WO1992003480A1 - Derive de n-acetylcarboxymethylchitosan et procede de production - Google Patents

Description

細 ¾

-マセ チル カ ル ボキ ン ゾ チ ^ ；、 卄 ン誘導休 ¾び その製法

5 本発明 は新規な アセ チルカ ルボ キ シ メ チル 卜 サ ン誘導体及びその製法に関する ： 更に詳 し く は、 本発 明は、 医薬化合物の生体内 タ 一ゲテ ィ ン グの技術に関 するものであ り 、 該医薬化合物の 液中での安定 ¾ -. 朧器への標的指向性並びに体内で 被代 . を ¾め

10 上で有用な多糖型高分子担体と し て の新規な' 丁 セ チ ルカ ルボキ シ メ チ ルキ ト サ ン誘 に i す る . ま た、 本発明は該医薬化合物と結合 し た複合体 形 と し て の 新規な \ -ァセチル力 ルボキ シ ヌ チル i、 サ ン誘導体に 関する 。

1 背景技術

水溶性高分子物質を薬物すなおち医薬化合 ^ ^担体 と して使用する こ と は、 従来か ら と り わけ医薬品製弁， の分野において試み られ、 関連する多数の技術 提供 されてきた。 それ ら薬物担体用の水溶性高分子物質は

2 C すで に一般に公知でぁ リ 、 多 く の場合に おいて カ ル ボ キ シ メ チルセル ロ ー ズ、 ヒ ド コ キ シ ブ ロ ピルセル □ ― ズ、 ヒ ド ロ キ シ ブ ロ ピル チルセルロ ー ズ ^のセゾレ 口 ー ズ誘導体が使用 されて い、 る . し か し こ れ ら 东お： 術は薬物のいわ る徐放に関する も でま. に 、 荬物 Λ

I . 送 s . すなわち薬物を薬 ¾が '二、要され る組 Itに 時に必要な量だけ送達する技術には至つ てお ず、 水 溶性高分子を薬物送達の担体と し て使用する技術は末 だ十分に開発さ れていないのが实状であ る。 例えば下 ΐ己文献 1) 2)があ り 、 文 ¾1) にはカ ルボキシ メ チル キ δ チンを体内埋め込み型の微粒子性担体と して使用す る 技術が、 また文献 2)には力ルボキシ ル化デキ ス ト ラ ン を薬物との複合体のための担体と して使用する技術が 開示されて いる ^

1 ) a t a n a b β , K . et a丄.， Chen;. F ii a r i;_; . Bui丄 . ，0 506-509, (1990)

2) 瀬崎 仁、 薬学維誌、 1^， 611 -621 , ( 1989) し か しながら、 文献 1 )記載の技術は力ルボキシ >' 千 ルキチンのゲル化能と生体内被分解性と に着目 し てそ れ らの性質を利用 したものではあるものの、 体内局所5 への埋め込み型であっ て、 機能と しては薬物の放出制 御の範囲を出ておらず、 癌組織や臓器への薬物の標的 指向性を高める こ と は期待できない - また文献 2)記載 の薬物複合体は、 -優れた薬物送達の可能性を示 してい る が、 薬物送達を計るための薬物複合体の分子の修飾0 に利用でき る官能基はアルコール性水酸基に限定され る =

制癌剤あ る いは脳疾患治療剤等が次第に開発さ れ る の に伴い、 水溶性高分子を利用 し た こ ら薬物の タ ー

• ゲティ ング技術の完成が急がれて い るのにも かかわ ら " ず、 従来技術は十分な る解決を与えて いない ： 水溶性高分子担体を利用 し た薬物すな ち医薬化合 物の タ 一ゲ亍イ ン グ技術が完成さ れ るた には、 その 前提条件と して、 第一に担体と薬物 と の複 ^体 ^静 ¾ 投与後に標的臓器に到達する までの時間内にあ 、、て血 5 中で安定である こ と 、 換言すれば血中で必要な薬物濃 度を持続でき る こ と 、 また第二に該担体が生体内で徐 々 に分解を受け、 その結果その拉体が長時間の体内残 留 を起こ さ ない こ と 、 第三に薬物と の複合体の形で結 合 し て いる該担体そ 自体が臓器指向の傾向 を す 二 1 0 と が必要であ り 、 従っ て担体はまずこお らの条件を 同 時に満足するも の と して提供さ れな ければな らない； 発明の開示

かかる課題の解決を 目 的と し て、 木発明者等は稀々 の検討を繰 り返 した . その結果、 前記のカ ルボキ シ

] 5 チルキチン を酵索処理およぴァルカ リ 処理 し て得 才' た低分子化力ルボキ シ メ チ - ί、サン に これ (Lァ ノ 基の所で ぺブチ ド鎖およぴ \ -ァセチル基 を導 7,す る こ と によ リ本発明者 ら は、 新親な物質と して、 マセ チルカルボキ シ メ チルキ 卜 サ ン誘導体を今回合成する

2 0 こ と に成功する と共に、 この誘導体が意外にも前記の 諸条件を満足する担体と して有用である こ と 、 また 二 れを利用する と該目 的を達成でき る ものであ る 二 と を 見出だ し た し かも 、 上-記の導入さ れる、. -ベプ千 ; は、 適切なペプチ ド ^を選択する こ と に よ っ て、 用

：-- 可能な医薬化合物の範 が力 'ン i ^ ミ ノ 化合物、 アルコ ール化合物の広い範囲に及ぶ：： と 能に し 、 かつ複合体にあ る特定の臌器に対する朦器指 向の傾向をもた らすこ とも見出 し た . これ ら 0)知見に 基づいて本発明を完成する に至つ た：

以下に本発明を詳細に説明する

本発明の新規物質は、 後記の一般式 1 で示さ れる ァセチルカルボキ シ メ チルキ 卜サ ン誘導体であ リ 、 それのキ トサンの構成糖単位である グ几 コ サ ミ ンの e 位及び/または 3位の水酸基の - %の I が力ルボ ^ ソ メチル基で置換さ れ、 また一部の糖単位においては 2 位のア ミ ノ基の II がァセチル基で置換されて いる こ と 並びに他の部分の糖単位の 2位ア ミ ノ基の H がへプチ ド鎖又は 1 個のア ミ ノ酸で置換されている こ と が --つ の特徴である

第 1 の本発明によ る新規な -ァセチルカルボキ シ メ チルキ トサ ン誘導体は、 下記式 f i に よ っ て示さ れる

式（ 1 )において およぴ は夫々 に π または力ルボ キシ メチル基を表すが、 と も に Ηである こ と はな I、 また、 こ こ に Ρ は R ₃ C O基、 · Η基または R - 0基 ¾ す , こ こで r は、 X をなす \-ぺブキ f: 0 ¾端俾' - ミ ノ酸に連結する場合があ り 、 こ の と きは I' は ίい CO基 であ リ 、 更に P が X を なす ぺ フ 'チ ド鎖 ':：末端側ァ ミ ノ酸に連結する場合もあ り 、 こ の と き の P は i ^H S または （)基であ る 。 なおこ 二 に ！ con Ηは力ルボン酸

5 化合物、 R 4 ίし はァ ミ ノ 化合物、 R ₅0 Ηは ア ル コ ー ル 化合物を意味する _t

前記の CO基は、 多 く の場合において、 具体的には ア ミ ノ基の保護基であ る か、 あ る いは 力ルボン酸 E 薬化合构由来のァ シ ル基でぁ リ 、 例えは ア ミ ノ保 ^ (： と しては tert -ブ ト シ 力ルボ二 基の如き ア コ シ 力ルボニル基ある いは Ρ-メ 卜 キ シベン ジ ォ キ シ 力 ルボニル基の如き ァ ラルキル才 キ シ 力ルボ二ル基であ リ 、 ある いは更にそ の R₃ CO基に対 する ί こ 00!;が力 ル ボン酸型の医薬化合物、 例えば メ i、 卜 レ サ一 ί、 ：； な る も のであ る こ と もでき る

R _; 0基 は カ ル ボ ニ ル基の保護基 と し て ί£ ： マ ル コ キシ基、 例えば tert-ブチルォ キシ基ある いは丁 ラ ルキルォキシ基例えばベンジルォ キシ基を挙げる こ と がで き る . あ る レ、 は、 ま た、 ί 0基は、 ア ル コ ール 型の医薬化合物 R₅0Ηのアルコ ール性水酸基から II を除 いた残基である 二 と ができ る -

R, \·Η基は、 力 ルボ シル基を保護する ァ ミ 型の保 護基、 例えばメチルイ ミ ノ基の如き低 、マ キ 1 -< ミ ノ基である こ と ができ る "― ある いは、 また ':Η基に対 応寸 がァ ミ ノ 化合^型め医^ ：：台^ . えば ダウ ノ ルビシ ンまたは 卜 リ ブ口 リ ジン を表わすこ でき る ：.

Qは H または 0 H基を表す：、 こ こ に Q が X をなす \ -ベ プチ ド鎖の X末端側ア ミ ノ酸に連結する場合があ リ 、 5 この と きは Qは Hであ り 、 反対に Q が： をなす へブ チ ド鎖の C.末端側ア ミ ノ酸に連結する場合もぁ リ 、 こ の と きは Qは 0 H基である。

更に、 式（ I )において Xは 1 1 0個の同一または異 なるア ミ ノ酸を含むベブチ ド鎖 （但し ア ミ ノ酸 1 個（7, 0 場合も、 本明細書ではべプチ ドに包含 して意味す る を意味する が、 こ のぺプチ ド鎖はア ミ ノ酸のみかに,構 成される場合のペプチ ド鎖はもちろん、 鎖中の --部に ア ミ ノ酸以外の化合物を含む場合のペプチ ド鎖も包含 し て意味 してお り 、 後者の場合には例えばコハ ク の 5 ごと き二塩基性酸、 特に二塩基性カルボン酸がベプチ ド鎖中の中間又は末端のア ミ ノ酸に連結 し、 そ 結 ¾ 全体と して同一または異なるァ ミ ノ酸を含むぺブチ K 鎖を構成しても よい

更に、 式（ I )による -ァセチルカルボキシ メチルキ

20 トサン誘導体は、 これの塩、 特に該誘導体のカルボキ シメチル基のアルカ リ金属塩、 例えばナ ト リ ウ ム塩又 は力 リ ゥム塩あ る いはア ンモニゥ 厶塩等であ る ：： ヒ を 含む ,

なお、 第 1 の本発明によ る式（ I )の誘導体化合杓 - ' おいて、 ペプチ ド鎖 X を構 β¾するア ミ ノ酸の |ίは^ 放出や抗原性を考慮 し 、 通常は 1 〜 4 個、 姝に G 〜 個が好ま し い： XPにおけるぺづチ ド鎖 X が ] 4 個 ア ミ ノ酸のみから構成されるべプチ ド鎖であ り 、 その X末端側ア ミ ノ酸に P が結合する場合の Fの例を示せ ば以下のごと く であ る。 このよ う な場合の X 中のベプ チ ド結合はキ 卜サン側よ リ - NHC0-である：.

P-Phe-Phe-Gly- P— G1:.'— Phe— G丄 y— Gly—

P-Phe-GJ -Phe-Gly- P-GI y-Phe-GIy-Phe-

P - G]y - Giy - Gly - P— Ala— Gly— Gly— G丄 y—

また λ'Ρにおけるぺプチ ド鎖 λ' が二塩基燄 を含み、 か っ ュ 〜 4 個のア ミ ノ酸をふ く むべ チ ド鎖であ 、 そ の C末端側ア ミ ノ酸に Ρ が結合する場合の X Ρの を J-; せば次の ごと く であ り 、 このよ う な場台の X 中のぺつ チ ド結合はキ トサン側よ リ - CC'\'H -であ る なお [！列中 Sueはコ ハク酸残基を示す。

- S u - A 1 a - A 1 a - A 1 a - P

- S u c - 1 a - 1 - V a ]. - 1 - P

また、 本発明で利用でき るベプチ ド鎮 X についての ア ミ ノ酸 g己列の別の例には - 下記 <>ものがあ る ：

(： ) i」一 G】y— Giv— Gly— Vsl— Ai — 0H，

— G .—G!'.—Gl — Leu— Als—，

•GJ 一 v- ri f- · - G i y _ G丄 y - P h e _ T y r - A 1 a■

一 G 1 - G 1 - G ] y - G 1. -Gl:

( ) -Gly-Gl -Giy-Pho- し eu - G

- Gly - G丄 y - Gly - Gly- Leu- A l - ,

- G 1 y - G 1 y - G 1 y - G I y - G 1 - G 1 - ,

( I ) -Gly-Gi -Gl -Gly - Phe -し eu - Gl:

-（G丄 y)₇ -， - (Gly ) -し e u - A 18 - ( : ) 一（Gly)ョ;一 Phe— Leu— Gly—，

- (Gly)', -，

( v ) - (Gly )₃- ,

(• ' - (Gly)_{1 D}- なお、 本発明で利用でき る医薬化合物の残基〔P- )を 誘導する母体の化合物の例には、 下記のものがある ：. メ ト 卜 レ キサ一 卜 、 レ ポ ドノ 、 ' メ タ 二 、 フ L! セ ミ ド、 ジ ノ ブ ロ ス ト 、 ダ ウ ノ ル ビシ ン 、 ド キ ソ ル ビシ ン 、 マ イ ト マ イ シ ン 一 C 、 ト U ブ ロ リ ジン 及びァ リ フ ラ ビン等

更に、 第 1 の本発明によ る式（ I )の物質はカルボキ シ メチル化度、 分子量（ゲル濾過法）、 a/(a + b) 値およ ぴ P/ Xのモル比によつ て特定される。

力ルボキシ メチル化度は、 本発明においてコ Π ィ ！、' 滴定またはァルカ リ 滴定によ り求 られる .. コ ノ 滴定では下記文 i 3)が参照さ れる

沖増 哲、 農芸化学会誌 0：；-3 ' 19： (,■、 本髡 1 、 化 ^物の分子量は、 癸 2 - f o てデキ ス 卜 ラ ン を標準物質とする ゲル it過法に よ リ 求 め られる ：. 後記実施例において ; TSK -£.«·； G i«P xi. を カ ラ ム と し て使用 し 、 溶出液 ： ". ： ：、 流速： 0.8 in 1 / m i n , カ ラ ム温度 ： 4 ()。C： 、 検出 ： 示差屈折計 で測定 した。

a/ (a + b )値はいわばぺプチ ド化度 と も称すべき値で あ り 、 こ こで a は -XP置換された糖単位の数^ と - X'Q 置換された糖単位の数 a₂ と の合計を表 し 、 はァセチ ル置換されて いる糖単位の数を表す： 式（ 1 )で さ る物質の糖単位はすべて - 置換さ れて い る か、 -：\ 置換されている 力、、 またはァセチル置換さ れて い か のいづれかであるので、 a + bは分子中の糖 ^位の合計 の総数を示す。

なお a/ (a + b)は次式（])によ っ て求め ォ： る ：

A 100— （ A + C )

iVl _m

こ こで Aは式（ I )における P の含量（重量％ )、 M_mは P の分子量、 M_sは N-ァセチルカルボキシ メ チルキ トサ ンの糖単位の平均分子量、 Cは式（ I )において = 0 である と きの X の含量（重量％ )を表す。 なお Cは次式 ( 2 )によっ て算出される：，

C = B (I 00 - A ') X 1 ή-^Γ

こ こで B は式（ I )において .: ^ = であ る と き の 含量（重量％ )を表 し 、 例えばぺプチ ド化 し た後、 Ρ を 導入する前にあ る いば式 ' ）の物質か Γ を Κ ¾せ - めてか ら、 それぞれペプチ ド含量を測定 し て求める 二 と ができ る B は X 中のア ミ ノ酸に特性吸収があれば これを利用 して吸光度測定法によ り 直接に求める こ と ができ る。 し かし X中のア ミ ノ酸に特性吸収がない と きは B は次式（3)によって求めても よい。

