgf000023_0001
化合物 Illd是化合物 I的一部分。 反应式 7描述了化合物 nid的通用合成方法:
反应式 7:
Figure imgf000023_0002
化合物 Ille是化合物 I的一部分。 反应式 8描述了化合物 Ille的通用合成方法 反应式 8:
Figure imgf000023_0003
化合物 Illf和 Illg是化合物 I的一部分。 反应式 9描述了化合物 Illf和 Illg的通用合成方 法：
反应式 9:
Figure imgf000024_0001
化合物 Illh和 Illi是化合物 I的一部分。 反应式 10描述了化合物 Illh和 Illi的通用合成方 法
反应式 10:
Figure imgf000025_0001
上述反应式 1-10中 R、 R1、 R2、 R4、 Rf、 m、 p、 q、 s、 t、 A的定义与权力要求 1中表述 相同。
药物组合物和施用方法
由于本发明化合物具有优异的对一系列蛋白激酶的抑制活性， 因此本发明化合物及其 各种晶型， 药学上可接受的无机或有机盐， 水合物或溶剂合物， 以及含有本发明化合物为 主要活性成分的药物组合物可用于治疗、预防以及缓解与 EGFR、 EGFR ( C797S ) 、 ALK、 和 HPK 1等蛋白激酶活性或表达量相关的疾病。 本发明的药物组合物包含安全有效量范围内的本发明化合物或其药理上可接受的盐 及药理上可以接受的赋形剂或载体。 其中“安全有效量”指的是： 化合物的量足以明显改善 病情， 而不至于产生严重的副作用。 通常， 药物组合物含有 l-2000mg本发明化合物 /剂， 更 佳地， 含有 5-200mg本发明化合物 /剂。 较佳地， 所述的“一剂”为一个胶囊或药片。 “药学上可以接受的载体”指的是： 一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质， 它 们适合于人使用， 而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。 “相容性”在此指的是组合物中 各组份能和本发明的化合物以及它们之间相互掺和， 而不明显降低化合物的药效。 药学上 可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物（如羧甲基纤维素钠、 乙基纤维素钠、 纤维素 乙酸酯等）、 明胶、 滑石、 固体润滑剂（如硬脂酸、 硬脂酸镁）、 硫酸钙、 植物油（如豆油、 芝 麻油、 花生油、 橄榄油等）、 多元醇（如丙二醇、 甘油、 甘露醇、 山梨醇等）、 乳化剂（如吐温 ®）＞ 润湿剂（如十二焼基硫酸钠）、 着色剂、 调味剂、 稳定剂、 抗氧化剂、 防腐剂、 无热原 水等。
本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制， 代表性的施用方式包括（但并 不限于）： 口服、 瘤内、 直肠、 肠胃外（静脉内、 肌肉内或皮下）、 和局部给药。
用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、 片剂、 丸剂、 散剂和颗粒剂。 在这些固体剂型 中， 活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂（或载体）混合， 如柠檬酸钠或磷酸二钙， 或与下 述成分混合： （a）填料或增容剂， 例如， 淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸； （b）粘 合剂， 例如， 羟甲基纤维素、 藻酸盐、 明胶、 聚乙烯基吡咯烷酮、 蔗糖和***胶； （c）保 湿剂， 例如， 甘油； （d）崩解剂， 例如， 琼脂、 碳酸钙、 马铃薯淀粉或木薯淀粉、 藻酸、 某 些复合硅酸盐、 和碳酸钠； （e）缓溶剂， 例如石蜡； （f） 吸收加速剂， 例如， 季胺化合物； （g）润湿剂， 例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯； （h） 吸附剂， 例如， 高岭土； 和（i）润滑剂， 例如， 滑石、 硬脂酸钙、 硬脂酸镁、 固体聚乙二醇、 十二烷基硫酸钠， 或其混合物。 胶囊 剂、 片剂和丸剂中， 剂型也可包含缓冲剂。
固体剂型如片剂、 糖丸、 胶囊剂、 丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备， 如肠衣和其 它本领域公知的材料。 它们可包含不透明剂， 并且， 这种组合物中活性化合物或化合物的 释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。 可采用的包埋组分的实例是聚合物质 和蜡类物质。 必要时， 活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。
用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、 溶液、 悬浮液、 糖浆或酊剂。 除 了活性化合物外， 液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂， 如水或其它溶剂， 增 溶剂和乳化剂， 例知， 乙醇、 异丙醇、 碳酸乙酯、 乙酸乙酯、 丙二醇、 1,3 -丁二醇、 二甲基 甲酰胺以及油， 特别是棉籽油、 花生油、 玉米胚油、 橄榄油、 蓖麻油和芝麻油或这些物质 的混合物等。
除了这些惰性稀释剂外， 组合物也可包含助剂， 如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、 矫味剂和香料。
除了活性化合物外， 悬浮液可包含悬浮剂， 例如， 乙氧基化异十八烷醇、 聚氧乙烯山 梨醇和脱水山梨醇酯、 微晶纤维素、 甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。
用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮 液或乳液， 和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。 适宜的含水和非水 载体、 稀释剂、 溶剂或赋形剂包括水、 乙醇、 多元醇及其适宜的混合物。 用于局部给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、 散剂、 贴剂、 喷射剂和吸入剂。 活 性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、 缓冲剂， 或必要时可能需要的 推进剂一起混合。
本发明化合物可以单独给药， 或者与其他药学上可接受的化合物联合给药。
使用药物组合物时， 是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物 (如 人 )， 其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量， 对于 60kg体重的人而言， 日给药剂量 通常为 1〜 2000mg， 优选 5〜 500mg。 当然， 具体剂量还应考虑给药途径、 病人健康状况等 因素， 这些都是熟练医师技能范围之内的。
本发明的主要优点包括：
1. 提供了一种如式 (I)所示的化合物。
2. 提供了一种结构新颖的 EGFR、 EGFR ( C797S ) 、 ALK、 和 HPK1等蛋白激酶的 活性抑制剂，及其制备和应用， 所述的抑制剂在极低浓度下即可抑制上述蛋白激酶的活性。
3. 提供了一类治疗与 EGFR、 EGFR ( C797S ) 、 ALK、 和 HPK1等蛋白激酶活性相 关疾病的药物组合物。
下面结合具体实施例， 进一步阐述本发明。 应理解， 这些实施例仅用于说明本发 明而不用于限制本发明的范围。 下列实施例中未注明具体条件的实验方法， 通常按照 常规条件， 或按照制造厂商所建议的条件。 除非另外说明， 否则百分比和份数按重量 计算。 实施例 1: 化合物 1的制备
Figure imgf000027_0001
Figure imgf000028_0001
向 1,2 -二氟 -4 -硝基苯 (la, 1.11 g, 7.0 mmoL)和消旋体 3 -轻甲基哌嗪 -1-碳酸叔丁 酯 (lb, 1.30 g, 6.0 mmoL)的干燥 DMSO (15 mL)溶液中加入 KOH (1.01 g, 18.0 mmoL)。 混合物在室温下搅拌 3小时， 然后加热到 60 °C反应 8小时。 反应完成后， 将冰水加入 到反应液中。 所形成的固体经过滤收集， 水洗， 然后用快速柱色谱 (石油醚:乙酸乙酯 =6: 1)纯化得到黄色固体产物 lc (1.41 g, 收率 70.0%)。
Figure imgf000028_0002
7.79 (dd, 9.1 Hz, 2.6 Hz, 1H), 7.66
Figure imgf000028_0004
2.6 Hz, 1H), 6.76 (d,
Figure imgf000028_0003
9.2 Hz, 1H), 4.30 (dd, J = 1 1.0 Hz, 3.0 Hz, 1H), 4.18-4.09 (m, 2H), 3.99
Figure imgf000028_0005
11.1 Hz, 8.0 Hz, 1H), 3.79 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 3.35-3.31 (m, 1H), 3.04-2.93 (m, 2H), 2.67 (br, 1H), 1.49 (s, 9H); HRMS(+):m/z 358.1370 ([M+Na]+ , C16H21N305Na+ calcd: 358.1373。
将化合物 lc (2.0 克，6.0 毫摩尔) 溶于二氯甲烷 ( 20 mL) 中， 在室温搅拌下加入 三氟乙酸 (5 mL)。 室温搅拌 1小时后， TLC监测反应完成。 反应液减压浓缩除去三氟 乙酸， 再将残留物溶于二氯甲烷 ( 30 mL) 中， 用碳酸钠水溶液 (1 M)调 pH到 9〜 10， 将有机相和水相分开。水层用二氯甲烷萃取两次。合并的有机相用饱和食盐水 (30 mL) 洗一次， 用无水硫酸钠干燥。 过滤除去干燥剂， 滤液在减压条件下浓缩， 得到黄色固 体化合物 Id (1.2 克)。 MS w/z 236.1 [M+H]+。 将上述化合物 Id (1.2 克；)溶于甲醇 20 mL)中， 加入甲醛水溶液 (37%, 6 mL)， 再 加入 2滴醋酸， 室温下搅拌 30分钟后， 加入氰基硼氢化钠 (0.8 g, 12.7 mmol), 然后在室 温下继续搅拌 3小时。 TLC监测反应完成。 反应液减压浓缩得到粗产物。 粗品经硅胶 柱纯化 (DCM : MeOH = 60: 1)得黄色固体化合物 le (1.0 g)。 MS w/z 250.2 [M+H]+。
室温下向甲醇 ( 3 mL)中加入化合物 le (145 mg, 0.58 mmol)和钮碳催化剂 (10%, 15 mg), 该反应混合物在室温和 1大气压的氢气氛围下反应 1小时， TLC监测反应完成。 反应混合物经过硅藻土过滤， 滤液经减压浓缩得到棕色固体化合物 If (100 mg)。 粗品 直接用于下一步。 MS m/z 220.2 [M+H]+
将化合物 lg (3.0 g, 14 mmol)和化合物 lh (1.2 g, 15 mmol)溶解在 DMF (60 mL)中, 依次加入 Pd(OAc)2 (0.2 g,)、 X-Phos (0.3 g)、 K3P04 (5.9 g, 28 mmol)。 混合物用氮气 置换 3次， 然后在氮气氛围下加入至 120 °C， 直到反应完全为止。 混合物在减压条件 下浓缩， 残余物经硅胶柱层析 (DCM : MeOH = 1 : 40洗脱)分离得到白色固体化合物 li (0.75 g, 收率 33%)。 向化合物 li (750 mg, 4.4 mmol) 和化合物 lj (812 mg, 4.4 mmol) 的 IP A (20 mL) 溶液中加入 K2C03 (1.2 g, 8.8 mmol)。 所得的悬浮液在微波反应器加热至 105 °C， 反应 1 h。混合物在减压条件下浓缩，残余物经硅胶柱层析 (乙酸乙酯 ： 石油醚 = 1 : 1洗脱) 分离得乳白色的固体化合物 lk (450 mg, 收率 32%)。 液相色谱条件： 色谱柱 X Brdige C18: 4.6 mm*30 mm*3.5 um, 流动相 A: 水 (0.01 mol/L NH4HCO3)， 流动相 B: 乙腈， 流速 2.0 mL/min, 从 10%的 B到 95%的 B 0.5分钟梯度洗脱， 然后恒定 95%B 1.5分钟。 纯度 95%, 保留时间 0.95 min; MS m/z 316.0 [M+H]+。
将化合物 If (22 mg, 0.1 mmol) 和化合物 lk (31.5 mg, 0.1 mmol) 在盐酸的水溶液 (2 M in EtOH, 2 mL)里加热至 80 °C搅拌直到反应完全。 反应混合物在减压条件下浓 缩， 残留物用制备 HPLC分离得淡黄色的固体化合物 1 (5.6 mg, 收率 1 1%)。 液相色谱 条件： 色谱柱 X Brdige C18: 4.6 mm*30 mm*3.5 um , 流动相 A: 水 (0.01 mol/L NH4HCO3), 流动相 B: 乙腈， 流速 2.0 mL/min, 从 5%的 B到 100%的 B 1.6分钟梯度洗 脱，然后恒定 100%B 1.4分钟。纯度 90%。保留时间 1.56 min o ^ NMR (400 MHz, CD3OD) 5 8.48-8.52 (m， 1H), 8.03 (s, 1H), 7.53-7.61 (m, 2H), 7.24-7.26 (m, 1H), 7.03-7.04 (m, 1H), 6.89-6.91 (m, 1H), 6.75-6.77 (m, 1H), 4.21-4.24 (m, 1H), 3.94-3.99 (m, 1H), 3.72-3.75 (m, 1H), 3.08-3.09 (m, 1H), 2.97-3.00 (m, 1H), 2.87-2.90 (m, 1H), 2.72-2.73 (m,
1H), 2.38 (s, 3H), 2.29-2.36 (m, 1H), 1.87-1.92 (m, 1H), 1.86 (s, 3H), 1.84 (s, 3H) MS m/z 499.2 [M+H]+。
实施例 2: 化合物 1R的制备
Figure imgf000029_0001
Figure imgf000030_0001
室温下向甲醇 (15 mL) 中加入化合物 1R-Ia (650 mg, 2.60 mmol)和钮 -碳催化剂 (10%, 65 mg)。 反应体系用氢气置换三次。 该反应混合物在室温和氢气 (1大气压) 氛 围下搅拌过夜。 TLC监测反应完成。 反应混合物经硅藻土过滤， 滤液经减压浓缩得到 棕色粗品， 随后粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷 ： 甲醇 = 40:1至 20:1) 得到 黄色油状化合物 1R-Ib (180 mg, 收率 32%)。 4 NMR (500 MHz, CDC13) 56.62 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.24 (dd,J= 8.4, 2.6 Hz, 1H), 6.21 (d,J=2.5 Hz, 1H), 4.14 (dd,J= 10.5, 2.6 Hz, 1H), 4.03-3.95 (m, 1H), 3.56 (dt,J= 11.5, 2.7 Hz, 1H), 3.36 (s, br., 2H), 3.12-3.03 (m, 1H), 2.91 (dd, J = 11.3, 2.2 Hz, 1H), 2.81-2.75 (m, 1H), 2.72 (td, J = 11.7, 3.1 Hz, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.25 (td,J= 11.5, 3.2 Hz, 1H), 1.83 (t, J = 10.6 Hz, 1H)。
将化合物 lR-lb (70 mg, 0.32 mmol) 和化合物 lk (72 mg, 0.23 mmol)溶于 2 -甲氧基 乙醇 (2mL) 中， 然后再加入 HC1甲醇溶液 (2.5M, 0.24mL)。 将上述反应混合物置于 封管中， 加热至 120 °C， 搅拌过夜。 TLC监测反应原料消失， 停止反应， 待冷却后反 应液在减压条件下浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷 ： 甲醇 = 40:1 至 20:1) 得到米白色固体化合物 1R (79 mg, 收率 50%)。 4 NMR (500 MHz, CDC13) 5 10.88 (s, 1H), 8.65 (dd, J = 8.4, 4.3 Hz, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.48 (dd, J = 8.4, 7.4 Hz, 1H), 7.29-7.22 (m, 1H), 7.11-7.06 (m, 2H), 6.92 (dd, J = 8.6, 2.5 Hz, 1H), 6.74-6.70 (m, 2H), 4.20 (dd, J = 10.5, 2.7 Hz, 1H), 4.03 (dd, J = 10.4, 9.1 Hz, 1H), 3.67-3.61 (m, 1H), 3.22-3.15 (m, 1H), 2.94 (d,
Figure imgf000030_0002
10.9 Hz, 1H), 2.84-2.77 (m, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.26 (td, J = 11.6, 3.2 Hz, 1H), 1.87 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 1.84 (s, 3H), 1.81 (s, 3H) MS m/z 499.4
[M+H]+。
实施例 3: 化合物 IS的制备
Figure imgf000030_0003
b
Figure imgf000031_0001
室温下向甲醇 (10 mL) 中加入化合物 lS-la (800 mg, 3.20 mmol)和钮 -碳催化剂 (10%, 80 mg)。 反应体系用氢气置换三次。 该反应混合物在室温和氢气 (1大气压) 氛 围下搅拌过夜。 TLC监测反应完成。 反应混合物经过硅藻土过滤， 滤液经减压浓缩得 到棕色粗品。 粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷 ： 甲醇 = 40:1至 20:1) 得到黄 色油状化合物 lS-lb (400 mg, 收率 57%)。 4 NMR (500 MHz, DMSO- ) 56.54 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.06 (d,
Figure imgf000031_0002
8.5 Hz, 1H), 6.01 (s, 1H), 4.47 (s, br, 2H), 4.10 (d,
Figure imgf000031_0003
10.4 Hz,
1H), 3.80 (t,J= 9.8 Hz, 1H), 3.49 (d,J= 11.4 Hz, 1H), 2.82 (t,J= 9.5 Hz, 2H), 2.72 (d, J = 10.6 Hz, 1H), 2.48 - 2.40 (m, 1H), 2.19 (s, 3H), 2.07 (td,J= 11.0, 1.9 Hz, 1H), 1.66 (t, J = 10.5 Hz, 1H)
将化合物 lS-lb (70 mg, 0.32 mmol)和化合物 lk (72 mg, 0.23 mmol)溶于 2 -甲氧基 乙醇 (2mL) 中， 然后再加入 HC1甲醇溶液 (2.5M, 0.24mL)。 将反应混合物置于封管 中， 加热至 120 °C， 搅拌过夜。 TLC监测反应原料消失。 反应液冷却至室温， 在减压 条件下浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷 ： 甲醇 = 40:1至 20:1) 得 到米白色固体化合物 1S (44 mg, 收率 38%)。 ^NMRpOOMHz, CDC13) 510.88 (s, 1H), 8.65 (dd, J = 8.3, 4.4 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.48 (dd, J = 8.4, 7.4 Hz, 1H), 7.28-7.22 (m, 1H), 7.11-7.06 (m, 2H), 6.92 (dd, J = 8.7, 2.5 Hz, 1H), 6.79-6.72 (m, 2H), 4.20 (dd, J = 10.5, 2.6 Hz, 1H), 4.03 (dd, J = 10.4, 9.0 Hz, 1H), 3.67-3.61 (m, 1H), 3.22-3.15 (m, 1H), 2.95 10.9 Hz, 1H), 2.85-2.78 (m, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.27 (td, J = 11.5, 3.2 Hz, 1H), 1.87 (d, J= 10.7 Hz, 1H), 1.83 (s, 3H), 1.81 (s, 3H)。 MS m/z 499.4 [M+H]+。
实施例 4: 化合物 2R的制备
Figure imgf000031_0004
将化合物 2R-la (63 mg, 0.20 mmol) 和化合物 lk (46 mg, 0.14 mmol)溶于 2 -甲氧基 乙醇 ( 2 mL) 中， 然后再加入 HC1甲醇溶液 (2.5 M, 0.15 mL)。 将反应混合物置于封管 中， 加热至 120 °C， 搅拌过夜。 TLC监测反应原料消失。 反应混合物冷却至室温， 在 减压条件下浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷 ： 甲醇 = 40: 1至 20: 1 ) 得到米白色固体化合物 2R (21 mg, 收率 25%)。
Figure imgf000032_0001
10.91 (s, 1H), 8.64 (dd, J = 8.3, 4.4 Hz, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.48 (dd, 8.4, 7.4 Hz, 1H), 7.30-7.23
(m, 1H), 7.16 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.13-7.09 (m, 1H), 6.95 (dd, J = 8.7, 2.5 Hz, 1H), 6.80 (s, 1H), 6.75 (d, 8.8 Hz, 1H), 4.26 (dd, J= 10.7, 2.7 Hz, 1H), 4.04 (dd, J = 10.7, 8.2 Hz,
1H), 3.86-3.77 (m, 2H), 3.75-3.70 (m, 1H), 3.28-3.22 (m, 1H), 3.10 (td, J = 11.6, 2.8 Hz, 1H), 2.90 (td, J = 1 1.9, 3.1 Hz, 1H), 2.75 (t, J = 1 1.0 Hz, 1H), 2.30-2.23 (m, 1H), 1.84 (s, 3H), 1.82 (s, 3H), 1.23-1.68 (m, 2H), 1.05-1.00 (m, 2H)。 MS m/z 589.4 [M+H]+。
实施例 5: 化合物 3R的制备
Figure imgf000032_0002
将化合物 3R-la (86 mg, 0.30 mmol)和化合物 lk (67 mg, 0.20 mmol)溶于 2 -甲氧基 乙醇 ( 2 mL) 中， 然后再加入 HC1甲醇溶液 (2.5 M, 0.22 mL)。 将反应混合物置于封管 中， 加热至 120 °C， 搅拌过夜。 TLC监测反应原料消失。 反应混合物冷却至室温， 在 减压条件下浓缩。 所得粗品经制备型薄板层析分离 (二氯甲烷 ： 甲醇 = 20: 1 ) 得到 米白色固体化合物 3R (70 mg, 收率 62%)。 4 NMR (500 MHz, CDC13) 5 10.89 (s, 1H), 8.66 (dd, J = 8.2, 4.4 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.48 (dd, J = 8.4, 7.4 Hz, 1H), 7.28-7.22 (m, 1H), 7.11-7.06 (m, 2H), 6.92 (dd, J = 8.7, 2.5 Hz, 1H), 6.75-6.70 (m, 2H), 4.20 (dd, J =
10.4, 2.7 Hz, 1H), 4.09-3.98 (m, 3H), 3.67
Figure imgf000032_0003
11.5 Hz, 1H), 3.39 (t, J = 11.4 Hz, 2H),
3.17-3.10 (m, 1H), 3.06 (d, J = 11.0, 1H), 2.91 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 2.77
