TWI680985B - 抗ｏｘ-４０抗體及使用方法 - Google Patents

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Abstract

本發明提供抗-OX40抗體及其使用方法。

Description

抗OX-40抗體及使用方法 相關申請案之交叉參考
本申請案主張美國臨時申請案第61/973,193號(2014年3月31日提出申請)、第61/989,448號(2014年5月6日提出申請)、第62/073,873號(2014年10月31日提出申請)及第62/080,171號(2014年11月14日提出申請)之優先權；每一者之全部內容以引用方式併入本文中。
序列表
關於ASCII文本文件之下列提交內容之全部內容以引用方式併入本文中：電腦可讀形式(CRF)之序列表(文件名稱：146392029140SEQLIST.txt，記錄日期：2015年3月26日，大小：143KB)。
本發明係關於抗-OX40抗體及其使用方法。
OX40(亦稱為CD34、TNFRSF4及ACT35)係腫瘤壞死因子受體亞家族之成員。OX40並不組成型表現於幼稚T細胞上，但在結合T細胞受體(TCR)之後誘導。OX40、OX40L之配體主要表現於抗原呈遞細胞上。OX40由活化CD4+ T細胞、活化CD8+ T細胞、記憶性T細胞及調節性T細胞高度表現。OX40信號傳導可向CD4及CD8 T細胞提供共刺激信號，從而得到增強之細胞增殖、存活、效應物功能及遷移。OX40信號傳導亦增強記憶性T細胞發育及功能。
調節性T細胞(Treg)細胞高度富集於源自多種癌症適應症(包含黑素瘤、NSCLC、腎癌、卵巢癌、結腸癌、胰臟癌、肝細胞癌及乳癌)之腫瘤及腫瘤引流淋巴結中。在該等適應症之子組中，增加之瘤內Treg細胞密度與較差患者預後有關，從而表明該等細胞在阻抑抗腫瘤免疫性中發揮重要作用。已闡述OX40陽性腫瘤浸潤淋巴球。
顯而易見，業內持續需要具有最適於研發用作治療劑之臨床屬性之藥劑。本文所闡述之本發明可滿足此需要且提供其他益處。
本文引用之所有參考文獻(包含專利申請案及公開案)之全部內容皆以引用方式併入本文中。
在一態樣中，提供結合人類OX40之分離抗體。
在另一態樣中，提供抗人類OX40激動劑抗體，其中該抗體係消耗抗體。在另一態樣中，提供抗人類OX40激動劑抗體，其中該抗體在活體外消耗表現人類OX40之細胞且以小於或等於約1nM之親和力結合人類OX40。在一些實施例中，該抗體消耗CD4+效應T細胞。在一些實施例中，該抗體消耗調節性T細胞(Treg)。在一些實施例中，該消耗係藉由ADCC及/或吞噬作用達成。在一些實施例中，該消耗係藉由ADCC達成。
在另一態樣中，提供以小於或等於約0.45nM之親和力結合人類OX40之抗人類OX40激動劑抗體。在一些實施例中，抗體以小於或等於約0.4nM之親和力結合人類OX40。在一些實施例中，使用放射免疫分析測定抗體結合親和力。在一些實施例中，抗體結合人類OX40及食蟹猴OX40。在一些實施例中，使用FACS分析測定與人類及食蟹猴OX40之結合。在一些實施例中，與人類OX40之結合具有小於或等於0.2ug/ml之EC50。在一些實施例中，與人類OX40之結合具有小於或等於0.3ug/ml或更低之EC50。在一些實施例中，與食蟹猴OX40之 結合具有小於或等於1.5ug/ml之EC50。在一些實施例中，與食蟹猴OX40之結合具有小於或等於1.4ug/ml之EC50。
在另一態樣中，本發明提供抗人類OX40激動劑抗體，其與在使用抗人類OX40激動劑抗體進行治療之前之增殖及/或細胞介素產生相比增加(能夠增加)CD4+效應T細胞增殖及/或增加CD4+效應T細胞之細胞介素產生。在一些實施例中，細胞介素係γ干擾素。
在另一態樣中，本發明提供增加(能夠增加)記憶性T細胞增殖及/或增加記憶性細胞之細胞介素產生之抗人類OX40激動劑抗體。在一些實施例中，細胞介素係γ干擾素。
在另一態樣中，本發明提供抑制(能夠抑制)Treg功能之抗人類OX40激動劑。在一些實施例中，抗體抑制效應T細胞功能之Treg阻抑。在一些實施例中，效應T細胞功能係效應T細胞增殖及/或細胞介素產生。在一些實施例中，效應T細胞係CD4+效應T細胞。
在另一態樣中，本發明提供增加(能夠增加)表現OX40之靶細胞中之OX40信號轉導之抗人類OX40激動劑抗體。在一些實施例中，藉由監測NFkB下游信號傳導來檢測OX40信號轉導(例如在OX40表現細胞中，例如CD4+效應T細胞、CD8+效應T細胞、CD4+記憶性T細胞)。
在另一態樣中，提供在40℃下處理兩週後穩定之抗人類OX40激動劑抗體。
在另一態樣中，提供抗人類OX40激動劑抗體，其中該等抗體包括含有消除與人類效應細胞之結合之突變之變體IgG1 Fc多肽，其中該等抗體相對於包括天然序列IgG1 Fc部分之抗人類OX40激動劑抗體具有減弱活性。在一些實施例中，該等抗體包括含有消除與FcR之結合之突變(例如DANA或N297G突變)之變體Fc部分。在一些實施例中，該活性係以下中之一或多者：增加CD4+效應T細胞增殖及/或細 胞介素產生、增加CD4+記憶性T細胞增殖及/或細胞介素產生及/或藉由ADCC及/或吞噬作用消耗細胞。
在另一態樣中，提供抗人類OX40激動劑抗體，其中抗體交聯係抗人類OX40激動劑抗體功能所需。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體功能係以下中之一或多者：增加CD4+效應T細胞增殖及/或細胞介素產生、增加CD4+記憶性T細胞增殖及/或細胞介素產生及/或藉由ADCC及/或吞噬作用消耗細胞。
在另一態樣中，提供抗人類OX40激動劑抗體，其中該抗體包括：(a)VH結構域，其包括：(i)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2、8或9之胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3、10、11、12、13或14之胺基酸序列，及(iii)HVR-H3，其包括選自SEQ ID NO：4、15或19之胺基酸序列；及(iv)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列，(v)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列，及(vi)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：7、22、23、24、25、26、27或28之胺基酸序列。
在另一態樣中，提供抗人類OX40激動劑抗體，其中該抗體包括：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包括選自SEQ ID NO：7之胺基酸序列。
在另一態樣中，提供抗人類OX40激動劑抗體，其中該抗體包括：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其 包括選自SEQ ID NO：26之胺基酸序列。
在另一態樣中，提供抗人類OX40激動劑抗體，其中該抗體包括：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包括選自SEQ ID NO：27之胺基酸序列。
在另一態樣中，提供抗人類OX40激動劑抗體，其中該抗體包括與SEQ ID NO：56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、108、114、116、183或184之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。
在另一態樣中，提供抗人類OX40激動劑抗體，其中該抗體包括與SEQ ID NO：57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、109、115或117之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變結構域(VL)。
在另一態樣中，提供抗人類OX40激動劑抗體，其中該抗體包括與SEQ ID NO：56之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在一些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包括該序列之抗人類OX40激動劑抗體保留結合OX40之能力。在一些實施例中，在SEQ ID NO：56中取代、***及/或缺失總共1至10個胺基酸。在一些實施例 中，VH包括一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列。
在另一態樣中，提供抗人類OX40激動劑抗體，其中該抗體包括與SEQ ID NO：57之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變結構域(VL)。在一些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包括該序列之抗人類OX40激動劑抗體保留結合OX40之能力。在一些實施例中，在SEQ ID NO：57中取代、***及/或缺失總共1至10個胺基酸。在一些實施例中，VL包括一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：7之胺基酸序列。
在另一態樣中，提供包括SEQ ID NO：56之VH序列之抗人類OX40激動劑抗體。
在另一態樣中，提供包括SEQ ID NO：57之VL序列之抗人類OX40激動劑抗體。
在另一態樣中，提供包括SEQ ID NO：56之VH序列及SEQ ID NO：57之VL序列之抗人類OX40激動劑抗體。
在另一態樣中，提供包括SEQ ID NO：94之VH序列之抗人類OX40激動劑抗體。
在另一態樣中，提供包括SEQ ID NO：95之VL序列之抗人類OX40激動劑抗體。
在另一態樣中，提供包括SEQ ID NO：94之VH序列及SEQ ID NO：95之VL序列之抗人類OX40激動劑抗體。
在另一態樣中，提供包括SEQ ID NO：96之VH序列之抗人類OX40激動劑抗體。
在另一態樣中，提供包括SEQ ID NO：97之VL序列之抗人類OX40激動劑抗體。
在另一態樣中，提供包括SEQ ID NO：96之VH序列及SEQ ID NO：97之VL序列之抗人類OX40激動劑抗體。
在另一態樣中，提供包括SEQ ID NO：180之VH序列之抗人類OX40激動劑抗體。
在另一態樣中，提供包括SEQ ID NO：179之VL序列之抗人類OX40激動劑抗體。
在另一態樣中，提供包括SEQ ID NO：180之VH序列及SEQ ID NO：179之VL序列之抗人類OX40激動劑抗體。
在另一態樣中，提供包括SEQ ID NO：182之VH序列之抗人類OX40激動劑抗體。
在另一態樣中，提供包括SEQ ID NO：181之VL序列之抗人類OX40激動劑抗體。
在另一態樣中，提供包括SEQ ID NO：182之VH序列及SEQ ID NO：181之VL序列之抗人類OX40激動劑抗體。
在本發明之任一抗體之一些實施例中，該抗體係全長人類IgG1抗體。
在本發明之任一抗體之一些實施例中，該抗體係人類抗體。在本發明之任一抗體之一些實施例中，該抗體係人類化抗體。在本發明之任一抗體之一些實施例中，該抗體係嵌合抗體。
在本發明之任一抗體之一些實施例中，該抗體係裸抗體。
在另一態樣中，提供編碼本文所提供之任一抗人類OX40抗體(例如激動劑抗體)之分離核酸。
在另一態樣中，提供包括編碼本文所提供之任一抗人類OX40抗體(例如激動劑抗體)之核酸之宿主細胞。
在另一態樣中，提供產生抗體之方法，其包括培養宿主細胞，從而產生抗體。在一些實施例中，該等方法進一步包括自宿主細胞回收抗體。
在另一態樣中，提供包括本文所提供之任一抗人類OX40抗體(例如激動劑抗體)及細胞毒性劑之免疫偶聯物。
在另一態樣中，提供包括本文所提供之任一抗人類OX40抗體(例如激動劑抗體)及醫藥上可接受之載劑之醫藥調配物。在一些實施例中，該醫藥調配物包括：(a)本文所闡述之任一抗人類OX40激動劑抗體，其濃度介於約10mg/mL與約100mg/mL之間；(b)聚山梨醇酯，其中聚山梨醇酯濃度為約0.02%至約0.06%；(c)組胺酸緩衝劑，其pH為5.0至6.0；及(d)糖，其中糖濃度約為120mM至約320mM。在一些實施例中，組胺酸緩衝劑之pH介於5.0與6.0之間。在一些實施例中，糖係蔗糖。在一些實施例中，醫藥調配物包括：(a)本文所闡述之任一抗人類OX40激動劑抗體；(b)聚山梨醇酯20，其中聚山梨醇酯濃度約為0.02%；(c)組胺酸乙酸鹽緩衝劑，其pH為6.0；及(d)蔗糖，其中蔗糖濃度約為320mM。在一些實施例中，醫藥調配物包括：(a)本文所闡述之任一抗人類OX40激動劑抗體；(b)聚山梨醇酯20，其中聚山梨醇酯濃度約為0.02%；(c)組胺酸乙酸鹽緩衝劑，其pH為5.5；及(d)蔗糖，其中蔗糖濃度約為240mM。在一些實施例中，醫藥調配物包括：(a)本文所闡述之任一抗人類OX40激動劑抗體；(b)聚山梨醇酯20，其中聚山梨醇酯濃度約為0.04%；(c)組胺酸乙酸鹽緩衝劑，其pH為6.0；及(d)蔗糖，其中蔗糖濃度約為120mM。在一些實施例中，醫藥調配物包括：(a)本文所闡述之任一抗人類OX40激動劑抗體；(b)聚山梨醇酯40，其中聚山梨醇酯濃度約為0.04%；(c)組胺酸乙酸鹽緩衝 劑，其pH為5.0；及(d)蔗糖，其中蔗糖濃度約為240mM。在一些實施例中，醫藥調配物包括：(a)本文所闡述之任一抗人類OX40激動劑抗體；(b)聚山梨醇酯40，其中聚山梨醇酯濃度約為0.04%；(c)組胺酸乙酸鹽緩衝劑，其pH為6.0；及(d)蔗糖，其中蔗糖濃度約為120mM。在一些實施例中，調配物之抗體包括：(a)VH結構域，其包括：(i)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2、8或9之胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3、10、11、12、13或14之胺基酸序列，及(iii)HVR-H3，其包括選自SEQ ID NO：4、15或19之胺基酸序列；及(iv)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列，(v)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(vi)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：7、22、23、24、25、26、27或28之胺基酸序列。在一些實施例中，調配物之抗體包括：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包括選自SEQ ID NO：7之胺基酸序列。在一些實施例中，調配物之抗體包括：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包括選自SEQ ID NO：26之胺基酸序列。在一些實施例中，調配物之抗體包括：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包括選自SEQ ID NO：27之胺基酸序列。 在一些實施例中，調配物之抗體包括與SEQ ID NO：56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、108、114、116、183或184之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在一些實施例中，調配物之抗體包括與SEQ ID NO：57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、109、115或117之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變結構域(VL)。在一些實施例中，調配物之抗體包括與SEQ ID NO：56之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在一些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包括該序列之抗人類OX40激動劑抗體保留結合人類OX40之能力。在一些實施例中，在SEQ ID NO：56中取代、***及/或缺失總共1至10個胺基酸。在一些實施例中，VH包括一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列。在一些實施例中，調配物之抗體包括與SEQ ID NO：57之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變結構域(VL)。在一些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包括該序列之抗人類OX40激動劑抗體保留結合人類OX40之能 力。在一些實施例中，在SEQ ID NO：57中取代、***及/或缺失總共1至10個胺基酸。在一些實施例中，VL包括一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：7之胺基酸序列。在一些實施例中，調配物之抗體包括SEQ ID NO：56之VH序列。在一些實施例中，調配物之抗體包括SEQ ID NO：57之VL序列。在一些實施例中，調配物之抗體包括SEQ ID NO：56之VH序列及SEQ ID NO：57之VL序列。在一些實施例中，調配物之抗體包括SEQ ID NO：94之VH序列。在一些實施例中，調配物之抗體包括SEQ ID NO：95之VL序列。在一些實施例中，調配物之抗體包括SEQ ID NO：94之VH序列及SEQ ID NO：95之VL序列。在一些實施例中，調配物之抗體包括SEQ ID NO：96之VH序列。在一些實施例中，調配物之抗體包括SEQ ID NO：97之VL序列。在一些實施例中，調配物之抗體包括SEQ ID NO：96之VH序列及SEQ ID NO：97之VL序列。在一些實施例中，調配物之抗體包括SEQ ID NO：180之VH序列。在一些實施例中，調配物之抗體包括SEQ ID NO：179之VL序列。在一些實施例中，調配物之抗體包括SEQ ID NO：180之VH序列及SEQ ID NO：179之VL序列。在一些實施例中，調配物之抗體包括SEQ ID NO：182之VH序列。在一些實施例中，調配物之抗體包括SEQ ID NO：181之VL序列。在一些實施例中，調配物之抗體包括SEQ ID NO：182之VH序列及SEQ ID NO：181之VL序列。
在另一態樣中，本文所提供之抗人類OX0激動劑抗體係用作醫藥。
在另一態樣中，本文所提供之抗人類OX0激動劑抗體係用於治療癌症。
在另一態樣中，本文所提供之抗人類OX0激動劑抗體係用於以下 中之一或多者：抑制Treg功能(例如抑制Treg之阻抑功能)、殺滅OX40表現細胞(例如表現高含量OX40之細胞)、增加效應T細胞功能及/或增加記憶性T細胞功能、降低腫瘤免疫性、增強T細胞功能及/或消耗OX-40表現細胞。
在另一態樣中，提供本文所提供之抗人類OX0激動劑抗體在製造用於治療癌症之醫藥中之用途。
在另一態樣中，提供本文所提供之抗人類OX0激動劑抗體在製造用於以下中之一或多者之醫藥中之用途：抑制Treg功能(例如抑制Treg之阻抑功能)、殺滅OX40表現細胞(例如表現高含量OX40之細胞)、增加效應T細胞功能及/或增加記憶性T細胞功能、降低腫瘤免疫性增強T細胞功能及/或消耗OX-40表現細胞。
在另一態樣中，提供治療患有癌症之個體之方法，其包括向個體投與有效量之本文所提供之任一抗人類OX40激動劑抗體。在一些實施例中，該等方法進一步包括投與其他治療劑。在一些實施例中，其他治療劑包括化學治療劑。在一些實施例中，其他治療劑包括PD-1軸結合拮抗劑。
在另一態樣中，提供使用本文所揭示之任一抗人類OX40抗體之診斷或檢測方法。
在另一態樣中，提供包括本文所揭示之任一抗人類OX40抗體之套組或製品。
應理解，本文所闡述各實施例之性質中之一者、一些或全部可組合以形成本發明之其他實施例。熟習此項技術者將明瞭本發明之該等及其他態樣。本發明之該等及其他實施例由下列詳細說明進一步闡述。
圖1：藉由FACS分析人類化OX40抗體變體以評估抗體與表現於 Hut78細胞表面上之huOX40之結合。
圖2：以高親和力結合人類及食蟹猴T細胞之OX40激動劑抗體1A7.gr.1。
圖3A及3B：(圖3A)Mab 1A7.gr.1在不存在交聯下對T細胞增殖並無效應。增加濃度之mab 1A7.gr.1會因應於抗CD3交聯共刺激CD4+記憶性T細胞增殖。mab1A7.gr.1之共刺激效應之所計算EC50為9.96ng/mL(n=2)。(圖3B)增加濃度之mab 1A7.gr.1會因應於抗CD3交聯共刺激干擾素γ之CD4+記憶性T細胞產生。
圖4A：在板結合抗CD3存在下，板結合mab 1A7共刺激效應T細胞增殖。與之相比，在板結合抗CD3存在下以可溶性形式提供mab 1A7時，共刺激活性以類似於使用板結合同種型對照抗體在板結合抗CD3存在下所觀察之程度廢除。
圖4B：具有N297G突變之MAb 1A7 gr.1不能共刺激Teff細胞增殖。與之相比，野生型(未突變)mab 1A7 gr.1共刺激抗CD3誘導之Teff細胞增殖。
圖5：使用OX40激動劑抗體進行治療會抑制幼稚CD4+ T細胞之Treg細胞調介之阻抑。在單獨培養時，藉由添加Treg細胞及同種型對照抗體來抑制幼稚CD4+ T細胞(Tn)。天然CD4+ T細胞增殖之Treg細胞調介之抑制在含有抗-OX40抗體mab 1A7.gr1之培養物中得以廢除。數據代表3個獨立實驗之平均值。
圖6：使用mab 1A7.gr.1進行治療損害Treg細胞之阻抑功能。
圖7A及7B：(圖7A)使用mab 1A7.gr.1進行治療誘導OX40表現T細胞之ADCC。(圖7B)使用mab A7.gr1(IgG1)進行治療所誘導之OX40表現CD4+ T細胞之ADCC大於由mab 1A7.gr1(IgG4)誘導之ADCC程度。
圖8A及8B：BT474-人類OX40轉基因純系表現不同含量之人類OX40。圖8A：低OX40表現BT474細胞。圖8B：高OX40表現BT474細 胞。
圖9：使用OX40激動劑抗體進行治療誘導表現人類OX40之細胞系之抗體依賴性細胞調介之吞噬作用，且抗體依賴性細胞調介之吞噬作用程度對靶細胞中之OX40表現程度敏感。
圖10：使用OX40激動劑抗體1A7.gr1進行治療誘導OX40表現細胞中之ADCC。
圖11A-I：抗-OX40抗體之可變區之胺基酸序列。標記重鏈HVR-H1、-H2及-H3及輕鏈HVR-L1、-L2及-L3序列。如本文所闡述根據Kabat編號系統對胺基酸位置進行編號。
圖12A：以劑量依賴性方式結合Hut78-hOX40細胞之抗人類OX40 mab 1A7gr1，其中在約200ng/mL抗體下觀察到70%之最大結合(由點塊指示)。
圖12B：OX40L-flag顯示與Hut78-hOX40細胞之劑量依賴性結合。
圖12C：抗人類OX40 mab 1A7.gr.1與Hut78-hOX40細胞之結合隨OX40L-flag之濃度增加而降低。
圖12D：存在對照DR5-flag對mab 1A7.gr.1結合並無影響。
圖13：SCID小鼠中以1mg/kg或10mg/kg投用之1A7.gr1之藥物動力學(PK)。
圖14A及14B：在食蟹猴中投與1A7.gr1使得c-反應蛋白(CRP)發生最小或瞬時增加。(圖14A)給予0mg/kg或0.01mg/kg劑量之猴中所觀察隨時間之CRP含量。(圖14B)給予0.3mg/kg或10mg/kg劑量之猴中所觀察隨時間之CRP含量。
圖15A及15B：在食蟹猴中投與1A7.gr1使得細胞介素之混合子組發生最小或瞬時增加。(圖15A)促發炎性細胞介素IL6及MCP1隨時間之含量。(圖15B)抗發炎性細胞介素IL10及IL1ra隨時間之含量。在圖 15A及15B中，使用箭頭標記顯示細胞介素含量瞬時增加之10mg/kg劑量組中之個別猴。
圖16A及16B：藉由血清PK及周邊受體佔有率證實食蟹猴對1A7.gr1之暴露。(圖16A)投與0.01、0.3或10mg/kg 1A7.gr1之猴之血清PK。(圖16B)投與0.01、0.3或10mg/kg 1A7.gr1之猴中周邊CD4+ T細胞上隨時間之OX40受體佔有率。
圖17：食蟹猴中投用0.5、5或30mg/kg1A7.gr1之藥物動力學(PK)。
圖18：投與0、0.5、5或30mg/kg 1A7.gr1之猴中隨時間之OX40受體佔有率。箭頭指示獲得試樣之天數。
圖19：投與0、0.5、5或30mg/kg 1A7.gr1之猴中隨時間之MCP-1含量。
圖20：在投與0、0.5、5或30mg/kg 1A7.gr1之猴中觀察到周邊T細胞並無顯著活化或增殖。
I.定義
在免疫功能異常之背景下，術語「功能異常」係指對抗原刺激之免疫反應性減小之狀態。
本文所用之術語「功能異常的」亦包含對抗原識別不反應或無反應，具體而言，將抗原識別轉化成下游T細胞效應物功能(例如增殖、產生細胞介素(例如γ干擾素)及/或殺滅靶細胞)之能力受損。
「增強T細胞功能」意指誘導、致使或刺激效應或記憶性T細胞具有更新、持續或擴增之生物功能。增強T細胞功能之實例包含：相對於在幹預之前之程度，增加γ-干擾素自CD8+效應T細胞之分泌，增加γ-干擾素自CD4+記憶性及/或效應T細胞之分泌，增加CD4+效應及/或記憶性T細胞之增殖，增加CD8+效應T細胞之增殖，增加抗原反應 性(例如清除)。在一實施例中，增強程度係至少50%或者60%、70%、80%、90%、100%、120%、150%、200%。熟習此項技術者已知量測此增強之方式。
「腫瘤免疫性」係指腫瘤逃避免疫識別及清除之過程。因此，作為治療概念，在該逃避減弱且免疫系統識別並攻擊腫瘤時，「治療」腫瘤免疫性。腫瘤識別之實例包含腫瘤結合、腫瘤縮小及腫瘤清除。
「免疫原性」係指特定物質激發免疫反應之能力。腫瘤具有免疫原性且增強腫瘤免疫原性有助於藉由免疫反應清除腫瘤細胞。
出於本文目的，「受體人類框架」係包括源自人類免疫球蛋白框架或人類共有框架之輕鏈可變結構域(VL)框架或重鏈可變結構域(VH)框架之胺基酸序列的框架，如下文所定義。「源自」人類免疫球蛋白框架或人類共有框架之受體人類框架可包括其相同胺基酸序列，或其可含有胺基酸序列變化。在一些實施例中，胺基酸變化之數目為10或更小、9或更小、8或更小、7或更小、6或更小、5或更小、4或更小、3或更小或2或更小。在一些實施例中，VL受體人類框架之序列與VL人類免疫球蛋白框架序列或人類共有框架序列一致。
「親和力」係指分子(例如抗體)之單一結合位點與其結合配偶體(例如抗原)間之非共價相互作用之總強度。除非另外指示，否則如本文中所使用，「結合親和力」係指固有結合親和力，其反映結合對之成員(例如抗體及抗原)之間之1：1相互作用。分子X對於其配偶體Y之親和力通常可表示為解離常數(Kd)。可藉由業內已知之常用方法(包含彼等本文所闡述者)來量測親和力。用於量測結合親和力之具體闡釋性及實例性實施例闡述於下文中。
本文所用之「激動劑抗體」係活化其所結合之抗原之生物活性之抗體。
「抗血管生成劑」係指阻斷或在一定程度上干擾血管產生之化合物。抗血管生成劑可(例如)為結合涉及促進血管生成之生長因子或生長因子受體的小分子或抗體。在一實施例中，抗血管生成劑係結合血管內皮生長因子(VEGF)之抗體，例如貝伐珠單抗(bevacizumab)(AVASTIN)。
「抗體依賴性細胞介導之細胞毒性」或「ADCC」係指以下細胞毒性形式：其中結合存在於某些細胞毒性細胞(例如NK細胞、嗜中性球及巨噬細胞)上之Fc受體(FcR)之經分泌免疫球蛋白使該等細胞毒性效應細胞能夠特異性地結合帶抗原靶細胞且隨後利用細胞毒素殺滅該靶細胞。介導ADCC之原代細胞(NK細胞)僅表現FcγRIII，而單核球表現FcγRI、FcγRII及FcγRIII。FcR於造血細胞上之表現匯總於Ravetch及Kinet，Annu.Rev.Immunol 9：457-92(1991)之第464頁表3中。為評價所關注分子之ADCC活性，可實施活體外ADCC分析，例如闡述於美國專利第5,500,362號或第5,821,337號或美國專利第6,737,056號(Presta)中者。用於該等分析之可用效應細胞包含PBMC及NK細胞。另一選擇為或另外，可在活體內(例如在諸如揭示於Clynes等人，PNAS(USA)95：652-656(1998)中之動物模型等動物模型中)評價所關注分子之ADCC活性。用於評價ADCC活性之實例性分析提供於本文實例中。
術語「抗-OX40抗體」及「結合OX40之抗體」係指能夠以足夠親和力結合OX40以便該抗體可用作靶向OX40之診斷劑及/或治療劑之抗體。在一實施例中，抗-OX40抗體與無關非OX40蛋白結合之程度小於該抗體與OX40結合之約10%，如藉由(例如)放射免疫分析(RIA)所量測。在某些實施例中，結合OX40之抗體之解離常數(Kd)
Figure 104110569-A0202-12-0017-358
1μM、
Figure 104110569-A0202-12-0017-359
100nM、
Figure 104110569-A0202-12-0017-360
10nM、
Figure 104110569-A0202-12-0017-361
1nM、
Figure 104110569-A0202-12-0017-362
0.1nM、
Figure 104110569-A0202-12-0017-363
0.01nM或
Figure 104110569-A0202-12-0017-364
0.001nM(例如10-8M或更小，例如10-8M至10-13M，例如10-9M至10-13 M)。在某些實施例中，抗-OX40抗體結合在來自不同物種之OX40中保守之OX40表位。
如本文中所使用，術語「結合」、「特異性結合」或「對......具有特異性」係指可量測且可再現之相互作用，例如靶與抗體之間之結合，其決定在異源性分子群體(包含生物分子)存在下靶之存在。舉例而言，結合或特異性結合靶(其可為表位)之抗體係與其結合其他靶相比以更大親和力、親合力更容易地及/或以更長持續時間結合此靶之抗體。在一實施例中，抗體與無關靶之結合程度小於抗體與靶之結合之約10%，如藉由(例如)放射性免疫分析(RIA)所量測。在某些實施例中，特異性結合靶之抗體之解離常數(Kd)
Figure 104110569-A0202-12-0018-365
1μM、
Figure 104110569-A0202-12-0018-366
100nM、
Figure 104110569-A0202-12-0018-367
10nM、
Figure 104110569-A0202-12-0018-368
1nM或
Figure 104110569-A0202-12-0018-369
0.1nM。在某些實施例中，抗體特異性結合蛋白質上在不同物種之蛋白質間保守之表位。在另一實施例中，特異性結合可包含(但不要求)排他性結合。
術語「抗體」在本文中係以最廣泛意義使用且涵蓋各種抗體結構，包含但不限於單株抗體、多株抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)及抗體片段，只要其展示期望抗原結合活性。
「抗體片段」係指除完整抗體外之分子，其包括結合完整抗體所結合之抗原之完整抗體之一部分。抗體片段之實例包含但不限於Fv、Fab、Fab'、Fab’-SH、F(ab')2、雙鏈抗體、線性抗體、單鏈抗體分子(例如scFv)及自抗體片段形成之多特異性抗體。
「結合相同表位之抗體」(作為參考抗體)係指在競爭分析中將參考抗體與其抗原之結合阻斷50%或更高的抗體，且反之，參考抗體在競爭分析中將該抗體與其抗原之結合阻斷50%或更高。實例性競爭分析提供於本文中。
術語「結合結構域」係指多肽之結合另一分子之區。在FcR之情形下，結合結構域可包括其多肽鏈之負責結合Fc區之一部分(例如其α 鏈)。一個有用結合結構域係FcR α鏈之細胞外結構域。
與親本多肽或包括天然序列Fc區之多肽相比，含有具有「改變」FcR、ADCC或吞噬作用活性之變體IgG Fc之多肽具有增強或減弱之FcR結合活性(例如FcγR)及/或ADCC活性及/或吞噬作用活性。
除非另外指示，否則本文所用之術語「OX40」係指來自任一脊椎動物來源之任一天然OX40，該脊椎動物來源包含哺乳動物，例如靈長類動物(例如人類)及齧齒類動物(例如小鼠及大鼠)。該術語涵蓋「全長」未處理OX40以及自處理細胞產生之任一形式的OX40。該術語亦涵蓋OX40之天然存在之變體，例如剪接變體或等位基因變體。實例性人類OX40之胺基酸序列展示於SEQ ID NO：1中。
「OX40活化」係指OX40受體之活化。通常，OX40活化產生信號轉導。
術語「癌症」及「癌性」係指或闡述哺乳動物中特徵通常在於細胞生長失調之生理學病狀。癌症之實例包含但不限於癌瘤、淋巴瘤、母細胞瘤、肉瘤及白血病或淋巴樣惡性腫瘤。該等癌症之更特定實例包含但不限於鱗狀細胞癌(例如上皮鱗狀細胞癌)、肺癌(包含小細胞肺癌，非小細胞肺癌、肺腺癌及肺鱗狀癌瘤)、腹膜癌症、肝細胞癌、胃癌(gastric or stomach cancer)(包含胃腸癌及胃腸道間質癌)、胰臟癌、膠質母細胞瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、泌尿道癌、肝瘤、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜或子宮癌瘤、唾液腺癌瘤、腎癌(kidney or renal cancer)、***癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌瘤、肛門癌瘤、陰經癌瘤、黑素瘤、淺表擴散性黑素瘤、惡性雀斑樣痣黑素瘤、肢端著色斑性黑素瘤、結節性黑素瘤、多發性骨髓瘤及B細胞淋巴瘤、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、急性淋巴母細胞性白血病(ALL)、毛細胞白血病、慢性骨髓母細胞白血病及移植後淋巴組織增殖性病症(PTLD)以及與斑痣性錯構瘤病有關之異 常血管增殖、水腫(例如與腦腫瘤有關者)、麥格氏症候群(Meigs' syndrome)、腦癌以及頭頸癌及有關轉移。在某些實施例中，適於藉由本發明抗體治療之癌症包含乳癌、結腸直腸癌、直腸癌、非小細胞肺癌、膠質母細胞瘤、非何傑金氏淋巴瘤(non-Hodgkins lymphoma，NHL)、腎細胞癌、***癌、肝癌、胰臟癌、軟組織肉瘤、卡波西氏肉瘤(kaposi's sarcoma)、類癌、頭頸癌、卵巢癌、間皮瘤及多發性骨髓瘤。在一些實施例中，癌症係選自：非小細胞肺癌、膠質母細胞瘤、神經母細胞瘤、黑素瘤、***癌瘤(例如三陰性乳癌)、胃癌、結腸直腸癌(CRC)及肝細胞癌瘤。另外，在一些實施例中，癌症係選自：非小細胞肺癌、結腸直腸癌、膠質母細胞瘤及***癌瘤(例如三陰性乳癌)(包含彼等癌症之轉移形式)。
術語「細胞增殖性病症」及「增殖性病症」係指與一定程度之異常細胞增殖有關之病症。在一實施例中，細胞增殖性病症係癌症。
術語「嵌合」抗體係指重鏈及/或輕鏈之一部分源自特定來源或物種、而重鏈及/或輕鏈之其餘部分源自不同來源或物種之抗體。
抗體「種類」係指重鏈所擁有之恆定結構域或恆定區之類型。存在5大類抗體：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，且該等類別中之若干種可進一步分成子類(同種型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。對應於免疫球蛋白之不同種類之重鏈恆定結構域分別稱為α、δ、ε、γ及μ。
「補體依賴性細胞毒性」或「CDC」係指在補體存在下靶細胞之溶解。經典補體途徑之活化係藉由補體系統之第一補體(C1q)與抗體(適當亞類)之結合來開始，該等抗體結合其同族抗原。為評價補體活化，可實施CDC分析，例如如Gazzano-Santoro等人，J.Immunol.Methods 202：163(1996)中所闡述。具有改變之Fc區胺基酸序列(具有變體Fc區之多肽)及增加或降低之C1q結合能力之肽變體闡述於(例如) 於美國專利第6,194,551 B1號及WO 1999/51642中。亦參見(例如)Idusogie等人，J.Immunol.164：4178-4184(2000)中。
術語「細胞生長抑制劑」係指在活體外或活體內阻止細胞生長之化合物或組合物。因此，細胞生長抑制劑可為顯著減小S期中之細胞百分比者。細胞生長抑制劑之其他實例包含藉由誘導G0/G1阻止或M-期阻止來阻斷細胞週期進展之藥劑。人類化抗-Her2抗體曲妥珠單抗(trastuzumab)(HERCEPTIN®)係誘導G0/G1阻止之細胞生長抑制劑之實例。典型M期阻斷劑包含長春花提取物(長春新鹼(vincristine)及長春鹼(vinblastine))、紫杉烷(taxane)及拓撲異構酶II抑制劑(例如多柔比星(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、柔紅黴素(daunorubicin)、依託泊苷(etoposide)及博來黴素(bleomycin))。某些阻止G1之藥劑亦滲透至S-期阻止，例如DNA烷基化劑，例如他莫昔芬(tamoxifen)、潑尼松(prednisone)、達卡巴嗪(dacarbazine)、雙氯乙基甲胺(mechlorethamine)、順鉑(cisplatin)、胺甲蝶呤(methotrexate)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)及ara-C。其他資訊可參見The Molecular Basis of Cancer,Mendelsohn及Israel編輯，第1章，標題為「Cell cycle regulation,oncogenes,and antineoplastic drugs」,Murakami等人(W.B.Saunders,Philadelphia,1995)，例如第13頁。紫杉烷(太平洋紫杉醇(paclitaxel)及多西他賽(docetaxel))係皆源自紫杉樹之抗癌藥。源自歐洲紫杉之多西他賽(TAXOTERE®,Rhone-Poulenc Rorer)係太平洋紫杉醇(TAXOL®,Bristol-Myers Squibb)之半合成類似物。太平洋紫杉醇及多西他賽促進微管自微管蛋白二聚體之組裝並藉由防止解聚而使微管穩定，此可抑制細胞有絲***。
本文所用之術語「細胞毒性劑」係指抑制或防止細胞功能及/或引起細胞死亡或破壞之物質。細胞毒性劑包含但不限於放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212 及Lu之放射性同位素)；化學治療劑或藥物(例如胺甲蝶呤、阿黴素(adriamicin)、長春花生物鹼(vinca alkaloid)(長春新鹼、長春鹼、依託泊苷)、多柔比星、美法侖(melphalan)、絲裂黴素C(mitomycin C)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、柔紅黴素或其他嵌入劑)；生長抑制劑；酶及其片段，例如溶核酶；抗生素；毒素，例如來自細菌、真菌、植物或動物來源之小分子毒素或酶活性毒素，包含其片段及/或變體；及下文所揭示之各種抗腫瘤劑或抗癌劑。
「消耗抗-OX40抗體」係殺滅或缺失OX40表現細胞之抗-OX40抗體。可藉由各種機制來達成OX40表現細胞之消耗，例如抗體依賴性細胞介導之細胞毒性及/或吞噬作用。可在活體外分析OX40表現細胞之消耗，且用於活體外ADCC及吞噬作用分析之實例性方法提供於本文中。在一些實施例中，OX40表現細胞係人類CD4+效應T細胞。在一些實施例中，OX40表現細胞係表現人類OX40之轉基因BT474細胞。
「效應物功能」係指彼等可歸因於抗體之Fc區之生物學活性，其可隨抗體同種型而有所變化。抗體效應物功能之實例包含：C1q結合及補體依賴性細胞毒性(CDC)；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體)之下調；及B細胞活化。
藥劑(例如醫藥調配物)之「有效量」係指在所需時間段內以所需劑量有效達成期望治療或預防結果之量。
「Fc受體」或「FcR」闡述與抗體Fc區結合之受體。在一些實施例中，FcR係天然人類FcR。在一些實施例中，FcR係結合IgG抗體者(γ受體)且包含FcγRI、FcγRII及FcγRIII亞類之受體，包含彼等受體之等位基因變體及選擇性剪接形式。FcγRII受體包含具有類似胺基酸序列之FcγRIIA(「活化受體」)及FcγRIIB(「抑制受體」)，該等胺基酸 序列主要在其細胞質結構域方面不同。活化受體FcγRIIA在其細胞質結構域中含有基於免疫受體酪胺酸之活化基序(ITAM)。抑制受體FcγRIIB在其細胞質結構域中含有基於免疫受體酪胺酸之抑制基序(ITIM)。(例如參見Daëron,Annu.Rev.Immunol.15：203-234(1997))。FcR綜述於(例如)以下文獻中：Ravetch及Kinet,Annu.Rev.Immunol 9：457-92(1991)；Capel等人，Immunomethods 4：25-34(1994)；及de Haas等人，J.Lab.Clin.Med.126：330-41(1995)。在本文中，術語「FcR」涵蓋其他FcR，包含彼等欲在將來鑑別者。術語「Fc受體」或「FcR」亦包含負責將母體IgG轉移至胎中(Guyer等人，J.Immunol.117：587(1976)及Kim等人，J.Immunol.24：249(1994))且調控免疫球蛋白穩態之新生受體FcRn。量測與FcRn之結合之方法為業內已知(例如參見Ghetie及Ward.,Immunol.Today 18(12)：592-598(1997)；Ghetie等人，Nature Biotechnology,15(7)：637-640(1997)；Hinton等人，J.Biol.Chem.279(8)：6213-6216(2004)；WO 2004/92219(Hinton等人)。可(例如)在表現人類FcRn之轉基因小鼠或經轉染人類細胞系中或在投與具有變體Fc區之多肽之靈長類動物中分析活體內與人類FcRn之結合及人類FcRn高親和力結合多肽之血清半衰期。WO 2000/42072(Presta)闡述具有經改良或減少之與FcR之結合之抗體變體。舉例而言，亦參見Shields等人J.Biol.Chem.9(2)：6591-6604(2001)。
本文之術語「Fc區」用於定義免疫球蛋白重鏈中含有恆定區之至少一部分之C-末端區。該術語包含天然序列Fc區及變體Fc區。在一實施例中，人類IgG重鏈Fc區自Cys226或自Pro230延伸至重鏈之羧基-末端。然而，Fc區之C-末端離胺酸(Lys447)可存在或可不存在。除非在本文中另外指定，否則根據EU編號系統(亦稱為EU指數)來編號Fc區或恆定區中之胺基酸殘基，如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD,1991中所闡述。
「功能Fc區」具有天然序列Fc區之「效應物功能」。實例性「效應物功能」包含C1q結合；CDC；Fc受體結合；ADCC；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體；BCR)之下調等。該等效應物功能通常需要Fc區與結合結構域(例如抗體可變結構域)組合且可使用如(例如)本文定義中所揭示之各種分析來評價。
「人類效應細胞」係指表現一或多種FcR且實施效應物功能之白血球。在某些實施例中，該等細胞至少表現FcγRIII且實施ADCC效應物功能。介導ADCC之人類白血球之實例包含周邊血單核細胞(PBMC)、天然殺傷(NK)細胞、單核球、細胞毒性T細胞及嗜中性球。可自天然來源(例如自血液)分離效應細胞。
「框架」或「FR」係指除超變區(HVR)殘基外之可變結構域殘基。可變結構域之FR通常由4個FR結構域：FR1、FR2、FR3及FR4組成。因此，HVR及FR序列通常出現於VH(或VL)中之下列序列中：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
術語「全長抗體」、「完整抗體」及「全抗體」在本文中可互換使用，其係指具有實質上與天然抗體結構類似之結構或具有含有如本文所定義Fc區之重鏈的抗體。
術語「宿主細胞」、「宿主細胞系」及「宿主細胞培養物」可互換使用且係指向其中引入外源核酸之細胞，包含該等細胞之子代。宿主細胞包含「轉化體」及「經轉化細胞」，其包含原代經轉化細胞及源自其之子代(與傳代次數無關)。子代之核酸含量可與親代細胞並不完全相同，但可含有突變。本文包含經篩選或選擇用於天然經轉化細胞中之具有相同功能或生物活性之突變體子代。
「人類抗體」係具有對應於由人類或人類細胞產生或衍生自非 人類來源之抗體之胺基酸序列的胺基酸序列者，該非人類來源利用人類抗體譜或編碼序列之其他人類抗體。人類抗體之此定義尤其不包含含有非人類抗原結合殘基之人類化抗體。
「人類共有框架」係表示在選擇人類免疫球蛋白VL或VH框架序列中最普遍存在之胺基酸殘基之框架。通常，人類免疫球蛋白VL或VH序列選自可變結構域序列之亞組。通常，序列亞組係如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，NIH公開案91-3242,Bethesda MD(1991)，第1-3卷中之亞組。在一實施例中，對於VL而言，亞組係如Kabat等人所述之亞組κI(見上文)。在一實施例中，對於VH而言，該亞組係如Kabat等人所述之III亞組(見上文)。
「人類化」抗體係指包括來自非人類HVR之胺基酸殘基及來自人類FR之胺基酸殘基的嵌合抗體。在某些實施例中，人類化抗體將包括實質上全部之至少一個及通常兩個可變結構域，其中全部或實質上全部之HVR(例如CDR)對應於非人類之彼等HVR，且全部或實質上全部之FR對應於人類抗體之彼等FR。人類化抗體視情況可包括源自人類抗體之抗體恆定區之至少一部分。「人類化形式」之抗體(例如非人類抗體)係指已經受人類化之抗體。
本文所用之術語「超變區」或「HVR」係指抗體可變結構域中序列具有超變性(「互補決定區」或「CDR」)及/或形成在結構上經界定環(「超變環」)及/或含有抗原接觸殘基(「抗原觸點」)之每一區。通常，抗體包括6個HVR：三個位於VH中(H1、H2、H3)，且三個位於VL中(L1、L2、L3)。本文之實例性HVR包含：(a)存在於胺基酸殘基26-32(L1)、50-52(L2)、91-96(L3)、26-32(H1)、53-55(H2)及96-101(H3)處之超變環(Chothia及Lesk,J.Mol.Biol.196：901-917(1987))； (b)存在於胺基酸殘基24-34(L1)、50-56(L2)、89-97(L3)、31-35b(H1)、50-65(H2)及95-102(H3)處之CDR(Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991))；(c)出現於胺基酸殘基27c-36(L1)、46-55(L2)、89-96(L3)、30-35b(H1)、47-58(H2)及93-101(H3)處之抗原觸點(MacCa1lum等人J.Mol.Biol.262：732-745(1996))；及(d)(a)、(b)及/或(c)之組合，包含HVR胺基酸殘基46-56(L2)、47-56(L2)、48-56(L2)、49-56(L2)、26-35(H1)、26-35b(H1)、49-65(H2)、93-102(H3)及94-102(H3)。
除非另外指示，否則可變結構域中之HVR殘基及其他殘基(例如FR殘基)在本文中係根據Kabat等人所述編號(見上文)。
在一實施例中，HVR殘基包括在圖11A-I或說明書中其他地方所鑑別之彼等殘基。
「免疫偶聯物」係偶聯至一或多個異源分子(包含但不限於細胞毒性劑)之抗體。
「個體」(individual或subject)係哺乳動物。哺乳動物包含但不限於家養動物(例如牛、綿羊、貓、狗及馬)、靈長類動物(例如人類及非人類靈長類動物，例如猴子)、兔、及齧齒類動物(例如小鼠及大鼠)。在某些實施例中，個體(individual或subject)係人類。
「促進細胞生長或增殖」意指將細胞之生長或增殖增加至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或100%。
「分離」抗體係已與其天然環境中之組份分離者。在一些實施例中，將抗體純化至具有大於95%或99%之純度，如藉由例如電泳(例如SDS-PAGE、等電聚焦(IEF)、毛細管電泳)或層析(例如離子交換或 反相HPLC)所測定。關於評價抗體純度之方法之綜述，例如參見Flatman等人，J.Chromatogr.B 848：79-87(2007)。
「分離」核酸係指已與其天然環境中之組份分離之核酸分子。分離核酸包含通常含有核酸分子之細胞中所含之核酸分子，但該核酸分子存在於染色體外或存在於與其天然染色體位置不同之染色體位置。
「編碼抗-OX40抗體之分離核酸」係指編碼抗體重鏈及輕鏈(或其片段)之一或多個核酸分子，包含單一載體或單獨載體中之該核酸分子及存在於宿主細胞中一或多個位置處之該核酸分子。
本文所用之術語「單株抗體」係指自實質上同源抗體群獲得之抗體，亦即，包括該群之個別抗體相同及/或結合相同表位，可能之變體抗體除外，例如含有天然存在之突變或在產生單株抗體製劑期間產生，該等變體通常以較小量存在。與通常包含針對不同決定簇(表位)之不同抗體之多株抗體製劑相比，單株抗體製劑之每一單株抗體針對抗原上之單一決定簇。因此，修飾語「單株」指示抗體之特徵在於得自實質上同源之抗體群體，且不應視為需要藉由任一特定方法產生該抗體。舉例而言，擬根據本發明使用之單株抗體可藉由多種技術製得，包含但不限於融合瘤法、重組DNA法、噬菌體展示法及利用含有所有或部分之人類免疫球蛋白基因座之轉基因動物之方法，該等方法及製備單株抗體之其他實例性方法闡述於本文中。
「裸抗體」係指不與異源部分(例如細胞毒性部分)或放射性標記偶聯之抗體。裸抗體可存在於醫藥調配物中。
「天然抗體」係指具有不同結構之天然存在之免疫球蛋白分子。舉例而言，天然IgG抗體係約150,000道爾頓(dalton)之異四聚體糖蛋白，其由二硫鍵鍵結之兩條相同輕鏈及兩條相同重鏈組成。自N-至C-末端，每一重鏈具有可變區(VH)，亦稱為可變重鏈結構域或重鏈可 變結構域，隨後為三個恆定結構域(CH1、CH2及CH3)。類似地，自N-至C-末端，每一輕鏈依次具有可變區(VL)(亦稱為可變輕鏈結構域或輕鏈可變結構域)及恆定輕鏈(CL)結構域。基於抗體恆定結構域之胺基酸序列，可將該抗體之輕鏈分配為兩種類型中之一者，稱為卡帕(κ)及拉姆達(λ)。「天然序列Fc區」包括與自然界中發現之Fc區之胺基酸序列一致的胺基酸序列。天然序列人類Fc區包含天然序列人類IgG1 Fc區(非A及A同種異型)；天然序列人類IgG2 Fc區；天然序列人類IgG3 Fc區；及天然序列人類IgG4 Fc區以及其天然存在之變體。
術語「包裝插頁」用於係指通常包含於治療產品中之商業包裝內之說明，其含有關於適應症、用法、劑量、投與、組合療法、禁忌及/或關於治療產品之使用之警告的資訊。
就參考肽序列而言，「胺基酸序列一致性百分比(%)」定義為在比對序列並引入空位(若需要)以達到最大序列一致性百分比後候選序列中與參考肽序列中之胺基酸殘基一致之胺基酸殘基的百分比，且不將任何保守取代視為序列一致性之一部分。出於確定胺基酸序列一致性百分比之目的，比對可以熟習此項技術者所熟知之各種方式來達成，例如使用可公開獲得之電腦軟體，例如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟體。彼等熟習此項技術者可確定用於比對序列之合適參數，包含在所比較序列之全長範圍內達成最大比對所需要之任何算法。然而，出於本文目的，使用序列對比電腦程式ALIGN-2來產生胺基酸序列一致性%之值。ALIGN-2序列對比電腦程式係由Genentech公司設計，且天然碼與使用者文件已一起編入美國版權局，Washington D.C.,20559中，其中其以美國版權註冊號TXU510087註冊。ALIGN-2程式可自Genentech公司，South San Francisco,California公開獲得，或可自源代碼進行編譯。ALIGN-2程式應經編譯用於UNIX操作系統(包含數位UNIX V4.0D)中。所有序列 比較參數皆由ALIGN-2程式設定且不改變。
在採用ALIGN-2進行胺基酸序列比較之情形下，給定胺基酸序列A相對於(to)、與(with)或對(against)給定胺基酸序列B之胺基酸序列一致性%(或者可表達為相對於、與或對給定胺基酸序列B具有或包括一定胺基酸序列一致性%之給定胺基酸序列A)計算如下：100乘以分數X/Y
其中X係在A與B之程式比對中由序列比對程式ALIGN-2評定為一致性匹配之胺基酸殘基數，且其中Y係B中胺基酸殘基之總數。應瞭解，若胺基酸序列A之長度不等於胺基酸序列B之長度，則A相對於B之胺基酸序列一致性百分比將不等於B相對於A之胺基酸序列一致性百分比。除非另外明確陳述，否則本文所用之所有胺基酸序列一致性百分比的值皆係根據前面緊接段落中所闡述使用ALIGN-2電腦程式獲得。
術語「醫藥調配物」係指如下製劑：其所呈現形式允許其中所含活性成份之生物活性有效，且不含對將投與該調配物之受試者具有不可接受毒性的其他組份。
