WO2017173999A1 - 抗乙肝病毒的吡唑-噁唑烷酮类化合物 - Google Patents

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WO2017173999A1
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Definitions

  • the present invention relates to a class of pyrazole-oxazolidinone compounds having anti-hepatitis B virus activity.
  • Hepatitis B is a disease caused by hepatitis B virus (HBV), which is mainly caused by inflammatory lesions of the liver and can cause damage to multiple organs. Hepatitis B is widely prevalent in all countries of the world, mainly invading children and young adults, and a small number of patients can be converted into cirrhosis or liver cancer. Therefore, it has become a worldwide disease that seriously threatens human health and is one of the most widespread and most harmful diseases. There is no certain epidemic period for hepatitis B virus, which can occur all year round, but it is mostly distributed. In recent years, the incidence of hepatitis B has increased significantly.
  • HBV hepatitis B virus
  • HBV inhibition is directly related to the therapeutic effects of hepatitis B (see, for example, Klaus Klumpp and Thibaut Crupin, Capsid proteins of enveloped viruses as antiviral drug targets, Current Opinion in Virology, 2014, 5: 63-71; Timothy M. Block, Siddhartha Rawat, Carol L. Brosgart, Chronic hepatitis B: A wave of new therapies on the horizon, Antiviral Research, 121, 2015, 69-81).
  • interferon alpha has been widely used for the treatment of chronic HBV infection for many years, but interferon is only effective for certain types of patients and is poorly tolerated.
  • lamivudine (3'-thio-2',3'-dideoxycytosine) has been used for the treatment of HBV infection because of its significant inhibitory effect on HBV replication, but the rate of resistance has gradually increased. High, thus limiting its efficacy for a large proportion of patients.
  • adefovir dipivoxil (9-[2-[[bis[(pivaloyloxy)methyl]phosphinyl]methoxy]ethyl]adenine) is resistant to lamivudine
  • the patient is effective, but the drug has the disadvantage of a low sustained viral response rate (less than 20%), and the maximum tolerated dose and duration of treatment are often limited by nephrotoxicity.
  • Carbocyclic nucleoside compounds such as ketone monohydrate (Bristol-Myers Squibb) and acyclic nucleoside compounds having liver targeting such as Ribapharm also exhibit anti-HBV activity clinically.
  • the existing therapeutic drugs of HBV have the limitations of limited therapeutic effect, high drug resistance and high toxicity. Therefore, there is an urgent need for new drugs with high efficiency, low toxicity and different drug resistance spectrum.
  • Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical use of the above compounds.
  • One aspect of the invention relates to a compound of formula I or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or an enantiomer or tautomer thereof,
  • R 1 , R 2 and R 3 are each independently selected from hydrogen, halogen, optionally substituted alkyl, amino or hydroxy;
  • R 4 and R 5 is an amino group, and the other is selected from hydrogen, halogen, amino or hydroxy; or
  • R 6 is selected from the group consisting of hydrazine, halogen, amino or hydroxy
  • n 0, 1 or 2;
  • Q is an aryl or heteroaryl group optionally substituted with one or more halogens.
  • the chiral carbon in formula I can be in the R configuration or the S configuration.
  • Another aspect of the invention relates to a compound of formula I, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or an enantiomer or tautomer thereof, for use in inhibiting hepatitis B virus.
  • Another aspect of the invention relates to a compound of formula I, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or an enantiomer or tautomer thereof, for use in the treatment of a mammalian, particularly human, hepatitis B virus infection.
  • Another aspect of the invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a compound of formula I or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or an enantiomer or tautomer thereof, and a pharmaceutically acceptable carrier.
  • Another aspect of the invention relates to the use of a compound of formula I, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or an enantiomer or tautomer thereof, for the manufacture of a medicament for the inhibition of hepatitis B virus.
  • Another aspect of the invention relates to a method of inhibiting hepatitis B virus comprising administering to a subject in need thereof a therapeutically effective amount of a compound of formula I or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or an enantiomer or tautomer thereof thereof body.
  • One aspect of the invention relates to a compound of the formula I or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or an enantiomer or tautomer thereof:
  • R 1 , R 2 and R 3 are each independently selected from hydrogen, halogen, optionally substituted alkyl, amino or hydroxy;
  • R 4 and R 5 is an amino group, and the other is selected from hydrogen, halogen, amino or hydroxy; or
  • R 6 is selected from the group consisting of hydrazine, halogen, amino or hydroxy
  • n 0, 1 or 2;
  • Q is an aryl or heteroaryl group optionally substituted with one or more halogens.
  • the compounds of the present application may have tautomers.
  • the following two structural parts are identical to each other.
  • the compounds of the present application may have one or more stereoisomeric centers, and each isomeric center may exist in the R or S configuration or a combination thereof.
  • the chiral carbon of Formula I is in the R configuration and the structure is as shown in Formula I-R:
  • enantiomers and tautomers of a particular compound are understood to include all possible isomers and mixtures thereof.
  • the compounds of the present application include all conformationally different enantiomers, diastereomeric The conformation and tautomeric forms as well as their corresponding mixtures.
  • R 1 , R 2 and R 3 are each independently hydrogen or halogen; preferably, R 1 and R 3 are both hydrogen and R 2 is halogen; more preferably, R 1 and R 3 are both hydrogen and R 2 is bromine ;
  • the substituent is selected from the group consisting of halogen and alkoxycarbonylamino;
  • R 6 is hydrazine or halogen
  • Q is an aryl or heteroaryl group optionally substituted by one or more halogens, especially fluoro, said aryl being phenyl, said heteroaryl being selected from furanyl, pyrrolyl or thienyl.
  • R 6 in Formula I and Formula IR is fluoro.
  • Q in Formula I and Formula I-R is p-fluorophenyl.
  • Q in Formula I and Formula I-R is thienyl or furanyl, preferably furan-2-yl.
  • the compound of formula I is selected from the group consisting of
  • the compound of formula I is selected from the group consisting of
  • the compound of formula I is selected from the group consisting of
  • R 1 , R 2 and R 3 are each independently selected from the group consisting of hydrogen, C 1 -C 3 alkyl, halogen;
  • R 4 and R 5 is an amino group, and the other is selected from the group consisting of hydrogen, halogen, especially fluorine, amino group;
  • R 6 is halogen, especially fluorine
  • Q is an aryl or heteroaryl group optionally substituted by one or more halogens, especially fluoro, said aryl being phenyl, said heteroaryl being selected from furanyl, pyrrolyl, thienyl or pyridyl.
  • the alkyl group as R 1 , R 2 or R 3 is methyl.
  • the halogen as R 4 or R 5 is fluorine.
  • the halogen as R 6 is fluorine.
  • Q in Formula I and Formula I-R is p-fluorophenyl.
  • R 4 in Formula I and Formula IR is an amino group
  • R 5 is hydrogen
  • n is 0.
  • the compound of formula I is selected from the group consisting of
  • alkyl denotes a straight or branched saturated hydrocarbon group.
  • an alkyl group may include 1 to 6 carbon atoms, preferably 1 to 3 carbon atoms.
  • C 1 -C 3 alkyl refers to a straight or branched saturated hydrocarbon group having from 1 to 3 carbon atoms, including methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl.
  • C 1 -C 3 alkyl is preferably a methyl group.
  • alkoxy denotes -O-alkyl, wherein the term “alkyl” is as defined above.
  • C 1 -C 3 alkoxy refers to -OC 1 -C 3 alkyl.
  • halogen is fluoro, chloro, bromo or iodo. In some embodiments, the halogen is fluorine.
  • trifluoromethyl is a -CF 3 group.
  • trifluoromethoxy is a -OCF 3 group.
  • amino is a -NH 2 group.
  • heterocyclyl refers to a non-aromatic cyclic group formed from one or more heteroatoms selected from nitrogen, oxygen, sulfur, and one or more carbon atoms.
  • the heterocyclic group may be a 3- to 8-membered ring system containing 1 to 3 selected from the group consisting of nitrogen, oxygen, and sulfur, and preferably at least one of the hetero atoms is selected from nitrogen.
  • heterocyclic groups include, but are not limited to, pyrrolidinyl, pyrrolidinyl, pyrrolinyl, pyrrolinone, oxazolidinyl, oxazolidinone, oxazolinyl, oxazolinone, thiazolidinyl
  • a thiazolidinone group, a thiazolinyl group, a thiazolinone group can be bonded to the rest of the molecule through any suitable site on the ring.
  • aryl refers to a monocyclic or fused aromatic cyclic hydrocarbon group containing from six to ten carbon atoms.
  • examples of the aryl group include a phenyl group and a naphthyl group, of which a phenyl group is preferred.
  • heteroaryl refers to a fused or non-fused aromatic cyclic group formed by one or more heteroatoms selected from the group consisting of oxygen, nitrogen, sulfur and one or more carbon atoms, at least one of which The ring is a five to eight membered ring containing from 1 to 4 heteroatoms selected from nitrogen, oxygen and sulfur, preferably at least one heteroatom selected from nitrogen.
  • the two or more heteroatoms may be identical to each other, or some or all of the two or more heteroatoms may be different from each other, provided that The ring of the group does not contain two adjacent O or S atoms.
  • heteroaryl groups include, but are not limited to, pyrrolyl, furyl, thienyl, pyrazolyl, imidazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, thiazolyl, isothiazolyl, triazolyl, pyridyl, pyrimidinyl , pyrazinyl, pyridazinyl, benzimidazolyl, benzopyrazolyl, fluorenyl and the like.
  • a heteroaryl group can be bonded to the rest of the molecule through any suitable site on the ring.
  • the pyrrolyl group may be pyrrol-1-yl, pyrrol-2-yl, pyrrol-3-yl;
  • the furyl group may be furan-2-yl, furan-3-yl;
  • the thienyl group may be thiophen-2-yl, Thiophen-3-yl.
  • salts refers to those salts which retain the biological effectiveness and properties of the parent compound, which possess the desired pharmaceutical activity and which are not biologically and otherwise undesirable.
  • Such salts include, but are not limited to: (1) salt formation with an acid (acid salt), obtained by reaction of a free base of the parent compound with an inorganic or organic acid; inorganic acids including, but not limited to, hydrochloric acid, sulfuric acid, phosphoric acid, Methanesulfonic acid, organic acids including but not limited to acetic acid, trichloroacetic acid, propionic acid, butyric acid, maleic acid, p-toluenesulfonic acid, malic acid, malonic acid, cinnamic acid, citric acid, fumaric acid, camphoric acid , digluconic acid, aspartic acid, tartaric acid; (2) a salt (basic salt) formed by the acidic protons present in the parent compound being replaced by metal ions or complexed with an organic base.
  • Another aspect of the invention relates to a compound of formula I, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or an enantiomer or tautomer thereof, for use in inhibiting hepatitis B virus.
  • Another aspect of the invention relates to a compound of formula I, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or an enantiomer or tautomer thereof, for use in the treatment of a mammalian, particularly human, hepatitis B virus infection.
  • Another aspect of the invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a compound of formula I or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or an enantiomer or tautomer thereof, and a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the compounds of the invention may be combined with one or A wide variety of pharmaceutically acceptable carriers form suitable dosage forms for administration.
  • These dosage forms are suitable for oral administration, rectal administration, topical administration, and other parenteral administration (e.g., subcutaneous, intramuscular, intravenous, etc.).
  • dosage forms suitable for oral administration include capsules, tablets, granules, and syrups and the like.
  • the compound of the present invention contained in these preparations may be a solid powder or granule; a solution or suspension in an aqueous or non-aqueous liquid; a water-in-oil or oil-in-water emulsion or the like.
  • the above dosage forms can be prepared from the active compounds with one or more pharmaceutically acceptable carriers via conventional pharmaceutical methods.
  • a pharmaceutically acceptable carrier refers to an excipient or diluent that does not cause significant irritation to the organism and does not interfere with the biological activity and properties of the administered compound.
  • the above carriers need to be compatible with the active compound or other excipients.
  • commonly used non-toxic carriers include, but are not limited to, mannitol, lactose, starch, magnesium stearate, calcium carbonate, calcium phosphate, starch, cellulose and its derivatives, glucose, sucrose, gelatin, and the like.
  • Carriers for liquid preparations include water, physiological saline, aqueous dextrose, vegetable oil, ethylene glycol, polyethylene glycol, and the like.
  • the active compound can form a solution or suspension with the above carriers.
  • the pharmaceutical composition is in a unit dosage form suitable for single administration of precise dosages.
  • the amount of the compound ranges from about 0.001 mg/kg body weight/day to about 1000 mg/kg body weight/day. In some embodiments, the amount of the compound ranges from about 0.5 mg/kg body weight/day to about 50 mg/kg body weight/day. In some embodiments, the amount of the compound is from about 0.001 g/day to about 7 g/day. In other embodiments, the amount of the compound is from about 0.002 g/day to about 6 g/day. In other embodiments, the amount of the compound is from about 0.005 g/day to about 5 g/day.
  • a dose level below the lower limit of the above range may already be sufficient. In other embodiments, dose levels above the upper limit of the above range may be required.
  • the compound is administered in a single dose, once a day. In other embodiments, the compound is administered in multiple doses more than once a day.
  • the individual to which the pharmaceutical composition is administered is a mammal. In other embodiments, the mammal is a human.
  • the pharmaceutical composition further comprises at least one anti-HBV drug. In other embodiments, the pharmaceutical composition and the at least one anti-HBV drug are each combined into a combined product in separate dosage forms.
  • HBV drugs which may be HBV polymerase inhibitors, immunomodulators or interferons
  • the other HBV drugs may be lamivudine, telbivudine, tenofovir, entecavir, adefovir dipivoxil, alfafone, alloferon, celmoleukin, claf Ding, emtricitabine, famciclovir, Feilong, Baoganling CP, intepropen, interferon alpha-1b, interferon alpha, interferon alpha-2a, interferon beta-1a, interferon alpha-2, leukocytes Interleukin-2, mivotilate, nitazoxanide, peginterferon alfa-2a, ribavirin, interferon-A, sirolimus, euforavac, veldona, rintatolimod
  • additional drugs can be administered separately from the pharmaceutical compositions containing the compounds of the invention as part of a multi-dose regimen.
  • a drug may be part of a single dosage form, mixed with a compound of the invention in a single composition.
  • the two active agents can be administered simultaneously, sequentially or at intervals between each other to produce the desired activity of these agents.
  • Another aspect of the invention relates to a compound of formula I or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or an enantiomer or tautomer thereof, or a pharmaceutical composition of the invention, in the manufacture of a medicament for the inhibition of hepatitis B virus the use of.
  • the medicament is for treating a hepatitis B virus infection in a mammal, particularly a human.
  • Another aspect of the invention relates to a method of inhibiting replication of hepatitis B virus comprising administering to a subject in need thereof a therapeutically effective amount of a compound of formula I or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or an enantiomer or tautomer thereof thereof A construct or a pharmaceutical composition of the invention.
  • the method is for treating a hepatitis B virus infection in a mammal, particularly a human.
  • the term "therapeutically effective amount” may be one or more physiology that alleviates one or more symptoms of a disease or condition in a subject, causes a disease or condition, or its etiology. Or an amount of biochemical parameter that partially or completely returns to normal, and/or reduces the likelihood of a disease or condition.
  • diseases involved in hepatitis B virus infection include acute hepatitis, chronic hepatitis, cirrhosis, and hepatocellular carcinoma.
  • Symptoms of acute hepatitis B virus infection can be asymptomatic or can be the same as acute hepatitis.
  • a patient with a chronic viral infection may develop an active disease that can progress to cirrhosis or liver cancer.
  • PCR and enzyme-linked immunosorbent assay can be used to quantitatively detect the effect of the compounds of the present application on HBV replication.
  • the present invention also provides a process for the preparation of the above compounds, and a similar preparation process is disclosed in PCT/US/06/28343, filed on Jul. 21, 2006.
  • the preparation of the compounds of the invention may be referred to, but not limited to, the following methods:
  • the chiral resolution method of Berger can be summarized as follows: A racemic mixture (60 mg) is dissolved in methanol (2 mL), and the resulting solution is injected into a chiral column (ChiralPak AD-H SFC, id 1 cm x 25 cm). The conditions of the SFC were as follows: mobile phase: 65% CO 2 and 35% methanol, flow rate: 10 mL/min, detection wavelength: 220 nm. Stereoisomers can be separated at different retention times.
  • Phosphorus oxychloride 83.5 mL was slowly added dropwise to anhydrous DMF (68.75 mL) under anhydrous and ice-cooling conditions. After stirring for 30 min, 1-(4-bromophenyl) was taken under nitrogen. 2-(1-(4-fluorophenyl)ethylidene) ruthenium (125 g, 407.2 mmol) was dissolved in a small amount of DMF, and slowly added dropwise to the reaction mixture, stirred at room temperature for 1 h, and warmed to 70 ° C.
  • Step 8 3-(2-(1H-Benzo[d]imidazol-5-yl)ethyl)-2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H -pyrazol-4-yl)oxazolin-4-one
  • the reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hours, and 50 mL of water was added, and the mixture was extracted with ethyl acetate (60 mL), and the mixture was extracted with 10% sodium hydrogencarbonate solution and brine, dried over anhydrous sodium sulfate and evaporated to dryness.
  • the crude product was purified by reversed column chromatography to afford white crystals.
  • 1,2-Difluoro-4-nitro (20 g, 0.13 mol), ethyl cyanoacetate (19 g, 0.16 mol), potassium carbonate (35 g, 0.25 mol) was dissolved in acetonitrile and heated to 90 ° C overnight.
  • the reaction mixture was dried with EtOAc EtOAc m.
  • the combined ethyl acetate phases were washed twice with brine, dried over anhydrous sodium sulfate and filtered and evaporated.
  • reaction mixture was concentrated by flash evaporation and purified using silica gel column (EtOAc:EtOAc:EtOAc:EtOAc:EtOAc a crude product of -1H-pyrazolyl-4-yl)-3-(2-fluoro-4-nitrophenethyl)oxazolin-4one, which was then beaten with ethyl acetate and filtered, and dried in a filter cake oven. Solid (4.5 g, yield: 48%); MS: 569.1 [M+H] + .
  • Step 7 3-(2-Fluoro-5-nitro-4-acetamidophenethyl)-2-(3-(4-fluorophenyl)-1-(4-bromophenyl)-1H-pyridyl Oxazol-4-yl)oxazolidin-4-one
  • Step X 2-(1-(4-Bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)1H-pyrazol-4-yl)-3-(2-(5-fluoro-1H-benzo[ d] imidazolium-6-yl)ethyl)oxazolin-4-one
  • N-(2,6-Difluoro-4-nitrophenethyl)-2-hydroxyacetamide (2.5 g, 9.6 mmol) and 1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorobenzene -1H-pyrazole-4-carbaldehyde (3.3 g, 9.6 mmol) was dissolved in toluene (60 mL), and p-toluenesulfonic acid (825 mg, 4.8 mmol) was added. The reaction mixture was concentrated. The extract was washed with a 10% sodium hydrogen carbonate solution and a saturated aqueous sodium chloride solution, dried over anhydrous sodium sulfate and evaporated to dryness.
  • Step 7 3-(2,6-Difluoro-5-nitro-4-acetamidophenethyl)-2-(3-(4-fluorophenyl)-1-(4-bromophenyl)- 1H-pyrazol-4-yl)oxazolidin-4-one
  • Step 8 3-(2,6-Difluoro-5-nitro-4-acetamidophenethyl)-2-(3-(4-fluorophenyl)-1-(4-bromophenyl)- 1H-pyrazol-4-yl)oxazolidin-4-one
  • Step X 2-(1-(4-Bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)1H-pyrazol-4-yl)-3-(3,4-diamino-2,6-di Fluorophenethyl)oxazolin-4-one
  • Example 11 2-(1-(4-Bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)1H-pyrazol-4-yl)-3-(2-(4,6-difluoro-2) -carbonyl-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazol-5-yl)ethyl)oxazolin-4-one
  • Example 12 2-(1-(4-Bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazol-4-yl)-3-(2-(5,7-difluoro-) 1H hydrogen-benzo[d][1,2,3]triazol-6-yl)ethyl)oxazolin-4-one
  • Methyl methyl-2-(2-nitrophenyl)cyanocarboxylate (1.0 g, 3.26 mmol) was dissolved in DMSO (10 mL), sodium chloride (0.57 g, 9.80 mmol) and The reaction was carried out at 140 ° C for 1.5 hours, cooled to room temperature, water was added, EtOAc (EtOAc) 700 mg, yield: 76%).