Figure imgf000032_0004
11.5, 2.9 Hz, 1H), 2.53-2.41 (m, 2H), 2.03 (t, J = 10.5 Hz, 1H), 1.84 (s, 3H), 1.81 (s, 3H), 1.80-1.76 (m, 4H) MS w/z 569.6 [M+H]+
实施例 6: 化合物 4R的制备
Figure imgf000033_0001
室温下向化合物 4R-la (3.0 g, 8.94 mmol)的甲醇 (35 mL) 溶液里加入钮 -碳催化 剂 (10%, 250 mg)。 反应体系用氢气置换三次。 反应混合物在室温和氢气 (1大气压) 氛围下搅拌过夜。 TLC监测反应完成。 反应混合物经过硅藻土过滤， 滤液经减压浓缩 得到棕色粗品。 粗品经硅胶柱层析分离纯化 (石油醚 ： 乙酸乙酯 = 4:1至 1:1) 得到 黑紫色固体化合物 4R-lb (2.48 g, 收率 91%)。 ^NMR (500 MHz, CDC13) 56.63 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.25 (dd,J= 8.5, 2.5 Hz, 1H), 6.21 (d,J=2.5 Hz, 1H), 4.17 (dd,J= 10.6, 2.6 Hz, 1H), 4.14-4.00 (m, 2H), 3.96 (dd, J= 10.5, 9.1 Hz, 1H), 3.56 (d, J= 11.0 Hz, 1H), 3.38 (s, 2H), 3.04 (s, 1H), 2.95 (ddd, J= 11.7, 5.5, 2.7 Hz, 1H), 2.59 (td, J= 11.8, 3.1 Hz, 2H), 1.47 (s, 9H)。
将化合物 4R-lb (100 mg, 0.33 mmol)和化合物 lk (74 mg, 0.24 mmol)溶于 2 -甲氧基 乙醇 (2mL) 中， 然后再加入 HC1甲醇溶液 (2.5 M, 0.25 mL)。 将反应混合物置于封管 中， 加热至 120 °C， 搅拌过夜。 TLC监测反应原料消失。 反应混合物冷却至室温， 减 压条件下浓缩。所得粗品经制备型薄板层析分离 (二氯甲烷 ：丙酮 =1:1,2% 三乙胺) 得到米白色固体化合物 4R (6 mg, 收率 5%)。
Figure imgf000033_0002
8.49 (dd, J
= 8.2, 4.6 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.63-7.52 (m, 2H), 7.26-7.22 (m, 1H), 7.08 (d, J=2.4 Hz, 1H), 6.93 (dd, J = 8.7, 2.5 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 4.26 (dd, J = 10.7, 2.5 Hz, 1H), 4.00 (dd,J= 10.8, 8.2 Hz, 1H), 3.90 (d, 12.7 Hz, 1H), 3.27-3.16 (m, 3H), 3.11 (td,
J = 12.5, 3.5 Hz, 1H), 2.81 (td, J = 12.6, 3.1 Hz, 1H), 2.75 (t, J = 11.4 Hz, 1H), 1.86 (s, 3H), 1.83 (s, 3H) MS m/z 485.4 [M+H]+。
实施例 7: 化合物 4S的制备
Figure imgf000034_0001
在冰水浴下， 向搅拌的化合物 4S-la (500 mg, 2.10 mmol)的 1,4 -二氧六环 (8mL) 溶液中， 加入 NaOH水溶液 (1 N, 2 mL) , 接着加入二碳酸二叔丁酯 (510 mg, 2.30 mmol) 。 反应混合物升至室温， 并搅拌约 30 min。 TLC监测反应原料消失。 将反应液 倒入冰水中， 用二氯甲烷 (20mLx3) 萃取。 合并的有机相用饱和食盐水 (30 mL) 洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 减压浓缩得到黄色固体粗品 4S-lb。 所得粗品直接用 于下一步反应。
室温下， 向粗品 4S-lb的甲醇 (20mL)溶液中加入钯-碳催化剂 (10%, 80 mg)。 反 应体系用氢气置换三次。 反应混合物在室温和 1大气压的氢气氛围下搅拌过夜。 TLC 监测反应完成。 反应混合物经过硅藻土过滤， 滤液经减压浓缩得到棕色粗品。 粗品经 硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷 ： 甲醇 =20:1) 得到白色固体化合物 4S-lc(432 mg, 两步总收率 67%)。 MS m/z 306.3 [M+H]+。 将化合物 4S-lc (48 mg, 0.16 mmol)和化合物 lk (50 mg, 0.16 mmol)溶于 2 -甲氧基乙醇 (2mL) 中， 然后再加入 HC1甲醇溶液 (2.5 M, 0.16 mL)。 反应混合物置于封管中， 加热至 120 °C， 搅拌过夜。 TLC监测反应原料消 失。 反应冷却至室温， 在减压条件下浓缩。 所得粗品经制备型薄板层析纯化 (二氯甲 烷 ： 甲醇 =20:1, 2% 三乙胺)得到米白色固体化合物 4S (45 mg, 收率 57%)^HNMR (400 MHz, CDC13) 510.86 (s, 1H), 8.65 (dd, 8.4, 4.5 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.48 (dd, J = 8.4, 7.4 Hz, 1H), 7.31-7.21 (m, 1H), 7.13-7.05 (m, 2H), 6.92 (dd, J = 8.7, 2.5 Hz, 1H), 6.84 (s, 1H), 6.72
Figure imgf000034_0002
8.8 Hz, 1H), 4.18 (dd, J = 10.5, 2.5 Hz, 1H), 4.01 (dd, J = 10.4, 9.1 Hz, 1H), 3.62 (d,
Figure imgf000034_0003
11.4 Hz, 1H), 3.17 (d,
Figure imgf000034_0004
12.3 Hz, 1H), 3.09-2.93 (m, 3H), 2.66
(td, J = 11.7, 3.3 Hz, 1H), 2.54 (t, J = 10.9 Hz, 1H), 1.84 (s, 3H), 1.81 (s, 3H)。 MS m/z 485.3 [M+H]+
实施例 8: 化合物 5R的制备
Figure imgf000035_0001
在 0 °(：下向化合物 4R (60 mg, 0.12 mmol)的 N,N-二甲基甲酰胺 (1.0 mL)溶液中加 ADIPEA (32 mg, 0.24 mmol), 接着缓慢滴加乙酰氯 ( 12 mg, 0.15 mmol ) 的二氯甲烷 (1.0 mL)溶液。 滴加完毕， 将反应液维持在 0 °C条件下搅拌 1 h。 TLC监测反应完毕。 反应液中加入水 (10 mL)， 再用二氯甲烷 (10 mL x 3)萃取。 合并的有机相用饱和食 盐水 ( 20 mL) 洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤后减压浓缩。 所得粗品经制备型薄板层 析分离纯化 (二氯甲烷 ： 丙酮 = 2: 1, 2% 三乙胺)得到米白色固体化合物 5R (29 mg, 收率 46%)。 4 NMR (500 MHz, CDC13) 5 10.90 (s, 1H), 8.65 (dd, J = 7.9, 4.5 Hz, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.48 (t, 8.0 Hz, 1H), 7.30-7.23 (m, 1H), 7.19-7.08 (m, 2H), 6.94 (ddd, J = 32.3, 8.7, 2.5 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.74 (dd, J = 14.9, 8.8 Hz, 1H),
4.75-4.57(m, 1H), 4.26 (dd, J = 10.7, 2.6 Hz, 1H), 4.04 (td, J = 10.7, 8.6 Hz, 1H), 3.90 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 3.76-3.67 (m, 1H), 3.1 1-2.96 (m, 2H), 2.75-2.64 (m, 1H), 2.51-2.42 (m, 1H), 2.16 (S, 3H), 1.84 (s, 3H), 1.81 (s, 3H)。 MS m/z 527.5 [M+H]+。
实施例 9: 化合物 6R的制备
Figure imgf000035_0002
0 °C条件下向化合物 4R (60 mg, 0.12 mmol)的 N,N-二甲基甲酰胺 (1.0 mL)溶液中 加入 DIPEA (32 mg, 0.24 mmol), 随后缓慢滴加丙烯酰氯 (14 mg, 0.15 mmol)的二氯甲 烷 (l .O mL)溶液。 滴加完毕后， 反应液在 0 °C下继续搅拌 1 h。 TLC监测反应完毕。 反 应液中加入水 (10 mL)， 再用二氯甲烷 (10 mL x 3)萃取。 合并的有机相用饱和食盐 水 ( 20 mL) 洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 滤液减压浓缩。 所得粗品经制备型薄板 层析分离纯化 (二氯甲烷 ： 丙酮 = 2: 1, 2% 三乙胺)得到米白色固体化合物 6R (21 mg, 收率 32%)。 4 NMR (500 MHz, CDC13) 5 10.94 (s, 1H), 8.64 (dd, J = 8.4, 4.4 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.48 (t, 8.1 Hz, 1H), 7.31-7.23 (m, 1H), 7.21-7.08 (m, 2H), 7.01-6.82 (m, 2H), 6.79-6.67 (m, 1H), 6.67-6.55 (m, 1H), 6.35 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 5.77 (dd, J = 10.6, 1.7 Hz, 1H), 4.72 (dd, 50.4, 1 1.5 Hz, 1H), 4.34-4.19 (m, 1H), 4.13-3.87 (m, 1H), 3.74 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.47-3.37 (m, 1H), 3.13-2.93 (m, 2H), 2.73 (m, 1H), 2.61-2.52 (m, 1H), 1.84 (s, 3H), 1.82 (s, 3H)。 MS m/z 539.5 [M+H]+。
实施例 10: 化合物 6S的制备
Figure imgf000036_0001
在 0 °C下， 向化合物 4S (60 mg, 0.12 mmol)的 N,N-二甲基甲酰胺 (0.5 mL)溶液中 加入 DIPEA (32 mg, 0.24 mmol), 接着缓慢滴加丙烯酰氯 (14 mg, 0.15 mmol)的二氯甲 烷 (2.0 mL)溶液。 滴加完毕， 将反应在 0 °C条件下继续搅拌 1 h。 TLC监测反应完毕。 反应液中加入水 (10 mL)， 再用二氯甲烷 (10 mL x 3)萃取。 合并的有机相用饱和食 盐水 ( 20 mL) 洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 滤液减压浓缩。 所得粗品经制备型薄 板层析分离纯化 (二氯甲烷 ： 甲醇 = 20: 1 ) 得到黄色固体化合物 6S (16 mg, 收率 24%) o lU NMR (400 MHz, CDC13) 5 10.89 (s, 1H), 8.64 (dd, 8.4, 4.4 Hz, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.48 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.31 - 7.22 (m, 1H), 7.20-7.07 (m, 2H), 7.00-6.80 (m, 2H),
6.79-6.69 (m, 1H), 6.68-6.54 (m, 1H), 6.34 (dd, J = 16.8, 1.4 Hz, 1H), 5.77 (dd, J = 10.5, 1.8 Hz, 1H), 4.71 (dd, J = 40.3, 12.5 Hz, 1H), 4.36-4.20 (m, 1H), 4.13-3.88 (m, lH), 3.73 (d, 12.1 Hz, 1H), 3.48-3.34 (m, 1H), 3.14-2.96 (m, 2H), 2.79-2.66 (m, 1H), 2.64-2.50
(m, 1H), 1.84 (s, 3H), 1.81 (s, 3H)。 MS m/z 539.6 [M+H]+。
实施例 11: 化合物 7R的制备
Figure imgf000036_0002
向化合物 4R (48.5 mg, 0.10 mmol)的 N,N-二甲基甲酰胺 (0.5 mL)溶液中， 加入 2- 溴乙醇 (7R-la, 6.3 mg, 0.05 mmol)的甲苯 (1.5 mL) 溶液。 随后将反应混合物置于封 管中， 加热至回流温度， 搅拌反应 lh。 TLC监测反应完毕。 反应混合物冷却至室温， 减压条件下浓缩。 所得粗品经制备型薄板层析分离纯化 (二氯甲烷 ： 甲醇 = 20:1) 得到黄色固体化合物 7R (13 mg, 收率 50%)。 ^NMR (500 MHz, CDC13) 510.89 (s, 1H), 8.66 (dd, J = 8.5, 4.4 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.48 (dd, J = 8.4, 7.6 Hz, 1H), 7.29-7.20 (m, 1H), 7.12-7.07 (m, 2H), 6.92 (dd, J = 8.7, 2.5 Hz, 1H), 6.81 (s, 1H), 6.72 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.20 (dd, J = 10.5, 2.6 Hz, 1H), 4.03 (dd, J = 10.4, 9.1 Hz, 1H), 3.70-3.63 (m, 3H), 3.19 - 3.11 (m, 1H), 3.02 (d, J = 10.9, 1H), 2.90-2.85 (m, 1H), 2.83-2.74 (m, 1H), 2.66-2.56 (m, 2H), 2.40 (td,J= 11.5, 3.1 Hz, 1H), 2.04-1.95 (m, 1H), 1.84 (s, 3H), 1.81 (s, 3H)。 MS m/z 529.5 [M+H]+。
实施例 12: 化合物 8R的制备
Figure imgf000037_0001
向化合物 4R (48.5 mg, 0.10 mmol)的 N,N-二甲基甲酰胺 (0.5 mL)中加入碳酸钾 (27.6 mg, 0.20 mmol),接着滴加溴乙焼 (8R-la , 10.9 mg, 0.10 mmol)的甲苯 ( 1.5 mL) 溶液。 随后将反应混合物置于封管中， 加热至回流温度， 搅拌反应 3 h。 TLC监测反应 完毕。 反应混合物冷却至室温， 加入水 (10 mL)， 再用二氯甲烷 (10 mLx 3)萃取。 合并的有机相用饱和食盐水 (20 mL)洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 滤液减压浓缩。 所得粗品经制备型薄板层析分离 (二氯甲烷 ： 丙酮 = 2:1, 2% 三乙胺) 得到白色固 体化合物 8R (18 mg,
Figure imgf000037_0002
10.88 (s, 1H), 8.65 (dd, J = 8.5, 4.5 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.48 (t,J= 7.9 Hz, 1H), 7.29-7.21 (m, 1H), 7.12-7.04 (m, 2H), 6.92 (dd,J= 8.7, 2.3 Hz, 1H), 6.78 (s, 1H), 6.72 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 4.21
Figure imgf000037_0003
10.4,
1H), 4.03 (t,J=9.7Hz, 1H), 3.65 (d,J= 11.8 Hz, 1H), 3.18 (t,J= 9.7 Hz, 1H), 3.05 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 2.94-2.87 (m, 1H), 2.85-2.75 (m, 1H), 2.53-2.45 (m, 2H), 2.24 (td, J = 11.4, 2.6 Hz, 1H), 1.85-1.82 (s, 3H), 1.81 (s, 3H), 1.14 (t, J= 7.2 Hz, 3H) MS m/z 513.3 [M+H]+。
实施例 13: 化合物 9R的制备
Figure imgf000038_0001
向化合物 4R (48.5 mg, 0.10 mmol)的 N,N-二甲基甲酰胺 (0.6 mL)溶液里加入碳酸 钾 ( 27.6 mg, 0.20 mmol )， 然后滴加溴乙腈 (9R-la, 13.2 mg, 0.11 mmol)的乙腈 ( 1.5 mL) 溶液。 反应混合物在室温下搅拌过夜。 TLC监测反应完毕。 反应混合物在减压 条件下浓缩。 所得粗品经制备型薄板层析分离纯化 (二氯甲烷 ： 甲醇 = 20: 1, 2% 三 乙胺) 得到米白色固体化合物 9R (26 mg, 收率 50%)。 4 NMR (500 MHz, CDC13) 5
10.89 (s, 1H), 8.65 (dd, J = 8.3, 4.4 Hz, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.51-7.46 (m, 1H), 7.29-7.23 (m, 1H), 7.16 - 7.08 (m, 2H), 6.94 (dd, J = 8.7, 2.5 Hz, 1H), 6.79 (s, 1H), 6.73 (d,
Figure imgf000038_0002
8.8 Hz,
1H), 4.21 (dd, J = 10.5, 2.7 Hz, 1H), 4.06 (dd, J = 10.5, 9.0 Hz, 1H), 3.74-3.69 (m, 1H), 3.60 (s, 2H), 3.23-3.17 (m, 1H), 2.90 (dd, J = 10.4, 2.0 Hz, 1H), 2.85-2.74 (m, 2H), 2.68 (td, J = 11.1, 3.2 Hz, 1H), 2.30-2.23 (m, 1H), 1.84 (s, 3H), 1.81 (s, 3H) MS m/z 524.4 [M+H]+。
实施例 14: 化合物 10R的制备
Figure imgf000038_0003
向化合物 4R (48.5 mg, 0.10 mmol)的 N,N-二甲基甲酉先胺 (0.6 mL)溶液里加入碳酸 钾 ( 27.6 mg, 0.20 mmol ) , 然后缓慢滴加 2 -氯乙基甲基醚 (10R-la, 9.5 mg, 0.10 mmol) 的甲苯 ( 1.5 mL) 溶液。 滴加完毕， 反应混合物置于封管中， 加热至 90 °C， 搅拌 2 h。 TLC监测反应仍有较多原料剩余， 再补加 DIPEA (25.9 mg, 0.20 mmol)后继续反应 2 h。 反应混合物冷却至室温， 减压浓缩。所得粗品经制备型薄板层析分离 (二氯甲烷 ： 丙 酮 = 2: 1, 2% 三乙胺)得到白色固体化合物 10R (12 mg, 收率 22%)。 NMR (500 MHz, CDCI3) 5 10.89 (s, 1H), 8.65 (dd, J = 8.3, 4.3 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.47 (dd, J = 8.3, 7.4 Hz, 1H), 7.29-7.22 (m, 1H), 7.12-7.07 (m, 2H), 6.91 (dd, 8.7, 2.5 Hz, 1H), 6.80 (s, 1H), 6.72 (d, 8.8 Hz, 1H), 4.20 (dd, J = 10.5, 2.6 Hz, 1H), 4.02 (dd, J = 10.5, 8.8 Hz, 1H), 3.64 (d, 11.7 Hz, 1H), 3.59 (t, 5.3 Hz, 2H), 3.38 (s, 3H), 3.28 (dd, J = 12.8, 7.3 Hz,
1H), 3.10 (d,
Figure imgf000039_0001
10.8 Hz, 1H), 2.98 10.7 Hz, 1H), 2.94-2.86 (m, 1H), 2.68 (d, J =
3.3 Hz, 2H), 2.42-2.31 (m, 1H), 2.04-1.92 (m, 1H), 1.84 (s, 3H), 1.81 (s, 3H) MS m/z 543.4 [M+H]+
实施例 15: 化合物 11R的制备
Figure imgf000039_0002
向化合物 4R (60 mg, 0.12 mmol)的二氯甲烷 (1.5 mL)溶液中， 依次加入 N-甲基 -4- 哌啶酮 (11R-Ia, 42 mg, 0.37 mmol)和 2滴醋酸。 反应混合物在室温下搅拌 1 h。 随后冷 却至 0 °C, 分批次向混合物中加入三乙酰氧基硼氢化钠 ( 80 mg, 0.37 mmol ) 。 反应 升至室温下搅拌过夜。 TLC监测反应完毕。 反应液中加入水淬灭反应， 然后再加入饱 和碳酸氢钠溶液， 再用乙酸乙酯 (10 mL x 3)萃取。 合并的有机相用饱和食盐水 ( 20 mL) 洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 滤液减压浓缩。 所得粗品经制备型薄板层析分 离纯化 (二氯甲烷 ： 甲醇 = 20: 1, 2% 三乙胺)得到白色固体化合物 llR (9 mg, 收率 13%) lU NMR (500 MHz, CDC13) 5 10.86 (s, 1H), 8.65 (dd, 8.5, 4.4 Hz, 1H), 8.04 (s,
1H), 7.47 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.28-7.21 (m, 1H), 7.11-7.05 (m, 2H), 6.91 (dd, J = 8.6, 1.9 Hz, 1H), 6.81 (s, 1H), 6.71 (d, 8.7 Hz, 1H), 4.18 (dd, 10.5, 2.0 Hz, 1H), 4.01 (t, J =
9.7 Hz, 1H), 3.65 (d, 1 1.2 Hz, 1H), 3.12 (t, J = 9.5 Hz, 1H), 3.01 (d, J = 10.8 Hz, 1H),
2.95 (d, J = 11.3 Hz, 2H), 2.86
Figure imgf000039_0003
10.9 Hz, 1H), 2.79-2.66 (m, 1H), 2.35-2.30 (m, 3H), 2.06-1.95 (m, 2H), 1.83 (s, 3H), 1.81 (s, 3H), 1.69-1.50 (m, 2H)。 MS m/z 582.5 [M+H]+。
实施例 16: 化合物 12R的制备
Figure imgf000040_0001
向 1,2 -二氟 -4 -硝基苯 (la, 326 mg, 2.05 mmol)和 (S)-3 -轻甲基吗啉 (12R-la, 200 mg, 1.70 mmol)的干燥 DMSO (6 mL)溶液中加入 KOH (286 mg, 5.10 mmol)。 混合物在 室温下搅拌 3小时， 然后加热到 60 °C反应 5小时。 TLC监测反应原料几乎消耗完。 反 应混合物冷却至室温， 加入冰水， 并用二氯甲烷 (20mLx3)萃取。 合并的有机相用 饱和食盐水 (30 mL) 洗涤， 经无水硫酸钠干燥， 过滤， 滤液减压条件下浓缩。 所得 粗品经硅胶柱层析分离纯化 (石油醚 ： 乙酸乙酯 =6:1)得到黄色固体化合物12R-lb
(187 mg, 收率 46%)。
室温下向化合物12R-lb的甲醇 (10mL) 溶液里加入钯-碳催化剂 (10%, 50 mg)。 反应体系用氢气置换三次。 反应混合物在室温和氢气 (1大气压) 氛围下搅拌过夜。 TLC监测反应完成。 反应混合物经过硅藻土过滤， 滤液经减压浓缩得到棕色粗品。 粗 品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷 ： 甲醇 =50:1)得到无色油状化合物12R-lc(38 mg, 收率 24%)。 MS w/z 207.8 [M+H]+。