「醫藥上可接受之載劑」係指醫藥調配物中除活性成份外對個體無毒之成份。醫藥上可接受之載劑包含但不限於緩衝劑、賦形劑、穩定劑或防腐劑。
如本文中所使用，「治療」(及其語法變體，例如「治療(treat)」或「治療(treating)」)係指試圖改變所治療個體之自然病程之臨床介入，且可實施用於預防或在臨床病程期間實施。治療之期望效應包含但不限於預防疾病發生或復發、減輕症狀、減弱疾病之任何直接或間接病理結果、預防轉移、降低疾病進展速率、改善或緩和疾病狀態及緩解或改良預後。在一些實施例中，使用本發明抗體來延遲疾病發生或減緩疾病進展。
術語「腫瘤」係指所有腫瘤性細胞生長及增殖(無論惡性的抑或良性的)以及所有癌前期及癌症性細胞及組織。本文中所提及之術語「癌症」、「癌症性」、「細胞增殖性病症」、「增殖性病症」及「腫瘤」並不相互排斥。
術語「可變區」或「可變結構域」係指抗體重鏈或輕鏈中參與使抗體與抗原結合之結構域。天然抗體之重鏈及輕鏈之可變結構域(分別為VH及VL)通常具有類似結構，其中各結構域包括4個保守框架區(FR)及三個超變區(HVR)。(例如參見Kindt等人，Kuby Immunology，第6版，W.H.Freeman及Co.，第91頁(2007)。)單一VH或VL結構域可足以賦予抗原結合特異性。另外，結合特定抗原之抗體可使用來自結合該抗原之抗體之VH或VL結構域分離以分別篩選互補VL或VH結構域文庫。例如參見Portolano等人，J.Immunol.150：880-887(1993)；Clarkson等人，Nature 352：624-628(1991)。
「變體Fc區」包括與天然序列Fc區之不同之處在於至少一種胺基酸修飾、較佳地一或多種胺基酸取代之胺基酸序列。較佳地，變體Fc區與天然序列Fc區或親本多肽之Fc區相比具有至少一種胺基酸取代，例如在天然序列Fc區或親本多肽之Fc區中具有約一種至約十種胺基酸取代及較佳地約一種至約五種胺基酸取代。本文之變體Fc區較佳地與天然序列Fc區及/或親本多肽之Fc區擁有至少約80%同源性，且最佳地與其擁有至少約90%同源性，更佳地與其擁有至少約95%同源性。
本文所用之術語「載體」係指能夠轉運與其連接之另一核酸之核酸分子。術語包含呈自複製核酸結構之載體以及納入引入其之宿主細胞基因組中之載體。某些載體能夠引導與其可操作連接之核酸之表現。該等載體在本文中稱為「表現載體」。
「VH III亞組共有框架」包括自Kabat等人之可變重鏈III亞組中 之胺基酸序列獲得之共有序列。在一實施例中，該VH III亞組共有框架胺基酸序列包括下列序列中之每一者的至少一部分或全部：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS(SEQ ID NO：185)-H1-WVRQAPGKGLEWV(SEQ ID NO：186)-H2-RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC(SEQ ID NO：187)-H3-WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：188)。
「VLI亞組共有框架」包括自Kabat等人之可變輕鏈κ I亞組中之胺基酸序列獲得之共有序列。在一實施例中，VH亞組I共有框架胺基酸序列包括每一下列序列之至少一部分或全部：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：189)-L1-WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO：190)-L2-GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO：191)-L3-FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：192)。
本文所用之術語「細胞毒性劑」係指抑制或防止細胞功能及/或引起細胞死亡或破壞之物質。細胞毒性劑包含但不限於放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212及Lu之放射性同位素)；化學治療劑；生長抑制劑；酶及其片段，例如溶核酶；及毒素，例如細菌、真菌、植物或動物來源之小分子毒素或之酶活性毒素，包含其片段及/或變體。實例性細胞毒性劑可選自抗微管劑、鉑配位錯合物、烷基化劑、抗生素劑、拓撲異構酶II抑制劑、抗代謝物、拓撲異構酶I抑制劑、激素及激素類似物、信號轉導路徑抑制劑、非受體酪胺酸激酶血管發生抑制劑、免疫治療劑、促細胞凋亡劑、LDH-A抑制劑、脂肪酸生物合成抑制劑、細胞週期信號傳導抑制劑、HDAC抑制劑、蛋白酶體抑制劑及癌症代謝抑制劑。
在實施例中，細胞毒性劑係選自抗微管劑、鉑配位錯合物、烷 基化劑、抗生素劑、拓撲異構酶II抑制劑、抗代謝物、拓撲異構酶I抑制劑、激素及激素類似物、信號轉導路徑抑制劑、非受體酪胺酸激酶血管發生抑制劑、免疫治療劑、促細胞凋亡劑、LDH-A抑制劑、脂肪酸生物合成抑制劑、細胞週期信號傳導抑制劑、HDAC抑制劑、蛋白酶體抑制劑及癌症代謝抑制劑。在一種實施例中，細胞毒性劑係紫杉烷。在一種實施例中，紫杉烷係太平洋紫杉醇或多西他賽。在一種實施例中，細胞毒性劑係鉑藥劑。在一種實施例中，細胞毒性劑係EGFR拮抗劑。在一種實施例中，EGFR拮抗劑係N-(3-乙炔基苯基)-6,7-雙(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺(例如埃羅替尼(erlotinib))。在一種實施例中，細胞毒性劑係RAF抑制劑。在一實施例中，RAF抑制劑係BRAF及/或CRAF抑制劑。在一種實施例中，RAF抑制劑係維拉菲尼(vemurafenib)。在一種實施例中，細胞毒性劑係PI3K抑制劑。
「化學治療劑」包含可用於治療癌症之化學化合物。化學治療劑之實例包含埃羅替尼(TARCEVA®,Genentech/OSI Pharm.)、硼替佐米(bortezomib)(VELCADE®,Millennium Pharm.)、雙硫侖(disulfiram)、沒食子酸表沒食子兒茶素酯、嗜鹽放線菌醯胺A、卡非佐米(carfilzomib)、17-AAG(格爾德黴素(geldanamycin))、根赤殼菌素(radicicol)、乳酸去氫酶A(LDH-A)、氟維司群(fulvestrant)(FASLODEX®,AstraZeneca)、舒尼替尼(sunitib)(SUTENT®,Pfizer/Sugen)、來曲唑(letrozole)(FEMARA®,Novartis)、甲磺酸伊馬替尼(imatinib mesylate)(GLEEVEC®,Novartis)、非蘇那特(finasunate)(VATALANIB®,Novartis)、奧沙利鉑(oxaliplatin)(ELOXATIN®,Sanofi)、5-FU(5-氟尿嘧啶)、甲醯四氫葉酸(leucovorin)、雷帕黴素(Rapamycin)(西羅莫司(Sirolimus),RAPAMUNE®,Wyeth)、拉帕替尼(Lapatinib)(TYKERB®,GSK572016,Glaxo Smith Kline)、洛那法尼(lonafamib)(SCH 66336)、索拉非尼(sorafenib)(NEXAVAR®,Bayer Labs)、吉非替尼(gefitinib)(IRESSA®,AstraZeneca)、AG1478；烷基化劑，例如噻替派(thiotepa)及CYTOXAN®環磷醯胺(cyclosphosphamide)；磺酸烷基酯，例如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)及哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶(aziridine)，例如苯唑達帕(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、美托達帕(meturedopa)及尤裡達帕(uredopa)；伸乙亞胺及甲基三聚氰胺，包含六甲蜜胺(altretamine)、三伸乙基三聚氰胺、三伸乙基磷醯胺、三伸乙基硫磷醯胺及三甲基蜜胺；多聚乙醯(尤其布拉它辛(bullatacin)及布拉它辛酮(bullatacinone))；喜樹鹼(camptothecin)(包含托泊替康(topotecan)及伊立替康(irinotecan))；苔蘚蟲素(bryostatin)；海綿多聚乙醯(callystatin)；CC1065(包含其阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)及比折來新(bizelesin)合成類似物)；念珠藻素(cryptophycin)(尤其念珠藻素1及念珠藻素8)；腎上腺皮質類固醇(包含潑尼松(prednisone)及潑尼松龍(prednisolone))；乙酸環丙孕酮(cyproterone acetate)；5α-還原酶(包含非那雄胺(finasteride)及度他雄胺(dutasteride))；伏立諾他(vorinostat)、羅米地辛(romidepsin)、帕比司他(panobinostat)、丙戊酸(valproic acid)、莫替司他(mocetinostat)、多拉斯他汀(dolastatin)；阿地白介素(aldesleukin)、滑石粉多卡米星(talc duocarmycin)(包含合成類似物KW-2189及CB1-TM1)；軟珊瑚醇(eleutherobin)；水鬼蕉鹼(pancratistatin)；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海綿抑制素(spongistatin)；氮芥子氣(nitrogen mustard)，例如苯丁酸氮芥、萘氮芥(chlomaphazine)、氯磷醯胺(chlorophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、雙氯乙基甲胺、氧化雙氯乙基甲胺鹽酸鹽、美法侖、新氮芥(novembichin)、膽甾醇對苯乙酸氮芥(phenesterine)、潑尼氮芥(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥；亞硝基脲，例如卡莫司汀(carmustine)、 氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)及雷莫司汀(ranimustine)；抗生素，例如烯二炔類抗生素(例如卡奇黴素(calicheamicin)，尤其卡奇黴素γ1I、卡奇黴素ωI1(Angew Chem.Intl.Ed.Engl.199433：183-186)；達內黴素(dynemicin)，包含達內黴素A；雙磷酸鹽，例如氯屈膦酸鹽(clodronate)；埃斯波黴素(esperamicin)；以及新製癌菌素(neocarzinostatin)發色團及相關色蛋白烯二炔抗生素發色團)、阿克拉黴素(aclacinomysins)、放線菌素(actinomycin)、胺茴黴素(anthramycin)、偶氮絲胺酸、博來黴素、放線菌素c(cactinomycin)、卡雷比素(carabicin)、洋紅黴素(caminomycin)、嗜癌黴素(carzinophilin)、色黴素(chromomycinis)、更生黴素(dactinomycin)、柔紅黴素、地托比星(detorubicin)、6-重氮-5-側氧基-L-正白胺酸、ADRIAMYCIN®(多柔比星)、嗎啉基-多柔比星、氰基嗎啉基-多柔比星、2-吡咯啉基-多柔比星及去氧多柔比星、表柔比星、依索比星(esorubicin)、伊達比星(idarubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素(例如絲裂黴素C)、黴酚酸(mycophenolic acid)、諾拉黴素(nogalamycin)、橄欖黴素(olivomycin)、培洛黴素(peplomycin)、泊非黴素(porfiromycin)、嘌羅黴素(puromycin)、三鐵阿黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑黴素(streptonigrin)、鏈佐星(streptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司他汀(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代謝物，例如胺甲喋呤及5-氟尿嘧啶(5-FU)；葉酸類似物，例如二甲葉酸(denopterin)、胺甲喋呤、蝶羅呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤類似物，例如氟達拉濱(fludarabine)、6-巰基嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤；嘧啶類似物，例如安西他濱(ancitabine)、阿紮胞苷(azacitidine)、6-阿紮尿苷(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞 苷(cytarabine)、二去氧尿苷、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷；雄激素，例如卡普睪酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、環硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睪內酯；抗腎上腺劑，例如胺魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸補充劑，例如亞葉酸；醋葡醛內酯(aceglatone)；醛磷醯胺糖苷；胺基酮戊酸；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；貝拉布昔(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依達曲沙(edatrexate)；迪福胺(defofamine)；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；依氟鳥胺酸(eflornithine)；依利醋銨(elliptinium acetate)；埃博黴素(epothilone)；依託格魯(etoglucid)；硝酸鎵；羥基脲；香菇多糖(lentinan)；氯尼達明(lonidamine)；類美坦素，例如美坦辛(maytansine)及安絲菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌達醇(mopidamol)；尼曲吖唆(nitraerine)；噴司他丁(pentostatin)；蛋胺氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸；2-乙基醯肼；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK®多糖複合體(JHS Natural Products,Eugene,Oreg.)；雷佐生(razoxane)；根黴素(rhizoxin)；昔唑飛蘭(sizofuran)；鍺螺胺(spirogermanium)；替奴佐酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌(triaziquone)；2,2',2"-三氯三乙胺；單端孢黴烯(trichothecene)(尤其T-2毒素、撫孢菌素A(verrucarin A)、桿孢菌素A(roridin A)及蛇形菌素(anguidine))；烏拉坦(urethan)；長春地辛(vindesine)；達卡巴嗪；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴衛矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；葛胞嘧啶(gacytosine)；***糖苷(「Ara-C」)；環磷醯胺；噻替派；紫杉烷(taxoid)，例如TAXOL(太平洋紫杉醇；Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)、 ABRAXANE®(不含克列莫佛(Cremophor-free))、太平洋紫杉醇之白蛋白改造型奈米顆粒調配物(American Pharmaceutical Partners,Schaumberg,Ill.)及TAXOTERE®(多西他賽、多西紫杉醇(doxetaxel)；Sanofi-Aventis)；苯丁酸氮芥；GEMZAR®(吉西他濱(gemcitabine))；6-硫鳥嘌呤；巰基嘌呤；胺甲喋呤；鉑類似物，例如順鉑及卡鉑(carboplatin)；長春鹼)；依託泊苷(VP-16)；異環磷醯胺；米托蒽醌；長春新鹼；NAVELBINE®(長春瑞濱(vinorelbine))；諾消靈(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；依達曲沙(edatrexate)；道諾黴素(daunomycin)；胺基蝶呤(aminopterin)；卡培他濱(XELODA®)；伊班膦酸鹽(ibandronate)；CPT-11；拓撲異構酶抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥胺酸(DMFO)；類視色素，例如視黃酸；及上述任一者之醫藥上可接受之鹽、酸及衍生物。
化學治療劑亦包含：(i)抗激素劑，其用於調控或抑制激素對腫瘤之作用，例如抗***及選擇性***受體調變劑(SERM)，包含(例如)他莫昔芬(包含NOLVADEX®；檸檬酸他莫昔芬)、雷洛昔芬(raloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、依多昔芬(iodoxyfene)、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、凱奧昔芬(keoxifene)、LY117018、奧那司酮(onapristone)及FARESTON®(檸檬酸托瑞米芬(toremifine citrate))；(ii)芳香酶抑制劑，其抑制酶芳香酶，其調控腎上腺中之***產生，例如，4(5)-咪唑、胺魯米特、MEGASE®(乙酸甲地孕酮(megestrol acetate))、AROMASIN®(依西美坦(exemestane)；Pfizer)、福美坦(formestanie)、法倔唑(fadrozole)、RIVISOR®(伏氯唑(vorozole))、FEMARA®(來曲唑；Novartis)及ARIMIDEX®(阿那曲唑(anastrozole)；AstraZeneca)；(iii)抗雄激素，例如氟他胺(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、亮丙瑞林(leuprolide)及亮丙瑞林(goserelin)；布舍瑞林(buserelin)、曲普瑞林(tripterelin)、 乙酸甲羥孕酮(medroxyprogesterone acetate)、己烯雌酚(diethylstilbestrol)、倍美力(premarin)、氟甲睪酮(fluoxymesterone)、全反式維A酸(all transretionic acid)、芬維A胺(fenretinide)以及曲沙他濱(troxacitabine)(1,3-二氧雜環戊烷核苷胞嘧啶類似物)；(iv)蛋白激酶抑制劑；(v)脂質激酶抑制劑；(vi)反義寡核苷酸，尤其彼等抑制信號傳導路徑中與異常細胞增殖有關之基因之表現者，例如PKC-α、Ralf及H-Ras；(vii)核糖酶，例如VEGF表現抑制劑(例如ANGIOZYME®)及HER2表現抑制劑；(viii)疫苗，例如基因療法疫苗，例如ALLOVECTIN®、LEUVECTIN®及VAXID®；PROLEUKIN®、rIL-2；拓撲異構酶1抑制劑，例如LURTOTECAN®；ABARELIX® rmRH；及(ix)上述任一者之醫藥上可接受之鹽、酸及衍生物。
活性治療劑亦包含抗體，例如阿侖珠單抗(alemtuzumab)(Campath)、貝伐珠單抗(AVASTIN®,Genentech)；西妥昔單抗(cetuximab)(ERBITUX®,Imclone)；帕尼單抗(panitumumab)(VECTIBIX®,Amgen)、利妥昔單抗(rituximab)(RITUXAN®,Genentech/Biogen Idec)、帕妥珠單抗(pertuzumab)(OMNITARG®,2C4,Genentech)、曲妥珠單抗(HERCEPTIN®,Genentech)、托西莫單抗(tositumomab)(Bexxar,Corixia)及抗體藥物偶聯物吉妥單抗(gemtuzumab ozogamicin)(MYLOTARG®,Wyeth)。具有作為與本發明化合物組合之藥劑之治療潛力之其他人類化單株抗體包含：阿普珠單抗(apolizumab)、阿塞珠單抗(aselizumab)、托珠單抗(atlizumab)、巴皮紐阻單抗(bapineuzumab)、莫比伐珠單抗(bivatuzumab mertansine)、莫坎妥珠單抗(cantuzumab mertansine)、西利珠單抗(cedelizumab)、賽妥珠單抗(certolizumab pegol)、西土珠單抗(cidfusituzumab)、西杜珠單抗(cidtuzumab)、達珠單抗(daclizumab)、 艾庫組單抗(eculizumab)、依法珠單抗(efalizumab)、依帕珠單抗(epratuzumab)、厄利珠單抗(erlizumab)、非維珠單抗(felvizumab)、芳妥珠單抗(fontolizumab)、吉妥單抗、奧英妥珠單抗(inotuzumab ozogamicin)、伊匹單抗(ipilimumab)、拉貝珠單抗(labetuzumab)、林妥珠單抗(lintuzumab)、馬妥珠單抗(matuzumab)、美泊利單抗(mepolizumab)、莫維珠單抗(motavizumab)、莫特珠單抗(motovizumab)、那他珠單抗(natalizumab)、尼妥珠單抗(nimotuzumab)、諾維珠單抗(nolovizumab)、努維珠單抗(numavizumab)、歐力珠單抗(ocrelizumab)、奧馬佐單抗(omalizumab)、帕利珠單抗(palivizumab)、帕考珠單抗(pascolizumab)、佩斯珠單抗(pecfusituzumab)、佩土珠單抗(pectuzumab)、培克珠單抗(pexelizumab)、拉維珠單抗(ralivizumab)、蘭尼單抗(ranibizumab)、瑞利珠單抗(reslivizumab)、來利珠單抗(reslizumab)、萊維珠單抗(resyvizumab)、羅維珠單抗(rovelizumab)、魯利單抗(ruplizumab)、西羅珠單抗(sibrotuzumab)、希普利珠單抗(siplizumab)、索土珠單抗(sontuzumab)、他珠單抗(tacatuzumab tetraxetan)、他度珠單抗(tadocizumab)、他利珠單抗(talizumab)、替非珠單抗(tefibazumab)、托珠單抗(tocilizumab)、托利珠單抗(toralizumab)、西莫白介素單抗(tucotuzumab celmoleukin)、吐西珠單抗(tucusituzumab)、烏維珠單抗(umavizumab)、烏珠單抗(urtoxazumab)、優特克單抗(ustekinumab)、維西珠單抗(visilizumab)及抗介白素-12(ABT-874/J695,Wyeth Research及Abbott實驗室，其係經基因修飾以識別介白素-12 p40蛋白質之重組排他性人類序列、全長IgG1 λ抗體)。
化學治療劑亦包含「EGFR抑制劑」，其係指結合EGFR或另外與EGFR直接相互作用且防止或減小其信號傳導活性之化合物，且或者 稱為「EGFR拮抗劑」。該等藥劑之實例包含結合EGFR之抗體及小分子。結合EGFR之抗體之實例包含MAb 579(ATCC CRL HB 8506)、MAb 455(ATCC CRL HB8507)、MAb 225(ATCC CRL 8508)、MAb 528(ATCC CRL 8509)(參見Mendelsohn等人之美國專利第4,943,533號)及其變體(例如嵌合225(C225或西妥昔單抗；ERBUTIX®)及重新定形人類225(H225)(參見WO 96/40210,Imclone Systems公司))；IMC-11F8，其係完全人類、EGFR靶定抗體(Imclone)；結合II型突變體EGFR之抗體(美國專利第5,212,290號)；結合EGFR之人類化及嵌合抗體，如美國專利第5,891,996號中所闡述；及結合EGFR之人類抗體，例如ABX-EGF或帕尼單抗(參見WO98/50433,Abgenix/Amgen)；EMD 55900(Stragliotto等人，Eur.J.Cancer 32A：636-640(1996))；EMD7200(馬妥珠單抗)，針對與EGF及TGF-α競爭EGFR結合之EGFR之人類化EGFR抗體(EMD/Merck)；人類EGFR抗體HuMax-EGFR(GenMab)；稱為E1.1、E2.4、E2.5、E6.2、E6.4、E2.11、E6.3及E7.6.3且闡述於US6,235,883中之完全人類抗體；MDX-447(Medarex公司)；及mAb 806或人類化mAb 806(Johns等人，J.Biol.Chem.279(29)：30375-30384(2004))。抗EGFR抗體可與細胞毒性劑偶聯，由此生成免疫偶聯物(例如參見EP659,439A2,Merck Patent GmbH)。EGFR拮抗劑包含小分子，例如闡述於美國專利編號：5,616,582、5,457,105、5,475,001、5,654,307、5,679,683、6,084,095、6,265,410、6,455,534、6,521,620、6,596,726、6,713,484、5,770,599、6,140,332、5,866,572、6,399,602、6,344,459、6,602,863、6,391,874、6,344,455、5,760,041、6,002,008及5,747,498中以及下列PCT公開案：WO98/14451、WO98/50038、WO99/09016及WO99/24037中之化合物。特定小分子EGFR拮抗劑包含OSI-774(CP-358774，埃羅替尼，TARCEVA® Genentech/OSI Pharmaceuticals)； PD 183805(CI 1033，2-丙烯醯胺，N-[4-[(3-氯-4-氟苯基)胺基]-7-[3-(4-嗎啉基)丙氧基]-6-喹唑啉基]-二鹽酸鹽，Pfizer公司)；ZD1839(吉非替尼，IRESSA®，4-(3’-氯-4’-氟苯胺基)-7-甲氧基-6-(3-嗎啉基丙氧基)喹唑啉，AstraZeneca)；ZM 105180((6-胺基-4-(3-甲基苯基-胺基)-喹唑啉，Zeneca)；BIBX-1382(N8-(3-氯-4-氟-苯基)-N2-(1-甲基-六氫吡啶-4-基)-嘧啶并[5,4-d]嘧啶-2,8-二胺，Boehringer Ingelheim)；PKI-166((R)-4-[4-[(1-苯基乙基)胺基]-1H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基]-苯酚)；(R)-6-(4-羥基苯基)-4-[(1-苯基乙基)胺基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶)；CL-387785(N-[4-[(3-溴苯基)胺基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔醯胺)；EKB-569(N-[4-[(3-氯-4-氟苯基)胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-4-(二甲基胺基)-2-丁烯醯胺)(Wyeth)；AG1478(Pfizer)；AG1571(SU 5271；Pfizer)；雙重EGFR/HER2酪胺酸激酶抑制劑，例如拉帕替尼(TYKERB®,GSK572016或N-[3-氯-4-[(3氟苯基)甲氧基]苯基]-6[5[[[2甲基磺醯基)乙基]胺基]甲基]-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺)。
化學治療劑亦包含「酪胺酸激酶抑制劑」，包含前述段落中所述之EGFR靶定藥物；小分子HER2酪胺酸激酶抑制劑，例如可自Takeda獲得之TAK165；CP-724,714，其係ErbB2受體酪胺酸激酶之口服選擇性抑制劑(Pfizer及OSI)；雙重HER抑制劑，例如優先結合EGFR但抑制HER2及EGFR過度表現細胞之EKB-569(可自Wyeth獲得)；拉帕替尼(GSK572016；可自Glaxo-SmithKline獲得)，其係口服HER2及EGFR酪胺酸激酶抑制劑；PKI-166(可自Novartis獲得)；pan-HER抑制劑，例如卡納替尼(canertinib)(CI-1033；Pharmacia)；Raf-1抑制劑，例如可自ISIS Pharmaceuticals獲得之抑制Raf-1信號傳導之反義藥劑ISIS-5132；非HER靶定TK抑制劑，例如甲磺酸伊馬替尼(GLEEVEC®，可自Glaxo SmithKline獲得)；多靶定酪胺酸激酶抑制劑，例如舒尼替尼(sunitinib)(SUTENT®，可自Pfizer獲得)；VEGF受 體酪胺酸激酶抑制劑，例如發他拉尼(vatalanib)(PTK787/ZK222584，可自Novartis/Schering AG獲得)；MAPK細胞外調控激酶I抑制劑CI-1040(可自Pharmacia獲得)；喹唑啉類，例如PD 153035,4-(3-氯苯胺基)喹唑啉；吡啶并嘧啶；嘧啶并嘧啶；吡咯并嘧啶，例如CGP 59326、CGP 60261及CGP 62706；吡唑并嘧啶，4-(苯基胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶；薑黃素(curcumin)(二阿魏醯基甲烷，4,5-雙(4-氟苯胺基)鄰苯二甲醯亞胺)；含有硝基噻吩部分之酪胺酸磷酸化抑制劑；PD-0183805(Warner-Lamber)；反義分子(例如彼等結合編碼HER之核酸)者；喹喔啉類(美國專利第5,804,396號)；酪胺酸磷酸化抑制劑(美國專利第5,804,396號)；ZD6474(Astra Zeneca)；PTK-787(Novartis/Schering AG)；pan-HER抑制，例如CI-1033(Pfizer)；Affinitac(ISIS3521；Isis/Lilly)；甲磺酸伊馬替尼(GLEEVEC®)；PKI 166(Novartis)；GW2016(Glaxo SmithKline)；CI-1033(Pfizer)；EKB-569(Wyeth)；司馬沙尼(Semaxinib)(Pfizer)；ZD6474(AstraZeneca)；PTK-787(Novartis/Schering AG)；INC-1C11(Imclone)、雷帕黴素(西羅莫司，RAPAMUNE®)；或如下列專利公開案中之任一者中所闡述：美國專利第5,804,396號；WO 1999/09016(American Cyanamid)；WO 1998/43960(American Cyanamid)；WO 1997/38983(Warner Lambert)；WO 1999/06378(Warner Lambert)；WO 1999/06396(Warner Lambert)；WO 1996/30347(Pfizer公司)；WO 1996/33978(Zeneca)；WO 1996/3397(Zeneca)及WO 1996/33980(Zeneca)。
化學治療劑亦包含***(dexamethasone)、干擾素、秋水仙鹼(colchicine)、氯苯胺啶(metoprine)、環孢菌素(cyclosporine)、兩性黴素(amphotericin)、甲硝唑(metronidazole)、阿侖珠單抗、阿利維a酸(alitretinoin)、別嘌呤醇(allopurinol)、胺磷汀(amifostine)、三氧化砷、天門冬醯胺酶、活BCG、貝伐單抗(bevacuzimab)、貝沙羅汀 (bexarotene)、克拉屈濱(cladribine)、氯法拉濱(clofarabine)、促紅血球生成素α、地尼白介素(denileukin)、右雷佐生(dexrazoxane)、阿法依伯汀(epoetin alfa)、埃羅替尼(elotinib)、非格司亭(filgrastim)、乙酸組胺瑞林(histrelin acetate)、替伊莫單抗(ibritumomab)、干擾素α-2a、干擾素α-2b、來那度胺(lenalidomide)、左旋咪唑(levamisole)、美司鈉(mesna)、甲氧沙林(methoxsalen)、苯丙酸諾龍(nandrolone)、苯丙酸諾龍(nelarabine)、諾非單抗(nofetumomab)、奧普瑞白介素(oprelvekin)、帕利夫明(palifermin)、帕瑪二磷酸(pamidronate)、培加酶(pegademase)、培門冬酶(pegaspargase)、培非司亭(pegfilgrastim)、培美曲塞二鈉(pemetrexed disodium)、普利黴素(plicamycin)、卟吩姆鈉(porfimer sodium)、奎納克林(quinacrine)、拉布立酶(rasburicase)、沙格司亭(sargramostim)、替莫唑胺(temozolomide)、VM-26、6-TG、托瑞米芬(toremifene)、維a酸(tretinoin)、ATRA、戊柔比星(valrubicin)、唑來膦酸鹽(zoledronate)及唑來膦酸及其醫藥上可接受之鹽。
化學治療劑亦包含氫化可的松(hydrocortisone)、乙酸氫化可的松(hydrocortisone acetate)、乙酸可的松(cortisone acetate)、新戊酸替可的松(tixocortol pivalate)、曲安奈德(triamcinolone acetonide)、曲安西龍醇(triamcinolone alchol)、莫米松(mometasone)、安西奈德(amcihonide)、布***(budesohide)、***(desonide)、乙酸氟輕鬆(fluocinonide)、氟輕鬆(fluocinolone acetohide)、倍他米松(betamethasone)、磷酸鈉(betamethasone sodium phosphate)、***、***磷酸鈉、氟可龍(fluocortolone)、丁酸氫化可的松-17、戊酸氫化可的松-17、二丙酸阿克羅美他松(aclometasone dipropionate)、戊酸倍他米松(betamethasone valerate)、二丙酸倍他米松(betamethasone dipropionate)、潑尼卡酯(prednicarbate)、丁酸氯倍 他松-17(clobetasone-17-butyrate)、丙酸氯倍他索-17(clobetasol-17-propionate)、己酸氟可龍(fluocortolone caproate)、新戊酸氟可龍(fluocortolone pivalate)及乙酸氟潑尼定(fluprednidene acetate)；免疫選擇性抗發炎性肽(ImSAID)，例如苯基丙胺酸-麩醯胺酸-甘胺酸(FEG)及其D-異構體形式(feG)(IMULAN BioTherapeutics,LLC)；抗風濕性藥物，例如硫唑嘌呤(azathioprine)、環孢素(ciclosporin)(環孢菌素A)、D-青黴胺(D-penicillamine)、金鹽、羥氯喹(hydroxychloroquine)、來氟米特(leflunomide)、米諾環素(minocycline)、柳氮磺吡啶(sulfasalazine)；腫瘤壞死因子α(TNFα)阻斷劑，例如依那西普(etanercept)(Enbrel)、英夫利昔單抗(infliximab)(Remicade)、阿達木單抗(adalimumab)(Humira)、賽妥珠單抗(certolizumab pegol)(Cimzia)、戈利木單抗(golimumab)(Simponi)；介白素1(IL-1)阻斷劑，例如阿那白滯素(anakinra)(Kineret)，T細胞共刺激阻斷劑，例如阿巴他塞(abatacept)(Orencia)；介白素6(IL-6)阻斷劑，例如托珠單抗(tocilizumab)(ACTEMERA®)；介白素13(IL-13)阻斷劑，例如來金珠單抗(lebrikizumab)；干擾素α(IFN)阻斷劑，例如羅利珠單抗(Rontalizumab)；β7整合素阻斷劑，例如rhuMAb β7；IgE路徑阻斷劑，例如抗M1 prime；分泌同源三聚體LTa3及膜結合異源三聚體LTa1/β2阻斷劑，例如抗淋巴毒素α(LTa)；放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212及Lu之放射性同位素)；多種試驗劑，例如硫代鉑(thioplatin)、PS-341、苯基丁酸酯、ET-18-OCH3或法尼基轉移酶抑制劑(L-739749、L-744832)；多酚，例如槲皮素(quercetin)、白藜蘆醇(resveratrol)、四羥反式茋(piceatannol)、表沒食子兒茶素沒食子酸酯(epigallocatechine gallate)、茶黃素(theaflavin)、黃烷醇(flavanol)、原花青素(procyanidin)、白樺脂酸(betulinic acid)及其衍生物；自體吞噬 抑制劑，例如氯喹(chloroquine)；δ-9-四氫***酚(屈***酚(dronabinol)，MARINOL®)；β-拉帕醌(beta-lapachone)；拉帕醇(lapachol)；秋水仙鹼；白樺脂酸；乙醯基喜樹鹼(acetylcamptothecin)、東莨菪素(scopolectin)及9-胺基喜樹鹼)；鬼臼毒素(podophyllotoxin)；替加氟(tegafur)(UFTORAL®)；貝沙羅汀(TARGRETIN®)；雙膦酸鹽，例如氯屈膦酸鹽(clodronate)(例如BONEFOS®或OSTAC®)、羥乙磷酸鹽(etidronate)(DIDROCAL®)、NE-58095、唑來膦酸/唑來膦酸鹽(ZOMETA®)、阿屈膦酸鹽(alendronate)(FOSAMAX®)、帕瑪二磷酸(AREDIA®)、替魯膦酸鹽(tiludronate)(SKELID®)或利塞膦酸鹽(risedronate)(ACTONEL®)；及表皮生長因子受體(EGF-R)；疫苗，例如THERATOPE®疫苗；哌立福辛(perifosine)、COX-2抑制劑(例如塞來考昔(celecoxib)或艾托考昔(etoricoxib))、蛋白酶體抑制劑(例如PS341)；CCI-779；替吡法尼(tipifarnib)(R11577)；奧拉菲妮(orafenib)、ABT510；Bcl-2抑制劑，例如奧利默森鈉(oblimersen sodium)(GENASENSE®)；匹善重(pixantrone)；法尼基轉移酶抑制劑，例如氯那法尼(lonafarnib)(SCH 6636，SARASARTM)；及上述任一者之醫藥上可接受之鹽、酸或衍生物；以及上述兩者或更多者之組合，例如CHOP(環磷醯胺、多柔比星、長春新鹼及潑尼松龍之組合療法之縮寫)及FOLFOX(奧沙利鉑(ELOXATINTM)與5-FU及甲醯四氫葉酸之組合治療方案之縮寫)。
化學治療劑亦包含具有鎮痛、退熱及抗發炎性效應之非類固醇抗發炎性藥物。NSAID包含酶環氧合酶之非限制性抑制劑。NSAID之具體實例包含阿司匹林(aspirin)、丙酸衍生物(例如布洛芬(ibuprofen)、非諾洛芬(fenoprofen)、酮洛芬(ketoprofen)、氟比洛芬(flurbiprofen)、奧沙普秦(oxaprozin)及萘普生(naproxen))、乙酸衍生物(例如吲哚美辛(indomethacin)、舒林酸(sulindac)、依託度酸 (etodolac)、雙氯芬酸(diclofenac))、烯醇酸衍生物(例如吡羅昔康(piroxicam)、美洛昔康(meloxicam)、替諾昔康(tenoxicam)、屈噁昔康(droxicam)、氯諾昔康(lornoxicam)及伊索昔康(isoxicam))、芬那酸衍生物(例如甲芬那酸(mefenamic acid)、甲氯芬那酸(meclofenamic acid)、氟芬那酸(flufenamic acid)、托芬那酸(tolfenamic acid))及COX-2抑制(例如塞來考昔(celecoxib)、艾托考昔(etoricoxib)、魯米考昔(lumiracoxib)、帕瑞考昔(parecoxib)、羅非昔布(rofecoxib)、羅非昔布及伐地考昔(valdecoxib))。NSAID可適用於症狀性緩解諸如以下等病狀：類風濕性關節炎、骨關節炎、發炎性關節病、強直性脊柱炎、牛皮癬關節炎、萊特爾氏症候群(Reiter's syndrome)、急性痛風、痛經、轉移性骨痛、頭痛及偏頭痛、手術後疼痛、由發炎及組織損傷所致之輕微至中等疼痛、發熱、腸阻塞及腎絞痛。
術語「細胞介素」係由一種細胞群體釋放之作為細胞內媒介物作用於另一細胞之蛋白質之一般術語。該等細胞介素之實例係淋巴因子、單核因子；介白素(IL)，例如IL-1、IL-1a、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-11、IL-12、IL-15；腫瘤壞死因子，例如TNF-α或TNF-β；及其他多肽因子，包含LIF及套組配體(KL)及γ干擾素。如本文中所使用，術語細胞介素包含來自天然來源或來自天然序列細胞介素之重組細胞培養物及生物活性等效物之蛋白質，包含以合成方式產生之小分子實體及其醫藥上可接受之衍生物及鹽。
術語「PD-1軸結合拮抗劑」係抑制PD-1軸結合配偶體與其結合配偶體中之一或多者相互作用以去除由PD-1信號傳導軸上之信號傳導引起之T細胞功能異常之分子，其中一個結果係恢復或增強T細胞功能(例如增殖、產生細胞介素、殺滅靶T細胞)。如本文中所使用，PD-1軸結合拮抗劑包含PD-1結合拮抗劑、PD-L1結合拮抗劑及PD-L2結合拮抗劑。
術語「PD-1結合拮抗劑」係降低、阻斷、抑制、消除或干擾由PD-1與其結合配偶體(例如PD-L1、PD-L2)中之一或多者相互作用引起之信號轉導之分子。在一些實施例中，PD-1結合拮抗劑係抑制PD-1與其結合配偶體結合之分子。在一具體態樣中，PD-1結合拮抗劑抑制PD-1與PD-L1及/或PD-L2結合。舉例而言，PD-1結合拮抗劑包含抗PD-1抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白、寡肽及其他分子，該等分子降低、阻斷、抑制、消除或干擾由PD-1與PD-L1及/或PD-L2相互作用引起之信號轉導。在一實施例中，PD-1結合拮抗劑降低藉由或經由PD-1之信號傳導所調介T淋巴球上表現之細胞表面蛋白介導之負共刺激信號以使功能異常T細胞較少功能異常(例如增強對抗原識別之效應物反應)。在一些實施例中，PD-1結合拮抗劑係抗PD-1抗體。在一具體態樣中，PD-1結合拮抗劑係本文所闡述之MDX-1 106。在另一具體態樣中，PD-1結合拮抗劑係本文所闡述之Merck 3745。在另一具體態樣中，PD-1結合拮抗劑係本文所闡述之CT-011。
術語「PD-L1結合拮抗劑」係降低、阻斷、抑制、消除或干擾由PD-L1與其結合配偶體(例如PD-1、B7-1)中之一或多者相互作用引起之信號轉導之分子。在一些實施例中，PD-L1結合拮抗劑係抑制PD-L1與其結合配偶體結合之分子。在具體態樣中，PD-L1結合拮抗劑抑制PD-L1與PD-1及/或B7-1結合。在一些實施例中，PD-L1結合拮抗劑包含抗PD-L1抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白、寡肽及其他分子，該等分子降低、阻斷、抑制、消除或干擾由PD-L1與其結合配偶體(例如PD-1、B7-1)中之一或多者相互作用引起之信號轉導。在一實施例中，PD-L1結合拮抗劑降低藉由或經由PD-L1之信號傳導所調介T淋巴球上表現之細胞表面蛋白介導之負共刺激信號以使功能異常T細胞較少功能異常(例如增強對抗原識別之效應物反應)。 在一些實施例中，PD-L1結合拮抗劑係抗PD-L1抗體。在一具體態樣中，抗PD-L1抗體係本文所闡述之YW243.55.S70。在另一具體態樣中，抗PD-L1抗體係本文所闡述之MDX-1105。在再一具體態樣中，抗PD-L1抗體係本文所闡述之MPDL3280A。
術語「PD-L2結合拮抗劑」係降低、阻斷、抑制、消除或干擾由PD-L2與其結合配偶體(例如PD-1)中之一或多者相互作用引起之信號轉導之分子。在一些實施例中，PD-L2結合拮抗劑係抑制PD-L2與其結合配偶體結合之分子。在具體態樣中，PD-L2結合拮抗劑抑制PD-L2與PD-1結合。在一些實施例中，PD-L2結合拮抗劑包含抗PD-L2抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白、寡肽及其他分子，該等分子降低、阻斷、抑制、消除或干擾由PD-L2與其結合配偶體(例如PD-1)中之一或多者相互作用引起之信號轉導。在一實施例中，PD-L2結合拮抗劑降低藉由或經由PD-L2之信號傳導所調介T淋巴球上表現之細胞表面蛋白介導之負共刺激信號以使功能異常T細胞較少功能異常(例如增強對抗原識別之效應物反應)。在一些實施例中，PD-L2結合拮抗劑係免疫黏附素。
術語「吞噬作用」意指對細胞或微粒物質之細胞內在化。在一些實施例中，吞噬細胞(phagocytic cell或phagocyte)係巨噬球或嗜中性球。在一些實施例中，該等細胞係表現人類OX40之細胞。業內已知分析吞噬作用之方法且包含使用顯微術檢測在另一細胞內內在化之細胞之存在。在其他實施例中，使用FACS(例如)藉由檢測另一細胞內可檢測標記細胞(其可(例如)使用不同於第一細胞之標記可檢測標記)之存在來檢測吞噬作用。
本文所用之關於抗體之片語「並不擁有實質性活性」或「實質上並無活性」意指抗體並不展現高於背景程度(在一些實施例中，高於統計學顯著之背景程度)之活性。本文所用之關於抗體之片語「幾 乎沒有活性」意指抗體並不顯示生物學有意義量之功能。可根據業內已知之任一分析或技術(包含(例如)彼等闡述於本文中者)量測或檢測功能。在一些實施例中，抗體功能係刺激效應T細胞增殖及/或細胞介素分泌。
本文所用之術語「生物標記物」或「標記物」通常係指在組織或細胞或分泌物中或上之表現可藉由已知方法(或本文所揭示之方法)進行檢測之分子(包含基因、mRNA、蛋白質、碳水化合物結構或糖脂)且可預測或可用於預測(或有助於預測)細胞、組織或患者對治療方案之反應性。
「患者試樣」意指自癌症患者獲得之細胞或流體之集合體。組織或細胞試樣之來源可為固體組織，例如來自新鮮、冷凍及/或保藏器官或組織試樣或活檢組織或吸出物；血液或任一血液組份；體液，例如腦脊髓液、羊膜液、腹膜液或間隙液；來自個體懷孕或發育之任一時間之細胞。組織試樣可含有並不與天然組織天然混合之化合物，例如防腐劑、抗凝血劑、緩衝劑、固定劑、營養素、抗生素或諸如此類。本文之腫瘤試樣之實例包含但不限於腫瘤活檢組織、細針吸出物、支氣管肺泡灌洗液、胸膜液、唾液、尿、手術樣品、循環腫瘤細胞、血清、血漿、循環血漿蛋白、腹水液、源自腫瘤或展現腫瘤樣性質之原代細胞培養物或細胞系以及保藏腫瘤試樣(例如福爾馬林(formalin)固定、石蠟包埋腫瘤試樣或冷凍腫瘤試樣)。
本文所用之片語「基於......之表現」意指使用關於表現程度或表現之存在或不存在(例如本文之一或多種生物標記物之存在或不存在或流行程度(例如所顯示細胞之百分比)(例如FcR表現細胞之存在或不存在或量或流行程度，或(例如)人類效應細胞之存在或不存在或量或流行程度))之資訊來獲知治療決定、提供於包裝插頁上之資訊或銷售/促銷導則等。
「具有人類效應細胞」之癌症或生物試樣係在診斷測試中具有存在於試樣中之人類效應細胞(例如浸潤人類效應細胞)者。
「具有FcR表現細胞」之癌症或生物試樣係在診斷測試中具有存在於試樣中之FcR表現細胞(例如浸潤FcR表現細胞)者。在一些實施例中，FcR係FcγR。在一些實施例中，FcR係活化FcγR。
本文所用之片語「推薦治療」係指使用相對於患者試樣中c-met之含量或存在所生成之資訊或數據將患者鑑別為適於使用療法治療或不適於使用療法治療。在一些實施例中，該療法可包括c-met抗體(例如昂圖株單抗(onartuzumab))。在一些實施例中，該療法可包括VEGF拮抗劑(例如貝伐珠單抗)。在一些實施例中，該療法可包括抗人類OX40激動劑抗體。資訊或數據可呈任一形式(書面、口頭或電子)。在一些實施例中，使用所生成之資訊或數據包含通信、呈現、報告、儲存、發送、轉移、供應、傳遞、遞送、分配或其組合。在一些實施例中，通信、呈現、報告、儲存、發送、轉移、供應、傳遞、遞送、分配或其組合係藉由計算裝置、分析儀單元或其組合來實施。在一些其他實施例中，通信、呈現、報告、儲存、發送、轉移、供應、傳遞、分配或其組合係藉由個體(例如實驗室或醫學專家)來實施。在一些實施例中，資訊或數據包含FcR表現細胞之量或流行程度與參考含量之對比。在一些實施例中，資訊或數據包含人類效應細胞之量或流行程度與參考含量之對比。在一些實施例中，資訊或數據包含關於人類效應細胞或FcR表現細胞存在或不存在於試樣中之指示。在一些實施例中，資訊或數據包含關於FcR表現細胞及/或人類效應細胞以特定細胞百分比存在(例如高流行程度)之指示。在一些實施例中，資訊或數據包含關於患者適於使用包括抗人類OX40激動劑抗體之療法治療或不適於使用該療法治療之指示。
II.組合物及方法
在一態樣中，本發明部分地係基於各種OX40結合劑之鑑別。在某些實施例中，提供結合人類OX40之抗體(例如激動劑抗體)。本發明抗體可用於(例如)診斷或治療癌症及其他與OX40表現及/或活性有關之病症。
A.實例性抗-OX40抗體