D

B = X 100 (3)

r (100 - D ) + D こ こで Dは式（ I )において a_z = 0 である と きの XPの 含量（重量％ )を表 し、 P に特性吸収があれば こ れ を利 用 して吸光度測定法によ り求める こ と ができ る ： また r は次式（4 )によっ て求め られる値を示す。 r M p X / M X (4 ) こ こ で、 Mp Xおよび Μχはそれぞれ ΧΡおよぴ X (!)分子 量を あ らわす。

次に Ρ / Xのモル比はぺプチ ドに対する Ρ化度 （ ま たは Ρ置換度） と も称すべき値、 すなわち 十 であ り 、 次式（5) によっ てそのモル比を求める こ と が でき る ：

A C

—— ÷ 一一一 (5)

M _m M _κ 第 】 の本発明によ る式（ 1 )で示される物質は、 前記 の如 く 算定される力ルボキシ メチル化度、 分子量 (ゲ' ル濾過法）、 a/ (a + b)値および P X値かそれぞれ（ .5 へ 2、 3,000- 300 , 000. 0.0】へ 1ぉょぴ（ .1〜 1の各範 gにあ る ものである なお本明細書において、 前記の式 ( 】 )の記戟は、 式

• 1 ：)で示さ れる物質の分子において - 置換さ れた糖 単位 （すなわち グルコ サ ミ ン糖単位） が^個、 - x(r置 換された糖単位が 個、 - COCH₃置換された糖単 力' I- 個だけそれぞれ存在 して い る こ と を示すに止まっ てお リ 、 同一種類の糖単位がそれぞれの個数だけ連较 して 結合 している と か、 ある いは これ ら 3種類の糖単位が 式 '， I )に記载の配列順序で結合 して い る かい う こ と を意味 しない：

1い 更に、 第 1 の本発明に よ る式（ I ：)の化合物における それの \--ァセチル基の一部が欠除 し てい る部分的ヽ-ァ セチルカルボキシ メチルキ 卜サン誘導体も新規な物質 であ リ 、 そ して後述される有用性を有する 従っ て、 第 2の本発明に よ る と 、 式（ Π )

·) . によっ て示さ れる部分的: '-ァセチル力ルボキシ メ チル キ トサン誘導体が提供さ れる 式（ Π )において 、 R, X は式；. \ )に おける と 同一 (7；意味を ¾すが， こ こで は式（ 1 )におけ る よ リ 意味が多少と も拡大さ ί·てお り II、 on 、 f C0基、 R H基または 1く₅0基を表す： P if- ： ' ^ な ' . ブー 鎖の 末端側ア ミ ノ ; ί· ¾ 1 1 合があ り 、 この と き は P は Hまたは Γ、 〕 あ （； 、 が X をなすペプチ ド鎖の C末端側ア ミ ノ酸に連結す 場合もあ り 、 この と き の Ρ は 0 Η基、 F. , X \\基または R . Γ) 基である a、 、 b ₂は正の整数を表す ：,

δ また式（ Π )の物質は式（ I )における と 同一の方法に よ っ て求め られるカルボキシメチル化度、 分子量 （ゲ ル濾過法）、 aバ a + b )値および P / Xモル比によっ て特 定される . ただ し、 式（ Π )では、 a / ( a + b )値における b は式（ 1 )で示さ れる物質における b と は意 t¾が多少0 異な り 、 ァセチル置換されている糖単位の数 と 2位 ア ミ ノ基が置換さ れずに遊離のままである糖単位の数 t と の合計を表す： 式（ Π )で示される物質における特 性値は式（ I )で示さ れる物質におけるそれ ら と 同 - -で あ る

δ なお、 本明細書での上記の式（ Π )の記载は、 式 ί Π ： で示される物質の分子において - Χ Γ置換さ れた糖単 i が a 個、 - C0 CH ₃置換された糖単位が ^個、 2位ァ ミ ノ 基が置換されずに遊離のま まである糖単位が

個だけ それぞれ存在 している こ と を示すに止まっ てお 、 同0 —種類の糖単位がそれぞれの個数だけ連続 して結合し ている と 力、、 ある いはこれ ら 3種類の糖単位が式（ 11；； の記載の配列順序で結合 している と かと '.、 う t 昧 し ない - 式（ mで示される物質は式（ I )で示さ る物燹 = 造するための合成中間体であ '） 、 て式「 ！ ] れ る物質と は産業上の利用分野が同一であ （ 、 かつ構 成 主要部が同一であ る ：

例えば、 上記の式（ Π )の化合物において 、 ί ^; が医荬 化合物に由来する残基 K₃CO基、 ま たは \!;Sま たは R₅0基を示す場合の式（ Ε ) の化合物は、 こ れ のァ ミ ノ 基を無水酢酸、 ある いはァセチルク ロ リ ドの如き他の 適当なァセチル化剤で適当な溶剤、 例えばビ リ ジン 中 でマセチル化すれば、 医薬化合物の結合 し て i.、 る場合 の複合体の形の式（ I )の本発明化合物を 与える . ま た 式（ Π )の化合物において、 P が保護基である場合の ( π )の化合物か ら保護基を脱離 し た後に、 若 し く は P が H または 0H基である場合の式（ Π ')の化合物に ¾ し て 医薬化合物と し て の R₃ C00i!、 Ρ、₄ Ίし または に 0Ηを結合 させ、 次いで上記と 同様に残余 ァ ミ ノ基を マでュ )1 化する と 、 式（ I )の本発明化合物を生成する こ ご が 能である ；■

発明を実施するため の最良の形態

次に第 1 の本発明によ る式（ ！ ）の化合物の製造につ いて述べる と 、 その概略は以下のごと く であ る が、 本 発明はこれに限定されない ₂

本発明物質の原料である カルボキ シ メ チル キチ ンは、 力 二 、 ェ ビ等の甲殻類や昆虫の外皮， 菌類の細

に広 く 存在する キ チ ン （ - i， 4-ボ リ -' -マ セ 手 )1- コ サ ミ ン） に アルカ リ 存在下、 モ ノ ジ ΠΙ ル酢 ¾ t ¾ ^ させて容易に調製でき る . そ 条件を え ；： 二 i によ り 、 力ルボキシ メ チルィヒ度 ΰ,'異なる 力ルボキシ } チルキチン が得られる が、 巿販品の利用も可能である 次に力ルボキシ メチルキチン を低分子化する が、 二 の低分子化にあた り 、 例えば市販のカ ルボキ シ ^チル δ キチンに卵白 リ ゾチーム を作用させ、 その反応条件を 制御する こ と によ り 、 得られる力ルボキシメ チル チ ンの分子量を調節する こ と ができ る。 その反応条件は . 用いる 力ルボキシ メチルキチンの力 ルボキシ メ チル化 度 （ d s： 糖残基当 り のカルボキシ チル化度 によ -,

] 0 ても異な り 、 例えば、 d s = .0 の場合、 分子量が約 1

X 10⁵ に低減された低分子化カルボキシ チルキチン は、 分子量が 1 X 10^ε 程度のカルボキシ メ チルキチン に、 その約 1ノ 400量の卵白 リ ゾチームを ρΠ 6.0 , 37 で約 2 時間作用 させる こ と に よ リ得られ る

1 Γ> 更に低分子化カルボキシ メ チルキチンの脱 \ - マセ チル化を行う が、 これはアル力 リ処理によ 違成さ る - 低分子化カ ルボキ シ メ チルキチン を ^えば、 】 (川 に溶解後、 i ( ^Cで数時間〜数十時間、 好ま く は 3 〜 8 時間加熱還流する こ と に よ り 、 ーァセチル基

20 の一部を除去 し 、 部分的に \ -ァセチル基が残つ ている カルボキシ メチルキ ！、サンが得られる _r これ を .4；的 、'-ァセチノ カ ルボキシ -ス 手ルキ ン ご 051ぶ - 次に部分的 -、 -ァ セチル カ ルボキ シ チ ^ ン 例えばジ チルホ ル ム マ ミ ド と ^Λ 2\ai;^r.C ^溶洁 ¾έ 2 合溶媒に溶解後、 その瑢液に対し て . ベ -/ : 端マ ミ ノ酸のア ミ ノ基に保護基を ^入 し た ^発明に ベ Ύチ ド 〔以下単に保護ペプチ ド と ^ ： 式 「Η ⁽ ' - X -保護基」 で表示で き る 〕 の '-、、 - ヒ π ^ ン ス ク シ ン ノ ミ ドニステル （保護ペプチ ド の活性エ ステ 、 加え て反応さ せる こ と に よ り 、 部分的 \ -ァセ チル 力 ルボキ シ メ チルキ トサン の遊離ア ミ ノ基に保護ペプチ ド を結 合させる。 保護ペプチ ドの活性エ ステルの加える量を 変え る こ と に よ リ 、 保護ペ プチ ドの結合量の異な 「部分的 \ -ァセ チルカ ルボキ シ チ ル 卜 サ ン 一保 ¾ ペ プチ ド」 複合体が得 らォ； る ： 保護ベブチ ド 活性ェ ステルの大過剰を反応させれば、 遊齄ァ ミ ノ基が殆 ビ 存在 しない複合体を得る こ と も可能である ： なお保護 ペプチ ドの活性エ ス子 ルは、 保護ペプチ ド をペブチ ド 合成の常法によ り 例えば、 ジ チルホル ムァ ミ に 解後、 これに、、- ヒ ド ロ キ シ ス り シ ィ ミ ド と 、， \ ' -ジ シ ク ロ へ キ シ ルカ ゾレボジィ ミ I を力 Πえ て さ せ ： 二 と に よ り 得る こ と がで き る ：

上記の よ う に、 保護ぺプチ ドの活性ェステル と の結 合反応に用 い る部分的 .\ -ァ セチル カルボキ シ メ チルキ 卜サ ン の濃度は G . 1〜 5 % (重量％ )が適当であ り 、 多粳 の糖残基と保護べプチ ド の活性エ ス子 ルのモル比は、 2 ( ： ] 〜 1 ： Η)が適当であ る ま た、 保 ¾ ' チ (]- マ ミ ノ酸の数は、 ： 〜〗 Gの範囲であ る ：

なお上記において保護基の代 " に薬^ 使

え. ¾ フ、 し た 15明に ^ ， - レ' ^ - . -： ' し P は医薬化合物由来の PuCO基、 ί.ΛΗ¾ ^は 0¾ て 表示で き る ：； の '，,- ヒ ド ロ キ .シ ス ク シ ン ■' ニ フ ニ を力 πえ才、 ば、 「部分的 \ -ァ セチルカ ルボキ シ チル * 卜サ ン 一ペプチ ド一薬物」 複合体が得 れ る

また上記のよ う に して得られた複合体から、 そ ぞ れ保護基あ る いは薬物残基（P ) を脱離せ し めれば 「 g-i- 分的 >< -ァセチルカ ルボキ シ メ チルキ 卜 サ ン 一 ぺプチ ド 複合体が得られる

式（ I门で示される本発明物質は、 丄 よ に て 得ら れ る 「部分的 \ -ァセチルカ ルボ シ チル ^ 卜 ン ー保護ペプチ ド」 複合体、 「部分的、-ァセチル カ ボキ シ メ チルキ ト サ ン 一ベプチ ド ー薬物」 複合体お び 「部分的 -ァセチル力ルボキ シ メ チル キ ！、 サ ン 一 ベ プチ ド」 複合体と い う 3種の物質を包含す .

式（ II )で示さ れ る本発明物質は、 こ れを飽 \aiiC 水溶液に溶解後、 無水齚酸又は他の適当な Tセ ル 剤、 例えば塩化マセチルを反応させて式〖 ϋ )の複合体 物質中に残存する遊離ァ ミ ノ基をァセチル化する こ と によ リ 、 対応する式（ I )で示される本発明物質を得る ただ し こ こで得られる物質は式 (' I )において a = .₃ 、 a₂ = 0または a =a _3i = 0である場合 物質てあ に 、 例えば上記の 3種の钩質に夫々 に ¾"応 し てそ；^ ぞ 「- - 7ァ でチル カ ルボ シ メ チル * ト サ ン 一 ^ ^ ·■、 -P千 - 複合体、 「'、-ァセチルカ ルボ シ ^ チル ト ン — ブ二 —荬 ft— 複台体および 「 - メ チル ^ ;、 ン ー ぺプチ 」 複合体を得る 二 ；： かで t る が、 前二者は a = ό . 、 二 ' に \応寸る ^ で 後 -一者は a = 、 a₁ = (：' に 応す る物 Kであ る - た 前二者か ら後 --者への変換は通常は ¾処理に よ 、 て δ う こ と ができ る - 例えば い-ァセチルカ ルボキシ ^ チ ルキ トサン—保護ペプチ ド」 複合体を弱 ¾処理、 ^え ば、 0.5\· HC i中、 30°Cで 16時間処理する こ と によ リ 、 「 \-ァ セチル カ ルボキ シ メ チルキ ト サ ン 一 へ つ ÷ , 複合体を得る こ と ができ る

0 次 に こ 「 \ -ァセ チル力 ルボキ シ ゾ. チル ；、 - ン 一 ペプチ ド」 複合体を、 ^えば 】％ aHC0₃水溶液に溶解 後、 カルボン酸型の医薬化合物、 すなわち カ ル ボ ン ル基を有する薬物の - ヒ ド ロ キ ン ス ク シ ン ィ ミ に 二 ス テル （活性エ ステル） を前記複合体中 へブチ ^ ⁽⁷, X末端に反応させる こ と に よ リ 「',-ァ セチルカ シ メ チ ルキ トサ ン 一ペプチ ド 一薬杓」 複合 .t: を Z 二 と ができ る ： ただ し こ こ で得られる物質は、 必ず も 式（ I )において a = _&1 、 = 0 であ る場合の物 f に 定されるも のではな く 、 実際には a = _3l + a, 、 ^ ('；0 である場合の物質と し て示さ れる - すなわち こ こ で薬 物と して ^えばメ ト ト レ サ一 ！. （ΜΊ X) を還识す ば 「 \ -ァ セ チル カ ルボ ン チル キ 卜 ン ー へ づ手 '■' M Τ λ」複合体 が得 ら れ る ' 巡常は該複合 に お ：一 -:. Μ丁 X含量はペプチ ド含^よ リ小さ く な ：

F- 従っ て、 第 3 Q, 発 に よ と . 式 ·· II： .·

〔式中、 および R₂は夫々 に II または力 ルボキシ チ ル基を表わす〕

によつ て示され、 下記の特性値 ）〜（ 2 )： - \) カルボ シ メ チル化度： Q .5〜 ： - (2) 分子量（ゲル濾過法） ： 3.(10( '〜： 50(;，00n を有する部分的 -ァセチルカルボキシ メ チル ト、 サ に次式

P X - 0 H

〔式中、 こ こで P は H、 OH基、 R₃ CO基、 R, Ml基ま た ::- R 0基、 X は 】 〜 10個の 同一 ま たは異な る ァ ミ ノ 酸 を含むぺプチ ド鎮を意味する なお F: C 00 Hは力 酸化合物、 R₄ XH₂はァ ミ ノ化合物、 R ₃0Π はァ ル ル 化合物を意味する。 〕

で示さ れる化合物を反応せしめる こ と を特 ¾とする 式（ II )

<■- II

〔式中、 、 ίし、 Ρ 、 は（ HI )式における前記と 同 じ 意味を示す： a、 、 b_zは正の整数 す , 〕に よ て 示され 、 下記の特性値（Γ)〜（4)： -

( 1 ) カ ルボキ シ メ チノレ化度

(2) 分子量（ゲル濾過法） 3， 000〜 300, 000

(3) a / ( a + b ) 0.0

(ただ し b = b₁ + b_z )

(4) P /X (モル比） ： 0.1へ-，： を有する部分的 :-ァセチルカルボキ ン メ チル キ 誘導体の製法が提供され る 。

G

また、 第 4 の本発明によ る と、 式一 （ Π ' )

