KR20180128953A - 항 b형 간염 바이러스 피라졸-옥사졸리디논계 화합물 - Google Patents

항 b형 간염 바이러스 피라졸-옥사졸리디논계 화합물 Download PDF

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KR20180128953A
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Abstract

본 발명은 하기 식I의 구조를 갖는 항 B형 간염 바이러스 활성을 갖는 피라졸-옥사졸리디논 화합물을 개시하고, 이는 식(I)의 구조를 구비하며, 상기 식에서 각 변량은 본문에서 정의된 바와 같다.
Figure pct00124

I

Description

항 B형 간염 바이러스 피라졸-옥사졸리디논계 화합물
본 발명은 항 B형 간염 바이러스 활성을 갖는 피라졸-옥사졸리디논(PYRAZOLE-OXAZOLIDINONE) 화합물에 관한 것이다.
B형 바이러스성 간염은 B형 바이러스(HBV)에 의해 유발되는 주로 간장 염증성 병변으로, 여러 장기의 손상을 일으킬 수 있는 질환이다. B형 간염은 전 세계적으로 널리 퍼지고 있고, 주로 어린이 및 청년과 장년을 침범하며, 소수의 환자는 간경화 또는 간암으로 전이될 수 있다. 따라서, 인류의 건강을 심각하게 위협하는 세계적 질환이 되었고, 현재 가장 널리 퍼져 있으며 위험성이 가장 심각한 질환 중 하나이다. B형 바이러스성 간염은 일정한 유행기가 없고, 일년 내내 모두 발병할 수 있지만, 대부분은 퍼져 있다. 최근 B형 간염의 발병률은 현저하게 증가하는 추세를 나타낸다. 연구에 따르면, HBV에 대한 억제는 B형 간염에 대한 작용과 직접 관련된다(예를 들어 Klaus Klumpp and Thibaut Crιpin, Capsid proteins of enveloped viruses as antiviral drug targets, Current Opinion in Virology, 2014, 5:63-71; Timothy M. Block, Siddhartha Rawat, Carol L. Brosgart, Chronic hepatitis B: A wave of new therapies on the horizon, Antiviral Research, 121, 2015, 69-81을 참조바람).
B형 간염 바이러스 감염의 치료 방법은 많지만, 모두 큰 한계가 있고, 소수의 환자만이 지속적인 혈청 HBV DNA 감소, e항원 및 s항원 혈청학 전이 등 치료 효과를 관찰할 수 있다.
예를 들어, 인터페론(interferon)α는 수년 동안 만성 HBV 감염의 치료에 널리 적용되었지만, 인터페론은 특정 유형의 환자에게만 유효하고, 내약성이 낮다. 유사하게, 라미부딘(Lamivudine)(3'-티오-2',3'-디데옥시시티딘)(3'-thio-2',3'-dideoxycytidine)은 HBV 복제에 대한 현저한 억제 작용으로 인해 HBV 감염의 치료에 사용되지만, 내약률이 점차 증가하기 때문에, 많은 환자에 대한 치료 효과가 제한된다. 최근 판매된 아데포비르디피복실(adefovir dipivoxil)(9-[2-[[비스[(피바로일옥시)메틸]포스피닐]메톡시]에틸]아데닌)(9-[2-[[bis[(pivaloyloxy)methyl]phosphinyl]methoxy]ethyl]adenine)은 라미부딘에 내성이 있는 환자에게 유효하지만, 상기 약물은 지속적인 바이러스 반응률이 낮은(20 % 미만) 단점이 있고, 최대 내성 투여량과 치료 기간은 종종 신장 독성에 의해 제한된다.
최근의 연구에서 일부 약물은 우수한 항 HBV 활성을 나타내는 것을 발견하여 임상 연구에 진입하였다. 예를 들어, 2'-플루오로-5-메틸-β-L-아라비노푸라노시드(2'-fluoro-5-methyl-β-L-arabinofuranoside)(Bukwang), 2'-데옥시-5-플루오로-3'-티오시티딘(2'-deoxy-5-fluoro-3'-thiocytidine)(Gilead), 2'-데옥시-L-티미딘(2'-deoxy-L-thymidine)(Idenix) 및 2'-데옥시-L-시티딘(2'-deoxy-L-cytidine)(Idenix) 등 뉴클레오시드 화합물은 현저한 항 HBV 활성을 나타낸다. 이 밖에, 2-아미노-1,9-디히드로-9-[(1S,3R,4S)-4-히드록시-3-히드록시메틸-2-메틸렌시클로펜틸]-6H-푸린-6-온(2-amino-1,9-dihydro-9-[(1S,3R,4S)-4-hydroxy-3-hydroxymethyl-2-methylenecyclopentyl]-6H-purine-6-one) 일 수화물(Bristol-Myers Squibb) 등 탄소 고리 뉴클레오시드계 화합물과 Ribapharm 등 간 표적화 비환식 뉴클레오시드계 화합물도 임상적으로 항 HBV의 활성을 나타낸다.
최근에 발견된 대부분 항 HBV 약물은 우수한 체외 항 바이러스 활성을 나타내지만, 낮은 응답률과 약물 내성은 이러한 약물의 임상 유효성을 제한한다. 따라서, 현재 HBV를 치료하는 약물과 방법이 많지만, 신규하거나 개선된 약물과 치료 방법은 여전히 임상에서 필요하다.
종합해보면, 기존의 HBV 치료 약물은 치료 효과가 제한되고, 약물 내성이 용이하며 독성이 높은 한계가 존재하므로, 임상에서 높은 효능, 낮은 독성, 상이한 약물 내성 프로파일을 갖는 신형 약물이 시급하게 필요하다.
본 발명의 목적은 HBV 복제를 억제하는 기능을 갖는 화합물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 하나의 목적은 상기 화합물의 약학적 용도를 제공하는 것이다.
본 발명의 하나의 양태는 식I 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 거울상 이성질체 또는 호변 이성질체에 관한 것이고,
Figure pct00001
I
여기서,
R1, R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 선택적으로 치환된 알킬기, 아미노기 또는 히드록시기로부터 선택되고;
R4와 R5 중 하나는 아미노기이며, 다른 하나는 수소, 할로겐, 아미노기 또는 히드록시기로부터 선택되거나; 또는
R4와 R5는 이들에 연결된 탄소 원자와 함께 선택적으로 치환된, 적어도 하나의 질소 원자를 함유하는 5원 헤테로고리기 또는 헤테로아릴기를 형성하며, 여기서 상기 헤테로고리기의 -CH2-는 선택적으로 -C(=O)-, -C(=S)- 또는 -C(=NH)-에 의해 대체되고;
R6은 중수소, 할로겐, 아미노기 또는 히드록시기로부터 선택되며;
n은 0, 1 또는 2이고;
Q는 선택적으로 하나 또는 복수개의 할로겐에 의해 치환된 아릴기 또는 헤테로아릴기이다.
식I의 키랄 탄소는 R배열 또는 S배열일 수 있다.
본 발명의 다른 하나의 양태는 B형 간염 바이러스를 억제하기 위한 식I 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 거울상 이성질체 또는 호변 이성질체에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 하나의 양태는 포유 동물, 특히 인간의 B형 간염 바이러스 감염을 치료하기 위한 식I 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 거울상 이성질체 또는 호변 이성질체에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 하나의 양태는 식I 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 거울상 이성질체 또는 호변 이성질체, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 함유하는 약물 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 하나의 양태는 식I 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 거울상 이성질체 또는 호변 이성질체의 B형 간염 바이러스를 억제하는 약물의 제조에서의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 하나의 양태는 필요한 개체에게 치료 유효량의 식I 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 거울상 이성질체 또는 호변 이성질체를 투여하는 단계를 포함하는 B형 간염 바이러스를 억제하는 방법에 관한 것이다.
발명의 상세한 설명
본 발명의 하나의 양태는 하기 일반식I을 갖는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 거울상 이성질체 또는 호변 이성질체에 관한 것이고,
Figure pct00002
I
여기서,
R1, R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 선택적으로 치환된 알킬기, 아미노기 또는 히드록시기로부터 선택되며;
R4 및 R5 중 하나는 아미노기이고, 다른 하나는 수소, 할로겐, 아미노기 또는 히드록시기로부터 선택되거나; 또는
R4와 R5는 이들에 연결된 탄소 원자와 함께 선택적으로 치환된, 적어도 하나의 질소 원자를 함유하는 5원 헤테로고리기 또는 헤테로아릴기를 형성하고, 여기서 상기 헤테로고리기의 -CH2-는 선택적으로 -C(=O)-, -C(=S)- 또는 -C(=NH)-에 의해 대체되며;
R6은 중수소, 할로겐, 아미노기 또는 히드록시기로부터 선택되고;
n은 0, 1 또는 2이며;
Q는 선택적으로 하나 또는 복수개의 할로겐에 의해 치환된 아릴기 또는 헤테로아릴기이다.
본 출원의 화합물은 호변 이성질체를 가질 수 있다. 예를 들어 하기 두 개의 구조 부분
Figure pct00003
및
Figure pct00004
은 본 출원에서 동등한 구조 부분으로 간주된다. 유사하게, 하기 두 개의 구조 부분
Figure pct00005
및
Figure pct00006
도 본 출원에서 동등한 구조 부분으로 간주된다.
본 출원의 화합물은 하나 또는 복수개의 입체 이성질체 중심을 가질 수 있고, 각 이성질체 중심은 R배열 또는 S배열 또는 이들의 조합 형식으로 존재할 수 있다.
따라서, 하나의 실시형태에서, 식I의 키랄 탄소는 R배열이고, 구조는 식I-R에 도시된 바와 같다.
Figure pct00007
I-R
본 출원에서, 하나의 특정된 화합물의 거울상 이성질체와 호변 이성질체는 모든 가능한 이성질체 및 이의 혼합물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 본 출원의 화합물은 모든 배열이 상이한 거울상 이성질체, 부분 입체 이성질체 및 호변 이성질체 형태 및 이의 상응한 혼합물을 포함한다.
하나의 실시형태에서, 식I과 식I-R에서,
R1, R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소 또는 할로겐이고; 바람직하게는, R1과 R3은 모두 수소이며, R2는 할로겐이고; 보다 바람직하게는, R1과 R3은 모두 수소이며, R2는 브롬이고;
R4와 R5는 이들에 연결된 탄소 원자와 함께 선택적으로 치환된, 적어도 하나의 질소 원자를 함유하는 5원 헤테로고리기 또는 헤테로아릴기를 형성하며, 여기서 상기 헤테로고리기의 -CH2-는 선택적으로 -C(=O)-, -C(=S)- 또는 -C(=NH)-에 의해 대체되고, 바람직하게는 선택적으로 -C(=O)- 또는 -C(=S)-에 의해 대체되며; 상기 헤테로고리기 또는 헤테로아릴기가 선택적으로 치환될 경우, 치환기는 할로겐과 알콕시카르보닐아미노기(Alkoxy carbonyl amino group)로부터 선택되고;
R6은 중수소 또는 할로겐이며;
Q는 선택적으로 하나 또는 복수개의 할로겐에 의해 치환된 아릴기 또는 헤테로아릴기이고, 상기 아릴기는 페닐기이며, 상기 헤테로아릴기는 푸릴기(furyl group), 피롤릴기(pyrrolyl group) 또는 티에닐기(thienyl group)로부터 선택된다.
하나의 실시형태에서, 식I과 식I-R의 R6은 불소이다.
하나의 실시형태에서, 식I과 식I-R의 Q는 p-플루오로페닐기이다.
다른 하나의 실시형태에서, 식I과 식I-R의 Q는 티에닐기 또는 푸릴기이고, 바람직하게는 푸란-2-일(Furan-2-yl)이다.
하나의 실시형태에서, 식I과 식I-R 중의 구조 부분
Figure pct00008
는,
Figure pct00009
,
Figure pct00010
,
Figure pct00011
,
Figure pct00012
,
Figure pct00013
,
Figure pct00014
,
Figure pct00015
,
Figure pct00016
,
Figure pct00017
,
Figure pct00018
,
Figure pct00019
,
Figure pct00020
로부터 선택되고;
바람직하게는,
Figure pct00021
,
Figure pct00022
,
Figure pct00023
,
Figure pct00024
,
Figure pct00025
,
Figure pct00026
,
Figure pct00027
으로부터 선택되며;
보다 바람직하게는,
Figure pct00028
,
Figure pct00029
으로부터 선택된다.
하나의 실시형태에서, 식I 화합물은,
Figure pct00030
Figure pct00031
Figure pct00032
으로부터 선택된다.
하나의 바람직한 실시형태에서, 식I 화합물은,
Figure pct00033
Figure pct00034
로부터 선택된다.
하나의 보다 바람직한 실시형태에서, 식I 화합물은,
Figure pct00035
,
Figure pct00036
,
Figure pct00037
,
Figure pct00038
로부터 선택된다.
하나의 실시형태에서, 식I과 식I-R에서,
R1, R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소, C1-C3알킬기, 할로겐으로부터 선택되고;
R4와 R5 중 하나는 아미노기이며, 다른 하나는 수소, 할로겐 특히 불소, 아미노기로부터 선택되고;
R6은 할로겐 특히 불소이며;
Q는 선택적으로 하나 또는 복수개의 할로겐 특히 불소에 의해 치환된 아릴기 또는 헤테로아릴기이고, 상기 아릴기는 페닐기이며, 상기 헤테로아릴기는 푸릴기, 피롤릴기, 티에닐기 또는 피리딜기(pyridyl group)로부터 선택된다.
하나의 실시형태에서, 식I과 식I-R에서, R1, R2 또는 R3로서의 알킬기는 메틸기이다.
하나의 실시형태에서, 식I과 식I-R에서, R4 또는 R5로서의 할로겐은 불소이다.
하나의 실시형태에서, 식I과 식I-R에서, R6으로서의 할로겐은 불소이다.
하나의 실시형태에서, 식I과 식I-R의 Q는 p-플루오로페닐기이다.
하나의 실시형태에서, 식I과 식I-R의 R4는 아미노기이고, R5는 수소이며; n은 0이다.
하나의 실시형태에서, 식I 화합물은,
Figure pct00039
Figure pct00040
Figure pct00041
로부터 선택된다.
본 출원의 용어는 달리 명시하지 않는 한 일반적으로 다음과 같은 의미를 갖는다.
용어 "알킬기"는 직쇄 또는 분지쇄 포화 탄화수소기를 의미한다. 본 출원에서, 알킬기는 1개 내지 6개의 탄소 원자, 바람직하게는 1개 내지 3개의 탄소 원자를 포함할 수 있다. 예를 들어, 용어 "C1-C3알킬기"는 메틸기, 에틸기, n-프로필기, 이소프로필기를 포함하는 1개 내지 3개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 포화 탄화수소기를 지칭한다. 본 출원에서, "C1-C3알킬기"는 바람직하게는 메틸기이다.
용어 "알콕시기"는 -O-알킬기를 나타내고, 여기서 용어 "알킬기"는 상기에서 정의된 바와 같다. 예를 들어, 용어 "C1-C3알콕시기"는 -O-C1-C3알킬기를 지칭한다.
용어 "할로겐"은 불소, 염소, 브롬 또는 요오드이다. 일부 실시형태에서, 할로겐은 불소이다.
용어 "트리플루오로메틸기"는 -CF3 라디칼이다.
용어 "트리플루오로메톡시기"는 -OCF3 라디칼이다.
용어 "아미노기"는 -NH2 라디칼이다.
용어 "헤테로고리기"는 질소, 산소, 유황으로부터 선택되는 하나 또는 복수개의 헤테로 원자와 하나 또는 복수개의 탄소 원자로 형성되는 비방향족 고리형 라디칼을 지칭한다. 헤테로고리기는 질소, 산소, 유황으로부터 선택되는 1개 내지 3개의 헤테로 원자를 포함하는 3원 내지 8원 고리 체계일 수 있고, 여기서 바람직하게는 적어도 하나의 헤테로 원자는 질소로부터 선택된다. 헤테로고리기의 포화 탄소 원자(즉, -CH2-)는 선택적으로 -C(=O)-, -C(=S)- 또는 -C(=NH)-에 의해 대체될 수 있다. 헤테로고리기의 구현예로 피롤리디닐기(pyrrolidinyl group), 피롤리도닐기(pyrrolidonyl group), 피롤리닐기(pyrrolinyl group), 피롤리논기(pyrrolinone group), 옥사졸리디닐기(oxazolidinyl group), 옥사졸리디논기(oxazolidinone group), 옥사졸리닐기(oxazolinyl group), 옥사졸리논기(oxazolinone group), 티아졸리디닐기(thiazolidinyl group), 티아졸리디논기(thiazolidinone gruop), 티아졸리닐기(thiazolinyl group), 티아졸리논기(thiazolinone group)를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 헤테로고리기는 고리 상의 임의의 적당한 위치를 통해 분자의 기타 부분에 결합될 수 있다.
용어 "아릴기"는 6개 내지 10개의 탄소 원자를 포함하는 단일 고리 또는 융합된 방향족 고리형 탄화수소기를 지칭한다. 아릴기의 구현예로 페닐기와 나프틸기를 포함하고, 여기서 바람직하게는 페닐기이다.
용어 "헤테로아릴기"는 산소, 질소, 유황으로부터 선택되는 하나 또는 복수개의 헤테로 원자와 하나 또는 복수개의 탄소 원자로 형성되는 융합되거나 비융합된 방향족 고리형 라디칼을 지칭하고, 여기서 적어도 하나의 고리는 질소, 산소, 유황으로부터 선택되는 1개 내지 4개의 헤테로 원자를 함유하는 5원 내지 8원 고리이며, 바람직하게는 적어도 하나의 헤테로 원자는 질소로부터 선택된다. 고리에서 두 개 또는 더 많은 헤테로 원자가 나타나는 실시형태에서, 상기 두 개 또는 더 많은 헤테로 원자는 서로 동일하거나 상기 두 개 또는 더 많은 헤테로 원자의 일부 또는 전부는 서로 상이할 수 있고, 상기 라디칼의 고리는 두 개의 인접된 O 또는 S 원자를 포함하지 않는 것을 전제로 한다. 헤테로아릴기의 구현예로 피롤릴기(pyrrolyl group), 푸릴기(furyl group), 티에닐기(thienyl group), 피라졸릴기(pyrazolyl group), 이미다졸릴기(imidazolyl gruop), 옥사졸릴기(oxazolyl group), 이소옥사졸릴기(isoxazolyl group), 티아졸릴기(thiazolyl group), 이소티아졸릴기(isothiazolyl group), 트리아졸릴기(triazolyl group), 피리딜기(pyridyl group), 피리미딜기(pyrimidinyl group), 피라지닐기(pyrazinyl group), 피리다지닐기(pyridazinyl group), 벤즈이미다졸릴기(benzimidazolyl), 벤조피라졸릴기(benzopyrazolyl), 인돌릴기(indolyl group) 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 헤테로아릴기는 고리 상의 임의의 적당한 위치를 통해 분자의 기타 부분에 결합될 수 있다. 예를 들어, 피롤릴기는 피롤-1-일, 피롤-2-일, 피롤-3-일일 수 있고; 푸릴기는 푸란-2-일, 푸란-3-일일 수 있으며; 티에닐기는 티오펜-2-일, 티오펜-3-일일 수 있다.
본 출원에서, 어느 하나의 라디칼이 "선택적으로 치환됨"으로 한정될 경우, 이는 하나 또는 복수개의 알킬기, 알콕시기, 할로겐, 히드록시기, 아미노기로부터 선택되는 본 출원에서 정의된 라디칼에 의해 치환되거나 치환되지 않을 수 있다. 본 기술분야의 통상의 기술자는, 하나 또는 복수개의 치환기를 포함하는 임의의 라디칼에 있어서, 임의의 공간적으로 존재할 수 없거나 및/또는 합성될 수 없는 치환 또는 치환 모드가 도입되지 않을 것임을 이해하여야 한다.
용어 "약학적으로 허용 가능한 염"은 모체 화합물의 생물 유효성과 성질을 보류하는 염을 나타내고, 이는 기대하는 약학적 활성을 가지며 생물학적과 기타 면에서 모두 요구에 부합되지 않는 부분이 없다. 이러한 염은, (1) 산과 염을 형성하고(산성염), 모체 화합물의 유리 염기와 무기산 또는 유기산의 반응을 통해 얻어지며; 무기산은 염산, 황산, 인산, 메탄설폰산(methanesulfonic acid)을 포함하지만 이에 한정되지 않고, 유기산은 아세트산(acetic acid), 트리클로로아세트산(trichloroacetic acid), 프로피온산(propionic acid), 부티르산(butyric acid), 말레산(maleic acid), p-톨루엔설폰산(p-toluenesulfonic acid), 말산(malic acid), 말론산(malonic acid), 계피산(cinnamic acid), 시트르산(citric acid), 푸마르산(fumaric acid), 캄포르산(camphoric acid), 디글루콘산(digluconic acid), 아스파라긴산(aspartic acid), 주석산(tartaric acid)을 포함하지만 이에 한정되지 않으며; (2)모체 화합물에 존재하는 산성 양성자가 금속 이온에 의해 대체되거나 유기 염기와 배위 화합하여 형성된 염(알칼리성염)을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 또 다른 하나의 양태는 B형 간염 바이러스를 억제하기 위한 식I 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 거울상 이성질체 또는 호변 이성질체에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 하나의 양태는 포유 동물, 특히 인간의 B형 간염 바이러스 감염을 치료하기 위한 식I 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 거울상 이성질체 또는 호변 이성질체에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 하나의 양태는 식I 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 거울상 이성질체 또는 호변 이성질체, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 함유하는 약물 조성물에 관한 것이다.
약물 조성물의 목적은 생물체에 대한 화합물의 투여를 촉진시키는 것이다. 통상적으로, 본 발명 화합물은 하나 또는 복수개의 약학적으로 허용 가능한 담체와 적합한 제형을 형성하여 투여될 수 있다. 이러한 제형은 경구 투여, 직장 투여, 국소 투여 및 기타 비위장도 투여(예를 들어, 피하, 근육, 정맥 등)에 적용된다. 예를 들어, 경구 투여에 적합한 제형은 캡슐, 정제, 과립제 및 시럽제 등을 포함한다. 이러한 제제에 포함된 본 발명의 화합물은 고체 분말 또는 과립; 수성 또는 비수성 액체의 용액 또는 현탁액; 유중수 또는 수중유의 에멜젼 등일 수 있다. 상기 제형은 활성 화합물과 하나 또는 복수개의 약학적으로 허용 가능한 담체로 통상적인 약제학 방법을 통해 제조될 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체는 유기체에 현저한 자극성을 일으키지 않고 투여된 화합물의 생물학적 활성 및 성질을 간섭하지 않는 부형제 또는 희석제를 지칭한다. 상기 담체는 활성 화합물 또는 기타 보조 재료와 상용되어야 한다. 고체 제제에 있어서, 통상적인 무독 담체는 만니톨(mannitol), 락토오스(lactose), 전분, 스테아린산마그네슘(magnesium stearate), 탄산칼슘, 인산칼슘, 전분, 셀룰로오스(cellulose) 및 이의 유도체, 글루코스(glucose), 수크로스(sucrose), 젤라틴 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 액체 제제에 사용되는 담체는 물, 생리 식염수, 글루코스 수용액, 식물유, 에틸렌글리콜(ethylene glycol)과 폴리에틸렌글리콜(polyethylene glycol) 등을 포함한다. 활성 화합물은 상기 담체와 용액 또는 현탁액을 형성할 수 있다.
일부 실시형태에서, 상기 약물 조성물은 정확한 투여량을 단일 투여하기 적합한 단위 제형이다. 기타 실시형태에서, 상기 화합물의 양은 약 0.001 mg/kg체중/일 ~ 약 1000 mg/kg체중/일의 범위에 있다. 일부 실시형태에서, 상기 화합물의 양의 범위는 약 0.5 mg/kg체중/일 ~ 약 50 mg/kg체중/일이다. 일부 실시형태에서, 상기 화합물의 양은 약 0.001 g/일 ~ 약 7 g/일이다. 기타 실시형태에서, 상기 화합물의 양은 약 0.002 g/일 ~ 약 6 g/일이다. 기타 실시형태에서, 상기 화합물의 양은 약 0.005 g/일 ~ 약 5 g/일이다. 기타 실시형태에서, 상기 범위의 하한보다 낮은 수준은 이미 충분할 수 있다. 기타 실시형태에서, 상기 범위의 상한보다 높은 수준이 필요할 수 있다. 일부 실시형태에서, 단일 투여량으로 상기 화합물을 투여하고, 1일 1회 투여한다. 기타 실시형태에서, 다중 투여량으로 상기 화합물을 투여하고, 1일 1회 이상 투여한다. 일부 실시형태에서, 상기 약물 조성물이 투여되는 개체는 포유 동물이다. 기타 실시형태에서, 상기 포유 동물은 인간이다. 기타 실시형태에서, 상기 약물 조성물은 적어도 하나의 항 HBV 약물을 더 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 약물 조성물과 적어도 하나의 항 HBV 약물은 각각 별도의 제형으로 조합된 제품으로 조합된다.
본 발명의 약물 조성물은, HBV 중합 효소 억제제, 면역 조절제 또는 인터페론을 포함하는 기타 항 HBV 약물을 더 포함할 수 있다. 구체적으로, 상기 기타 HBV 약물은 라미부딘, 텔비부딘(telbivudine), 테노포비르(tenofovir), 엔테카비르(entecavir), 아데포비르디피복실(adefovir dipivoxil), 알파페론(alfaferone), 알로페론(alloferon), 셀몰루킨(celmoleukin), 클레부딘(clevudine), 엠트리시타빈(emtricitabine), 팜시클로버(famciclovir), 페론(ferron), 헤파텍트(HepaTect) CP, 인테펜(intefen), 인터페론α-1b, 인터페론α, 인터페론α-2a, 인터페론β-1a, 인터페론α-2, 인터루킨(interleukin)-2, 미보틸레이트(mivotilate), 니타족사니드(nitazoxanide), 폴리에틸렌글리콜(polyethylene glycol) 인터페론α-2a, 리바비린(ribavirin), 로페론(roferon)-A, 시조피란(sizofiran), 유포라박(euforavac), 벨도나(veldona), 린타톨리모드(rintatolimod), 포스파지드(phosphazide), 헤플리사브(heplisav), 인터페론α-2b, 레바미솔(Levamisole), 프로파게르마늄 등일 수 있다.
이러한 별도의 약물은 다중 투여량 치료 방법의 일부로서, 본 발명의 화합물을 함유하는 약물 조성물과 개별적으로 투여될 수 있다. 또는, 이러한 약물은 단일 제형의 일부일 수 있고, 단일 조성물에서 본 발명의 화합물과 혼합된다. 다중 투여량 치료 방법의 일부로서 개별적으로 투여될 경우, 두 개의 활성 약제는 이러한 약물의 원하는 활성을 생성하기 위하여, 동시에 순차적으로 또는 서로 일정한 시간 간격을 두고 투여될 수 있다.
본 발명의 또 다른 하나의 양태는 식I 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 거울상 이성질체 또는 호변 이성질체 또는 본 발명의 약물 조성물의 B형 간염 바이러스를 억제하기 위한 약물의 제조에서의 용도에 관한 것이다.
하나의 실시형태에서, 상기 약물은 포유 동물, 특히 인간의 B형 간염 바이러스 감염을 치료하기 위한 것이다.
본 발명의 또 다른 하나의 양태는 필요한 개체에게 치료 유효량의 식I 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 거울상 이성질체 또는 호변 이성질체 또는 본 발명의 약물 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 B형 간염 바이러스의 복제를 억제하는 방법에 관한 것이다.
하나의 실시형태에서, 상기 방법은 포유 동물, 특히 인간의 B형 간염 바이러스 감염을 치료하기 위한 것이다.
본 출원에서, 용어 "치료 유효량"은 대상의 질환 또는 병증의 하나 또는 여러가지 증상을 어느 정도 경감시키고, 질환 또는 병증과 관련되거나 이의 병인의 하나 또는 여러가지 생리 또는 생물 화학 파라미터를 부분적으로 또는 완전히 정상으로 회복시키거나, 및/또는 질환 또는 병증의 발작 가능성을 감소시키는 량이다.
본 출원에서, B형 간염 바이러스 감염에 관한 질환은 급성 간염, 만성 간염, 간경화 및 간세포암을 포함한다. 급성 B형 간염 바이러스 감염의 증상은 무증상이거나 급성 간염과 동일할 수 있다. 만성 바이러스 감염 환자는 간경화 또는 간암 등과 같은 활동성 질환으로 발전될 수 있다.
구체적인 투여 방식과 제형은 화합물 자체의 물리 화학적 성질 및 적용된 질환의 중증도에 의존된다.
PCR 및 효소결합면역흡착법(Elisa)을 사용하여 HBV 복제에 대한 본 출원의 화합물의 영향을 정량적으로 검출할 수 있다.
본 발명은 상기 화합물의 제조방법을 더 제공하고, 유사한 제조방법은 2006년 7월 21일에 출원된 PCT/US/06/28343에 개시되어 있다. 본 발명의 상기 화합물의 제조는 하기 방법을 참조할 수 있지만 이에 한정되지 않는다.
경로1
Figure pct00042
경로2
Figure pct00043
본 출원 화합물의 키랄 분해는 Berger의 방법에 따라 초임계 유체 크로마토그래피(SFC)를 통해 완성된다. Berger, T. A. "Practical advantages of packed column supercritical fluid chromatography in supporting combinatorial chemistry," ACS Symposium Series (2000), 748 (Unified Chromatography), 203-233; Berger, T. A.; Todd, B. S. "Packed column supercritical fluid chromatography of oligoethers using pure carbon dioxide with flame ionization and ultraviolet detection" Chromatographia (2001), 54(11/12), 777-781; Berger, T. A.; Todd, B. S. "Packed column supercritical fluid chromatography of polysiloxanes using pure and hexane modified carbon dioxide with flame ionization and ultraviolet detection," Chromatographia (2001), 54(11/12), 771-775를 참조한다.
Berger의 키랄 분해 방법은 다음과 같이 요약될 수 있다. 라세미 혼합물(60 mg)을 메탄올(methanol)(2 mL)에 용해시키고, 얻은 용액을 제조 키랄 컬럼에 주사한다(ChiralPak AD-H SFC, i.d. 1 cm Х 25 cm). SFC의 조건은 하기와 같다. 이동상: 65 %의 CO2와 35 %의 메탄올이고, 유동 속도: 10 mL/min이며, 검출 파장: 220 nm이다. 입체 이성질체는 상이한 보유 시간에서 분리될 수 있다. 절대적인 배열은 CP060의 결정체 회절 결과를 대조하여 결정된다(CP060은 2-(3,5-디-tert-부틸-4-히드록시페닐)-3-[3-[N-메틸-N-[2-[3,4-(메틸렌디옥시)페녹시]에틸]아미노]프로필]-1,3-티아졸린-4-온(2-(3,5-di-tert-butyl-4-hydroxyphenyl)-3-[3-[N-methyl-N-[2-[3,4-(methylenedioxy)phenoxy]ethyl]amino]propyl]-1,3-thiazolin-4-one), CP060-(R)-(+), [a]D = +33.3°; CP060-(S)-(-), [a]D = -33.5°)(Kato, Tatsuya; Ozaki, Tomokazu; Tamura, Kazuhiko; Suzuki, Yoshiyuki; Akima, Michitaka; Ohi, Nobuhiro, "Novel Calcium Antagonists with Both Calcium Overload Inhibition and Antioxidant Activity. 2. Structure-Activity Relationships of Thiazolidinone Derivatives,"Journal of Medicinal Chemistry (1999), 42(16), 3134-3146). 본 발명의 상기 화합물의 R배열은 상기 방법에 기반하여 결정된다.
아래, 비제한적인 실시예를 통해 본 발명을 설명한다. 본 기술분야의 통상의 기술자는 여기서 설명된 실시예는 단지 본 발명을 설명하고 해석하기 위한 것으로, 본 발명을 한정하려는 것이 아님을 이해하여야 한다.
실시예1: 3-(2-(1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸린-4-온(3-(2-(1H-benzo[d]imidazole-5-yl)ethyl)-2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)oxazoline-4-one)
Figure pct00044
단계1: 1-(4-브로모페닐)-2-(1-(4-플루오로페닐)에틸리덴)히드라진(1-(4-bromophenyl)-2-(1-(4-fluorophenyl)ethylidene)hydrazine)
1-(4-플루오로페닐)에타논(1-(4-fluorophenyl)ethanone)(113.2 g, 820.6 mmol), 1-(4-브로모페닐)히드라진염산염(1-(4-bromophenyl)hydrazine hydrochloride)(183 g, 820.6 mmol) 및 아세트산칼륨(potassium acetate)(80.4 g, 820.6 mmol)을 에탄올(1.8 L)에 넣고, 88 ℃ 하에서 하룻밤 교반한다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축 건조시킨 후, 디클로로메탄(dichloromethane)으로 용해시키고, 여과하여 조품을 얻으며, 최종적으로 석유 에테르로 세척하여 145 g의 1-(4-브로모페닐)-2-(1-(4-플루오로페닐)에틸리덴)히드라진을 얻는다. 수율: 59 %이고; MS: 307.0[M+H]+.
단계2: 1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-포름알데히드(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-formaldehyde)
무수, 아이스 배스(ice bath) 냉각 조건 하에서, 염화포스포릴(phosphorus oxychloride)(83.5 mL)을 무수 DMF(68.75 mL)에 천천히 적가하고, 30분 동안 교반한 후, 질소 가스 보호하에서 1-(4-브로모페닐)-2-(1-(4-플루오로페닐)에틸리덴)히드라진(125 g, 407.2 mmol)을 소량의 DMF에 용해시키며, 반응액에 천천히 적가하고, 실온에서 1시간 동안 교반하며, 70 ℃까지 승온시키고, 5시간 동안 반응시키며, 반응액을 얼음물에 넣고, 여과하며, 아세톤으로(acetone) 세척하고, 여과하여 145 g 의 1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-포름알데히드를 얻는다. 수율: 94 %이다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.97 (s, 1H); 9.39 (s, 1H); 8.03-7.96 (m, 4H); 7.79-4.77 (d, 2H); 7.38-7.33 (m, 2H).
단계3: 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-4-1H-피라졸릴)-3-(4-니트로페네틸)옥사졸린-4-온(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-4-1H-pyrazolyl)-3-(4-nitrophenethyl)oxazoline-4-one)