在一態樣中，本發明提供結合人類OX40之分離抗體。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體以小於或等於約0.45nM之親和力結合人類OX40。在一些實施例中，抗人類OX40抗體以小於或等於約0.4nM之親和力結合人類OX40。在一些實施例中，抗人類OX40抗體以小於或等於約0.5nM之親和力結合人類OX40。在一些實施例中，使用放射免疫分析測定結合親和力。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體結合人類OX40及食蟹猴OX40。在一些實施例中，使用FACS分析測定結合。在一些實施例中，與人類OX40之結合具有約0.2ug/ml之EC50。在一些實施例中，與人類OX40之結合具有約0.3ug/ml或更低之EC50。在一些實施例中，與食蟹猴OX40之結合具有約1.5ug/ml之EC50。在一些實施例中，與食蟹猴OX40之結合具有約1.4ug/ml之EC50。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體並不結合大鼠OX40或小鼠OX40。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體係消耗抗人類OX40抗體(例如消耗表現人類OX40之細胞)。在一些實施例中，人類OX40表現細胞係CD4+效應T細胞。在一些實施例中，人類OX40表現細胞係Treg細胞。在一些實施例中，消耗係藉由ADCC及/或吞噬作用達成。在一些實施例中，抗體藉由結合由人類效應細胞表現之FcγR且活化人類效應細胞功能來調介ADCC。在一些實施例中，抗體藉由結合由人類效應細胞表現之FcγR且活化人類效應細胞功能來調介吞噬作用。實 例性人類效應細胞包含(例如)巨噬球、天然殺傷(NK)細胞、單核球、嗜中性球。在一些實施例中，人類效應細胞係巨噬球。在一些實施例中，人類效應細胞係NK細胞。在一些實施例中，消耗並非藉由細胞凋亡達成。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體具有功能Fc區。在一些實施例中，功能Fc區之效應物功能係ADCC。在一些實施例中，功能Fc區之效應物功能係吞噬作用。在一些實施例中，功能Fc區之效應物功能係ADCC及吞噬作用。在一些實施例中，Fc區係人類IgG1。在一些實施例中，Fc區係人類IgG4。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體並不誘導OX40表現細胞(例如Treg)中之細胞凋亡。在一些實施例中，使用30ug/ml之抗體濃度(例如)藉由使用膜聯蛋白V及碘化丙啶染色之Treg測定細胞凋亡是否已發生來分析細胞凋亡。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體(例如)藉由增加CD4+效應T細胞增殖及/或增加CD4+效應T細胞γ干擾素產生來增強CD4+效應T細胞功能(例如與在使用抗人類OX40激動劑抗體治療之前之增殖及/或細胞介素產生相比)。在一些實施例中，細胞介素係γ干擾素。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體增加瘤內(浸潤)CD4+效應T細胞之數量(例如CD4+效應T細胞之總數量，或例如CD45+細胞中CD4+細胞之百分比)(例如與在使用抗人類OX40激動劑抗體治療之前之瘤內(浸潤)CD4+ T細胞之數量相比)。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體增加表現γ干擾素之瘤內(浸潤)CD4+效應T細胞之數量(例如表現γ干擾素之總CD4+細胞，或例如總CD4+細胞中表現γ干擾素之CD4+細胞之百分比)(例如與在使用抗人類OX40激動劑抗體治療之前表現γ干擾素之瘤內(浸潤)CD4+ T細胞之數量相比)。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體增加瘤內(浸潤)CD8+ 效應T細胞之數量(例如CD8+效應T細胞之總數量，或例如CD45+細胞中CD8+之百分比)(例如與在使用抗人類OX40激動劑抗體治療之前瘤內(浸潤)CD8+ T效應細胞之數量相比)。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體增加表現γ干擾素之瘤內(浸潤)CD8+效應T細胞之數量(例如總CD8+細胞中表現γ干擾素之CD8+細胞之百分比)(例如與在使用抗人類OX40激動劑抗體治療之前表現γ干擾素之瘤內(浸潤)CD8+ T細胞之數量相比)。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體(例如)藉由增加記憶性T細胞增殖及/或增加記憶性細胞之細胞介素產生來增強記憶性T細胞功能。在一些實施例中，細胞介素係γ干擾素。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體(例如)藉由降低效應T細胞功能(例如效應T細胞增殖及/或效應T細胞細胞介素分泌)之Treg阻抑來抑制Treg功能。在一些實施例中，效應T細胞係CD4+效應T細胞。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體減小瘤內(浸潤)Treg之數量(例如Treg之總數量或例如CD4+細胞中Fox3p+細胞之百分比)。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體經改造以增加效應物功能(例如與野生型IgG1中之效應物功能相比)。在一些實施例中，抗體增加Fcγ受體結合。在一些實施例中，抗體缺乏附接(直接或間接)至Fc區之岩藻糖。舉例而言，此抗體中岩藻糖之量可為1%至80%、1%至65%、5%至65%或20%至40%。在一些實施例中，Fc區包括二等分寡糖，舉例而言，其中接至抗體之Fc區之二分枝寡糖附由GlcNAc二等分。在一些實施例中，抗體包括具有一或多個改良ADCC之胺基酸取代之Fc區，例如在Fc區之298位、333位及/或334位處(殘基之EU編號)之取代。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體增加表現OX40之靶細胞中之OX40信號轉導。在一些實施例中，藉由監測NFkB下游信號傳 導來檢測OX40信號轉導。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體在40℃下處理兩週後穩定。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體結合人類效應細胞，例如結合由人類效應細胞表現之FcγR(例如活化FcγR)。在一些實施例中，人類效應細胞實施(能夠實施)ADCC效應物功能。在一些實施例中，人類效應細胞實施(能夠實施)吞噬作用效應物功能。
在一些實施例中，相對於包括天然序列IgG1 Fc部分之抗人類OX40激動劑抗體，包括含有消除與人類效應細胞之結合之突變(例如DANA突變)之變體IgG1 Fc多肽之抗人類OX40激動劑抗體具有減弱的活性(例如CD4+效應T細胞功能，例如增殖)。在一些實施例中，包括含有消除與人類效應細胞之結合之突變(例如DANA突變)之變體IgG1 Fc多肽之抗人類OX40激動劑抗體並不擁有實質性活性(例如CD4+效應T細胞功能，例如增殖)。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體功能需要抗體交聯。在一些實施例中，功能係刺激CD4+效應T細胞增殖。在一些實施例中，藉由提供黏附於固體表面(例如細胞培養板)上之抗人類OX40激動劑抗體來測定抗體交聯。在一些實施例中，藉由在抗體IgG1 Fc部分中引入突變(例如DANA突變)且測試突變體抗體之功能來測定抗體交聯。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體與OX40L競爭結合人類OX40。在一些實施例中，添加OX40L並不增強活體外分析中之抗人類OX40抗體功能。
根據另一實施例，抗人類OX40激動劑抗體包含下列性質中之任一者、任一組合或全部：(1)以小於或等於約0.45nM之親和力結合人類OX40，在一些實施例中以小於或等於約0.4nM之親和力結合人類 OX40，在一些實施例中以小於或等於約0.5nM之親和力結合人類OX40，在一些實施例中使用放射免疫分析測定結合親和力；(2)結合人類OX40及食蟹猴OX40，在一些實施例中使用FACS分析測定結合，(3)以約0.2ug/ml之EC50結合人類OX40，在一些實施例中以約0.3ug/ml或更低之EC50結合人類OX40，在一些實施例中以約1.5ug/ml之EC50結合食蟹猴OX40，在一些實施例中以約1.4ug/ml之EC50結合食蟹猴OX40，(4)並不實質上結合大鼠OX40或小鼠OX40，(6)係消耗抗人類OX40抗體(例如消耗表現人類OX40之細胞)，在一些實施例中細胞係CD4+效應T細胞及/或Treg細胞，(7)(例如)藉由增加CD4+效應T細胞增殖及/或增加CD4+效應T細胞之γ干擾素產生來增強CD4+效應T細胞功能(例如與在使用抗人類OX40激動劑抗體治療之前之增殖及/或細胞介素產生相比)，(8)(例如)藉由增加記憶性T細胞增殖及/或增加記憶性細胞之細胞介素產生來增強記憶性T細胞功能，(9)(例如)藉由降低效應T細胞功能(例如效應T細胞增殖及/或效應T細胞細胞介素分泌)之Treg阻抑來抑制Treg功能。在一些實施例中，效應T細胞係CD4+效應T細胞，(10)增加表現OX40之靶細胞中之OX40信號轉導(在一些實施例中，藉由監測NFkB下游信號傳導來檢測OX40信號轉導)，(11)在40℃下處理兩週後穩定，(12)結合人類效應細胞，例如結合由人類效應細胞表現之FcγR，(13)相對於包括天然序列IgG1 Fc部分之抗人類OX40激動劑抗體，包括含有消除結合人類效應細胞之突變(例如N297G)之變體IgG1 Fc多肽之抗人類OX40激動劑抗體具有減弱的活性(例如CD4+效應T細胞功能，例如增殖)，在一些實施例中，包括含有消除結合人類效應細胞之突變(例如N297G)之變體IgG1 Fc多肽之抗人類OX40激動劑抗體並不擁有實質性活性(例如CD4+效應T細胞功能，例如增殖)，(14)抗人類OX40激動劑抗體功能需要抗體交聯(例如藉由Fc受體結合)。
在一態樣中，本發明提供抗人類OX40激動劑抗體，其包括至少1個、2個、3個、4個、5個或6個選自以下之HVR：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：7之胺基酸序列。
在一態樣中，本發明提供抗人類OX40激動劑抗體，其包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列。在一實施例中，該抗體包括含有SEQ ID NO：4之胺基酸序列之HVR-H3。在另一實施例中，該抗體包括含有SEQ ID NO：4之胺基酸序列之HVR-H3及含有SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3。在另一實施例中，該抗體包括含有SEQ ID NO：4之胺基酸序列之HVR-H3、含有SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-L3及含有SEQ ID NO：3之胺基酸序列之HVR-H2。在另一實施例中，該抗體包括：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明提供抗人類OX40激動劑抗體，其包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR：(a)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：7之胺基酸序列。在一實施例中，該抗體包括：(a)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：7之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明之抗人類OX40激動劑抗體包括：(a)VH結構域，其包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(i)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列，及(iii)HVR-H3，其包括選自SEQ ID NO：4之胺基酸序列；及(b)VL結構域，其包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：(i)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列，(ii)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：7之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明提供抗人類OX40激動劑抗體，其包括：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包括選自SEQ ID NO：7之胺基酸序列。
在一態樣中，本發明提供抗人類OX40激動劑抗體，其包括至少1個、2個、3個、4個、5個或6個選自以下之HVR：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：26之胺基酸序列。
在另一實施例中，該抗體包括含有SEQ ID NO：4之胺基酸序列之HVR-H3及含有SEQ ID NO：26之胺基酸序列之HVR-L3。在另一實施例中，該抗體包括含有SEQ ID NO：4之胺基酸序列之HVR-H3、含有SEQ ID NO：26之胺基酸序列之HVR-L3及含有SEQ ID NO：3之胺基酸序列之HVR-H2。
在另一態樣中，本發明抗體包括：(a)VH結構域，其包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(i)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列，及(iii)HVR-H3，其包括選自SEQ ID NO：4之胺基酸序列；及(b)VL結構域，其包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：(i)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列，(ii)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列，及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：26之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明提供包括以下之抗體：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包括選自SEQ ID NO：26之胺基酸序列。
在一態樣中，本發明提供抗人類OX40激動劑抗體，其包括至少1個、2個、3個、4個、5個或6個選自以下之HVR：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：27之胺基酸序列。
在另一實施例中，該抗體包括含有SEQ ID NO：4之胺基酸序列之HVR-H3及含有SEQ ID NO：27之胺基酸序列之HVR-L3。在另一實施例中，該抗體包括含有SEQ ID NO：4之胺基酸序列之HVR-H3、含有SEQ ID NO：27之胺基酸序列之HVR-L3及含有SEQ ID NO：3之胺基酸序列之HVR-H2。
在另一態樣中，本發明抗體包括：(a)VH結構域，其包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(i)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列，及(iii)HVR-H3，其包括選自SEQ ID NO：4之胺基酸序列；及(b)VL結構域，其包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：(i)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列，(ii)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列，及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：27之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明提供包括以下之抗體：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包括選自SEQ ID NO：27之胺基酸序列。
在一態樣中，本發明提供抗人類OX40激動劑抗體，其包括至少1個、2個、3個、4個、5個或6個選自以下之HVR：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2、8或9之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3、10、11、12、13或14之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：4、15或19之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：7、22、23、24、25、26、27或28之胺基酸序列。
在一態樣中，本發明提供包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列之抗體：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2、8或9之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3、10、11、12、13或14之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO： 4、15或19之胺基酸序列。在一實施例中，該抗體包括含有SEQ ID NO：4、15或19之胺基酸序列之HVR-H3。在另一實施例中，該抗體包括含有SEQ ID NO：4、15或19之胺基酸序列之HVR-H3及含有SEQ ID NO：7、22、23、24、25、26、27或28之胺基酸序列之HVR-L3。在另一實施例中，該抗體包括含有SEQ ID NO：4、15或19之胺基酸序列之HVR-H3、含有SEQ ID NO：7、22、23、24、25、26、27或28之胺基酸序列之HVR-L3及含有SEQ ID NO：3、10、11、12、13或14之胺基酸序列之HVR-H2。在另一實施例中，該抗體包括：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2、8或9之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3、10、11、12、13或14之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：4、15或19之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明提供包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列之抗體：(a)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：7、22、23、24、25、26、27或28之胺基酸序列。在一實施例中，該抗體包括：(a)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：7、22、23、24、25、26、27或28之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明抗體包括：(a)VH結構域，其包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(i)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2、8或9之胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3、10、11、12、13或14之胺基酸序列，及(iii)HVR-H3，其包括選自SEQ ID NO：4、15或19之胺基酸序列；及(b)VL結構域，其包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：(i)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列，(ii)HVR-L2，其包括 SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：7、22、23、24、25、26、27或28之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明提供包括以下之抗體：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2、8或9之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3、10、11、12、13或14之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：4、15或19之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包括選自SEQ ID NO：7、22、23、24、25、26、27或28之胺基酸序列。
在一態樣中，本發明提供抗人類OX40激動劑抗體，其包括至少1個、2個、3個、4個、5個或6個選自以下之HVR：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：172之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：173之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：174之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：175之胺基酸序列。在一些實施例中，HVR-H2並非DMYPDAAAASYNQKFRE(SEQ ID NO：193)。在一些實施例中，HVR-H3並非APRWAAAA(SEQ ID NO：194)。在一些實施例中，HVR-H3並非QAAAAAAAT(SEQ ID NO：195)。
在一態樣中，本發明提供包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列之抗體：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：172之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：173之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：174之胺基酸序列。在一實施例中，該抗體包括含有SEQ ID NO：174之胺基酸序列之HVR-H3。在另一實施例中，該抗體包括含有SEQ ID NO：174之胺基酸序列之HVR-H3及含有SEQ ID NO：175之胺基酸序列之HVR-L3。在另一實施 例中，該抗體包括含有SEQ ID NO：174之胺基酸序列之HVR-H3、含有SEQ ID NO：175之胺基酸序列之HVR-L3及含有SEQ ID NO：173之胺基酸序列之HVR-H2。在另一實施例中，該抗體包括：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：172之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：173之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：174之胺基酸序列。在一些實施例中，HVR-H2並非DMYPDAAAASYNQKFRE(SEQ ID NO：193)。在一些實施例中，HVR-H3並非APRWAAAA(SEQ ID NO：194)。在一些實施例中，HVR-H3並非QAAAAAAAT(SEQ ID NO：195)。
在另一態樣中，本發明提供包括以下之抗體：(a)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：175之胺基酸序列。在一些實施例中，HVR-H3並非QAAAAAAAT(SEQ ID NO：195)。
在另一態樣中，本發明抗體包括：(a)VH結構域，其包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(i)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：172之胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：173之胺基酸序列，及(iii)HVR-H3，其包括選自SEQ ID NO：174之胺基酸序列；及(b)VL結構域，其包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：(i)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列，(ii)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列，及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：175之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明提供包括以下之抗體：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：172之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：173之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：174之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包括選自 SEQ ID NO：175之胺基酸序列。在一些實施例中，HVR-H2並非DMYPDAAAASYNQKFRE(SEQ ID NO：193)。在一些實施例中，HVR-H3並非APRWAAAA(SEQ ID NO：194)。在一些實施例中，HVR-H3並非QAAAAAAAT(SEQ ID NO：195)。
SEQ ID NO：172、173、174及175之共有序列涵蓋上述取代之所有可能組合。
在一態樣中，本發明提供抗人類OX40激動劑抗體，其包括至少1個、2個、3個、4個、5個或6個選自以下之HVR：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：29之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：30之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：33之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：37之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：39之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：42之胺基酸序列。
在一態樣中，本發明提供包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR之序列抗體：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：29之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：30之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：33之胺基酸序列。在一實施例中，該抗體包括含有SEQ ID NO：33之胺基酸序列之HVR-H3。在另一實施例中，該抗體包括含有SEQ ID NO：33之胺基酸序列之HVR-H3及含有SEQ ID NO：42之胺基酸序列之HVR-L3。在另一實施例中，該抗體包括含有SEQ ID NO：33之胺基酸序列之HVR-H3、含有SEQ ID NO：42之胺基酸序列之HVR-L3及含有SEQ ID NO：30之胺基酸序列之HVR-H2。在另一實施例中，該抗體包括：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：29之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：30之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：33之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明提供包括至少一個、至少兩個或所有三 個選自以下之VL HVR序列之抗體：(a)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：37之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：39之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：42之胺基酸序列。在一實施例中，該抗體包括：(a)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：37之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：39之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：42之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明抗體包括：(a)VH結構域，其包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(i)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：29之胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：30之胺基酸序列，及(iii)HVR-H3，其包括選自SEQ ID NO：33之胺基酸序列；及(b)VL結構域，其包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：(i)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：37之胺基酸序列，(ii)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：39之胺基酸序列，及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：42之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明提供包括以下之抗體：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：29之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：30之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：33之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：37之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：39之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：42之胺基酸序列。
在一態樣中，本發明提供抗人類OX40激動劑抗體，其包括至少1個、2個、3個、4個、5個或6個選自以下之HVR：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：29之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：30之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：33之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：37之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：40之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：42之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明提供包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列之抗體：(a)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：37之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：40之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：42之胺基酸序列。在一實施例中，該抗體包括：(a)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：37之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：40之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：42之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明抗體包括：(a)VH結構域，其包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(i)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：29之胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：30之胺基酸序列，及(iii)HVR-H3，其包括選自SEQ ID NO：33之胺基酸序列；及(b)VL結構域，其包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：(i)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：37之胺基酸序列，(ii)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：40之胺基酸序列，及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：42之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明提供包括以下之抗體：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：29之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：30之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：33之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：37之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：40之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：42之胺基酸序列。
在一態樣中，本發明提供抗人類OX40激動劑抗體，其包括至少1個、2個、3個、4個、5個或6個選自以下之HVR：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：29之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：30、31或32之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：33之胺 基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：37之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：39、40或41之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：42、43或44之胺基酸序列。
在一態樣中，本發明提供包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列之抗體：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：29之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：30、31或32之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：33之胺基酸序列。在另一實施例中，該抗體包括含有SEQ ID NO：33之胺基酸序列之HVR-H3及含有SEQ ID NO：42、43或44之胺基酸序列之HVR-L3。在另一實施例中，該抗體包括含有SEQ ID NO：33之胺基酸序列之HVR-H3、含有SEQ ID NO：42、43或44之胺基酸序列之HVR-L3及含有SEQ ID NO：39、40或41之胺基酸序列之HVR-H2。在另一實施例中，該抗體包括：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：29之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：30、31或32之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：33之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明提供包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列之抗體：(a)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：37之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：39、40或41之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：42、43或44之胺基酸序列。在一實施例中，該抗體包括：(a)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：37之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：39、40或41之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：42、43或44之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明抗體包括：(a)VH結構域，其包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(i)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：29之胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：30、31或32之胺基酸序列，及(iii)HVR-H3，其包括選自SEQ ID NO：33之胺基酸序列；及(b)VL結構域，其包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：(i)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：37之胺基酸序列，(ii)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：39、40或41之胺基酸序列，及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：42、43或44之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明提供包括以下之抗體：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：29之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：30、31或32之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：33之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：37之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：39、40或41之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：42、43或44之胺基酸序列。
在一態樣中，本發明提供抗人類OX40激動劑抗體，其包括至少1個、2個、3個、4個、5個或6個選自以下之HVR：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：29之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：175之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：33之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：37之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：177之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：178之胺基酸序列。
在一態樣中，本發明提供包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列之抗體：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：29之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：175之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：33之胺基酸序列。在另一實施例中，該抗體包括含有SEQ ID NO：33之胺基酸序列之HVR-H3及含有SEQ ID NO：177之胺基酸序列之HVR-L3。在另一實施例中，該抗體包括含有SEQ ID NO：33之胺基酸序列之HVR-H3、含有SEQ ID NO：178之胺基酸序列之HVR-L3及含有SEQ ID NO：176之胺基酸序列之HVR-H2。在另一實施例中，該抗體包括：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：29之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：176之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：33之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明提供包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR下列之抗體：(a)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：37之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：177之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：177之胺基酸序列。在一實施例中，該抗體包括：(a)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：37之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：177之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：178之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明抗體包括：(a)VH結構域，其包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(i)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：29之胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：176之胺基酸序列，及(iii)HVR-H3，其包括選自SEQ ID NO：33之胺基酸序列；及(b)VL結構域，其包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：(i)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：37之胺基酸序列，(ii)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：177之胺基酸序列，及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：178之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明提供包括以下之抗體：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：29之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：176之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：33之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：37之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：177之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：178之胺基酸序列。
在上文任一實施例中，抗-OX40激動劑抗體係人類化抗體。在一 實施例中，抗-OX40抗體包括如上文任一實施例或圖11A-I中之任一實施例中之HVR，且進一步包括受體人類框架(例如人類免疫球蛋白框架或人類共有框架)。在另一實施例中，抗-OX40抗體包括如上文任一實施例中之HVR，且進一步包括含有圖11A-I中所展示之FR序列之VH及/或VL。
在另一態樣中，抗人類OX40激動劑抗體包括與SEQ ID NO：56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、108、114、116、183或184之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包括該序列之抗人類OX40激動劑抗體保留結合OX40之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO：56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、108、114、116、183或184中取代、***及/或缺失總共1至10個胺基酸。在某些實施例中，取代、***或缺失出現於HVR外側之區中(亦即在FR中)。視情況，抗人類OX40激動劑抗體包括SEQ ID NO：SEQ ID NO：56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、108、114、116、183或184中之VH序列，包含該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VH包括一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列。
在另一態樣中，提供抗人類OX40激動劑抗體，其中該抗體包括 與SEQ ID NO：57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、109、115或117之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包括該序列之抗人類OX40激動劑抗體保留結合OX40之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO：57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、109、115或117中取代、***及/或缺失總共1至10個胺基酸。在某些實施例中，取代、***或缺失出現於HVR外側之區中(亦即在FR中)。視情況，抗人類OX40激動劑抗體包括SEQ ID NO：57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、109、115或117中之VL序列，包含該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VL包括一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：7之胺基酸序列。
在另一態樣中，抗人類OX40激動劑抗體包括與SEQ ID NO：56之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包括該序列之抗人類OX40激動劑抗體保留結合OX40之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO 56中取代、***及/或缺失總共1至10個胺基酸。在某些實施例中，取代、***或 缺失出現於HVR外側之區中(亦即在FR中)。視情況，抗人類OX40激動劑抗體包括SEQ ID NO：56之VH序列，包含該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VH包括一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列。
在另一態樣中，提供抗人類OX40激動劑抗體，其中該抗體包括與胺基酸序列SEQ ID NO：57具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包括該序列之抗人類OX40激動劑抗體保留結合OX40之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO 57中取代、***及/或缺失總共1至10個胺基酸。在某些實施例中，取代、***或缺失出現於HVR外側之區中(亦即在FR中)。視情況，抗人類OX40激動劑抗體包括SEQ ID NO：57之VL序列，包含該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VL包括一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：7之胺基酸序列。
在另一態樣中，抗人類OX40激動劑抗體包括與SEQ ID NO：180之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包括該序列之抗人類OX40激動劑抗體 保留結合OX40之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO 180中取代、***及/或缺失總共1至10個胺基酸。在某些實施例中，取代、***或缺失出現於HVR外側之區中(亦即在FR中)。視情況，抗人類OX40激動劑抗體包括SEQ ID NO：180之VH序列，包含該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VH包括一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列。
在另一態樣中，提供抗人類OX40激動劑抗體，其中該抗體包括與胺基酸序列SEQ ID NO：179具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包括該序列之抗人類OX40激動劑抗體保留結合OX40之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO 179中取代、***及/或缺失總共1至10個胺基酸。在某些實施例中，取代、***或缺失出現於HVR外側之區中(亦即在FR中)。視情況，抗人類OX40激動劑抗體包括SEQ ID NO：179之VL序列，包含該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VL包括一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：7之胺基酸序列。
在另一態樣中，抗人類OX40激動劑抗體包括與SEQ ID NO：94之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、 96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包括該序列之抗人類OX40激動劑抗體保留結合OX40之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO 94中取代、***及/或缺失總共1至10個胺基酸。在某些實施例中，取代、***或缺失出現於HVR外側之區中(亦即在FR中)。視情況，抗人類OX40激動劑抗體包括SEQ ID NO：94之VH序列，包含該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VH包括一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列。