II Ί

〔式中、 および R₂は夫々 に Hまたはカルボキ ン チ ル基、 f は Hまたは 0Π基、 も し く は R C0基、 ₄ ' Ml S または R 0基、 Xは 1 〜 0個の同一または異なる ァ ミ ノ酸を含むペプチ ド鎖を意味する _r なお R , ' C00I1は力 ルボン酸化合物、 R ^:H₂はア ミ ノ 化合物、 ノ 0H はァ ルコ ール化合物を意味する， a， b,、 b: は正 <7)整数ナニ 示す - 〕

に よ っ て示さ れ、 下記の特性値（ 1：)〜（4)： - f ]； 力 ルボキ シ 、1 手ル化度： O ： , 2 ί)

(.ュ、 分子量（ゲル濾過法） ： '"，00 "へ？)ο'-..οο(:

(V} a / ( a + b ) ： .01 - 1

(ただ し = + ）

(4) P / X (モノレ比、ι ： 0. へ 1

を有する部分的 ァセチルカルボキ シ チル キ トサ ン 誘導体をァセチル化 し 、 ^基が Π または 0H基以外の と きは、 さ ら に Pi基を脱離せしめ 最後に次式

P-H または P— OH Π .：

〔式中、 Pは R₃C0基、 基または R_; 0基を表す： ： て 示される化合物を反応せし める こ と を特徴とする、 式 ( I )

〔式中、 、 R₂ p xは前記と同 じ意味を示 し 、 ς' は Ηまたは 0Η基を意味する。 _ai、 a₂は 0 または正の整 数を示すが、 共に 0 と なる場合を除 く b は正の整数 を示す。 〕

によっ て示され、 下記の特性値（1)〜（4)： -

( 1 ) 力ルボキ シ チル化度： 0.5 1.2

(2) 分子量（ゲル瀘過法） ： ,G00 300 00

(3) a / ( a + b ) ： 01 1

( 屮一 ― Ί ο o (4 ) Ρ / X モノレ比） ： ；':'.¹ へ

を有する \ -マセチルカルボキシ ス チル キ トサン誘 ¾体 の製法が提供される - 更に、 木発明者は、 第 1 の本発明に係る式（ I )の ァセチルカルボキシメチルキ トサ ン誘導体の性質を一 層改善する研究を進めたし その結果、 式（ I )の誘導体 の構成糖である -ァセチルカルボキシ メ チルグルコ サ ミ ン単位の う ちの複数個を、 ポ リ エチ レ ン グ リ コ ール 鎖を含む基（以下、 単に PEGと 唣 する こ と があ る ： t 2 -ア ミ ノ基上に置換基 と し て有するカ ルボ シ -ス ル グルコ サ ミ ン単位、 詳 し く は次 A )

〔式中、 ！ 及び R₂は前記の意味をもち、 PEG は次式 ( \Ί )、 （ YE )、 （ \ )又は（ IX )： -

'"•^ ~ 0- (CH₂CH₂0)_n-CH₃

(VI:)

；、

C1

• fO-CH,□·：· - CO- 0- (ひし CH, 0； _1:一 CH— -CO- 0- (ひし ¾0)_Γ,—ひ -C0-CH,-f- (CH 1し 0ハ』一 Ci: で示され る基を表わ し 、 はボ リ ヱチ レ ジ' リ -二 一ル 鎖の平均重合度を示す〕 で表される 力 ルボ シ 千ル グルコ サ ミ ンのポ リ 二チ レ ン グ リ コ ール置換単（ί: 校 数個と取 り 代える こ と によって、 次式（ X

〔式中、 、 R₂ 、 P 、 Q 、 X は夫々 に前記の式（ I 、に おける と 同 じ意味をもち、 PEG は上記の意味を もち、 および a₂は夫々 に 0または正の整数を示すガ ^:、 共に 0 と なる場合がな く 、 bおよび cは夫 々 に正の整数を 示す： 〕 で示されて且つ下記の特性値（ 〜 ): -

( 1 ) カルボキシ チル化度 0.5へ 】 .2

(2) 分子量 （ゲル it過法） 3 , 000 - 300.00^

(3) a / (a + b + c) (； .0〗〜 1

(ただ し a = 5 i + a₂ )

(4) P / X (モル比） ： 0.1へ 1

を有する '-ァセチルカルボキシ メチルキ トサン誘導 ; を新規な物質と し て合成する こ と に成功した： し かも こ の新規な式（ X：! で示さ れる \ - アヤ手 ) -力 ルボ - ；- チルキ 卜サン誘導体が式（ 1 )の ア チ カ ナ: シ ^チル ^ I、 サ ン誘導体それ自体に比べろ と 增強さ ； i _ た水溶性を もち且つ薬杓の運搬用 担 1- L て * 一-: き 、 生体内に投与 し た後に血中に長時 ^^で き る 二 と を見い出 し た：

更にまた、 本発明者 らは、 式（ I )の誘導 構成糖 であ る、-ァセチルカ ルボキ シ メ チ ル 几- コ 卄 ミ ン 単位 の う ちの複数個を、 次式（ Β )

j

〔式 、 は前記と 同 じ く 水素ま たはカ ルボキ シ チ ル基を表わす〕 で示さ れ るポ リ オ ル単位 )複数個と ¾ リ代える こ と によ っ て、 次式（ 3：)

〔式中、 、 ί 、 P Q , は夫々 に前記の式（ ： ）に おける と 同 じ意味をも ち、 および は夫々 に ま た は正の整数を示すが、 共に 0 と な る場合がな く 、 b お よび c は夫々 に正の整数を示す〕 で示さ ォ て ϋつ ^ の特性値（ 1 ) （ 4：) ： -

(： カ ルボ キ ン ^ チル化度 ： ；'. rへ ：

(2) 分子量 (ゲル濾.過法 ) ： :，0ο(· .00；·

(： . , + b (ただ し a = a： + a 2 )

(4 s P / X (モル比） ： ！〜；

を有する -ァセチルカルボキシ メ チルキ 卜サ ン誘導体 を新規な物質と して合成する こ と に成功 した - し かも 新規な式（ H )で示さ れる N-ァセチルカルボキシ ^ チル キ トサン誘導体が式（ I )の -ァセチルカルボキシ k チ ルキ 卜サ ン誘導体それ自体に比べる と増強された水溶 性をもち且つ薬物の運緞用の担体 と して利用で ^ '丄 n- 体内に投与 した後に血中に長時間 ;1?留でき る こ い出 した ^

従っ て 、 第 5 の本発明 に おいて は、 式（ X )人 . 、 (S)

(

〔式 、 および は夫々 に H または力ルボキン ゾ チ ル基、 F は C0¾；、 ₄XH基または I 0基、 Qは I： た は OH 、 X は _ 1 へ 0個の同一ま たは異な る ア ミ ノ f -· 含むペプチ ド鎖を意味す なお ₃ C00Hは 力 しォ'ン T 合物、 R Λ は ァ ミ ノ .化合物、 Hは 丁 ニ ー I 合物を意味する。 Hi . a₂は ま たは正の整数を ；':すが 共に 0 と な る場合を除 く ： t> および c は正の整 を す

また式（ X )中で- PEGは下記の式（ VI )、 ( VH：； . ' \¾ ス は ）

^ ""― 0-(CH_?CH,0»_N-CH_;

、

π

一 CO-CK, en, -co-n- (ci ひ o),,- c¾ (VII:; 一 CO- 0- (Ci CH₂0)_RI— CH₃

― CO - C1 - 0 -（C! \l_z 0) _ri― CH, ノ の基を表わ し 、 n はポリ エチ レ ン グ リ コ ール鎖 重合度を示す〕によ っ て示さ れ且つ下記の特性 ii (4)：

( 1 ) カルボキシ メ チル化度 ο . Γ'〜 i .：

(2) 分子量（ゲル濾過法） 3,00 へ 30 ' 00！

(3) a / (' a + b + G ) (..0 ]〜 1

(ただ し a = ( 十 a ₂ )

(4； P / X ("モル比） 0.！ 〜 1

ナ r冇す る \ -マ セ 千 ル 力 ルボ チ ル ^ ；. ¾；； ' Η- が提供さ れ る ものである - 第 5 の 発明 に よ ) め誘導体 式

. 一: 一 ^ ^伫 1：— J .. .. マ.' ϋ— . ί

o 取代え られた λ -ァセチルカ ルボキ シ ^ チル トサ ン誘 導体であ 、 また第 5 の本発明によ S iftixn の誘導 体は同様に下記の式（ B )のボリ オール単位によつ て ¾ 代え られた - ァセチルカルボキ シ メチルキ 1、サ ン誘 導体である。 後記の実施例 17〜2] は式（X ) の化合物 の例を、 また実施例 22〜 23 は式（ XI ) の化合物の例を 示す。 0 2

6

式（ A )の糖誘導体はカルボキシメチルダルコ サ ミ ン 単位の 2-ァ ミ ノ基が PEGによ っ て置換された糖単位で あ り 、 こ こ で PEGと は具体的にはポリ エチ レ ング リ コ δ 一ル鎖を含む下記の式（ Ί )〜（！ X )の基を表わす -

-0-(CH₂CH_z0)_ri-CK:

丫 (VI ,'

CI "

- CO-CH, CH₂ - CO- 0- (CH₂ CH₂0)_T1 - CH₃

-CO- 0- (CH₂CH₂0)_n-CH₃ (葡

- CO- CH₂ -0- (CH₂ CH_Z 0)_ri- CH;

h記式（ VI )〜式（ IX ) I：示す基に存在するボ リ ェチ レ ン グ リ コ 一ル鎖は種々 の分子量をもつも（¾である こ と ができ る が、 一般に入手 しやすい点で好ま し いポ！.' 二 チ レ ン グ リ コール鎖は平均 '分子！：が約 ή ft σ-,も 'Ί.. て . リ 、 従っ て、 式（ VI )〜式（ κ )の基におけるボ リ ェチ し- ン グ リ コ ール鎖の好ま し い平均重合度 は約〗（) 〜】 2 ⁽' であ る が、 本発明は これに限定さ れない： ま た式 ( X ) の誘導体の中のボ リ エチ レ ン グ リ コ ール含量は 法 を用いて鎖中のメチ レ ンプロ ト ン に基づ く ビ一 ' 'ノ面積 の測定から求める こ と ができ、 こ の含量は大き いほど 好ま し く 、 例えば 1 % (重量） 以上であればよ いが、 本発明において特に限定はない：

他方、 第 5 の本発明によ る式（ )の誘導体におけ ： l u 式（ B )のポ リ オ一ル舉位は力 ルボキ シ ヌ チル 'リ'ル コ ミ ン単位の 2 位炭素と 3 位炭素の間の結合が酸化に よ つ て開裂されて、 その開裂後に還元によ リ ボ リ マル 二 —ルの形に転化 してい る点において化学構造上の特 かあ ,

Γ, なお、 第 5 の本発明の式「Χ )及び式（XI )の誘導^ に お け る / ( a + ト. 十 r ) 値 は 式 ！ I ：) に お け " a / ( a + b )値に対応 して定義さ れるぺプチ に化度で あ り 、 従っ てその求め方は前出の式（ Γ) を その ま ま用 いて行えばよ く 、 実際上は式（ 2 )〜（5 )を準用 し な が ら 式（ I )における と全 く 同 じ要領によ っ て算出す る そ の値の範囲も また式（ I )における と 同一であ る ： 同様 に カ ルボキ シ ^ チル化度 .. 分子 f: 〔 ゲル滤過法、 の範 囲についても式（ 1 -)における と 同 -である

第 ？； の b発明によ る式（ X )の物 の製造は . ■ 1ί によ つ て表 ΐ 「き 分的 アセ ボ ン -: 二 ルキ ト サ ン - 保護ぺプチ ド」 複合体を原 ヒ て ^： ' して 下の ごと く に処理する こ と によ っ て行う まず、 こ の式（ 1] )の複合体中の〉,-ァセチル化 し てない遊離力 ルボキ シ ブ、チル グル コ サ ミ ン単位に対 し rEG活性誘 ¾ 体を反応せしめてその遊難の 2-ァ ミ ノ基に式 （ \Ί )

(Κ )の PEG基を置換基と して導入 し、 更に残余の遊離 の力ルボキシ メチルダルコサ ミ ン単位は X-ァセチル化 し、 次に複合体中の保護ペプチ ド部 から保護基を脱 離 して脱保護し、 そのべプチ ド部分の末端へ葉物 T

2

応活性誘導体を反応せしめて 8、 ペプチ ド末端に薬物（ を結合する - 以上の反応工程において N-ァセチル化後の諸中間体 および最終物は式（X )によっ て示さ れる。

上記の PEG活性誘導体と は、 例えば 2- 0-モ ノ ^ i、 - シポ リ エチ レ ン グ リ コ 一ノレ- 3 , 5-ジク 口 口 -:;- 卜 リ マ ジ ン又は メ ト キ シポ リ 才 キ シエチ レ ン カ ルボ ン酸の活 t: エステル（-例えば サ ク シ ンィ ミ ドエ ス、テル）であ り う る。

第 5 の本発明によ る式（ XT )の物質の製造は、 式（ X ) の物質の製造と 同様に式（ D )によっ て表される 「部分 的 ァセチルカルボキ シ メ チルキ 卜サ ン-保護ぺプチ ·」 複合体を原料と して用意する が , その後に卞記 如き処理する こ と に よ っ て行う ： まず こ の原料複合体 中 の ァセチル化 し て いな い遊齄力 ルボキ シ ^ チ ザ几 コ サ ミ ン単位に対 し 、 ^えば過ヨ ウ素酸を作^ さ て ― 2 ― o 酸化によ っ て環の開裂を行い、 更に開裂で生 たマル デヒ ド を例えば水素化ホ ウ素十 ！、 リ ゥ厶によ つ て還元 し てボリ オールの形に転化 し 、 次に複合体中の保護へ プチ ドか ら保護基を脱離して脱保護 し、 そのベづチ ド 部分の末端へ薬物の反応活性誘導体を反応せ し めて、 ペプチ ド末端に薬物（P ) を結合する 以上の反応ェ程 においてポ リ オールへの転化後の諸中間体および最 物は式（ XI )によ っ て示さ れる ：

第 5 の本発明によ る式（ X：)および式（ XI )の物 fiは く

J 0 溶性が高 く 、 従っ て第 5 の本発明に よ つ ては水溶性 (7, 改善された薬物運搬担体および薬物運搬体が提供さ る 。 後記の実験例 4 に よれば、 例えば式 ( X )の物質は 血中滞留性に倭れ、 また薬物 と し て制癌剤を担持 し た 場合に癌選択性が向上 して い る 。

1 5 本発明によ る式（ I ) の誘導体並びに式 ( X '·' お び 式（ )の誘導体は下記の通 り有利な性質を TJする . すなわち、 後記実験例によ っ て示される ご'と く 、 本 発明によ る式（ I )および式（ X )の誘導体は静脈注射に よ る投与後で臓器に到達する までの時間内において血 中で安定であ り 、 すなわち、 これ らの水発明物質の必 要な血中濃度を持続でき るのであ り 、 他方、 生体内で 徐々 に酵素分解を受けるので木物質の'、 -ァセチル'力 ボキシメ チルキ トサン部分が長時間 にわャ: り の体内に 残留する懸念はない . また更に式（ 1 ：) 0:水発明誘導 -: 並びに式（ X )および式 ( ) : &発明誘導 ; ^生 ： rて 臓器指向の傾向をもつ こ と も観察する こ と ができ る： なお、 こ こで式（ I )並びに式（ X )および式（ a )の本 発明化合物が標的臓器に指向する傾向をもっ とは、 該 化合物は、 本発明の手段を加えなかっ た場合に比べて、 δ ある特定の標的臓器での該化合物の濃度において増加 の傾向を示すこ と を意味する に止まってお り 、 該特定 臓器のみに選択的に集中する こ と まで意味するもので はない。