1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-포름알데히드(72.0 g, 208.7 mmol), 2-히드록시-N-(4-니트로페네틸)아세트아미드(2-Hydroxy-N-(4-nitrophenethyl)acetamide)(59.0 g, 250.4 mmol) 및 p-톨루엔설폰산(21.5 g, 104.4 mmol)을 2 L의 톨루엔(toluene)에 용해시킨다. 물 분리기를 사용하여 16시간 동안 가열 환류시킨 후, 에틸아세테이트(ethyl acetate)로 추출하고 용매를 스핀 건조시킨다. 조품을 물에 분산시키고, 15분 동안 교반한 후 여과한다. 필터 케이크(filter cake)를 메탄올에 분산시키고, 30분 동안 교반한 후 여과한다. 용매를 스핀 건조시킨 후 92.0 g 의 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-4-1H-피라졸릴)-3-(4-니트로페네틸)옥사졸린-4-온을 얻는다. 수율: 94 %이다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.03 (d, 2H); 7.86 (s, 1H); 7.65-7.61 (m, 7H); 7.19-7.14 (m, 5H); 5.92 (s, 1H); 4.41-4.28 (m, 2H); 3.91-3.87 (m, 1H); 3.09-3.05 (m, 1H); 2.87-2.82 (m, 2H).
단계4: 3-(4-아미노페네틸)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-4-1H-피라졸릴)옥사졸린-4-온(3-(4-aminophenylethyl)-2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-4-1H-pyrazolyl)oxazoline-4-one)
2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-4-1H-피라졸릴)-3-(4-니트로페네틸)옥사졸린-4-온(92.0 g, 18.15 mmol)을 에틸아세테이트/메탄올(1/1)(2000 mL)에 용해시키고, 라니니켈(Raney Ni)(9.2 g)을 넣으며, 수소 가스를 넣고, 30 ℃에서 16시간 동안 교반하며, 여과하고 농축시킨 후 88 g의 3-(4-아미노페네틸)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-4-1H-피라졸릴)옥사졸린-4-온을 얻는다. 수율: 93 %이고; MS: 521.2[M+H]+.
단계5: 3-(4-아세틸아미노-3-니트로페네틸)-2-(3-(4-플루오로페닐)-1-(4-브로모페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸리딘-4-온(3-(4-acetylamino-3-nitrophenethyl)-2-(3-(4-fluorophenyl)-1-(4-bromophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)oxazolidine-4-one)
3-(4-아미노페네틸)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-4-1H-피라졸릴)옥사졸린-4-온(86.0 g, 165.1 mmol)을 Ac2O (900 mL)에 용해시키고, 실온 하에서 60분 동안 교반한다. 반응이 완료된 후 0 ℃까지 냉각시키고, 다음 HNO3(65 %)(16.0 mL)을 아이스 배스 냉각된 Ac2O(123 mL)에 넣어 형성된 용액을 반응 혼합물에 천천히 넣는다. 반응 혼합물을 0 ℃ 하에서 하룻밤 교반한다. TLC(메탄올:디클로로메탄=1:10)는 반응이 거의 완료되었음을 나타낸다. 다음 반응 혼합물을 진공 농축시키고, 조품을 에틸아세테이트로 재결정시키며, 여과하여 3-(4-아세틸아미노-3-니트로페네틸)-2-(3-(4-플루오로페닐)-1-(4-브로모페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸리딘-4-온(70 g, 70 %의 수율)을 얻는다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.15 (s, 1H); 8.74 (s, 1H); 7.91-7.29 (m, 13H); 6.17 (s, 1H); 4.31-4.20 (m, 2H); 3.75-3.71 (m, 1H); 3.06-3.01 (m, 1H); 2.79-2.73 (m, 2H); 2.05 (s, 3H).
단계6: 3-(4-아미노-3-니트로페네틸)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸린-4-온(3-(4-amino-3-nitrophenethyl)-2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)oxazoline-4-one)
N-(4-(2-(2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-4-1H-피라졸릴)-4-옥사졸린-3-일)에틸)-2-니트로페닐)아세트아미드(N-(4-(2-(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-4-1H-pyrazolyl)-4-oxazoline-3-yl)ethyl)-2-nitrophenyl)acetamide)(70 g, 114.6 mmol)를 메탄올(1000 mL) 및 1 M의 NaOH(690 mL)에 용해시키고, 하룻밤 환류시킨다. 반응액을 여과하여 60.0 g의 3-(4-아미노-3-니트로페네틸)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸린-4-온을 얻는다. 수율: 93.8 %이고; MS: 566.1[M+H]+.
단계7: 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(3,4-디아미노페네틸)옥사졸린-4-온(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)-3-(3,4-diaminophenethyl)oxazoline-4-one)
3-(4-아미노-3-니트로페네틸)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸린-4-온(60.0 g, 106.0 mmol)을 에틸아세테이트/메탄올(1/1)(2000 mL)에 용해시키고, 라니니켈(6.0 g)을 넣으며, 수소 가스를 통과시키고, 30 ℃에서 16시간 동안 교반한다. 여과하고 농축시켜 55.0 g의 3-(4-아미노페네틸)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-4-1H-피라졸릴)옥사졸린-4-온을 얻는다. 수율: 90 %이다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.72 (s, 1H); 9.71 (d, 2H); 7.74-7.63 (m, 4H); 7.35-7.31 (m, 2H); 6.36 (d, 1H); 6.25 (s, 1H); 6.09-6.06 (d, 3H); 4.39-6.25 (m, 6H); 3.61-3.59 (m, 1H); 2.82-2.79 (m, 1H); 2.39-2.37 (m, 2H). MS: 536.2[M+H]+.
단계8: 3-(2-(1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸린-4-온
2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(3, 4-디아미노페네틸)옥사졸린-4-온(300 mg, 0.56 mmol)을 5 mL의 포름산(formic acid)에 용해시킨다. 반응액을 70 ℃에서 1시간 동안 교반하고, 농축 건조시킨다. 조품을 역상 컬럼 크로마토그래피로 분리하여 백색 고체를 얻는다(80 mg, 수율: 26 %).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.29 (s, 1H); 8.73 (s, 1H); 7.89 (d, J=8.4 Hz, 2H); 7.72 (d, J=8.8Hz, 2H); 7.59-7.62 (m, 2H); 7.39-7.41 (m, 1H); 7.23-7.28 (m, 3H); 6.89 (d, J=8.4Hz, 1H); 6.05 (s, 1H); 4.19-4.29 (m, 2H); 3.73-3.80 (m, 1H); 2.95-3.02 (m, 1H); 2.07-2.86 (m, 2H). MS: 548[M+H]+.
실시예2: 3-(2-(1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸-5-일)에틸)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸린-4-온(3-(2-(1H-benzo[d][1,2,3]triazol-5-yl)ethyl)-2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-) Fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)oxazoline-4-one)
Figure pct00045
2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(3,4-디아미노페네틸)옥사졸린-4-온(300 mg, 0.56 mmol)을 5 mL의 아세트산에 용해시키고, 아질산나트륨(58 mg, 0.84 mmol)을 넣어 5 mL의 물의 용액에 용해시킨다. 반응액을 상온에서 2시간 동안 교반 반응시키고, 50 mL의 물을 넣으며, 에틸아세테이트(60 mL)로 추출하고, 각각 10 %의 탄산수소나트륨 용액, 포화 식염수로 추출 분액시키며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축 건조시킨다. 조품을 역상 컬럼 크로마토그래피로 분리하여 백색 고체를 얻는다(105 mg, 수율: 34 %).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 15.53 (s, 1H); 8.75 (s, 1H); 7.89 (d, J=8.8 Hz, 2H); 7.72 (d, J=8.4Hz, 3H); 7.59-7.63 (m, 3H); 7.23-7.27 (m, 2H); 7.14 (d, J=8.0 Hz, 1H); 6.08 (s, 1H); 4.19-4.29 (m, 2H); 3.78-3.85 (m, 1H); 3.02-3.09 (m, 1H); 2.81-2.93 (m, 2H). MS: 549[M+H]+.
실시예3: 3-(2-(2-옥소-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-옥사졸리딘-4-온(3-(2-(2-oxo-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazole-5-yl)ethyl)-2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)-oxazolidine-4-one)
Figure pct00046
CDI(4.23 g, 26.10 mmol)를 차수를 나누어 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(3,4-디아미노페네틸)옥사졸린-4-온(7.0 g, 13.05 mmol)의 DMF(10 mL) 용액에 넣는다. 질소 가스 보호 하, 80 ℃에서 5시간 동안 교반한다. 반응액을 포화 식염수(1000 mL)에 부어 넣으면 갈색 고체가 석출된다. 여과하여 얻은 필터 케이크를 60 ℃에서 진공 건조시킨 후 실리카겔 컬럼(디클로로메탄:메탄올=10:1)으로 정제하여 담황색 고체 3-(2-(2-옥소-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-옥사졸리딘-4-온(5.56 g, 수율: 75.4 %)을 얻는다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.46-10.45 (d, J=4.8Hz, 2H); 8.72 (s, 1H); 7.90-7.88 (m, 2H); 7.73-7.71 (d, J=9.2Hz, 2H); 7.65-7.61 (m, 2H); 7.29 (t, J=8.8Hz, 2H); 6.71 (t, J=8.0Hz, 2H); 6.62-6.59 (m, 2H); 6.02 (s, 1H); 4.26-4.24 (m, 2H); 3.89-3.83 (m, 1H); 2.98-2.91 (m, 1H); 2.51-2.50 (m, 2H). MS, m/z: 563.8 (M++H).
3-(2-(2-옥소-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-옥사졸리딘-4-온(87 g)을 SFC(크로마토그래피 컬럼: AS-H; 크로마토그래피 컬럼 크기: 0.46 cm I.D. Х 15 cm L; 주입량: 2.0 μl; 이동상: HEP/IPA(0.1 %의 DEA) = 60/40 (V/V); 유속: 0.5 mL/min; 파장: UV 254 nm; 온도: 35 ℃)를 거쳐 키랄 분해시켜 두 개의 광학 이성질체를 얻는다.
(R)-3-(2-(2-옥소-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-옥사졸리딘-4-온은 백색 고체이고, 34.72 g이며, 수율은 39.9 %이다. [α]D +41.04° (c 0.5019 g/mL, 19.9 ℃); 순도: 98.47 %, ee: 100.00 %이다.
(S)-3-(2-(2-옥소-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-옥사졸리딘-4-온은 백색 고체이고, 35.09 g이며, 수율은 40.3 %이다. [α]D -39.89° (c 0.5014 g/mL, 20.0 ℃); 순도: 99.65%, ee: 98.65 %이다.
실시예4: 3-(2-(2-아미노-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)에틸)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸린-4-온(3-(2-(2-amino-1H-benzo[d]imidazole-6-yl)ethyl)-2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)oxazoline-4-one)
Figure pct00047
2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(3,4-디아미노페네틸)옥사졸린-4-온(140 mg, 0.26 mmol)을 메탄올(8 mL)과 물(2 mL)에 용해시킨다. 실온 교반 하에서, 시안화브롬(cyanogen bromide)을 2 mL의 메탄올에 용해시킨 후 반응액에 천천히 적가한다. 30분 후에 반응액이 혼탁해지고, TLC(디클로로메탄:메탄올= 10:1)는 원료가 전부 소모되었음을 나타낸다. 반응액에 50 mL의 물을 넣어 희석한 후, 스핀 증발 저온 하에서 메탄올을 제거하고, 5 mL의 암모니아수로 알칼리성을 조절한 후, 각가 에틸아세테이트(50 mL Х 2)로 두번 추출한다. 유기상을 포화 식염수로 세번 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 스핀 증발 농축시킨 후 DMF로 용해시키며, HPLC 제조 정제하여 3-(2-(2-아미노-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)에틸)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸린-4-온의 백색 고체 목표 산물(30 mg, 수율: 20.5 %)을 얻는다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.68 (s, 1H); 7.88 (d, J=7.6Hz, 2H); 7.72 (d, J=7.6Hz, 2H); 7.59 (s, 2H); 7.27 (t, J=8.0Hz, 2H); 6.92 (d, J=7.2Hz, 1H); 6.82 (s, 1H); 6.55 (d, J=6.8Hz, 1H); 6.07 (s, 2H); 6.03 (s, 1H); 4.28-4.19 (m, 2H); 3.72-3.68 (m, 1H); 2.92-2.89 (m, 1H); 2.70-2.60 (m, 2H); MS: 563.2[M+H]+.
실시예5: 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(2-(2,3-디히드로-2-티오-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)옥사졸린-4-온(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)-3-(2-(2,3-dihydro-2-thio)-1H-benzo[d]imidazole-5-yl)ethyl)oxazoline-4-one)
Figure pct00048
2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(3,4-디아미노페네틸)옥사졸린-4-온(100 mg, 0.19 mmol), 이황화탄소(142 mg, 1.87 mmol), 수산화칼륨(40 mg, 0.71 mmol)을 에탄올(2.5 mL)과 물(0.2 mL)에 용해시키고, 아르곤 가스 보호하에서 2시간 동안 가열 환류시키며, TLC(디클로로메탄:메탄올=15:1)는 원료가 전부 소모되었음을 나타낸다. 반응액을 스핀 증발 농축시킨 후, DMF(3 mL)으로 용해시킨 후 여과하고, HPLC 제조 정제하여 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(2-(2,3-디히드로-2-티오-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)옥사졸린-4-온의 백색 고체 목표 산물(43 mg, 수율: 39.8 %)을 얻는다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.41 (d, J=4.8Hz, 2H); 8.71 (s, 1H); 7.88 (d, J=8.0Hz, 2H); 7.72 (d, J=8.0Hz, 2H); 7.61 (d, J=4.8Hz, 2H); 7.29 (t, J=8.2Hz, 2H); 6.94 (t, J=8.0Hz, 1H); 6.86 (s, 1H); 6.82 (d, J=7.6Hz, 1H); 6.03 (s, 1H); 4.29-4.20 (m, 2H); 3.74-3.70 (m, 1H); 2.97-2.94 (m, 1H); 2.77-2.50 (m, 2H); MS: 580.2[M+H]+.
실시예6: 2-(3-(4-플루오로페닐)-1-(4-요오드페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(2-(2-옥소-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)옥사졸리딘-4-온(2-(3-(4-fluorophenyl)-1-(4-iodophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)-3-(2-(2-oxo-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazole-5-yl)ethyl)oxazolidine-4-one)
Figure pct00049
단계1: 2-(3-(4-플루오로페닐)-1-(4-요오드페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(4-니트로페네틸)옥사졸리딘-4-온(2-(3-(4-fluorophenyl)-1-(4-iodophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)-3-(4-nitrophenethyl)oxazolidine-4-one)
3-(4-플루오로페닐)-1-(4-요오드페닐)-1H-피라졸-5-포름알데히드(1.18 g, 3 mol), 2-히드록시-N-(4-메톡시페네틸)아세트아미드(741 mg, 3.3 mmol)(2-hydroxy-N-(4-methoxyphenethyl)acetamide) 및 p-톨루엔설폰산(160 mg)의 톨루엔(100 mL) 용액을 하룻밤 가열 환류시켜 분액시킨다. TLC(석유 에테르:에틸아세테이트= 1:1)는 반응이 완료되었음을 나타낸다. 반응액을 농축시키고, 실리카겔 컬럼(석유 에테르:에틸아세테이트=10:1)로 정제하여 황색 고체 2-(3-(4-플루오로페닐)-1-(4-요오드페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(4-니트로페네틸)옥사졸리딘-4-온(1.78 g, 수율: 99.1 %)을 얻으며; MS: m/z: 599 (M++H)이다.
단계2: 3-(4-아미노페네틸)-2-(3-(4-플루오로페닐)-1-(4-요오드페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸리딘-4-온(3-(4-aminophenylethyl)-2-(3-(4-fluorophenyl)-1-(4-iodophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)oxazolidine-4-one)
철분말(1.4 g)을 2-(3-(4-플루오로페닐)-1-(4-요오드페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(4-니트로페네틸)옥사졸리딘-4-온(1.5 g, 2.5 mmol)의 테트라히드로푸란(tetrahydrofuran)(100 mL)과 아세트산(acetic acid)(100 mL)용액에 넣는다. 60 ℃에서 하룻밤 교반한다. TLC(석유 에테르:에틸아세테이트=1:1)는 반응이 거의 완료되었음을 나타낸다. 여과하여 철분말을 제거하고, 여액을 진공 농축시킨 후 실리카겔 컬럼(석유 에테르:에틸아세테이트=5:1)으로 정제하여 황색 고체 3-(4-아미노페네틸)-2-(3-(4-플루오로페닐)-1-(4-요오드페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸리딘-4-온(1.2 g, 수율: 84.4 %)을 얻으며; MS: m/z: 569 (M++H)이다.
단계3: 3-(4-아세틸아미노-3-니트로페네틸)-2-(3-(4-플루오로페닐)-1-(4-요오드페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸리딘-4-온(3-(4-acetylamino-3-nitrophenethyl)-2-(3-(4-fluorophenyl)-1-(4-iodophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)oxazolidine-4-one)
0 ℃ 하에서, 3-(4-아미노페네틸)-2-(3-(4-플루오로페닐)-1-(4-요오드페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸리딘-4-온(1.2 g, 2.11 mmol)의 아세트산 무수물(12 mL) 용액에 HNO3(65%, 5 mL)의 아세트산 무수물 용액(5 mL)을 천천히 적가한다. 반응을 실온에서 하룻밤 교반하고, TLC(디클로로메탄:메탄올= 15:1)는 반응이 완료되었음을 나타낸다. 반응액을 농축시킨 후 실리카겔 컬럼(디클로로메탄:메탄올= 30:1)을 거쳐 정제하여 갈색 고체 3-(4-아세틸아미노-3-니트로페네틸)-2-(3-(4-플루오로페닐)-1-(4-요오드페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸리딘-4-온(660 mg, 수율: 65.28 %)을 얻고; MS: m/z: 656 (M++H)이다.
단계4: 3-(4-아미노-3-니트로페닐)-2-(3-(4-플루오로페닐)-1-(4-요오드페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸리딘-4-온(3-(4-amino-3-nitrophenyl)-2-(3-(4-fluorophenyl)-1-(4-iodophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)oxazolidine-4-one)
3-(4-아세틸아미노-3-니트로페네틸)-2-(3-(4-플루오로페닐)-1-(4-요오드페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸리딘-4-온(660 mg, 1 mmol)의 메탄올 용액(10 mL)에 수산화나트륨 용액(40 mg의 NaOH가 5 mL의 물에 용해됨)을 넣고, 2시간 동안 가열 환류시킨다. TLC(디클로로메탄:메탄올=10:1)반응이 완료되었음을 나타낸다. 반응액을 농축시킨 후 실리카겔 컬럼(디클로로메탄:메탄올=30:1)으로 정제하여 갈색 고체 3-(4-아미노-3-니트로페닐)-2-(3-(4-플루오로페닐)-1-(4-요오드페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸리딘-4-온(200 mg, 수율: 32.6 %)을 얻고; MS: m/z: 614 (M++H)이다.
단계5: 3-(3,4-디아미노페네틸)-2-(3-(4-플루오로페닐)-1-(4-요오드페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸리딘-4-온(3-(3,4-diaminophenethyl)-2-(3-(4-fluorophenyl)-1-(4-iodophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)oxazolidine-4-one)
3-(4-아미노-3-니트로페닐)-2-(3-(4-플루오로페닐)-1-(4-요오드페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸리딘-4-온(200 mg, 0.327 mmol)의 테트라히드로푸란 용액(10 mL)에 라니니켈(200 mg)을 넣고, 수소 가스 보호 하에, 실온에서 5시간 동안 교반한다. TLC(디클로로메탄:메탄올= 10:1)는 반응이 완료되었음을 나타낸다. 반응액을 농축시킨 후 실리카겔 컬럼(디클로로메탄:메탄올=50:1)으로 정제하여 갈색 고체 3-(3,4-디아미노페네틸)-2-(3-(4-플루오로페닐)-1-(4-요오드페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸리딘-4-온(115 mg, 수율: 69.3 %)을 얻고; MS: m/z: 509 (M++H)이다.
단계6: 2-(3-(4-플루오로페닐)-1-(4-요오드페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(2-(2-옥소-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)메틸)옥사졸리딘-4-온(2-(3-(4-fluorophenyl)-1-(4-iodophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)-3-(2-(2-oxo-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazole-5-yl)methyl)oxazolidine-4-one)
3-(3,4-디아미노페네틸)-2-(3-(4-플루오로페닐)-1-(4-요오드페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸리딘-4-온(115 mg, 0.197 mmol)의 DMF (5 mL)용액에 CDI(64 mg, 0.394 mmol)를 넣고, 80 ℃에서 8시간 동안 교반한다. TLC(디클로로메탄:메탄올=10:1)는 반응이 완료되었음을 나타낸다. 반응액에 20 mL의 물을 넣어 퀀칭시키고, 에틸아세테이트(20 mL Х 2)로 추출한다. 추출액을 합병하고, 포화 식염수로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 농축시키며, 실리카겔 컬럼(디클로로메탄:메탄올=50:1)으로 정제하여 백색 고체 2-(3-(4-플루오로페닐)-1-(4-요오드페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(2-(2-옥소-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)메틸)옥사졸리딘-4-온(30 mg, 수율: 24.9 %)을 얻는다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.46-10.44 (d, 2H); 8.71(s, 1H); 7.88-7.86 (d, 2H); 7.75-7.73 (d, 2H); 7.64-7.60 (m, 2H); 7.30-7.26 (t, 2H); 6.73-6.71 (d, J=8.1Hz, 1H); 6.63-6.59 (t, 2H); 6.02 (s, 1H); 4.25-4.20 (m, 2H); 3.68-3.69 (m, 1H); 2.92-2.89 (m, 1H); 2.67-2.60 (m, 2H); MS: m/z: 509 (M++H).
실시예7: 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)1H-피라졸-4-일)-3-(2-(5-플루오로-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)에틸)옥사졸린-4-온(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)1H-pyrazole-4-yl)-3-(2-(5-fluoro-1H-benzo[d]imidazole-6-yl)ethyl)oxazoline-4-one)
Figure pct00050
단계1: 2-시아노-2-(2-플루오로-4-니트로페닐)에틸아세테이트(2-cyano-2-(2-fluoro-4-nitrophenyl)ethyl acetate)
1,2-디플루오로-4-니트로기(1,2-difluoro-4-nitro)(20 g, 0.13 mol), 에틸시아노아세테이트(ethyl cyanoacetate)(19 g, 0.16 mol), 탄산칼륨(35 g, 0.25 mol)을 아세토니트릴(acetonitrile)에 용해시키고 90 ℃에서 하룻밤 가열한다. TLC(석유 에테르:에틸아세테이트=10:1)는 원료가 전부 소모되었음을 나타낸다. 반응액을 스핀 건조시키고, 조품을 2 M의 염산(200 mL)으로 산성화시키며, 에틸아세테이트(100 mL)로 세번 추출한다. 합병한 에틸아세테이트상을 식염수로 두 번 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 여액을 스핀 건조시킨다. 조품을 디클로로메탄으로 용해시키고, 실리카겔을 넣어 혼합하며, 실리카겔 컬럼을 통해 정제하여(PE:EA=10:1-1:1) 31 g의 화합물 2-시아노-2-(2-플루오로-4-니트로페닐)에틸아세테이트를 얻고, 갈색 오일상 물질이며, 수율: 97.6 %이다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.15 (d, J=8.8Hz, 1H); 8.05 (d, J=9.2Hz, 1H); 7.77 (t, J=8.0Hz, 1H); 5.11 (s, 1H); 4.34-4.35 (m, 2H); 1.35-1.26 (m, 3H).
단계2: 2-(2-디플루오로-4-니트로페닐)아세토니트릴(2-(2-difluoro-4-nitrophenyl)acetonitrile)
2-시아노-2-(2-플루오로-4-니트로페닐)에틸아세테이트(31 g, 0.12 mol), 염화나트륨(15 g, 0.25 mol), 물(0.13 mL, 0.12 mol)을 디메틸설폭시드(dimethyl sulfoxide)(200 mL)에 용해시킨 후, 100 ℃에서 하룻밤 가열한다. TLC(석유 에테르:에틸아세테이트=2:1)는 원료가 전부 소모되었음을 나타낸다. 반응액을 실온까지 냉각시킨 후, 1 L의 물에 넣어 퀀칭시키고, 200 mL의 에틸아세테이트로 세 번 추출한다. 합병한 유기상을 식염수로 세번 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 여액을 스핀 건조시킨다. 조품을 실리카겔 컬럼으로 정제하여(석유 에테르:에틸아세테이트=10:1-2:1), 20 g의 화합물 2-(2-디플루오로-4-니트로페닐)아세토니트릴을 얻고, 적갈색 고체이며, 수율: 90.3 %이다.
단계3: 2-(2-플루오로-4-니트로페닐)에틸아민(2-(2-fluoro-4-nitrophenyl)ethylamine)
2-(2-디플루오로-4-니트로페닐)아세토니트릴(20 g, 0.11 mol)을 80 mL의 테트라히드로푸란에 용해시키고, 아이스 배스 냉각 하에서 1 M의 보란 테트라히드로푸란(borane tetrahydrofuran) 용액(150 mL, 0.15 mol)을 적가한다. 적가 완료 후 실온으로 회복시키고 80 ℃까지 가열하여 두 시간 동안 환류시킨다. TLC(석유 에테르:에틸아세테이트=2:1)는 대부분 원료가 반응 완료되었음을 나타낸다. 반응액을 실온까지 냉각시키고, 아이스 배스 하에서 반응액에 기포가 생성되지 않을 때까지 메탄올을 넣는다. 반응액을 스핀 증발 농축시킨 후 흑색 오일상 물질(22 g, 수율: 108 %)을 얻고, 직접 다음 단계 반응에 사용된다; MS: 185.1[M+H]+.
단계4: N-(2-플루오로-4-니트로페네틸)-2-히드록시아세트아미드(N-(2-fluoro-4-nitrophenethyl)-2-hydroxyacetamide)
2-(2-플루오로-4-니트로페닐)에틸아민(22 g, 118. mmol), 메틸히드록시아세테이트(Methyl hydroxyacetate)(40 g, 444.4 mmol)를 100 mL의 메탄올에 용해시키고 이틀 동안 가열 환류시킨다. TLC(디클로로메탄:메탄올= 10:1)는 원료가 전부 소모되었음을 나타낸다. 반응액을 실온까지 냉각시킨 후, 스핀 증발 농축시키고, 조품을 실리카겔 컬럼으로 정제하여(석유 에테르:에틸아세테이트=5:1-1:2) 12 g의 화합물 N-(2-플루오로-4-니트로페네틸)-2-히드록시아세트아미드를 얻으며, 흑색 고체이고, 수율: 42 %이며; MS: 243.3[M+H]+이다.
단계5: 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(2-플루오로-4-니트로페네틸)옥사졸린-4-온(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazolyl-4yl)-3-(2-fluoro-4-nitrophenethyl)oxazoline-4-one)
N-(2-플루오로-4-니트로페네틸)-2-히드록시아세트아미드(4 g, 16.53 mmol), 1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-포름알데히드(5.88 g, 17.21 mmol), p-톨루엔설폰산 일 수화물(1.57 g, 8.26 mmol)을 100 mL의 톨루엔에 용해시키고, 150 ℃까지 가열하며, 물 분리기로 물을 하룻밤 분리한다. TLC(석유 에테르:에틸아세테이트=2:1)는 원료가 전부 소모되었음을 나타낸다. 반응액을 스핀 증발 농축시킨 후 실리카겔 컬럼으로 정제하여(석유 에테르:에틸아세테이트=2:1-0:1) 화합물 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(2-플루오로-4-니트로페네틸)옥사졸린-4-온의 조품을 얻고, 다음 에틸아세테이트로 슬러리화(slurrying)시킨 후 여과하며, 필터 케이크를 오븐에서 건조시켜 백색 고체(4.5 g, 수율: 48 %)를 얻는다; MS: 569.1[M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.77 (s, 1H); 7.90 (d, J=7.2Hz, 4H); 7.73-7.66 (m, 4H); 7.51 (t, J=8.0Hz, 1H); 7.30 (t, J=8.8Hz, 2H); 6.14 (s, 1H); 4.32-4.22 (m, 2H); 3.78-3.71 (m, 1H); 3.11-3.04 (m, 1H); 2.86 (s, 2H).
단계6: 3-(4-아미노-2-플루오로페네틸)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸린-4-온(3-(4-amino-2-fluorophenethyl)-2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)oxazoline-4-one)
2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(2-플루오로-4-니트로페네틸)옥사졸린-4-온(4.5 g, 7.92 mmol)을 에틸아세테이트(50 mL)/메탄올(100 mL)에 용해시키고, 라니니켈(100 mg)을 넣으며, 수소 가스 볼로 30 ℃의 상압에서 수소화시킨다. 1시간 동안 반응시킨 후, 반응을 정지시키고, 반응액을 여과하며, 에틸아세테이트로 필터 케이크를 세척하고, 여액을 스핀 건조시켜 목표 산물(백색 고체, 4.2 g, 수율: 98.5 %)을 얻으며, 상기 화합물은 정제를 거치지 않고, 직접 다음 단계 반응에 사용된다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.77 (s, 1H); 7.91 (d, J=8.8Hz, 2H); 7.73 (d, J=8.4Hz, 2H); 7.66 (t, J=7.6Hz, 2H); 7.33 (t, J=8.3Hz, 1H); 6.75 (t, J=8.4Hz, 1H); 6.25-6.16 (m, 3H); 5.25 (s, 2H); 4.30-4.20 (m, 2H); 3.64-3.57 (m, 1H); 2.86-2.79 (m, 1H); 2.59-2.42 (m, 2H); MS: 541.1[M+H]+.