  • Example 14 2-(1-(4-Bromophenyl)-3-(4-difluorophenyl)-1H-pyrazole)-3-(2-(3,3-difluoro-2-oxo) Porphyrin-5-ethyl)oxorphyrin-4-one
  • Step 8 2-(1-(4-Fluorophenyl)-3-(4-fluorophenyl)1H-pyrazol-4-yl)-3-(2-(6-fluoro-2-carbonyl-2) ,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazol-5-yl)ethyl)oxazolin-4-one
  • Example 16 6-(2- ⁇ 2-[1-(4-Bromo-phenyl)-3-(4-fluoro-phenyl)-1-hydro-pyrazol-4-yl]-4-carbonyl -oxazolin-3-yl ⁇ -ethyl)-3-hydro-2-carbonyl-benzoxazole
  • Step 8 6-(2- ⁇ 2-[1-(4-Bromo-phenyl)-3-(4-fluoro-phenyl)-1-hydro-pyrazol-4-yl]-4-carbonyl- Oxazolin-3-yl ⁇ -ethyl)-3-hydro-2-carbonyl-benzoxazole
  • Step X 5-(2-(2-(1-(4-Bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazol-4-yl)-4-oxazoline-3- Ethyl)benzo[d]oxazole-2(3H)-one
  • the reaction solution was cooled to room temperature, and 3 mL of glacial acetic acid was added via a syringe, and then heated to 130 ° C under a nitrogen atmosphere, and stirred for 3 hours.
  • the reaction mixture was cooled to room temperature, filtered over Celite, filtered, and ethyl acetate (50 mL), and the filtrate was washed once with 100 mL of water, and the aqueous phase was extracted once with ethyl acetate (50 mL) and the organic phase was washed three times with saturated brine.
  • the organic phase was dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and evaporated.
  • Step I O-(4-(2-(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazol-4-yl)-4-oxazoline) -3-yl)ethyl)-2-nitrophenyl)dimethylaminothiocarboxylic acid
  • N-(4-(2-Acetylaminoethyl)phenyl)acetamide (4.9 g, 22.3 mmol) was dissolved in concentrated sulfuric acid (30 mL), cooled to 0 ° C in an ice bath, and fuming nitric acid (2.1 g, 33.3 mmol) was slowly added dropwise to the reaction solution, and the ice bath was removed, and the mixture was reacted at room temperature for 1 hour.
  • reaction solution was slowly added to 400 mL of ice water by the wall of the bottle, stirred for 15 min, filtered, and the filter cake was washed with 50 mL of water, and the filter cake was dried to obtain crude N-(4-acetamido-3-nitrophenethyl)acetamide (5.2 g), used directly in the next reaction.
  • tert-Butyl-4-amino-3-nitrophenylcarbamate (1.8 g, 6.4 mmol) was dissolved in methanol (100 mL), Pd / C (0.36 g) was added, hydrogen was passed, and stirred at 30 ° C 16 After a while, filtration and concentration gave tert-butyl tert-butyl 3,4-diaminophenethylcarbamate (1.6 g, 6.4 mmol, yield: 100%). MS: 274.3 [M + Na] + .
  • tert-Butyl 3,4-diaminophenethylcarbamic acid tert-butyl ester (1.6 g, 6.4 mmol) was added to acetonitrile (30 mL) and N,N'-carbonyldiimidazole (CDI) (1.2) was added with stirring. g, 7.4 mmol). The reaction solution was warmed to 60 ° C and stirred for 3 hours.
  • Phosphorus oxychloride (3.78 g, 24.6 mmol) was slowly added dropwise to anhydrous DMF (3.3 mL) under ice-cooling. After stirring for 30 min, 1-(4-bromophenyl)- 2-(1-(Thien-2-yl)ethylidene) hydrazine (3.3 g, 11.18 mmol) was dissolved in a small amount of anhydrous DMF, and slowly added dropwise to the reaction mixture, stirred at room temperature for 1 hour, and warmed to 70 The reaction was continued for 5 hours at ° C. The reaction solution was poured into ice water and extracted with ethyl acetate.
  • reaction solution was concentrated by rotary distillation and purified by preparative HPLC to give 2-(1-(4-bromophenyl)-3-(thiophen-2-yl)-1H-pyrazol-4-yl)-3-(2) -(2-Oxo-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazol-5-yl)ethyl)oxazolidin-4-one (3.6 mg).
  • Phosphorus oxychloride (1.14 g, 7.46 mmol) was slowly added dropwise to anhydrous DMF (2 mL) under ice-cooling. After stirring for 30 min, 1-(4-bromophenyl)-2 -(1-(furan-3-yl)ethylidene)anthracene (1.0g, 3.39mmol) was dissolved in a small amount of anhydrous DMF, and slowly added dropwise to the reaction mixture, stirred at room temperature for 1 hour, warmed to 70 The reaction was continued for 5 hours at ° C. The reaction solution was poured into ice water and extracted with ethyl acetate.
  • Step 2 (5-(2-(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazol-4-yl)oxazolin-4-one- Methyl 3-yl)ethyl)-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)carbamate
  • the initial concentration of all compounds used in the in vitro anti-HBV activity assay was 1 ⁇ M, 3 fold dilution, 8 concentrations; the initial concentration of all compounds used in the cytotoxicity experiments was 100 ⁇ M, 3 fold dilution, 8 Concentration; the mother liquor of the compound was diluted with DMSO.
  • the control compound was lamivudine, which was set to 100 nM in the anti-HBV activity assay in vitro, and the initial concentration in the cytotoxicity experiment was 100 ⁇ M, 3-fold dilution, and 8 concentrations.
  • HepG2.2.15 cells (4 x 10 4 cells/well) were seeded into 96-well plates and incubated overnight at 37 ° C, 5% CO 2 . The next day, fresh culture medium containing different concentrations of compounds was added to the culture wells. On the fifth day, the old culture solution in the culture well was aspirated and fresh culture medium containing different concentrations of the compound was added. On the eighth day, the supernatant in the culture well was collected for extracting HBV DNA from the supernatant. The qPCR assay was used to detect the HBV DNA content in the supernatant of HepG2.2.15.
  • Example 26 Activity test of anti-nucleoside anti-HBV resistant strains in vitro
  • the compound was tested for the activity of anti-nucleoside anti-HBV resistant strains in vitro using a transient transfected cell model.
  • HepG2 cells (4 x 10 4 cells/well) transfected with the nucleoside HBV resistant strain were seeded into 96-well plates and cultured overnight at 37 ° C, 5% CO 2 . The next day, fresh culture medium containing different concentrations of compounds was added to the culture wells. On the fifth day, the old culture solution in the culture well was aspirated and fresh culture medium containing different concentrations of the compound was added. On the eighth day, the supernatant in the culture well was collected for extracting HBV DNA from the supernatant. The qPCR assay was used to detect the HBV DNA content in the supernatant of HepG2. The experimental results are shown in the following table (EC 50 nM):
  • IV and PO oral administration of test compounds in Sprague Dawley rats
  • blood samples were taken at different time points, and LC/MS/MS was used to determine the concentration of the test substance in the plasma of rats after administration of the test substance and calculate the correlation. parameter.
  • the time points of animal blood collection were: before administration, 5 min, 15 min, 30 min, 1 h, 2 h, 4 h, 6 h, 8 h and 24 h after administration.
  • Each animal was subjected to a jugular vein puncture or other suitable vein for about 0.3 mL of blood, and heparin sodium was anticoagulated.
  • Blood samples were collected and placed on ice, and plasma was separated by centrifugation (centrifugation conditions: 8000 rpm, 6 min, 4 ° C). Plasma samples were stored in a -70 ° C refrigerator before storage.
  • Mass Spectrometer API 4000, Applied Biosystems, Inc., Electrospray Ionization (ESI), Tandem Quadrupole Mass Analyzer.
  • ESI Electrospray Ionization
  • Mass spectrometry conditions ion source: electrospray ion source (ESI); auxiliary gas (Gas1): 60 psi; auxiliary gas (Gas2): 60 psi; curtain gas (CUR): 14 psi; collision gas (CAD): 6; ion source voltage ( IS): 5500V; ion source temperature (TEM): 550 ° C
  • the pharmacokinetic parameters of the test compound were calculated using the non-compartment model of the pharmacokinetic calculation software WinNonlin5.2.
  • mice Female BALB/c mice were given a single subcutaneous test compound, blood samples were taken at different time points, LC/MS/MS was used to determine the concentration of the test substance in the rat plasma after administration of the test substance and the relevant parameters were calculated.
  • the time points of animal blood collection were: before administration, 5 min, 15 min, 30 min, 1 h, 2 h, 4 h, 8 h and 24 h after administration.
  • Mass spectrometer Triple Quad 5500. Mass spectrometry conditions: SRM detection
  • the pharmacokinetic parameters of the test compound were calculated using the non-compartment model of the pharmacokinetic calculation software WinNonlin5.2.
  • Example 28 In vivo pharmacodynamic assay
  • HBV DNA tail vein hypertension injection and administration methods are HBV DNA tail vein hypertension injection and administration methods:
  • HBV plasmid DNA solution into mouse tail vein:
  • the plasmid DNA was previously dissolved in physiological saline (10 ⁇ g / 1.4 ml, 10 ⁇ g / 1.5 ml) before injection. Store at 4 ° C until use.
  • a mouse 8% plasmid DNA solution was injected from the tail vein within 5 seconds. If the injection volume is less than or equal to 1.4 ml, 10 ⁇ g / 1.4 ml of the plasmid solution is used; if the injection volume is greater than or equal to 1.5 ml, 10 ⁇ g / 1.5 ml of the plasmid solution is used.
  • mice On days 1-7, mice were injected intraperitoneally with the test compound or solvent for 7 days. Blood was collected from the submandibular vein on days 1, 3, and 5, and heparin sodium was anticoagulated, 7,000 x g, and centrifuged at 4 ° C for 10 min to prepare plasma. The plasma was divided into two parts, one was sent to the in vitro anti-infective group of the Ministry of Biology for HBV DNA testing, and the other was used.
  • liver tissues were collected.
  • the liver tissue was divided into three parts. Two of the left leaves were collected and immediately frozen in liquid nitrogen, and transferred to -80 degrees for storage until the anti-infective group of WuXi PharmaTech was tested for HBV DNA; the remaining liver tissue was frozen in dry ice. Medium, and transferred to -80 degrees to save the spare.
  • Quantitative PCR was used to detect the amount of HBV DNA in mouse plasma.
  • DNA in mouse plasma was extracted according to the QIAamp 96 DNA Blood Kit instructions.
  • HBV DNA sequence HBV primer
  • pAAV2 primer pAAV2 vector sequence
  • HBV DNA content DNA content of HBV primer detection - DNA content detected by pAAV2 primer
  • the dose of the test compound (the compound of Example 3, the R isomer) was 25 mpk.
  • the HBV DNA content in mouse plasma decreased significantly on days 1 and 3, with a decrease of 0.55 log and 1.84 log, respectively, with statistical differences.

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Abstract

本发明公开了一类具有抗乙肝病毒活性的吡唑-噁唑烷酮化合物，其具有式（I）的结构，其中各变量如本文所定义。

Description

抗乙肝病毒的吡唑-噁唑烷酮类化合物 技术领域
本发明涉及一类具有抗乙肝病毒活性的吡唑-噁唑烷酮化合物。
背景技术
乙型病毒性肝炎是由乙肝病毒(HBV)引起的、以肝脏炎性病变为主，并可引起多器官损害的一种疾病。乙肝广泛流行于世界各国，主要侵犯儿童及青壮年，少数患者可转化为肝硬化或肝癌。因此，它已成为严重威胁人类健康的世界性疾病，也是当前流行最为广泛、危害性最严重的疾病之一。乙型病毒性肝炎无一定的流行期，一年四季均可发病，但多属散发。近年来乙肝发病率呈明显增高的趋势。研究表明，对HBV的抑制与对乙肝的治疗作用直接相关(参见例如Klaus Klumpp and Thibaut Crépin,Capsid proteins of enveloped viruses as antiviral drug targets,Current Opinion in Virology,2014,5:63-71；Timothy M.Block,Siddhartha Rawat,Carol L.Brosgart,Chronic hepatitis B:A wave of new therapies on the horizon,Antiviral Research,121,2015,69-81)。
尽管乙型肝炎病毒感染的治疗方法很多，但都存在很大的局限性，仅有很少一部分病人可以观察到持续的血清HBV DNA减少、e抗原和s抗原血清学转换等治疗效果。
例如，干扰素α多年来广泛应用于慢性HBV感染的治疗，但是干扰素仅对特定类型的患者有效，并且耐受性差。类似的，拉米夫定(3’-硫代-2’,3’-双脱氧胞嘧啶)因对HBV复制具有显著的抑制作用而被用于HBV感染的治疗，但是由于耐药率逐渐升高，从而限制了其对很大一部分患者的疗效。最近上市的阿德福韦酯(9-[2-[[二[(特戊酰氧基)甲基]氧膦基]甲氧基]乙基]腺嘌呤)对拉米夫定耐受的患者有效，但是该药物具有持续病毒反应率低(小于20％)的缺点，并且最大耐受剂量和治疗期限经常受到肾毒性的限制。
最近研究发现了一批药物具有良好的抗HBV活性并且进入了临床研究。例如，2’-氟-5-甲基-β-L-阿糖尿苷(Bukwang)、2'-脱氧-5-氟-3’-硫代胞嘧啶核苷(Gilead)、2'-脱氧-L-胸腺嘧啶核苷(Idenix)和2'-脱氧-L-胞嘧啶核苷(Idenix)等核苷类化合物表现出显著的抗HBV活性。此外，2-氨基-1,9-二氢-9-[(1S,3R,4S)-4-羟基-3-羟甲基-2-亚甲基环戊基]-6H-嘌呤-6-酮一水合物(Bristol-Myers Squibb)等碳环核苷类化合物和瑞莫夫韦(Ribapharm)等具有肝靶向性的无环核苷类化合物也在临床上表现出抗HBV的活性。