以下に記載する実施例によっ て本発明 を さ ら に具体 的に説明する。

第 1 〜第 4 の本発明は実施例 1〜 16によ つ て例 ₃ミさ れ、 第 5 の本発明は実施例 17〜 23によっ て例示さ れ る なお各実施例においてゲル瀘過はいづれも次の条件 で行なっ た： すなわちカ ラ ム： TSK- gei G4000Pt:,:し、5 溶 出液： 0.1 M N a C 1. 流速： 0. S m β / in i n、 カ ラ ム温度

: 40°C、 試料の注入量： 約 75

実施例 1

市販（フナコ シ薬品株式会社）のカルボキシ メチル ^ チン（カルボキシメチル化度： 糖残基当 り 1.0 ) の 5. Og0 を pH 6.0の 0.05M酢酸緩衝液（500mjS)に溶解後、 卵白 リ ゾチーム（ 12.5mg)を加え、 37 °Cで 2 時間反応させた― 反応液をエタ ノ ール（ 2 J? )中に力! 1 て祈出 し た沈殿特 を集め、 真空乾燥 して、 4.25_ε の低分子化力ルボキシ ヌ チルキチン を得た： この物質（3.9g)を 1\ aOH水第 Γ. 液（390rafl)に溶解後、 } ) ( ^で 6時間加熱還流 し +: 応液の PHを 8 に調整 した後、 遠心分離 し て得 れ る 二 清を タ ノ ール （ 1.9 β ) 中に加えて析出 し た沈殿物 を 集め、 真空乾燥 して、 式 （ m ) の物質 -一例と し.ての 1.91 g の部分的 X-ァ セチルカ ルボキ シ チルキ 卜 サ ン (以下、 単に多糖と言う こ と も あ る を得た こ の多 糖物質の分子量は、 デキ ス ト ラ ン を標準物質と し たゲ ル濾過法（G4000PWXLカ ラ ム） で約 】 X 10⁵であつ た

上記の多糖物質（ 200mg)を 0.5 % \aHC0,水溶液（' 20mi'； に溶解後、 ジ メ チルホ ルム ァ ミ ；、' （】 T .5ιηβ ') を力 Πえて ίί' 1 (' 一な多糖溶液と した 他方、 tert - ブ ト キ シ カ ルボ二 ノレ基 (hoc)で保護さ れたペプチ ド、 N-Boc-Phe-Phe-ΠΙ '.' -OH (94mg) を 1.5πιβの ジメ チルホルム ア ミ に溶解後、 X- ヒ ド □ キ シ ス ク シ ン ィ ミ ド （ 23πι_ε') と Λ ' -ジシ ク U へキシル力 ルボジイ ミ ド（37mg)を力 ϋえ、 4 ^C で 24時間 】「 反応させて活性エ ステ ルと し た _t こ の反応液の全量

上記の多糖溶液に加え、 4 °Cで 16時間反応させた . 反 応液をエ タ ノ ール（ 160ηιβ) 中に加えて析出 し た沈殿物 を集め、 真空乾燥 して、 200mgの部分的 >\ -ァでチ ル カ ゾレポ'キ シ メ チノレキ 卜 サ ン一 Gly— Phe— Phe— Boc複合 .： 〔式 20 ( Π )の誘導体の一例である〕 を得た

本複合体（150mg)を飽和 HCG.,水溶液（lSmfi) に溶^ 後、 無水酢酸（ 0.6m£ ) を加えて、 室潟で 17時問 "、 - ァ セチル化反応を行っ た 反応液を中和後、 二 タ ノ 一ル (80mC)中に加えて析出 し た沈殿物を集め、 真空乾燥 し 2Ϊ- て 、 154mgの \ - 7 セ チ ル カ ル'ポ シ 手 ル' ：- - 22

- Gly- Phe- Phe- Boc複合体 〔式（ I ：)の誘導体の -一例で . る〕 を得た： 本複合体の紫外部吸収スへ ク ト ルと ゲル 濾過溶出パタ ー ン を各々 、 添付図面の第 1 図と第 2 図 に示す 。 本複合体の \'- bocペプチ ド含量は、 紫外部 ( 258nm)の吸光度分析から、 14.1 % (重量％ )であっ た。

本複合体（130mg)を 0.5、、 HC1 に溶解後、 30で で 17時間反応させて Bocの脱離のための脱保 ϋ処理 し †: 反応液を中和後、 エ タ ノ ール（7ϋπι )中に加えて祈 出 した沈殿物を集め、 真空乾燥 して 、 Ι2ΐπΐίίの 、：-ァ ΐ' チルカルボキ シ メ チルキ ト サン- G] y-F'hf:-- Pnc- Η複合体

〔式（ 1 )の誘導体の別例である〕 を得た： 本複合 i 0, 紫外部吸収スぺク 卜ルとゲル濾過溶出パタ ー ン を各 々 添付図面の第 3 図 と第 4 図に示す； 本複合体のぺブチ ド含量は、 紫外部（ 258ηιη) の吸光度分析から、 11.3% (重量％ )であっ た：

力ルボン酸型の医薬化合物と し ての 〗 S 2mgの >' 、 ト レ キサ一 ト （MTX) を ジメ チルホルム ア ミ ド （ 4 mfi)に溶 解後、 X Λ· '-ジシグロへキ シルカノレボジイ ミ ド （82mg) を加え、 4 °Cで 17時間反応させ、 その反応液に、 (-ヒ ド ロ キ シ ス ク シ ン イ ミ ド （46mg)と ピ リ ジン （63 ） を力口え 室温で 5 時間反応させて の活性ニ ス ルを調製 し た - 他方 - 上言己の \ -ァセチル力ル-ボ *シ メ チルキ 卜サ ンー Gly— Phe— Phe— H複合体（50mg) ¾ 0.5 % ^ a !i ^ C , ?k ¾ ¾ ( 1 ΟιηΡ )に溶解後、 上記 ( ΜΤΧの活性ェ ス ；レを含む反 応液 σ: 5m Cを力 11えて . '？で 15時間反応さ せて該 W. 合体のペプチ ド鎖の X末端 /、 TXを結合さ亡た ら れた反応液を エタ ノ ール（4⁽)mP) !"4： に力【；えて析出 し た ¾ 殿物を集め、 真空乾燥 して .. 5 mgの '、- - Ύセチル力ルボ キ シ メ チ—ル キ 卜 サ ン一 Gly— Phe— Phe— MTX複合 W 〔式 :' I ： 5 の複合体の更に別の一例である〕 を黄色粉末と し て得 た。 本複合体の紫外 · 可視部吸収スぺク 卜 ルと ゲル濾 過溶出パタ ー ン を各々 、 添付図面の第 5 図 と第 G 図に 示す。 本複合体の MTX含量は、 紫外部（ ηη, : の吸光 度分析から、 11.5 % (重量％ )であっ た また 複台

10 体における Ρ Ζ ) (のモル比、 すなわち具体的には'、; Τ λ へ ブチ ド（モル比）は、 前出の計算式の（5) 式に従つ て、 0.93と算出された。

ま た、 本複合体について、 式（ ！ ）におけ る d ÷ tリ 値は、 前出の計算式の（1 )式に従っ て、 と概^さ

】 5 ォした _c

実施例 2

実施例 1 で得た部分的 -ァ セ チルカ ルボ シ メ チ ル キ ト サ ン （】 OOmg)を 1 % aHCO,水溶液（ΙϋπιίΟに溶解後、 ジメ チルホルムア ミ ド（ 6 mfi )を力 []えて均一な多糖溶液

20 と し た。 p-メ ト キ シベ ン ジルォ キ シ カゾレボニ ル基（_F !Z';

で保護されたぺプチ ド pMZ_G] y- Gly- Gly- 0H ( M im_£ を mftの ジメ 千ルホル厶 ア ミ ド に溶解後、 ヒ レ'' π * シ ス ク シ ン イ ミ ド （46mg) と H—ジン ク ロ へ シ ル カ んホ ジイ ミ ド（74mg)を加え、 室温で ；^ 時間反応さ せて ^

2 ニ ス千ル と し た . こ (7)活 .ニ ス子 ル t t- r: . - 1

o 量を上記の多糖溶液に加え、 1 Omfiのジ ゾ.チルホルム ミ ド を追加 した後、 4 て：で 23時間反応させた。 反応液 に 5 πιβの水を加えた後、 遠心分離した得 れ る上清を エタ ノ ール（ 150mfi) 中に加えて析出 し た沈殿物を实 真空乾燥 して、 120nigの部分的 ァセチルカ ルボキ シ メ チノレキ 卜サン一Gly— Gly— GJy— pMZ複合 〔式（ Π )の誘 導体の一例である〕 を得た

こ の複合体 UOOmg) を実施例 1 に準 じて .. 無水酢酸 で _ァセチル化 を行い、 \ -ァ セチル力 ルボキ シ 、ス チ . キ 卜サ ン一 G]y— Gly— Gly— PMZ複合体（97mg)を ' た 本 合体の紫外部吸収スぺ ク 卜ルと ゲル濾過溶出ノ タ 一 ン を各々 、 第 7 図 と第 8 図に示す： 本複合体の pMZ-ベブ チ ド含量は、 紫外部（272_nm) の吸光度分析から、 2「'.1 % (重量％ )であつ た。

1 本複合体（89mg)を実施例 】 に準じて酸処理によ {? 護基 PMZの脱離を行っ て、 7Smgの ァセチル力ルボ シ メ チルキ ト サ ン - Gly-Gly- Gly- Η複合体を得た： こ の 複合体の紫外部吸収スペ ク トルを第 図に示す 本複 合体のペプチ ド含量（B)は、 （3)式に従っ て、 11 .3 % と

20 算出された。

本複合体（50mg) を 1 % MaHC.0₃水溶液（5m£:i に溶解後 その溶液に実施例 1 と 同様に して作成 し た T の活性 ステル溶液（ 1 ιηβ)を加え、 4 で 21時間反応させた： 反応液をエタ ノ ール（25m )中に加えて祈出 し た沈毀

9 r を集 .. 真空乾燥 し て、 式（ ！ ）の複合体 '一^ L て

リ"

52m の \:-ァセチルカ ルボキ シ メ チル キ · ^ ン - G i： - G 1 '.· -Gly- MTX複合体を黄色粉末と し て得た： 複合体（7;紫 外 ' 可視部吸収スぺク ト ル と ゲル瀘過溶出パ タ ー ン を 各々 、 第 10図 と第 11図に示す 本複合体 MTX含量は 紫外部（307ηπι)の吸光度分析から、 21.4 % (重量％ )で あ つ †: ま た、 本複合体における P / λモ ル比、 すなわ ち具体的には ΜΤΧ /ベブチ ド（モル比）は、 （5)式に従つ て、 りと算出さ れた— 本複合体につ いて 、 式（ し に おける aパ a + b)値は、 （ 式に従っ て 、 ： ヒ ^出さ れ た

实施例 3

実施例 1 と 同様に 、 カ ルボキシ メ チル チ ン （ 力 ボキ シ メ チル化度： 糖残基当 り 】 .0)の .リ_£に卵白 リ ゾ チーム を作用 させて得 られた低分子化カ ルボ ^ " シ ル ^チン（4.28g)の 4. を アルカ リ 処理 し て、 分孑 £ が約 1 X 1 ― の部分的'、-ァ セチル 力 ボ - ン チ ル - ；-. サン（2.22g)を得た 。

本物質（ 200m_£)に、 実施例 1 と 同様の方法で、 ' - fio : -Gly-Phe-Gly-Gl y-OH (90mg)の活性ニ ステル を作用 さ せ、 部分的'、-ァセチルカ ルボキ シ チ ル - 卜サ ン - G — Giy— Phe— Gl:.— Boc複合体（2】ΰπ_:£)を得た後、 二 0) ^ n.;: を \- " セチ ル L て . \ - 下 セ ェ P- 力 ノボ * ン -;、 ェ )\. 卜サ

-Pne-G]y- oc¾合体： X , ΐ;

複合体の Bo' -ペプチ ド含量 、 ¾ ' : .'.inr - (■' ¾光度 か 、 '： ('重 ¹. ' - 実施例 1 と 同様の方法で、 こ の複合体 i】 60m - 1- 保護のため酸処理して、 、、-マセチル力ルボキ シ ニ !1 キ 卜 サ ン- G】 y-Giy - Phe- Gly- H複合体 Π44πΐ£、 ぺ フ ' 含量： 7.6 % )を得た。

こ の 120mgに MTX (55mg)の活性エステルを作用さ せて -ァ セチルカルボキ シ メ チルキ ト廿ン -Gly- Gly_Phe - Giy - MTX複合体（127mg、 MTX含量： 9.5 % )を得た： 本複 合 体 の M T X /ぺ プチ ド （モ ル 比） と 式 （ I ) に お け aハ + b)は、 各々 、 （5)式と（1 式から、 1 . 0.07 - 算出 さ れた。

実施例 4

実施例 3 で得た部分的 \-ァセチルカルボキ シ メ チル キ トサ ン （ 200mg)に、 実施 ¼' 1 と 同様の方法で、 \- Boc -Gly-Phe-Gly-Phe-OH (105mg )の活性エ ステ ル を 作 H] さ せ、 部分的 X-ァセチルカ ルボキ シ メ チル ^ 卜サ ン― -' -G J y-Phe-Gi% -Bocit ^ ft (19&mg) : ,

こ の 188nigを -ァセチル化 し て 、 -ァ セチル力ルボ キ シ メ チ レキ 卜 サンー F'he— Gly— Phe— Gly— Boc複合 ； 19 mg)を得た： 本複合体の N- BGC -ペプチ ド含量は、 紫 gP ( 258nm)の吸光度分析から、 4 · 9 % (重量％ )であつ た 実施^ 1 と 同様の方法で、 こ の複合体（160mg) を ¾ 理 に よ 脫保護 し て、 -ァセチル カ ルボキ シ チル 卜 サ ン一 I'hp— Gly— Phe— Giv— Π ί合 (i nOmg . ^ Ύ - '； 量： .0 % -; を得†:後、 こ の 50Mgに MTX (23mg) (T 活 二 ス千 ル を ^用 さ せて、 、 -マセチ ル カ ルボ シ チ：.' - トサ ン - Ph(?-G』y- MTX複合体 (46m, , ： Λ T s ： 4. δ % ) ¾：得た , 本複合体の Μ] λ ぺブチ Iモ ル J ·· L Λ -

( I )における aバ a + b)値は、 各々 、 ；式 ご ':.か 1.1、 （;.03と算出された ,

実施例 5

実施例 3 で得た部分的 -ァセチル力ルボキ ン メ チル キ ト サ ン （lOOmg)に 、 実施例 1 と 同様の方法で、 - BGC — Phe— Gl V— Phe— Gュ y— OH (δ4ιη_£)の活' ニスニ { 用 さ せ、 部分的 -ァセチルカ ルボ ン チ キ

一 Phe— Gly— Phe— Boc複合体（l ()9m_S ; を た - この 9()nigを -ァセチルイ匕 し て、 -ァセチルカノレボキ シ メ チノレキ 卜 サン一 Gly— Phe— Gl — Ph 一 Bor複合 ^ ( bmz) を得た。 本複合体の \- Boc - ベブチ ド含量は、 紫外き:: ( 258ππ の吸光度分析か ら、 12.7 % (重量 であっ たό 実施例 1 と 同様の方法で、 この複合体（72_ffig i を酸 fe ¾

によ リ脱保護 し て、 \ -ァセチル カ ボ - ン ヌ 二 - レ > -Gly-Phe-Gly-Phe-Hl¾ ^ (63mg , ベプチ ！ 量 ： 10.4 % )を得た：

この 50mgに MTX (23πι_ε) の活性ニステル を作用 させて 0 \—ァ セチルカ ルボ シ メ チ ルキ ί、 サ ン -Gl -Phe-GI ■ -

Phe- T) (複合体（49mg、 .MTX含量： 9.4 % ) を得た— ； 複 合 体 の Μ Τ ) ベ ブチ Κ (千 ル 比、 ヒ 式 ：' 1 ) に お

.' ' ':':. + b)は， 各々 、 (5)式と （ 式 ':: .9.;、 C O"と 出さ れた .