단계7: 3-(2-플루오로-5-니트로-4-아세트아미노페네틸)-2-(3-(4-플루오로페닐)-1-(4-브로모페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸리딘-4-온(3-(2-fluoro-5-nitro-4-acetaminophenethyl)-2-(3-(4-fluorophenyl)-1-(4-bromophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)oxazolidine-4-one)
3-(4-아미노-2-플루오로페네틸)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸린-4-온(4.2 g, 7.8 mmol)을 30 mL의 아세트산 무수물에 용해시키고, 실온에서 20분 동안 교반 반응시키며, 반응액은 혼탁해지고, TLC(석유 에테르:에틸아세테이트=1:1)는 원료가 전부 소모되었음을 나타내며, 다음 아이스 배스 냉각 하에서 반응액에 65 %의 농질산(2.12 g, 21.86 mmol)을 천천히 적가하고, 적가 완료 후 아이스 배스를 제거하여 하룻밤 교반한다. TLC(석유 에테르:에틸아세테이트=1:1)는 원료가 전부 소모되었음을 나타낸다. 반응액을 에틸아세테이트(100 mL)로 희석하고, 물과 식염수로 각각 한번 세척한 후, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 여액은 스핀 증발 건조시킨다. 조품을 실리카겔 컬럼으로 정제하여(석유 에테르:에틸아세테이트=5:1-1:1) 화합물 3-(2-플루오로-5-니트로-4-아세트아미노페네틸)-2-(3-(4-플루오로페닐)-1-(4-브로모페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸리딘-4-온의 황색 고체를 얻고, 다음 에틸아세테이트로 슬러리화시킨 후 여과하며, 필터 케이크를 오븐에서 건조시켜 담황색 고체(2.4 g, 수율: 49.2 %)를 얻는다.
1H NMR(400MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.23 (s, 1H); 8.76 (s, 1H); 7.95 (d, J=7.2Hz, 1H); 7.89 (d, J=8.8Hz, 2H); 7.73-7.68 (m, 4H); 7.59 (d, J=11.6Hz, 1H); 7.31 (t, J=8.8Hz, 2H); 6.24 (s, 1H); 4.30-4.20 (m, 2H); 3.74-3.67 (m, 1H); 3.06-3.01 (m, 1H); 2.79-2.77 (m, 2H); MS; 626.2[M+H]+.
단계8: 3-(2-플루오로-4-아미노-5-니트로페네틸)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸린-4-온(3-(2-Fluoro-4-amino-5-nitrophenethyl)-2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)oxazoline-4-one)
N-(4-(2-(2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-4-옥사졸린-3-일)에틸)-3-플루오로-2-니트로페닐)아세트아미드(1.8 g, 2.88 mmol)을 20 mL의 에탄올에 용해시키고, 2 mL의 농황산을 넣으며, 2시간 동안 가열 환류시키고, 감압 농축시킨다. 잔류물을 에틸아세테이트(40 mL)로 희석하고, 얼음물(100 mL)을 넣어 교반하며, 포화 탄산수소나트륨으로 pH를 중성까지 조절하고, 에틸아세테이트(40 mL)로 추출하며, 포화 식염수 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 스핀 건조시키고, 조품을 컬럼 크로마토그래피로 분리하여(석유 에테르:에틸아세테이트=3:1), 목표 산물 3-(2-플루오로-4-아미노-5-니트로페네틸)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸린-4-온의 황색 고체(0.8 g, 수율: 47.6 %)를 얻는다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.79 (s, 1H); 7.90 (d, J=8.4Hz, 2H); 7.85 (d, J=7.6Hz, 1H); 7.74-7.67 (m, 4H); 7.45 (s, 2H); 7.30 (t, J=8.6Hz, 2H); 6.62 (d, J=12.4Hz, 1H); 6.24 (s, 1H); 4.30-4.20 (m, 2H); 3.69-3.34 (m, 1H); 2.96-2.92 (m, 1H); 2.66-2.57 (m, 2H); MS: 586.1[M+H]+.
단계9: 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)1H-피라졸-4-일)-3-(4,5-디아미노-2-플루오로페네틸)옥사졸린-4-온(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)1H-pyrazole-4-yl)-3-(4,5-diamino-2-fluorophenethyl)oxazoline-4-one)
3-(2-플루오로-4-아미노-5-니트로페네틸)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸린-4-온(200 mg, 0.33 mmol)을 50 mL의 에틸아세테이트와 100 mL의 메탄올에 용해시키고, 라니니켈(50 mg)을 넣으며, 상압에서 수소화시킨다. 1시간 동안 반응시킨 후, 반응을 정지시키고, 반응액을 여과하며, 메탄올로 필터 케이크를 세척하고, 여액을 스핀 건조시켜 목표 산물인 갈색 고체(0.7 g, 수율: 94%)를 얻으며, 상기 화합물은 정제를 거치지 않고, 직접 다음 단계 반응에 사용된다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.77 (s, 1H); 7.91 (d, J=8.0 Hz, 2H); 7.72 (d, J=8.0 Hz, 2H); 7.64 (s, 2H); 7.33 (t, J=8.4 Hz, 2H); 6.23-6.14 (m, 3H); 4.65 (s, 2H); 3.58-3.55 (m, 1H); 2.81-2.78 (m, 1H); 2.41-2.40 (m, 2H); MS: 556.1[M+H]+.
단계10: 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)1H-피라졸-4-일)-3-(2-(5-플루오로-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)에틸)옥사졸린-4-온(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)1H-pyrazole-4-yl)-3-(2-(5-fluoro-1H-benzo[d]imidazole-6-yl)ethyl)oxazoline-4-one)
2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)1H-피라졸-4-일)-3-(4,5-디아미노-2-플루오로페네틸)옥사졸린-4-온(280 mg, 0.51 mmol)을 5 mL의 포름산에 용해시킨다. 반응액을 70 ℃에서 1시간 동안 교반 반응시키고, 농축 건조시키며, 에틸아세테이트로 희석하고, 포화 탄산수소나트륨으로 pH를 중성까지 조절하며, 유기상 포화 식염수로 세척한 후, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과한다. 여액을 스핀 증발 농축시키고, 조품을 역상 컬럼 크로마토그래피로 분리하여 백색 고체를 얻는다(120 mg, 수율: 42.1 %).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.40 (s, 1H); 8.78 (s, 1H); 8.17 (s, 1H); 7.90 (d, J=8.8Hz, 2H); 7.73 (d, J=8.8Hz, 2H); 7.64 (t, J=6.8Hz, 2H); 7.37 (s, 1H); 7.27 (t, J=8.8Hz, 2H); 6.17 (s, 1H); 4.31-4.21 (m, 2H); 3.79-3.73 (m, 1H); 3.03-2.96 (m, 1H); 2.89-2.74 (m, 2H); MS: 566.1[M+H]+.
실시예8: 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)1H-피라졸-4-일)-3-(2-(6-플루오로-2-카르보닐-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)옥사졸린-4-온(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)1H-pyrazole-4-yl)-3-(2-(6-fluoro-2-carbonyl-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazole-5-yl)ethyl)oxazoline-4-one)
Figure pct00051
2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(3,4-디아미노-2-플루오로페네틸)옥사졸린-4-온(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)-3-(3,4-diamino-2-fluorophenethyl)oxazoline-4-one)(300 mg, 0.54 mmol), CDI(106 mg, 0.65 mmol)를 DMF(5 mL)에 용해시키고, 질소 가스 보호 하, 80 ℃에서 2시간 동안 교반하며, 반응이 완료된 후, 반응액을 물(100 mL)에 넣고, 에틸아세테이트(50 mL)로 두 번 추출하며, 유기상을 합병한 후 포화 식염수로 한번 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 여액을 스핀 건조시키며, 조품을 실리카겔 컬럼(디클로로메탄:메탄올=1:0-40:1)으로 정제하여 백색 고체의 목표 산물(200 mg, 수율: 64 %)을 얻는다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.64 (s, 1H); 10.55 (s, 1H); 8.77 (s, 1H); 7.90 (d, J=8.4 Hz, 2H); 7.72 (d, J=8.4 Hz, 2H); 7.65 (t, J=7 Hz, 2H); 7.29 (t, J=8.4 Hz, 2H); 6.67-6.60 (m, 2H); 6.13 (s, 1H); 4.30-4.20 (m, 2H); 3.70 (m, 1H); 2.91 (m, 1H); 2.74-2.62 (m, 2H); MS: 580.2[M+H]+.
2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)1H-피라졸-4-일)-3-(2-(6-플루오로-2-카르보닐-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)옥사졸린-4-온(19.5 g)을 SFC(크로마토그래피 컬럼: OJ-H; 크로마토그래피 컬럼 크기: 0.46 cm I.D. Х 15 cm L; 주입량: 2.0 μl; 이동상: HEP/EtOH = 60/40 (V/V); 유속: 0.5 mL/min; 파장: UV 254 nm; 온도: 25℃)를 거쳐 키랄 분해시켜 두 개의 광학 이성질체를 얻는다.
(S)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)1H-피라졸-4-일)-3-(2-(6-플루오로-2-카르보닐-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)옥사졸린-4-온은 백색 고체이고, 7.48 g이며, 수율은 38.4 %이다. tR 3.557분, [α]D -38.78° (c 0.5261 g/100 mL, 21.4 ℃); 순도: 99.62 %, ee: 100.0 %이다.
(R)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)1H-피라졸-4-일)-3-(2-(6-플루오로-2-카르보닐-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)옥사졸린-4-온, 백색 고체, 7.98 g, 수율 40.9 %. tR 5.784분, [α]D +37.20° (c 0.4893 g/100 mL, 19.7 °C); 순도: 98.93 %, ee: 99.02 %이다.
실시예9: 3-(2-(5-플루오로-1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸-6-일)에틸)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸린-4-온(3-(2-(5-fluoro-1H-benzo[d][1,2,3]triazol-6-yl)ethyl)-2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)oxazoline-4-one)
Figure pct00052
2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)1H-피라졸-4-일)-3-(3,4-디아미노-2-플루오로페네틸)옥사졸린-4-온(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)1H-pyrazole-4-yl)-3-(3,4-diamino-2-fluorophenethyl)oxazoline-4-one)(160 mg, 0.29 mmol)을 빙초산(5 mL)과 물(1 mL)에 용해시킨다. 아이스 배스 하에서, 아질산나트륨(40 mg, 0.578 mmol)을 2 ml의 물에 용해시킨 후 반응액에 적가한다. 30분 후 TLC(디클로로메탄:메탄올=15:1)는 원료가 전부 소모되었음을 나타낸다. 반응액을 100 mL의 얼음물에 넣고, 포화 탄산수소나트륨을 사용하여 알칼리성으로 조절하며, 에틸아세테이트(50 mL Х 2)로 두 번 추출한다. 합병한 유기상을 식염수로 세 번 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 스핀 증발 농축시킨 후 DMF로 용해시키며, HPLC 제조 정제하여 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(2-(5-플루오로-1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸-6-일)에틸)옥사졸린-4-온의 백색 고체 목표 산물(65 mg, 수율: 39.8 %)을 얻는다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.78 (s, 1H); 7.89 (d, J=8.4Hz, 2H); 7.78 (d, J=4.8Hz, 1H); 7.72 (d, J=8.0Hz, 2H); 7.64 (s, 2H); 7.26 (t, J=9.2Hz, 2H); 6.22 (s, 1H); 4.29-4.19 (m, 2H); 3.81-3.76 (m, 1H); 3.07-3.04 (m, 1H); 2.87-2.83 (m, 2H); MS: 567.2[M+H]+.
실시예10: 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)1H-피라졸-4-일)-3-(2-(5,7-디플루오로-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)에틸)옥사졸린-4-온(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)1H-pyrazole-4-yl)-3-(2-(5,7-difluoro-1H-benzo[d]imidazole-6-yl)ethyl)oxazoline-4-one)
Figure pct00053
단계1: 2-시아노-2-(2,6-디플루오로-4-니트로페닐)에틸아세테이트(2-cyano-2-(2,6-difluoro-4-nitrophenyl)ethyl acetate)
에틸시아노아세테이트(ethyl cyanoacetate)(4.8 g, 42.3 mmol)를 무수 DMF(40 mL)에 용해시키고, 60 %의 NaH(1.7 g, 42.3 mmol)를 넣으며, 실온에서 1시간 동안 교반하고, 1,2,3-트리플루오로-5-니트로벤젠(1,2,3-trifluoro-5-nitrobenzene)(5 g, 28.2 mmol)을 넣으며, 70 ℃에서 16시간 동안 반응시킨다. 실온까지 냉각시키고, 40 mL의 물을 넣으며, 2 M의 염산으로 pH를 2 ~ 3까지 조절하고, 에틸아세테이트(200 mL)로 추출한다. 에틸아세테이트 용액을 포화 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 스핀 건조시켜 2-시아노-2-(2,6-디플루오로-4-니트로페닐)에틸아세테이트의 갈색 오일상 조품(8.5 g)을 얻는다. 상기 화합물은 정제를 거치지 않고, 직접 다음 단계 반응에 사용된다.
단계2: 2-(2,6-디플루오로-4-니트로페닐)아세토니트릴(2-(2,6-difluoro-4-nitrophenyl)acetonitrile)
2-시아노-2-(2,6-디플루오로-4-니트로페닐)에틸아세테이트(8.5 g, 31.5 mmol)를 DMSO (30 mL)에 용해시키고, 염화리튬(1.3 g, 31.5 mmol)과 1 mL의 물을 넣는다. 130 ℃에서 3시간 동안 반응시키고, 실온까지 냉각시키며, 100 mL의 물을 넣고, 에틸아세테이트(200 mL)로 추출한다. 에틸아세테이트 용액을 포화 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 스핀 건조시키고, 조품을 컬럼 크로마토그래피로 분리하여(에틸아세테이트:메탄올 용리=10:1), 2-(2,6-디플루오로-4-니트로페닐)아세토니트릴의 황색 고체(4.0 g)를 얻는다.
단계3: 2-(2,6-디플루오로-4-니트로페닐)에틸아민(2-(2,6-difluoro-4-nitrophenyl)ethylamine)
2-(2,6-디플루오로-4-니트로페닐)아세토니트릴(4.0 g, 20.2 mmol)을 30 mL의 테트라히드로푸란에 용해시키고, 보란 테트라히드로푸란 용액(40 mL, 1 M)을 넣는다. 3시간 동안 가열 환류시키고, 실온까지 냉각시키며, 10 mL의 메탄올을 천천히 적가하고, 1시간 동안 가열 환류시키며, 반응액을 농축시켜 2-(2,6-디플루오로-4-니트로페닐)에틸아민의 갈색 오일상 조품을 얻고(4.6 g); MS: 203 [M+H]+이다. 상기 화합물은 정제를 거치지 않고, 직접 다음 단계 반응에 사용된다.
단계4: N-(2,6-디플루오로-4-니트로페네틸)-2-히드록시아세트아미드(N-(2,6-difluoro-4-nitrophenethyl)-2-hydroxyacetamide)
2-(2,6-디플루오로-4-니트로페닐)에틸아민(4.6 g, 22.8 mmol)을 메탄올(60 mL)에 용해시키고, 2-메틸히드록시아세테이트(10 g, 111 mmol)를 넣으며, 40시간 동안 가열 환류시키고, 반응액을 농축시키며, 조품을 컬럼 크로마토그래피로 분리하여(디클로로메탄:메탄올 용리=40:1), N-(2,6-디플루오로-4-니트로페네틸)-2-히드록시아세트아미드의 황색 고체 산물(2.5 g, 수율: 42 %)을 얻고; MS: 261[M+H]+이다.
단계5: 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(2,6-디플루오로-4-니트로페네틸)옥사졸린-4-온(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazolyl-4yl)-3-(2,6-difluoro-4-nitrophenethyl)oxazoline-4-one)
N-(2,6-디플루오로-4-니트로페네틸)-2-히드록시아세트아미드(2.5 g, 9.6 mmol)와 1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-포름알데히드(3.3 g, 9.6 mmol)를 톨루엔(60 mL)에 용해시키고, p-톨루엔설폰산(825 mg, 4.8 mmol)을 넣으며, 물 분리기로 물을 분리하고, 16시간 동안 가열 환류시키며, 반응액을 농축시키고, 50 mL의 물을 넣으며, 에틸아세테이트(60 mL)로 추출한다. 추출액을 각각 10 %의 탄산수소나트륨용액과 포화 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 스핀 건조시키고, 조품을 컬럼 크로마토그래피로 분리하여(디클로로메탄:메탄올 용리=30:1), 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(2,6-디플루오로-4-니트로페네틸)옥사졸린-4-온의 백색 고체 산물(2.6 g, 수율: 46 %)을 얻으며; MS: 589[M+H]+이다.
단계6: 3-(4-아미노-2,6-디플루오로페네틸)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸린-4-온(3-(4-Amino-2,6-difluorophenethyl)-2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)oxazoline-4-one)
2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(2,6-디플루오로-4-니트로페네틸)옥사졸린-4-온(2.6 g, 4.4 mmol)을 에틸아세테이트/메탄올(1:1, 40 mL)에 용해시키고, 라니니켈(300 mg)을 넣으며, 상압에서 수소화시킨다. 2시간 동안 반응시킨 후, 반응을 정지시키고, 반응액을 여과하며, 에틸아세테이트로 필터 케이크를 세척하고, 여액을 스핀 건조시켜 3-(4-아미노-2,6-디플루오로페네틸)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸린-4-온의 백색 고체 산물(2.3 g, 수율: 93 %)을 얻으며; MS: 559 [M+H]+; 상기 화합물은 정제를 거치지 않고, 직접 다음 단계 반응에 사용된다.
단계7: 3-(2,6-디플루오로-5-니트로-4-아세트아미노페네틸)-2-(3-(4-플루오로페닐)-1-(4-브로모페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸리딘-4-온(3-(2,6-difluoro-5-nitro-4-acetaminophenylethyl)-2-(3-(4-fluorophenyl)-1-(4-bromophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)oxazolidine-4-one)
3-(4-아미노-2,6-디플루오로페네틸)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸린-4-온(1.8 g, 3.2 mmol)을 20 mL의 디클로로메탄에 용해시키고, 1 mL의 아세트산 무수물을 넣으며, 실온에서 2시간 동안 교반 반응시킨다. 반응액을 농축시키고, 잔류물에 20 mL의 에틸에테르(ethyl ether)를 넣으며, 여과하여 3-(2,6-디플루오로-4-아세트아미노페네틸)-2-(3-(4-플루오로페닐)-1-(4-브로모페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸리딘-4-온의 백색 고체 산물(1.8 g, 93 %의 수율)을 얻고; MS: 601 [M+H]+이다.
단계8: 3-(2,6-디플루오로-5-니트로-4-아세트아미노페네틸)-2-(3-(4-플루오로페닐)-1-(4-브로모페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸리딘-4-온(3-(2,6-difluoro-5-nitro-4-acetaminophenylethyl)-2-(3-(4-fluorophenyl)-1-(4-bromophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)oxazolidine-4-one)
3-(2,6-디플루오로-4-아세트아미노페네틸)-2-(3-(4-플루오로페닐)-1-(4-브로모페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸리딘-4-온(1.8 g, 3 mmol)을 20 mL의 농황산에 용해시키고, 0 ℃에서 질산칼륨(455 mg, 4.5 mmol)을 넣으며, 다음 실온으로 회복시키고, 2시간 동안 교반 반응시킨다. 반응액을 분쇄된 얼음에 넣고, 에틸아세테이트(60 mL)로 추출한다. 추출액을 각각 10 %의 탄산수소나트륨 용액과 포화 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 스핀 건조시키고, 조품을 컬럼 크로마토그래피로 분리하여(디클로로메탄:메탄올 용리=40:1), 3-(2,6-디플루오로-5-니트로-4-아세트아미노페네틸)-2-(3-(4-플루오로페닐)-1-(4-브로모페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸리딘-4-온의 담황색 고체(800 mg, 수율: 41 %)를 얻으며; MS: 646 [M+H]+이다.
단계9: 3-(4-아미노-2,6-디플루오로-3-니트로페네틸)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸린-4-온(3-(4-amino-2,6-difluoro-3-nitrophenethyl)-2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)oxazoline-4-one)
3-(2,6-디플루오로-5-니트로-4-아세트아미노페네틸)-2-(3-(4-플루오로페닐)-1-(4-브로모페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸리딘-4-온(800 mg, 1.24 mmol)을 10 mL의 메탄올에 용해시키고, 0.5 mL의 농황산을 넣으며, 2시간 동안 가열 환류시키고, 감압 농축시킨다. 잔류물에 물(20 mL)을 넣고, 에틸아세테이트(40 mL)로 추출한다. 추출액을 각각 10 %의 탄산수소나트륨 용액과 포화 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 스핀 건조시키고, 조품을 컬럼 크로마토그래피로 분리하여(디클로로메탄:메탄올 용리=30:1), 3-(4-아미노-2,6-디플루오로-3-니트로페네틸)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸린-4-온의 황색 고체(520 mg, 수율: 69 %)를 얻으며; MS: 604 [M+H]+이다.
단계10: 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)1H-피라졸-4-일)-3-(3,4-디아미노-2,6-디플루오로페네틸)옥사졸린-4-온(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)1H-pyrazole-4-yl)-3-(3,4-diamino-2,6-difluorophenethyl)oxazoline-4-one)
3-(4-아미노-2,6-디플루오로-3-니트로페네틸)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸린-4-온(480 mg, 0.8 mmol)을 5 mL의 에틸아세테이트와 5 mL의 메탄올에 용해시키고, 라니니켈(20 mg)을 넣으며, 상압에서 수소화시킨다. 1시간 동안 반응시킨 후, 반응을 정지시키고, 반응액을 여과하며, 에틸아세테이트/에탄올(1:1) 용액으로 필터 케이크를 세척한다. 여액을 스핀 건조시켜 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(3,4-디아미노-2,6-디플루오로페네틸)옥사졸린-4-온의 갈색 고체(450 mg, 수율: 98 %)를 얻고, 상기 화합물은 정제를 거치지 않고, 직접 다음 단계 반응에 사용되며; MS: 574 [M+H]+이다.
단계11: 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)1H-피라졸-4-일)-3-(2-(5,7-디플루오로-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)에틸)옥사졸린-4-온(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)1H-pyrazole-4-yl)-3-(2-(5,7-difluoro-1H-benzo[d]imidazole-6-yl)ethyl)oxazoline-4-one)
2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)1H-피라졸-4-일)-3-(3,4-디아미노-2,6-디플루오로페네틸)옥사졸린-4-온(190 mg, 0.33 mmol)을 5 mL의 포름산에 용해시킨다. 반응액을 70 ℃에서 1시간 동안 교반하고, 농축 건조시키며, 조품은 역상 컬럼 크로마토그래피로 분리하여 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(2-(5,7-디플루오로-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)에틸)옥사졸린-4-온(88 mg, 수율: 45.8 %)을 얻는다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ 8.82 (s, 1H); 8.33 (s, 1H); 7.90 (d, J=8.4Hz, 2H); 7.73 (d, J=8.4Hz, 2H); 7.62-7.66 (m, 2H); 7.26-7.30 (m, 2H); 7.19 (d, J=9.6Hz, 1H); 6.19 (s, 1H); 4.19-4.31 (m, 2H); 3.66-3.69 (m, 1H); 2.79-2.98 (m, 3H); MS: 584 [M+H]+.
실시예11: 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)1H-피라졸-4-일)-3-(2-(4,6-디플루오로-2-카르보닐-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)옥사졸린-4-온(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)1H-pyrazole-4-yl)-3-(2-(4,6-difluoro-2-carbonyl-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazole-5-yl)ethyl)oxazoline-4-one)
Figure pct00054
2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)1H-피라졸-4-일)-3-(3,4-디아미노-2,6-디플루오로페네틸)옥사졸린-4-온(260 mg, 0.45 mmol)을 8 mL의 무수 DMF에 용해시키고, CDI(88 mg, 0.54 mmol)를 넣는다. 반응액은 80 ℃에서 16시간 동안 교반 반응시키고, 실온까지 냉각시키며, 30 mL의 물을 넣고, 에틸아세테이트(30 mL Х 2)로 추출한다. 추출액을 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 농축시켜 조품을 얻고, 컬럼 크로마토그래피로 분리(디클로로메탄:메탄올 용리=30:1) 정제하여, 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)1H-피라졸-4-일)-3-(2-(4,6-디플루오로-2-카르보닐-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)옥사졸린-4-온(160 mg)을 얻으며, 디클로로메탄으로 세척하여 백색 고체 산물(120 mg, 수율: 44 %)을 얻는다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.93-11.03 (m, 2H); 8.83 (s, 1H); 7.91 (d, J=6.8Hz, 2H); 7.65-7.74 (m, 4H); 7.26-7.32 (m, 2H); 6.57 (d, J=8.8Hz, 1H); 6.16 (s, 1H); 4.21-4.32 (m, 2H); 3.61-3.64 (m, 1H); 2.91-2.94 (m, 1H); 2.67-2.74 (m, 2H); MS: 600 [M+H]+.
실시예12: 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(2-(5,7-디플루오로-1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸-6-일)에틸)옥사졸린-4-온(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)-3-(2-(5,7-difluoro-1H-benzo[d][1,2,3]triazol-6-yl)ethyl)oxazoline-4-one)
Figure pct00055
2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)1H-피라졸-4-일)-3-(3,4-디아미노-2,6-디플루오로페네틸)옥사졸린-4-온(130 mg, 0.23 mmol)을 빙초산(5 ml)/물(3 ml)에 용해시키고, 아이스 배스 하에서, 아질산나트륨(32 mg, 0.46 mmol)을 2 ml의 물에 용해시킨 후 반응액에 적가하며, 30분 후 TLC(디클로로메탄:메탄올=15:1)는 원료가 전부 소모되었음을 나타낸다. 반응액을 100 ml의 얼음물에 넣고, 포화 탄산수소나트륨으로 알칼리성으로 조절하며, 에틸아세테이트(50 ml Х 2)로 두 번 추출한다. 합병한 유기상을 식염수로 세 번 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 스핀 증발 농축시킨 후 DMF로 용해시키며 HPLC 제조 정제하여 백색 고체 산물(65 mg, 수율: 40 %)을 얻는다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.84 (s, 1H), 7.90 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.73 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.66 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 7.48 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.29 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 6.23 (s, 1H), 4.32-4.20 (m, 2H), 3.71-3.68 (m, 1H), 3.05-3.02 (m, 1H), 2.90-2.84 (m, 2H); MS: 583.1[M+H]+.
실시예13: 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4,6-디플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(2-(2-옥소디히드로인돌-5-일)에틸)옥사졸린-4-온(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4,6-difluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)-3-(2-(2-oxodihydroindoline)-5-yl)ethyl)oxazoline-4-one)
Figure pct00056
단계1: 메틸-2-(5-플루오로-2-니트로페닐)메틸포르메이트(methyl-2-(5-fluoro-2-nitrophenyl)methyl formate)
아이스 배스 조건 하에서 농황산(16.0 g)을 2-(3-플루오로페닐)메틸아세테이트(2-(3-fluorophenyl)methyl acetate)(16.0 g, 95.23 mmol)에 천천히 넣고, 30분 후 다시 질산(12.0 ml)을 천천히 적가하며, 적가 완료 후 2시간 동안 교반한 후, 반응액을 얼음물에 천천히 넣고, 에틸아세테이트 추출하며, 유기상을 농축 건조시키고, 컬럼을 거쳐 백색 고체(10.6 g, 수율: 52 %)를 얻는다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.22-8.19 (m, 1H); 7.18-7.16 (m, 1H); 7.14-7.06 (m, 1H); 4.03 (s, 2H); 3.73 (s, 3H).
단계2: 메틸-2-(2-니트로페닐)메틸시아노포르메이트(methyl-2-(2-nitrophenyl)methyl cyanoformate)
에틸시아노아세테이트(5.3 g, 46.9 mmol)를 무수 DMF(50 ml)에 용해시키고, NaH (60 %)(1.9 g, 46.9 mmol)를 넣으며, 실온에서 1시간 동안 교반한다. 메틸-2-(5-플루오로-2-니트로페닐)메틸포르메이트(5 g, 28.2 mmol)를 넣고, 80 ℃에서 16시간 동안 반응시키며, 실온까지 냉각시키고, 물을 넣으며, 염산(2 M)으로 pH를 3까지 조절하고, 에틸아세테이트로 추출하며, 스핀 건조시켜 조품을 얻고, 컬럼을 거쳐 갈색 오일상 산물(6.7 g, 수율: 93 %)을 얻으며; MS: 305[M-H]+이다.
단계3: 2-(5-(시아노메틸)-2-니트로페닐)메틸포르메이트(2-(5-(cyanomethyl)-2-nitrophenyl)methyl formate)