在另一態樣中，提供抗人類OX40激動劑抗體，其中該抗體包括與胺基酸序列SEQ ID NO：95具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包括該序列之抗人類OX40激動劑抗體保留結合OX40之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO 95中取代、***及/或缺失總共1至10個胺基酸。在某些實施例中，取代、***或缺失出現於HVR外側之區中(亦即在FR中)。視情況，抗人類OX40激動劑抗體包括SEQ ID NO：95之VL序列，包含該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VL包括一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列；(b)HVR-2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：26之胺基酸序列。
在另一態樣中，抗人類OX40激動劑抗體包括與SEQ ID NO：96之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、 97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包括該序列之抗人類OX40激動劑抗體保留結合OX40之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO 96中取代、***及/或缺失總共1至10個胺基酸。在某些實施例中，取代、***或缺失出現於HVR外側之區中(亦即在FR中)。視情況，抗人類OX40激動劑抗體包括SEQ ID NO：96之VH序列，包含該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VH包括一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列。
在另一態樣中，提供抗人類OX40激動劑抗體，其中該抗體包括與胺基酸序列SEQ ID NO：97具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包括該序列之抗人類OX40激動劑抗體保留結合OX40之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO 97中取代、***及/或缺失總共1至10個胺基酸。在某些實施例中，取代、***或缺失出現於HVR外側之區中(亦即在FR中)。視情況，抗人類OX40激動劑抗體包括SEQ ID NO：97之VL序列，包含該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VL包括一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：27之胺基酸序列。
在另一態樣中，抗人類OX40激動劑抗體包括與SEQ ID NO：118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包括該序列之抗人類OX40激動劑抗體保留結合OX40之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO：118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148中取代、***及/或缺失總共1至10個胺基酸。在某些實施例中，取代、***或缺失出現於HVR外側之區中(亦即在FR中)。視情況，抗人類OX40激動劑抗體包括SEQ ID NO：SEQ ID NO：118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148中之VH序列，包含該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VH包括一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：29之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：30之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：33之胺基酸序列。
在另一態樣中，提供抗人類OX40激動劑抗體，其中該抗體包括與SEQ ID NO：119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包括該序列之抗人類OX40激動劑抗體保留結合OX40之能力。在某些實施 例中，在SEQ ID NO：119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149中取代、***及/或缺失總共1至10個胺基酸。在某些實施例中，取代、***或缺失出現於HVR外側之區中(亦即在FR中)。視情況，抗人類OX40激動劑抗體包括SEQ ID NO：119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149中之VL序列，包含該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VL包括一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：37之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：39之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：42之胺基酸序列。
在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：56及SEQ ID NO：57中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：58及SEQ ID NO：59中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：60及SEQ ID NO：61中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：62及SEQ ID NO：63中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：64及SEQ ID NO：65中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：66及SEQ ID NO：67中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：68及SEQ ID NO：69中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：70及SEQ ID NO：71中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：72及SEQ ID NO：73中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：74及SEQ ID NO：75中之VH及VL序列，包含彼等 序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：76及SEQ ID NO：77中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：78及SEQ ID NO：79中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：80及SEQ ID NO：81中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：82及SEQ ID NO：83中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：84及SEQ ID NO：85中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：86及SEQ ID NO：87中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：88及SEQ ID NO：89中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：90及SEQ ID NO：91中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：92及SEQ ID NO：93中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：94及SEQ ID NO：95中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：96及SEQ ID NO：97中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：98及SEQ ID NO：99中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：100及SEQ ID NO：101中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：108及SEQ ID NO：109中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：114及SEQ ID NO：115中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：116及SEQ ID NO：117中之VH及VL序 列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：183及SEQ ID NO：65中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：184及SEQ ID NO：69中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。
在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：118及SEQ ID NO：119中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：120及SEQ ID NO：121中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：122及SEQ ID NO：123中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：124及SEQ ID NO：125中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：126及SEQ ID NO：127中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：128及SEQ ID NO：129中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：130及SEQ ID NO：131中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：132及SEQ ID NO：133中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：134及SEQ ID NO：135中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：136及SEQ ID NO：137中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：138及SEQ ID NO：139中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：140及SEQ ID NO：141中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：142及SEQ ID NO：143中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例 中，抗體分別包括SEQ ID NO：144及SEQ ID NO：145中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。在一實施例中，抗體分別包括SEQ ID NO：146及SEQ ID NO：147中之VH及VL序列，包含彼等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，提供抗人類OX40激動劑抗體，其中該抗體包括如上文所提供任一實施例中之VH及如上文所提供任一實施例中之VL。
在另一態樣中，本發明提供與本文所提供抗人類OX40抗體結合相同表位之抗體。在一些實施例中，抗體係抗人類OX40激動劑抗體。
在本發明之另一態樣中，上文任一實施例之抗-OX40抗體係單株抗體，包含嵌合、人類化或人類抗體。在一實施例中，抗-OX40抗體係抗體片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、雙鏈抗體或F(ab’)2片段。在另一實施例中，抗體係全長抗體，例如完整IgG1抗體或如本文所定義之其他抗體種類或同種型。在一些實施例中，抗體係全長完整IgG4抗體。
在另一態樣中，上文任一實施例之抗-OX40抗體可單獨或組合納入任一特徵，如下文在第1-7部分中所闡述：
1.抗體親和力
在某些實施例中，本文所提供之抗體具有
Figure 104110569-A0202-12-0078-370
1μM、
Figure 104110569-A0202-12-0078-371
100nM、
Figure 104110569-A0202-12-0078-372
10nM、
Figure 104110569-A0202-12-0078-373
1nM、
Figure 104110569-A0202-12-0078-374
0.1nM、
Figure 104110569-A0202-12-0078-375
0.01nM或
Figure 104110569-A0202-12-0078-376
0.001nM(例如10-8M或更小，例如10-8M至10-13M，例如10-9M至10-13M)之解離常數(Kd)。
在一實施例中，藉由放射標記抗原結合分析(RIA)量測Kd。在一實施例中，使用所關注抗體之Fab形式及其抗原實施RIA。舉例而言，Fab對抗原之溶液結合親和力係藉由以下方式來量測：在滴定系列之未標記抗原存在下利用最小濃度之(125I)標記抗原平衡Fab，然後 利用抗Fab抗體塗覆板捕獲所結合抗原(例如參見Chen等人，J.Mol.Biol.293：865-881(1999))。為確立該分析之條件，將MICROTITER®多孔板(Thermo Scientific)利用5μg/ml存於50mM碳酸鈉(pH 9.6)中之捕獲用抗Fab抗體(Cappel實驗室)塗覆過夜，且隨後在室溫下(大約23℃)利用存於PBS中之2%(w/v)牛血清白蛋白阻斷2小時至5小時。在非吸收性板(Nunc 269620號)中，將100pM或26pM[125I]-抗原與所關注Fab之連續稀釋液混合(例如與Presta等人，Cancer Res.57：4593-4599(1997)中對抗VEGF抗體(Fab-12)之評價一致)。然後將所關注Fab培育過夜；然而，可繼續培育較長時間(例如約65小時)以確保達到平衡。然後，將混合物轉移至捕獲板中以在室溫下進行培育(例如1小時)。然後去除溶液且使用存於PBS中之0.1%聚山梨醇酯20(TWEEN-20®)將板洗滌8次。在板已乾燥時，添加150μl/孔之閃爍體(MICROSCINT-20 TM；Packard)，且在TOPCOUNT TMγ計數器(Packard)上經10分鐘對該等板進行計數。選擇得到小於或等於20%之最大結合之每一Fab之濃度用於競爭性結合分析。
根據另一實施例，使用BIACORE®表面電漿共振分析量測Kd。舉例而言，使用BIACORE®-2000或BIACORE®-3000(BIAcore公司，Piscataway,NJ)之分析係在25℃下使用固定抗原CM5晶片以約10個反應單位(RU)實施。在一實施例中，根據供應商說明使用N-乙基-N’-(3-二甲基胺基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)及N-羥基琥珀醯亞胺(NHS)來活化羧甲基化之右旋糖酐生物感測器晶片(CM5,BIACORE公司)。使用10mM乙酸鈉(pH 4.8)將抗原稀釋至5μg/ml(約0.2μM)，然後以5μl/分鐘之流速注射以達成約10個反應單位(RU)之偶聯蛋白。在注射抗原後，注射1M乙醇胺以阻斷未反應之基團。對於動力學量測而言，在25℃下以約25μl/min之流速注射Fab存於含有0.05%聚山梨醇酯20(TWEEN-20TM)表面活性劑之PBS(PBST)中之兩倍連續稀釋液(0.78 nM至500nM)。締合速率(k締合)及解離速率(k解離)係使用簡單一對一Langmuir結合模型(BIACORE ®評估軟體3.2版)藉由同時擬合締合及解離感測圖來計算。以比率k解離/k締合之形式來計算平衡解離常數(Kd)．例如參見Chen等人，J.Mol.Biol.293：865-881(1999)。若藉由上述表面電漿共振分析測得之上速率超過106M-1 S-1，則上速率可藉由使用螢光淬滅技術進行測定，該技術在25℃下於增加濃度之抗原存在下量測存於PBS(pH 7.2)中之20nM抗抗原抗體(Fab形式)之螢光發射強度之增加或降低(激發波長=295nm；發射波長=340nm，16nm帶通)，如於分光光度計中所量測，例如帶有攪拌比色杯之停流裝備之分光光度計(Aviv Instruments)或8000-系列SLM-AMINCOTM分光光度計(ThermoSpectronic)。
2.抗體片段
在某些實施例中，本文所提供抗體係抗體片段。抗體片段包含但不限於Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2、Fv及scFv片段及下文所闡述之其他片段。關於某些抗體片段之綜述，參見Hudson等人Nat.Med.9：129-134(2003)。關於scFv片段之綜述，例如參見Pluckthün,The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，第113卷，Rosenburg及Moore編輯(Springer-Verlag,New York)，第269-315頁(1994)；亦參見WO 93/16185及美國專利第5,571,894號及第5,587,458號。關於包括補救受體結合表位殘基且具有延長之活體內半衰期之Fab及F(ab')2片段之論述，參見美國專利第5,869,046號。
雙鏈抗體係具有兩個抗原結合位點之可為二價或雙特異性之抗體片段。例如參見EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson等人，Nat.Med.9：129-134(2003)；及Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448(1993)。三鏈抗體及四鏈抗體亦闡述於Hudson等人，Nat.Med.9：129-134(2003)中。
單一結構域抗體係包括抗體中重鏈可變結構域之全部或一部分或輕鏈可變結構域之全部或一部分的抗體片段。在某些實施例中，單一結構域抗體係人類單一結構域抗體(Domantis公司，Waltham,MA；例如參見美國專利第6,248,516B1號)。
可藉由各種技術來製備抗體片段，包含但不限於蛋白水解消化完整抗體以及藉由重組宿主細胞(例如大腸桿菌(E.coli)或噬菌體)來產生，如本文所闡述。
3.嵌合及人類化抗體
在某些實施例中，本文所提供抗體係嵌合抗體。某些嵌合抗體闡述於(例如)美國專利第4,816,567號及Morrison等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81：6851-6855(1984))中。在一實例中，嵌合抗體包括非人類可變區(例如源自小鼠、大鼠、倉鼠、兔或非人類靈長類動物(例如猴子)之可變區)及人類恆定區。在另一實例中，嵌合抗體係種類或子類已自親代抗體發生變化之「種類轉換」抗體。嵌合抗體包含其抗原結合片段。
在某些實施例中，嵌合抗體係人類化抗體。通常，將非人類抗體人類化以降低對人類之免疫原性，而保留親代非人類抗體之特異性及親和力。通常，人類化抗體包括一或多個可變結構域，其中HVR(例如CDR)(或其部分)係源自非人類抗體，且FR(或其部分)係源自人類抗體序列。人類化抗體視情況亦可包括人類恆定區之至少一部分。在一些實施例中，人類化抗體中之一些FR殘基經來自非人類抗體(例如產生HVR殘基之抗體)之相應殘基取代以(例如)恢復或改良抗體特異性或親和力。
人類化抗體及其製備方法綜述於(例如)Almagro及Fransson，Front.Biosci.13：1619-1633(2008)中，且進一步闡述於(例如)以下文獻中：Riechmann等人，Nature 332：323-329(1988)；Queen等人 Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 86：10029-10033(1989)；美國專利第5,821,337號、第7,527,791號、第6,982,321號及第7,087,409號；Kashmiri等人，Methods 36：25-34(2005)(闡述特異性決定區(SDR)接枝)；Padlan，Mol.Immunol.28：489-498(1991)(闡述「表面重塑」)；Dall’Acqua等人，Methods 36：43-60(2005)(闡述「FR改組」)；及Osbourn等人，Methods 36：61-68(2005)及Klimka等人，Br.J.Cancer，83：252-260(2000)(闡述FR改組之「引導選擇」方法)。
可用於人類化之人類框架區包含但不限於：使用「最佳擬合」方法選擇之框架區(例如參見，Sims等人，J.Immunol.151：2296(1993))；源自輕鏈或重鏈可變區之特定亞組之人類抗體之共有序列的框架區(例如參見，Carter等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89：4285(1992)；及Presta等人，J.Immunol.,151：2623(1993))；人類成熟(經體突變)框架區或人類種系框架區(例如參見，Almagro及Fransson,Front.Biosci.13：1619-1633(2008))；及自篩選FR文庫獲得之框架區(例如參見，Baca等人，J.Biol.Chem.272：10678-10684(1997)及Rosok等人，J.Biol.Chem.271：22611-22618(1996))。
4.人類抗體
在某些實施例中，本文所提供抗體係人類抗體。可使用業內已知之各種技術來產生人類抗體。人類抗體概述於van Dijk及van de Winkel,Curr.Opin.Pharmacol.5：368-74(2001)及Lonberg,Curr.Opin.Immunol.20：450-459(2008)中。
可藉由向轉基因動物投與免疫原來製備人類抗體，該轉基因動物已經修飾以產生完整人類抗體或具有因應於抗原性激發之人類可變區的完整抗體。該等動物通常含有人類免疫球蛋白基因座之全部或一部分，該等基因座代替內源性免疫球蛋白基因座，或存在於染色體外 或隨機整合至動物染色體中。在該等轉基因小鼠中，內源性免疫球蛋白基因座通常已失活。關於自轉基因動物獲得人類抗體之方法之綜述，參見Lonberg,Nat.Biotech.23：1117-1125(2005)。舉例而言，亦可參見美國專利第6,075,181號及第6,150,584號，其闡述XENOMOUSETM技術；美國專利第5,770,429號，其闡述HUMAB®技術；美國專利第7,041,870號，其闡述K-M MOUSE ®技術；及美國專利申請公開案第US 2007/0061900號，其闡述VELOCIMOUSE®技術。可進一步(例如)藉由與不同人類恆定區組合來修飾由該等動物產生之完整抗體的人類可變區。
人類抗體亦可藉由基於雜交瘤之方法來製備。已闡述用於產生人類單株抗體之人類骨髓瘤及小鼠-人類異源骨髓瘤細胞系。(例如參見Kozbor J.Immunol.,133：3001(1984)；Brodeur等人，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications，第51-63頁(Marcel Dekker公司，New York,1987)；及Boerner等人，J.Immunol.,147：86(1991)。)經由人類B細胞雜交瘤技術產生之人類抗體亦闡述於Li等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,103：3557-3562(2006)中。其他方法包含彼等闡述於(例如)美國專利第7,189,826號(闡述來自雜交瘤細胞系之單株人類IgM抗體之產生)及Ni,Xiandai Mianyixue,26(4)：265-268(2006)(闡述人類-人類雜交瘤)中者。人類雜交瘤技術(三源雜交瘤(Trioma)技術)亦闡述於Vollmers及Brandlein，Histology and Histopathology，20(3)：927-937(2005)以及Vollmers及Brandlein，Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology,27(3)：185-91(2005)中。
人類抗體亦可藉由分離選自人類源噬菌體展示文庫之Fv純系可變結構域序列來生成。然後，該等可變結構域序列可與期望之人類恆定結構域組合。自抗體文庫選擇人類抗體之技術闡述於下文中。
5.文庫衍生之抗體
可藉由自組合文庫篩選具有一或多種期望活性之抗體來分離本發明抗體。舉例而言，業內已知用於產生噬菌體展示文庫及自該等文庫篩選具有期望結合特性之抗體的各種方法。此等方法可參見(例如)Hoogenboom等人，Methods in Molecular Biology 178：1-37(O’Brien 等人，編輯，Human Press,Totowa,NJ,2001)，且進一步闡述於(例如)以下文獻中：McCafferty等人，Nature 348：552-554；Clackson等人，Nature 352：624-628(1991)；Marks等人，J.Mol.Biol.222：581-597(1992)；Marks及Bradbury，Methods in Molecular Biology 248：161-175(Lo編輯，Human Press,Totowa,NJ,2003)；Sidhu等人，J.Mol.Biol.338(2)：299-310(2004)；Lee等人，J.Mol.Biol.340(5)：1073-1093(2004)；Fellouse,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101(34)：12467-12472(2004)；及Lee等人，J.Immunol.Methods 284(1-2)：119-132(2004)。
在某些噬菌體展示方法中，藉由聚合酶鏈反應(PCR)來單獨選殖VH及VL譜且將其隨機重組於噬菌體文庫中，然後可篩選結合抗原之噬菌體，如Winter等人，Ann.Rev.Immunol.,12：433-455(1994)中所闡述。噬菌體通常展示呈單鏈Fv(scFv)片段或呈Fab片段之抗體片段。來自免疫化源之文庫可向免疫原提供高親和力抗體而無需構築雜交瘤。另一選擇為，可選殖天然譜(例如自人類)以向各種無任何免疫之非自體抗原亦及自體抗原提供單一抗體源，如由Griffiths等人，EMBO J,12：725-734(1993)所闡述。最後，亦可藉由以下方式以合成方式製得天然文庫：選殖來自幹細胞之未重排V-基因片段，且使用含有隨機序列之PCR引物編碼高度可變CDR3區並在活體外達成重排，如由Hoogenboom及Winter,J.Mol.Biol.,227：381-388(1992)所闡述。闡述人類抗體噬菌體文庫之專利公開案包含(例如)：美國專利第 5,750,373號及美國專利公開案第2005/0079574號、第2005/0119455號、第2005/0266000號、第2007/0117126號、第2007/0160598號、第2007/0237764號、第2007/0292936號及第2009/0002360號。
本文中將自人類抗體文庫分離之抗體或抗體片段視為人類抗體或人類抗體片段。
6.多特異性抗體
在某些實施例中，本文所提供之抗體係多特異性抗體，例如雙特異性抗體。多特異性抗體係對至少兩個不同位點具有結合特異性之單株抗體。在某些實施例中，結合特異性中之一者係關於OX40且另一者係關於任一其他抗原。在某些實施例中，雙特異性抗體可結合OX40之兩個不同表位。雙特異性抗體亦可用於將細胞毒性劑局域化至表現OX40之細胞。雙特異性抗體可以全長抗體或抗體片段形式製得。
製備多特異性抗體之技術包含但不限於重組共表現兩個具有不同特異性之免疫球蛋白重鏈-輕鏈對(參見Milstein及Cuello,Nature 305：537(1983))、WO 93/08829及Traunecker等人，EMBO J.10：3655(1991))及「凸起與孔洞(knob-in-hole)」改造(例如參見美國專利第5,731,168號)。亦可藉由以下方式來製備多特異性抗體：改造用於製備抗體Fc-異源二聚分子之靜電牽引效應(WO 2009/089004A1)；使兩個或更多個抗體或片段交聯(例如參見美國專利第4,676,980號及Brennan等人，Science 229：81(1985))；使用白胺酸拉鍊產生雙特異性抗體(例如參見Kostelny等人，J.Immunol.,148(5)：1547-1553(1992))；使用用於製備雙特異性抗體片段之「雙鏈抗體」技術(例如參見Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90：6444-6448(1993))；及使用單鏈Fv(scFv)二聚體(例如參見Gruber等人，J.Immunol.152：5368(1994))；及製備三特異性抗體(例如如Tutt等人， J.Immunol.147：60(1991)中所闡述)。
本文亦包含經改造以具有三個或更多個功能抗原結合位點之抗體(包含「章魚抗體」)(例如參見US 2006/0025576A1)。
本文之抗體或片段亦包含含有結合OX40以及另一不同抗原之抗原結合位點的「雙重作用之FAb」或「DAF」(例如參見US 2008/0069820)。
7.抗體變體
在某些實施例中，本發明涵蓋本文所提供抗體之胺基酸序列變體。舉例而言，可能期望改良抗體之結合親和力及/或其他生物學性質。抗體之胺基酸序列變體可藉由向編碼抗體之核苷酸序列中引入適宜修飾或藉由肽合成來製備。該等修飾包含(例如)抗體胺基酸序列內殘基之缺失及/或***及/或取代。可實施缺失、***及取代之任一組合以達成最終構築體，前提為最終構築體具有期望特性，例如抗原結合性。
a)取代、***及缺失變體
在某些實施例中，提供具有一或多個胺基酸取代之抗體變體。用於取代誘變之所關注位點包含HVR及FR。保守取代展示於表A中之「較佳取代」標題下。其他實質性變化提供於表A中之「實例性取代」標題下，且參照胺基酸側鏈種類進一步闡述於下文中。可將胺基酸取代引入所關注抗體及經篩選具有期望活性之產物中，該期望活性係(例如)經保留/改良抗原結合、經降低免疫原性或經改良ADCC或CDC。
Figure 104110569-A0202-12-0086-45
Figure 104110569-A0202-12-0087-46
可根據常見側鏈性質將胺基酸分組：(1)疏水性：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；(2)中性親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；(3)酸性：Asp、Glu；(4)鹼性：His、Lys、Arg；(5)影響鏈取向之殘基：Gly、Pro；(6)芳族殘基：Trp、Tyr、Phe。
非保守性取代使得需要將該等種類之一種之成員與另一種類交 換。
一種取代變體類型涉及取代親代抗體(例如人類化或人類抗體)之一或多個超變區殘基。通常，選擇用於進一步研究之所得變體相對於親代抗體在某些生物學性質(例如增加之親和力、降低之免疫原性)中具有修飾(例如改良)及/或實質上保留親代抗體之某些生物學性質。實例性取代變體係親和力成熟抗體，其可便利地(例如)使用基於噬菌體展示之親和力成熟技術(例如彼等本文所闡述者)產生。簡言之，使一或多個HVR殘基突變且將變體抗體展示於噬菌體上並篩選特定生物學活性(例如結合親和力)。
可對HVR作出變化(例如取代)以(例如)改良抗體親和力。該等改變可在HVR「熱點」(亦即由在體細胞成熟過程期間發生高頻率突變之密碼子編碼的殘基)(例如參見Chowdhury，Methods Mol.Biol.207：179-196(2008))及/或接觸抗原之殘基中進行，其中測試所得變體VH或VL之結合親和力。藉由自二級文庫構築及重新選擇來達成親和力成熟已闡述於(例如)Hoogenboom等人，Methods in Molecular Biology 178：1-37(O’Brien等人編輯，Human Press,Totowa,NJ,(2001))中。在親和力成熟之一些實施例中，藉由各種方法(例如易錯PCR、鏈改組或寡核苷酸引導之誘變)中之任一者將多樣性引入所選用於成熟之可變基因中。然後建立二級文庫。然後篩選文庫以鑑別具有期望親和力之任一抗體變體。引入多樣性之另一方法涉及HVR引導方法，其中將若干HVR殘基(例如一次4-6個殘基)隨機化。可特定鑑別(例如使用丙胺酸掃描誘變或建模)參與抗原結合之HVR殘基。特定而言，通常靶向CDR-H3及CDR-L3。
在某些實施例中，取代、***或缺失可出現於一或多個HVR內，只要該等改變不會實質上降低抗體結合抗原之能力即可。舉例而言，可對HVR作出不實質上降低結合親和力之保守改變(例如本文所 提供之保守取代)。該等改變可例如)位於接觸HVR中之殘基之抗原外側。在上文所提供變體VH及VL序列之某些實施例中，每一HVR未經改變，或含有不超過一個、兩個或三個胺基酸取代。
用於鑑別抗體上可靶向用於誘變之殘基或區之有用方法稱為「丙胺酸掃描誘變」，如Cunningham及Wells(1989)Science,244：1081-1085中所闡述。在此方法中，已鑑別殘基或目標殘基組(例如帶電殘基，例如arg、asp、his、lys及glu)，並由中性或帶負電之胺基酸(例如丙胺酸或多丙胺酸)代替以確定是否影響抗體與抗原之相互作用。可在對初始取代顯示功能敏感性之胺基酸位置處引入其他取代。另一選擇為或另外，使用抗原-抗體複合體之晶體結構以鑑別抗體與抗原之間之接觸點。可靶向該等接觸殘基及相鄰殘基作為取代候選物或將其消除。可篩選變體以確定其是否含有期望性質。
胺基酸序列***包含胺基-及/或羧基-末端融合體(長度在一個殘基至含有上百或更多殘基之多肽範圍內)以及單個或多個胺基酸殘基之序列內***。末端***之實例包含具有N-末端甲二磺醯殘基之抗體。抗體分子之其他***變體包含酶(例如用於ADEPT)或延長抗體血清半衰期之多肽與抗體N-端或C-末端之融合體。
b)糖基化變體
在某些實施例中，改變本文所提供之抗體以增加或降低抗體經糖基化之程度。抗體糖基化位點之添加或缺失可藉由改變胺基酸序列以產生或去除一或多個糖基化位點來便利地完成。
若抗體包括Fc區，則其所附接之碳水化合物可有所改變。由哺乳動物細胞產生之天然抗體通常包括具支鏈、二分枝寡糖，其通常藉由N-鏈接附接至Fc區之CH2結構域的Asn297。例如參見Wright等人TIBTECH 15：26-32(1997)。該寡糖可包含各種碳水化合物，例如甘露糖、N-乙醯基葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖及唾液酸以及附接至二分枝寡 糖結構之「主幹」中之GlcNAc之岩藻糖。在一些實施例中，可修飾本發明抗體中之寡糖以產生具有某些改良性質之抗體變體。
在一實施例中，提供具有缺乏附接(直接或間接)至Fc區之岩藻糖之碳水化合物結構的抗體變體。舉例而言，此抗體中岩藻糖之量可為1%至80%、1%至65%、5%至65%或20%至40%。岩藻糖之量係藉由計算糖鏈內Asn297處之岩藻糖相對於附接至Asn 297之所有糖結構(例如複雜、雜合及高甘露糖結構)之總和的平均量來測定，如藉由MALDI-TOF質譜所量測，如(例如)WO 2008/077546中所闡述。Asn297係指位於Fc區中大約297位處之天門冬醯胺殘基(Fc區殘基之Eu編號)；然而，因抗體中具有微小序列變化，故Asn297亦可位於297位上游或下游之大約±3個胺基酸處，亦即，介於294位與300位之間。該等岩藻糖基化變體可具有經改良ADCC功能。例如參見美國專利公開案第US 2003/0157108號(Presta,L.)；US 2004/0093621(Kyowa Hakko Kogyo有限公司)。與「去海藻糖基化」或「缺乏海藻糖」抗體變體相關之公開案(出版物)之實例包含：US 2003/0157108；WO 2000/61739；WO 2001/29246；US 2003/0115614；US 2002/0164328；US 2004/0093621；US 2004/0132140；US 2004/0110704；US 2004/0110282；US 2004/0109865；WO 2003/085119；WO 2003/084570；WO 2005/035586；WO 2005/035778；WO2005/053742；WO2002/031140；Okazaki等人，J.Mol.Biol.336：1239-1249(2004)；Yamane-Ohnuki等人，Biotech.Bioeng.87：614(2004)。能產生去岩藻糖基化抗體之細胞系之實例包含缺乏蛋白質岩藻糖基化之Lec13 CHO細胞(Ripka等人，Arch.Biochem.Biophys.249：533-545(1986)；美國專利申請案第US 2003/0157108 A1號，Presta,L；及WO 2004/056312 A1，Adams等人，尤其在實例11中)及基因敲除細胞系，例如α-1,6-岩藻糖基轉移酶基因FUT8基因敲除CHO 細胞(例如參見Yamane-Ohnuki等人，Biotech.Bioeng.87：614(2004)；Kanda,Y.等人Biotechnol.Bioeng.,94(4)：680-688(2006)；及WO2003/085107)。
進一步提供二等分寡糖之抗體變體，舉例而言，其中附接至抗體Fc區之二分枝寡糖由GlcNAc二等分。該等抗體變體可具有降低之岩藻糖基化及/或改良之ADCC功能。該等抗體變體之實例闡述於(例如)WO 2003/011878(Jean-Mairet等人)、美國專利第6,602,684號(Umana等人)及US 2005/0123546(Umana等人)中。亦提供在附接至Fc區之寡糖中具有至少一個半乳糖殘基之抗體變體。該等抗體變體可具有經改良CDC功能。該等抗體變體闡述於(例如)WO 1997/30087(Patel等人)、WO 1998/58964(Raju,S.)及WO 1999/22764(Raju,S.)中。
c)Fc區變體
在某些實施例中，可將一或多個胺基酸修飾引入本文所提供抗體之Fc區中，由此產生Fc區變體。Fc區變體可包括人類Fc區序列(例如人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc區)，該序列在一或多個胺基酸位置包括胺基酸修飾(例如取代)。
在某些實施例中，本發明涵蓋具有一些(但非全部)效應物功能之抗體變體，此情況使其成為許多應用之期望候選物，在該等應用中抗體之活體內半衰期較為重要，但某些效應物功能(例如補體及ADCC)係不必要或有害的。可實施活體外及/或活體內細胞毒性分析來確認CDC及/或ADCC活性之降低/消耗。舉例而言，可實施Fc受體(FcR)結合分析以確保抗體缺乏FcγR結合能力(因此可能缺乏ADCC活性)，但保留FcRn結合能力。介導ADCC之原代細胞(NK細胞)僅表現FcγRIII，而單核球表現FcγRI、FcγRII及FcγRIII。FcR於造血細胞中之表現匯總於Ravetch及Kinet,Annu.Rev.Immunol 9：457-492(1991)之第464頁表3 中。評價所關注分子之ADCC活性之活體外分析之非限制性實例闡述於美國專利第5,500,362號(例如參見Hellstrom,I.等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 83：7059-7063(1986))及Hellstrom,I等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 82：1499-1502(1985)；5,821,337(參見Bruggemann,M.等人，J.Exp.Med.166：1351-1361(1987))中。另一選擇為，可使用非放射性分析方法(例如參見用於流式細胞術之ACTITM非放射性細胞毒性分析(CellTechnology公司，Mountain View,CA)及CytoTox 96®非放射性細胞毒性分析(Promega,Madison,WI))。可用於該等分析之效應細胞包含周邊血單核細胞(PBMC)及天然殺傷(NK)細胞。另一選擇為或另外，可在活體內(例如在諸如揭示於Clynes等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 95：652-656(1998)中之動物模型等動物模型中)評價所關注分子之ADCC活性。亦可實施C1q結合分析來確認抗體不能與C1q結合且因此缺少CDC活性。例如參見WO 2006/029879及WO 2005/100402中之C1q及C3c結合ELISA。為評價補體活化，可實施CDC分析(例如參見Gazzano-Santoro等人，J.Immunol.Methods 202：163(1996)；Cragg,M.S.等人，Blood 101：1045-1052(2003)；及Cragg,M.S.及M.J.Glennie,Blood 103：2738-2743(2004))。亦可使用業內已知方法來實施FcRn結合及活體內清除/半衰期測定(例如參見Petkova,S.B.等人，Int’l.Immunol.18(12)：1759-1769(2006))。
具有降低效應物功能之抗體包含彼等具有Fc區殘基238、265、269、270、297、327及329中之一或多者的取代者(美國專利第6,737,056號)。該等Fc突變體包含在胺基酸位置265、269、270、297及327中之兩者或更多者處具有取代之Fc突變體，包含在殘基265及297處經丙胺酸取代之所謂的「DANA」Fc突變體(美國專利第7,332,581號)。
闡述具有改良或降低之與FcR之結合的某些抗體變體。(例如參 見美國專利第6,737,056號、WO 2004/056312及Shields等人，J.Biol.Chem.9(2)：6591-6604(2001))。
在某些實施例中，抗體變體包括具有一或多個改良ADCC之胺基酸取代之Fc區，例如在Fc區之位置298、333及/或334處之取代(殘基之EU編號)。
在一些實施例中，Fc區有所改變，從而改變(亦即改良或減小)C1q結合及/或補體依賴性細胞毒性(CDC)，例如如美國專利第6,194,551號、WO 99/51642及Idusogie等人，J.Immunol.164：4178-4184(2000)中所闡述。
具有延長之半衰期及增強之與新生兒Fc受體(FcRn，其負責將母體IgG轉移至胎兒中，Guyer等人，J.Immunol.117：587(1976)及Kim等人，J.Immunol.24：249(1994))之結合之抗體闡述於US2005/0014934A1(Hinton等人)中。彼等抗體包括具有一或多個改良Fc區與FcRn之結合之取代之Fc區。該等Fc變體包含彼等在以下Fc區殘基之一或多者處具有取代者：238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434，例如取代Fc區殘基434(美國專利第7,371,826號)。
亦參見Duncan及Winter,Nature 322：738-40(1988)；美國專利第5,648,260號；美國專利第5,624,821號；及與Fc區變體有關之其他實例之WO 94/29351。
d)半胱胺酸改造之抗體變體
在某些實施例中，可能期望產生半胱胺酸改造之抗體，例如「硫代MAb」，其中抗體之一或多個殘基經半胱胺酸殘基取代。在特定實施例中，經取代殘基於抗體之可及位點處出現。藉由使用半胱胺酸取代彼等殘基，反應性硫醇基團由此位於抗體之可及位點處且可用 於使抗體偶聯至其他部分(例如藥物部分或連接體-藥物部分)以產生免疫偶聯物，如本文進一步所闡述。在某些實施例中，下列殘基中之任一個或多個可經半胱胺酸取代：輕鏈之V205(Kabat編號)、重鏈之A118(EU編號)及重鏈Fc區之S400(EU編號)。半胱胺酸改造之抗體可如(例如)美國專利第7,521,541號中所闡述來產生。
e)抗體衍生物
在某些實施例中，可進一步修飾本文所提供抗體以含有業內已知且易於獲得之額外非蛋白質性部分。適於衍生抗體之部分包含但不限於水溶性聚合物。水溶性聚合物之非限制性實例包含但不限於聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇之共聚物、羧甲基纖維素、右旋糖酐、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯啶酮、聚-1,3-二氧戊環、聚-1,3,6-三噁烷、乙烯/馬來酸酐共聚物、聚胺基酸(均聚物或無規共聚物)及右旋糖酐或聚(n-乙烯基基吡咯啶酮)聚乙二醇、聚丙二醇均聚物、聚環氧丙烷/環氧乙烷共聚物、聚氧乙基化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛可因其在水中具有穩定性而在製造方面具有優勢。聚合物可具有任何分子量，且可為具支鏈或不具支鏈。附接至抗體之聚合物之數量可有所變化，且若附接一個以上之聚合物，則其可為相同或不同分子。一般而言，衍生化所用聚合物之數量及/或類型可根據包含但不限於以下在內之考慮因素來確定：擬改良抗體之特定性質或功能、抗體衍生物是否將用於界定條件下之療法等。
在另一實施例中，提供抗體及非蛋白質性部分之偶聯物，其可藉由暴露於輻射來選擇性加熱。在一實施例中，非蛋白質性部分係碳奈米管(Kam等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102：11600-11605(2005))。輻射可具有任一波長，且包含但不限於如下波長之輻射：其不會危害正常細胞，但將非蛋白質性部分加熱至可將毗鄰抗體-非蛋白質性部分之細胞殺滅的溫度。
B.重組方法及組合物
可使用重組方法及組合物來產生抗體，例如如美國專利第4,816,567號中所闡述。在一實施例中，提供本文所闡述之編碼抗-OX40抗體之分離核酸。該核酸可編碼抗體中包括VL之胺基酸序列及/或包括VH之胺基酸序列(例如抗體之輕鏈及/或重鏈)。在另一實施例中，提供一或多個包括該核酸之載體(例如表現載體)。在另一實施例中，提供包括該核酸之宿主細胞。在一此類實施例中，宿主細胞包括以下物質(例如已經該等物質轉化)：(1)包括如下核酸之載體：其編碼包括抗體之VL之胺基酸序列及包括抗體之VH之胺基酸序列，或(2)包括編碼包括抗體之VL之胺基酸序列之核酸的第一載體，及包括編碼包括抗體之VH之胺基酸序列之核酸的第二載體。在一實施例中，宿主細胞係真核細胞，例如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或淋巴樣細胞(例如Y0、NS0、Sp20細胞)。在一實施例中，提供製備抗-OX40抗體之方法，其中該方法包括在適於表現抗體之條件下培養包括編碼如上文所提供抗體之核酸的宿主細胞，及視情況自宿主細胞(或宿主細胞培養基)回收抗體。
對於抗-OX40抗體之重組產生，分離(例如)如上文所闡述之編碼抗體之核酸並將其***一或多個載體中以供進一步選殖及/或在宿主細胞中表現。該核酸可易於使用習用程序分離出來並測序(例如藉由使用能與編碼抗體之重鏈及輕鏈之基因特異性結合之寡核苷酸探針)。
用於選殖或表現編碼抗體之載體之適宜宿主細胞包含本文所闡述之原核或真核細胞。舉例而言，抗體可在細菌中產生，尤其在無需糖基化及Fc效應物功能時。關於抗體片段及多肽在細菌中之表現，例如參見美國專利第5,648,237號、第5,789,199號及第5,840,523號(亦參見Charlton,Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo編輯， Humana Press,Totowa,NJ,2003)，第245-254頁，其闡述抗體片段在大腸桿菌中之表現)。在表現之後，可以可溶性部分自細菌細胞膏分離抗體且可將其進一步純化。
除原核生物外，真核微生物(例如絲狀真菌或酵母菌)亦係用於抗體編碼載體之適宜選殖或表現宿主，包含糖基化途徑已「人類化」從而產生具有部分或完全人類糖基化模式之抗體的真菌及酵母菌菌株。參見Gerngross,Nat.Biotech.22：1409-1414(2004)及Li等人，Nat.Biotech.24：210-215(2006)。
用於表現糖基化抗體之適宜宿主細胞亦源自多細胞有機體(無脊椎動物及脊椎動物)。無脊椎動物細胞之實例包含植物及昆蟲細胞。已確定多種桿狀病毒菌株可與昆蟲細胞聯合使用，尤其用於轉染草地貪夜蛾(Spodoptera frugiperda)細胞。
亦可利用植物細胞培養物作為宿主。例如參見美國專利第5,959,177號、第6,040,498號、第6,420,548號、第7,125,978號及第6,417,429號(闡述產生轉基因植物中之抗體之PLANTIBODIESTM技術)。
亦可使用脊椎動物細胞作為宿主。舉例而言，可使用適於懸浮液生長之哺乳動物細胞系。有用哺乳動物宿主細胞系之其他實例係藉由SV40轉變之猴腎臟CV1細胞系(COS-7)；人類胚胎腎臟細胞系(293或293細胞，如(例如)Graham等人，J.Gen Virol.36：59(1977)中所闡述)；幼倉鼠腎細胞(BHK)；小鼠支持細胞(TM4細胞，如(例如)Mather,Biol.Reprod.23：243-251(1980)中所闡述)；猴腎細胞(CV1)；非洲綠猴腎細胞(VERO-76)；人類子宮頸癌細胞(HELA)；犬腎細胞(MDCK)；布法羅大鼠肝細胞(buffalo rat liver cell)(BRL 3A)；人類肺細胞(W138)；人類肝細胞(Hep G2)；小鼠***腫瘤(MMT 060562)；TRI細胞，如(例如)Mather等人，Annals N.Y.Acad.Sci.383：44-68 (1982)中所闡述；MRC5細胞；及FS4細胞。其他有用哺乳動物宿主細胞系包含中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，包含DHFR-CHO細胞(Urlaub等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4216(1980))；及骨髓瘤細胞系，例如Y0、NS0及Sp2/0。關於適於抗體產生之某些哺乳動物宿主細胞系之綜述，例如參見Yazaki及Wu，Methods in Molecular Biology，第248卷(B.K.C.Lo編輯，Humana Press,Totowa,NJ)，第255-268頁(2003)。
C.分析
可藉由業內已知之各種分析來鑑別本文所提供之抗-OX40抗體、篩選或表徵其物理/化學性質及/或生物活性。
1.結合分析及其他分析