向化合物12R-lc (38 mg, 0.18 mmol)和化合物lk (58 mg, 0.18 mmol)的 2 -甲氧基乙 醇 (1.5 mL) 溶液中加入 HC1甲醇溶液 C2.5 M, 0.22 mL)。 反应混合物置于封管中， 加 热至 120°C， 搅拌过夜。 TLC监测反应完毕。 反应混合物冷却至室温， 减压条件下浓 缩。 所得粗品经制备型薄板层析分离纯化 (二氯甲烷 ： 甲醇 =20:1,2% 三乙胺) 得 到黄色固体化合物12R (30 mg, 收率 34%)。 ^NMR (500 MHz, CDC13) 510.87 (s, 1H), 8.65 (dd, J = 8.5, 4.4 Hz, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.48 (t, J= 8.6, 1H), 7.33-7.20 (m, 3H), 7.13- 7.06 (m, 2H), 6.93 (dd, J = 8.6, 2.5 Hz, 1H), 6.77 (s, 1H), 6.69 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 4.16 (dd, 10.5, 2.7 Hz, 1H), 4.05 (dd,
Figure imgf000040_0002
11.5, 3.5 Hz, 1H), 3.98 (dd,J= 10.5, 9.1 Hz, 1H), 3.88 (dd, 10.9, 3.1 Hz, 1H), 3.76 (td, J = 11.6, 2.8 Hz, 1H), 3.51-3.45 (m, 1H), 3.30 (t, J= 10.7 Hz, 1H), 3.24-3.18 (m, 1H), 2.84 (td, J = 11.8, 3.6 Hz, 1H), 1.84 (s, 3H), 1.81 (s, 3H)。 MS m/z 486.9 [M+H]+。
实施例17: 化合物12S的制备
Figure imgf000041_0001
向 1,2 -二氟 -4 -硝基苯 (la, 317 mg, 2.05 mmol)和 (R)-3 -轻甲基吗啉 (12S-la, 200 mg, 1.70 mmol)的干燥 DMSO (6 mL)溶液中加入 KOH (286 mg, 5.10 mmol)。 混合物在 室温下搅拌 3小时， 然后加热到 60 °C反应 5小时。 TLC监测反应原料几乎消耗完。 反 应混合物冷却至室温， 加入冰水， 并用二氯甲烷 (25mLx3)萃取。 合并的有机相用 饱和食盐水 (40 mL) 洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 滤液减压浓缩。 所得粗品经硅 胶柱层析分离纯化 (石油醚 ： 乙酸乙酯 =6:1)得到黄色固体化合物 12S-lb。 该化合 物直接用于下一步反应。
室温下向化合物 12S-lb的甲醇 (15mL) 溶液中加入钯-碳催化剂 (10%, 100 mg)。 反应体系用氢气置换三次。 反应混合物在室温和氢气 (1大气压) 氛围下搅拌过夜。
TLC监测反应完成。 反应混合物经过硅藻土过滤， 滤液经减压浓缩得到棕色粗品。 粗 品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷 ： 甲醇 =50:1)得到无色油状化合物 12S-lc(44 mg, 两步总收率： 13%)。 MS m/z 207.4 [M+H]+
向化合物 12S-lc (44 mg, 0.21 mmol)和化合物 lk (68 mg, 0.21 mmol)的 2 -甲氧基乙 醇 (2mL) 溶液里加入 HC1甲醇溶液 C2.5 M, 0.22mL)。 反应混合物置于封管中， 加热 至 120°C， 搅拌过夜。 TLC监测反应完毕。 反应混合物冷却至室温， 减压条件下浓缩。 所得粗品经制备型薄板层析分离纯化 (二氯甲烷 ： 甲醇 =20:1,2% 三乙胺) 得到黄 色固体化合物 12S (11 mg, 收率 11%)。 lU NMR (400 MHz, CDC13) 510.87 (s, 1H), 8.65 (dd, J = 8.4, 4.4 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.48 (t, J= 7.9 Hz, 1H), 7.30-7.21 (m, 1H), 7.14- 7.06 (m, 2H), 6.93 (dd, J = 8.7, 2.5 Hz, 1H), 6.83 (s, 1H), 6.69 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 4.16 (dd, 10.5, 2.6 Hz, 1H), 4.05 (dd,
Figure imgf000041_0002
11.5, 3.2 Hz, 1H), 3.98 (dd,J= 10.3, 9.2 Hz, 1H), 3.88 (dd, 10.8, 2.8 Hz, 1H), 3.76 (td, J = 11.6, 2.8 Hz, 1H), 3.53-3.44 (m, 1H), 3.30 (t, J= 10.6 Hz, 1H), 3.25-3.15 (m, 1H), 2.89-2.77 (m, 1H), 1.84 (s, 3H), 1.81 (s, 3H)oMS m/z 486.5 [M+H]+。
实施例 18: 化合物 13R的制备
Figure imgf000042_0001
在 0 °C下， 向化合物 4R-la（1.5 g, 4.5 mmol）的二氯甲烷 （ 10 mL） 溶液中缓慢加 入三氟乙酸 （4.5 mL） 反应在室温下搅拌 l h。 TLC监测反应完毕。 反应混合物在减 压条件下浓缩， 再加入饱和碳酸氢钠溶液中和。混合物用二氯甲烷（20 mL x 3）萃取。 合并的有机相用饱和食盐水 （40 mL） 洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 滤液减压浓缩 得到粗品 13R-la（3.06 g）。 该粗品直接用于下一步反应。
在 0 °（：和搅拌下向粗品 13R-la（3.06 g）的二氯甲烷 （20 mL） 溶液中加入 DIPEA （3.36 g, 26.0 mmol）。 然后向其中缓慢滴加三氟乙酸酐 （3.0 g, 14.3 mmol） 。 随后将反 应移至室温下搅拌过夜。 TLC监测反应完毕。 反应混合物减压浓缩， 然后加入饱和碳 酸氢钠溶液调节 pH至 8左右， 再用二氯甲烷 （30 mL x 3）萃取。 合并的有机相用饱和 食盐水 （40 mL） 洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 减压浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析 分离纯化 （石油醚 ： 乙酸乙酯 = 2: 1） 得到黄色固体化合物 13R-lb（1.2 g, 两步总收 率 63%）。 MS m/z 332.5 [M+H]+。
向化合物 13R-lb（950 mg, 2.87 mmol）的 THF（10 mL）溶液中加入 BH3-THF（1.0 M, 7.17 mL）。 反应混合物在回流状态下搅拌 2 h。 TLC监测反应完毕。 反应混合物冷却至 室温， 并减压浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 （石油醚 ： 乙酸乙酯 = 8 : 1） 得 到黄色固体化合物 13R-1C。 该粗产物直接用于下一步反应。
室温下向化合物 13R-lc的甲醇 （20 mL） 溶液中加入钯-碳催化剂（10%, 200 mg）。 反应体系用氢气置换三次。 该反应混合物在室温和氢气 （1大气压）氛围下搅拌过夜。 TLC监测反应完成。 反应混合物经过硅藻土过滤， 滤液经减压浓缩得到棕色粗品。 粗 品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷 ： 甲醇 = 50:1至 20:1) 得到黄色固体化合物 13R-ld (520 mg, 两步总收率 63%)。 MS m/z 288.4 [M+H]+。 向化合物 13R-ld (91 mg, 0.32 mmol)和化合物 lk (100 mg, 0.32 mmol)的 2 -甲氧基 乙醇 (2mL) 溶液中加入 HC1甲醇溶液 (2.5 M, 0.33 mL)。 反应混合物置于封管中， 加 热至 120°C， 搅拌过夜。 TLC监测反应完毕。 反应混合物冷却至室温， 减压条件下浓 缩。 所得粗品经制备型薄板层析分离纯化 (二氯甲烷 ： 甲醇 =20:1,2% 三乙胺) 得 到黄色固体化合物 13R (71 mg, 收率 40%)。 ^NMR (500 MHz, CDC13) 510.80 (s, 1H), 8.58 (dd, J = 8.3, 4.4 Hz, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.41 (dd, J = 8.4, 7.4 Hz, 1H), 7.22-7.15 (m, 1H), 7.05-7.00 (m, 2H), 6.85 (dd, J = 8.7, 2.5 Hz, 1H), 6.69 (s, 1H), 6.65 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.11 (dd,J= 10.5, 2.7 Hz, 1H), 3.94 (dd,J= 10.5, 8.9 Hz, 1H), 3.56 (dt,
Figure imgf000043_0001
11.4, 2.4 Hz, 1H), 3.16-3.08 (m, 1H), 3.02-2.93 (m, 3H), 2.88-2.82 (m, 1H), 2.77 (td, J = 11.6, 3.1 Hz, 1H), 2.62 (td, J = 11.3, 2.9 Hz, 1H), 2.21 (t, J = 10.6 Hz, 1H), 1.77 (s, 3H), 1.74 (s, 3H)。 MS m/z 567.6 [M+H]+。
实施例 19: 化合物 14R的制备
Figure imgf000043_0002
向封管中依次加入化合物 4R (50 mg, 0.10 mmol)， 二甲氨基氯乙烷盐酸 (14R-la, 16mg, 0.10 mmol), 碘化钠 ( 16 mg, 0.10 mmol) 和碳酸钾 (42 mg, 0.30 mmol) ， 最 后加入 N,N-二甲基甲酰胺 (2 mL)将其溶解。 反应混合物在封管中加热至 80 °C， 搅拌 过夜。 TLC监测反应仍有原料剩余。 反应混合物冷却至室温， 加入水 (10 mL) ， 用 二氯甲烷 (15 mL x 3)萃取。 合并的有机相用饱和食盐水 (25 mL) 洗涤， 无水硫酸钠 干燥， 过滤， 滤液减压浓缩。 所得粗品经制备型薄板层析分离纯化 (二氯甲烷 ： 甲 醇 =3:1) 得到米白色固体化合物 14R (2 mg,
Figure imgf000043_0003
10.89 (s, 1H), 8.65 (dd,J= 8.3, 4.5 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.48 (t, 7.5 Hz, 1H), 7.26 (d,
J=20A Hz, 1H), 7.15-7.07 (m, 2H), 6.92 (dd,J= 8.6, 2.0 Hz, 1H), 6.79 (s, 1H), 6.71 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.20 (dd, J = 10.4, 2.2 Hz, 1H), 4.05-3.97 (m, 1H), 3.63 (d, J = 11.6 Hz, 2H), 3.19 (dd,
Figure imgf000043_0004
10.3, 9.0 Hz, 1H), 3.04 (d, 10.3 Hz, 1H), 2.91 (d, 10.1 Hz, 1H),
2.82 (td, J = 11.5, 2.5 Hz, 1H), 2.73-2.63 (m, 2H), 2.56-2.39 (s, 6H), 2.37-2.29 (m, 2H), 2.24-2.18 (m, 1H), 1.84 (s, 3H), 1.81 (s, 3H)。 MS m/z 556.5 [M+H]+。 实施例 20: 化合物 15R的制备
Figure imgf000044_0001
向封管中依次加入化合物 4R-2 (48 mg, 0.10 mmol),醋酸钮 (0.2 mg, 0.001 mmol) , RuPhos (0.9 mg, 0.002 mmol), 叔丁醇钠 ( 11.5 mg, 0.12 mmol) 和 3 -溴批陡 (15R-la, 17.4 mg, 0.11 mmol), 最后加入 N,N-二甲基甲酰胺 (0.5 mL)。 反应混合物在封管中加 热至 110°C， 搅拌过夜。 TLC监测反应仍有原料剩余。 反应混合物冷却至室温， 加入 水 (10 mL)， 用二氯甲烷 (10mLx3)萃取。 合并的有机相用饱和食盐水 (25mL) 洗 涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。所得粗品经制备型薄板层析分离纯化 (二 氯甲烷 ： 甲醇 = 20:1, 2% 三乙胺) 得到黄色固体化合物 15R (6 mg, 收率 11%)。 MS m/z 562.5 [M+H]+。
实施例 21: 化合物 16R的制备
Figure imgf000044_0002
向封管里依次加入化合物 4R-2 (48 mg, 0.10 mmol),醋酸钮 (0.2 mg, 0.001 mmol) ,
RuPhos (0.9 mg, 0.002 mmol),叔丁醇钠 (11.5 mg, 0.12 mmol)和溴苯 (16R-la, 17.3mg, 0.11 mmol), 最后加入 N,N-二甲基甲酰胺 (0.5 mL)。 反应混合物在封管里， 加热至 110°C,搅拌过夜。 TLC监测反应仍有原料剩余。反应混合物冷却至室温后，加入水 (10 mL), 用二氯甲烷 (；10mLx3；)萃取。 合并的有机相饱和食盐水 (25 mL) 洗涤， 无水 硫酸钠干燥， 过滤， 减压浓缩。所得粗品经制备型薄板层析分离纯化 (二氯甲烷 ： 甲 醇 =20:1, 2% 三乙胺)得到黄色固体化合物 16R (4 mg,
Figure imgf000044_0003
CDC13) 510.82 (s, 1H), 8.59 (dd, J 8.5, 4.4 Hz, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.43 (dd, J 8.7, 7.7 Hz, 1H), 7.27-7.16 (m, 3H), 7.07 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.03 (td, J = 7.4, 1.4 Hz, 1H), 6.95-6.82 (m, 4H), 6.15 - 6.69 (m, 2H), 4.24 (dd, J = 10.5, 2.6 Hz, 1H), 4.05 (dd, 10.5, 9.0 Hz, 1H), 3.75-3.62 (m, 2H), 3.55-3.48 (m, 1H), 3.28-3.20 (m, 1H), 2.97-2.82 (m, 2H), 2.53 (t, J = 11.1 Hz, 1H), 1.78 (s, 3H), 1.75 (s, 3H)。 MS m/z 561.6 [M+H]+。
实施例 22: 化合物 17R的制备
Figure imgf000045_0001
室温下， 将化合物 4R (48.5 mg, 0.1 mmol), 17R-la (10.5 mg, 0.15 mmol), 2-(7 - 偶氮苯并三氮唑) -N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯 (57 mg, 0.15 mmol) 和 N,N-二异丙 基乙胺 (20 mg, 0.15 mmol) 溶于 DMF (1.5 mL) 中， 反应混合物搅拌 0.5 h。 TLC监测 反应完毕。 反应混合物中加入水 (10 mL)， 用二氯甲烷 (15 mL x 3) 萃取。 合并的有 机相用饱和食盐水 (20 mL) 洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 滤液减压浓缩。 所得粗 品经制备型薄板层析分离纯化 (二氯甲烷 ： 甲醇 = 10: 1) 得到黄色固体化合物 17R。
MS m/z 537.6 [M+H]+。
实施例 23: 化合物 18R的制备
Figure imgf000045_0002
将化合物 13R-la (400 mg, 1.70 mmol)， 18R-la (422 mg, 2.55 mmol), 0-(7 -氮杂苯 并*** -1-基) -N,N,N、N 四甲基脲 (970 mg, 2.55 mmol)和二异丙基乙基胺 (330 mg, 2.55 mmol) 溶于乙腈 (20mL) 中， 反应混合物在室温下搅拌 30分钟。 TLC监测反应 完毕。反应混合物减压浓缩，所得粗品再经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷 ： 甲醇 = 20:1, 2%三乙胺) 得到黄色固体化合物 18R-lb (417 mg, 收率 71%)。 MS m/z 347.5 [M+H]+。 将化合物 18R-lb (326 mg, 0.94 mmol)和二水合二氯化锡 (977 mg, 4.71 mmol) 溶 于乙醇 (8mL) 中， 再加入 HC1水溶液 (2.0 M, 2.35 mL) ， 反应混合物在 90 °C下搅 拌过夜。 TLC监测反应完毕。 反应混合物减压浓缩， 再溶于少量二氯甲烷中， 加入饱 和碳酸氢钠溶液调节 pH至 7-8， 二氯甲烷 (20x3mL) 萃取。 合并的有机相用饱和食 盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 减压浓缩后得到黄色固体化合物 18R-1C (203 mg, 收率 68%)。 MS w/z 317.4 [M+H]+。
将化合物 18R-lc (80 mg, 0.25 mmol) 和化合物 lk (80 mg, 0.25 mmol)溶于 2 -甲氧 基乙醇 (2 mL) 中， 再加入 HC1甲醇溶液 (2.5 M, 0.26 mL)。 将反应混合物置于封管 中， 加热至 120 °C搅拌过夜。 TLC监测反应完毕。 反应混合物冷却至室温后减压浓缩。 所得粗品经制备型薄板层析分离纯化 (二氯甲烷 ： 甲醇 =9:1)得到淡黄色固体化合 物 18R(14mg, 收率 9%)。 4X1^11(5001^1^,00(:13)510.90(3, 1H), 8.66-8.62 (m, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.49 (t, J 7.9 Hz, 1H), 7.30-7.24 (m, 1H), 7.15 (d, J 2.4 Hz, 1H), 7.14-7.10 (m, 1H), 6.96-6.92 (m, 1H), 6.91-6.81 (m, 2H), 6.80 (s, 1H), 6.76-6.70 (m, 1H), 4.79-4.60 (m, 1H), 4.39-4.13 (m, 2H), 4.08-4.02 (m, 1H), 3.76 (d, J 11.6 Hz, 1H), 3.51-3.34 (m, 3H), 3.15-2.91 (m, 2H), 2.77-2.70 (m, 1H), 2.56 (s, 6H), 1.84 (s, 3H), 1.82 (s, 3H)。 MS m/z 596.5 [M+H]+。
实施例 24: 化合物 19R的制备
Figure imgf000046_0001
0 °C下将化合物 13R-la (500 mg, 2.13 mmol)和三乙胺 ( 258 mg, 2.55 mmol ) 溶于 二氯甲烷 ( 15 mL) 中， 再缓慢加入化合物 19R-la (416 mg, 2.55 mmol)的二氯甲烷稀 释液 ( 5 mL) ， 该反应混合物在室温下搅拌 1小时。 TLC监测反应完毕。 反应混合物 减压浓缩， 所得粗品再经硅胶柱层析分离纯化 (石油醚： 乙酸乙酯 = 2: 1至 1 :2 ) 得到 黄色固体化合物 19R-lb (153 mg, 收率 22%)。 MS m/z 326.3 [M+H]+
将化合物 19R-lb (150 mg, 0.46 mmol)和二水合二氯化锡 ( 479 mg, 2.31 mmol ) 溶 于乙醇 ( 8 mL) 中， 再加入 HC1水溶液 ( 2.0 M, 1.15 mL) ， 反应混合物在 90 °C下搅 拌过夜。 TLC监测反应完毕。 反应混合物减压浓缩， 再溶于少量二氯甲烷中， 饱和碳 酸氢钠溶液调节 pH至 7-8， 二氯甲烷 ( 20 x 3 mL) 萃取。 合并的有机相用饱和食盐水 洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 减压浓缩。 所得粗品再经硅胶柱层析分离纯化 (二氯 甲烷： 甲醇 = 20: 1 ) 得到黄色固体化合物 19R-lc (107 mg, 收率 78%)。 lU NMR (500 MHz, DMSO- ) 5 6.84 (dd, J = 16.5, 10.0 Hz, 1H), 6.60
Figure imgf000047_0001
8.6 Hz, 1H), 6.21 (d, J =
10.0 Hz, 1H), 6.15 (d, 16.5 Hz, 1H), 6.09 (dd, 8.5, 2.4 Hz, 1H), 6.03 (d,
Figure imgf000047_0002
2.4 Hz,
1H), 4.59 (bs, 2H), 4.22
Figure imgf000047_0003
10.6, 2.5 Hz, 1H), 3.82
Figure imgf000047_0004
10.5, 8.7 Hz, 1H), 3.72 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 3.51 (t, J = 10.2 Hz, 2H), 2.96-2.90 (m, 1H), 2.81-2.74 (m, 1H), 2.57-2.51 (m, 1H), 2.42 (t, J = 1 1.1 Hz, 1H)。
将化合物 19R-lc (50 mg, 0.17 mmol)和化合物 lk (54 mg, 0.17 mmol)溶于 2 -甲氧基 乙醇 ( 2 mL) 中， 再加入 HC1甲醇溶液 ( 2.5 M, 0.18 mL) 将反应混合物置于封管中， 加热至 120 °C搅拌过夜。 TLC监测反应完毕。 反应混合物冷却至室温后减压浓缩。 所 得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 50: 1, 2%三乙胺)得到淡黄色固体 化合物 19R (32 mg, 收率 32%)。 NMR (500 MHz, CDC13) 5 10.93 (s, 1H), 8.65-8.61 (m, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.50-7.45 (m, 1H), 7.30-7.24 (m, 1H), 7.16 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.14-7.09 (m, 1H), 7.03 (s, 1H), 6.96-6.92 (m, 1H), 6.73
Figure imgf000047_0005
8.8 Hz, 1H), 6.44 (dd, J =
16.6, 9.9 Hz, 1H), 6.30 (d, 16.6 Hz, 1H), 6.10 (d,
Figure imgf000047_0006
9.9 Hz, 1H), 4.26-4.22 (m, 1H), 4.04-3.99 (m, 1H), 3.81-3.74 (m, 2H), 3.68-3.64 (m, 1H), 3.31-3.23 (m, 1H), 2.94-2.84 (m,
2H), 2.54 (t, J = 11.1 Hz, 1H), 1.84 (s, 3H), 1.82 (s, 3H)。 MS m/z 575.5 [M+H]+。
实施例 25: 化合物 20R的制备
Figure imgf000048_0001
室温下将 4 -溴巴豆酸 (20R-la, 1.0 g, 6.06 mmol)溶于甲醇 (60mL) 中， 再加入甲 醇钠的甲醇溶液 ( 1.64 g, 30.3 mmol, 10 mL) 反应混合物室温下搅拌 30分钟， 再在 回流条件下搅拌 2小时。 TLC监测反应完毕。 反应混合物冷却至室温后减压浓缩， 再 将其溶于水和乙酸乙酯的混合液 (v/v = 50/50) 中， 滴加入 HC1水溶液 (2.0M) 调节 pH至 1, 用乙酸乙酯萃取 (3x20mL) 合并的有机相用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸 钠干燥， 过滤后减压浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 =2:1) 得到黄色固体化合物20R-lb (622 mg, 收率 88%)。 4 NMR (500 MHz, CDC13) 57.06 (dt, J = 15.7, 4.1 Hz, 1H), 6.08 (dt, J = 15.7, 2.1 Hz, 1H), 4.12 (dd, J = 4.1, 2.1 Hz, 2H), 3.41 (s, 3H)