메틸-2-(2-니트로페닐)메틸시아노포르메이트(1.0 g, 3.26 mmol)를 DMSO(10 ml)에 용해시키고, 염화나트륨(0.57 g, 9.80 mmol)과 0.05 ml의 물을 넣으며, 140 ℃에서 1.5시간 동안 반응시키고, 실온까지 냉각시키며, 물을 넣고, 에틸아세테이트로 추출하며, 스핀 건조시키고, 조품을 컬럼 크로마토그래피로 분리하여(디클로로메탄/메탄올 용리=30:1), 적색 오일상의 목표 산물(700 mg, 수율: 76 %)을 얻는다.
단계4: 메틸2-(5-(2-아미노에틸)-2-니트로페닐)메틸포르메이트(methyl 2-(5-(2-aminoethyl)-2-nitrophenyl)methyl formate)
2-(5-(시아노메틸)-2-니트로페닐)메틸포르메이트(0.7 g, 2.99 mmol)를 테트라히드로푸란(5 ml)에 용해시키고, 보란 테트라히드로푸란 용액(3.29 ml, 1 M)을 넣으며, 2시간 동안 가열 환류시키고, 실온까지 냉각시키며, 10 mL의 메탄올을 천천히 적가하고, 반응액을 농축시켜 적갈색 고체의 목표 산물(638 mg, 수율: 87 %)을 얻으며; MS: 238 [M+H]+이다.
단계5: 5-(2-(2-히드록시아세트아미드)에틸)-2-니트로벤조에이트(5-(2-(2-hydroxyacetamide)ethyl)-2-nitrobenzoate)
메틸2-(5-(2-아미노에틸)-2-니트로페닐)메틸포르메이트(638 mg, 2.68 mmol)를 메탄올(10 ml)에 용해시키고, 2-메틸히드록시아세테이트(2.68 g, 8.04 mmol)를 넣으며, 40시간 동안 가열 환류시키고, 반응액을 농축시키며, 조품을 컬럼 크로마토그래피로 분리하여(디클로로메탄/메탄올 용리=40:1), 적색 오일상의 목표 산물(100 mg, 수율: 12.6 %)을 얻고; MS: 296 [M+H]+이다.
단계6: 메틸2-(5-(2-(2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-4-옥소옥사졸리딘-3-일)메틸)-2-니트로페닐)메틸포르메이트(methyl2-(5-(2-(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)-4-oxooxazolidine-3-yl)methyl)-2-nitrophenyl)methyl formate)
5-(2-(2-히드록시아세트아미드)에틸)-2-니트로벤조에이트(100 mg, 0.34 mmol)와 1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-포름알데히드(116 mg, 0.34 mmol)를 톨루엔(13 ml)에 용해시키고, p-톨루엔설폰산(32.1 mg, 0.17 mmol)을 넣으며, 물 분리기로 물을 분리하고, 150 ℃에서 16시간 동안 가열 환류시키며, 반응액을 농축시키고, 물을 넣으며, 에틸아세테이트(60 ml)로 추출하고, 10 %의 탄산수소나트륨 용액으로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 스핀 건조시키며, 조품을 액상에서 제조하여 갈색 고체의 목표 산물(60 mg, 수율: 28 %)을 얻고; MS: 623 [M+H]+이다.
단계7: 메틸2-(5-(2-(2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-4-옥소옥사졸리딘-3-일)메틸)-2-아미노페닐)메틸포르메이트(methyl2-(5-(2-(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)-4-oxooxazolidine-3-yl)methyl)-2-aminophenyl)methyl formate)
메틸2-(5-(2-(2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-4-옥소옥사졸리딘-3-일)메틸)-2-니트로페닐)메틸포르메이트를 에틸아세테이트/메탄올(1:1)(6 ml)에 용해시키고, 라니니켈(6 mg)을 넣으며, 상압에서 수소화시킨다. 16시간 동안 반응시킨 후, 반응을 정지시키고, 반응액을 여과하며, 에틸아세테이트로 필터 케이크를 세척하고, 여액을 스핀 건조시켜 황색 고체 목표 산물(58 mg, 수율: 97 %)을 얻는다. 상기 화합물은 정제를 거치지 않고, 직접 다음 단계 반응에 사용되며; MS: 593 [M+H]+이다.
단계8: 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)1H-피라졸-4-일)-3-(2-(2-옥소디히드로인돌-5-일)에틸)옥사졸린-4-온(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)1H-pyrazole-4-yl)-3-(2-(2-oxodihydroindolin-5-yl) Ethyl)oxazoline-4-one)
메틸2-(5-(2-(2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-4-옥소옥사졸리딘-3-일)메틸)-2-아미노페닐)메틸포르메이트(58 mg, 0.1 mmol)를 2 mL의 빙초산에 용해시키고, 실온에서 16시간 동안 교반 반응시키며, 반응액을 농축시키고, 조품 고체를 얻으며, HPLC 제조로 담황색 고체 산물(8 mg, 수율: 15 %)을 얻는다.
1H NMR(400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.24 (s, 1H); 8.73 (s, 1H); 7.91-7.89 (d, J=8.4Hz, 2H); 7.73-7.71 (m, 2H); 7.67-7.64 (m, 4H); 7.32-7.28 (t, J=8.8和8.0Hz, 2H); 6.86-6.82 (m, 2H); 6.62-6.60 (d, J=7.6Hz, 1H); 6.02 (s, 1H); 4.26 (m, 2H); 3.69-3.66 (m, 1H); 3.18 (s, 2H); 2.92 (m, 1H); 2.66 (m, 2H); MS: 561 [M+H]+.
2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4,6-디플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(2-(2-옥소디히드로인돌-5-일)에틸)옥사졸린-4-온(18 g)을 SFC(크로마토그래피 컬럼: OJ-H; 크로마토그래피 컬럼 크기: 0.46 cm I.D. Х 15 cm L; 주입량: 2.0 μl; 이동상: HEP/EtOH=60/40/(V/V); 유속: 0.5 mL/min; 파장: UV 254 nm; 온도: 25℃)를 거쳐 키랄 분해시켜 두 개의 광학 이성질체를 얻는다.
(S)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4,6-디플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(2-(2-옥소디히드로인돌-5-일)에틸)옥사졸린-4-온은 백색 고체이고, 6.46 g이며, 수율은 35.9 %이다. tR 2.629분, [α]D -22.77° (c 0.5007 g/100mL, 18.4 ℃); 순도: 98.39 %, ee: 100.0 %이다.
(R)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4,6-디플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(2-(2-옥소디히드로인돌-5-일)에틸)옥사졸린-4-온은 백색 고체이고, 6.63 g이며, 수율은 36.8 %이다. tR 7.951분, [α]D +23.08° (c 0.5113 g/100mL, 19.2 ℃); 순도: 99.10 %, ee: 100.00 %이다.
실시예14: 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-디플루오로페닐)-1H-피라졸)-3-(2-(3,3-디플루오로-2-옥소인돌린-5-에틸)옥소인돌린-4-온(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-difluorophenyl)-1H-pyrazol)-3-(2-(3,3-difluoro-2-oxoindoline-5-ethyl)oxoindoline-4-one)
Figure pct00057
2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(3,4-디아미노페네틸)옥사졸린-4-온 화합물(521 mg, 1.0 mmol), 2-브로모-2,2-에틸디플루오로아세테이트(2-bromo-2,2-ethyl difluoroacetate)(0.388 mL, 3.0 mmol), Cp2Fe(19 mg, 0.1 mmol)를 5 mL의 DMSO에 용해시키고, 질소 가스 보호하에서, 반응액을 상온에서 12시간 동안 교반 반응시킨 후, 2 mL의 1 M의 농황산 DMSO 용액을 넣으며, 질소 가스 보호하에서 계속하여 24시간 동안 반응시키고, 반응이 완료된 후 얼음물에 넣으며 에틸아세테이트로 추출하고, 포화 식염수로 추출 분액시키며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축 건조시키며, 조품은 제조 HPLC 분리를 거쳐 백색 고체(10 mg, 수율: 1.6 %)를 얻는다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.03 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 7.90 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.73-7.65 (m, 4H), 7.35-7.20 (m, 4H), 6.78 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.07 (s, 1H), 4.27-4.24 (m, 2H), 3.74-3.70 (m, 1H), 3.02-2.95 (m, 1H), 2.73-2.64 (m, 2H); MS: 597[M+H]+.
실시예15: 3-(2-(2-옥소-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)-2-(1-(4-플루오로페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-옥사졸리딘-4-온(3-(2-(2-oxo-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazole-5-yl)ethyl)-2-(1-(4-fluorophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)-oxazolidine-4-one)
Figure pct00058
단계1: 1-(4-플루오로페닐)-2-(1-(4-플루오로페닐)에틸리덴)히드라진(1-(4-fluorophenyl)-2-(1-(4-fluorophenyl)ethylidene)hydrazine)
1-(4-플루오로페닐)에타논(1-(4-fluorophenyl)ethanone)(17.0 g, 123 mmol), 1-(4-플루오로페닐)히드라진염산염(1-(4-fluorophenyl)hydrazinehydrochloride)(20.0 g, 123 mmol)와 아세트산칼륨(12.0 g, 123 mmol)을 에탄올(200 mL)에 넣고, 88 ℃ 하에서 하룻밤 교반한다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축 건조시킨 후 디클로로메탄으로 용해시키고, 여과하여 조품을 얻으며, 최종적으로 석유 에테르로 세척하여 1-(4-플루오로페닐)-2-(1-(4-플루오로페닐)에틸리덴)히드라진(26.0 g, 105 mmol, 수율: 85%)을 얻는다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 9.25 (s, 2H); 7.82-7.80 (m, 2H); 7.23-7.18 (m, 4H); 7.08-7.04 (m, 2H); 2.24 (s, 3H).
단계2: 1-(4-플루오로페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-포름알데히드(1-(4-fluorophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-formaldehyde)
아이스 배스 조건 하에서, 염화포스포릴(13.5 mL, 142 mmol)을 무수 DMF(11 mL, 142 mmol)에 천천히 적가하고, 30분 동안 교반한 후, 질소 가스 보호하에서 1-(4-플루오로페닐)-2-(1-(4-플루오로페닐)에틸리덴)히드라진(20.0 g, 81.2 mmol)이 25 mL의 무수 DMF에서의 용액을 반응액에 천천히 적가하며, 실온에서 1시간 동안 교반하고, 70 ℃까지 승온시키며, 계속하여 5시간 동안 반응시키고, 반응액을 얼음물에 넣으며, 여과하고, 아세톤으로 슬러리화시키며, 여과하여 백색 고체 산물(18 g, 63.4 mmol, 수율: 78 %)을 얻는다.
단계3: 2-(1-(4-플루오로페닐)-3-(4-플루오로페닐)-4-1H-피라졸릴)-3-(4-니트로페네틸)옥사졸린-4-온(2-(1-(4-fluorophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-4-1H-pyrazolyl)-3-(4-nitrophenethyl)oxazoline-4-one)
1-(4-플루오로페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-포름알데히드(9.65 g, 33.9 mmol), 2-히드록시-N-(4-니트로페네틸)아세트아미드(9.14 g, 40.8 mmol)와 p-톨루엔설폰산 일 수화물(3.23 g, 16.9 mmol)을 250 mL의 톨루엔에 용해시키고, 물 분리기를 사용하여 16시간 동안 가열 환류시킨 후, 에틸아세테이트로 추출하며, 용매를 스핀 건조시킨다. 조품을 물에 분산시키고, 15분 동안 교반한 후 여과하며, 필터 케이크를 메탄올에 분산시키고, 30분 동안 교반한 후 여과한다. 용매를 스핀 건조시켜 2-(1-(4-플루오로페닐)-3-(4-플루오로페닐)-4-1H-피라졸릴)-3-(4-니트로페네틸)옥사졸린-4-온(13.3 g, 27.1 mmol, 수율: 80 %)을 얻는다.
단계4: 3-(4-아미노페네틸)-2-(1-(4-플루오로페닐)-3-(4-플루오로페닐)-4-1H-피라졸릴)옥사졸린-4-온(3-(4-aminophenethyl)-2-(1-(4-fluorophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-4-1H-pyrazolyl)oxazoline-4-one)
2-(1-(4-플루오로페닐)-3-(4-플루오로페닐)-4-1H-피라졸릴)-3-(4-니트로페네틸)옥사졸린-4-온(13.3 g, 27.1 mmol)을 에틸아세테이트/메탄올(1:1, 300 mL)에 용해시키고, 라니니켈(2.6 g)을 넣으며, 수소 가스를 통과시키고, 50 ℃ 하에서 16시간 동안 교반하며, 여과하고 농축시켜 3-(4-아미노페네틸)-2-(1-(4-플루오로페닐)-3-(4-플루오로페닐)-4-1H-피라졸릴)옥사졸린-4-온(12 g, 26.2 mmol, 수율: 97 %)을 얻는다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.71 (s, 1H); 8.00 (m, 2H); 7.69 (m, 2H); 7.42 (t, 2H); 7.36 (t, 2H); 6.73 (d, 2H); 6.45 (d, 2H); 6.13 (s, 1H); 4.92 (s, 2H); 4.28 (dd, 2H, J=13 및 21Hz); 3.65(m, 1H); 2.87 (m, 1H); 2.62-2.42 (m, 2H).
단계5: N-(4-(2-(2-(1-(4-플루오로페닐)-3-(4-플루오로페닐)-4-1H-피라졸릴)-4-옥사졸린-3-일)에틸)-2-니트로페닐)아세트아미드(N-(4-(2-(2-(1-(4-fluorophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-4-1H-pyrazolyl)-4-oxazoline-3-yl)ethyl)-2-nitrophenyl)acetamide)
3-(4-아미노페네틸)-2-(1-(4-플루오로페닐)-3-(4-플루오로페닐)-4-1H-피라졸릴)옥사졸린-4-온(12.0 g, 26 mmol)을 Ac2O(100 mL)에 용해시키고, 실온 하에서 60분 동안 교반한다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 0 ℃까지 냉각시키고, 다음 HNO3(65 %, 2.7 mL)을 반응 혼합물에 천천히 적가한다. 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반한다. TLC(석유 에테르:에틸아세테이트=1:2)는 반응이 거의 완료되었음을 나타낸다. 반응 혼합물을 진공에서 농축 건조시키고, 조품을 에틸아세테이트로 재결정시키며, 여과하여 백색 고체(12.0 g, 21.9 mmol, 수율: 73 %)를 얻는다.
단계6: 3-(4-아미노-3-니트로페네틸)-2-(1-(4-플루오로페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸린-4-온(3-(4-amino-3-nitrophenethyl)-2-(1-(4-fluorophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazolyl-4yl)oxazoline-4-one)
N-(4-(2-(2-(1-(4-플루오로페닐)-3-(4-플루오로페닐)-4-1H-피라졸릴)-4-옥사졸린-3-일)에틸)-2-니트로페닐)아세트아미드(12.0 g, 22 mmol)를 메탄올(300 mL), NaOH(1 N, 40 mL)에 용해시키고, 하룻밤 환류시킨다. 반응액에 에틸아세테이트를 넣고, 분액시킨다. 에틸아세테이트상을 포화 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 여액을 진공에서 농축시켜 3-(4-아미노-3-니트로페네틸)-2-(1-(4-플루오로페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸린-4-온 조품(10.0 g, 19.8 mmol, 수율: 90 %)을 얻으며, 직접 다음 단계 반응에 사용된다.
단계7: 2-(1-(4-플루오로페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(3,4-디아미노페네틸)옥사졸린-4-온(2-(1-(4-fluorophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)-3-(3,4-diaminophenethyl)oxazoline-4-one)
3-(4-아미노-3-니트로페네틸)-2-(1-(4-플루오로페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸린-4-온 조품(10.0 g, 19.8 mmol)을 에틸아세테이트/메탄올(1:1, 400 mL)에 용해시키고, 라니니켈(2.0 g)를 넣으며, 수소 가스를 통과시키고, 50 ℃ 하에서 16시간 동안 교반하며, 여과하고 농축시켜 3-(4-아미노페네틸)-2-(1-(4-플루오로페닐)-3-(4-플루오로페닐)-4-1H-피라졸릴)옥사졸린-4-온 조품(9.0 g, 18.9 mmol, 수율: 95 %)을 얻으며, 직접 다음 단계 반응에 사용된다.
단계8: 2-(1-(4-플루오로페닐)-3-(4-플루오로페닐)1H-피라졸-4-일)-3-(2-(6-플루오로-2-카르보닐-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)옥사졸린-4-온(2-(1-(4-fluorophenyl)-3-(4-fluorophenyl)1H-pyrazole-4-yl)-3-(2-(6-fluoro-2-carbonyl-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazole-5-yl)ethyl)oxazoline-4-one)
2-(1-(4-플루오로페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(3,4-디아미노페네틸)옥사졸린-4-온 조품(9.0 g, 18.9 mmol), CDI(3.8 g, 23.4 mmol)를 무수 DMF(10 mL)에 용해시키고, 질소 가스 보호 하에, 60 ℃에서 4시간 동안 교반하며, 반응이 완료된 후, 반응액을 물(300 mL)에 넣고, 에틸아세테이트(300 mL Х 3)로 추출하며, 유기상을 합병한 후 포화 식염수로 한번 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 여액을 스핀 건조시켜 조품(6.0 g)을 얻으며, 디클로로메탄으로 세척하고, 여과하며, 고체를 진공 건조시켜 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)1H-피라졸-4-일)-3-(2-(6-플루오로-2-카르보닐-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)옥사졸린-4-온(3.0 g, 6.0 mmol, 32 %: 수율)을 얻는다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.44 (s, 2H), 8.65 (s, 1H), 7.96-7.92 (m, 2H), 7.64-7.61 (m, 2H), 7.37 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 7.28 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 6.73-6.59 (m, 3H), 6.02 (s, 1H), 4.26-4.23 (m, 2H), 3.67-3.63 (m, 1H), 2.91-2.88 (m, 1H), 2.68-2.62 (m, 2H); MS: 502.2[M+H]+.
3-(2-(2-옥소-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)-2-(1-(4-플루오로페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-옥사졸리딘-4-온(3 g)을 SFC(크로마토그래피 컬럼: OJ-H; 크로마토그래피 컬럼 크기: 0.46 cm I.D. Х 15 cm L; 주입량: 2.0 μl; 이동상: HEP/EtOH = 60/40 (V/V); 유속: 0.5 mL/min; 파장: UV 254 nm; 온도: 25 ℃)를 거쳐 키랄 분해시켜 두 개의 광학 이성질체를 얻는다.
(S)-3-(2-(2-옥소-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)-2-(1-(4-플루오로페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-옥사졸리딘-4-온은 백색 고체이고, 1.00 g이며, 수율은 33.3 %이다. tR 1.831분, [α]D -12.30° (c 0.5040 g/100mL, 14.7 ℃); 순도: 99.52 %, ee: 100.0 %이다.
(R)-3-(2-(2-옥소-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)-2-(1-(4-플루오로페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-옥사졸리딘-4-온은 백색 고체이고, 0.88 g이며, 수율29.3 %이다. tR 2.275분, [α]D +14.80° (c 0.5001 g/100mL, 14.1 ℃); 순도: 99.45 %, ee: 99.54 %이다.
실시예16: 6-(2-{2-[1-(4-브로모-페닐)-3-(4-플루오로-페닐)-1-히드로-피라졸-4-일]-4-카르보닐-옥사졸린-3-일}-에틸)-3-히드로-2-카르보닐-벤조옥사졸(6-(2-{2-[1-(4-Bromo-phenyl)-3-(4-fluoro-phenyl)-1-hydro-pyrazole-4-yl]-4-carbonyl-oxazoline-3-yl}-ethyl)-3-hydro-2-carbonyl-benzoxazole)
Figure pct00059
단계1: (3-메톡시-4-니트로-페닐)-에틸시아노아세테이트((3-methoxy-4-nitro-phenyl)-ethyl cyanoacetate)
에틸시아노아세테이트(3.6 g, 32.1 mmol)를 DMF(50 mL)에 용해시킨 후, 실온 하에서 수소화나트륨(0.9 g, 광물유 중 60 %, 37.9 mmol)을 차수를 나누어 넣고, 첨가 완료 후 30분 동안 교반한 후 3-메톡시-4-니트로-플루오로벤젠(3-methoxy-4-nitro-fluorobenzene)(5.0 g, 29.2 mmol)을 넣는다. 반응액을 100 ℃까지 가열하고, 1시간 동안 교반한다. TLC(석유 에테르:에틸아세테이트=10:1)는 원료가 전부 소모되었음을 나타낸다. 반응액을 300 mL의 얼음물 포화 염화암모늄으로 퀀칭시킨 후, 적갈색이 소실될 때까지 희염산을 넣고, 에틸아세테이트(100 mL Х 2)로 두 번 추출하며, 합병한 유기상을 포화 식염수로 세 번 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 여액을 농축시켜 갈색 오일상 물질 조품(9.0 g, 100 %)을 얻으며, 직접 다음 단계 반응에 사용된다.
단계2: (3-메톡시-4-니트로-페닐)-아세토니트릴((3-methoxy-4-nitro-phenyl)-acetonitrile)
(3-메톡시-4-니트로-페닐)-에틸시아노아세테이트(9.0 g, 0.034 mol), 염화나트륨(3.37 g, 0.058 mol), 물(0.54 ml, 0.03 mol)을 DMSO(90 mL)에 용해시키고, 100 ℃까지 가열한 후 하룻밤 경과하며, TLC는 반응 원료가 완전히 소모되었음을 나타낸다. 반응액을 500 mL의 물로 희석하고, 에틸아세테이트(100 mL Х 2)로 두 번 추출하며, 합병한 유기상을 포화 식염수로 세 번 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 여액을 농축시키며, 조품을 실리카겔 컬럼으로 정제하여 적갈색 고체 산물(2.6 g, 40 %)을 얻는다.
단계3: (3-메톡시-4-니트로-페닐)-에틸아민((3-methoxy-4-nitro-phenyl)-ethylamine)
(3-메톡시-4-니트로-페닐)-아세토니트릴(2.6 g, 13.5 mmol)을 테트라히드로푸란(10 mL)에 용해시킨 후, 실온에서 1 N의 보란 테트라히드로푸란 용액(67 ml, 67 mmol)을 천천히 적가한다. 적가 완료 후 반응액을 1시간 동안 가열 환류시키고, TLC는 원료가 전부 소모되었음을 나타낸다. 반응액에 아이스 배스 하에서 메탄올을 적가하여 퀀칭시키고, 농축시켜 흑색 오일상 물질 조품(2.9 g, 100 %)을 얻으며, 직접 다음 단계 반응에 사용된다. MS: 197.1[M+H]+.
단계4: 2-히드록시-N-[2-(3-메톡시-4-니트로-페닐)-에틸]-아세트아미드(2-hydroxy-N-[2-(3-methoxy-4-nitro-phenyl)-ethyl]-acetamide)
(3-메톡시-4-니트로-페닐)-에틸아민(2.9 g, 0.014 mmol), 메틸히드록시아세테이트(20.0 g, 0.222 mol)를 메탄올(30 mL)에 용해시키고, 하룻밤 가열 환류시키며, TLC는 원료가 전부 소모되었음을 나타내고, 반응액을 농축시키며, 조품을 실리카겔 컬럼(석유 에테르:에틸아세테이트=5:1 ~ 0:1)으로 정제하여 갈색 오일상 산물(2.0 g, 56 %)을 얻는다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.81 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.93 (s, 1H), 6.86 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.80 (s, 1H), 4.05 (s, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.61-3.56 (m, 2H), 2.93-2.89 (m, 2H); MS: 255.3[M+H]+.
단계5: 2-[1-(4-브로모-페닐)-3-(4-플루오로-페닐)-1-히드로-피라졸-4-일]-3-[2-(3-메톡시-4-니트로-페닐)-에틸]-4-카르보닐-옥사졸린(2-[1-(4-bromo-phenyl)-3-(4-fluoro-phenyl)-1-hydro-pyrazole-4-yl]-3-[2-(3-methoxy-4)-nitro-phenyl)-ethyl]-4-carbonyl-oxazoline)
2-히드록시-N-[2-(3-메톡시-4-니트로-페닐)-에틸]-아세트아미드(4.0 g, 3.94 mmol), 1-[1-(4-브로모-페닐)-3-(4-플루오로-페닐)-1-히드로-피라졸-4-포름알데히드(1.4 g, 4.13 mmol), p-톨루엔설폰산 일 수화물(0.37 g, 1.97 mmol)을 톨루엔(20 ml)에 용해시키고, 물 분리기로 물을 분리하며, 150 ℃까지 가열한 후 하룻밤 환류시킨다. TLC로 검출하면 원료가 소실되었음을 나타낸다. 반응액을 농축시키고, 조품을 실리카겔 컬럼으로 정제하여 황색 고체 산물(1.1 g, 48 %)을 얻는다
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.74 (s, 1H), 7.90 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.73-7.64 (m, 5H), 7.29 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 7.07 (s, 1H), 6.80 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.05 (s, 1H), 4.31-4.23 (m, 2H), 3.85-3.81 (m, 1H), 3.77 (s, 3H), 3.14-3.07 (m, 1H), 2.85-2.73 (m, 2H); MS: 581.1[M+H]+.
단계6: 2-[1-(4-브로모-페닐)-3-(4-플루오로-페닐)-1-히드로-피라졸-4-일]-3-[2-(3-히드록시-4-니트로-페닐)-에틸]-4-카르보닐-옥사졸린(2-[1-(4-bromo-phenyl)-3-(4-fluoro-phenyl)-1-hydro-pyrazole-4-yl]-3-[2-(3-hydroxy-4-nitro-phenyl)-ethyl]-4-carbonyl-oxazoline)
2-[1-(4-브로모-페닐)-3-(4-플루오로-페닐)-1-히드로-피라졸-4-일]-3-[2-(3-메톡시-4-니트로-페닐)-에틸]-4-카르보닐-옥사졸린(0.9 g, 1.55 mmol)을 디클로로메탄(20 mL)에 용해시키고, 드라이 아이스(Dry ice) 아세톤 배스(Acetone bath)하, -78 ℃ 하에서 삼브롬화붕소(boron tribromide)(1.9 g, 7.75 mmol)를 적가하며, 반응을 하룻밤 교반하고, 온도를 자연적으로 실온으로 회복시킨다. TLC는 반응 원료가 완전히 소모되었음을 나타내고, 반응액을 메탄올로 퀀칭시키며, 탄산수소나트륨으로 중성으로 조절하고, 디클로로메탄(50 mL Х 2)으로 두 번 추출한다. 합병한 유기상을 포화 식염수로 두 번 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 여액을 농축시켜 황색 고체 조품(777 mg)을 얻으며, 직접 다음 단계 반응에 사용된다. MS: 569.1[M+H]+.
단계7: 2-[1-(4-브로모-페닐)-3-(4-플루오로-페닐)-1-히드로-피라졸-4-일]-3-[2-(3-히드록시-4-아미노-페닐)-에틸]-4-카르보닐-옥사졸린(2-[1-(4-bromo-phenyl)-3-(4-fluoro-phenyl)-1-hydro-pyrazole-4-yl]-3-[2-(3-hydroxy-4-amino)-phenyl)-ethyl]-4-carbonyl-oxazoline)
2-[1-(4-브로모-페닐)-3-(4-플루오로-페닐)-1-히드로-피라졸-4-일]-3-[2-(3-히드록시-4-니트로-페닐)-에틸]-4-카르보닐-옥사졸린(777 mg,1.37 mmol)을 메탄올(50 mL)에 용해시키고, 라니니켈(100 mg)을 넣으며, 상압에서 수소화시켜 1시간 동안 교반하고, TLC는 원료가 전부 소모되었음을 나타낸다. 반응액을 규조토로 여과하고, 여액을 농축시켜 갈색 고체 조품(660 mg)을 얻으며, 직접 다음 단계 반응에 사용된다. MS: 537.1[M+H]+.
단계8: 6-(2-{2-[1-(4-브로모-페닐)-3-(4-플루오로-페닐)-1-히드로-피라졸-4-일]-4-카르보닐-옥사졸린-3-일}-에틸)-3-히드로-2-카르보닐-벤조옥사졸(6-(2-{2-[1-(4-bromo-phenyl)-3-(4-fluoro-phenyl)-1-hydro-pyrazole-4-yl]-4-carbonyl-oxazoline-3-yl}-ethyl)-3-hydro-2-carbonyl-benzoxazole)
2-[1-(4-브로모-페닐)-3-(4-플루오로-페닐)-1-히드로-피라졸-4-일]-3-[2-(3-히드록시-4-아미노-페닐)-에틸]-4-카르보닐-옥사졸린(300 mg, 0.559 mmol)을 무수 DMF(10 mL)에 용해시킨 후, 실온에서 카르보닐디이미다졸(carbonyldiimidazole) CDI(110 mg, 0.67 mmol)을 넣는다. 반응액을 70 ℃에서 1시간 동안 가열하고, TLC는 원료가 전부 소모되었음을 나타내며, 반응액을 100 mL의 물로 퀀칭시키고, 에틸아세테이트(50 mL Х 2)로 두 번 추출한다. 합병한 유기상을 포화 식염수로 세 번 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 여액을 농축시키며, 조품은 HPLC 제조를 거쳐 백색 고체 산물(100 mg, 32 %)을 얻는다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.44 (s, 1H) , 8.71 (s, 1H) , 7.90 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.72 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.65-7.61 (dd, J = 8.8 Hz, 5.6 Hz, 2H), 7.28 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 7.00 (s, 1H), 6.87-6.80 (m, 2H), 5.97 (s, 1H), 4.30-4.21 (m, 2H), 3.75-3.70 (m, 1H) , 3.00-2.94 (m, 1H), 2.71-2.65 (m, 2H); MS: 563.1 [M+H]+.
실시예17: 5-(2-(2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-4-옥사졸린-3-일)에틸)벤조[d]옥사졸-2(3H)-온(5-(2-(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)-4-oxazoline-3-yl)ethyl)benzo[d]oxazole-2(3H)-one)
Figure pct00060
단계1: 2-(4-히드록시-3-니트로페닐)아세트산(2-(4-hydroxy-3-nitrophenyl)acetic acid)
2-(4-히드록시페닐)아세트산(2-(4-hydroxyphenyl)acetic acid)(12 g, 78.9 mmol)을 아세트산(75 mL)에 용해시키고, 0 ℃까지 냉각시킨 후, 질산(65 %, 4.08 mL, 91.9 mmol)을 적가한다. 반응액을 실온으로 승온시키고, 실온에서 2시간 동안 교반한다. 여과하고, 고체는 에틸에테르(10 mL Х 2)로 세척하며, 감압 농축시켜 2-(4-히드록시-3-니트로페닐)아세트산(10.0 g, 50 mmol, 수율: 64 %)을 얻는다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.42 (m, 1H), 10.84 (m, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.45 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.60 (s, 2H).
단계2: 2-(4-메톡시-3-니트로페닐)메틸아세테이트(2-(4-methoxy-3-nitrophenyl)methyl acetate)
2-(4-히드록시-3-니트로페닐)아세트산(10.0 g, 50 mmol)을 N,N-디메틸포름아미드(N,N-dimethylformamide)(100 mL)에 용해시키고, 탄산칼륨(21.0 g, 152.2 mmol)을 용액에 넣은 후, 요오드메탄(Iodomethane)(21.0 g, 147.9 mmol)을 넣는다. 반응 혼합물을 50 ℃까지 승온시키고 30분 동안 반응시킨다. TLC는 반응이 완료되었음을 나타낸다. 반응 혼합물을 300 mL의 물에 천천히 넣고, 여과하며, 고체는 물로 세척하고, 진공 건조시켜 2-(4-메톡시-3-니트로페닐)메틸아세테이트(11.2 g, 49.8 mmol, 수율: 98 %)를 얻는다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 7.81 (d, J = 2.4Hz, 1H), 7.57 (dd, J = 2.4와 8.8Hz, 1H), 7.33 (d, J = 8.8Hz, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.75 (s, 2H), 3.63 (s, 3H); MS: 226.3[M+H]+.
단계3: 2-(4-메톡시-3-니트로페닐)아세트산(2-(4-methoxy-3-nitrophenyl)acetic acid)