尽管最近发现的大部分抗HBV药物表现出良好的体外抗病毒活性，但是，低应答率和耐药性限制了这些药物的临床有效性。因此，虽然目前已有很多治疗HBV的药物和方法，但新颖的或改良的药物和治疗方法仍然是临床亟需的。
综上所述，HBV现有治疗药物存在治疗效果有限、易耐药和毒性高的局限性，因此，临床上迫切需要具有高效、低毒、不同耐药谱的新型药物。
发明内容
本发明的目的是提供一类具有抑制HBV复制功能的化合物。
本发明的另一目的是提供一种上述化合物在医药方面的用途。
本发明的一方面涉及式I化合物或其药学上可接受的盐或其对映异构体或互变异构体，
Figure PCTCN2017079552-appb-000001
其中，
R1、R2和R3各自独立地选自氢、卤素、任选取代的烷基、氨基或羟基；
R4和R5中的一个为氨基，另一个选自氢、卤素、氨基或羟基；或者
R4和R5与它们所连接的碳原子一起形成任选取代的含有至少一个氮原子的五元杂环基或杂芳基，其中所述杂环基中的-CH2-任选地被-C(＝O)-、-C(＝S)-或-C(＝NH)-替换；
R6选自氘、卤素、氨基或羟基；
n为0、1或2；
Q为任选地被一个或多个卤素取代的芳基或杂芳基。
式I中的手性碳可以为R构型或者S构型。
本发明的另一方面涉及式I化合物或其药学上可接受的盐或其对映异构体或互变异构体，其用于抑制乙型肝炎病毒。
本发明的另一方面涉及式I化合物或其药学上可接受的盐或其对映异构体或互变异构体，其用于治疗哺乳动物特别是人乙型肝炎病毒感染。
本发明的另一方面涉及一种药物组合物，其含有式I化合物或其药学上可接受的盐或其对映异构体或互变异构体，和药学上可接受的载体。
本发明的另一方面涉及式I化合物或其药学上可接受的盐或其对映异构体或互变异构体在制备用于抑制乙型肝炎病毒的药物中的用途。
本发明的另一方面涉及抑制乙型肝炎病毒的方法，其包括向有需要的个体给予治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或其对映异构体或互变异构体。
发明详述
本发明的一个方面涉及具有以下通式I的化合物或其药学上可接受的盐或其对映异构体或互变异构体：
Figure PCTCN2017079552-appb-000002
其中：
R1、R2和R3各自独立地选自氢、卤素、任选取代的烷基、氨基或羟基；
R4和R5中的一个为氨基，另一个选自氢、卤素、氨基或羟基；或者
R4和R5与它们所连接的碳原子一起形成含有任选取代的至少一个氮原子的五元杂环基或杂芳基，其中所述杂环基中的-CH2-任选地被-C(＝O)-、-C(＝S)-或-C(＝NH)-替换；
R6选自氘、卤素、氨基或羟基；
n为0、1或2；
Q为任选地被一个或多个卤素取代的芳基或杂芳基。
本申请的化合物可以具有互变异构体。例如，以下两个结构部分
Figure PCTCN2017079552-appb-000003
在本申请中被认为是等同的结构部分。类似地，以下两个结构部分
Figure PCTCN2017079552-appb-000004
在本申请中也被认为是等同的结构部分。
本申请的化合物可具有一个或多个立体异构中心，且各个异构中心可以以R或S构型或其组合的形式存在。
因此，在一个实施方式中，式I中的手性碳为R构型，结构如式I-R所示：
Figure PCTCN2017079552-appb-000005
在本申请中，一个特定化合物的对映异构体和互变异构体应被理解为包括所有可能的异构体及其混合物。因此，本申请的化合物包括所有构型上不同的对映异构体、非对映异 构体和互变异构体形式以及其相应的混合物。
在一个实施方式中，在式I和式I-R中：
R1、R2和R3各自独立地为氢或卤素；优选地，R1和R3均为氢，R2为卤素；更优选地，R1和R3均为氢，R2为溴；
R4和R5与它们所连接的碳原子一起形成任选取代的含有至少一个氮原子的五元杂环基或杂芳基，其中所述杂环基中的-CH2-任选地被-C(＝O)-、-C(＝S)-或-C(＝NH)-替换，优选任选地被-C(＝O)-或-C(＝S)-替换；当所述杂环基或杂芳基被任选取代时，取代基选自卤素和烷氧基羰基氨基；
R6为氘或卤素；
Q为任选地被一个或多个卤素尤其是氟取代的芳基或杂芳基，所述芳基为苯基，所述杂芳基选自呋喃基、吡咯基或噻吩基。
在一个实施方式中，式I和式I-R中的R6为氟。
在一个实施方式中，式I和式I-R中的Q为对-氟苯基。
在另一个实施方式中，式I和式I-R中的Q为噻吩基或呋喃基，优选为呋喃-2-基。
在一个实施方式中，式I和式I-R中的结构部分：
Figure PCTCN2017079552-appb-000006
选自：
Figure PCTCN2017079552-appb-000007
优选为：
Figure PCTCN2017079552-appb-000008
更优选为：
Figure PCTCN2017079552-appb-000009
在一个实施方式中，式I化合物选自：
Figure PCTCN2017079552-appb-000010
Figure PCTCN2017079552-appb-000011
在一个优选的实施方式中，式I化合物选自：
Figure PCTCN2017079552-appb-000012
Figure PCTCN2017079552-appb-000013
在一个更优选的实施方式中，式I化合物选自：
Figure PCTCN2017079552-appb-000014
在一个实施方式中，在式I和式I-R中：
R1、R2和R3各自独立地选自氢、C1-C3烷基、卤素；
R4和R5中的一个为氨基，另一个选自氢、卤素尤其是氟、氨基；
R6为卤素尤其是氟；
Q为任选地被一个或多个卤素尤其是氟取代的芳基或杂芳基，所述芳基为苯基，所述杂芳基选自呋喃基、吡咯基、噻吩基或吡啶基。
在一个实施方式中，在式I和式I-R中，作为R1、R2或R3的烷基是甲基。
在一个实施方式中，在式I和式I-R中，作为R4或R5的卤素是氟。
在一个实施方式中，在式I和式I-R中，作为R6的卤素是氟。
在一个实施方式中，式I和式I-R中的Q为对-氟苯基。
在一个实施方式中，式I和式I-R中的R4为氨基，R5为氢；n为0。
在一个实施方式中，式I化合物选自：
Figure PCTCN2017079552-appb-000015
Figure PCTCN2017079552-appb-000016
本申请中的术语除特别说明外，一般具有如下的含义。
术语“烷基”表示直链或支链饱和烃基。在本申请中，烷基可以包括1至6个碳原子，优选1至3个碳原子。例如，术语“C1-C3烷基”是指具有1至3个碳原子的直链或支链饱和烃基，包括甲基、乙基、正丙基、异丙基。在本申请中，“C1-C3烷基”优选为甲基。
术语“烷氧基”表示-O-烷基，其中术语“烷基”如上文所定义。例如，术语“C1-C3烷氧基”是指-O-C1-C3烷基。
术语“卤素”为氟、氯、溴或碘。在一些实施方式中，卤素为氟。
术语“三氟甲基”为-CF3基团。
术语“三氟甲氧基”为-OCF3基团。
术语“氨基”为-NH2基团。
术语“杂环基”是指由一个或多个选自氮、氧、硫的杂原子与一个或多个碳原子所形成的非芳香性环状基团。杂环基可以为包含1至3个选自氮、氧、硫的3至8元环体系， 其中优选至少一个杂原子选自氮。杂环基中的饱和碳原子(即，-CH2-)可以任选地被-C(＝O)-、-C(＝S)-或-C(＝NH)-替换。杂环基的实例包括但不限于吡咯烷基、吡咯烷酮基、吡咯啉基、吡咯啉酮基、噁唑烷基、噁唑烷酮基、噁唑啉基、噁唑啉酮基、噻唑烷基、噻唑烷酮基、噻唑啉基、噻唑啉酮基。杂环基可以通过环上任何适当的位点与分子的其他部分键合。
术语“芳基”是指包含六到十个碳原子的单环或稠合的芳香性环状烃基。芳基的实例包括苯基和萘基，其中优选苯基。
术语“杂芳基”是指由一个或多个选自氧、氮、硫的杂原子与一个或多个碳原子所形成的稠合或非稠合的芳香性环状基团，其中至少一个环是含有1至4个选自氮、氧和硫的杂原子的五至八元环，优选至少一个杂原子选自氮。在环中出现两个或更多杂原子的实施方式中，所述两个或更多杂原子可彼此相同，或者所述两个或更多杂原子中的一些或全部彼此不同，前提是所述基团的环不包含两个相邻的O或S原子。杂芳基的实例包括但不限于吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、***基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基，苯并咪唑基，苯并吡唑基，吲哚基等。杂芳基可以通过环上任何适当的位点与分子的其他部分键合。例如，吡咯基可以是吡咯-1-基、吡咯-2-基、吡咯-3-基；呋喃基可以是呋喃-2-基、呋喃-3-基；噻吩基可以是噻吩-2-基、噻吩-3-基。
在本申请中，当某个基团被限定为“任选取代”时，其可以被或不被一个或多个选自以下的本申请中所定义的基团取代：烷基、烷氧基、卤素、羟基、氨基。本领域技术人员可理解，对于包含一个或多个取代基的任何基团，不会被引入任何在空间上不可能存在和/或不能合成的取代或取代模式。
术语“药学上可接受的盐”表示保留母体化合物的生物有效性和性质的那些盐，其具有所期望的药学活性并且在生物学上和在其它方面均没有不合要求之处。这类盐包括但不限于：(1)与酸成盐(酸式盐)，通过母体化合物的游离碱与无机酸或有机酸的反应而得；无机酸包括但不限于盐酸、硫酸、磷酸、甲磺酸，有机酸包括但不限于乙酸、三氯乙酸、丙酸、丁酸、马来酸、对甲苯磺酸、苹果酸、丙二酸、肉桂酸、柠檬酸、富马酸、樟脑酸、二葡糖酸、天冬氨酸、酒石酸；(2)存在于母体化合物中的酸性质子被金属离子代替或者与有机碱配位化合所生成的盐(碱式盐)。
本发明的另一方面涉及式I化合物或其药学上可接受的盐或其对映异构体或互变异构体，其用于抑制乙型肝炎病毒。
本发明的另一方面涉及式I化合物或其药学上可接受的盐或其对映异构体或互变异构体，其用于治疗哺乳动物特别是人乙型肝炎病毒感染。
本发明的另一方面涉及一种药物组合物，其含有式I化合物或其药学上可接受的盐或其对映异构体或互变异构体，和药学上可接受的载体。
药物组合物的目的是促进化合物对生物体的给药。通常，本发明化合物可以与一种或 多种药学上可接受的载体形成适合的剂型施用。这些剂型适用于口服给药、直肠给药、局部给药、以及其他非胃肠道施用(例如，皮下、肌肉、静脉等)。例如，适合口服给药的剂型包括胶囊、片剂、颗粒剂以及糖浆等。这些制剂中包含的本发明的化合物可以是固体粉末或颗粒；水性或非水性液体中的溶液或是混悬液；油包水或水包油的乳剂等。上述剂型可由活性化合物与一种或多种药学上可接受的载体经由通用的药剂学方法制成。药学上可接受的载体指的是对有机体不引起明显的刺激性和不干扰所给予化合物的生物活性和性质的赋形剂或稀释剂。上述载体需要与活性化合物或其他辅料兼容。对于固体制剂，常用的无毒载体包括但不限于甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、碳酸钙、磷酸钙、淀粉、纤维素及其衍生物、葡萄糖、蔗糖、明胶等。用于液体制剂的载体包括水、生理盐水、葡萄糖水溶液、植物油、乙二醇和聚乙二醇等。活性化合物可与上述载体形成溶液或是混悬液。
在一些实施方式中，所述药物组合物为适合单次施予精确剂量的单位剂型。在其它实施方式中，所述化合物的量在约0.001mg/kg体重/天-约1000mg/kg体重/天的范围内。在一些实施方式中，所述化合物的量的范围为约0.5mg/kg体重/天-约50mg/kg体重/天。在一些实施方式中，所述化合物的量为约0.001g/天-约7g/天。在其它实施方式中，所述化合物的量为约0.002g/天-约6g/天。在其它实施方式中，所述化合物的量为约0.005g/天-约5g/天。在其它实施方式中，低于上述范围下限的剂量水平可能已经是足够的。在其它实施方式中，可能需要高于上述范围上限的剂量水平。在一些实施方式中，以单剂量施用所述化合物，每天一次。在其它实施方式中，以多剂量施用所述化合物，每天不只一次。在一些实施方式中，所述药物组合物施用于的个体为哺乳动物。在其它实施方式中，所述哺乳动物是人。在其它实施方式中，所述药物组合物还包含至少一种抗HBV药物。在另一些实施方式中，所述药物组合物和至少一种抗HBV药物分别以独立的剂型组合成组合产品。
在本发明的药物组合物中，还可以进一步包含其他抗HBV药物，其可以是HBV聚合酶抑制剂、免疫调节剂或干扰素。具体而言，该其他的HBV药物可以是拉米夫定、替比夫定、替诺福韦、恩替卡韦、阿德福韦二匹伏酯、alfaferone、alloferon、西莫白介素(celmoleukin)、克拉夫定、恩曲他滨、泛昔洛韦、费龙、宝甘灵CP、因特芬、干扰素α-1b、干扰素α、干扰素α-2a、干扰素β-1a、干扰素α-2、白细胞介素-2、米伏替酯(mivotilate)、硝唑尼特、聚乙二醇干扰素α-2a、利巴韦林、罗扰素-A、西佐喃、euforavac、veldona、rintatolimod、叠氮膦、heplisav、干扰素α-2b、左咪唑、丙帕锗等。
这些另外的药物可以作为多剂量治疗方案的一部分，与含有本发明的化合物的药物组合物分开给药。或者，这样药物可以是单一剂型的一部分，在单一的组合物中与本发明的化合物混合。当作为多剂量治疗方案的一部分分开给药时，两种活性药剂可以同时、按顺序或者彼此间隔一段时间给药，以产生这些药物的期望活性。
本发明的另一方面涉及式I化合物或其药学上可接受的盐或其对映异构体或互变异构体或者本发明的药物组合物在制备用于抑制乙型肝炎病毒的药物中的用途。
在一个实施方式中，所述药物用于治疗哺乳动物特别是人乙型肝炎病毒感染。
本发明的另一方面涉及抑制乙型肝炎病毒复制的方法，其包括向有需要的个体给予治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或其对映异构体或互变异构体或者本发明的药物组合物。
在一个实施方式中，所述方法用于治疗哺乳动物特别是人乙型肝炎病毒感染。
在本申请中，术语“治疗有效量”可以是在某种程度上缓解对象中的疾病或病症的一种或多种症状、使与疾病或病症相关或是其病因的一种或多种生理或生物化学参数部分或完全恢复正常、和/或降低疾病或病症的发作可能性的量。
在本申请中，乙型肝炎病毒感染所涉及的疾病包括急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌。急性乙型肝炎病毒感染的症状可以是无症状的或者可以是与急性肝炎相同。患有慢性病毒感染的患者可能发展为活跃性疾病，其可以发展为肝硬化或肝癌。
具体的给药方式和剂型取决于化合物本身的理化性质以及所应用疾病的严重程度等。
可以利用PCR和酶联免疫吸附法(Elisa)来定量检测本申请化合物对HBV复制的影响。
本发明还提供上述化合物的制备方法，类似的制备方法在2006年7月21日申请的PCT/US/06/28343中披露。本发明所述化合物的制备可以参考但不仅限于下列方法：
路线1
Figure PCTCN2017079552-appb-000017
路线2
Figure PCTCN2017079552-appb-000018
本申请化合物的手性拆分是根据Berger的方法通过超临界流体色谱法(SFC)完成。参 见Berger,T.A.“Practical advantages of packed column supercritical fluid chromatography in supporting combinatorial chemistry,”ACS Symposium Series(2000),748(Unified Chromatography),203-233；Berger,T.A.；Todd,B.S.“Packed column supercritical fluid chromatography of oligoethers using pure carbon dioxide with flame ionization and ultraviolet detection”Chromatographia(2001),54(11/12),777-781；Berger,T.A.；Todd,B.S.“Packed column supercritical fluid chromatography of polysiloxanes using pure and hexane modified carbon dioxide with flame ionization and ultraviolet detection,”Chromatographia(2001),54(11/12),771-775。
Berger的手性拆分方法可概括如下：将外消旋混合物(60mg)溶于甲醇(2mL)中，将所得溶液注射入制备手性柱中(ChiralPak AD-H SFC,i.d.1cm×25cm)。SFC的条件如下：移动相：65％CO2和35％甲醇，流动速率：10mL/min，检测波长：220nm。立体异构体可在不同的保留时间被分离出。绝对构型通过对照CP060的晶体衍射结果确定(CP060为2-(3,5-二叔丁基-4-羟基苯基)-3-[3-[N-甲基-N-[2-[3,4-(亚甲基二氧)苯氧基]乙基]氨基]丙基]-1,3-噻唑啉-4-酮，CP060-(R)-(+),[α]D＝+33.3°；CP060-(S)-(-),[α]D＝-33.5°)(Kato,Tatsuya；Ozaki,Tomokazu；Tamura,Kazuhiko；Suzuki,Yoshiyuki；Akima,Michitaka；Ohi,Nobuhiro,“Novel Calcium Antagonists with Both Calcium Overload Inhibition and Antioxidant Activity.2.Structure-Activity Relationships of Thiazolidinone Derivatives,”Journal of Medicinal Chemistry(1999),42(16),3134-3146)。本发明所述化合物的R构型为基于上述方法确定。
具体实施方式
下面通过非限定性实施例来对本发明进行说明。本领域技术人员应当理解，此处描述的实施例仅用于说明和解释本发明，而不用于限定本发明。
实施例1：3-(2-(1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑啉-4-酮
Figure PCTCN2017079552-appb-000019
步骤一、1-(4-溴苯基)-2-(1-(4-氟苯基)亚乙基)肼
将1-(4-氟苯基)乙酮(113.2g，820.6mmol)，1-(4-溴苯基)肼盐酸盐(183g，820.6mmol)和醋酸钾(80.4g，820.6mmol)加入乙醇(1.8L)中，在88℃下搅拌过夜。将反应混合物真空浓缩至干后，用二氯甲烷溶解，过滤得到粗品，最后用石油醚洗涤得到1-(4-溴苯基)-2-(1-(4-氟苯基)亚乙基)肼145g。收率：59％；MS：307.0[M+H]+。
步骤二、1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-甲醛
在无水、冰浴冷却条件下将三氯氧磷(83.5mL)慢慢滴加到无水DMF(68.75mL)中，搅拌30min后，在氮气保护下将1-(4-溴苯基)-2-(1-(4-氟苯基)亚乙基)肼(125g，407.2mmol)溶解在少量DMF中，并慢慢滴加到反应液中，室温搅拌1h，升温到70℃，反应5h，将反应液倒入冰水中，过滤，丙酮洗涤，过滤得到1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-甲醛145g。收率：94％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.97(s,1H)；9.39(s,1H)；8.03-7.96(m,4H)；7.79-4.77(d,2H)；7.38-7.33(m,2H)。
步骤三、2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-4-1H-吡唑基)-3-(4-硝基苯乙基)噁唑啉-4-酮
将1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-甲醛(72.0g，208.7mmol)、2-羟基-N-(4-硝基苯乙基)乙酰胺(59.0g，250.4mmol)和对甲苯磺酸(21.5g，104.4mmol)溶于2升甲苯中。用分水器加热回流16小时后，用乙酸乙酯萃取，旋干溶剂。将粗品分散在水中，搅拌15min后过滤。将滤饼分散在甲醇中，搅拌30min后过滤。旋干溶剂后得2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-4-1H-吡唑基)-3-(4-硝基苯乙基)噁唑啉-4-酮92.0g。收率：94％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.03(d,2H)；7.86(s,1H)；7.65-7.61(m,7H)；7.19-7.14(m, 5H)；5.92(s,1H)；4.41-4.28(m,2H)；3.91-3.87(m,1H)；3.09-3.05(m,1H)；2.87-2.82(m,2H)。
步骤四、3-(4-氨基苯乙基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-4-1H-吡唑基)噁唑啉-4-酮
将2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-4-1H-吡唑基)-3-(4-硝基苯乙基)噁唑啉-4-酮(92.0g，18.15mmol)溶于乙酸乙酯/甲醇(1/1)(2000mL)中，加入Raney Ni(9.2g)，通入氢气，30℃搅拌16小时，过滤浓缩后得到3-(4-氨基苯乙基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-4-1H-吡唑基)噁唑啉-4-酮88g。收率：93％；MS：521.2[M+H]+。
步骤五、3-(4-乙酰氨基-3-硝基苯乙基)-2-(3-(4-氟苯基)-1-(4-溴苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑烷-4-酮
将3-(4-氨基苯乙基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-4-1H-吡唑基)噁唑啉-4-酮(86.0g，165.1mmol)溶于Ac2O(900mL)中，在室温下搅拌60min。反应完成后冷却至0℃，然后将HNO3(65％)(16.0mL)加入到冰浴冷却的Ac2O(123mL)中形成的溶液慢慢加到反应混合物中。反应混合物在0℃下搅拌搅拌过夜。TLC(甲醇:二氯甲烷＝1:10)显示反应几乎完成。然后真空浓缩反应混合物，粗品用乙酸乙酯重结晶，过滤得到3-(4-乙酰氨基-3-硝基苯乙基)-2-(3-(4-氟苯基)-1-(4-溴苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑烷-4-酮(70g，70％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.15(s,1H)；8.74(s,1H)；7.91-7.29(m,13H)；6.17(s,1H)；4.31-4.20(m,2H)；3.75-3.71(m,1H)；3.06-3.01(m,1H)；2.79-2.73(m,2H)；2.05(s,3H)。
步骤六、3-(4-氨基-3硝基苯乙基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑基-4基)噁唑啉-4酮
将N-(4-(2-(2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-4-1H-吡唑基)-4-噁唑啉-3基)乙基)-2-硝基苯基)乙酰胺(70g，114.6mmol)溶于甲醇(1000mL)和1M NaOH(690mL)中，回流过夜。将反应液过滤得到3-(4-氨基-3硝基苯乙基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑基-4基)噁唑啉-4酮60.0g。收率93.8％；MS：566.1[M+H]+。
步骤七、2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4基)-3-(3,4-二氨基苯乙基)噁唑啉-4酮
将3-(4-氨基-3硝基苯乙基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑基-4基)噁唑啉-4酮(60.0g，106.0mmol)溶于乙酸乙酯/甲醇(1/1)(2000mL)中，加入Raney Ni(6.0g)，通入氢气，30℃搅拌16小时。过滤浓缩后得3-(4-氨基苯乙基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-4-1H-吡唑基)噁唑啉-4-酮55.0g。收率：90％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.72(s,1H)；9.71(d,2H)；7.74-7.63(m,4H)；7.35-7.31(m,2H)；6.36(d,1H)；6.25(s,1H)；6.09-6.06(d,3H)；4.39-6.25(m,6H)；3.61-3.59(m,1H)；2.82-2.79(m,1H)；2.39-2.37(m,2H)。MS：536.2[M+H]+。
步骤八、3-(2-(1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑啉-4-酮
将2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4基)-3-(3，4-二氨基苯乙基)噁唑啉-4酮(300mg，0.56mmol)溶于5mL甲酸中。将反应液在70℃搅拌反应1小时，浓缩至干。粗品经 反相柱色谱分离得白色固体(80mg，收率：26％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.29(s,1H)；8.73(s,1H)；7.89(d,J＝8.4Hz,2H)；7.72(d,J＝8.8Hz,2H)；7.59-7.62(m,2H)；7.39-7.41(m,1H)；7.23-7.28(m,3H)；6.89(d,J＝8.4Hz,1H)；6.05(s,1H)；4.19-4.29(m,2H)；3.73-3.80(m,1H)；2.95-3.02(m,1H)；2.07-2.86(m,2H)。MS：548[M+H]+。
实施例2：3-(2-(1H-苯并[d][1,2,3]三氮唑-5-基)乙基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑啉-4-酮
Figure PCTCN2017079552-appb-000020