化合物13R-la (200 mg, 0.85 mmol), 4 -甲氧基巴豆酸 (20R-lb, 148 mg, 1.28 mmol), 0-(7 -氮杂苯并*** -1-基) -N,N,N',N'-四甲基脲 (487 mg, 1.28 mmol) 和二异 丙基乙基胺 ( 165 mg, 1.28 mmol) 溶于乙腈 (15 mL) 中， 反应混合物在室温下搅拌 30分钟。 TLC监测反应完毕。 反应混合物减压浓缩， 所得粗品再经硅胶柱层析分离纯 化 (二氯甲烷： 甲醇 =20:1)得到黄色固体化合物20R-lc(700 mg)直接用于下一步反 应。 MS m/z 334.3 [M+H]+。
化合物20R-lc (700 mg, 2.10 mmol)和铁粉 ( 586 mg, 10.5 mmol) 加入到乙酸乙酯 /水 (v/v = 10 mL/6 mL) 的混合液中， 再加入氯化铵 (702 mg, 13.12 mmol) , 反应混 合物在室温下搅拌 4小时。 TLC监测反应完毕。 过滤反应混合物， 滤液用乙酸乙酯萃 取 (3x25mL) 合并的有机相用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 减压浓 缩。 所得粗品再经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 =20:1)得到黄色固体化合 物20R-ld (55 mg, 两步收率 21%)。 MS m/z 304.4 [M+H]+
将化合物20R-ld (55 mg, 0.18 mmol)和化合物lk (60 mg, 0.18 mmol)溶于 2 -甲氧基 乙醇 (2mL) 中， 再加入 HC1甲醇溶液 (2.5 M, 0.20 mL) 将反应混合物置于封管中， 加热至 120 °C搅拌过夜。 TLC监测反应完毕。 反应混合物冷却至室温后减压浓缩。 所 得粗品经制备型薄板层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 =20:1)得到黄色固体化合物20R
(8.3 mg, 收率 8%)。
Figure imgf000048_0002
10.95 (s, 1H), 8.66-8.63 (m, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.48 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.30-7.24 (m, 1H), 7.20-7.09 (m, 2H), 7.04 (s, 1H), 6.98-6.89 (m, 2H), 6.77-6.70 (m, 1H), 6.61-6.51 (m, 1H), 4.82-4.60 (m, 1H), 4.32-4.25 (m, 1H), 4.17-3.90 (m, 4H), 3.73 (d, J = 1 1.0 Hz, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.1 1-2.92 (m, 2H), 2.77-2.66 (m, 1H), 2.61-2.50 (m, 1H), 1.84 (s, 3H), 1.82 (s, 3H)。 MS m/z 583.6 [M+H]'
实施例26: 化合物21R的制备
Figure imgf000049_0001
将化合物13R-la (300 mg, 1.28 mmol)溶于二氯甲烷 ( 10 mL) 中， 再依次加入 #-Boc-哌啶酮 (21R-la, 381 mg, 1.91 mmol)和 2滴醋酸。反应混合物室温下搅拌 2小时。 随后缓慢加入三乙酰氧基硼氢化钠 ( 405 mg, 1.91 mmol ) , 然后室温下搅拌过夜。 反 应完毕后， 0 °C下向反应混合物中加入 1 N氢氧化钠溶液， 再将该混合液倒入冰水中， 二氯甲烷萃取 ( 3 x 20 mL) 合并的有机相饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤 后减压浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 20: 1 )得到黄色固 体化合物21R-lb (483 mg, 收率 91%)。 MS m/z 419.5 [M+H]+。
室温下向甲醇 ( 20 mL) 中加入化合物21R-lb (200 mg, 0.48 mmol)和钮碳催化剂
(10%, 50 mg)。 该反应混合物在室温和 1大气压的氢气氛围下搅拌 2小时。 TLC监测反 应完成。 反应混合物经过硅藻土过滤， 滤液经减压浓缩得到粗品。 该粗品经硅胶柱层 析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 10: 1 )得到无色油状化合物21R-lc(77mg, 收率 41%)。 MS m/z 389.6 [M+H]+。
将化合物21R-lc (77 mg, 0.20 mmol)和化合物lk (63 mg, 0.20 mmol)溶于 2 -甲氧基 乙醇 ( 2 mL) 中， 再加入 HC1甲醇溶液 ( 2.5 M, 0.21 mL) 将反应混合物置于封管中， 加热至 120 °C搅拌过夜。 TLC监测反应完毕。 反应混合物冷却至室温后减压浓缩。 所 得粗品经制备型薄板层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 3 : 1, 2%三乙胺)得到黄色固体 化合物 21R (26 mg, 收率 ISo/O^H NMR pOO MHz, CDC13) 5 10.89 (s, 1H), 8.67-8.63 (m, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.51-7.45 (m, 1H), 7.29-7.22 (m, 1H), 7.12-7.07 (m, 2H), 6.92 (dd, J = 8.8, 2.5 Hz, 1H), 6.88 (s, 1H), 6.71 (d, 8.8 Hz, 1H), 4.22-4.14 (m, 1H), 4.06-3.93 (m,
1H), 3.66 (d, 11.4 Hz, 1H), 3.50-3.39 (m, 2H), 3.14-3.06 (m, 1H), 2.98 (d, J= 10.5 Hz,
1H), 2.92-2.81 (m, 3H), 2.78-2.70 (m, 1H), 2.60-2.47 (m, 3H), 2.11-1.88 (m, 4H), 1.84 (s, 3H), 1.81 (s, 3H)。 MS m/z 568.5 [M+H]+。
实施例 27: 化合物 22R的制备
Figure imgf000050_0001
将化合物 21R-lb (283 mg, 0.73 mmol)溶于二氯甲烷 ( 10 mL) 中， 0。(：下缓慢滴 加三氟乙酸 (1.5mL) 反应混合物在室温下搅拌 30分钟。 反应完毕后， 反应混合物 减压浓缩， 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 10:1, 2%三乙胺) 得 到黄色固体化合物 22R-la (150 mg, 收率 65%)。 MS m/z 319.4 [M+H]+
化合物 22R-la (150 mg, 0.47 mmol)和二异丙基乙基胺 (67 mg, 0.52 mmol) 溶于 二氯甲烷 (8 mL) 中， 0 °C下向其中缓慢滴加丙烯酰氯 (47 mg, 0.52 mmol) 的二氯 甲烷稀释液 (2mL) 反应混合物在室温下搅拌 30分钟。 反应完毕后， 反应混合物减 压浓缩， 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 =15:1)得到黄色固体化 合物 22R-lb (240 mg)直接用于下一步反应。 MS w/z 373.5 [M+H]+。
化合物 22R-lb (240 mg, 0.64 mmol)和铁粉 (180 mg, 3.22 mmol) 溶于乙酸乙酯 / 水混合溶剂 (v/v = 5 mL/3 mL) 中， 再加入氯化铵 (215 mg, 4.03 mmol) 反应混合 物在室温下搅拌过夜。 反应完毕后， 反应混合物经硅藻土过滤， 滤液用乙酸乙酯萃取 (3 x25 mL) 合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥， 过滤后减压浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷：甲醇 =20:1)得到黄色固体化合物 22R-1C (91 mg, 两步收率 56%)。 MS w/z 343.5 [M+H]+。
将化合物 22R-lc (91 mg, 0.27 mmol)和化合物 lk (85 mg, 0.27 mmol)溶于 2 -甲氧基 乙醇 (2mL)中， 再加入 HC1甲醇溶液 (2.5 M, 0.28 mL) 将反应混合物置于封管中， 加热至 120 °C搅拌过夜。 TLC监测反应芫毕。 反应混合物冷却至室温后减压浓缩。 所 得粗品经制备型薄板层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 10:1)得到黄色固体化合物22R
(12 mg, 收率 7%)。 ^NMRpOOMHz, CDC13)510.91 (s, 1H), 8.67-8.63 (m, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.48 (t,J= 7.9 Hz, 1H), 7.29-7.22 (m, 1H), 7.12-7.06 (m, 2H), 6.93 (dd, J = 8.8, 2.5 Hz, 1H), 6.89 (s, 1H), 6.72 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.58 (dd, J= 16.8, 10.6 Hz, 1H), 6.28 (dd, J= 16.8, 1.8 Hz, 1H), 5.69 (dd,J= 10.6, 1.8 Hz, 1H), 4.72
Figure imgf000051_0001
10.5 Hz, 1H), 4.24-4.16
(m, 1H), 4.11-3.98 (m, 2H), 3.68 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.27-2.96 (m, 3H), 2.93-2.75 (m, 2H), 2.73-2.48 (m, 3H), 2.19-2.08 (m, 1H), 2.00-1.88 (m, 2H), 1.74-1.57 (m, 2H), 1.84 (s, 3H), 1.81 (s, 3H)。 MS m/z 622.6 [M+H]+。
实施例28: 化合物23R的制备
Figure imgf000051_0002
化合物23R-la (5.0 g, 21.01 mmol), 23R-lb (4.54 g, 21.01 mmol)和氢氧化钾 (3.54 g, 63.03 mmol) 溶于二甲亚砜 (60mL) 中， 室温下搅拌 3小时， 再在 60 °C下搅拌 3小 时。 反应完毕后， 待反应混合物冷却后将其倒入冰水中， 室温下搅拌 1小时。 该混合 物再用二氯甲烷萃取 (3x40mL) 。 合并的有机相再用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠 干燥， 过滤后滤液减压浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (石油醚： 乙酸乙酯 = 10:1) 得到黄色固体化合物23R-1C (5.0 g, 收率 57%)和黄色固体化合物24R-la (1.4 g, 收率 16%)。 23R-lc : lU NMR (500 MHz, CDC13) 58.04-8.02 (m, 1H), 7.72-7.70 (m, 1H), 4.25-4.14 (m, 2H), 3.87-3.76 (m, 2H), 3.64-3.55 (m, 1H), 3.51-3.32 (m, 2H), 3.29-3.16 (m, 2H),
1.49 (s, 9H); 24R-la:
Figure imgf000051_0003
2.4 Hz, 1H), T63 (d, J = 2.2
Hz, 1H), 4.50-4.43 (m, 1H), 4.28-4.05 (m, 3H), 3.75-3.70 (m, 1H), 3.22 - 3.15 (m, 1H), 3.12-2.99 (m, 1H), 2.84 (td, J= 11.8, 2.9 Hz, 1H), 2.69-2.56 (m, 1H), 1.49 (s, 9H)。 将化合物 23R-lc (2.0 g, 4.83 mmol), 四甲基锡 ( 1.73 g, 9.66 mmol ) ， 四三苯基 膦钯 ( 279 mg, 0.24 mmol ) 和氯化锂 ( 409 mg, 9.66 mmol ) 的 N, N-二甲基甲酰胺 ( 35 mL) 混合液加热至 95 °C， 搅拌过夜。 反应完毕后， 将反应混合物过滤， 滤液减压浓 缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (石油醚： 乙酸乙酯 = 15: 1 )得到黄色固体化合 物 23R-ld (1.37 g, 收率 81%)。
Figure imgf000052_0001
2.5 Hz, 1H), T58
(d, J= 2.6 Hz, 1H), 4.25-4.13 (m, 2H), 3.87-3.80 (m, 2H), 3.60-3.52 (m, 1H), 3.35 (s, 1H), 3.23 (s, 1H), 3.10-2.97 (m, 2H), 2.36 (s, 3H), 1.48 (s, 9H)。 室温下向甲醇 ( 8 mL) 中加入化合物 23R-ld (200 mg, 0.57 mmol)和钮碳催化剂 (10%, 80 mg), 该反应混合物在室温和 1大气压的氢气氛围下搅拌 2小时。 TLC监测反 应完成。 反应混合物经过硅藻土过滤， 滤液经减压浓缩得到粗品。 该粗品经硅胶柱层 析分离纯化 (石油醚： 乙酸乙酯 = 2: 1 )得到灰白色固体化合物 23R-le (162 mg, 89%)。 lU NMR (500 MHz, CDC13) 5 6.14 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.10 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.31 (t, J = 10.9 Hz, 1H), 4.17-3.93 (m, 3H), 3.34 (s, 1H), 3.20-2.97 (m, 2H), 2.90 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 2.79-2.66 (m, 1H), 2.20 (s, 3H), 1.47 (s, 9H)。 将化合物 23R-le (50 mg, 0.16 mmol)和化合物 lk (50 mg, 0.16 mmol)溶于 2 -甲氧基 乙醇 ( 2 mL) 中， 再加入 HC1甲醇溶液 ( 2.5 M, 0.16 mL) 将反应混合物置于封管中， 加热至 120 °C搅拌过夜。 TLC监测反应完毕。 反应混合物冷却至室温后减压浓缩。 所 得粗品经制备型薄板层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 10: 1, 2%三乙胺) 得到淡黄色 固体化合物 23R (59 mg, 收率 75%)。 4 NMR (500 MHz, CDCI3) 5 10.86 (s, 1H), 8.67-8.63 (m, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.53-7.47 (m, 1H), 7.30-7.23 (m, 1H), 7.13-7.09 (m, 1H), 7.08 (d, 2.4 Hz, 1H), 6.92 (s, 1H), 6.81 (d,
Figure imgf000052_0002
2.3 Hz, 1H), 4.67 (t, J = 10.8 Hz, 1H),
4.05 (dd, J = 10.8, 3.0 Hz, 1H), 3.35 (dd, J = 12.8, 4.3 Hz, 1H), 3.23-3.18 (m, 1H), 3.17-3.00 (m, 4H), 2.94-2.87 (m, 1H), 2.25 (s, 3H), 1.84 (s, 3H), 1.82 (s, 3H)。 MS m/z 499.4 [M+H]+
实施例 29: 化合物 23S的制备
Figure imgf000053_0002
化合物23R-la (100 mg, 0.42 mmol), 23S-la (91 mg, 0.42 mmol)和氢氧化钾 ( 71 mg,
I.26 mmol) 溶于二甲亚砜 (5mL) 中， 室温下搅拌 3小时， 再在 60 °C下搅拌 3小时。 反应完毕后， 待反应混合物冷却后将其倒入冰水中， 室温下搅拌 1小时。 混合物再用 二氯甲烷萃取 (3x25mL) 。 合并的有机相经饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过 滤后滤液减压浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (石油醚： 乙酸乙酯 = 10:1)得 到黄色固体化合物23S-lb (64 mg, 收率 37%)和黄色固体化合物24S-la (64 mg, 收率 37%)。 23S-lb: ^NMR (500 MHz, CDC13) 58.03 (d, 7=2.5 Hz, 1H), 7.71 (d,J=2.6Hz, 1H), 4.26-4.15 (m, 2H), 3.86-3.78 (m, 2H), 3.60 (dd,
Figure imgf000053_0001
13.8, 4.1 Hz, 1H), 3.52-3.36 (m, 2H), 3.29-3.15 (m, 2H), 1.48 (s, 9H); 24S-la: lU NMR (500 MHz, CDC13) 57.94 (d, J
2.5 Hz, 1H), 7.63 (d, 2.5 Hz, 1H), 4.49-4.44 (m, 1H), 4.28-4.04 (m, 3H), 3.71 (d, J =
II.3 Hz, 1H), 3.22-3.15 (m, 1H), 3.10-3.01 (m, 1H), 2.88-2.79 (m, 1H), 2.66-2.57 (m, 1H), 1.49 (s, 9H)0 将化合物23S-lb (64 mg, 0.16 mmol)， 四甲基锡 (56 mg, 0.31 mmol) ， 四三苯基 膦使 1 ( 9 mg, 0.01 mmol)和氯化锂 ( 13 mg, 0.31 mmol ) 的 N, N-二甲基甲酰胺 (2mL) 混合液加热至 90 °C， 搅拌过夜。 反应完毕后， 将反应混合物过滤， 滤液减压浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (石油醚： 乙酸乙酯 = 10:1) 得到黄色固体化合物 23S-1C (33 mg, 收率 60%)。 H NMR (500 MHz, CDC13) 5 T65 (d, /= 2.5 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 4.24-4.14 (m, 2H), 3.89-3.78 (m, 2H), 3.60-3.49 (m, 1H), 3.39-3.30 (m, 1H), 3.28-3.18 (m, 1H), 3.10-2.98 (m, 2H), 2.37 (s, 3H), 1.48 (s, 9H)。 室温下向甲醇 (6 mL)中加入化合物23S-lc (33 mg, 0.09 mmol)和钮碳催化剂 (10%, 40 mg),该反应混合物在室温和 1大气压的氢气氛围下搅拌 2小时。 TLC监测反应完成， 反应混合物经过硅藻土过滤， 滤液经减压浓缩得到粗品， 随后粗品经硅胶柱层析分离 纯化 (石油醚： 乙酸乙酯 = 2:1)得到淡黄色固体化合物23S-ld (23 mg, 76%) MS m/z 320.4 [M+H]+。
将化合物23S-ld (23 mg, 0.07 mmol)和化合物lk (23 mg, 0.07 mmol)溶于 2 -甲氧基 乙醇 (lmL) 中， 再加入 HC1甲醇溶液 (2.5 M, 0.08 mL) 。 将反应混合物置于封管中， 加热至 120 °C搅拌过夜。 TLC监测反应完毕， 反应混合物冷却至室温后减压浓缩。 所 得粗品经制备型薄板层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 =5:1)得到淡黄色固体化合物23S
(14 mg, 收率 38%)。 4 NMR (500 MHz, CD3OD) 58.50-8.45 (m, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.62-7.53 (m, 2H), 7.27-7.22 (m, 1H), 6.98 (d,
Figure imgf000054_0001
2.4 Hz, 1H), 6.82 (d,
Figure imgf000054_0002
2.1 Hz, 1H),
4.53 (t,J= 11.0 Hz, 1H), 4.02 (dd, 10.7, 2.8 Hz, 1H), 3.30-3.26 (m, 1H), 3.18-3.09 (m, 2H), 3.07-2.99 (m, 3H), 2.87-2.80 (m, 1H), 2.20 (s, 3H), 1.86 (s, 3H), 1.83 (s, 3H)。 MS m/z 499.4 [M+H]+。
实施例30: 化合物24R的制备
Figure imgf000054_0003
将化合物24R-la (1.0 g, 2.41 mmol)， 四甲基锡 ( 863 mg, 4.83 mmol ) ， 四三苯基 膦钯 (140 mg, 0.12 mmol) 和氯化锂 (205 mg, 4.83 mmol) 的 N, N-二甲基甲酰胺 ( 15 mL) 混合液加热至 95 °C， 搅拌过夜。 反应完毕后， 将反应混合物过滤， 滤液减压浓 缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (石油醚： 乙酸乙酯 =15:1)得到黄色固体化合 物24R-lb (861 mg, 收率 100%)。 lU NMR (500 MHz, CDC13) 57.60-7.54 (m, 2H), 4.38 (dd, J= 10.8, 2.8 Hz, 1H), 4.26-4.09 (m, 2H), 4.06 (dd, J = 10.8, 8.8 Hz, 1H), 3.73-3.68 (m, 1H), 3.14-3.01 (m, 2H), 2.82-2.73 (m, 1H), 2.65-2.55 (m, 1H), 2.21 (s, 3H), 1.49 (s, 9H)。 室温下向甲醇 (6 mL) 中加入化合物24R-lb (150 mg, 0.43 mmol)和钮碳催化剂 (10%, 50 mg), 该反应混合物在室温和 1大气压的氢气氛围下搅拌 2小时。 TLC监测反 应完成。 反应混合物经过硅藻土过滤， 滤液经减压浓缩得到粗品。 该粗品经硅胶柱层 析分离纯化 (石油醚： 乙酸乙酯 =2:1)得到灰白色固体化合物24R-1C (119 mg, 87%)。 ^NMR (500 MHz, CDC13) 56.11 (d, 2.3 Hz, 1H), 6.05 (d,J=2.0Hz, 1H), 4.19 (dd,J =
10.7, 2.7 Hz, 1H), 4.15-3.98 (m, 2H), 3.91 (dd, J = 10.6, 8.4 Hz, 1H), 3.62-3.57 (m, 1H), 3.10-3.03 (m, 1H), 3.02-2.97 (m, 1H), 2.74-2.67 (m, 1H), 2.64-2.59 (m, 1H), 2.09 (s, 3H), 1.48 (s, 9H)。 将化合物 24R-lc (50 mg, 0.16 mmol)和化合物 lk (50 mg, 0.16 mmol)溶于 2 -甲氧基 乙醇 (2mL) 中， 再加入 HC1甲醇溶液 (2.5 M, 0.16 mL) 将反应混合物置于封管中， 加热至 120 °C搅拌过夜。 TLC监测反应完毕， 反应混合物冷却至室温后减压浓缩。 所 得粗品经制备型薄板层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 10:1, 2%三乙胺) 得到淡黄色 固体化合物 24R (52 mg, 收率 66%)。 4 NMR (500 MHz, DMSO- ) 511.14 (s, 1H), 9.04
Figure imgf000055_0001