2-(4-메톡시-3-니트로페닐)메틸아세테이트(8.0 g, 35.6 mmol)를 테트라히드로푸란(80 mL)과 물(20 mL)에 용해시킨다. 수산화리튬 일 수화물(4.5 g, 106.7 mmol)을 반응액에 천천히 넣고, 실온에서 1시간 동안 교반 반응시킨다. 감압하여 테트라히드로푸란을 제거한 후, 염산(3 N)으로 pH를 3으로 조절하고, 반응액을 15분 동안 교반한 후 여과하며, 필터 케이크를 50 mL의 물로 세척하고, 건조시켜 2-(4-메톡시-3-니트로페닐)아세트산(6.0 g, 28.4 mmol, 수율: 80 %)을 얻는다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.46 (m, 1H), 7.79 (d, J = 2.4Hz, 1H), 7.56 (dd, J=2.4와 8.8Hz, 1H), 7.32 (d, J = 8.8Hz, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.64 (s, 2H).
단계4: 2-(4-메톡시-3-니트로페닐)아세트아미드(2-(4-methoxy-3-nitrophenyl)acetamide)
2-(4-메톡시-3-니트로페닐)아세트산(6.0 g, 28.4 mmol)을 염화티오닐(thionyl chloride)(20 mL)에 넣은 후, 100 ℃까지 승온시키고, 1시간 동안 반응시킨다. 반응액을 스핀 증발 건조시키고, 테트라히드로푸란(80 mL)에 용해시키며, 0 ℃에서 용액을 암모니아수(50 mL)에 천천히 넣고 실온에서 1시간 동안 반응시킨다. 테트라히드로푸란을 스핀 증발시켜 제거하고, 여과하며, 필터 케이크를 건조시켜 2-(4-메톡시-3-니트로페닐)아세트아미드(5.0 g, 23.8 mmol, 수율 84 %)를 얻는다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 7.77 (d, J = 2.4Hz, 1H), 7.53 (dd, J=2.4和8.8Hz, 1H), 7.30 (d, J = 8.8Hz, 1H), 6.95 (brs, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.42 (s, 2H); MS: 211.3[M+H]+.
단계5: 2-(4-메톡시-3-니트로페닐)에틸아민(2-(4-methoxy-3-nitrophenyl)ethylamine)
2-(4-메톡시-3-니트로페네틸)아세트아미드(2.0 g, 9.52 mmol)를 테트라히드로푸란(80 mL)에 넣은 후, 보란 테트라히드로푸란(1 M, 50 mL, 50 mmol)을 넣으며, 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 70 ℃까지 승온시키고 2시간 동안 반응시킨다. 반응액을 농염산으로 퀀칭시키고, 테트라히드로푸란을 스핀 증발시켜 제거한 후, 포화 탄산나트륨으로 pH를 9로 조절하며, 반응액을 에틸아세테이트(50 mL Х 3)로 추출한다. 추출액을 합병하고, 포화 식염수 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여액을 스핀 증발 건조시켜 2-(4-메톡시-3-니트로페닐)에틸아민(2 g, 9.52 mmol, 수율: 100 %)을 얻는다. MS: 197.3[M+H]+.
단계6: 2-히드록시-N-(4-메톡시-3-니트로페네틸)아세트아미드(2-hydroxy-N-(4-methoxy-3-nitrophenethyl)acetamide)
2-(4-메톡시-3-니트로페네틸)에틸아민(2.0 g, 10.2 mmol), 메틸히드록시아세테이트(18.0 g, 200 mmol)를 50 mL의 메탄올에 용해시키고, 이틀 동안 가열 환류시킨다. 반응액을 실온까지 냉각시키고, 스핀 증발시켜 농축 건조시키며, 조품을 실리카겔 컬럼으로 정제(석유 에테르:에틸아세테이트= 5:1-1:2)하여 화합물2-히드록시-N-(4-메톡시-3-니트로페네틸)아세트아미드(550 mg, 2.2 mmol, 수율: 21 %)를 얻는다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 7.69 (d, J = 2.4Hz, 1H), 7.41 (dd, J=2.4와 8.8Hz, 1H), 7.05(d, J = 8.8Hz, 1H), 6.81 (brs, 1H), 4.06 (s, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.44 (m, 2H), 2.94 (m, 2H); MS: 255.3[M+H]+.
단계7: 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(4-메톡시-3-니트로페닐)옥사졸린-4-온(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)-3-(4-methoxy-3-nitrophenyl)oxazoline-4-one)
2-히드록시-N-(4-메톡시-3-니트로페네틸)아세트아미드(550 mg, 2.2 mmol), 1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-포름알데히드(747 mg, 2.2 mmol), p-톨루엔설폰산 일 수화물(74 mg, 0.43 mmol)을 50 mL의 톨루엔에 용해시키고, 150 ℃까지 가열하며, 물 분리기로 물을 하룻밤 분리한다. TLC(석유 에테르:에틸아세테이트=2:1)는 원료가 전부 소모되었음을 나타낸다. 반응액을 스핀 증발 농축시킨 후, 실리카겔 컬럼으로 정제하여(석유 에테르:에틸아세테이트=2:1 ~ 0:1), 화합물 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(4-메톡시-3-니트로페닐)옥사졸린-4-온(600 mg, 1.03 mmol, 수율: 50 %)을 얻는다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.89 (s, 1H), 7.66-7.59 (m, 6H), 7.48 (s, 1H), 7.24 (m, 1H), 7.17 (m, 2H), 6.90 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.95 (s, 1H), 4.34 (dd, J = 13.6과 20.8 Hz, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.80 (m, 1H), 3.02 (m, 1H), 2.73 (m, 2H); MS: 581.1, 583.1[M+H]+.
단계8: 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(4-히드록시-3-니트로페닐)옥사졸린-4-온(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)-3-(4-hydroxy-3-nitrophenyl)oxazoline-4-one)
2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(4-메톡시-3-니트로페닐)옥사졸린-4-온(600 mg, 1.03 mmol)을 디클로로메탄(10 mL)에 용해시키고, -70 ℃까지 냉각시킨 후, 삼브롬화붕소(774 mg, 3.09 mmol)를 천천히 넣는다. 반응액을 실온까지 천천히 승온시키고, 1시간 동안 교반한다. TLC(석유 에테르:에틸아세테이트= 1:1)는 원료가 전부 소모되었음을 나타낸다. 반응액을 -70 ℃까지 냉각시키고, 메탄올(10 mL)로 퀀칭시키며, 고체 탄산수소나트륨(2 g)을 넣고, 반응 혼합물을 실온까지 천천히 승온시키며 실온에서 2시간 동안 교반한다. 여과하고, 여액을 농축 건조시킨다. 20 mL의 에틸아세테이트를 넣어 용액을 형성하고, 상기 용액은 포화 탄산수소나트륨 용액(5 mL)과 포화 식염수로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 여액을 농축 건조시켜 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(4-히드록시-3-니트로페닐)옥사졸린-4-온(600 mg, 1.03 mmol, 수율: 100 %)을 얻는다. MS: 567.2, 569.1[M+H]+.
단계9: 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(4-히드록시-3-아미노페닐)옥사졸린-4-온(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)-3-(4-hydroxy-3-aminophenyl)oxazoline-4-one)
2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(4-히드록시-3-니트로페닐)옥사졸린-4-온(600 mg, 1.03 mmol)을 메탄올(10 mL)에 용해시키고, 라니니켈(100 mg)을 넣으며, 수소 가스 볼로 30 ℃의 상압에서 수소화시킨다. 1시간 동안 반응시킨 후, 반응액을 여과하고, 에틸아세테이트로 필터 케이크를 세척하며, 여액을 스핀 건조시켜 조품을 얻고, 조품을 실리카겔 컬럼으로 정제하여 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-yl)-3-(4-히드록시-3-아미노페닐)옥사졸린-4-온(250 mg, 0.46 mmol, 수율: 45 %)을 얻는다. MS: 537.1, 539.1[M+H]+.
단계10: 5-(2-(2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-4-옥사졸린-3-일)에틸)벤조[d]옥사졸-2(3H)-온(5-(2-(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)-4-oxazoline-3-yl)ethyl)benzo[d]oxazole-2(3H)-one)
2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-yl)-3-(4-히드록시-3-아미노페닐)옥사졸린-4-온(250 mg, 0.46 mmol)과 N,N'-카르보닐디이미다졸(327 mg, 2.32 mmol)을 N,N-디메틸포름아미드(15 mL)에 용해시키고, 70 ℃ 하에서 하룻밤 교반한다. 반응 혼합물을 진공에서 농축 건조시킨 후, 제조 HPLC 정제하여 5-(2-(2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-4-옥사졸린-3-일)에틸)벤조[d]옥사졸-2(3H)-온(96.4 mg, 0.17 mmol, 수율: 40 %)을 얻는다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.43 (m, 1H), 8.72 (s, 1H), 7.91 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 7.73 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.65 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.31 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.02 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.79 (s, 1H), 6.76 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.96 (s, 1H), 4.26 (dd, J = 13.2和21.6 Hz, 2H), 3.73 (m, 1H), 2.94 (m, 1H), 2.70 (m, 2H); MS: 563.2, 565.1[M+H]+.
실시예18: 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(2-(2-카르보닐-2,3-디히드로벤조[d]티아졸-6-일)에틸)-4-카르보닐-옥사졸린(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)-3-(2-(2-carbonyl-2,3-dihydrobenzo[d]thiazole-6-yl)ethyl)-4-carbonyl-oxazoline)
Figure pct00061
단계1: 3-(4-아미노-3-요오드페닐)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-4-카르보닐-옥사졸린(3-(4-amino-3-iodophenyl)-2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)-4-carbonyl-oxazoline)
3-(4-아미노페닐)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1-히드로-피라졸-4-일)-4-카르보닐-옥사졸린(3-(4-aminophenyl)-2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1-hydro-pyrazole-4-yl)-4-carbonyl-oxazoline)(100 mg, 0.192 mmol)을 빙초산(5 mL)에 용해시키고, 실온에서 1 mL의 디클로로메탄에 용해된 염화요오드(iodine chloride)(37 mg, 0.23 mmol)를 적가하며, 실온에서 0.5시간 동안 교반한다. 반응액을 100 mL의 물로 희석하고, 에틸아세테이트(50 mL Х 2)로 두 번 추출한다. 합병한 유기상을 포화 식염수로 두 번 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 여액을 농축시키며, 조품을 실리카겔 컬럼(석유 에테르:에틸아세테이트= 5:1 - 1:1)으로 정제하여 갈색 고체 산물(100 mg, 수율: 81 %)을 얻는다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.79 (s, 1H), 7.64-7.58 (m, 6H), 7.27 (d, J = 8.8 Hz,1H), 7.16 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 6.80 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.53 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.36-4.27 (m, 2H), 3.97 (s, 2H), 3.82-3.75 (m, 1H), 2.95-2.88 (m, 1H), 2.62-2.59 (m, 2H); MS: 647.1[M+H]+.
단계2: 에틸(4-(2-(2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1-히드로-피라졸-4-일)-4-카르보닐옥사졸린-3-일)에틸)-2-요오드페닐)에틸카르바메이트(ethyl(4-(2-(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1-hydro-pyrazole-4-yl)-4-carbonyloxazoline-3-yl)ethyl)-2-iodophenyl)ethyl carbamate)
3-(4-아미노-3-요오드페닐)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1-히드로-피라졸-4-일)-4-카르보닐-옥사졸린(100 mg, 0.15 mmol), 탄산칼륨(212 mg, 1.54 mmol)을 아세톤(5 mL)에 용해시킨 후, 실온에서 에틸클로로포르메이트(ethyl chloroformate)(90 mg, 1.54 mmol)를 적가하고, 실온에서 2시간 동안 교반한다. 반응액을 100 mL의 물로 희석하고, 에틸아세테이트(50 mL Х 2)로 두 번 추출한다. 합병한 유기상을 포화 식염수로 두 번 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 여액을 농축시키며, 조품을 실리카겔 컬럼(석유 에테르:에틸아세테이트=1:1)으로 정제하여 갈색 고체 산물(90 mg, 수율: 81 %)을 얻는다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.86 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.63-7.58 (m, 6H), 7.40 (s, 1H), 7.15 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 6.98 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.79 (s, 1H), 5.84 (s, 1H), 4.38-4.28 (m, 2H), 3.80-3.74 (m, 1H), 2.98-2.93 (m, 1H), 2.69-2.65 (m, 2H); MS: 721.1[M+H]+.
단계3: 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1-히드로-피라졸-4-일)-3-(2-(2-카르보닐-2,3-디히드로벤조[d]티아졸-6-일)에틸)-4-카르보닐-옥사졸린(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1-hydro-pyrazole-4-yl)-3-(2-(2-carbonyl-2,3-dihydrobenzo[d]thiazole-6-yl)ethyl)-4-carbonyl-oxazoline)
100 mL의 환류 밀폐된 삼구 플라스크에 에틸(4-(2-(2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1-히드로-피라졸-4-일)-4-카르보닐옥사졸린-3-일)에틸)-2-요오드페닐)에틸카르바메이트(80 mg, 0.111 mmol), CuI(2.2 mg, 0.011 mmol), Na2S.9H2O(80 mg, 0.333 mmol)를 DMF(5 mL)에 용해시키고, 질소 가스 보호하에서 80 ℃까지 가열하고 하룻밤 교반하며, LC-MS는 원료의 소실 및 중간체의 형성을 나타낸다. 반응액을 실온까지 냉각시키고, 주사기를 통해 3 mL의 빙초산을 넣은 후, 질소 가스 보호하에서 130 ℃까지 가열하고, 3시간 동안 교반한다. 반응액을 실온까지 냉각시키고, 규조토를 넣어 여과하며, 여과 잔류물은 에틸아세테이트(50 mL)로 세척하고, 여액은 100 mL의 물로 한번 세척하며, 수상은 에틸아세테이트(50 mL)로 한번 추출하고, 합병한 유기상은 포화 식염수로 세 번 세척하며, 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 여액을 농축시키고, HPLC로 백색 고체 산물(4 mg, 수율: 6 %)을 얻는다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.77 (s, 1H), 7.95 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.78 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.70 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 7.34 (t, J = 8.8 Hz, 3H), 7.02- 6.95 (m, 2H), 6.09 (s, 1H), 4.36-4.28 (m, 2H), 3.79-3.75 (m, 1H), 3.07-3.00 (m, 1H), 2.77-2.68 (m, 2H); MS: 579.2 [M+H]+.
실시예19: 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(2-(2-옥소-2,3-디히드로벤조[d]티아졸-5-일)에틸)옥사졸린-4-온(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)-3-(2-(2-oxo-2,3-dihydrobenzo[d]thiazole-5-yl)ethyl)oxazoline-4-one)
Figure pct00062
단계1: O-(4-(2-(2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-4-옥사졸린-3-일)에틸)-2-니트로페닐)디메틸아미노티오카르복실산(O-(4-(2-(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)-4-oxazoline-3-yl)ethyl)-2-nitrophenyl)dimethylaminothiocarboxylic acid)
2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(4-히드록시-3-니트로페닐)옥사졸린-4-온(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)-3-(4-hydroxy-3-nitrophenyl)oxazoline-4-one)(800 mg, 1.45 mmol)을 무수 DMF(10 mL)에 용해시키고, 0 ℃에서 수소화나트륨(60 %, 70 mg, 1.75 mmol)을 넣으며, 30분 동안 교반하고, 질소 가스 보호하에서 디메틸아미노티오닐클로라이드(Dimethylaminothionyl chloride)(356 mg, 11.18 mmol)를 반응액에 천천히 적가하며, 실온에서 하룻밤 교반하고, 반응액을 얼음물에 넣으며, 에틸아세테이트로 추출한다. 에틸아세테이트상을 포화 식염수로 세 번 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 여액을 스핀 증발 건조시킨다. 조품을 실리카겔 컬럼으로 정제 분리하여 O-(4-(2-(2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-4-옥사졸린-3-일)에틸)-2-니트로페닐)디메틸아미노티오카르복실산(230 mg, 0.35 mmol, 수율: 24 %)을 얻는다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.93 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.70-7.56 (m, 6H), 7.36 (dd, J = 8.4,2.0, 1H), 7.21-7.08 (m, 3H), 5.89 (s, 1H), 4.39-4.28 (m, 2H), 3.86-3.76 (m, 1H), 3.47 (s, 3H), 3.40 (s, 3H), 3.03-2.96 (m, 1H), 2.82 (m, 2H); MS: 654.2, 656.2[M+H]+.
단계2: S-(4-(2-(2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-4-옥사졸린-3-일)에틸)-2-니트로페닐)디메틸아미노티오카르복실산(S-(4-(2-(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)-4-oxazoline-3-yl)ethyl)-2-nitrophenyl)dimethylaminothiocarboxylic acid)
실온에서 O-(4-(2-(2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-4-옥사졸린-3-일)에틸)-2-니트로페닐)디메틸아미노티오카르복실산(230 mg, 0.35 mmol)을 설포란(sulfolane)(2 mL)에 넣고, 질소 가스 보호하에서 150 ℃까지 승온시키며, 1시간 동안 반응시킨다. 반응액을 얼음물에 넣고, 에틸아세테이트로 추출한다. 에틸아세테이트상을 포화 식염수로 세 번 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 여액을 스핀 증발 건조시킨다. 조품을 실리카겔 컬럼으로 정제 분리하여 S-(4-(2-(2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-4-옥사졸린-3-일)에틸)-2-니트로페닐)디메틸아미노티오카르복실산(230 mg, 0.35 mmol, 수율: 100 %)을 얻는다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.95 (s, 1H), 7.66-7.52 (m, 8H), 7.27 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.15 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 5.79 (s, 1H), 4.39-4.25 (m, 2H), 3.82- 3.68 (m, 1H), 3.13 (s, 3H), 3.02 (s, 3H), 3.00-2.95 (m, 1H), 2.86-2.81 (m, 2H); MS: 654.2, 656.2[M+H]+.
단계3: S-(2-아미노-4-(2-(2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-yl)-4-옥사졸린-3-일)에틸)페닐)디메틸아미노티오카르복실산(S-(2-amino-4-(2-(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)-4-oxazoline-3-yl)ethyl)phenyl)dimethylaminothiocarboxylic acid)
S-(4-(2-(2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-4-옥사졸린-3-일)에틸)-2-니트로페닐)디메틸아미노티오카르복실산(230 mg, 0.35 mmol)을 에틸아세테이트(20 mL)에 용해시키고, 염화제1주석(stannous chloride)(665 mg, 3.5 mol)을 천천히 넣으며, 실온에서 하룻밤 교반한다. 에틸아세테이트(50 mL)르 넣어 반응액을 희석하고, 포화 탄산수소나트륨으로 pH를 알칼리성으로 조절한다. 반응 혼합물을 여과하고, 여액인 에틸아세테이트상을 포화 식염수로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 여액을 스핀 증발 건조시켜 S-(2-아미노-4-(2-(2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-yl)-4-옥사졸린-3-일)에틸)페닐)디메틸아미노티오카르복실산 조품(200 mg)을 얻고, 직접 다음 단계 반응에 사용된다. MS: 624.3, 626.2[M+H]+.
단계4: 3-(3-아미노-4-메르캅토페닐에틸)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸린-4-온(3-(3-amino-4-mercaptophenylethyl)-2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)oxazoline-4-one)
S-(2-아미노-4-(2-(2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-yl)-4-옥사졸린-3-일)에틸)페닐)디메틸아미노티오카르복실산 조품(200 mg)을 메탄올(20 mL)에 용해시키고, 수산화나트륨(2 N, 2 mL, 4 mol)을 천천히 넣은 후, 70 ℃까지 승온시켜 하룻밤 교반한다. 반응액을 실온까지 감온시킨 후, pH 7로 조절하고, 메탄올을 스핀 증발시켜 제거하며, 에틸아세테이트로 추출한다. 에틸아세테이트상을 포화 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 여액을 스핀 증발 건조시켜 3-(3-아미노-4-메르캅토페닐에틸)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸린-4-온 조품(180 mg)을 얻으며, 직접 다음 단계 반응에 사용된다.
단계5: 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(2-(2-옥소-2,3-디히드로벤조[d]티아졸-5-일)에틸)옥사졸린-4-온(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)-3-(2-(2-oxo-2,3-dihydrobenzo[d]thiazole-5-yl)ethyl)oxazoline-4-one)
3-(3-아미노-4-메르캅토페닐에틸)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸린-4-온 조품(180 mg)을 테트라히드로푸란(20 mL)에 용해시키고, N,N′'-카르보닐디이미다졸(105 mg, 0.648 mmol)을 넣으며, 70 ℃까지 승온시켜, 하룻밤 반응시키고, 반응액을 스핀 증발 건조시킨 후, HPLC로 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(2-(2-옥소-2,3-디히드로벤조[d]티아졸-5-일)에틸)옥사졸린-4-온(14.5 mg, 0.025 mmol)을 제조한다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.71 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 7.90 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 7.71 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.66-7.62 (m, 2H), 7.34-7.27 (m, 3H), 6.82-6.81 (m, 2H), 6.02 (s, 1H), 4.31-4.25 (m, 2H), 3.84-3.66 (m, 1H), 3.00-2.96 (m, 1H), 2.80-2.67 (m, 2H); MS: 579.2, 581.0 [M+H]+.
실시예20: 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(티오펜-3-일)-1H-피라졸-4-일)-3-(2-(2-옥소-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)옥사졸리딘-4-온(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(thiophen-3-yl)-1H-pyrazole-4-yl)-3-(2-(2-oxo-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazole-5-yl)ethyl)oxazolidine-4-one)
Figure pct00063
단계1: 4-(2-아미노에틸)아닐린(4-(2-aminoethyl)aniline)
2-(4-니트로페닐)에틸아민(5.0 g, 30 mmol), 라니니켈(500 mg)을 메탄올(50 mL)에 넣고, 1대기압의 수소 가스 하에서 하룻밤 교반한다. 반응 혼합물을 여과하고, 라니니켈을 메탄올(50 mL Х 4)로 세척하며, 여액을 스핀 건조시켜 4-(2-아미노에틸)아닐린(4.1 g, 30 mmol)을 얻고, 수율: 100 %이다.
단계2: N-(4-(2-아세틸아미노에틸)페닐)아세트아미드(N-(4-(2-acetylaminoethyl)phenyl)acetamide)
4-(2-아미노에틸)아닐린(4.1 g, 30 mmol)을 디클로로메탄(100 mL)에 용해시킨 후, 0 ℃까지 감온시키고, 아이스 배스 조건 하에서 아세트산 무수물(15.3 g, 150 mmol)을 용액에 적가한다. 아이스 배스를 제거하고, 실온에서 2시간 동안 반응시킨다. 디클로로메탄을 스핀 증발하여 제거하고, 농축액을 50 mL의 물에 넣으며, 30분 동안 교반하고, 여과하여 N-(4-(2-아세틸아미노에틸)페닐)아세트아미드 화합물(4.9 g, 22.3 mmol, 수율: 74 %)을 얻는다. MS: 221.2[M+H]+.
단계3: N-(4-아세틸아미노-3-니트로페네틸)아세트아미드(N-(4-acetylamino-3-nitrophenethyl)acetamide)
N-(4-(2-아세틸아미노에틸)페닐)아세트아미드(4.9 g, 22.3 mmol)를 농황산(30 mL)에 용해시키고, 아이스 배스로 0 ℃까지 감온시키며, 발연 질산(2.1 g, 33.3 mmol)을 반응액에 천천히 적가하고, 아이스 배스를 제거하며, 실온에서 1시간 동안 반응시킨다. 반응액을 병 벽에 따라 400 mL의 얼음물에 넣고, 15분 동안 교반한 후 여과하며, 필터 케이크를 50 mL의 물로 세척하고, 필터 케이크를 건조시켜 N-(4-아세틸아미노-3-니트로페네틸)아세트아미드 조품(5.2 g)을 얻으며, 직접 다음 단계 반응에 사용된다.
단계4: 4-(2-아미노에틸)-2-니트로아닐린(4-(2-aminoethyl)-2-nitroaniline)
N-(4-아세틸아미노-3-니트로페네틸)아세트아미드 조품(5.2 g)을 염산(6 M, 60 mL)에 넣은 후, 100 ℃까지 승온시켜 하룻밤 경과한다(16시간). 반응액을 스핀 증발 건조시키고, 포화 탄산수소나트륨을 넣으며, 에틸아세테이트로 추출한다. 에틸아세테이트상을 포화 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 여액을 스핀 증발시켜 4-(2-아미노에틸)-2-니트로아닐린 조품(1.5 g)을 얻으며, 직접 다음 단계 반응에 사용된다. MS: 182.0[M+H]+.
단계5: tert-부틸-4-아미노-3-니트로페닐카르바메이트(tert-butyl-4-amino-3-nitrophenyl carbamate)
4-(2-아미노에틸)-2-니트로아닐린 조품(1.5 g, 약 8.3 mmol)을 수산화나트륨(1 M, 50 mL)에 넣고, 교반 하에서 Boc2O(2.2 g, 10.1 mmol)를 넣으며, 실온에서 하룻밤 교반한다. 반응액을 희염산으로 pH를 7 ~ 8까지 조절하고, 에틸아세테이트로 추출한다. 에틸아세테이트상을 합병하고, 무수 Na2SO4으로 건조시키며, 여과하고, 여액을 스핀 증발시켜 조품을 얻는다. 실리카겔 컬럼으로 분리 정제하여(석유 에테르:에틸아세테이트= 20:1 ~ 5:1) tert-부틸-4-아미노-3-니트로페닐카르바메이트(1.8 g, 6.4 mmol)를 제조한다. MS: 304.3[M+Na]+.
단계6: tert-부틸3,4-디아미노페네틸tert-부틸카르바메이트(tert-butyl3,4-diaminophenethyl tert-butyl carbamate)
tert-부틸-4-아미노-3-니트로페닐카르바메이트(1.8 g, 6.4 mmol)를 메탄올(100 mL)에 용해시키고, Pd/C(0.36 g)를 넣으며, 수소 가스를 통과시키고, 30 ℃에서 16시간 동안 교반하며, 여과하고 농축시켜 tert-부틸3,4-디아미노페네틸tert-부틸카르바메이트(1.6 g, 6.4mmol, 수율: 100 %)를 얻는다. MS: 274.3[M+Na]+.
단계7: tert-부틸(2-(2-옥소-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)tert-부틸카르바메이트(tert-butyl(2-(2-oxo-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazole-5-yl)ethyl)tert-butyl carbamate)
tert-부틸3,4-디아미노페네틸카르바메이트(1.6 g, 6.4 mmol)를 아세토니트릴(30 mL)에 넣고, 교반 하에서 N,N′'-카르보닐디이미다졸(CDI)(1.2 g, 7.4 mmol)을 넣는다. 반응액을 60 ℃까지 승온시키고 3시간 동안 교반한다. 반응액을 스핀 건조시키고, 조품을 실리카겔 컬럼으로 정제하여 tert-부틸(2-(2-옥소-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)tert-부틸카르바메이트(1.3 g, 4.7 mmol, 수율: 73 %)를 얻는다.
단계8: 5-(2-아미노에틸)-1H-벤조[d]이미다졸-2(3H)-온염산염(5-(2-aminoethyl)-1H-benzo[d]imidazole-2(3H)-one hydrochloride)
tert-부틸(2-(2-옥소-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)tert-부틸카르바메이트(1.3 g, 4.7 mmol)를 메탄올(30 mL)에 넣고, 실온에서 6 M의 염산메탄올 용액(10 mL)을 교반하면서 적가한 후, 계속하여 30분 동안 교반한다. 반응액을 농축 건조시켜 5-(2-아미노에틸)-1H-벤조[d]이미다졸-2(3H)-온염산염(1.3 g)을 얻는다. MS: 178.3 [M+H]+.
단계9: 2-히드록시-N-(2-(2-옥소-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)아세트아미드(2-hydroxy-N-(2-(2-oxo-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazole-5-yl)ethyl)acetamide)
5-(2-아미노에틸)-1H-벤조[d]이미다졸-2(3H)-온염산염(1.3 g, 4.7mmol), 메틸히드록시아세테이트(8.5 g, 94.4 mmol)와 트리에틸아민(triethylamine)(1.4 g, 13.8 mmol)을 20 mL의 메탄올에 용해시키고 이틀 동안 가열 환류시킨다. 반응액을 실온까지 냉각시킨 후 스핀 증발 농축시켜, 조품을 실리카겔 컬럼으로 정제하여(석유 에테르:에틸아세테이트=1:2, 다음 디클로로메탄:메탄올=3:1) 2-히드록시-N-(2-(2-옥소-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)아세트아미드(2.0 g)를 얻는다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.54 (s, 2H), 10.50 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 6.83 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.76 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 3.77 (s, 2H), 3.28 (m, 2H), 2.70 (m, 2H); MS: 236.2[M+H]+.