将2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4基)-3-(3,4-二氨基苯乙基)噁唑啉-4酮(300mg，0.56mmol)溶于5mL乙酸中，加入亚硝酸钠(58mg，0.84mmol)溶于5mL水的溶液。将反应液常温搅拌反应2小时，加入50mL水，用乙酸乙酯(60mL)萃取，分别用10％的碳酸氢钠溶液、饱和食盐水萃取分液，无水硫酸钠干燥，浓缩至干。粗品经反相柱色谱分离得白色固体(105mg，收率：34％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ15.53(s,1H)；8.75(s,1H)；7.89(d,J＝8.8Hz,2H)；7.72(d,J＝8.4Hz,3H)；7.59-7.63(m,3H)；7.23-7.27(m,2H)；7.14(d,J＝8.0Hz,1H)；6.08(s,1H)；4.19-4.29(m,2H)；3.78-3.85(m,1H)；3.02-3.09(m,1H)；2.81-2.93(m,2H)。MS：549[M+H]+。
实施例3：3-(2-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-噁唑烷-4-酮
Figure PCTCN2017079552-appb-000021
将CDI(4.23g，26.10mmol)分批加入到2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4基)-3-(3,4-二氨基苯乙基)噁唑啉-4酮(7.0g，13.05mmol)的DMF(10mL)溶液中。氮气保护下80℃搅拌5小时。将反应液倒入饱和盐水(1000mL)中析出棕色固体。将过滤所得滤饼于60℃真空干燥后经硅胶柱(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化得淡黄色固体3-(2-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-噁唑烷-4-酮(5.56g，收率：75.4％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.46-10.45(d,J＝4.8Hz,2H)；8.72(s,1H)；7.90-7.88(m,2H)；7.73-7.71(d,J＝9.2Hz,2H)；7.65-7.61(m,2H)；7.29(t,J＝8.8Hz,2H)；6.71(t,J＝8.0Hz,2H)；6.62-6.59(m,2H)；6.02(s,1H)；4.26-4.24(m,2H)；3.89-3.83(m,1H)；2.98-2.91(m,1H)；2.51-2.50(m,2H)。MS，m/z:563.8(M++H)。
将3-(2-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-噁唑烷-4-酮(87g)经SFC(色谱柱：AS-H；色谱柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注入量：2.0μl；流动相：HEP/IPA(0.1％DEA)＝60/40(V/V)；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：35℃)手性拆分得到二个光学异构体。
(R)-3-(2-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-噁唑烷-4-酮，白色固体，34.72g，收率39.9％。[α]D+41.04°(c 0.5019g/mL，19.9℃)；纯度：98.47％，ee:100.00％。
(S)-3-(2-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-噁唑烷-4-酮，白色固体，35.09g，收率40.3％。[α]D-39.89°(c 0.5014g/mL，20.0℃)；纯度：99.65％，ee：98.65％。
实施例4：3-(2-(2-氨基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)乙基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑啉-4-酮
Figure PCTCN2017079552-appb-000022
将2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4基)-3-(3,4-二氨基苯乙基)噁唑啉-4酮(140mg,0.26mmol)溶解在甲醇(8mL)和水(2mL)中。在室温搅拌下，把溴化氰溶解在2mL甲醇后逐滴加入反应液中。半小时后反应液变浑浊，TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)显示原料耗尽。反应液加50mL水稀释后，在旋蒸低温下把甲醇除掉，用5mL氨水调碱性，随后分别用乙酸乙酯(50mL×2)萃取两次。将有机相用饱和盐水洗三次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋蒸浓缩后用DMF溶解，HPLC制备纯化得到3-(2-(2-氨基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)乙基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑啉-4-酮的白色固体目标产物(30mg，收率：20.5％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.68(s,1H)；7.88(d,J＝7.6Hz,2H)；7.72(d,J＝7.6Hz,2H)；7.59(s,2H)；7.27(t,J＝8.0Hz,2H)；6.92(d,J＝7.2Hz,1H)；6.82(s,1H)；6.55(d,J＝6.8Hz,1H)；6.07(s,2H)；6.03(s,1H)；4.28-4.19(m,2H)；3.72-3.68(m,1H)；2.92-2.89(m,1H)；2.70-2.60(m,2H)；MS：563.2[M+H]+。
实施例5：2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-3-(2-(2,3-二氢-2-硫代-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)噁唑啉-4-酮
Figure PCTCN2017079552-appb-000023
将2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4基)-3-(3,4-二氨基苯乙基)噁唑啉-4酮(100mg，0.19mmol)、二硫化碳(142mg，1.87mmol)、氢氧化钾(40mg，0.71mmol)溶解在乙醇(2.5mL)和水(0.2mL)中，在氩气保护下加热回流两个小时，TLC(二氯甲烷:甲醇＝15:1)显示原料耗尽。反应液经旋蒸浓缩后，用DMF(3mL)溶解后过滤，HPLC制备纯化得到2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-3-(2-(2,3-二氢-2-硫代-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)噁唑啉-4-酮的白色固体目标产物(43mg，收率：39.8％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.41(d,J＝4.8Hz,2H)；8.71(s,1H)；7.88(d,J＝8.0Hz,2H)；7.72(d,J＝8.0Hz,2H)；7.61(d,J＝4.8Hz,2H)；7.29(t,J＝8.2Hz,2H)；6.94(t,J＝8.0Hz,1H)；6.86(s,1H)；6.82(d,J＝7.6Hz,1H)；6.03(s,1H)；4.29-4.20(m,2H)；3.74-3.70(m,1H)；2.97-2.94(m,1H)；2.77-2.50(m,2H)；MS：580.2[M+H]+。
实施例6：2-(3-(4-氟苯基)-1-(4-碘苯基)-1H-吡唑-4-基)-3-(2-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)噁唑烷-4-酮
Figure PCTCN2017079552-appb-000024
步骤一、2-(3-(4-氟苯基)-1-(4-碘苯基)-1H-吡唑-4-基)-3-(4-硝基苯乙基)噁唑烷-4-酮
将3-(4-氟苯基)-1-(4-碘苯基)-1H-吡唑-5-甲醛(1.18g，3mol)、2-羟基-N-(4-甲氧基苯乙基)乙酰胺(741mg，3.3mmol)和对甲苯磺酸(160mg)的甲苯(100mL)溶液加热回流分水过夜。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)显示反应完全。将反应液浓缩，硅胶柱(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)纯化得黄色固体2-(3-(4-氟苯基)-1-(4-碘苯基)-1H-吡唑-4-基)-3-(4-硝基苯乙基)噁 唑烷-4-酮(1.78g，收率：99.1％)；MS:m/z:599(M++H)。
步骤二、3-(4-氨基苯乙基)-2-(3-(4-氟苯基)-1-(4-碘苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑烷-4-酮
将铁粉(1.4g)加到2-(3-(4-氟苯基)-1-(4-碘苯基)-1H-吡唑-4-基)-3-(4-硝基苯乙基)噁唑烷-4-酮(1.5g，2.5mmol)的四氢呋喃(100mL)和醋酸(100mL)溶液中。60℃搅拌过夜。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)显示反应基本完全。过滤除去铁粉，将滤液真空浓缩后经硅胶柱(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)纯化得黄色固体3-(4-氨基苯乙基)-2-(3-(4-氟苯基)-1-(4-碘苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑烷-4-酮(1.2g，收率：84.4％)；MS:m/z:569(M++H)。
步骤三、3-(4-乙酰氨基-3-硝基苯乙基)-2-(3-(4-氟苯基)-1-(4-碘苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑烷-4-酮
在0℃下，向3-(4-氨基苯乙基)-2-(3-(4-氟苯基)-1-(4-碘苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑烷-4-酮(1.2g，2.11mmol)的醋酸酐(12mL)溶液中缓慢滴加HNO3(65％，5mL)的醋酸酐溶液(5mL)。反应室温搅拌过夜，TLC(二氯甲烷:甲醇＝15:1)显示反应完全。反应液浓缩后经硅胶柱(二氯甲烷:甲醇＝30:1)纯化得棕色固体3-(4-乙酰氨基-3-硝基苯乙基)-2-(3-(4-氟苯基)-1-(4-碘苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑烷-4-酮(660mg，收率：65.28％)；MS:m/z:656(M++H)。
步骤四、3-(4-氨基-3-硝基苯基)-2-(3-(4-氟苯基)-1-(4-碘苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑烷-4-酮
向3-(4-乙酰氨基-3-硝基苯乙基)-2-(3-(4-氟苯基)-1-(4-碘苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑烷-4-酮(660mg，1mmol)的甲醇溶液(10mL)中加入氢氧化钠溶液(40mg NaOH溶解在5mL水中)，加热回流2小时。TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)显示反应完全。反应液浓缩后经硅胶柱(二氯甲烷:甲醇＝30:1)纯化得棕色固体3-(4-氨基-3-硝基苯基)-2-(3-(4-氟苯基)-1-(4-碘苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑烷-4-酮(200mg，收率：32.6％)；MS:m/z:614(M++H)。
步骤五、3-(3,4-二氨基苯乙基)-2-(3-(4-氟苯基)-1-(4-碘苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑烷-4-酮
向3-(4-氨基-3-硝基苯基)-2-(3-(4-氟苯基)-1-(4-碘苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑烷-4-酮(200mg，0.327mmol)的四氢呋喃溶液(10mL)中加入Raney Ni(200mg)，氢气保护下室温搅拌5小时。TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)显示反应完全。反应液浓缩后经硅胶柱(二氯甲烷:甲醇＝50:1)纯化得棕色固体3-(3,4-二氨基苯乙基)-2-(3-(4-氟苯基)-1-(4-碘苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑烷-4-酮(115mg，收率：69.3％)；MS:m/z:509(M++H)。
步骤六、2-(3-(4-氟苯基)-1-(4-碘苯基)-1H-吡唑-4-基)-3-(2-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)噁唑烷-4-酮
向3-(3,4-二氨基苯乙基)-2-(3-(4-氟苯基)-1-(4-碘苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑烷-4-酮(115mg，0.197mmol)的DMF(5mL)溶液中加入CDI(64mg，0.394mmol)，80℃拌搅8小时。TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)显示反应完全。向反应液加入20mL水淬灭，乙酸乙酯(20mL×2)萃取。将萃取液合并，用饱和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，经硅胶柱(二氯甲烷:甲醇＝50:1)纯化得白色固体2-(3-(4-氟苯基)-1-(4-碘苯基)-1H-吡唑-4-基)-3-(2-(2-氧代 -2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)噁唑烷-4-酮(30mg，收率：24.9％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.46-10.44(d,2H)；8.71(s,1H)；7.88-7.86(d,2H)；7.75-7.73(d,2H)；7.64-7.60(m,2H)；7.30-7.26(t,2H)；6.73-6.71(d,J＝8.1Hz,1H)；6.63-6.59(t,2H)；6.02(s,1H)；4.25-4.20(m,2H)；3.68-3.69(m,1H)；2.92-2.89(m,1H)；2.67-2.60(m,2H)；MS:m/z:509(M++H)。
实施例7：2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)1H-吡唑-4-基)-3-(2-(5-氟-1H-苯并[d]咪唑-6-基)乙基)噁唑啉-4-酮
Figure PCTCN2017079552-appb-000025
步骤一、2-氰基-2-(2-氟-4-硝基苯基)乙酸乙酯
将1,2-二氟-4-硝基(20g，0.13mol)、氰基乙酸乙酯(19g，0.16mol)、碳酸钾(35g，0.25mol)溶解在乙腈中加热到90℃过夜。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)显示原料耗尽。将反应液旋干，粗品用2M盐酸(200mL)酸化，用乙酸乙酯(100mL)萃取三次。将合并的乙酸乙酯相用盐水洗两遍，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干。粗品用二氯甲烷溶解加硅胶拌样，通过硅胶柱纯化(PE：EA＝10:1-1:1)得到化合物2-氰基-2-(2-氟-4-硝基苯基)乙酸乙酯，为棕色油状物，31g，收率：97.6％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.15(d,J＝8.8Hz,1H)；8.05(d,J＝9.2Hz,1H)；7.77(t,J＝8.0Hz,1H)；5.11(s,1H)；4.34-4.35(m,2H)；1.35-1.26(m,3H)。
步骤二、2-(2-二氟-4-硝基苯基)乙腈
将2-氰基-2-(2-氟-4-硝基苯基)乙酸乙酯(31g，0.12mol)、氯化钠(15g，0.25mol)、水(0.13mL，0.12mol)溶解在二甲基亚砜(200mL)中，然后加热到100℃过夜。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)显示原料耗尽。反应液冷却到室温后，加入到1升水中淬灭，用200mL乙 酸乙酯萃取三次。将合并的有机相用盐水洗三次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干。粗品用硅胶柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1-2:1)，得到化合物2-(2-二氟-4-硝基苯基)乙腈，为红棕色固体，20g，收率：90.3％。
步骤三、2-(2-氟-4-硝基苯基)乙胺
将2-(2-二氟-4-硝基苯基)乙腈(20g，0.11mol)溶解在80mL四氢呋喃中，在冰浴冷却下滴加1M的硼烷四氢呋喃溶液(150mL，0.15mol)。滴加完后恢复到室温并加热到80℃回流二小时。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)显示原料大部分反应完。反应液冷却到室温，并在冰浴下逐滴加入甲醇直到反应液没有气泡产生。反应液经旋蒸浓缩后得到黑色油状物(22g，收率：108％)，直接用于下一步反应；MS：185.1[M+H]+。
步骤四、N-(2-氟-4-硝基苯乙基)-2-羟基乙酰胺
将2-(2-氟-4-硝基苯基)乙胺(22g，118.mmol)、羟基乙酸甲酯(40g，444.4mmol)溶解在100mL甲醇中并加热回流两天。TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)显示原料耗尽。反应液冷却到室温后，旋蒸浓缩，粗品经过硅胶柱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝5:1-1:2)得到化合物N-(2-氟-4-硝基苯乙基)-2-羟基乙酰胺，为黑色固体，12g，收率：42％)；MS：243.3[M+H]+。
步骤五、2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑基-4基)-3-(2-氟-4-硝基苯乙基)噁唑啉-4酮
将N-(2-氟-4-硝基苯乙基)-2-羟基乙酰胺(4g，16.53mmol)、1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-甲醛(5.88g，17.21mmol)、一水合对甲苯磺酸(1.57g，8.26mmol)溶解在100mL甲苯中，加热到150℃，用分水器分水过夜。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)显示原料耗尽。反应液经旋蒸浓缩后用硅胶柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝2:1-0:1)得到化合物2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑基-4基)-3-(2-氟-4-硝基苯乙基)噁唑啉-4酮的粗品，然后乙酸乙酯打浆后过滤，滤饼烘箱干燥得白色固体(4.5g，收率：48％)；MS：569.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.77(s,1H)；7.90(d,J＝7.2Hz,4H)；7.73-7.66(m,4H)；7.51(t,J＝8.0Hz,1H)；7.30(t,J＝8.8Hz,2H)；6.14(s,1H)；4.32-4.22(m,2H)；3.78-3.71(m,1H)；3.11-3.04(m,1H)；2.86(s,2H)。
步骤六、3-(4-氨基-2-氟苯乙基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑啉-4-酮
将2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑基-4基)-3-(2-氟-4-硝基苯乙基)噁唑啉-4酮(4.5g，7.92mmol)溶于乙酸乙酯(50mL)/甲醇(100mL)中，加入Raney Ni(100mg)，氢气球常压30℃氢化。反应1小时后，停止反应，将反应液过滤，用乙酸乙酯洗滤饼，滤液旋干得目标产物(白色固体，4.2g，收率：98.5％)，该化合物不经纯化，直接用于下一步反应。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.77(s,1H)；7.91(d,J＝8.8Hz,2H)；7.73(d,J＝8.4Hz,2H)；7.66(t,J＝7.6Hz,2H)；7.33(t,J＝8.3Hz,1H)；6.75(t,J＝8.4Hz,1H)；6.25-6.16(m,3H)；5.25(s,2H)；4.30-4.20(m,2H)；3.64-3.57(m,1H)；2.86-2.79(m,1H)；2.59-2.42(m,2H)；MS： 541.1[M+H]+。
步骤七、3-(2-氟-5-硝基-4-乙酰氨基苯乙基)-2-(3-(4-氟苯基)-1-(4-溴苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑烷-4-酮
将3-(4-氨基-2-氟苯乙基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑啉-4-酮(4.2g，7.8mmol)溶于30mL醋酸酐中，室温搅拌反应20min，反应液由澄清变浑浊，TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)显示原料耗尽，然后在冰浴冷却下往反应液慢慢滴加65％的浓硝酸(2.12g，21.86mmol)，滴加完后撤掉冰浴搅拌过夜。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)显示原料耗尽。反应液用乙酸乙酯(100mL)稀释，用水和盐水各洗一次，随后用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液经旋蒸浓缩。粗品经硅胶柱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝5:1-1:1)得到化合物3-(2-氟-5-硝基-4-乙酰氨基苯乙基)-2-(3-(4-氟苯基)-1-(4-溴苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑烷-4-酮的黄色固体，然后乙酸乙酯打浆后过滤，滤饼烘箱干燥得浅黄色固体(2.4g，收率：49.2％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.23(s,1H)；8.76(s,1H)；7.95(d,J＝7.2Hz,1H)；7.89(d,J＝8.8Hz,2H)；7.73-7.68(m,4H)；7.59(d,J＝11.6Hz,1H)；7.31(t,J＝8.8Hz,2H)；6.24(s,1H)；4.30-4.20(m,2H)；3.74-3.67(m,1H)；3.06-3.01(m,1H)；2.79-2.77(m,2H)；MS；626.2[M+H]+。
步骤八、3-(2-氟-4-氨基-5-硝基苯乙基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4氟苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑啉-4-酮
将N-(4-(2-(2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-4-噁唑啉-3-基)乙基)-3-氟-2-硝基苯基)乙酰胺(1.8g，2.88mmol)溶于20mL乙醇中，加入2mL浓硫酸，加热回流2小时，减压浓缩。残留物用乙酸乙酯(40mL)稀释，加入冰水(100mL)搅拌，用饱和碳酸氢钠调节pH至中性，乙酸乙酯(40mL)萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干，粗产品用柱色谱分离(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)，得到目标产物3-(2-氟-4-氨基-5-硝基苯乙基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4氟苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑啉-4-酮的黄色固体(0.8g，收率：47.6％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.79(s,1H)；7.90(d,J＝8.4Hz,2H)；7.85(d,J＝7.6Hz,1H)；7.74-7.67(m,4H)；7.45(s,2H)；7.30(t,J＝8.6Hz,2H)；6.62(d,J＝12.4Hz,1H)；6.24(s,1H)；4.30-4.20(m,2H)；3.69-3.34(m,1H)；2.96-2.92(m,1H)；2.66-2.57(m,2H)；MS：586.1[M+H]+。
步骤九、2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)1H-吡唑-4-基)-3-(4,5-二氨基-2-氟苯乙基)噁唑啉-4-酮