在一態樣中，藉由(例如)已知方法(例如ELISA、西方印跡(Western blot)等)測試本發明抗體之抗原結合活性。可使用業內已知方法測定OX40結合且實例性方法揭示於本文中。在一實施例中，使用放射免疫分析量測結合。實例性放射免疫分析例示於實例中。對OX40抗體實施碘化，且製備含有固定濃度之碘化抗體及降低濃度之連續稀釋、未標記OZ X40抗體之競爭反應混合物。向反應混合物中添加表現OX40之細胞(例如經人類OX40穩定轉染之BT474細胞)。在培育後，洗滌細胞以使游離碘化OX40抗體與結合細胞之OX40抗體分離。藉由(例如)對與細胞結合之放射活性進行計數來測定結合碘化OX40抗體之濃度，且使用標準方法測定結合親和力。在另一實施例中，使用流式細胞術分析OX40抗體結合表面表現OX40(例如在T細胞子組上)之能力。獲得周邊白血細胞(例如自人類、食蟹猴、大鼠或小鼠)且使用血清阻斷細胞。以連續稀釋液添加經標記OX40抗體，且亦將T細胞染色以鑑別T細胞子組(使用業內已知方法)。在培育試樣且洗滌後，使用流式細胞儀分選細胞，且使用業內熟知方法分析數據。在 另一實施例中，可使用表面電漿共振分析OX40結合。實例性表面電漿共振方法例示於實例中。
在另一態樣中，可使用競爭分析來鑑別與本文所揭示任一抗-OX40抗體競爭結合OX40之抗體。在某些實施例中，此一競爭性抗體結合本文所揭示任一抗-OX40抗體所結合之相同表位(例如線性或構型表位)。定位抗體所結合之表位之詳細實例性方法提供於Morris(1996)「Epitope Mapping Protocols」,Methods in Molecular Biology第66卷(Humana Press,Totowa,NJ)中。競爭分析例示於實例中。
在實例性競爭分析中，在溶液中培育固定化OX40，該溶液包括結合OX40(例如mab 1A7.gr.1、mab 3C8.gr5)之第一經標記抗體及正在測試與第一抗體競爭結合OX40之能力之第二未標記抗體。第二抗體可存在於雜交瘤上清液中。作為對照，在包括第一經標記抗體但不包括第二未標記抗體之溶液中培育固定OX40。在允許第一抗體與OX40結合之條件下培育之後，去除過量未結合抗體，並量測與固定OX40締合之標記的量。若與固定OX40締合之標記之量在測試試樣中相對於對照試樣實質上有所減小，則此指示第二抗體與第一抗體競爭結合OX40。參見Harlow及Lane(1988)Antibodies：A Laboratory Manual ch.14(Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,NY)。
2.活性分析
在一態樣中，提供分析以鑑別具有生物活性之抗-OX40抗體。生物活性可包含(例如)結合OX40(例如結合人類及/或食蟹猴OX40)、增加OX40調介之信號轉導(例如增加NFkB調介之轉錄)、消耗表現人類OX40之細胞(例如T細胞)、藉由ADCC及/或吞噬作用消耗表現人類OX40之細胞、藉由(例如)增加效應T細胞增殖及/或增加效應T細胞之細胞介素產生(例如γ干擾素)來增強T效應細胞功能(例如CD4+效應T細 胞)、藉由(例如)增加記憶性T細胞增殖及/或增加記憶性T細胞之細胞介素產生(例如γ干擾素)來增強記憶性T細胞功能(例如CD4+記憶性T細胞)、抑制調節性T細胞功能(例如藉由降低效應T細胞功能(例如CD4+效應T細胞功能)之Treg阻抑)、結合人類效應細胞。亦提供在活體內及/或活體外具有該生物活性之抗體。
在某些實施例中，測試本發明抗體之該生物活性。
可使用業內已知方法分析T細胞共刺激且實例性方法揭示於本文中。舉例而言，可自周邊白血細胞獲得T細胞(例如記憶性或效應T細胞)(例如使用Ficoll梯度離心自人類全血分離)。可使用業內已知方法自PBMC分離記憶性T細胞(例如CD4+記憶性T細胞)或效應T細胞(例如CD4+ Teff細胞)。舉例而言，可使用Miltenyi CD4+記憶性T細胞分離套組或Miltenyi幼稚CD4+ T細胞分離套組。在抗原呈遞細胞(例如表現CD32及CD80之經輻照L細胞)存在下培養分離T細胞，且藉由在存在或不存在OX40激動劑抗體下添加抗CD3抗體進行活化。可使用業內熟知方法量測T細胞增殖之激動劑OX40抗體之效應。舉例而言，可使用CellTiter Glo套組(Promega)，且在Multilabel讀數儀(Perkin Elmer)上讀取結果。亦可藉由分析由T細胞產生之細胞介素來測定激動劑OX40抗體對T細胞功能之效應。在一實施例中，藉由(例如)量測細胞培養上清液中之干擾素γ來測定CD4+ T細胞之干擾素γ產生。量測干擾素γ之方法在業內已眾所周知。
可使用業內已知方法分析Treg細胞功能且實例性方法揭示於本文中。在一實例中，分析Treg阻抑效應T細胞增殖之能力。使用業內已知方法自人類全血分離T細胞(例如分離記憶性T細胞或幼稚T細胞)。對經純化CD4+幼稚T細胞進行標記(例如使用CFSE)且使用不同試劑標記經純化Treg細胞。將經輻照抗原呈遞細胞(例如表現CD32及CD80之L細胞)與經標記純化幼稚CD4+ T細胞及經純化Treg一起共培養。使 用抗CD3抗體活化共培養物且在存在或不存在激動劑OX40抗體下進行測試。在適宜時間(例如共培養6天)後，藉由染料稀釋在還原標記染色(例如還原CFSE標記染色)中使用FACS分析追蹤CD4+幼稚T細胞增殖程度。
可使用業內熟知方法分析OX40信號傳導且實例性方法揭示於本文中。在一實施例中，生成表現人類OX40之轉基因細胞及包括融合至報告基因(例如β螢光素酶)之NFkB啟動子之報告基因。向細胞中添加OX40激動劑抗體會使得增加NFkB轉錄，此可使用用於報告基因之分析進行檢測。
可(例如)藉由使用單核球源巨噬球或U937細胞(具有成熟巨噬球之形態及特性之人類組織細胞淋巴瘤細胞系)來分析吞噬作用。在存在或不存在抗-OX40激動劑抗體下將OX40表現細胞添加至單核球源巨噬球或U937細胞中。在將細胞培養適宜時間段後，藉由以下方式測定吞噬作用百分比：檢驗雙染色1)巨噬球或U937細胞及2)OX40表現細胞之標記物之細胞之百分比，且將此百分比除以展示OX40表現細胞(例如GFP)之標記物之總細胞數量。可藉由流式細胞術進行分析。在另一實施例中，可藉由螢光顯微分析進行分析。
可(例如)使用業內熟知方法分析ADCC。實例性方法闡述於定義部分中且實例性分析揭示於實例中。在一些實施例中，在用於ADCC分析中測試之OX40表現細胞上表徵OX40含量。可使用可檢測標記抗-OX40抗體(例如PE標記)將細胞染色，然後使用流式細胞術測定螢光含量，且結果呈現為中值螢光強度(MFI)。在另一實施例中，可藉由CellTiterGlo分析套組分析ADCC且可藉由化學發光測定細胞存活/細胞毒性。
可在基於ELISA之配體結合分析中使用各別重組Fcγ受體量測各種抗體與FcγRIA、FcγRIIA、FcγRIIB及FcγRIIIA之兩種同種異型 (F158及V158)之結合親和力。將經純化人類Fcγ受體表現為含有在C-末端處連接至Gly/6xHis/谷胱甘肽S-轉移酶(GST)多肽標籤之受體γ鏈之細胞外結構域之融合蛋白。如下所述來分析抗體與彼等人類Fcγ受體之結合親和力。對於低親和力受體(亦即FcγRIIA(CD32A)、FcγRIIB(CD32B)及FcγRIIIA(CD16)之兩種同種異型F-158及V-158)而言，可以多聚體形式藉由與山羊抗人類κ鏈(ICN Biomedical；Irvine,CA)之F(ab’)2片段以1：3抗體：交聯F(ab’)2之近似莫耳比率進行交聯來測試抗體。使用抗GST抗體(Genentech)塗覆板且使用牛血清白蛋白(BSA)阻斷。在使用含有0.05% Tween-20之磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)利用ELx405TM板洗滌劑(Biotek Instruments；Winooski,VT)洗滌之後，以25ng/孔向板中添加Fcγ受體且在室溫下培育1小時。在洗滌板之後，以多聚體複合物形式添加測試抗體之連續稀釋液且將板在室溫下培育2小時。在洗滌板以去除未結合抗體後，使用山羊抗人類F(ab’)2(Jackson ImmunoResearch實驗室；West Grove,PA)之辣根過氧化物酶(HRP)-偶聯F(ab’)2片段檢測結合Fcγ受體之抗體，隨後添加受質四甲基聯苯胺(TMB)(Kirkegaard & Perry實驗室；Gaithersburg,MD)。端視所測試Fcγ受體，將板在室溫下培育5-20分鐘以使得出現顏色。使用1M H3PO4終止反應且使用微量板讀數儀(SpectraMax®190,Molecular Devices；Sunnyvale,CA)量測450nm下吸光度。藉由將來自多份抗體稀釋液之平均吸光度值針對抗體濃度繪圖來生成劑量-反應結合曲線。在利用4參數方程式使用SoftMax Pro(Molecular Devices)擬合結合曲線之後，測定檢測到Fcγ受體結合之最大反應之50%之抗體的有效濃度值(EC50)。
為選擇誘導細胞死亡之抗體，可相對於對照分析膜完整性之損失，如由(例如)碘化丙錠(PI)、台盼藍(trypan blue)或7AAD攝取所指示。PI攝取分析可在不存在補體及免疫效應細胞下實施。將OX40表 現細胞與單獨培養基或含有(例如)約10μg/ml適當單株抗體之培養基一起培育。將細胞培育一定時間段(例如1或3天)。在每一處理後，洗滌細胞且等分。在一些實施例中，將細胞等分至35mm蓋有濾網之12×75管(1ml/管，3隻管/處理組)以去除細胞團塊。然後使各管接受PI(10μg/ml)。可使用FACSCANTM流式細胞儀及FACSCONVERTTM CellQuest軟體(Becton Dickinson)分析試樣。
用於上文任一活體外分析之細胞包含天然表現OX40或經改造表現OX40之細胞或細胞系。該等細胞包含天然表現OX40之活化T細胞、Treg細胞及活化記憶性T細胞。該等細胞亦包含表現OX40之細胞系及並不正常表現OX40但已經編碼OX40之核酸轉染之細胞系。本文所提供用於上文任一活體外分析之實例性細胞系包含表現人類OX40之轉基因BT474細胞(人類乳癌細胞系)。
應理解，可使用本發明免疫偶聯物代替抗-OX40抗體或與抗-OX40抗體一起來實施上文任一分析。
應理解，可使用抗-OX40抗體及其他治療劑實施上文任一分析。
D.免疫偶聯物
本發明亦提供包括偶聯至一或多種細胞毒性劑之本發明抗-OX40抗體的免疫偶聯物，該等細胞毒性劑係(例如)化學治療劑或藥物、生長抑制劑、毒素(例如蛋白質毒素、細菌、真菌、植物或動物來源之酶活性毒素或其片段)或放射性同位素。
在一實施例中，免疫偶聯物係抗體-藥物偶聯物(ADC)，其中抗體偶聯至一或多種藥物，該等藥物包含但不限於類美坦素(參見美國專利第5,208,020號、第5,416,064號及歐洲專利EP 0 425 235 B1)；奧裡斯他汀(auristatin)，例如單甲基奧裡斯他汀藥物部分DE及DF(MMAE及MMAF)(參見美國專利第5,635,483號及第5,780,588號及第7,498,298號)；多拉司他汀；卡奇黴素或其衍生物(參見美國專利第 5,712,374號、第5,714,586號、第5,739,116號、第5,767,285號、第5,770,701號、第5,770,710號、第5,773,001號及第5,877,296號；Hinman等人，Cancer Res.53：3336-3342(1993)；及Lode等人，Cancer Res.58：2925-2928(1998))；蒽環抗生素，例如道諾黴素或多柔比星(參見Kratz等人，Current Med.Chem.13：477-523(2006)；Jeffrey等人，Bioorganic & Med.Chem.Letters 16：358-362(2006)；Torgov等人，Bioconj.Chem.16：717-721(2005)；Nagy等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97：829-834(2000)；Dubowchik等人，Bioorg.& Med.Chem.Letters 12：1529-1532(2002)；King等人，J.Med.Chem.45：4336-4343(2002)；及美國專利第6,630,579號)；胺甲蝶呤；長春地辛；紫杉烷，例如多西他賽、太平洋紫杉醇、拉羅他塞(larotaxel)、特西他塞(tesetaxel)及歐他紫杉烷(ortataxel)；單端孢黴烯；及CC1065。
在另一實施例中，免疫偶聯物包括與酶活性毒素或其片段偶聯之本文所闡述抗體，該酶活性毒素或其片段包含但不限於白喉A鏈、白喉毒素之非結合活性片段、外毒素A鏈(來自綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa))、蓖麻毒素A鏈、相思豆毒蛋白A鏈、蒴蓮根毒素A鏈、α-八疊球菌、油桐(Aleurites fordii)蛋白質、石竹素蛋白質、美洲商陸(Phytolaca americana)蛋白質(PAPI、PAPII及PAP-S)、苦瓜(momordica charantia)抑制劑、瀉果素、巴豆毒素、皂草(sapaonaria officinalis)抑制劑、白樹毒素、絲裂吉菌素(mitogellin)、侷限麴菌素(restrictocin)、酚黴素(phenomycin)、依諾黴素(enomycin)及單端孢黴烯族毒素(tricothecene)。
在另一實施例中，免疫偶聯物包括偶聯至放射性原子以形成放射性偶聯物之本文所闡述抗體。多種放射性同位素可用於產生放射性偶聯物。實例包含At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、 Bi212、P32、Pb212及Lu之放射性同位素。在偶聯物用於檢測時，其可包括用於閃爍法研究之放射性原子，例如tc99m或I123；或用於核磁共振(NMR)成像(亦稱為磁共振成像，mri)之自旋標記，例如碘-123(再次)、碘-131、銦-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、釓、錳或鐵。
抗體與細胞毒性劑之偶聯物可使用多種雙功能蛋白質偶合劑製得，例如3-(2-吡啶基二硫代)丙酸N-琥珀醯亞胺酯(SPDP)、4-(N-馬來醯亞胺甲基)環己烷-1-甲酸琥珀醯亞胺酯(SMCC)、亞胺基硫雜環戊烷(IT)、亞胺酸酯之雙功能衍生物(例如己二醯亞胺二甲酯HCl)、活性酯(例如辛二酸二琥珀醯亞胺酯)、醛(例如戊二醛)、雙-疊氮基化合物(例如雙(對-疊氮基苯甲醯基)己二胺)、雙-重氮衍生物(例如雙-(對-重氮苯甲醯基)-乙二胺)、二異氰酸酯(例如甲苯2,6-二異氰酸酯)及雙-活性氟化合物(例如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。舉例而言，蓖麻毒素免疫毒素可如Vitetta等人，Science,238：1098(1987)中所闡述來製備。經碳-14標記之1-異硫氰酸根合苄基-3-甲基二伸乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)係用於放射性核苷酸與抗體偶聯之實例性螯合劑。參見WO94/11026。連接體可為促進細胞毒性藥物在細胞中釋放之「可裂解連接體」。舉例而言，可使用酸不穩定性連接體、肽酶敏感性連接體、光不穩定性連接體、二甲基連接體或含有二硫化物之連接體(Chari等人，Cancer Res.52：127-131(1992)；美國專利第5,208,020號)。
本文之免疫偶聯物或ADC明確地涵蓋(但不限於)該等使用以下交聯劑試劑製備之偶聯物：BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、硫代-EMCS、硫代-GMBS、硫代-KMUS、硫代-MBS、硫代-SIAB、硫代-SMCC及硫代-SMPB以及SVSB((4-乙烯基碸)苯甲酸琥珀 醯亞胺酯)，以上試劑市面有售(例如購自Pierce Biotechnology公司，Rockford,IL.,美國)。
E.用於診斷及檢測之方法及組合物
在某些實施例中，本文所提供任一抗-OX40抗體皆可用於檢測生物試樣中OX40之存在。本文所用之術語「檢測」涵蓋定量或定性檢測。在某些實施例中，生物試樣包括細胞或組織，例如腫瘤(例如NSCLC或***腫瘤)之試樣。
在一實施例中，提供用於診斷或檢測方法中之抗-OX40抗體。在另一態樣中，提供檢測生物試樣中OX40之存在之方法。在某些實施例中，該方法包括使生物試樣與本文所闡述抗-OX40抗體在允許抗-OX40抗體與OX40結合之條件下接觸，且檢測在抗-OX40抗體與OX40之間是否形成複合物。該方法可為活體外或活體內方法。在一實施例中，使用抗-OX40抗體來選擇適用於使用抗-OX40抗體之療法之個體，舉例而言，其中OX40係用於選擇患者之生物標記物。
在一些實施例中，用於診斷或檢測方法之抗-OX40抗體係包括至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之HVR之抗人類OX40抗體：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：7之胺基酸序列。在一些實施例中，抗-OX40抗體包括：(a)VH結構域，其包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(i)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列；(ii)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列；及(iii)HVR-H3，其包括選自SEQ ID NO：4之胺基酸序列；及(b)VL結構域，其包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序 列：(i)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列；(ii)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：7之胺基酸序列。在一些實施例中，OX40抗體包括：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包括選自SEQ ID NO：7之胺基酸序列。在一些實施例中，該抗體包括與SEQ ID NO：180之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包括該序列之抗人類OX40激動劑抗體保留結合OX40之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO 180中取代、***及/或缺失總共1至10個胺基酸。在某些實施例中，取代、***或缺失出現於HVR外側之區中(亦即在FR中)。視情況，抗人類OX40激動劑抗體包括SEQ ID NO：180之VH序列，包含該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VH包括一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列。在一些實施例中，抗體包括與SEQ ID NO：179之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包括該序列之抗人類OX40激動劑抗體 保留結合OX40之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO 179中取代、***及/或缺失總共1至10個胺基酸。在某些實施例中，取代、***或缺失出現於HVR外側之區中(亦即在FR中)。視情況，抗人類OX40激動劑抗體包括SEQ ID NO：179之VL序列，包含該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VL包括一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：7之胺基酸序列。
在一些實施例中，用於診斷或檢測方法之抗-OX40抗體係包括至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之HVR之抗人類OX40抗體：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：29之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：30之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：31之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：37之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：39之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：42之胺基酸序列。在一些實施例中，抗-OX40抗體包括：(a)VH結構域，其包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(i)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：29之胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：30之胺基酸序列，及(iii)HVR-H3，其包括選自SEQ ID NO：31之胺基酸序列；及(b)VL結構域，其包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：(i)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：37之胺基酸序列，(ii)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：39之胺基酸序列，及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：42之胺基酸序列。在一些實施例中，抗-OX40抗體包括：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：29之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：30之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：31之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：37之胺基 酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：39之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包括選自SEQ ID NO：42之胺基酸序列。在一些實施例中，抗-OX40抗體包括與SEQ ID NO：182之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包括該序列之抗人類OX40激動劑抗體保留結合OX40之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO 182中取代、***及/或缺失總共1至10個胺基酸。在某些實施例中，取代、***或缺失出現於HVR外側之區中(亦即在FR中)。視情況，抗人類OX40激動劑抗體包括SEQ ID NO：182之VH序列，包含該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VH包括一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：29之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：30之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：31之胺基酸序列。在一些實施例中，抗-OX40抗體包括與SEQ ID NO：181之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包括該序列之抗人類OX40激動劑抗體保留結合OX40之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO 181中取代、***及/或缺失總共1至10個胺基酸。在某些實施例中，取代、***或缺失出現於HVR外側之區中(亦即在FR中)。視情況，抗人類OX40激動劑抗體包括SEQ ID NO：181之VL序列，包含該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VL包括一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：37之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：39之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：42之胺基酸序列。
在一些實施例中，抗-OX40抗體包括SEQ ID NO：180之VH序列。在一些實施例中，抗-OX40抗體包括SEQ ID NO：179之VL序列。在一些實施例中，抗-OX40抗體包括SEQ ID NO：180之VH序列及SEQ ID NO：179之VL序列。在一些實施例中，抗-OX40抗體包括SEQ ID NO：182之VH序列。在一些實施例中，抗-OX40抗體包括SEQ ID NO：181之VL序列。在一些實施例中，抗-OX40抗體包括SEQ ID NO：182之VH序列及SEQ ID NO：181之VL序列。
可使用本發明抗體診斷之實例性病症包含癌症。
在某些實施例中，提供經標記抗-OX40抗體。標記包含但不限於直接檢測之標記或部分(例如螢光標記、發色標記、電子緻密標記、化學發光標記及放射性標記)以及經由(例如)酶反應或分子相互作用間接檢測之部分(例如酶或配體)。實例性標記包含但不限於放射性同位素32P、14C、125I、3H及131I、螢光團(例如稀土螯合物或螢光黃及其衍生物)、若丹明(rhodamine)及其衍生物、丹醯、傘形酮、螢光素酶(例如螢火蟲螢光素酶及細菌螢光素酶)(美國專利第4,737,456號)、螢光素、2,3-二氫酞嗪二酮、辣根過氧化物酶(HRP)、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡萄糖澱粉酶、溶菌酶、糖氧化酶(例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶及葡萄糖-6-磷酸脫氫酶)、雜環氧化酶(例如尿酸酶及黃嘌呤氧化酶，其與諸如HRP、乳過氧化物酶或微過氧化物酶等採用過氧化氫來氧化染料前體之酶偶聯)、生物素/抗生物素蛋白、自旋標記、噬菌體標記、穩定自由基及諸如此類。
在一態樣中，本發明提供(例如)鑑別可能對使用抗人類OX40激動劑抗體進行治療具有反應之癌症患者之診斷方法。
在一些實施例中，提供鑑別可能對使用抗人類OX40激動劑抗體 進行治療具有反應之患者之方法，該等方法包括：(i)測定來自患者之癌症試樣中表現FcR之細胞之存在或不存在或量(例如每一給定試樣大小之數量)，及(ii)若試樣包括表現FcR之細胞(例如表現FcR之細胞之數量較高)，則將患者鑑別為可能具有反應。檢測表現FcR之細胞之方法在業內已眾所周知，包含(例如)藉由IHC。在一些實施例中，FcR係FcγR。在一些實施例中，FcR係活化FcγR。在一些實施例中，癌症係本文所闡述之任一癌症。在一些實施例中，癌症係非小細胞肺癌(NSCLC)、膠質母細胞瘤、神經母細胞瘤、黑素瘤、***癌瘤(例如三陰性乳癌)、胃癌、結腸直腸癌(CRC)或肝細胞癌瘤。在一些實施例中，該方法係活體外方法。在一些實施例中，該等方法進一步包括：(iii)推薦使用抗人類OX40激動劑抗體(例如本文所闡述之任一抗人類OX40激動劑抗體)進行治療。在一些實施例中，該等方法進一步包括：(iv)使用抗人類OX40激動劑抗體治療患者。
在一些實施例中，提供鑑別可能對使用抗人類OX40激動劑抗體進行治療具有反應之患者之方法，該等方法包括：(i)測定來自患者之癌症試樣中人類效應細胞(例如浸潤效應細胞)之存在或不存在或量(例如每一給定試樣大小之數量)，及(ii)若試樣包括效應細胞(例如高之數量效應細胞)，則將患者鑑別為可能具有反應。檢測浸潤人類效應細胞之方法在業內已眾所周知，包含(例如)藉由IHC。在一些實施例中，人類效應細胞係NK細胞、巨噬球、單核球中之一或多者。在一些實施例中，效應細胞表現活化FcγR。在一些實施例中，該方法係活體外方法。在一些實施例中，癌症係本文所闡述之任一癌症。在一些實施例中，癌症係非小細胞肺癌(NSCLC)、膠質母細胞瘤、神經母細胞瘤、黑素瘤、***癌瘤(例如三陰性乳癌)、胃癌、結腸直腸癌(CRC)或肝細胞癌瘤。在一些實施例中，該等方法進一步包括：(iii)推薦使用抗人類OX40激動劑抗體(例如本文所闡述之任一抗人類 OX40激動劑抗體)進行治療。在一些實施例中，該等方法進一步包括：(iv)使用抗人類OX40激動劑抗體治療患者。
提供癌症診斷之方法，其包括：(i)量測來自患者之試樣中之FcR表現細胞(例如FcR之含量或存在或不存在或流行程度(例如表現FcR之細胞之百分比，例如藉由IHC))；(ii)在試樣具有FcR生物標記物表現時，將患者診斷為患有包括FcR生物標記物(例如高FcR生物標記物)之癌症。在一些實施例中，該方法進一步包括(iii)選擇包括以下之療法：(a)抗人類OX40激動劑抗體或(b)推薦包括抗人類OX40激動劑抗體之療法用於患者。在一些實施例中，該方法係活體外方法。
提供癌症診斷之方法，其包括：(i)量測來自患者之試樣中之人類效應細胞(例如人類效應細胞之含量或存在或不存在或流行程度(例如人類效應細胞之百分比))；(ii)在試樣具有人類效應細胞生物標記物時，將患者診斷為患有包括人類效應細胞(例如高人類效應細胞)之癌症。在一些實施例中，該方法進一步包括(iii)選擇包括以下之療法：(a)抗人類OX40激動劑抗體或(b)推薦包括抗人類OX40激動劑抗體之療法用於患者。在一些實施例中，該方法係活體外方法。
提供向癌症患者推薦治療之方法，其包括：(i)量測來自患者之試樣中之FcR表現細胞(例如FcR之含量或存在或不存在或流行程度(例如表現FcR之細胞之百分比))；(ii)在試樣具有FcR表現細胞(在一些實施例中高FcR表現細胞)時，推薦使用抗人類OX40激動劑抗體進行治療。在一些實施例中，該方法進一步包括(iii)選擇包括抗人類OX40激動劑抗體之療法用於患者。在一些實施例中，該方法係活體外方法。
提供向癌症患者推薦治療之方法，其包括：(i)量測來自患者之試樣中之人類效應細胞(例如人類效應細胞之含量或存在或不存在或流行程度(例如人類效應細胞之百分比))；(ii)在試樣具有人類效應細 胞(在一些實施例中高人類效應細胞)時，推薦使用抗人類OX40激動劑抗體進行治療。在一些實施例中，該方法進一步包括(iii)選擇包括抗人類OX40激動劑抗體之療法用於患者。在一些實施例中，該方法係活體外方法。
在本文所提供之任一發明之一些實施例中，在使用抗人類OX40激動劑抗體治療之前獲得試樣。在一些實施例中，在使用癌症醫藥治療之前獲得試樣。在一些實施例中，在癌症已轉移之後獲得試樣。在一些實施例中，試樣經福爾馬林固定及石蠟包埋(FFPE)。在一些實施例中，試樣係活檢組織(例如核心活檢組織)、手術樣品(例如來自手術切除之樣品)或細針吸出物。
F.醫藥調配物
本文所闡述抗-OX40抗體之醫藥調配物係藉由混合具有期望純度之該抗體與一或多種醫藥上可接受之可選載劑(Remington's Pharmaceutical Sciences，第16版，Osol,A.編輯(1980))以凍乾之調配物或水溶液形式製得。醫藥上可接受之載劑通常在所用劑量及濃度下對接受者無毒，且包含但不限於：緩衝劑，例如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包含抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(例如十八烷基二甲基苄基氯化銨；氯化六甲雙銨；苯紮氯銨、苄索氯銨；苯酚、丁醇或苯甲醇；對羥基苯甲酸烷基酯，例如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間-甲酚)；低分子量(小於約10個殘基)多肽；蛋白質，例如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水聚合物，例如聚乙烯基吡咯啶酮；胺基酸，例如甘胺酸、麩醯胺酸、天門冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單糖、二糖及其他碳水化合物，包含葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，例如EDTA；糖，例如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成鹽抗衡離子，例如鈉；金屬錯合物(例如Zn-蛋白質錯合物)；及/或非離子表面 活性劑，例如聚乙二醇(PEG)。本文之實例性醫藥上可接受之載劑進一步包含間質性藥物分散劑，例如可溶性中性活性透明質酸酶糖蛋白(sHASEGP)，例如人類可溶性PH-20透明質酸酶糖蛋白，例如rHuPH20(HYLENEX®，Baxter International公司)。某些實例性sHASEGP及使用方法(包含rHuPH20)闡述於美國專利公開案第2005/0260186號及第2006/0104968號中。在一態樣中，將sHASEGP與一或多種額外醣胺多醣酶(例如軟骨素酶)進行組合。
在一些實施例中，「組胺酸緩衝劑」係包括組胺酸離子之緩衝劑。組胺酸緩衝劑之實例包含組胺酸氯化物、組胺酸乙酸鹽、組胺酸磷酸鹽、組胺酸硫酸鹽。發現在本文實例中鑑別之較佳組胺酸緩衝劑係組胺酸乙酸鹽。在較佳實施例中，藉由使用乙酸(液體)滴定L-組胺酸(游離鹼，固體)來製備組胺酸乙酸鹽緩衝劑。在一些實施例中，組胺酸緩衝劑或組胺酸乙酸鹽緩衝劑在pH 5.0至6.0下，在一些實施例中在pH 5.3至5.8下。
在一些實施例中，本文之「糖」包括一般組成(CH2O)n及其衍生物，包含單糖、二糖、三糖、多糖、糖醇、還原糖、非還原糖等。本文糖之實例包含葡萄糖、蔗糖、海藻糖、乳糖、果糖、麥芽糖、右旋糖酐、丙三醇、右旋糖酐、赤蘚醇、甘油、阿糖醇(arabitol)、木糖醇、山梨醇、甘露醇、蜜二糖、松三糖、棉子糖、甘露三糖、水蘇糖、麥芽糖、乳果糖、麥芽酮糖、葡糖醇、麥芽糖醇、拉克替醇(lactitol)、異麥芽酮糖等。在一些實施例中，糖係非還原二糖，例如海藻糖或蔗糖。
在本文之一些實施例中，「表面活性劑」係指表面活化劑、較佳地非離子型表面活性劑。本文之表面活性劑之實例包含聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20及聚山梨醇酯80)；泊洛沙姆(poloxamer)(例如泊洛沙姆188)；曲拉通(Triton)；十二烷基硫酸鈉(SDS)；月桂基硫酸 鈉；辛基糖苷鈉；月桂基-、肉豆蔻基-、亞麻油基-或硬脂醯基-磺基甜菜鹼；月桂基-、肉豆蔻基-、亞麻油基-或硬脂醯基-肌胺酸；亞麻油基-、肉豆蔻基-或鯨蠟基-甜菜鹼；月桂醯胺基丙基-、椰子醯胺基丙基-、亞麻油醯胺基丙基-、肉豆蔻醯胺基丙基-、棕櫚油醯胺基丙基-或異硬脂醯胺基丙基-甜菜鹼(例如月桂醯胺基丙基)；肉豆蔻醯胺基丙基-、棕櫚油醯胺基丙基-或異硬脂醯胺基丙基-二甲胺；甲基椰油基牛黃酸鈉或甲基油基牛磺酸二鈉；及MONAQUATTM系列(Mona Industries公司，Paterson,N.J.)、聚乙二醇、聚丙二醇及乙二醇與丙二醇之共聚物(例如Pluronics,PF68等)。在一些實施例中，表面活性劑係聚山梨醇酯20。在一些實施例中，表面活性劑係聚山梨醇酯80。
實例性凍乾抗體調配物闡述於美國專利第6,267,958號中。水性抗體調配物包含彼等闡述於美國專利第6,171,586號及WO2006/044908中者，後一些調配物包含組胺酸-乙酸鹽緩衝劑。
本文之調配物亦可視需要含有一種以上用於所治療特定適應症之活性成份，較佳為彼等具有相互間不會產生不利影響之補充活性者。舉例而言，可期望另外提供其他醫藥(其實例提供於本文中)。該等活性成份適於以對欲達成目的有效之量以組合形式存在。
活性成份亦可分別裝入藉由(例如)凝聚技術或介面聚合製備之微膠囊(例如羥甲基纖維素或明膠微膠囊及聚-(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊)中、膠質藥物遞送系統(例如脂質體、白蛋白微球體、微乳液、奈米顆粒及奈米膠囊)或粗滴乳液中。該等技術揭示於Remington's Pharmaceutical Sciences，第16版，Osol,A.編輯(1980)中。
可製備持續釋放製劑。緩釋製劑之適宜實例包含含有抗體之固態疏水性聚合物之半滲透性基質，該等基質呈成形物件形式，例如薄膜或微膠囊。
擬用於活體內投與之調配物通常為無菌的。無菌性可藉由(例如) 使用無菌過濾膜進行過濾來容易地達成。
在一些實施例中，本文提供包括以下之醫藥調配物：(a)本文所闡述之任一抗人類OX40激動劑抗體；(b)pH為5.0-6.0之組胺酸緩衝劑。
在一些實施例中，本文提供包括以下之醫藥調配物：(a)本文所闡述之任一抗人類OX40激動劑抗體；(b)pH為5.0-6.0之組胺酸緩衝劑；(c)糖；及(d)表面活性劑。
在調配物中任一者之一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體係以介於約10mg/mL與約100mg/mL(例如約15mg/mL、18mg/mL、20mg/mL、60mg/mL及75mg/mL)之間之濃度存在。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體係以約20mg/mL之濃度存在。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體係以約50mg/mL之濃度存在。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體係以約60mg/mL之濃度存在。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體係以約70mg/mL之濃度存在。
在調配物中任一者之一些實施例中，糖係以約75mM至約360mM(例如約100mM、約120mM、約240mM、約320mM至約360mM)之濃度存在。在一些實施例中，糖係以約120mM之濃度存在。在一些實施例中，糖係以約240mM之濃度存在。在一些實施例中，糖係以約320mM之濃度存在。在一些實施例中，糖係二糖。在一些實施例中，二糖係海藻糖。在一些實施例中，二糖係蔗糖。
在調配物中任一者之一些實施例中，組胺酸緩衝劑之濃度為約1mM至約50mM(例如約1mM至約25mM)。在一些實施例中，組胺酸緩衝劑之濃度為約10mM。在一些實施例中，組胺酸緩衝劑之濃度為約20mM。在一些實施例中，組胺酸緩衝劑之濃度為約30mM。在一些實施例中，組胺酸緩衝劑係組胺酸乙酸鹽。
在調配物中之任一者之一些實施例中，表面活性劑係聚山梨醇 酯(例如聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯40)、泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188)、曲拉通、十二烷基硫酸鈉(SDS)、月桂基硫酸鈉或辛基糖苷鈉。
在調配物中之任一者之一些實施例中，表面活性劑係聚山梨醇酯。在一些實施例中，聚山梨醇酯係以約0.005%至約0.1%之濃度存在。在一些實施例中，聚山梨醇酯係以約0.005%之濃度存在。在一些實施例中，聚山梨醇酯係以約0.02%之濃度存在。在一些實施例中，聚山梨醇酯係以約0.04%之濃度存在。在一些實施例中，聚山梨醇酯係以約0.06%之濃度存在。在一些實施例中，聚山梨醇酯係聚山梨醇酯20。在一些實施例中，聚山梨醇酯係聚山梨醇酯80。
在調配物中任一者之一些實施例中，調配物經稀釋劑(例如0.9% NaCl)稀釋。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體係以約1mg/mL之濃度存在。
特定而言，本文提供包括以下之醫藥調配物：(a)本文所闡述之任一抗人類OX40激動劑抗體；(b)聚山梨醇酯，其中聚山梨醇酯濃度約為0.005%至約0.1%；及(c)組胺酸緩衝劑(例如pH介於5.0與6.0之間之組胺酸緩衝劑)。
在一些實施例中，醫藥調配物包括：(a)本文所闡述之任一抗人類OX40激動劑抗體(例如濃度介於約10mg/mL與約100mg/mL之間)；(b)聚山梨醇酯，其中聚山梨醇酯濃度為約0.02%至約0.06%；(c)組胺酸緩衝劑(例如pH為5.0至6.0之組胺酸緩衝劑)；及糖，其中糖濃度為約120mM至約320mM。在一些實施例中，糖係蔗糖。
在一些實施例中，醫藥調配物包括：(a)本文所闡述之任一抗人類OX40激動劑抗體，其濃度介於約10mg/mL與約100mg/mL之間；(b)聚山梨醇酯，其中聚山梨醇酯濃度為約0.02%至約0.06%，其中聚山梨醇酯係聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯40；(c)組胺酸乙酸鹽緩衝 劑，其pH為5.0至6.0；及糖(例如蔗糖)，其濃度為約120mM至約320mM。
在一些實施例中，醫藥調配物包括：(a)本文所闡述之任一抗人類OX40激動劑抗體；(b)聚山梨醇酯20，其中聚山梨醇酯濃度為約0.02%至約0.06%；(c)組胺酸乙酸鹽緩衝劑(例如pH為5.0至6.0之組胺酸乙酸鹽緩衝劑)；及(d)蔗糖，其中蔗糖濃度約為120mM至約320mM。
在一些實施例中，醫藥調配物包括：(a)本文所闡述之任一抗人類OX40激動劑抗體；(b)聚山梨醇酯40，其中聚山梨醇酯濃度為約0.02%至約0.06%；(c)組胺酸乙酸鹽緩衝劑(例如pH介於5.0與6.0之間之組胺酸乙酸鹽緩衝劑)；及蔗糖，其中蔗糖濃度約為120mM至約320mM。
在一些實施例中，醫藥調配物包括：(a)本文所闡述之任一抗人類OX40激動劑抗體；(b)聚山梨醇酯20，其中聚山梨醇酯濃度約為0.02%；(c)組胺酸乙酸鹽緩衝劑，其pH為6.0；及(d)蔗糖，其中蔗糖濃度約為320mM。
在一些實施例中，醫藥調配物包括：(a)本文所闡述之任一抗人類OX40激動劑抗體；(b)聚山梨醇酯20，其中聚山梨醇酯濃度約為0.02%；(c)組胺酸乙酸鹽緩衝劑，其pH為5.5；及(d)蔗糖，其中蔗糖濃度約為240mM。
在一些實施例中，醫藥調配物包括：(a)本文所闡述之任一抗人類OX40激動劑抗體；(b)聚山梨醇酯20，其中聚山梨醇酯濃度約為0.04%；(c)組胺酸乙酸鹽緩衝劑，其pH為6.0；及(d)蔗糖，其中蔗糖濃度約為120mM。
在一些實施例中，醫藥調配物包括：(a)本文所闡述之任一抗人類OX40激動劑抗體；(b)聚山梨醇酯40，其中聚山梨醇酯濃度約為 0.04%；(c)組胺酸乙酸鹽緩衝劑，其pH為5.0；及(d)蔗糖，其中蔗糖濃度約為240mM。
在一些實施例中，醫藥調配物包括：(a)本文所闡述之任一抗人類OX40激動劑抗體；(b)聚山梨醇酯40，其中聚山梨醇酯濃度約為0.04%；(c)組胺酸乙酸鹽緩衝劑，其pH為6.0；及(d)蔗糖，其中蔗糖濃度約為120mM。
在一些實施例中，醫藥調配物係液體醫藥調配物。在一些實施例中，醫藥調配物係穩定醫藥調配物。在一些實施例中，醫藥組合物係穩定液體醫藥組合物。
在本文所闡述醫藥調配物中任一者之一些實施例中，醫藥調配物之抗人類OX40激動劑抗體係以介於約10mg/mL與約100mg/mL之間之濃度存在。在一些實施例中，人類OX40激動劑抗體之濃度約為以下任一範圍：10mg/mL至50mg/mL、10mg/mL至75mg/mL、25mg/mL至75mg/mL、50mg/mL至100mg/mL、50mg/mL至75mg/mL及/或75mg/mL至100mg/mL。在一些實施例中，人類OX40激動劑抗體之濃度大於大約20mg/mL、30mg/mL、40mg/mL、50mg/mL、60mg/mL、70mg/mL或100mg/mL中之任一者。
醫藥調配物較佳包括聚山梨醇酯。通常以減少聚集體形成(例如在振盪或運輸時發生者)之量包含聚山梨醇酯。聚山梨醇酯之實例包含但不限於聚山梨醇酯20(聚氧乙烯(20)去水山梨醇單月桂酸酯)、聚山梨醇酯40(聚氧乙烯(20)去水山梨醇單棕櫚酸酯)、聚山梨醇酯60(聚氧乙烯(20)去水山梨醇單硬脂酸酯)及/或聚山梨醇酯80(聚氧乙烯(20)去水山梨醇單油酸酯)。在一些實施例中，聚山梨醇酯係聚山梨醇酯20(聚氧乙烯(20)去水山梨醇單月桂酸酯)。在本文所闡述醫藥調配物中任一者之一些實施例中，聚山梨醇酯濃度足以在長期儲存後及/或在投與期間(例如在IV袋中稀釋後)使聚集最小化及/或維持穩定性。 在一些實施例中，聚山梨醇酯濃度為約0.005% w/v、約0.02% w/v、約0.04% w/v及小於約0.1% w/v。在一些實施例中，聚山梨醇酯濃度大於0.01% w/v且小於約0.1% w/v。在一些實施例中，聚山梨醇酯濃度約為0.005% w/v、約0.02% w/v、0.03% w/v、0.04% w/v或0.05% w/v中之任一者。在一些實施例中，聚山梨醇酯係以約0.04% w/v之濃度存在。在一些實施例中，聚山梨醇酯係以約0.02% w/v之濃度存在。
醫藥調配物較佳包括糖。糖包含單糖、二糖、三糖、多糖、糖醇、還原糖、非還原糖等。糖之其他實例包含但不限於葡萄糖、蔗糖、海藻糖、乳糖、果糖、麥芽糖、右旋糖酐、丙三醇、右旋糖酐、赤蘚醇、甘油、阿糖醇、木糖醇、山梨醇、甘露醇、蜜二糖、松三糖、棉子糖、甘露三糖、水蘇糖、麥芽糖、乳果糖、麥芽酮糖、葡糖醇、麥芽糖醇、拉克替醇、異麥芽酮糖等。在一些實施例中，糖係二糖。在一些實施例中，糖係非還原二糖。在一些實施例中，糖係海藻糖。
通常以減少聚集體形成之量包含糖。在本文所闡述醫藥調配物中任一者之一些實施例中，糖係以約以下任一範圍之濃度存在：50mM至250mM、75mM至200mM、75mM至150mM、100mM至150mM或110mM至130mM或100mM至320mM或240mM至320mM或240mM至400mM。在一些實施例中，糖係以大於大約50mM、75mM、100mM、110mM或115mM中之任一者之濃度存在。在一些實施例中，糖係以約100mM、110mM、120mM、130mM或140mM中之任一者之濃度存在。在一些實施例中，糖係以約120mM之濃度存在。在調配物中任一者之一些實施例中，糖係以約75mM至約360mM(例如約100mM、約120mM、約240mM、約320mM至約360mM)之濃度存在。在一些實施例中，糖係以約240mM之濃度存在。在一些實 施例中，糖係以約320mM之濃度存在。
醫藥調配物較佳包括組胺酸緩衝劑。組胺酸緩衝劑之實例包含但不限於組胺酸氯化物、組胺酸琥珀酸鹽、組胺酸乙酸鹽、組胺酸磷酸鹽、組胺酸硫酸鹽。在一些實施例中，組胺酸緩衝劑係組胺酸乙酸鹽。在本文所闡述醫藥調配物中任一者之一些實施例中，組胺酸緩衝劑濃度之範圍約為以下中之任一者：1mM至50mM、1mM至35mM、1mM至25mM、1mM至20mM、7.5mM至12.5mM或5mM至15mM、20mM至30mM、25mM至35mM。在一些實施例中，組胺酸緩衝劑濃度約為5mM、7.5mM、10mM、12.5mM、15mM、20mM、25mM、30mM、35mM或40mM中之任一者。在一些實施例中，組胺酸緩衝劑濃度約為10mM。在一些實施例中，組胺酸緩衝劑濃度約為20mM。在一些實施例中，組胺酸緩衝劑濃度約為30mM。在一些實施例中，組胺酸緩衝劑濃度約為40mM。在本文所闡述醫藥調配物中任一者之一些實施例中，組胺酸緩衝劑之pH介於pH 5.0與6.0之間，例如約為pH 5.0、pH 5.1、pH 5.2、pH 5.3、pH 5.4、pH 5.5、pH 5.6、pH 5.7、pH 5.8、pH 5.9或pH 6.0中之任一者。在一些實施例中，pH介於pH 4.9至pH 6.3之間。
本文醫藥調配物亦可視需要含有一種以上用於所治療特定適應症之活性成份，較佳為彼等具有相互間不會產生不利影響之互補活性者。此等分子適於以對預定目的有效之量以組合形式存在。
另外，本文提供小瓶及將包括本文所闡述醫藥調配物之小瓶歸檔之方法。在一些實施例中，在具有可藉由注射器刺穿之塞子之小瓶內提供醫藥調配物，其較佳呈水性形式。期望將小瓶在約2-8℃以及最高30℃下儲存24小時直至將其投與有需要之個體為止。小瓶可為(例如)15cc小瓶(例如對於200mg劑量而言)。
用於投與之醫藥調配物較佳係液體調配物(未凍乾)且未經受預先 凍乾。儘管醫藥調配物可經凍乾，但較佳地其未經凍乾。在任一醫藥調配物之一些實施例中，醫藥調配物係凍乾醫藥調配物。在一些實施例中，醫藥調配物係液體調配物。在一些實施例中，醫藥調配物不含等張化(tonicifying)量之諸如氯化鈉等鹽。在任一醫藥調配物之一些實施例中，醫藥調配物經稀釋。
G.治療方法及組合物
本文所提供任一抗人類OX40抗體可用於治療方法。
在一態樣中，提供用作醫藥之抗人類OX40激動劑抗體。在其他態樣中，提供用於治療癌症之抗人類OX40激動劑抗體。在某些實施例中，提供用於治療方法中之抗人類OX40激動劑抗體。在某些實施例中，本發明提供用於治療患有癌症之個體之方法之抗人類OX40激動劑抗體，該方法包括向個體投與有效量之抗人類激動劑OX40抗體。在一該實施例中，該方法進一步包括向個體投與有效量之至少一種其他治療劑，例如如下文所述。
在一態樣中，提供用於增強患有癌症之個體中之免疫功能(例如藉由上調細胞調介之免疫反應)之抗人類OX40激動劑抗體，其包括向個體投與有效量之抗人類激動劑OX40抗體。在一態樣中，提供用於增強患有癌症之個體中之T細胞功能之抗人類OX40激動劑抗體，其包括向個體投與有效量之抗人類激動劑OX40抗體。在一態樣中，提供用於消耗人類OX40表現細胞(例如OX40表現T細胞，例如OX40表現Treg)之抗人類OX40激動劑抗體，其包括向個體投與有效量之抗人類激動劑OX40抗體。在一些實施例中，消耗係藉由ADCC達成。在一些實施例中，消耗係藉由吞噬作用達成。提供用於治療具有腫瘤免疫性之個體之抗人類OX40激動劑抗體。
在其他態樣中，提供用於治療感染(例如細菌或病毒或其他病原體)之抗人類OX40激動劑抗體。在某些實施例中，本發明提供用於治 療患有感染之個體之方法之抗人類OX40激動劑抗體，該方法包括向個體投與有效量之抗人類激動劑OX40抗體。在一些實施例中，該感染係病毒及/或細菌之感染。在一些實施例中，該感染係病原體之感染。
在另一態樣中，本發明提供抗-OX40抗體在製造或製備醫藥中之用途。在一實施例中，該醫藥係用於治療癌症。在另一實施例中，該藥劑用於治療癌症之方法中，其包括向患有癌症之個體投與有效量之醫藥。在一該實施例中，該方法進一步包括向個體投與有效量之至少一種其他治療劑，例如如下文所述。
在一態樣中，該醫藥係用於增強患有癌症之個體中之免疫功能(例如藉由上調細胞調介之免疫反應)，其包括向個體投與有效量之醫藥。在一態樣中，該醫藥係用於增強患有癌症之個體中之T細胞功能，其包括向個體投與有效量之醫藥。在一些實施例中，T細胞功能障礙病症係癌症。在一態樣中，該醫藥係用於消耗人類OX40表現細胞(例如表現高OX40之細胞，例如OX40表現T細胞)，其包括向個體投與有效量之醫藥。在一些實施例中，消耗係藉由ADCC達成。在一些實施例中，消耗係藉由吞噬作用達成。在一態樣中，該醫藥係用於治療具有腫瘤免疫性之個體。
在其他態樣中，提供用於治療感染(例如細菌或病毒或其他病原體)之醫藥。在某些實施例中，該醫藥係用於治療患有感染之個體之方法，其包括向個體投與有效量之醫藥。在一些實施例中，該感染係病毒及/或細菌之感染。在一些實施例中，該感染係病原體之感染。
在另一態樣中，本發明提供治療癌症之方法。在一實施例中，該方法包括向患有該癌症之個體投與有效量之抗-OX40抗體。在一該實施例中，該方法進一步包括向個體投與有效量之至少一種其他治療劑，如下文所述。上文任一實施例之「個體」可為人類。
在一態樣中，提供增強患有癌症之個體中之免疫功能(例如藉由上調細胞調介之免疫反應)之方法，其包括向個體投與有效量之抗人類激動劑OX40抗體。在一態樣中，提供增強患有癌症之個體中之T細胞功能之方法，其包括向個體投與有效量之抗人類激動劑OX40抗體。在一態樣中，提供消耗人類OX40表現細胞(例如表現高含量OX40之細胞，例如OX40表現T細胞)之方法，其包括向個體投與有效量之抗人類激動劑OX40抗體。在一些實施例中，消耗係藉由ADCC達成。在一些實施例中，消耗係藉由吞噬作用達成。提供用於治療具有腫瘤免疫性之個體之抗人類OX40激動劑抗體。