단계10: 1-(4-브로모페닐)-2-(1-(티오펜-2-일)에틸리덴)히드라진(1-(4-bromophenyl)-2-(1-(thiophen-2-yl)ethylidene)hydrazine)
1-(티오펜-2-일)에타논(2.0 g, 15.87 mmol), 1-(4-브로모페닐)히드라진염산염(3.54 g, 15.87 mmol)과 아세트산칼륨(1.56 g, 15.87 mmol)을 에탄올(32 mL)에 넣고, 80 ℃ 하에서 하룻밤 교반한다. 반응 혼합물을 진공에서 농축 건조시킨 후, 물을 넣고, 에틸아세테이트로 추출하며, 에틸아세테이트상을 농축시켜 조품을 얻고, 최종적으로 혼합 용매(석유 에테르: 에틸아세테이트=50:1, 50 mL)로 세척하여 1-(4-브로모페닐)-2-(1-(티오펜-2-일)에틸리덴)히드라진(3.5 g, 11.9 mmol, 수율: 75 %)을 얻는다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 7.64 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.37-7.25 (m, 4H), 7.04 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 2.22 (s, 3H); MS: 295.2, 297.1[M+H]+.
단계11: 1-(4-브로모페닐)-3-(티오펜-2-일)-1H-피라졸-4-포름알데히드(1-(4-bromophenyl)-3-(thiophen-2-yl)-1H-pyrazole-4-formaldehyde)
아이스 배스 조건 하에서 염화포스포릴(3.78 g, 24.6 mmol)을 무수 DMF (3.3 mL)에 천천히 적가하고, 30분 동안 교반한 후, 질소 가스 보호하에서 1-(4-브로모페닐)-2-(1-(티오펜-2-일)에틸리덴)히드라진(3.3 g, 11.18 mmol)을 소량의 무수 DMF에 용해시키며, 반응액에 천천히 적가하고, 실온에서 1시간 동안 교반하며, 70 ℃까지 승온시키고, 계속하여 5시간 동안 반응시키며, 반응액을 얼음물에 넣고, 에틸아세테이트로 추출한다. 에틸아세테이트상을 포화 식염수로 세 번 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 여액을 스핀 증발 건조시켜 1-(4-브로모페닐)-3-(티오펜-2-일)-1H-피라졸-4-포름알데히드(3.5 g, 10.5 mmol, 수율: 94 %)를 얻는다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.04 (s, 1H), 9.38 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.96 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.78 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.72 (m, 2H); MS: 335.1[M+H]+.
단계12: 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(티오펜-2-일)-1H-피라졸-4-일)-3-(2-(2-옥소-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)옥사졸리딘-4-온(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(thiophen-2-yl)-1H-pyrazole-4-yl)-3-(2-(2-oxo-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazole-5-yl)ethyl)oxazolidine-4-one)
1-(4-브로모페닐)-3-(티오펜-2-일)-1H-피라졸-4-포름알데히드(500 mg, 1.5 mmol), 2-히드록시-N-(2-(2-옥소-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)아세트아미드(500 mg, 1.5 mmol), p-톨루엔설폰산 일 수화물(366 mg, 2.1 mmol)을 100 mL의 톨루엔과 N-메틸피롤리돈(N-methylpyrrolidone)(10 mL)에 용해시키고 160 ℃까지 가열하며, 물 분리기로 물을 하룻밤 분리한다. 반응액을 스핀 증발 농축시킨 후, 제조 HPLC로 정제하여 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(티오펜-2-일)-1H-피라졸-4-일)-3-(2-(2-옥소-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)옥사졸리딘-4-온(3.6 mg)을 얻는다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.46 (m, 2H), 8.68 (s, 1H), 7.89 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.72-7.65 (m, 4H), 7.42 (q, J = 2.0 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.64-6.61 (m, 2H), 4.33-4.21 (m, 2H), 3.69-3.67 (m, 1H), 2.96-2.93 (m, 1H), 2.71-2.59 (m, 2H); MS: 550.1, 552.0 [M+H]+.
실시예21: 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(푸란-3-일)-1H-피라졸-4-일)-3-(2-(2-옥소-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)옥사졸리딘-4-온(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(furan-3-yl)-1H-pyrazole-4-yl)-3-(2-(2-oxo-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazole--5-yl)ethyl)oxazolidine-4-one)
Figure pct00064
단계1: 1-(4-브로모페닐)-2-(1-(푸란-3-일)에틸리덴)히드라진(1-(4-bromophenyl)-2-(1-(furan-3-yl)ethylidene)hydrazine)
1-(푸란-3-일)에타논(4.2 g, 38.2 mmol), 1-(4-브로모페닐)히드라진염산염(8.5 g, 38.2 mmol)과 아세트산칼륨(3.7 g, 38.2 mmol)을 에탄올(50 mL)에 넣고, 80 ℃ 하에서 하룻밤 교반한다. 반응 혼합물을 진공에서 농축 건조시킨 후, 물을 넣고, 에틸아세테이트로 추출하며, 에틸아세테이트상을 농축시켜 조품을 얻고, 혼합 용매(석유 에테르:에틸아세테이트=50:1, 50 mL)로 세척하여, 1-(4-브로모페닐)-2-(1-(푸란-3-일)에틸리덴)히드라진(3.8 g, 13.7 mmol, 수율: 36 %)을 얻는다. MS: 279.2, 281.1[M+H]+.
단계2: 1-(4-브로모페닐)-3-(푸란-3-일)-1H-피라졸-4-포름알데히드(1-(4-bromophenyl)-3-(furan-3-yl)-1H-pyrazole-4-formaldehyde)
아이스 배스 조건 하에서 염화포스포릴(1.14 g, 7.46 mmol)을 무수 DMF(2 mL)에 천천히 적가하고, 30분 동안 교반한 후, 질소 가스 보호하에서 1-(4-브로모페닐)-2-(1-(푸란-3-일)에틸리덴)히드라진(1.0 g, 3.39 mmol)을 소량의 무수 DMF에 용해시키며, 반응액에 천천히 적가하고, 실온에서 1시간 동안 교반하며, 70 ℃까지 승온시키고, 계속하여 5시간 동안 반응시키며, 반응액을 얼음물에 넣고, 에틸아세테이트로 추출한다. 에틸아세테이트상을 포화 식염수 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 여액을 스핀 증발 건조시킨다. 조품을 혼합 용매(에틸아세테이트:석유 에테르=50:1, 20 mL)로 세척하고, 여과하여 1-(4-브로모페닐)-3-(푸란-3-일)-1H-피라졸-4-포름알데히드(1.0 g, 10.5 mmol, 수율: 90 %)를 얻는다. MS: 317, 319.1[M+H]+.
단계3: 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(푸란-3-일)-1H-피라졸-4-일)-3-(2-(2-옥소-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)옥사졸리딘-4-온(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(furan-3-yl)-1H-pyrazole-4-yl)-3-(2-(2-oxo-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazole-5-yl)ethyl)oxazolidine-4-one)
1-(4-브로모페닐)-3-(푸란-3-일)-1H-피라졸-4-포름알데히드(500 mg, 1.58 mmol), 2-히드록시-N-(2-(2-옥소-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)아세트아미드(500 mg, 1.5 mmol), p-톨루엔설폰산 일 수화물(366 mg, 2.1 mmol)을 100 mL의 톨루엔과 N-메틸피롤리돈(10 mL)에 용해시키고, 160 ℃까지 가열하며, 물 분리기로 물을 하룻밤 분리한다. 반응액을 스핀 증발 농축시킨 후, 제조 HPLC로 정제하여 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(푸란-3-일)-1H-피라졸-4-일)-3-(2-(2-옥소-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)옥사졸리딘-4-온(7.2 mg, 수율: 1 %)을 얻는다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.47 (s, 2H), 8.68 (s, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.86 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.79 (s, 1H), 7.71 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.80 (s, 1H), 6.76 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.64-6.62 (m, 2H), 6.17 (s, 1H), 4.33 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 4.23 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.68-3.65 (m, 1H), 2.96-2.93 (m, 1H), 2.71-2.60 (m, 2H); MS: 534,536.2 [M+H]+.
2-(1-(4-브로모페닐)-3-(푸란-3-일)-1H-피라졸-4-일)-3-(2-(2-옥소-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)옥사졸리딘-4-온(20 g)을 SFC(크로마토그래피 컬럼: OJ-H; 크로마토그래피 컬럼 크기: 0.46 cm I.D. Х 15 cm L; 주입량: 2.0 μl; 이동상: HEP/EtOH = 60/40 (V/V); 유속: 0.5 mL/min; 파장: UV 254 nm; 온도: 25 ℃)를 거쳐 키랄 분해시켜 두 개의 광학 이성질체를 얻는다.
(S)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(푸란-3-일)-1H-피라졸-4-일)-3-(2-(2-옥소-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)옥사졸리딘-4-온은 백색 고체이고, 8.63 g이며, 수율은 43.2 %이다. tR 1.766분, [α]D -43.94° (c 0.5007 g/100 mL, 21.4 ℃); 순도: 99.64 %, ee: 100.0 %이다.
(R)-2-(1-(4-브로모페닐)-3-(푸란-3-일)-1H-피라졸-4-일)-3-(2-(2-옥소-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)옥사졸리딘-4-온은 백색 고체이고, 8.26 g이며, 수율은 41.3 %이다. tR 3.724분, [α]D +47.00° (c 0.4979 g/100 mL, 21.3 ℃); 순도: 100.00 %, ee: 99.03 %이다.
실시예22: 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(푸란-2-일)-1H-피라졸-4-일)-3-(2-(2-옥소-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)옥사졸리딘-4-온(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(furan-2-yl)-1H-pyrazole-4-yl)-3-(2-(2-oxo-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazole-5-yl)ethyl)oxazolidine-4-one)
Figure pct00065
단계1: (4-브로모페닐)-2-(1-(푸란-2-일)에틸리덴)히드라진((4-bromophenyl)-2-(1-(furan-2-yl)ethylidene)hydrazine)
1-(푸란-2-일)에타논(100 g, 0.91 mol)과 1-(4-브로모페닐)히드라진염산염(162 g, 0.87 mol)을 톨루엔(1 L)에 용해시키고, 36 %의 염산(60방울)을 넣으며, 물 분리기를 장착한다. 150 ℃까지 가열하고, 2시간 동안 교반 반응시키며, 실온까지 냉각시킨다. 반응액에 디클로로메탄을 넣어 산물을 용해시키고 여과하여 적흑색의 여액을 얻으며, 여액을 스핀 건조시키고, 조품을 실리카겔 컬럼으로 분리 정제하여(석유 에테르:디클로로메탄=1:1) 황색 고체를 얻는다. 석유 에테르를 넣어 20분 동안 교반한 후, 여과하여 순수한 황색 고체 산물(68.0 g, 수율: 27 %)을 얻는다.
단계2: 1-(4-브로모페닐)-3-(푸란-2-일)-1H-피라졸-4-포름알데히드
아이스 배스 조건 하에서, 무수 DMF(60 mL)에 POCl3(12.1 g, 78.85 mmol)을 천천히 넣고, 15분 동안 교반한 후 실온까지 천천히 승온시키며, 계속하여 30분 동안 교반하고, (4-브로모페닐)-2-(1-(푸란-2-일)에틸리덴)히드라진(10.0 g, 35.84 mmol)을 반응액에 넣어, 실온에서 30분 동안 교반하며, 70 ℃까지 천천히 승온시키고, 계속하여 3시간 동안 교반한다. 반응액을 얼음물에 천천히 넣어 퀀칭시키고, 0 ℃에서 30분 동안 교반하고, 여과한다. 얻어진 고체에 소량의 에탄올과 디클로로메탄을 넣어 용해시킨 후 스핀 건조시킨다. 조품을 실리카겔 컬럼으로 분리 정제하여 황색 고체 산물(10.5 g, 수율: 92 %)을 얻는다.
단계3: 3-(3-니트로-4-tert-부틸아미노페네틸)-2-(3-(푸란-2-일))-1-(4-브로모페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸리딘-4-온(3-(3-nitro-4-tert-butyraminophenethyl)-2-(3-(furan-2-yl))-1-(4-bromophenyl)-1H-pyrazole-4-oxazolidin-4-one)
질소 가스 보호하에서, 2-히드록시-N-(3-니트로-4-tert-부틸아미노페네틸)아세트아미드(4.3 g, 13.31 mmol)와 1-(4-브로모페닐)-3-(푸란-2-일)-1H-피라졸-4-포름알데히드(4.22 g, 13.31 mmol), TsOH(506 mg, 2.66 mmol)를 톨루엔(100 mL)에 용해시키고, 물 분리기를 장착한다. 150 ℃까지 천천히 승온시켜 하룻밤 환류시킨다. 반응액에 에틸아세테이트(100 mL)를 넣고, 포화 탄산수소나트륨(100 mL)과 식염수로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 여액을 감압 농축 건조시켜, 조품을 실리카겔 컬럼으로 분리 정제하여(석유 에테르:에틸아세테이트=5:1) 황색 오일상 산물(1.8 g, 수율: 22 %)을 얻는다.
단계4: 3-(3-니트로-4-아미노페네틸)-2-(3-(푸란-2-일))-1-(4-브로모페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸리딘-4-온(3-(3-nitro-4-aminophenethyl)-2-(3-(furan-2-yl))-1-(4-bromophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)oxazolidin-4-one)
질소 가스 보호하에서, 3-(3-니트로-4-tert-부틸아미노페네틸)-2-(3-(푸란-2-일))-1-(4-브로모페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸리딘-4-온(1.42 g, 2.28 mmol)과 1 N의 NaOH(15 mL, 14.27 mmol)를 메탄올(50 mL)에 용해시킨다. 70 ℃까지 천천히 승온시켜 2시간 동안 환류시킨다. 반응액에 에틸아세테이트(100 mL)를 넣고, 물(100 mL)과 포화 식염수로 두 번 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 여액을 감압 농축시키고, 스핀 건조시키며, 실리카겔을 넣어 혼합하고, 조품을 실리카겔 컬럼으로 분리 정제하여(석유 에테르:에틸아세테이트= 2:1) 황색 오일상 산물(720 mg, 수율: 60 %)을 얻는다.
단계5: 3-(3,4-디아미노페네틸)-2-(3-(푸란-2-일))-1-(4-브로모페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸리딘-4-온(3-(3,4-diaminophenethyl)-2-(3-(furan-2-yl))-1-(4-bromophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)oxazolidine-4-one)
질소 가스 보호하에서, 3-(3-니트로-4-아미노페네틸)-2-(3-(푸란-2-일))-1-(4-브로모페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸리딘-4-온(500 mg, 0.93 mmol)과 환원 철분말(260 mg, 4.65 mmol) 및 염화암모늄(497 mg, 9.3 mmol)을 에탄올과 물(2:1, 30 mL)에 용해시킨다. 85 ℃까지 천천히 승온시켜, 1.5시간 동안 환류시킨다. 반응액에 디클로로메탄(50 mL)을 넣고, 여과하여 철분말을 제거한다. 스핀 증발시켜 용매인 에탄올을 제거한 후, 디클로로메탄(50 mL)을 넣고, 물(50 mL)과 포화 식염수로 한번 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 여액을 감압 농축 건조시켜 조품(400 mg)을 얻고, 직접 다음 단계 반응에 사용된다.
단계6: 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(푸란-2-일)-1H-피라졸-4-일)-3-(2-(2-옥소-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)에틸)옥사졸리딘-4-온(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(furan-2-yl)-1H-pyrazole-4-yl)-3-(2-(2-oxo-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazole-5-yl)ethyl)oxazolidine-4-one)
질소 가스 보호하에서, 3-(3,4-디아미노페네틸)-2-(3-(푸란-2-일))-1-(4-브로모페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸리딘-4-온(400 mg, 0.8 mmol)과 CDI(400 mg, 2.5 mmol)를 무수 DMF(6 mL)에 용해시키고, 80 ℃에서 하룻밤 교반한다. 반응액을 에틸아세테이트(2 Х 60 mL)로 추출하고, 유기상을 물(100 mL)과 포화 식염수(150 mL)로 두 번 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 여액을 감압 농축 건조시킨다. 실리카겔을 넣어 혼합하고, 조품을 실리카겔 컬럼으로 분리 정제하여(석유 에테르:에틸아세테이트=2:1) 담황색 고체 산물(198 mg, 수율: 48 %)을 얻는다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.47 (s, 2H), 8.75 (s, 1H), 7.87 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.78 (s, 1H), 7.73 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.80-6.76 (m, 2H), 6.65-6.63 (m, 3H), 6.31 (s, 1H), 4.34 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 4.23 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 3.76-3.64 (m, 1H), 2.98-2.94 (m, 1H), 2.76-2.72 (m, 1H), 2.64-2.61 (m, 1H); MS: 534[M+1]+.
실시예23: (5-(2-(2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸린-4-온-3-일)에틸)-1H-벤조[d]이미다졸-2-일)메틸카르바메이트((5-(2-(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)oxazoline-4-one-3-yl)ethyl)-1H-benzo[d]imidazole-2-yl)methyl carbamate)
Figure pct00066
단계1: 2-메틸-N,N’-디메톡시카르보닐메르캅토우레아(2-methyl-N,N'-dimethoxy carbonyl mercapto urea)
2-메틸-2-메르캅토우레아설페이트(2-methyl-2-mercapto urea sulfate)(1.6 g, 5.75 mmol)를 15 mL의 물에 현탁시키고, 0 ℃까지 냉각시킨다. 메틸클로로포르메이트(methyl chloroformate)(2.5 g, 26.45 mmol)를 넣고, 0 ℃에서 5분 동안 교반한다. 25 %의 NaOH 수용액으로 반응액의 pH를 9 정도로 유지하고, 5시간 동안 교반하며, 대량의 백색 고체가 석출된다. 여과하고, 필터 케이크를 물로 세척하여, 2-메틸-N,N’-디메톡시카르보닐메르캅토우레아(1.1 g, 수율: 93 %)를 얻는다.
단계2: (5-(2-(2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)옥사졸린-4-온-3-일)에틸)-1H-벤조[d]이미다졸-2-일)메틸카르바메이트((5-(2-(2-(1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)-1H-pyrazole-4-yl)oxazoline-4-one-3-yl)ethyl)-1H-benzo[d]imidazole-2-yl)methyl carbamate)
둥근밑 플라스크에 2-메틸-N,N’-디메톡시카르보닐메르캅토우레아(42 mg, 0.21 mmol)와 2-(1-(4-브로모페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-4-일)-3-(3,4-디아미노페네틸)옥사졸린-4-온(100 mg, 0.19 mmol)을 넣고, HOAc(10 mL)를 넣어 질소 가스를 치환한다. 반응액을 80 ℃까지 가열하고 1시간 동안 반응시킨다. 용매를 스핀 증발시켜 제거한 후, 조품을 메탄올로 세척하여 백색 고체 산물(65 mg, 수율: 56 %)을 얻는다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.48 (br s, 2H), 8.64 (s, 1H), 7.86 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.70 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.61-7.58 (m, 2H), 7.27-7.20 (m, 3H), 7.09 (s, 1H), 6.77 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.99 (s, 1H), 4.29-4.21 (m, 2H), 3.74-3.70 (m, 4H), 2.98-2.93 (m, 1H), 2.78-2.68 (m, 2H); MS: 619[M+H]+.
실시예24: 체외 항 HBV 활성 실험
화합물 희석: 체외 항 HBV 활성 실험에서 사용되는 모든 화합물의 출발 농도는 모두 1 μM이고, 3배 희석하며, 8개의 농도이고; 세포 독성 실험에서 사용되는 모든 화합물의 출발 농도는 모두 100 μM이며, 3배 희석하고, 8개의 농도이며; DMSO로 화합물의 모액을 희석한다. 대조 화합물은 라미부딘이고, 이가 체외 항 HBV 활성 실험에서의 출발 농도는 모두 100 nM이며, 세포 독성 실험에서의 출발 농도는 100 μM이고, 3배 희석하며, 8개의 농도이다.
체외 항 HBV 활성 실험: HepG2.2.15 세포(4Х104 세포/웰)를 96웰 플레이트에 접종하고, 37 ℃ 및 5 %의 CO2에서 하룻밤 배양한다. 다음날, 상이한 농도의 화합물이 함유된 신선한 배양액을 배양웰에 넣는다. 5일째에, 배양웰의 오래된 배양액을 흡입 제거하고, 상이한 농도의 화합물이 함유된 신선한 배양액을 넣는다. 8일째에, 배양웰의 상등액을 수집하여, 상등액의 HBV DNA를 추출하는데 사용된다. qPCR 실험으로 HepG2.2.15 상등액의 HBV DNA 함량을 검출한다.
데이터를 분석하고 억제 백분율을 계산한다. 다음과 같은 공식을 사용하여 억제 백분율을 계산한다.
억제 % = [(DMSO 대조의 HBV양 - 샘플의 HBV양) / DMSO 대조의 HBV양] Х 100%.
상기 시험 방법을 사용하여, 본 발명의 부분 화합물의 구조 및 대응되는 항 HBV 활성은 하기 표와 같다.
화합물 구조식 EC 50 (nM)
실시예1
Figure pct00067
 50.29
실시예1
중간체
Figure pct00068
 11.77
실시예2
Figure pct00069
 68.81
실시예3라세미체
Figure pct00070
 31.18
실시예3R이성질체
Figure pct00071
 7.68
실시예3S이성질체
Figure pct00072
 > 1000
실시예4
Figure pct00073
 > 1000
실시예5
Figure pct00074
 45.68
실시예6
Figure pct00075
 N/A
실시예7
Figure pct00076
 67.50
실시예8라세미체
Figure pct00077
 35.45
실시예8R이성질체
Figure pct00078
 15.54
실시예8S이성질체
Figure pct00079
 > 1000
실시예9
Figure pct00080
 233.80
실시예10
Figure pct00081
 134.50
실시예11
Figure pct00082
 101.30
실시예12
Figure pct00083
 223.00
실시예13라세미체
Figure pct00084
 21.96
실시예13R이성질체
Figure pct00085
 14.40
실시예13S이성질체
Figure pct00086
 > 1000
실시예14
Figure pct00087
 > 1000
실시예15라세미체
Figure pct00088
 N/A
실시예15R이성질체
Figure pct00089
 44.46
실시예15S이성질체
Figure pct00090
 > 1000
실시예16
Figure pct00091
 80.32
실시예17
Figure pct00092
 150.50
실시예18
Figure pct00093
 60.35
실시예19
Figure pct00094
 162.00
실시예20
Figure pct00095
 20.94
실시예21라세미체
Figure pct00096
 30.58
실시예21R이성질체
Figure pct00097
 10.97
실시예21S이성질체
Figure pct00098
 > 1000
실시예22
Figure pct00099
 85.31
실시예23
Figure pct00100
 126.80
실시예25: 체외 항 상이한 유전자형 HBV 균주 활성 실험
일시적인 형질 감염 세포 모델을 사용하여 화합물의 체외 항 상이한 유전자형 HBV 균주 활성을 시험한다. 상이한 HBV 유전자형 균주에 의해 형질 감염된 HepG2 세포(4Х104 세포/웰)를 96웰 플레이트에 접종하고, 37 ℃ 및 5 %의 CO2에서 하룻밤 배양한다. 다음날, 상이한 농도의 화합물이 함유된 신선한 배양액을 배양웰에 넣는다. 5일째에, 배양웰의 오래된 배양액을 흡입 제거하고, 상이한 농도의 화합물이 함유된 신선한 배양액을 넣는다. 8일째에, 배양웰의 상등액을 수집하여, 상등액의 HBV DNA를 추출하는 데 사용된다. qPCR 실험으로 HepG2 상등액의 HBV DNA 함량을 검출한다. 실험 결과는 하기 표와 같다(EC50 nM).
Figure pct00101
실시예26: 체외 항 뉴클레오시드 약물 HBV 내성 균주 활성 실험
일시적인 형질 감염 세포 모델을 사용하여 화합물의 체외 항 뉴클레오시드 약물 HBV 내성 균주 활성을 시험한다. 뉴클레오시드 약물 HBV 내성 균주에 의해 형질 감염된 HepG2 세포(4Х104 세포/웰)를 96웰 플레이트에 접종하고, 37 ℃ 및 5 %의 CO2에서 하룻밤 배양한다. 다음날, 상이한 농도의 화합물이 함유된 신선한 배양액을 배양웰에 넣는다. 5일째에, 배양웰의 오래된 배양액을 흡입 제거하고, 상이한 농도의 화합물이 함유된 신선한 배양액을 넣는다. 8일째에, 배양웰의 상등액을 수집하여, 상등액의 HBV DNA를 추출하는 데 사용된다. qPCR 실험으로 HepG2 상등액의 HBV DNA 함량을 검출한다. 실험 결과는 하기 표와 같다(EC50 nM).
Figure pct00102
실시예27: 약동학 측정
본 출원의 실시예3의 화합물(라세미체)이 래트에서의 약동학을 측정한다.
측정 방법과 조건:
Sprague Dawley 래트에게 시험 화합물을 단일 정맥(IV)과 경구(PO) 투여하고, 상이한 시점에서 혈액 샘플을 수집하며, LC/MS/MS로 시험 물질을 투여한 후 래트 혈장의 시험 물질의 농도를 측정하고 관련된 파라미터를 계산한다.
동물 채혈 시점은: 투여 전, 투여 후 5분, 15분, 30분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 8시간과 24시간이다. 각 동물은 경정맥 천자 또는 기타 적합한 정맥당 약 0.3 mL의 혈액을 채취하고, 헤파린나트륨(Heparin Sodium)으로 항 응고시킨다. 혈액 샘플을 채취하고 얼음에 놓으며, 혈장을 원심 분리하고(원심 분리 조건: 8000회/분, 6분, 4 ℃), 혈장 샘플을 분석 전에 보관할 경우 -70 ℃의 냉장고에 보관한다.
50 μL의 샘플을 취하여 1.5 mL의 원심 분리관에 넣고, 250 μL의 내부 표준 용액을 넣으며, 60초 동안 와류시킨 후 5분 동안 원심 분리시키고(14000회/분), 200 μL의 상등액을 취하여 96웰 샘플 플레이트에서 분석을 진행한다.
질량 분석기: API 4000, 미국응용생물시스템회사, 전자 분사 이온 소스(ESI), 직렬 사중극 질량 분석기.
질량 분석 조건: 이온 소스: 전자 분사 이온 소스(ESI); 보조 가스(Gas1): 60 psi; 보조 가스(Gas2): 60 psi; 에어 커튼 가스(CUR): 14 psi; 충돌 가스(CAD): 6; 이온 소스 전압(IS): 5500V; 이온 소스 온도(TEM): 550 ℃
액상 조건: 크로마토그래피 컬럼: Thermo AQUASIL C18 (50Х2.1mm); 크로마토그래피 이동상: A는 0.1 %의 포름산 수용액, B는 0.1 %의 포름산메탄올 용액(A : B = 80 % : 20 % - 10 % : 90 %); 유속: 500 μL/min; 주입량: 1 μL.
약물의 혈중 농도 데이터에 따라, 약동학 계산 소프트웨어 WinNonlin5.2 비구획형 모델을 사용하여 시험 화합물의 약동학 파라미터를 각각 계산한다.
결과는 하기와 같다.
화합물 실시예3, 라세미체
투여 경로 IV PO
t1/2 (h) 3.52 2.07
Tmax (h) 0.083 0.83
Cmax (ng/mL) 5459.25 201.02
AUC(0-∞) (ng/mL*h) 3884.62 773.14
Vz (L/kg) 6.22 3.58
CLz (L/hr/kg) 1.31
F (%) 18.55
이 밖에, 본 출원의 실시예3의 화합물(R이성질체)이 마우스에서의 약동학을 측정한다.
측정 방법과 조건:
암컷 BALB/c 마우스에게 피시험 화합물을 단일 피하 투여하고, 상이한 시점에서 혈액 샘플을 수집하며, LC/MS/MS로 시험 물질을 투여한 후 래트 혈장의 시험 물질의 농도를 측정하고 관련된 파라미터를 계산한다.
동물 채혈 시점은: 투여 전, 투여 후 5분, 15분, 30분, 1시간, 2시간, 4시간, 8시간과 24시간이다.
질량 분석기: Triple Quad 5500. 질량 분석 조건: SRM 검출
액상 조건: 크로마토그래피 컬럼: XSELECT CSHTM XP C18 (2.1 Х 50 mm, 2.5 μm); 크로마토그래피 이동상: 이동상A: 0.025 %의 FA & 1 mM의 NH4Oac의 물/CAN 용액(v:v, 95:5), 이동상B: 0.025 %의 FA & 1 mM의 NH4Oac의 ACN/수용액(v:v, 95:5) (A : B = 65 % : 35 % ~ 10 % : 90 %); 유속: 0.6 mL/min; 컬럼 온도: 50 ℃.
약물의 혈중 농도 데이터에 따라, 약동학 계산 소프트웨어 WinNonlin5.2 비구획형 모델을 사용하여 시험 화합물의 약동학 파라미터를 각각 계산한다.
결과는 하기와 같다.
PK 파라미터 실시예3, R이성질체
Cmax (ng/mL) 643
Tmax (h) 1.33
T1/2 (h) 1.19
AUC0-inf (ng.h/mL) 2079
MRT0-inf (h) 2.40
실시예28: 체내 약효 측정
측정 방법과 조건:
HBV DNA 꼬리 정맥 고압 주사 및 투여 방법:
마우스 꼬리 정맥에 HBV 플라스미드 DNA 용액을 고압 주사한다: 플라스미드 DNA를 주사하기 전에 생리 식염수(10 μg/1.4 ml, 10 μg/1.5 ml)에 미리 용해시킨다. 사용할 때까지 4 ℃에서 보관한다. 5초 이내에 꼬리 정맥에 마우스 체중의 8 %인 플라스미드 DNA 용액을 주사한다. 주사 체적이 1.4 ml보다 작거나 같으면 10 μg/1.4 ml의 플라스미드 용액을 사용하고; 주사 체적이 1.5 ml보다 크거나 같으면 10 μg/1.5 ml의 플라스미드 용액을 사용한다.
1 ~ 7일째에, 마우스에게 피시험 화합물 또는 용매를 연속적으로 7일 동안 복강 주사한다. 1일, 3일, 5일에 턱밑 정맥에서 채혈하고, 헤파린 나트륨으로 항 응고시키며, 7000 Х g, 4 ℃에서 10분 동안 원심 분리하여 혈장을 제조한다. 혈장을 두 부분으로 나누고, 하나는 생물부 체외 항 감염 그룹에 보내에 HBV DNA 검출을 진행하고, 다른 하나는 사용 준비하기 위한 것이다.
7일째에, 모든 마우스를 CO2로 안락사시킨 후, 심장에서 채혈하여 혈장을 제조하고, 간 조직을 수집한다. 간 조직을 세 부분으로 나누어, 왼쪽 두 개의 엽을 수집하여, 액체 질소로 급속 동결시키고, 요우밍캉더생물부 체외 항 감염 그룹에서 HBV DNA를 측정할 때까지 -80 ℃로 옮겨 보관하며; 나머지 간 조직은 드라이 아이스로 동결시키고, -80 ℃로 옮겨 보관하여 사용 준비한다.
샘플 분석:
정량 PCR로 마우스 혈장의 HBV DNA의 함량을 검출한다.
QIAamp 96 DNA Blood Kit 설명서를 참조하여, 마우스 혈장의 DNA를 추출한다.
정량 PCR로 HBV DNA의 함량을 검출한다: 주사한 HBV 플라스미드 DNA로부터의 가능한 간섭을 제거하기 위하여, 두 개의 그룹의 프라이머와 프로브를 동시에 사용하여 측정한다. 하나의 그룹의 프라이머와 프로브는 HBV DNA 서열(HBV 프라이머)을 인식하고, HBV 플라스미드 DNA와 복제된 HBV DNA를 동시에 검출할 수 있다. 다른 하나의 그룹의 프라이머와 프로브는 pAAV2 담체 서열(pAAV2 프라이머)을 인식하고, HBV 플라스미드 DNA만 검출할 수 있다.
HBV DNA 함량= HBV 프라이머에 의해 검출된 DNA 함량 - pAAV2 프라이머에 의해 검출된 DNA 함량
결과는 하기와 같다:
피시험 화합물(실시예3화합물, R이성질체)의 투여량은 25 mpk이다. 마우스 혈장의 HBV DNA 함량은 1일, 3일째에 모두 현저히 감소되고, 각각 0.55 log 및 1.84 log 감소되며, 통계학적으로 차이가 있다.