Γ ¾施 実施例 で得た部分的 \ -ァセチ .力 ボ シ チ キ 卜 卄 ン 0り！! i£)に、 実施例 ： と 同様 方法で、 ·' - 。、

- Aia— Gly- Gl:.'- Gュ - 0iS (180mg)の活性二 ステル を作用 さ せ、 部分的 \ -ァ セチル カ ルボキ シ ス チル キ ''、 サ ン - Gュ， - Gly - Gly - Ala - Boc複合体（2] 8mg)を得た後、 二 の l 50m_C を \ -ァセチル化 し て、 ：\-ァセチル力 ルボキ シ ス チル * 卜 サ ン一 Gly— Giy— Gly— A丄 a— Boc複合 .； (] -13mg ) を得†一 - 実施例 1 と 同様の方法で、 こ の複合体 iOm を酸 理 し て 、 ：\ -ァ セ チルカ ル ボ キ シ メ チル - ン - i；. - G] y— Gj y— Aia- H複合体 (120m_t)を得た：

こ の 50mgに MTX (46m の活性ェ ス ル を作用 さ せて -ァセチルカ ルボキ シ メ チルキ 卜 サ ： - -G H-G -GI; - Ala- MTX複合体（55mg、 MTX含量： 21.5 を た . 本複 合体の紫タ · 可視部吸収スべ ク 卜 ル と ゲル ¾過 ¾ :δ タ ー ン を各々 、 第 12図、 第] 3図に示す—

実施^ 7

力 ルボキ -ニ メ チルキチ ン （力 ルボ * シ チ ル化度 ： 糖残基当 り 0.7)を ¾ いて 、 実施例 1 に準 じ て調製 した 分子量が約 1 X 10^s の部分的 -マセ チ ル 力 ルボキ シ ^U チルキ トサ ン （45mg) を、 C .1Mほ う酸緩衝液（pii B.0)

( 2 mfijに溶か して多糖の溶液を炸る 他方 - ス シ ニ ノレ— Ala— Ala— A 1 a— P—二 K Ο ァ ニ ド （45m を ジ メ チ； ί ホ ルム 7 ミ （ 2 mf ) に溶解後、 ： V - ご i コ - シ ス. ク ン ィ ミ ド （12mg) 、 ；\ , X '-ジシ ク ロ へ キ シ ルカ ジ ノ ミ ί' i mr ¾力:：え . 室温で 1 時間、 そ 梭 4 で S ίί 反応させて二 I、 ロ アニ リ ド成分 と結合されたべフ ド の活性エ ステ ルを調製 し た： 二の反応液 溶^を ^ > 留去 し 、 残渣を イ ソ プ ノ ノ ール で洗っ た後、 ジ ゾ チ ルホルム ア ミ ド （G .8mi に溶か し た， こ ； h を 上記の多 5 糖溶液に加え、 室温にて 40時間反応させた :. 反応液に エタ ノ ールを加えて、 析出 し た沈殿物を集め、 真空乾 燥 して 、 46mgの部分的 \ -ァ セチル カ ルボキ シ メ チル ^ ト サ ン - Sue- A ] 3— A la A丄; rp-二 卜 ！ ァ ニ ド複合 ^を /二 ―

Η» さ ら に本複合体（26mg ; を取 り 、 飽和 ^HCO.,水溶 ¾

nifi)に溶解後、 無水酢酸（ 14m£)を加えて、 4 '：で： Β 間反応さ せて \-ァセ チル化 し た： 反 液を 液 を水 と し て透析 し た後、 エ タ ノ ール中 に力 Πえて 、 ί 出 し ¾ 殿物を真空乾燥 し 、 ア セ チル 力 ルボ ノ ). 千 I ^ ：、

1 ·^Γ サ ン - Sue- Aj a_Ala - Α] 3 - 二 ！、 C ァ ニ り ド ^に 5 i:.r

を得た 本複合体の紫外部吸収スへ ク ル と ゲル i 溶出パタ ー ン を各々 、 第] 4図 と第 15図に示寸， ( 体の - Sue- A la- Ala- A 二 卜 口 ァ ニ ド含！： .

ninの吸光度分析から、 3.9 % (重量％：)であつ た - リ 実施例 8

実施例 了 と 同様の方法で . 部分的' -ァセチん 力 ルボ シ ^ チル ί、 サ （4 i_ni£ (.一 - ス " シ 二 ル - A丄 a- A i-.Aia-p-二 ト ロ ア 二 ：、' (35n_l£： 活 二 ス 千 /· を ' 用 させ、 部分的 マ セチルカルボ シ ノ ；、 サ . ~ - -r-Ai;;-A ! _; - ' - 3 , _¾ -： - - ，'二 リ ^ {■ {T- ： - -] , を '得た：

さ ら に 、 こ の 3(>_mgを用いて、 実施^ 7 と 同様 Λ力法 で、、-ァ セチ ル化を行ない、 ？、-ァセチル力 ルボキ シ メ チ レキ 卜 サ > - S u c - A i £j - A 1 & - V a 1 - A i a - Γ - 二 i、 C ァ ニ リ ド 複合体（22mg) を得た _r 本複合体の- S -AL·'₁-Aia-V_a—l -

Ala - p-ニ 卜 ロ ァニ リ ド含量は、 215nmの吸光度から、 4.5% (重量％ )であつ た。

実施例 9

実施 1 で得た部分的 ア セチル ボ シ キ トサ ン （50mg)を 0.25 % 3!!·::0」水溶液（ 7 mi ¾ ^ ^ ジメ チルホルム ァ ミ ド （ 6 ) を加えて均一 多糖 ¾ 液と した。 別に、 保護基 B。cで保護されたフ ニ 二 ；：.. ァ ラ 二 ン N-Boc-Phe-OH (265mg)を 3 miiの ジ メ、 チル L、 ア ミ ド に溶解後、 X-ヒ ド ロ キ シ ス ク シ ン ィ ミ ド と、、 Λ· ジシ ク ロ へ キ シゾレ力 ルボジィ ミ ド （ 19 Orag；!を力え、 4 °Cで 20時間反応さ せて活性エ ステ ル と し た . 二 の活性ェ テルを含む反応液の 1 mi?を上記の多糖溶^ に加え、 室温で 20時間反応させた： 反応液をェタ ノ 一 ル（35mS)中に加えて析出 した沈殿物を集め、 真空乾燥 して 51 mgの部分的 X-ァセチルカルボキ シ メ チルキ ト サ ン -Phe-Boc複合体を得た 本複合体の - Bc:r- フ ェ 二 ；: ァ ラ ニ ン （Phe-Boc)含量は紫舛部 (?58nni'iの ¾光度^定 力、ら 14.4 % (重量％ )であっ た：.

実施例 10

实施^ 3 に示 し た低分子化カ ルボ - ： - K - - ： — 一

(4. 1 g )をアルカ リ 処理 して得た反応液を PHS .5に調整 し た。 その後、 その反応液を遠心分離 し て得ら る上 清を 4.4倍量の メ タ ノ 一ル中に加え、 析出 し た沈 物 と上清に分離 し た。 こ の上清にエタ ノ ール （30 _ni】 ノ を 加えて析出 した沈殿物を集め、 真空乾燥 し て、 分子量 が約 2 X 10⁴の部分的 - ァセ チルカ ルボキ シ メ チ キ トサ ン （0.54g)を得た _c

本物質 UOOmg) に、 実施例 と 同様の方法で、 保該 ぺプチ ド X— Boc-Phe-Gly-Phe-G J y-OH (2! 7m_£ を ；用 せ、 次いで無水酢酸で -ァセチル化 し て、 ·',_ァセチ 1 カゾレポ'キ シ メ チノレキ ト サ ン -Gly-Phe-Gly-Phe- b DC複 ^ 体（98mg、 N-Boc-ぺプチ ド含量 ： 28 % )を得た _c こ の複 合体（80mg)を実施例 1 と 同様の方法で酸処理に よ り脱 保護 して、 -ァセチルカノレボキ シ ^ チル ト サ ン - G ] -Phe-Gly- Phe-H複合体（46mg、 ベブチ ド含 £ ： % ) ¾ 得た。

こ の複合体の 35mgに メ ト ト レ キサ一 卜 （ΜΤλ； f 69rag) の活性エステルを実施例 】 と 同様に作用 させて、 λ-ァ セ チソレ カ ゾレボ キ シ メ チルキ ト サ ン - G ] y - P h e - G丄 y - P h e -MTX複合体（35rag、 MTX含量 ： 19 % を得た。 本複合体 の M TX /ベプチ ド（モノレ比） と 式（ I )に おけ る a / a + b ) は、 各 々 、 前出 の計算式の（5)式 と （1)式か ら（ .92、 0.〗 9と算出された

実施例 11

実施例 10に示 し た、 分子 が約 2 X〗 のき C分的 ''· - ァセチルカノレボキシ メ チルキ トサン （' 5 ύπ;_ε ¾水に ί , 2 Γ. ml i-ジメ チルスルホキ シ ド（] .2δπι1) - ジメチルホル厶 ァ ミ ド（ 8 ml)の混液に溶解後、 実施例 1 と 同様の方法 で、 .、一 S u c c 1 n y J _ ϋ 1 y一 P h e一 G 1 y一し y c 一■>一 oし ：'一い一†. B υ ( 169mg)の活性エステルを作用させて部分的 - ァセチ ノレカソレポ'キ シ メ チノレキ トサ -Suc-Gl -Phe-Giy-Lys ( ί - -Boc)-0-tBu複合体を得た。 次いで ァセチル化 と酸処理によ る脱保護を行ない、 ァセチル力ルボキ シ メチノレキ 卜サン 一 Suc-G丄 y— Phe— GJy— Lys-H複合 .；（4

4

mg)を得た。 2

この複合体（35mg)に、 メ ト ト レ キサ一 卜（MTX) (23mg; の活性エステルを作用 させて、 -ァセチルカルボキ シ メチノレキ トサン ' 一 Sue— Gly— Phe-Giy-Lys— MTX複合本 mg、 MTX含量 ： 1.5% ) を得た。 本複合体の紫外 ' 可視 部吸収スペク トルとゲル濾過溶出パタ ーン を各々 、 第

20図、 第 21図に示す - 実施例 12 実施例 丄 と 同様の方法で、 カルボキシ メチルキチン (カルボキシメチル化度 ： 糖残基当た り 0.7) 5. Ogに卵 白 リ ゾチーム 25mgを作用 させて低分子化カルボキ シ チルキチン（4.37 g )を得た。 この 3.7gをアル力 リ ^理 ί一 ± Π ¾R

(デキス 卜 ラ ン標準）の部分的 \ -ァセチルカルボキシ メ チノレキ 卜サン（ 2.58 g )を得た こ の部分的ヽ - ァ セ チ ゾレ 力 ，'レボ - シ 手ノレ ^ ；、 ン (300mg)に、 実施例 1 と 同様の方法で、 - Boc-Plie- Gj_y - OH (141 nig ) の活性エステル - ヒ ド ロ キ シ ス ク シ ン ィ ミ ドエステル） を作用 させて 、 部分的. \ -ァセ チルカ ル ボキ シ' メ チノレキ 卜 サ ン -Gly— Phe— Phe— Boc複合 ft (340mg) を得た。 この 300mgを無水酢酸で ァセチル化 して、 - ァ セ チゾレカ ノレボ キ シ メ チノレキ ト サ ン - G 1 y - P h e - P h e - Boc複合体（ 298mg、 .\ - Boc -ペプチ ド含量 ： 12·0 % )得た ₌ こ の複合体（ 1 OOmg) を、 実施例 1 と 同様の方法で、 酸処理によ り 脱保護 （Boc基の脱齄） し、 ：、-ァセチルカ ノレボキシ メ チノレキ 卜 サ ン一 Gl — Phe— Phe-H複合体（8&nig) を得た。

こ の複合体（75mg) を〗％ .\aHC0₃水溶液（7.5ml)に溶 解 し、 メ ト ト レ キ サ一 卜 （MTX) (75mg)の活性ニ ステル を加えて、 4 でで 24時間反応して複合体のぺブチ ドの X末端へ M TXを結合させた。 反応液をエタ ノ ール（4 Oml 中に加えて析出 し た沈殿物を集め、 真空乾燥 し て、 \ - ァセ チゾレカ レボキ シ メ チノレキ 卜 サ ン -Gly-Phe-Phe- Τλ 複合体（75mg、 MT) (含量 ： 10.1重量％ ) を黄色粉末と し て得た。 本複合体の紫外 · 可視部吸収スぺ ク ト ル とゲ ル濾過溶出パタ ーン を各々 、 第 22図、 第 23図に示す 実施例 13

力 ルボキ シ メ チルキチ ン （力 ルボキ シ メ チル化 g ： 0.7) 2.0gを PH6.0の 0.05M 酢酸緩衝液（ 200 ml )に溶解 し、 卵白 リ ゾチーム （ 2.5 mg) を加えて 、 37て：で ュ 時間 80分 反応 し て低分子化させ、 更に実施例 】 と 同様に . Λ¾' Hで処理 して、 分子量約 3 X 10^s (千'キス ト ラ ン標準） 部分的: -ァセチノレカルボキシメチルキ トサン（】 .72 g ) を得た。 本物質（150mg)を ϋ·5% ,NaHC0₃水溶液（15m】J に溶解 し、 実施例 1 と 同様の方法で、 Boc- a- G]y- Gly-Gly-0H(135mg) の活性エステルを作用させて部分 的 ァセチルカゾレボキシメチルキ トサン -Gly- Gly-G]y -Ala-Boc複合体（150mg)を得た。 その 140mgを無水酢酸 で λ -ァセ チル化 し て、 Ν -ァセチルカルボキ シ チル キ 卜 サン - G 1 y - G 1 y - Gュ y - A 1 a - B o c複合体 U 54 m _ε：) を得 た。 更に、 その 130mgを酸処理によ り Boc基を脱保護 し .

X-ァセ チルカルボキ シ メ チルキ ト サン - Gly-Giy_Cl:、 -Ala- H複合体（106mg)を得た。 この複合体（95mg)を 1 % :aHC0₃水溶液（4,8ml)に溶解 し 、 MTX(86mg)の活性二 ステルを作用させて、 X-ァセチルカルボキシ メ チルキ 卜サン - Gly - Gly - Gly - Ala - MT) (複合体（88mg、 MTX含量 ：

13.7 % )を得た。

実施例 14

実施例 12で得た部分的 -ァセチルカルボキシ メチル キ トサン（150mg)に、 実施例 1 と 同様の方法で、 ： V- Boc -Gly-Gly-Gly-0H(109mg)の活性ェステルを作用させて 部分的 ァセチルカルボキシメチルキ トサン -Gly- Gly - Gly - Boc複合体 (167n!g)を得た _c この 150si を無水 酸 で X-ァセチル化 して、 -ァセチルカルボキシメ チルキ 卜サン- Gly- Gly - Gly - Boc複合体（153mg) を得た 更に その 130mgを酸処理によ リ Boc基を脱離 して、 マセチ ル カ ルボ キ シ メ チノレキ ト サ ン - G 1 y - G丄 y - G i v - H複合体 (UOmg)を得た こ の 10り mgに MTX (90mg ' の活性ニ ス千 ル を作用さ せて 、 -ァセ チルカルボ キ シ メ チルキ ト サ ン- Gly— Gly- G丄 y-MTX複合体 （lllm_£、 MTX含量 ： 7 1重 δ 量％ )を得た - 実施例 15

実施例 12で得た部分的 ァセチルカ ルボ キ シ メ チル キ ト サ ン （ 150mg)に、 実施例 1 と 同様 方法で、 - Boc 一 A丄 a— G 1 y— G：1 y— Gュ .'一 0 H (】 35 m g ) の活 f土工 ス 子 ん を .作用 (, さ せて、 部分的、-ァセチノレカルボキ シ メ チル ^ ：、 サ ン

- Gly - Gly - Gly-i a - Boc複合体 (162rag)を得た , 二 の 1 0 mgを無水酢酸で :-ァ セ チル化 し て 、 ·\-ァセ チ ル力 ルボ キ シ メ チノレキ 卜 サン一Gly— Gly-Gly— Aia— Boc複合体 (157 rag)を得た。 更に、 そ の 13 Omgを 酸処理に よ り Boc基 をΓ> 脱離 して、 .\-ァセチルカノレボキ シ メ チル 卜 サ ン - G 1：-

— Gly— Gly— Ala— H複合 ：（114mg を得た： 二 の lOOragに MTX(90mg)の活性エステル を作用さ せて 、 \ - ァセチル カルボキ シ メ チルキ ト サ ン- Gly-Gly- G]y- Ala-MTX複合 体（lllmg、 MTX含量 ： 17.4重量％ )を得た .