在一些實施例中，癌症之實例進一步包含但不限於B細胞淋巴瘤(包含低級/濾泡性非何傑金氏淋巴瘤(NHL)；小淋巴細胞性(SL)NHL；中級/濾泡性NHL；中級彌漫性NHL；高級免疫母細胞性NHL；高級淋巴母細胞性NHL；高級小無裂細胞NHL；巨瘤症NHL；外套細胞淋巴瘤；AIDS相關淋巴瘤；及沃爾登斯特倫巨球蛋白血症(Waldenstrom's Macroglobulinemia))；慢性淋巴細胞性白血病(CLL)；急性淋巴母細胞性白血病(ALL)；毛細胞白血病；慢性骨髓母細胞白血病；及移植後淋巴組織增殖性病症(PTLD)以及與斑痣性錯構瘤病有關之異常血管增殖、水腫(例如與腦腫瘤有關者)、B細胞增殖性病症及麥格氏症候群。更具體實例包含但不限於復發性或頑固性NHL、前線低級NHL、III/IV階段NHL、化學療法抗性NHL、前體B淋巴母細胞性白血病及/或淋巴瘤、小淋巴細胞性淋巴瘤、B細胞慢性淋巴細胞性白血病及/或幼淋巴細胞性白血病及/或小淋巴細胞性淋巴瘤、B細胞幼淋巴細胞性淋巴瘤、免疫細胞瘤及/或淋巴質漿細胞淋巴瘤、淋巴質漿細胞淋巴瘤、邊緣區B細胞淋巴瘤、脾臟邊緣區淋巴瘤、結節外邊緣區-MALT淋巴瘤、結節邊緣區淋巴瘤、毛細胞白血病、漿細胞瘤及/或漿細胞骨髓瘤、低級/濾泡性淋巴瘤、中級/濾泡性NHL、外套 細胞淋巴瘤、濾泡中心淋巴瘤(濾泡性)、中級彌漫性NHL、彌漫性大B細胞淋巴瘤、侵襲性NHL(包含侵襲性前線NHL及侵襲性復發性NHL)、在自體幹細胞移植之後復發或對其頑固之NHL、原發性縱隔大B細胞淋巴瘤、原發性滲出性淋巴瘤、高級免疫母細胞性NHL、高級淋巴母細胞性NHL、高級小無裂細胞NHL、巨瘤症NHL、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt'slymphoma)、前體(周邊)大顆粒淋巴細胞性白血病、蕈樣真菌病及/或塞紮裡症候群(Sezary syndrome)、皮膚(皮膚性)淋巴瘤、間變型大細胞淋巴瘤、血管中心性淋巴瘤。
在一些實施例中，癌症之實例進一步包含但不限於B細胞增殖性病症，其進一步包含但不限於淋巴瘤(例如B細胞非何傑金氏淋巴瘤(NHL))及淋巴細胞性白血病。該等淋巴瘤及淋巴細胞性白血病包含(例如)a)濾泡性淋巴瘤；b)小無裂細胞淋巴瘤/伯基特氏淋巴瘤(包含地方性伯基特淋氏巴瘤、偶發性伯基特淋氏巴瘤及非伯基特淋氏巴瘤)；c)邊緣區淋巴瘤(包含結節外邊緣區B細胞淋巴瘤(黏膜相關淋巴樣組織淋巴瘤，MALT)、結節邊緣區B細胞淋巴瘤及脾臟邊緣區淋巴瘤)；d)外套細胞淋巴瘤(MCL)；e)大細胞淋巴瘤(包含B細胞彌漫性大細胞淋巴瘤(DLCL)、彌漫性混合細胞淋巴瘤、免疫母細胞性淋巴瘤、原發性縱隔B細胞淋巴瘤、血管中心性淋巴瘤-肺B細胞淋巴瘤)；f)毛細胞白血病；g)淋巴細胞性淋巴瘤、沃爾登斯特倫巨球蛋白血症；h)急性淋巴細胞性白血病(ALL)、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)/小淋巴細胞性淋巴瘤(SLL)、B細胞早幼淋巴細胞性白血病；i)漿細胞腫瘤、漿細胞性骨髓瘤、多發性骨髓瘤、漿細胞瘤；及/或j)何傑金氏病(Hodgkin’s disease)。
在任一方法之一些實施例中，癌症係B細胞增殖性病症。在一些實施例中，B細胞增殖性病症係淋巴瘤、非何傑金氏淋巴瘤(NHL)、侵襲性NHL、復發性侵襲性NHL、復發性惰性NHL、頑固性NHL、頑 固性惰性NHL、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、小淋巴細胞性淋巴瘤、白血病、毛細胞白血病(HCL)、急性淋巴細胞性白血病(ALL)或外套細胞淋巴瘤。在一些實施例中，B細胞增殖性病症係NHL，例如惰性NHL及/或侵襲性NHL。在一些實施例中，B細胞增殖性病症係惰性濾泡性淋巴瘤或彌漫性大B細胞淋巴瘤。
在另一態樣中，本發明提供醫藥調配物，其包括本文所提供之任一抗-OX40抗體以(例如)用於上述治療方法中之任一者中。在一實施例中，醫藥調配物包括本文所提供之任一抗-OX40抗體及醫藥上可接受之載劑。在另一實施例中，醫藥調配物包括本文所提供之任一抗-OX40抗體及至少一種其他治療劑，例如如下文所述。
在本發明任一方法之一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體藉由抑制Treg功能(例如抑制Treg之阻抑功能)、殺滅OX40表現細胞(例如表現高含量OX40之細胞)、增加效應T細胞功能及/或增加記憶性T細胞功能來抑制腫瘤免疫性。在本發明任一方法之一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體藉由抑制Treg功能(例如抑制Treg之阻抑功能)、殺滅OX40表現細胞(例如表現高含量OX40之細胞)、增加效應T細胞功能及/或增加記憶性T細胞功能來治療癌症。在本發明任一方法之一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體藉由抑制Treg功能(例如抑制Treg之阻抑功能)、殺滅OX40表現細胞(例如表現高含量OX40之細胞)、增加效應T細胞功能及/或增加記憶性T細胞功能來增強免疫功能。在本發明任一方法之一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體藉由抑制Treg功能(例如抑制Treg之阻抑功能)、殺滅OX40表現細胞(例如表現高含量OX40之細胞)、增加效應T細胞功能及/或增加記憶性T細胞功能來增強T細胞功能。
在任一方法之一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體係消耗性抗人類激動劑抗體。在一些實施例中，使用抗人類OX40激動劑抗體 進行治療會引起細胞消耗(例如消耗OX40表現細胞，例如消耗表現高含量OX40之細胞)。在一些實施例中，消耗係藉由ADCC達成。在一些實施例中，消耗係藉由吞噬作用達成。
在任一方法之一些實施例中，相對於在投與OX40激動劑抗體之前之Treg功能，抗人類OX40激動劑抗體(例如)藉由抑制效應及/或記憶性T細胞功能(在一些實施例中效應T細胞及/或記憶性T細胞增殖及/或細胞介素分泌)之Treg阻抑來抑制Treg功能。在任一方法之一些實施例中，相對於在投與OX40激動劑抗體之前之效應T細胞增殖，抗人類OX40激動劑抗體增加效應T細胞增殖。在任一方法之一些實施例中，相對於在投與OX40激動劑抗體之前之記憶性T細胞增殖，抗人類OX40激動劑抗體增加記憶性T細胞增殖。在任一方法之一些實施例中，相對於在投與OX40激動劑抗體之前之效應T細胞細胞介素產生，抗人類OX40激動劑抗體增加效應T細胞細胞介素產生(例如γ干擾素產生)。在任一方法之一些實施例中，相對於在投與OX40激動劑抗體之前之記憶性T細胞細胞介素產生，抗人類OX40激動劑抗體增加記憶性T細胞細胞介素產生(例如γ干擾素產生)。在任一方法之一些實施例中，相對於在投與OX40激動劑抗體之前之CD4+效應T細胞增殖及/或CD8+效應T細胞增殖，抗人類OX40激動劑抗體增加CD4+效應T細胞增殖及/或CD8+效應T細胞增殖。在任一方法之一些實施例中，相對於在投與OX40激動劑抗體之前之記憶性T細胞增殖，抗人類OX40激動劑抗體增加記憶性T細胞增殖(例如CD4+記憶性T細胞增殖)。在一些實施例中，相對於在投與抗人類OX40激動劑抗體之前之增殖、細胞介素分泌及/或細胞溶解活性，個體中之CD4+效應T細胞具有增強之增殖、細胞介素分泌及/或細胞溶解活性。
在本發明任一方法之一些實施例中，相對於在投與抗人類OX40激動劑抗體之前，CD4+效應T細胞之數量有所升高。在一些實施例 中，相對於在投與抗人類OX40激動劑抗體之前，CD4+效應T細胞細胞介素分泌有所升高。在任一方法之一些實施例中，相對於在投與抗人類OX40激動劑抗體之前，個體中之CD8+效應T細胞具有增強之增殖、細胞介素分泌及/或細胞溶解活性。在一些實施例中，相對於在投與抗人類OX40激動劑抗體之前，CD8+效應T細胞之數量有所升高。在一些實施例中，相對於在投與抗人類OX40激動劑抗體之前，CD8+效應T細胞細胞介素分泌有所升高。
在本發明任一方法之一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體結合人類效應細胞，例如結合由人類效應細胞表現之FcγR。在一些實施例中，人類效應細胞實施ADCC效應物功能。在一些實施例中，人類效應細胞實施吞噬作用效應物功能。
在本發明任一方法之一些實施例中，相對於包括天然序列IgG1 Fc部分之抗人類OX40激動劑抗體，包括含有消除與人類效應細胞之結合之突變(例如DANA或N297G突變)之變體IgG1 Fc多肽之抗人類OX40激動劑抗體具有減弱的活性(例如CD4+效應T細胞功能，例如增殖)。在一些實施例中，包括含有消除與人類效應細胞之結合之突變(例如DANA或N297G突變)之變體IgG1 Fc多肽之抗人類OX40激動劑抗體並不擁有實質性活性(例如CD4+效應T細胞功能，例如增殖)。
在本發明任一方法之一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體功能需要抗體交聯。在一些實施例中，功能係刺激CD4+效應T細胞增殖。在一些實施例中，藉由提供黏附於固體表面(例如細胞培養板)上之抗人類OX40激動劑抗體來測定抗體交聯。在一些實施例中，藉由在抗體IgG1 Fc部分中引入突變(例如DANA或N297S突變)且測試突變體抗體之功能來測定抗體交聯。
在任一方法之一些實施例中，相對於在投與抗人類OX40激動劑抗體之前，個體中之記憶性T細胞具有增強之增殖及/或細胞介素分 泌。在一些實施例中，相對於在投與抗人類OX40激動劑抗體之前，記憶性T細胞之數量有所升高。在一些實施例中，相對於在投與抗人類OX40激動劑抗體之前，記憶性T細胞細胞介素分泌(程度)有所升高。在任一方法之一些實施例中，相對於在投與抗人類OX40激動劑抗體之前，個體中之Treg具有降低之效應T細胞功能(例如增殖及/或細胞介素分泌)之抑制。在一些實施例中，相對於在投與抗人類OX40激動劑抗體之前，效應T細胞之數量有所升高。在一些實施例中，相對於在投與抗人類OX40激動劑抗體之前，效應T細胞細胞介素分泌(程度)有所升高。
在本發明任一方法之一些實施例中，相對於在投與抗人類OX40激動劑抗體之前，瘤內(浸潤)CD4+效應T細胞之數量(例如CD4+效應T細胞之總數量，或例如CD45+細胞中CD4+細胞之百分比)有所升高。在本發明任一方法之一些實施例中，相對於在投與抗人類OX40激動劑抗體之前，表現γ干擾素之瘤內(浸潤)CD4+效應T細胞之數量(例如表現γ干擾素之總CD4+細胞，或例如總CD4+細胞中表現γ干擾素之CD4+細胞之百分比)有所升高。
在本發明任一方法之一些實施例中，相對於在投與抗人類OX40激動劑抗體之前，瘤內(浸潤)CD8+效應T細胞之數量(例如CD8+效應T細胞之總數量，或例如CD45+細胞中CD8+之百分比)有所升高。在本發明任一方法之一些實施例中，相對於在投與抗人類OX40激動劑抗體之前，表現γ干擾素之瘤內(浸潤)CD8+效應T細胞之數量(例如總CD8+細胞中表現γ干擾素之CD8+細胞之百分比)有所增加。
在本發明任一方法之一些實施例中，相對於在投與抗人類OX40激動劑抗體之前，瘤內(浸潤)Treg之數量(例如Treg之總數量或例如CD4+細胞中Fox3p+細胞之百分比)有所減小。
在本發明任一方法之一些實施例中，將抗人類OX40激動劑抗體 之投與與腫瘤抗原之投與進行組合。在一些實施例中，腫瘤抗原包括蛋白質。在一些實施例中，腫瘤抗原包括核酸。在一些實施例中，腫瘤抗原係腫瘤細胞。
在本發明任一方法之一些實施例中，癌症顯示人類效應細胞(例如由人類效應細胞浸潤)。檢測人類效應細胞之方法在業內已眾所周知，包含(例如)藉由IHC。在一些實施例中，癌症顯示高含量之人類效應細胞。在一些實施例中，人類效應細胞係NK細胞、巨噬球、單核球中之一或多者。在一些實施例中，癌症係本文所闡述之任一癌症。在一些實施例中，癌症係非小細胞肺癌(NSCLC)、膠質母細胞瘤、神經母細胞瘤、黑素瘤、***癌瘤(例如三陰性乳癌)、胃癌、結腸直腸癌(CRC)或肝細胞癌瘤。
在本發明任一方法之一些實施例中，癌症顯示表現FcR之細胞(例如由表現FcR之細胞浸潤)。檢測FcR之方法在業內已眾所周知，包含(例如)藉由IHC。在一些實施例中，癌症顯示高含量之表現FcR之細胞。在一些實施例中，FcR係FcγR。在一些實施例中，FcR係活化FcγR。在一些實施例中，癌症係非小細胞肺癌(NSCLC)、膠質母細胞瘤、神經母細胞瘤、黑素瘤、***癌瘤(例如三陰性乳癌)、胃癌、結腸直腸癌(CRC)或肝細胞癌瘤。
上述實施例中之任一者之「個體」較佳係人類。
本發明抗體可單獨或與其他藥劑組合用於療法中。舉例而言，可共投與本發明抗體與至少一種其他治療劑。
上述該等組合療法涵蓋組合投與(其中兩種或更多種治療劑包含於同一或分開調配物中)及分開投與(在此情形下，可在投與一或多種其他治療劑之前、同時及/或之後投與本發明抗體)。在一實施例中，抗-OX40抗體之投與及其他治療劑之投與彼此發生於約一個月內或約一週、兩週或三週內或約一天、兩天、三天、四天、五天或六天內。 本發明抗體亦可與輻射療法組合使用。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與化學療法或化學治療劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與輻射療法或放射治療劑投與聯合。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與靶定療法或靶定治療劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與免疫療法或免疫治療劑(例如單株抗體)聯合投與。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與以下藥劑聯合投與：PARP抑制劑(例如奧拉帕尼(Olaparanib)、盧卡帕尼(Rucaparib)、尼拉帕尼(Niraparib)、西地尼布(Cediranib)、BMN673、威力帕尼(Veliparib))、曲貝替定(Trabectedin)、nab-太平洋紫杉醇(蛋白結合太平洋紫杉醇、ABRAXANE)、瑞巴納尼(Trebananib)、帕唑帕尼(Pazopanib)、西地尼布(Cediranib)、帕博西林(Palbociclib)、依維莫司(everolimus)、氟嘧啶(fluoropyrimidine)(例如FOLFOX、FOLFIRI)、IFL、瑞格非尼(regorafenib)、Reolysin、Alimta、Zykadia、Sutent、Torisel(特姆莫司(temsirolimus))、Inlyta(阿西替尼(axitinib)，Pfizer)、Afinitor(依維莫司，Novartis)、Nexavar(索拉非尼(sorafenib)，Onyx/Bayer)、Votrient、帕唑帕尼、阿西替尼、IMA-901、AGS-003、卡博替尼(cabozantinib)、長春氟寧(Vinflunine)、Hsp90抑制劑(例如阿帕脫星(apatorsin))、Ad-GM-CSF(CT-0070)、替莫唑胺(Temazolomide)、IL-2、IFNa、長春鹼、撒利多邁(Thalomid)、達卡巴嗪、環磷醯胺、來那度胺、氮胞苷(azacytidine)、來那度胺、硼替佐米(bortezomid)(VELCADE)、胺柔比星(amrubicine)、卡非佐米(carfilzomib)、普拉曲沙(pralatrexate)及/或恩紮他因(enzastaurin)。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與PD-1軸結合拮抗 劑聯合投與。PD-1軸結合拮抗劑包含但不限於PD-1結合拮抗劑、PD-L1結合拮抗劑及PD-L2結合拮抗劑。「PD-1」之替代名稱包含CD279及SLEB2。「PD-L1」之替代名稱包含B7-H1、B7-4、CD274及B7-H。「PD-L2」之替代名稱包含B7-DC、Btdc及CD273。在一些實施例中，PD-1、PD-L1及PD-L2係人類PD-1、PD-L1及PD-L2。在一些實施例中，PD-1結合拮抗劑係抑制PD-1與其配體結合配偶體結合之分子。在一具體態樣中，PD-1配體結合配偶體係PD-L1及/或PD-L2。在另一實施例中，PD-L1結合拮抗劑係抑制PD-L1與其結合配偶體結合之分子。在一具體態樣中，PD-L1結合配偶體係PD-1及/或B7-1。在另一實施例中，PD-L2結合拮抗劑係抑制PD-L2與其結合配偶體結合之分子。在一具體態樣中，PD-L2結合配偶體係PD-1。拮抗劑可為抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白或寡肽。在一些實施例中，PD-1結合拮抗劑係抗PD-1抗體(例如人類抗體、人類化抗體或嵌合抗體)。在一些實施例中，抗PD-1抗體係選自由以下組成之群：MDX-1106(尼沃魯單抗(nivolumab)，OPDIVO)、Merck 3475(MK-3475，皮落株單抗(pembrolizumab)，KEYTRUDA)及CT-011(皮裡株單抗(Pidilizumab))。在一些實施例中，PD-1結合拮抗劑係免疫黏附素(例如包括PD-L1或PD-L2中融合至恆定區(例如免疫球蛋白序列之Fc區)之細胞外或PD-1結合部分之免疫黏附素)。在一些實施例中，PD-1結合拮抗劑係AMP-224。在一些實施例中，PD-L1結合拮抗劑係抗PD-L1抗體。在一些實施例中，抗PD-L1結合拮抗劑係選自由以下組成之群：YW243.55.S70、MPDL3280A、MEDI4736及MDX-1105。MDX-1105(亦稱為BMS-936559係闡述於WO2007/005874中之抗PD-L1抗體。抗體YW243.55.S70(分別顯示於SEQ ID第20及21號中之重鏈及輕鏈可變區序列)係闡述於WO 2010/077634 A1中之抗PD-L1。MDX-1106(亦稱為MDX-1106-04、ONO-4538、BMS-936558或尼沃魯 單抗)係闡述於WO2006/121168中之抗PD-1抗體。Merck 3475(亦稱為MK-3475、SCH-900475或皮落株單抗)係闡述於WO2009/114335中之抗PD-1抗體。CT-011(亦稱為hBAT、hBAT-1或皮裡株單抗)係闡述於WO2009/101611中之抗PD-1抗體。AMP-224(亦稱為B7-DCIg)係闡述於WO2010/027827及WO2011/066342中之PD-L2-Fc融合體可溶性受體。「MDX-1106」之替代名稱包含MDX-1106-04、ONO-4538、BMS-936558或尼沃魯單抗。在一些實施例中，抗PD-1抗體係尼沃魯單抗(CAS登記號：946414-94-4)。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與針對活化共刺激性分子之激動劑聯合投與。在一些實施例中，活化共刺激性分子可包含CD40、CD226、CD28、GITR、CD137、CD27、HVEM或CD127。在一些實施例中，針對活化共刺激性分子之激動劑係結合CD40、CD226、CD28、OX40、GITR、CD137、CD27、HVEM或CD127之激動劑抗體。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與針對抑制共刺激性分子之拮抗劑聯合投與。在一些實施例中，抑制共刺激性分子可包含CTLA-4(亦稱為CD152)、PD-1、TIM-3、BTLA、VISTA、LAG-3、B7-H3、B7-H4、IDO、TIGIT、MICA/B或精胺酸酶。在一些實施例中，針對抑制共刺激性分子之拮抗劑係結合CTLA-4、PD-1、TIM-3、BTLA、VISTA、LAG-3(例如LAG-3-IgG融合蛋白(IMP321))、B7-H3、B7-H4、IDO、TIGIT、MICA/B或精胺酸酶之拮抗劑抗體。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與針對CTLA-4(亦稱為CD152)之拮抗劑(例如阻斷抗體)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與伊匹單抗(亦稱為MDX-010、MDX-101或Yervoy®)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與萊美木單抗(tremelimumab)(亦稱為替茲木單抗(tieilimumab)或CP- 675,206)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與針對B7-H3(亦稱為CD276)之拮抗劑(例如阻斷抗體)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與MGA271聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與針對TGFβ之拮抗劑(例如美替木單抗(metelimumab)(亦稱為CAT-192)、夫蘇木單抗(fresolimumab)(亦稱為GC1008)或LY2157299)聯合投與。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與包括授受性轉移表現嵌合抗原受體(CAR)之T細胞(例如細胞毒性T細胞或CTL)之治療劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與UCART19聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與WT128z聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與KTE-C19(Kite)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與CTL019(Novartis)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與包括授受性轉移包括顯性陰性TGFβ受體(例如顯性陰性TGFβII型受體)之T細胞之治療劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與包括HERCREEM方案(例如參見ClinicalTrials.gov Identifier NCT00889954)之治療劑聯合投與。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與針對CD19之拮抗劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與MOR00208聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與針對CD38之拮抗劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與達拉木單抗(daratumumab)聯合投與。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與針對CD137(亦稱為TNFRSF9、4-1BB或ILA)之激動劑(例如活化抗體)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與烏瑞蘆單抗(urelumab)(亦稱為BMS-663513)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑 抗體可與針對CD40之激動劑(例如活化抗體)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與CP-870893聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與針對OX40(亦稱為CD134)之激動劑(例如活化抗體)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與不同抗-OX40抗體(例如AgonOX)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與針對CD27之激動劑(例如活化抗體)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與CDX-1127聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與針對吲哚胺-2,3-二氧合酶(IDO)之拮抗劑聯合投與。在一些實施例中，IDO拮抗劑係1-甲基-D-色胺酸(亦稱為1-D-MT)。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與針對CD137(亦稱為TNFRSF9、4-1BB或ILA)之激動劑(例如活化抗體)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與烏瑞蘆單抗(亦稱為BMS-663513)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與針對CD40之激動劑(例如活化抗體)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與CP-870893或RO7009789聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與針對OX40(亦稱為CD134)之激動劑(例如活化抗體)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與針對CD27之激動劑(例如活化抗體)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與CDX-1127(亦稱為瓦力魯單抗(varlilumab))聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與針對吲哚胺-2,3-二氧合酶(IDO)之拮抗劑聯合投與。在一些實施例中，IDO拮抗劑係1-甲基-D-色胺酸(亦稱為1-D-MT)。在一些實施例中，IDO拮抗劑係WO2010/005958(其內容以記錄方式明確併入本文中)中所展示之IDO拮抗劑。在一些實施例中，IDO拮抗劑係4-({2-[(胺基磺醯基)胺基]乙基}胺基)-N-(3-溴-4-氟苯基)-N’-羥基-1,2,5-噁二唑- 3-甲脒(例如如WO2010/005958之實例23中所闡述)。在一些實施例中，IDO拮抗劑係
Figure 104110569-A0202-12-0135-47
在一些實施例中，IDO拮抗劑係INCB24360。在一些實施例中，IDO拮抗劑係因西莫德(Indoximod)(1-甲基-色胺酸之D異構體)。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與抗體-藥物偶聯物聯合投與。在一些實施例中，抗體-藥物偶聯物包括莫坦斯因(mertansine)或單甲基奧裡斯他汀E(MMAE)。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與抗NaPi2b抗體-MMAE偶聯物(亦稱為DNIB0600A、RG7599或維裡斯株單抗(lifastuzumab vedotin))聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與艾曲妥珠單抗(trastuzumab emtansine)(亦稱為T-DM1、ado-艾曲妥珠單抗或KADCYLA®,Genentech)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與抗MUC16抗體-MMAE偶聯物DMUC5754A聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與抗MUC16抗體-MMAE偶聯物DMUC4064A聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與靶向內皮素B受體(EDNBR)之抗體-藥物偶聯物(例如針對EDNBR之與MMAE偶聯之抗體)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與靶向淋巴細胞抗原6複合物基因座E(Ly6E)之抗體-藥物偶聯物(例如針對Ly6E之與MMAE偶聯之抗體，亦稱為DLYE5953A)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與維普拉珠單抗(polatuzumab vedotin)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與靶向CD30之抗體-藥物偶聯物聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與ADCETRIS(亦稱為維本土西單抗(brentuximab vedotin))聯合 投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與維普拉珠單抗聯合投與。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與血管生成抑制劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與針對VEGF(例如VEGF-A)之抗體聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與貝伐珠單抗(亦稱為AVASTIN®,Genentech)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與針對血管生成素2(亦稱為Ang2)之抗體聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與MEDI3617聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與針對VEGFR2之抗體聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與雷莫蘆單抗(ramucirumab)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與VEGF受體融合蛋白聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與阿柏西普(aflibercept)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與ziv-阿柏西普(亦稱為VEGF Trap或Za1trap®)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與針對VEGF及Ang2之雙特異性抗體聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與RG7221(亦稱為萬喜珠單抗(vanucizumab))聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與血管生成抑制劑聯合投與且與PD-1軸結合拮抗劑(例如PD-1結合拮抗劑(例如抗PD-1抗體)、PD-L1結合拮抗劑(例如抗PD-L1抗體)及PD-L2結合拮抗劑(例如抗PD-L2抗體))聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與貝伐珠單抗及PD-1軸結合拮抗劑(例如PD-1結合拮抗劑(例如抗PD-1抗體)、PD-L1結合拮抗劑(例如抗PD-L1抗體)及PD-L2結合拮抗劑(例如抗PD-L2抗體))聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與貝伐珠單抗及MDX-1106(尼沃魯單抗，OPDIVO)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑 抗體可與貝伐珠單抗及Merck 3475(MK-3475，皮落株單抗，KEYTRUDA)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與貝伐珠單抗及CT-011(皮裡株單抗)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與貝伐珠單抗及YW243.55.S70聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與貝伐珠單抗及MPDL3280A聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與貝伐珠單抗及MEDI4736聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與貝伐珠單抗及MDX-1105聯合投與。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與抗腫瘤劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與靶向CSF-1R(亦稱為M-CSFR或CD115)之藥劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與抗CSF-1R抗體(亦稱為IMC-CS4或LY3022855)聯合投與在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與抗CSF-1R抗體RG7155(亦稱為RO5509554或依瑪珠單抗(emactuzumab))聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與干擾素(例如干擾素α或干擾素γ)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與羅夫侖-A(Roferon-A)(亦稱為重組干擾素α-2a)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與GM-CSF(亦稱為重組人類粒細胞巨噬球菌落刺激因子rhu GM-CSF，沙格司亭或Leukine®)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與IL-2(亦稱為阿地白介素或Proleukin®)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與IL-12聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與IL27聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與IL-15聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與ALT-803聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與靶向CD20之抗體聯合投與。在一些實施例中，靶向CD20之抗體係奧 圖珠單抗(obinutuzumab)(亦稱為GA101或Gazyva®)或利妥昔單抗。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與靶向GITR之抗體聯合投與。在一些實施例中，靶向GITR之抗體係TRX518。在一些實施例中，靶向GITR之抗體係MK04166(Merck)。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與布魯頓氏酪胺酸激酶(Bruton’s tyrosine Kinase，BTK)之抑制劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與依魯替尼(ibrutinib)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與異檸檬酸去氫酶1(IDH1)及/或異檸檬酸去氫酶2(IDH2)之抑制劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與AG-120(Agios)聯合投與。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與奧圖珠單抗及PD-1軸結合拮抗劑(例如PD-1結合拮抗劑(例如抗PD-1抗體)、PD-L1結合拮抗劑(例如抗PD-L1抗體)及PD-L2結合拮抗劑(例如抗PD-L2抗體))聯合投與。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與癌症疫苗聯合投與。在一些實施例中，癌症疫苗係肽癌症疫苗，其在一些實施例中係個體化肽疫苗。在一些實施例中，肽癌症疫苗係多價長肽、多肽、肽混合製劑、雜合肽或肽衝擊樹枝狀細胞疫苗(例如參見Yamada等人，Cancer Sci,104：14-21,2013)。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與佐劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與包括TLR激動劑(例如聚-ICLC(亦稱為Hiltonol®)、LPS、MPL或CpG ODN)之治療劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與腫瘤壞死因子(TNF)α聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與IL-1聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與HMGB1聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與IL-10拮抗劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40 激動劑抗體可與IL-4拮抗劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與IL-13拮抗劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與IL-17拮抗劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與HVEM拮抗劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與ICOS激動劑(例如藉由投與ICOS-L或針對ICOS之激動抗體)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與靶向CX3CL1之治療劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與靶向CXCL9之治療劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與靶向CXCL10之治療劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與靶向CCL5之治療劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與LFA-1或ICAM1激動劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與選擇素激動劑聯合投與。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與B-Raf抑制劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與維拉菲尼(亦稱為Zelboraf®)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與達拉非尼(dabrafenib)(亦稱為Tafinlar®)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與恩拉菲尼(encorafenib)(LGX818)聯合投與。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與EGFR抑制劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與埃羅替尼(亦稱為Tarceva®)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與EGFR-T790M抑制劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與吉非替尼聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與阿法替尼(afatinib)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與西妥昔單抗(亦稱為Erbitux®)聯合投與。在一些 實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與帕尼單抗(亦稱為Vectibix®)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與羅西替尼(rociletinib)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與AZD9291聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與MEK(例如MEK1(亦稱為MAP2K1)及/或MEK2(亦稱為MAP2K2))之抑制劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與科美替尼(cobimetinib)(亦稱為GDC-0973或XL-518)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與曲美替尼(trametinib)(亦稱為Mekinist®)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與比尼替尼(binimetinib)聯合投與。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與B-Raf抑制劑(例如維拉菲尼或達拉非尼)及MEK(例如MEK1及/或MEK2之抑制劑(例如科美替尼或曲美替尼)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與ERK(例如ERK1/2)之抑制劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與GDC-0994)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與B-Raf抑制劑、MEK抑制劑及ERK1/2抑制劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與EGFR抑制劑、MEK抑制劑及ERK1/2抑制劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與一或多種MAP激酶路徑抑制劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與CK127聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與K-Ras抑制劑聯合投與。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與c-Met抑制劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與昂圖株單抗(亦稱為MetMAb)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與間變性淋巴瘤激酶(ALK)抑制劑聯合投與。在一些實施例中，抗 人類OX40激動劑抗體可與AF802(亦稱為CH5424802或艾樂替尼(alectinib))聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與克唑替尼(crizotinib)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與色瑞替尼(ceritinib)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與磷脂醯肌醇3-激酶(PI3K)抑制劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與布帕西布(buparlisib)(BKM-120)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與匹克西布(pictilisib)(亦稱為GDC-0941)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與布帕西布(亦稱為BKM-120)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與哌立福辛(亦稱為KRX-0401)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與磷脂醯肌醇3-激酶(PI3K)之δ-選擇性抑制劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與伊拉西布(idelalisib)(亦稱為GS-1101或CAL-101)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與他賽西布(taselisib)(亦稱為GDC-0032)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與BYL-719聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與Akt抑制劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與MK2206聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與GSK690693聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與依帕提布(ipatasertib)(亦稱為GDC-0068)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與mTOR抑制劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與西羅莫司(亦稱為雷帕黴素)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與特姆莫司(亦稱為CCI-779或Torisel®)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與依維莫司(亦稱為RAD001)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與 地磷莫司(ridaforolimus)(亦稱為AP-23573、MK-8669或地羅莫司(deforolimus))聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與OSI-027聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與AZD8055聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與INK128聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與雙重PI3K/mTOR抑制劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與XL765聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與GDC-0980聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與BEZ235(亦稱為NVP-BEZ235)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與BGT226聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與GSK2126458聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與PF-04691502聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與PF-05212384(亦稱為PKI-587)聯合投與。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與選擇性降解***受體之藥劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與GDC-0927聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與HER3抑制劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與杜麗珠單抗(duligotuzumab)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與LSD1抑制劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與MDM2抑制劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與BCL2抑制劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與維尼拉克(venetoclax)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與CHK1抑制劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與GDC-0575聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與活化刺蝟信號傳 導路徑之抑制劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與ERIVEDGE聯合投與。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與輻射療法聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與吉西他濱聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與nab-太平洋紫杉醇(ABRAXANE)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與曲妥珠單抗聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與TVEC聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與IL27聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與環磷醯胺聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與將T細胞募集至腫瘤之藥劑聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與裡魯單抗(lirilumab)(IPH2102/BMS-986015)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與伊拉西布聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與靶向CD3及CD20之抗體聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與REGN1979聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與靶向CD3及CD19之抗體聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與比林莫單抗(blinatumomab)聯合投與。