将化合物 24S-la (39 mg, 2.41 mmol)， 四甲基锡 (34 mg, 0.19 mmol) ， 四三本基 膦使 1 ( 6 mg, 0.004 mmol)和氯化锂 (8 mg, 0.19 mmol) 的 N, N-二甲基甲酰胺 (2mL) 混合液加热至 95 °C， 搅拌过夜。 反应完毕后， 将反应混合物过滤， 滤液减压浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (石油醚： 乙酸乙酯 = 10:1) 得到黄色固体化合物 24S-lb (28 mg, 收率 85%)。 ^ NMR (500 MHz, CDC13) 57.60-T55 (m, 2H), 4.40- 4.35 (m, 1H), 4.25-4.02 (m, 3H), 3.71 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.16-3.00 (m, 2H), 2.83-2.73 (m, 1H), 2.66-2.57 (m, 1H), 2.21 (s, 3H), 1.49 (s, 9H)。 室温下向甲醇 (6 mL)中加入化合物 24S-lb (28 mg, 0.08 mmol)和钮碳催化剂 (10%, 40 mg),该反应混合物在室温和 1大气压的氢气氛围下搅拌 2小时。 TLC监测反应完成。 反应混合物经过硅藻土过滤， 滤液经减压浓缩得到粗品。 该粗品经硅胶柱层析分离纯 化 (石油醚： 乙酸乙酯 = 2:1) 得到灰白色固体化合物 24S-1C (12 mg, 47%)。 MS m/z 320.4 [M+H]+。
将化合物 24S-lc (12 mg, 0.04 mmol)和化合物 lk (12 mg, 0.04 mmol)溶于 2 -甲氧基 乙醇 (lmL)中， 再加入 HC1甲醇溶液 (2.5 M, 0.04 mL)。 将反应混合物置于封管中， 加热至 120 °C搅拌过夜。 TLC监测反应完毕。 反应混合物冷却至室温后减压浓缩。 所 得粗品经制备型薄板层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 =5:1)得到黄色固体化合物 24S (8 mg, 收率 42%)。 4 NMR (500 MHz, CD3OD) 58.52-8.48 (m, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.62-7.55 (m, 1H), 7.51 (t, J=7.9Hz, 1H), 7.25-7.20 (m, 1H), 6.89 (d,
Figure imgf000056_0001
2.0 Hz, 1H), 6.74 (d, J =
1.9 Hz, 1H), 4.27-4.21 (m, 1H), 3.96-3.90 (m, 1H), 3.50 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 3.08-3.01 (m, 3H), 2.89-2.80 (m, 1H), 2.63-2.56 (m, 1H), 2.51 (t, J= 11.7 Hz, 1H), 2.07 (s, 3H), 1.87 (d, J= 2.9 Hz, 3H), 1.84 (d, J= 2.9 Hz, 3H)。 MS m/z 499.4 [M+H]+。
实施例 32: 化合物 25R的制备
Figure imgf000056_0002
室温下将化合物 23R-ld (1.17 g, 3.35 mmol)溶于甲醇 (15mL) 中， 再滴加 HC1甲 醇溶液 (4.0 M, 1.36 mL)， 混合液在 60 °C下搅拌 1小时。 反应完毕后， 反应混合物减 压浓缩， 再溶于二氯甲烷， 用饱和碳酸氢钠水溶液中和。该混合物用二氯甲烷萃取 (3 x 20 mL) 。 合并的有机相用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤后减压浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 20:1) 得到黄色固体化合物 25R-la (465 mg, 收率 56%)。 ^NMR (500 MHz, CDC13) 57.57 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 4.37-4.27 (m, 1H), 4.10-4.01 (m, 1H), 3.19-3.12 (m, 2H), 3.09-2.91 (m, 5H), 2.29 (s, 3H)0 化合物 25R-la (150 mg, 0.60 mmol), 甲醛溶液 (37%, 1.5 mL) 和 2滴醋酸的甲醇 (6mL)混合液在室温下搅拌 1小时。 随后加入氰基硼氢化钠 ( 113 mg, 1.81 mmol) , 反应混合物在室温下搅拌过夜。 反应完毕后， 反应混合物减压浓缩， 加入水 (15 mL) 后再用二氯甲烷萃取 ( 3x15 mL) 合并的有机相用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干 燥， 过滤后减压浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 30: 1 )得 到黄色固体化合物 25R-lb (I 55 mg, 收率 ％)。 MS w/z 264.4 [M+H]+。
室温下向甲醇 ( 8 mL) 中加入化合物 25R-lb (155 mg, 0.59 mmol)和钮碳催化剂 (10%, 80 mg), 该反应混合物在室温和 1大气压的氢气氛围下搅拌 2小时。 TLC监测反 应完成。 反应混合物经过硅藻土过滤， 滤液经减压浓缩得到粗品。 该粗品经硅胶柱层 析分离纯化 (石油醚： 乙酸乙酯 = 2: 1 )得到淡黄色固体化合物 25R-1C (123 mg, 90%)。 lU NMR (500 MHz, CDC13) 5 6.12 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 6.09 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 4.62 (t, J = 10.7 Hz, 1H), 4.01-3.96 (m, 1H), 3.42 (bs, 2H), 3.18 (d, 10.6 Hz, 1H), 3.02-2.76 (m, 4H),
2.59 (d, 9.4 Hz, 1H), 2.37-2.33 (m, 1H), 2.31 (s, 3H), 2.19 (s, 3H)。 将化合物 25R-lc (50 mg, 0.22 mmol)和化合物 lk (68 mg, 0.22 mmol)溶于 2 -甲氧基 乙醇 ( 1.5 mL) 中， 再加入 HC1甲醇溶液 ( 2.5 M, 0.22 mL) 将反应混合物置于封管 中， 加热至 120 °C搅拌过夜。 TLC监测反应完毕， 反应混合物冷却至室温后减压浓缩。 所得粗品经制备型薄板层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 20: 1 ) 得到淡黄色固体化合 物 25R (73 mg, 收率 66%)。 4 NMR (500 MHz, CDCI3) 5 10.89 (s, 1H), 8.68-8.64 (m, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.49 (t, 7.9 Hz, 1H), 7.30-7.22 (m, 1H), 7.12-7.05 (m, 2H), 6.96 (s,
1H), 6.80 (d,
Figure imgf000057_0001
2.3 Hz, 1H), 4.62 (t, J = 10.7 Hz, 1H), 4.05 (dd, J = 10.8, 2.8 Hz, 1H),
3.21 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 3.07-3.02 (m, 1H), 2.98-2.91 (m, 1H), 2.87 (d,
Figure imgf000057_0002
1 1.8 Hz, 1H),
2.80 (d, J= 10.0 Hz, 1H), 2.63-2.56 (m, 1H), 2.39-2.32 (m, 1H), 2.31 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 1.84 (s, 3H), 1.81 (s, 3H)。 MS m/z 513.4 [M+H]+。
实施例 33: 化合物 26R的制备
Figure imgf000057_0003
将化合物 25R-la (150 mg, 0.60 mmol)和二异丙基乙基胺 ( 156 mg, 1.20 mmol ) 溶 于二氯甲烷 ( 6 mL) 中， 0 °C下缓慢滴加丙烯酰氯 ( 60 mg, 0.66 mmol ) 的二氯甲烷 ( 4 mL) 稀释液。 反应混合液在室温下搅拌 1小时。 反应完毕后， 反应混合物减压浓 缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (石油醚： 乙酸乙酯 = 2: 1 ) 得到黄色固体化合 物 26R-la (190 mg, 收率 100%)。 MS w/z 304.3 [M+H]+。
向化合物 26R-la (190 mg, 0.63 mmol)和水合二氯化锡 ( 650 mg, 3.13 mmol ) 的乙 醇 ( 10 mL) 混合液中加入 HC1水溶液 ( 2.0 M, 1.57 mL)， 反应混合物在 90 °C下搅拌 6小时。 TLC监测反应完成。 反应混合物减压浓缩， 再溶于二氯甲烷， 混合液经饱和 碳酸氢钠水溶液中和， 二氯甲烷萃取 ( 3 x 20 mL) 。合并的有机相用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤后减压浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲 醇 = 20: 1 )得到淡黄色固体化合物 26R-lb (103 mg, 收率 60%)。 MS w/z 274.3 [M+H]+。
将化合物 26R-lb (50 mg, 0.18 mmol)和化合物 lk (58 mg, 0.18 mmol)溶于 2 -甲氧基 乙醇 ( 1.5 mL) 中， 再加入 HC1甲醇溶液 ( 2.5 M, 0.19 mL) 。 将反应混合物置于封管 中， 加热至 120 °C搅拌过夜。 TLC监测反应完毕。 反应混合物冷却至室温后减压浓缩。 所得粗品经制备型薄板层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 20: 1 , 2%三乙胺) 得到白色 固体化合物 26R (16 mg, 收率 16%)。 4 NMR (500 MHz, CDC13) 5 10.97 (s, 1H), 8.65-8.61 (m, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.53-7.47 (m, 1H), 7.31-7.24 (m, 1H), 7.17-7.08 (m, 2H),
7.00 (s, 1H), 6.87-6.75 (m, 1H), 6.63-6.51 (m, 1H), 6.36
Figure imgf000058_0001
16.7 Hz, 1H), 5.76 (d, J =
10.0 Hz, 1H), 4.70-4.55 (m, 1H), 4.38-4.20 (m, 1H), 4.16-3.89 (m, 2H), 3.55-3.45 (m, 1H), 3.37-3.19 (m, 2H), 3.07 (d, 12.1 Hz, 1H), 2.80 (t, J = 12.3 Hz, 1H), 2.27 (s, 3H), 1.85
(s, 3H), 1.82 (s, 3H)。 MS m/z 553.5 [M+H]+。
实施例 34: 化合物 27R的制备
Figure imgf000058_0002
将化合物 25R-la (150 mg, 0.60 mmol), N-甲基哌啶酮 ( 11R-Ia, 340 mg, 3.01 mmol ) 和 2滴醋酸的甲醇 ( 8 mL) 混合液在室温下搅拌 1小时。 随后加入氰基硼氢化 钠 (113 mg, 1.81 mmol) ， 反应混合物在室温下搅拌过夜。 反应完毕后， 反应混合物 减压浓缩， 再经二氯甲烷萃取 (3xl5mL) 合并的有机相用饱和食盐水洗涤， 无水 硫酸钠干燥， 过滤后减压浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 30:1) 得到黄色固体化合物 27R-la (219 mg)直接用于下一步反应。 MS m/z 347.4 [M+H]+。 室温下向甲醇 (10mL) 中加入化合物 27R-la (219 mg, 0.63 mmol)和钮碳催化剂 (10%, 80 mg), 该反应混合物在室温和 1大气压的氢气氛围下搅拌 2小时。 TLC监测反 应完成。 反应混合物经过硅藻土过滤， 滤液经减压浓缩得到粗品。 该粗品经硅胶柱层 析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 =20:1, 2%三乙胺)得到灰白色固体化合物 27R-lb (182 mg, 两步收率 96%)。 MS w/z 317.4 [M+H]+。
将化合物 27R-lb (50 mg, 0.16 mmol)和化合物 lk (50 mg, 0.16 mmol)溶于 2 -甲氧基 乙醇 (1.5mL) 中， 再加入 HC1甲醇溶液 (2.5 M, 0.16 mL) 将反应混合物置于封管 中， 加热至 120 °C搅拌过夜。 TLC监测反应完毕。 反应混合物冷却至室温后减压浓缩。 所得粗品经制备型薄板层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 50:1, 2%三乙胺) 得到淡黄 色固体化合物 27R (43 mg, 收率 46%)。 4 NMR (500 MHz, CD3OD) 58.51-8.45 (m, 1H),
8.02 (s, 1H), 7.60-7.50 (m, 2H), 7.22 (t, J= 6.5 Hz, 1H), 6.96 (d, J=2.3 Hz, 1H), 6.79 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 4.53 (t,
Figure imgf000059_0001
10.6 Hz, 1H), 3.94 (dd, J = 10.6, 2.7 Hz, 1H), 3.11-3.01 (m,
2H), 3.00-2.77 (m, 5H), 2.69 (dd, J = 11.7, 4.1 Hz, 1H), 2.51-2.42 (m, 1H), 2.26 (s, 3H), 2.23-2.15 (m, 1H), 2.17 (s, 3H), 2.05 (t,J= 11.0 Hz, 2H), 1.88-1.80 (m, 2H), 1.84 (s, 3H), 1.82 (s, 3H), 1.63-1.49 (m, 2H)。 MS w/z 596.6 [M+H]+。
实施例 35: 化合物 27S的制备
Figure imgf000059_0002
将化合物 23S-lc (200 mg, 0.57 mmol)溶于甲醇 (2mL) 中， 冰浴下滴加盐酸甲醇 溶液 (l mL, 4M) 。 滴加完毕后， 室温搅拌 1小时。 TLC检测反应完全。 反应混合物 减压浓缩， 再加入饱和碳酸氢钠水溶液 (10mL) ， 用乙酸乙酯 (3 x 10 mL) 萃取。 合并的有机相用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤后减压浓缩得到黄色固体化 合物 27S-la (100 mg, 收率 70%)。 MS w/z 250.3 [M+H]+。 将化合物 27S-la (100 mg, 0.40 mmol), N-甲基哌陡酮 (llR-la, 227 mg, 2.00 mmol) 和 2滴醋酸的甲醇 (5 mL)混合液在室温下搅拌 1小时。随后加入氰基硼氢化钠 (75 mg, 1.21 mmol) , 反应混合物在室温下搅拌过夜。 反应完毕后， 反应混合物减压浓缩， 再经二氯甲烷萃取 (3xl5mL)。合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥， 过滤后减压浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 =30:1)得到黄 色固体化合物 27S-lb (140 mg)直接用于下一步反应。 MS m/z 347.4 [M+H]+。
室温下向甲醇 (10 mL) 中加入化合物 27S-lb (55 mg, 0.16 mmol)和钮碳催化剂 (10%, 10 mg), 该反应混合物在室温和 1大气压的氢气氛围下搅拌 2小时。 TLC监测反 应完成。 反应混合物经过硅藻土过滤， 滤液经减压浓缩得到灰白色固体化合物 27S-1C
(50 mg, 收率 99%)。 MS w/z 317.4 [M+H]+。
将化合物 27S-lc (50 mg, 0.16 mmol)和化合物 lk (50 mg, 0.16 mmol)溶于 2 -甲氧基 乙醇 (1.5mL) 中， 再加入 HC1甲醇溶液 (2.5 M, 0.16 mL) 。 将反应混合物置于封管 中， 加热至 120 °C搅拌过夜。 TLC监测反应完毕， 反应混合物冷却至室温后减压浓缩。 所得粗品经制备型薄板层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 50:1, 2%三乙胺) 得到淡黄 色固体化合物 27S (33 mg, 收率 35%)。 lU NMR (500 MHz, CD3OD) 58.51-8.45 (m, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.60-7.51 (m, 2H), 7.23 (t,J=6.5 Hz, 1H), 6.96 (s, 1H), 6.80 (s, 1H), 4.55 (t,
J = 10.8 Hz, 1H), 3.97 (dd, J = 10.5, 2.0 Hz, 1H), 3.13-3.05 (m, 2H), 3.00-2.94 (m, 3H), 2.90-2.82 (m, 2H), 2.72 (dd, J = 12.0, 4.0 Hz, 1H), 2.51-2.42 (m, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.26-2.12 (m, 3H), 2.18 (s, 3H), 1.93-1.80 (m, 2H), 1.85 (s, 3H), 1.82 (s, 3H), 1.65-1.52 (m, 2H) MS w/z 596.6 [M+H]+
实施例 36: 化合物 28R的制备
Figure imgf000061_0001
化合物 28R
室温下向甲醇 ( 6 mL) 中加入化合物 20R-lc (123 mg, 0.37 mmol)和钮碳催化剂 (10%, 30 mg), 该反应混合物在室温和 1大气压的氢气氛围下搅拌 2小时。 TLC监测反 应完成。 反应混合物经过硅藻土过滤， 滤液经减压浓缩得到粗品， 随后粗品经硅胶柱 层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 15: 1 ) 得到黄色固体化合物 28R-la (73 mg, 65%)。 MS m/z 306.5 [M+H]+。
将化合物 28R-la (73 mg, 0.24 mmol)和化合物 lk (76 mg, 0.24 mmol)溶于 2 -甲氧基 乙醇 ( 2 mL)中， 再加入 HC1甲醇溶液 ( 2.5 M, 0.25 mL) 。将反应混合物置于封管中， 加热至 120 °C搅拌过夜。 TLC监测反应完毕， 反应混合物冷却至室温后减压浓缩。 所 得粗品经制备型薄板层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 10: 1 )得到黄色固体化合物 28R
(28 mg, 收率 21%)。 lU NMR (500 MHz, CDC13) 5 10.95 (s, 1H), 8.67-8.58 (m, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.48 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.30-7.24 (m, 1H), 7.19-7.09 (m, 2H), 6.99-6.88 (m, 2H), 6.77-6.70 (m, 1H), 4.68 (dd, 53.0, 13.0 Hz, 1H), 4.30-4.22 (m, 1H), 4.08-3.81 (m, 2H), 3.71 (d, J = 11.8 Hz, 1H), 3.44 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 3.34 (s, 3H), 3.10-2.84 (m, 2H), 2.74-2.63 (m, 1H), 2.57-2.41 (m, 3H), 1.98-1.90 (m, 2H), 1.84 (s, 3H), 1.82 (s, 3H)。 MS m/z 585.6 [M+H]+。
实施例 37: 化合物 29R的制备
Figure imgf000062_0001
将化合物 29R-la (2.0g， 6.09 mmol), TMSN3 (1.4g， 12.19 mmol), 2 -氨基乙醇 (820 mg, 13.14 mmol), 铜粉 (774 mg, 12.19 mmol)溶于 DMA (15mL) 中， 氮气保护下加 热至 95°C搅拌至反应完全。 加入 15 mL水， 以乙酸乙酯提取 (3 x l5 mL) 合并的有机 层用无水硫酸钠干燥， 过滤， 减压蒸馏除去溶剂。所得粗品经柱层析纯化得黄色油状液体 29R-lb (600 mg, 37%)。 MS w/z 265.3 [M+H]+。
将化合物 29R-lb (600 mg, 2.27 mmol) ， DMAP (55 mg, 0.45 mmol)溶于乙腈 (lOmL)中，在冰浴下缓慢滴加 Boc20 (1.49g， 6.81 mmol) ,滴加完毕后加热至 50°C 搅拌至反应完全。 加入 15 mL水， 以乙酸乙酯提取 (3xl5mL) 合并的有机层以无水 硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。所得粗品经柱层析纯化得黄色油状液体 29R-1C (600 mg, 57%) 。 4 NMR (500 MHz, CDC13) 57.69 (47=2.6 Hz, 1H), 7.59(47=2.6 Hz, 1H), 4.19 - 4.12 (m, 2H), 3.67-3.24 (m, 3H), 2.75-2.66 (m, 2H), 2.41-2.34 (m, 5H), 1.47 (s, 9H), 1.44 (s, 9H)。
将化合物 29R-lc (140 mg, 0.30 mmol)和 10%的钮碳催化剂 (32 mg, 0.03 mmol)溶于 甲醇 (3mL) 中， 该反应混合物在室温和 1大气压的氢气氛围下搅拌 2小时。 TLC监测 反应完成。 反应混合物经过硅藻土过滤， 滤液经减压浓缩得到粗品。 所得粗品经制备 型薄板层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 20:1)得到淡黄色固体化合物 29R-ld (60 mg,
46%) o MS m/z 435.6 [M+H]+。
将化合物 29R-ld (60 mg, 0.14 mmol)和化合物 lk (43 mg, 0.14 mmol)溶于化合物 2- 甲氧基乙醇 (1.5mL) 中， 再加入 HC1甲醇溶液 (2.5 M, 0.35 mL) 将反应混合物置 于封管中， 加热至 120°C搅拌过夜。 TLC监测反应完毕。 反应混合物冷却至室温后减 压浓缩。 所得粗品经制备型薄板层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 =20:1)得到淡黄色 固体化合物 29R-le (12 mg, 收率 13%)。 ^NMR (500 MHz, CD3OD) 58.53-8.50 (m, 1H), 8.01 (s,lH), 7.58-7.55 (m, 2H), 7.23-7.20 (m, 1H), 6.52-6.50 (m, 1H), 6.47-6.45 (m, 1H), 4.53 (t, 11.0 Hz, 1H), 4.01 (dd, J = 10.8, 1.8 Hz, 1H), 3.30-3.29 (m, 1H), 3.17 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 2.99 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 2.87 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 2.77 (t, 11.8 Hz,
1H), 2.67-2.63 (m, 1H), 2.44 (t, 10.0 Hz, 1H), 2.34 (s, 3H), 1.85 (s, 3H), 1.82 (s, 3H)。