Claims (13)

  1. 식I 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 거울상 이성질체 또는 호변 이성질체에 있어서,
    Figure pct00103

    I
    상기 식I에서,
    R1, R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 선택적으로 치환된 알킬기, 아미노기 또는 히드록시기로부터 선택되고;
    R4와 R5 중 하나는 아미노기이며, 다른 하나는 수소, 할로겐, 아미노기 또는 히드록시기로부터 선택되거나; 또는
    R4와 R5는 이들에 연결된 탄소 원자와 함께 선택적으로 치환된，적어도 하나의 질소 원자를 함유하는 5원 헤테로고리기 또는 헤테로아릴기를 형성하며, 상기 헤테로고리기의 -CH2-는 선택적으로 -C(=O)-, -C(=S)- 또는 -C(=NH)-에 의해 대체되고;
    R6은 중수소, 할로겐, 아미노기 또는 히드록시기로부터 선택되며;
    n은 0, 1 또는 2이고;
    Q는 선택적으로 하나 또는 복수개의 할로겐에 의해 치환된 아릴기 또는 헤테로아릴기인 식I 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 거울상 이성질체 또는 호변 이성질체.
  2. 제1항에 있어서,
    키랄 탄소는 R배열이고, 구조는 식I-R에 도시된 바와 같은 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 거울상 이성질체 또는 호변 이성질체.
    Figure pct00104