在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與溶瘤病毒聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與卡鉑及nab-太平洋紫杉醇聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與卡鉑及太平洋紫杉醇聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與順鉑及培美曲塞(pemetrexed)聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與順鉑及吉西他濱聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與FOLFOX聯合投與。在一些實施例中，抗人類OX40激動劑抗體可與FOLFIRI聯合投與。
上文提及之該等組合療法涵蓋組合投與(其中兩種或兩種以上藥劑包含於相同或單獨調配物中)及單獨投與(在此情形下，本發明抗體之投與可在投與其他治療劑及/或佐劑之前、同時及/或之後進行)。本發明抗體亦可與輻射療法組合使用。
本發明抗體(及任一其他治療劑)可藉由任何適宜方式投與，包含非經腸、肺內及鼻內以及(若期望用於局部治療)病灶內投與。非經腸輸注包含肌內、靜脈內、動脈內、腹膜腔內或皮下投與。可藉由任一適宜途徑(例如藉由注射，例如靜脈內或皮下注射)來投藥，此部分地取決於投與係短期投與或長期投與。本文涵蓋各種投藥方案，包含但不限於在不同時間點單次或多次投與、濃注投與及脈衝輸注。
本發明抗體應以符合良好醫療實踐之方式調配、調劑及投與。在此上下文中需考慮之因素包含所治療之特定病症、所治療之特定哺乳動物、個體患者之臨床病狀、病因、藥劑之遞送位點、投與方法、投與時間安排及從業醫師所知之其他因素。抗體不需要(但視情況)與一或多種當前用於預防或治療所討論病症之藥劑一起調配。該等其他藥劑之有效量端視調配物中所存在抗體之量、病症或治療之類型以及上文所討論之其他因素而定。該等藥劑通常以相同劑量及如本文所闡述之投與途徑來使用，或以本文所闡述劑量之約1%至99%來使用，或以憑經驗/臨床確定適宜之任一劑量及任一途徑來使用。
對疾病之預防或治療而言，本發明抗體之適當劑量(在單獨使用或與一或多種其他其他治療劑組合使用時)應端視擬治療疾病之類型、抗體類型、疾病之嚴重程度及病程、投與抗體係用於預防目的抑或治療目的、先前療法、患者之臨床病史及對抗體之反應以及主治醫師之判斷而定。抗體係以適宜方式一次性或經一系列治療投與患者。端視疾病之類型及嚴重程度，約1μg/kg至40mg/kg抗體可為投與患者之初始候選劑量，不論(例如)藉由一或多次單獨投與、抑或藉由連續 輸注。端視上述因素而定，一種典型日劑量可介於約1μg/kg至100mg/kg之間或更高。在經若干天或更長時間重複投與時，端視病狀而定，治療通常持續至對疾病症狀之期望阻抑出現為止。該等劑量可間歇性投與，例如每週一次或每三週一次(例如以使患者接受約兩個至約20個或例如約6個劑量之抗體)。可在開始時投與較高負荷劑量，隨後投與一或多個較低劑量。然而，可使用其他劑量方案。此療法之進展可容易地藉由習用技術及分析來監測。
應理解，可使用本發明免疫偶聯物代替抗-OX40抗體或與抗-OX40抗體一起來實施任一上述調配物或治療方法。
III.製品及套組
在本發明另一態樣中，提供含有用於治療、預防及/或診斷上述病症之材料的製品。該製品包括容器及位於該容器上或與該容器相連之標記或包裝插頁。適宜容器包含(例如)瓶子、小瓶、注射器、IV溶液袋等。該等容器可由諸如玻璃或塑膠等多種材料形成。容器裝有自身或與另一組合物組合時可有效治療、預防及/或診斷病狀之組合物，且可具有無菌存取通道(舉例而言，該容器可為靜脈內溶液袋或具有可由皮下注射針刺穿之塞子的小瓶)。該組合物中至少一種活性劑係本發明抗體。標記或包裝插頁指示該組合物用於治療選定病狀。另外，該製品可包括：(a)含有組合物之第一容器，其中該組合物包括本發明抗體；及(b)含有組合物之第二容器，其中該組合物包括另一細胞毒性劑或治療劑。本發明此實施例中之製品可進一步包括指示組合物可用於治療特定病狀之包裝插頁。另一選擇為或另外，該製品可進一步包括第二(或第三)容器，該容器包括醫藥上可接受之緩衝液，例如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸鹽緩衝鹽水、林格氏溶液(Ringer's solution)及右旋糖溶液。其可進一步包含自商業及使用者角度來看期望之其他材料，包含其他緩衝劑、稀釋劑、濾膜、針及注射 器。
應理解，代替抗-OX40抗體或除抗-OX40抗體外，上文任一製品可包含本發明免疫偶聯物。
序列
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實例 材料及方法
表面電漿共振：使用表面電漿共振(SPR)在Biacore 3000儀器(GE Healthcare)上量測抗-OX40抗體之結合動力學。經由基於胺之偶合使用製造商提供方案將抗人類Fc(GE Healthcare)固定於CM5感測器晶片上。以300-400個共振單位(RU)之濃度捕獲抗-OX40抗體。量測抗體與人類OX40(Sino Biological公司)之結合。使用18.75nM至300nM或6.25nM至200nM範圍之huOX40之兩倍濃度系列進行實驗。使用2分鐘之注射時間利用30μl/min之流速、在25℃之溫度下且利用10mM pH 7.4 HEPES、150mM NaCl及0.005% Tween 20之運行緩衝液記錄OX40結合之感測圖。在注射之後，在運行緩衝液中監測配體自抗體之解離600秒。在結合循環之間使用3M氯化鎂之40μl注射再生表面。在減去僅含有運行緩衝液之空白之後，使用1：1蘭格繆爾(Langmuir)結合模型利用由製造商供應之軟體來分針對OX40結合抗-OX40抗體所觀察到之感測圖以計算動力學及結合常數。
交叉阻斷：如上所述，使用表面電漿共振(SPR)在Biacore 3000儀器(GE Healthcare)上實施交叉阻斷實驗。使用兩種格式進行分析。對於第一格式而言，使用抗鼠類Fc(GE Healthcare)在不同流通池上捕獲雜交瘤衍生親代抗體1A7、3C8及1D2。然後使人類OX40(Sino Biological公司)流經抗體2分鐘以使其結合。隨後經2.5分鐘注射抗-OX40抗體純系1A7.gr.1、3C8.gr.5及1D2.chimera。共振單位(RU)之增 加指示並無交叉阻斷且RU並無變化指示競爭。對於第二格式而言，逆轉抗體格式且使用抗人類Fc(GE Healthcare)捕獲人類化變體。隨後經2分鐘注射huOX40且然後注射鼠類抗體。每一純系能夠在其他兩種純系存在下結合且僅自身競爭結合。
抗體變體之生成：使用Kunkel誘變生成人類化抗-OX40激動劑抗體純系1A7、3C8及1D2之變體。在293細胞中瞬時表現變體抗體且然後測試結合及功能。
FACS分析：使用人類OX40穩定轉染人類T細胞系Hut78，且藉由FACS使用Hut78-OX40細胞測試人類化抗-OX40抗體純系以評價變體是否保留結合細胞表面表現之OX40。在使用FACS阻斷緩衝液(1X PBS、0.5% BSA、0.05%疊氮化鈉)阻斷之後，在冰上使用0.1、1.0或10.0μg/ml抗體將細胞染色30分鐘。在染色之後，使用冷FACS緩衝液(1X PBS、0.5% BSA、0.05%疊氮化鈉)將細胞洗滌2次。然後使用抗huFc藻紅蛋白(PE)或抗muFc PE在冰上將細胞染色30分鐘。使用冷FACS緩衝液將經染色細胞洗滌3次，然後在FACSCalibur上讀數，隨後使用Flowjo軟體進行分析。
穩定性測試：對抗-OX40激動劑抗體實施穩定性分析，包含熱應力測試及化學應力測試。對於熱測試而言，將所調配抗體之試樣在40C下處理兩週，然後分析(例如)CDR殘基中異構化或去胺化胺基酸殘基之存在，如使用胰蛋白酶定位及使用LC-MS/MS所測定。對於化學測試而言，使所調配抗體之試樣經受氧化條件(例如使用AAPH作為氧化劑)，然後使用胰蛋白酶定位及使用LC-MS/MS分析CDR中經氧化殘基(例如M或W)之存在。
OX40激動劑抗體1A7.gr.1與表現於經轉染BT-474細胞上之重組人類OX40蛋白質之平衡結合分析：使用Iodogen方法(Fraker及Speck 1978)對Mab 1A7.gr.1實施碘化。藉由凝膠過濾使用NAP-5管柱自游離 125I-Na純化放射標記mab 1A7.gr.1；經純化抗體具有24.3μCi/μg之比活性。將含有固定濃度之碘化mab 1A7.gr.1及降低濃度之連續稀釋、未標記mab 1A7.gr.1之50μL體積競爭反應混合物置於96孔板中。在37℃下於5%CO2中培養表現人類OX40之經穩定轉染BT-474細胞。使用細胞解離溶液(Sigma-Aldrich；St.Louis,MO)自燒瓶剝離細胞且使用結合緩衝液(含有2% FBS、50mM pH 7.2 HEPES、2mM疊氮化鈉之DMEM)洗滌。以5×104個細胞(存於0.2mL結合緩衝液中)之近似密度將經洗滌細胞添加至含有50μL競爭反應混合物之96孔板中。含有細胞之每一競爭反應液中碘化抗體之最終濃度大約為100pM(大約16.0×104cpm/0.25mL)且含有細胞之競爭反應液中未標記抗體之最終濃度有所變化(始於500nM且針對10個濃度以3倍梯度降低)，隨後僅使用結合緩衝液實施無添加未標記抗體步驟。將含有細胞之競爭反應液在室溫下培育2小時。一式三份分析在未標記抗體之每一濃度下含有細胞之競爭反應液。在培育2小時之後，將競爭反應液轉移至Millipore Multiscreen®過濾板(Millipore；Billerica,MA)中且使用結合緩衝液洗滌4次以自結合碘化抗體分離游離物。在Wallac Wizard 1470γ計數器(PerkinElmer Life and Analytical Sciences公司；Wellesley,MA)上對過濾器進行計數。使用NewLigand軟體(Genentech)評估結合數據，該軟體使用Munson及Rodbard之擬合算法測定抗體之結合親和力(Munson and Rodbard 1980)。
OX40激動劑抗體1A7.gr.1與人類、食蟹猴、大鼠及小鼠T細胞上之細胞表面表現OX40之結合(經由流式細胞術)：藉由使用紅血球裂解緩衝液(BD Bioscience；San Jose,CA)裂解紅血細胞自人類、毛裡求斯食蟹猴(Mauritius cynomolgus monkey)、大鼠或小鼠全血獲得周邊白血細胞(PBMC)。分別使用存於PBS中之10%人類、食蟹猴、大鼠或小鼠血清將細胞在4℃下阻斷15分鐘且以100μL全血/反應液之當量平 鋪於96孔板中。
滴定使用Alexa Fluor® 647標記之Mab 1A7.gr.1(或使用Alexa Fluor® 647標記之曲妥珠單抗抗體對照)且結合細胞(對於人類、大鼠及小鼠試樣而言始於9μg/mL以3倍連續稀釋液，且對於毛裡求斯食蟹猴試樣而言始於8μg/mL以2倍連續稀釋液)。將PBMC在4℃下於暗處共染色30分鐘以鑑別以下T細胞子組群體：人類抗CD3-PE-Cy7、抗PerCDP-Cy5.5、抗CD8-BV510(BD Biosciences)；食蟹猴抗CD3-PE-Cy7、抗CD4-PerCP-Cy5.5、抗CD8-APC-H7(BD Biosciences)；大鼠抗CD3-PE、抗CD4-FITC(BD Biosciences)；小鼠抗CD3-FITC、抗CD4-PE(eBioscience,San Diego,CA)。
然後使用FACS染色緩衝液(BD Bioscience)將細胞洗滌兩次，且使用存於PBS中之1%低聚甲醛(EMS)固定，然後在流式細胞儀上獲取試樣。
在BD Biosciences FACSCanto II上運行所有試樣。使用來自T細胞上曲妥珠單抗對照抗體之背景染色設定分析閘且將mab 1A7.gr.1-Alexa 647染色正規化。使用BD FACSDiva軟體分析所獲取數據。
抗-OX40激動劑抗體1A7.gr.1調介之效應T細胞共刺激：使用Trima Accel雪球分離裝置自人類全血回收周邊白血細胞(PBMC)且進一步藉由Ficoll-Hypaque梯度離心富集(GE healthcare)。使用Miltenyi CD4+記憶性T細胞分離套組(Miltenyi)根據製造商說明自PBMC分離CD4+記憶性T細胞。在5000Rad下輻照表現CD32及CD80之L細胞且用作抗原呈遞細胞。
將經輻照CD32+ CD80+ L細胞(5000個細胞/孔)與CD4+記憶性T細胞(50000個細胞/孔)混合且在37℃下於5% CO2中培養於96孔板中。培養基係由含有10% FBS、Gluta-MAX、丙酮酸鈉、青黴素(penicillin)/鏈黴素(streptomycin)、非必需胺基酸及β-巰基乙醇之RPMI 1640組 成。
藉由添加40ng/mL抗CD3(純系SP34)及(BD Biosciences)及可變量之mab 1A7.gr.1或同種型對照(抗HSV糖蛋白D，抗gD)(自320ng/mL至0.16ng/mL連續稀釋兩倍)在CD32+ CD80+ L細胞共培養物中活化CD4+記憶性T細胞。藉由Luminex(Bio-Rad)在培養之第5天分析上清液中之IFN-γ含量，且藉由Cell Titer-Glo發光(Promega)量測T細胞增殖並在培養之第7天在EnVision Multilabel讀數儀(Perkin Elmer)上讀數。
結果：
OX40激動劑抗體以亞奈莫耳親和力結合人類OX40。使用表面電漿共振分析量測抗-OX40抗體結合人類OX40之結合動力學。人類化抗體1A7之變體展示結合人類OX40之高親和力，如藉由Biacore所量測。此分析之結果展示於表2中。
Figure 104110569-A0202-12-0180-80
人類化抗體3C8之變體展示對huOX40之高親和力。此分析之結果展示於表3中。
Figure 104110569-A0202-12-0180-352
Figure 104110569-A0202-12-0181-82
抗體1D2之人類化變體展示對huOX40之結合小於親代雜交瘤抗體。此分析之結果展示於表4中。
Figure 104110569-A0202-12-0181-83
FACS分析：藉由FACS分析人類化OX40抗體變體以評估表現於Hut78細胞表面上之huOX40之抗體結合。此分析之結果展示於圖1中。人類化抗-OX40激動劑抗體1A7.gr.1、1A7.gr.2、1A7.gr.3、3C8.gr.1、3C8.gr.2及3C8.gr.3充分結合至表現於細胞表面上之人類OX40。
交叉阻斷實驗：每一抗體純系能夠在其他兩種純系存在下結合，且僅自身競爭結合人類OX40，從而表明抗體1A7、3C8及1D2並不彼此競爭結合人類OX40。
變體OX40抗體之生成及表徵：藉由kunkel誘變使可能不穩定之CDR殘基基序發生突變(例如在熱應力條件下)生成抗-OX40純系1A7.gr.1及3C8.gr.5之變體。對於抗體1A7.gr1而言，將序列DS(D位於CDRH1中；DS可能發生增加之異構化)及NGDS(在CDR H2中；NG可能發生增加之異構化)鑑別為可能不穩定之殘基，且如表5中所展示發生突變。藉由Biacore如上所述測試變體以評估結合動力學且在共刺激分析中測定生物活性。
Figure 104110569-A0202-12-0182-84
殘基DS(D位於CDR H1中)至DA或ES之突變並不顯著改變對huOX40之結合親和力(表6)。CDR H2中之殘基NGDS至NADS、NADA、NGDA及NGSS之突變亦並不顯著改變對人類OX40之結合親和力。NGDS(在CDR H2中)至SGDS之突變係使得結合親和力損失兩倍(表6)。使用T細胞共刺激分析來分析變體抗體且變體中T效應細胞之共刺激程度與1A7.gr1抗相比體並不顯著改變(數據未展示)。
表6：抗-OX40 1A7變體結合人類OX40之動力學常數
Figure 104110569-A0202-12-0183-85
對於抗體3C8.gr5而言，將序列DT(在CDRH2中)及DG(在CDR L2中)(皆係潛在異構化位點)鑑別為抗體3C8.gr.5中之可能不穩定殘基。在每一該等序列中進行突變，如表7中所展示。
Figure 104110569-A0202-12-0183-86
CDR H2中之殘基DT至DA或DQ之突變使得損失對人類OX40之親和力(與親代抗體之親和力相比)(表8)。CDR L2中之殘基DG至EG、 QG或SG之突變並不顯著改變結合親和力(表8)。
Figure 104110569-A0202-12-0184-87
穩定性測試：如上文所闡述對抗體1A7.gr.1實施穩定性測試，且序列DS(D位於CDRH1中)及NGDS(在CDR H2中)在熱應力測試條件下較為穩定。此外，M及W殘基(在CDR-H1、-H2及-H3中)在化學應力測試期間並不展示不可接受程度之氧化。
亦對抗體3C8.gr.5實施穩定性測試。儘管殘基DT在熱測試條件下較為穩定，但殘基DG(CDR-L2)在熱測試條件下並不穩定。
OX40抗體丙胺酸掃描突變體之生成及表徵：生成1A7.gr.1及3C8.gr.5之丙胺酸掃描突變體以(例如)檢驗突變對結合親和力之影響。此外，測定結合親和力對抗體活性之影響。使用kunkel誘變生成突變體以改變輕鏈及重鏈之第三CDR中之胺基酸殘基。在293細胞中瞬時表現變體抗體，且藉由Biacore 3000測試人類OX40結合。
此實驗之結果展示於表9中。在位置96(1A7.Ala.14)、97 (1A7.Ala.11)、98(1A7.Ala.13)、99(1A7.Ala.10)及100(1A7.Ala.9)處重鏈CDR3中之丙胺酸取代展示減小之huOX40結合。該等結果表明，位置96、97、98、99及100處之殘基可對於OX40之抗體結合較為重要。活體外T細胞共刺激分析中Ala掃描突變體1A7.Ala9、1A7.Ala10、1A7.Ala11、1A7.Ala13及1A7.Ala14之功能表徵展示，降低之OX40抗體親和力與抗體共刺激效應T細胞增殖活性之能力有所減小相關。
Figure 104110569-A0202-12-0185-353
Figure 104110569-A0202-12-0186-89
抗體3C8.gr5丙胺酸掃描變體之分析展示於表10中。在位置91、93、94及95處於輕鏈重鏈CDR 3中包括丙胺酸取代之變體抗體展示顯著減小之huOX40結合。重鏈CDR3中之所有三個位置(95、96及97)在突變至丙胺酸時皆展示減小之huOX40結合。
Figure 104110569-A0202-12-0186-90
Figure 104110569-A0202-12-0187-91
使用放射免疫分析來分析以高親和力結合人類OX40之Mab1A7.gr.1：如本文所闡述實施平衡結合研究以測定mab 1A7.gr.1對表現於經轉染BT-474細胞上之人類OX40之親和力。Kd值匯總於表11中。平均量測結合親和力為0.45nM(n=3，個別值為0.43、0.44、0.49)。
Figure 104110569-A0202-12-0187-92
Mab 1A7.gr.1以高親和力結合表現於人類、食蟹猴、大鼠及小鼠T細胞上之OX40：在基於流式細胞術之分析中分析mab 1A7.gr.1與表 現於人類、食蟹猴、大鼠及小鼠T細胞上之OX40之結合。mab 1A7.gr.1結合人類及食蟹猴T細胞之平均EC50值匯總於表12中，且結合曲線展示於圖2中。結果指示，mab1A7.gr.1以類似高親和力結合人類及食蟹猴T細胞，其中人類及食蟹猴T細胞之EC50值分別為0.220±0.026(1.47nM)及0.142±0.0001μg/mL(0.946nM)。檢測到mab1A7.gr.1與大鼠或小鼠T細胞並無可量測之結合。
Figure 104110569-A0202-12-0188-93
使用OX40激動劑抗體mab1A7.gr.1進行處理會在T細胞受體結合後以劑量依賴性方式共刺激T效應細胞增殖及干擾素γ產生：如本文所闡述，使用固定濃度之抗CD3及可變濃度之抗-OX40或對照抗體刺激CD4+記憶性T細胞。在不存在抗CD3交聯下，mab 1A7.gr.1對T細胞增殖並無效應(圖3A)。增加濃度之mab 1A7.gr.1因應於抗CD3交聯共刺激CD4+記憶性T細胞增殖。mab1A7.gr.1之共刺激效應之計算EC50為9.96ng/mL(n=2，圖3A)。增加濃度之mab1A7.gr.1因應於抗CD3交聯共刺激干擾素γ之CD4+記憶性T細胞產生(圖3B)。該等結果顯示，激動劑OX40 mab1A7.gr.1共刺激CD4+記憶性T細胞增殖及干擾素γ產生。
材料及方法II
1.抗體：自BD biosciences購買經純化抗人類OX40(PE)(純系ACT35)、小鼠IgG1(PE)、抗人類CD3(純系SP34)、抗人類CD4(FITC)、抗人類CD25(PE)、抗人類CD45RA(APC)、抗人類CD3-APC及經純化小鼠抗人類CD11b抗體。自Genzyme購買阿侖珠單抗(Campath)。自Sigma購買抗人類CD52(APC)。自Invitrogen購買山羊抗小鼠IgG Alexa Fluor 647。自eBiosciences購買抗人類CD127(eFluor 450)及大鼠抗小鼠OX40(PE，純系OX86)。在Genentech處生成抗人類OX40抗體IA7gr1、利妥昔單抗(嵌合抗CD20，IgG1)及抗HSV糖蛋白D(抗gD抗體，人類IgG1)。自BD Biosciences購買抗人類IgG(PE)。人類CD4分離套組II係來自Miltenyi Biotech。自Stem Cell Technology購買人類NK分離套組。
2.細胞及培養基
a，細胞系：自ATCC獲取BT474(人類乳癌細胞系)；自Life Technology獲取基於293之雙向性細胞系。在37℃/5%CO2培育器中於補充有10% FBS/Pen/Strep之DMEM培養基中培養BT474及雙向性細胞並維持。在37℃/5%CO2培育器中於完全RPMI培養基(RPMI-1640，補充有10% FBS(熱失活)/Pen/strep/麩醯胺酸/非必需胺基酸/55μM βME)中培養表現CD32a及CD80之L細胞並維持。在37℃/5%CO2培育器中於完全RPMI培養基中培養U937(人類單核細胞細胞系)並維持。
b，人類OX40表現BT474純系之生成：為生成人類OX40-MSCV(hOX40-MSCV)質粒，將人類OX40cDNA以具有5’ HSV糖蛋白D(gD)標籤之融合蛋白形式選殖至MSCV IRES GFP逆轉錄載體(Clontech)中。使用hOX40-MSCV質粒經由Fugene HD(Roche)轉染雙向性Phoenix包裝細胞。隨後使用來自經轉染雙向性細胞之病毒上清液感染BT474細胞。藉由分選表面gD+及GFP+細胞來富集OX40表現BT474細胞池。藉由OX40表現純系之有限稀釋分析來生成OX40表現純系。 基於gD標籤之表面表現及OX40表現程度藉由流式細胞術來選擇表現高含量及低含量OX40之純系。為測定BT474純系上之人類OX40表現程度，使用抗人類OX40-PE(純系ACT35，BD Biosciences)將OX40表現細胞染色，且在FACS Canto II(BD Bioscience)上量測細胞螢光並使用Flowjo軟體(TreeStar)進行分析。
c，正常人類周邊血單核細胞(PBMC)、T細胞、單核球及NK細胞之分離：正常人類周邊血試樣係由註冊Genentech雇員捐助且由Employee Health Service department提供。自San Francisco Blood Bank經由Genentech Employee Health Service department獲得正常人類血沉棕黃層。使用Trima Accel雪球分離裝置自人類全血回收周邊白血細胞(PBMC)且進一步藉由Ficoll-Hypaque梯度離心(GE Healthcare)富集。
使用Miltenyi CD4+ T細胞分離套組自PBMC分離CD4+ T細胞。使用CD4-FITC、CD25-PE及CD127-e450(eBiosciences)將CD4+幼稚T細胞染色以分選CD4+CD25-CD127+細胞及CD4+CD25+CD127-細胞。使用FACS Aria(BD Biosciences)自相同供體分選Treg細胞。在分選之後立即藉由流式細胞術分析證實分選細胞之純度。
將藉由Ficoll-Paque梯度離心分離之全血試樣之PBMC用於分離單核球。使用人類單核球分離套組(Miltenyi)自PBMC分離單核球。將所分離單核球與完全RPMI培養基在20ng/mL GM-CSF存在下一起培養7至14天以用於生成單核球源巨噬球(MDM)。
使用人類NK細胞富集套組(Stem Cell Technology)根據製造商說明自血沉棕黃層之PBMC分離正常人類NK細胞，且將細胞立即用於ADCC分析。
3，細胞標記試劑：利用CFSE使用CellTrace CFSE細胞增殖套組(Life Technology)標記經純化CD4+幼稚T細胞且使用PKH26 Red Fluorescent Cell Linker套組(Sigma)標記經純化Treg細胞。根據製造商 說明使用兩種套組。
4.Treg阻抑分析：以5000 rad輻照表現CD32及CD80 L之細胞且用作用於CD4+CD25+CD127-細胞阻抑分析之抗原呈遞細胞。
將經輻照CD32+ CD80+ L細胞(5000 RAD，10,000個細胞/孔)平鋪於平底96孔組織培養板上，且在37℃/5%CO2培育器中維持過夜。第二天，在下列CD4+CD25+CD127- T細胞阻抑分析中分析在存在或不存在經分選Treg細胞下之CD4+幼稚T細胞增殖。
為監測幼稚CD4+ T細胞之增殖，將100,000 CFSE(5um)標記幼稚CD4+ T細胞添加至分析板(其已含有在前一天接種之L細胞)中之每一孔中。為測試Treg細胞之阻抑功能，將200,000 PKH26(2um)標記Treg細胞添加至含有CFSE標記CD4+幼稚T細胞之每一孔中。為測試抗-OX40抗體1A7.gr1之活性，將1A7.gr1或同種型對照抗體抗CD20抗體(利妥昔單抗)(各200ng/ml)添加至幼稚CD4+ T細胞、Treg細胞及經輻照CD32+ CD80+ L細胞之共培養物中。以2.5ng/mL之最終濃度將可溶性抗CD3添加至細胞中。將分析板在37℃/5%CO2培育器中維持6天，然後獲取數據。在第6天，藉由CFSE染料稀釋追蹤幼稚CD4 T細胞之增殖且在FACS Canto II(BD Bioscience)上量測細胞螢光並使用FlowJo軟體(Treestar)進行分析。
5.抗體依賴性細胞調介之吞噬作用(ADCP)分析：將U937細胞用作ADCP分析中之吞噬效應細胞。在96孔組織培養板中接種使用PKH26(2um)標記之50,000 U937細胞。將可變量之抗-OX40、1A7.gr1或抗HER2(曲妥珠單抗同種型對照)抗體(自1000ng/ml至7.8ng/ml之2倍連續稀釋液)添加至U937細胞中。將OX40高或低表現BT474純系用作ADCP分析中之靶細胞。將5,000 OX40+ BT474細胞添加至分析板中之U937細胞中。將分析板在37℃/5%CO2培育器中培育4小時。然後收穫細胞用於在FACS Canto II(BD Bioscience)上進行細胞螢光量測且 使用FlowJo軟體(Treestar)進行分析。藉由將GFP+ PKH26+事件(亦即，具有吞沒BT474細胞之所量測U937細胞)除以所有GFP+事件(所有BT474細胞)來計算吞噬作用之百分比。
6，抗體依賴性細胞調介之細胞毒性(ADCC)分析：為顯示OX40表現T細胞之1A7.gr1誘導之ADCC，將原代NK細胞與活化原代CD4+ T細胞一起共培養。分別使用人類CD4 T細胞分離套組(Miltenyi套組)及人類NK細胞富集套組(Stem Cell Technology)自相同PBMC供體分離CD4+ T細胞及NK細胞。藉由使用PHA(5ug/ml)將T細胞在完全RPMI-1640培養基中活化48小時來誘導所分離CD4+ T細胞上之OX40表現。使用阿侖珠單抗(抗CD52 mAb)作為陽性對照且使用抗gD作為陰性對照以用於ADCC分析。將經活化CD4+細胞(5,000個/孔)與可變量之1A7.gr1或對照抗體(自10000ng/ml至0.01ng/ml之3倍連續稀釋液)在96孔組織培養分析板中一起培育30分鐘。隨後，藉由向每一孔中添加NK細胞(50,000個細胞)來開始ADCC分析。然後將分析板在37℃/5%CO2培育器中再培育20小時。然後使用抗人類CD4-FITC及7AAD(BD Biosciences)將共培養物染色。在使用PBS洗滌之後，藉由流式細胞術(BD FACScaliber)獲取數據且藉由Flowjo程式(TreeStar)進行分析。藉由CD4+7AAD+細胞佔總CD4 T細胞之百分比來定義OX40表現CD4 T細胞之殺滅(ADCC)頻率。
為顯示1A7gr1誘導之OX40敏感性ADCC，將高或低人類OX40表現BT474(人類乳癌細胞系)純系接種(5,000個/孔)至黑壁96孔組織培養分析板中以進行黏附且在37℃/5%CO2培育器中維持24小時。然後，將抗CD20(同種型對照)或抗-OX40激動劑抗體1A7.gr1添加至BT474細胞中。使用人類NK細胞富集套組(Stem Cell Technology)自血沉棕黃層PBMC分離來自健康供體之原代人類NK細胞，且然後在抗CD20(利妥昔單抗同種型對照)或1A7.gr1存在下將50,000個經純化NK細胞 添加至含有BT474純系之孔中。將分析板培育24小時，然後添加CellTiterGlo試劑以捕獲化學發光信號。藉由將抗體處理細胞信號除以未處理細胞信號來計算發生抗-OX40調介之ADCC之細胞之百分比。扣除來自NK單一培養物之信號以補償來自NK細胞之背景信號。
結果II
Mab 1A7.gr.1抑制CD4+幼稚T細胞之Treg阻抑：測試藉由使OX40激動劑抗體結合Treg細胞進行OX40交聯是否會抑制其抑制幼稚T細胞增殖之能力。藉由抗CD3交聯在不存在1A7.gr1下誘導幼稚CD4+ T細胞增殖。向幼稚T細胞培養物中添加Treg細胞會阻抑抗CD3誘導之幼稚T細胞增殖。使用mAb 1A7.gr.1進行處理會抑制調節性T細胞之阻抑功能(n=3，圖6)。藉由經由流式細胞術分析監測CFSE低群體來量測幼稚T細胞增殖。此結果顯示，mAb 1A7.gr.1抑制Treg細胞之阻抑功能。
BT474-hOX40轉基因純系表現不同含量之hOX40：在轉基因BT474細胞純系中使用hOX40表面染色及平均螢光強度(MFI)藉由流式細胞術分析來表徵人類OX40之表現程度。BT474-人類高OX40純系所表現之OX40為BT474-人類低OX40純系之5倍，其中高-OX40純系展示5243之MFI(圖8B)且低-OX40純系展示994之MFI(圖8A)。同種型對照抗體曲妥珠單抗具有10之MFI(數據未展示)。
使用OX40激動劑抗體進行處理會誘導OX40依賴性抗體依賴性細胞調介之吞噬作用(ADCP)：為測定抗人類OX40 mab 1A7.gr.1是否調介ADCP，將U937骨髓樣細胞與OX40表現靶細胞(表現高含量或低含量OX40 BT474純系)一起培養。使用OX40激動劑抗體1A7進行處理會以劑量依賴性方式誘導表現低含量及高含量hOX40之BT474-hOX40純系之吞噬作用，如使用FACS所分析(圖9)。此外，使用BT474-高hOX40純系所觀察到之吞噬作用程度高於使用BT474-低hOX4純系 時，從而表明OX40抗體調介之細胞調介之吞噬作用依賴於靶細胞上之OX40表現程度(圖9)。與之相比，曲妥珠單抗(亦稱為Herceptin，同種型對照抗體)僅調介10%之吞噬作用，如使用BT474-高hOX40純系所展示。該等數據顯示，mab 1A7.gr.1誘導OX40表現靶細胞之吞噬作用，且抗體依賴性細胞調介之吞噬作用之程度與OX40含量相關。
使用激動劑OX40抗體1A7.gr1進行處理會誘導表現人類OX40之BT474純系中之ADCC，且表現高含量OX40之細胞中之ADCC程度顯著高於表現低含量OX40之細胞中之ADCC程度：使用OX40激動劑抗體1A7.gr1進行處理會誘導OX40表現細胞中之ADCC(圖10)。為檢測ADCC，實施CellTiterGlo分析。使用抗-OX40激動劑抗體1A7.gr1以0.1ug/mL進行處理會誘導低hOX40-BT474細胞之顯著ADCC，如藉由減小之靶細胞存活所證實。使用OX40激動劑抗體1A7.gr1以0.1ug/ml進行處理會得到高hOX40-BT474細胞之極廣泛ADCC。低hOX40-BT474純系與高hOX40-BT474純系之間之ADCC差異係統計學顯著(p=0.0077)。與之相比，使用利妥昔單抗(對照)進行處理並不改變高及低OX40表現BT474純系之存活。該等數據顯示，激動劑OX40抗體1A7.gr1能夠調介OX40表現細胞之活體外殺滅。此外，表現高含量OX40之細胞中之ADCC程度顯著高於表現低含量OX40之細胞中之ADCC程度。OX40高度表現於瘤內T細胞中，且人類瘤內Treg細胞表現高含量之人類OX40。
激動劑OX40抗體之活性係交聯依賴性且需要Fc效應物功能來共刺激效應T細胞：為測定mab 1A7是否依賴於抗體交聯來共刺激效應T細胞增殖，將mab 1A7.gr.1以板結合或可溶性形式添加至培養物中。此實驗之結果展示於圖4A中。在板結合抗CD3存在下，板結合mab 1A7.gr.1共刺激CD4+效應T細胞增殖。與之相比，在以可溶性形式在板結合抗CD3存在下提供1A7時，共刺激活性得以廢除，其測定類似 於使用板結合同種型對照抗體在板結合抗CD3存在下所觀察。該等結果表明，效應T細胞之mab 1A7共刺激可能需要交聯(例如藉由使mab 1A7.gr.1黏附至板上提供)。
為進一步探詢mab 1A7.gr.1是否需要交聯以達成活性，生成突變體抗體以產生對應結合呈現於細胞上之Fcγ受體不穩定之抗體。簡言之，使Fc殘基天門冬醯胺297(結合Fcγ受體所需之N-連接糖基化位點)突變至甘胺酸(N297G)以防止抗體Fc結合Fc受體。此實驗之結果展示於圖4B中。具有N297G突變之MAb 1A7 gr.1(IgG1)不能共刺激Teff細胞增殖。與之相比，野生型(未突變)mab 1A7 gr.1共刺激抗CD3誘導之Teff細胞增殖。綜合圖4A中所展示之結果，該等結果顯示，OX40激動劑mab 1A7 gr.1之活性係交聯依賴性，從而需要Fc效應物功能來共刺激效應T細胞。
Mab 1A7 gr.1 IgG1擁有強於mab 1A7.gr.1 IgG4之交聯活性。抗體同種型對Fcγ受體具有差別性結合。為鑑別達成最強力效應T細胞共刺激活性之同種型，將具有人類IgG1 Fc之mab 1A7.gr.1之活性與人類IgG4骨架上之mab 1A7 gr.1之活性進行比較。此實驗之結果展示於圖5中。Mab 1A7 gr.1-IgG1較mab 1A7 gr.1 -IgG4更強力地共刺激抗CD3誘導之效應T細胞增殖。此結果指示，包括人類IgG1 Fc之mab 1A7 gr.1所擁有之交聯活性強於包括人類IgG4 Fc之mab 1A7.gr1。
使用mab 1A7.gr.1進行處理會誘導OX40表現T細胞之ADCC。識別細胞表面抗原之抗體可經由抗體依賴性細胞毒性(ADCC)來調介靶細胞消耗。為測定mab1A7.gr1是否誘導ADCC，藉由使用PHA刺激周邊血CD4+ T細胞來生成表現高含量OX40之靶細胞且與mab 1A7.gr.1在人類效應細胞存在下接觸。此實驗之結果展示於圖7A中。在將NK細胞與經刺激CD4+ T細胞一起培養(以10個NK細胞：1個經活化T細胞之比率)時，使用mab 1A7.gr.1進行處理會誘導OX40表現T細胞之 ADCC。此結果顯示，1A7.gr1在表現高含量OX40之T細胞上誘導ADCC。由mab.1A7.gr.1誘導之消耗小於藉由使用陽性對照抗體阿侖珠單抗(抗CD52 mab)進行處理所誘導。與之相比，使用陰性對照mab抗gD(同種型對照)進行處理並不誘導ADCC。
為測定具有不同Fc同種型之mab 1A7.gr.1抗體是否在活體外顯示差別性ADCC活性，將具有IgG1同種型之mab 1A7.gr1之活性與具有IgG4同種型之mab 1A7.gr1之活性進行比較。此實驗之結果展示於圖7B中。使用A7.gr1(IgG1)進行處理所誘導之OX40表現CD4+ T細胞之ADCC大於由mab 1A7.gr1(IgG4)誘導之ADCC程度。
Figure 104110569-A0202-12-0196-377
材料及方法III
OX40L及抗-OX40結合競爭分析。將抗人類OX40抗體1A7gr1偶聯至Alexa Fluor647。在Genentech處生成人類OX40L-flag及人類DR5-flag蛋白質。自Cell Signaling購買偶聯至Alexa Fluor 555之抗flag抗體(目錄編號：3768)。在37℃/5%CO2培育器中於完全RPMI培養基(RPMI-1640，其補充有10% FBS(熱失活)/Pen/strep/麩醯胺酸/非必需胺基酸/55uM βME)中培養轉基因Hut78-hOX40細胞(Hut78-hOX40，人類T細胞系，其經逆轉錄病毒轉導以用於人類OX40表現)並維持。
首先，實施結合OX40之mab 1A7gr1之滴定。使用1×106個Hut78-hOX40細胞且自10ug/mL開始將mab1A7gr1之濃度向下滴定2倍。在4℃下培育30min之後，使用洗滌緩衝液(PBS/0.5%FBS/2mM EDTA)將細胞洗滌兩次，隨後在FACSCantoII流式細胞儀(BD)上獲取數據。然後藉由Flowjo程式(TreeStar)分析數據且捕獲平均螢光強度(MFI)。選擇生成大約70%之最大MFI之mab 1A7.gr.1(200ng/mL)之量以用於競爭分析。以類似方式實施OX40L-flag結合之滴定，只是自10ug/mL開始將OX40L-flag向下滴定3倍。
如下所述來實施OX40L及抗-OX40 mab結合競爭分析：以10 ug/ml至10ng/mL之濃度將OX40L-flag或對照DR5-flag添加至1×106個Hut78-hOX40細胞中。在4℃下培育30min之後，使用洗滌緩衝液將細胞洗滌兩次，且然後添加10ug/mL抗flag-Alexa Fluor 555及200ng/mL mab 1A7.gr.1-AlexaFluor647以測試OX40L與抗hOX40 mab 1A7.gr.1之間之競爭。在4℃下培育30min之後，在洗滌緩衝液中將細胞洗滌兩次，隨後在FACSCantoII流式細胞儀(BD)上獲取數據。然後藉由Flowjo程式(TreeStar)分析數據以捕獲1A7gr1結合之MFI。
結果III
滴定實驗顯示，抗人類OX40 mab 1A7gr1以劑量依賴性方式結合Hut78-hOX40細胞，且在約200ng/mL抗體下觀察到70%之最大結合(圖12A)。選擇此濃度用於競爭實驗。OX40L-flag亦顯示與Hut78-hOX40細胞之劑量依賴性結合(圖12B)。
在競爭分析中，抗人類OX40 mab 1A7.gr.1與Hut78-hOX40細胞之結合隨著OX40L-flag濃度之增加而降低(圖12C)。與之相比，存在對照DR5-flag並不影響mab 1A7.gr.1結合(圖12D)，從而指示Hut78-OX40細胞之OX40L結合具有特異性。該等數據顯示，OX40L與抗人類OX40 mab 1A7gr1競爭結合Hut78-OX40細胞上之hOX40。在類似實驗中，亦觀察到3C8.gr5與OX40L競爭結合。
材料及方法IV
抗-OX40在小鼠中之藥物動力學(PK)評估。在第0天，以1mg/kg或10mg/kg向雌性B6.CB17-Prkdc scid /SzJ小鼠(n=12隻動物/組)給予單一靜脈內注射之1A7.gr1 IgG1(MOXR0916)。向每一小鼠給予5mL/kg之劑量體積(1mg/kg劑量係在0.2mg/mL之濃度下；10mg/kg劑量係在2mg/mL之濃度下)。經由心臟穿刺(3個時間點/動物；3隻動物/時間點)在投藥後5分鐘、1、3、8及24小時及2、4、7、10、14、21及28天自每一動物收集血樣(125-150μL)。並不收集投藥前試樣用於研究。 將試樣收集至含有血清分離管之管中且如下文所闡述進行處理。
在離心之前使試樣在環境溫度下凝結至少20分鐘。在收集1小時內以11,000轉/分鐘之相對離心力於設定於維持2℃-8℃之離心機中開始離心並保持5分鐘。將自血液分離之血清轉移至預標記0.5-mL有蓋管中。將試樣儲存於設定於維持-80℃之冷凍器中直至分析。
利用一般ELISA使用綿羊抗人類IgG作為捕獲試劑且使用山羊抗人類IgG辣根過氧化物(HRP)作為檢測試劑來分析1A7.gr1 IgG1。此分析之有效檢測限值(LOD)為0.08μg/mL。
使用靜脈內濃注輸入模型及稀疏採樣(模型201)WinNonlin Pro 5.2.1版(Pharsight公司；Mountain View,CA)分析來自每一動物之血清濃度與時間數據。所有PK分析皆係基於個體動物數據之天然庫。使用下列方法估計具體PK參數：Cmax(最大濃度)、AUC最後(使用線性梯形法則計算自時間=0至最後可量側濃度之時間血清濃度對時間曲線下面積)、AUCinf(外推至無窮大之血清濃度對時間曲線下面積)、Cmax/D(劑量正規化Cmax)、AUCinf/D(劑量正規化AUCinf)、CL(清除率；劑量/AUCinf)、Vss(穩態下分佈面積)及t1/2(λz)(終末半衰期)。
結果IV
在投與1mg/kg及10mg/kg後，觀察到1A7.gr1 IgG1之PK係劑量成比例性(圖13)。PK參數匯總於下表13中。
Figure 104110569-A0202-12-0198-94
據觀察，並不具有腫瘤之SCID小鼠中之1A7.gr1具有線性劑量成 比例PK。該等數據表明，1A7.gr1 IgG1在所測試劑量值下之藥物動力學係如針對小鼠中之非交叉反應性人類IgG1單株抗體所預期且類似於典型IgG1單株抗體。
材料及方法V
食蟹猴中之先導4週毒性研究。將媒劑(10mM組胺酸乙酸鹽、6%蔗糖、0.02% pH 5.8 Tween 20)或1A7.gr1 IgG1以0.01、0.3或10mg/kg/劑量經靜脈內投與雄性食蟹猴中。投藥方案為每2週一次且進行三個劑量(在第1、15及29天投與)。在最後劑量之後三天實施終末屍檢。安全性端點包含：臨床及日觀察、臨床病理學、凝血、尿液分析、宏觀及微觀分析、毒性動力學(TK)及抗治療性抗體(ATA)效價。藥物動力學(PD)分析包含血清細胞介素、T細胞活化/增殖/消耗及OX40受體佔有率。
藉由靜脈穿刺收集血液。在並不超過允許採樣頻率及血液體積時，獲得其他血樣(例如因非血清試樣發生凝結)。在與FACS及PD試樣同時收集其他試樣類型時，在靜脈穿刺之後首先收集該等試樣，隨後收集FACS及PD試樣。藉由引流術自特定不銹鋼籠盤收集尿。在收集之後，將試樣轉移至適當實驗室中進行處理。針對血清處理血樣，且分析血清之各種臨床化學參數。
使用OLYMPUS® au640e分析儀分析個別臨床化學值。藉由免疫比濁法量測C-反應蛋白(CRP)。
在指示時間點收集含有K2-EDTA抗凝血劑之血樣用於細胞介素分析。在離心之後，收集血漿並儲存於-80℃下直至分析。使用LUMINEX® xMAP®分析技術(Luminex,Austin,TX)測定細胞介素含量，該技術係使得能夠同時量化多種細胞介素之基於珠粒之多工技術。使用MILLIPLEX® MAP Non-Human Primate Cytokine Magnetic Bead Panel套組(EMD Millipore,Billerica,MA)根據製造商方案分析試 樣。標準含有重組GCSF、GMCSF、IFNγ、IL1β、IL1ra、IL2、IL4、IL5、IL6、IL8、IL10、IL12/23p40、IL13、IL15、IL17A、IL18、MCP1、MIP1α、MIP1β、sCD40、TGFα、TNFα及VEGF之混合物。標準曲線範圍為4.6-3000pg/mL(對於IL4而言)、11.6-7500pg/mL(對於IL10及IL18而言)及2.3-1500pg/mL(對於所有其他細胞介素而言)。在96孔板中以1：3稀釋血漿試樣，隨後以1：2連續稀釋三次，且添加每一細胞介素之特異性抗體偶聯螢光珠粒之混合劑。將板在室溫下培育30分鐘，隨後在4℃下培育過夜。第二天，向試樣中添加生物素化檢測抗體之混合物，且將板在室溫下培育1小時，隨後與鏈黴抗生物素-藻紅蛋白一起培育30分鐘。然後使用LUMINEX® FLEXMAP 3D®儀器分析螢光信號，其中藻紅蛋白信號之強度對應於所存在細胞介素之量。自每一蛋白質之標準曲線之5參數擬合測定血清細胞介素濃度。
使用一般ELISA分析猴血清中1A7.gr1 IgG1之濃度。使用綿羊抗人類IgG(H+L)(猴吸收)作為捕獲試劑且使用偶聯至辣根過氧化物酶(HRP)之山羊抗人類IgG(H+L)(猴吸收)作為檢測試劑。
在整個研究中收集血樣用於使用流式細胞術進行受體佔有率分析。對於染色表面標記物(例如OX40受體)之流式細胞術分析而言，製備抗體混合劑以用於每一研究日之每一染色組。將混合劑之適當等分試樣分配至96深孔板之指定孔中。對於每一動物而言，轉移100μL全血試樣且在含有染色混合劑之適當孔中混合。將經染色血液在環境溫度下於暗處培育最少30分鐘。使用1.8mL 1X BD FACS Lyse(BD Biosciences)將紅血細胞在室溫下裂解至少6分鐘。離心試樣，且吸出上清液並棄除。使用1.8mL HBSS將細胞團粒洗滌兩次。在第二洗滌後，將每一試樣再懸浮於300μL 1%低聚甲醛中。將每一試樣(200μL)轉移至96孔U形底板之適當孔中以用於在BD FACS Canto II流式細胞儀上進行獲取。使用FACS Diva軟體(BD Biosciences)實施數據分析。 基於FSC/SSC特徵來鑑別淋巴球，且將T細胞選通為CD3+/SSClow。使用CD3+ T細胞之後續分級選通來鑑別及列舉每一T細胞子組。使用並不結合OX40之螢光標記之測試物品(抗-OX40抗體)在所投與測試物品存在下評估CD3+CD4+CD8- Th淋巴球上OX40之佔有率。使用不相關人類化IgG1抗體作為1A7.gr1之同種型對照。將正性高於同種型閘之Th細胞之分數歸類為OX40+細胞%。
研究設計匯總於下表14中。
Figure 104110569-A0202-12-0201-95
良好實驗室規範(GLP)毒性研究。經由靜脈內濃注以0.5、5或30mg/kg/劑量將媒劑(20mM組胺酸乙酸鹽、240mM蔗糖、0.02% pH 5.5聚山梨醇酯20)或1A7.gr1 IgG1投與雄性及雌性食蟹猴(5隻雄性及5隻雌性/組)。投藥方案為經6週每2週一次且總共進行四個劑量(在第1、15、29及43天投與)。在第45天將主要研究動物指定用於終末屍檢。指定用於恢復性屍檢之動物在最後劑量之後經受6週恢復且在第85天進行屍檢。安全性端點包含：臨床及日觀察、臨床病理學、凝血、尿液分析、宏觀及微觀分析、毒性動力學(TK)、抗治療性抗體(ATA)效價、CV安全性藥理學及神經學評估。藥物動力學(PD)分析包含血清細胞介素、T細胞活化/增殖/消耗及OX40受體佔有率(周邊及組織)。
藉由靜脈穿刺收集血液。在濕冰上來自/藉由引流術自特定不銹鋼籠盤過夜收集尿，然後收集血液。在收集之後，將試樣轉移至適當實驗室中進行處理。在臨床化學血液收集之前使動物禁食。
使用一般ELISA分析猴血清中1A7.gr1 IgG1之濃度。
藉由使用流式細胞術評估CD3+CD4+ T-輔助性淋巴球上AF647標記1A7.gr1之結合來分析受體佔有率。簡言之，將100μL全血或單一細胞懸浮液與1.8mL新製Pharm裂解液一起添加至2.2ml/孔96孔板之適當孔中。將試樣充分混合且在室溫下培育20分鐘。在裂解之後，將試樣離心，棄除上清液，且使用1.8mL HBSS將試樣洗滌一次。在洗滌之後，在100μL 10%食蟹猴血清中阻斷細胞且在暗處於設定於維持2-8℃之冰箱中培育最少15分鐘。在阻斷步驟之後，將適當體積之抗體混合劑添加至板上之適當孔中，混合板，且然後在暗處於設定於維持2-8℃之冰箱中培育最少30分鐘。在培育之後，使用1.8mL HBSS將板洗滌兩次且將試樣再懸浮於300μL 1%低聚甲醛中並在暗處於設定於維持2-8℃之冰箱中培育10-15分鐘。在培育之後，將200μL每一試樣轉移至96孔v形底板中且在細胞計數器上進行分析。流式細胞術儀器得到關於含有標記物抗原之各種細胞類型之相對豐度之數據。利用FACSCantoTM II流式細胞儀及DIVA® 6.0軟體分析試樣。將在每一投藥後時間點下針對每一動物所生成之數據與相應研究前值以及對照值範圍進行比較。然後評估增加或降低之等級以測定任一所觀察變化之潛在生物顯著性。
藉由經驗證基於LUMINEX®之方法量測MCP-1含量。基於珠粒之多工夾心式免疫分析係固相蛋白質分析，其使用偶聯至分析物特異性捕獲抗體之光譜編碼珠粒作為固體載體。向孔中添加標準及試樣，且所存在分析物(細胞介素)結合偶聯至顏色編碼之珠粒(每一顏色珠粒對1種細胞介素為特異性)之特定捕獲抗體。分析中之檢測系統係偶聯 至螢光蛋白之鏈黴抗生物素、R-藻紅蛋白或與分析物特異性生物素化檢測抗體混合在鏈黴抗生物素-藻紅蛋白(鏈黴抗生物素-RPE)。在Luminex儀器中汲取每一微量板孔之內容物。藉由監測珠粒之光譜性質及有關RPE螢光之量，同時測定若干分析物之濃度。將試樣離心以沈澱碎屑。使用200μL洗滌緩衝液洗滌96孔多屏過濾板之孔。然後將標準、品質對照(QC)試樣及試樣轉移(25μL)至含有25μL分析緩衝液之適當孔中且隨後添加25μL適當抗體珠粒工作溶液。將板在暗處於室溫下在設定為劇烈振盪之板振盪器上培育2小時(±5分鐘)，然後使用200μL洗滌緩衝液洗滌兩次，隨後向每一孔中添加25μL檢測抗體。將板在暗處於室溫下在設定為振盪劇烈之板振盪器上培育1小時(±2分鐘)。然後，向每一孔中添加25μL工作鏈黴抗生物素-RPE工作溶液且將板在暗處於室溫下在設定為振盪劇烈之板振盪器上培育30分鐘(±1分鐘)。在使用200μL洗滌緩衝液將板洗滌兩次之後，向每一孔中添加150μL鞘液且將板在暗處於室溫下在設定為振盪劇烈之板振盪器上培育至少5分鐘。在Luminex系統上讀取板。在涵蓋37.500pg/mL至6000pg/mL之濃度範圍之分析稀釋劑中製備猴MCP-1之標準。分析之LLOQ及ULOQ為75.00pg/mL至6000pg/mL。在理論濃度為200pg/mL、1000pg/mL及3200pg/mL之分析稀釋劑中製備猴MCP-1之QC試樣。此外，整潔平鋪內源性QC(EQC)且在曲線範圍內。
研究設計匯總於下表15中。
Figure 104110569-A0202-12-0203-96
Figure 104110569-A0202-12-0204-97
結果V 先導毒性研究
此研究之目標在於，在每2週一次(第1、15及29天)經總共3個劑量經由靜脈內注射投與食蟹猴時，評估抗-OX40(1A7.gr1 IgG1)之毒性、毒性動力學特徵及藥物動力學。
1A7.gr1 IgG1之靜脈內投與(最高10mg/kg，每2週一次，經4週)在食蟹猴中耐受良好，且所有動物得以存活直至計劃屍檢為止。觀察到c-反應蛋白(CRP)具有最小增加(圖14A及B)，且CRP之瞬時增加限於主要位於高劑量組(10mg/kg)中之三隻ATA+猴。類似地，細胞介素混合子組之中瞬時增加(圖15A及B)限於主要位於高劑量(10mg/kg)組中之三隻ATA+猴。在其他ATA+或ATA-動物中並未觀察到臨床病理學變化或細胞介素升高。並未觀察到IFNγ增加，如在不存在抗原激發下所預期。
藉由量測血清PK(圖16A)及周邊受體佔有率(圖16B)來證實所有動物中之暴露。第一循環Cmax劑量在所有三個組中成比例。PK如針對IgG1抗體基於10mg/kg下之AUC0-14所預期。觀察到高頻率之ATA：0.01mg/kg及0.3mg/kg組中4隻動物中之3隻；及10mg/kg組中4隻動物中之2隻。影響係血清濃度及受體佔有率有所降低。該等結果顯示，1A7.gr1之靜脈內投與在指示投藥時間表下於食蟹猴中耐受良好。
GLP毒性研究
GLP毒性研究之目標為測定以以下方式經靜脈內投用之1A7.gr1在食蟹猴中之毒性：在研究之第1、15、29及43天0、0.5、5及30mg/kg/劑量，隨後42天並不投藥(恢復期)。
1A7.gr1 IgG1(最高30mg/kg，每2週一次，經6週)之靜脈內投與 在食蟹猴中耐受良好，且所有動物得以存活直至其在研究之第45及85天之計劃屍檢時間點為止。觀察到IgG1抗體具有預期、劑量成比例PK(圖17)。暴露及受體佔有率維持於30mg/kg劑量程度(圖18)。在0.5mg/kg及5mg/kg劑量值(但非30mg/kg劑量值)之所有動物中皆檢測到ATA，且損失暴露及受體佔有率。在中等劑量動物中觀察到MCP-1之瞬時升高(圖19)。並未觀察到周邊T細胞之顯著活化或增殖(圖20)，且亦未觀察到絕對周邊T計數之任何顯著減小。
總而言之，在第一劑量之後並未觀察到臨床病理學參數具有臨床觀察或變化。在第2劑量之後開始觀察到急性投藥後反應及急性期蛋白質及細胞介素之瞬時增加，此可能係由ATA所致(在兩個研究中一致)。並未發現藥物相關性器官重量變化、宏觀或微觀發現。在0.5mg/kg及5mg/kg(但非30mg/kg)劑量組中之所有動物中檢測到ATA，且損失暴露及受體佔有率。發現1A7.gr1以高親和力(約0.45nM)結合人類OX40，且PK係如針對典型IgG1所預期且係劑量成比例性。該等結果投影為人類CL=2.5mL/d/kg且t1/2約為3週。在組織或周邊中觀察到T細胞數量或活化狀態並無顯著PD效應。周邊T細胞缺乏顯著活化或增殖且絕對周邊T細胞計數缺乏顯著變化並不令人吃驚，此乃因OX40僅瞬時表現於經活化T細胞上且健康食蟹猴具有可忽略之經活化T細胞。