将3-(2-氟-4-氨基-5-硝基苯乙基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4氟苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑啉-4-酮(200mg，0.33mmol)溶于50mL乙酸乙酯和100mL甲醇中，加入Raney Ni(50mg)，常压氢化。反应1小时后，停止反应，反应液过滤，甲醇洗滤饼，滤液旋干得目标产物的棕色固体(0.7g，收率：94％)，该化合物不经纯化，直接用于下一步反应。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.77(s,1H)；7.91(d,J＝8.0Hz,2H)；7.72(d,J＝8.0Hz, 2H)；7.64(s,2H)；7.33(t,J＝8.4Hz,2H)；6.23-6.14(m,3H)；4.65(s,2H)；3.58-3.55(m,1H)；2.81-2.78(m,1H)；2.41-2.40(m,2H)；MS：556.1[M+H]+。
步骤十、2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)1H-吡唑-4-基)-3-(2-(5-氟-1H-苯并[d]咪唑-6-基)乙基)噁唑啉-4-酮
将2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)1H-吡唑-4-基)-3-(4,5-二氨基-2-氟苯乙基)噁唑啉-4-酮(280mg，0.51mmol)溶于5mL甲酸中。将反应液70℃搅拌反应1小时，浓缩至干，用乙酸乙酯稀释，用饱和碳酸氢钠调节pH至中性，有机相用饱和盐水洗涤后，用无水硫酸钠干燥，过滤。滤液旋蒸浓缩，粗品经反相柱色谱分离得白色固体(120mg，收率：42.1％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.40(s,1H)；8.78(s,1H)；8.17(s,1H)；7.90(d,J＝8.8Hz,2H)；7.73(d,J＝8.8Hz,2H)；7.64(t,J＝6.8Hz,2H)；7.37(s,1H)；7.27(t,J＝8.8Hz,2H)；6.17(s,1H)；4.31-4.21(m,2H)；3.79-3.73(m,1H)；3.03-2.96(m,1H)；2.89-2.74(m,2H)；MS：566.1[M+H]+。
实施例8：2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)1H-吡唑-4-基)-3-(2-(6-氟-2-羰基-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)噁唑啉-4-酮
Figure PCTCN2017079552-appb-000026
将2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-3-(3,4-二氨基-2-氟苯乙基)噁唑啉-4-酮(300mg，0.54mmol)、CDI(106mg，0.65mmol)溶解在DMF(5mL)中，在氮气的保护下80℃搅拌2小时，反应完成后，将反应液倒入水(100mL)中，用乙酸乙酯(50mL)萃取两次，有机相合并后用饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干，粗品经硅胶柱(二氯甲烷:甲醇＝1:0-40:1)纯化得到白色固体的目标产物(200mg，收率：64％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.64(s,1H)；10.55(s,1H)；8.77(s,1H)；7.90(d,J＝8.4Hz,2H)；7.72(d,J＝8.4Hz,2H)；7.65(t,J＝7Hz,2H)；7.29(t,J＝8.4Hz,2H)；6.67-6.60(m,2H)；6.13(s,1H)；4.30-4.20(m,2H)；3.70(m,1H)；2.91(m,1H)；2.74-2.62(m,2H)；MS：580.2[M+H]+。
将2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)1H-吡唑-4-基)-3-(2-(6-氟-2-羰基-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)噁唑啉-4-酮(19.5g)经SFC(色谱柱：OJ-H；色谱柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注入量：2.0μl；流动相：HEP/EtOH＝60/40(V/V)；流速：0.5mL/min；波长：UV254nm；温度：25℃)手性拆分得到二个光学异构体。
(S)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)1H-吡唑-4-基)-3-(2-(6-氟-2-羰基-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)噁唑啉-4-酮，白色固体，7.48g，收率38.4％。tR3.557min，[α]D-38.78°(c0.5261g/100mL，21.4℃)；纯度：99.62％,ee:100.0％。
(R)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)1H-吡唑-4-基)-3-(2-(6-氟-2-羰基-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)噁唑啉-4-酮，白色固体，7.98g，收率40.9％。tR5.784min，[α]D+37.20°(c0.4893g/100mL，19.7℃)；纯度：98.93％,ee:99.02％。
实施例9：3-(2-(5-氟-1H-苯并[d][1,2,3]三氮唑-6-基)乙基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑啉-4-酮
Figure PCTCN2017079552-appb-000027
将2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)1H-吡唑-4-基)-3-(3,4-二氨基-2-氟苯乙基)噁唑啉-4-酮(160mg,0.29mmol)溶解在冰醋酸(5mL)和水(1mL)中。在冰浴下，将亚硝酸钠(40mg，0.578mmol)溶解在2ml水后滴加到反应液中。半小时后TLC(二氯甲烷:甲醇＝15:1)监测显示原料耗尽。将反应液倒入100mL冰水中，用饱和碳酸氢钠调至碱性，用乙酸乙酯(50mL×2)萃取两次。合并的有机相用盐水洗三次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋蒸浓缩后用DMF溶解，经HPLC制备纯化得到2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-3-(2-(5-氟-1H-苯并[d][1,2,3]三氮唑-6-基)乙基)噁唑啉-4-酮的白色固体目标产物(65mg，收率：39.8％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.78(s,1H)；7.89(d,J＝8.4Hz,2H)；7.78(d,J＝4.8Hz,1H)；7.72(d,J＝8.0Hz,2H)；7.64(s,2H)；7.26(t,J＝9.2Hz,2H)；6.22(s,1H)；4.29-4.19(m,2H)；3.81-3.76(m,1H)；3.07-3.04(m,1H)；2.87-2.83(m,2H)；MS：567.2[M+H]+。
实施例10：2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)1H-吡唑-4-基)-3-(2-(5,7-二氟-1H-苯并[d]咪唑-6-基)乙基)噁唑啉-4-酮
Figure PCTCN2017079552-appb-000028
步骤一、2-氰基-2-(2,6-二氟-4-硝基苯基)乙酸乙酯
将氰基乙酸乙酯(4.8g，42.3mmol)溶于无水DMF(40mL)中，加入60％NaH(1.7g，42.3mmol)，室温搅拌1小时，加入1,2,3-三氟-5-硝基苯(5g，28.2mmol)，70℃反应16小时。冷却到室温，加入40mL水，用2M盐酸调节pH至2-3，用乙酸乙酯(200mL)萃取。将乙酸乙酯溶液用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干得到2-氰基-2-(2,6-二氟-4-硝基苯基)乙酸乙酯的褐色油状粗产物(8.5g)。该化合物不经纯化，直接用于下一步反应。
步骤二、2-(2,6-二氟-4-硝基苯基)乙腈
将2-氰基-2-(2,6-二氟-4-硝基苯基)乙酸乙酯(8.5g，31.5mmol)溶于DMSO(30mL)中，加入氯化锂(1.3g，31.5mmol)和1mL水。130℃反应3小时，冷却到室温，加入100mL水，用乙酸乙酯(200mL)萃取。将乙酸乙酯溶液用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干，粗产品用柱色谱分离(乙酸乙酯:甲醇洗脱＝10:1)，得到2-(2,6-二氟-4-硝基苯基)乙腈的黄色固体(4.0g)。
步骤三、2-(2,6-二氟-4-硝基苯基)乙胺
2-(2,6-二氟-4-硝基苯基)乙腈(4.0g，20.2mmol)溶于四氢呋喃30mL中，加入硼烷四氢呋喃溶液(40mL，1M)。加热回流3小时，冷却到室温，慢慢滴加10mL甲醇，加热回流1小时，将反应液浓缩得到2-(2,6-二氟-4-硝基苯基)乙胺的棕色油状粗产物(4.6g)；MS：203[M+H]+。该化合物不经纯化，直接用于下一步反应。
步骤四、N-(2,6-二氟-4-硝基苯乙基)-2-羟基乙酰胺
2-(2,6-二氟-4-硝基苯基)乙胺(4.6g，22.8mmol)溶于甲醇(60mL)中，加入2-羟基乙酸甲酯(10g，111mmol)，加热回流40小时，将反应液浓缩，粗产品用柱色谱分离(二氯甲 烷:甲醇洗脱＝40：1)，得到N-(2,6-二氟-4-硝基苯乙基)-2-羟基乙酰胺的黄色固体产物(2.5g，收率：42％)；MS:261[M+H]+。
步骤五、2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑基-4基)-3-(2,6-二氟-4-硝基苯乙基)噁唑啉-4酮
将N-(2,6-二氟-4-硝基苯乙基)-2-羟基乙酰胺(2.5g，9.6mmol)和1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-甲醛(3.3g，9.6mmol)溶于甲苯(60mL)中，加入对甲苯磺酸(825mg，4.8mmol)，用分水器分水，加热回流16小时，反应液浓缩，加入50mL水，用乙酸乙酯(60mL)萃取。将萃取液分别用10％的碳酸氢钠溶液和饱和的食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干，粗产品用柱色谱分离(二氯甲烷:甲醇洗脱＝30:1)，得到2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑基-4-基)-3-(2,6-二氟-4-硝基苯乙基)噁唑啉-4酮的白色固体产物(2.6g，收率：46％)；MS:589[M+H]+。
步骤六、3-(4-氨基-2,6-二氟苯乙基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑啉-4-酮
2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑基-4-基)-3-(2,6-二氟-4-硝基苯乙基)噁唑啉-4-酮(2.6g，4.4mmol)溶于乙酸乙酯/甲醇(1:1，40mL)中，加入Raney Ni(300mg)，常压氢化。反应2小时后，停止反应，反应液过滤，乙酸乙酯洗滤饼，滤液旋干得3-(4-氨基-2,6-二氟苯乙基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑啉-4-酮的白色固体产物(2.3g，收率：93％)；MS:559[M+H]+；该化合物不经纯化，直接用于下一步反应。
步骤七、3-(2,6-二氟-5-硝基-4-乙酰氨基苯乙基)-2-(3-(4-氟苯基)-1-(4-溴苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑烷-4-酮
将3-(4-氨基-2,6-二氟苯乙基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑啉-4-酮(1.8g，3.2mmol)溶于20mL二氯甲烷中，加入1mL醋酸酐，室温搅拌反应2小时。将反应液浓缩，残留物中加入***20mL，过滤得3-(2,6-二氟-4-乙酰氨基苯乙基)-2-(3-(4-氟苯基)-1-(4-溴苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑烷-4-酮的白色固体产物(1.8g，93％收率)；MS:601[M+H]+。
步骤八、3-(2,6-二氟-5-硝基-4-乙酰氨基苯乙基)-2-(3-(4-氟苯基)-1-(4-溴苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑烷-4-酮
将3-(2,6-二氟-4-乙酰氨基苯乙基)-2-(3-(4-氟苯基)-1-(4-溴苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑烷-4-酮(1.8g，3mmol)溶于20mL浓硫酸中，在0℃加入硝酸钾(455mg，4.5mmol)，然后恢复至室温，搅拌反应2小时。将反应液倒入碎冰中，用乙酸乙酯(60mL)萃取。将萃取液分别用10％的碳酸氢钠溶液和饱和的食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干，粗产品用柱色谱分离(二氯甲烷:甲醇洗脱＝40:1)，得到3-(2,6-二氟-5-硝基-4-乙酰氨基苯乙基)-2-(3-(4-氟苯基)-1-(4-溴苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑烷-4-酮的浅黄色固体(800mg，收率：41％)；MS:646[M+H]+。
步骤九、3-(4-氨基-2,6-二氟-3-硝基苯乙基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4氟苯基)-1H-吡唑-4- 基)噁唑啉-4-酮
将3-(2,6-二氟-5-硝基-4-乙酰氨基苯乙基)-2-(3-(4-氟苯基)-1-(4-溴苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑烷-4-酮(800mg，1.24mmol)溶于10mL甲醇中，加入0.5mL浓硫酸，加热回流2小时，减压浓缩。向残留物中加入水(20mL)，用乙酸乙酯(40mL)萃取。将萃取液分别用10％的碳酸氢钠溶液和饱和的食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干，粗产品用柱色谱分离(二氯甲烷:甲醇洗脱＝30:1)，得到3-(4-氨基-2,6-二氟-3-硝基苯乙基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4氟苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑啉-4-酮的黄色固体(520mg，收率：69％)；MS:604[M+H]+。
步骤十、2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)1H-吡唑-4-基)-3-(3,4-二氨基-2,6-二氟苯乙基)噁唑啉-4-酮
3-(4-氨基-2,6-二氟-3-硝基苯乙基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑啉-4-酮(480mg，0.8mmol)溶于5mL乙酸乙酯和5mL甲醇中，加入Raney Ni(20mg)，常压氢化。反应1小时后，停止反应，将反应液过滤，用乙酸乙酯/乙醇(1:1)溶液洗滤饼。将滤液旋干得2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-3-(3,4-二氨基-2,6-二氟苯乙基)噁唑啉-4-酮的棕色固体(450mg，收率：98％)，该化合物不经纯化，直接用于下一步反应；MS:574[M+H]+。
步骤十一、2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)1H-吡唑-4-基)-3-(2-(5,7-二氟-1H-苯并[d]咪唑-6-基)乙基)噁唑啉-4-酮
将2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)1H-吡唑-4-基)-3-(3,4-二氨基-2,6-二氟苯乙基)噁唑啉-4-酮(190mg，0.33mmol)溶于5mL甲酸中。将反应液在70℃搅拌反应1小时，浓缩至干，粗品经反相柱色谱分离得2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-3-(2-(5,7-二氟-1H-苯并[d]咪唑-6-基)乙基)噁唑啉-4-酮(88mg，收率：45.8％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.82(s,1H)；8.33(s,1H)；7.90(d,J＝8.4Hz,2H)；7.73(d,J＝8.4Hz,2H)；7.62-7.66(m,2H)；7.26-7.30(m,2H)；7.19(d,J＝9.6Hz,1H)；6.19(s,1H)；4.19-4.31(m,2H)；3.66-3.69(m,1H)；2.79-2.98(m,3H)；MS:584[M+H]+。
实施例11：2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)1H-吡唑-4-基)-3-(2-(4,6-二氟-2-羰基-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)噁唑啉-4-酮
Figure PCTCN2017079552-appb-000029
将2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)1H-吡唑-4-基)-3-(3,4-二氨基-2,6-二氟苯乙基)噁唑啉-4-酮(260mg，0.45mmol)溶于8mL无水DMF中，加入CDI(88mg，0.54mmol)。将反应液在80℃搅拌反应16小时，冷却到室温，加入30mL水，用乙酸乙酯(30mL×2)萃取。将萃取液用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗产品，用柱色谱分离(二氯甲烷:甲醇洗脱＝30：1)纯化，得到2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)1H-吡唑-4-基)-3-(2-(4,6- 二氟-2-羰基-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)噁唑啉-4-酮(160mg)，用二氯甲烷洗涤得白色固体产物(120mg，收率：44％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.93-11.03(m,2H)；8.83(s,1H)；7.91(d,J＝6.8Hz,2H)；7.65-7.74(m,4H)；7.26-7.32(m,2H)；6.57(d,J＝8.8Hz,1H)；6.16(s,1H)；4.21-4.32(m,2H)；3.61-3.64(m,1H)；2.91-2.94(m,1H)；2.67-2.74(m,2H)；MS:600[M+H]+。
实施例12：2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-3-(2-(5,7-二氟-1H氢-苯并[d][1,2,3]三氮唑-6-基)乙基)噁唑啉-4-酮
Figure PCTCN2017079552-appb-000030
2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)1H-吡唑-4-基)-3-(3,4-二氨基-2,6-二氟苯乙基)噁唑啉-4-酮(130mg,0.23mmol)溶解在冰醋酸(5ml)/水(3ml)中，在冰浴下，将亚硝酸钠(32mg,0.46mmol)溶解在2ml水中后滴加到反应液中，半小时后TLC(二氯甲烷:甲醇＝15:1)监测显示原料耗尽。反应液倒入100ml冰水中，用饱和碳酸氢钠调碱性，用乙酸乙酯(50ml×2)萃取两次。合并的有机相用盐水洗三次，用无水硫酸钠干燥，过滤，旋蒸浓缩后用DMF溶解送HPLC制备纯化得到白色固体产物(65mg，收率：40％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.84(s,1H),7.90(d,J＝8.8Hz,2H),7.73(d,J＝8.0Hz,2H),7.66(t,J＝6.4Hz,2H),7.48(d,J＝8.4Hz,1H),7.29(t,J＝8.4Hz,2H),6.23(s,1H),4.32-4.20(m,2H),3.71-3.68(m,1H),3.05-3.02(m,1H),2.90-2.84(m,2H)；MS：583.1[M+H]+。
实施例13：2-(1-(4-溴苯基)-3-(4,6-二氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-3-(2-(2-氧代二氢吲哚-5-基)乙基)噁唑啉-4-酮
Figure PCTCN2017079552-appb-000031
步骤一、甲基-2-(5-氟-2-硝基苯基)甲酸甲酯
在冰浴条件下将浓硫酸(16.0g)慢慢加到2-(3-氟苯基)乙酸甲酯(16.0g，95.23mmol)中，半小时后再慢慢滴加硝酸(12.0ml)，滴加完成后搅拌2小时后，将反应液慢慢倒入冰水中，乙酸乙酯萃取，将有机相浓缩至干，过柱得到白色固体(10.6g，收率：52％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.22-8.19(m,1H)；7.18-7.16(m,1H)；7.14-7.06(m,1H)；4.03(s,2H)；3.73(s,3H)。
步骤二、甲基-2-(2-硝基苯基)氰基甲酸甲酯
将氰基乙酸乙酯(5.3g，46.9mmol)溶于无水DMF(50ml)中，加入NaH(60％)(1.9g，46.9mmol)，室温搅拌1小时。加入甲基-2-(5-氟-2-硝基苯基)甲酸甲酯(5g，28.2mmol)，80℃反应16小时，冷却到室温，加入水，用盐酸(2M)调节pH至3，用乙酸乙酯萃取，旋干得到粗产物，过柱得到褐色油状产物(6.7g，收率：93％)；MS:305[M-H]+。
步骤三、2-(5-(氰基甲基)-2-硝基苯基)甲酸甲酯
将甲基-2-(2-硝基苯基)氰基甲酸甲酯(1.0g，3.26mmol)溶于DMSO(10ml)中，加入氯化钠(0.57g，9.80mmol)和0.05ml水，140℃反应1.5小时，冷却到室温，加入水，用乙酸乙酯萃取，旋干，粗产品用柱色谱分离(二氯甲烷/甲醇洗脱＝30:1)，得到红色油状物的目标产物(700mg，收率：76％)。
步骤四、甲基2-(5-(2-氨基乙基)-2-硝基苯基)甲酸甲酯
将2-(5-(氰基甲基)-2-硝基苯基)甲酸甲酯(0.7g，2.99mmol)溶于四氢呋喃(5ml)中，加入硼烷四氢呋喃溶液(3.29ml，1M)，加热回流2小时，冷却到室温，慢慢滴加10ml甲醇，将反应液浓缩得到红棕色固体的目标产物(638mg，收率：87％)；MS:238[M+H]+。
步骤五、5-(2-(2-羟基乙酰胺)乙基)-2-硝基苯甲酸甲酯
将甲基2-(5-(2-氨基乙基)-2-硝基苯基)甲酸甲酯(638mg，2.68mmol)溶于甲醇(10ml)中，加入2-羟基乙酸甲酯(2.68g，8.04mmol)，加热回流40小时，反应液浓缩，粗产品用柱色谱分离(二氯甲烷/甲醇洗脱＝40:1)，得到红色油状物的目标产物(100mg，收率：12.6％)；MS:296[M+H]+。
步骤六、甲基2-(5-(2-(2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-4-氧代噁唑烷-3-基)甲基)-2-硝基苯基)甲酸甲酯
将5-(2-(2-羟基乙酰胺)乙基)-2-硝基苯甲酸甲酯(100mg，0.34mmol)和1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-甲醛(116mg，0.34mmol)溶于甲苯(13ml)中，加入对甲苯磺酸(32.1mg，0.17mmol)，用分水器分水，加热150℃回流16小时，反应液浓缩，加入水，用乙酸乙酯(60ml)萃取，用10％的碳酸氢钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干，粗产品液相制备，得到棕色固体的目标产物(60mg，收率：28％)；MS:623[M+H]+。
步骤七、甲基2-(5-(2-(2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-4-氧代噁唑烷-3-基)甲基)-2-氨基苯基)甲酸甲酯
将甲基2-(5-(2-(2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-4-氧代噁唑烷-3-基)甲 基)-2-硝基苯基)甲酸甲酯溶于乙酸乙酯/甲醇(1:1)(6ml)中，加入Raney Ni(6mg)，常压氢化。反应16小时后，停止反应，反应液过滤，乙酸乙酯洗滤饼，滤液旋干得黄色固体目标产物(58mg，收率：97％)。该化合物不经纯化，直接用于下一步反应；MS:593[M+H]+。
步骤八、2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)1H-吡唑-4-基)-3-(2-(2-氧代二氢吲哚-5-基)乙基)噁唑啉-4-酮