    I-R
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    R1, R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소 또는 할로겐이고;
    R4 및 R5는 이들에 연결된 탄소 원자와 함께 선택적으로 치환된，적어도 하나의 질소 원자를 함유하는 5원 헤테로고리기 또는 헤테로아릴기를 형성하며, 상기 헤테로고리기의 -CH2-는 선택적으로 -C(=O)-, -C(=S)- 또는 -C(=NH)-에 의해 대체되고;
    R6은 중수소 또는 할로겐이며;
    Q는 선택적으로 하나 또는 복수개의 할로겐에 의해 치환된 아릴기 또는 헤테로아릴기이고, 상기 아릴기는 페닐기이며, 상기 헤테로아릴기는 푸릴기(furyl group), 피롤릴기(pyrrolyl group) 또는 티에닐기(thienyl group)로부터 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 거울상 이성질체 또는 호변 이성질체.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    Q는 p-플루오로페닐기(P-fluorophenyl group) 또는 티에닐기 또는 푸릴기인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 거울상 이성질체 또는 호변 이성질체.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    식I과 식I-R 중의 구조
    Figure pct00105
    는,
    Figure pct00106
    ,
    Figure pct00107
    ,
    Figure pct00108
    ,
    Figure pct00109
    ,
    Figure pct00110
    ,
    Figure pct00111
    ,
    Figure pct00112
    ,
    Figure pct00113
    ,
    Figure pct00114
    ,
    Figure pct00115
    ,
    Figure pct00116
    ,
    Figure pct00117
    로부터 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 거울상 이성질체 또는 호변 이성질체.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 화합물은,
    Figure pct00118

    Figure pct00119

    Figure pct00120
    로부터 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 거울상 이성질체 또는 호변 이성질체.
  7. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    R1, R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소, C1-C3알킬기, 할로겐으로부터 선택되고;
    R4와 R5 중 하나는 아미노기이며, 다른 하나는 수소, 할로겐, 아미노기로부터 선택되며;
    R6은 할로겐이고;
    Q는 선택적으로 하나 또는 복수개의 할로겐 특히 불소에 의해 치환된 아릴기 또는 헤테로아릴기이며, 상기 아릴기는 페닐기이고, 상기 헤테로아릴기는 푸릴기, 피롤릴기, 티에닐기 또는 피리딜기(pyridyl group)로부터 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 거울상 이성질체 또는 호변 이성질체.
  8. 제1항 내지 제2항, 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    Q는 p-플루오로페닐기인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 거울상 이성질체 또는 호변 이성질체.
  9. 제1항 내지 제2항, 제7항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    R4는 아미노기이고, R5는 수소이며; n은 0인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 거울상 이성질체 또는 호변 이성질체.
  10. 제1항 내지 제2항, 제7항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 화합물은,
    Figure pct00121

    Figure pct00122

    Figure pct00123
    로부터 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 거울상 이성질체 또는 호변 이성질체.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 거울상 이성질체 또는 호변 이성질체, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 함유하는 약물 조성물.
  12. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 거울상 이성질체 또는 호변 이성질체 또는 제11항에 따른 약물 조성물의 항 B형 간염 바이러스에 사용하기 위한 약물 제조에서의 용도.
  13. 제12항에 있어서,
    상기 약물은 포유 동물의 B형 간염 바이러스 감염을 치료하기 위한 것인 용도.
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Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2022531199A (ja) 2019-04-30 2022-07-06 アイクリス ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング ウント コンパニー コマンディトゲゼルシャフト Ｂ型肝炎ウイルス（ｈｂｖ）に対し活性な新規のフェニル及びピリジル尿素
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CN112574188B (zh) * 2019-09-29 2022-05-06 苏州爱科百发生物医药技术有限公司 一种吡唑类化合物及其应用
CN114685473A (zh) * 2020-12-25 2022-07-01 杭州百新生物医药科技有限公司 5-烷基-2-吡唑-恶唑烷-4-酮类衍生物及其用途
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CN115677680A (zh) 2021-07-23 2023-02-03 上海挚盟医药科技有限公司 式i化合物的晶型及其制备和应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006033995A2 (en) * 2004-09-16 2006-03-30 Valeant Research And Development Thiazolidin-4-ones having anti-hepatitis b activity
WO2007014023A1 (en) * 2005-07-21 2007-02-01 Valeant Research & Development Thiazolidinones, oxazolidinones, and pyrrolidinones for hbv

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006033995A2 (en) * 2004-09-16 2006-03-30 Valeant Research And Development Thiazolidin-4-ones having anti-hepatitis b activity
WO2007014023A1 (en) * 2005-07-21 2007-02-01 Valeant Research & Development Thiazolidinones, oxazolidinones, and pyrrolidinones for hbv

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