将化合物29R-le (12 mg, 0.023 mmol) 溶于 1 mL二氯甲烷中， 加入二异丙基乙 基胺 (30mg， 0.23 mmol) , 冰浴下滴加丙烯酰氯 (2.1 mg， 0.023mmol) 的 l mL二氯 甲烷稀释液。 反应混合液在室温下搅拌 1小时。 TLC检测反应完全。 将反应液以水猝 灭， 二氯甲烷提取。 合并的二氯甲烷层以饱和食盐水洗涤一次， 无水硫酸钠干燥， 过 滤，减压浓缩。所得粗品经制备型薄层板纯化得化合物29R( 6 mg， 45%) MSm/z 568.6 [M+H]+。
实施例38: 化合物30R的制备
Figure imgf000063_0001
将化合物25R-la (400 mg, 1.60 mmol), N-叔丁氧碳基 -4 -哌陡酮 ( 1.6 g, 8.02 mmol) 和 3滴醋酸的甲醇 (15mL)混合液在室温下搅拌 1小时。 随后加入氰基硼氢化钠 (303 mg, 4.81 mmol) , 反应混合物在室温下搅拌 3小时。 反应完毕后， 反应混合物减压浓 缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 =30:1)得到黄色油状化合物 30R-la (694 mg)直接用于下一步反应。 MS w/z 433.5 [M+H]+。
室温下将化合物30R-la (694 mg, 1.60 mmol)溶于甲醇 (15 mL) 中， 再滴加 HC1 甲醇溶液 (4.0 M, 0.80 mL) 。 混合液在 60 °C下搅拌 2小时。 反应完毕后， 反应混合物 减压浓缩， 再溶于二氯甲烷， 加入饱和碳酸氢钠溶液中和。 该混合液用二氯甲烷萃取 (3x20mL) 。 合并的有机相再经饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤后减压浓 缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 =20:1)得到黄色固体化合物 30R-lb (400 mg, 两步收率 75%)。
将化合物30R-lb (150 mg, 0.45 mmol),碘甲焼 ( 106 mg, 0.68 mmol)和碳酸钾 ( 125 mg, 0.90 mmol) 的甲苯 /甲醇混合液 (2mL/l mL) 在 50 °C下搅拌 5小时。 TLC监测反 应完毕。 反应混合物减压浓缩， 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 20:1) 得到黄色固体化合物30R-lc (115 mg, 收率 71%)。 MS w/z 361.4 [M+H]+。
室温下向甲醇 (6 mL) 中加入化合物30R-lc (115 mg, 0.31 mmol)和钮碳催化剂 (10%, 50 mg), 该反应混合物在室温和 1大气压的氢气氛围下搅拌 1小时。 TLC监测反 应完成。 反应混合物经过硅藻土过滤， 滤液经减压浓缩得到粗品。 所得粗品经硅胶柱 层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 =20:1, 2%氨水)得到棕色固体化合物30R-ld (91 mg, 收率 86%)。 MS w/z 331.5 [M+H]+。
将化合物30R-ld (91 mg, 0.28 mmol)和化合物lk (104 mg, 0.33 mmol)溶于 2 -甲氧 基乙醇 (2mL) 中， 再加入 HC1甲醇溶液 (2.5 M, 0.29 mL) 。 将反应混合物置于封管 中， 加热至 120 °C搅拌过夜。 TLC监测反应完毕， 反应混合物冷却至室温后减压浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 =20:1, 2%氨水)得到淡黄色固体 化合物 30R(142 mg, 收率 85%)。
Figure imgf000064_0001
8.45 (m, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.62-7.52 (m, 2H), 7.24 (t, 7.5 Hz, 1H), 6.96 (s, 1H), 6.80 (s, 1H), 4.56 (t, J =
10.6 Hz, 1H), 3.98 (dd, 10.6, 2.0 Hz, 1H), 3.16-2.99 (m, 5H), 2.94-2.82 (m, 2H), 2.73 (dd, J 11.7, 4.0 Hz, 1H), 2.54-2.46 (m, 3H), 2.30-2.22 (m, 1H), 2.19 (s, 3H), 2.11 (t, J 11.8 Hz, 2H), 1.95-1.88 (m, 2H), 1.86 (s, 3H), 1.83 (s, 3H), 1.64-1.52 (m, 2H), 1.13 (t, J = 7.1 Hz, 3H)。 MS m/z 610.7 [M+H]+。
实施例39: 化合物30S的制备
Figure imgf000064_0002
将化合物27S-la (157 mg, 0.63 mmol), N-乙基 -4 -哌啶酮 (30S-la, 160 mg, 1.26 mmol) 和 2滴醋酸的甲醇 (5 mL) 混合液在室温下搅拌 1小时。 随后加入氰基硼氢化 钠 (118 mg, 1.89 mmol) , 反应混合物在室温下搅拌 2小时。 反应完毕后， 反应混合 物在减压的条件下浓缩。所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷：甲醇 =25:1,2% 氨水) 得到淡黄色固体化合物30S-lb (230 mg)直接用于下一步反应。 MS w/z 361.5 [M+H]+。 室温下向甲醇 ( 10 mL) 中加入化合物30S-lb (230 mg, 0.53 mmol)和钮碳催化剂 (10%, 80 mg), 体系中的空气用氢气置换， 然后该反应混合物在室温和 1大气压的氢气 氛围下搅拌 1小时。 TLC监测反应完成。 反应混合物经过硅藻土过滤， 滤液经减压浓 缩得到粗品。 该粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 =25:1, 2%氨水) 得到 白色固体化合物33S-1C (136 mg, 两步收率 64%)。 MS m/z 331.4 [M+H]+
将化合物30S-lc (70 mg, 0.2 mmol)和化合物lk (67 mg, 0.2 mmol)溶于 2 -甲氧基乙 醇 (2mL) 中， 再加入 HC1甲醇溶液 (2.5M, 0.2mL) 。 将反应混合物置于封管中， 加热至 120 °C搅拌过夜。 TLC监测反应完毕。 反应混合物冷却至室温后， 在减压的条 件下浓缩。 将所得残余物溶于少量二氯甲烷中， 用饱和碳酸氢钠溶液中和， 再用二氯 甲烷萃取 (3xl0mL) 。 合并的有机相用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤后 减压浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 =20:1, 2%氨水) 得到 白色固体化合物30S (50 mg, 收率 39%)。 4 NMR (500 MHz, CD3OD) 58.52-8.42 (m, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.63-7.49 (m, 2H), 7.27-7.20 (m, 1H), 6.96 (d, J=2.4Hz, 1H), 6.80 (d,
J= 2.0 Hz, 1H), 4.56 (t,
Figure imgf000065_0001
10.6 Hz, 1H), 3.98 (dd, J = 10.6, 2.8 Hz, 1H), 3.18-2.98 (m,
5H), 2.95-2.80 (m, 2H), 2.74 (dd, J= 11.7, 4.2 Hz, 1H), 2.55-2.47 (m, 3H), 2.27 (t, J = 11.0 Hz, 1H), 2.20 (s, 3H), 2.15-2.06 (m, 2H), 1.95-1.88 (m, 2H), 1.86 (s, 3H), 1.83 (s, 3H), 1.65-1.55 (m, 2H), 1.13 (t, J= 7.2 Hz, 3H) MS m/z 610.6 [M+H]+。
实施例40: 化合物31R的制备
Figure imgf000065_0002
化合物 31 R
将化合物25R-la (150 mg, 0.60 mmol), 四氢批喃酮 (31R-la, 301 mg, 3.01 mmol) 和 2滴醋酸的甲醇 (5 mL)混合液在室温下搅拌 1小时。随后加入氰基硼氢化钠 (113 mg, 1.81 mmol ) , 反应混合物在室温下搅拌 3小时。 反应完毕后， 反应混合物减压浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 20: 1 ) 得到黄色固体化合物 31R-lb (201 mg)直接用于下一步反应。 MS w/z 334.5 [M+H]+。
室温下向甲醇 ( 6 mL) 中加入化合物 31R-lb (201 mg, 0.60 mmol)和钮碳催化剂 (10%, 80 mg), 该反应混合物在室温和 1大气压的氢气氛围下搅拌 2小时。 TLC监测反 应完成。 反应混合物经过硅藻土过滤， 滤液经减压浓缩得到粗品。 所得粗品经硅胶柱 层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 20: 1 ) 得到棕色固体化合物 31R-1C (209 mg, 收率
86%) o
将化合物 31R-lc (209 mg, 0.69 mmol)和化合物 lk (218 mg, 0.69 mmol)溶于 2 -甲氧 基乙醇 ( 4 mL) 中， 再加入 HC1甲醇溶液 ( 2.5 M, 0.72 mL) 。 将反应混合物置于封管 中， 加热至 120 °C搅拌过夜。 TLC监测反应完毕， 反应混合物冷却至室温后减压浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 20: 1, 2%氨水)得到淡黄色固体 化合物 31R (104 mg, 收率 26%)。 4 NMR (500 MHz, CDC13) 5 10.91 (s, 1H), 8.69-8.64 (m, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.51 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.30-7.23 (m, 1H), 7.14-7.06 (m, 2H), 6.84 (s, 1H), 6.80 (s, 1H), 4.79-4.48 (m, 1H), 4.10-3.97 (m, 3H), 3.40 (t, J = 11.6 Hz, 2H),
3.30-2.72 (m, 6H), 2.66-2.35 (m, 2H), 2.25 (s, 3H), 1.84 (s, 3H), 1.81 (s, 3H), 1.79-1.73 (m, 2H), 1.66-1.56 (m, 2H)。 MS m/z 583.6 [M+H]+。
实施例 41: 化合物 31S的制备
Figure imgf000066_0001
将化合物 27S-la (100 mg, 0.40 mmol), 四氢吡喃酮 ( 31R-la, 120 mg, 1.20 mmol ) 和 2滴醋酸的甲醇 ( 4 mL)混合液在室温下搅拌 1小时。随后加入氰基硼氢化钠 ( 76 mg, 1.20 mmol ) , 反应混合物在室温下搅拌 2小时。 反应完毕后， 反应混合物减压浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 20: 1, 2%氨水)得到黄色固体化 合物 31S-la (157 mg)直接用于下一步反应。 MS m/z 334.5 [M+H]+。
室温下向甲醇 ( 4 mL) 中加入化合物 31S-la (157 mg, 0.42 mmol)和钮碳催化剂 (10%, 60 mg), 体系中的空气用氢气置换， 然后该反应混合物在室温和 1大气压的氢气 氛围下搅拌 1小时。 TLC监测反应完成。 反应混合物经过硅藻土过滤， 滤液经减压浓 缩得到粗品。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 20: 1, 2%氨水) 得 到黄色固体化合物 31S-lb (126 mg, 两步收率 100%)。 MS m/z 304.5 [M+H]+。
将化合物 31S-lb (50 mg, 0.16 mmol)和化合物 lk (52 mg, 0.16 mmol)溶于 2 -甲氧基 乙醇 ( 2 mL) 中， 再加入 HC1甲醇溶液 ( 2.5 M, 0.17 mL) 。 将反应混合物置于封管中， 加热至 120 °C搅拌过夜。 TLC监测反应完毕。 反应混合物冷却至室温后， 在减压的条 件下浓缩。 将所得残余物溶于少量二氯甲烷中， 用饱和碳酸氢钠溶液中和， 再用二氯 甲烷萃取 ( 3 x l0 mL) 。 合并的有机相用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤后 减压浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 20: 1, 2%氨水) 得到 白色固体化合物 31S (57 mg, 收率 59%)。 4 NMR (500 MHz, CDC13) 5 10.91 (s, 1H), 8.73-8.54 (m, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.51 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.30-7.27 (m, 1H), 7.13-7.08 (m, 2H), 6.83 (s, 1H), 6.80 (s, 1H), 4.78-4.50 (m, 1H), 4.08-3.97 (m, 3H), 3.40
Figure imgf000067_0001
1 1.0 Hz,
2H), 3.32-2.77 (m, 6H), 2.66-2.41 (m, 2H), 2.25 (s, 3H), 1.84 (s, 3H), 1.81 (s, 3H), 1.81-1.76 (m, 2H), 1.68-1.59 (m, 2H) MS m/z 583.7 [M+H]+。
实施例 42: 化合物 32R的制备
Figure imgf000067_0002
0 °C下将化合物 30R-lb (150 mg, 0.45 mmol)和二异丙基乙基胺 ( 117 mg, 0.90 mmol ) 溶于二氯甲焼 ( 3 mL) 中， 再缓慢滴加乙酰氯 ( 53 mg, 0.68 mmol ) 的二氯甲 烷 ( 1 mL) 稀释液。 反应混合液在室温下搅拌 1小时。 TLC监测反应完毕。 反应混合 物减压浓缩， 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 20: 1 )得到黄色固 体化合物32R-la (142 mg, 收率 84%)。 MS w/z 375.4 [M+H]+。
室温下向甲醇 ( 5 mL ) 中加入化合物32R-la (142 mg, 0.38 mmol)和钮碳催化剂 (10%, 50 mg) , 该反应混合物在室温和 1大气压的氢气氛围下搅拌 1小时。 TLC监测反 应完成。 反应混合物经过硅藻土过滤， 滤液经减压浓缩得到粗品。 所得粗品经硅胶柱 层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 15 : 1 ) 得到淡黄色固体化合物32R-lb (1 18 mg, 收 率 90%)。 MS m/z 345.5 [M+H]+。
将化合物32R-lb (60 mg, 0.17 mmol)和化合物lk (66 mg, 0.21 mmol)溶于 2 -甲氧基 乙醇 ( 2 mL ) 中， 再加入 HC1甲醇溶液 ( 2.5 M, 0.18 mL ) 。 将反应混合物置于封管中， 加热至 120 °C搅拌过夜。 TLC监测反应完毕， 反应混合物冷却至室温后减压浓缩。 所 得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 20: 1 , 2%氨水)得到淡黄色固体化 合物32R (45 mg, 收率 41%)。 lU NMR (500 MHz, CD3OD) 5 8.50-8.45 (m, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.62-7.51 (m, 2H), 7.23 (td, J = 7.5, 1.3 Hz, 1H), 6.96 (d, 2.4 Hz, 1H), 6.79 (d, J
= 2.2 Hz, 1H), 4.54 (t, J = 10.7 Hz, 1H), 4.50-4.44 (m, 1H), 4.00-3.89 (m, 2H), 3.15-3.04 (m, 3H), 3.03-2.97 (m, 1H), 2.92-2.81 (m, 2H), 2.79-2.73 (m, 1H), 2.72-2.64 (m, 1H), 2.59-2.44 (m, 2H), 2.18 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 1.94-1.86 (m, 2H), 1.85 (s, 3H), 1.82 (s, 3H), 1.55-1.32 (m, 2H)。 MS m/z 624.7 [M+H]+。
实施例43: 化合物32S的制备
Figure imgf000068_0001
将化合物27S-la (100 mg, 0.40 mmol), N-乙酰基 -4 -哌啶酮 (32S-la, 170 mg, 1.20 mmol ) 和 2滴醋酸的甲醇 ( 4 mL ) 混合液在室温下搅拌 1小时。 随后加入氰基硼氢化 钠 ( 76 mg, 1.20 mmol ) , 反应混合物在室温下搅拌 2小时。 反应完毕后， 反应混合物 减压浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 20: 1, 2%氨水) 得到 粗品黄色固体化合物32S-lb (200 mg)直接用于下一步反应。 MS w/z 375.5 [M+H]+。
室温下向甲醇 ( 5 mL ) 中加入化合物32S-lb (200 mg, 0.53 mmol)和钮碳催化剂 (10%, 80 mg), 体系中的空气用氢气置换， 然后该反应混合物在室温和 1大气压的氢气 氛围下搅拌 1小时。 TLC监测反应完成。 反应混合物经过硅藻土过滤， 滤液经减压浓 缩得到粗品。 该粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 20: 1, 2%氨水) 得到 黄色固体化合物 32S-lc (190 mg, 两步收率 100%)。 MS m/z 345.5 [M+H]+ 将化合物 32S-lc (50 mg, 0.15 mmol)和化合物 lk (46 mg, 0.15 mmol)溶于 2 -甲氧基 乙醇 ( 2 mL) 中， 再加入 HC1甲醇溶液 ( 2.5 M, 0.15 mL) 。 将反应混合物置于封管中， 加热至 120 °C搅拌过夜。 TLC监测反应完毕。 反应混合物冷却至室温后， 在减压的条 件浓缩。 将所得混合物溶于少量二氯甲烷中， 用饱和碳酸氢钠溶液中和， 再用二氯甲 焼萃取 ( 3 x l0 mL) 。 合并的有机相用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤后减 压浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 20: 1, 2%氨水)得到黄 色固体化合物 32S (36 mg, 收率 40%)。 4 NMR (500 MHz, CDC13) 5 10.92 (s, 1H), 8.68-8.61 (m, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.50 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.26-7.21 (m, 1H), 7.14-7.07 (m, 2H), 6.87 (s, 1H), 6.80 (s, 1H), 4.69-4.56 (m, 2H), 3.99 (dd, J = 10.7, 2.5 Hz, 1H), 3.87 (d,
J = 14.6 Hz, 1H), 3.27-3.20 (m, 1H), 3.08 (t, J = 12.6 Hz, 2H), 2.97-2.81 (m, 4H), 2.66-2.46 (m, 3H), 2.25 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.84 (s, 3H), 1.82 (s, 3H), 1.73-1.61 (m, 2H), 1.54-1.42 (m, 2H)。 MS m/z 624.7 [M+H]+。
实施例 44: 化合物 33R的制备
Figure imgf000069_0001
将化合物 25R-la (100 mg, 0.40 mmol), 1-环丙基 -4 -哌啶酮 ( 33R-la, 168 mg, 1.20 mmol ) 和 2滴醋酸的甲醇 ( 6 mL) 混合液在室温下搅拌 1小时。 随后加入氰基硼氢化 钠 ( 76 mg, 1.20 mmol )， 反应混合物在室温下搅拌 3小时。 反应完毕后， 反应混合物 减压浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 20: 1, 2%氨水) 得到 黄色固体化合物 33R-lb (150 mg, 收率 100%)。 MS w/z 373.4 [M+H]+。
室温下向甲醇 ( 5 mL) 中加入化合物 33R-lb (150 mg, 0.40 mmol)和钮碳催化剂 (10%, 50 mg), 该反应混合物在室温和 1大气压的氢气氛围下搅拌 2小时。 TLC监测反 应完成。 反应混合物经过硅藻土过滤， 滤液经减压浓缩得到粗品。 所得粗品经硅胶柱 层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 20: 1, 2%氨水)得到棕色固体化合物 33R-1C (116 mg, 收率 84%)。 MS m/z 343.4 [M+H]+。
将化合物 33R-lc (50 mg, 0.15 mmol)和化合物 lk (55 mg, 0.18 mmol)溶于 2 -甲氧基 乙醇 ( 1.5 mL) 中， 再加入 HC1甲醇溶液 ( 2.5 M, 0.15 mL) 将反应混合物置于封管 中， 加热至 120 °C搅拌过夜。 TLC监测反应完毕， 反应混合物冷却至室温后减压浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 20: 1, 2%氨水)得到淡黄色固体 化合物 33R (70 mg, 收率 77%)。 4 NMR (500 MHz, CD3OD) 5 8.52-8.45 (m, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.62-T51 (m, 2H), T24
Figure imgf000070_0001
TO Hz, 1H), 6.96 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 6.80 (d, 2.1 Hz,
1H), 4.55 (t, 10.7 Hz, 1H), 3.97 (dd, J = 10.6, 2.6 Hz, 1H), 3.15-3.04 (m, 4H), 3.00 (d, J =
11.7 Hz, 1H), 2.91-2.80 (m, 2H), 2.73 (dd, 11.7, 4.2 Hz, 1H), 2.54-2.45 (m, 1H), 2.32-2.21 (m, 3H), 2.19 (s, 3H), 1.91-1.78 (m, 2H), 1.85 (s, 3H), 1.82 (s, 3H), 1.69-1.61 (m, 1H), 1.57-1.43 (m, 2H), 0.55-0.39 (m, 4H)。 MS m/z 622.7 [M+H]+。
实施例 45: 化合物 34R的制备
Figure imgf000070_0002