将甲基2-(5-(2-(2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-4-氧代噁唑烷-3-基)甲基)-2-氨基苯基)甲酸甲酯(58mg，0.1mmol)溶于2mL冰醋酸中，室温搅拌反应16小时，反应液浓缩，得粗品固体，高效液相制备得淡黄色固体产物(8mg，收率：15％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.24(s,1H)；8.73(s,1H)；7.91-7.89(d,J＝8.4Hz,2H)；7.73-7.71(m,2H)；7.67-7.64(m,4H)；7.32-7.28(t,J＝8.8和8.0Hz,2H)；6.86-6.82(m,2H)；6.62-6.60(d,J＝7.6Hz,1H)；6.02(s,1H)；4.26(m,2H)；3.69-3.66(m,1H)；3.18(s,2H)；2.92(m,1H)；2.66(m,2H)；MS:561[M+H]+。
将2-(1-(4-溴苯基)-3-(4,6-二氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-3-(2-(2-氧代二氢吲哚-5-基)乙基)噁唑啉-4-酮(18g)经SFC(色谱柱：OJ-H；色谱柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注入量：2.0μl；流动相：HEP/EtOH＝60/40/(V/V)；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃)手性拆分得到二个光学异构体。
(S)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4,6-二氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-3-(2-(2-氧代二氢吲哚-5-基)乙基)噁唑啉-4-酮，白色固体，6.46g，收率35.9％。tR2.629min，[α]D-22.77°(c 0.5007g/100mL，18.4℃)；纯度：98.39％,ee:100.0％。
(R)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4,6-二氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-3-(2-(2-氧代二氢吲哚-5-基)乙基)噁唑啉-4-酮，白色固体，6.63g，收率36.8％。tR7.951min，[α]D+23.08°(c 0.5113g/100mL，19.2℃)；纯度：99.10％,ee:100.00％。
实施例14：2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-二氟苯基)-1H-吡唑)-3-(2-(3,3-二氟-2-氧吲哚啉-5-乙基)氧吲哚啉-4-酮
Figure PCTCN2017079552-appb-000032
将2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4基)-3-(3，4-二氨基苯乙基)噁唑啉-4酮化合物(521mg,1.0mmol)，2-溴-2,2-二氟乙酸乙酯(0.388mL，3.0mmol)，Cp2Fe(19mg，0.1mmol)溶于5mL DMSO中，在氮气保护下，反应液常温搅拌反应12小时后，加入2mL 1M浓硫酸DMSO溶液，氮气保护下继续反应24小时，反应完成后倒入冰水中并用乙酸乙酯萃取，饱和的食盐水萃取分液，无水硫酸钠干燥，浓缩干，粗品经制备HPLC分离得到白色固体(10mg,收率：1.6％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.03(s,1H),8.72(s,1H),7.90(d,J＝8.8Hz,2H), 7.73-7.65(m,4H),7.35-7.20(m,4H),6.78(d,J＝8.0Hz，1H),6.07(s,1H),4.27-4.24(m,2H),3.74-3.70(m,1H),3.02-2.95(m,1H),2.73-2.64(m，2H)；MS：597[M+H]+。
实施例15：3-(2-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)-2-(1-(4-氟苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-噁唑烷-4-酮
Figure PCTCN2017079552-appb-000033
步骤一、1-(4-氟苯基)-2-(1-(4-氟苯基)亚乙基)肼
将1-(4-氟苯基)乙酮(17.0g，123mmol)、1-(4-氟苯基)肼盐酸盐(20.0g，123mmol)和醋酸钾(12.0g，123mmol)加入到乙醇(200mL)中，在88℃下搅拌过夜。将反应混合物真空浓缩至干后用二氯甲烷溶解，过滤得到粗品，最后用石油醚洗涤得到1-(4-氟苯基)-2-(1-(4-氟苯基)亚乙基)肼(26.0g,105mmol，收率：85％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.25(s,2H)；7.82-7.80(m,2H)；7.23-7.18(m,4H)；7.08-7.04(m,2H)；2.24(s,3H)。
步骤二、1-(4-氟苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-甲醛
在冰浴条件下，将三氯氧磷(13.5mL，142mmol)慢慢滴加到无水DMF(11mL,142mmol)中，搅拌30min后，在氮气保护下将1-(4-氟苯基)-2-(1-(4-氟苯基)亚乙基)肼(20.0g，81.2mmol)在25mL无水DMF中的溶液慢慢滴加到反应液中，室温搅拌1小时，升温到70℃，继续反应5小时，将反应液倒入冰水中，过滤，丙酮打浆，过滤得到白色固体产物(18g，63.4mmol，收率：78％)。
步骤三、2-(1-(4-氟苯基)-3-(4-氟苯基)-4-1H-吡唑基)-3-(4-硝基苯乙基)噁唑啉-4-酮
将1-(4-氟苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-甲醛(9.65g,33.9mmol)、2-羟基-N-(4-硝基苯乙基)乙酰胺(9.14g,40.8mmol)和对甲苯磺酸一水化合物(3.23g，16.9mmol)溶于250mL甲苯中，用分水器加热回流16小时后，用乙酸乙酯萃取，旋干溶剂。粗品分散在水中，搅拌15min后过滤，滤饼分散在甲醇中，搅拌30min后过滤。旋干溶剂后得2-(1-(4-氟苯基)-3-(4-氟苯 基)-4-1H-吡唑基)-3-(4-硝基苯乙基)噁唑啉-4-酮(13.3g，27.1mmol，收率：80％)。
步骤四、3-(4-氨基苯乙基)-2-(1-(4-氟苯基)-3-(4-氟苯基)-4-1H-吡唑基)噁唑啉-4-酮
将2-(1-(4-氟苯基)-3-(4-氟苯基)-4-1H-吡唑基)-3-(4-硝基苯乙基)噁唑啉-4-酮(13.3g，27.1mmol)溶于乙酸乙酯/甲醇(1:1，300mL)中，加入Raney Ni(2.6g)，通入氢气，在50℃下搅拌16小时，过滤浓缩后得3-(4-氨基苯乙基)-2-(1-(4-氟苯基)-3-(4-氟苯基)-4-1H-吡唑基)噁唑啉-4-酮(12g，26.2mmol，收率：97％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.71(s,1H)；8.00(m,2H)；7.69(m,2H)；7.42(t,2H)；7.36(t,2H)；6.73(d,2H)；6.45(d,2H)；6.13(s,1H)；4.92(s,2H)；4.28(dd,2H,J＝13和21Hz)；3.65(m,1H)；2.87(m,1H)；2.62-2.42(m,2H)。
步骤五、N-(4-(2-(2-(1-(4-氟苯基)-3-(4-氟苯基)-4-1H-吡唑基)-4-噁唑啉-3基)乙基)-2-硝基苯基)乙酰胺
将3-(4-氨基苯乙基)-2-(1-(4-氟苯基)-3-(4-氟苯基)-4-1H-吡唑基)噁唑啉-4-酮(12.0g，26mmol)溶于Ac2O(100mL)，在室温下搅拌60min。反应完成后，将反应混合物冷却至0℃，然后将HNO3(65％，2.7mL)慢慢加入反应混合物中。反应混合物在室温搅拌过夜。TLC(石油醚:醋酸乙酯＝1:2)显示反应几乎完成。真空浓缩反应混合物至干，粗品用乙酸乙酯重结晶，过滤得到白色固体(12.0g，21.9mmol，收率：73％)。
步骤六、3-(4-氨基-3-硝基苯乙基)-2-(1-(4-氟苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑基-4基)噁唑啉-4-酮
将N-(4-(2-(2-(1-(4-氟苯基)-3-(4-氟苯基)-4-1H-吡唑基)-4-噁唑啉-3-基)乙基)-2-硝基苯基)乙酰胺(12.0g，22mmol)溶于甲醇(300mL)、NaOH(1N,40mL)中，回流过夜。向反应液中加入乙酸乙酯，分液。乙酸乙酯相用饱和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空浓缩得到3-(4-氨基-3-硝基苯乙基)-2-(1-(4-氟苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑基-4-基)噁唑啉-4-酮粗品(10.0g，19.8mmol，收率：90％)，直接用于下一步反应。
步骤七、2-(1-(4-氟苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-3-(3,4-二氨基苯乙基)噁唑啉-4-酮
将3-(4-氨基-3-硝基苯乙基)-2-(1-(4-氟苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑基-4-基)噁唑啉-4-酮粗品(10.0g，19.8mmol)溶于乙酸乙酯/甲醇(1:1，400mL)中，加入Raney Ni(2.0g)，通入氢气，在50℃下搅拌16小时，过滤浓缩后得到3-(4-氨基苯乙基)-2-(1-(4-氟苯基)-3-(4-氟苯基)-4-1H-吡唑基)噁唑啉-4-酮粗品(9.0g，18.9mmol，收率：95％)，直接用于下一步反应。
步骤八、2-(1-(4-氟苯基)-3-(4-氟苯基)1H-吡唑-4-基)-3-(2-(6-氟-2-羰基-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)噁唑啉-4-酮
将2-(1-(4-氟苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4基)-3-(3，4-二氨基苯乙基)噁唑啉-4酮粗品(9.0g,18.9mmol)、CDI(3.8g,23.4mmol)溶解在无水DMF(10mL)中，在氮气的保护下60℃搅拌4小时，反应完成后，将反应液倒入水(300mL)中，用乙酸乙酯(300mL×3)萃 取，有机相合并后用饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干，得到粗品(6.0g)，二氯甲烷洗涤，过滤，固体真空干燥得到2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)1H-吡唑-4-基)-3-(2-(6-氟-2-羰基-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)噁唑啉-4-酮(3.0g,6.0mmol，32％：收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.44(s,2H),8.65(s,1H),7.96-7.92(m,2H),7.64-7.61(m,2H),7.37(t,J＝8.4Hz,2H),7.28(t,J＝8.8Hz,2H),6.73-6.59(m,3H),6.02(s,1H),4.26-4.23(m,2H),3.67-3.63(m,1H),2.91-2.88(m,1H),2.68-2.62(m,2H)；MS：502.2[M+H]+。
将3-(2-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)-2-(1-(4-氟苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-噁唑烷-4-酮(3g)经SFC(色谱柱：OJ-H；色谱柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注入量：2.0μl；流动相：HEP/EtOH＝60/40(V/V)；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃)手性拆分得到二个光学异构体。
(S)-3-(2-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)-2-(1-(4-氟苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-噁唑烷-4-酮，白色固体，1.00g，收率33.3％。tR1.831min，[α]D-12.30°(c 0.5040g/100mL，14.7℃)；纯度：99.52％,ee:100.0％。
(R)-3-(2-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)-2-(1-(4-氟苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-噁唑烷-4-酮，白色固体，0.88g，收率29.3％。tR2.275min，[α]D+14.80°(c 0.5001g/100mL，14.1℃)；纯度：99.45％,ee:99.54％。
实施例16：6-(2-{2-[1-(4-溴-苯基)-3-(4-氟-苯基)-1-氢-吡唑-4-基]-4-羰基-噁唑啉-3-基}-乙基)-3-氢-2-羰基-苯并噁唑
Figure PCTCN2017079552-appb-000034
步骤一、(3-甲氧基-4-硝基-苯基)-氰基乙酸乙酯
将氰基乙酸乙酯(3.6g,32.1mmol)溶解在DMF(50mL)中，随后室温下分批加入氢化钠(0.9g,矿物油中60％,37.9mmol)，加完搅拌半小时后加入3-甲氧基-4-硝基-氟苯(5.0g, 29.2mmol)。反应液加热到100℃，并搅拌一小时。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)显示原料耗尽。反应液用300mL冰水饱和氯化铵淬灭，随后加入稀盐酸直至红棕色褪去，乙酸乙酯(100mL×2)萃取两次，合并的有机相用饱和食盐水洗三次，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得到棕色油状物粗品(9.0g,100％)，直接用于下一步反应。
步骤二、(3-甲氧基-4-硝基-苯基)-乙氰
将(3-甲氧基-4-硝基-苯基)-氰基乙酸乙酯(9.0g,0.034mol)、氯化钠(3.37g,0.058mol)、水(0.54ml,0.03mol)溶解在DMSO(90mL)中，加热到100℃过夜，TLC显示反应原料耗尽。反应液用500mL水稀释，乙酸乙酯(100mL×2)萃取两次，合并的有机相用饱和食盐水洗三次，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，粗品用硅胶柱纯化得到红棕色固体产物(2.6g,40％)。
步骤三、(3-甲氧基-4-硝基-苯基)-乙胺
将(3-甲氧基-4-硝基-苯基)-乙氰(2.6g,13.5mmol)溶解在四氢呋喃(10mL)中，随后室温下慢慢滴加1N硼烷四氢呋喃溶液(67ml,67mmol)。滴加完成后反应液加热回流一小时，TLC显示原料耗尽。反应液冰浴下滴加甲醇淬灭，浓缩得到黑色油状物粗品(2.9g，100％)，直接用于下一步反应。MS：197.1[M+H]+。
步骤四、2-羟基-N-[2-(3-甲氧基-4-硝基-苯基)-乙基]-乙酰胺
将(3-甲氧基-4-硝基-苯基)-乙胺(2.9g,0.014mmol)、羟基乙酸甲酯(20.0g,0.222mol)溶解在甲醇(30mL)中，加热回流过夜，TLC显示原料耗尽，反应液浓缩，粗品经硅胶柱(石油醚:乙酸乙酯＝5:1-0:1)纯化得到棕色油状产物(2.0g,56％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.81(d,J＝8.4Hz,1H),6.93(s,1H),6.86(d,J＝8.0Hz,1H),6.80(s,1H),4.05(s,2H),3.95(s,3H),3.61-3.56(m,2H),2.93-2.89(m,2H)；MS：255.3[M+H]+。
步骤五、2-[1-(4-溴-苯基)-3-(4-氟-苯基)-1-氢-吡唑-4-基]-3-[2-(3-甲氧基-4-硝基-苯基)-乙基]-4-羰基-噁唑啉
将2-羟基-N-[2-(3-甲氧基-4-硝基-苯基)-乙基]-乙酰胺(4.0g,3.94mmol)、1-[1-(4-溴-苯基)-3-(4-氟-苯基)-1-氢-吡唑-4-甲醛(1.4g，4.13mmol)、一水合对甲基苯磺酸(0.37g,1.97mmol)溶解在甲苯(20ml)中，用分水器分水，加热到150℃回流过夜。TLC检测显示原料消失。反应液浓缩，粗品用硅胶柱纯化得到黄色固体产物(1.1g,48％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.74(s，1H),7.90(d,J＝8.4Hz,2H),7.73-7.64(m,5H),7.29(t,J＝8.4Hz,2H),7.07(s,1H),6.80(d,J＝8.4Hz,1H),6.05(s,1H),4.31-4.23(m,2H),3.85-3.81(m，1H),3.77(s,3H),3.14-3.07(m,1H),2.85-2.73(m,2H)；MS：581.1[M+H]+。
步骤六、2-[1-(4-溴-苯基)-3-(4-氟-苯基)-1-氢-吡唑-4-基]-3-[2-(3-羟基-4-硝基-苯基)-乙基]-4-羰基-噁唑啉
将2-[1-(4-溴-苯基)-3-(4-氟-苯基)-1-氢-吡唑-4-基]-3-[2-(3-甲氧基-4-硝基-苯基)-乙基]-4-羰基-噁唑啉(0.9g,1.55mmol)溶解在二氯甲烷(20mL)中，干冰丙酮浴-78℃下滴加 三溴化硼(1.9g,7.75mmol),反应搅拌过夜，温度自然恢复至室温。TLC显示反应原料耗尽，反应液用甲醇淬灭，碳酸氢钠调中性，二氯甲烷(50mL×2)萃取两次。合并的有机相用饱和盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得到黄色固体粗产物(777mg)，直接用于下一步反应。MS：569.1[M+H]+。
步骤七、2-[1-(4-溴-苯基)-3-(4-氟-苯基)-1-氢-吡唑-4-基]-3-[2-(3-羟基-4-氨基-苯基)-乙基]-4-羰基-噁唑啉
将2-[1-(4-溴-苯基)-3-(4-氟-苯基)-1-氢-吡唑-4-基]-3-[2-(3-羟基-4-硝基-苯基)-乙基]-4-羰基-噁唑啉(777mg,1.37mmol)溶解在甲醇(50mL)中，加入Ra-Ni(100mg)，常压氢化搅拌1小时，TLC显示原料耗尽。反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩得到棕色固体固体粗产物(660mg)，直接用于下一步反应。MS：537.1[M+H]+。
步骤八、6-(2-{2-[1-(4-溴-苯基)-3-(4-氟-苯基)-1-氢-吡唑-4-基]-4-羰基-噁唑啉-3-基}-乙基)-3-氢-2-羰基-苯并噁唑
将2-[1-(4-溴-苯基)-3-(4-氟-苯基)-1-氢-吡唑-4-基]-3-[2-(3-羟基-4-氨基-苯基)-乙基]-4-羰基-噁唑啉(300mg,0.559mmol)溶解在无水DMF(10mL)中，随后室温下加入羰基二咪唑CDI(110mg,0.67mmol)。反应液加热到70℃一小时，TLC显示原料耗尽，反应液用100mL水淬灭，乙酸乙酯(50mL×2)萃取两次。合并的有机相用饱和食盐水洗涤三次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，粗品送HPLC制备得到白色固体产物(100mg,32％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.44(s,1H),8.71(s,1H),7.90(d,J＝8.8Hz,2H),7.72(d,J＝8.8Hz,2H),7.65-7.61(dd,J＝8.8Hz,5.6Hz,2H),7.28(t,J＝8.8Hz,2H),7.00(s,1H),6.87-6.80(m,2H),5.97(s,1H),4.30-4.21(m,2H),3.75-3.70(m,1H),3.00-2.94(m,1H),2.71-2.65(m,2H)；MS：563.1[M+H]+。
实施例17：5-(2-(2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-4-噁唑啉-3-基)乙基)苯并[d]噁唑-2(3H)-酮
Figure PCTCN2017079552-appb-000035
步骤一、2-(4-羟基-3-硝基苯基)乙酸
将2-(4-羟基苯基)乙酸(12g，78.9mmol)溶于醋酸(75mL)中，冷却到0℃，然后滴加硝酸(65％，4.08mL，91.9mmol)。反应液升温到室温，在室温下搅拌2小时。过滤，固体用***(10mL×2)洗涤，减压干燥得到2-(4-羟基-3-硝基苯基)乙酸(10.0g，50mmol，收率：64％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.42(m，1H),10.84(m,1H),7.80(s,1H),7.45(d,J＝8.4Hz,1H),7.09(d,J＝8.4Hz,1H),3.60(s,2H)。
步骤二、2-(4-甲氧基-3-硝基苯基)乙酸甲酯
将2-(4-羟基-3-硝基苯基)乙酸(10.0g，50mmol)溶解到N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中，将碳酸钾(21.0g，152.2mmol)加入溶液中，然后加入碘甲烷(21.0g，147.9mmol)。将反应混合物升温至50℃并反应30min。TLC显示反应完全。将反应混合物慢慢加入到300mL的水中，过滤，固体用水洗涤，真空干燥得到2-(4-甲氧基-3-硝基苯基)乙酸甲酯(11.2g，49.8mmol，收率：98％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.81(d,J＝2.4Hz,1H),7.57(dd,J＝2.4和8.8Hz,1H),7.33(d,J＝8.8Hz,1H),3.91(s,3H),3.75(s,2H),3.63(s,3H)；MS：226.3[M+H]+。
步骤三、2-(4-甲氧基-3-硝基苯基)乙酸
将2-(4-甲氧基-3-硝基苯基)乙酸甲酯(8.0g，35.6mmol)溶于四氢呋喃(80mL)和水(20mL)中。将氢氧化锂一水合物(4.5g，106.7mmol)缓慢加到反应液中，室温搅拌反应1小时。减压除去四氢呋喃后，用盐酸(3N)调pH至3，反应液搅拌15min后过滤，滤饼用50mL的水洗涤，干燥得2-(4-甲氧基-3-硝基苯基)乙酸(6.0g，28.4mmol，收率：80％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.46(m，1H),7.79(d,J＝2.4Hz,1H),7.56(dd,J＝2.4和8.8Hz,1H),7.32(d,J＝8.8Hz,1H),3.91(s,3H),3.64(s,2H)。
步骤四、2-(4-甲氧基-3-硝基苯基)乙酰胺
将2-(4-甲氧基-3-硝基苯基)乙酸(6.0g，28.4mmol)加入到氯化亚砜(20mL)中，然后升温到100℃，并反应1小时。反应液旋蒸至干，并溶于四氢呋喃(80mL)中，在0℃将溶液慢慢加入到氨水(50mL)中并在室温反应1小时。将四氢呋喃旋蒸除去，过滤，滤饼干燥得到2-(4-甲氧基-3-硝基苯基)乙酰胺(5.0g，23.8mmol，收率84％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.77(d,J＝2.4Hz,1H),7.53(dd,J＝2.4和8.8Hz,1H),7.30(d,J＝8.8Hz,1H),6.95(brs,2H),3.90(s,3H),3.42(s,2H)；MS：211.3[M+H]+。
步骤五、2-(4-甲氧基-3-硝基苯基)乙胺
2-(4-甲氧基-3-硝基苯乙基)乙酰胺(2.0g，9.52mmol)加入到四氢呋喃(80mL)中，然后加入硼烷四氢呋喃(1M，50mL，50mmol)，室温搅拌1小时，然后升温至70℃反应2小时。反应液用浓盐酸淬灭，将四氢呋喃旋蒸除去，然后用饱和碳酸钠调pH至9，反应液用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。萃取液合并，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，滤液旋蒸至干得到2-(4-甲氧基-3-硝基苯基)乙胺(2g，9.52mmol，收率：100％)。MS：197.3[M+H]+。
步骤六、2-羟基-N-(4-甲氧基-3-硝基苯乙基)乙酰胺
将2-(4-甲氧基-3-硝基苯乙基)乙胺(2.0g，10.2mmol)、羟基乙酸甲酯(18.0g,200mmol)溶解在50mL甲醇中，加热回流两天。反应液冷却到室温，并旋蒸浓缩至干，粗品经硅胶柱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝5:1-1:2)得到化合物2-羟基-N-(4-甲氧基-3-硝基苯乙基)乙酰胺(550mg，2.2mmol，收率：21％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.69(d,J＝2.4Hz,1H),7.41(dd,J＝2.4和8.8Hz,1H),7.05(d,J＝8.8Hz,1H),6.81(brs,1H),4.06(s,2H),3.94(s,3H)，3.44(m,2H),2.94(m,2H)；MS：255.3[M+H]+。
步骤七、2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-3-(4-甲氧基-3-硝基苯基)噁唑啉-4-酮