儘管已出於理解清楚之目的藉由闡釋及實例相當詳細地對上述發明進行闡述，但說明及實例不應解釋為限制本發明範圍。本文所引用所有專利及科學文獻之揭示內容皆全文以引用方式明確併入本文中。
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<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
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<400> 28
Figure 104110569-A0202-12-0213-129
<210> 29
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 29
Figure 104110569-A0202-12-0214-130
<210> 30
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 30
Figure 104110569-A0202-12-0214-131
<210> 31
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 31
Figure 104110569-A0202-12-0214-132
<210> 32
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 32
Figure 104110569-A0202-12-0214-133
<210> 33
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 33
Figure 104110569-A0202-12-0215-134
<210> 34
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 34
Figure 104110569-A0202-12-0215-135
<210> 35
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 35
Figure 104110569-A0202-12-0215-136
<210> 36
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 36
Figure 104110569-A0202-12-0215-137
<210> 37
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 37
Figure 104110569-A0202-12-0216-138
<210> 38
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 38
Figure 104110569-A0202-12-0216-139
<210> 39
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 39
Figure 104110569-A0202-12-0216-140
<210> 40
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 40
Figure 104110569-A0202-12-0216-141
<210> 41
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 41
Figure 104110569-A0202-12-0217-142
<210> 42
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 42
Figure 104110569-A0202-12-0217-143
<210> 43
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 43
Figure 104110569-A0202-12-0217-144
<210> 44
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 44
Figure 104110569-A0202-12-0217-145
<210> 45
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 45
Figure 104110569-A0202-12-0218-146
<210> 46
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 46
Figure 104110569-A0202-12-0218-147
<210> 47
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 47
Figure 104110569-A0202-12-0218-148
<210> 48
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 48
Figure 104110569-A0202-12-0218-149
<210> 49
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 49
Figure 104110569-A0202-12-0219-150
<210> 50
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 50
Figure 104110569-A0202-12-0219-151
<210> 51
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 51
Figure 104110569-A0202-12-0219-152
<210> 52
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 52
Figure 104110569-A0202-12-0219-153
<210> 53
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 53
Figure 104110569-A0202-12-0219-154
<210> 54
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 54
Figure 104110569-A0202-12-0220-155
<210> 55
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 55
Figure 104110569-A0202-12-0220-156
<210> 56
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 56
Figure 104110569-A0202-12-0220-157
<210> 57
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 57
Figure 104110569-A0202-12-0221-158
<210> 58
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 58
Figure 104110569-A0202-12-0221-159
<210> 59
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 59
Figure 104110569-A0202-12-0222-160
<210> 60
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 60
Figure 104110569-A0202-12-0222-161
<210> 61
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 61
Figure 104110569-A0202-12-0223-162
<210> 62
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 62
Figure 104110569-A0202-12-0223-163
<210> 63
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 63
Figure 104110569-A0202-12-0223-164
Figure 104110569-A0202-12-0224-165
<210> 64
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 64
Figure 104110569-A0202-12-0224-166
<210> 65
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 65
Figure 104110569-A0202-12-0224-167
Figure 104110569-A0202-12-0225-168
<210> 66
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 66
Figure 104110569-A0202-12-0225-169
<210> 67
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 67
Figure 104110569-A0202-12-0225-170
Figure 104110569-A0202-12-0226-171
<210> 68
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 68
Figure 104110569-A0202-12-0226-172
<210> 69
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 69
Figure 104110569-A0202-12-0226-173
Figure 104110569-A0202-12-0227-174
<210> 70
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 70
Figure 104110569-A0202-12-0227-175
<210> 71
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 71
Figure 104110569-A0202-12-0227-176
Figure 104110569-A0202-12-0228-177
<210> 72
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 72
Figure 104110569-A0202-12-0228-178
<210> 73
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 73
Figure 104110569-A0202-12-0228-179
<210> 74
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 74
Figure 104110569-A0202-12-0229-180
<210> 75
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 75
Figure 104110569-A0202-12-0229-181
<210> 76
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 76
Figure 104110569-A0202-12-0230-183
<210> 77
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 77
Figure 104110569-A0202-12-0230-184
<210> 78
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 78
Figure 104110569-A0202-12-0231-185
<210> 79
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 79
Figure 104110569-A0202-12-0231-186
<210> 80
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 80
Figure 104110569-A0202-12-0232-187
<210> 81
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 81
Figure 104110569-A0202-12-0232-188
<210> 82
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 82
Figure 104110569-A0202-12-0232-189
Figure 104110569-A0202-12-0233-190
<210> 83
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 83
Figure 104110569-A0202-12-0233-191
<210> 84
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 84
Figure 104110569-A0202-12-0233-192
Figure 104110569-A0202-12-0234-193
<210> 85
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 85
Figure 104110569-A0202-12-0234-194
<210> 86
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 86
Figure 104110569-A0202-12-0234-196
Figure 104110569-A0202-12-0235-197
<210> 87
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 87
Figure 104110569-A0202-12-0235-198
<210> 88
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 88
Figure 104110569-A0202-12-0235-199
Figure 104110569-A0202-12-0236-200
<210> 89
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 89
Figure 104110569-A0202-12-0236-201
<210> 90
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 90
Figure 104110569-A0202-12-0236-203
Figure 104110569-A0202-12-0237-204
<210> 91
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 91
Figure 104110569-A0202-12-0237-205
<210> 92
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 92
Figure 104110569-A0202-12-0237-206
<210> 93
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 93
Figure 104110569-A0202-12-0238-207
<210> 94
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 94
Figure 104110569-A0202-12-0238-209
<210> 95
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 95
Figure 104110569-A0202-12-0239-210
<210> 96
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 96
Figure 104110569-A0202-12-0239-211
<210> 97
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 97
Figure 104110569-A0202-12-0240-379
<210> 98
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 98
Figure 104110569-A0202-12-0240-213
<210> 99
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 99
Figure 104110569-A0202-12-0241-214
<210> 100
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 100
Figure 104110569-A0202-12-0241-215
<210> 101
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 101
Figure 104110569-A0202-12-0241-216
Figure 104110569-A0202-12-0242-217
<210> 102
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 102
Figure 104110569-A0202-12-0242-218
<210> 103
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 103
Figure 104110569-A0202-12-0242-219
Figure 104110569-A0202-12-0243-220
<210> 104
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 104
Figure 104110569-A0202-12-0243-221
<210> 105
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 105
Figure 104110569-A0202-12-0243-222
Figure 104110569-A0202-12-0244-223
<210> 106
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 106
Figure 104110569-A0202-12-0244-224
<210> 107
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 107
Figure 104110569-A0202-12-0244-225
Figure 104110569-A0202-12-0245-226
<210> 108
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 108
Figure 104110569-A0202-12-0245-227
<210> 109
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 109
Figure 104110569-A0202-12-0245-229
<210> 110
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 110
Figure 104110569-A0202-12-0246-230
<210> 111
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 111
Figure 104110569-A0202-12-0246-231
<210> 112
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 112
Figure 104110569-A0202-12-0247-232
<210> 113
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 113
Figure 104110569-A0202-12-0247-233
<210> 114
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 114
Figure 104110569-A0202-12-0248-234
<210> 115
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 115
Figure 104110569-A0202-12-0248-235
<210> 116
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 116
Figure 104110569-A0202-12-0249-237
<210> 117
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 117
Figure 104110569-A0202-12-0249-238
<210> 118
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 118
Figure 104110569-A0202-12-0249-239
Figure 104110569-A0202-12-0250-240
<210> 119
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 119
Figure 104110569-A0202-12-0250-241
<210> 120
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 120
Figure 104110569-A0202-12-0250-242
Figure 104110569-A0202-12-0251-243
<210> 121
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 121
Figure 104110569-A0202-12-0251-244
<210> 122
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 122
Figure 104110569-A0202-12-0251-245
Figure 104110569-A0202-12-0252-246
<210> 123
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 123
Figure 104110569-A0202-12-0252-247
<210> 124
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 124
Figure 104110569-A0202-12-0252-248
Figure 104110569-A0202-12-0253-249
<210> 125
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 125
Figure 104110569-A0202-12-0253-250
<210> 126
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 126
Figure 104110569-A0202-12-0253-251
Figure 104110569-A0202-12-0254-252
<210> 127
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 127
Figure 104110569-A0202-12-0254-253
<210> 128
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 128
Figure 104110569-A0202-12-0254-254
<210> 129
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 129
Figure 104110569-A0202-12-0255-255
<210> 130
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 130
Figure 104110569-A0202-12-0255-354
<210> 131
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 131
Figure 104110569-A0202-12-0256-257
<210> 132
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 132
Figure 104110569-A0202-12-0256-258
<210> 133
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 133
Figure 104110569-A0202-12-0257-259
<210> 134
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 134
Figure 104110569-A0202-12-0257-260
<210> 135
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 135
Figure 104110569-A0202-12-0258-261
<210> 136
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 136
Figure 104110569-A0202-12-0258-262
<210> 137
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 137
Figure 104110569-A0202-12-0258-263
Figure 104110569-A0202-12-0259-264
<210> 138
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 138
Figure 104110569-A0202-12-0259-265
<210> 139
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 139
Figure 104110569-A0202-12-0259-380
Figure 104110569-A0202-12-0260-267
<210> 140
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 140
Figure 104110569-A0202-12-0260-268
<210> 141
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 141
Figure 104110569-A0202-12-0260-269
Figure 104110569-A0202-12-0261-271
<210> 142
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 142
Figure 104110569-A0202-12-0261-272
<210> 143
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 143
Figure 104110569-A0202-12-0261-273
Figure 104110569-A0202-12-0262-274
<210> 144
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 144
Figure 104110569-A0202-12-0262-275
<210> 145
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 145
Figure 104110569-A0202-12-0262-276
<210> 146
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 146
Figure 104110569-A0202-12-0263-277
<210> 147
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 147
Figure 104110569-A0202-12-0263-278
<210> 148
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 148
Figure 104110569-A0202-12-0264-280
<210> 149
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 149
Figure 104110569-A0202-12-0264-281
<210> 150
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 150
Figure 104110569-A0202-12-0265-284
<210> 151
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 151
Figure 104110569-A0202-12-0265-283
<210> 152
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 152
Figure 104110569-A0202-12-0266-285
<210> 153
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 153
Figure 104110569-A0202-12-0266-286
<210> 154
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 154
Figure 104110569-A0202-12-0266-288
Figure 104110569-A0202-12-0267-289
<210> 155
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 155
Figure 104110569-A0202-12-0267-290
<210> 156
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 156
Figure 104110569-A0202-12-0267-291
Figure 104110569-A0202-12-0268-292
<210> 157
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 157
Figure 104110569-A0202-12-0268-293
<210> 158
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 158
Figure 104110569-A0202-12-0268-294
Figure 104110569-A0202-12-0269-295
<210> 159
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 159
Figure 104110569-A0202-12-0269-296
<210> 160
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 160
Figure 104110569-A0202-12-0269-297
Figure 104110569-A0202-12-0270-298
<210> 161
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 161
Figure 104110569-A0202-12-0270-299
<210> 162
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 162
Figure 104110569-A0202-12-0270-300
Figure 104110569-A0202-12-0271-301
<210> 163
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 163
Figure 104110569-A0202-12-0271-302
<210> 164
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 164
Figure 104110569-A0202-12-0271-303
<210> 165
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 165
Figure 104110569-A0202-12-0272-304
<210> 166
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 166
Figure 104110569-A0202-12-0272-305
<210> 167
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 167
Figure 104110569-A0202-12-0273-306
<210> 168
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 168
Figure 104110569-A0202-12-0273-307
<210> 169
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 169
Figure 104110569-A0202-12-0274-381
<210> 170
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 170
Figure 104110569-A0202-12-0274-309
<210> 171
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 171
Figure 104110569-A0202-12-0275-310
<210> 172
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<220>
<221> VARIANT
<222> 1
<223> Xaa=D或E
<220>
<221> VARIANT
<222> 2
<223> Xaa=S或A
<400> 172
Figure 104110569-A0202-12-0275-311
<210> 173
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa=N或S
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa=A或G
<220>
<221> VARIANT
<222> 8
<223> Xaa=D或S
<220>
<221> VARIANT
<222> 9
<223> Xaa=A或S
<400> 173
Figure 104110569-A0202-12-0276-312
<210> 174
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa=Y或A
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa=A或F
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa=S或A
<220>
<221> VARIANT
<222> 8
<223> Xaa==A或V
<400> 174
Figure 104110569-A0202-12-0276-382
<210> 175
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<220>
<221> VARIANT
<222> 2
<223> Xaa=A或Q
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa=A或G
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa=A或H
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa=A或T
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa=A或L
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa=A或P
<220>
<221> VARIANT
<222> 8
<223> Xaa=A或P
<400> 175
Figure 104110569-A0202-12-0277-314
<210> 176
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<220>
<221> VARIANT
<222> 9
<223> Xaa=T、A或Q
<400> 176
Figure 104110569-A0202-12-0278-356
<210> 177
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa=S、E或Q
<400> 177
Figure 104110569-A0202-12-0278-316
<210> 178
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<220>
<221> VARIANT
<222> 1
<223> Xaa=V或A
<220>
<221> VARIANT
<222> 2
<223> Xaa=H或A
<220>
<221> VARIANT
<222> 9
<223> Xaa=Y或A
<400> 178
Figure 104110569-A0202-12-0278-317
Figure 104110569-A0202-12-0279-318
<210> 179
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 179
Figure 104110569-A0202-12-0279-319
<210> 180
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 180
Figure 104110569-A0202-12-0279-321
<210> 181
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 181
Figure 104110569-A0202-12-0280-322
<210> 182
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 182
Figure 104110569-A0202-12-0280-323
<210> 183
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 183
Figure 104110569-A0202-12-0281-324
<210> 184
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 184
Figure 104110569-A0202-12-0281-325
<210> 185
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 185
Figure 104110569-A0202-12-0282-326
<210> 186
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 186
Figure 104110569-A0202-12-0282-327
<210> 187
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 187
Figure 104110569-A0202-12-0282-328
<210> 188
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 188
Figure 104110569-A0202-12-0282-329
<210> 189
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 189
Figure 104110569-A0202-12-0283-330
<210> 190
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 190
Figure 104110569-A0202-12-0283-331
<210> 191
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 191
Figure 104110569-A0202-12-0283-332
<210> 192
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 192
Figure 104110569-A0202-12-0283-333
<210> 193
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 193
Figure 104110569-A0202-12-0284-334
<210> 194
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 194
Figure 104110569-A0202-12-0284-335
<210> 195
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 195
Figure 104110569-A0202-12-0284-336
<210> 196
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 196
Figure 104110569-A0202-12-0284-337
<210> 197
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 197
Figure 104110569-A0202-12-0285-338
<210> 198
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 198
Figure 104110569-A0202-12-0285-339
<210> 199
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 199
Figure 104110569-A0202-12-0285-340
<210> 200
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 200
Figure 104110569-A0202-12-0285-341
<210> 201
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 201
Figure 104110569-A0202-12-0286-343
<210> 202
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 202
Figure 104110569-A0202-12-0286-344
<210> 203
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 203
Figure 104110569-A0202-12-0286-345
<210> 204
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 204
Figure 104110569-A0202-12-0286-346
<210> 205
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 205
Figure 104110569-A0202-12-0287-347
<210> 206
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 206
Figure 104110569-A0202-12-0287-348
<210> 207
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 207
Figure 104110569-A0202-12-0287-349
<210> 208
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 208
Figure 104110569-A0202-12-0287-357
<210> 209
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 209
Figure 104110569-A0202-12-0287-351

Claims (42)

  1. 一種結合人類OX40之抗體，其中該抗體包含：(1)重鏈可變結構域(VH)，其包含(a)包含DSYMS(SEQ ID NO：2)之胺基酸序列的HVR-H1；(b)包含DMYPDNGDSSYNQKFRE(SEQ ID NO：3)之胺基酸序列的HVR-H2；及(c)包含APRWYFSV(SEQ ID NO：4)之胺基酸序列的HVR-H3；及(2)輕鏈可變結構域(VL)，其包含(d)包含RASQDISNYLN(SEQ ID NO：5)之胺基酸序列的HVR-L1；(e)包含YTSRLRS(SEQ ID NO：6)之胺基酸序列的HVR-L2；及(f)包含QQGHTLPPT(SEQ ID NO：7)之胺基酸序列的HVR-L3。
  2. 如請求項1之抗體，其中該結合人類OX40之抗體為抗人類OX40激動劑抗體。
  3. 如請求項1或2之抗體，其中該抗體以小於或等於約0.4nM之親和力結合人類OX40。
  4. 如請求項1或2之抗體，其中該抗體結合人類OX40及食蟹猴OX40。
  5. 如請求項1或2之抗體，其中該抗體在40℃下處理兩週後穩定。
  6. 如請求項1或2之抗體，其中該VH域具有與SEQ ID NO：56之胺基酸序列至少90%序列一致性。
  7. 如請求項6之抗體，其中該VH域具有與SEQ ID NO：56之胺基酸序列至少95%序列一致性。
  8. 如請求項6之抗體，其中該VH域包含SEQ ID NO：56之胺基酸序列。
  9. 如請求項1或2之抗體，其中該VL域具有與SEQ ID NO：57之胺基酸序列至少90%序列一致性。
  10. 如請求項9之抗體，其中該VL域具有與SEQ ID NO：57之胺基酸序列至少95%序列一致性。
  11. 如請求項9之抗體，其中該VL域包含SEQ ID NO：57之胺基酸序列。
  12. 如請求項1之抗體，其中該VH域包含SEQ ID NO：56之胺基酸序列且該VL域包含SEQ ID NO：57之胺基酸序列。
  13. 如請求項1或2之抗體，其中該抗體係選自由Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、Fv及scFv組成之群的抗體片段。
  14. 如請求項1或2之抗體，其進一步包含人類IgG1 Fc區。
  15. 如請求項1或2之抗體，其中該抗體為單株抗體。
  16. 如請求項1或2之抗體，其中該抗體為人類化抗體。
  17. 一種分離核酸，其編碼如請求項1至16中任一項之抗體。
  18. 一種宿主細胞，其包含如請求項17之核酸。
  19. 一種產生抗體之方法，其包含培養如請求項18之宿主細胞以使得產生該抗體。
  20. 如請求項19之方法，其進一步包含自該宿主細胞回收該抗體。
  21. 一種免疫偶聯物，其包含偶聯至細胞毒性劑或標記之如請求項1至16中任一項之抗體。
  22. 一種組合物，其包含如請求項1至16中任一項之抗體及醫藥上可接受之載劑。
  23. 如請求項22之組合物，其中該組合物包含緩衝液、表面活性劑及糖。
  24. 如請求項22之組合物，其中該組合物包含10mg/mL至100mg/mL之抗體、0.01%至0.1%(w/v)之表面活性劑、100mM至320mM之糖、1mM至50mM之組胺酸緩衝劑，且具有5.0至6.0之pH。
  25. 如請求項22之組合物，其中該組合物包含10mg/mL至100mg/mL 之抗體、0.01%至0.1%(w/v)之表面活性劑、100mM至150mM之糖、1mM至25mM之組胺酸緩衝劑，且具有5.0至6.0之pH。
  26. 如請求項22之組合物，其中該組合物包含50mg/mL至75mg/mL之抗體、0.01%至0.1%(w/v)之表面活性劑、110mM至130mM之糖、20mM至30mM之組胺酸緩衝劑，且具有5.0至6.0之pH。
  27. 如請求項22之組合物，其中該組合物包含10mg/mL至100mg/mL之抗體、0.02%至0.06%(w/v)之聚山梨醇酯、100mM至320mM之蔗糖、1mM至50mM之組胺酸緩衝劑，且具有5.0至6.0之pH。
  28. 如請求項22之組合物，其中該組合物包含60mg/mL之抗體、0.03%(w/v)之聚山梨醇酯、120mM之蔗糖、20mM之組胺酸乙酸鹽緩衝劑，且具有5.5之pH。
  29. 一種如請求項1至16中任一項之抗體或如請求項22至28中任一項之組合物的用途，其用以製造用於治療癌症之醫藥。
  30. 如請求項29之用途，其中該醫藥係與其他治療劑投與。
  31. 如請求項30之用途，其中該其他治療劑包含化學治療劑。
  32. 如請求項30之用途，其中該其他治療劑包含PD-1軸結合拮抗劑。
  33. 如請求項32之用途，其中該PD-1軸結合拮抗劑為PD-L1結合拮抗劑。
  34. 如請求項33之用途，其中該PD-L1結合拮抗劑為抗PD-L1抗體。
  35. 如請求項34之用途，其中該抗PD-L1抗體為MPDL3280A。
  36. 如請求項32之用途，其中該PD-1軸結合拮抗劑為PD-1結合拮抗劑。
  37. 如請求項36之用途，其中該PD-L1結合拮抗劑為抗PD-1抗體。
  38. 如請求項37之用途，其中該抗PD-1抗體為尼沃魯單抗(nivolumab)或皮落株單抗(pembrolizumab)。
  39. 如請求項29至38中任一項之用途，其中該癌症係選自由乳癌、肺癌、黑素瘤、腎細胞癌、膀胱癌、結腸直腸癌及卵巢癌組成之群。
  40. 如請求項29至38中任一項之用途，其中該癌症係三陰性乳癌。
  41. 如請求項29至38中任一項之用途，其中該癌症係非小細胞肺癌。
  42. 如請求項29至38中任一項之用途，其中該癌症係泌尿道癌。
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