0 実施例 16

実施例 12で得た部分的 !V-ァセチルカルボキ シ メ チル キ ト サ ン（200m_S)に 、 実施^ 1 と 同様の方法で、 \ - Boc - G 1 - P h e - G 1 y - G 1 - 0 H ( 87 m g ) の活 ttエ フ、亍 ル を作用 さ せて 、 部分的 X-ァセ チルカ ルボ キ シ メ チル - ''、 サ ン." 一 Gly— G丄 y— Phe— — Boc複合体（206_Dig)を得た 二 mgを無水酢酸で ァセチル化 して、 X -ァセチルカ ルポ キ シ メ チ レキ ト サ ン - Gly-Gly-Phe— G丄 y— Boc複合体 (92 mg、 - Boc-ペプチ ド含量 ： 7.4 % )を得た。 更に、 その 80m を酸処理によ り Boc基を脱離して、 - ァセチルカ レボ キ シ メ チノレキ ト サ ン一 Gly— Gly— Phe-Gly-H複合体

(71mg) を得た。 こ の 50mgに MTX (45mg)の活性エ ステル を作用 させて、 N: -ァセチルカルボキシ メ チルキ 卜サ ン -Gly - Gly - Phe - Gly - MTX複合体 (50mg. MTX含量 ： 7·0 % ) を得た - 実施例 17

実施例 12で得た部分的 -ァセチルカルボキシメチル キ ト サン 一 Gly— Phe-Phe-Boc複合体（力ゾレボキ シ メ チリレ ィ匕度 ： 0.7、 λ^: - B 0 c -ペプチ ド含量 ： Ι Ζ . 2 % ) ΰ) 5 U n, gを 0.1 % aHC0₃水溶液（2.5ml) に溶解 し、 2-0-モ ノ メ ' キ シポ リ エチ レ ン グ リ コ ーノレ- 3， 5-ジク ロ ロ - S- 卜 ア ジ ン （分子量 5000、 シ グマ社製）（以下、 PE「_3l と 唣記） (80mg)を加えて、 0 °Cで 4 時間反応 した , 生成された 部分的 X-ァ セ チルカ ルボキ シ メ チルキ ト サ ン -PEGi - Gly-Phe-Phe-Boc複合体を含む反応液に水（ 2.5m ] )、 炭 酸水素ナ ト リ ウ ム（500mg)、 無水酢酸（200^) を加え、

4 で-で 18時間反応 して -ァセチル化 し た。 反応液を水 に対 して透析 し 、 透析内液を 3 nilに濃縮 し 、 ァセ ト ン (90ml)を加えて析出 した沈殿物を集め、 塩化メ チ レ ン で洗浄 し、 真空乾燥 して、 ^τ -ァセチルカルボキシ ^手 レキ 卜サ ン 一 PEG^ -Gly-Phe— Phe— Evoc複合体（72 £ . ΡΕ 含量 ： 37 % )を得た„

こ の複合体（60mg) を 0·5\: HCl (:;.5ml)に溶解 し 、 ： K' °Cで 16時間反応 して Boc基を脱離 し 、 反応液をェ タ ノ —ル-エーテル（ 1 ： 2 )の混合溶媒（ 60π! 1 ) 中 に加えて 析出 した沈殿物を集め、 塩化メチ レ ンで洗浄 し、 真空 乾燥 し て 、 I -ァ セ チ ノレ カ ノレボ キ シ メ チ ル キ 卜 サ ン - PEd - Gly - Phe - Phe - Η複合体（44mg、 PEG含量 ： 26 % )を 得た。 本複合体のゲル濾過溶出パタ 一ン を第 24図に示 す。 X-ァセチルカルボキ シ メ チルキ 卜 サ ン- PEG: -Gl - Phe - Phe-H複合体（35mg)を 1 % HC0₃水溶液（ 1 · 75 に溶解し、 MTX(16mg)の活性エステルを加え、 4 てで ] 8時間反応 した。 反応液を水に対 して透析 し 、 透析内 液を 3 mlに濃縮 し、 ァセ ト ン（60ml)を加えて析出 し た 沈殿物を集め、 塩化メ チ レ ンで洗浄 し 、 真空乾燥 し て、 式（ X )の誘導体の一例 と して、 -ァセチルカ ルボキ シ メ チノレ キ 卜 サ ン- PEGユー Gly-Phe— Phe— MTX複合休； (29πι_£ . PEG含量 ： 21 % 、 M TX含量 ： 7.9 % )を黄色粉末 - し て得 た。 本複合体の紫外 · 可視吸収スぺク トルと ゲル濾過 溶出パタ ー ン を各々第 25図、 第 26図に示す _ε

実施例： 1 S

実施例 12で得た部分的 ·-ァセチルカルボキ シ メ チル キ ト サン 一 Gly-Phe-Phc-Bcc ^合 ^ (力 ，¹レボキ シ メ チ J ィ匕度 ： 0.7、 -Boc-ぺブチ ド含量 ： 】 2 ' G >υιηι,を G.1 % aHC0₃水溶液（2.5ml) に溶解 し 、 実施例' , Tで ^ いた PEG ( 12mg )を加えて、 実施例 Πと 同様 方 £で 、 - Ύセチルカルボキシメチルキ 卜サン -PEGi -Gly-ト rn>- Phe- Boc複合体 （49mg、 PEG含量 ： 8.0 % )を得、 こ の 40 mgを用い、 Boc基を脱保護して、 、' - ァセチルカルボキ シ メチゾレキ 卜サン 一 PEGi—GJy— Phe— Ph_fミ一 H複合体 ί33ηι_ε) を得た。 ^:-ァセチルカルボキシ メチルキ トサン- PEG - Gly-Phe-Phe-H複合体（21mg) を 1 % NaHC0₃水溶液（ i .1 ml) に溶解し、 MTX(9.5mg) の活性エステルを加えて、 4 °Cで 18時間反応 した。 反応液をエタ ノ 一ル（ Π m J )中 に加えて析出 した沈殿物を集め、 塩化メチ レ ン で法浄 し 、 真空乾燥 して、 λ·-ァセチルカルボキンメ チル 卜 サ ン - PEG_a - Gly - Phe - Phe - MTX複合体（17mg、 PEG含量 ： 6.1 % . MTX含量 ： 8.5 °/ό )を得た _t

実施例 19

実施例 12に準じて合成した部分的 -ァセ チルカ ルボ キシ メチ レキ 卜サ ン 一 Gly-Phe— Phe— Boc複合体 (力 レボ キシ メチル化度 ： 0.7、 \ - Boc-ペプチ ド含量 ： 14.8 % ) の 50mgを 0, 1 % NaHC0₃水溶液（5ml ) に溶解 し 、 PEGi (200mg) を加えて、 実施例 17と 同様の方法で、 -ァセ チノレ カ レポ' キ シ メ チノレキ ト サ ン一PEG — Gly— Phe-Phe— Boc複合体 (l Omg. PEG含量 ： 58 % )を得た。 こ の 90ιη_ε を用いて、 その Boc基を脱離して、 -ァセチルカルボ キシメ チ，'レキ トサン一PEC-]— Gly— Phc-Phc— H複合体 ( 67¾£ PEG含量 ： 45 % )を得た。 λ·-ァセチル力ルボキシ ス チ /レ キ 卜サン- ΡΕ - Gly - Phe - Phe - Η複合体（50mg:)を用 いて、 実施例 17 と 同様に して MT) (の活性エ ステル と 反応さ i て 、 N-ァセ チノレカルボキ シ メ チルキ ト サ ン -PEG - G J · - Phe - Phe-MTX複合体 (42mg , PEG含量 ： 3 ¾ . MTX含 ： 6.3 % )を得た。

実施例 20

実施例 16に準 じ て合成した部分的 N-ァセチルカ ルボ キ シ メ チルキ ト サン - 6】 -6丄 '-?1^-61 -80₍：複合体（力 ルボキ シ メ チル化度 ： 0.7、 N-Boc-ぺプチ ド含量 ： 7.9 % )の 25mgを 0.1 % 水溶液（ 1.25π ； に溶解 し 、

PE (50rag)を加えて 、 実施例 ] 7と 同様 Λ方法て 、 、-一'' セ チルカノレボキ シ メ チルキ ト サ ン - PEG - G】 - G i y- 'i' -

Gly-Boc複合体（42mg、 PEG含量 ： 42 % )を得た - - こ の :; 0 mgを用いて、 そ の Boc基 を脱離 し て 、 ' - ァ セ チル カ ル ボキ シ メ チルキ ト サ ン ― PE(^ - Gly- Gly-Phe-Gjy- H複合 体（ 20mg)を得た _c -ァセ チルカルボキ シ メ チル ^ ト サ ン - PEGrG丄 y - Gly - Phe - Gly - H複合体（]5π"_;)を用 いて、 実施例 Πと 同様に し て ΜΤΧの活性ェ ステル と 反応さ せ、 ァセチノレカルボキ シ メ チノレキ ト サ ン- PEG₂ - Gly- GJy- Phe - Gly - MTX複合体（llmg、 PEG含量 ： 27 % , ： «Π'Χ含量 ： 6 · 1 % )を得た：

実施例 2 ]

実施例 12に準 じて合成 し た部分的 X-ァセチルカルボ キ シ メ チルキ ト サ ン - Gly- Phe- Phe- Boc複合 ^ (力 ルボ キ シ メ チル化度 ： 0.7、 - Boc-ぺプチ ド含量 ： 14.6 ) の 100mgを 0.5 % aHCO,水溶液（ 10m】 ) に溶解 し . ジ ゾ、 チルホルム ア ミ ド（ 8.5m」） を加えて ¾一な溶 'と . だ こ の溶液に、 メ ト キ シポ リ オ キ シエチ レ ンカ ルボン酸 (分子量 ： 5000、 シ グマ社製） （以下、 PEG_C。 と 唣記）の 1 OOmgの活性エステルを加えて、 4 °Cで 18時間反応さ せて前記の複合体の糖単位の -ァセチル化されていな いア ミ ノ基へ PEG_C。を結合させた。 反応液を水に対 し て透析 し、 透析内液（27ml)に炭酸水素ナ 卜 リ ゥ ム（3.6 g )、 無水酢酸（2. lml)を加えて、 4 °Cで 20時間反応 し て部分的 X-ァセチルカルボキ シ メ チルキ 卜 サ ン- PEG_C。

-Gly-Phe- Phe-Boc複合体を？、 -ァセチル化 した。 反応液 を水に対 して透析し、 透析内液を 6 mlに濃縮 し 、 マセ ト ン （120ml) を加えて析出 した沈殿物を集め、 塩化メ チ レ ンで洗浄し、. 真空乾燥 して、 ァセチルカルボキ シ メ チノレキ 卜サン一 PEG_co— Gly— Phe— Phe— Boc複合体 (109 mg、 PEG含量 ： 9.0 % ) を得た こ の 50mgを用 い、 酸処 理によ り それの Boc基を脱離して、 ァセチルカルボ キ シ メ チ ノレ キ ト サ ン— P E G _c。一 G 1 y— P h e - P h e— H複合体 (35mg、 PEG含量 ： 4.7 % )を得た。 ί\-ァセチルカルボキ シ メ チノレキ 卜 サ ンニ PEG_co— Gly-Phe— Phe— H複合体 (25mg) を用いて、 実施例 18 と 同様に して、 MTXの活性エステ ルを反応さ せ、 IV-ァセチルカルボキ シ メチルキ 卜卄 ン -PEGco-Gly-Phe-Phe-MTXii ^ίφ: (25mg. PEG含量 ： . δ %、 Μ ΤΧ含量 ： 9.1 % ) を得た。

実施例 22

実施例 1 と同様の方法で調製 した部分的 X-ァセチル カ ルボキ シ メ チルキ 卜 サ ン （300mg ' に、 実旌^： 1 t 様の方法で .\-Boc- Gly- Giy- Gly-0H (289mg) の活性ェ ス テルを作用 させて部分的 -ァセチルカ ルボキ シ メ チル キ ト サ ン -Gly-Gly- Gly-Boc複合体（334m_£)を得た _r この 125mgを水（] 2ml)に溶解 し 、 3.3 % メ タ 過ヨ ウ素 酸ナ ト リ ウム水溶液（ 5 ml)を加えて、 遮光下、 室温で 4 時間反応させた。 こ の反応液を水に対 して透析後、 透析内液を約 12mlまで濃縮 し、 水素化ホ ウ素ナ 卜 リ ウ ム（30mg )を加えて、 一晩反応させた。 こ の反応液の PH を 4 . 5 に 下 げ た後、 δ . ΰ に 上 げ、 次 い で ェ ' ノ 一ル (60ml)中に加えて析出 し た沈殿物を集め、 真空乾燥 し て、 一部の ピラ ノ 一ス環が開環 し てポ リ オ一ル化 し た N - ァセチルカルボキ シ メ チゾレキ ト サ ン- Gュ - G h - G 1 V - Boc複合体（77mg)を得た。

こ の複合体（60mg)を実施例 丄 と 同様の方法で酸処理 して、 Boc基を脱離させ、 ボ リ オール化 ,\ - ァセチルカ ルボキ シ メ チルキ ト サ ン - Gh'- G』 - G」 - H複合体（46rag を得た。 こ の複合体（35mg) に MTX (46mg)の活性エ ステ ルを作用 さ せて、 ボ リ オ ール化 \:-ァ セ チルカ ルボキ シ メ チルキ ト サ ン -Gly-Gly- G] y-M 複合体（42mg、 MTX含 量 ： 29 °/。） を得た。 本複合体の紫外 ， 可視部吸収スぺ ク トル と ゲル濾過溶出パタ ー ン を各々 、 第 27医、 第 2δ 図に示す。

実施例 23

実施例 丄 と 同様の方法で調製 し た部分的 ^γ-ァセチル カルボキ シ メ チルキ ト サ ン (25yn_lt：;. に、 实施 ': -: と ^ - i 25 o 様の方法で λ - Boc - Gly - Phe - Phe-Gly - OH (527mg) (>活 エステルを作用 させて部分的 -ァセチルカルボキシ メ チノレキ 卜 サ ン一 Gly-Phe— Phe— Gly— Boc複合体 (327mgj ¾ 得た。 こ の複合体（200_mg)を実施例 22と 同様の方法で、 過ヨ ウ素酸で酸化し、 次いで還元して、 ボリ オール化 -ァ セ チ ルカ ルボキ シ メ チルキ 卜 サ ン - G ] y - P h e - P h e - Gly - Boc複合体 （113rag、 N - Boc -ペプチ ド'含量 ： 28 % ) を得た。