将2-羟基-N-(4-甲氧基-3-硝基苯乙基)乙酰胺(550mg，2.2mmol)、1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-甲醛(747mg，2.2mmol)、一水合对甲苯磺酸(74mg，0.43mmol)溶解在50mL甲苯中，加热到150℃，用分水器分水过夜。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)显示原料耗尽。反应液经旋蒸浓缩，然后用硅胶柱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝2:1-0:1)，得到化合物2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-3-(4-甲氧基-3-硝基苯基)噁唑啉-4-酮(600mg，1.03mmol，收率：50％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.89(s,1H),7.66-7.59(m,6H),7.48(s,1H),7.24(m,1H),7.17(m,2H),6.90(d,J＝8.4Hz,1H),5.95(s,1H),4.34(dd,J＝13.6和20.8Hz,2H),3.87(s,3H),3.80(m,1H),3.02(m,1H),2.73(m,2H)；MS：581.1，583.1[M+H]+。
步骤八、2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-3-(4-羟基-3-硝基苯基)噁唑啉-4-酮
将2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-3-(4-甲氧基-3-硝基苯基)噁唑啉-4-酮(600mg，1.03mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，冷却到-70℃，然后慢慢加入三溴化硼(774mg，3.09mmol)。反应液慢慢升温至室温，并搅拌1小时。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)显示原料耗尽。反应液冷却到-70℃，甲醇(10mL)淬灭，加入固体碳酸氢钠(2g)，反应混合物慢慢升温至室温并在室温搅拌2小时。过滤，滤液浓缩至干。加入20mL乙酸乙酯形成溶液，该溶液用饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩至干得到2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-3-(4-羟基-3-硝基苯基)噁唑啉-4-酮(600mg，1.03mmol，收率：100％)。MS：567.2,569.1[M+H]+。
步骤九、2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-3-(4-羟基-3-氨基苯基)噁唑啉-4-酮
将2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-3-(4-羟基-3-硝基苯基)噁唑啉-4-酮(600mg，1.03mmol)溶于甲醇(10mL)中，加入Raney Ni(100mg)，氢气球常压30℃氢化。反应1小时后，反应液过滤，乙酸乙酯洗滤饼，滤液旋干得粗品，粗品用硅胶柱纯化得到2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-yl)-3-(4-羟基-3-氨基苯基)噁唑啉-4-酮(250mg，0.46mmol，收率：45％)。MS：537.1，539.1[M+H]+。
步骤十、5-(2-(2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-4-噁唑啉-3-基)乙基)苯并[d]噁唑-2(3H)-酮
将2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-yl)-3-(4-羟基-3-氨基苯基)噁唑啉-4-酮(250mg，0.46mmol)和N,N’-羰基二咪唑(327mg，2.32mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中，在70℃下搅拌过夜。将反应混合物真空浓缩干后，制备HPLC纯化得到5-(2-(2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-4-噁唑啉-3-基)乙基)苯并[d]噁唑-2(3H)-酮(96.4mg,0.17mmol，收率：40％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.43(m,1H),8.72(s,1H),7.91(d,J＝9.2Hz,2H),7.73(d,J＝8.8Hz,2H),7.65(d,J＝8.8Hz,2H),7.31(d,J＝8.8Hz,2H),7.02(d,J＝8.0Hz,1H),6.79(s,1H),6.76(d,J＝8.0Hz,1H),5.96(s,1H),4.26(dd,J＝13.2和21.6Hz,2H),3.73(m,1H),2.94(m,1H),2.70(m,2H)；MS：563.2，565.1[M+H]+。
实施例18：2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-3-(2-(2-羰基-2,3-二氢苯并[d]噻唑-6-基)乙基)-4-羰基-噁唑啉
Figure PCTCN2017079552-appb-000036
步骤一、3-(4-氨基-3-碘苯基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯)-1H-吡唑-4-基)-4-羰基-噁唑啉
将3-(4-氨基苯基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯)-1-氢-吡唑-4-基)-4-羰基-噁唑啉(100mg,0.192mmol)溶解在冰乙酸(5mL)中，室温下滴加溶解在1mL二氯甲烷的氯化碘(37mg,0.23mmol)，室温搅拌0.5小时。反应液用100mL水稀释，乙酸乙酯(50mL×2)萃取两次。合并的有机相用饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，粗品用硅胶柱(石油醚:乙酸乙酯＝5:1-1:1)纯化得到棕色固体产物(100mg，收率：81％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.79(s,1H),7.64-7.58(m,6H),7.27(d,J＝8.8Hz,1H),7.16(t,J＝8.4Hz,2H),6.80(d,J＝8.0Hz,1H),6.53(d,J＝8.0Hz,1H),5.86(s,1H),4.36-4.27(m,2H),3.97(s,2H),3.82-3.75(m,1H),2.95-2.88(m,1H),2.62-2.59(m,2H)；MS：647.1[M+H]+。
步骤二、乙基(4-(2-(2-(1-(4-溴苯)-3-(4-氟苯)-1-氢-吡唑-4-基)-4-羰基噁唑啉-3-基)乙基)-2-碘苯)氨基甲酸乙酯
将3-(4-氨基-3-碘苯基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯)-1-氢-吡唑-4-基)-4-羰基-噁唑啉(100mg,0.15mmol)，碳酸钾(212mg,1.54mmol)溶解在丙酮(5mL)中，随后室温下滴加氯甲酸 乙酯(90mg，1.54mmol)，室温搅拌2小时。反应液用100mL水稀释，乙酸乙酯(50mL×2)萃取两次。合并的有机相用饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，粗品用硅胶柱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化得到棕色固体产物(90mg，收率：81％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.86(d,J＝8.4Hz,1H),7.78(s,1H),7.63-7.58(m,6H),7.40(s,1H),7.15(t,J＝8.4Hz,2H),6.98(d,J＝8.4Hz,1H),6.79(s,1H),5.84(s,1H),4.38-4.28(m,2H),3.80-3.74(m,1H),2.98-2.93(m,1H),2.69-2.65(m,2H)；MS：721.1[M+H]+。
步骤三、2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1-氢-吡唑-4-基)-3-(2-(2-羰基-2,3-二氢苯并[d]噻唑-6-基)乙基)-4-羰基-噁唑啉
在一个100mL回流密闭的三口瓶中，将乙基(4-(2-(2-(1-(4-溴苯)-3-(4-氟苯)-1-氢-吡唑-4-基)-4-羰基噁唑啉-3-基)乙基)-2-碘苯)氨基甲酸乙酯(80mg,0.111mmol)、CuI(2.2mg,0.011mmol)、Na2S.9H2O(80mg,0.333mmol)溶解在DMF(5mL)中，在氮气保护下加热到80℃搅拌过夜，LC-MS显示原料消失，中间体形成。反应液冷却到室温，经注射器加入3mL冰乙酸，然后在氮气保护下加热到130℃，并搅拌3小时。反应液冷却到室温，加硅藻土过滤，滤渣用乙酸乙酯(50mL)洗涤，滤液用100mL水洗一次，水相用乙酸乙酯(50mL)萃取一次，合并有机相用饱和食盐水水洗三次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，HPLC制备得到白色固体产物(4mg，收率：6％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.77(s,1H),7.95(d,J＝8.4Hz,2H),7.78(d,J＝8.8Hz,2H),7.70(t,J＝8.0Hz,2H),7.34(t,J＝8.8Hz,3H),7.02-6.95(m,2H),6.09(s,1H),4.36-4.28(m,2H),3.79-3.75(m,1H),3.07-3.00(m,1H),2.77-2.68(m,2H)；MS：579.2[M+H]+。
实施例19：2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-3-(2-(2-氧-2,3-二氢苯并[d]噻唑-5-基)乙基)噁唑啉-4-酮
Figure PCTCN2017079552-appb-000037
步骤一、O-(4-(2-(2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-4-噁唑啉-3-基)乙基)-2-硝基苯基)二甲氨基硫代羧酸
将2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-3-(4-羟基-3-硝基苯基)噁唑啉-4-酮(800mg，1.45mmol)溶于无水DMF(10mL)，在0℃加入氢化钠(60％，70mg，1.75mmol)， 并搅拌30min，在氮气保护下将二甲氨基硫代酰氯(356mg，11.18mmol)慢慢滴加到反应液中，室温搅拌过夜，将反应液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯相用饱和食盐水洗涤三次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋蒸至干。粗品经硅胶柱纯化分离得到O-(4-(2-(2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-4-噁唑啉-3-基)乙基)-2-硝基苯基)二甲氨基硫代羧酸(230mg，0.35mmol，收率：24％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.93(s,1H),7.76(s,1H),7.70-7.56(m,6H),7.36(dd,J＝8.4,2.0,1H),7.21-7.08(m,3H),5.89(s,1H),4.39-4.28(m,2H),3.86-3.76(m,1H),3.47(s,3H),3.40(s,3H),3.03-2.96(m,1H),2.82(m,2H)；MS:654.2,656.2[M+H]+。
步骤二、S-(4-(2-(2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-4-噁唑啉-3-基)乙基)-2-硝基苯基)二甲氨基硫代羧酸
在室温下将O-(4-(2-(2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-4-噁唑啉-3-基)乙基)-2-硝基苯基)二甲氨基硫代羧酸(230mg，0.35mmol)加入到环丁砜(2mL)中，在氮气保护下升温到150℃，反应1小时。将反应液倒入冰水中，用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯相用饱和食盐水洗涤三次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋蒸至干。粗品通过硅胶柱纯化分离得到S-(4-(2-(2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-4-噁唑啉-3-基)乙基)-2-硝基苯基)二甲氨基硫代羧酸(230mg，0.35mmol，收率：100％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.95(s,1H),7.66-7.52(m,8H),7.27(d,J＝8.0Hz,1H),7.15(t,J＝8.4Hz,2H),5.79(s,1H),4.39-4.25(m,2H),3.82-3.68(m,1H),3.13(s,3H),3.02(s,3H),3.00-2.95(m,1H),2.86-2.81(m,2H)；MS:654.2,656.2[M+H]+。
步骤三、S-(2-氨基-4-(2-(2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-yl)-4-噁唑啉-3-基)乙基)苯基)二甲氨基硫代羧酸
将S-(4-(2-(2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-4-噁唑啉-3-基)乙基)-2-硝基苯基)二甲氨基硫代羧酸(230mg，0.35mmol)溶入到乙酸乙酯(20mL)中，慢慢加入二氯化锡(665mg，3.5mol)，室温搅拌过夜。加入乙酸乙酯(50mL)稀释反应液，用饱和碳酸氢钠调节pH到碱性。反应混合物过滤，滤液乙酸乙酯相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋蒸至干得到S-(2-氨基-4-(2-(2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-yl)-4-噁唑啉-3-基)乙基)苯基)二甲氨基硫代羧酸粗品(200mg)，直接用于下一步反应。MS:624.3,626.2[M+H]+。
步骤四、3-(3-氨基-4-巯基苯基乙基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑啉-4-酮
将S-(2-氨基-4-(2-(2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-yl)-4-噁唑啉-3-基)乙基)苯基)二甲氨基硫代羧酸粗品(200mg)溶到甲醇(20mL)，慢慢加入氢氧化钠(2N,2mL，4mol)，然后升温至70℃搅拌过夜。将反应液降到室温后，调节pH 7，甲醇旋蒸除去，用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋蒸至干得到3-(3-氨基-4-巯基苯基乙基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑啉-4-酮粗 品(180mg)，直接用于下一步反应。
步骤五、2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-3-(2-(2-氧-2,3-二氢苯并[d]噻唑-5-基)乙基)噁唑啉-4-酮
将3-(3-氨基-4-巯基苯基乙基)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑啉-4-酮粗品(180mg)溶到四氢呋喃(20mL)，加入N,N′-羰基二咪唑(105mg，0.648mmol)，升温到70℃，反应过夜，反应液旋蒸至干，然后用HPLC制备得到2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-3-(2-(2-氧-2,3-二氢苯并[d]噻唑-5-基)乙基)噁唑啉-4-酮(14.5mg，0.025mmol)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.71(s,1H),8.73(s,1H),7.90(d,J＝9.2Hz,2H),7.71(d,J＝8.8Hz,2H),7.66-7.62(m,2H),7.34-7.27(m,3H),6.82-6.81(m,2H),6.02(s,1H),4.31-4.25(m,2H),3.84-3.66(m,1H),3.00-2.96(m,1H),2.80-2.67(m,2H)；MS:579.2,581.0[M+H]+。
实施例20：2-(1-(4-溴苯基)-3-(噻吩-3-基)-1H-吡唑-4-基)-3-(2-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)噁唑烷-4-酮
Figure PCTCN2017079552-appb-000038
步骤一、4-(2-氨基乙基)苯胺
将2-(4-硝基苯基)乙胺(5.0g，30mmol)、Raney Ni(500mg)加入甲醇(50mL)中，在1个大气压的氢气下搅拌过夜。将反应混合物过滤，Raney Ni用甲醇(50mL×4)洗涤，滤液旋干得到4-(2-氨基乙基)苯胺(4.1g，30mmol)，收率：100％。
步骤二、N-(4-(2-乙酰氨基乙基)苯基)乙酰胺
将4-(2-氨基乙基)苯胺(4.1g，30mmol)溶解于二氯甲烷(100mL)中，然后降温到0℃，冰浴条件下将醋酸酐(15.3g,150mmol)滴加溶液中。移去冰浴，室温反应2小时。将二氯甲烷旋蒸除去，浓缩液加入到50mL水中，搅拌30min，过滤得到N-(4-(2-乙酰氨基乙基)苯基)乙酰胺化合物(4.9g，22.3mmol，收率：74％)。MS：221.2[M+H]+。
步骤三、N-(4-乙酰氨基-3-硝基苯乙基)乙酰胺
将N-(4-(2-乙酰氨基乙基)苯基)乙酰胺(4.9g，22.3mmol)溶于浓硫酸(30mL)中，冰浴降温到0℃，将发烟硝酸(2.1g，33.3mmol)缓慢滴加到反应液中，移去冰浴，室温反应1小时。将反应液缓慢靠瓶壁加入400mL冰水中，搅拌15min后过滤，滤饼用50mL的水洗涤，滤饼干燥得N-(4-乙酰氨基-3-硝基苯乙基)乙酰胺粗品(5.2g)，直接用于下一步反应。
步骤四、4-(2-氨基乙基)-2-硝基苯胺
将N-(4-乙酰氨基-3-硝基苯乙基)乙酰胺粗品(5.2g)加入到盐酸(6M，60mL)中，然后升温到100℃过夜(16小时)。将反应液旋蒸至干，加入饱和碳酸氢钠，用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯相用饱和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋蒸得到4-(2-氨基乙基)-2-硝基苯胺粗品(1.5g)，直接用于下一步反应。MS：182.0[M+H]+。
步骤五、叔丁基-4-氨基-3-硝基苯氨基甲酸酯
将4-(2-氨基乙基)-2-硝基苯胺粗品(1.5g，约8.3mmol)加入到氢氧化钠(1M，50mL)中，在搅拌下加入Boc2O(2.2g,10.1mmol)，室温搅拌过夜。反应液用稀盐酸调pH至7-8，用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯相合并，用无水Na2SO4干燥，过滤，滤液旋蒸得到粗品。经硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝20:1-5:1)得到叔丁基-4-氨基-3-硝基苯氨基甲酸酯(1.8g，6.4mmol)。MS：304.3[M+Na]+。
步骤六、叔丁基3,4-二氨基苯乙基氨基甲酸叔丁酯
将叔丁基-4-氨基-3-硝基苯氨基甲酸酯(1.8g，6.4mmol)溶于甲醇(100mL)中，加入Pd/C(0.36g),通入氢气，30℃搅拌16小时，过滤浓缩后得叔丁基3,4-二氨基苯乙基氨基甲酸叔丁酯(1.6g，6.4mmol,收率：100％)。MS：274.3[M+Na]+。
步骤七、叔丁基(2-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
将叔丁基3,4-二氨基苯乙基氨基甲酸叔丁酯(1.6g，6.4mmol)加入到乙腈(30mL)中，在搅拌下加入N,N′-羰基二咪唑(CDI)(1.2g，7.4mmol)。反应液升温到60℃并搅拌3个小时。反应液旋干，粗品经硅胶柱纯化得到叔丁基(2-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.3g，4.7mmol，收率：73％)。
步骤八、5-(2-氨基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-2(3H)-酮盐酸盐
将叔丁基(2-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.3g，4.7mmol)加入到甲醇(30mL)中，在搅拌、室温下滴加6M盐酸甲醇溶液(10mL)后，继续搅拌30min。反应液浓缩至干得到5-(2-氨基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-2(3H)-酮盐酸盐(1.3g)。MS：178.3[M+H]+。
步骤九、2-羟基-N-(2-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)乙酰胺
将5-(2-氨基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-2(3H)-酮盐酸盐(1.3g，4.7mmol)、羟基乙酸甲酯(8.5g，94.4mmol)和三乙胺(1.4g，13.8mmol)溶解在20mL甲醇中并加热回流两天。反应液冷却到室温后旋蒸浓缩，粗品经硅胶柱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝1:2，然后二氯甲烷:甲醇＝3:1)得到2-羟基-N-(2-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)乙酰胺(2.0g)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.54(s,2H),10.50(s,1H),7.72(s,1H),6.83(d,J＝7.6 Hz,1H),6.76(d,J＝7.6Hz,1H),3.77(s,2H),3.28(m,2H),2.70(m,2H)；MS：236.2[M+H]+。
步骤十、1-(4-溴苯基)-2-(1-(噻吩-2-基)亚乙基)肼
将1-(噻吩-2-基)乙酮(2.0g，15.87mmol)、1-(4-溴苯基)肼盐酸盐(3.54g，15.87mmol)和醋酸钾(1.56g，15.87mmol)加入乙醇(32mL)中，在80℃下搅拌过夜。将反应混合物真空浓缩干后，加入水，用乙酸乙酯萃取,乙酸乙酯相浓缩得到粗品,最后用混合溶剂(石油醚：乙酸乙酯＝50:1，50mL)洗涤得到1-(4-溴苯基)-2-(1-(噻吩-2-基)亚乙基)肼(3.5g,11.9mmol，收率：75％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.64(d,J＝6.8Hz,1H),7.37-7.25(m,4H),7.04(d,J＝8.4Hz,2H),2.22(s,3H)；MS：295.2，297.1[M+H]+。
步骤十一、1-(4-溴苯基)-3-(噻吩-2-基)-1H-吡唑-4-甲醛
在冰浴条件下将三氯氧磷(3.78g，24.6mmol)慢慢滴加到无水DMF(3.3mL)中，搅拌30min后，在氮气保护下将1-(4-溴苯基)-2-(1-(噻吩-2-基)亚乙基)肼(3.3g，11.18mmol)溶在少量无水DMF中，并慢慢滴加到反应液中，室温搅拌1小时，升温到70℃，继续反应5小时，将反应液倒入冰水中，用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯相用饱和食盐水洗涤三次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋蒸至干得到1-(4-溴苯基)-3-(噻吩-2-基)-1H-吡唑-4-甲醛(3.5g，10.5mmol，收率：94％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.04(s,1H),9.38(s,1H),8.43(s,1H),7.96(d,J＝8.4Hz,2H),7.78(d,J＝8.4Hz,2H),7.72(m,2H)；MS：335.1[M+H]+。
步骤十二、2-(1-(4-溴苯基)-3-(噻吩-2-基)-1H-吡唑-4-基)-3-(2-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)噁唑烷-4-酮
将1-(4-溴苯基)-3-(噻吩-2-基)-1H-吡唑-4-甲醛(500mg，1.5mmol)、2-羟基-N-(2-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)乙酰胺(500mg，1.5mmol)、一水合对甲苯磺酸(366mg，2.1mmol)溶解在100mL甲苯和N-甲基吡咯烷酮(10mL)中加热到160℃，用分水器分水过夜。反应液经旋蒸浓缩后，用制备HPLC纯化得到2-(1-(4-溴苯基)-3-(噻吩-2-基)-1H-吡唑-4-基)-3-(2-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)噁唑烷-4-酮(3.6mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.46(m,2H),8.68(s,1H),7.89(d,J＝8.8Hz,2H),7.72-7.65(m,4H),7.42(q,J＝2.0Hz,1H),6.75(d,J＝8.0Hz,1H),6.64-6.61(m,2H),4.33-4.21(m,2H),3.69-3.67(m,1H),2.96-2.93(m,1H),2.71-2.59(m,2H)；MS：550.1，552.0[M+H]+。