将化合物 23R (50 mg, 0.10 mmol), 1-甲基 -3 -氮杂环丁酮盐酸盐 ( 34R-la, 18 mg, 0.15 mmol ) , 无水氯化锌 ( 41 mg, 0.30 mmol ) 溶于甲醇 ( 3 mL) 中， 再加入氰基硼 氢化钠 ( 19 mg, 0.30 mmol ) 将反应混合物置于封管中， 加热至 100 °C搅拌 2小时。 TLC监测反应完毕。 反应混合物冷却至室温后减压浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离 纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 20: 1, 2%氨水)得到白色固体化合物 34R (21 mg, 收率 37%)。 lU NMR (500 MHz, CDC13) 5 10.90 (s, 1H), 8.69-8.63 (m, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.54-7.47 (m, 1H), 7.30-7.23 (m, 1H), 7.13-7.06 (m, 2H), 6.81 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 6.77 (s, 1H), 4.61 (t, J = 10.7 Hz, 1H), 4.01 (dd, J = 10.6, 2.8 Hz, 1H), 3.74-3.65 (m, 2H), 3.22-3.17 (m, 1H), 3.13-3.00 (m, 4H), 2.91-2.84 (m, 1H), 2.73-2.63 (m, 2H), 2.48 (s, 3H), 2.47-2.45 (m, 1H), 2.24 (s, 3H), 2.23-2.19 (m, 1H), 1.84 (s, 3H), 1.81 (s, 3H)。 MS m/z 568.6 [M+H]'
实施例 46: 化合物 34S的制备
Figure imgf000071_0001
将化合物 23S (38 mg, 0.08 mmol), 1-甲基 -3 -氮杂环丁酮盐酸盐 ( 34R-la, 14 mg, 0.11 mmol ) , 无水氯化锌 ( 31 mg, 0.23 mmol ) 溶于甲醇 ( 3 mL) 中， 再加入氰基硼 氢化钠 ( 14 mg, 0.23 mmol ) 。 将反应混合物置于封管中， 加热至 100 °C搅拌 2小时。 TLC监测反应完毕。 反应混合物冷却至室温后减压浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离 纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 20: 1, 2%氨水)得到白色固体化合物 34S (16 mg, 收率 37%)。 ^ NMR (500 MHz, CDC13) 5 10.90 (s, 1H), 8.70-8.62 (m, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.50 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.31-7.27 (m, 1H), 7.14-7.07 (m, 2H), 6.82 (s, 1H), 6.77 (s, 1H), 4.60 (t, J = 10.7 Hz, 1H), 4.01 (dd, J = 10.6, 2.8 Hz, 1H), 3.94-3.84 (m, 2H), 3.33-3.13 (m, 4H), 3.08-3.03 (m, 1H), 2.88 (td, J = 11.6, 2.5 Hz, 1H), 2.73-2.64 (m, 2H), 2.61 (s, 3H), 2.50
3H)。 MS
Figure imgf000071_0002
将化合物 35S-la (1.0 g, 5.65 mmol), 23S-la (1.22 g, 5.65 mmol)和氢氧化钾 ( 950 mg, 16.94 mmol ) 溶于二甲亚砜 ( 15 mL) 中， 室温下搅拌 3小时， 再在 60 °C下搅拌 3 小时。 反应完毕后， 待反应混合物冷却后将其倒入冰水中， 室温下搅拌 1小时。 混合 物再用二氯甲烷萃取 (3x30mL) 。 合并的有机相用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干 燥， 过滤后滤液减压浓缩得到粗品。 该粗品经硅胶柱层析分离纯化 (石油醚： 乙酸乙 酯： 二氯甲烷 =5:1:1)得到黄色固体化合物35S-lb (1.45 g, 收率 73%)。 MS w/z 354.4 [M+H]+。 室温下将化合物35S-lb (1.45 g, 4.10 mmol)溶于甲醇 (15mL) 中， 再滴加 HC1甲 醇溶液 (4.0M, 4mL) ， 混合液在 60 °C下搅拌 1小时。 TLC监测反应完毕。 反应混合 液减压浓缩除去大部分甲醇， 将析出的固体滤出干燥后得黄色固体化合物35S-1C
(1.08 g, 收率 91%)。 MS w/z 254.3 [M+H]+。
将化合物35S-lc (500 mg, 1.73 mmol), N-甲基 -4 -哌啶酮 (11R-Ia, 587 mg, 5.18 mmol) 和 4滴醋酸的甲醇 (8 mL) 混合液在室温下搅拌 1小时。 随后加入氰基硼氢化 钠 (326 mg, 5.18 mmol) , 反应混合物在室温下搅拌过夜。 反应完毕后， 反应混合物 减压浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 =20:1, 2%氨水) 得到 黄色固体化合物35S-ld (704 mg)直接用于下一步反应。 MS m/z 351.4 [M+H]+。
室温下向甲醇 (3 mL) 中加入化合物35S-ld (100 mg, 0.29 mmol)和钮碳催化剂
(10%, 80 mg), 体系中的空气用氢气置换， 然后该反应混合物在室温和 1大气压的氢气 氛围下搅拌 1小时。 TLC监测反应完成。 反应混合物经过硅藻土过滤， 滤液经减压浓 缩得到粗品。 该粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 =20:1, 2%氨水) 得到 黄色油状化合物35S-le (38 mg, 收率 41%)。 MS m/z 321.5 [M+H]+
将化合物35S-le (38 mg, 0.12 mmol)和化合物lk (41 mg, 0.13 mmol)溶于 2 -甲氧基 乙醇 (1.5mL) 中， 再加入 HC1甲醇溶液 (2.5 M, 0.12 mL) 。 将反应混合物置于封管 中， 加热至 120 °C搅拌过夜。 TLC监测反应完毕。 反应混合物冷却至室温后减压浓缩。 将所得混合物溶于少量二氯甲烷中，用饱和碳酸氢钠溶液中和，再用二氯甲烷萃取 (3 x 10 mL) 。 合并的有机相用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤后减压浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 =20:1, 2%氨水)得到白色固体化 合物35S (60 mg, 收率 84%)。 4 NMR (500 MHz, CDC13) 510.89 (s, 1H), 8.61-8.56 (m, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.54 (t, J 7.9 Hz, 1H), 7.31-7.27 (m, 1H), 7.13 (t, J 6.8 Hz, 1H), 7.07 (dd, 14.8, 2.4 Hz, 1H), 6.81 (s, 1H), 6.75 (s, 1H), 4.18-4.05 (m, 2H), 3.72-3.64 (m, 1H), 3.25-3.18 (m, 1H), 3.15-3.04 (m, 3H), 2.85 (dd, 10.9, 2.8 Hz, 1H), 2.81-2.74 (m, 1H), 2.67-2.59 (m, 1H), 2.50-2.42 (m, 1H), 2.47 (s, 3H), 2.40-2.22 (m, 3H), 1.95-1.86 (m,
4H), 1.84 (s, 3H), 1.82 (s, 3H) MS m/z 600.7 [M+H]+。
实施例48: 化合物36R的制备
Figure imgf000073_0001
将化合物 23R (200 mg, 0.40 mmol), l-Boc-3 -氮杂环丁酮 (36R-la, 103 mg, 0.60 mmol) , 无水氯化锌 ( 164 mg, 1.20 mmol) 溶于甲醇 (lOmL) 中， 再加入氰基硼氢 化钠 (76 mg, 1.20 mmol) 将反应混合物置于封管中， 加热至 100 °C搅拌 1小时。 TLC 监测反应完毕。 反应混合物冷却至室温后减压浓缩。所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 =20:1, 2%氨水)得到淡黄色固体化合物 36R-lb (258 mg)直接用于 下一步反应。 MS m/z 654.7 [M+H]+
将化合物 36R-lb (258 mg, 0.52 mmol)溶于甲醇 (10 mL) 中， 再加入 HC1的二氧 六环溶液 (4.0M, 3mL) 反应混合物在 40 °C下搅拌 2小时。 TLC监测反应完毕。 反 应混合物冷却至室温后减压浓缩。 将所得残余物溶于少量甲醇中， 用氨水中和， 再减 压浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 =12:1, 2%氨水)得到淡 黄色固体化合物 36R-lc (185 mg, 两步收率 83%)。 MS w/z 554.6 [M+H]+。
将化合物 36R-lc (70 mg, 0.13 mmol)和二异丙基乙基胺 ( 34 mg, 0.26 mmol ) 溶于 二氯甲烷 (10 mL)中， 0 °C下缓慢滴加乙酰氯 (10 mg, 0.13 mmol)的二氯甲烷 (1 mL) 稀释液。 反应混合液在室温下搅拌 15分钟。 反应完毕后， 反应混合物在减压条件下浓 缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 =15:1, 2%氨水)得到白色固 体化合物 36R(31mg, 收率 41%)。 lU NMR (500 MHz, CDC13) 511.21 (s, 1H), 8.67-8.62 (m, 1H), 8.01 (d, J 1.2 Hz, 1H), 7.60-7.47 (m, 2H), 7.32-7.27 (m, 1H), 7.18-7.08 (m, 2H), 6.80 (dd, J 10.7, 2.2 Hz, 1H), 4.65-4.56 (m, 1H), 4.17-4.11 (m, 1H), 4.07-3.91 (m, 3H), 3.89-3.78 (m, 1H), 3.23 (d, 10.3 Hz, 1H), 3.17-3.06 (m, 2H), 2.94-2.86 (m, 1H),
2.83-2.70 (m, 2H), 2.57-2.49 (m, 1H), 2.32-2.25 (m, 1H), 2.25 (s, 3H), 1.89 (d, 1.9 Hz, 3H), 1.85 (s, 3H), 1.82 (s, 3H)。 MS m/z 596.5 [M+H]+。
实施例 49: 化合物 36S的制备
Figure imgf000074_0001
将化合物 23S (237 mg, 0.47 mmol), l-Boc-3 -氮杂环丁酮 (36R-la, 122 mg, 0.71 mmol) , 无水氯化锌 ( 194 mg, 1.42 mmol) 溶于甲醇 (15mL) 中， 再加入氰基硼氢 化钠 (90 mg, 1.42 mmol) 将反应混合物置于封管中， 加热至 100 °C搅拌 1小时。 TLC 监测反应完毕。 反应混合物冷却至室温后减压浓缩。所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 =20:1, 2%氨水) 得到淡黄色固体化合物 36S-la (340 mg)直接用于 下一步反应。 MS w/z 654.7 [M+H]+。
将化合物 36S-la (340 mg, 0.47 mmol)溶于甲醇 (15mL) 中， 再加入 HC1的二氧六 环溶液 (4.0M, 3mL) 反应混合物在 40 °C下搅拌 2小时。 TLC监测反应完毕。 反应 混合物冷却至室温后减压浓缩。 将所得残余物溶于少量甲醇中， 用氨水中和， 再减压 浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 12:1, 2%氨水) 得到淡黄 色固体化合物 36S-lb (206 mg, 两步收率 78%)。 MS w/z 554.6 [M+H]+。
化合物 36S-lb (40 mg, 0.07 mmol)和二异丙基乙基胺 ( 19 mg, 0.14 mmol)溶于二 氯甲烷 (6mL) 中， 0°C下缓慢滴加乙酰氯 (6 mg, 0.07 mmol) 的二氯甲烷 (l mL) 稀释液。 反应混合液在室温下搅拌 15分钟。 反应完毕后， 反应混合物在减压条件下浓 缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 =15:1, 2%氨水)得到淡黄色 固体化合物 36 S (24 mg, 收率 56%)。 4 NMR (500 MHz, CDC13) 5 1 1.10 (s, 1H), 8.69-8.59 (m, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.54-7.46 (m, 1H), 7.35-7.27 (m, 2H), 7.17-7.07 (m, 2H), 6.80 (dd, J = 10.5, 2.3 Hz, 1H), 4.65-4.56 (m, 1H), 4.19-4.10 (m, 1H), 4.07-3.91 (m, 3H), 3.89-3.77 (m, 1H), 3.24 (d, J = 11.1 Hz, 1H), 3.19-3.04 (m, 2H), 2.95-2.85 (m, 1H), 2.83-2.68 (m, 2H), 2.59-2.47 (m, 1H), 2.31-2.27 (m, 1H), 2.25 (s, 3H), 1.89 (d, J = 1.9 Hz,
3H), 1.85 (s, 3H), 1.82 (s, 3H)。 MS m/z 596.7 [M+H]+。
实施例 50: 化合物 37R的制备
Figure imgf000075_0001
将化合物 36R-lc (50 mg, 0.09 mmol)， 乙酸 ( 6 mg, 0.14 mmol ) ， 无水氯化锌 ( 37 mg, 0.27 mmol ) 溶于甲醇 ( 5 mL) 中， 再加入氰基硼氢化钠 ( 17 mg, 0.27 mmol ) 。 将反应混合物置于封管中， 加热至 70 °C搅拌 2小时。 TLC监测反应完毕。 反应混合物 冷却至室温后在减压条件下浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 20: 1, 2%氨水) 得到白色固体化合物 37R (24mg, 收率 46%)。 4 NMR (500 MHz, CDC13) 5 10.90 (s, 1H), 8.68-8.63 (m, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.53-7.47 (m, 1H), 7.31-7.22 (m, 1H), 7.13-7.05 (m, 2H), 6.81 (d, 2.2 Hz, 1H), 6.76 (s, 1H), 4.60 (t, J = 10.7 Hz, 1H),
4.00 (dd, J = 10.6, 2.8 Hz, 1H), 3.80-3.65 (m, 2H), 3.23-3.17 (m, 1H), 3.16-2.96 (m, 4H), 2.91-2.83 (m, 1H), 2.76-2.61 (m, 4H), 2.49 (dd, J = 1 1.4, 4.1 Hz, 1H), 2.27-2.21 (m, 1H), 2.24 (s, 3H), 1.84 (s, 3H), 1.82 (s, 3H), 1.16-1.01 (m, 3H)。 MS m/z 582.5 [M+H]'
实施例 51 : 化合物 37S的制备
Figure imgf000076_0001
将化合物 36S-lb (40 mg, 0.07 mmol)， 乙酸 ( 5 mg, 0.1 1 mmol ) ， 无水氯化锌 ( 30 mg, 0.22 mmol ) 溶于甲醇 ( 8 mL) 中， 再加入氰基硼氢化钠 ( 14 mg, 0.22 mmol ) 。 将反应混合物置于封管中， 加热至 70 °C搅拌 1小时。 TLC监测反应完毕。 反应混合物 冷却至室温后在减压条件下浓缩。 所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇
= 15 : 1, 2%氨水) 得到白色固体化合物 37S (30 mg, 收率 71%)。 4 NMR (500 MHz, CDC13) 5 10.90 (s, 1H), 8.72-8.59 (m, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.50 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.30-7.26 (m, 1H), 7.13-7.05 (m, 2H), 6.81 (d,
Figure imgf000076_0002
2.3 Hz, 1H), 6.76 (s, 1H), 4.60 (t, J =
10.7 Hz, 1H), 4.00 (dd, J = 10.6, 2.8 Hz, 1H), 3.82-3.61 (m, 2H), 3.20 (d, 10.7 Hz, 1H), 3.15-2.93 (m, 4H), 2.92-2.82 (m, 1H), 2.75-2.61 (m, 4H), 2.49 (dd, J = 11.5, 4.3 Hz, 1H),
2.24 (s, 3H), 2.22-2.17 (m, 1H), 1.84 (s, 3H), 1.82 (s, 3H), 1.15-1.01 (m, 3H) MS m/z 582.8 [M+H]+。
实施例 52: 化合物 38R的制备
Figure imgf000076_0003
将化合物 23R (40 mg, 0.08 mmol)， 3 -氧杂环丁酮 ( 38R-la, 9 mg, 0.12 mmol ) ， 无水氯化锌 ( 33 mg, 0.24 mmol )溶于甲醇 ( 3 mL) 中， 再加入氰基硼氢化钠 ( 15 mg, 0.24 mmol ) 将反应混合物置于封管中， 加热至 100 °C搅拌 2小时。 TLC监测反应完 毕。反应混合物冷却至室温后减压浓缩。所得粗品经硅胶柱层析分离纯化 (二氯甲烷： 甲醇 = 20: 1, 2%氨水)得到白色固体化合物 38R (25 mg, 收率 56%)。 NMR (500 MHz, CDCI3) 5 11.29 (s, 1H), 8.68-8.62 (m, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.74 (bs, 1H), 7.54-7.48 (m, 1H), 7.32-7.27 (m, 1H), 7.19-7.13 (m, 1H), 7.11 (d, 2.4 Hz, 1H), 6.80 (d, 2.2 Hz, 1H), 4.74-4.53 (m, 5H), 4.05 (dd, J 10.7, 2.8 Hz, 1H), 3.53-3.44 (m, 1H), 3.26-3.20 (m, 1H), 3.1 1-3.05 (m, 1H), 2.98-2.91 (m, 1H), 2.76-2.67 (m, 2H), 2.54-2.49 (m, 1H), 2.31-2.21 (m, 1H), 2.25 (s, 3H), 1.85 (s, 3H), 1.83 (s, 3H)。 MS m/z 555.4 [M+H]+。
实施例 53: 激酶活性抑制实验
1. EGFR(C797S)激酶活性抑制实验:
采用 Lantha screen Assay的方法， 测试化合物在激酶 EGFR(C797S)浓度 10 nM, ATP 浓度 0.1 (JV［下的抑制活性， 对照品均为 Staurosporine。 实验步骤：
1 ) 缓冲液配制： 50 mM HEPES , pH 7.5 , 0.0015% Brij-35。
2 ) 对照品 Staurosporine和测试样品配制： 将 Staurosporine和本发明实施例化合物在 100% DMSO中配制成梯度浓度溶液， 并用上述缓冲液将之稀释成 10% DMSO， 加入 384孔板。 例如， 化合物起始浓度为 10 ^M， 则用 100% DMSO配制成 1000 ^M， 并稀 释 10个浓度梯度， 并用 Echo®LIQUID HANDLE RS ( LABCYTE, USA) 转移 100 nL 到 384孔板中。
3 ) 将激酶 EGFR(C797S)用以下缓冲液稀释成所需浓度： 50 mM HEPES , pH 7.5， 0.0015% Brij-35 , 2 mM DTT。 转移 5 pL至 384孔板中， 与化合物共孵育 10-15分钟。
4 )将底物用以下缓冲液稀释成所需浓度： 50 mM HEPES， pH 7.5 , 0.0015% Brij-35 , 10 mM MgCl2 o 转移 5 pL至 384孔板起始反应， 并于室温反应 30分钟。 测试实验中各试剂的反应浓度如下表 1所示。
表 1.
Figure imgf000077_0001
5)用 TR-Fret dilution buffer配制 2倍检测溶液， Antibody终浓度为 2 nM, EDTA终 浓度为 10 mM,转移 10 pL检测溶液至 384孔板反应孔中，振荡混匀，室温下静置 60 min。
6 )在 Envision上读取在 340 nm处激发，发射 520 nm与 495 nm的比值，计算抑制率。 7) 用 XL-fit软件拟合 IC50。
代表性化合物的活性如表 2所示， 1(：5()值通过以下方式表示: A: 1 nM<IC50值 S 50 nM; B: 50 nM<IC50值 S 250 nM; C: 250 nM<IC50值 S 1000 nM; D: IC50值 >1000 nM。 表 2. EGFR(C797S)激酶活性抑制 (IC50值)
Figure imgf000078_0001
2. ALK激酶活性抑制实验:
方法 1 : 采用 Caliper迁移率变动检测技术 (Caliper mobility shift assay)测定 ALK蛋 白激酶活性。 将化合物用 DMSO溶解后用激酶缓冲液稀释： pH 7.5 的 50 mM HEPES， 0.0015% Brij-35, 10 mM MgCl2， 2 mM DTT； 在 384孔板中加入 5 |iL的 5倍反应终浓 度的化合物 (10%DMSO)。加入 10 |iL的 2.5倍酶溶液后在室温下孵育 10分钟， 再加入 10 |iL的 2.5倍底物 (Peptide FAM-P22和 ATP)溶液。 28 °C下孵育 60分钟后加 25 |iL终止液
(pH 7.5 的 100 mM HEPES, 0.015% Brij-35， 0.2% Coating Reagent #3 , 50 mM EDTA) 终止反应。 Caliper EZ Reader II(Caliper Life Sciences)上读取转化率数据。 把转化率转 化成抑制率数据(％抑制率 =(max-转化率 )/(max-min)* 100)。其中 max是指 DMSO对照的 转化率， min是指无酶活对照的转化率。 以化合物浓度和抑制率为横纵坐标， 绘制曲 线， 使用 XLFit excel add-in version5.4.0.8软件拟合曲线并计算 IC5o。
方法 2: 采用 Caliper迁移率变动检测技术 (Caliper mobility shift assay)测定 ALK蛋 白激酶活性。方法基本与方法 1相同，个别参数进行了调整。化合物的起始浓度为 1 mM, 依次进行 4倍稀释成 6个 (个别化合物稀释为 7个) 浓度点。 使用分液器 Echo 550向目 的板 3573转移 250 nL 100倍终浓度的化合物， 加入 10 |iL终浓度分别为 1.25 nM ALK， 室温下孵育 10分钟 (阴性对照孔含 10 |iL激酶缓冲液和 250 nL 100%DMSO； 阳性对照 孔含 10|iL的激酶溶液和 250nL 100%DMSO ) 。 在激酶 ALK上， 加入 15 |iL终浓度为 30 |iM的 ATP和 3 |iM底物 22号肽混合溶液反应 25分钟； 加入 30 |iL含 EDTA的终止检测液 停止激酶反应。 用 Caliper EZ Reader读取转化率。 换算抑制率％ = (阳性对照转化率均 值％ -样品转化率％ /(阳性对照转化率均值％-阴性对照转化率均值％)。 其中： 阴性对 照孔， 代表没有酶活孔的转化率读数； 阳性对照孔， 代表没有化合物抑制孔的转化率 读数。 以浓度的 log值作为 X轴， 百分比抑制率为 Y轴， 采用分析软件 GraphPad Prism 5 的 log(inhibitor) vs. response -Variable slope拟合量效曲线，从而得出各个化合物对酶活 性的 IC5o值。 计算公式： Y=Bottom + (Top-Bottom)/(l + 10A((LogIC5o-X)*HillSlope)) o 代表性化合物的活性如表 3所示， 1（：50值通过以下方式表示：
A: 1 nM<IC50值 $ 50 nM; B: 50 nM<IC50值 S 250 nM; C: 250 nM<IC50值 S 1000 nM; D: IC50值 >1000 nM。
表 3. ALK激酶活性抑制 (IC50值)