こ の複合体（60m_g)を実施例 ュ と 同様の方法で酸^理 0 して、 Boc基を脱離 し、 ポリ オール化 - ァセチ；レカ ル ボキ シ メ チノレキ 卜 サ ン - Gly— Phe-Phe-Gly-H複合体 (36 mg、 ペプチ ド含量 ： 24 % ) を得た - こ の 3 Omgに M IX ( 55 mg)の活性エステルを作用 させて、 ポリ オ一ル化 _\ - ァ セ チ；レ力 レボキ シ メ チゾレ キ 卜 サ -Gly-Phe-Phe-G] -MTX複合体 （22m_£、 MTX含量 ： 19% )を得た： 本複合体 の- M TX /ぺプチ ド （モル比） と式（ 21)に おけ る a / ( a -t- L- + c)は、 各々 、 前出の計算式の（5)式と （lj式から 0.93 0.19と算出さ れた。

以下 に記载す る実験例 1 〜 4 に よ っ て本発明の式 ( 1 )、 式（X)および式（XOの誘導体の諸性質を試験し た。

宝 Sfe伊 I }

〔試料と方法〕

実施例 ：！ で得られた ァセチルカルボ シ メ チル 卜サ ン—Gly— Phe— Phe - MTX複合体と実施 2 で得 ら ήた

1

マ ル カ ルボキ シ チ ル キ '' せ i C 複合体を夫 に生理^塩水に溶解 し て、 ， ' (ん試 ¾液 2 種を準備 した . マ ス 匹 J: 採 ¾ し た 血液を遠 ^ て得 られた血 ¾ ( 0 i ' に 、 l 各試料溶液 ( 10/zfi ) を加え .. で反応さ せた ： 径 ^ 的に反応液を取 り 、 除蛋 ¾ し た後、 ゲル ^過≤ ム： TSK ge ] G4000Pk_xし、 ί容 ： ；' .〗 M \sC： 、 ¾ ： O. Smi'/mi r: , カ ラ ム温度： 4G ^CC、 検出： 307nm：: i'：- 紫外 ¾ ； で分析する こ と に よ り 、 校合 - ' '

5

在 し ている ΜΐΧの血漿中での残 3存 % を求めた 〔結 果〕 結果を第] 6図に示す： 第 16図は式 U )で さ 複合体 と し て存在 している ΜΤλ (?) .漿 での残存バ一 セ ン トの経時変化を示す グラ フであ る m で ΡΠ

15 は'、-ァセ チ ル力ルボキ シ メ、 チル キ ；、 サ ン - G 1 -ド - ' - Τ X複合体、 □印線は \ -マ セ チ 力 ルボ ン チ -- 卜 サ ン - Gly- Gly - Gly - ΜΤΧ複合体につ いての結果 ：^寸 第 16図よ り 、 上記 2種のいずれの 合体も血液 ^で 殆ど分解を受けず、 安定である こ と が認め る -

20 実験例 2 〔試料と方法〕 実施例 I で得 れ た -ァセチルカ ルボ キ シ メ チ ル 卜 卄 ン— Gj y - P e-Phe— MTX 合 rog) と実施 f¾ 2 で ら ォ た、.-ァ セ チル カ ルポキ シ ゾ 手 ル ^ ；- - G： . - >

'； r -；:：： - 複合体 ' in ) を夫 ΐ ：: 0Π ' ' ゾ千一二 の存在下および非存在下で M酢酸緩衝液（ P π e . ··.、 ： ホ：;7 で反応させ、 1. 3、 および 13 Βφ間後 液を突験例 1 記載と 同 ル濾過法によ i 分圻亡 ： と に よ 、 \ - セ チル カ ルボキシ メ チル i、 サ ^ が ^ δ 解を受けて複合体が低分子化する結果と し て ¾

間（ゲル濾過における '） の延長を求めだ；

〔結 果〕

結果を第 17図に示す： 第！ 7 Μは反応時間 と その R 時間での反応液において ビー ジ の ¾ ^が わ： . 0 時間 と の関係を示す ジ' フである ： 図 で〇印 およ び 印線は \ -ァセ チ 力 ルボキ シ 、 チル ^ ト サ ン -； ！ V

-Phe-Phe- TXig合体につ いて リ ゾ'チ ーム ガ;存†£ し な い 場合およびリ ゾチームが存在する場合にお る そ i' ぞ れの結果を示 し 、 また口印線および黼 印^は' - マセチ 5 ルカルボキシ メ チル * トサン -G〗y-Giy- - 複合 ¾·: について 1) ゾチームが存在 しない ^合および リ ゾチ - ムが存在する場合におけるそれぞれの結果を示す

第 Π図よ り 、 リ ゾチーム の作用 によ り 上記の複合体 の >：-ァセチル力ルボキ シ ^ チル トサ ン部分が分解を

20 受け、 その結果、 いずれの複合体も低分子化する こ が認め られるので、 複合 が長時間にわた り体内に 留す る こ と は起 らない こ と が期待さ れ ；· .

実験例

〔試 料〕

r 、に 咅 ： '：二 べ し て ：、 ： 2 ⁷ ' -，'一一 -- に 力ルボキシ ヌ チルキ 卜サ ン -Gly-Gい- Gi:. 複合 ^f: 検体試料の化合物と し た . 別に^ ベ几 し た实施 ： の工程途中で得 られた部分的 ァセチ カ ルボ - ン ^;' チルキ サ ン を対照試料と して用意 し た .

〔方 法〕

系の雄性マ ゥ ス に Sarcoid ) 8ハを皮下に植え込み )0日後の担癌マ ウ ス を实験に用 いた： 試料を生理食 ; 水に溶解 し 、 各 3 群匹のマ ウ ス ¾用 い、 尾静脈よ '） V：

FJi

mt/Kj; を投与 し た - 投与 IH. 、 6 時間および 24時間に大腿動脈 よ び静脈 を ¾ ^ し、 血液を採取 した 血浩を遠心分雜 し て ΙΠ1 清 と癌組織の放射活性を 焼法によ 測定 、 血清 と 癌組織中での試料化合物濃度を求 た .

〔 Tiw j

結果を第 18 、 第 I 9図に示す： 第 1 S図は試料化合^ の血清中濃度の経時変化 示す グ 5 つであ に 、 « ·： Ρ は癌組織での試料化合物の濃度の経時変化を示す ゾ ラ フである 。 共に図中の□ f¾線は対照試料につ いて 結 果を 、 參印線は上記の検体試料につ いての結果を表す 第 18図によ り 、 上記検体試料はぺプチ ド鎖を介 I て TXを多糖体 （ -ァセチル力ルボキ シ チ ^ ン に結合 し た複合体であ り 、 従っ て こ の よ う な複 ttは ώΐ 消失が速い と予想さ . にも か かわ . 寸' . 实際に は結合させる以前の単なる多糖 ；すな ち' -ァ チ 力 ルボ * シ チ ル - サ ン そ f, ¾ ft: Jrヒ *: ；. て —-:+'. ― o t、— ϋ 複合体の形の検体試料 合物 血中滞留性は ί ¾度 ま たはそれ以丄に増加 し てい る こ と が認め ま た第 19図よ t 上記検体試料は上 の -なる多锆体 ヒ 比 Kしてみる とペプチ ド鎖を具有する こ と に よ ¾ : 織に集合 しやすい性質を新たに獲得 している こ と が認 ぬ られる ：. 従っ て、 式（ I )の本発明物 Ϊにお 、て適切 なべプチ ド鎖（-X-) を選択する こ と によ り式（ 1 、 ) 発明物質に臓器指向の傾向を具備させる 二 と がて き る 実験例 4

0 本実験例では、 式（ X )の本発明物質の数例を試料

して用 いて、 下記の実験を行っ た _r

すなわち、 ？1 TX部分が ³ Hラベル し て いる実施例 18、 実施例 17、 実施例 19の最終生成物と し ての複合体 (そ れぞれの複合体のボ リ エチ レ ン グ リ ニ ール （PEG： 含 £5 が 6 % 、 21 % . 43 % ) を検体 ： 、 検体 2 、 検体 のた めのラベル化合^と I て用意し た - 別に、 ί F を 欠除 さ れた形の伹し Μ τχ部分を³ Ηラベル した複合体 ¾ のための ラベル化合物と して用意した： 検体 1 、 検体

2 、 検体 3 の複合体及び対照の複合体の全てにおいて、 複合体の力ルボキシ メチルグルコサ ミ ン単位の 1-マ ノ墓に結合されたぺプチ ド鎮はいずれも G】y- Phe-Ph であ リ 、 検体 1 、 検体 2 、 検体 3 におけ る いず れも实旌^ に記載さ れた G (^子 500 でぁ

r ·' ス ー ; 卜に癌 ^ゥ ナ 一力 一 ：?·· を 径 皮下に移植 し . 移植 π ½ ¾ -' ー ' 験に用 いた 試料投与液は¹ ベ )i た枚 f'-r i - . す る非放射性の複合体を溶解 た生理食塩水 で 適宜希釈 し て用 . し 、 複合体 と し て ： 【;,:■ ';, と なる よ う に 】 群 3 匹 ラ ッ 、 の頸静脈内 に ΐ'- ^r: 与 した - エーテル麻酔下に頸静脈よ り ¾ί時的 ί '■ . ： Πί ί¾ 2 時間、 4 およぴ 6 B$問 に ! を '.、 ΓΆ ^!！ 餽 し た _t 投与後 24時^ 二 一ニ ¾ : . 放血死させた： 組織および H ¾iを ^ 、 し . 全 ^ - · は一都を秤量後、 放射能を 定 た：

なお、 採取された測定組織中のお身:能 、 ニ バ ス 卜 コ ー ン に採取 し たサ ン ブル を ¾燥 . ί'! · ' £ i 装置 SC - 1】 2 ALOKA > にて ^烧させた . し ー タ 一 （ AQし AS0L- 2 XE ； を力 []えて ン ン シ ヨ ン カ ウ ン タ 一 （LSC- 360(;， ALO - Aリ に て S;定 、 - 、 々:. 部標準線源法によ り補正 した：

(試験結果）

試験結果 添付図面の第 29図、 第 30図および後記の 表 】 に示す。 第 29図は投与後 24時^ ま で の各試料につ い て の血漿中濃度の経時変化を示す ^ フ で . ; 0 |¾は各試糾に つ いて 与景に 'する轺綠 ^ ¾ ' : 内分布？：示す 'ゾ フであ ： -: 、 ¾ ： 各 : ':- - . ' '： 9図に基ずいて求めた ALC値 各 に - 、て (- 与 ; i に ÷: 'す ：： 膣^は： ^ yす て ■· ' - i 第 29図よ り 示され る ごと く 、 P G ΟΊ £ /、 ί'_:が多い程

5

複合体の血 滞留性は倥れてお ！） 、 こ を表 ： （7, ΑΙΓ 値に よっ て示寸 と 、 対照に し て検体 1 導人 ： (： は約 3倍、 検体 2 (PEG¾人量 2 ：および検

(PEG導入量 43 % ) は約 3倍にも増大 してい る こ : が判

また第 30図よ り示される ごと く 、 S 镲組鎩以^の 器では PEG導入量によ る顕著な差は認め られ な！、 に ¾ し 、 膛疡組織では PEG¾人 に よ て Κ ¾ ¾ ,¾ in 着实に-高 く なつ てい る が認め ' . # 体的には ' の腫瘥中濃度の値によっ て示され ご と であ . す なわち -ァセチルカ ルボキシ メチルキ 卜サ ン誘 ¾体に おいて PEGが導入された場合には . 痰組織を認譁.す る 傾向が現われる よ う にな り 、 徒っ て制癌剤（7. 耍 ¾与 量を少量化する こ と ができ、 その結果、 他の腺器へ V, 好ま し く ない影響を低減ォ ニ i: が可能 ヒ な る 表 1

血漿 AI _U〜_:.：

(% of dose' r/ml (% of dose/g at 24 hr！

20 α 照 ΐδ.δ;-: - .18 検体 1 20.85 0.22 検体 - -ie.2(: 検 ft

図面 f! 単 添付図 ； に 一 、 第 1 図 ： ：*：発明の実施^ ： で ^ †. た、,-ァ セ 手 t ルボキ シ チ ル · i、 サ ン. - GJ v-Php-!'h--!i-r ί合 it ;-· ^咅 ί;吸 ¾ ス べ リ ！ヽ ル（濃度 ： , 溶媒 ： ：.' · Ε 1.0 Η ) を示す .

笫 2 図 ： 本発明の实施例 2 で^ た ア 二 力 ルボ キ シ メ チル ト サ ン— G J y - P n - P h e— i, c梭合 ft ゲ ル濾過溶出パ タ ー ン （検出 ： 25Snmにおけ る紫外 ¾ ¾ を 7Ts 5

第 ： 図 ： 発明の実施 ^ で た'一 " ^ t ルボキ シ メ チ ル キ ト.サ ン _ G - P h '？ - P h e _ li 体 . 々： 部吸収スべ ク 卜ル（濃度 ： 19 Oy¾l/rai'、 溶 ^ ： ：；" ')-. ^:.· Γ;]! '±：示" 9 c

第 4 図 ： 太発明の实施例 】 で ら .た マセ 力 ルポキ シ メ チル 卜サ ン - G] -!' h — Ph'- - H複 U (]—, 濾過溶出パ タ ー ン （検 ： 25 niuに お (1 , ¾ ^ §：吸 L:乂 j- 一 j- 第 5 図 ： 本発明の实施例 2 で最終生成杓 と ： て ^ .' ォ L た -ァ セチル カ ルボキ シ ヌ チノレ * ： - -。 - ί, ⁽- -

Phe- ΜΤΧ複合体 紫外 ' 可視部 ¾収ス ヘ ク ；、 ル（ 度 ：

, 溶媒 ： 0.1 % aHC ： を示す - 笫 c m ： 本発明の实施伊'; 1 で最終 成^と て ·' た \ -マ セ チ カ ルボ シ チ ；レ. ；、 サ ン - G ' ' - ' -

― V丁 χ¾合体 ゲル ϋ過 ί¾

に おけ る紫外部吸 ）を ^す

" Γ;·· ： ±： ¾ ρπ a, fi: お'. ：.； . ；1 ボキシ チルキ !·、 サ ン -G.i；. -G :： -G! - "2 i W C- : ：吸収スベ ト ル（濃度 ： 0 A¾ mi: ί容 ί ： 7;、 . -' 第 ： ^発明の実施 ί¾ 2 で得 た' -一'、セ チ ん 力 ルポキ シ メ チフレキ 卜サ ン - G 1 G】 y- G】 - ΡΜΖ 合体（7 ゲ ル瀘過溶出パタ ー ン（検出 ： 272nmに る紫外部吸収 T - 第 ： 本発明の实施例 2 で得られ た ァ で手 ボキ 、 チル ：- サ ン -Gj - ΐ y-Ci ; -U拔合 Ί;紫 「 収スへク ト ル（濃度 ： ι πΰ;¾ Γ.Λ 、 iu ： フ;

す

第 10図 ： 本発明の実施例 2 で！ ¾終生！ ^

れ た 、 -ァセチル力 ル.ボキ シ メ チ ル * ^!、 ： - -.:

Giy- MTX複合体の紫夕 y · 可視部吸収スへ -- ノ：

4&/ug /mi； 、 i ： 0. 1 % \aUCG , ) ί .

n ： 発明 実施例 2 で最 ^ —

れた -ァセチル力 ルボキ シ： チ；L- キ ン - '

Gly-MTX複合体のゲル滤過溶出パタ ー ン ■ ¾ ti ϊι !1 における紫舛部吸収）を示す。

第 12図 ： 本発明の実施例 eで得られた: -ァセ チル カ ルボキ シ メ チルキ 卜サ ン - Gly-Gl - G]. - a- MTX 合 : の紫タ · 可視部吸収スべ シ ト ル（濃度 ： ' / π;； 、 ¾ ft- U . 1 % ,A\C )を示す - ： 本発明の实施例 β で得らォ:. た ···.-，'て-チ >, ^÷

Hボ ^ シ ·,·· チ /レ ^ ン— G - G ' ；： - A — 丁 X複 {-■ ¾： - 6 ) - の ゲル濾過溶出バ タ 一 ン f検出 ： ：;' η'に お ίュ i ；し .'；. - 吸収）を 示す

第 14図 ： 本究 ^の实施例 で最終生 し れた -ァ セ チノレ カ ルボキ シ 千 . キ ト サ ン -：、; u r - Aia-Α Ι -ρ-二 ！'、 ロ アニ リ ド複合体の紫々' ^ ¾収ス し ル（濃度 ： 500 /mi>、 溶媒 ： 水）を示す

r 第 ] 5図 ： 本発明 の实施例 7 で最終生 ¾ 二 I ォ た ァセ チルカル ボ * シ メ. チ 卜 ン - ，

-'. ' ' ί ' — 二 口 二 ' - jEi 【'丄，ノ'

(検出 ： 315r.mにおけ る紫外部吸収）？： 示す

笫 16図 ： 本発明によ る实験例 I にお 、て測定さ キ ト サ ン と の複合体 と し て存在 し て い [¾ ¾ ί Λ 卜 ト レ キ サ 一 卜 （ Μ ΤΧ ) の血 中での ¾ バ セ ン 経時変化（in V ί tro)を示す グラ フであ る .