实施例21：2-(1-(4-溴苯基)-3-(呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)-3-(2-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)噁唑烷-4-酮
Figure PCTCN2017079552-appb-000039
步骤一、1-(4-溴苯基)-2-(1-(呋喃-3-基)亚乙基)肼
将1-(呋喃-3-基)乙酮(4.2g，38.2mmol)、1-(4-溴苯基)肼盐酸盐(8.5g，38.2mmol)和醋酸钾(3.7g，38.2mmol)加入乙醇(50mL)中，在80℃下搅拌过夜。将反应混合物真空浓缩干后，加入水，用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相浓缩得到粗品，用混合溶剂(石油醚:乙酸乙酯＝50:1，50mL)洗涤，得到1-(4-溴苯基)-2-(1-(呋喃-3-基)亚乙基)肼(3.8g,13.7mmol，收率：36％)。MS：279.2，281.1[M+H]+。
步骤二、1-(4-溴苯基)-3-(呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-甲醛
在冰浴条件下将三氯氧磷(1.14g，7.46mmol)慢慢滴加到无水DMF(2mL)中，搅拌30min后，在氮气保护下将1-(4-溴苯基)-2-(1-(呋喃-3-基)亚乙基)肼(1.0g，3.39mmol)溶在少量的无水DMF中，并慢慢滴加到反应液中，室温搅拌1小时，升温到70℃，继续反应5小时，将反应液倒入冰水中，用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯相用饱和食盐水洗涤三次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋蒸至干。粗品用混合溶剂(乙酸乙酯:石油醚＝50:1,20mL)洗涤，过滤得到1-(4-溴苯基)-3-(呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-甲醛(1.0g，10.5mmol，收率：90％)。MS：317，319.1[M+H]+。
步骤三、2-(1-(4-溴苯基)-3-(呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)-3-(2-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)噁唑烷-4-酮
将1-(4-溴苯基)-3-(呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-甲醛(500mg，1.58mmol)、2-羟基-N-(2-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)乙酰胺(500mg，1.5mmol)、一水合对甲苯磺酸(366mg，2.1mmol)溶解在100mL甲苯和N-甲基吡咯烷酮(10mL)中，加热到160℃，用分水器分水过夜。反应液经旋蒸浓缩后，用制备HPLC纯化得到2-(1-(4-溴苯基)-3-(呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)-3-(2-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)噁唑烷-4-酮(7.2mg,收率：1％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.47(s,2H),8.68(s,1H),7.90(s,1H),7.86(d,J＝8.8Hz,2H),7.79(s,1H),7.71(d,J＝8.8Hz,2H),6.80(s,1H),6.76(d,J＝7.6Hz,1H),6.64-6.62(m,2H),6.17(s,1H),4.33(d,J＝13.6Hz,1H),4.23(d,J＝13.6Hz,1H),3.68-3.65(m,1H),2.96-2.93(m,1H),2.71-2.60(m,2H)；MS：534,536.2[M+H]+。
将2-(1-(4-溴苯基)-3-(呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)-3-(2-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑 -5-基)乙基)噁唑烷-4-酮(20g)经SFC(色谱柱：OJ-H；色谱柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注入量：2.0μl；流动相：HEP/EtOH＝60/40(V/V)；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃)手性拆分得到二个光学异构体。
(S)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)-3-(2-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)噁唑烷-4-酮，白色固体，8.63g，收率43.2％。tR1.766min，[α]D-43.94°(c0.5007g/100mL，21.4℃)；纯度：99.64％,ee:100.0％。
(R)-2-(1-(4-溴苯基)-3-(呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)-3-(2-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)噁唑烷-4-酮，白色固体，8.26g，收率41.3％。tR3.724min，[α]D+47.00°(c0.4979g/100mL，21.3℃)；纯度：100.00％,ee:99.03％。
实施例22：2-(1-(4-溴苯基)-3-(呋喃-2-基)-1H-吡唑-4-基)-3-(2-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)噁唑烷-4-酮
Figure PCTCN2017079552-appb-000040
步骤一、(4-溴苯基)-2-(1-(呋喃-2-基)亚乙基)肼
将1-(呋喃-2-基)乙酮(100g，0.91mol)和1-(4-溴苯基)肼盐酸盐(162g，0.87mol)溶于甲苯(1L)中，加入36％盐酸(60滴)，装上分水器。加热至150℃，搅拌反应2小时，冷却至室温。向反应液中加入二氯甲烷溶解产物并过滤得到红黑色的滤液，将滤液旋干，粗品经硅胶柱分离纯化(石油醚:二氯甲烷＝1:1)得到黄色固体。加入石油醚搅拌20min后，过滤得到纯的黄色固体产物(68.0g，收率：27％)。
步骤二、1-(4-溴苯基)-3-(呋喃-2-基)-1H-吡唑-4-甲醛
在冰浴条件下，向无水DMF(60mL)中慢慢加入POCl3(12.1g，78.85mmol)，搅拌15min后慢慢升至室温，继续搅拌30min，将(4-溴苯基)-2-(1-(呋喃-2-基)亚乙基)肼(10.0g，35.84mmol)加入反应液中，温室搅拌30min，慢慢升温至70℃，继续搅拌3小时。将反应液慢慢倒入冰水中淬灭，并在0℃搅拌30min，过滤。所得固体加入少量乙醇和二氯甲烷溶解后旋干。粗品经硅胶柱分离纯化得到黄色固体产物(10.5g，收率：92％)。
步骤三、3-(3-硝基-4-叔丁酰氨基苯乙基)-2-(3-(呋喃-2-基))-1-(4-溴苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑烷-4-酮
在氮气保护下，将2-羟基-N-(3-硝基-4-叔丁酰氨基苯乙基)乙酰胺(4.3g，13.31mmol) 和1-(4-溴苯基)-3-(呋喃-2-基)-1H-吡唑-4-甲醛(4.22g，13.31mmol)，TsOH(506mg，2.66mmol)溶解于甲苯(100mL)中，加上分水器。缓慢升温至150℃回流过夜。反应液中加入乙酸乙酯(100mL)，饱和碳酸氢钠(100mL)和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，粗品经硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)得到黄色油状产物(1.8g，收率：22％)。
步骤四、3-(3-硝基-4-氨基苯乙基)-2-(3-(呋喃-2-基))-1-(4-溴苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑烷-4-酮
在氮气保护下，将3-(3-硝基-4-叔丁酰氨基苯乙基)-2-(3-(呋喃-2-基))-1-(4-溴苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑烷-4-酮(1.42g，2.28mmol)和1N NaOH(15mL，14.27mmol)溶解于甲醇(50mL)中。缓慢升温至70℃回流2小时。反应液中加入乙酸乙酯(100mL)，用水(100mL)和饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩旋干，加入硅胶拌样，粗品经硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)得到黄色油状产物(720mg，收率：60％)。
步骤五、3-(3,4-二氨基苯乙基)-2-(3-(呋喃-2-基))-1-(4-溴苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑烷-4-酮
在氮气保护下，将3-(3-硝基-4-氨基苯乙基)-2-(3-(呋喃-2-基))-1-(4-溴苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑烷-4-酮(500mg，0.93mmol)和还原铁粉(260mg，4.65mmol)和氯化铵(497mg，9.3mmol)溶解于乙醇和水(2:1，30mL)中。缓慢升温至85℃，回流1.5小时。反应液中加入二氯甲烷(50mL)，过滤除去铁粉。旋蒸除去溶剂乙醇后，加入二氯甲烷(50mL)，用水(50mL)和饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干得到粗产物(400mg)，直接用于下一步反应。
步骤六、2-(1-(4-溴苯基)-3-(呋喃-2-基)-1H-吡唑-4-基)-3-(2-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)噁唑烷-4-酮
在氮气保护下，将3-(3,4-二氨基苯乙基)-2-(3-(呋喃-2-基))-1-(4-溴苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑烷-4-酮(400mg，0.8mmol)与CDI(400mg，2.5mmol)溶解于无水DMF(6mL)中，80℃搅拌过夜。反应液用乙酸乙酯(2×60mL)萃取，有机相用水(100mL)和饱和食盐水(150mL)洗涤两次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干。加入硅胶拌样，粗品经硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)得到浅黄色固体产物(198mg，收率：48％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.47(s,2H),8.75(s,1H),7.87(d,J＝8.8Hz,2H),7.78(s,1H),7.73(d,J＝8.8Hz,2H),6.80-6.76(m,2H),6.65-6.63(m,3H),6.31(s,1H),4.34(d,J＝13.2Hz,1H),4.23(d,J＝13.2Hz,1H),3.76-3.64(m,1H),2.98-2.94(m,1H),2.76-2.72(m,1H),2.64-2.61(m,1H)；MS:534[M+1]+。
实施例23：(5-(2-(2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑啉-4-酮-3-基)乙基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)氨基甲酸甲酯
Figure PCTCN2017079552-appb-000041
步骤一、2-甲基-N,N’-二甲氧羰基疏基脲
将2-甲基-2-疏基硫酸脲(1.6g,5.75mmol)悬浮在15mL水中，冷却到0℃。加入氯甲酸甲酯(2.5g,26.45mmol)，并在0℃搅拌5min。用25％的NaOH水溶液保持反应液的pH 9左右，并搅拌5小时，大量白色固体析出。过滤，滤饼用水洗涤，得到2-甲基-N,N’-二甲氧羰基疏基脲(1.1g,收率：93％)。
步骤二、(5-(2-(2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)噁唑啉-4-酮-3-基)乙基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)氨基甲酸甲酯
在圆底烧瓶中加入2-甲基-N,N’-二甲氧羰基疏基脲(42mg,0.21mmol)和2-(1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)-3-(3,4-二氨基苯乙基)噁唑啉-4-酮(100mg,0.19mmol)，加入HOAc(10mL)并置换氮气。将反应液加热到80℃并反应1小时。将溶剂旋蒸去除，然后粗品用甲醇洗涤得到白色固体产物(65mg,收率：56％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.48(br s,2H),8.64(s,1H),7.86(d,J＝8.8Hz,2H),7.70(d,J＝8.8Hz,2H),7.61-7.58(m,2H),7.27-7.20(m,3H),7.09(s,1H),6.77(d,J＝8.4Hz，1H),5.99(s,1H),4.29-4.21(m,2H),3.74-3.70(m,4H),2.98-2.93(m,1H),2.78-2.68(m，2H)；MS：619[M+H]+。
实施例24：体外抗HBV活性实验
化合物稀释：体外抗HBV活性实验中所用的所有化合物的起始浓度均为1μM，3倍稀释，8个浓度；细胞毒性实验中所用的所有化合物的起始浓度均为100μM，3倍稀释，8个浓度；用DMSO对化合物母液进行稀释。对照化合物为拉米夫定，其在体外抗HBV活性实验中的起始浓度均设为100nM，在细胞毒性实验中的起始浓度为100μM，3倍稀释，8个浓度。
体外抗HBV活性实验：种HepG2.2.15细胞(4×104细胞/孔)到96孔板，在37℃，5％CO2培养过夜。第二天，加入含不同浓度化合物的新鲜培养液到培养孔中。第五天，吸除培养孔中旧的培养液，加入含不同浓度化合物的新鲜培养液。第八天，收集培养孔中的上清，用于提取上清中的HBV DNA。qPCR实验检测HepG2.2.15上清中的HBV DNA含量。
分析数据和计算抑制百分比：应用如下公式计算抑制百分比：
抑制％＝[(DMSO对照的HBV量–样品的HBV量)/DMSO对照的HBV量]×100％。
采用上述测试方法，本发明部分化合物的结构及对应的抗HBV活性如下表。
Figure PCTCN2017079552-appb-000042
Figure PCTCN2017079552-appb-000043
Figure PCTCN2017079552-appb-000044
Figure PCTCN2017079552-appb-000045
Figure PCTCN2017079552-appb-000046
实施例25：体外抗不同基因型HBV菌株活性实验
利用瞬时转染细胞模型测试化合物体外抗不同基因型HBV菌株活性。将已被不同HBV基因型菌株转染的HepG2细胞(4×104细胞/孔)种到96孔板，在37℃，5％CO2培养过夜。第二天，加入含不同浓度化合物的新鲜培养液到培养孔中。第五天，吸除培养孔中旧的培养液，加入含不同浓度化合物的新鲜培养液。第八天，收集培养孔中的上清，用于提取上清中的HBV DNA。qPCR实验检测HepG2上清中的HBV DNA含量。实验结果如下表(EC50nM)：
Figure PCTCN2017079552-appb-000047
实施例26：体外抗核苷类药物HBV耐药菌株活性实验
利用瞬时转染细胞模型测试化合物体外抗核苷类药物HBV耐药菌株活性。将已被核苷类药物HBV耐药菌株转染的HepG2细胞(4×104细胞/孔)种到96孔板，在37℃，5％CO2培养过夜。第二天，加入含不同浓度化合物的新鲜培养液到培养孔中。第五天，吸除培养孔中旧的培养液，加入含不同浓度化合物的新鲜培养液。第八天，收集培养孔中的上清，用于提取上清中的HBV DNA。qPCR实验检测HepG2上清中的HBV DNA含量。实验结果如下表(EC50nM)：
Figure PCTCN2017079552-appb-000048
Figure PCTCN2017079552-appb-000049
实施例27：药物代谢动力学测定
测定了本申请中实施例3化合物(外消旋体)在大鼠中的药物代谢动力学。
测定方法和条件：
单次静脉(IV)和口服(PO)给予Sprague Dawley大鼠受试化合物，于不同时间点采集血样，LC/MS/MS测定给予受试物后大鼠血浆中受试物的浓度并计算相关参数。
动物采血时间点为：给药前，给药后5min，15min，30min，1h，2h，4h，6h，8h和24h。每只动物每次经颈静脉穿刺或其他合适的静脉采约0.3mL血液，肝素钠抗凝。血液样本采集后置于冰上，离心分离血浆(离心条件：8000转/分钟，6min，4℃)，血浆样品在分析前存放时则放于-70℃冰箱内。
取50μL样品至1.5mL离心管中，加入250μL内标溶液，涡旋60秒后离心5min(14000转/分钟)，取200μL上清液至96孔进样板中，进样分析。
质谱仪：API 4000，美国应用生物***公司，电喷雾离子源(ESI)，串联四极杆质量分析器。
质谱条件：离子源：电喷雾离子源(ESI)；辅助气(Gas1)：60psi；辅助气(Gas2)：60psi；气帘气(CUR)：14psi；碰撞气(CAD)：6；离子源电压(IS)：5500V；离子源温度(TEM)：550℃
液相条件：色谱柱：Thermo AQUASIL C18(50x2.1mm)；色谱流动相：A为0.1％甲酸水溶，液B为0.1％甲酸甲醇溶液(A:B＝80％:20％-10％:90％)；流速：500μL/min；进样量：1μL。
根据药物的血药浓度数据，使用药代动力学计算软件WinNonlin5.2非房室模型分别计算受试化合物的药代动力学参数。
结果如下。
Figure PCTCN2017079552-appb-000050
Figure PCTCN2017079552-appb-000051
另外，测定了本申请中实施例3化合物(R异构体)在小鼠中的药物代谢动力学。
测定方法和条件：
单次皮下给予雌性BALB/c小鼠受试化合物，于不同时间点采集血样，LC/MS/MS测定给予受试物后大鼠血浆中受试物的浓度并计算相关参数。
动物采血时间点为：给药前，给药后5min，15min，30min，1h，2h，4h，8h和24h。
质谱仪：Triple Quad 5500。质谱条件：SRM检测
液相条件：色谱柱：XSELECT CSHTM XP C18(2.1×50mm,2.5μm)；色谱流动相：流动相A：0.025％FA&1mM NH4OAc的水/CAN溶液(v:v,95:5)，流动相B：0.025％FA&1mM NH4OAc的ACN/水溶液(v:v,95:5)(A:B＝65％:35％-10％:90％)；流速：0.6mL/min；柱温：50℃。
根据药物的血药浓度数据，使用药代动力学计算软件WinNonlin5.2非房室模型分别计算受试化合物的药代动力学参数。
结果如下。
PK参数 实施例3，R异构体
Cmax(ng/mL) 643
Tmax(h) 1.33
T1/2(h) 1.19
AUC0-inf(ng·h/mL) 2079
MRT0-inf(h) 2.40
实施例28：体内药效测定
测定方法和条件：
HBV DNA尾静脉高压注射和给药方法：
小鼠尾静脉高压注射HBV质粒DNA溶液：质粒DNA在注射前预先溶于生理盐水(10μg/1.4ml，10μg/1.5ml)。于4℃保存直至使用。5秒内从尾静脉注射小鼠体重8％的质粒DNA溶液。若注射体积小于或等于1.4ml用10μg/1.4ml质粒溶液；若注射体积大于或等于1.5ml用10μg/1.5ml质粒溶液。
第1-7天，小鼠用受试化合物或溶剂连续给小鼠腹腔注射7天。在第1、3、5天经颌下静脉采血，肝素钠抗凝，7,000×g，4℃离心10min以制备血浆。血浆分为两份，一份送至生物部体外抗感染组进行HBV DNA检测，另一份备用。
第7天，所有小鼠经CO2安乐死后，心脏采血制备血浆，并收集肝组织。肝组织分为三份，其中两份左叶收集后，立即液氮速冻，并转移于-80度保存直至送至药明康德生物部体外抗感染组测定HBV DNA；剩余的肝组织冻于干冰中，并转移至-80度保存备用。
样品分析：
定量PCR检测小鼠血浆中HBV DNA的含量。
参照QIAamp 96DNA Blood Kit说明书，提取小鼠血浆中DNA。
定量PCR检测HBV DNA的含量：为了排除注射的HBV质粒DNA可能带来的干扰，同时用两组引物和探针进行测定。一组引物和探针识别HBV DNA序列(HBV引物)，可以同时检测到HBV质粒DNA和复制后的HBV DNA。另一组引物和探针识别pAAV2载体序列(pAAV2引物)，仅能检测到HBV质粒DNA。
HBV DNA含量＝HBV引物检测的DNA含量-pAAV2引物检测的DNA含量
结果如下：
受试化合物(实施例3化合物，R异构体)的剂量为25mpk。小鼠血浆中的HBV DNA含量在第1、3天均显著降低，分别降低0.55log和1.84log，具有统计学差异。

Claims (13)

  1. 式I化合物或其药学上可接受的盐或其对映异构体或互变异构体：
    Figure PCTCN2017079552-appb-100001
    其中：
    R1、R2和R3各自独立地选自氢、卤素、任选取代的烷基、氨基或羟基；
    R4和R5中的一个为氨基，另一个选自氢、卤素、氨基或羟基；或者
    R4和R5与它们所连接的碳原子一起形成任选取代的含有至少一个氮原子的五元杂环基或杂芳基，其中所述杂环基中的-CH2-任选地被-C(＝O)-、-C(＝S)-或-C(＝NH)-替换；
    R6选自氘、卤素、氨基或羟基；
    n为0、1或2；
    Q为任选地被一个或多个卤素取代的芳基或杂芳基。
  2. 根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐或其对映异构体或互变异构体，其中手性碳为R构型，结构如式I-R所示：
    Figure PCTCN2017079552-appb-100002
  3. 根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐或其对映异构体或互变异构体，其中：
    R1、R2和R3各自独立地为氢或卤素；
    R4和R5与它们所连接的碳原子一起形成任选取代的含有至少一个氮原子的五元杂环基或杂芳基，其中所述杂环基中的-CH2-任选地被-C(＝O)-、-C(＝S)-或-C(＝NH)-替换；
    R6为氘或卤素；
    Q为任选地被一个或多个卤素取代的芳基或杂芳基，所述芳基为苯基，所述杂芳基选自呋喃基、吡咯基或噻吩基。
  4. 根据前述权利要求中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或其对映异构体 或互变异构体，其中Q为对-氟苯基或者为噻吩基或呋喃基。
  5. 根据前述权利要求中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或其对映异构体或互变异构体，其中式I和式I-R中的结构：
    Figure PCTCN2017079552-appb-100003
    选自：
    Figure PCTCN2017079552-appb-100004
  6. 根据前述权利要求中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或其对映异构体或互变异构体，其中所述化合物选自：
    Figure PCTCN2017079552-appb-100005
    Figure PCTCN2017079552-appb-100006
  7. 根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐或其对映异构体或互变异构体，其中：
    R1、R2和R3各自独立地选自氢、C1-C3烷基、卤素；
    R4和R5中的一个为氨基，另一个选自氢、卤素、氨基；
    R6为卤素；
    Q为任选地被一个或多个卤素尤其是氟取代的芳基或杂芳基，所述芳基为苯基，所述杂芳基选自呋喃基、吡咯基、噻吩基或吡啶基。
  8. 根据权利要求1-2、7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或其对映异构体或互变异构体，其中Q为对-氟苯基。
  9. 根据权利要求1-2、7-8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或其对映异构体或互变异构体，其中R4为氨基，R5为氢；n为0。
  10. 根据权利要求1-2、7-9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或其对映异构体或互变异构体，其中所述化合物选自：
    Figure PCTCN2017079552-appb-100007
    Figure PCTCN2017079552-appb-100008
  11. 一种药物组合物，其含有权利要求1-10中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或其对映异构体或互变异构体，和药学上可接受的载体。
  12. 权利要求1-10中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或其对映异构体或互变异构体或者权利要求11所述的药物组合物在制备用于抗乙型肝炎病毒的药物中的用途。
  13. 根据权利要求12所述的用途，其中所述药物用于治疗哺乳动物的乙型肝炎病毒感染。
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