Figure imgf000079_0001
注： 化合物 1-16R用方法 1测试， 化合物 25R-32R用方法 2测试。 3. EGFR (T790M/L858R/C797S)激酶活性抑制实验：
采用 Caliper迁移率变动检测技术 (Caliper mobility shift assay)的方法检测化合物 对 EGFR(T790M/L858R/C797S)激酶的活性抑制作用。 基本方法同 ALK的活性测试方 法 2相同。 化合物测试浓度为 2 |iM起始， 5倍稀释成 6个 (个别化合物为 7个) 浓度点。 使用分液器 Echo 550向目的板 3573转移 250 nL 100倍终浓度的化合物， 加入 10 |iL终浓 度为 2.5nM的 EGFR(T790M/L858R/C797S)的激酶溶液， 室温下孵育 10分钟 (阴性对照 孔含 10 |iL激酶缓冲液和 250 nL 100%DMSO； 阳性对照孔含 10 |iL的激酶溶液和 250 nL 100%DMSO ) 加入 15 |iL终浓度为 40 |iM的 ATP和 3 |iM底物 22号肽混合溶液反应 60 分钟。 加入 30 |iL含 EDTA的终止检测液停止激酶反应。 用 Caliper EZ Reader读取转化 率。 换算抑制率％ = (阳性对照转化率均值％ -样品转化率％ /(阳性对照转化率均值％ - 阴性对照转化率均值％)。 其中： 阴性对照孔， 代表没有酶活孔的转化率读数； 阳性对 照孔， 代表没有化合物抑制孔的转化率读数。 以浓度的 log值作为 X轴， 百分比抑制率 为 Y轴， 采用分析软件 GraphPad Prism 5的 log(inhibitor) vs. response -Variable slope拟 合量效曲线， 从而得出各个化合物对酶活性的 IC5Q值。 计算公式： Y=Bottom + (Top-Bottom)/(l + 10A((LogIC5o-X)*HillSlope))o
代表性化合物的活性如表 4所示， 1(：5()值通过以下方式表示：
A: IC50值 S 3 nM； B: 3 nM<IC50值 S 15 nM; C: 15 nM<IC50值 S 100 nM; D: IC50值 >100 nM。
表 4 EGFR (T790M/L858R/C797S)激酶活性抑制 (IC50值)
Figure imgf000080_0001
Figure imgf000081_0001
4. MAP4K1(HPK1)激酶活性抑制实验：
采用 Caliper迁移率变动检测技术 (Caliper mobility shift assay)的方法检测化合物 对 MAP4K1(HPK1)激酶的活性抑制作用。 化合物测试起始浓度为 500 nM, 5倍稀释， 5 个浓度点。 使用分液器 Echo 550向目的板 3573转移 250 nL 100倍终浓度的化合物， 加 入 10 |iL终浓度为 1.25Nm MAP4Kl(HPKl)的激酶溶液， 室温下孵育 10分钟 (阴性对照 孔含 10 |iL激酶缓冲液和 250 nL 100%DMSO； 阳性对照孔含 10 |iL的激酶溶液和 250 nL 100%DMSO ) 在激酶 MAP4K1(HPK1) ， 加入 15 |iL终浓度为 10.1 |iM的 ATP和 3 |iM 底物 25号肽混合溶液反应 120分钟。 加入 30 |iL含 EDTA的终止检测液停止激酶反应。 用 Caliper EZ Reader读取转化率。 换算抑制率％ = (阳性对照转化率均值％ -样品转化 率％ /(阳性对照转化率均值％ -阴性对照转化率均值％)。 其中： 阴性对照孔， 代表没 有酶活孔的转化率读数； 阳性对照孔， 代表没有化合物抑制孔的转化率读数。 以浓度 的 log值作为 X轴，百分比抑制率为 Y轴，采用分析软件 GraphPad Prism 5的 log(inhibitor) vs. response -Variable slope拟合量效曲线， 从而得出各个化合物对酶活性的 IC5o值。计 算公式： Y=Bottom + (Top-Bottom)/(l + 10A((LogIC5o-X)*HillSlope))o
代表性化合物的活性如表 5所示， 1(：5()值通过以下方式表示：
A: IC50值 S 1 nM； B: 1 nM<IC50值 S 10 nM; C: 10 nM<IC50值 S 100 nM; D: IC50值 >100 nMo
表 5. MAP4K1 (HPK1 )激酶活性抑制 (IC5o值)
Figure imgf000081_0002
Figure imgf000082_0002
实施例 54: Ba/F3 EGFR（dell9-T790M-C797S） 细胞抗増殖实验
方法 1 : 细胞培养： Ba/F3_EGFR dell9/T790M/C797S细胞培养基为 RPMI-1640 + 10% FBS + 1%双抗。 细胞置于 37 °C、 5% C02培养箱中培养。
细胞铺板及化合物处理： 1） 细胞常规培养至细胞饱和度为 80%-90%， 数量到达 要求时， 收取细胞。 2） 用相应的新鲜培养基重悬， 取少量细胞计数， 配制成合适密 度的细胞悬液。 3） 将细胞悬液以 700个 /孔接种到 384孔板中， 每孔 30 |iL。 4） 用 Echo 将化合物加入对应的细胞孔内。化合物最高起始浓度为 1-10 pM， 3倍稀释， 8个浓度， 空白对照孔为细胞加 0.1% DMSO， 正对照孔为细胞加 10
Figure imgf000082_0001
的 Brigatinib。 细胞在 37 °C、 5% C02培养箱中培养 72 h。
CTG方法检测： 1） 每孔加 30 |iL CTG试剂 （CelltiterGlo试剂盒） ， 避光 37 °C、
5% CO2条件下静置 30 min。 2） 用 Envision仪器读取化学发光信号值。
数据分析： IC5Q结果由 GraphPad PriSm 6软件进行分析。利用以下非线性拟合公式 来得到化合物的 IC5Q（半数抑制浓度）： Y=Bottom +（Top-Bottom）/（l + 10A（（LogIC50-X） xHillSlope））。 X: 化合物浓度 log值； Y : 抑制率（％inhibition） ; 抑制率（％inhibition）
= （空白对照孔读数-化合物孔读数） / （空白对照孔读数-正对照读数） x l00。
方法 2: 细胞铺板及化合物处理： 1） 取 Ba/F3_EGFR Dell9/T790M/C797S细胞， 800 rpm离心 5 min， 弃掉上清液， 重悬于新鲜培养基 （RPMI-1640+10% FBS） ， 取出 少量细胞用 ViCell计数。 2） 调整细胞密度， 细胞以 2000/孔接种于 384孔板中， 37 °C, 5% C02培养箱中孵育 4小时。 3） Tecan HP D300设置程序， 将化合物加入孔板中。 化 合物最高起始浓度为 1 -4 pM， 3倍稀释， 9个浓度， 每孔中 DMSO含量统一到 0.2%。 细 胞在 37 °C、 5% C02培养箱中培养 72 h。
CTG方法检测： 1） 将 CTG试剂和细胞板取出放置室温平衡 30 min， 每孔加 25 |iL CTG, 中速震荡 2 min, 1000 rpm离心 1 min, 室温静置 10 min。 2） Envision仪器读取 化学发光信号值。
数据分析： IC5Q结果由 IDBS公司的 XL-fit 5.0软件进行分析。
代表性化合物的活性如表 6所示， 1(：5()值通过以下方式表示：
A: IC50值 S 20 nM; B: 20 nM<IC50值 S 100 nM; C: 100 nM<IC50值 S 200 nM; D: IC50值 >200 nMo
表 6. BaF3_EGFR(dell9-T790M-C797S) 细胞抗增殖活性抑制 (IC50值)
Figure imgf000083_0001
实施例 55: 大鼠体内的药物动力学研究
仪器： Waters 生产的 XEVO TQ-S液质联用仪， 所有的测定数据由 Masslynx V4.1 软件采集并处理， 用 Microsoft Excel计算和处理数据。 用 WinNonLin 8.0软件， 采用统 计矩法进行药代动学参数计算。 主要包括动力学参数 Tmax、 T I/2 > Cmax、 AUClast等。 色 谱柱： ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mmx 50 mm , 1.7 pm）; 柱温 40 °C; 流动相 A为 水（0.1%甲酸）， 流动相 B为乙腈， 流速为 0.350毫升 /分钟， 采用梯度洗脱， 洗脱梯度为 0.50min: 10%B； 1.50min: 10%B； 2.30min: 95%B； 2.3 lmin： 10%B； 3.00min: stop。 进样量： 5 |xL。 动物： SD雄性大鼠 3只， 体重范围 200-220 g， 购入后在实验动物中心实验室饲养 2天后使用， 给药前 12小时及给药后 4小时内禁食， 试验期间自由饮水。 大鼠灌胃后按 既定的时间内点取血样。
溶媒： 0.5% Methylcellulose（含 0.4% Tween 80和 1%乙醇的水溶液）。 灌胃给药溶 液的配制： 精密称量化合物， 加入溶媒中， 常温下超声 5分钟使药品完全溶解， 配制 成 0.3 毫克 /毫升的药液。 药物样品： 本发明专利式（I）所示结构的代表性化合物， 一般采取多个结构类似的 样品（分子量相差在 2个单位以上）， 准确称量， 一起给药（cassette PK）。 这样可以同时 筛选多个化合物， 比较它们的口服吸收率。 也采用单一给药来研究药物样品在大鼠体 内的药物动力学。
灌胃给药后分别于 0.25、 0.5、 1、 2、 4、 9、 12和 24小时眼眶取血， 于肝素钠处理 的塑料离心管中， 离心后取上清液血浆用于 LC-MS/MS分析。 准确称量化合物配制成不同的浓度， 在质谱上进行定量分析， 从而建立起标准曲 线， 然后测试上述血浆里化合物的浓度， 得出不同时间点的化合物浓度。 所有的测定 数据由相关的软件采集并处理， 采用统计矩法进行药代动学参数计算（主要包括动力 学参数 Tmax、 TI/2 > Cmax、 AUClast等）。 结果如下：
表 7. 化合物在 SD大鼠上经灌胃给药后的药学动力学参数
Figure imgf000084_0001
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独 引用作为参考那样。 此外应理解， 在阅读了本发明的上述讲授内容之后， 本领域技术 人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书 所限定的范围。

Claims

权 利 要 求 书
1、 一种如下式 (I)所示结构的化合物， 或其光学异构体 (包括消旋体、 单一的对映异 构体、 可能的非对映异构体) ， 药学上可接受的盐， 前药， 氘代衍生物， 水合物， 溶剂合 物：
Figure imgf000086_0001
式 (I)中:
“*”表示手性中心；
各个 R各自独立为 CM烷基； 各个 R1各自独立为氨、 気、 素、 Ci.4焼基、 C2.4婦基、 C2.4块基、 C3.6环焼基、 3 -至 8- 元杂环基、 芳基、 杂芳基、 OR\ 或 CN;
各个 R2各自独立为氨、 気、 素、 Ci.4焼基、 C2.4婦基、 C2.4块基、 C3.6环焼基、 3 -至 8- 元杂环基、 芳基、 杂芳基、 或 CN;
各个 R3各自独立为氢、 氘、 或<：14烷基； 或当两个 R3同时连接到同一个碳原子上时， 这 两个 R3与其相连的碳原子可以任选地共同形成羰基 (C=0);
各个 R4各自独立为氢、 氘、 卤素、 CM烷基、 CM卤代烷基、 C2.4烯基、 C2.4炔基、 ORh > SR\ NRhR\ CN、 C(0)Re、 C(0)0Rh， C(0)NRhRh、 0C(0)Re、 NRhC(0)Re、 或 S(0)2Re;
J和 G各自独立地为 NRf、 0、 S、 S(O)、 S(0)2或 CRgRg;
m为 0、 1、 2、 3、 或 4;
n为 0、 1、 2、 或 3 ;
p为 0、 1、 或 2;
q为 0、 1、 2、 或 3 ;
Rf为氢、 Ci.8焼基、 Ci.8 代焼基、 C2.8婦基、 C2.8块基、 C3.8环焼基、 3 -至 12 -兀杂环基、 芳基、 杂芳基、 C(0)Re、 C(0)0R\ C(0)NRhR\ S(0)2Re、 或 S(0)2NRhRh; 其中， 上述各 个基团为未取代或被 1-3个 Re取代； 各个 Re各自独立地为选自下组的基团： 氢 !、 Cl.4焼基、 Cl.4 代焼基、 Cl.4焼氧基取代的 C14烷基、 C2.4烯基、 C2.4卤代烯基、 C14烷氧基取代的 C2.4烯基、羟基取代的 C2.4烯基、二 (CM 焼基)胺基取代的 C2.4婦基、 C3.8环焼基取代的 C2.4婦基、 3 -至 8 -兀杂环基取代的 C2.4婦基、 芳 基取代的 C2.4烯基、 杂芳基取代的 C2.4烯基、 C2.4炔基、 C2.4卤代炔基、 CM烷氧基取代的 C2.4 炔基、 羟基取代的 C2.4炔基、 二 (CM烷基 )胺基取代的 C2.4炔基、 C3.8环烷基取代的 C2.4炔基、 3 -至 8 -元杂环基取代的 C2.4炔基、 芳基取代的 C2.4炔基、 杂芳基取代的 C2.4炔基、 C3.8环烷基、 3 -至 8 -元杂环基、 芳基、 或杂芳基； 各个 Rg各自独立地选自下组： 氢、 卤素、 CM烷基； 或两个 1^与其相连的碳原子共同 形成羰基 (C=0); 或两个 Rg与其连接的同一个碳原子一起形成 3 -至 8 -元环状结构， 此环状结 构任选地含有 0、 1或 2个选自 N、 0、 S的杂原子；
各个 Rh各自独立为氢、 CM烷基； 或两个 Rh与其连接的氮原子一起形成 3 -至 -8元杂环 基， 此杂环基含有 1或 2个 N原子以及 0或 1个选自 0、 S的杂原子；
其中， 各个上述的烷基、 烯基、 炔基、 环烷基、 杂环基、 芳基和杂芳基任选地且各自 独立地被 1-3个各自独立地选自下组的取代基取代： 卤素、 C14烷基、 C14卤代烷基、 C2.4烯 基、 C2.4炔基、 C3.8环烷基、 3 -至 8 -元杂环基、芳基、杂芳基、 CN、 N02、 OR\ SR\ NRhRh、 C(0)Re > C(0)0R\ C(0)NRhR\ NRhC(0)Re > 或 S(0)2Re， 前提条件是所形成的化学结构是 稳定的和有意义的； 其中 R^PRh的定义如上所述；
除非特别说明， 上述的芳基为含有 6-12个碳原子的芳香基团； 杂芳基为 5 -至 15 -元杂芳 香基团； 环状结构为饱和的或不饱和的、 含杂原子或不含杂原子的环状基团。
2、 如权利要求 1所述的化合物， 或其光学异构体 (包括消旋体、单一的对映异构体、 可能的非对映异构体) ， 药学上可接受的盐， 前药， 氘代衍生物， 水合物， 溶剂合物， 其 特征在于， 式①为：
Figure imgf000087_0001
其中各个基团的定义如权利要求 1中所述。
3、 如权利要求 2所述的化合物， 其特征在于， 各个 R各自独立为 Ci.2烷基 各个 R1各自独立为氢、 氖、 卤素、 或(^.2焼基；
各个 R2各自独立为氢、 氖、 卤素、 或(^.2焼基； 各个 R3各自独立为氢 CM烷基； 或当两个 R3同时连接到同一个碳原子上时， 这两个 R3与其相连的碳原子共同形成羰基 (C=0);
各个 R4各自独立为氢、 氘、 卤素、 CM烷基、 NRhR\ 或 NRhC(0)Re;
m为 0、 1、 或 2;
n为 0、 1、 或 2;
p为 0、 1、 或 2;
q为 0、 1、 或 2;
其中 Re和 Rh的定义如权利要求 1中所述。
4、 如权利要求 3所述的化合物， 其特征在于， 式 (I)为:
Figure imgf000088_0001
其中 R2为 F、 C1、 或 Br; 各个 R3各自独立为氢或 CM烷基； 或当两个 R3同时连接 到同一个碳原子上时，这两个 R3与其相连的碳原子共同形成羰基 (C=0);各个 R4各自独立 为氢、 氖、 卤素、 CM焼基、 NRhRh＞ 或 NRhC(0)Re; n为 0、 1、 或 2; q为 0、 1、 或 2; 其中 J、 G、 自 Re、 和 Rh的定义如权利要求 1中所述。
Figure imgf000088_0002
“一”表示上述结构片段与式 (Ilia)中其它结构的连接位点； 其中， 各个 R3各自独立为氢或。^烷基； 当两个 R3连接在同一个碳原子上时， 两 个 R3和连接它们的碳原子可以一起组成 C=0;
各个 R4各自独立为氢、 氘、 卤素、 Cw烷基、 NRhR\ 或 NRhC(0)Re;
n为 0、 1、 或 2; q为 0或 1
Rf为氢、 Ci.4焼基、 CM 代焼基、 C2.4婦基、 C2.4块基、 C3.6环焼基、 3 -至 9 -兀杂环基、 芳基、 杂芳基、 C(0)Re、 C(0)0R\ C(0)NRhR\ S(0)2Re > 或 S(0)2NRhRh; 其中各个烷基、 烯基、 炔基、 环烷基、 杂环基、 芳基和杂芳基任选地且各自独立地被 1-3个各自独立地选自 下组的取代基取代： 素、 Ci.4焼基、 C2.4婦基、 C2.4块基、 C3.8环焼基、 3 -至 8 -兀杂环基、 芳基、杂芳基、 CN、 N02、 OR\ SR\ NRhR\ C(0)Re、 C(0)0Rh > C(0)NRhRh、 NRhC(0)Re、 S(0)2Re > 或 S(0)2NRhRh ; 其中 R^PRh的定义如权利要求 1中所述。
6、 如权利要求 5所述的化合物， 其特征在于， 式 (I)为：
Figure imgf000089_0001
(IVa) (IVb)
其中， 各个 R4各自独立为氢、 氘、 卤素、 Cw烷基、 NRhR\ 或 NRhC(0)Re; q为 0或 1
Rf为氢、 Ci.4焼基、 CM 代焼基、 C2.4婦基、 C2.4块基、 C3.6环焼基、 3 -至 9 -兀杂环基、 芳基、 杂芳基、 C(0)Re、 C(0)0R\ C(0)NRhR\ S(0)2Re > 或 S(0)2NRhRh; 其中各个烷基、 烯基、 炔基、 环烷基、 杂环基、 芳基和杂芳基任选地且各自独立地被 1-3个各自独立地选自 下组的取代基取代： 素、 Ci.4焼基、 C2.4婦基、 C2.4块基、 C3.8环焼基、 3 -至 8 -兀杂环基、 芳基、杂芳基、 CN、 N02、 OR\ SR\ NRhR\ C(0)Re、 C(0)0Rh > C(0)NRhRh、 NRhC(0)Re、 S(0)2Re > 或 S(0)2NRhRh ; 其中 R^PRh的定义如权利要求 1中所述。
7、 如权利要求 6所述的化合物， 其特征在于， 所述的 Rf选自下组： 氢、 CM烷基、 CM卤代烷基、 C2.4烯基、 C2.4炔基、 C3.6环烷基、 3 -至 9 -元杂环基、 芳基、 杂芳基、 C(0)Re、 或 S(0)2Re ; 其中各个烷基、 烯基、 炔基、 环烷基、 杂环基、 芳基和杂芳基任选地且各自独 立地被 1-3个各自独立地选自下组的取代基取代： 卤素、 C14烷基、 C2.4烯基、 C2.4炔基、 C3.8 环烷基、 3 -至 8 -元杂环基、芳基、杂芳基、 CN、 N02、 ORe、 SRe、 NReRe、 C(0)Re、 C(0)0Re、 C(0)NReRe > NReC(0)Re > S(0)2Re、 或 S(0)2NRhRh; 其中 R^PRh的定义同上所述。 8、 如权利要求 6所述的化合物， 其特征在于， 式 (I)为:
Figure imgf000090_0001
Cw烷基、 NRhR\ 或 NRhC(0)Re;
Rf为氢、 CM烷基、 CM卤代烷基、 C3.6环烷基、 3 -至 9 -元杂环基、芳基、杂芳基、 C(0)Re、 或 S(0)2Re; 其中各个烷基、环烷基、 杂环基、 芳基和杂芳基任选地且各自独立地被 1-3个各 自独立地选自下组的取代基取代： 素、 Ci.4焼基、 C2.4婦基、 C2.4块基、 C3.8环焼基、 3- 至 8 -元杂环基、芳基、杂芳基、 CN、 N02、 OR\ SR\ NRhR\ C(0)Re、 C(0)0Rh > C(0)NRhR\ NRhC(0)Re > S(0)2Re > 或 S(0)2NRhRh ; 其中 R^PRh的定义如权利要求 1中所述。
9、 如权利要求 2-4任一所述的化合物， 其特征在于， 式 (I)为：
Figure imgf000090_0002
RhR\ 或 NRhC(0)Re;
Rf为氢、 CM烷基、 CM卤代烷基、 C3.6环烷基、 3 -至 9 -元杂环基、芳基、杂芳基、 C(0)Re、 或 S(0)2Re; 其中各个烷基、环烷基、 杂环基、 芳基和杂芳基任选地且各自独立地被 1-3个各 自独立地选自下组的取代基取代： 素、 Ci.4焼基、 C2.4婦基、 C2.4块基、 C3.8环焼基、 3- 至 8 -元杂环基、芳基、杂芳基、 CN、 N02、 OR\ SR\ NRhR\ C(0)Re、 C(0)0Rh > C(0)NRhR\ NRhC(0)Re > S(0)2Re > 或 S(0)2NRhRh ; 其中 R^PRh的定义如权利要求 1中所述。
10、 如权利要求 8所述的化合物， 其特征在于， 式 (I)为:
Figure imgf000091_0001
( VII ) 其中， R4为氢、 卤素、 Ci.2焼基；
s和 t各自独立为 1、 2、 或 3 ;
A为 NRk、 0、 或 CRgRg; 其中 Rk为氢、 CM烷基、 C14卤代烷基、 羟基取代的 CM烷基、
Cl.4焼氧基取代的 Cl.4焼基、 二 (Cl.4焼基)胺基取代的 Cl.4焼基、 C3.6环焼基、 3 -至 9 -兀杂环 基、 芳基、 杂芳基、 C(0)Re、 C(0)0R\ C(0)NRhR\ S(0)2Re、 或 S(0)2NRhRh; 其中各个
Re各自独立地选自下组： 氨、 Cl.4焼基、 Cl.4 代焼基、 C2.4婦基、 Cl.4焼氧基取代的 C2.4婦 基、 二 ( Ci.4焼基) 胺基取代的 C2.4婦基、 C2.4块基、 C3.6环焼基、 3 -至 8 -兀杂环基、 芳基、 或杂芳基； R3PRh的定义如权利要求 1中所述。
11、 如权利要求 1-10任一所述的化合物， 其特征在于， 所述的各个 Re各自独立地选 自下组的基团： 氨、 CK焼基、 CK 代焼基、 CK焼氧基取代的 C：L-4焼基、 〔2-4婦基、 CK 焼氧基取代的
Figure imgf000091_0002
婦基、 轻基取代的 婦基、 二 (CK焼基) 胺基取代的
Figure imgf000091_0003
婦基、 3 -至 6 -兀杂环基取代的
Figure imgf000091_0004
婦基、 芳基取代的
Figure imgf000091_0005
婦基、 杂芳基取代的
Figure imgf000091_0006
婦基、
Figure imgf000091_0007
块基、 C3-8 环烷基、 3 -至 8 -元杂环基、 芳基、 或杂芳基。
12、 如权利要求 1 -1 1任一所述的化合物， 其特征在于， 各个 R4各自独立为氢、 氘、 卤素、 Cw烷基、 或 NHC(0)CH=CH2。
13、 如权利要求 1所述的化合物， 其特征在于， 所述化合物选自下组：
Figure imgf000092_0001
Figure imgf000093_0001
Figure imgf000094_0001
Figure imgf000095_0001
Figure imgf000096_0001
其中， “*”表示手性中心， 在没有标明是 R或 S的情况下， 带“ *”的化合物表示可以是消旋 体， 也可以是 R构型， 或者是 S构型。 14、 如权利要求 1所述的式 (I)化合物， 或其光学异构体， 药学上可接受的盐， 前药， 氘代衍生物， 水合物， 溶剂合物的用途， 其特征在于， 用于：
(a)制备治疗与蛋白激酶活性或表达量相关的疾病的药物；
(b)制备蛋白激酶革巴向抑制剂； 和 /或
(c)体外非治疗性地抑制蛋白激酶的活性；
其中， 所述的蛋白激酶选自下组： EGFR、 EGFR (C797S)、 ALK、 HPK1等， 或其组 合。
15、 一种药物组合物， 其特征在于， 所述的药物组合物包括： (i)有效量的如权利要 求 1所述的式 I化合物， 或其光学异构体， 药学上可接受的盐， 前药， 氘代衍生物， 水合物， 溶剂合物； 和 (ii)药学上可接受的载体。
16、 一种式 (I)化合物的制备方法， 其特征在于， 包括步骤：
Figure imgf000097_0001
用式 4-D1化合物与式 1-A2反应， 得到式 4-D2-1或 4-D2-2化合物； 在钯催化剂存在下， 用式 4-D2-1或式 4-D2-2化合物与 Me4Sn进行反应， 得到式 4-D3-1 或式 4-D3-2化合物；
用式 4-D3-1或式 4-D3-2化合物进行还原反应， 得到式 4-D4-1或式 4-D4-2化合物； 用式 lb化合物与式 4-D4-1化合物或式 4-D4-2化合物进行反应， 得到式 Illf化合物或 Illg 化合物。 化合物 III域化合物 Illg是式 ®化合物的一部分。
17、 一种式 (I)化合物的制备方法， 其特征在于， 包括步骤
Figure imgf000098_0001
用式 5-E2化合物与式 lb化合物进行反应， 得到式 Illh化合物；
用式 Illh化合物与式 5-E3化合物进行还原胺化反应， 得到式 Illi化合物。 化合物 Illi是 式 (I)化合物的一部分。
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