第 17図 ： 本発明 によ る実験例 2 に おいて ¾定さ 本発明の複合体を酢酸緩衝液で分解さ せる反 に て、 反応時間 と その反応時間での反応 ¾において ク の溶出が現われる溶出時間 と の関係を示す リ'

7Π 9 ,

第 18図 ： 本発明に よ る実験 ' 3 で測定さ れて、 試料 化合物の it清中濃度の経時変化 Π n " V を 示す ゲ =) フであ る - 笫 ] 9叵 ： ：発明に よ 実験^ ：: で測定さ ォ て .

合物の癌組織での濃度の経時变化 ¾ 斗 ― / .す' 第 20図 ： 本発明の实施例】]で得 れた マ セ チル カ レボ シ メ チ レキ 卜 サ > -Suc-G !y-i'nt:-G ^-Ly - TX¾ 合体の紫^ · 可視部吸収スぺ ク ト ル（濃度 ： 49 / /n ： 、 溶媒 ： 1 % \aHCG, ) を示す .

第 21図 ： 本発明の実施例 Πで得られた \-ァセチル力 ルボキ シ メ チル キ ト サ ン - Sue- G1: - F'nc- ■MTX¾廣 合体のゲル濾過溶出パタ ー ン（検出 ： 307nmにおける紫 タ 1"部吸収）を示す

第：: 2図 ： 术発明の实施^ 12で得 れた マセチル カ ルボキ シ チル キ ト サ ン - G】y 6_! u'- ?'h - 複合体 ( 力 ルボキシ メ チル化度 ： 0.7)の紫外 · 可視部吸収ス へ '：: トル（濃度 ： 100 ¾/·ιηί·、 溶媒 ： 0.1 % :\aHC0 ）を示す - 第 23図 ： 本発明の实施例 12で得 れた \ -ァ ^ カ ルボキ シ メ チルキ 卜 サ ン - Gl - n - Pho- T) (複合体 （力 ルポ キ シ メ チ ル化度 ： （； .7 > の ゲル ¾過溶出 パ ー ン (検出 ： 307nmにおける紫々 部 ®收〗を ^寸

第 24図 ： 本努明の实施例 Πで生成さ た ·.-ァセ カ ルボキ シ メ チル 5? ト サ ン -PEGュ-（； 1 > - nr-ph -：^: ¾ 合 体のゲル濾過溶出パタ ー ン（検出 ： 25 mにおける紫外 部吸収）を示す - 第 25図 ： 本発明の实施例 17で最終生成物 ヒ て得 れ た \ -ァ セチル力 ルボキ シ チル ^;、 サ ン -「'！ — ！ Phe-Pr〖 - MTX複合体の紫 · 可視部吸 ί! フ -- : 度 ： 】 00wni 、 溶媒 ： C . i %

)を示す

f> Ί , ¾； ： ： · Ε¾ 0\→·: ¼\ 〗 で '. fy ¥ れ た:、 -ァ セ チル カ ルボ キ シ チル ；、 サ ン - P - - f'h— Ph -MT>: 複合 ： ^過溶出バ タ 一 ： ： ：：' · :;&7ΓΗ"における紫外部吸 〕を示す：

第 27ϋ ： 本発 .施 ^ で れた 一 ' 二 ' - マ セチルカゾレボ キ シ チ ル ト サ - ：；■ _ G； V -二』： -

MTX複合体の紫外 ' 可祝部吸収スべ リ ト ル （^度 ： - ハ"：、 溶媒 ： 0.1 % NaHCO, )を示す .

： -^: ： 本発 实施例:^で^ られたボ ォ 一 ：

-、 ー ァ tチルカ ルボキ シ ノ -二 ：、 - ン— G -：ニ ： . - - , MTX複合体のゲル濾過溶 ^ハタ ー 検 ： .： ：' ける紫外部吸収）を示す：

第 29図 ： 本発明の実験例 4 で測定さ れて、 投 後^ 時間までの各試料につ いて 血漿中濃度の g時変 'ヒ 示すグラ フ であ る

第 30図 ： 各試料について投与量に对する組 ¾ Ψ 0)体内分布を示すグ ラ フ であ る - 産業上の利用可能性

本発明 に よ る新規な -ァ セ チ ル カ ル'ボキ シ メ. チ ル ^ ト サ ン誘導体は医薬化合物の生体内 タ 一 ゲ'亍ィ ン グを g標と してお リ 、 医薬化合物 血液中での安定性 . if 器への標的指向性並びに体内での被代謝性を高 i で医薬化合物 ための多耱 ¾高 孑 ¾ K-と I て - て あ る . ま た、 発明によ り ¾ 台 こ 結 f 、 ：- 体の形と Lての ':規な -マ :チルカ ルボキ シ > .:. -.

：、 サ ン誘導体 、 朦器へ 標的 ¾ i : 7 そ ^ - - 利な性質を有 し . 医薬と して有用であ :.

Claims

請求の範囲

1 . 式（ I )

〔式中、 R, および R₂は夫 に IIまたは力 ボ シ ス レ基 、 pは c o基、 R Η基 ま た ' 0 、 a 一に '：' は OH基、 X は 1 〜 10個の同 - -または異な ァ ミ

含むぺブチ ド鎖を意味する ： なお I, 0 H 力 )1 1 化合物、 ΧΗ.' はア ミ ノィヒ合物、 ^ 0Ηはマ )1 二 一- /レ 合物を意味する _{a i}、 は 0ま たは の整数 を が 共に 0 と なる場合を除 く - b は正の整数を ^す： に よ っ て示さ れ、 下記の特性値 へ ； . ：

(1) カルボキ シ チ ル化度 G .5 - (2> 分子量（ゲル濾過法） 3 , 00 ΰ - 30 , 000

(3) a / ( a + b ) 0. G卜 ]

(ただ し a = a α + , )

(4) P / X (モ ゾレ比） ： ]〜 1

を有す る ア セチ ルカ ルボキ シ チ ル ；、 サ ン ^導 :

2 - に おけ る X が ] - 4 ; m一ま た は ¾た ：： ミ ノ酸か ら なるペプチ ド鎖であ し 、 そ 0, ：、' *端 ^マ ： ノ酸に pが結合する請求の範 g 1 a - -t - - ルボ シ - チ尸レ ^ サ ン誘導体

3 . XPが下記のいづれかである請求の範囲 2 E载 (7. X-ァセチルカ ルボキシ メチルキ 卜サン誘導体：

P - Phe - Phe - G〗 y - P-G]y-Phe-Gly-Gly- δ P-Phe-Gly-Phe-Gl y-

P-Gly-Phe-Gly-P e- P-Gly-Gly-Gly- P-Ala-Gly-Gly-Gl -

4 . XPにおける X が、 二塩基性酸を含み、 か 10 4 個の同一または異なるア ミ ノ酸からなるぺブチ K であ り 、 その C末端側ア ミ ノ酸に ； P が結合する請求 範囲 1. 記載の N-ァセチルカルボキシ チルキ トサン誘 導体。

5 . XPが下記のいづれかである請求の範囲 4 記載5 -ァセチルカルボキシ ヌ チルキ トサン誘導体：

-Suc-Ala- la-Ala-i'

-Suc-Ala-Ala-Va I -Ala-P

(Sueはコハク酸残基を示す：）

6 . R₃C0基と R_s0基が保護基である請求の範囲 1 ~0 5 のいづれかの項に記载の ァセチルカルボキシ メ チルキ トサン誘導体 - -

7 . R, C0¾が tert-つ" ！、 キ シカ ルボ二ル基または P- メ ト キ シ ベ ン ジルォ キ シ カ ルボニル基であ り 、 ま た R_s0基が tert -プチルォキ シ基である請求の範囲 記 ¾ の '、:—ァセチルカルボ ^ シ チル ί、 サ ン誘導休 一 o .''一

8 , R, COOI!が 卜 ト レ キ サ一 ト である請求の範囲 1 5 の いづれ かの項に記載の .\ -マ セ チル力 ルボキ シ メ チルキ ト サ ン誘導体：.

9 . 式（ Π i

1 〔式中、 Rュおよび ί は夫々 に H またはカルボキシ ゾ.

ル基、 こ こ で P は iし 0H基、 ί:0基、 または （ 基、 Xは 1 〜 ] 0個の同一または異な る マ ミ ノ 酸 ί 含む ペプチ ド鎖を意味する . なお R₃ C00Hはカ ルボン酸化合 物、 H₂はア ミ ノィヒ合物、 ί 0H はアルコ ー；レ化合 t¾ i を意味する &、 、 b₂は 0 または正の整数 . ：:

に よ っ て示され、 下記の特性値（ 1 )〜 （4；： -

( 1 ) カ ルボ キ シ メ チル化度

(2) 分子量（ゲル濾過法） ύ , 000 - 30 , 00 ( ¹

(3) a / ( a b ) 0. 1

(ただし b = + )

(4) P / X (モル比） ： G . Ί へ

を有す る部分的'、:-ァセチル力ルボ ^シ メ チル'キ 卜サン 誘導体 -

10. ^ ' m )

〔式中、 I および R₂は夫々 に Hまたは力ルボキシ メ チ ル基を表わす〕

によっ て示され、 下記の特性値（1)へ^ 2) :-

(1 i カルボキシメチル化度： 0.5へ 1.2

(2) 分子量（ゲル濾過法） ： '3，000〜3()0，0(>(' を有する部分的 N-ァセチルカルボキシ メ チル ト ン に次式 ， .

P X - 0 II (IV -

〔式中、 こ こで P は ίί、 0Π基、 K₃ CO基、 R₄ 墓ま たは R ₅0基、 X は 1 〜 10個の 同一ま たは異な る ア ミ ノ 漦 を含むぺプチ ド鎖を意味する。 なお R ₃ C00Hは力 ルボン 酸化合物、 I NH_Zはア ミ ノ化合物、 K_s 0H はマ ル コ 一ル 化合物を意味する 〕

で示される化合物を反応せしめる こ と を特徴とする、 式（ Π ) r cH_?orくュ

~~ 0、

/ ' 、、

NH-COCH, ΰ

〔式中、 、 R, , Ρ 、 χ は（ ra )式におけろ前記と 同 じ 意味を示す： u . 、 b, は正の整数を 示寸 . 〕 によっ て示され、 下記の特性値 ) :-

(1 ) カ ルボキ シ メ チル化度 (； .5へ 1.2

(2) 分子量（ゲル濾過法） 3 , 000 30 .000

(3) a / ( a + b ) 0.0】 】

(ただ し b = b₁ + b_z )

( ) P / X (モル比） ： t' .1 1

を有する部分的、、-ァセチル カ ルボ キ シ メ チ 尺' - ^;、 サ ン l u 誘導体の製法。

11. 式（ Π ■' )

(Π

〔式中、 および R₂は夫々 に H ま たは力ルボ ^シ メ チ ル基、 f は Hまたは 0H基、 も し く は R₃ 'CO墓、 R-₃ ' H基 または ' 0基、 Xは 1 〜 10個の同一または異な る ア ミ ノ酸を含むベプチ ド鎖を意味する ： なお 'COOi! は力 ルボン酸化合物、 R Ίしはァ ミ ノィヒ合物、 ί; 0Η はァ ル コ 一ル化合物を意味する .· a . b₂ . r... は の整 ψί も 示す。 〕 によ っ て示さ れ、 下記の特性値 ；〜 し ： - (1) カ ルボ キ ン チル化度： （.' .5〜 ：'

(2 ! 分子量（ゲル濾過法） ： ： (Η',Ο〜？, f :、r>'v (3) a / ( a + b ) : 0.0；〜]

(ただ し b = + b, )

(4) P /X (モル比） ： 0.1〜1

を有す る部分的 ァセチルカルボキ シ メ チルキ 卜サ ン 誘導体をァセチル化し、 ί 基が Hまたは ϋΗ基以外の と きは、 さ ら に Pi基を脱離せしめ、 最後に次式

P-H または P— OH (V) 〔式中、 Pは R₃C0基、 P \'H基または R_;0基を表す . ；！ で示される化合物を反応せ し める こ と を特¾ご す ： 、0 式（ I )

〔式中、 i 、 R₂ 、 p、 xは前記と 同 じ意味を示 し、 ς' は Η または OH基を意味する。 _ai、 a₂は 0 または正の整 数を示すが、 共に 0 と なる場合を除 く 。 b は正の整数 を示す。 )

0 によっ て示さ れ、 下記の特性値（1：)〜 （4) :- ( 1 ) カルボキ シ メ チル化度： Q .5〜 1 · 2

( \？一 ,) " & "~ - C \ゲ' · 7レ · 滤；咼法 ： ?,.000〜； H 00 · 000

(3) a / ( a + b ) : 0 · 01〜 1

(ただし a = a, + a, )

r '' P ZX (モル比） ： 0.】〜； を有す る 、-ァセチルカルボキ シ メ チルキ ト サ ン誘導体 の製法。

12. 式し X )又は式（ )

〔式中、 および!^は夫々 に H または力 ルボ シ チ ル基、 P は R₃C0基、 Γ(₄\·Η基ま たは！ 基、 Gは H ま だ は 0H基、 Xは 】 〜 10個の同一ま たは異なる マ ミ ノ ¾ 含むぺプチ ド鎖を意味する なお^ COO Hは力 ルボン酸 化合物、 R₄NH₂はア ミ ノ ィヒ合物、 Κ;0ί1 はアル コ ー ル化 合物を意味する； a_a a₂は 0 または正の整数を示すが 共に 0 と なる場合を除 く 。 b および c は正の整数を示 す

ま た- *、 - PEGは卞記の式 ( \Ί ) , ( , ( . '· 又は ' ^¾¾ι ~ 0- (CH₂ CH₇0) CH₃

( K丫 N

C丄

一 C0-CH₂ CH_Z - CO- 0- (CH, CH₂0) _n— CH₃ (VI0

— CO-0- (CH₂CH₂0)_n— CH₃

一 C0-CH₂ -0- (CH₂ CH₂0)_ri- CH₃ (K) の基を表わ し、 n はポリ エチ レ ングリ コ ール鎮の平均 重合度を示す〕

によっ て示され且つ下記の特性値（ 1 〜 ;/ ： ―

( 1 ) カルボキシメチル化度 ： 0.5〜 1.2

(2) 分子量 （ゲル濾過法） ： 3，000〜30 ，0リ

(3) a/ (a + b + c) ： 0.01〜 1

(ただし a = _3l + a_z )

(4) P / X (モル比） ： 0.1〜 1

を有する N-ァセチルカルボキシ ヌチルキ ί、サン誘導体